JP5768113B2

JP5768113B2 - 前処置用の皮膚外用剤の製造方法

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Publication number: JP5768113B2
Application number: JP2013247560A
Authority: JP
Inventors: 多田　明弘; 明弘多田; 金丸　晶子; 晶子金丸; 尚赤松
Original assignee: Pola Chemical Industries Inc
Current assignee: Pola Orbis Holdings Inc
Priority date: 2013-11-29
Filing date: 2013-11-29
Publication date: 2015-08-26
Anticipated expiration: 2028-12-15
Also published as: JP2014037447A

Description

本発明は、皮膚外用剤に関し、更に詳細には、化粧料に好適な皮膚外用剤に関する。

光が生体に及ぼす影響は様々存在し、例えば、ＤＮＡ切断、開裂による遺伝子の損傷、それに誘発される癌の発生、脂質における過酸化物の生成と、該過酸化物による生体成分の酸化的傷害、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ等のマトリックス・メタロ・プロテアーゼに代表されるプロテアーゼの発現の亢進と、それによるコラーゲンなどのマトリックス蛋白の切断、断片化などが挙げられる（例えば、特許文献１を参照）。更に、このような反応が誘発する、マクロファージやインターロイキン等が関与する炎症系の反応の亢進などが挙げられる（例えば、特許文献２を参照）。このような炎症反応が行なった後では、非ステロイド抗炎症剤に頼るしかないが、このような対応では炎症沈静後にメラニンの沈着が起こってしまうことも少なくなかった。この様な反応は何れも不可逆的な要素の大きい反応であり、この様な傷害を受けないことが、受けた後に速やかに処置するよりも重要であると言える。

この様な光の影響から生体を守る予防的手段としては、酸化亜鉛や二酸化チタンなどの紫外線吸収粉体、ベンゾフェノンや桂皮酸誘導体などの紫外線吸収剤、各種生薬エキスからなるコラーゲン架橋抑制剤を組み合わせて使用する方法が一般的に採用されている（例えば、特許文献３、特許文献４を参照）。しかしながら、これらの処置は皮膚に光を当てないという処置であり、化粧崩れなど漏れてくる光の影響に対してはあまりなすすべがなかったと言える。更に、炎症系が亢進した場合には、現状維持が精一杯であることも否めない。

アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体、ハイドロキノン、アルブチン、エラグ酸、イソフラボン、イソフラバノンなどの還元性成分は、化粧料の汎用原料であり、抗酸化剤、活性酸素消去剤、メラニン産生抑制剤などとして、化粧料中に配合されている（例えば、特許文献５、特許文献６、特許文献７を参照）が、生体の光照射に起因する傷害に対する作用は全く知られていない。
更に、キク科ヨモギ属の植物の抽出物との組み合わせ効果についても全く知られていない。

キク科ヨモギ属の植物の抽出物中に含有される、次に示す性状を有するＹＡＣ化合物は、文献未記載の新規化合物である。
＜ＹＡＣ化合物の特性＞
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、１５分前後にシングルピークを示す。
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はＣ₃₄Ｈ₄₀Ｏ₉であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）

特開２００４−２１７６７０号公報特表２００８−５２３０８３号公報特開平０９−１３６８２４号公報特開平１１−１２４３２３号公報特開２００８−１７９６３２号公報特開２００１−３２２９３０号公報特開２００１−１８１１７３号公報

