JP5200246B2 - 膵臓癌診断用マーカータンパク質 - Google Patents
膵臓癌診断用マーカータンパク質 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5200246B2 JP5200246B2 JP2007508026A JP2007508026A JP5200246B2 JP 5200246 B2 JP5200246 B2 JP 5200246B2 JP 2007508026 A JP2007508026 A JP 2007508026A JP 2007508026 A JP2007508026 A JP 2007508026A JP 5200246 B2 JP5200246 B2 JP 5200246B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- pancreatic cancer
- molecular weight
- protein chip
- expression level
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
- G01N33/6851—Methods of protein analysis involving laser desorption ionisation mass spectrometry
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本特許出願は、先に出願された日本国における特許出願である特願２００５−０７０５１２号（出願日：２００５年３月１４日）に基づく優先権の主張を伴うものであり、かかる先の特許出願における全開示内容は、引用することにより本明細書の一部とされる。
発明の分野
本発明は、特定の分子量を有する複数の膵臓癌マーカータンパク質、およびこれらを指標とする膵臓癌の検出方法に関する。
本発明は、特定の分子量を有する複数の膵臓癌マーカータンパク質、およびこれらを指標とする膵臓癌の検出方法に関する。
背景技術
膵臓癌は難治性癌の一つであり、外科的手術以外の有効な治療法は確立されていないため、早期治療が重要となる。膵臓癌の診断手法としては、既存の血清腫瘍マーカーであるＣＡ１９−９が用いられることが知られている（腫瘍マーカー臨床マニュアル、大倉 久直、医学書院、ｐ８８〜８９、ｐ１２４〜１２７）。また、最近では、膵臓癌の診断において、ヘリカルCT、磁気共鳴装置(MRI)、内視鏡的超音波検査法(EUS)などが用いられている。しかしながら、膵臓癌は、早期の段階においてその症状に乏しく、発見の時点では進行癌となっており、治療は困難となっていることが依然として多い。したがって、膵臓癌を早期において、的確かつ簡易に発見することが可能な診断技術の開発が望まれるといえる。
膵臓癌は難治性癌の一つであり、外科的手術以外の有効な治療法は確立されていないため、早期治療が重要となる。膵臓癌の診断手法としては、既存の血清腫瘍マーカーであるＣＡ１９−９が用いられることが知られている（腫瘍マーカー臨床マニュアル、大倉 久直、医学書院、ｐ８８〜８９、ｐ１２４〜１２７）。また、最近では、膵臓癌の診断において、ヘリカルCT、磁気共鳴装置(MRI)、内視鏡的超音波検査法(EUS)などが用いられている。しかしながら、膵臓癌は、早期の段階においてその症状に乏しく、発見の時点では進行癌となっており、治療は困難となっていることが依然として多い。したがって、膵臓癌を早期において、的確かつ簡易に発見することが可能な診断技術の開発が望まれるといえる。
本発明者らは、今般、膵臓癌患者の血液試料について、プロテインチップ法による質量分析を行ったところ、特定の分子量の複数の血中タンパク質の発現レベルが、健常者における発現レベルと有意に異なり、これら血中タンパク質を指標とすることにより膵臓癌の検出を的確かつ簡易に行うことができることを見出した。本発明はかかる知見に基づくのものである。
したがって、本発明は、膵臓癌の指標となる膵臓癌マーカータンパク質の提供を目的としている。
また、本発明は、膵臓癌の検出方法の提供を目的としている。
したがって、本発明は、膵臓癌の指標となる膵臓癌マーカータンパク質の提供を目的としている。
また、本発明は、膵臓癌の検出方法の提供を目的としている。
そして、本発明による膵臓癌マーカータンパク質は、
分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５（ｍ／ｚ）または１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の血中タンパク質である。
分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５（ｍ／ｚ）または１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の血中タンパク質である。
また、本発明による膵臓癌を検出する方法は、
被検者から得た血液試料における、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルを測定し、
健常者の発現レベルと比較して、
２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つの前記タンパク質の発現レベルが低い場合、および／または
１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の分子量のタンパク質の発現レベルが高い場合、被検者における膵臓癌が検出されたものとする、方法である。
被検者から得た血液試料における、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルを測定し、
健常者の発現レベルと比較して、
２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つの前記タンパク質の発現レベルが低い場合、および／または
１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の分子量のタンパク質の発現レベルが高い場合、被検者における膵臓癌が検出されたものとする、方法である。
本発明によれば、特定の分子量の血中タンパク質を膵臓癌マーカーとして利用することにより膵臓癌の検出を的確かつ簡易に行うことが可能であり、これにより膵臓癌を早期に発見・治療することが可能となる。したがって、かかる血中タンパク質を膵臓癌マーカーとして利用する本発明が提供されることは、極めて意義がある。
本発明による膵臓癌マーカータンパク質は、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５（ｍ／ｚ）または１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の分子量を有する複数の血中タンパク質である。ここで、各血中タンパク質の分子量の値は、質量分析における、質量分布中心の値を示す。そして、上記膵臓癌マーカータンパク質において、分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９または８，７６６±５（ｍ／ｚ）の血中タンパク質は、その膵臓癌患者における発現レベルが、健常者の発現レベルと比較して低いことを特徴とする。また、上記膵臓癌マーカータンパク質において、分子量 １４，７７９±８（ｍ／ｚ）の血中タンパク質は、その膵臓癌患者における発現レベルが、健常者の発現レベルと比較して高いことを特徴とする。
本発明による膵臓癌マーカータンパク質は、それぞれを単独で膵臓癌の指標として用いてもよく、組み合わせて用いてもよい。これらのマーカータンパク質は、単独で使用しても精度の高い膵臓癌の検出を可能とするが、組み合わせてマルチマーカーとして使用する場合、より精度の高い検出が可能となる。また、本発明による膵臓癌マーカータンパク質は、ＣＡ１９−９などの公知の膵臓癌マーカーと組み合わせて膵臓癌の検出に利用することもでき、本発明にはかかる態様も包含される。
上記膵臓癌マーカータンパク質の発現レベルの測定に用いられる手法は、膵臓癌マーカータンパク質を定量できる手法であれば特に限定されないが、好ましくは質量分析であり、より好ましくは飛行時間型質量分析である。かかる質量分析においては、例えば、質量ピークのイオン強度を指標として膵臓癌マーカータンパク質を定量することができる。
