JP5376785B2

JP5376785B2 - 医薬組成物

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Publication number: JP5376785B2
Application number: JP2007256016A
Authority: JP
Inventors: 学野崎; 茂樹澤村
Original assignee: Kobayashi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Kobayashi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2007-09-28
Filing date: 2007-09-28
Publication date: 2013-12-25
Anticipated expiration: 2027-09-28
Also published as: JP2009084207A; WO2009041700A1

Description

本発明は、式（１）で表される化合物による神経伸長阻害を抑制するための組成物に関する。

神経は神経細胞から成り立ち、情報の統合のために体正中部集合して存在する中枢神経系と、中枢外に存在する個別に繊維として存在する末梢神経系に分けられる。存在場所による便宜的な区別であり、それらの機能構造に大きな差異はない。これらの組織に障害が生じると、情報伝達が障害されることによる種々の症状が生じる。例えば、痴呆、アルツハイマー病などの記憶障害にはじまり、顔面神経麻痺、胃無力症、インポテンツ、外眼筋麻痺、排尿困難、便通異常、手足のしびれ、痛み、立ちくらみ、潰瘍などを生じ、著しくＱＯＬを害し、重篤な症状である。神経は再生力が弱いため、一度このような症状を生じると容易には治癒し難く、日常における悪影響は避けるべきことである。対処として生活習慣の改善などの取り組みが行われている。

また、これらの症状に対しては移植などによる再生医療が主となっている。昨今ではより簡便な内服製剤等の治療薬、予防薬が求められている。
日本臨床Ｖｏｌ．６４，８，１５５３−１５５９（２００６．８．１）

化合物１は、その欠乏により貧血や免疫不全などの症状が生じることが知られている。熱に弱く、酸化反応による破壊を受け易いため、適宜摂取することが望ましい。しかしながら、一方で、本発明者らは化合物１の神経細胞への伸長阻害作用を確認し、神経への悪影響が懸念された。

本発明は、化合物１の神経伸長阻害を抑制することが可能な組成物を提供することを主な目的とする。さらに、本発明は、神経細胞の伸長を促進することが可能な神経伸長促進用組成物を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、式（２）で表される化合物（以下、化合物２と表記することがある）に一般式（１）で表される化合物（以下、化合物１と表記することがある）の神経伸長阻害作用を抑制する効果があり、さらに一般式（３）で表される化合物（以下、化合物３と表記することがある）を配合することにより化合物１の神経伸長阻害作用が抑制されるのみならず、神経伸長を促進する効果が得られることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいてさらに研究を重ねた結果完成されたものである。

すなわち、本発明は以下の医薬組成物を提供するものである。
項１．下記一般式（１）で表される化合物の少なくとも１種と、下記式（２）で表される化合物の少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物：

［一般式（１）中、２つの

は同一又は異なって単結合又は二重結合を示す］；

項２．さらに、下記一般式（３）で表される化合物の少なくとも１種を含有することを特徴とする項１に記載の医薬組成物。

［式（２）中、Ｒは−ＣＮ、−ＯＨ（Ｈ_２Ｏ）、−ＣＨ₃又は基：

を示す］
項３．前記式（１）で表される化合物による神経伸長阻害を抑制するための組成物及び神経伸長促進用組成物である、項１又は２に記載の医薬組成物。
項４．前記一般式（１）で表される化合物の総量１重量部に対して前記式（２）で表される化合物の配合量が１０〜４１６７重量部である項１〜３のいずれかに記載の組成物。
項５．前記一般式（１）で表される化合物の総量１重量部に対して前記一般式（３）で表される化合物の配合量が総量で１〜８３重量部である項２〜４のいずれかに記載の組成物。
項６．下記一般式（１）で表される化合物の少なくとも１種に下記式（２）で表される化合物を組み合わせて添加することを特徴とする、化合物１による神経伸長阻害を抑制する方法：