本発明は、この様な状況下為されたものであり、光照射により、皮膚が傷害を受けるのを防護する手段を提供することを課題とする。

この様な状況に鑑みて、本発明者らは、光照射により、皮膚が傷害を受けるのを防護する手段を求め、鋭意研究努力を重ねた結果、１）還元性成分と、２）次に示す特性を有するＹＡＣ化合物及び／又はその塩とを含有する皮膚外用剤がその様な特性を備えていることを見出し、発明を完成させるに至った。
＜ＹＡＣ化合物の特性＞
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、１５分前後にシングルピークを示す。
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はＣ₃₄Ｈ₄₀Ｏ₉であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
即ち、本発明は以下に示すとおりである。
＜１＞１）還元性成分と、２）次に示す特性を有するＹＡＣ化合物及び／又はその塩とを含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
＜ＹＡＣ化合物の特性＞
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、１５分前後にシングルピークを示す。
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はＣ ₃₄ Ｈ ₄₀ Ｏ ₉であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
＜２＞前記還元性成分は、アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体、それらの塩、エラグ
酸及びその塩並びにアルブチン及びその塩から選択される１種乃至は２種以上であることを特徴とする＜１＞に記載の皮膚外用剤。
＜３＞前記ＹＡＣ化合物は、キク科ヨモギ属の植物の抽出物として含有されることを特徴とする、＜１＞又は＜２＞に記載の皮膚外用剤。

本発明によれば、光照射により、皮膚が傷害を受けるのを防護する手段を提供することができる。

分画７の化合物の¹ Ｈ−ＮＭＲを示す図である。分画７の化合物の¹³ Ｃ−ＮＭＲを示す図である。分画７の化合物のＨＰＬＣチャートを示す図である。分画７の化合物の紫外吸収スペクトルを示す図である。製造例１における分画７のグルコース−牛血清アルブミンＡＧＥｓ分解能を示す図である。分画７の化合物の質量分析スペクトルを示す図である。

＜１＞本発明の皮膚外用剤の必須成分である還元性成分
本発明の皮膚外用剤は、還元性成分を必須成分として含有することを特徴とする。本発明では、フェーリング反応などの還元性を検定する試験法に於いて陽性の成分を還元性成分として取り扱う。本発明で言う還元性成分を具体的に例示すれば、アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体、それらの塩等のアスコルビン酸関連物質、エラグ酸、グラブリジン、センタウレイジン、クラリノン、グラブレン、イソフラボン、イソフラバノンなどのポリフェノール性物質とその塩、ハイドロキノン、アルブチン及びその塩等のハイドロキノン類等が好適に例示でき、アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体、それらの塩、エラグ酸及びその塩並びにアルブチン及びその塩等が特に好ましく例示できる。
これらの成分は唯一種を含有させることも出来るし、二種以上を組み合わせて含有させることもできる。本発明の皮膚外用剤に於いて、かかる成分は後記のＹＡＣ化合物とともに働いて、皮膚が光照射によって受けた傷害を初期状態で消去せしめる作用を有する。この様な効果を奏するためには、かかる還元性成分は、総量で皮膚外用剤全量に対して、０．０１〜１０質量％含有されるのが好ましく、より好ましくは０．１〜５質量％である。かかる含有量が少ない場合には、前記効果を奏さない場合が存し、多すぎると効果が頭打ちになり、徒に処方の自由度を損なう場合が存する。

＜２＞本発明の皮膚外用剤の必須成分であるＹＡＣ化合物
本発明の皮膚外用剤の必須成分であるＹＡＣ化合物は次に示す性状を有することを特徴とする。
（性状）
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、１５分前後にシングルピークを示す。
（５）化学組成式はＣ ₃₄ Ｈ ₄₀ Ｏ ₉であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
本発明の化粧料の必須成分であるＹＡＣ化合物の紫外・可視吸収スペクトルは図４に示す。この図より、４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとにλmaxが存する特徴が明確に判別できる。本発明の化粧料の必須成分であるＹＡＣ化合物を特定する場合、かかる紫外・可視部吸収特性は非常に有利である。即ち、多波長の検出器を備えたＨＰＬＣを用いて、２１０ｎｍの吸収で分析し、ピークについて４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとの吸収を確認し、同様に強い吸収が認められた場合には、本願発明のＹＡＣ化合物である蓋然性が非常に高い。この意味で有力な確認手段となる。本願発明のＹＡＣ化合物は、極性溶媒抽出物の非極性部分に存在する。この為、溶媒で抽出し、抽出溶媒を減圧濃縮などで除去した後に酢酸エチルと水で分液し、酢酸エチル相を採取することにより、濃縮することが出来る。このものをシリカゲルカラムクロマトグラフィーなどを用いて、クロロホルム／メタノール混液系で分画精製することにより単離することが出来る。単離したかどうかについては、以下の条件のＨＰＬＣ分析でシングルピーク（リテンションタイム１５分前後）であるか否かを判別することにより特定することが出来る。図３に分析例を示す。この場合のリテンションタイムは１４．７分である。
（ＨＰＬＣ条件）
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はＣ ₃₄ Ｈ ₄₀ Ｏ ₉であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）

