JP4930055B2 - 抗腫瘍剤 - Google Patents

Description

技術分野
本発明は、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤から選ばれる抗腫瘍剤とその抗腫瘍効果を顕著に増強させる薬剤とを組み合わせてなる医薬組成物および該薬剤の使用方法に関する。

背景技術
一般に、腫瘍、特に悪性腫瘍の化学療法においては抗腫瘍剤を単独で投与しても所望の抗腫瘍効果が得られることはまれであり、その効果を増大させるために臨床の場では作用機序の異なった２剤あるいは３剤以上を組み合わせた多剤併用療法が行われている。この併用療法は、作用機序の異なった抗腫瘍剤を組み合わせることにより、１）非感受性細胞集団を減少させる、２）薬剤耐性出現を予防あるいは遅延させる、３）毒性の異なる薬剤の組み合わせにより毒性を分散させるなど、副作用の軽減や抗腫瘍作用の増強を目的としている。しかしながら作用機序の異なる抗腫瘍剤を漫然と組み合わせて併用療法を行っても必ずしも抗腫瘍作用の増強効果や相乗効果が得られるとは限らない。

ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤はヒストンの高アセチル化を誘発し、結果として、各種遺伝子の転写調節活性、細胞周期阻害活性及びアポトーシスを誘導することが報告されている。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は強力な抗癌剤としても知られている（特公平７−６４８７２号公報、Experimental Cell Research, 米国，(1998), 241号, p.126−133参照）。

例えば、式（Ｉ）

で表される化合物またはその医薬として許容される塩（以下、化合物Ａとも称する）、特に式（ＩＩ）

で表される立体異性体（以下、ＦＫ２２８とも称する）またはその医薬として許容される塩は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤であり、強力な抗腫瘍活性を有することが報告されている（特公平７−６４８７２号公報（対応米国特許第4977138号）、Experimental Cell Research, 米国，(1998), 241号, p.126−133参照）。

しかしながら、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と、従来抗腫瘍剤として広く用いられているシスプラチン等のＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、５−フルオロウラシル等の代謝拮抗物質系抗腫瘍剤またはタキサン系抗腫瘍剤との併用、ならびに併用によって得られる効果についての報告はまだなされていない。

発明の開示
したがって、本発明の目的は、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤から選ばれる抗腫瘍剤とその抗腫瘍効果を顕著に増強させる薬剤との併用により、副作用が軽減され、優れた抗腫瘍作用を有する抗腫瘍剤を提供することである。

本発明者らは鋭意研究した結果、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、特に強力なヒストンデアセチラーゼ阻害作用を有することが知られている化合物Ａが、既知の抗腫瘍剤であるＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤の抗腫瘍効果を顕著に増強することも見出し、本発明を完成するに至った。すなわち本発明は以下の通りである。

［１］ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤と、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤とを組み合わせてなる抗腫瘍剤及び医薬組成物、ならびに該組成物および剤を投与することを含む患者の治療方法。
［２］ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が式（Ｉ）

で表される化合物、その還元体、類縁体、プロドラッグまたはその医薬として許容される塩である上記［１］記載の抗腫瘍剤。
［３］ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤が白金化合物系抗腫瘍剤またはアルキル化剤系抗腫瘍剤である上記［２］記載の抗腫瘍剤。
［４］白金化合物系抗腫瘍剤がシスプラチンである上記［３］記載の抗腫瘍剤。
［５］代謝拮抗物質系抗腫瘍剤が５−フルオロウラシルである上記［２］記載の抗腫瘍剤。
［６］タキサン系抗腫瘍剤が、パクリタキセルまたはドセタキセルの少なくとも一種である上記［２］記載の抗腫瘍剤。
［７］肺癌、悪性リンパ腫、消化器癌、乳癌、卵巣癌、筋骨格肉腫、膀胱癌、白血病、腎臓癌または前立腺癌に対する抗腫瘍剤である、上記［１］〜［６］のいずれかに記載の抗腫瘍剤。

［８］ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を有効成分として含有する、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤の抗腫瘍効果増強剤、ならびに該組成物および剤を投与することを含む患者の治療方法。
［９］ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が式（Ｉ）