また、上記方質量分析において用いられる装置としては、膵臓癌マーカータンパク質の発現レベルを測定可能な装置またはシステムであれば、特に制限なく使用できる。このような装置またはシステムとしては、例えば、四重極型質量分析計、飛行時間型質量分析計、四重極イオントラップ質量分析計、フーリエ変換型イオンサイクロトロン型質量分析計などの装置、プロテインチップおよび飛行時間型質量分析計および測定・解析に使用するソフトウェアがインストールされたコンピュータが一体となったプロテインチップシステムなどが挙げられるが、好ましくは四重極型質量分析計、飛行時間型質量分析計またはプロテインチップシステムである。
また、本発明における質量分析において、使用されるエネルギー吸収分子としては、本発明によるマーカータンパク質の質量分析に使用可能であれば特に限定されないが、例えば、シナピン酸(sinapinic acid)またはα−ＣＨＣＡ（α−Cyano-4-hydroxycinnamic acid）などが挙げられる。
さらに、上記質量分析は、プロテインチップ法により行われることが好ましい。ここで、プロテインチップ法とは、意図する試料をプロテインチップに添加し、プロテインチップにより捕捉された試料中のタンパク質の分子量を質量分析により測定する手法をいう。プロテインチップ法によれば、少量の試料を用いて短時間で複数のタンパク質の精製・同定などを効率的かつ迅速に行うことが可能であり、したがって、膵臓癌の検出において有利に使用することができる。
本発明において用いられるプロテインチップは、膵臓癌マーカータンパク質を捕捉できるものであれば特に限定されないが、好ましくは逆相型プロテインチップ、金属イオン固定型プロテインチップまたは陽イオン交換型プロテインチップである。したがって、本発明の一つの態様によれば、膵臓癌マーカータンパク質は、逆相型プロテインチップ、金属イオン固定型プロテインチップ、および陽イオン交換型プロテインチップからなる群から選択される少なくとも一つのプロテインチップに捕捉されるものである。
また、本発明のより好ましい態様によれば、上記プロテインチップは、逆相型プロテインチップおよび／または陽イオン交換型プロテインチップである。
また、本発明の別の好ましい態様によれば、上記プロテインチップは、金属イオン固定型プロテインチップおよび／または陽イオン交換型プロテインチップである。
また、本発明による膵臓癌マーカータンパク質は、ｐＨ４または７において陽イオン交換型プロテインチップに好適に捕捉される。したがって、本発明のより好ましい態様によれば、上記陽イオン交換型プロテインチップは、ｐＨ４または７に調整されたものである。
また、本発明のより好ましい態様によれば、上記プロテインチップは、逆相型プロテインチップおよび／または陽イオン交換型プロテインチップである。
また、本発明の別の好ましい態様によれば、上記プロテインチップは、金属イオン固定型プロテインチップおよび／または陽イオン交換型プロテインチップである。
また、本発明による膵臓癌マーカータンパク質は、ｐＨ４または７において陽イオン交換型プロテインチップに好適に捕捉される。したがって、本発明のより好ましい態様によれば、上記陽イオン交換型プロテインチップは、ｐＨ４または７に調整されたものである。
また、陽イオン交換型プロテインチップにおける陽イオン交換基は、好ましくはカルボキシル基またはカルボキシアルキル基であり、より好ましくはカルボキシメチル基である。さらに、上記陽イオン交換型プロテインチップの好ましい具体例としては、ＷＣＸ２またはＣＭ１０（いずれもサイファージェン・バイオシステムズ（Ciphergen Biosystems,Inc.）社製：住所：日本国 神奈川県横浜市 保土ヶ谷区神戸町134 横浜ビジネスパーク イーストタワー14F）が挙げられるが、より好ましくはＣＭ１０である。また、逆相型プロテインチップにおける官能基は、好ましくはアルキル基、アラルキル基およびアリール基から選択される少なくとも一つのものであり、より好ましくは炭素数６〜１２であり、かつアルキル基、アラルキル基またはアリール基から選択される少なくとも一つのものであり、さらに好ましくは炭素数６〜１２のアルキル基である。上記官能基は置換されていてもよいが、好ましくは無置換である。さらに、上記逆相型プロテインチップの好ましい具体例としては、Ｈ４またはＨ５０（いづれもサイファージェン・バイオシステムズ社製）が挙げられるが、より好ましくはＨ５０である。また、金属イオン固定型プロテインチップにおいてプロテインチップに固定される金属イオンとしては、好ましくは銅イオンまたは亜鉛イオンであり、より好ましくは銅イオンである。さらに、上記金属イオン固定型プロテインチップの好ましい具体例としてはＩＭＡＣ ３０（サイファージェン・バイオシステムズ社製）が挙げられる。
プロテインチップ法にあっては、試料をプロテインチップに添加した後、試料中のタンパク質をプロテインチップへ捕捉させることを促し、かつ不純物を除去するため、所望により、緩衝液などの溶液によってプロテインチップを処理し、洗浄する。この際に使用される溶液としては、具体的には、酢酸ナトリウム緩衝溶液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン/塩化水素緩衝溶液、リン酸緩衝溶液などが挙げられる。そして、陽イオン交換型プロテインチップを用いる場合、本発明による膵臓癌マーカータンパク質は、陽イオン交換型プロテインチップにｐＨ４または７において捕捉される性質を有することから、使用される溶液は、好ましくはｐＨ４または７である緩衝液である。したがって、本発明の好ましい態様によれば、陽イオン交換型プロテインチップはｐＨ４または７に調整されたものである。
また、逆相型プロテインチップの場合、使用される溶液としては、好ましくはアセトニトリル溶液またはトリフルオロ酢酸溶液である。
また、金属イオン固定型プロテインチップの場合、使用される溶液としては、好ましくはリン酸ナトリウム溶液、塩化ナトリウム溶液または酢酸ナトリウム溶液である。
また、逆相型プロテインチップの場合、使用される溶液としては、好ましくはアセトニトリル溶液またはトリフルオロ酢酸溶液である。
また、金属イオン固定型プロテインチップの場合、使用される溶液としては、好ましくはリン酸ナトリウム溶液、塩化ナトリウム溶液または酢酸ナトリウム溶液である。
また、本発明の別の態様によれば、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つの血中タンパク質の、膵臓癌マーカータンパク質としての使用が提供される。また、本発明の別の好ましい態様によれば、１７，２７２±９および／または１７，２５３±９（ｍ／ｚ）の分子量の血中タンパク質の、膵臓癌マーカータンパク質としての使用が提供される。また、本発明の別の好ましい態様によれば、分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１４，７７９±８（ｍ／ｚ）および８，７６６±５（ｍ／ｚ）を有する血中タンパク質の、膵臓癌マーカータンパク質としての使用が提供される。
また、本発明による膵臓癌マーカータンパク質は、上述の通り、膵臓癌の的確かつ簡易な検出に用いられるものである。したがって、本発明の別の態様によれば、膵臓癌を検出する方法であって、
被検者から得た血液試料における、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルを測定し、
健常者の発現レベルと比較して、
２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルが低い場合、および／または
１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の分子量のタンパク質の発現レベルが高い場合、被検者における膵臓癌が検出されたものとする、方法が提供される。
被検者から得た血液試料における、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルを測定し、
健常者の発現レベルと比較して、
２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルが低い場合、および／または