［一般式（１）中、２つの

は同一又は異なって単結合又は二重結合を示す］；

項７．(i)下記式（１）で表される化合物の少なくとも１種と、(ii)下記一般式（２）で表される化合物；及び(iii)下記一般式（３）で表される化合物からなる群より選択される少なくとも１種とを組み合わせて添加することを特徴とする神経を伸長する方法：

［一般式（１）中、２つの

は同一又は異なって単結合又は二重結合を示す］；

本発明の医薬組成物によれば、化合物２によって化合物１の神経細胞に対する悪影響（神経伸長阻害）を抑制することができ、好適な化合物１の作用を得ることが出来る。また、前記組成物にさらに化合物３の少なくとも１種を配合することによって、神経伸長が顕著に促進される。

このような本願発明の組成物は、化合物１による好適な治療効果を得ることができ、さらに、従来では再生医療に頼らざるを得なかった神経性の疾患の予防又は治療に有効である。

本発明の医薬組成物は、有効成分として化合物１の少なくとも１種、ならびに化合物２を含有する。以下、各成分について説明する。

(1)化合物１
化合物１は、下記式（１）で表される化合物であって、ＤＳＭニュートリションジャパン株式会社などから商業的に入手可能である。

一般式（１）中、２つの

は同一又は異なって単結合又は二重結合を示し、好ましくは二重結合である。上記化合物１のうち１種を単独で使用してもよいが、２種以上を組み合わせて用いてもよい。本発明の組成物における化合物１の配合量は、総量で成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量あたり０．２５〜４０ｍｇ程度、好ましくは０．５〜２０ｍｇ程度、より好ましくは１〜１０ｍｇ程度である。

(2)化合物２
化合物２は、解熱鎮痛剤としての作用が知られる下記一般式（２）で表される化合物であって、ダイト株式会社などから商業的に入手可能である。

本発明の組成物における化合物２の配合量は、本発明の効果を奏するように化合物１の配合量に基づいて適宜設定することができ、化合物１の総量１重量部に対して、通常１０〜４１６７重量部程度、好ましくは２０８〜５２１重量部程度、より好ましくは２０８〜４１６重量部程度である。化合物１と化合物２がこの様な割合で含有されることにより、化合物１の神経伸長阻害作用がより効果的に抑制される。特に、化合物２の配合量として当該配合割合の範囲内であって、成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量あたり通常５０〜２４００ｍｇ程度、好ましくは１００〜１６００ｍｇ程度、より好ましくは１５０〜８００ｍｇ程度であることが望ましい。

(3)化合物３
上記化合物２に加え化合物３の少なくとも１種を配合することによって、神経伸長効果が認められることから、上記２成分に加えて化合物３の少なくとも１種を併用することが好ましい。

化合物３は、下記一般式（３）で表される化合物であって、ＤＳＭニュートリションジャパン株式会社などから商業的に入手可能である。

を示す］
上記一般式（３）において、Ｒが−ＣＮであることが好ましい。上記化合物３を１種単独で用いてもよいが、２種以上を組み合わせてもよい。

本発明の組成物における化合物３の配合量は、本発明の効果を奏するように化合物１の配合量に基づいて適宜設定することができる。化合物１の総量を１重量部とした場合であれば、化合物３の配合割合は、総量で通常１〜８３重量部程度、好ましくは１．５〜１０重量部程度、より好ましくは２〜１０重量部程度である。この様な配合割合であれば、本発明の組成物の神経伸長作用が顕著に発揮される。特に化合物３の配合量を、当該配合割合の範囲内で、成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量あたり０．２５〜２４００ｍｇ程度、０．５〜１２００ｍｇ程度、１〜６００ｍｇ程度とすることが望ましい。

本発明の化合物１による神経伸長阻害を抑制する効果が顕著に奏される好ましい実施態様の１つとしては、化合物１を総量で成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量あたり１〜１０ｍｇ程度を含有し；化合物１の総量１重量部に対して、化合物２を２０８〜４１６重量部程度の範囲内であって成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量あたり１５０〜８００ｍｇ程度を含有する組成物が例示される。