で表される化合物、その還元体、類縁体、プロドラッグまたはその医薬として許容される塩である上記［８］記載の増強剤。
［１０］ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤が白金化合物系抗腫瘍剤またはアルキル化剤系抗腫瘍剤である上記［９］記載の増強剤。
［１１］白金化合物系抗腫瘍剤がシスプラチンである上記［１０］記載の増強剤。
［１２］代謝拮抗物質系抗腫瘍剤が５−フルオロウラシルである上記［９］記載の増強剤。
［１３］タキサン系抗腫瘍剤が、パクリタキセルまたはドセタキセルの少なくとも一種である上記［９］記載の増強剤。
［１４］肺癌、悪性リンパ腫、消化器癌、乳癌、卵巣癌、筋骨格肉腫、膀胱癌、白血病、腎臓癌または前立腺癌に対する抗腫瘍効果増強剤である、上記［８］〜［１３］のいずれかに記載の増強剤。

［１５］ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤を含む併用剤、および該併用剤をヒストンデアセチラーゼ阻害剤とともに抗腫瘍剤として使用することができるまたは使用すべきであることを記載した該併用剤に関する記載物を含む、商業パッケージ。
［１６］ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が式（Ｉ）

で表される化合物、その還元体、類縁体、プロドラッグまたはその医薬として許容される塩である上記［１５］記載の商業パッケージ。
［１７］ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤が白金化合物系抗腫瘍剤またはアルキル化剤系抗腫瘍剤である上記［１６］記載の商業パッケージ。
［１８］白金化合物系抗腫瘍剤がシスプラチンである上記［１７］記載の商業パッケージ。
［１９］代謝拮抗物質系抗腫瘍剤が５−フルオロウラシルである上記［１６］記載の商業パッケージ。
［２０］タキサン系抗腫瘍剤が、パクリタキセルまたはドセタキセルの少なくとも一種である上記［１６］記載の商業パッケージ。

［２１］ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含有する製剤、および該製剤をＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤の抗腫瘍効果を増強するために使用することができるまたは使用すべきであることを記載した該製剤に関する記載物を含む、商業パッケージ。
［２２］ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が式（Ｉ）

で表される化合物、その還元体、類縁体、プロドラッグまたはその医薬として許容される塩である上記［２１］記載の商業パッケージ。
［２３］ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤が白金化合物系抗腫瘍剤またはアルキル化剤系抗腫瘍剤である上記［２２］記載の商業パッケージ。
［２４］白金化合物系抗腫瘍剤がシスプラチンである上記［２３］記載の商業パッケージ。
［２５］代謝拮抗物質系抗腫瘍剤が５−フルオロウラシルである上記［２２］記載の商業パッケージ。
［２６］タキサン系抗腫瘍剤が、パクリタキセルまたはドセタキセルの少なくとも一種である上記［２２］記載の商業パッケージ。

発明の詳細な説明
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（特に、化合物Ａ）は、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤（特に、白金化合物系抗腫瘍剤またはアルキル化剤系抗腫瘍剤）、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤もしくはタキサン系抗腫瘍剤の抗腫瘍効果を顕著に増強する。

したがって、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤とヒストンデアセチラーゼ阻害剤とを組み合わせてなる本発明の抗腫瘍剤は、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤から選ばれる抗腫瘍剤またはヒストンデアセチラーゼ阻害剤の単独投与に比べ、低用量でより高い癌の治療効果が得られ、また、副作用を低く抑えることができる。

発明を実施するための最良の形態
本発明で使用されるヒストンデアセチラーゼ阻害剤とは、ヒストンデアセチラーゼの活性部位に基質と競合して結合する化合物、および／またはヒストンデアセチラーゼの酵素活性を減少する効果を示すか、さもなくば酵素活性を阻害する化合物であり、既にヒストンデアセチラーゼ阻害剤として知られている化合物を含む。具体的には、上述の化合物Ａまたはその塩やその誘導体（例えば、化合物Ａをアセチル化したものやＳ−Ｓ結合を還元したチオール体等、WO 02/06307に記載）が挙げられる。ＦＫ２２８の類縁体は米国特許第６４０３５５５号に記載されている。さらにトリコスタチンＡ（Tricostatin A）、酪酸ナトリウム、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（suberoylanilide hydroxamic acid（ＳＡＨＡ））、ＭＳ−２７５、ヒドロキサム酸含有環状ペプチド（Cyclic hydroxamic-acid-containing peptide）、アピシジン（Apicidin）、トラポキシン（Trapoxin）等もヒストンデアセチラーゼ阻害活性を有することが報告されている化合物である。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、一種でもよく、また二種以上を混合したものであってもよい。