かかる本発明の皮膚外用剤の必須成分であるＹＡＣ化合物は、キク科ヨモギ乃至はキク科カワラヨモギの植物体を極性溶媒、例えば、含水していても良い有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ−ブタノール、プロピレングリコール、１，３−ブタンジオールなどのアルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類、クロロホルム、ジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、酢酸エチル、蟻酸メチルなどのカルボン酸エステル類、アセトニトリルなどのニトリル類などで抽出することにより、前記ＹＡＣ化合物を含む抽出物を得ることが出来、これを前記の如く、液液抽出やカラムクロマトグラフィーなどの精製手段により単離精製することが出来る。抽出溶媒としては、含水アルコールが特に好ましく、７０〜９０％エタノール水溶液を用いることが特に好ましい。抽出に用いる植物体の部位は、地上部を用いることが好ましい。植物体は、抽出に先立って、細切乃至は乾燥して粉砕するなど、細片化処置を行うことが好ましい。抽出は、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間植物体乃至はその加工物を溶媒に浸漬することにより為しうる。

斯くして得られたＹＡＣ化合物は、シリカゲルを担体とする薄層クロマトグラフィー（展開液、クロロホルム：メタノール＝９５：５〜８：２）においてシングルスポットを呈し、ＡＧＥｓ分解活性を示す。ＡＧＥｓ分解活性は、簡易的にはα−ジケトンの切断活性の強さを指標とし、定量化することが出来る。即ち、１−フェニル−１，２−プロパンジオンとともにインキュベートし、切断によって生じる安息香酸を吸光度で定量し、安息香酸の生成量が多いほどＡＧＥｓ分解能が高いと判別できる。これよりｖｉｖｏに近い評価としては、実際にグルコースと牛血清アルブミンとをインキュベートして作成したＡＧＥｓを分解せしめ、分解量を定量し、かかる分解量を指標にＡＧＥｓ分解能を定量する方法も存する。本発明の皮膚外用剤の必須成分であるＹＡＣ化合物はこの様な方法でＡＧＥｓ分解能を定量した場合、α−ジケトンの分解において４０〜６０％程度の分解率を呈し、牛アルブミンＡＧＥｓに対しては、１０^−３質量％で６５〜８０％程度の分解率を呈する。この性質を利用して本発明の皮膚外用剤の必須成分であるＹＡＣ化合物はＡＧＥｓ分解剤として化粧料等の皮膚外用剤に配合し、光照射などで生じたＡＧＥｓを速やかに分解し、この蓄積を防ぐことが出来る。この様な作用が、本発明の皮膚外用剤の効果に寄与している。以下に、これらの評価方法の手順を示す。本発明の皮膚外用剤に於いてはかかるＡＧＥｓ分解作用を明確に発現するドーズでのＹＡＣ化合物の含有が好ましい。この様なＡＧＥｓ分解作用を発現するドーズに於いて、前記還元性成分とともに働いて、光による傷害を速やかに消去する作用を発現する。かかる作用は、光照射によって亢進するＭＭＰの作用を抑制することによって生じる。この結果、細胞が傷害されアポトーシスが誘導され
ることも抑制される。

＜α−ジケトンのＣ−Ｃ結合切断能の測定＞
２２ｍＭ１−ｐｈｅｎｙｌ−１，２−ｐｒｏｐａｎｅｄｉｏｎ／ＭｅＯＨ＋０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．４）１ｍｌと、測定用試料１ｍｌを混合し、３７℃で１０時間反応させ、安息香酸の量をＨＰＬＣにて定量する。
（ＨＰＬＣ条件）
・分析条件検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２６０ｎｍ）
・カラム：東ソーＴＳＫ−ＯＤＳ８０ＴｓＱＡカラム温度：室温
・移動層：氷酢酸２ｇ／アセトニトリル５００ｍｌ＋エデト酸二ナトリウム溶液（１→２５０）５００ｍｌ流量：１ｍｌ／ｍｉｎ

＜グルコース−牛血清アルブミンＡＧＥｓ分解能の測定＞
用いる材料は以下の通り。
ＡＧＥ−ＢＳＡ：グルコースとＢＳＡを３７℃で１２週間以上インキュベートし、
ＰＤ−１０ｃｏｌｕｍｎｓ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ１７−０８５１−０１）にて余分なｇｌｕｃｏｓｅを除いたもの
１次抗体：Ａｎｔｉ−Ａｌｂｕｍｉｎ，ＢｏｖｉｎｅＳｅｒｕｍ，Ｒａｂｂｉｔ−Ｐｏｌｙ
ＲＯＣＫＬＡＮＤ２０１−４１３３１／２００００
２次抗体：Ｇｏａｔａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔＩＧｇｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ
ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｃｏｎｊｕｇａｔｅＢｉｏＲＡＤ１７０−６５１５１／１００００
基質：ＴＭＢｓｏｌｕｔｉｏｎＷａｋｏ５４６−０１９１１
（手順）
ｔｙｐｅＩコラーゲンコートした９６穴マイクロプレート（ＢｉｏＣｏａｔ３５４４０７）に１０μｇ／ｍｌのＡＧＥ−ＢＳＡを１００μｌ加え、（１．０μｇＡＧＥ−ＢＳＡ／ｗｅｌｌ）３７℃にて４時間静置した後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ（−）にて３回洗浄（マイクロミキサー上で室温・３分間振とう）し、ＰＢＳ（−）に溶解した各濃度の試料を１００μｌを加え、３７℃で１０時間以上反応させる。その後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ（−）にて３回洗浄し、１次抗体を各ｗｅｌｌに１００μｌ／ｗｅｌｌ加え、室温で３０分間静置する。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ（−）にて３回洗浄し、２次抗体を１００μｌ／ｗｅｌｌ入れ、室温３０分間静置する。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ（−）にて３回洗浄し、ＴＭＢを１００μｌ／ｗｅｌｌ加え、室温１５分反応させる。１ＮＨＣｌを１００μｌ／ｗｅｌｌ入れ、反応を止め、４５０ｎｍの吸光度を測定する。ＡＧＥｓの量を変え、検量線を引き、この検量線より残存ＡＧＥｓ量を定量した。残存ＡＧＥｓを添加したＡＧＥｓより減じ、添加したＡＧＥｓで除し、１００を乗じてＡＧＥｓ分解率を算出した。

本発明の皮膚外用剤の必須成分であるＹＡＣ化合物は、図１、図２のＮＭＲデータより、水酸基等の反応性置換基を有すると考えられ、かかる反応性基を利用して誘導体へと導くことが出来る。かかる誘導体が本発明の皮膚外用剤の必須成分であるＹＡＣ化合物の誘導体である。本発明の誘導体としては、例えば、メチルアイオダイドなどのハロゲン化炭化水素を用いてアルキル化したアルキルエーテル体、アルキルエステル体、アシルハライドを反応させて得られるアシル化体、モノエタノールアミンなどを反応させたアミド体などが好適に例示できる。前記の評価法においてＡＧＥｓ分解能を有する限り、これらの誘導体は本発明の皮膚外用剤の必須成分として、本発明の技術的範囲に属する。

