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JP5812861B2 - Ｍｙｃの修飾物質、該ｍｙｃの修飾物質を使用する方法、およびｍｙｃを調節する薬剤を同定する方法 - Google Patents

Ｍｙｃの修飾物質、該ｍｙｃの修飾物質を使用する方法、およびｍｙｃを調節する薬剤を同定する方法 Download PDF

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カーティス ターナー，ブライアン
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タイガ バイオテクノロジーズ，インク．
タイガ バイオテクノロジーズ，インク．
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Description

本出願は、２００８年８月２８日に出願された米国仮出願第６１／０９２，７０８号の利益を主張するものであり、これは、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
多数のタイプのワクチン剤がある：死んでいる微生物を含むワクチン剤（例えばインフルエンザワクチンおよびとコレラワクチン）；弱毒化された微生物を含むワクチン剤（例えばＭＭＲワクチン）；トキソイドを含むワクチン剤（例えばＤＰＴワクチン）；病原体のサブユニットを含むワクチン剤（例えばＨＰＶワクチン）；および核酸（例えばＲＮＡおよびＤＮＡ）ワクチン剤（例えば鳥インフルエンザ・ワクチン、西ナイルウイルス・ワクチンおよび多発癌ワクチン剤）。ワクチンアジュバントは、免疫システムを刺激し、ワクチンに対する免疫システムの反応を増加させる薬剤である。
抗原に対する免疫学的反応を増強するワクチンアジュバントに対する要求が存在する。発明者は、ＭＹＣの発現またはＭＹＣペプチドの活性を増加させることが抗原への免疫学的反応を増強することを発見した。最小の副作用で細胞の核内でのＭＹＣ濃度を増加させるために、発明者は、細胞の核に入り込むことができる融合ペプチドを設計した。このペプチドは全身作用を減少させるために局所的に投与することができる。このペプチドはまた、Ｔ細胞とＢ細胞を含む白血球の生存率を増加させる。さらに、発明者は、この満たされていない要求を満たす他の薬剤を同定するためのいくつかのアッセイを設計した。
自己免疫疾患を処置するための方法に対する要求もまた存在する。発明者は、ＭＹＣの発現またはＭＹＣペプチドの活性を減少させることが自己免疫疾患を処置することを発見した。この満たされていない要求を満たすために、発明者は、免疫システムの活性を（部分的にまたは完全に）抑制する薬剤を同定するためのいくつかのアッセイを設計した。特定の例において、免疫システムを抑制する薬剤は、白血球の生存率を減少させるか、またはアネルギー性Ｂ細胞の割合を増加させる。
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の発現をアップレギュレートするか、ＭＹＣポリペプチドの活性をアップレギュレートするか、またはそれらの組み合わせをアップレギュレートするペプチドが開示され、このペプチドは、（ａ） 輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および任意に（ｃ）輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（Ｉ）：
輸送体ペプチド配列‐ＭＹＣ配列
を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列、
を有し、‐Ｘ‐は、輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する分子である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
を有し、Ｘは、少なくとも１つのアミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する。
本明細書には、特定の実施形態において、融合ペプチドを含む、免疫反応を誘発する組成物が開示され、これは、（ａ）輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および任意に（ｃ）輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子、を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（Ｉ）：
輸送体ペプチド配列‐ＭＹＣ配列
を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
を有し、‐Ｘ‐は、輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する分子である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
を有し、Ｘは、少なくとも１つのアミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドは以下のアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態において、組成物は、抗原、抗原部分、またはそれらの組み合わせをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗原は、死んでいる微生物、弱毒化された微生物、トキソイド、病原体のサブユニット、核酸、核酸のポリマーまたはその組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗原は、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペス・ウイルス；ロタウイルス；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核；ヒトパピローマウイルス；またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの実施形態において、組成物は、A型肝炎；B型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペス・ウイルス；ロタウイルス；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核；ヒトパピローマウイルス；またはそれらの組み合わせから選択された病原体に由来する抗原部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、組成物は、腫瘍細胞に由来する抗原部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、組成物は局所投与のために処方される。
本明細書には、特定の実施形態において、免疫反応を誘発する方法が開示され、その方法は、（ａ）少なくとも１つの抗原に対するワクチンおよび（ｂ）融合ペプチドを、それを必要とする個体に投与する工程を含み、融合ペプチドは、（ａ） 輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および任意に（ｃ）輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（Ｉ）：
輸送体ペプチド配列‐ＭＹＣ配列
を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
を有し、‐Ｘ‐は、輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する分子である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
を有し、Ｘは、少なくとも１つのアミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドは以下のアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態において、ワクチンは以下からなる群から選択される：Ａ型肝炎ワクチン；Ｂ型肝炎ワクチン；ポリオワクチン；麻疹ワクチン；流行性耳下腺炎ワクチン；風疹ワクチン；ジフテリアワクチン；百日咳ワクチン；破傷風ワクチン；インフルエンザワクチン；水痘帯状ヘルペス・ウイルス・ワクチン；ロタウイルス・ワクチン；髄膜炎菌のワクチン；肺炎ワクチン；痘瘡ワクチン；コレラワクチン；腺ペスト・ワクチン；黄熱ワクチン；結核ワクチン；ヒトパピローマウイルス（paplomavirus）ワクチン；癌ワクチン；またはそれらの組み合わせ。いくつかの実施形態において、ワクチンは、Ｍｙｃポリペプチドの核内濃度（nucleic concentration）を高める薬剤の前に、後に、または同時に共に投与される。
本明細書には、特定の実施形態において、細胞の生存率を増加させる方法が開示され、その方法は、ＭＹＣの発現をアップレギュレートするか、ＭＹＣペプチドの活性をアップレギュレートするか、またはその組み合わせをアップレギュレートする薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、（ａ） 輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および任意に（ｃ）輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子、を含む融合ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（Ｉ）：
輸送体ペプチド配列‐ＭＹＣ配列
を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
を有し、‐Ｘ‐は、輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する分子である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列-X-ＭＹＣ配列
を有し、Ｘは、少なくとも１つのアミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態において、細胞は、白血球である。いくつかの実施形態において、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、記憶Ｔ細胞である。
本明細書には、特定の実施形態において、細胞の生存率を減少させる方法が開示され、その方法は、ＭＹＣの発現をダウンレギュレートするか、ＭＹＣペプチドの活性を低下させるか、またはその組み合わせをする薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の低発現またはＭｙｃポリペプチドの活性における欠損によって特徴付けられる障害を処置する方法が開示され、この方法は、ＭＹＣの発現をアップレギュレートするか、ＭＹＣペプチドの活性を高めるか、またはそれらは組み合わせをする薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、（ａ）輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および任意に（ｃ）輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子を含む、融合ペプチドである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（Ｉ）：
輸送体ペプチド配列-ＭＹＣ配列
を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
を有し、‐Ｘ‐は、輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する分子である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
を有し、ここで、Ｘは、少なくとも１つのアミノ酸である。いくつかの実施形態において、ペプチドは以下のアミノ酸配列を有する。
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の過剰発現またはＭｙｃポリペプチドの超過活性によって特徴付けられる障害を処置する方法が開示され、この方法はＭＹＣの発現をダウンレギュレートするか、ＭＹＣペプチドの活性を低下させるか、またはその組み合わせをする薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の発現をアップレギュレートする、及び／又は、ＭＹＣポリペプチド剤の活性ををアップレギュレートする薬剤を同定する方法が開示され、この方法は：（ａ）複数のアネルギー性Ｂ細胞を薬剤と接触させる工程；また（ｂ）薬剤との接触に続いて、細胞培養において１以上の細胞表面マーカーの発現レベルを検出及び／又は測定する工程を含み、ここで、細胞表面マーカーの存在は、非アネルギー性Ｂ細胞がないことを示す。いくつかの実施形態において、アネルギー性Ｂ細胞は表現型ＢＣＲＨＥＬ／ｓＨＥＬｂによってマウスから得られる。
いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーは、ＩｇＭ、ＩｇＭａ、ＩｇＭｂ、Ｂ２２０、ＣＤ２１／３５、ＣＤ２３、ＣＤ２４（ＨＳＡ）、ＣＤ４０、ＣＤ６９、ＣＤ８０および／又はＣＤ８６（Ｂ７−２）である。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現のレベルは、複数の細胞を、細胞表面マーカーに結合する、検出可能な抗体または検出可能な抗原と接触させることにより測定される。
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の発現、及び／又は、Ｍｙｃポリペプチドの活性をアップレギュレートする薬剤を同定する方法が開示され、この方法は、（ａ）複数の因子依存性細胞を薬剤と接触させる工程；および（ｂ）薬剤との接触に続いて、複数の細胞の拡張のレベルを検出および測定する工程を含む。いくつかの実施形態において、因子依存性細胞はリンパ球系細胞である。いくつかの実施形態において、因子依存性細胞は、ＩＬ−２−／−、ＩＬ−３−／−−／−、ＩＬ‐４−／−、ＩＬ‐５−／−、ＩＬ−６−／−、ＩＬ−７−／−、ＩＬ‐８−／−、ＩＬ−９−／−、ＩＬ−１０−／−、ＩＬ−１１−／−、ＩＬ−１２−／−、あるいはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態において、因子依存性細胞は、ＣＴＬＬ−２細胞またはＢＡＦ／３細胞に由来する。
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の発現及び／又はＭｙｃポリペプチドの活性をアップレギュレートする薬剤を同定する方法が開示され、この方法は、（ａ）ｍｙｃ‐反応性プロモーター内でコードされたＥボックス配列に操作可能に結合されたレポーター遺伝子を含むレポーター構成物で複数の細胞を形質転換する工程；（ｂ）複数の細胞を薬剤と接触させる工程；および（ｃ）薬剤との接触に続いて、レポーター遺伝子の発現のレベルを検出または測定する工程を含む。いくつかの実施形態において、細胞はリンパ系細胞である。いくつかの実施形態において、ｍｙｃ‐反応性プロモーターはオルニチンデカルボキシラーゼ・プロモーターである。いくつかの実施形態において、レポーター遺伝子は、β‐ガラクトシダーゼ遺伝子、β‐ラクタマーゼ遺伝子、ホースラディシュ・ペルオキシダーゼ遺伝子、アルカリフォスファターゼ遺伝子、チミジンキナーゼ遺伝子、キサンチンホスホリボトランスフェラーゼ（phosphoribotransferase）遺伝子、チロシナーゼ遺伝子、シトシン・デアミナーゼ遺伝子、抗生物質抵抗性遺伝子または蛍光の発現産物を有する遺伝子である。
本明細書には、特定の実施形態において、免疫システムを調節する（例えば、活性化する、高める、誘発する、補完する、減少させる、または抑制する）ことができる薬剤を同定する方法が開示される。いくつかの実施形態において、薬剤は免疫反応を高めるために利用される。いくつかの実施形態において、薬剤は免疫反応を減少させるために使用される。さらに、本明細書には、本明細書に開示された手段のうちのいずれかによって同定された薬剤を使用して、免疫システムを調節する方法が開示される。
特定の定義
他の方法で示されないならば、本明細書に添付の請求項で使用される場合、以下の用語は以下の意味を有する。
用語「ワクチン」は、免疫反応を誘発するために哺乳動物に投与された抗原及び／又は抗原部分を含む組成物を意味する。抗原または抗原部分は、生きているか弱毒化された微生物、微生物から精製された天然物（例えばタンパク質のサブユニット、ペプチド、多糖および核酸）、微生物の成分を模倣するために設計された合成製品、遺伝的に改変されたタンパク質、ペプチド、あるいは多糖、患者自身の腫瘍細胞、腫瘍細胞から精製された天然物（例えば、前立腺特異性抗原、ｇｐ９６、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、癌胚抗原、ＭＡＲＴ−１、およびチロシナーゼ）、腫瘍細胞の成分を模倣するために設計された合成分子（例えばｓｉａｌｙｌ Ｔｎ）、またはそれらの組み合わせである。さらに、用語ワクチンは、本発明のワクチン剤、および開発された任意の新しい及び／又は改変ワクチン剤をを含む。
用語「リンパ組織」は、リンパ系に関連した組織を意味する。限定しない例として、リンパ組織は、リンパ節、扁桃腺、ひ臓、骨髄および胸腺から得られた組織を含む。
用語「リンパ球」は、特定の組織および分化した変種を含む、全ての未熟な、成熟した、未分化の、および分化した白血球であるリンパ球集団（white lymphocyte population）を指す。それは、限定しない例として、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞およびＮＫ細胞を包含する。いくつかの実施形態において、リンパ球は、前Ｂ細胞、前駆B細胞、初期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大プレＢ細胞、小プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、血漿Ｂ細胞、記憶Ｂ細胞、B‐1細胞、B‐2細胞およびアネルギー性ＡＮ１／Ｔ３細胞集団を含むＢ細胞血統を全て含む。
用語Ｂ細胞は、限定しない例として、前Ｂ細胞、前駆Ｂ細胞、初期Ｂ細胞および後期Ｂ細胞、大プレＢ細胞、小プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、血漿Ｂ細胞、記憶Ｂ細胞、Ｂ−１細胞、Ｂ‐２細胞およびアネルギー性ＡＮ１／Ｔ３細胞集団を言う。いくつかの実施形態において、用語Ｂ細胞は、その細胞表面上に免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖を発現するＢ細胞を含む。いくつかの実施形態において、用語Ｂ細胞は、免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖を発現し分泌するＢ細胞を含む。いくつかの実施形態において、用語Ｂ細胞は、その細胞表面上に抗原を結合する細胞を含む。本明細書に開示のいくつかの実施形態において、Ｂ細胞またはＡＮ１／Ｔ３細胞は、記載されたプロセスで利用される。特定の実施形態において、このような細胞は、抗体を発現するのに適切な、抗体を発現（例えば誘発発現）することができる、または抗体を発現するために適切な細胞に分化することができる任意の適切な動物細胞、例えば、造血幹細胞、Ｂ細胞、前Ｂ細胞、前駆Ｂ細胞、初期プレＢ細胞、後期プレＢ細胞、大プレＢ細胞、小プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、血漿Ｂ細胞、記憶Ｂ細胞、Ｂ−１細胞、Ｂ‐２細胞、アネルギー性Ｂ細胞またはアネルギー性ＡＮ１／Ｔ３細胞、により任意に代替される。
用語「免疫反応」は、病原体及び／又は腫瘍細胞の同定および中和を含む。いくつかの実施形態において、免疫反応は適応的免疫反応である。限定しない例として、適応的免疫反応は、免疫記憶の進行（development）を含む。
用語「抗体」および「抗体（複数）」は、天然の（natural occuring）（しかし単離された及び／又は精製された）抗体、設計された抗体、または合成抗体をいい、モノクローナル抗体、多クローン性抗体、両特異抗体、多特異性抗体、グラフト化抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ化（camelized）抗体、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、F（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、細胞内抗体、および任意の上記のものの抗イディオタイプの（抗Ｉｄ）抗体および抗原結合性フラグメントを含む。特に、抗体は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメント、すなわち抗原結合部位を含む分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスである。用語「抗体」および免疫グロブリンは、最も広い意味の中で交換可能に使用される。いくつかの実施形態において、抗体は、１つ以上の他のタンパク質またはペプチドとの抗体の共有結合か、非共有結合によって形成されたより大きな分子の一部である。
本明細書中の抗体は、モノクローナル抗体、多クローン抗体、組み換え型抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、グラフト抗体、ヒト抗体、およびそれらのフラグメントであり、ヒトにおいてより少ない免疫原であるように任意の手段によって変化させた抗体を含む。従って、例えば、モノクローナル抗体およびフラグメントなどは、本明細書において、「キメラの」抗体および「ヒト化された」抗体を含む。一般に、キメラ抗体は、特定の種に由来する、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同じか、または一致する重鎖及び／又は軽鎖の一部を含み、一方、それらが所望の生物活性を示す限り、鎖の残部は、別の種に由来する、または別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同じであるかまたは一致する（米国特許第４，８１６，５６７号）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ. Ｐｒｏｃ. Ｎａｔｌ Ａｃａｄ. Ｓｃｉ． ８１：６８５１−６８５５（１９８４）。例えば、いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、マウスに由来する可変領域、およびヒトに由来する定常部を包含しており、そのヒトにおいて、定常部は、ヒトＩｇＧ２とヒトＩｇＧ４の両方に一致する配列を含む。非ヒト（例えばネズミ）の「ヒト化された」形態の抗体またはフラグメントは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合配列）である。ヒト化抗体は、グラフト抗体またはＣＤＲグラフト抗体を含み、非ヒトの動物抗体に由来する１つ以上の相補的決定部位（ＣＤＲ）のアミノ酸配列の一部または全ては、オリジナルの非ヒト抗体の所望の結合特異性及び／又は親和性を維持したまま、ヒト抗体の適切な位置にグラフトされる。いくつかの実施形態において、対応する非ヒト残基は、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基に代替する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含む。これらの改変は、抗体のパフォーマンスをさらに精製し最適化するためになされる。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、および典型的には２つの可変領域を実質的に含み、その可変領域では、全てまたは実質的にすべてのＣＤＲ領域が、非ヒト免疫グロブリンのものと一致し、全てまたは実質的にすべてのＦＲ領域が、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。さらなる詳述のために、例えば：Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ２：５９３−５９６（１９９２）参照。
用語「抗原」は、抗体の産生を誘発する物質を指す。
用語「抗原部分」は、抗体が結合（または補完）する分子、生物体（例えば、バクテリア、ウイルス）または細胞の部分を意味する。
用語「自己抗原」とは、動物、組織または細胞内に由来する抗原を指す。いくつかの実施形態において、自己抗原は内因性抗原を含む。いくつかの実施形態において、自己抗原は、内因性レトロウイルスによって産生された内因性抗原を含む。いくつかの実施形態において、自己抗原は、新自己抗原、微生物に又は寄生生物にコードされた新自己抗原、または全身照射法およびＨＳＣ移植の後に、動物または細胞への遺伝的改変の結果発現した他の新自己抗原を含む（それは、免疫システムを再始動させ、新しい抗原を許容し、「自己」と考える）。いくつかの実施形態において、キメラマウスは新自己抗原を発現する。
用語「自動抗原」は、自己抗原のエピトープを模倣する、自己抗原のエピトープ、または免疫学的に反応的なエピトープを含む抗原を指す。いくつかの実施形態において、用語自動抗原は、それに対して自己抗体が産生される抗原を含む。いくつかの実施形態において、自動抗原は、内因性抗原が由来する動物が、その抗原に免疫学的に寛容であるか、またはかつて免疫学的に寛容であった内因性抗原を含む。
用語「アネルギー」は、リンパ球が不活発である（例えば、それらは抗原の結合に応答しない）状態を指す。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞は、循環する可溶性の自己抗原への曝露の後にアネルギーになる。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞は、可溶性の循環する抗原への曝露の後にアネルギーになる。いくつかの実施形態において、抗原は、可溶性のニワトリ卵白リゾチーム（ｓＨＥＬ）である。
用語「アミノ酸」は、天然のアミノ酸に類似する態様で機能するアミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣体だけでなく、天然の、および非天然のアミノ酸も指す。天然にコードされたアミノ酸は、２０の共通アミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリン）およびピロリジン（pyrolysine）およびセレノシステインである。アミノ酸アナログとは、天然のアミノ酸と同じ基礎的な化学構造（すなわち水素に結合されるα炭素、カルボキシル基、アミノ基およびホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルフォキシド、メチオニン・メチル・スルホニウムのようなＲ基）を有している薬剤を指す。そのようなアナログは、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）、または修飾ペプチドバックボーンを有するが、天然のアミノ酸と同じ基礎的な化学構造を保持する。
