JP5950055B2 - 細胞塊用培養容器 - Google Patents

Description

本開示は、細胞塊用培養容器及びこれを用いた細胞塊の培養方法に関する。本願は、２０１４年５月２２日に日本に出願された特願２０１４−１０６４５０号、及び、２０１４年１０月２７日に日本に出願された特願２０１４−２１８６６１号に基づき優先権を主張し、それらの内容をここに援用する。

胚性幹細胞（ＥＳ細胞）は、様々な組織細胞に分化する多分化能を有する。このため、病気や事故等で失われた細胞を補修し、組織を修復する、いわゆる再生医療の分野での応用に向けて様々な研究が行われている（例えば、特許文献１）。

ＥＳ細胞は種々の細胞に分化しうる多様性を持つ。種々の細胞に分化させる手法の一つとして胚様体（embryonic body：ＥＢ）と呼ばれる細胞塊の形成がある。この細胞塊は、ＥＳ細胞やｉＰＳ細胞などを浮遊培養することにより形成され、細胞塊が形成された状態で２週間程度培養すると様々な細胞種への分化が観察される。このため、胚様体の形成は、細胞の分化多能性を調べる一般的な方法の一つとして用いられている。

ＥＳ細胞を浮遊状態で培養する方法としては、最も広く用いられている方法としてハンギングドロップ培養がある。ハンギングドロップ培養は、水滴状に垂れ下げた培養液の中で細胞を培養する方法である。しかしながらこの方法は、胚様体形成の成功率が低い、顕微鏡観察ができない、操作が煩雑である等といった問題がある。この問題を解決するために、例えば、容器内面に水溶性樹脂被膜を硬化させて非水溶性硬化被膜が形成された培養容器が提案されている（例えば、特許文献２）。

臨床応用を視野に入れると、ヒトＥＳ細胞を用いた研究及び開発が必要となるが、ヒトＥＳ細胞は、マウスＥＳ細胞と比較して細胞死を起こしやすく、胚様体が得られにくいという問題がある。この問題を解決するために、例えば、ウェル底部の形状を開き角度が６０〜１００度である漏斗形状とし、その中心部を凹状の丸みをもたせた培養容器が提案されている（例えば、特許文献３）。ヒトｉＰＳ細胞を用いた研究及び開発についても同様の培養容器が提案されている。

上述の特許文献１（特開２００８−９９６６２号公報）、特許文献２（特開２００８−１７８３６７号公報）、及び特許文献３（ＷＯ２０１３／１８３７７７公報）は、参照により本明細書に組み込まれる。

特開２００８−９９６６２号公報 特開２００８−１７８３６７号公報 ＷＯ２０１３／１８３７７７公報

Cell Stem Cell, Vol.10, No.6, pp771-785 (2012)

上記の培養容器等を用いて形成された細胞塊は、更なる培養を行うために、シャーレ等に移設される場合がある（非特許文献１）。一般的に細胞から排出される尿酸や炭酸ガス等の老廃物により培養液は酸性にかたよっていくため、シャーレ内の培養液は定期的に交換する必要がある。しかし、培養液の定期的な交換に伴いシャーレを揺動させると、細胞塊がシャーレの中央部に集まり、細胞塊同士が接触し、融合して、細胞塊が大きくなりすぎ、又は細胞塊が歪な形状となって、細胞塊を構成する細胞に、酸素や栄養が十分に供給されず、当該細胞が死んでしまう恐れがある。また、当該死細胞が放出する酵素等によって正常な細胞についてもダメージを受ける。従って、培養を行う上で、細胞塊を適切な径にまで成長させること、及び細胞塊にダメージや刺激を極力与えずに培養液の交換を行うことが、培養を経て良質な細胞塊を得る上で重要である。また、例えば、ヒト胚性幹細胞（ヒトＥＳ細胞）やヒト多能性幹細胞（ヒトｉＰＳ細胞）等の幹細胞は代謝がよいため、培養液の交換頻度が他の細胞の場合と比較して高い。故に、特に、これらの細胞に対しては、培養液の交換が効率的に行えることが望まれる。

本開示は、一又は複数の実施形態において、細胞塊への影響が少なく、培養液を効率的に交換できる培養容器、及び当該培養容器を用いた細胞塊の培養方法を提供する。

本開示は、一又は複数の実施形態において、細胞塊を培養するための容器に関する。前記細胞塊用培養容器は、前記細胞塊と培養液とを収容可能とする培養空間を有するウェルと、前記培養空間と連通した内腔を有する筒状体とを含み、前記筒状体の筒壁に、前記筒状体の外側に前記細胞塊を通過させることなく前記培養液を排出させうる１個以上の連通部が形成されている。

本開示は、一又は複数の実施形態において、本開示の細胞塊用培養容器を用いて細胞塊を培養する培養方法である。前記細胞塊の培養方法は、培養液が培養空間に充填された前記ウェル内で前記細胞塊を培養した後、前記細胞塊用培養容器を傾けることにより、前記ウェル内の培養液の一部を、前記連通部を通過させて前記筒状体の外側に排出させる工程を含む。

本開示にかかる細胞塊用培養容器及び細胞塊の培養方法によれば、細胞塊への影響が少なく、培養液を効率的に交換できる。

実施形態１の細胞塊用培養容器の平面図である。 図１Ａの部分拡大図である。 図１ＡのＩＩ−ＩＩ’線に沿った矢視断面図である。 図１ＡのＩＩＩ−ＩＩＩ’線に沿った矢視断面図である。 図２の部分拡大図である。 実施形態２の細胞塊用培養容器の平面図である。 図５のＶＩ−ＶＩ’線に沿った矢視拡大断面図である。 図５のＶＩＩ−ＶＩＩ’線に沿って切断した拡大端面図である。 実施形態２の細胞塊用培養容器を構成するマルチウェルプレート本体の平面図である。 図８のＩＸ−ＩＸ’線に沿った矢視断面図である。 実施形態２の細胞塊用培養容器を構成する液流制御体の平面図である。 図１０に示した液流制御体の底面図である。 図１０のＸＩＩ−ＸＩＩ’線に沿った矢視拡大断面図である。 図１０に示した液流制御体の拡大側面図である。 図１１に示した液流制御体の拡大斜視図である。 実施形態３の細胞塊用培養容器の平面図である。 図１５Ａの部分拡大図である。 図１５ＡのＸＶＩ−ＸＶＩ’線に沿った矢視拡大断面図である。 図１５ＡのＸＶＩＩ−ＸＶＩＩ’線に沿った矢視拡大断面図である。 図１７Ａの部分拡大図である。 図１６の部分拡大図である。 図１５Ａに示した細胞塊用培養容器の筒状体とウェルとからなる構造体の内部構造を説明する斜視断面図である。 図１５Ａの部分拡大図である。 図１５Ａに示した細胞塊用培養容器を用いて細胞塊を所定時間培養液中で培養した後、ウェル内の培養液の一部を排出した後の状態を説明する概念図である。 実施形態４の細胞塊用培養容器の平面図である。 図２２Ａの部分拡大図である。 図２２ＡのＸＸＩＩＩ−ＸＸＩＩＩ’線に沿った矢視拡大断面図である。 図２２ＡのＸＸＩＶ−ＸＸＩＶ’線に沿った矢視拡大断面図である。 図２４Ａの部分拡大図である。 図２３の部分拡大図である。 図２２Ａに示した細胞塊用培養容器の筒状体とウェルとからなる構造体の内部構造を説明する斜視断面図である。 図２２Ａに示した細胞塊用培養容器を用いて細胞塊を所定時間培養液中で培養した後、ウェル内の培養液の一部を排出した後の状態を説明する概念図である。

本開示の細胞塊用培養容器（以下。「培養容器」と略称する場合もある。）は、ウェルの培養空間と連通した内腔を有し、その筒壁に、外側に細胞塊を通過させることなく培養液を排出させうる１個以上の連通部が形成された筒状体を備えている。そのため、培養容器を傾けるという簡単な操作により短時間で、複数のウェル内の培養液を培養空間から排出させることができる。このような方法により培養液の排出を行えば、従来技術として記載した方法と比較して、細胞塊に悪影響を与えずに、培養液の交換を効率的に行える。複数のウェル内の培養液を培養空間から排出できるので、機械による培養液の自動交換化も期待できる。

細胞のなかでも、ヒト胚性幹細胞（ヒトＥＳ細胞）やヒト多能性幹細胞（ヒトｉＰＳ細胞）等の幹細胞は代謝がよく、僅かな刺激により分化してしまう可能性がある。従って、細胞塊にダメージや刺激等の影響が及ぶことを抑制しながら培養液を効率的に交換できる本開示の培養容器は、これらの幹細胞の細胞塊の培養に適している。

本開示は、以下の一又は複数の実施形態に関しうる。
（１）細胞塊を培養するための容器であって、前記細胞塊と培養液とを収容可能とする培養空間を有するウェルと、前記ウェルの開口を有する面上に配置され前記培養空間と連通した内腔を有する筒状体とを含み、前記筒状体の筒壁に、前記筒状体の外側に前記細胞塊を通過させることなく前記培養液を排出させうる１個以上の連通部が形成されている、細胞塊用培養容器。前記細胞塊用培養容器は、更に前記ウェルの開口よりも上方に突出して前記ウェルを囲う側壁を備えていてもよい。また、前記側壁が前記筒状体の外側に配置されていてもよい。
（２）前記筒状体に複数の前記連通部が形成されている、（１）に記載の細胞塊用培養容器。
（３）前記連通部が、前記筒状体の中心軸と平行なスリットである、（１）又は（２）に記載の細胞塊用培養容器。
（４）前記連通部が、前記筒状体の周方向に沿ったスリットである、（１）又は（２）に記載の細胞塊用培養容器。
（５）前記スリットの幅が、０．１ｍｍ以上０．５ｍｍ以下である、（３）又は（４）に記載の細胞塊用培養容器。
（６）前記ウェルと前記筒状体とからなる構造体をその中心軸を含む平面で切断して平面的にみた場合、前記スリットの両端のうちの前記ウェルにより近い一方の端から前記ウェルの最深部までの長さが、３．０ｍｍ以上６．０ｍｍ以下である、（３）〜（５）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（７）前記細胞塊用培養容器は複数の前記ウェルを含むマルチウェルプレート本体を含み、前記マルチウェルプレートの前記ウェルの開口を有する面上に複数の前記筒状体が配置されている、（１）〜（６）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。前記側壁は、複数の前記ウェルを囲うように配置されていてもよい。
（８）前記連通部が、前記筒状体の中心軸と平行で前記筒状体の基端から形成されたスリットである、（７）に記載の細胞塊用培養容器。
（９）前記マルチウェルプレート本体と前記複数の筒状体とが同一金型内で成型された、（７）又は（８）に記載の細胞塊用培養容器。
（１０）前記細胞塊用培養容器は、複数の前記ウェルと、前記ウェルの開口よりも上方に突出して前記複数のウェルを囲い平面視した時に見える形状が略矩形の側壁と、を含むマルチウェルプレート本体と、前記マルチウェルプレートの前記側壁によって囲われる空間内に配置された液流制御体と、を含み、前記液流制御体は、前記複数の筒状体と、前記マルチウェルプレート本体の前記ウェルの開口を有する面と接しないように配置され前記複数の筒状体を連結して前記複数の筒状体の連結体を形成する複数の架橋部と、一方の端部が前記連結体に連結され他方の端部が前記側壁と当接する少なくとも１対の位置規制部とを含み、互いに向かい合う側壁の内面の一方に、一方の位置規制部が当接し、互いに向かい合う側壁の内面の他方に、他方の位置規制部が当接する、（１）〜（６）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（１１）前記液流制御体は、前記マルチウェルプレート本体と別体である、（１０）に記載の細胞塊用培養容器。
（１２）液誘導部を更に含み、前記液誘導部は、前記ウェルと前記筒状体とからなる構造体の内面に配置された一対の突出部を含み、前記突出部は液誘導補助溝を形成し、前記突出部の上側端面は前記連通部の下側端よりも上方に配置されている、（１）〜（１１）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（１３）前記突出部の前記培養空間と向かい合う面は、前記筒状体の中心軸に向かって突出した曲面である、（１２）に記載の細胞塊用培養容器。
（１４）前記突出部の上側端面から前記連通部の下側端までの長さが、０．１ｍｍ以上である、（１２）又は（１３）に記載の細胞塊用培養容器。
（１５）前記連通部の下側端を通る円周上における一対の前記突出部間の距離は、０．３ｍｍ以上１．０ｍｍ以下である、（１２）〜（１４）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（１６）前記突出部の下側端部が前記ウェルの内面のうちの底面に達している、（１２）〜（１５）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（１７）前記液誘導部が、一対の前記突出部の下側端部を互いに連結し、前記液誘導補助溝の一方の終端を規定する面を含む基部を更に含む、（１２）〜（１６）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（１８）前記液誘導補助溝の一方の終端を規定する面は、前記連通部から前記培養空間内に流入し得る前記培養液の流れの下流側から上流側に向かって傾斜する傾斜面である、（１７）に記載の細胞塊用培養容器。
（１９）前記液誘導補助溝の閉塞端が前記ウェルの底部よりも上方に位置している、（１２）〜（１８）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（２０）前記ウェルの少なくとも底部の内面は、下記式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表される水溶性樹脂から形成された被覆層で被覆されている、（１）〜（１９）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。