ヒストンデアセチラーゼ阻害剤としては、化合物Ａが好ましく用いられる。化合物Ａは、不斉炭素原子および二重結合に基づく光学活性体または幾何異性体等の立体異性体（例えばＦＫ２２８）を有することがあるが、これらすべての異性体及びそれらの混合物も化合物Ａの範囲に含まれる。
さらに、本明細書記載の化合物の溶媒和物（例えば包接化合物（例えば水和物等））、無水物、他の結晶多形または医薬として許容される塩もこの発明の範囲に含まれる。
以下、本明細書中、特に断りのない限り、単に化合物Ａと言う場合にはＦＫ２２８またはその医薬として許容される塩も含む、立体異性を問わない化合物群を意味する。

上記に列挙されたヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、いずれも公知の物質であり入手可能である。例えば、化合物Ａの立体異性体の一つであるＦＫ２２８は、ＦＫ２２８を生産しうるクロモバクテリウム（Chromobacterium）属に属する菌株を好気性条件下に培養、当該培養ブロスから当該物質を回収することによって得ることができる。ＦＫ２２８を生産しうるクロモバクテリウム属に属する菌株としては、例えばクロモバクテリウム・ビオラセウム（Chromobacterium violaceum）ＷＢ９６８（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６８）が挙げられる。ＦＫ２２８はより具体的には特公平７−６４８７２号（対応米国特許４９７７１３８号）公報に記載したとおりにしてＦＫ２２８生産菌から得ることができる。ＦＫ２２８は、より容易に入手できるので、ＦＫ２２８を産生しうるクロモバクテリウム属に属する菌株からの回収が好ましい。さらなる精製工程が不要あるいは工程数が少なくてすむという点で、合成あるいは半合成のＦＫ２２８もまた有利である。同様にＦＫ２２８以外の化合物Ａについても、従来公知の方法により半合成、全合成することができる。より具体的にはKhan W.Li,らによって報告されている方法（J. Am. Chem. Soc., Vol. 118, 7237-7238(1996)）に準じて製造することができる。

その他のヒストンデアセチラーゼ阻害剤、例えばトリコスタチンＡ、酪酸ナトリウム、ＳＡＨＡ、ＭＳ−２７５、ヒドロキサム酸含有環状ペプチド、アピシジン、トラポキシン等も市販により入手可能または公知の方法により調製することができる。

化合物Ａにおける医薬として許容される塩としては、無機塩基との塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩）、有機塩基との塩（例えばトリエチルアミン塩、ジイソプロピルエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロへキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等の有機アミン塩）、無機酸付加塩（例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等）、有機カルボン酸・スルホン酸付加塩（例えばギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩等）、塩基性あるいは酸性アミノ酸（例えばアルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等）との塩等の、塩基との塩または酸付加塩が挙げられる。

本発明で使用されるＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤とは、ＤＮＡに直接作用して架橋を形成することにより抗腫瘍効果を示すかぎり、いかなる抗腫瘍剤でもよい。例としては、公知の白金化合物系抗腫瘍剤、公知のアルキル化剤系抗腫瘍剤等が含まれる。具体例には、白金化合物系抗腫瘍剤としてはシスプラチン、カルボプラチン等が、アルキル化剤系抗腫瘍剤としてはシクロホスファミド、メルファラン等が挙げられる。ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤は、一種でもよく、または二種以上を混合したものであってもよい。

本発明で使用される代謝拮抗物質系抗腫瘍剤とは、抗腫瘍剤として公知の代謝拮抗物質であればよい。具体例としては、５-フルオロウラシル、テガフール等が挙げられる。代謝拮抗物質系抗腫瘍剤は、一種でもよく、または二種以上を混合したものであってもよい。