アミノ酸は、本明細書では、アミノ酸の一般に知られている３文字表記によってか、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｉｓｓｉｏｎに推奨された１文字表記によってかのいずれかで表わされる。ヌクレオチドも、同様に、それらの一般に容認された単一の文字コードによって表わされる。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」または「タンパク質」は、本明細書では、アミノ酸残基のポリマーを指すために交換可能に使用される。その用語は、天然のアミノ酸ポリマーと同様に、１つ以上のアミノ酸残基が、非天然のアミノ酸（例えばアミノ酸アナログ）であるアミノ酸ポリマーにも適用される。その用語は、完全長タンパク質を含む任意の長さのアミノ酸鎖を包含し、アミノ酸残基は共有ペプチド結合によって結合される。
用語「Ｍｙｃタンパク質」、「Ｍｙｃポリペプチド」は、同物異名で用いられ、ＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒｓ ＮＰ００２４５８．２に開示されたアミノ酸残基のポリマー、およびそれらの機能的なホモログ、アナログまたはフラグメントを指す。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃポリペプチドは、少なくとも４０％から１００％同一の、例えば、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または約４０％から約１００％までの他の任意の百分率でＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒｓ ＮＰ００２４５８．２の配列と同一の、アミノ酸配列を含むアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃポリペプチドは、少なくとも５０％から１００％同一の、例えば、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または約５０％から約１００％までの他の任意の百分率でＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒｓ ＮＰ００２４５８．２の配列と同一の、長さで４０以上のアミノ酸のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃポリペプチドは、少なくとも５０％から１００％同一の、例えば、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約５０％から約１００％までの他の任意の百分率でＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒｓ ＮＰ００２４５８．２の配列と同一の、長さで４０以上のアミノ酸のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣポリペプチドは、４３９のアミノ酸のポリマー、任意の翻訳後修飾を受けていないＭｙｃポリペプチド、及び／又は翻訳後修飾を受けているＭｙｃポリペプチドを意味する。特定の例において、Ｍｙｃポリペプチドは４８，８０４ｋＤａである。特定の例において、Ｍｙｃポリペプチドは、ベーシック・ヘリックス・ループ・ヘリックスロイシンジッパー（ｂＨＬＨ／ＬＺ）領域を含む。特定の例において、Ｍｙｃポリペプチドは、転写因子（例えば転写因子６４）である。特定の例において、Ｍｙｃポリペプチドは、ＣＡＣＧＴＧを含む配列（すなわちＥボックス配列）に結合する。
用語「核酸」は、一重鎖型または二重鎖型のいずれかのデオキシリボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシドまたはリボヌクレオチドおよびそれらのポリマーを指す。特に限定されていないならば、その用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然のヌクレオチドに同様の形態で代謝される天然のヌクレオチドの既知のアナログを含む核酸を含む。特に他の方法で限定されていなければ、その用語はまた、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、アンチセンス技術で使用されるＤＮＡのアナログ（ホスホロチオアート、ホスホロアミド酸（phosphoroamidates）など）を含むオリゴヌクレオチド・アナログを指す。他の方法で示されないならば、特定の核酸配列は、明確に示された配列だけでなく、その保存的に修飾された改変体（縮重コドン置換を含むが、これらに限定されずない）および相補的配列もまた暗に含む。具体的には、縮重コドン置換は、混合基（mixed-base）及び／又はデオキシイノシン残基により１つ以上の選択された（あるいは全部の）コドンの第３位が置換された配列を作ることにより達成される（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；およびＣａｓｓｏｌ ｅｔ ａｌ．（１９９２）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１−９８（１９９４））。
用語「ＭＹＣ」及び「ＭＹＣ遺伝子」は、同義語である。それらは、Ｍｙｃポリペプチドをコードする核酸配列を指す。ＭＹＣ遺伝子は、少なくとも６０％から１００％同一の、または一致する、例えば、少なくとも６０、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは約７０％から約１００％までの他の任意の百分率でＮＣＢＩ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒｓ ＮＭ＿００２４６７の配列と同一の、少なくとも１２０のヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ遺伝子は、プロトオンコジーンである。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子は、第８染色体上、８ｑ２４．２１で見出される。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子は、ｐｔｅｒから１２８，８１６，８６２ｂｐで始まり、ｐｔｅｒから１２８，８２２，８５６ｂｐで終わる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子は約６ｋｂである。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子は、少なくとも８の別々のｍＲＮＡ配列―５の代替的にスプライシングされた変異と３のスプライシングされていない変異をコードする。
２つのアミノ酸配列、または２つの核酸の百分率相同を決定するために、配列は、最適な比較目的のために調整することができる（例えば、ギャップを、第２のアミノ酸配列または核酸配列との最適な整列のために、第１のアミノ酸の配列または核酸配列に導入される）。その後、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドは、比較することができる。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められると、その場合は、分子はその位置で同一である。２つの配列間の百分率相同は、配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一の位置の＃／位置の合計＃（例えば，オーバーラップする位置）Ｘ１００）。いくつかの実施形態において、２つの配列は、同じ長さである。
２つの配列の間の百分率相同を決定するために、１９９３年のＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌの文献（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. ＵＳＡ ９０：５８７３‐５８７７）で改変された、１９９０年のＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌの文献（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８７：２２６４‐２２６８）のアルゴリズムが使用される。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．２１５：４０３‐４１０のＮＢＬＡＳＴとＸＢＬＡＳＴのプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド探索は、本明細書に記載または開示の核酸分子に一致するヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２により行なわれる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３により行なわれる。比較目的のためにギャップを加えた（gapped）アラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９‐３４０２に述べられているように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが利用される。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトのパラメーター（例えばＸＢＬＡＳＴとＮＢＬＡＳＴ）が使用される。（ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖのワールド・ワイド・ウェブ上の）さらなる詳細な情報のためには、全米バイオテクノロジー情報センターのウェブサイトを参照。本明細書に記載の方法において使用するのに適しているタンパク質は、また、１から１５までのアミノ酸変更、例えば、本明細書に記載の任意のタンパク質のアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５のアミノ酸置換、欠失、または付加、を有するタンパク質を含む。他の実施形態において、変更されたアミノ酸配列は、本明細書に記載の任意のタンパク質インヒビターのアミノ酸配列と、少なくとも７５％、例えば、７７％、８０％、８２％、８５％、８８％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％同一である。そのような配列変異タンパク質は、変更されたアミノ酸配列が本明細書に記載の組成物および方法において機能的であるのに十分な生物活性を保持する限り、本明細書に記載の方法に適している。アミノ酸置換がなされる場合、置換は保存的なアミノ酸置換であるべきである。共通アミノ酸の間では、例えば、「保存的なアミノ酸置換」は、以下の基の各々内のアミノ酸中の置換によって例証される：（１）グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン、（２）フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、（３）セリンおよびトレオニン、（４）アスパルテートおよびグルタミン酸、（５）グルタミンおよびアスパラギン、および（６）リジン（アルギニンとヒスチジン）。ＢＬＯＳＵＭ６２表は、タンパク質配列セグメントの、約２，０００の局所の多数のアラインメントに由来するアミノ酸置換マトリックスであり、関連するタンパク質の５００を超える基の高度に保存された部位を表わす（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ（１９９２），Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，８９：１０９１５‐１０９１９）。従って、ＢＬＯＳＵＭ６２置換の頻度は、いくつかの実施形態において、本明細書に記載または開示のアミノ酸配列へ導入される保存的なアミノ酸置換を定義するために使用される。（上論のように）もっぱら化学的性質に基づいてアミノ酸置換を設計することは可能であるが、言語「保存的なアミノ酸置換」は、好ましくは、‐１を超えるＢＬＯＳＵＭ６２値で表わされる置換を指す。例えば、置換が０、１、２、または３のＢＬＯＳＵＭ６２値によって特徴づけられるならば、アミノ酸置換は保存的である。このシステムに従って、好ましい保存的なアミノ酸置換は少なくとも１（例えば１、２または３）のＢＬＯＳＵＭ６２値によって特徴付けられるが、より好ましい保存的なアミノ酸置換は、少なくとも２（例えば２または３）のＢＬＯＳＵＭ６２値によって特徴付けられる。
用語「Ｍｙｃ活性」は、核酸配列にＭｙｃポリペプチドを結合することを指す。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃ活性は、Ｍｙｃ反応遺伝子の転写活性のＭＹＣ調節をさらに含む。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃ活性は細胞増殖及び／又は抗体産生を誘発する。
用語「Ｍｙｃの活性化」および「Ｍｙｃ活性化」は、Ｍｙｃ活性の誘発を指す。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃの活性化はＭｙｃポリペプチドの過剰発現によって誘発される。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃの活性化は、細胞の核の中へのＭｙｃポリペプチドの輸送によって誘発される。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃの活性化は、細胞の中へのＭｙｃポリペプチドの輸送によって誘発される。
用語「発現」は、以下の事象の１つ以上を指す：（１）（例えば転写による）細胞内のＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの産生；（２）（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成および及び／又は３’末端形成による）細胞内のＲＮＡ転写物のプロセシング；（３）細胞内のポリペプチドまたはタンパク質へのＲＮＡ配列の翻訳；（４）細胞内のポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾；（５）細胞表面上のポリペプチドまたはタンパク質の発現；（６）細胞からのポリペプチドまたはタンパク質の分泌または放出。
細胞のタンパク質の文脈における用語「内因性」は、天然の及び／又は組換操作がない場合の細胞によって発現されたタンパク質に指し；従って、用語「内因性発現タンパク質」または「内因性タンパク質」は、組換技術の手段によって発現された細胞タンパク質を除外する。
用語「因子依存性細胞」は、外因性成長因子（例えばサイトカイン）との接触なしで生存及び／又は増殖することができない細胞を意味する。必要とする成長因子と接触させられた時、因子依存性細胞は、生存及び／又は増殖することができる。必要とする成長因子が存在しないと、因子依存性細胞は、生存及び／又は増殖することができない（例えば、アポトーシスを受けるだろう）。
本明細書で使用される場合、用語「拡張」は、細胞培養中の細胞の増殖（すなわち分裂）による培養のサイズにおける増大を指す。いくつかの実施形態において、細胞培養は拡張を示す（すなわち、それは、より大きなサイズに到達し、及び／又は培養中の細胞の濃度が増加する）。いくつかの実施形態において、細胞培養は負の拡張を示す（すなわち、より小さなサイズに到達し、または培養中の細胞の濃度は減少する）。特定の例において、細胞培養の拡張は、任意の適切な方法（例えば染色、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡、ＨＰＬＣ、共焦点顕微鏡観察、赤外分光学、オートラジオグラフィー）において検出可能で測定可能である。
句「Ｅボックス配列」および「エンハンサーボックス配列」は、本明細書において交換可能に使用され、ヌクレオチド配列ＣＡＮＮＴＧを意味し、Ｎは任意のヌクレオチドである。特定の例において、Ｅボックス配列はＣＡＣＧＴＧを含む。ＭＹＣによってコードされた転写因子のへリックス・ループ・へリックス領域は、Ｅボックス配列に結合する。特定の例において、Ｅボックス配列は、遺伝子（例えばｐ２１、Ｂｃｌ−２またはオルニチン・デカルボキシラーゼ）の上流に位置する。特定の例において、ＭＹＣによってコードされた転写因子のＥボックス配列への結合は、ＲＮＡポリメラーゼがＥボックス配列の下流遺伝子に転写することを可能にする。
細胞の生存率を調節する方法
本明細書には、いくつかの実施形態において、細胞の生存率を調節する方法が開示される。本明細書で使用される場合、「生存率」は、細胞が生存する時間の長さ、細胞増殖の割合（または量）またはそれらの組み合わせを意味する。いくつかの実施形態において、細胞の生存率は増加される。いくつかの実施形態において、細胞の生存率は減少される。
いくつかの実施形態において、調節はインビボで起こる。いくつかの実施形態において、調節はインビトロで起こる。いくつかの実施形態において、細胞の生存率を調節する方法は、白血球の生存率を調節する工程を含む。いくつかの実施形態において、白血球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、白血球は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、白血球は、記憶Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を調節することは、ＭＹＣ遺伝子の発現、及び／又はＭＹＣポリペプチドの活性を調節することを含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ遺伝子、及び／又は、ＭＹＣポリペプチドの活性の発現を調節することは、直接、あるいは、間接的に、ＭＹＣによって調節された遺伝子またはポリペプチドの修飾を結果として生じる。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ転写因子によって直接または間接的に修飾された遺伝子またはポリペプチドは、ニューログラニン、ＭＥＦ−２ｃ、ｇｆｉ−１、サイクリンＤ２、ＣＤＫ４、Ｅｇｒ−２、Ｎａｂ−２、ＴＧＩＦ、ＮＦ−ｋＢ ｐ１０５、Ｃａｒｍａ−１、Ａ１またはＢｃｌ−２である。
細胞の生存率を増加させること
いくつかの実施形態において、細胞の生存率の調節は、細胞の生存率を増加させることを意味する。いくつかの実施形態において、細胞の生存率を増加させることは、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）細胞が生存する時間の長さを増やすこと、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）細胞増殖の割合または量を増やすこと、あるいはそれらの組み合わせを意味する。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を増加させることは、細胞を、ＭＹＣポリペプチドの核酸濃度を増加させる薬剤と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、細胞の生存率を増加させることは、細胞を、外因性のＭＹＣポリペプチド、ＭＹＣ遺伝子の発現を増加させる薬剤、およびＭＹＣポリペプチドの活性を増加させる薬剤、またはそれらの組み合わせ（「ＭＹＣ増加薬剤」）と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、小分子、ペプチド、抗体またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を増加させる方法は、細胞を、ＭＹＣ増加薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、外因性ＭＹＣポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、（ａ）輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および任意に（ｃ）輸送体ペプチド配列およびＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子を含む融合ペプチドである。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、（ａ）ＴＡＴ配列、および（ｂ）ＭＹＣ配列を含む融合ペプチドである。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を増加させる方法は、細胞をＭＹＣ増加薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、ＭＡＤ−１遺伝子のアンタゴニストである。特定の例において、ＭＡＤ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのダウンレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をアップレギュレートする。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を増加させる方法は、細胞をＭＹＣ増加薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤はＭｘｉ‐１遺伝子のアンタゴニストである。特定の例において、Ｍｘｉ‐１遺伝子及び／又はポリペプチドのダウンレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をアップレギュレートする。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を増加させる方法は、ＭＹＣ増加薬剤を同定する工程をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を同定する方法は、Ｂ細胞内でのアネルギーを逆転写する薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ調整薬剤を同定する方法は、必要とされる成長因子の不存在下での因子依存性細胞の生存率を増加させる薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を同定する方法は、ＭＹＣ反応性プロモーター（例えばＥボックス配列）の制御下でレポーター遺伝子の発現を誘発する薬剤を同定する工程を含む。
いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約２０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約１５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約１０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約４倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約２倍増加される。
いくつかの実施形態において、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、記憶Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の生存率の調節は、Ｔ細胞の寿命を延ばすことを意味する。いくつかの実施形態において、記憶Ｔ細胞の寿命を延ばすことは、体内における記憶Ｔ細胞のより高い濃度を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞のより高い濃度は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションは、アネルギー性Ｔ細胞の減少を結果として生じる。特定の例において、アネルギー性Ｔ細胞の減少は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションは、Ｔ細胞がアネルギーに対する反応の際に活性化するのに必要とする時間の減少を結果として生じる。特定の例において、Ｔ細胞が抗原に対して反応する際に活性化するのに必要とする時間の減少は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。
細胞の生存率を減少させること
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を調節することは、細胞の生存率を減少させることを意味する。いくつかの実施形態において、細胞の生存率を減少させることは、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）細胞が生存する時間の長さを減少させること、および細胞増殖の割合または量を減少させることを意味する。いくつかの実施形態において、細胞の生存率を減少させることは、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）細胞が生存する時間の長さを減少させること、および細胞増殖の割合または量を減少させることを意味する。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を減少させることは、細胞をＭＹＣの核酸濃度を減少させる薬剤と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、細胞の生存率を減少させることは、細胞を、ＭＹＣ遺伝子の発現を減少させる薬剤、ＭＹＣポリペプチドの活性を減少させる薬剤またはそれらの組み合わせ（「ＭＹＣ減少薬剤」）と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、小分子、バイオロジック、ペプチド、抗体またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を減少させる方法は、細胞をＭＹＣ減少薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、ＭＡＤ−１遺伝子のアゴニスト、ＭＡＤ−１ポリペプチドまたはそれらの組み合わせである。特定の例において、ＭＡＤ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのアップレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をダウンレギュレートする。いくつかの実施形態において、細胞の生存率を調節する方法は、細胞をＭＹＣ減少薬剤と接触させる工程を含む。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率を減少させる方法は、細胞をＭＹＣ減少薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、Ｍｘｉ−１、Ｍｘｉ−１遺伝子およびＭｘｉ−１ポリペプチドのアゴニスト、またはそれらの組み合わせである。
特定の例において、Ｍｘｉ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのアップレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をダウンレギュレートする。
いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を同定する方法は、因子依存性細胞が必要な成長因子と接触させられる場合に、因子依存性細胞の生存率を減少させる薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を同定する方法は、ＭＹＣ反応性プロモーター（例えばＥボックス配列）の制御下でレポーター遺伝子の発現を阻害する薬剤を同定する工程を含む。
いくつかの実施形態において、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約２５倍減少される。いくつかの実施形態において、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約２０倍減少される。いくつかの実施形態において、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約１５倍減少される。いくつかの実施形態において、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約１０倍減少される。いくつかの実施形態において、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約５倍減少される。いくつかの実施形態において、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約４倍減少される。いくつかの実施形態において、細胞の生存率は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）約１から約２倍減少される。
いくつかの実施形態において、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、記憶Ｔ細胞である。特定の実施形態において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、Ｔ細胞に対する減少した寿命を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞の減少した寿命は、体内における記憶Ｔ細胞のより低濃度を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞のより低濃度は、減速された抗原に対する一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、アネルギー性Ｔ細胞の増加を結果として生じる。特定の例において、アネルギー性Ｔ細胞の増加は、減速された抗原に対する一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、Ｔ細胞が抗原に対して反応する際に活性化するのに必要とする時間の増加を結果として生じる。特定の例において、Ｔ細胞が抗原に対して反応する際に活性化するのに必要とする時間の増加は、減速された抗原に対する一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制を結果として生じる。
免疫反応を調節する方法
本明細書には、特定の実施形態において、免疫反応を調節する方法が開示される。いくつかの実施形態において、免疫反応は、適応的免疫反応（例えば記憶Ｂ細胞と記憶Ｔ細胞）である。いくつかの実施形態において、免疫反応を調節することは、免疫反応を増加させる（例えば、誘発し、補完し、増幅する）ことを意味する。いくつかの実施形態において、免疫反応を調節することは、免疫反応を減少させる（例えば、阻害する、または抑制する）ことを意味する。いくつかの実施形態において、その調節は、インビトロで起こる。いくつかの実施形態において、その調節は、インビボで起こる。
いくつかの実施形態において、免疫反応を調節する方法は、リンパ球の生存率を調節する工程を含む。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、記憶Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、免疫反応を調節することは、ＭＹＣ遺伝子の発現及び／又はＭＹＣポリペプチドの活性を調節することを含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の発現、及び／又はＭＹＣポリペプチドの活性の調節は、直接、あるいは、間接的に、ＭＹＣによって調節された遺伝子またはポリペプチドの調節を結果として生じる。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ転写因子によって直接または間接的に調節された遺伝子またはポリペプチドは、ニューログラニン、ＭＥＦ−２ｃ、ｇｆｉ−１、サイクリンＤ２、ＣＤＫ４、Ｅｇｒ−２、Ｎａｂ−２、ＴＧＩＦ、ＮＦ−ｋＢ ｐ１０５、Ｃａｒｍａ−１、Ａ１またはＢｃｌ−２である。
いくつかの実施形態において、被験体は、ヒトである。
免疫反応の誘発
いくつかの実施形態において、免疫反応を調節することは、免疫反応を増加させる（例えば、誘発する、補完する、増幅する）ことを意味する。いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させることは、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）Ｔ細胞の寿命を増加させること、Ｔ細胞による増殖の割合を増加させること、記憶Ｔ細胞が抗原に反応する割合を増加させること、アネルギー性細胞の数を減少させること、及び／又は、細胞がアネルギーに終わる割合を増加させることを含む。
いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させることは、ＭＹＣの核酸濃度を増加させる薬剤を、それを必要とする個体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させることは、外因性のＭＹＣ、ＭＹＣ遺伝子の発現を増加させる薬剤、およびＭＹＣの活性を増加させる薬剤（「ＭＹＣ増加薬剤」）を、それを必要とする個体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、小分子、バイオロジック、ペプチド、抗体またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させる方法は、細胞をＭＹＣ増加薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、外因性ＭＹＣポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、（ａ）輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および任意に（ｃ）輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子を含む融合ペプチドである。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は（ａ）ＴＡＴ配列；および（ｂ）ＭＹＣ配列を含む融合ペプチドである。
いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させる方法は、細胞をＭＹＣ増加薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、ＭＡＤ−１遺伝子のアンタゴニストである。特定の例において、ＭＡＤ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのダウンレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をアップレギュレートする。
いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させる方法は、細胞をＭＹＣ増加薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、Ｍｘｉ−１遺伝子のアンタゴニストである。特定の例において、Ｍｘｉ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのダウンレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をアップレギュレートする。
いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約１５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約１０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約４倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２倍増加される。
いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させる方法は、ＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与した後に、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）、１乃至約１０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与した後に、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与した後に、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約１５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与した後に、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約１０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与した後に、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与した後に、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約４倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与した後に、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２倍増加される。
いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させる方法は、ワクチンを同時投与する工程をさらに含む。いくつかの実施形態において、ワクチンは、ＭＹＣ増加薬剤の前に、後に、または同時に共に投与される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、免疫系を刺激し、ワクチンに対する免疫系の反応を増加させる。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、免疫反応を増大させる。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、ワクチンと相乗的に作用する。いくつかの実施形態において、その薬剤は、ワクチンアジュバントである。
いくつかの実施形態において、ワクチンは、死んでいる微生物、弱毒化した微生物、トキソイド、病原体のサブユニット、核酸またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、ワクチンは、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペス・ウイルス；ロタウイルス；インフルエンザ；髄膜炎菌の障害；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核：ヒトパピローマウイルス（paplomavirus）（ＨＰＶ）；マラリア；リーシュマニア；カンジアルビカンス；アレルゲンまたはそれらの組み合わせのためのワクチンである。いくつかの実施形態において、ワクチンは、癌（例えば濾胞性Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫、前立腺癌、多発性骨髄腫、腎臓癌、皮膚の黒色腫および目の黒色腫）のためのワクチンである。いくつかの実施形態において、癌ワクチンは、患者特異的なワクチン（例えば、ワクチンは患者自身の腫瘍細胞を含む）である。いくつかの実施形態において、癌ワクチンは前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）を含む。いくつかの実施形態において、癌ワクチンはｓｉａｌｙｌ Ｔｎ（ＳＴｎ）を含む。いくつかの実施形態において、癌ワクチンは熱ショック蛋白質（ＨＳＰ）（例えばｇｐ９６）を含む。いくつかの実施形態において、癌ワクチンはガングリオシド分子（例えばＧＭ２、ＧＤ２およびＧＤ３）を含む。いくつかの実施形態において、癌ワクチンは癌胚抗原（ＣＥＡ）を含む。いくつかの実施形態において、癌ワクチンはＭＡＲＴ−１（またはＭｅｌａｎ−Ａとして知られている）を含む。いくつかの実施形態において、癌ワクチンは、チロシナーゼを含む。いくつかの実施形態において、ワクチンは、ＤＮＡワクチンである。
いくつかの実施形態において、ワクチンは、抗原部分を含む。いくつかの実施形態において、抗原部分は、トキソイド、ペプチド、核酸配列、ポリサッカライド、またはこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗原部分は、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペス・ウイルス；ロタウイルス；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核；ヒトパピローマウイルス；またはそれらの組み合わせから選択される病原体に由来する。いくつかの実施形態において、抗原部分は、腫瘍細胞由来である。いくつかの実施形態において、抗原部分は核酸または核酸のポリマーである。
いくつかの実施形態において、抗原に対するワクチン接種を受けた個体における免疫反応を増加させることは、その抗原に対する、記憶Ｔ細胞、Ｂ細胞またはそれらの組み合わせの生存率（したがって濃度）の増加を結果として生じる。特定の例において、抗原に対するワクチン接種を受けた個体における免疫反応を増加させることは、抗原によるＴ細胞の加速された活性化を結果として生じる。特定の例において、抗原に対するワクチン接種を受けた個体における免疫反応を増加させることは、アネルギー性Ｔ細胞の減少を結果として生じる。
いくつかの実施形態において、免疫反応を増加させる方法は、ＭＹＣ増加薬剤を同定する工程をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を同定する方法は、Ｂ細胞内でのアネルギーを逆転写する薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を同定する方法は、必要とされる成長因子の不存在下で因子依存性細胞の生存率を増加させる薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤を同定する方法は、ＭＹＣ反応性プロモーター（例えばＥボックス配列）の制御下でレポーター遺伝子の発現を誘発する薬剤を同定する工程を含む。
免疫反応を減少させること
いくつかの実施形態において、免疫反応を調節することは、免疫反応を減少させる（例えば、阻害するまたは抑制する）ことを意味する。いくつかの実施形態において、免疫反応を減少させることは、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の細胞と比較して）Ｔ細胞の寿命を減少させること、Ｔ細胞による増殖を減少せせること、記憶Ｔ細胞が抗原に反応する割合を減少すること、アネルギー性細胞の数を増加させること、及び／又は細胞がアネルギーに終わる割合を減少させることを含む。
いくつかの実施形態において、免疫反応を減少させることは、ＭＹＣの核酸濃度を減少させる薬剤を、それを必要とする個体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、免疫反応を減少させることは、ＭＹＣ遺伝子の発現を減少させる薬剤、およびＭＹＣポリペプチドの活性を減少させる薬剤（「ＭＹＣ減少薬剤」）を、それを必要とする個体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、小分子、バイオロジック、ペプチド、抗体またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態において、免疫反応を減少させる方法は、細胞をＭＹＣ減少薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、ＭＡＤ−１遺伝子、ＭＡＤ−１ポリペプチドのアゴニストまたはそれらの組み合わせである。特定の例において、ＭＡＤ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのアップレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をダウンレギュレートする。
いくつかの実施形態において、免疫反応を減少させる方法は、細胞をＭＹＣ減少薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、Ｍｘｉ−１、Ｍｘｉ−１遺伝子およびＭｘｉ−１ポリペプチドのアゴニスト、またはそれらの組み合わせである。特定の例において、Ｍｘｉ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのアップレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をダウンレギュレートする。
いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２５倍減少される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２０倍減少される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約１５倍減少される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約１０倍減少される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約５倍減少される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約４倍減少される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤との接触に続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２倍減少される。
いくつかの実施形態において、免疫反応を減少させる方法は、ＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体へ投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与することに続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与することに続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与することに続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約１５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与することに続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約１０倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与することに続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約５倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与することに続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約４倍増加される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与することに続いて、免疫反応は、（例えば同じタイプの同一か同様の未調節の免疫反応と比較して）１乃至約２倍増加される。
いくつかの実施形態において、免疫反応を減少させる方法は、自己免疫疾患を伴う個体へのＭＹＣ減少薬剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、免疫反応を減少させる。特定の例において、自己免疫疾患を伴う個体内での免疫反応を減少させることは、被験体の免疫系による自己抗原に対する免疫反応を、寛解させ及び／又は防ぐ。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、カストルマン病、狼瘡、多発性硬化症、強皮性色素変性症（scleroderma pigmentos）、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、重症筋無力症（myesthenia gravis）、糖尿病、喘息、関節リウマチ、白斑、ディ・ジョージ症候群、グレーブス病（Grave's disorder）、クローン病（Crohn's disease）、炎症性腸疾患、大腸炎、精巣炎、強皮性色素変性症（scleroderma pigmentos）、ブドウ膜炎、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）または自己免疫疾患に関連するリンパ節症（ＡＤＡＬ）である。
いくつかの実施形態において、免疫反応を減少させる方法は、ＭＹＣ減少薬剤を、器官または骨髄の移植（「移植」）を受けている、受ける予定の、または受けた個体へ投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、免疫反応を減少させる。いくつか例において、臓器移植または骨髄移植を受けている、受ける予定の、または受けた個体において免疫反応を減少させることは、移植に対する免疫反応を、寛解させ及び／又は防ぐ。
いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を同定する方法は、因子依存性細胞が必要な成長因子と接触させられると、因子依存性細胞の生存率を減少させる薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤を同定する方法は、ＭＹＣ反応性プロモーター（例えばＥボックス配列）の制御下でレポーター遺伝子の発現を阻害する薬剤を同定する工程を含む。
ＭＹＣ遺伝子の異常発現またはＭＹＣポリペプチドの異常活性によって特徴付けられた障害を調節する方法
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣの過剰発現またはＭＹＣポリペプチド活性の過剰によって特徴付けられた障害を処置する方法が開示される。本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣの過小発現またはＭＹＣポリペプチド活性の不足によって特徴付けられた障害を処置する方法がさらに開示される。いくつかの実施形態において、その方法は、有効な量のＭＹＣ遺伝子の発現及び／又はＭＹＣポリペプチドの活性を調節する薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣの過小発現またはＭＹＣポリペプチド活性の不足によって特徴付けられた障害を処置する方法が開示される。いくつかの実施形態において、その方法は、有効な量のＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、小分子、バイオロジック、ペプチド、抗体またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態において、その方法は、有効な量のＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、外因性ＭＹＣポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、（ａ）輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および任意に（ｃ）輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子を含む融合ペプチドである。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、（ａ）ＴＡＴ配列；および（ｂ）ＭＹＣ配列を含む融合ペプチドである。
いくつかの実施形態において、その方法は、有効な量のＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、ＭＡＤ−１遺伝子のアンタゴニストである。特定の例において、ＭＡＤ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのダウンレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をアップレギュレートする。
いくつかの実施形態において、その方法は、有効な量のＭＹＣ増加薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、Ｍｘｉ−１遺伝子のアンタゴニストである。特定の例において、Ｍｘｉ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのダウンレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をアップレギュレートする。
本明細書には、特定の実施形態において、ＭＹＣの過剰発現またはＭＹＣポリペプチド活性の過剰によって特徴付けられた障害を処置する方法が開示される。いくつかの実施形態において、その方法は、有効な量のＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、小分子、バイオロジック、ペプチド、抗体またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態において、その方法は、有効な量のＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、ＭＡＤ−１遺伝子、ＭＡＤ−１ポリペプチドのアゴニスト、またはそれらの組み合わせである。特定の例において、ＭＡＤ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのアップレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をダウンレギュレートする。