また、本発明の神経伸長促進効果が顕著に奏される好ましい実施態様の１つとしては、化合物１を総量で１日量あたり１〜１０ｍｇ程度を含有し；化合物１の総量１重量部に対して、化合物２を２０８〜４１６重量部程度の範囲内であって成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）1日量あたり１５０〜８００ｍｇ程度含有し；化合物３を総量で２〜１０重量部程度の範囲内であって成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量あたり１〜６００ｍｇ程度含有する組成物が例示される。

(4)剤型
本発明の組成物は、従来公知の方法に従って、経口又は非経口の別を問わず各種の製剤剤型に調製することができ、例えば、液剤（シロップ等を含む）等の液状製剤（懸濁剤含む）や、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）等の固形製剤形態の経口製剤；液剤、点滴剤、注射剤、点眼剤等の液状製剤や、錠剤、丸剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）などの固形製剤形態の非経口製剤が挙げられる。本発明の組成物としては、フィルムコート錠、糖衣錠、甘味剤コート錠、カプセル剤、舌下錠、静脈用注射剤、可食フィルム等の形態が好ましい。

本発明の組成物が液状製剤である場合は、凍結保存することもでき、また凍結乾燥等により水分を除去して保存してもよい。凍結乾燥製剤やドライシロップ等は、使用時に注射用蒸留水、滅菌水等を加え、再度溶解して使用される。

例えば、本発明の組成物が注射剤、点滴等として調製される場合、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用することができる。なお、この場合、体液と等張な溶液を調整するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを本発明の組成物中に含有させてもよい。また、当分野において一般的に使用されている溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。

固形剤として本発明の組成物を調製する場合、例えば、錠剤の場合であれば、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用することができる。このような担体としては、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、アルギン酸ナトリウム等の結合剤；乾燥デンプン、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、クロスポビドン、ポビドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等の崩壊剤；ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン等の保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。さらに錠剤は、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。また、前記有効成分を含有する組成物を、ゼラチン、プルラン、デンプン、アラビアガム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）等を原料とする従来公知のカプセルに充填して、カプセル剤とすることができる。

また、丸剤の形態に調製する場合は、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。その例としては、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。

上記以外に、添加剤として、例えば、界面活性剤、吸収促進剤、吸着剤、充填剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節する塩を、得られる製剤の投与単位形態に応じて適宜選択し使用することができる。

また、アミノ酸、ビタミン類、無機塩類等の他の活性成分を含有させても良い。他の活性成分としては、例えば、バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等のアミノ酸；ビタミンＡ１、ビタミンＡ２、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、アスコルビン酸、ニコチン酸アミド、ビオチン等のビタミン類；塩化ナトリウム、塩化カリウム等のアルカリ金属塩や、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩等の無機塩類が挙げられる。

本発明の組成物の投与量としては、本発明の効果が奏される限り特に限定されず、剤型、患者の年齢、性別、病状の程度等によって適宜設定され得るが、例えば、化合物１の投与量を基準として成人（１５才以上）（体重約６０ｋｇとして計算する）１日量あたり０．００４〜０．６７ｍｇ／ｋｇ程度、好ましくは０．００８３〜０．３３ｍｇ／ｋｇ程度、より好ましくは０．０１７〜０．１７ｍｇ／ｋｇ程度である。

(5)神経伸長阻害を抑制する方法及び神経を伸長する方法
本発明は、化合物１の少なくとも１種に化合物２を組み合わせて添加することを特徴とする、化合物１による神経伸長阻害を抑制する方法、ならびに、化合物１の少なくとも１種と、化合物２と、化合物３からなる群より選択される少なくとも１種とを組み合わせて添加することを特徴とする神経を伸長する方法をも提供するものである。本発明の方法における化合物１、化合物２、化合物３の具体的種類や配合量等については、上記(1)〜(3)に記載される通りである。