本発明で使用されるタキサン系抗腫瘍剤は、セイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）から単離されるタキサン骨格を構造中に有する各種成分またはその半合成品あるいはタキサン骨格を有する純粋合成品を含む。具体的には、パクリタキセル、ドセタキセル等が挙げられる。タキサン系抗腫瘍剤は、一種でもよく、または二種以上を混合したものであってもよい。

本発明において、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（特に、化合物Ａ）は、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤を顕著に増強させる。したがって、本発明の抗腫瘍剤および抗腫瘍効果増強剤は、血液癌及び固型癌等を含む癌疾患、より具体的には、肺癌、悪性リンパ腫(例えば、細網肉腫、リンパ肉腫、ホジキン病等)、消化器癌（例えば、胃癌、胆のう・胆管癌、膵臓癌、肝癌、結腸癌、直腸癌等）、乳癌、卵巣癌、筋骨格肉腫 (例えば、骨肉腫等)、膀胱癌、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病の急性転化を含む急性白血病等）、腎臓癌および前立腺癌等の治療薬として有用である。

ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤は、一種の化合物でもよく、または二種以上の化合物を別々にまたは混合して投与してもよい。
本明細書中、特に断りのない限り、「抗腫瘍剤Ａ」というときは「ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤」を意味するものとする。

本発明の抗腫瘍剤または医薬組成物は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを組み合わせてなるもの（即ち、併用剤）であり、投与時にヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを組み合わすことができるものであればよい。本発明の抗腫瘍剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを同時に製剤化して得られる単一の製剤であっても、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを別々に製剤化して得られる少なくとも二種の製剤を組み合わせたものであってもよい。

投与形態は、特に限定されず、例えば、（１）ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを含有する組成物、即ち、単一の製剤としての投与、（２）ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、（３）ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与（例えばヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗腫瘍剤Ａの順序での投与、あるいは逆の順序での投与）、（４）ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、（５）ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えばヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗腫瘍剤Ａの順序での投与、あるいは逆の順序での投与）等が挙げられる。

本発明の増強剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含有してなるものであり、投与時にヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを組み合わすことができるものであればよい。従って、本発明の増強剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含有するものであれば、抗腫瘍剤Ａを単一の製剤中に含有するものであってもよく、抗腫瘍剤Ａを含有しないものであっても併用剤として抗腫瘍剤Ａを別途投与すればよい。
投与形態は、特に限定されず、例えば、（１）ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとを単一の製剤中に含有する本発明の増強剤の投与、（２）本発明の増強剤と抗腫瘍剤Ａの同一投与経路での同時投与、（３）本発明の増強剤と抗腫瘍剤Ａの同一投与経路での時間差をおいての投与（例えば抗腫瘍剤Ａ、本発明の増強剤の順序での投与、あるいは逆の順序での投与）、（４）本発明の増強剤と抗腫瘍剤Ａの異なる投与経路での同時投与、（５）本発明の増強剤と抗腫瘍剤Ａの異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えば抗腫瘍剤Ａ、本発明の増強剤の順序での投与、あるいは逆の順序での投与）等が挙げられる。

本発明において、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と抗腫瘍剤Ａとの組合せの割合は、両者が単一製剤とされる場合、別個の製剤とされる場合のいずれにおいても、重量比率として、通常１：１００〜１００：１の範囲であり、１：１０〜１０：１の範囲が好ましい。

抗腫瘍剤Ａを二種以上の混合物とする場合、その配合比は特に限定されない。ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤と代謝拮抗物質系抗腫瘍剤の混合物とする場合は１：１００〜１００：１の範囲の配合比（重量比率）が好ましく、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤とタキサン系抗腫瘍剤の混合物とする場合は１：１００〜１００：１の範囲の配合比（重量比率）が好ましく、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤とタキサン系抗腫瘍剤の混合物とする場合は１：１００〜１００：１の範囲の配合比（重量比率）が好ましい。

本発明の抗腫瘍効果を増強させるために、ＡＴＲＡ（all-trans-retinoic acid）と併用して投与（例えば合剤として投与、別々の製剤として同時または前後別々に投与）することも好ましい。