いくつかの実施形態において、その方法は、有効な量のＭＹＣ減少薬剤を、それを必要とする個体に投与する工程を含む。いくつかの実施形態において、細胞の生存率を調節する方法は、細胞をＭＹＣ減少薬剤と接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ減少薬剤は、Ｍｘｉ−１、Ｍｘｉ−１遺伝子およびＭｘｉ−１ポリペプチドのアゴニスト、またはそれらの組み合わせである。特定の例において、Ｍｘｉ−１遺伝子及び／又はポリペプチドのアップレギュレーションは、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣ遺伝子によってコードされたポリペプチドの発現をダウンレギュレートする。
いくつかの実施形態において、個体がＭＹＣを過剰発現するか、またはＭＹＣポリペプチドが過度に活発であるという兆候は、自己免疫疾患の進行である。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、カストルマン病、狼瘡、多発性硬化症、強皮性色素変性症（scleroderma pigmentos）、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、重症筋無力症（myesthenia gravis）、糖尿病、喘息、関節リウマチ、白斑、ディ・ジョージ症候群、グレーブス病（Grave's disease）、クローン病、炎症性腸疾患、大腸炎、精巣炎、強皮性色素変性症（scleroderma pigmentos）、ブドウ膜炎、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、自己免疫性疾患に関連するリンパ節症（ＡＤＡＬ）、臓器移植の拒絶、組織移植の拒絶またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態において、個体がＭＹＣを過小発現するか、またはＭＹＣポリペプチドが極小に活性または不活発であるという兆候は、アネルギー性Ｂ細胞及び／又はＴ細胞の数における増加である。特定の例において、ＩｇＭ、ＩｇＭａ、ＩｇＭｂ、Ｂ２２０、ＣＤ２１／３５、ＣＤ２３、ＣＤ２４（ＨＳＡ）、ＣＤ４０、ＣＤ６９、ＣＤ８０及び／又はＣＤ８６（Ｂ７−２）の発現は、非アネルギー性Ｂ細胞と比較して、アネルギー性Ｂ細胞内でダウンレギュレートされる。特定の例において、（例えば部分的にまたは完全に）アネルギーを逆転写することは、ＩｇＭ、ＩｇＭａ、ＩｇＭｂ、Ｂ２２０、ＣＤ２１／３５、ＣＤ２３、ＣＤ２４（ＨＳＡ）、ＣＤ４０、ＣＤ６９、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６（Ｂ７−２）の発現の増加を結果として生じる。
いくつかの実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の異常の発現またはＭＹＣポリペプチドの異常活性によって特徴付けられた障害を処置する方法は、Ｂ細胞内でのアネルギーを逆転写する薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の異常の発現またはＭＹＣポリペプチドの異常活性によって特徴付けられた障害を処置する方法は、必要とされる成長因子の不存在下での因子依存性細胞の生存率を増加させる薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の異常発現またはＭＹＣポリペプチドの異常活性によって特徴付けられた障害を処置する方法は、因子依存性細胞が必要な成長因子と接触させられると、因子依存性細胞の生存率を減少させる薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の異常発現またはＭＹＣポリペプチドの異常活性によって特徴付けられた障害を処置する方法は、ＭＹＣ反応性プロモーター（例えばＥボックス配列）の制御下でレポーター遺伝子の発現を誘発する薬剤を同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ遺伝子の異常発現またはＭＹＣポリペプチドの異常活性によって特徴付けられた障害を処置する方法は、ＭＹＣ反応性プロモーター（例えばＥボックス配列）の制御下でレポーター遺伝子の発現を阻害する薬剤を同定する工程を含む。
外因性のＭＹＣ
本明細書には、特定の実施形態において、（ａ）輸送体ペプチド配列；および（ｂ）ＭＹＣ配列を含む融合ペプチドが開示される。いくつかの実施形態において、融合ペプチドは、式（Ｉ）：
輸送体ペプチド配列‐ＭＹＣ配列
のペプチドである。
いくつかの実施形態において、本明細書には、（ａ）輸送体ペプチド配列；（ｂ）ＭＹＣ配列；および（ｃ）輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する１つ以上の分子を含む融合ペプチドが開示される。いくつかの実施形態において、融合ペプチドは式（ＩＩ）：
輸送体ペプチド配列‐Ｘ‐ＭＹＣ配列
のペプチドであり、‐Ｘ‐は、輸送体ペプチド配列とＭＹＣ配列を結合する分子である。いくつかの実施形態において、‐Ｘ‐は、アミノ酸である。いくつかの実施形態において、‐Ｘ‐は、少なくとも１つのアミノ酸である。
本明細書で使用される場合、「輸送体ペプチド」は、細胞と組織へのペプチドの貫入を促進するペプチド配列を意味する。いくつかのの実施形態において、輸送体ペプチドは、ＴＡＴである。いくつかの実施形態において、輸送体ペプチドはＴＡＴ［４８−５７］である。いくつかの実施形態において、輸送体ペプチドはＴＡＴ［５７−４８］である。
本明細書で使用される場合、「ＭＹＣ配列」は、ＭＹＣアミノ酸ペプチド配列である。いくつかの実施形態において、ＭＹＣポリペプチドは完全なＭＹＣポリペプチド配列である。いくつかの実施形態において、ＭＹＣポリペプチドは部分的なＭＹＣポリペプチド配列である。いくつかの実施形態において、ＭＹＣは、ｃ−ＭＹＣである。いくつかの実施形態において、ＭＹＣポリペプチド配列は、以下の配列番号１を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、（ａ）ＴＡＴおよび（ｂ）ｃ‐ＭＹＣを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、（ａ）ＴＡＴ［４８−５７］及び（ｂ）ｃ−ＭＹＣを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、（ａ）ＴＡＴ［５７−４８］及び（ｂ）ｃ‐ＭＹＣを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、（ａ）ＴＡＴ、（ｂ）リンカーアミノ酸および（ｃ）ｃ‐ＭＹＣを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、（ａ）ＴＡＴ［４８−５７］、（ｂ）リンカーアミノ酸および（ｃ）ｃ‐ＭＹＣを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、（ａ）ＴＡＴ［５７−４８］、（ｂ）リンカーアミノ酸および（ｃ）ｃ‐ＭＹＣを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、融合タンパク質の精製を促進する少なくとも１つのアミノ酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドはタンパク質タグを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドはポリヒスチジンタグを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドはエピトープタグを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、ポリヒスチジンタグおよびエピトープタグを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、６‐ヒスチジンタグおよびＶ５エピトープタグを含む。
いくつかの実施形態において、ヒスチジンタグは、６‐ヒスチジンタグである。いくつかの実施形態において、ヒスチジンタグは、配列ＨＨＨＨＨＨを含む。いくつかの実施形態において、ヒスチジンタグは、任意の適切な方法によって本明細書に開示の融合タンパク質に付加される。いくつかの実施形態において、ＴＡＴ−ＭＹＣポリペプチド配列は、ポリＨｉｓ‐タグをコードする発現ベクターへとクローン化される。いくつかの実施形態において、ポリヒスチジンタグは、ＰＣＲによって付加される（すなわち、ＰＣＲプライマーはポリヒスチジン（polyhistine）配列を含む）。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、少なくとも１つのタンパク質タグをさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、エピトープタグを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の融合ペプチドは、Ｖ５エピトープタグをさらに含む。いくつかの実施形態において、Ｖ５タグは、アミノ酸：ＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴを含む。いくつかの実施形態において、Ｖ５タグは、アミノ酸：ＩＰＮＰＬＬＧＬＤを含む。いくつかの実施形態において、Ｖ５タグは、任意の適切な方法によって本明細書に開示の融合タンパク質に付加される。いくつかの実施形態において、ＴＡＴ−Ｍｙｃポリペプチド配列は、Ｖ５タグをコードする発現ベクターへとクローン化される。いくつかの実施形態において、Ｖ５タグは、ＰＣＲによって付加される（すなわち、ＰＣＲプライマーはＶ５配列を含む）。
いくつかの実施形態において、アミノ酸は、Ｄ体（D formation）である。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、Ｌ体（Ｌ formation）である。いくつかの実施形態において、第１の複数のアミノ酸は、D体であり、第２の複数のアミノ酸は、L体である。
いくつかの実施形態において、ＭＹＣ増加薬剤は、以下の配列番号２を含む。
ＭＹＣ‐ＴＡＴペプチドの構築
いくつかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ‐ＴＡＴ融合ペプチドは、任意の適切な方法によって構築される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ−ＴＡＴ融合ペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ＰＣＲによって生成される。いくつかの実施形態において、ヒトＭＹＣ配列のための順方向プライマーは、ＴＡＴタンパク質形質導入領域の構造インフレームのＮ末端９‐アミノ酸配列（すなわちＲＫＫＲＲＱＲＲＲ）を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＭＹＣ配列のための逆方向プライマーは、停止コドンを削除するように設計される。いくつかの実施形態において、ＰＣＲ生成物は、任意の適切な発現ベクター（以下、ｐ−ＴＡＴ−ＭＹＣ）へとクローン化される。いくつかの実施形態において、発現ベクターは、ポリヒスチジンタグおよびＶ５タグを含む。
薬剤の同定のためのアッセイ
アネルギーの逆転写
本明細書には、特定の実施形態において、Ｂ細胞内でのアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法が開示される。特定の例において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤は、免疫反応を増加させ、及び／又は細胞の生存率を増加させる。特定の例において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤は、ＭＹＣ（例えば、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭＹＣポリペプチド）をアップレギュレートする。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、（ａ）薬剤と複数のアネルギー性Ｂ細胞を接触させる工程；および（ｂ）薬剤と複数の細胞を接触させる工程に続いて、細胞培養内で１以上の細胞表面マーカー（例えば、その存在が非アネルギー性細胞を表示する細胞表面マーカー）の発現のレベルを検出及び／又は測定する工程を含む。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーは、ＩｇＭ、ＩｇＭａ、ＩｇＭｂ、Ｂ２２０、ＣＤ２１／３５、ＣＤ２３、ＣＤ２４（ＨＳＡ）、ＣＤ４０、ＣＤ６９、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６（Ｂ７−２）である。
特定の例において、ＩｇＭ 、ＩｇＭａ、ＩｇＭｂ、Ｂ２２０、ＣＤ２１／３５、ＣＤ２３、ＣＤ２４（ＨＳＡ）、ＣＤ４０、ＣＤ６９、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６（Ｂ７−２）の発現は、非アネルギー性Ｂ細胞と比較すると、アネルギー性Ｂ細胞においてダウンレギュレートされる。特定の例において、（例えば部分的にまたは完全に）アネルギーを逆転写することは、ＩｇＭ、ＩｇＭａ、ＩｇＭｂ、Ｂ２２０、ＣＤ２１／３５、ＣＤ２３、ＣＤ２４（ＨＳＡ）、ＣＤ４０、ＣＤ６９、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６（Ｂ７−２）の発現の増加を結果として生じる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、細胞表面マーカーの発現が（例えば、薬剤と接触させられないアネルギー性Ｂ細胞と比較して）アップレギュレートされるならば、薬剤を免疫反応のアゴニストであると同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、活性化されたＢ細胞上で、（アネルギー性Ｂ細胞の上の発現パターンと比較すると）約１０％から約１００％まで（例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約１０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）アップレギュレートされる。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、活性化されたＢ細胞上で、（アネルギー性Ｂ細胞上の発現パターンと比較すると）約３０％から約１００％まで（例えば、少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約３０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）アップレギュレートされる。
いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、活性化されたＢ細胞上で、（アネルギー性Ｂ細胞上の発現パターンと比較すると）約５０％から約１００％まで（例えば、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約５０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）アップレギュレートされる。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、活性化されたＢ細胞上で、（アネルギー性Ｂ細胞上の発現パターンと比較すると）約７０％から約１００％まで（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約７０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）アップレギュレートされる。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、活性化されたＢ細胞上で、（アネルギー性Ｂ細胞上の発現パターンと比較すると）約８０％から約１００％まで（例えば、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約８０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）アップレギュレートされる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、細胞表面マーカーの発現が、（例えば、薬剤と接触させられない非アネルギー性Ｂ細胞と比較して）ダウンレギュレートされるならば、薬剤を免疫反応のアンタゴニストであると同定する工程を含む。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、（例えば、薬剤と接触させられない非アネルギー性Ｂ細胞と比較して）約１０％から約１００％まで（例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約１０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）ダウンレギュレートされる。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、（例えば、薬剤と接触させられない非アネルギー性Ｂ細胞と比較して）約３０％から約１００％まで（例えば、少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約３０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）ダウンレギュレートされる。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、（例えば、薬剤と接触させられない非アネルギー性Ｂ細胞と比較して）約５０％から約１００％まで（例えば、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約５０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）ダウンレギュレートされる。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、（例えば、薬剤と接触させられない非アネルギー性Ｂ細胞と比較して）約７０％から約１００％まで（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約７０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）ダウンレギュレートされる。いくつかの実施形態において、細胞表面マーカーの発現は、（例えば、薬剤と接触させられない非アネルギー性Ｂ細胞と比較して）約８０％から約１００％まで（例えば、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または約８０％から約１００％までの他の任意の百分率まで）ダウンレギュレートされる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、（１）複数の細胞を薬剤と接触させることに続いて、複数のアネルギー性Ｂ細胞内で観察される細胞表面マーカーの発現のレベルを、（２）対照において観察された細胞表面マーカーのレベルと比較する工程をさらに含む。いくつかの実施形態において、対照は、薬剤と接触させられない複数のアネルギー性Ｂ細胞である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、任意の適切なソース（例えば、ヒト、マウス、ラットまたは任意の哺乳動物）からアネルギー性Ｂ細胞を得る工程を含む。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、表現型ＢＣＲＨＥＬ／ｓＨＥＬによるトランスジェニックマウスからアネルギー性Ｂ細胞を得る工程を含む。特定の例において、ＢＣＲＨＥＬマウスは、抗原ニワトリ卵白リゾチーム（ＨＥＬ）に対する成熟Ｂ細胞レセプター（ＢＣＲ）を発現する。特定の例において、ＨＥＬ ＢＣＲは、トランスジェニックマウスのＢ細胞上の優性ＢＣＲである。特定の例において、ｓＨＥＬマウスは、可溶性形態のＨＥＬのための導入遺伝子を至る所に発現する。特定の例において、ＨＥＬ導入遺伝子の発現は、メタロチオネインプロモーターに操作可能に結合される。特定の例において、可溶性ＨＥＬへの曝露は、Ｂ細胞内でアネルギーを誘発する。米国特許出願公開第２００８／００７０２５６号は、上論されたマウスのモデルを構築する方法のために、参照として、本明細書によって組み込まれる。いくつかの実施形態において、アネルギー性Ｂ細胞は、トランスジェニックマウスのひ臓、胸腺、骨髄、リンパ節またはそれらの組み合わせから得られる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でのアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、１以上の細胞表面マーカー（例えばＣＤ８６）の発現のレベルを検出及び／又は測定する工程を含む。いくつかの実施形態において、１以上の細胞表面マーカーの発現のレベルを検出及び／又は測定する工程は、（ａ）細胞表面マーカーに対する抗体（例えばＣＤ８６に対する抗体）と複数のアネルギー性Ｂ細胞（例えば、対照、または薬剤との接触に続く複数のアネルギー性Ｂ細胞）を接触させる工程：（ｂ）抗体との接触の後に、緩衝液（例えばＦＡＣＳ緩衝液）により細胞培養物を洗浄する（例えば、リンスする）工程；および（ｃ）抗体／細胞表面マーカー複合体の量を検出及び／又は測定する工程を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、商用サプライヤーから購入される。いくつかの実施形態において、抗体は、社内で（in-house）作成される。抗体を作成する方法については、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）；米国特許第４，８１６，５６７号；またはＧｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６（１９８９）；Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１（１９８９）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４（１９９０）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ. Ｍｏｌ. Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）を参照、これらはすべて、参照によって本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、細胞培養は、抗体との接触の間、氷上でインキュベートされる。いくつかの実施形態において、抗体は、同位体標識されるか、放射能標識されるか、蛍光標識されるか、またはビオチン化される。いくつかの実施形態において、蛍光体は、フルオレセインである。特定の例において、細胞表面マーカー／抗体複合体は、任意の適切な方法（例えばＨＰＬＣ、蛍光顕微鏡法、共焦点顕微鏡観察、マイクロアレイスキャナー、表面プラズモン共鳴、赤外分光法またはオートラジオグラフィー）において検出可能及び／又は測定可能である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、ＩｇＭの発現レベルを検出及び／又は測定することをする工程を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＭの発現のレベルを検出及び／又は測定する工程は、（ａ）抗原がIgMに結合することを可能にするのに十分な時間の間、細胞培養物（例えば、対照、または薬剤との接触に続く複数のアネルギー性Ｂ細胞）を抗原（例えばＨＥＬ）と接触させる工程；（ｂ）培養物を抗原と接触させた後、緩衝液（例えばＦＡＣＳ緩衝液）で細胞培養物を洗浄する（例えばリンスする）工程；および（ｃ）抗原及び／又は抗原／ＩｇＭ複合体の量を検出及び／又は測定する工程を含む。いくつかの実施形態において、抗原は、ビオチン化される。いくつかの実施形態において、細胞培養物は、ビオチンへの親和性を有するマーカー（「ビオチン・マーカー」）と一緒にさらにインキュベートされる。いくつかの実施形態において、ビオチン・マーカーは、アビジンまたはストレプトアビジンである。いくつかの実施形態において、ビオチン・マーカーは、同位体標識されるか、放射線標識されるか、蛍光標識される。いくつかの実施形態において、蛍光体は、フィコエリトリンである。特定の例において、ＩｇＭ／抗原／ビオチン・マーカー複合体は、任意の適切な方法（例えばＨＰＬＣ、蛍光顕微鏡法、共焦点顕微鏡観察、マイクロアレイスキャナー、表面プラズモン共鳴、赤外分光法またはオートラジオグラフィー）において検出可能及び／又は測定可能である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞内でアネルギーを逆転写する薬剤を同定する方法は、ＩｇＭの発現のレベルを検出及び／又は測定することをする工程を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＭの発現のレベルを検出及び／又は測定する工程は、（ａ）抗原がＩｇＭに結合することを可能にするのに十分な時間の間、抗原（例えばＨＥＬ）に細胞培養物（例えば、対照、または薬剤との接触に続く複数のアネルギー性Ｂ細胞）を接触させる工程；（ｂ）抗原と培養物を接触させた後、緩衝液（例えばＦＡＣＳ緩衝液）で細胞培養物を洗浄する（例えばリンスする）工程；および（ｃ）抗原及び／又は抗原／ＩｇＭ複合体の量を検出及び／又は測定する工程を含む。いくつかの実施形態において、培養物は、（例えば、抗体が抗原に結合することを可能にするのに十分な時間の間）抗原に対する抗体の稀釈液と接触させられる。いくつかの実施形態において、細胞培養物は、抗体と接触させる間、氷上でインキュベートされる。いくつかの実施形態において、細胞培養物は、抗体との接触の後、緩衝液（例えばＦＡＣＳ緩衝液）で洗浄される（例えば、リンスされる）。いくつかの実施形態において、抗体は、アイソトープで標識されるか、放射能標識されるか、蛍光標識されるか、またはビオチン化される。いくつかの実施形態において、蛍光体は、フルオレセインである。特定の例において、抗原／抗体及び／又はＩｇＭ／抗原／抗体複合体は、任意の適切な方法（例えばHPLC、蛍光顕微鏡法、共焦点顕微鏡観察、マイクロアレイスキャナー、表面プラズモン共鳴、赤外分光法またはオートラジオグラフィー）において検出可能及び／又は測定可能である。
いくつかの実施形態において、その方法は、標識された抗体、または抗体とＨＥＬ抗原の間で形成された複合体の存在を検出し、及び／又は、標識された抗体、または抗体とＨＥＬ抗原の間で形成された複合体の量を測定する工程をさらに含む。特定の例において、ＨＥＬ抗原／抗体複合体は、任意の適切な方法（例えばＨＰＬＣ、蛍光顕微鏡法、共焦点顕微鏡観察、マイクロアレイスキャナー、表面プラズモン共鳴、赤外分光法またはオートラジオグラフィー）において検出可能で測定可能である。