このような本発明の化合物１及び化合物２を含有する組成物は、化合物１による神経伸長阻害を顕著に抑制することができる。また、化合物１及び化合物２に加えて化合物３を含有する組成物は、神経伸長を顕著に促進する。従って、本発明の組成物は、貧血、免疫不全などの症状の治療に対し有用な組成物であり、また、痴呆、アルツハイマー病などの記憶障害、顔面神経麻痺、胃無力症、インポテンツ、外眼筋麻痺、排尿困難、便通異常、手足のしびれ、痛み、立ちくらみ、潰瘍等の神経系の伝達経路に傷害を生じる疾患（または神経系伝達経路の障害によって引き起こされる症状）の予防又は治療に有用である。

以下に実施例、比較例及び処方例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
＜試験例＞
(1)凍結保存のP19 EC cells細胞（マウス胚性腫瘍由来細胞株理化学研究所提供）を非働化牛胎児血清（以下、ＦＢＳと記載する）を１５％含有するＤＭＥＭ液体培地で培養した。

(2)1×10⁵cells/ml/wellで、レチノイン酸（１μM）を含むDMEM液体培地（ＦＢＳ無し）で、37℃、CO_２濃度５％条件下で１日間培養した。

（６穴プレートを使用し、１wellに２mLで培養）
(3)上清を取り除き、下記表１又は２に示される濃度（液体培地中の濃度）の被験物質を含む液体培地で培養した。
(4)(3)から72時間後に細胞をトリパンブルーで染色し扁平な形状であって、細胞から外方向に向かって放射状の突起物を伸ばしている細胞（樹状突起を伸ばしている細胞）の数を測定した。5つの視野において計測し、その平均値を用いて下記式（I）より神経伸長促進率を算出した。結果を表１及び２に示す。
式(I)：神経細胞伸長促進率＝（Ａ／Ｂ）×１００（％）
Ａ：各被験物質投与時の各視野の（樹状突起細胞数／総細胞数）
Ｂ：被験物質非投与時（比較例１に相当）の各視野の（樹状突起細胞数／総細胞数）

表２比較例１と比較例２から明らかなように、化合物１には神経細胞に対して伸長阻害作用を有することが示された。一方、実施例１に示されるように、化合物１の神経細胞への悪影響は、化合物２を併用することによって抑制された。化合物２は解熱鎮痛作用と強い細胞毒性が知られる成分であるが、神経細胞に対して毒性を生じず、化合物１による神経細胞への障害をも抑制した。これに対して、同様に解熱鎮痛剤として用いられるアセトアミノフェンは同様に細胞毒性が知られており（比較例４）、化合物１と組み合わせたとしても化合物１の副作用を抑制することはなかった（比較例５〜８）。

さらに、化合物１及び化合物２、化合物３を組み合わせることにより、化合物１の神経細胞への障害を抑制するに留まらず、神経伸長を顕著に促進することが示された。

以下に本発明の処方例を示す。

処方例１〜５を、手足のしびれを訴える患者に服用させる有効性試験を実施したところ、各処方例の有効性及び有用性が確認された。

Claims

下記一般式（１）で表される化合物１、下記式（２）で表される化合物２、及び下記一般式（３）で表される化合物３を有効成分として含有する神経伸長促進用組成物であって、化合物１と化合物２の割合（モル比）が化合物１：化合物２＝４.８：１０００〜２.４：１０００、化合物１と化合物３の割合（モル比）が化合物１：化合物３＝２.４：２.４〜４.８：１０.８であることを特徴とする神経伸長促進用組成物：

［一般式（１）中、２つの

は二重結合を示す］；

［一般式（３）中、Ｒは−ＣＮを示す。］。
(i)下記式（１）で表される化合物１、
(ii)下記一般式（２）で表される化合物２、及び
(iii)下記一般式（３）で表される化合物３
を、化合物１：化合物２＝４.８：１０００〜２.４：１０００、及び化合物１：化合物３＝２.４：２.４〜４.８：１０.８の割合（モル比）で組み合わせて添加することを特徴とする神経の伸長を促進する方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く。）：

［一般式（１）中、２つの

は二重結合を示す］；

［一般式（３）中、Ｒは−ＣＮを示す］。