本発明の医薬組成物、すなわち抗腫瘍剤Ａおよび／またはヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、有効成分としてヒストンデアセチラーゼ阻害剤、および／または抗腫瘍剤Ａを含有し、経直腸、経鼻、経肺、経膣、外用（局所）、経口または非経口（皮下、植込み、静脈内および筋肉内を含む）投与に適した固体、半固体または液体（錠剤、ペレット剤、トローチ剤、カプセル剤、坐剤、クリーム剤、軟膏剤、エアゾール剤、散剤、液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、注射液など）等の医薬製剤の形態で使用できる。

本発明の抗腫瘍効果増強剤は、有効成分としてヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含有し、経直腸、経鼻、経肺、経膣、外用（局所）、経口または非経口（皮下、植込み、静脈内および筋肉内を含む）投与に適した固体、半固体または液体（錠剤、ペレット剤、トローチ剤、カプセル剤、坐剤、クリーム剤、軟膏剤、エアゾール剤、散剤、液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、注射液など）等の医薬製剤の形態で使用できる。

本発明の抗腫瘍剤および抗腫瘍効果増強剤は、製薬目的で慣用されている種々の有機または無機担体、例えば賦形剤（例えばスクロース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウムなど）、縮合剤（例えばセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、スクロース、デンプンなど）、崩壊剤（例えばデンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウムなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、エアロシル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウムなど）、矯味剤（例えばクエン酸、メントール、グリシン、オレンジ末など）、保存剤（例えば安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベンなど）、安定化剤（クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸など）、懸濁剤（例えばメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウムなど）、分散剤（例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、希釈剤（例えば水など）、基材ワックス（例えばカカオバター、ポリエチレングリコール、白色ワセリンなど）を用いる常法によっても製造することができる。

本発明の抗腫瘍剤および抗腫瘍効果増強剤は、ヒトを含む哺乳動物に上記慣用の医薬製剤の形で、特に限定なく投与することができる。その中でも静脈内、筋肉内または経口投与するのが好ましい。

本発明における投与量は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤または抗腫瘍剤Ａをそれぞれ単独で投与した場合より低用量に設定することができる。
例えば、患者の体重および／または年令ならびに／または疾病の程度ならびに投与経路のような種々の要因によって適宜決定される。
例えば、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤として化合物Ａ、抗腫瘍剤Ａとしてシスプラチンを用いる場合は、通常、化合物Ａおよびシスプラチンを合わせた１日投与量は、静脈内投与の場合には、ヒトの体表面積１ｍ^２あたり通常１〜１０００ｍｇ、好ましくは５〜１００ｍｇ、更に好ましくは１０〜６０ｍｇで連続点滴投与して処置することができる。この場合、化合物Ａの１日投与量としては、ヒトの体表面積１ｍ^２あたり化合物Ａの量で０．１〜１００ｍｇ、好ましくは１〜５０ｍｇ、更に好ましくは５〜３０ｍｇであり、［前記化合物Ａおよびシスプラチンを合わせた投与量−化合物Ａの投与量］の用量でシスプラチンが投与される。

本発明には、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤とヒストンデアセチラーゼ阻害剤とを組み合わせてなる併用剤、および該併用剤を抗腫瘍剤として使用することができるまたは使用すべきであることを記載した該併用剤に関する記載物を含む、商業パッケージ；および、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含有する製剤、および該製剤をＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤およびタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤の抗腫瘍効果を増強するために使用することができるまたは使用すべきであることを記載した該製剤に関する記載物を含む、商業パッケージが含まれる。

実施例
本発明の有用性を示した薬理試験結果を以下に示す。
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤としてＦＫ２２８、ＤＮＡに架橋を形成し抗腫瘍効果を示す抗腫瘍剤としてシスプラチン（ＣＤＤＰ）、代謝拮抗物質系抗腫瘍剤として５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、タキサン系抗腫瘍剤としてパクリタキセルを用い、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と各腫瘍剤の併用効果を評価した。評価試験は、ヒト前立腺癌細胞ＤＵ−１４５（ＡＴＣＣ(AMERICAN TYPE CULTURE COLLECTION)より入手）を１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地で培養したものを使用した。