サイトカインの作用の調節
本明細書には、特定の実施形態において、免疫反応を誘発する（例えば、活性化する、または増加する、または補完する）薬剤を同定する方法が開示される。いくつかの実施形態において、その方法は、サイトカインの作用を代わりに行う、及び／又は増大する（「サイトカイン補完薬剤」）を同定する工程を含む。特定の例において、因子依存性細胞でサイトカインの作用を代わりに行う、及び／又は増大する薬剤は、免疫反応を増加させ、及び／又は細胞の生存率を増加させる。特定の例において、因子依存性細胞でサイトカインの作用を代わりに行う、及び／又は増大する薬剤は、ＭＹＣ（例えば、ＭＹＣ遺伝子及び／又は、ＭＹＣポリペプチド）をアップレギュレートする。
いくつかの実施形態において、その方法は（ａ）複数の因子依存性細胞を薬剤と接触させる工程；および（ｂ）細胞を薬剤と接触させることに続いて、細胞培養の拡張のレベルを検出及び／又は測定する工程を含む。
いくつかの実施形態において、その方法は、薬剤との接触に続いて、（例えば、薬剤と接触させられない細胞培養と比較して）細胞培養は拡張する場合、薬剤をサイトカイン補足剤であると確認する工程をさらに含む。いくつかの実施形態において、薬剤との接触に続いて、細胞培養は、（薬剤と接触させられない細胞培養と比較して）約１０％から約１００％まで、例えば少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約１０％から約１００％までの他の任意の百分率までで拡張する。いくつかの実施形態において、薬剤との接触に続いて、細胞培養は、(薬剤と接触させられない細胞培養と比較して)約３０％から約１００％まで、例えば少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約３０％から約１００％までの他の任意の百分率までで拡張する。いくつかの実施形態において、薬剤との接触に続いて、細胞培養は、（薬剤と接触させられない細胞培養と比較して）約５０％から約１００％まで、例えば少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約５０％から約１００％までの他の任意の百分率までで拡張する。いくつかの実施形態において、薬剤との接触に続いて、細胞培養は、（薬剤と接触させられない細胞培養と比較して）約７０％から約１００％まで、例えば少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約７０％から約１００％までの他の任意の百分率までで拡張する。いくつかの実施形態において、薬剤との接触に続いて、細胞培養は、（薬剤と接触させられない細胞培養と比較して）約８０％から約１００％まで、例えば少なくとも、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約８０％から約１００％までの他の任意の百分率までで拡張する。
いくつかの実施形態において、サイトカインの作用を代わりに行う及び/又は増大する薬剤を同定する方法は、（１）複数の細胞を薬剤と接触させる工程に続いて、複数の因子依存性細胞に観察される拡張のレベルと、（２）対照の拡張のレベルとの比較する工程をさらに含む。いくつかの実施形態において、対照は薬剤と接触させない複数の因子依存性細胞である。
いくつかの実施形態において、因子依存性細胞を、サイトカインの作用を代わりに行う、及び/又は増大する薬剤と接触させることは、アップレギュレートされているＭＹＣの発現を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣのアップレギュレーションは、生存率のためにサイトカインを必要としない因子依存性細胞を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣのアップレギュレーションは、サイトカイン不存在下で増殖する因子依存性細胞を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣのアップレギュレーションは、サイトカイン不存在下でアポトーシスを受けない、因子依存性細胞を結果として生じる。
いくつかの実施形態において、因子依存性細胞は、リンパ球系細胞（すなわち、リンパ系の細胞に由来する）である。いくつかの実施形態において、因子依存性細胞は、限定しない例として、ＩＬ−２‐/‐、ＩＬ−３‐/‐、ＩＬ−４‐/‐、ＩＬ−５‐/‐、ＩＬ−６‐/‐、ＩＬ−７‐/‐、ＩＬ−８‐/‐、ＩＬ−９‐/‐、ＩＬ−１０‐/‐、ＩＬ−１１‐/‐、ＩＬ−１２‐/‐、あるいはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態において、因子依存性細胞は、限定しない例として、２Ｄ６；２Ｅ８；１０Ｂ１０；ＡＴＨ８；Ｂ１３；ＢＡＦ／３；ＢＡＬＭ‐４；ＢＣＬ１；ＣＴ.４Ｓ；ＣＴ６；ＣＴＬ４４；ＣＴＬＬ−２；Ｄ１；Ｄ１０；Ｄ３６；Ｄａ；ＤＳ‐１；Ｅａ３．１７；ＥＬ４；ＦＬ５．１２；ＨＴ‐２；ＩＣ‐２；Ｋｉｔｔ２２５；ＫＴ‐３；Ｌ４；Ｌ１３８．８Ａ；ＬＢＲＭ‐３３；ＬｙＤ９；ＭＣ／９；ＭＬＡ‐１４４；Ｍｏｎｏ Ｍａｃ６；Ｎｂ２；ＮＫＣ３；ＰＢ‐１；Ｐｎｏ；ＰＴ‐１８；Ｒａｍｏｓ；Ｓｅｚ６２７；Ｔ１０；Ｔ８８；Ｔ１１６５；ＴＡＬＬ‐１０３；ＴＦ‐１；ＴＭＤ２；ＴＳ１；ＵＴ‐７；ＸＧ‐１；Ｙ１６；あるいはそれらの組み合わせから選択された細胞株に由来する。いくつかの実施形態において、細胞は、ＣＴＬＬ−２またはＢＡＦ/３細胞株に由来する。
本明細書には、特定の実施形態において、サイトカインの作用を阻害する、及び/又は干渉する薬剤(「サイトカイン干渉薬剤」)を同定する方法が開示される。特定の例において、サイトカイン干渉薬剤は、免疫反応及び/又は細胞の生存率を減少させる。いくつかの実施実施形態において、その方法は、（ａ）複数の因子依存性細胞を、細胞培養が拡張するような必須成長因子と接触させる工程；（ｂ）複数の細胞、複数の因子依存性細胞、と薬剤を接触させる工程；および（ｃ）複数の細胞、複数の因子依存性細胞を、薬剤と接触させる工程に続いて、細胞培養の拡張のレベルを検出及び/又は測定する工程を含む。
幾つかの実施形態において、薬剤との接触後、細胞培養物が縮小する場合（例えば、薬剤と接触させられない細胞培養物と比較して）、方法は、薬剤をサイトカイン干渉薬剤として同定する工程をさらに含む。幾つかの実施形態において、薬剤との接触後、（薬剤と接触させられない細胞培養物と比較した場合に）細胞培養物は、約１０％〜約１００％（例えば、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または約１０％から約１００％までの任意の他の百分率）にまで縮小する。幾つかの実施形態において、薬剤との接触後、（薬剤と接触させられない細胞培養物と比較した場合に）細胞培養物は、約３０％〜約１００％（例えば、少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８、または約３０％から約１００％までの任意の他の百分率）にまで縮小する。幾つかの実施形態において、薬剤との接触後、薬剤と接触させられない細胞培養物と比較した場合に）細胞培養物は、約５０％〜約１００％（例えば、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８、または約５０％から約１００％までの任意の他の百分率）にまで縮小する。幾つかの実施形態において、薬剤との接触後、（薬剤と接触させられない細胞培養物と比較した場合に）細胞培養物は、約７０％〜約１００％（例えば、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８、または約７０％から約１００％までの任意の他の百分率）にまで縮小する。幾つかの実施形態において、薬剤との接触後、（薬剤と接触させられない細胞培養物と比較した場合に）細胞培養物は、約８０％〜約１００％（例えば、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８、または約８０％から約１００％までの任意の他の百分率）にまで縮小する。
幾つかの実施形態において、サイトカイン作用を代わりに行い、及び／又は増大する薬剤を同定する方法は、（１）多数の細胞を薬剤と接触させた後に、多くの因子依存性細胞において観測された拡張のレベルと、（２）対照の拡張のレベルを比較する工程をさらに含む。幾つかの実施形態において、その対照は、薬剤と接触させられない、複数の因子依存性細胞である。
幾つかの実施形態において、因子依存性細胞を、サイトカイン作用を阻害する及び／又は干渉する薬剤と接触させる工程は、ダウンレギュレートされているＭＹＣの発現を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣのダウンレギュレーションは、生存率のためサイトカインを必要とする因子依存性細胞を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣのダウンレギュレーションは、サイトカインの不存在下において増殖しない、因子依存性細胞を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣのダウンレギュレーションは、サイトカインの不存在下においてアポトーシスを受ける、因子依存性細胞を結果として生じる。
幾つかの実施形態において、因子依存性細胞は、リンパ球系細胞（すなわち、リンパ系の細胞に由来）である。幾つかの実施形態において、因子依存性細胞は、制限しない例では、ＩＬ−２−／−、ＩＬ−３−／−、ＩＬ−４−／−、ＩＬ−５−／−、ＩＬ−６−／−、ＩＬ−７−／−、ＩＬ−８−／−、ＩＬ−９−／−、ＩＬ−１０−／−、ＩＬ−１１−／−、ＩＬ−１２−／−、又はそれらの任意の組み合わせである。幾つかの実施形態において、因子依存性細胞は、制限しない例では、以下のものから選択された細胞株に由来する：即ち、２Ｄ６；２Ｅ８；１０Ｂ１０；ＡＴＨ８；Ｂ１３；ＢＡＦ／３；ＢＡＬＭ−４；ＢＣＬ１；ＣＴ．４Ｓ；ＣＴ６；ＣＴＬ４４；ＣＴＬＬ−２；Ｄ１；Ｄ１０；Ｄ３６；Ｄａ；ＤＳ‐１；Ｅａ３．１７；ＥＬ４；ＦＬ５．１２；ＨＴ−２；ＩＣ−２；Ｋｉｔｔ２２５；ＫＴ−３；Ｌ４；Ｌ１３８．８Ａ；ＬＢＲＭ−３３；ＬｙＤ９；ＭＣ／９；ＭＬＡ−１４４；Ｍｏｎｏ Ｍａｃ ６；Ｎｂ２；ＮＫＣ３；ＰＢ‐１；Ｐｎｏ；ＰＴ−１８；Ｒａｍｏｓ；Ｓｅｚ６２７；Ｔ１０；Ｔ８８；Ｔ１１６５；ＴＡＬＬ−１０３；ＴＦ−１；ＴＭＤ２；ＴＳ１；ＵＴ−７；ＸＧ‐１；Ｙ１６；又はそれらの組み合わせから選択される。幾つかの実施形態において、細胞はＣＴＬＬ−２；又はＢＡＦ／３細胞株に由来する。
レポーターアッセイ
本明細書には、特定の実施形態において、免疫反応を誘発する（例えば、活性化する、増加する、補足する）薬剤を同定する方法が開示される。幾つかの実施形態において、方法は、ＭＹＣコード化の転写因子の作用を調節する薬剤を同定する工程を含む。幾つかの実施形態において、方法は、（ａ）レポーター構築物で細胞培養物における複数の細胞を形質転換する工程、ここで、レポーター構築物は、レポーター遺伝子を含むプラスミドであり、レポーター遺伝子の発現は１つ以上のＥ−ｂｏｘ配列に操作しやすく結合される；（ｂ）薬剤と、レポーター構築物で形質転換された複数の細胞を接触させる工程；そして、（ｃ）薬剤と培養物を接触させた後、レポーター遺伝子の発現のレベルを検出及び／又は測定する工程を含む。幾つかの実施形態において、レポーター構築物は、任意の適切な方式（例えば、売り手から購入された、または企業内で製作したもの）で得られる。レポーター構築物を製作し、レポーター構築物で細胞を形質転換させるのに適している方法に関しては、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition （Sambrook et al., 1989）」および「Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition （Sambrook and Russel, 2001）」、これらを一緒に“Sambrook”として本明細書に称される;「Current Protocols in Molecular Biology （F. M. Ausubel et al., eds., 1987、2001年の補足を含む）」;「Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry John Wiley & Sons, Inc.、New York、2000）」を参照する。これらは、そのような開示のために参照として本明細書に組み入れられる。
幾つかの実施形態において、ＭＹＣコード化の転写因子の機能を調節する薬剤を同定する方法は、（１）薬剤と接触させた後、レポーター構築物で形質転換された複数の細胞におけるレポーター遺伝子の発現のレベルと、（２）対照におけるレポーター遺伝子の発現のレベルを比較する工程をさらに含む。
幾つかの実施形態において、細胞は真核細胞である。幾つかの実施形態において、真核細胞はヒト細胞である。幾つかの実施形態において、細胞はヒトリンパ球系細胞である。幾つかの実施形態において、リンパ球系細胞はＢ細胞である。
幾つかの実施形態において、レポーター構築物はレポーター遺伝子の上流に１つ以上のＥ−ｂｏｘ配列を含む。幾つかの実施形態において、１つ以上のＥ−ｂｏｘ配列は、ｍｙｃ−反応性プロモーター配列内でコード化され、及び／又はｍｙｃ−反応性プロモーターの上流にある。本明細書で使用されるように、「プロモーター配列」は、ＲＮＡポリメラーゼが遺伝子を転写することを可能にする遺伝子の上流にある、ヌクレオチド配列を意味する。本明細書で使用されるように、「ｍｙｃ−反応性プロモーター」は、ＭＹＣによってコード化された転写因子がそれに対し結合できるプロモーター配列を意味する。幾つかの実施形態では、ｍｙｃ−反応性プロモーターは、オルニチンデカルボキシラーゼプロモーターである。
幾つかの実施形態において、レポーター遺伝子は、β−ガラクトシダーゼ遺伝子、β−ラクタマーゼ遺伝子、ホースラディッシュペルオキシダーゼ遺伝子、アルカリフォスファターゼ遺伝子、チミジンキナーゼ遺伝子、キサンチンホスホリボトランスフェラーゼ遺伝子、チロシナーゼ遺伝子、シトシンデアミナーゼ遺伝子、抗生物質抵抗性遺伝子、または蛍光の発現産物を有する遺伝子である。幾つかの実施形態において、蛍光の発現産物を有する遺伝子は、ルシフェラーゼ遺伝子、または緑の蛍光のポリペプチド（ＧＦＰ）遺伝子である。
幾つかの実施形態において、ＭＹＣコード化転写因子の作用を調節する薬剤を同定する方法は、レポーター遺伝子の発現を検出及び／又は発現の量を測定する工程をさらに含む。特定の例において、レポーター遺伝子の発現は、任意の適切な方法（例えば蛍光顕微鏡法）において検出可能であり、測定可能である。
幾つかの実施形態において、細胞培養物は、血清をさらに含む。幾つかの実施形態において、血清は、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）；ウシ血清；ウマ血清；ヒト血清；ニワトリ血清；ヤギ血清；ブタ血清；ウサギ血清；ヒツジ血清；血清置換物（例えば血清置換物１（Sigma-Aldrich））；又はそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態において、細胞培養物は、媒体をさらに含む。幾つかの実施形態において、培地は、制限しない例では、リン酸緩衝食塩水；Ｅａｒｌｅ’ｓ平衡塩；Ｈａｎｋｓ’平衡塩；Ｔｙｒｏｄｅ’ｓ塩；それらの誘導体；またはそれらの組み合わせである。幾つか実施形態において、成長因子は、制限しない例では、サイトカイン、表皮増殖因子または血小板由来増殖因子である。幾つかの実施形態において、サイトカインは、制限しない例では、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、またはＩＬ−１３である。特定の例において、成長因子の選択は、方法において使用される細胞のタイプに基づいて、決定される。
幾つかの実施形態において、方法は、複数の細胞を細胞分裂促進性の刺激物と接触させる工程をさらに含む。幾つかの実施形態において、細胞分裂促進性の刺激物は、制限しない例では、抗原または細胞分裂促進性の抗体である。幾つかの実施形態において、抗原は、制限しない例では、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）、コンカナバリンＡ（ｃｏｎＡ）、リポ多糖類（ＬＰＳ）、ポークウィートマイトジェン（ＰＷＭ）またはそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態において、細胞分裂促進性の抗体は、制限しない例では、抗−ＩｇＭ、抗−ＣＤ４０、またはそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態において、抗−ＩｇＭは、抗−ＩｇＭ−Ｆ（ａｂ’）２である。幾つかの実施形態において、抗−ＣＤ４０は、抗−ＣＤ４０ ＩｇＭである。
薬剤のインビトロでの検証
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法の何れかは、免疫反応のレギュレーターとして、薬剤（例えば、本明細書に記載の任意の方法によって同定された薬剤）をインビトロで検証する工程をさらに含む。幾つかの実施形態において、免疫反応のレギュレーターとして薬剤をインビトロで検証する方法は、（ａ）薬剤を主要なＴ細胞活性化培養物と接触させる工程；（ｂ）活性化マーカーのため培養物を染色する工程；および（ｃ）薬剤との接触後の２４時間後に培養物を染色する工程を含む。特定の例において、細胞の生存率は、任意の適切な方法（例えば蛍光顕微鏡法、フローサイトメトリー、ＦＡＣＳ）において検出可能であり、測定可能である。特定の例において、免疫反応をアップレギュレートする薬剤は、対照（または薬剤との接触の前の培養物）と比較して、活性化マーカーの増加を引き起こす。特定の例において、免疫反応をダウンレギュレートする薬剤は、対照（または薬剤との接触の前の培養物）と比較して、活性化マーカーの減少を引き起こす。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法の何れかは、免疫反応のレギュレーターとして、薬剤をインビトロで検証する工程をさらに含む。幾つかの実施形態において、免疫反応のレギュレーターとして薬剤をインビトロで検証する方法は、（ａ）薬剤を主要なＴ細胞活性化培養物と接触させる工程；（ｂ）ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレスセインスクシンイミジルエステル）で培養物を染色する工程；および（ｃ）薬剤との接触後の７２時間後に培養物を染色する工程を含む。特定の例において、ＣＦＳＥは細胞増殖を示す。特定の例において、細胞はＣＦＳＥを取り込む。特定の例において、細胞におけるＣＦＳＥの一部（すなわち半分）は、分割後に娘細胞へ移動する。特定の例において、細胞におけるＣＦＳＥの量は、各々の分割とともに減少する。特定の例において、細胞の生存率は、任意の適切な方法（例えば蛍光顕微鏡法、フローサイトメトリー、ＦＡＣＳ）において検出可能であり、測定可能である。特定の例において、免疫反応をアップレギュレートする薬剤は、対照（または薬剤との接触の前の培養物）と比較して、細胞増殖の増加を引き起こす。特定の例において、免疫反応をダウンレギュレートする薬剤は、対照（または薬剤との接触の前の培養物）と比較して、細胞増殖の減少を引き起こす。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法の何れかは、免疫反応のレギュレーターとして、薬剤をインビトロで検証する工程をさらに含む。幾つかの実施形態において、免疫反応のレギュレーターとして薬剤をインビトロで検証する方法は、（ａ）薬剤を主要なＴ細胞活性化培養物と接触させる工程；（ｂ）７ＡＡＤ（７−アミノ−アクチノマイシンＤ）で培養物を染色する工程；および（ｃ）薬剤との接触後の７２時間後に培養物を染色する工程を含む。特定の例において、７−ＡＡＤは細胞の生存率を示す。特定の例において、７−ＡＡＤは、易感染性膜（compromised membranes）を有する細胞（すなわち生存不能細胞（unviable cells））を染色する。特定の例において、７−ＡＡＤは、易感染性でない膜（uncompromised membranes）を有する細胞（すなわち生細胞）を染色しない。特定の例において、細胞の生存率は、任意の適切な方法（例えば蛍光顕微鏡法、フローサイトメトリー、ＦＡＣＳ）において検出可能であり、測定可能である。特定の例において、免疫反応をアップレギュレートする薬剤は、対照（または薬剤との接触の前の培養物）と比較して、細胞の生存率の増加を引き起こす。特定の例において、免疫反応をダウンレギュレートする薬剤は、対照（または薬剤との接触の前の培養物）と比較して、細胞の生存率の減少を引き起こす。
薬剤のインビボでの検証
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法の何れかは、免疫反応のレギュレーターとして、薬剤（例えば、本明細書に記載の任意の方法によって同定された薬剤）をインビボで検証する工程をさらに含む。幾つかの実施形態において、免疫反応のレギュレーターとして薬剤をインビボで検証する方法は、（ａ）抗原（例えばＯＶＡペプチド、ＮＰ−ＫＨＬ）に対して哺乳動物（例えばネズミ、ラット、ウサギ）に、マウスに抗原を投与することにより免疫を与える工程；（ｂ）抗原の投与の前、間、または後に、マウスに薬剤を投与する工程；（ｃ）抗原と薬剤の投与の後に、マウスから生体サンプル（例えば血液、リンパ液または血清）を得る工程；および（ｄ）免疫反応（例えば、記憶Ｂ細胞及び／又はＴ細胞の増殖の割合）を検出又は測定する工程を含む。幾つかの実施形態において、免疫反応は、免疫感作後の抗体産生を検出し、測定することにより、検出又は測定される。幾つかの実施形態において、抗体産生は、免疫感作後の１週間、毎日１日１回分析され、その後、１週間に１回行われる。幾つかの実施形態において、免疫反応は、抗原で再刺激した際のＴ細胞増殖を検出し、測定することにより、検出又は測定される。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞増殖は、免疫感作の１週間後に分析される。特定の例において、一次免疫反応をアップレギュレートする薬剤は、対照（すなわち薬剤を投与されていないマウス）と比較して、抗体産生とＴ細胞増殖の増加を引き起こす。特定の例において、一次免疫反応をダウンレギュレートする薬剤は、対照（すなわち薬剤を投与されていないマウス）と比較して、抗体産生とＴ細胞増殖の減少を引き起こす。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の方法の何れかは、免疫反応のレギュレーターとして、薬剤（例えば、本明細書に記載の任意の方法によって同定された薬剤）をインビボで検証する工程をさらに含む。幾つかの実施形態において、免疫反応のレギュレーターとして薬剤をインビボで検証する方法は、（ａ）マウスに抗原を投与することにより、抗原（例えばＯＶＡペプチド、ＮＰ−ＫＨＬ）に対してマウスに免疫を与える工程；（ｂ）抗原の投与の前、間、または後に、マウスに薬剤を投与する工程；（ｃ）移植の３〜６か月後に抗原でマウスを負荷する（challenging）工程；（ｄ）負荷（challenge）後のマウスから生体サンプル（例えば血液、リンパ液または血清）を得る工程；および（ｄ）免疫反応を検出又は測定する工程を含む。幾つかの実施形態において、免疫反応は、免疫感作後の抗体産生を検出し、測定することにより、検出又は測定される。幾つかの実施形態において、抗体産生は、負荷後の１週間、毎日１日１回分析され、その後、１週間に１回行われる。幾つかの実施形態において、免疫反応は、抗原で再刺激した際のＴ細胞増殖を検出し、測定することにより、検出又は測定される。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞増殖は、負荷の１週間後に分析される。特定の例において、二次免疫反応をアップレギュレートする薬剤は、対照（すなわち、薬剤を投与されていないマウス）と比較して、抗原での負荷後の加速された免疫反応（すなわち、増加の割合の抗体産生とＴ細胞分裂反応）を引き起こす。特定の例において、二次免疫反応をダウンレギュレートする薬剤は、対照（すなわち、薬剤を投与されていないマウス）と比較して、抗原での負荷後の減速された免疫反応（すなわち、減少の割合の抗体産生とＴ細胞分裂反応）を引き起こす。
薬剤
本明細書には、特定の実施形態において、免疫反応を調節する薬剤（例えば、アネルギーを転換する薬剤、サイトカイン作用を調節する薬剤、及び／又はＭＹＣコード化転写因子の作用を調節する薬剤）が開示される。特定の実施形態において、薬剤は、それを必要とする個体への投与において役立つ。具体的な実施形態において、薬剤は、本明細書に開示の方法の何れかによって同定された任意の薬剤である。幾つかの実施形態において、薬剤は、免疫反応を調節する任意の薬剤である。特定の実施形態において、薬剤は小分子である。幾つかの実施形態において、薬剤はＲＮＡｉである。幾つかの実施形態において、薬剤は、ＭＹＣ（例えば、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭｙｃポリペプチド）のアゴニストである。幾つかの実施形態において、薬剤は、ＭＹＣ（例えば、ＭＹＣ遺伝子及び／又はＭｙｃポリペプチド）のアンタゴニストである。
幾つかの実施形態において、薬剤は、Ｂ細胞におけるアネルギーを逆転写する薬剤の能力に基づいて、細胞の生存率を調節する薬剤であると同定される。幾つかの実施形態において、薬剤は、因子依存性細胞の生存率を調節する薬剤の能力に基づいて、細胞の生存率を調節する薬剤であると同定される。幾つかの実施形態において、薬剤は、レポーター遺伝子の発現を誘発する薬剤の能力に基づいて、細胞の生存率を調節する薬剤であると同定される。
幾つかの実施形態において、免疫反応の調節は、リンパ球の生存率の調節を含む。幾つかの実施形態において、リンパ球はＴ細胞である。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞は記憶Ｔ細胞である。
幾つかの実施形態において、薬剤との接触後のリンパ球の生存率は、薬剤に接触されなかったリンパ球の生存率より、１より多く〜約１０倍大きい。幾つかの実施形態において、薬剤は、リンパ球においてＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションを引き起こす。幾つかの実施形態において、調節はインビボで起こる。幾つかの実施形態において、リンパ球はＴ細胞である。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞は記憶Ｔ細胞である。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションは、Ｔ細胞にとって延ばされた寿命を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞の延ばされた寿命は、体内における記憶Ｔ細胞のより高い濃度を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞のより高い濃度は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションは、アネルギー性Ｔ細胞の減少を結果として生じる。特定の例において、アネルギー性Ｔ細胞の減少は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションは、Ｔ細胞が抗原に反応して活性化するのに必要な時間の減少を結果として生じる。特定の例では、Ｔ細胞が抗原に反応して活性化するのに必要な時間の減少は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。