＜３＞本発明の皮膚外用剤
本発明の皮膚外用剤は、前記必須成分を含有し、光照射の傷害が皮膚細胞に生ずることを抑制する効果を有する。本発明の皮膚外用剤は光の照射に先だって皮膚に投与され、光照射で皮膚が受けたダメージを初期段階で消去する作用を有する。本発明の皮膚外用剤は、皮膚外用医薬、化粧料（医薬部外品を包含する）、皮膚外用雑貨等に適用されるが、化粧料に適応されることが特に好ましい。化粧料としては、例えば、ローション、乳液、クリームなどの基礎化粧料に好ましく適用される。特に好ましい系は乳化剤形であり、油中水乳化剤形の内水相に含有されることが好ましい。油中水乳化剤形としては、例えば、「ベントン３８Ｖ」という名称で市販されている、ジメチルジステアリルアンモニウムクロリド変性ヘクトライトのような有機変性粘土鉱物０．１〜１０質量％とポリエーテル変性メチルポリシロキサン０．１〜５質量％を組み合わせて界面活性剤とした乳化系などが好ましく例示できる。

本発明の皮膚外用剤では、前記必須成分以外に通常皮膚外用剤で使用される任意成分を含有することが出来る。この様な任意成分としては、例えば、マカデミアナッツ油、アボガド油、トウモロコシ油、オリ−ブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワ−油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パ−ム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ等のオイル、ワックス類；流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類；オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類；セチルアルコ−ル、ステアリルアルコ−ル、イソステアリルアルコ−ル、ベヘニルアルコ−ル、オクチルドデカノ−ル、ミリスチルアルコ−ル、セトステアリルアルコ−ル等の高級アルコール等；イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコ−ル、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロ−ルプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロ−ルプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類；ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン；オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサンシロキサン等の環状ポリシロキサン；アミノ変性ポリシロキサン、ポリエ−テル変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等の変性ポリシロキサン等のシリコーン油等の油剤類；脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノ−ルアミンエ−テル等のアニオン界面活性剤類；塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類；イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類；ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレ−ト、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコ−ル等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエ−テル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエ−ト、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレ−ト等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレ−ト等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコ−ルモノオレ−ト、ＰＯＥジステアレ−ト等）、ＰＯＥアルキルエ−テル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエ−テル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエ−テル類（ＰＯＥノニルフェニルエ−テル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエ−テル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテ
トラデシルエ−テル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類；ポリエチレングリコ−ル、グリセリン、１，３−ブチレングリコ−ル、エリスリト−ル、ソルビト−ル、キシリト−ル、マルチト−ル、プロピレングリコ−ル、ジプロピレングリコ−ル、ジグリセリン、イソプレングリコ−ル、１，２−ペンタンジオ−ル、２，４−ヘキサンジオ−ル、１，２−ヘキサンジオ−ル、１，２−オクタンジオ−ル等の多価アルコ−ル類；ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類；表面を処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、；表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類；表面を処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパ−ル剤類；レ−キ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類；ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマ−等の有機粉体類；パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤；アントラニル酸系紫外線吸収剤；サリチル酸系紫外線吸収剤、；桂皮酸系紫外線吸収剤、；ベンゾフェノン系紫外線吸収剤；糖系紫外線吸収剤；２−（２’−ヒドロキシ−５’−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾトリアゾ−ル、４−メトキシ−４’−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類；エタノ−ル、イソプロパノ−ル等の低級アルコール類；ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ6塩酸塩、ビタミンＢ6トリパルミテ−ト、ビタミンＢ6ジオクタノエ−ト、ビタミンＢ2又はその誘導体、ビタミンＢ12、ビタミンＢ15又はその誘導体等のビタミンＢ類；α−トコフェロ−ル、β−トコフェロ−ル、γ−トコフェロ−ル、ビタミンＥアセテ−ト等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類等；フェノキシエタノ−ル等の抗菌剤；ヘクトライト、ジメチルジステアリルアンモニウム変性ヘクトライトなどの有機変性粘土鉱物などが好ましく例示できる。これらの必須成分や任意成分を常法に従って処理することにより、本発明の化粧料は製造することが出来る。これらの必須成分、任意成分を常法に従って処理することにより、本発明の皮膚外用剤は製造することが出来る。

本発明について、以下に実施例を示し、更に詳細に説明を加える。

[実施例１]
＜製造例１＞
キク科ヨモギ属ヨモギの全草の乾燥物１００ｇを、細切した後、５００ｍｌのメタノールを加えて３時間、加熱還流し、冷却後濾過にて不溶物を取り除いた後、減圧濃縮し、ついで凍結乾燥し、抽出物１を得た。しかる後に、抽出物１に２００ｍｌの水と２００ｍｌの酢酸エチルを加え、液液抽出を行い、酢酸エチル相をとり、減圧濃縮し、分画１を得た。
分画１を減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて分画精製した。即ち、シリカゲルをクロロホルムで濡らし、カラムに充填し、クロロホルムに溶解させた分画１の濃縮物をチャージし、クロロホルム、１％メタノール含有クロロホルム、５％メタノール含有クロロホルム、１０％メタノール含有クロロホルム次いで１５％メタノール含有クロロホルムを５０ｍｌ流し、流出分を減圧濃縮した。これらの分画を順に分画２、分画３、分画４、分画５、分画６とした。分画１〜６についてα−ジケトンの切断活性を調べたところ、分画３が最も高く４８％であった。分画３を更にクロロホルム・メタノール混液系を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーで４回精製し（１回目クロロホルム：メタノール＝１００：０→１：１、２回目クロロホルム：メタノール＝１００：２→９：１、３回目クロロホルム：メタノール＝１００：５→８：２、４回目クロロホルム：メタノール＝１００：０→１００：５）、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（展開溶媒クロロホルム：メタノール＝９５：５）で、５０％硫酸水溶液焼付での呈色でシングルスポットであるアモルファスの分画７を得た。このもののＮＭＲを図１、図２に示す。ＨＰＬＣ（条件は下記の通り）でのチャートを図３に示す。又、紫外部吸収スペクトルは図４に示す。これらの結果より、構造そのものは不明であるものの、分画７は単一物質であることが推測される。

＜分画７のグルコース−牛血清アルブミンＡＧＥｓ分解能の測定＞
上述の手技で予めグルコースと牛血清アルブミンより生成させたＡＧＥｓに対する分画７の種々の濃度でのＡＧＥｓ分解作用を測定した。結果をグラフとして図５に示す。これより、分画７の本発明の化合物が１０^−５質量％存在すれば、そのＡＧＥｓ分解の有効性を発現することが判る。又、分画７の化合物をヨモギなどの植物の植物体の抽出物乃至はその精製物として含有させる場合、抽出物乃至はその精製物において、配合濃度において前記ＡＧＥｓの分解作用が存するか否かを確かめて、ＡＧＥｓ分解作用が認められた場合には、その抽出物乃至はその精製物の化粧料への含有を可とする様な簡易的な鑑別を行って、化粧料への含有を決定することも出来る。

＜ＭＭＰ−１に対する作用＞
フナコシ株式会社より、販売されているMMP−1 Colorimetric Assay Kit （ＡＫ４０４）を用いて、還元性成分とＹＡＣ化合物について、ＭＭＰ−１阻害活性を測定した。検体濃度は何れも１μｇ／ｍＬとした。結果をＭＭＰ−１阻害率として、表１に示す。これより、組み合わせ効果によってＭＭＰ−１阻害効果に優れることがわかる。