１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の分子量のタンパク質の発現レベルが高い場合、被検者における膵臓癌が検出されたものとする、方法が提供される。
また、本発明の別の好ましい態様によれば、上記方法において、上記タンパク質として、１７，２７２±９および／または１７，２５３±９（ｍ／ｚ）の分子量を有するものを用いる。また、本発明の別の好ましい態様によれば、上記方法において、上記タンパク質として、分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１４，７７９±８（ｍ／ｚ）および８，７６６±５（ｍ／ｚ）を有するものを用いる。
本発明による上記方法において、膵臓癌の検出されたことの判定は、上述の通り、膵臓癌マーカータンパク質について、健常者における発現レベルと、被検者における発現レベルとを比較することによって行われる。そして、健常者における発現レベルは、人種、性別、年齢などに応じて、予め閾値として設定される。そして、上記健常者における発現レベルは、上述の手法により測定された健常者における膵臓癌マーカータンパク質の定量値を参照して公知の統計手法により設定することができる。上記発現レベルの具体的な設定手法としては、例えば、（健常者における膵臓癌マーカータンパク質のレベルの平均値±標準偏差）またはＲＯＣ（Receiver Operating Characteristic)分析などが挙げられ、好ましくはＲＯＣ分析である。なお、膵臓癌が検出されたことの判定は、上述のような統計手法により患者における膵臓癌マーカータンパク質の定量値を参照して予め設定された閾値と、被検者における発現レベルとを比較することにより行ってもよく、本発明にはかかる態様も包含される。
また、本発明における血液試料は、通常はヒト由来のものとされる。さらに、本発明における血液試料は、好ましくは血漿である。血液試料の採取および調製手法は、本発明によるマーカータンパク質の測定に影響を与えない限り特に限定されず、当業者に公知の手法により行うことができる。
また、本発明による膵臓癌マーカータンパク質はまた、患者において、膵臓癌をモニタリングする方法に利用することができる。上述のようなモニタリング方法は、膵臓癌の進行を正確に把握し、より適切な時期に、より適切な薬剤を投与したり、適切な治療を施したりするのに有利に利用することができる。
したがって、本発明の別の態様によれば、患者において、膵臓癌をモニタリングする方法であって、
患者から得た血液試料における、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルを測定し、
２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルが経時的に低下した場合、および／または
１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の分子量のタンパク質の発現レベルが経時的に上昇した場合、膵臓癌が進行したものとする、方法が提供される。
患者から得た血液試料における、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルを測定し、
２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（ｍ／ｚ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルが経時的に低下した場合、および／または
１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の分子量のタンパク質の発現レベルが経時的に上昇した場合、膵臓癌が進行したものとする、方法が提供される。
また、本発明の別の好ましい態様によれば、上記モニタリング方法において、タンパク質として、１７，２７２±９および／または１７，２５３±９（ｍ／ｚ）の分子量を有するものを用いる。また、本発明の別の好ましい態様によれば、上記モニタリング方法において、タンパク質として、分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１４，７７９±８（ｍ／ｚ）および８，７６６±５（ｍ／ｚ）を有するものを用いる。
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１
ピークの選択
採血
２００２年９月から２００３年１０月までの期間において、国立がんセンター中央病院における治療前膵臓がん患者１０４名および健常者１１６名について、ＥＤＴＡ採血管を用いて採血を行い、得られた血漿を以下の実験に用いた。
実施例１
ピークの選択
採血
２００２年９月から２００３年１０月までの期間において、国立がんセンター中央病院における治療前膵臓がん患者１０４名および健常者１１６名について、ＥＤＴＡ採血管を用いて採血を行い、得られた血漿を以下の実験に用いた。
プロテインチップ法による分析
上記血漿を９M Urea、２％ CHAPS（3-[3-Cholamidoproppyl)dimethylammonio]propanesulfonic acid）にて処理し、検体を調製した。この検体を、ワークステーションロボットバイオメック ２０００（Beckman Coulter社製）を用いて、３種類のプロテインチップに添加した。これらプロテインチップとしては、陽イオン交換型プロテインチップ CM10（サイファージェン・バイオシステムズ社製）、金属イオン固定型プロテインチップ IMAC30（サイファージェン・バイオシステムズ社製）、または逆相型プロテインチップ H50（サイファージェン・バイオシステムズ社製）を用いた。なお、CM10については、サイファージェン・バイオシステムズ社の取扱説明書に記載の手順に従い、ｐＨ７の緩衝液を用いる厳密条件、またはｐＨ４の緩衝液を用いる緩和条件にて洗浄を行い、以下の質量分析に用いた。
上記血漿を９M Urea、２％ CHAPS（3-[3-Cholamidoproppyl)dimethylammonio]propanesulfonic acid）にて処理し、検体を調製した。この検体を、ワークステーションロボットバイオメック ２０００（Beckman Coulter社製）を用いて、３種類のプロテインチップに添加した。これらプロテインチップとしては、陽イオン交換型プロテインチップ CM10（サイファージェン・バイオシステムズ社製）、金属イオン固定型プロテインチップ IMAC30（サイファージェン・バイオシステムズ社製）、または逆相型プロテインチップ H50（サイファージェン・バイオシステムズ社製）を用いた。なお、CM10については、サイファージェン・バイオシステムズ社の取扱説明書に記載の手順に従い、ｐＨ７の緩衝液を用いる厳密条件、またはｐＨ４の緩衝液を用いる緩和条件にて洗浄を行い、以下の質量分析に用いた。
質量分析
上記チップに、レーザー吸収体マトリックスであるシナピン酸を添加し、乾燥した。次に、このチップを、飛行時間型質量分析機を搭載した四重極型ハイブリッド質量分析機Q-star XL（Applied Biosystems社）内に配置し、約２−４０KD以下の低分子タンパク質およびペプチドについて、質量およびイオン化量を測定した。質量分析器Q-star XLから得られた質量・イオン化情報は、解析用ソフトウエアーAnalyst QS（Applied Biosystems社）を用い、質量・イオン化情報データに対する、ガウシアン窓関数によるスムージングを行い、さらには、Improving protein identification from peptide mass fingerprinting through a parameterized multi-level scoring algorithm and an optimized peak detection（Electrophoresis. 1999 Dec;20(18):3535-50.の記載に準じてベースラインおよびノイズレベルの調整を行い、ピーク情報へ変換した。なお、質量分析機において許容される質量誤差は０．０５％程度であるとして、データの解析を行った。