幾つかの実施形態において、薬剤は、個体へのワクチンの投与の前、間、またはその後に投与される。幾つかの実施形態において、薬剤は、免疫系を刺激し、ワクチンに対する免疫系の反応を増加させる。幾つかの実施形態において、薬剤は、免疫反応を増大させる。幾つかの実施形態において、薬剤は、ワクチンと相乗的に作用する。幾つかの実施形態において、薬剤は、ワクチンアジュバントである。
幾つかの実施形態において、ワクチンは、死んでいる微生物、弱毒化された微生物、トキソイド、病原体のサブユニット、核酸、またはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、ワクチンは、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペスウイルス；ロタウイルス；インフルエンザ；髄膜炎菌；肺炎；天然痘;コレラ;腺ペスト；黄熱病；結核；ヒトパピローマウイルス（human paplomavirus）;またはそれらの組み合わせのためのワクチンである。幾つかの実施形態において、ワクチンは、癌（例えば濾胞性Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫、前立腺癌、多発性骨髄腫、腎臓癌、皮膚のメラノーマ、目のメラノーマ、および他の固形腫瘍、固形癌腫および固形肉腫）のためワクチンである。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、患者特異的なワクチン（例えば、このワクチンは患者自身の腫瘍細胞を含む）である。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、シアリルＴｎ（ＳＴｎ）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）（例えばｇｐ９６）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、ガングリオシド分子（例えばＧＭ２、ＧＤ２およびＧＤ３）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、癌胚抗原（ＣＥＡ）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、ＭＡＲＴ−１（また、Ｍｅｌａｎ−Ａとしても知られている）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、チロシナーゼを含む。幾つかの実施形態において、ワクチンは、ＤＮＡワクチンである。
幾つかの実施形態において、それは抗原部分を含む。幾つかの実施形態において、抗原部分は、トキソイド、ペプチド、核酸配列、多糖、またはそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態において、抗原部分は、以下のものから選択された病原体に由来する：すなわち、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペスウイルス；ロタウイルス；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核；ヒトパピローマウイルス；またはそれらの組み合わせから選択される。幾つかの実施形態において、抗原部分は新生細胞由来である。幾つかの実施形態において、抗原部分は、核酸または核酸のポリマーである。
特定の例において、抗原に対するワクチン接種を受ける個体における免疫反応をアップレギュレートする工程は、その抗原に対する記憶Ｔ細胞の生存率の増加を生じ、およびしたがって濃度の増加を結果として生じる。特定の例において、抗原に対するワクチン接種を受ける個体における免疫反応をアップレギュレートする工程は、抗原により加速されたＴ細胞の活性化を結果として生じる。特定の例において、抗原に対するワクチン接種を受ける個体における免疫反応をアップレギュレートする工程は、抗原に耐性があるＴ細胞の減少を結果として生じる。
幾つかの実施形態において、薬剤を投与されたリンパ球の生存率は、薬剤を投与されなかったリンパ球の生存率より、１より多く〜約２５倍大きい。幾つかの実施形態において、薬剤は、リンパ球においてＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションを引き起こす。幾つかの実施形態において、調節はインビボで起こる。幾つかの実施形態において、リンパ球はＴ細胞である。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞は記憶Ｔ細胞である。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、Ｔ細胞にとって減少された寿命を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞の減少された寿命は、体内における記憶Ｔ細胞のより低い濃度を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞のより低い濃度は、抗原に対する減速させられた一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、アネルギー性Ｔ細胞の増加を結果として生じる。特定の例において、Ｔ細胞における増加は、抗原に対する減速させられた一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、Ｔ細胞が抗原に反応して活性化するのに必要な時間の増加を結果として生じる。特定の例において、Ｔ細胞が抗原に反応して活性化するのに必要な時間の増加は、抗原に対する減速させられた一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制を結果として生じる。
幾つかの実施形態において、薬剤は自己免疫疾患を患う個体に投与される。幾つかの実施形態において、自己免疫疾患は、カストルマン病、狼瘡、多発性硬化症、強皮性色素変性症、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、重症筋無力症（myesthenia gravis）、糖尿病、喘息、関節リウマチ、白斑、ディ・ジョージ症候群、グレーヴス病（Grave's disease）、クローン病、炎症性腸疾患、大腸炎、精巣炎、強皮性色素変性症、ブドウ膜炎、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、または自己免疫性疾患に関連するリンパ節症（ＡＤＡＬ）である。特定の例において、自己免疫疾患を患う個体における免疫反応のダウンレギュレーションは、被験体の免疫系によって自己抗原に対する免疫反応を回復及び／又は防ぐ。
幾つかの実施形態において、薬剤は、臓器移植、または骨髄移植を受けた個体に投与される。特定の例において、臓器移植または骨髄移植を受けた個体における免疫反応のダウンレギュレーションは、被験体の免疫系によって臓器移植または骨髄移植に対する免疫反応を寛解及び／又は防ぐ。
医薬組成物
本明細書には、特定の実施形態において、それを必要とする個体における免疫系を調節する組成物が開示され、組成物は、本明細書に開示された方法の何れかにより同定された、治療上有効な量の薬剤を含む。幾つかの実施形態において、薬剤は小分子である。幾つかの実施形態において、薬剤はＲＮＡｉである。幾つかの実施形態において、薬剤は生体分子（例えばペプチド、融合ペプチド）である。幾つかの実施形態において、薬剤は、本明細書開示の融合ペプチドである。幾つかの実施形態において、薬剤は、（ａ）輸送体ペプチド配列；および（ｂ）ＭＹＣ配列を含む融合ペプチドである。幾つかの実施形態において、薬剤は、式（Ｉ）：
輸送体ペプチド配列−ＭＹＣ配列
の融合ペプチドである。
幾つかの実施形態において、薬剤は、Ｂ細胞におけるアネルギーを逆転写する薬剤の能力に基づいて、細胞の生存率を調節する薬剤であると同定される。幾つかの実施形態において、薬剤は、因子依存性細胞の生存率を調節する薬剤の能力に基づいて、細胞の生存率を調節する薬剤であると同定される。幾つかの実施形態において、薬剤は、レポーター遺伝子の発現を誘発する薬剤の能力に基づいて、細胞の生存率を調節する薬剤であると同定される。
幾つかの実施形態において、免疫反応の調節は、リンパ球の生存率の調節を含む。幾つかの実施形態において、リンパ球はＴ細胞である。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞は記憶Ｔ細胞である。
幾つかの実施形態において、薬剤との接触後のリンパ球の生存率は、薬剤に接触されなかったリンパ球の生存率より、１より多く〜約１０倍大きい。幾つかの実施形態において、薬剤は、リンパ球においてＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションを引き起こす。幾つかの実施形態において、調節はインビボで生じる。幾つかの実施形態において、リンパ球はＴ細胞である。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞は記憶Ｔ細胞である。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションは、Ｔ細胞にとって延ばされた寿命を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞の延ばされた寿命は、身体における記憶Ｔ細胞のより高い濃度を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞のより高い濃度は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションは、アネルギー性Ｔ細胞の減少を結果として生じる。特定の例において、アネルギー性Ｔ細胞の減少は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のアップレギュレーションは、Ｔ細胞が抗原に反応して活性化するのに必要な時間の減少を結果として生じる。特定の例において、Ｔ細胞が抗原に反応して活性化するのに必要な時間の減少は、抗原に対する加速された一次免疫反応を結果として生じる。
幾つかの実施形態において、薬剤は、個体へのワクチンの投与の前、間、またはその後に投与される。幾つかの実施形態において、薬剤は、免疫系を刺激し、ワクチンに対する免疫系の反応を増加させる。幾つかの実施形態において、薬剤は、免疫反応を増大させる。幾つかの実施形態において、薬剤は、ワクチンと相乗的に作用する。幾つかの実施形態において、薬剤は、ワクチンアジュバントである。
幾つかの実施形態において、ワクチンは、死んでいる微生物、弱毒化された微生物、トキソイド、病原体のサブユニット、核酸、またはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、ワクチンは、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペスウイルス；ロタウイルス；インフルエンザ；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核;ヒトパピローマウイルス（human paplomavirus）；またはそれらの組み合わせのためのワクチンである。幾つかの実施形態において、ワクチンは、癌（例えば濾胞性Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫、前立腺癌、多発性骨髄腫、腎臓癌、皮膚のメラノーマ、および目のメラノーマ）のためワクチンである。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、患者特異的なワクチン（例えば、このワクチンは患者自身の腫瘍細胞を含む）である。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、シアリルＴｎ（ＳＴｎ）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）（例えばｇｐ９６）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、ガングリオシド分子（例えばＧＭ２、ＧＤ２およびＧＤ３）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、癌胚抗原（ＣＥＡ）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、ＭＡＲＴ−１（また、Ｍｅｌａｎ−Ａとしても知られている）を含む。幾つかの実施形態において、癌ワクチンは、チロシナーゼを含む。幾つかの実施形態において、ワクチンは、ＤＮＡワクチンである。
幾つかの実施形態において、それは抗原部分を含む。幾つかの実施形態において、抗原部分は、トキソイド、ペプチド、核酸配列、多糖、またはそれらの組み合わせである。幾つかの実施形態において、抗原部分は、以下のものから選択された病原体に由来する：すなわち、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペスウイルス；ロタウイルス；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核；ヒトパピローマウイルス；またはそれらの組み合わせから選択される。幾つかの実施形態において、抗原部分は新生細胞由来である。幾つかの実施形態において、抗原部分は、核酸または核酸のポリマーである。
特定の例において、抗原に対するワクチン接種を受ける個体における免疫反応をアップレギュレートする工程は、その抗原に対する記憶Ｔ細胞の生存率の増加を生じ、およびしたがってその濃度の増加を結果として生じる。特定の例において、抗原に対するワクチン接種を受ける個体における免疫反応をアップレギュレートする工程は、抗原により加速されたＴ細胞の活性化を結果として生じる。特定の例において、抗原に対するワクチン接種を受ける個体における免疫反応をアップレギュレートする工程は、抗原に耐性があるＴ細胞の減少を結果として生じる。
幾つかの実施形態において、薬剤を投与されたリンパ球の生存率は、薬剤を投与されなかったリンパ球の生存率より、１より多く〜約２５倍大きい。幾つかの実施形態において、薬剤は、リンパ球においてＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションを引き起こす。幾つかの実施形態において、調節はインビボで起こる。幾つかの実施形態において、リンパ球はＴ細胞である。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞は記憶Ｔ細胞である。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、Ｔ細胞にとって減少された寿命を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞の減少された寿命は、体内における記憶Ｔ細胞のより低い濃度を結果として生じる。特定の例において、記憶Ｔ細胞のより低い濃度は、抗原に対する減速させられた一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制において生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、アネルギー性Ｔ細胞の増加を結果として生じる。特定の例において、Ｔ細胞の増加は、抗原に対する減速させられた一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制を結果として生じる。特定の例において、ＭＹＣ遺伝子のダウンレギュレーションは、Ｔ細胞が抗原に反応して活性化するのに必要な時間の増加を結果として生じる。特定の例において、Ｔ細胞が抗原に反応して活性化するのに必要な時間の増加は、抗原に対する減速させられた一次免疫反応、自己免疫疾患の処置、及び／又は免疫抑制を結果として生じる。
幾つかの実施形態において、薬剤は自己免疫疾患を患う個体に投与される。幾つかの実施形態において、自己免疫疾患は、カストルマン病、狼瘡、多発性硬化症、強皮性色素変性症、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、重症筋無力症（myesthenia gravis）、糖尿病、喘息、関節リウマチ、白斑、ディ・ジョージ症候群、グレーヴス病、クローン病、炎症性腸疾患、大腸炎、精巣炎、強皮性色素変性症、ブドウ膜炎、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、または自己免疫性疾患に関連するリンパ節症（ＡＤＡＬ）である。特定の例において、自己免疫疾患を患う個体における免疫反応のダウンレギュレーションは、被験体の免疫系によって自己抗原に対する免疫反応を寛解及び／又は防ぐ。
幾つかの実施形態において、薬剤は、臓器移植、または骨髄移植を受けた個体に投与される。特定の例において、臓器移植または骨髄移植を受けた個体における免疫反応のダウンレギュレーションは、被験体の免疫系によって臓器移植または骨髄移植に対する免疫反応を回復及び／又は防ぐ。
医薬組成物の処方
幾つかの実施形態において、医薬組成物は、例えば、活性な化合物を、薬学的使用に適した調整物に処理することを促進する、賦形剤及び助剤を含む１以上の生理学的に許容可能な担体を用いて、従来の方式で処方される。特定の実施形態において、適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。本明細書に記載の医薬組成物の要約は、例えば、文献「Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed （Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995）」、文献「Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975」、文献「Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980」、及び文献「Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. （Lippincott Williams & Wilkins1999）」に見出される。
医薬組成物は、本明細書で使用されるように、本明細書記載の化合物と、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、および／または賦形剤のような他の化学成分との混合物のことを言う。特定の例において、医薬組成物は、個体又は細胞への化合物の投与を促進する。本明細書で提供される処置方法又は使用方法を実施する特定の実施形態において、本明細書記載の治療に有効な量の化合物は、医薬組成物の状態で、処置されるべき障害、疾患、又は疾病を患う個体に投与される。具体的な実施形態において、個体はヒトである。本明細書に論じられるように、本明細書に記載の治療上の化合物は、単独で、または１つ以上の追加の治療薬剤と組み合わせて利用される。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の医薬製剤は、制限しない例では、経口、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内）、鼻腔内、頬側、局所、直腸、又は経皮投与経路などの、1つ以上の複数の投与経路を含む、任意の方法で個体に投与される。本明細書に記載の医薬製剤は、水性液体分散剤、自己乳化分散剤、固溶体、リポソーム分散剤、エアゾール剤、固形剤形、粉末剤、即時放出製剤、制御放出製剤、速溶製剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出製剤、持続放出製剤、パルス放出製剤、多粒子の製剤、および即時混合並びに制御放出製剤を含むが、これらに限定されない。
本明細書記載の化合物を含む医薬組成物は、従来の方法で随意に製造される。従来の方法は、ほんの一例として、従来の混合、溶解、造粒、糖衣作成、微粒子化、乳化、カプセル化、封入、又は圧縮過程などの手段によるものである。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、遊離酸または遊離塩基形態、または薬学的に許容可能な塩形態における活性成分として、本明細書記載の1つ以上の薬剤を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の化合物は、Ｎ-酸化物として、または結晶或いは非晶形（すなわち多形体）として利用される。特定の実施形態において、本明細書に記載の化合物の活性な代謝物またはプロドラッグが利用される。幾つかの状況において、本明細書に記載の化合物は、互変異性体として存在する。全ての互変異性体は本明細書で示される化合物の範囲内に含まれる。特定の実施形態において、本明細書に記載の化合物は、溶媒和されていない形態又は溶媒和された形態で存在し、溶媒和された形態は、例えば水、エタノールなどの任意の薬学的に許容可能な溶媒を含む。本明細書提示の化合物の溶媒和形態はまた、本明細書で開示されるとみなされる。
「担体」は、幾つかの実施形態において、薬学的に許容可能な賦形剤を含み、本明細書開示の化合物（式Ｉ‐Ｖの何れかの化合物）および所望の剤形の放出プロフィール特性との適合性に基づいて選択される。例示の担体物質としては、例えば、結合剤、懸濁剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定化剤、滑沢剤、加湿剤、希釈剤などが含まれる。例えば、文献「Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed （Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995）」、文献「Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975」、文献「Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980」、及び文献「Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. （Lippincott Williams & Wilkins1999）」残照。
さらに、幾つかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、剤形として処方される。そのようなものとして、幾つかの実施形態において、本明細書には、個体への投与に適した、本明細書記載の化合物（例えば、式Ｉ‐Ｖの何れかの化合物）を含む剤形が提供される。特定の実施形態において、適切な剤形は、制限しない例では、水溶性の経口分散剤、液体、ゲル剤、シロップ剤、エリキシル剤、スラリー剤、懸濁剤、固形経口剤形、エアロゾル剤、制御放出製剤、速溶製剤（fast melt formulations）、発泡製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、粉末剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、遅延放出製剤、持続放出製剤、パルス放出製剤、多粒子製剤、及び即時放出並びに制御放出製剤の混合製剤を含む。
本明細書に記載の薬学的な固形剤形は、本明細書に記載の追加の治療上の化合物、および互換性をもつ担体、結合剤、充填剤、懸濁剤、香料添加剤、甘味剤、崩壊剤、分散剤、界面活性剤、潤滑剤、着色剤、希釈剤、溶解剤、湿潤剤、可塑剤、安定剤、経皮吸収促進剤、加湿剤、抗起泡剤、酸化防止剤、防腐剤、またはそれらの1つ以上の組み合わせなどの、1つ以上の薬学的に許容可能な添加剤を随意に含む。幾つかの態様において、標準的なコーティング手順（例えば「Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th Edition （2000）」に記載されるような手順）を用いて、フィルムコーティングは、式Ｉ‐Ｖの何れかの化合物の製剤の周囲に提供される。1つの実施形態において、本明細書に記載の化合物は、粒子の形であり、化合物の幾つか又は全ての粒子はコーティングされる。特定の実施形態において、本明細書記載の化合物の粒子の幾つか又は全ては、マイクロカプセル化される。幾つかの実施形態において、本明細書記載の化合物の粒子は、マイクロカプセル化されず、コーティングされない。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、正確な投与量の単回投与に適した単位剤形である。単位剤形において、製剤は一以上の化合物の適量を含む単位用量に分割される。幾つかの実施形態において、単位用量は、製剤の個別の量を含有するパッケージ形状である。制限のない例は、包装された錠剤やカプセル剤、およびバイアルまたはアンプルの中にある粉末剤である。水溶性懸濁液組成物は、単回投与用の再密閉が不可能な容器に随意に包装される。幾つかの実施形態において、複数回投与用の再密閉が可能な容器が使用される。特定の例において、複数回投与用の容器は、組成物中に防腐剤を含む。ほんの一例として、非経口注射用の製剤は、追加の防腐剤と共に、単位剤形で（アンプルを含むが、これらに限定されない）、又は複数回投与用の容器で提供される。
幾つかの実施形態において、本明細書記載の薬剤および組成物は、ワクチンの投与の前、間、またはその後に投与される。幾つかの実施形態において、本明細書記載の薬剤および組成物は、ワクチンに取り込まれる。幾つかの実施形態において、薬剤および組成物は、免疫系を刺激し、ワクチンに対する免疫系の反応を増加させる。幾つかの実施形態において、薬剤および組成物は、免疫反応を増大させる。幾つかの実施形態において、薬剤および組成物は、ワクチンと相乗的に作用する。幾つかの実施形態において、薬剤および組成物は、ワクチンアジュバントである。幾つかの実施形態において、ワクチン製剤は、抗原または、抗原部分（例えば、B. pertussis, C. tetani, E. coli, C. diphtheriae, P. Aeruginosa, V. cholerae, H. influenzae, N. meningitidis, S. pneumoniae, N. gonorrheaからのタンパク質または多糖類）、および薬剤を含む。幾つかの実施形態において、ワクチンは、担体（例えば水、生理食塩水、ＰＢＳ）、防腐剤（例えばチメロサール、２−フェノキシエタノール、フェノール、塩化ベンゼトニウム）、安定剤（例えばラクトース、グルタミン酸ナトリウム）、抗生物質、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、またはそれらの組み合わせをさらに含む。
局所用製剤
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、局所的に投与される（すなわち、ポリペプチドは皮膚の表面へ投与される）。幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、ワクチン注射の部位にて局所的に投与される。特定の例において、局在性の抗原デポ（すなわち、抗原の遅い及び均一な放出をもたらす、ワクチンアジュバント（例えば、油中水型エマルジョン、またはアルミニウム塩）によって形成された組織デポ）は、現在の手法でワクチン接種を行う間に生じる。幾つかの実施形態において、皮膚（抗原デポの部位の近く）に常在するリンパ球系細胞におけるＭＹＣの一時的なアップレギュレーションは、より多くの強健な免疫反応を押し進め、自己抗原に対する緩やかな耐性という面においてより広い反応を与える。