＜光に対する効果＞
96ウェルのプレートに、ウェル当り５×１０ ⁴cellsずつヒト表皮正常メラノサイト（クラボウ）を播種し、Medium154S培地（クラボウ）にて３７℃、５％CO ₂の条件下２４時間培養した。サプリメントを添加していないDefinedケラチノサイト−SFM培地（ギブコBRL）１００μｌに培地交換後、１μｇ／ｍＬ（終濃度）の分画７の存在下、１μｇ／ｍＬ（終濃度）のアスコルビン酸グルコシドの存在下、１μｇ／ｍＬ（終濃度）の分画７と１μｇ／ｍＬ（終濃度）のアスコルビン酸グルコシドの存在下３日間培養を続け、培地を検体を含まないDefinedケラチノサイト−SFM培地（ギブコBRL）１００μｌに交換後、紫外線１０ｍＪを照射し、TaKaRa社より市販されているLDHdetectionkitを用いて、アポトーシス細胞を定量化した。陽性対照は紫外線を照射し検体を含まないものとし、陰性対照としては紫外線非照射で検体を含まないものとした。陽性対照のアポトーシス抑制率を０％、陰性対照のアポトーシス抑制率を１００％とし、検体のアポトーシス抑制率を算出した。結果を表２に示す。これより、組合せによりアポトーシスを抑制していることが判る。即ち前記の試験と組み合わせるならば、分画７と還元性成分との組合せにより、光照射で亢進するＭＭＰが細胞に損傷を与え、これがアポトーシスを誘導するのを防いでいると推測される。

[実施例２]
以下に示す処方に従って、本発明の皮膚外用剤である化粧料１（油中水乳化剤形）を製造した。即ち、イ、ロの成分をそれぞれ７５℃に加温し、攪拌下イに徐々にロを加え乳化し、乳化粒子を均質化した後、攪拌冷却し、化粧料１を得た。同様に操作して、分画７を水に置換した比較例１、アスコルビン酸グルコシドを水に置換した比較例２、分画７とアスコルビン酸グルコシドとを水に置換した比較例３も同様に作成した。

＜試験例１＞
化粧料１、比較例１〜３について、急性の光損傷に対する作用を調べた。即ち、ＭＥＤ（最少紅斑容量）の判っているパネラーの前腕に２ｃｍ×４ｃｍの部位を５つ作り、４種の検体と水とをそれぞれの部位に４０μＬ投与した。投与後３０分に検体を水で湿した脱脂綿で拭き取り、その１時間後にＭＥＤの２倍の紫外線を照射し、照射後２４時間に部位と非照射部位との色差を色彩色差計コニカミノルタＣＲ４００で測色した。結果を紅斑抑制率として表４に示す。これより、本発明の皮膚外用剤である化粧料１の前処置により、急性の光損傷も抑制できることが判る。尚、紅斑抑制率は（１００−（検体部位の色差）／（水投与部位の色差）×１００）で算出した。

[実施例３]
実施例２と同様に化粧料２を作成した。試験例１の方法で評価したところ、紅斑抑制率は５９％であった。

[実施例４]
実施例２と同様に化粧料３を作成した。試験例１の方法で評価したところ、紅斑抑制率は５８．６％であった。

[実施例５]
実施例２と同様に化粧料４を作成した。試験例１の方法で評価したところ、紅斑抑制率は６１．３％であった。

本発明は、化粧料などの皮膚外用剤に応用できる。

Claims

ＹＡＣ化合物及び／又はその塩が、次に示す特性を有することを確認するステップ、及び、
１）還元性成分と、２）前記ＹＡＣ化合物及び／又はその塩とを組み合わせて配合するステップを含むことを特徴とする、皮膚外用剤の製造方法。
＜ＹＡＣ化合物の特性＞
（１）λmaxを４０５〜４１５ｎｍと、６６０〜６７０ｎｍとに有する。
（２）図１に示す¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（３）図２に示す¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを有する。
（４）以下の条件でのＨＰＬＣ分析において、１５分前後にシングルピークを示す。
移動相：９０％アセトニトリル
カラム：ＯＤＳ４．６×２５０ｍｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
検知：紫外部２１０ｎｍ
（５）化学組成式はＣ₃₄Ｈ₄₀Ｏ₉であり、質量分析スペクトルは５９３（Ｍ＋Ｈ）
前記還元性成分が、アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体、それらの塩、エラグ酸及びその塩並びにアルブチン及びその塩から選択される１種乃至は２種以上であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
前記ＹＡＣ化合物を１０^-5質量％以上配合することを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。