上記チップに、レーザー吸収体マトリックスであるシナピン酸を添加し、乾燥した。次に、このチップを、飛行時間型質量分析機を搭載した四重極型ハイブリッド質量分析機Q-star XL（Applied Biosystems社）内に配置し、約２−４０KD以下の低分子タンパク質およびペプチドについて、質量およびイオン化量を測定した。質量分析器Q-star XLから得られた質量・イオン化情報は、解析用ソフトウエアーAnalyst QS（Applied Biosystems社）を用い、質量・イオン化情報データに対する、ガウシアン窓関数によるスムージングを行い、さらには、Improving protein identification from peptide mass fingerprinting through a parameterized multi-level scoring algorithm and an optimized peak detection（Electrophoresis. 1999 Dec;20(18):3535-50.の記載に準じてベースラインおよびノイズレベルの調整を行い、ピーク情報へ変換した。なお、質量分析機において許容される質量誤差は０．０５％程度であるとして、データの解析を行った。
機械学習
上記のようにして得られた2,000〜35,000Daの範囲のピーク情報について、膵臓癌患者７１例および健常者７１例を学習セットとして、ＳＶＭ（support vector machine：rbf(radius basis function)およびlinear）、ＮＮ（neural network）、およびＦＮＮ（fuzzy neural network）のアルゴリズムによる機械学習を行った。その結果、表１に示される通りであった。３つのピーク、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）および１７，２５３±９（ｍ/ｚ）、並びにＨ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）が、いずれのアルゴリズムによる解析でも判別率 約８０％以上を示した。
上記のようにして得られた2,000〜35,000Daの範囲のピーク情報について、膵臓癌患者７１例および健常者７１例を学習セットとして、ＳＶＭ（support vector machine：rbf(radius basis function)およびlinear）、ＮＮ（neural network）、およびＦＮＮ（fuzzy neural network）のアルゴリズムによる機械学習を行った。その結果、表１に示される通りであった。３つのピーク、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）および１７，２５３±９（ｍ/ｚ）、並びにＨ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）が、いずれのアルゴリズムによる解析でも判別率 約８０％以上を示した。
ピークチャート
また、健常者および膵臓癌患者における、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）に関するピークチャートは、図１に示される通りであった。
また、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）に関するピークチャートは、図２に示される通りであった。
また、Ｈ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）に関するピークチャートは、図３に示される通りであった。
上記図１〜図３におけるピークチャートの縦軸は相対的なイオン強度を示す。
いずれのピークも、健常者と比較して膵臓癌患者において減少する傾向を示した。
また、健常者および膵臓癌患者における、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）に関するピークチャートは、図１に示される通りであった。
また、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）に関するピークチャートは、図２に示される通りであった。
また、Ｈ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）に関するピークチャートは、図３に示される通りであった。
上記図１〜図３におけるピークチャートの縦軸は相対的なイオン強度を示す。
いずれのピークも、健常者と比較して膵臓癌患者において減少する傾向を示した。
実施例２
検証試験
実施例１とは異なる膵臓癌患者３３例および健常者４５例を検証セットとして、実施例１にて見出された３つのそれぞれのピークについて実施例１と同様の手法により質量分析を行い、Ｃ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、Ｃ１０（ｐＨ４）における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）およびＨ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）について、膵臓癌の正答率を解析した。
ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）については、判別率７２．２％、感度５８．８％、特異度８２．２％であった。
ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）については、判別率７９．７％、感度８５．３％、特異度７５．６％であった。
Ｈ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）については、判別率７９．７％、感度８２．４％、特異度７７．８％であった。
検証試験
実施例１とは異なる膵臓癌患者３３例および健常者４５例を検証セットとして、実施例１にて見出された３つのそれぞれのピークについて実施例１と同様の手法により質量分析を行い、Ｃ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、Ｃ１０（ｐＨ４）における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）およびＨ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）について、膵臓癌の正答率を解析した。
ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）については、判別率７２．２％、感度５８．８％、特異度８２．２％であった。
ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）については、判別率７９．７％、感度８５．３％、特異度７５．６％であった。
Ｈ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）については、判別率７９．７％、感度８２．４％、特異度７７．８％であった。
Ｕ検定（Mann Whitney U test)による検証
実施例１および実施例２についてそれぞれ、実施例１で見出された三つの質量ピークのイオン強度に関し、健常者群と、膵臓癌患者群とを比較してＵ検定を行った。
ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）に関する結果は、図４に示される通りであった。
また、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）に関する結果は、図５に示される通りであった。
また、Ｈ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）に関する結果は、図６に示される通りであった。
上記図４〜図６における縦軸は相対的なイオン強度を示す。
いずれのピークも、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のイオン強度は有意に低かった。
また、実施例１および実施例２の結果は同様の傾向を示していた。
実施例１および実施例２についてそれぞれ、実施例１で見出された三つの質量ピークのイオン強度に関し、健常者群と、膵臓癌患者群とを比較してＵ検定を行った。
ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）に関する結果は、図４に示される通りであった。
また、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）に関する結果は、図５に示される通りであった。
また、Ｈ５０における１７，２５３±９（ｍ/ｚ）に関する結果は、図６に示される通りであった。
上記図４〜図６における縦軸は相対的なイオン強度を示す。
いずれのピークも、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のイオン強度は有意に低かった。
また、実施例１および実施例２の結果は同様の傾向を示していた。
実施例３
実施例１における質量分析により検出された、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５または１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の質量ピークのイオン強度に関し、Ｔ検定による統計解析を行った。結果は表２に示される通りであった。
実施例１における質量分析により検出された、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５または１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の質量ピークのイオン強度に関し、Ｔ検定による統計解析を行った。結果は表２に示される通りであった。
陽イオン交換型プロテインチップ（ＣＭ１０、ｐＨ４）を用いた場合、分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（ｍ／ｚ）の質量ピークについては、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のイオン強度が有意に低かった。さらに、陽イオン交換型プロテインチップ（ＣＭ１０、ｐＨ７）を用いた場合、１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の質量ピークは、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のイオン強度が有意に高かった。また、逆相型プロテインチップ（Ｈ５０）を用いた場合、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（ｍ／ｚ）の質量ピークについては、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のピーク強度が有意に低く、１４，７７９±８（ｍ／ｚ）の質量ピークは、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のピーク強度が有意に高かった。また、金属イオン固定型プロテインチップ（ＩＭＡＣ ３０、銅イオン固定型）を用いた場合、２８，０８０±１５および８，７６６±５（ｍ／ｚ）の質量ピークは、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のピーク強度が有意に低かった。
実施例４
質量分析
国立がんセンター中央病院における治療前膵臓がん患者７１名および健常者７１名について、実施例１と同様の手法により、サンプルを調製して質量分析を行った。プロテインチップとしては、陽イオン交換チップ CM10（サイファージェン・バイオシステムズ社製）および逆相チップ H50（サイファージェン・バイオシステムズ社製）を用いた。なお、CM10については、サイファージェン・バイオシステムズ社の取扱説明書に記載の手順に従い、ｐＨ４の緩衝液を用いる緩和条件にて洗浄を行った。
質量分析
国立がんセンター中央病院における治療前膵臓がん患者７１名および健常者７１名について、実施例１と同様の手法により、サンプルを調製して質量分析を行った。プロテインチップとしては、陽イオン交換チップ CM10（サイファージェン・バイオシステムズ社製）および逆相チップ H50（サイファージェン・バイオシステムズ社製）を用いた。なお、CM10については、サイファージェン・バイオシステムズ社の取扱説明書に記載の手順に従い、ｐＨ４の緩衝液を用いる緩和条件にて洗浄を行った。
機械学習
上記質量分析のピーク情報を学習セットとして、rbf ＳＶＭのアルゴリズムによる機械学習を行った。その結果、ＣＭ１０（ｐＨ４）における２８，０８０±１５、１７，２７２±９、８，７６６±５（ｍ／ｚ）およびＨ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）とが検出された。
上記質量分析のピーク情報を学習セットとして、rbf ＳＶＭのアルゴリズムによる機械学習を行った。その結果、ＣＭ１０（ｐＨ４）における２８，０８０±１５、１７，２７２±９、８，７６６±５（ｍ／ｚ）およびＨ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）とが検出された。
ピークチャート
また、実施例４の結果、各ピークチャートは、図７〜図１０に示される通りであった。ここで、ピークチャートの縦軸は、相対的なイオン強度を示す。
図７〜図９に示される通り、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、８，７６６±５（ｍ／ｚ）および２８，０８０±１５（ｍ/ｚ）は、健常者と比較して膵臓癌患者において低い傾向を示した。一方、図１０において示される通り、Ｈ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）は、健常者と比較して膵臓癌患者において高い傾向を示した。
実施例４および実施例５についてそれぞれ、上記四つの質量ピークのピーク強度に関し、健常者群と、膵臓癌患者群とを比較してＵ検定を行った。
実施例４および実施例５における結果は、表３に示される通りであった。なお、各統計結果の値は、ピークのイオン強度の平均値±Ｓ．Ｄ．を示す。
また、実施例４の結果、各ピークチャートは、図７〜図１０に示される通りであった。ここで、ピークチャートの縦軸は、相対的なイオン強度を示す。
図７〜図９に示される通り、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、８，７６６±５（ｍ／ｚ）および２８，０８０±１５（ｍ/ｚ）は、健常者と比較して膵臓癌患者において低い傾向を示した。一方、図１０において示される通り、Ｈ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）は、健常者と比較して膵臓癌患者において高い傾向を示した。
実施例４および実施例５についてそれぞれ、上記四つの質量ピークのピーク強度に関し、健常者群と、膵臓癌患者群とを比較してＵ検定を行った。
実施例４および実施例５における結果は、表３に示される通りであった。なお、各統計結果の値は、ピークのイオン強度の平均値±Ｓ．Ｄ．を示す。
ＲＯＣ曲線
また、上記四つのピークに関するＲＯＣ曲線およびそのＡＵＣ値は図１１に示される通りであった。特に上記四つのピークのすべてが検出される場合(4ピーク コンビネーション)、感度 ９７．２％、特異度 ９４．４％であり、そのＡＵＣ値は０．９７８であった。なお、上記四つのピークについては、ＬＯＯ（leave-one-out） cross validationによっても、識別能力を確認した。
また、上記四つのピークに関するＲＯＣ曲線およびそのＡＵＣ値は図１１に示される通りであった。特に上記四つのピークのすべてが検出される場合(4ピーク コンビネーション)、感度 ９７．２％、特異度 ９４．４％であり、そのＡＵＣ値は０．９７８であった。なお、上記四つのピークについては、ＬＯＯ（leave-one-out） cross validationによっても、識別能力を確認した。
実施例５
検証試験
実施例４とは異なる治療前膵臓癌患者３３例および健常者４５例を検証セットとして、実施例４と同様の手法により、検証試験を行った。その結果、実施例４における四つのピークのすべてが検出される場合、判別率９１．０％、感度 ９０．９％、特異度 ９１．１％であった。
検証試験
実施例４とは異なる治療前膵臓癌患者３３例および健常者４５例を検証セットとして、実施例４と同様の手法により、検証試験を行った。その結果、実施例４における四つのピークのすべてが検出される場合、判別率９１．０％、感度 ９０．９％、特異度 ９１．１％であった。