（式（Ｉａ）中、Ｒはカルボニル基と−ＮＨ−基とを有する炭化水素基を示し、ｒ１は１〜１０００を示し、ｒ２は４０〜４９９５を示し、ｒ３は０〜４０００を示し、ｎは１、２又は３を示す。）

（式（Ｉｂ）中、Ｒはカルボニル基と−ＮＨ−基とを有する炭化水素基を示し、ｒ１は１〜１０００を示し、ｒ２は４０〜４９９５を示し、ｒ３は０〜４０００を示す。）
（２１）前記ウェルは、筒状の胴部と、前記胴部の一端に設けられた漏斗形状の底部とを有し、前記底部の中心部は、凹曲面であり、前記底部の開き角度は、６０〜１００度であり、前記底部の前記凹曲面の曲率半径は、０．５〜２．０ｍｍである、（１）〜（２０）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（２２）前記細胞塊が幹細胞である、（１）〜（２１）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器。
（２３）前記幹細胞が、ヒト胚性幹細胞（ヒトＥＳ細胞）、ヒト多能性幹細胞又はヒトｉＰＳ細胞である、（２２）に記載の細胞塊用培養容器。
（２４）（１）〜（２３）のいずれかに記載の細胞塊用培養容器を用いて細胞塊を培養する培養方法であって、培養液が培養空間に充填された前記ウェル内で前記細胞塊を培養した後、前記細胞塊用培養容器を傾けることにより、前記ウェル内の培養液の一部を、前記連通部を通過させて前記筒状体の外側に排出させる工程を含む、細胞塊の培養方法。

［１］細胞塊を培養するための容器であって、前記細胞塊と培養液とを収容可能とする培養空間を有するウェルと、前記培養空間と連通した内腔を有する筒状体と、液誘導部と、を含み、前記筒状体の筒壁に、前記筒状体の外側に前記細胞塊を通過させることなく前記培養液を排出させうる１個以上の連通部が形成されており、前記液誘導部は、前記ウェルと前記筒状体とからなる構造体の内面に一対の突出部が形成され、各突出部の上側端面が前記連通部の下側端よりも上方に配置されており、且つ、前記筒状部の内面のうちの少なくとも１つの連通部の両側に各々前記突出部が形成されることにより設けられた液誘導補助溝を含む、細胞塊用培養容器。
［２］前記連通部が、前記筒状体の中心軸と平行なスリットである、［１］に記載の細胞塊用培養容器。
［３］前記スリットは、前記筒状体の基端から形成された、［２］に記載の細胞塊用培養容器。
［４］前記スリットの幅が、０．１ｍｍ以上０．５ｍｍ以下である、［２］又は［３］に記載の細胞塊用培養容器。
［５］各突出部の前記培養空間と向かい合う面は、前記筒状体の中心軸に向かって突出した曲面である、［１］〜［４］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器。
［６］前記突出部の上側端面から前記連通部の下側端までの長さが、０．１ｍｍ以上である、［１］〜［５］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器。
［７］前記連通部の下側端を通る円周上における前記突出部間の距離は、０．３ｍｍ以上１．０ｍｍ以下である、［１］〜［６］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器。
［８］各突出部の下側端部が前記ウェルの内面のうちの底面に達している、［１］〜［７］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器。
［９］前記液誘導部が、各突出部の下側端部を互いに連結し、前記液誘導補助溝の一方の終端を規定する面を含む基部を更に含む、［１］〜［７］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器。
［１０］前記液誘導補助溝の一方の終端を規定する面は、前記連通部から前記培養空間内に流入し得る前記培養液の流れの下流側から上流側に向かって傾斜する傾斜面である、［９］に記載の細胞塊用培養容器。
［１１］前記ウェルと前記筒状体とからなる構造体をその中心軸を含む平面で切断して平面的にみた場合、前記連通部の下側端から前記ウェルの最深部までの長さが、３．０ｍｍ以上６．０ｍｍ以下である、［１］〜［１０］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器。
［１２］前記ウェルは、筒状の胴部と、前記胴部の一端に設けられた漏斗形状の底部とを有し、前記底部の中心部は、凹曲面であり、前記底部の開き角度は、６０〜１００度であり、前記底部の前記凹曲面の曲率半径は、０．５〜２．０ｍｍである、［１］〜［１１］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器。
［１３］前記液誘導補助溝の閉塞端が前記ウェルの前記底部よりも上方に位置している、［１２］に記載の細胞塊用培養容器。
［１４］前記細胞塊用培養容器は複数の前記ウェルを含むマルチウェルプレート本体を含み、前記マルチウェルプレートの前記ウェルの開口を有する面上に複数の前記筒状体が配置されている、［１］〜［１３］に記載の細胞塊用培養容器。
［１５］前記マルチウェルプレート本体と複数の前記筒状体とが同一金型内で成型された、［１４］に記載の細胞塊用培養容器。
［１６］前記ウェルの少なくとも底部の内面は、下記式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表される水溶性樹脂を用いて形成された被覆層で被覆されている、請求項１２又は１３に記載の細胞塊用培養容器。

（式（Ｉａ）中、Ｒはカルボニルとアミンとを有するアルキル基、ｒ１は１〜１０００、ｒ２は４０〜４９９５、ｒ３は０〜４０００、ｎは１、２又は３を示す。）

（式（Ｉｂ）中、Ｒはカルボニルとアミンとを有するアルキル基、ｒ１は１〜１０００、ｒ２は４０〜４９９５、ｒ３は０〜４０００を示す。）
［１７］前記細胞塊が幹細胞である、［１］〜［１６］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器。
［１８］前記幹細胞が、ヒト胚性幹細胞（ヒトＥＳ細胞）又はヒト多能性幹細胞（ヒトｉＰＳ細胞）である、［１７］に記載の細胞塊用培養容器。
［１９］［１］〜［１８］のいずれかの項に記載の細胞塊用培養容器を用いて細胞塊を培養する培養方法であって、培養液が培養空間に充填された前記ウェル内で前記細胞塊を培養した後、前記細胞塊用培養容器を傾けることにより、前記ウェル内の培養液の一部を、前記連通部を通過させて前記構造体の外側に排出させる工程を含む、細胞塊の培養方法。

以下、場合により図面を参照しつつ、本発明の実施形態について詳細に説明する。なお、図面中、同一又は相当部分には同一又は対応する符号を付し、重複する説明は省略する。なお、各図における寸法比は、説明のため誇張している部分があり、必ずしも実際の寸法比とは一致しない。

（実施形態１）
図１Ａは、実施形態１の細胞塊用培養容器の平面図であり、図１Ｂは、図１Ａの部分拡大図である。図２は、図１ＡのＩＩ−ＩＩ’線に沿った矢視断面図であり、図３は、図１ＡのＩＩＩ−ＩＩＩ’線に沿った矢視断面図であり、図４は、図２の部分拡大図である。

図１Ａ〜図４を用いて説明される実施形態１の培養容器１は、細胞塊を培養するための容器である。培養容器１は、板状体２に形成された複数のウェル２１と、各ウェル２１の上方に配置された筒状体３とを含む。以下の説明の便宜のために、板状体２の平面と直行する方向を「上下方向」、筒状体３側を「上方」、ウェル２１側を「下方」という。

実施形態１の培養容器１は、複数のウェル２１の開口よりも上方に突出して複数のウェル２１を囲う側壁４と、複数のウェル２１の開口よりも下方に突出した台座５を含む。培養容器１を平面視した時に見える側壁４の外面及び内面の形状は各々略矩形である。台座５は、ウェル２１よりも、より板状体２から遠くまで突出しているので、培養容器１を水平面上に置いた時、台座５の端面が水平面に接する。

各ウェル２１は、細胞塊と培養液を収容可能とする培養空間を有する。筒状体３の形状は、略円筒状であり、培養空間と連通した内腔を有する。筒状体３の筒壁３ｂには、複数の連通部３ａが、筒状体３の周方向に沿って等間隔で形成されている。連通部３ａは、筒状体３の中心軸３ｃ（図４参照）と平行で筒状体３の基端３ｄから先端３ｅに達するまで形成されたスリットである。尚、筒状体３の中心軸３ｃは、前記上下方向と平行である。

図１Ａ〜図４を用いて説明される実施形態１の培養容器１の一例では、スリット３ａの両端のうちのウェル２１により近い一方の端が筒状体３の基端３ｄと一致し、ウェル２１から遠い他方の端が筒状体３の先端３ｅと一致している。しかし、培養液の一部の排出を行うために培養容器１を傾けた際に、細胞塊がウェル２１の外に出てしまうことなく、且つ、ウェル２１中の培養液の一部の排出が良好に行えるかぎり、スリットは、上記の一例に限定されない。例えば、スリットは、筒状体３の基端３ｄよりも上方から筒状体３の先端３ｅに向かって形成されていてもよい。あるいは、スリットは、筒状体３の筒壁をその厚み方向に貫通し、その長手方向が筒状体３の周方向に沿った貫通穴であってもよい。あるいは、連通部３ａはスリットに限定されず、例えば、筒状体３の筒壁３ｂをその厚み方向に貫通する貫通穴であってもよい。

図１Ａ〜図４を用いて説明される実施形態１の培養容器１の一例では、連通部３ａ（スリット）の数は８個であるが、連通部３ａの数について特に制限はない。しかし、各ウェル２１内から培養液を効率的に排出させ易く、後述する新鮮培養液が、各ウェル内に均一に行き渡り易いという理由から、２個以上が好ましく、４個以上がより好ましく、６個以上が更に好ましい。また、各ウェル２１が２個以上の連通部３ａを含む場合、培養液を効率的に排出させるという理由から、２個以上の連通部３ａから選択される１対の連通部３ａは、周方向に９０度以上離れていると好ましく、１８０度以上離れているとより好ましい。

図１Ｂに示されるように、スリットの幅Ｗ１（周方向の幅）は、実施形態１の培養容器１に移設される直前の細胞塊の顕微鏡観察により測定される直径よりも小さければよいが、当該細胞塊の直径が６００〜７００μｍである場合、培養液の排出効率の向上の観点から、０．１ｍｍ以上が好ましく、０．２ｍｍ以上がより好ましく、０．２５ｍｍ以上が更に好ましく、細胞塊の流出の可能性を低減する観点から、０．５ｍｍ以下が好ましく、０．４ｍｍ以下がより好ましく、０．３ｍｍ以下が更に好ましい。

なお、本明細書において、スリットの長手方向が筒状体３の中心軸３ｃ（図４参照）と平行である場合、スリットの幅とは、筒状体３の中心軸３ｃ（図４参照）と垂直な方向におけるスリットの長さをいう。また、スリットの長手方向が筒状体３の周方向に沿っている場合、スリットの幅とは、筒状体３の中心軸３ｃ（図４参照）と平行な方向におけるスリットの長さをいう。

後述する本開示の細胞塊の培養方法では、複数のウェル２１内の培養液の質を、連通部３ａを利用した拡散により均一化する観点から、培養液の液面は、筒状体３の基端３ｄよりも上方とされることが好ましい。当該培養方法において、細胞塊が培養液中を浮遊し筒状体３の先端を越えて筒状体３と側壁４の間や、隣接する筒状体３及びウェル２１内に移動することが起こらないよう、筒状体３の高さＨ１は、１〜７ｍｍであると好ましく、３〜５ｍｍであるとより好ましい。

複数のウェル２１の開口は、複数のウェル２１を連結する板状体２の一方の面２ａ（図２参照）と同一平面内にあり、筒状体３は、当該平面上に配置されている。連通部３ａであるスリットは、培養液の排出効率の向上の観点から、筒状体３の基端３ｄ（図４参照）から形成されていると好ましい。

培養液の排出最中に、細胞塊に物理的な刺激が加わることを抑制する観点から、筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２（図３及び図４参照）の内面には段差がないと好ましく、具体的には、筒状体３の中心軸３ｃとウェル２１の中心軸とが一致しており、筒状体３の内周面である円筒面の半径と、ウェル２１の開口における半径とが等しいと好ましい。また、例えば、ウェル２１が筒状の胴部２１ａ（図４参照）を含み、胴部２１ａの内面が円筒面である場合、筒状体３の中心軸３ｃとウェル２１の中心軸とが一致しており、筒状体３の内周面である円筒面の半径と、胴部２１ａの内周面である円筒面の半径とが等しいと好ましい。

各ウェル２１は、筒状の胴部２１ａと、胴部２１ａの一端に設けられた漏斗形状の底部２１ｂとを含む。底部２１ｂでは、ウェル２１の培養空間はウェル２１の先端（開口とは反対側）に向かって縮径している。ウェル２１の培養空間に面する内面のうち、底部の中心部２１ｃでは曲面である。即ち、底部２１ｂの内面は、頂点部分が曲面の逆円錐面ということができる。胴部２１ａは、例えば、略円筒状であってもよい。各ウェル２１の一又は複数の実施形態において、ウェル２１をその中心軸を含む平面で切断した場合の断面図（図４参照）において、底部２１ｂの内面が、略Ｖ字形状であり、その中心部２１ｃでは弧状である。各ウェル２１の一又は複数の実施形態において、内面のうち、胴部２１ａと底部２１ｂとの接続部分は、曲面であると好ましい。

また、ウェル２１は、一又は複数の実施形態において、ウェル２１をその中心軸を含む平面で切断して平面的にみた場合、ウェル２１の内面は、胴部２１ａではウェル２１の中心軸と略平行であり、漏斗形状の底部２１ｂでは、ウェル２１の内面の頂点２１ｄ（最深部）を通る中心軸に向かって傾斜する１対の傾斜面２１ｅを含み、底部２１ｂの中心部２１ｃでは弧状面２１ｆを含む。

図４に示されるように、底部２１ｂの開き角度θは、細胞塊の培養が効率的に行えるという理由から、６０度を超え１００度以下が好ましく、７０〜１００度がより好ましく、さらに好ましくは８０〜９０度である。本開示における「開き角度」とは、前記１対の傾斜面２１ｅがなす角をいい、例えば、図４においてθで示す角度である。

底部２１ｂの中心部内面における曲率半径Ｒ_１は、培養液の交換の際、細胞塊が培養液面より露出せず、且つ、細胞塊に刺激が加わることを抑制できるという理由から、０．５〜２．０ｍｍが好ましく、細胞塊の光学顕微鏡による観察が行い易いという理由から、１．０〜２．０ｍｍがより好ましい。尚、本開示における「中心部内面の曲率半径」とは、ウェル２１の底部２１ｂの先端部の曲率が１/Ｒ_１の曲面を含む円周に対応する半径である。中心部内面の曲率半径Ｒ_１は、レーザー距離計、または成型品の切断断面の実測により測定できる。

ウェル２１と筒状体３とからなる構造体１２（図４参照）をその中心軸を含む平面で切断して平面的にみた場合、スリット３ａの両端のうちのウェル２１により近い一方の端からウェル２１の最深部２１ｄまでの長さＨ２（図４参照）は、培養液の交換のために培養液の一部が除去された後、新しい培養液が添加される前の細胞塊が培養液面より露出せず、培養液の除去に伴って細胞塊が受けるダメージや刺激を低減するという理由から、３．０〜６．０ｍｍが好ましく、更に細胞塊に対して十分な量の栄養及び酸素を供給するという理由から、３．０〜５．０ｍｍがより好ましい。

スリット３ａが筒状体３の基端３ｄから筒状体３の先端３ｅに向かって形成されている場合、ウェル２１の深さは、培養液の交換のために培養液の一部が除去された後、新しい培養液が添加される前の細胞塊が培養液面より露出せず、培養液の除去に伴って細胞塊が受けるダメージや刺激を低減するという理由から、３．０〜６．０ｍｍが好ましく、更に細胞塊に対して十分な量の栄養及び酸素を供給するという理由から、３．０〜５．０ｍｍがより好ましい。

ウェル２１の開口における直径は、マルチディスペンサーを使用する場合の操作性に優れるという理由から、例えば、４．０ｍｍ以上が好ましく、培養容器一つ当たりのウェル２１の数を増やす点から、１１．０ｍｍ以下が好ましい。

ウェル２１と筒状体３とからなる構造体１２（図４参照）の内側空間の１個当たりの容量、換言すると、ウェル２１の培養空間（ウェル２１の内側空間）の容量と筒状体３の内周面（例えば円筒面）の内側空間の容量の合計は、特に制限されるものではないが、細胞塊の培養のために十分な量の培養液や試薬を添加できる点から、例えば、５０〜５００μＬが好ましく、培養液や試薬の使用量を低減する点から、５０〜２００μＬがより好ましい。

尚、本実施形態の培養容器のウェルの形態は上記した胴部２１ａと漏斗形状の底部２１ｂとを含むものに限定されない。ウェルの形態は、ウェル内から細胞塊が出てしまうことなくウェル中の培養液の一部の排出が行える限り、例えば、内面が半球状である形態であってもよいし、胴部と底部とを含み底部が半球状である形態であってもよい。

一又は複数の実施形態において、ウェル２１の少なくとも底部２１ｂの内面は、細胞低接着性処理が行われていることが好ましい。本開示における「細胞低接着性処理」とは、細胞に対するウェル２１の内面の接着性を低減するための処理をいう。接着性が低減するとは、例えば、ウェル２１の内面と細胞とが接着しにくくなること、及びウェル２１の内面と細胞とが接着しなくなることを含む。

細胞低接着性処理としては、例えば、ウェル２１の内面の親水化処理が挙げられる。親水化処理としては、例えば、水溶性樹脂を用いた被覆層の形成、及び親水性樹脂を用いた被覆層の形成等が挙げられる。本開示における「水溶性樹脂」とは、水分子とのイオン結合又は水素結合により水和して水に溶解するものであって、２５℃の水１００ｇに対して１．０ｇ以上溶解可能なものをいう。また、水溶性樹脂としては、水に溶解するために分子内の主鎖に対して必要充分な量のイオン性又は極性の側鎖を有するものが挙げられる。

水溶性樹脂としては、例えば、ポリ酢酸ビニルのケン化物、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、ポリメタアクリルアミド、ポリヒドロキシエチルメタアクリレート、ポリペンタエリスリトールトリアクリレート、ポリペンタエリスリトールテトラアクリレート、ポリジエチレングリコールジアクリレート、及びそれらを構成するモノマー同士の共重合体、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンと他のモノマー（例えばブチルメタクリレート等）との共重合体等が挙げられる。これらの中でもポリ酢酸ビニルのケン化物、ポリビニルピロリドン、及びポリエチレングリコールの中から選ばれる１種以上と後述する官能基とからなる構造が好ましい。これにより、種々の細胞に対する刺激を抑制し、細胞塊の成長率、及び成長した細胞塊の質を向上することができる。

ポリ酢酸ビニルのケン化物としては、例えば、ポリビニルアルコール又はビニルアルコールと他の化合物との共重合体、親水基変性、疎水基変性、アニオン変性、カチオン変性、アミド基変性又はアセトアセチル基のような反応基変性させた変性酢酸ビニルとビニルアルコールとのケン化物等が挙げられる。重合体の平均重合度は、特に限定されないが、培養容器の内面に均一な被膜が形成しやすく、かつ作業性が良好となる点から、１００〜１０，０００が好ましく、２００〜５，０００がより好ましい。ポリ酢酸ビニルのケン化物のケン化度は、特に限定されないが、該ポリ酢酸ビニル全体の２０〜１００ｍｏｌ％が好ましく、５０〜９５ｍｏｌ％がより好ましい。

水溶性樹脂は、硬化させるための官能基を側鎖に有する水溶性樹脂が好ましい。硬化させるための官能基としては、例えば、放射線反応性、感光性、熱反応性の官能基等が挙げられる。感光性の官能基としては、例えば、ジアゾ基、アジド基、シンモナイル基等が挙げられる。熱反応性及び放射線反応性の官能基としては、例えば、ビニル基、エポキシ基等を挙げることができる。これらの官能基を有する水溶性樹脂の中でも硬化処理を迅速におこなうことができ、簡易な設備で硬化させることができる点から、感光性の官能基を有する水溶性樹脂が好ましい。

水溶性樹脂としては、３００〜５００ｎｍの波長の光の照射により均一な被覆層が形成でき、細胞の接着量を低減して細胞塊の成長効率を向上できることから、アジド基を有する水溶性樹脂が好ましく、より好ましくは下記式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表される水溶性樹脂である。

式（Ｉａ）において、Ｒはカルボニル基と−ＮＨ−基とを有する３価の炭化水素基を示す。炭化水素基としては、飽和炭化水素基又は不飽和炭化水素基が挙げられ、中でも極性の側鎖の合成が容易となる点から、下記式（ＩＩ）で表される基が好ましい。

式（Ｉｂ）において、Ｒはカルボニル基と−ＮＨ−基とを有する２価の炭化水素基を示す。炭化水素基としては、飽和炭化水素基又は不飽和炭化水素基が挙げられる。

式（Ｉａ）において、ｒ１は１〜１０００を示し、ｒ２は４０〜４９９５を示し、ｒ３は０〜４０００を示し、ｎは１、２又は３を示す。式（Ｉｂ）においてｒ１は１〜１０００を示し、ｒ２は４０〜４９９５を示し、ｒ３は０〜４０００を示す。

親水性樹脂としては、特に限定されるものではないが、例えば、ポリ−２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ポリ−ＨＥＭＡ）、ホスホリルコリン基含有高分子化合物、ポリエチレングリコール鎖含有高分子化合物等が挙げられる。

被覆層の厚みとしては、特に限定されるものではないが、細胞が基材（ウェル）から受ける物理的な刺激を低減しつつ、被覆層に取り込まれるタンパク質量を低減してタンパク質を介した細胞のウェルへの接着を抑制できる点から、例えば、１００〜５，０００ｎｍが好ましく、１５０〜１，０００ｎｍがより好ましい。

本開示にかかる培養容器の材質は特に制限されるものではないが、培養容器をディスポーザルタイプとすることができ、かつ成形が容易である点から、樹脂が好ましい。樹脂としては、例えば、ポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、エチレン-プロピレン共重合体等のポリオレフィン系樹脂または環状ポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン系樹脂等のポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂等のメタクリル系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素系樹脂、ポリメチルペンテン樹脂、ポリアクリロニトリル等のアクリル系樹脂、プロピオネート樹脂等の繊維素系樹脂等が挙げられる。これらの中でも、培養容器に求められる成形性、及び滅菌性の点から、ポリスチレン樹脂が好ましい。

本開示にかかる培養容器の形態としては、複数のウェルを含むマルチウェルプレート等が挙げられる。マルチウェルプレートにおけるウェルの数は特に制限されるものではないが、例えば、６、１２、２４、４８、９６、又は３８４個である。

本開示にかかる培養容器は、以下のようにして製造することができる。

まず、上述の樹脂材料を用いて、射出成形、ブロー成形、インジェクションブロー成形等によって所望の形状に成形する。図１Ａ〜図４を用いて説明される実施形態１の培養容器１は、板状体２と、板状体２に形成された複数のウェル２１と、側壁４と、台座５とを含むマルチウェルプレート本体１１と、複数の筒状体３とが、射出成形法により同一金型内で成型できる。

次に、成形した容器に細胞低接着性処理を行う。細胞低接着性処理は、例えば、ＷＯ２０１３／１８３７７７公報に記載の方法で行える。

上述の細胞低接着性処理を行った後、滅菌する。滅菌は、例えば、エチレンオキサイドガス滅菌、乾熱滅菌、蒸気滅菌、放射線滅菌等が挙げられ、γ線又は電子線を用いた放射線滅菌が好ましく、大量生産を行う点からは、放射線透過性の点でγ線滅菌がより好ましい。

［細胞塊の培養方法］
次に、本開示の培養容器を用いて細胞塊を培養する方法について説明する。本開示にかかる細胞塊の培養方法（以下「培養方法」と略称する場合もある。）によれば、本開示にかかる培養容器を用いるため、細胞塊への影響が少なく、培養液を効率的に交換できるので、細胞塊の培養が効率的に行える。

本開示の培養方法は、一又は複数の実施形態において、培養液が培養空間に充填されたウェル内で細胞塊を所定の期間培養した後、本開示にかかる培養容器を傾けることにより、ウェル内の培養液の一部を、連通部を通過させて筒状体の外側に排出させ、次いで、培養容器から除去した後、除去した培養液と等しいかほぼ等しい量の新しい培養液（新鮮培養液）を前記培養容器に添加する培養液交換工程を含み、当該培養液交換工程を所定の回数繰り返す。

本開示の培養方法の培養対象が、例えば、ヒト胚性幹細胞（ヒトＥＳ細胞）又はヒト多能性幹細胞（ヒトｉＰＳ細胞）の細胞塊である場合、例えば、細胞塊形成用マルチウェルプレートで形成された細胞塊を培養液全量とともに、本開示の培養容器に移設し、当該細胞塊に本開示の培養方法を適用してもよい。細胞塊形成用マルチウェルプレートで形成され、本開示の培養容器に移設される直前の細胞塊（即ち、本開示の培養容器を用いた培養の対象となる細胞塊）の顕微鏡観察により観察される直径は、本開示の培養容器において細胞塊への栄養供給が十分に行えるという理由から、５００μｍ〜１，０００μｍが好ましい。本開示の培養容器への細胞塊の移設は、１つのウェル内に対して１つの細胞塊が配置されるように行う。

前記培養液交換工程において、「所定の期間」は、細胞の種類、ウェルの容量、培養の目的等に応じて異なっていてもよいし、前記培養液交換工程毎に異なっていてもよい。例えば、培養初期の前記培養液交換工程における「所定の期間」の方が、培養初期より後の前記培養液交換工程における「所定の期間」よりも長くてもよい。また、前記培養液交換工程の繰り返し回数についても、細胞の種類、ウェルの容量、培養の目的等に応じて適宜決定される。

前記培養液交換工程において、培養液の除去に伴って細胞塊が受けるダメージや刺激を低減するという理由から、各ウェル内の培養液の一部を、連通部を通過させて筒状体の外側に排出させる。培養液の一部が除去された後、新しい培養液が添加される前の細胞塊は、培養液中に細胞塊全体が沈んだ状態に保たれていると好ましい。

前記培養液交換工程において、培養容器から除去される培養液の量及び添加される新鮮培養液の量は、培養液の交換の際に細胞塊が培養液面より露出せず、且つ、新鮮培養液の添加により細胞塊に対して十分な量の栄養及び酸素を供給するという理由から、培養液が除去される直前の培養容器中の培養液を１００質量部とすると、５０質量部以上９９質量部以下が好ましく、７５質量部以上９９質量部以下がより好ましい。

前記培養液交換工程において、新鮮培養液を培養容器に添加した後、新鮮培養液が、各ウェル内に均一に行き渡るように、培養容器を揺動すると好ましい。

前記培養液交換工程で用いられる培養液は、細胞の種類、ウェルの容量、培養の目的等に応じて、従来から公知の培養液を用いればよい。

本開示の培養方法において、細胞塊が浮き上がりすぎてウェル２１の外に出てしまわない限り、複数のウェル２１内の培養液の質を、連通部３ａを利用した拡散により均一化するという理由から、培養液は、ウェル２１内の培養空間のみならず、ウェル２１の開口よりも上方であって側壁４により囲われる空間内にも供給されていると好ましい。換言すると、培養液は、その一部が複数のウェル２１からあふれ、筒状体３の内腔のうちの基端側にも充填されるように供給されると好ましい。培養液の液面は、例えば、スリット３ａの両端のうちのウェル２１により近い一方の端よりも上方にあってもよい。

本開示の培養容器を用いた細胞塊の培養方法を経た細胞塊は、別の培養容器に移設され当該培養容器でさらに培養されてもよい。

（実施形態２）
図５は実施形態２の培養容器６の平面図である。図６は図５のＶＩ−ＶＩ’線に沿った矢視拡大断面図である。図７は、図５のＶＩＩ−ＶＩＩ’線に沿って切断した拡大端面図である。図８は、実施形態２の培養容器６を構成するマルチウェルプレート本体６１の平面図であり、図９は図８のＩＸ−ＩＸ’線に沿った矢視断面図である。図１０は、実施形態２の培養容器６を構成する液流制御体８００の平面図であり、図１１は図１０に示した液流制御体８００の底面図であり、図１２は、図１０のＸＩＩ−ＸＩＩ’線に沿った矢視拡大断面図であり、図１３は図１０の拡大側面図であり、図１４は図１１に示した液流制御体８００の拡大斜視図である。

図５〜図１４を用いて説明される実施形態２の培養容器６は、実施形態１の培養容器１と同様に、板状体７に形成された複数のウェル７１と、各ウェル７１の上方に配置された筒状体８１と、複数のウェル７１の開口よりも上方に突出して複数のウェル７１を囲う側壁９と、複数のウェル７１の開口よりも下方に突出した台座１０とを含む。しかし、実施形態２の培養容器６では、筒状体８１は複数の筒状体８１の連結体８０（図１０及び図１１参照）を含む液流制御体８００を構成している点、及び、連通部８１ｂが筒状体８１の周方向に沿ったスリットである点で、実施形態１の培養容器１と相違する。

実施形態２の培養容器６は、マルチウェルプレート本体６１（図８及び図９参照）と、液流制御体８００（図１０、図１１、及び図１４参照）とを含む。マルチウェルプレート本体６１は、板状体７に形成された複数のウェル７１と、複数のウェル７１の開口よりも上方に突出して複数のウェル７１を囲う側壁９と、複数のウェル７１の開口よりも下方に突出した台座１０とを含む。以下の説明の便宜のために、板状体７の平面と直行する方向を「上下方向」（Ｚ軸方向）、筒状体８１側を「上方」、ウェル７１側を「下方」という。尚、筒状体８１の中心軸８１ａ（図７参照）は、前記上下方向及び前記Ｚ軸方向と平行であり、ウェル７１の中心軸と一致する。

実施形態２の培養容器６において、液流制御体８００は、マルチウェルプレート本体６１に接合されておらずマルチウェルプレート本体６１と別体であってもよし、マルチウェルプレート本体６１と、接合により一体化されていてもよい。

図１４からよく分かるように、液流制御体８００を構成する各筒状体８１のウェル７１側の端面（底面）８４には、少なくとも１つの溝８４ｂが形成されており、好ましくは周方向に沿って複数の溝８４ｂが形成されており、より好ましくは周方向に沿って複数の溝８４ｂが等間隔で形成されている。図７からよく分かるように、液流制御体８００が板状体７の一方の面７ａ上に配置された状態では、この溝８４ｂは、筒状体８１の外側に細胞塊を通過させることなく培養液を排出させうる連通部８１ｂを構成し、各筒状体８１のウェル７１側の端面（底面）８４のうちの溝８４ｂが形成されていない部分８４ａは、各々、板状体７の一方の面７ａと接する。即ち、溝８４ｂは、液流制御体８００が板状体７の一方の面７ａ上に配置された状態では、筒状体８１に形成され、筒状体８１の周方向に沿ったスリット８１ｂを構成する。

図５〜図１４を用いて説明される実施形態２の培養容器６の一例では、ウェル７１内の培養液を筒状体８１の外側に排出させうる連通部（筒状体８１の周方向に沿ったスリット）が、筒状体８１のウェル７１側の端面（底面）８４のうちの溝８４ｂを構成する面と板状体７の一方の面７ａのうちの当該溝８４ｂと対向する部分とによって形成されるスリットであるが、筒状体８１の周方向に沿ったスリットは、これに限定されない。筒状体８１の周方向に沿ったスリットは、培養液の一部の排出を行うために培養容器１を傾けた際に、細胞塊がウェル７１の外に出てしまうことなく、ウェル７１中の培養液の一部の排出が良好に行えるかぎり、例えば、筒状体８１の筒壁をその厚み方向に貫通し、その長手方向が筒状体８１の周方向に沿った貫通穴であってもよい。あるいは、スリットの長手方向が筒状体８１の中心軸８１ａ（図７参照）と平行であってもよい。

溝８４ｂの深さ又はスリットの幅Ｗ２（図７参照）は、実施形態２の培養容器６に移設される直前の細胞塊の顕微鏡観察により測定される直径よりも小さければよいが、当該細胞塊の直径が６００〜７００μｍである場合、培養液の排出効率の向上の観点から、０．１ｍｍ以上が好ましく、０．２ｍｍ以上がより好ましく、０．２５ｍｍ以上が更に好ましく、細胞塊の流出の可能性を低減する観点から、０．５ｍｍ以下が好ましく、０．４ｍｍ以下がより好ましく、０．３ｍｍ以下が更に好ましい。

溝８４ｂ又はスリットの周方向の長さＷ３（図１１参照）は、培養液の排出効率の向上の観点から、２ｍｍ以上が好ましい。

図５〜図１４を用いて説明される実施形態２の培養容器６では、連通部８１ｂの数は４個であるが、連通部８１ｂの数について特に制限はない。しかし、ウェル７１内から培養液を効率的に排出させ易く、前述の新鮮培養液が、各ウェル７１内に均一に行き渡り易いという理由から、２個以上が好ましく、４個以上がより好ましい。また、実施形態２の培養容器６が２個以上の連通部８１ｂを含む場合、培養液を効率的に排出させる観点から、２個以上の連通部８１ｂから選択される１対の連通部８１ｂは、周方向に９０度以上離れていると好ましい。

図５〜図１４を用いて説明される実施形態２の培養容器６では、ウェル７１の内面の形状は、半球状であるが、実施形態２の培養容器６において、ウェル７１の形態はこれに限定されず、実施形態１の培養容器１のそれと同形態であってもよい。ウェル７１の開口における直径、ウェル７１の深さ、ウェル７１と筒状体８１とからなる構造体の内側空間の１個当たりの容量、及びウェル７１の１個当たりの容量等も、実施形態１の培養容器１のそれと同じであってもよい。

図１０及び図１１からよく分かるように、液流制御体８００は、複数の筒状体８１が架橋部８２によって連結された連結体８０と、位置規制部８３とを含む。液流制御体８００において、複数の筒状体８１は、隣り合う筒状体８１の間に配置された架橋部８２によって連結されている。図７等に示されるように、架橋部８２は、各々、その板状体７に対向する面８２ａが、板状体７の一方の面７ａと接しないように、筒状体８１の外周面の上下方向の中央部で筒状体８１と連結しているので、架橋部８２と板状体７の一方の面７ａとの間には隙間Ｃ１が存在する。また、図１０及び図１１からよく分かるように、複数の筒状体８１のうちの連結体８０の外縁に配置された筒状体８１’には、各々、位置規制部８３が連結されている。

図６に示されるように、位置規制部８３の一端８３ａは、筒状体８１の外周面の上下方向の中央部で筒状体８１と連結しており、位置規制部８３の他端の端面８３ｂは、側壁９の内面９ａと当接している。そのため、例えば、液流制御体８００がマルチウェルプレート本体６１と別体である場合は、板状体７の一方の面７ａ上に配置された液流制御体８００の、Ｘ軸と平行な方向及びＹ軸と平行な方向への移動が防止され（図５参照）、各筒状体８１が常に対応するウェル７１の上方の所定の位置に配置されることが保証されており、液流制御体８００が、マルチウェルプレート本体６１に接合されている場合は、その接合の際の液流制御体８００の位置決めが容易となっている。

図６に示されるように、位置規制部８３の板状体７に対向する面のうちの少なくとも筒状体８１に近い部分８３ｃは、板状体７の一方の面７ａと接しないように、筒状体８１の外周面の上下方向の中央部で筒状体８１と連結しているので、位置規制部８３と板状体７の一方の面７ａとの間には隙間Ｃ２が存在する。そのため、培養容器６を傾けることにより連通部（スリット）８１ｂを通ってウェル７１内から排出された培養液は、隙間Ｃ１及び隙間Ｃ２を通って、例えば、培養容器の角に集めることができる。

一方、位置規制部８３の筒状体８１から離れた端部（他方の端部）では、側壁９の内面９ａのみならず、板状体７の一方の面７ａと接していると、マルチウェルプレート本体６１内における液流制御体８００の位置決めが容易であるという理由から、好ましい。

図５〜図１４を用いて説明される実施形態２の培養容器６では、複数の筒状体８１のうちの連結体８０の外縁に配置された筒状体８１'の全てに位置規制部８３が連結されている。しかしながら、実施形態２の培養容器６は、これに限定されない。液流制御体８００は、一方の端部が連結体８０に連結され他方の端部が側壁９の内面と当接する少なくとも１対の位置規制部８３とを含み、互いに向かい合う側壁９の内面９ａの一方に、一方の位置規制部８３が当接し、互いに向かい合う側壁９の内面９ａの他方に、他方の位置規制部８３が当接していてもよい。これにより、液流制御体８００が、マルチウェルプレート本体６１に接合されている場合には、その接合の際の液流制御体８００の板状体７の一方の面７ａ上における位置決めを容易に行うことができる。また、液流制御体８００が、マルチウェルプレート本体６１と別体である場合には、液流制御体８００の板状体７の一方の面７ａ上における移動を抑制することができる。

同様の観点から、液流制御体８００は、前記１対の位置規制部８３を２つ含み、図５に示されるように、Ｙ軸方向に互いに向かい合う側壁９の内面の一方に、１対の位置規制部８３'のうちの一方の位置規制部が当接し、Ｙ軸方向に互いに向かい合う側壁９の内面の他方に、他方の位置規制部８３'が当接し、Ｘ軸方向に互いに向かい合う側壁９の内面の一方に、もう一方の１対の位置規制部８３’’のうちの一方の位置規制部８３’’が当接し、Ｘ軸方向に互いに向かい合う側壁９の内面の他方に、他方の位置規制部８３’’が当接していると好ましい。

実施形態２の培養容器６の材料は実施形態１の培養容器１のそれと同様でよい。実施形態２の培養容器６は、マルチウェルプレート本体６１と液流制御体８００とを各々、別々に成型した後、例えば、これらを接合、又はマルチウェルプレート本体６内に液流制御体８００を配置させることにより製造できる。

実施形態２の培養容器６を、上記［細胞塊の培養方法］に用いれば、細胞塊への影響が少なく、培養液を効率的に交換できるので、細胞塊の培養が効率的に行える。

（実施形態３）
図１５Ａは、実施形態３の細胞塊用培養容器１００の平面図であり、図１５Ｂは、図１５Ａの部分拡大図である。図１６は、図１５ＡのＸＶＩ−ＸＶＩ’線に沿った矢視拡大断面図である。図１７Ａは、図１５ＡのＸＶＩＩ−ＸＶＩＩ’線に沿った矢視拡大断面図であり、図１７Ｂは、図１７Ａの部分拡大図である。図１８は、図１６の部分拡大図であり、図１９は、細胞塊用培養容器１００の筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２の内部構造を説明する斜視断面図である。図２０は、図１５Ａの部分拡大図であり、図２１は、本開示の細胞塊用培養容器１００を用いて細胞塊１４を所定時間培養液１３中で培養した後、ウェル２１内の培養液１３の一部を連通部３ａを通過させて構造体１２外へ排出した後の状態を説明する概念図である。

図１５Ａ〜図２１を用いて説明される実施形態３の培養容器１００は、細胞塊を培養するための容器であり、後述する液誘導部を備えること以外は、上述した実施形態１及び実施形態２の細胞塊用培養容器と同様の構成を有している。具体的には、培養容器１００は、板状体２に形成された複数のウェル２１と、各ウェル２１の上方に配置された筒状体３とを含む。以下の説明の便宜のために、板状体２の平面と直交する方向を「上下方向」、筒状体３側を「上方」、ウェル２１側を「下方」という。

実施形態３の培養容器１００は、複数のウェル２１の開口よりも上方に突出して複数のウェル２１を囲う側壁４と、複数のウェル２１の開口よりも下方に突出した台座５を含む。培養容器１００を平面視した時に見える側壁４の外面及び内面の形状は各々略矩形である。台座５は、ウェル２１よりも、より板状体２から遠くまで突出しているので、培養容器１を水平面上に置いた時、台座５の端面が水平面に接する。

各ウェル２１は、細胞塊と培養液を収容可能とする培養空間を有する。筒状体３の形状は、略円筒状であり、培養空間と連通した内腔を有する。筒状体３の筒壁３ｂには、複数の連通部３ａが、筒状体３の周方向に沿って例えば、等間隔で形成されている。連通部３ａは、筒状体３の中心軸３ｃ（図１８参照）と平行で筒状体３の基端３ｄから先端３ｅに達するまで形成されたスリットである。尚、筒状体３の中心軸３ｃは、前記上下方向と平行であり、ウェル２１、及び、筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２（図１７Ａ、図１７Ｂ、図１８、図１９、図２１等参照）の中心軸と一致する。

図１５Ａ〜図２１を用いて説明される実施形態３の培養容器１００の一例では、スリット３ａの長手方向両端のうちのウェル２１により近い一方の端（下側端３１１、図１８〜図１９参照）が筒状体３の基端３ｄと一致し、ウェル２１から遠い他方の端が筒状体３の先端３ｅと一致している。しかし、培養液の一部の排出を行うために培養容器１００を傾けた際に、細胞塊がウェル２１の外に出てしまうことなく且つウェル２１内の培養液の一部の排出が良好に行え、培養容器１００を水平面上に置いて新鮮培養液を供給する際に、構造体１２の外に供給された新鮮培養液のウェル２１内への流入が良好に行えるかぎり、スリットは、上記の一例に限定されない。例えば、スリットは、筒状体３の基端３ｄよりも上方から筒状体３の先端３ｅに向かって形成されていてもよい。

図１５Ａ〜図２１を用いて説明される実施形態３の培養容器１００の一例では、連通部３ａ（スリット）の数は８個であるが、連通部３ａの数について特に制限はない。しかし、各ウェル２１内からの培養液の排出性が向上し、後述する新鮮培養液が、各ウェル内に均一に行き渡り易いという理由から、２個以上が好ましく、４個以上がより好ましく、６個以上が更に好ましい。また、各ウェル２１が２個以上の連通部３ａを含む場合、培養液を効率的に排出させるという理由から、２個以上の連通部３ａから選択される一対の連通部３ａは、周方向に９０度以上離れていると好ましく、１８０度以上離れているとより好ましい。

一又は複数の実施形態において、図１５Ｂに示されるように、スリットの幅Ｗ１（周方向の幅）は、培養容器に移設される直前の細胞塊の顕微鏡観察により測定される直径よりも小さければよいが、当該細胞塊の直径が６００〜７００μｍである場合、培養液の排出性及び新鮮培養液の流入性の向上の観点から、０．１ｍｍ以上が好ましく、０．２ｍｍ以上がより好ましく、０．２５ｍｍ以上が更に好ましく、細胞塊の流出の可能性を低減する観点から、０．５ｍｍ以下が好ましく、０．４ｍｍ以下がより好ましく、０．３ｍｍ以下が更に好ましい。

後述する本開示の細胞塊の培養方法では、複数のウェル２１内の培養液の質を連通部３ａを利用した拡散により均一化する観点から、培養液の液面は、筒状体３の基端３ｄ（連通部３ａの下側端３１１）よりも上方とされることが好ましい。当該培養方法において、細胞塊が培養液中を浮遊し筒状体３の先端を越えて当該筒状体３の隣りの筒状体３との間や、隣りの筒状体３内及びウェル２１内に移動することが起こらないよう、筒状体３の高さＨ１（図１８参照）は、１〜７ｍｍであると好ましく、３〜５ｍｍであるとより好ましい。

一又は複数の実施形態において、複数のウェル２１の開口は、複数のウェル２１を連結する板状体２の一方の面２ａ（図１６〜図１８参照）と同一平面内にあり、筒状体３は、当該面２ａ上に配置されているが、連通部３ａであるスリットは、培養液の排出性の向上の観点から、筒状体３の基端３ｄ（図１８及び図１９参照）から形成されていると好ましい。

培養液の排出最中に、細胞塊に物理的な刺激が加わることを抑制する観点から、一又は複数の実施形態において、筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２（図１７Ａ、図１７Ｂ及び図１８参照）の内面（ただし、後述する液誘導部６０が形成された部分は除く）には段差がないと好ましく、具体的には、筒状体３の中心軸３ｃとウェル２１の中心軸とが一致しており、筒状体３の内周面である円筒面の半径と、ウェル２１の開口における半径とが等しいと好ましい。また、例えば、ウェル２１が筒状の胴部２１ａ（図１８参照）を含み、胴部２１ａの内面が円筒面である場合、筒状体３の中心軸３ｃとウェル２１の中心軸とが一致しており、筒状体３の内周面である円筒面の半径と、胴部２１ａの内周面である円筒面の半径とが等しいと好ましい。

図１８に示されるように、各ウェル２１は、筒状の胴部２１ａと、胴部２１ａの一端に設けられた漏斗形状の底部２１ｂとを含む。底部２１ｂでは、ウェル２１の培養空間はウェル２１の先端（開口とは反対側）に向かって縮径している。ウェル２１の培養空間に面する内面のうち、底部２１ｂの中心部２１ｃでは凹曲面である。即ち、底部２１ｂの内面は、頂点部分が曲面の逆円錐面ということができる。胴部２１ａは、例えば、略円筒状であってもよい。各ウェル２１の一又は複数の実施形態において、ウェル２１をその中心軸を含む平面で切断した場合の断面図（図１８参照）では、底部２１ｂの内面が、略Ｖ字形状であり、その中心部２１ｃでは弧状である。各ウェル２１の一又は複数の実施形態において、内面のうち、胴部２１ａと底部２１ｂとの接続部分は、曲面であると好ましい。

また、ウェル２１は、一又は複数の実施形態において、ウェル２１をその中心軸を含む平面で切断して平面的にみた場合、ウェル２１の内面は、胴部２１ａではウェル２１の中心軸と略平行であり、漏斗形状の底部２１ｂでは、胴部２１ａの内面の下側端からウェル２１の内面の頂点２１ｄ（最深部）を通る中心軸に向かって傾斜する一対の傾斜面２１ｅを含み、底部２１ｂの中心部２１ｃでは弧状面２１ｆを含む。

一又は複数の実施形態において、図１８に示されるように、底部２１ｂの開き角度θは、細胞塊の培養が効率的に行えるという理由から、６０度以上１００度以下が好ましく、７０〜１００度がより好ましく、更に好ましくは８０〜９０度である。本開示における「開き角度」とは、前記一対の傾斜面２１ｅがなす角をいい、例えば、図１８においてθで示す角度である。

一又は複数の実施形態において、底部２１ｂの中心部内面における曲率半径Ｒ_１は、培養液の交換の際、細胞塊が培養液面より露出せず、且つ、細胞塊に刺激が加わることを抑制できるという理由から、０．５〜２．０ｍｍが好ましく、細胞塊の光学顕微鏡による観察が行い易いという理由から、１．０〜２．０ｍｍがより好ましい。尚、本開示における「中心部内面の曲率半径」とは、ウェル２１の底部２１ｂの先端部の曲率が１/Ｒ_１の曲面を含む円周に対応する半径である。中心部内面の曲率半径Ｒ_１は、レーザー距離計、または成型品の切断断面の実測により測定できる。

一又は複数の実施形態において、ウェル２１と筒状体３とからなる構造体１２（図１８参照）をその中心軸を含む平面で切断して平面的にみた場合、スリット３ａの長手方向両端のうちのウェル２１により近い一方の端（下側端３１１）からウェル２１の最深部２１ｄまでの長さＨ２（図１８参照）は、培養液の交換のために培養液の一部が除去された後、新鮮培養液が添加される前の細胞塊が培養液面より露出せず、培養液の除去に伴って細胞塊が受けるダメージや刺激を低減するという理由から、３．０〜６．０ｍｍが好ましく、更に細胞塊に対して十分な量の栄養及び酸素を供給するという理由から、３．０〜５．０ｍｍがより好ましい。

スリット３ａが筒状体３の基端３ｄから筒状体３の先端３ｅに向かって形成されている場合、ウェル２１の深さは、培養液の交換のために培養液の一部が除去された後、新鮮培養液が添加される前の細胞塊が培養液面より露出せず、培養液の除去に伴って細胞塊が受けるダメージや刺激を低減するという理由から、３．０〜６．０ｍｍが好ましく、更に細胞塊に対して十分な量の栄養及び酸素を供給するという理由から、３．０〜５．０ｍｍがより好ましい。

一又は複数の実施形態において、ウェル２１の開口における直径は、マルチディスペンサーを使用する場合の操作性に優れるという理由から、例えば、４．０ｍｍ以上が好ましく、培養容器一つ当たりのウェル２１の数を増やす点から、１１．０ｍｍ以下が好ましい。

一又は複数の実施形態において、ウェル２１と筒状体３とからなる構造体１２（図１８参照）の内側空間の１個当たりの容量、換言すると、ウェル２１の培養空間（ウェル２１の内側空間）の容量と筒状体３の内周面（例えば円筒面）より内側空間の容量の合計は、特に制限されるものではないが、細胞塊の培養のために十分な量の培養液や試薬を添加できる点から、例えば、５０〜５００μＬが好ましく、培養液や試薬の使用量を節約する点から、５０〜２００μＬがより好ましい。

尚、培養容器のウェルの形態は上記した胴部２１ａと漏斗形状の底部２１ｂとを含むものに限定されない。ウェルの形態は、ウェル内から細胞塊が出てしまうことなくウェル中の培養液の一部の排出が行える限り、例えば、内面が半球状である形態であってもよいし、胴部と底部とを含み底部が半球状である形態であってもよい。

培養容器１００は、筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２の内面に形成された液誘導部６０を含む。図１９から良く分かるように、液誘導部６０は、一対の突出部６１０が構造体１２の内面に形成されることにより形成された液誘導補助溝６２０を含む。液誘導補助溝６２０は、各突出部６１の上側端面６１１がスリット３ａの下側端３１１よりも上方に配置されるように構造体１２の内面に一対の突出部６１０を形成し、且つ、筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２の内面のうちの少なくとも１つのスリット３ａの幅方向両側に各々スリット３ａの長手方向と同方向に沿って突出部６１０を形成することで、設けられている。スリット３ａが筒状体３の基端３ｄから形成された培養容器１００では、各突出部６１０の上側端部６１０ａとスリット３ａの下側端部３１ｂとが上下方向の同位置に配置されている。培養容器１００では、液誘導補助溝６２０を備えることで、毛細管現象により、スリット３ａからの新鮮培養液のウェル２１内への流入性及びウェル２１内の培養液の構造体１２外への排出性が向上されているものと推察される。尚、上下方向において、ウェル２１の内面の頂点２１ｄ（図１８参照）に近い側を突出部６１０の「下側」、スリット３ａの「下側」と呼び、遠い側を突出部６１０の「上側」、スリット３ａの「上側」と呼ぶ。

図１８等から良く分かるように、各突出部６１０の下側端部６１０ｂは、ウェル２１の内面のうちの底面（ウェル２１の底部２１ｂの内面）に達している。一対の突出部６１０の間に形成された液誘導補助溝６２０の一方の終端６２０ａは、閉塞端であり、ウェル２１の底部２１ｂの内面によって規定されている。終端６２０ａを規定するウェル２１の底部２１ｂの内面が、スリット３ａからウェル２１の培養空間内に流入し得る培養液の流れの上流側から下流側に向かって下方に傾斜する傾斜面２１ｅ（図１８参照）の一部である。液誘導補助溝６２０は、スリット３ａを介した培養液の構造体１２外への排出及び構造体１２内への流入を促す。

一又は複数の実施形態において、各突出部６１０の上側端面６１１からスリット３ａの下側端３１１までの上下方向の長さＷ４（図１６参照）は、スリット３ａからの新鮮培養液のウェル２１内への流入性が向上しやすいという理由から、０．１ｍｍ以上であると好ましく、０．３ｍｍ以上であるとより好ましい。一又は複数の実施形態において、長さＷ４の上限については特に制限はなく、突出部６１０は、筒状体３の上端に達するまで形成されていてもよい。尚、図１５Ａ〜図２１に示した培養容器１００では、スリット３ａが、筒状体３の基端３ｄ（図１８〜１９参照）から先端３ｅまで形成されているので、Ｗ４は、突出部６１０のうちの筒状体３の内面に形成された部分の上下方向の長さに等しい。しかし、本開示において、スリット３ａが筒状体３の基端３ｄから形成されていることは必須ではなく、スリット３ａが筒状体３の基端３ｄよりも上方から形成されている場合、Ｗ４は、突出部６１０のうちの筒状体３の内面に形成された部分の上下方向の長さよりも短い。

尚、図１５Ａ〜図２１を用いて説明する培養容器１００では、突出部６１０の上側端面６１１は、筒状体３の中心軸３ｃ（図１８参照）と直交する平面と平行な平面であり、スリット３ａの下側端も、筒状体３の中心軸３ｃ（図１８参照）と直交する平面と平行な平面によって規定されているので、長さＷ４は、筒状体の周方向に沿って一定である。しかし、例えば、突出部６１０の上側端面６１１が曲面であることにより、長さＷ４が筒状体の周方向に沿って一定でない場合、長さＷ４は各突出部６１０の上側端面６１１からスリット３ａの下側端までの長さの最大長とする。

一又は複数の実施形態において、スリット３ａの下側端３１１を通る円周上における突出部６１０間の距離Ｗ５（図１７Ｂ参照）は、スリット３ａからの新鮮培養液のウェル２１内へ流入性及びウェル２１内の培養液の構造体１２外への排出性が向上しやすく、且つ、細胞塊が一対の突出部６１０に挟まれることが防止できるという理由から、０．３ｍｍ以上であると好ましく、０．４ｍｍ以上であるとより好ましく、１．０ｍｍ以下であると好ましく、０．７ｍｍ以下であると更に好ましい。尚、スリット３ａの下側端３１１を通る円周は、筒状体３の中心軸３ｃ（図１８参照）上の点であってスリット３ａの下側端３１１を含み中心軸３ｃと直交する平面上の点を中心とする円周である。また、Ｗ５は、筒状体３の内面上におけるスリット３ａの下側端３１１と同一位置の突出部６１０間の距離ということができる。

図１９から良く分かるように、各突出部６１０の培養空間と向かい合う面６１０ｃは、筒状体３の中心軸３ｃの延長軸（ウェル２１の中心軸）に向かって突出した凸曲面である。当該凸曲面は、ウェル２１の内面２１ｅ（胴部２１ａの内面）から遠い部分が近い部分よりも高くなった曲面である。突出部６１０を、筒状体３の中心軸３ｃ（図１８参照）と直交する方向に切断した場合の突出部６１０の断面は、例えば、円弧と直線によって囲われる弓形（円を一つの弦で２つに分けたときにできる形）である。あるいは、２つの円の重なり部分により規定される形である。各突出部６１０の培養空間と向かい合う面６１０ｃが前記凸曲面であると、細胞塊が各突出部６１０から受ける物理的な刺激を低減できる。

一又は複数の実施形態において、スリット３ａからの新鮮培養液のウェル２１内へ流入性及びウェル２１内の培養液の構造体１２外への排出性が向上しやすく、且つ、細胞塊が一対の突出部６１０に挟まれることが抑制されるという理由から、前記突出部の断面が弓形又は２つの円の重なり部分により規定される形であり、弓形又は２つの円の重なり部分により規定される形を形成する、前記筒状体の中心軸に向かって突出した円弧を含む円周の曲率半径Ｒ_２（図２０参照）は、０．５ｍｍ以上１．０ｍｍ以下であることが好ましい。

一又は複数の実施形態において、スリット３ａからの新鮮培養液のウェル２１内へ流入性及びウェル２１内の培養液の構造体１２外への排出性が向上しやすく、且つ、細胞塊が一対の突出部６１０に挟まれることが抑制されるという理由から、図２０に示されるように、培養容器１００を平面視して、前記曲率半径Ｒ₂を半径とする円の中心が、スリット３ａの幅方向中心を通り、筒状体３の内面を含む円周の接線上にあると好ましい。

また、実施形態３の培養容器１００においても実施形態１の培養容器１と同様に、ウェル２１の少なくとも底部２１ｂ（図１８参照）の内面は、細胞低接着処理が施されていると好ましい。

図１５Ａ〜図２１を用いて説明した培養容器１００では、一対の突出部６１０及び液誘導補助溝６２０の数は、１つの構造体１２について、各々２個であるが、本開示の培養容器１００において、一対の突出部６１０及び液誘導補助溝６２０の数はこれに限定されない。一対の突出部６１０及び液誘導補助溝６２０の数は、ウェル２１の容量に応じたウェル２１内の培養液の排出量及びウェル２１内への培養液の流入量を考慮の上、１つ以上設ければよい。

培養容器１００では、ウェル２１内の培養液を筒状体３の外側に排出させうる連通部３ａが、筒状体３の筒壁３ｂに形成され筒状体３の中心軸３ｃ（図１８参照）と平行なスリットであるが、連通部３ａはこれに限定されず、例えば、筒状体３の筒壁３ｂをその厚み方向に貫通し、その長手方向が筒状体３の周方向に沿ったスリットであってもよい。あるいは、連通部３ａはスリットに限定されず、例えば、筒状体３の筒壁３ｂをその厚み方向に貫通する貫通穴であってもよい。

培養容器１００では、ウェル２１の内面の形状は、胴部２１ａと底部２１ｂとを含む形状であるが、実施形態２の培養容器１０において、ウェル２１の形態はこれに限定されず、半球状であってもよい。

図１５Ａ〜図２１を用いて説明される実施形態３の培養容器１００は、実施形態１の培養容器１と同様の方法により製造することができる。なお、板状体２と、板状体２に形成された複数のウェル２１と、突出部６１０と、側壁４と、台座５とを含むマルチウェルプレート本体１１０（図１７Ａ参照）は、射出成形法により同一金型内で成型することができる。

本実施形態の細胞塊用培養容器は、実施形態２の細胞塊用培養容器と同様に、マルチウェルプレート本体と液流制御体とから構成されていてもよい。この場合、細胞塊用培養容器は、実施形態２の細胞塊用培養容器と同様に、マルチウェルプレート本体と液流制御体とを各々、別々に成型した後、例えば、これらを接合することにより、又は、マルチウェルプレート本体に液流制御体を配置させることにより製造することができる。

実施形態３の培養容器１００を、上述した［細胞塊の培養方法］に用いれば、細胞塊への影響が少なく、培養液を効率的に交換できるので、細胞塊の培養を効率的に行うことができる。

（実施形態４）
図２２Ａは実施形態４の培養容器２００の平面図であり、図２２Ｂは、図２２Ａの部分拡大図である。図２３は図２２ＡのＸＸＩＩＩ−ＸＸＩＩＩ’線に沿った矢視拡大断面図である。図２４Ａは、図２２ＡのＸＸＩＶ−ＸＸＩＶ’線に沿った矢視拡大断面図であり、図２４Ｂは、図２４Ａの部分拡大図である。図２５は、図２３の部分拡大図であり、図２６は、細胞塊用培養容器２００の筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２の内部構造を説明する斜視断面図である。図２７は、本開示の細胞塊用培養容器２００を用いて細胞塊１４を所定時間培養液１３中で培養した後、ウェル２１内の培養液の一部を排出した後の状態を説明する概念図である。

図２２Ａ〜図２７を用いて説明される実施形態４の培養容器２００は、液誘導部の形態が異なること以外は、実施形態３の培養容器１００と同構成を有している。

実施形態４の培養容器２００は、実施形態３の培養容器１００と同様に、板状体２に形成された複数のウェル２１と、各ウェル２１の上方に配置された筒状体３と、複数のウェル２１の開口よりも上方に突出して複数のウェル２１を囲う側壁４と、複数のウェル２１の開口よりも下方に突出した台座５と、筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２の内面に形成された液誘導部７０を含む。図２６から良く分かるように、液誘導部７０は、一対の突出部７１０が構造体１２の内面に形成されることにより形成された液誘導補助溝７２０を含む。液誘導補助溝７２０は、各突出部７１０の上側端面７１１がスリット３ａの下側端３１１よりも上方に配置されるように構造体１２の内面に一対の突出部７１０を形成し、且つ、筒状体３とウェル２１とからなる構造体１２の内面のうちの少なくとも１つのスリット３ａの幅方向両側に各々スリット３ａの長手方向と同方向に沿って突出部７１０を形成することで、設けられている。スリット３ａが筒状体３の基端３ｄから形成された培養容器２００では、各突出部７１０の上側端部７１０ａとスリット３ａの下側端部３１ｂとが上下方向の同位置に配置されている。

しかし、実施形態４の培養容器２００では、一対の突出部７１０の下側端部７１０ｂ（図２６参照）がウェル２１の内面のうちの底面に達しておらず、液誘導部７０は、各突出部７１０の下側端部７１０ｂを互いに連結する基部７３０を含む。基部７３０は、各突出部７１０の下側端部７１０ｂを互いに連結するようにウェル２１の底面と一対の突出部７１０の間に配置されているので、基部７３０は、液導入補助溝７２０の一方の終端（閉塞端）を規定する面７３０ａを有する。培養容器２００では、一対の突出部７１０の下側端部７１０ｂがウェル２１の内面のうちの底面に達していないので、一対の突出部７１０の下側端部７１０ｂがウェル２１の内面のうちの底面に達した実施形態３の培養容器１００よりも、ウェル２１内の培養液の構造体１２外への過剰な排出が抑制される。故に、培養容器２００では、培養液の排出量のコントロールが行い易く、培養液の過剰排出により細胞塊が培養液から露出されて細胞塊がダメージを受けることを抑制できる。

液導入補助溝７２０の一方の終端（閉塞端）を規定する面７３０ａは、培養液の流入が促されるという理由から、スリット３ａから培養空間内に流入し得る培養液の流れの上流側から下流側に向かって下方に傾斜する（下流側から上流側に向かって上方に傾斜する）傾斜面７３０ｃであると好ましい。図２５から良く分かるように、傾斜面７３０ｃは、ウェル２１の胴部２１ａの内面（円筒面）からウェル２１の中心軸に向かって下方に傾斜している。尚、本開示において、液導入補助溝７２０の一方の終端（閉塞端）を規定する面７３０ａが、例えば、ウェル２１の中心軸と直交する平面と並行な面であってもよい。

筒状体３の中心軸３ｃ（図２５参照）と直交する平面に対する、導入補助溝７２０の一方の終端（閉塞端）を規定する面７３０ａの傾斜角度α（図２５参照）は、培養液の流入を良好にするという理由から、０度以上が好ましく、３０度以上がより好ましく、培養液の過剰な排出を抑制するという理由から、７５度以下が好ましく、６０度以下がより好ましい。

図２２Ａ〜図２７を用いて説明される実施形態４の培養容器２００では、ウェル２１内の培養液を筒状体３の外側に排出させうる連通部３ａが、筒状体３の筒壁３ｂに形成され筒状体３の中心軸と平行なスリットであるが、本開示において連通部３ａはスリットに限定されず、例えば、筒状体の筒壁をその厚み方向に貫通する貫通穴であってもよい。

図２２Ａ〜図２７を用いて説明される実施形態４の培養容器２００において、連通部３ａの数、連通部３ａの幅Ｗ１、連通部３ａの形態、筒状体３の高さＨ１、ウェル２１の形態、ウェル２１の深さＨ２、構造体１２の容量、１対の突出部７１０の数、突出部７１０の上側端面７１１から連通部３ａの下側端３１１までの上下方向の距離Ｗ４、突出部７１０間の距離Ｗ５、突出部７１０を筒状体３の中心軸３ｃと直交する方向面で切断した断面形状等について、実施形態３の培養容器１００と同じでよい。また、実施形態４の培養容器２００においても実施形態３の培養容器１００と同様に、ウェル２１の少なくとも底部２１ｂの内面は、細胞低接着処理が施されていると好ましい。

本実施形態の細胞塊用培養容器は、実施形態２の細胞塊用培養容器と同様に、マルチウェルプレート本体と液流制御体とから構成されていてもよい。この場合、細胞塊用培養容器は、実施形態２の細胞塊用培養容器と同様に、マルチウェルプレート本体と液流制御体とを各々、別々に成型した後、例えば、これらを接合することにより、又は、マルチウェルプレート本体に液流制御体を配置させることにより製造することができる。

実施形態４の培養容器２００を、上述した［細胞塊の培養方法］に用いれば、細胞塊への影響が少なく、培養液を効率的に交換できるので、細胞塊の培養を効率的に行うことができる。

以下、本開示を以下の実施例及び比較例に基づいて説明するが、本開示はこれに限定されるものではない。

（実施例１）
［細胞塊の培養容器の製造］
ポリスチレン樹脂(ＰＳジャパン社製、商品名：ＨＦ７７)を用いて、射出成形により２４ウェルマルチウェルプレート（横：６５．０ｍｍ、縦：５０．０ｍｍ、高さ：２０．５ｍｍ）を成形した。本実施例における培養容器の形状は図１Ａ〜図３に示す形状とし、ウェルの形状は図４に示す形状とし、底部の開き角度（図４におけるθ）は８５度、底部中心部における内面の曲率半径Ｒ_１は２．０ｍｍとした。各ウェルの開口における直径は６．２ｍｍ、深さは５.０ｍｍ、胴部の深さは２．６ｍｍとした。また、各筒状体の、内径は６．２ｍｍ、高さは５.０ｍｍ、側壁の厚みは０．８ｍｍとし、ウェルと筒状体とからなる構造体の内側空間の１個当たりの容量は、約２５０μＬとした。筒状体には約４５度おきにスリットの幅Ｗ１が０．３ｍｍの連通部を計８ヶ所設けた。

得られた筒状体付き２４ウェルマルチウェルプレートにプラズマ処理装置（ＢＲＡＮＳＯＮ／ＩＰＣ社製 ＳＥＲＩＥＳ７０００）を用いてプラズマ処理（酸素プラズマ１０分）を行った。これにより、前処理としてプレート表面に濡れ性を付与した。

（水溶性樹脂を用いた表面処理）
次に、ウェルの表面処理を行うために、水溶性樹脂として側鎖にアジド基を有するポリビニルアルコール（東洋合成工業社製 ＡＷＰ（Azide-unit pendant Water soluble Photopolymer、ｒ１＝１〜１０００、ｒ２＝４〜４９９５、ｒ３＝０〜４０００、ｎ＝１，２、または３、Ｒは下記式（ＩＩ）で表される基）:下記式（Ｉａ）で表される化合物（水溶性樹脂の平均重合度１６００、感光基の導入率０．６５ｍｏｌ％））を茶色顔料で着色した遮光ポリプロプレン容器中で、２５体積％エタノール水溶液に溶解し、０．５重量％の水溶性樹脂溶液を調製した。

上記０．５重量％の水溶性樹脂溶液を、プラズマ処理したプレートに、１ウェルにつき５０μＬ加えて１分間静置した後、プレートを裏返して余分な溶液を廃棄した。ついで、４０℃で６０分一次乾燥した後、ＵＶランプで２５０ｎｍのＵＶ光を１．０ｍＷ／ｃｍ^２×３０秒間照射して水溶性樹脂を硬化させた。次いで、プレートを超純水で３回繰り返し洗浄し、乾燥させた後、γ線を吸収線量１０ｋＧｙで照射（ラジエ工業株式会社製装置）して実施例１の培養容器を得た。

［ＨｅｐＧ２（ヒト肝癌由来細胞）を用いた細胞塊（スフェロイド）の形成］
ＨｅｐＧ２を培養液（ダルベッコ改変ＭＥＭ＋１０体積％ウシ胎児血清）に３×１０^４ｃｅｌｌｓ/ｍＬの濃度で分散させた細胞懸濁液を調製し、ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅ（登録商標）９６Ｖプレート（住友ベークライト、ＭＳ−９０９６Ｖ）に、１００μＬ/ウェルずつ分注し、５％炭酸ガス、湿度９９％、温度３７℃の炭酸ガス培養容器の中で培養を行った。６日後に各ウェルに直径が約７００μｍのサイズの１個の細胞塊（スフェロイド）が形成されていることを、顕微鏡下で確認した。

ＰｒｉｍｅＳｕｒｆａｃｅ（登録商標）９６Ｖプレート（住友ベークライト、ＭＳ−９０９６Ｖ）の各ウェルで形成した直径が約７００μｍの細胞塊のうち２４個を、ＡＲＴ２００Ｇピペットチップ（ＭＢＰ、２０６９Ｇ）を使用して、９０μＬ/ウェルずつ培養液ごと吸引し、実施例１の培養容器に培養液ごと各ウェル内に入れた後、培養液（ダルベッコ改変ＭＥＭ＋１０体積％ウシ胎児血清）を１．８４ｍＬ加え、培養容器全体の培養液量を４ｍＬとし、５％炭酸ガス、湿度９９％、温度３７℃の炭酸ガス培養容器の中で、３日間培養した。次いで、実施例１の培養容器を様々な方向に傾けて、各ウェル内の培養液の一部を培養容器の隅に集め、当該培養液を、アスピレーションピペットを用いて約３ｍＬ吸引した後、新しい培養液（新鮮培養液）約３ｍＬを実施例１の培養容器に入れた。以降３日毎に同様な操作により培養液の交換を行った。ただし、培養液の交換の際、細胞塊が乾燥しないように注意した。培養液の交換操作を５回行った後、各ウェル内の細胞塊を顕微鏡で観察したところ、いずれのウェル内の細胞塊も順調に成長しており、細胞塊の直径は平均１１００μｍであった。

（比較例１）
実施例１の［ＨｅｐＧ２（ヒト肝癌由来細胞）を用いた細胞塊（スフェロイド）の形成］に従って、直径が約７００μｍのサイズの１個の細胞塊（スフェロイド）を９６個形成した。次いで、各ウェル中の細胞塊を培養液ごと実施例１と同様に回収し、１枚につき２４個の細胞塊を、４枚のＰｒｉｍａＳｕｆａｃｅ６０ｍｍシャーレ（ＭＳ−９０６０Ｘ、住友ベークライト社製）に移し替えた。９６ウェル全ての細胞塊（スフェロイド）をシャーレに移し替えた後、新しい培養液をシャーレ１枚につき１．８４ｍＬに加えて、シャーレ内の培養液量を４ｍＬとした。

細胞塊（スフェロイド）をシャーレに移し替えた後、３日後に培養液の交換を行った。培養液の交換は、シャーレを傾け、細胞塊をシャーレの角に集めたのち、培養液の上清を３ｍＬ吸引した後、新しい培養液３ｍＬをシャーレに加えた。培養液の交換後、シャーレを揺動し、細胞塊を培養液中に分散させた。以降３日毎に同様な操作により培養液の交換を行った。４枚のシャーレについて、培養液の交換操作を５回行った結果、培養液の交換操作を５回行ううちに、ピペットによる吸引により９つの細胞塊が失われ、残った細胞塊のうち、２８個の細胞塊について融合が発生し、独立した１個の細胞塊として培養できた細胞塊は５９個であった。

以上の結果から、実施例１の培養容器は、細胞塊への影響が少なく、培養液を効率的に交換することができ、９６個の細胞塊すべてを順調に成長させることが可能であることが明らかとなった。一方、比較例１の培養容器では、細胞塊の誤吸引や細胞塊の融合のため、９６個の細胞塊すべてを順調に成長させることができなかった。

（実施例２）
［細胞塊の培養容器の製造］
ポリスチレン樹脂(ＰＳジャパン社製、商品名：ＨＦ７７)を用いて、射出成形により２４ウェルマルチウェルプレート（横：６５．０ｍｍ、縦：５０．０ｍｍ、高さ：２０．５ｍｍ）を成形した。本実施例における培養容器の形状は図２２Ａ〜図２７に示す形状とし、ウェルの形状は図２５に示す形状とし、底部の開き角度（図２５におけるθ）は８５度、底部中心部における内面の曲率半径Ｒ_１は２．０ｍｍとした。各ウェルの開口における直径は６．２ｍｍ、深さは５.０ｍｍ、胴部の深さは２．６ｍｍとした。また、各筒状体の内径は６．２ｍｍ、高さは５.０ｍｍ、側壁の厚みは０．８ｍｍ、ウェルと筒状体とからなる構造体の内側空間の１個当たりの容量は約２５０μＬ、構造体におけるスリットの下側端よりも下方部分の容量、即ち、ウェル１個当たりの容量は、約１０５μＬとした。筒状体には約４５度おきに幅Ｗ１（図２２Ｂ参照）が０．３ｍｍのスリットを連通部として計８ヶ所設けた。また、ウェルと筒状体とからなる構造体に液誘導部を２つ設けた。Ｗ４（図２３参照）は０．３ｍｍ、Ｗ５(図２４Ｂ参照)は０．５ｍｍとした。液導入補助溝の一方の終端（閉塞端）を規定する面の傾斜角度α（図２５参照）は４５度、ウェル内における液導入補助溝の上下方向の長さＨ３（図２５参照）は１．５ｍｍとした。突出部を筒状体の中心軸と直交する方向面で切断した切断面の形状は略弓形（２つの円の重なり部分により規定される形）であり、当該弓形を構成し、筒状体の中心軸方向に突出した曲線は、中心がスリットの幅方向中心を通り筒状体の内面を含む円周の接線上にあり、曲率半径Ｒ_２（図２０参照）が０．７ｍｍの円周の一部であった。

得られた筒状体付き２４ウェルマルチウェルプレートにプラズマ処理装置（ＢＲＡＮＳＯＮ／ＩＰＣ社製 ＳＥＲＩＥＳ７０００）を用いてプラズマ処理（酸素プラズマ１０分）を行った。これにより、前処理としてプレート表面に濡れ性を付与した。

（水溶性樹脂を用いた表面処理）
次に、実施例１の培養容器と同様にしてウェルの表面処理を行い、実施例２の培養容器を得た。

（実施例３）
傾斜角度αを０度としたこと以外は、実施例２と同様にして実施例３の培養容器を作製した。

（実施例４）
Ｈ３を１．０ｍｍとしたこと以外は、実施例２と同様にして実施例４の培養容器を作製した。

（実施例５）
傾斜角度αを０度とし、Ｈ３を０．５ｍｍとしたこと以外は、実施例２と同様にして実施例５の培養容器を作製した。

（実施例６）
ポリスチレン樹脂(ＰＳジャパン社製、商品名：ＨＦ７７)を用いて、射出成形により２４ウェルマルチウェルプレート（横：６５．０ｍｍ、縦：５０．０ｍｍ、高さ：２０．５ｍｍ）を成形した。本実施例における培養容器の形状は図１５Ａ〜図２１に示す形状とし、ウェルの形状は図１８に示す形状とし、底部の開き角度（図１８におけるθ）は８５度、底部中心部における内面の曲率半径Ｒ_１は２．０ｍｍとした。各ウェルの開口における直径は６．２ｍｍ、深さは５.０ｍｍ、胴部の深さは２．６ｍｍとした。また、各筒状体の、内径は６．２ｍｍ、高さは５.０ｍｍ、側壁の厚みは０．８ｍｍとし、ウェルと筒状体とからなる構造体の内側空間の１個当たりの容量は、約２５０μＬ、構造体におけるスリットの下側端よりも下方部分の容量、即ち、ウェル１個当たりの容量は約１０５μＬとした。筒状体には約４５度おきに幅Ｗ１（図２２Ｂ参照）が０．３ｍｍのスリットを連通部として計８ヶ所設けた。また、ウェルと筒状体とからなる構造体に液誘導部として、一対の突出部を２つ設けた。Ｗ４(図１６参照)は０．３ｍｍ、Ｗ５（図１７Ｂ参照)は０．５ｍｍとした。また、ウェル内における液導入補助溝の上下方向の長さＨ３は３．５２ｍｍとした。突出部を筒状体の中心軸と直交する方向面で切断した切断面の形状は略弓形（２つの円の重なり部分により規定される形）であり、当該弓形を構成し、筒状体の中心軸方向に突出した曲線は、中心がスリットの幅方向中心を通り筒状体の内面を含む円周の接線上にあり、曲率半径Ｒ_２（図２０参照）が０．７ｍｍの円周の一部であった。実施例２と同様に、水溶性樹脂を用いた表面処理を行って実施例６の培養容器を作成した。

（実施例７）
液誘導部の数を１つとしたこと以外は、実施例４と同様にして実施例７の培養容器を作成した。

［培養液の排出性及び流入性の評価］
実施例１〜７の培養容器について、以下の方法に従って、培養液の排出性及び流入性の評価を行った。まず、水平面上に置いた培養容器内に、培養液を６ｍＬ加え、培養容器内の全培養液量を６ｍＬとした。その後、培養容器を、液誘導部の突出部が両側に設けられたスリットから培養液が排出されるように、２０度に５秒間傾けて各ウェル内の培養液の一部を培養容器の隅に集め、直ちに当該培養液を、アスピレーションピペットを用いて約５ｍＬ以上（５．２〜５．９ｍＬ）吸引し、吸引後、培養容器の傾きを０度に戻した。その後、各ウェル内に残存する培養液量を、マイクロピペットを使用して回収・計量し、下記［評価基準１］に基づいて、培養液の排出性を評価し、その結果を表１にした。その後、新鮮培養液約５ｍＬを培養容器の隅に入れ、１０秒の静置後に、各ウェル内に入っている培養液の量を観察した。また、下記［評価基準２］に基づいて、培養液のウェル内への流入性を評価し、その結果を表１に示した。

［評価基準１］
Ａ：ウェル内に残存する培養液量がウェル容量（１０５μＬ）の１５分の１以上４分の１以下
Ｂ：ウェル内に残存する培養液量がウェル容量（１０５μＬ）１５分の１未満
Ｃ：ウェル内に残存する培養液量がウェル容量（１０５μＬ）の４分の１を超える

［評価基準２］
Ａ：ウェル内に培養液が入り、培養容器内の培養液面はスリットの下側端よりも上方にあり、ウェルと筒状体からなる構造体内における培養液面と構造体外における培養液面とが同一平面内にある。
Ｂ：ウェル内に培養液が入らず、ウェル内の培養液面はスリットの下側端よりも下方にあり、ウェルと筒状体からなる構造体内における培養液面の方が構造体外における培養液面よりも低い。

表１に示されるように、液誘導部を備えた実施例２〜７の培養容器は、液誘導部を備えていない実施例１の培養容器と比較して、培養液の排出性及び培養液の流入性が更に良好であることが明らかとなった。故に、実施例２〜７の培養容器では、実施例１の培養容器と比較して、培養液を更に効率的に交換することができる。

本開示は、例えば、ヒトＥＳ細胞の研究、再生医療等といった医療分野等で有用である。

本発明は、その趣旨を逸脱しない範囲で、上記以外の形態としても実施が可能である。本出願に開示された実施形態は一例であって、これらに限定はされない。本開示の範囲は、上述の明細書の記載よりも、添付されている請求の範囲の記載を優先して解釈され、請求の範囲と均等の範囲内での全ての変更は、請求の範囲に含まれるものである。

１，６，１００，２００…細胞塊用培養容器、２，７…板状体、２１，７１…ウェル、２１ａ…胴部、２１ｂ…底部、２１ｃ…底部の中心部、２１ｄ…ウェルの内面の頂点（最深部）、２１ｅ…ウェルの内面（傾斜面）、３，８１…筒状体、３ｃ，８１ａ…筒状体の中心軸、３ａ…スリット（連通部）、４，９…側壁、９ａ…側壁の内面、５，１０…台座、１１，６１…マルチウェルプレート本体、８０…連結体、８００…液流制御体、８２…架橋部、８３…位置規制部、８１ｂ…連通部（スリット）、８４ｂ…溝、６０，７０…液誘導部、６１０，７１０…突出部、６２０，７２０…液誘導補助溝、７３０…基部。

Claims (24)

1. 細胞塊を培養するための容器であって、
   前記細胞塊と培養液とを収容可能とする培養空間を有するウェルと、
   前記ウェルの開口を有する面上に配置され前記培養空間と連通した内腔を有する筒状体と、
   前記ウェルの開口よりも上方に突出して前記ウェルを囲う側壁とを含み、
   前記側壁が前記筒状体の外側に配置されており、
   前記筒状体の筒壁に、前記筒状体の外側に前記細胞塊を通過させることなく前記培養液を排出させうる１個以上の連通部が形成されている、細胞塊用培養容器。
2. 前記筒状体に複数の前記連通部が形成されている、請求項１に記載の細胞塊用培養容器。
3. 前記連通部が、前記筒状体の中心軸と平行なスリットである、請求項１又は２に記載の細胞塊用培養容器。
4. 前記連通部が、前記筒状体の周方向に沿ったスリットである、請求項１又は２に記載の細胞塊用培養容器。
5. 前記スリットの幅が、０．１ｍｍ以上０．５ｍｍ以下である、請求項３又は４に記載の細胞塊用培養容器。
6. 前記ウェルと前記筒状体とからなる構造体をその中心軸を含む平面で切断して平面的にみた場合、前記スリットの両端のうちの前記ウェルにより近い一方の端から前記ウェルの最深部までの長さが、３．０ｍｍ以上６．０ｍｍ以下である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
7. 前記細胞塊用培養容器は複数の前記ウェルを含むマルチウェルプレート本体を含み、
   前記マルチウェルプレートの前記ウェルの開口を有する面上に複数の前記筒状体が配置されており、
   前記側壁は、複数の前記ウェルを囲うように配置されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
8. 前記連通部が、前記筒状体の中心軸と平行で前記筒状体の基端から形成されたスリットである、請求項７に記載の細胞塊用培養容器。
9. 前記マルチウェルプレート本体と前記複数の筒状体とが同一金型内で成型された、請求項７又は８に記載の細胞塊用培養容器。
10. 前記細胞塊用培養容器は、
    複数の前記ウェルと、前記ウェルの開口よりも上方に突出して前記複数のウェルを囲い平面視した時に見える形状が略矩形の側壁と、を含むマルチウェルプレート本体と、
    前記マルチウェルプレートの前記側壁によって囲われる空間内に配置された液流制御体と、を含み、
    前記液流制御体は、
    前記複数の筒状体と、
    前記マルチウェルプレート本体の前記ウェルの開口を有する面と接しないように配置され前記複数の筒状体を連結して前記複数の筒状体の連結体を形成する複数の架橋部と、
    一方の端部が前記連結体に連結され他方の端部が前記側壁と当接する少なくとも１対の位置規制部とを含み、
    互いに向かい合う側壁の内面の一方に、一方の位置規制部が当接し、互いに向かい合う側壁の内面の他方に、他方の位置規制部が当接する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
11. 前記液流制御体は、前記マルチウェルプレート本体と別体である、請求項１０に記載の細胞塊用培養容器。
12. 液誘導部を更に含み、前記液誘導部は、前記ウェルと前記筒状体とからなる構造体の内面に配置された一対の突出部を含み、前記突出部は液誘導補助溝を形成し、前記突出部の上側端面は前記連通部の下側端よりも上方に配置されている、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
13. 前記突出部の前記培養空間と向かい合う面は、前記筒状体の中心軸に向かって突出した曲面である、請求項１２に記載の細胞塊用培養容器。
14. 前記突出部の上側端面から前記連通部の下側端までの長さが、０．１ｍｍ以上である、請求項１２又は１３に記載の細胞塊用培養容器。
15. 前記連通部の下側端を通る円周上における一対の前記突出部間の距離は、０．３ｍｍ以上１．０ｍｍ以下である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
16. 前記突出部の下側端部が前記ウェルの内面のうちの底面に達している、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
17. 前記液誘導部が、一対の前記突出部の下側端部を互いに連結し、前記液誘導補助溝の一方の終端を規定する面を含む基部を更に含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
18. 前記液誘導補助溝の一方の終端を規定する面は、前記連通部から前記培養空間内に流入し得る前記培養液の流れの下流側から上流側に向かって傾斜する傾斜面である、請求項１７に記載の細胞塊用培養容器。
19. 前記液誘導補助溝の閉塞端が前記ウェルの底部よりも上方に位置している、請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
20. 前記ウェルの少なくとも底部の内面は、下記式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表される水溶性樹脂から形成された被覆層で被覆されている、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
    

    

    （式（Ｉａ）中、Ｒはカルボニル基と−ＮＨ−基とを有する炭化水素基を示し、ｒ１は１〜１０００を示し、ｒ２は４０〜４９９５を示し、ｒ３は０〜４０００を示し、ｎは１、２又は３を示す。）
    

    

    （式（Ｉｂ）中、Ｒはカルボニル基と−ＮＨ−基とを有する炭化水素基を示し、ｒ１は１〜１０００を示し、ｒ２は４０〜４９９５を示し、ｒ３は０〜４０００を示す。）
21. 前記ウェルは、筒状の胴部と、前記胴部の一端に設けられた漏斗形状の底部とを有し、
    前記底部の中心部は、凹曲面であり、
    前記底部の開き角度は、６０〜１００度であり、
    前記底部の前記凹曲面の曲率半径は、０．５〜２．０ｍｍである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
22. 前記細胞塊が幹細胞である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器。
23. 前記幹細胞が、ヒト胚性幹細胞（ヒトＥＳ細胞）、ヒト多能性幹細胞又はヒトｉＰＳ細胞である、請求項２２に記載の細胞塊用培養容器。
24. 請求項１〜２３のいずれか一項に記載の細胞塊用培養容器を用いて細胞塊を培養する培養方法であって、
    培養液が培養空間に充填された前記ウェル内で前記細胞塊を培養した後、前記細胞塊用培養容器を傾けることにより、前記ウェル内の培養液の一部を、前記連通部を通過させて前記筒状体の外側に排出させる工程を含む、細胞塊の培養方法。

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