試験例１：ＦＫ２２８とシスプラチンの併用効果（同時添加）
各前立腺癌細胞（６×１０^３個/ウェル）を９６ウェルプレートで２４時間培養後、種々の濃度になるようにＦＫ２２８（０．１ｎＭ、０．２ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭおよび５０ｎＭ）、シスプラチン（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、５００ｎＭ、１０００ｎＭ、２０００ｎＭおよび５０００ｎＭ）、あるいは両薬剤（前記濃度の組み合わせの同時添加）を添加した。２４時間培養後、１％ＦＢＳ（Fetal Bovine Serum）含有ＰＢＳ（−）（phosphate-buffered saline (calcium magnesium free)）で細胞を２回洗浄した。その後薬物を含まない培地と交換し、さらに９６時間の培養を行った。ＦＫ２２８は使用前にエタノールに溶解し培地で希釈し、シスプラチンは使用前に培地で希釈した。

各処理による抗腫瘍活性の評価はＭＴＴアッセイにより行った。すなわち、3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾニウムブロミド (ＭＴＴ)を２．５ｍｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳに溶解し、各ウェルに２０μｌ加え４時間培養した。生細胞により形成されたホルマザンを酸性イソプロパノール１００μｌを加え溶解し、５８０ｎｍの波長で各ウェルの吸光度を測定した。
無処置の細胞における吸光度(ＯＤ)を１００％として、各薬剤単独あるいは併用での抗腫瘍活性の濃度反応曲線を作成した。

ＦＫ２２８とシスプラチンの併用効果はＳｔｅｅｌらの方法（Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 5: 85-91, 1979.）に従って、アイソボログラム解析で評価した。すなわち、各薬剤単独の濃度反応曲線より、併用した際の８０％増殖抑制濃度(ＩＣ_８０)を理論的に求めグラフ上に曲線で示した。実際の併用でＩＣ_８０となった薬剤濃度をプロットした(図１参照)。プロットが曲線に囲まれた範囲（ｂ）に位置した場合には相加効果があると判定し、それより原点に近い範囲（ａ）に位置した場合には相乗効果があると判定し、原点から遠い範囲（ｃ）に位置した場合には拮抗効果があると判定した。単剤でのＩＣ_８０値を１として相対値で表現した。
試験例１のアイソボログラムを図２に示す。ＦＫ２２８とシスプラチンの併用（同時添加）により、抗腫瘍活性は、顕著に増強した。

試験例２：ＦＫ２２８とシスプラチンの併用効果（連続添加）
各前立腺癌細胞（６×１０^３個/ウェル）を９６ウェルプレートで２４時間培養後、種々の濃度になるようにＦＫ２２８（０．１ｎＭ、０．２ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭおよび５０ｎＭ）またはシスプラチン（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、５００ｎＭ、１０００ｎＭ、２０００ｎＭおよび５０００ｎＭ）を添加した。２４時間培養後、１％ＦＢＳ含有ＰＢＳ（−）で細胞を２回洗浄した。
洗浄後、両薬剤の組み合わせによる連続添加（ＦＫ２２８⇒シスプラチンまたはシスプラチン⇒ＦＫ２２８の順序で各濃度の組み合わせとなるように添加）で、ＦＫ２２８またはシスプラチンを添加した。さらに２４時間培養し、１％ＦＢＳ含有ＰＢＳ（−）で２回洗浄した。薬物を含まない培地と交換し、さらに細胞を７２時間培養した。試験例１と同様な方法で併用効果を評価した。
試験例２のアイソボログラムを図３（ＦＫ２２８⇒シスプラチンの添加順序）および図４（シスプラチン⇒ＦＫ２２８の添加順序）に示す。ＦＫ２２８とシスプラチンの併用（連続添加）は何れの添加順序（ＦＫ２２８⇒シスプラチンまたはシスプラチン⇒ＦＫ２２８の順序）においても、顕著な抗腫瘍活性の増強が認められた。