Ｕ検定による検証
実施例４および実施例５についてそれぞれ、上記四つの質量ピークのピーク強度に関し、健常者群と、膵臓癌患者群とを比較してＵ検定を行った。
実施例４および実施例５における結果は、表３に示される通りであった。なお、各統計結果の値は、ピークのイオン強度の平均値±Ｓ．Ｄ．を示す。
実施例４および実施例５についてそれぞれ、上記四つの質量ピークのピーク強度に関し、健常者群と、膵臓癌患者群とを比較してＵ検定を行った。
実施例４および実施例５における結果は、表３に示される通りであった。なお、各統計結果の値は、ピークのイオン強度の平均値±Ｓ．Ｄ．を示す。
Ｕ検定の結果、実施例４および実施例５は同様の傾向を示した。
ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、８，７６６±５（ｍ／ｚ）および２８，０８０±１５（ｍ/ｚ）についてはいずれも、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のピーク強度は有意に低かった。一方、Ｈ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）については、健常者と比較して膵臓癌患者群のピーク強度は有意に高かった。
ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、８，７６６±５（ｍ／ｚ）および２８，０８０±１５（ｍ/ｚ）についてはいずれも、健常者群と比較して、膵臓癌患者群のピーク強度は有意に低かった。一方、Ｈ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）については、健常者と比較して膵臓癌患者群のピーク強度は有意に高かった。
実施例６
ＣＡ１９−９と質量ピークとを指標とした、膵臓癌の検出
東京医科大学病院における治療前膵臓癌患者２９名および健常者３９名について、実施例１と同様の手法により、サンプルの調製および質量分析を行い、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、８，７６６±５（ｍ／ｚ）および２８，０８０±１５（ｍ/ｚ）並びにＨ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）を検出した。また、上記膵臓癌患者および健常者の血漿中CA19-9を、CA19-9イムノラジオアッセイキット（富士レビオ社製）用いて検出した。なお、血漿中CA19-9のカットオフ値は、３７Ｕ／ｍＬとして膵臓癌の検出を行った。
ＣＡ１９−９と質量ピークとを指標とした、膵臓癌の検出
東京医科大学病院における治療前膵臓癌患者２９名および健常者３９名について、実施例１と同様の手法により、サンプルの調製および質量分析を行い、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、８，７６６±５（ｍ／ｚ）および２８，０８０±１５（ｍ/ｚ）並びにＨ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）を検出した。また、上記膵臓癌患者および健常者の血漿中CA19-9を、CA19-9イムノラジオアッセイキット（富士レビオ社製）用いて検出した。なお、血漿中CA19-9のカットオフ値は、３７Ｕ／ｍＬとして膵臓癌の検出を行った。
結果は、表４に示される通りであった。なお、表４において、ＳＥＬＤＩとは、ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、８，７６６±５（ｍ／ｚ）および２８，０８０±１５（ｍ/ｚ）並びにＨ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）がいずれも検出された場合を意味する。また、コンビネーションとは、ＳＥＬＤＩと、ＣＡ１９−９とがいずれも検出された場合を意味する。また、ｎは検出された被検者の数を示す。なお、臨床段階は、日本膵臓病学会編集 膵癌取扱い規約の記載に準じ、分類されている。
上記ＣＭ１０（ｐＨ４）における１７，２７２±９（ｍ/ｚ）、８，７６６±５（ｍ／ｚ）および２８，０８０±１５（ｍ/ｚ）並びにＨ５０における１４，７７９±８（ｍ/ｚ）と、CA19-9とを併せて指標とすることにより、膵臓癌患者の１００％が検出された。
Claims (25)
- 分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５（Ｄ）または１４，７７９±８（Ｄ）の血中タンパク質である、膵臓癌マーカータンパク質。
- 分子量 １７，２７２±９または１７，２５３±９（Ｄ）の血中タンパク質である、請求項１に記載の膵臓癌マーカータンパク質。
- 分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９または８，７６６±５（Ｄ）の前記血中タンパク質の膵臓癌患者における発現レベルが、健常者の発現レベルと比較して低いことを特徴とする、請求項１に記載の膵臓癌マーカータンパク質。
- 分子量 １４，７７９±８（Ｄ）の前記血中タンパク質の膵臓癌患者における発現レベルが、健常者の発現レベルと比較して高いことを特徴とする、請求項１に記載の膵臓癌マーカータンパク質。
- 逆相型プロテインチップ、金属イオン固定型プロテインチップおよび陽イオン交換型プロテインチップからなる群から選択される少なくとも一つのプロテインチップに捕捉されるものである、請求項１に記載の膵臓癌マーカータンパク質。
- 前記プロテインチップが、逆相型プロテインチップおよび／または陽イオン交換型プロテインチップである、請求項５に記載の膵臓癌マーカータンパク質。
- ｐＨ４または７において前記陽イオン交換型プロテインチップに捕捉されるものである、請求項１に記載の膵臓癌マーカータンパク質。
- 膵臓癌を検出する方法であって、
被検者から得た血液試料における、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（Ｄ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルを測定し、
健常者の発現レベルと比較して、
２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（Ｄ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つの前記タンパク質の発現レベルが低い場合、および／または
１４，７７９±８（Ｄ）の分子量の前記タンパク質の発現レベルが高い場合、前記被検者における膵臓癌が検出されたものとする、方法。 - 前記タンパク質が、１７，２７２±９および／または１７，２５３±９（Ｄ）の分子量を有するものであり、健常者の発現レベルと比較して、前記タンパク質の発現レベルが低い場合、前記被検者における膵臓癌が検出されたものとする、請求項８に記載の方法。
- 前記タンパク質が、分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１４，７７９±８（Ｄ）および８，７６６±５（Ｄ）を有するものであり、
健常者の発現レベルと比較して、
分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９および８，７６６±５（Ｄ）を有する前記タンパク質の発現レベルが低く、かつ分子量 １４，７７９±８（Ｄ）を有する前記タンパク質の発現レベルが高い場合、前記被検者における膵臓癌が検出されたものとする、請求項８に記載の方法。 - 前記測定が質量分析により行われる、請求項８に記載の方法。
- 前記質量分析が飛行時間型質量分析である、請求項１１に記載の方法。
- 前記質量分析がプロテインチップ法により行われる、請求項１１に記載の方法。
- 前記プロテインチップ法において用いられるプロテインチップが、逆相型プロテインチップ、金属イオン固定型プロテインチップ、および陽イオン交換型プロテインチップからなる群から選択される少なくとも一つものである、請求項１３に記載の方法。
- 前記プロテインチップが、逆相型プロテインチップおよび／または陽イオン交換型プロテインチップである、請求項１４に記載の方法。