任意の適切な製剤が利用される。幾つかの実施形態において、ＭＹＣ融合ポリペプチドは、溶液、クリーム、ローション、ゲル、軟膏、フォーム、マイクロエマルジョン、またはそれらの組み合わせとして処方される。幾つかの実施形態において、ＭＹＣ融合ポリペプチドは、経皮パッチを介する送達のために処方される。
局所投与の任意の適切な方法が利用される（例えば、電気穿孔法、超音波導入（sonophoresis）、化学的送達、皮膚剥削術）。幾つかの実施形態において、ＭＹＣ融合ポリペプチドは、化学的送達のために処方される（すなわち、化学物質（例えばＰＥＧ、エタノール、グリセロールモノラウレート、硫酸ドデシルナトリウム、フォスファチジルコリン、または尿素）は、皮膚を介した活性剤の浸透を促進するために使用される）。幾つかの実施形態において、ＭＹＣ融合ポリペプチドは、電気穿孔法による送達（すなわち、電流の適用を介する障壁（例えば皮膚）の透過処理）のために処方される。幾つかの実施形態において、ＭＹＣ融合ポリペプチドは、超音波導入（sonophoresis）による送達（すなわち、超音波の適用による障壁（例えば皮膚）の透過処理）のために処方される。
クリームとローション
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、クリームとして処方される。特定の例において、クリームは、水中油型エマルションまたは油中水型エマルジョンで分散し、本明細書開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）を含む、半固体（例えば、柔らかい固形または濃い液体）の製剤である。
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、ローションとして処方される。特定の例において、ローションは、流動性の乳剤（例えば、水中油型エマルションまたは油中水型エマルジョン）である。
幾つかの実施形態において、ローション及び／又はクリームの疎水性成分は、動物由来（例えばラノリン、タラ肝油および竜涎香）、植物由来（例えばベニバナ油、ヒマシ油、やし油、綿実油、メンヘーデン油、パーム核油、パーム油、落花生油、大豆油、なたね油、あまに油、米ぬか油、マツ油、ごま油、またはヒマワリ種子油）、石油由来（例えば鉱油、またはワセリン）、またはそれらの組み合わせに由来する。
軟膏
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、軟膏として処方される。特定の例において、軟膏は、体温で柔らかくなる又は溶ける半固形製剤である。
ペースト
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、ペーストとして処方される。特定の例において、ペーストは、少なくとも２０％の固体を含む。特定の例において、ペーストは、体温で流れない軟膏である。
ゲル
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、ゲルとして処方される。特定の例において、ゲルは、液体で分散した大きな有機分子の分散から成る半固体の（または半剛体の）系である。特定の例において、ゲル剤は水溶性であり、温かい水または食塩水を使用して除去される。
スティック
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、スティックとして処方される。特定の例において、スティックは、体温で溶ける固形剤形である。幾つかの実施形態において、スティックは、ロウ、ポリマー、樹脂、堅い塊に融合した乾燥した固形、及び／又は融合結晶を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）の局所用の製剤は、止血棒剤（すなわち、（１）それらが結晶化の水を失い、溶解されるまで結晶を過熱すること、および（２）溶解した結晶を型に注ぎ、結晶が硬化することを可能にすることにより調合されるスティック）の形である。幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）の局所用の製剤は、スティックの形であり、スティックは、ロウ（例えば、ロウは溶かされ、スティックの形で凝固する適切な型へ注がれる）を含む。
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）の局所用の製剤は、スティックの形であり、スティックは、溶解基材（すなわち、体温で柔らかくなる基材）を含む。溶解基材の例は、ロウ、油、ポリマー、及びゲルを含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）の局所用の製剤は、スティックの形であり、スティックは、湿潤基材（すなわち、湿気の追加により活性化される基材）を含む。
パッチ
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、パッチを介する投与のため処方される。幾つかの実施形態において、本明細書に開示の局所用の製剤は、ポリマーまたは接着剤中で溶かされる及び／又は分散される。幾つかの実施形態において、本明細書に開示のパッチは、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）の、連続的な送達、パルス送達、またはオンデマンド送達のため構築される。
創傷包帯
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、創傷包帯による投与のため処方される。創傷包帯は、ガーゼ、透明フィルム包帯、ヒドロゲル、ウレタンフォーム包帯、親水コロイド、及びアルギナートを含むが、これらに限定されない。
皮膚科学の賦形剤
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、浸透促進剤で処方される。浸透促進剤は、以下のものを含むが、これらに限定されない。すなわち、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、ポリオキシエチレン−２０−セチルエーテル、ラウレス−９、硫酸ドデシルナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ＰＬＥ）、Ｔｗｅｅｎ８０、ノニルフェノキシポリエチレン（ＮＰ−ＰＯＥ）、ポリソルベート、グリココール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、ナトリウムタウロジヒドロフシジエート、ナトリウムグリコジヒドロフシジエート、オレイン酸、カプリル酸、モノ−およびジ−グリセリド、ラウリン酸、アシルコリン、カプリル酸、アシルカルニチン、カプリン酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、クエン酸、サリチル酸塩、ＤＭＳＯ、デシルメチルスルフォキシド、エタノール、イソプロパノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、プロパンジオール、およびジエチレングリコールモノエチルエーテルを含む。
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、ゲル化剤（又は増粘剤）で処方される。幾つかの実施形態において、本明細書に開示の局所用の製剤は、ゲル化剤の約０．１％から約５％、より好ましくは約０．１％から約３％、最も好ましくは約０．２５％から約２％をさらに含む。特定の実施形態において、本明細書に開示の局所用の製剤の粘度は、約１００〜約５００，０００ｃＰ、約１００ｃＰ〜約１，０００ｃＰ、約５００ｃＰ〜約１５００ｃＰ、約１０００ｃＰ〜約３０００ｃＰ、約２０００ｃＰ〜約８，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ〜約１０，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ〜約５０，０００ｃＰの範囲である。
ゲル局所製剤の調製に使用するのに適切なゲル化剤は、以下のものを含むが、これらに限定されない。すなわち、セルロース、セルロース誘導体、セルロースエーテル（例えば、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース）、グアーガム、キサンタンゴム、ローカストビーンゴム、アルギン酸塩（例えば、アルギン酸）、シリケート、デンプン、トラガカント、カルボキシビニルポリマー、カラギーナン、パラフィン、ワセリン、アカシア（アラビアゴム）、寒天、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、アルギン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ヒバマタ、ベントナイト、カルボマー、カラギーナン、カルボポール、キサンタン、セルロース、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、セラトニア、ツノマタ、デキストロース、ファーセレラン、ゼラチン、ガチ（ghatti）ゴム、グアーガム、ヘクトライト、ラクトース、スクロース、バクガデキストリン、マンニトール、ソルビトール、蜂蜜、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、アラヤゴム、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ ２００−４５００）、トラガカントゴム、エチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、エチルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリル酸塩、オキシポリゼラチン、ペクチン、ポリゲリン、ポビドン、炭酸プロピレン、メチルビニルエーテル／無水マレイン酸共重合体（ＰＶＭ／ＭＡ）、ポリ（メトキシエチルメタクリル酸塩）、ポリ（メトキシエトキシエチルメタクリル酸塩）、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース（ＨＰＭＣ）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、二酸化ケイ素、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ：ポビドン）、またはそれらの組み合わせを含む。
幾つかの実施形態において、本明細書に開示のＭＹＣ融合ポリペプチド（例えばＴＡＴ−ＭＹＣ）は、皮膚軟化薬で処方される。皮膚軟化薬は、以下のものを含むが、これらに限定されない。すなわち、ヒマシ油エステル、ココアバターエステル、サフラワー油エステル、綿実油エステル、トウモロコシ油エステル、オリーブ油エステル、タラ肝油エステル、アーモンド油エステル、アボカド油エステル、パーム油エステル、胡麻油エステル、スクアレンエステル、キク油（kikui oil）エステル、大豆油エステル、アセチル化モノグリセリド、エトキシ化モノステアリン酸グリセリン、ラウリン酸ヘキシル、ラウリン酸イソヘキシル、パルミチン酸イソヘキシル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸メチル、オレイン酸デシル（decyloleate）、オレイン酸イソデシル、ステアリン酸ヘキサデシル（hexadecyl stearate）ステアリン酸デシル（decyl stearate）、イソステアリン酸イソプロピル、イソステアリン酸メチル、ジイソプロピルアジパート、ジイソヘキシルアジパート、ジヘキシルデシルアジパート、ジイソプロピルセバケート、ラウリルラクタート、ミリスチルラクタート、およびセチルラクタート、オレイルミリステート、ステアリン酸オレイル、およびステアリン酸オレイル、ペラルゴン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リシノール酸、アラキジン酸、ベヘン酸、エルカ酸、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ヘキサデシルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、ヒドロキシステアリルアルコール、オレイルアルコール、リシノレイルアルコール、ベヘニルアルコール、エルシルアルコール、2-オクチルドデカニルアルコール、ラノリンおよびラノリン誘導体、蜜ロウ、鯨ロウ、ミリスチン酸ミリスチル、ステアリン酸ステアリル、カルナウバロウ、カンデリラロウ、レシチン、およびコレステロールを含む。
併用
幾つかの実施形態において、別の治療薬剤と組み合わせて、少なくとも一つの本明細書に記載の治療薬剤を投与することが適切である。または、ほんの一例として、患者にもたらされた有用性は、本明細書に記載の化合物の１つを、治療的有用性も有する別の治療薬剤（治療レジメンも含む）と共に投与することで増加される。あらゆる場合において、処置される障害、疾患、疾病に関わらず、患者が受ける総合的な有用性は、幾つかの実施形態においては、２つの治療薬剤の添加であり、または他の実施形態においては、患者は相乗的な有用性を受ける。
幾つかの実施形態において、化合物の特定の選択は、主治医の診断、患者の状態および適切な処置プロトコルの判断に依存する。疾患、障害、又は疾病の性質、患者の状態、及び使用される化合物の実際の選択に依存して、化合物は随意に一斉に（同時に、ほぼ同時に、又は同じ処置プロトコルの範囲で）、又は連続して投与される。特定の例において、処置プロトコルの間に各々の治療薬剤を投与する順序、及び投与を繰り返す回数の決定は、処置される障害及び患者の状態の評価に基づく。
幾つかの実施形態において、薬物が処置の併用において使用される場合、治療上の有効量は変わる。併用処置レジメンにおける使用のため、薬物及び他の薬剤の治療に効果的な投与量を実験的に決定する方法が、文献に記載されている。例えば、規則正しい投薬の使用、すなわち、有毒な副作用を最小限にするためにより頻繁で、より低い用量を与えることは、文献において広範囲に述べられてきた。併用処置は、患者の臨床管理を援助するために様々な時点で開始および停止される定期的処置をさらに含む。
本明細書に記載の併用療法の幾つかの実施形態において、同時投与化合物の投与量は、併用される薬物のタイプ、利用される特定の薬物、処置される障害または疾病などに依存して異なる。加えて、１以上の生理薬剤と共に共投与される場合、本明細書提供の化合物は、生理学的な薬剤（複数）と同時、又は連続のいずれかで随意に投与される。特定の例において、連続して投与される場合、主治医は、追加の治療薬と組み合わせた本明細書に記載の治療上の化合物の適切な順序を決める。
多数の治療薬剤（その少なくとも一つは、本明細書に記載の治療上の化合物である）は、あらゆる順で、または同時に、随意に投与される。同時の場合、複数の治療薬剤は、単回用の統一された形状で、又は複数回用の形状（ほんの一例だが、１つの丸薬又は２つの別の丸薬のいずれか）で随意に提供される。特定の例において、治療薬剤の１つは、複数回投与において随意に与えられる。他の例において、両方の治療薬剤は、複数回投与として随意に与えられる。同時に投与されない場合は、複数回投与する間の時期は、例えば、０週間より多くから４週間未満の、任意の適切な時期である。幾つかの実施形態において、追加の治療薬剤は、癌の（部分的または完全な）軽減を達成するために利用されると、引き続いて本明細書に記載の治療薬剤（例えば、式Ｉ‐Ｖの何れか１つの化合物）が投与される。加えて、併用方法、組成物、製剤は、２つの薬剤だけの使用に制限されるものではなく；多数の治療上の組み合わせの使用もまた予見される（本明細書に記載の２つ以上の治療上の化合物を含む）。
幾つかの実施形態において、軽減が求められる疾病（複数）を処置、予防、または改善するための投与レジメンは、様々な要因に従って改変される。これらの要因は、被験体の年齢、体重、性別、食事および病状と同様に、被験体が苦しむ障害も含む。従って、様々な実施形態において、実際に利用される投与レジメンは、本明細書説明の投与レジメンとは異なり、およびそこから逸脱する。
幾つかの実施形態において、本明細書に開示の併用療法を構築する医薬品は、結合した剤形、または実質的に同時の投与のための個別の剤形で提供される。特定の実施形態において、併用療法を構築する医薬品は、２段階の投与を要求するレジメンによって投与されている一方の治療上の化合物と共に、連続して投与される。幾つかの実施形態において、２段階の投与レジメンは、薬剤の連続する投与または個別の薬剤の間隔を空けた投与を要求する。特定の実施形態において、複数の投与工程の間の時間は、各々の医薬品の特性（医薬品の効能、溶解度、バイオアベイラビリティ、血漿半減期、及び動的特性など）に依存して、制限しない例では、数分から数時間まで変わる。
更に、本明細書に記載の化合物はまた、患者に付加的または相乗的な有用性を提供する手順と組み合わせて、随意に使用される。ほんの一例ではあるが、患者は、本明細書に記載の方法において、治療的および／または予防的有用性を得ると予測され、本明細書に開示の化合物の医薬組成物、および／または他の治療法との併用は、個体が特定の障害または疾病と相互関連することが知られている、遺伝子または遺伝子突然変異の担体であるかどうかを決定するための遺伝子検査と組み合わせられる。特定の実施形態において、予防的な有用性は、その増殖性疾患（例えば癌）が小康状態（例えば、部分的または完全に）である個体に、本明細書に記載の治療上の化合物の投与により達成される。
幾つかの実施形態において、本明細書記載の化合物および併用療法は、障害または疾病の発生の前、間、またはその後に投与される。化合物を含む組成物を投与する期間は、処置される個体の必要に適するよう、随意に変わる。従って、特定の実施形態において、化合物は予防薬として使用され、障害または疾病の発症を防ぐため、疾病または障害を進行させる傾向のある被験体に連続的に投与される。幾つかの実施形態において、化合物および組成物は、症状発症の間、または発症後可能な限り早急に、個体に投与される。化合物の投与は、症状発症の最初の４８時間以内に、症状発症の最初の６時間以内に、または症状の発症の３時間以内に随意に始められる。最初の投与は、例えば、静脈注射、ボーラス注入、５分間から５時間にわたる点滴、丸薬、カプセル、経皮パッチ、口腔送達など、またはこれらの組み合わせといった、任意の実用的な経路により達成される。幾つかの実施形態において、化合物は、障害または疾病の発症が検出または疑われた後実施可能な限り早急に、障害の処置が必要とされる時間、例えば１ヶ月より多く〜約３ヶ月の間投与されるべきである。処置の長さは、既知の基準に基づいて各々の被験体のために随意に変わる。例示の実施形態において、化合物または化合物を含む製剤は、少なくとも２週間、１ヶ月より多くから約５年の間、または１ヶ月より多くから約３年までの間投与される。
幾つかの実施形態において、治療薬剤は、任意の組み合わせにおける以下の治療薬剤の１つ以上と結合されるか、または組み合わせて利用される：即ち、Ａｋｔ選択的インヒビター；ＰＩ３Ｋインヒビター；ポリペプチドキナーゼＣ（ＰＫＣ）インヒビター；ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター；小胞体Ｃａ２＋ＡＴＰアーゼ（sarco/endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase）のインヒビター；Ｃａ＋＋／カルモジュリン（CaM）-依存性ポリペプチドキナーゼインヒビター;サイクリン依存性キナーゼインヒビター; ＰＰＤ（ｐ−フェニレンジアミン）；Ｄ６０９（トリシクロデカン−９−イルキサントゲナート）；ＰＰ１（４−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−７−（ｔ−ブチル）ピラゾロ［３，４−ｄ］−ピリミジン）；ＡＧ−８７９（α−シアノ−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシ）チオシンナミド）；ＢＡＹ１１‐７０８２（（Ｅ）３‐（４‐メチルフェニルスルフォニル）‐２‐プロペンニトリル）；タプシガルジン、またはＲＫ−６８２（３−ヘキサデカノイル−５−ヒドロキシメチル−テトロン酸）。
免疫抑制剤は、制限しない例では、シロリムス（ラパマイシン）、シクロスポリン、ＦＫ５０６、シペルメトリン、デルタメトリン、フェンバレレート、チルホスチン８、メトトレキサート、ピセタノール、ゲニステイン、タクロリムス、ラパマイシン（rapamicin）、シクロホスファミド、アザチオプリン、メルカプトプリン、ミコフェノール酸、およびＦＴＹ７２０を含む。
Ａｋｔ選択的インヒビターは、制限しない例では、ＳＨ４（１Ｌ−６−ヒドロキシメチル−chiro−イノシトール２−Ｒ−２−Ｏ−メチル−３−Ｏ−オクタデシルカルボナート；ＳＨ−５（Ｄ−３−デオキシ−２−Ｏ−メチル−Ｍｙｏイノシトール１−（Ｒ）−２−メトキシ−３−（オクタデシロキシ）プロピルリン酸水素；およびＳＨ−６（Ｄ−２，３−デオキシ（dieoxy）−Ｍｙｏイノシトール１−（Ｒ）−２−メトキシ−３−（オクタデシロキシ）プロピルリン酸水素を含む。
ＰＩ３Ｋインヒビターは、制限しない例では、ウォルトマンニン；ＬＹ２９４００２（２−（４−モルホリニル）−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）；Ｄ０００（Upstate, Milton Keynes, United Kingdom）；およびＤ１２１（３−フェニル−２−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニルメチル）−３Ｈ−キナゾリン−４−オン）を含む。
制限しない例では、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）インヒビターは、Ｒｏ−３１８２２０（３−［１−［３−（amidinothio）プロピル］−１Ｈ−インドイル（indoyl）−３−イル］−３−（１−メチル−１Ｈ−インドイル−３−イル）マレイミドメタンスルホン酸塩；Ｇｏｅ６９７６（１２−（２−シアノエチル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ−１３−メチル−５−オキソ−５Ｈ−インドロ（２，３−ａ）ピロロ（３，４−ｃ）−カルバゾール；スタウロスポリン（staurosporin）；ロットレリン;カルホスチン（calphastin）Ｃ；ＧＦ １０９２０３Ｘ（３−［１−（ジメチルアミノプロピル）インドール（indol）−３−イル］−４−（インドール（ｉｎｄｏｌ）−３−イル）マレイミドヒドロクロライド；ヒペリシン；スフィンゴシン；ミルテホシン；パルミトイル−ＤＬカルニチンＣｌ；ロットレリン；および２，２’，３，３’，４，４’−ヘキサヒドロキシ−１，１’−ビフェニル−６，６’−ジメントールジメチルエーテルを含む。
制限しない例では、ファルネシルトランスフェラーゼ（farmesyltransferase）インヒビターは、Ｌ−７４４，８３２（Ｃ26Ｈ45Ｎ3Ｏ6Ｓ2 ２ＨＣｌ）；あるいはSarasar（ＳＣＨ６６３３６またはロナファーニブ）を含む。
制限しない例では、Ｃａ＋＋／カルモジュリン（ＣａＭ）−依存性ポリペプチドキナーゼインヒビターは、２−ヒドロキシ−５−（２，５−ジヒドロキシベンジルアミノ）安息香酸；ＫＮ−６２（１−［Ｎ，Ｏ−ｂｉｓ（５−イソキノリンスルホニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−チロシル］−４−フェニルピペラジン）；ＫＮ−９３（２−［Ｎ（２−ヒドロキシ−エチル）−Ｎ−（４メトキシベンゼンスルホニル）］アミノ−Ｎ−（４−クロロシナミル）−Ｎ−メチルベンジルアミン）；またはスタウロスポリン（staurosporin）（ＡＭ−２２８２）を含む。
制限しない例では、サイクリン依存性キナーゼインヒビターは、ロスコビチン（SeliciclibまたはＣＹＣ２０２）；プルバラノールＡ；またはインジルビンを含む。
投薬方法および処置レジメン
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤及び／又は組成物は、病原体（例えば、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペスウイルス；ロタウイルス；インフルエンザ；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核;ヒトパピローマウイルス（paplomavirus））に対する、免疫感作のためのワクチンの製剤において使用され、免疫反応のアップレギュレーションは、前述の処置に有益である。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤は、ワクチンの製剤に組み込まれる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤は、ワクチンアジュバントである。幾つかの実施形態において、注射のためのワクチン製剤の量は、約５０μｌから約５ｍｌまでである。幾つかの実施形態において、注射のためのワクチン製剤の量は、約１００μｌから約３．５ｍｌまでである。幾つかの実施形態において、注射のためワクチン製剤の量は、約２００μｌから約２ｍｌまでである。幾つかの実施形態において、注射のためワクチン製剤の量は、約３５０μｌから約１ｍｌまでである。幾つかの実施形態において、注射のワクチン製剤の量は、約５００μｌである。ワクチンの量は、投与の方法によって決定される。特定の例において、ワクチンは皮下または皮内注射として投与される。特定の例において、ワクチンは筋肉内注射として投与される。幾つかの実施形態において、ワクチンは、１用量として投与される。幾つかの実施形態において、ワクチンは複数回投与（例えばブースター注射）で投与される。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤及び／又は組成物は、免疫反応（例えば自己免疫疾患、移植拒絶反応）のダウンレギュレーションから少なくとも部分的に、利益を得る障害の予防的な及び／又は治療上の処置のための薬の製剤において使用される。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤及び／又は組成物は、障害（例えば、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペスウイルス；ロタウイルス；インフルエンザ；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核；ヒトパピローマウイルス（paplomavirus）、および癌）を処置する方法において使用され、免疫反応のアップレギュレーションは、前述の処置に有益である。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤及び／又は組成物は、免疫反応（例えば自己免疫疾患、移植拒絶反応）のダウンレギュレーションから少なくとも部分的に、利益を得る障害の予防的な及び／又は治療上の処置の方法おいて使用される。
患者の状態が改善しない特定の例において、医者の裁量に基づき、本明細書記載の薬剤または組成物の投与は、長期にわたって、つまり、患者の障害の兆候を寛解させる、又はそうでなくとも制御又は制限するために、患者の寿命の間中を含む延長された期間、随意に投与される。
患者の状況が改善しない場合において、医師の決定に従って、本明細書記載の薬剤または組成物の投与は、継続的に随意に与えられる；あるいは、投与される薬物の投与量は、特定の期間、一時的に減少され、または一時的に中止される（すなわち、休薬期間）。休薬期間の長さは２日から１年の間で随意に変わり、ほんの一例として、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日、又は３６５日を含む。休薬期間の間の用量の減少は、１０％〜１００％を含み、ほんの一例として、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％を含む。
一旦患者の状態の改善が生じると、必要ならば維持量が投与される。次に、症状に応じて、改善された疾患、障害又は疾病が維持される水準になるまで、投与量または投与頻度、或いはその両方が減少される。幾つかの実施形態において、患者は、いかなる症状の再発時にも、長期的に間欠的処置を必要とする。
幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤または組成物は、正確な投与量の単回投与に適した単位剤形である。単位剤形において、製剤は、本明細書記載の薬剤または組成物の適量を含む単位用量に分割される。幾つかの実施形態において、単位用量は、製剤の個別の量を含むパッケージ形状である。制限のない例は、包装された錠剤またはカプセル剤、およびバイアルまたはアンプルの中にある粉末剤である。幾つかの実施形態において、水性懸濁液組成物は、単回用量用の再密閉できない容器に包装される。あるいは、複数回用量用の再密閉できる容器が使用され、この場合は、組成物中に防腐剤を含むことが一般的である。ほんの一例として、非経口注射用の製剤は、追加の防腐剤と共に、単位剤形で（アンプルを含むが、これらに限定されない）、又は複数回投与用の容器で提供される。
本明細書に記載の薬剤または組成物にとって適切な１日の投与量は、体重１ｋｇにつき約０．０１〜１０．０ｍｇ／ｋｇまでである。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤または組成物に適切な１日の投与量は、体重１ｋｇにつき約０．０５〜７．５ｍｇ／ｋｇまでである。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤または組成物に適切な１日の投与量は、体重１ｋｇにつき約０．１〜５．０ｍｇ／ｋｇまでである。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤または組成物に適切な１日の投与量は、体重１ｋｇにつき約０．２５〜２．５ｍｇ／ｋｇまでである。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の薬剤または組成物に適切な１日の投与量は、体重１ｋｇにつき約０．５〜１．０ｍｇ／ｋｇまでである。ヒトを含む（ただし、ヒトに限定されない）大型哺乳動物で示される１日の投与量は、約０．５ｍｇから約１００ｍｇの範囲であり、一日に４度まで（但し、これに限定されない）の分割投与、又は持続放出形態で都合よく投与される。経口投与に適切な単位投与形態は、１より多く〜５０ｍｇの活性成分を含む。個々の処置レジメンに関する変数の数が大きいため、前述の範囲は単に示唆的なものでしかなく、可動域がこのような推奨値から少なからず外れることは珍しくない。前記投与量は、多くの変数に依存して随意に変化し、この変数は、用いられる本明細書に記載の薬剤または組成物の活性、処置される障害又は疾病、投与形態、個々の被験体の要求、処置される障害又は疾病の重篤度、及び、従事者の判断を含むが、これらに限定されない。
このような処置レジメンの毒性および治療効果は、細胞培養物または実験動物において随意に決定され、ＬＤ５０（個体群の５０％に対する致死量）およびＥＤ５０（個体群の５０％において治療上有効な用量）の決定などを含むが、これらに限定されない。毒性と治療効果の間の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０との間の比率として表現される。高い治療指数を示す本明細書に記載の薬剤または組成物が好ましい。細胞培養アッセイ及び動物研究から得られるデータは、ヒトに使用する用量の範囲を定式化する工程に随意に使用される。前記本明細書に記載の薬剤または組成物の用量は、好ましくは最小の毒性を備えたＥＤ５０を含む、血中濃度の範囲内にある。前記投与量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に依存して、この範囲内で随意に変化させる。
（実施例）
以下の実施例は、説明の目的のみのためであり、制限しない実施形態である。本発明の多くの修正、同等物、および変化は、上記の教示を踏まえると可能であり、それ故、添付の請求項の範囲内で、明確に記述されるもの以外で、本発明が実行され得ることが理解されるべきである。
実施例１−レポーター構築物を使用するアッセイ
複数の細胞をレポーター構築物により形質転換させる。レポーター構築物は、ＯＤＣプロモーターの制御下でＦＬｕｃを有する。細胞を、標準９６−ウェルプレートを使用して、９６のアリコートに分割する。各々のウェルに、異なる小分子を投与する。小分子を６時間、細胞と共にインキュベートする。ルシフェラーゼの発現のレベルを、蛍光顕微鏡を使用して測定する。ルシフェラーゼ遺伝子の発現を誘発する薬剤を、インビトロで検証する。
実施例２−ＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドの構築
ｐ−ＴＡＴ−ＭＹＣの構築
プラスミドｐＴＡＴ−ＭＹＣ−Ｖ５−６ｘＨｉｓを、ＨＩＶ−１のＴＡＴタンパク質形質導入ドメインのインフレーム（in frame）のＮ末端９−アミノ酸配列（ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ）を含む順方向プライマー、および停止コドンを除去した逆方向プライマーを使用する、ヒトＭＹＣのためのコード領域のＰＣＲ増幅によって作成した。その後、ＰＣＲ生成物を、ｐＥＴ１０１／Ｄ−Ｔｏｐｏ（Invitrogen）ベクトルへとクローン化し、これは、Ｃ末端Ｖ５エピトープおよび６ｘ−ヒスチジン精製タグを含む。
タンパク質発現に使用された菌株
ＢＬ−２１ ＲＡＲＥ細胞を、ＡＧＧ、ＡＧＡ、ＡＵＡ、ＣＵＡ、ＣＣＣ、ＧＧＡコドンに対するｔＲＮＡを発現するＢＬ２１ロゼッタ細胞（Novagen）から分離されたｐＲＡＲＥ（ＣａｍＲ）で、ＢＬ−２１ Ｓｔａｒ（登録商標）大腸菌株（Invitrogen）を形質転換させることにより作成した。
タンパク質誘発および精製
ｐＴＡＴ−ＭＹＣ−Ｖ５−６ｘＨｉｓを、ＢＬ２１ ＲＡＲＥ細胞に変形させ、３７℃で一晩中、ＴＢ／Ａｍｐ／Ｃａｍプレートの上で成長させた。分離されたコロニーを使用し、５ｍｌのＴＢ／Ａｍｐ／Ｃａｍ種菌を接種し、３７℃で一晩中成長させた。１リットルのＴＢ／Ａｍｐ／Ｃａｍブロスを、５ｍｌのスタータカルチャで接種し、ＯＤ６００を０．５にまで成長させ、３７℃で３時間、０．５ｍＭのＩＰＴＧで誘発した。
細菌性細胞を遠心分離によってペレット化して、細胞ペレットを、溶解バッファ（８Ｍの尿素、１００ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4、１０ｍＭのトリスのｐＨ８．０まで）で再懸濁し、室温で一晩中、撹拌器で溶解した。溶解物を３０分間、２９，０００ｘｇでの遠心分離によって取り除き、上澄み液を、自然流下を使用してニッケルニトリロトリ酢酸アフィニティカラム（Qiagen）に適応した。カラムを、１０ｍＭのイミダゾールを含む２５用量の溶解バッファで洗浄し、その後１００ｍＭのイミダゾールを含む溶解バッファで溶離した。
タンパク質を、アミコンウルトラ（Amicon Ultra）遠心濾過機デバイス（１０，０００のＭＷＣＯ）を使用して濃縮し、透析バッファ（５０ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4、５ｍＭのトリスのｐＨ７．０、４５０ｍＭのＮａＣｌ、５％のグリセリン、１ｍＭのＤＴＴ）の中へ、段階的様式で透析した。透析は以下のように行った：４Ｍの尿素を含む透析バッファ内で２時間、２Ｍの尿素を含むバッファ内で２時間、その後、透析バッファ単独の中で２時間行う。タンパク質の純度およびサイズを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動、およびクマシーブルー染色（coomassie blue staining）、または抗Ｖ５（１：５０００；Invitrogen）または抗ｃ−Ｍｙｃ（Ｎ−２６２、１：２０００；Santa Cruz Biotechnology）抗体でのウェスタンブロット法のいずれかを使用して実証した。
タンパク濃度を、ウシ血清アルブミンの標準曲線と比較して、ブラッドフォードタンパク質アッセイ（Sigma）によって測定した。
実施例３−免疫反応に対するＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドの影響
ＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドを、免疫反応のレギュレーターとしてインビトロで評価する。主要なＴ細胞活性化培養物を、７２時間、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドでインキュベートする。その後、培養物をＣＦＳＥで染色する。ＣＦＳＥでの染色後、培養物をＦＡＣＳによって分析する。
実施例４−免疫反応に対するＴＡＴ−Ｍｙｃ融合ペプチドの影響
ＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドを、免疫反応のレギュレーターとしてインビボで評価する。マウスへのＮＰ−ＫＨＬの投与により、マウスにＮＰ−ＫＨＬに対する免疫を与える。抗原に対する免疫感作の直後に、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドをマウスに投与する。免疫付与の２４時間後に、血清をマウスから得る。血清を抗体のために分析する。あるいは、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドを、免疫感作と同時に、または免疫感作の前に投与する。
実施例５−ワクチンアジュバントとしてのＩＭ ＴＡＴ−ＭＹＣの影響
これは、二重盲検の、無作為化された、プラセボ対照の研究である。この研究は、インフルエンザワクチンとＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドの投与後の免疫記憶を評価するために設計される。
参加者を２つのグループに分ける。グループＩに、インフルエンザワクチンと食塩水を投与する。グループＩＩに、インフルエンザワクチンおよびＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドを投与する。
主な目的
インフルエンザワクチンを受ける個体への筋肉内注射（ＩＭ）によって投与されるＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドの免疫学的影響を評価すること。
第２の目的
インフルエンザワクチンを受ける個体への筋肉内注射によって投与されるＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドの安全性と耐性を評価すること。
方法論
０日目に、グループＩとグループＩＩの両方に、同じインフルエンザワクチンの１回量を投与する。被験体を、陰性の副作用のため２時間監視する。
陰性の副作用を示さないグループＩにおける全ての個体に、ＩＭ注射によって２０μＬの生理食塩水を投与する。
陰性の副作用を示さないグループＩＩにおける全ての個体に、ＩＭ注射によって２０μＬのＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドを投与する。
血液を、１日目にすべての個体から採取する。Ｔ細胞数を測定し、記録する。
２０日目に、全ての個体を当該インフルエンザ菌株からの抗原で負荷する。血液を、負荷の１時間後、負荷の６時間後、負荷の１２時間後、および負荷の２４時間後に全ての個体から採取する。Ｔ細胞レベルを測定する。
実施例６−ワクチンアジュバントとしての局所用のＴＡＴ−ＭＹＣの影響
これは、二重盲検の、無作為化された、プラセボ対照の研究である。この研究は、インフルエンザワクチンとＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドの投与後の免疫記憶を評価するために設計される。
参加者を２つのグループに分ける。グループＩに、インフルエンザワクチンと食塩水を投与する。グループＩＩに、インフルエンザワクチンとＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドを投与する。
主な目的
インフルエンザワクチンを受ける個体へ局所的に投与されるＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドの免疫学的影響を評価すること。
第２の目的
インフルエンザワクチンを受ける個体へ局所的に投与されるＴＡＴ−ＭＹＣ融合ペプチドの安全性と耐性を評価すること。
方法論
０日目に、グループＩとグループＩＩの両方に、同じインフルエンザワクチンの１回量を投与する。被験体を、陰性の副作用のため２時間監視する。
陰性の副作用を示さないグループＩにおける全ての個体に、プラセボローションを１回塗布する。個体に、ワクチン接種の部位の皮膚上にローションを塗るように指示する。
陰性の副作用を示さないグループＩＩにおける全ての個体に、ＴＡＴ−ＭＹＣローションを１回塗布する。個体に、ワクチン接種の部位の皮膚上にローションを塗るように指示する。
血液を、１日目にすべての個体から採取する。Ｔ細胞数を測定し、記録する。
２０日目に、全ての個体を適切なインフルエンザ菌株からの抗原で負荷する（challenged）。血液を、負荷（challenge）の１時間後、負荷の６時間後、負荷の１２時間後、および負荷の２４時間後に全ての個体から採取する。Ｔ細胞レベルを測定する。
実施例７−ＭＹＣ発現をダウンレギュレートする薬剤のＲＡに対する効果
主な目的
活動性関節リウマチ（ＲＡ）を患う被験体に皮下投薬を行った後、本明細書に開示の方法によって同定すると、ＭＹＣの発現を減少させる薬剤（以下、「薬剤Ｘ」）の、定常的なトラフ血清濃度を評価すること。
第２の目的
ＲＡを患う個体に皮下投与された薬剤Ｘの安全性と耐性を評価すること；ＲＡを患う個体に皮下投与された薬剤Ｘの免疫原性を評価すること；およびＲＡを患う個体におけるリウマチ因子（ＲＦ）の血中濃度に対する、薬剤Ｘの皮下投与の効果を検査すること。
方法論
これは、二重盲検の、無作為化された、プラセボ対照の、並行群の、複数回投与研究である。この研究は、ＲＡを患う被験体における皮下投与後の、薬剤Ｘの定常的なトラフ血清濃度を評価することために設計される。
スクリーニング視察で得られた体重に基づいた５つの並列のグループのうちの１つにおいて、薬剤Ｘまたはプラセボのいずれかを受けるために、３：１の割合で、コンピューターで作り出した無作為化スキームによって被検者を無作為化する。
１日目に、被検者は、自身の体重範囲に基づいて、薬剤Ｘまたはプラセボの単一のＩＶ点滴（負荷量）を受ける。薬剤Ｘまたはプラセボを、皮下の処置を始める前に検定された一定の割合の薬物注入ポンプを使用して、３０分にわたって静脈内に投与する。ＩＶ注射の完了のおよそ１時間後に、被験体は、バイアルから、またはプレフィルドシリンジを使用して採取される薬剤Ｘまたはプラセボの、それらの割り当てられた皮下投与を受ける。薬剤Ｘまたはプラセボを、合計１２回の皮下注射のため、１日目の皮下投与と同じ用量で、皮下の経路によって臨床研究現場スタッフが毎週投与する。
被検者を、研究の期間中の有害事象（ＡＥ）のため監視する。理学的検査、生命徴候測定、および臨床検査室評価を、研究の全体にわたる選択された時間に行なう。ＰＫ分析のための血液サンプルを、１日目のＩＶ点滴の前に、およびその終わりに集める。さらに、血液サンプルを、定常的なＣｍｉｎ濃度の評価のため、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目、５７日目、６４日目、７１日目、および７８日目に、薬剤Ｘの各々の毎週のＳＣ投薬前に集める。単一の血液サンプルも、定常的なＣｍａｘ、Ｔｍａｘ、およびＡＵＣ（ＴＡＵ）の評価のため、７２日目、７４日目、７５日目、および７６日目に集め、ここで、ＴＡＵ＝７日、および研究解除（８５日目）で。免疫原性の評価のための血液サンプルを、１日目、１５日目、２９日目、４３日目、５７日目、７１日目、および８５日目に、薬剤Ｘの投与前に得る。ＲＦの測定のための血液サンプルを、１日目、８日目、１５日目、２９日目、５７日目、および８５日目に、投薬の前に得る。
薬剤Ｘまたはプラセボの１２週の皮下投薬を完了する被験体は、長期間延長（ＬＴＥ）へ突入するのに適格である。ＬＴＥに突入した被験体に、薬剤Ｘの最初の用量を、８５日目に投与する。
被験体の数
４８〜７２の被験体が、処置を研究するために無作為化されることになっている。
包含のための診断および基準
１８歳以上の活動性ＲＡを患う男性または女性が、この研究に参加する資格を有する。被験体は、ＲＡのため、米国リウマチ学大学（American College of Rheumatology）（ＡＣＲ）（以前は米国リウマチ協会（American Rheumatism Association）（ＡＲＡ））の分類基準を満たさねばならず、活性な障害を有していた。被験体は、初回診断の時間から少なくとも１年間、ＲＡを患わねばならなかった。
本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され、記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されるものであることは、当業者にとって明らかである。多数の変化、変更、および代替は、本発明から逸脱することなく、現在当業者に想起される。発明を実施する際、本明細書に記載の発明の実施形態の様々な代案が利用され得ることが理解されるべきである。以下の請求項が本発明の範囲を定義するものであり、この請求項及びそれらの同等物の範囲内の方法及び構造が、それによって包含されるものである、ということが意図されている。

Claims (29)

  1. （ａ）抗原部分、
    （ｂ）（ｉ）タンパク質形質導入ドメイン配列と（ｉｉ）ＭＹＣポリペプチド配列とを含む、細胞の核へと移行できＭＹＣ活性を有する融合ペプチド、および、
    （ｃ）薬理学的に許容可能な賦形剤
    を含むワクチン組成物。
  2. 融合ペプチドが式（Ｉ）：
    タンパク質形質導入ドメイン配列−ＭＹＣポリペプチド配列
    を有することを特徴とする請求項１に記載のワクチン組成物。
  3. 融合ペプチドは、タンパク質形質導入ドメイン配列とＭＹＣポリペプチド配列を結合する１つ以上の分子をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載のワクチン組成物。
  4. 融合ペプチドが、式（ＩＩ）：
    タンパク質形質導入ドメイン配列−Ｘ−ＭＹＣポリペプチド配列
    を有し、
    ここで、−Ｘ−は、タンパク質形質導入ドメイン配列とＭＹＣポリペプチド配列を結合する分子であり、随意に、Ｘには少なくとも１つのアミノ酸があることを特徴とする請求項３に記載のワクチン組成物。
  5. 融合ペプチドは、以下の配列を有することを特徴とする請求項１に記載のワクチン組成物。
  6. 抗原部分は、病原体、トキソイド、ペプチド、核酸配列、ポリサッカライド、または、これらの組み合わせであることを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載のワクチン組成物。
  7. 抗原部分は、Ａ型肝炎；Ｂ型肝炎；ポリオ；麻疹；耳下腺炎；風疹；ジフテリア；百日咳；破傷風；インフルエンザ；水痘帯状ヘルペス・ウイルス；ロタウイルス；髄膜炎菌；肺炎；天然痘；コレラ；腺ペスト；黄熱病；結核；ヒトパピローマウイルス；または、それらの組み合わせから選択される病原体に由来することを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載のワクチン組成物。
  8. 局所投与、静脈内投与又は皮下投与のために処方される請求項１乃至７のいずれかに記載のワクチン組成物。
  9. 個体において抗原に対する免疫反応を増加させる際に使用するための薬剤の製造における、細胞の核へと移行できＭＹＣ活性を有する融合ペプチドの使用であって、
    融合ペプチドは、（ａ）タンパク質形質導入ドメイン配列と（ｂ）ＭＹＣポリペプチド配列を含み、
    融合ペプチドは、ワクチン投与の前、後、または、その間に投与されることが可能であり、
    ワクチンは、Ａ型肝炎ワクチン；Ｂ型肝炎ワクチン；ポリオワクチン；麻疹ワクチン；流行性耳下腺炎ワクチン；風疹ワクチン；ジフテリアワクチン；百日咳ワクチン；破傷風ワクチン；インフルエンザワクチン；水痘帯状ヘルペス・ウイルス・ワクチン；ロタウイルス・ワクチン；髄膜炎菌のワクチン；肺炎ワクチン；痘瘡ワクチン；コレラワクチン；腺ペスト・ワクチン；黄熱病ワクチン；結核ワクチン；ヒトパピローマウイルスワクチン；癌ワクチン；または、それらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする
    融合ペプチド。
  10. 融合ペプチドは式（Ｉ）：
    タンパク質形質導入ドメイン配列−ＭＹＣポリペプチド配列
    を有することを特徴とする請求項９に記載の使用。
  11. 融合ペプチドは、タンパク質形質導入ドメイン配列とＭＹＣポリペプチド配列を結合する１つ以上の分子をさらに含むことを特徴とする請求項９に記載の使用。
  12. 融合ペプチドは式（ＩＩ）：
    タンパク質形質導入ドメイン配列‐Ｘ‐ＭＹＣポリペプチド配列
    を有し、
    −Ｘ−は、タンパク質形質導入ドメイン配列とＭＹＣポリペプチド配列を結合する分子であり、随意に、Ｘには少なくとも１つのアミノ酸があることを特徴とする請求項１１に記載の使用。
  13. 融合ペプチドは、以下の配列を有することを特徴とする請求項９に記載の使用。
  14. ワクチンは、新生細胞、病原体又はトキソイド由来の抗原部分を含むことを特徴とする請求項９乃至１３のいずれかに記載の使用。
  15. 前記ワクチンが自己抗原を含むことを特徴とする請求項９乃至１３のいずれかに記載の使用。
  16. 免疫反応の増加が１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞の１つ以上の活性、生存又は増殖の増加を含むことを特徴とする請求項９乃至１５のいずれかに記載の使用。
  17. 前記１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞がＴ細胞であることを特徴とする請求項１６に記載の使用。
  18. 前記１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞がＢ細胞であることを特徴とする請求項１６に記載の使用。
  19. 前記融合ペプチドを含む薬剤が筋肉内又は皮下投与のために処方されることを特徴とする請求項９乃至１８のいずれかに記載の使用。
  20. 前記融合ペプチドを含む薬剤が経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、頬側投与、直腸投与又は静脈内投与のために処方されることを特徴とする請求項９乃至１８のいずれかに記載の使用。
  21. 前記融合ペプチドを含む薬剤が局所又は経皮投与のために処方されることを特徴とする請求項９乃至１８のいずれかに記載の使用。
  22. 前記融合ペプチドを含む薬剤が遅延放出製剤又は持続放出製剤として処方されることを特徴とする請求項９乃至１８のいずれかに記載の使用。
  23. 経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、頬側投与、直腸投与、経皮投与、筋肉内投与又は静脈内投与するために処方されることを特徴とする請求項１乃至７のいずれかに記載のワクチン組成物。
  24. 遅延放出製剤又は持続放出製剤として処方されることを特徴とする請求項１乃至７のいずれかに記載のワクチン組成物。
  25. Ｔ細胞またはＢ細胞の生存率を調節する方法であって、該方法は、
    インビトロの１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞に請求項１乃至７のいずれかに記載のワクチン組成物を与える工程、及び
    請求項１乃至７のいずれかに記載の融合ペプチドに曝されていない同様のＴ細胞またはＢ細胞と比較して、前記１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞の１つ以上の生存又は増殖を増加させるのに前記ワクチン組成物にとって十分な条件下で１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞を培養する工程、
    を含む方法。
  26. Ｔ細胞またはＢ細胞の生存率を調節する方法であって、該方法は、
    インビトロで及びサイトカインが存在しない中で、因子依存性であり、抗原に対して反応する際に活性化する１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞に請求項１乃至７のいずれかに記載のワクチン組成物を与える工程、及び
    請求項１乃至７のいずれかに記載の融合ペプチドに曝されていない同様のＴ細胞またはＢ細胞と比較して、前記１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞の１つ以上の生存又は増殖を増加させるのに前記ワクチン組成物にとって十分な条件下で１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞を培養する工程、
    を含む方法。
  27. Ｔ細胞またはＢ細胞の生存率を調節する方法であって、該方法は、
    インビトロで及びサイトカインが存在しない中で、因子依存性であり、抗原に対して反応する際に活性化する１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞に請求項１乃至７のいずれかに記載の融合ペプチドを与える工程、及び
    請求項１乃至７のいずれかに記載の融合ペプチドに曝されていない同様のＴ細胞またはＢ細胞と比較して、前記１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞の１つ以上の生存又は増殖を増加させるのに前記融合ペプチドにとって十分な条件下で１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞を培養する工程、
    を含む方法。
  28. 前記１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞がＴ細胞であることを特徴とする請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記１つ以上のＴ細胞またはＢ細胞がＢ細胞であることを特徴とする請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
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