試験例３：ＦＫ２２８と５−フルオロウラシルの併用効果（同時添加）
シスプラチンの代わりに各種濃度の５−フルオロウラシル（５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭおよび５００μＭ）を添加したこと以外は、試験例１と同様に行い、併用効果を評価した。５−フルオロウラシルは添加前に培地で希釈した。
試験例３のアイソボログラムを図５に示す。ＦＫ２２８と５−フルオロウラシルの併用（同時添加）は、抗腫瘍活性を増強した。

試験例４：ＦＫ２２８と５−フルオロウラシルの併用効果（連続添加）
シスプラチンの代わりに各種濃度の５−フルオロウラシル（５−フルオロウラシル⇒ＦＫ２２８の添加順序の場合は、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭおよび５００μＭ；ＦＫ２２８⇒５−フルオロウラシルの添加順序の場合は、１００μＭ、２００μＭ、５００μＭ、１０００μＭ、２０００μＭ、５０００μＭおよび１００００μＭ）を添加したこと以外は、試験例２と同様に行い、併用効果を評価した。５−フルオロウラシルは添加前に、培地で希釈した。
試験例４のアイソボログラムを図６（ＦＫ２２８⇒５−フルオロウラシルの添加順序）および図７（５−フルオロウラシル⇒ＦＫ２２８の添加順序）に示す。ＦＫ２２８と５−フルオロウラシルの併用（連続添加）は何れの添加順序（ＦＫ２２８⇒５−フルオロウラシルまたは５−フルオロウラシル⇒ＦＫ２２８の順序）においても、抗腫瘍活性を増強した。

試験例５：ＦＫ２２８とパクリタキセルの併用効果（パクリタキセル⇒ＦＫ２２８の添加順序の連続添加）
シスプラチンの代わりに各種濃度のパクリタキセル（０．２ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭおよび２０ｎＭ）を、パクリタキセル⇒ＦＫ２２８の順序で添加したこと以外は、試験例２と同様に行い、併用効果を評価した。パクリタキセルは添加前にエタノールで溶解し培地で希釈した。
試験例５のアイソボログラムを図８に示す。ＦＫ２２８とパクリタキセルの併用（パクリタキセル⇒ＦＫ２２８の順序の連続添加）は、抗腫瘍活性を増強した。

製剤例１
ＦＫ２２８ ２０ｍｇ
エタノール ２０ｍｌ
ＦＫ２２８（２０ｍｇ）をエタノール（２０ｍｌ）に溶解・希釈し注射用製剤を得る。

製剤例２
ＦＫ２２８ ２０ｍｇ
シスプラチン １００ｍｇ
生理食塩水 １００ｍｌ
ＦＫ２２８（２０ｍｇ）およびシスプラチン（１００ｍｇ）を生理食塩水（１００ｍｌ）に溶解・希釈し注射用製剤を得る。

製剤例３
ＦＫ２２８ ２０ｍｇ
５−フルオロウラシル ５００ｍｇ
エタノール １００ｍｌ
ＦＫ２２８（２０ｍｇ）および５−フルオロウラシル（５００ｍｇ）をエタノール（１００ｍｌ）に溶解・希釈し注射用製剤を得る。

製剤例４
ＦＫ２２８ ２０ｍｇ
パクリタキセル ２０ｍｇ
エタノール ４０ｍｌ
ＦＫ２２８（２０ｍｇ）およびパクリタキセル（２０ｍｇ）をエタノール（４０ｍｌ）に溶解・希釈し注射用製剤を得る。

本発明がその好ましい態様を参照して提示または記載される一方、本明細書中において、添付の請求の範囲で包含される発明の範囲を逸脱することなく、形態や詳細の様々な変更をなし得ることは当業者に理解されるであろう。本明細書中に示されまたは参照されたすべての特許、特許公報およびその他の刊行物は、参照によりその全体が取り込まれる。