- 前記陽イオン交換型プロテインチップが、ｐH４または７に調製されたものである、請求項１４に記載の方法。
- 患者において、膵臓癌をモニタリングする方法であって、
前記患者から得た血液試料における、２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９、８，７６６±５および１４，７７９±８（Ｄ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つのタンパク質の発現レベルを測定し、
２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１７，２５３±９および８，７６６±５（Ｄ）からなる群から選択される分子量の、少なくとも一つの前記タンパク質の発現レベルが経時的に低下した場合、および／または
１４，７７９±８（Ｄ）の分子量の前記タンパク質の発現レベルが経時的に上昇した場合、膵臓癌が進行したものとする、方法。 - 前記タンパク質が、１７，２７２±９および／または１７，２５３±９（Ｄ）の分子量を有するであり、該タンパク質の発現レベルが経時的に低下した場合、膵臓癌が進行したものとする、請求項１７に記載の方法。
- 前記タンパク質が、分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９、１４，７７９±８（Ｄ）および８，７６６±５（Ｄ）を有するものであり、
分子量 ２８，０８０±１５、１７，２７２±９および８，７６６±５（Ｄ）の前記タンパク質の発現レベルが経時的に低下し、かつ分子量 １４，７７９±８（Ｄ）の前記タンパク質の発現レベルが経時的に上昇した場合、膵臓癌が進行したものとする、請求項１７に記載の方法。 - 前記測定が質量分析により行われる、請求項１７に記載の方法。
- 前記質量分析が飛行時間型質量分析である、請求項２０に記載の方法。
- 前記質量分析がプロテインチップ法により行われる、請求項２０に記載の方法。
- 前記プロテインチップ法において用いられるプロテインチップが、逆相型プロテインチップ、金属イオン固定型プロテインチップおよび陽イオン交換型プロテインチップからなる群から選択される少なくとも一つものである、請求項２１に記載の方法。
- 前記プロテインチップが、逆相型プロテインチップおよび／または陽イオン交換型プロテインチップである、請求項２３に記載の方法。
- 前記陽イオン交換型プロテインチップが、ｐH４または７に調製されたものである、請求項２３に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2007508026A JP5200246B2 (ja) | 2005-03-14 | 2006-01-26 | 膵臓癌診断用マーカータンパク質 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2005070512 | 2005-03-14 | ||
| JP2005070512 | 2005-03-14 | ||
| PCT/JP2006/301243 WO2006098087A1 (ja) | 2005-03-14 | 2006-01-26 | 膵臓癌診断用マーカータンパク質 |
| JP2007508026A JP5200246B2 (ja) | 2005-03-14 | 2006-01-26 | 膵臓癌診断用マーカータンパク質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2006098087A1 JPWO2006098087A1 (ja) | 2008-08-21 |
| JP5200246B2 true JP5200246B2 (ja) | 2013-06-05 |
Family
ID=36991443
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007508026A Active JP5200246B2 (ja) | 2005-03-14 | 2006-01-26 | 膵臓癌診断用マーカータンパク質 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20090004671A1 (ja) |
| EP (1) | EP1870711B1 (ja) |
| JP (1) | JP5200246B2 (ja) |
| DE (1) | DE602006013109D1 (ja) |
| WO (1) | WO2006098087A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015050107A1 (ja) | 2013-10-01 | 2015-04-09 | 東レ株式会社 | 膵腫瘍の検出方法、抗体及び膵腫瘍検出用キット |
| WO2018134952A1 (ja) * | 2017-01-19 | 2018-07-26 | 株式会社島津製作所 | 分析データ解析方法および分析データ解析装置 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5140809B2 (ja) * | 2007-07-25 | 2013-02-13 | 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | 修飾α−フィブリノゲンタンパク質またはその免疫原性断片 |
| JP5422785B2 (ja) * | 2008-09-12 | 2014-02-19 | 国立大学法人名古屋大学 | 質量分析法を利用した複数癌腫の血液検出のための方法および生物マーカー |
| JP2010175452A (ja) * | 2009-01-30 | 2010-08-12 | Japan Health Science Foundation | 膵臓癌の検出法 |
| CA2774869C (en) | 2009-10-01 | 2017-10-24 | Phenomenome Discoveries Inc. | Serum-based biomarkers of pancreatic cancer and uses thereof for disease detection and diagnosis |
| KR101894111B1 (ko) * | 2010-06-01 | 2018-08-31 | 메타노믹스 헬스 게엠베하 | 대상체에서 췌장암을 진단하기 위한 수단 및 방법 |
| DK3267197T3 (da) | 2015-03-02 | 2020-10-12 | Toray Industries | Fremgangsmåde og kit til detektionen af pankreatisk dysfunktion |
| DK179161B1 (en) * | 2016-05-26 | 2017-12-18 | Man Diesel & Turbo Filial Af Man Diesel & Turbo Se Tyskland | A large two-stroke compression-ignited internal combustion engine with fuel injection system for low flashpoint fuel and a fuel valve therefore |
| JP7592326B2 (ja) | 2019-07-18 | 2024-12-02 | ルムス エルティーディー． | カプセル化された光ガイド光学素子 |
| US20240168026A1 (en) | 2021-03-24 | 2024-05-23 | Toray Industries, Inc. | Method and kit for assisting in determination of malignant pancreatic cystic tumor |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003027138A1 (en) * | 2001-09-25 | 2003-04-03 | Japan As Represented By President Of National Cancer Center | Search for cancer marker by novel screening method |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6936424B1 (en) * | 1999-11-16 | 2005-08-30 | Matritech, Inc. | Materials and methods for detection and treatment of breast cancer |