図１は、解析の概念を示すグラフである。 図２は、ＤＵ−１４５細胞に対するＦＫ２２８とシスプラチンの併用（同時添加）におけるアイソボログラム解析を示すグラフである（実施例１）。 図３は、ＤＵ−１４５細胞に対するＦＫ２２８とシスプラチンの併用（ＦＫ２２８⇒シスプラチンの順序の連続添加）におけるアイソボログラム解析を示すグラフである（実施例２）。 図４は、ＤＵ−１４５細胞に対するＦＫ２２８とシスプラチンの併用（シスプラチン⇒ＦＫ２２８の順序の連続添加）におけるアイソボログラム解析を示すグラフである（実施例２）。 図５は、ＤＵ−１４５細胞に対するＦＫ２２８と５−フルオロウラシルの併用（同時添加）におけるアイソボログラム解析を示すグラフである（実施例３）。 図６は、ＤＵ−１４５細胞に対するＦＫ２２８と５−フルオロウラシルの併用（ＦＫ２２８⇒５−フルオロウラシルの順序の連続添加）におけるアイソボログラム解析を示すグラフである（実施例４）。 図７は、ＤＵ−１４５細胞に対するＦＫ２２８と５−フルオロウラシルの併用（５−フルオロウラシル⇒ＦＫ２２８の順序の連続添加）におけるアイソボログラム解析を示すグラフである（実施例４）。 図８は、ＤＵ−１４５細胞に対するＦＫ２２８とパクリタキセルの併用（パクリタキセル⇒ＦＫ２２８の順序の連続添加）におけるアイソボログラム解析を示すグラフである（実施例５）。

Claims (13)

1. シスプラチン、５−フルオロウラシル、およびパクリタキセル及びドセタキセルから選ばれるタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤と組み合わせて併用投与されるように用いられることを特徴とする、式（Ｉ）
   

   

   で表される化合物またはその医薬として許容される塩であるヒストンデアセチラーゼ阻害剤を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
2. ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が式（II）
   

   

   で表される化合物またはその医薬として許容される塩である、請求項１に請求される抗腫瘍剤。
3. シスプラチンと組み合わせて併用投与されるように用いられることを特徴とする、請求項１または２に請求される抗腫瘍剤。
4. ５−フルオロウラシルと組み合わせて併用投与されるように用いられることを特徴とする、請求項１または２に請求される抗腫瘍剤。
5. パクリタキセルおよびドセタキセルから選ばれるタキサン系抗腫瘍剤と組み合わせて併用投与されるように用いられることを特徴とする、請求項１または２に請求される抗腫瘍剤。
6. パクリタキセルと組み合わせて併用投与されるように用いられることを特徴とする、請求項５に請求される抗腫瘍剤。
7. 肺癌、悪性リンパ腫、消化器癌、乳癌、卵巣癌、筋骨格肉腫、膀胱癌、白血病、腎臓癌または前立腺癌に対する抗腫瘍剤である、請求項１〜６のいずれかに請求される抗腫瘍剤。
8. 式（Ｉ）
   

   

   で表される化合物またはその医薬として許容される塩であるヒストンデアセチラーゼ阻害剤を有効成分として含有する、シスプラチン、５−フルオロウラシル、およびパクリタキセル及びドセタキセルから選ばれるタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤の抗腫瘍効果増強剤。
9. ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が式（II）
   

   

   で表される化合物またはその医薬として許容される塩である、請求項８に請求される増強剤。
10. シスプラチン、５−フルオロウラシル、およびパクリタキセル及びドセタキセルから選ばれるタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤と、式（Ｉ）
    

    

    で表される化合物またはその医薬として許容される塩であるヒストンデアセチラーゼ阻害剤を有効成分とする抗腫瘍剤。
11. ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が式（II）
    

    

    で表される化合物またはその医薬として許容される塩である、請求項１０に請求される抗腫瘍剤。
12. シスプラチン、５−フルオロウラシル、およびパクリタキセル及びドセタキセルから選ばれるタキサン系抗腫瘍剤からなる群から選ばれる少なくとも一種の抗腫瘍剤と組み合わせて併用投与されるように用いられることを特徴とする抗腫瘍剤を製造するための、式（Ｉ）
    

    

    で表される化合物またはその医薬として許容される塩であるヒストンデアセチラーゼ阻害剤の使用。
13. ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が式（II）
    

    

    で表される化合物またはその医薬として許容される塩である、請求項１２に請求される使用。

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