| EP1269194B1 (en) * | 2000-03-20 | 2007-03-07 | Eastern Virginia Medical School | Prostate cancer markers |
-
2006
- 2006-01-26 DE DE602006013109T patent/DE602006013109D1/de active Active
- 2006-01-26 WO PCT/JP2006/301243 patent/WO2006098087A1/ja not_active Ceased
- 2006-01-26 JP JP2007508026A patent/JP5200246B2/ja active Active
- 2006-01-26 US US11/908,694 patent/US20090004671A1/en not_active Abandoned
- 2006-01-26 EP EP06712425A patent/EP1870711B1/en active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003027138A1 (en) * | 2001-09-25 | 2003-04-03 | Japan As Represented By President Of National Cancer Center | Search for cancer marker by novel screening method |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015050107A1 (ja) | 2013-10-01 | 2015-04-09 | 東レ株式会社 | 膵腫瘍の検出方法、抗体及び膵腫瘍検出用キット |
| WO2018134952A1 (ja) * | 2017-01-19 | 2018-07-26 | 株式会社島津製作所 | 分析データ解析方法および分析データ解析装置 |
| JPWO2018134952A1 (ja) * | 2017-01-19 | 2019-11-07 | 株式会社島津製作所 | 分析データ解析方法および分析データ解析装置 |
| US11423331B2 (en) | 2017-01-19 | 2022-08-23 | Shimadzu Corporation | Analytical data analysis method and analytical data analyzer |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1870711A4 (en) | 2008-07-16 |
| WO2006098087A1 (ja) | 2006-09-21 |
| DE602006013109D1 (de) | 2010-05-06 |
| US20090004671A1 (en) | 2009-01-01 |
| JPWO2006098087A1 (ja) | 2008-08-21 |
| EP1870711A1 (en) | 2007-12-26 |
| EP1870711B1 (en) | 2010-03-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6596555B2 (ja) | 癌療法を示すためのｓｒｍアッセイ | |
| JP5200246B2 (ja) | 膵臓癌診断用マーカータンパク質 | |
| US20140113388A1 (en) | Treatment planning based on polypeptide radiotoxicity serum markers | |
| JP6381629B2 (ja) | 前立腺癌の放射線療法のための臨床決定支援（ｃｄｓ） | |
| MX2012011724A (es) | Metodo y equipo para el diagnostico del cancer. | |
| WO2013016966A1 (zh) | 检测肺癌蛋白的质谱模型及构建方法 | |
| JP2019058171A (ja) | Ｐｄ−ｌ１に対するｓｒｍアッセイ | |
| JP6046147B2 (ja) | がんの評価のための多重ｍｒｍアッセイ | |
| CN118362666A (zh) | 区分健康、非结直肠癌疾病与结直肠癌的代谢标志物组合物及其应用 | |
| CN102661884B (zh) | 含有肺结核血清特征蛋白的样品及其制备方法 | |
| Wu et al. | Proteomic evaluation of urine from renal cell carcinoma using SELDI-TOF-MS and tree analysis pattern | |
| CN107847866B (zh) | 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(p16)的SRM/MRM测定 | |
| JP6046151B2 (ja) | エフリンａ型受容体２タンパク質に対するｓｒｍ／ｍｒｍアッセイ | |
| JPWO2008032868A1 (ja) | 腎癌の腫瘍マーカー及び腎癌の罹患の識別方法 | |
| Liu et al. | Potential biomarkers for esophageal carcinoma detected by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry | |
| KR20190080973A (ko) | GTPase KRas 단백질(KRas)에 대한 SRM/MRM 검정 | |
| US9362094B2 (en) | Biomarkers for determining breast cancer bone metastasis | |
| JP6046144B2 (ja) | 脂肪酸シンターゼタンパク質に対するｓｒｍ／ｍｒｍアッセイ | |
| JP4109032B2 (ja) | 膀胱癌の検査判定方法 | |
| CN107850605B (zh) | 间皮素(msln)蛋白质的srm/mrm测定 | |
| JP2007271370A (ja) | 子宮癌検出用マーカー | |
| JP6073337B2 (ja) | レセプター型チロシンキナーゼｅｒｂＢ−４タンパク質（ＨＥＲ４）に対するＳＲＭ／ＭＲＭアッセイ | |
| JP6613526B2 (ja) | 膠芽腫の予測方法 | |
| CN119335076A (zh) | 用于早期冠心病诊断的血液生物标志物及其筛选方法与应用 | |
| CN118777616A (zh) | 肺结节的生物标志物集及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090120 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090120 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120330 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120418 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20121130 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20121226 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5200246 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |