JP4862120B2 - Benz-indole and benzo-quinoline derivatives as prodrugs for tumor therapy - Google Patents

Abstract

Compounds of the general formula (I) or (IA) in which X is H, Y is a leaving group, R1 preferably being an aromatic DNA binding subunit are prodrug analogues of duocarmycin. The compounds are expected to be hydroxylated at the carbon atom to which C is joined, by cytochrome P450, in particular by CYP1B1, expressed at high levels in tumors. The prodrug is expected to be activated preferentially in tumor cells, which it will act as a DNA alkylating agent preventing cell division.

Description

【０００９】
Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（２０００），６５／１３，４１０１−４１１１において、そのベンゾジヒドロインドール誘導体から得られる対応する環閉鎖（ｒｉｎｇ ｃｌｏｓｅｄ）インドリン化合物（ＣＢＩ誘導体）は、ＣＣ−１０６５のＤＮＡ−結合サブユニットへ結合され、ＤＮＡアルキル化活性を有することが示された。ベンズ部分がメトキシまたはシアノで置換されるアルキル化サブユニット前駆体のアナログがまた、合成された。同様の化合物が、ＷＯ−Ａ−９７４５４１１およびＷＯ−Ａ−９７３２８５０において記載される。‘４１１において、ベンズ部分は、７−位にてシアノによって置換されるか、またはシクロプロパン基がジフルオロ置換され得る。‘８５０において７−メトキシＣＢＩ化合物が記載される。
【００１０】
ＷＯ−Ａ−９８１１１０１において、ＣＢＩ型化合物のＢ環におけるフェノール性ヒドロキシル基は、アミノ、ニトロまたはチオール−ベースの基によって置換される。
【００１１】
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９１），１１３，３９８０−３９８３においてＢｏｇｅｒ ｅｔ ａｌは、ＤＮＡアルキル化の選択性に寄与するＣＣ−１０６５アナログの特徴を同定するための研究を記載する。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて試験された化合物は、２，３−ジヒドロインドールに基づくアルキル化サブユニットを有し、また６−デスヒドロキシアナログを含んでいた。これらは、６−ヒドロキシ化合物のものよりも１０⁴倍高い濃度であるけれども、少しの（ｓｏｍｅ）ＤＮＡアルキル化特性を有することが示された。
【００１２】
本発明は、アナログＣＣ−１０６５（これは、アルキル化サブユニットのＢ環中にヒドロキシル基を有さず、それゆえそれら自体ではＤＮＡアルキル化剤として実質的に不活性である）の前駆体に関する。
【００１３】
酵素ＣＹＰ１Ｂ１（生体異物代謝酵素であるシトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）ファミリーのメンバー）が広範囲なヒトガン（乳房、結腸、肺、食道、皮膚、リンパ節、脳および精巣のガンを含む）において高頻度に発現すること、そしてそれが正常組織においては検出できなかったことが報告された（Ｍｕｒｒａｙ，Ｇ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．，１５ Ｊｕｌｙ １９９７，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７ｍ ３０２６−３０３１およびＷＯ−Ａ−９７１２２４６）。これは、腫瘍細胞におけるシトクロムＰ４５０アイソフォームの発現が、腫瘍細胞におけるＣＹＰ酵素によって選択的に活性化され得る新規の抗腫瘍薬の開発のための分子標的を提供するという結論を導いたものの、薬物の例は与えられなかった。多くの他のＣＹＰアイソフォームは、種々の腫瘍において発現することが示された。腫瘍において発現されるＣＰＹの多くは、Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ， ＬＨ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１４（６），４７３−４８６において言及される。
【００１４】
ＷＯ−Ａ−９９／４００５６において、スチレン−およびカルコン−誘導体のプロドラッグが記載される。このプロドラッグのｉｎ ｓｉｔｕにおいて形成される各々のヒドロキシル化型は、強力なチロシンキナーゼ（ＴＫ）阻害剤である。ＴＫ活性の阻害は、腫瘍阻害および細胞破壊に寄与する。このプロドラッグは、ＣＹＰ１Ｂ１酵素を発現するミクロソーム調製物によって活性化され、また同酵素を発現する細胞系に対して細胞毒性活性を有する一方、この酵素を発現しない細胞系に対して非常に低い細胞毒性活性を有することが示された。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、ＣＹＰ酵素（特に、腫瘍において高レベルで発現する酵素）により、ｉｎ ｓｉｔｕにおいてヒドロキシル化されることが予測されるプロドラッグの新規なクラスに関する。特に、このプロドラッグは、ＣＹＰ１Ｂ１酵素によって代謝可能であると考えられている。その化合物のいくつかは新規である。本発明は、広範囲な化合物の最初の治療的使用、およびそこで使用されるそれらの合成物ならびに中間体に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の第１の局面に従って、動物の治療による処置の方法において使用するための組成物の製造における一般式ＩまたはＩＡの化合物あるいはその塩の新規な使用を提供する：
【００１７】
【化２】

【００１８】
（ここで、ＸはＨであり；
Ｙは、脱離基であり
Ｒ¹は、−Ａｒ、−ＮＨ₂、ＯＲ⁷またはＲ⁷であり；
Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、−ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁶、−ＮＲ¹⁶ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁶ ₃；−ＮＨＣＯＲ⁸、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ⁹、−ＮＨＣＯＯＲ⁹および−ＣＯＯＲ⁹から選択され；
Ｒ⁷、Ｒ⁸およびＲ⁹は、独立して、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
Ａｒは、
【００１９】
【化３】

【００２０】
から選択され（ここで、Ｂは、ＮまたはＣＲ¹⁰であり；
Ｒ¹⁰は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁴、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁵、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁵および−ＣＯＯＲ¹⁵およびＨから選択され；
Ｚは、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＨであり；
各Ｒ¹¹は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁶、−ＮＲ¹⁶ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁶ ₃、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁴、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁵、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁵およびＣＯＯＲ¹⁵から選択され；
ｎは、０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ¹²は、Ｈ、−ＣＯＡｒ¹、−ＣＯＮＨ₂、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ¹⁵または−ＣＯＲ¹⁵であり；
各Ｒ¹³は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁶、−ＮＲ¹⁶ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁶ ₃、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁴、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁵、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁵および−ＣＯＯＲ¹⁵から選択され；
ｍは、０、１または２であり；
Ｒ¹⁴は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、Ｃ_7-12アラルキル、Ａｒ¹およびリガンドから選択され；
Ｒ¹⁵は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
各Ｒ¹⁶は、独立して、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択され；そして
Ａｒ¹は、Ａｒと同じ基から選択される（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ¹¹またはＲ¹³が基Ａｒ¹を含む。）））
Ａｒ¹は、好ましくは、
【００２１】
【化４】

【００２２】
である。
【００２３】
この化合物は獣医学的（ｖｅｔｅｒｎａｒｙ）用途も有するかも知れないが、処置される動物は、概して、ヒトである。処置される適応症（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）は、概して、ガン（腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌、および特に、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚部（ｃｅｒｖｉｘ）、胆嚢、ガングリア（ｇａｎｇｌｉａ）、胃腸管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ）、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺（ｔｈｙｒｏｉｄ）および子宮のガンを含む）である。
【００２４】
腫瘍は、例えば、高レベルのＣＹＰ１Ｂ１を発現する腫瘍として定義され得る。
【００２５】
本発明において、脱離基Ｙは、例えば、求核置換反応における有用性を有する基の中にある。脱離基の好適な例は、−ＯＣＯＯＲ¹⁷、−ＯＣＯＮＨＲ¹⁸、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたは−ＯＳＯＯＲ¹⁹（ここで、Ｒ¹⁷、Ｒ¹⁸およびＲ¹⁹は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択される）である。最も好ましくは、脱離基はハロゲン原子、好ましくは塩素である。
【００２６】
フェニル、アラルキルおよびヘテロアリール基における任意の置換基は、Ｃ_1-4−アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ_1-4−アルコキシ、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁶、−ＮＲ¹⁶ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁶ ₃、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＲ¹⁴、−ＣＯＮＨＲ¹⁵、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁵、ＣＯＯＲ¹⁵などである。
【００２７】
本発明において、用語リガンドは、特異的標的化特性（例えば、酵素または遺伝子−指向型（ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｇｅｎｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ）酵素プロドラッグ型環境において有用である）を有する基を含む。リガンドは、オリゴペプチド、ビオチン、アビジン、またはストレプトアビジン、ポリマー基、オリゴヌクレオチドまたはタンパク質であり得る。好ましくは、それは、抗体またはフラグメント、抗原、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはアビジン、ストレプトアビジンおよびビオチンのうちの１つ（すなわち、それは、特異的結合対の１つの構成成分である）のように特異的結合特性を有する。あるいは、それは、受動標的化のためにデザインされる基（ポリマー基のような）、または安定性を持続するまたは免疫原性を減少させるようデザインされる基（親水性基のような）であり得る。ＵＳ−Ａ−５８４３９３７は、これらの型の活性物（ａｃｔｉｖｅｓ）へ複合体化させる好適なリガンドおよびその複合体化を実行するための方法を開示する。
【００２８】
薬学的に活性な化合物において、Ｒ¹はＯＲ⁷以外である。
【００２９】
一般的に、最適化されたＤＮＡ結合能のために、一般式Ｉの化合物において、基Ｒ¹は基Ａｒである。しばしば、この化合物は、互いに連結する２つの芳香族基を含み得る。このような化合物において、Ａｒ基の基Ｒ¹¹の１つ、または基Ｒ¹²は、場合により、基Ａｒ¹である。いくつかの化合物について、３つ以上のこのような芳香族基が連結されることが所望され得る一方、１つの基Ａｒ及び１つの基Ａｒ¹が存在することが好ましい。従って、ピロロ−ジヒドロインドール型の基である基Ａｒ¹において、基Ｒ¹²は基−ＣＯＡｒ¹以外であるべきである。他の型の基の１つである基Ａｒ¹において、好ましくは、置換基Ｒ¹¹またはＲ¹³が存在しないべきであるか、場合により、あるいは何らかの置換基が存在する場合、このような置換基は基Ａｒ¹を含むべきではない。
【００３０】
本発明の１つの実施形態に従って、置換基Ａｒは、基
【００３１】
【化５】

【００３２】
である。
【００３３】
このような基Ａｒにおいて、Ｂは、好ましくはＣＲ¹⁰である。Ｒ¹⁰は、好ましくはＨである。フラン（Ｚ＝Ｏ）およびチオフェン（Ｚ＝Ｓ）アナログは、ＤＮＡアルキル化ユニットへの複合体化のために生成され、且つ有用なＤＮＡ結合特性を有し得るけれども、Ｚの定義は、好ましくはＮＨである。同様に基Ａｒ¹において、基ＢおよびＺは、同様の好ましい基の中から選択される。好ましくは、ｎが少なくとも１であり且つ基Ｒ¹¹の１つが−ＮＨＣＯＡｒ¹である。この実施形態においてＡｒ¹は、好ましくは、基
【００３４】
【化６】

【００３５】
（ここで、ＢおよびＺはＡｒにおける場合と同じ）である。
【００３６】
別の実施形態において、置換基Ａｒは、基
【００３７】
【化７】

【００３８】
である。
【００３９】
ＡｒにおけるＲ¹²は、好ましくは、−ＣＯＯＲ¹⁵以外であり、より好ましくは、基−ＣＯＡｒ¹（ここで−Ａｒ¹は、好ましくは、同じ型の基である）である。
【００４０】
基ＡｒおよびＡｒ¹の両方の基において、インドール型基におけるｍは、好ましくはゼロである。
【００４１】
ＡｒおよびＡｒ¹において、いくつかの置換基Ｒ¹¹が存在してもよい。最も好ましくは、このような置換基は、Ｃ_1-4−アルコキシ基の中から選択される。
【００４２】
式Ｉの化合物において、ＤＮＡアルキル化サブユニットのコアインドール環は、好ましくはベンゼン環（Ｒ²は水素である）において非置換であり、一方、ベンズ環は、非置換であり（Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は、全て水素原子であり）得るか、またはＲ³〜Ｒ⁶の１つ以上は、シアノ基、アルコキシ基、基−ＣＯＯＲ¹⁰、またはＣ_1-4−アルキル基（好ましくはメチル）を表す。
【００４３】
１つの好ましい実施形態においてＲ⁵は、アルコキシ、好ましくはメトキシであり、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁶は、全てＨである。
【００４４】
別の実施形態において、Ｒ⁵はシアノであり、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁶はＨである。
【００４５】
式Ｉの化合物において、ＸはＨである。化合物のヒドロキシル化は、Ｘが結合する（ａｔｔａｃｈｅｄ）炭素原子においてｉｎ ｓｉｔｕで起こり、それによりＤＮＡアルキル化剤として作用することを可能にする化合物が活性化されると信じられている。
【００４６】
一般式Ｉの化合物およびその塩の多くは、新規の化合物であると考えられる。本発明のさらなる局面に従って、一般式ＩＩの新規化合物またはその塩が提供され、
【００４７】
【化８】

【００４８】
（ここで、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁵およびＲ⁶は、上記に定義されるとおりであり；
Ｘ¹は、Ｈであり；
Ｙ¹は、脱離基であり；
Ｒ²⁰は、−Ｒ⁷、−ＯＲ⁷、ＮＨ₂またはＡｒ²であり；
Ｒ⁷は、上記に定義されるとおりであり；
Ａｒ²は、
【００４９】
【化９】

【００５０】
から選択され（ここで、Ｂ¹は、ＮまたはＣＲ²²であり；
Ｚ¹は、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＲ²¹であり；
Ｒ²¹は、アミン保護基であり；
各（ｔｈｅ ｏｒ ｅａｃｈ）Ｒ²²は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ Ｃ_1-4アルキル、ＮＯ₂、−ＮＨＲ²¹、−ＮＨＲ²⁶、−ＮＲ²⁶ ₂、−Ｎ⁺Ｒ²⁶ ₃、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ²⁵、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ⁷および−ＣＯＯＲ²⁵から選択され；
ｐは、０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ²³は、Ｈ、ＣＯＡｒ³、−ＣＯＮＨ₂、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ⁷または−ＣＯＲ⁷であるか、あるいはアミン保護基であり；
各（ｔｈｅ ｏｒ ｅａｃｈ）Ｒ²⁴は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨＲ²¹、−ＮＨＲ²⁶、−ＮＲ²⁶ ₂、−Ｎ⁺Ｒ²⁶ ₃、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ²⁵、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ⁷、および−ＣＯＯＲ⁷から選択され；
ｑは０、１または２であり；
Ｒ²⁵は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアルキル、Ｃ_7-12−アラルキル Ａｒ³およびリガンドから選択され；
Ｒ²⁶は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択され；そして
Ａｒ³は、Ａｒ²と同じ基から選択される（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ²²またはＲ²⁴が基Ａｒ³を含む）））。
【００５１】
Ａｒ³は、好ましくは、
【００５２】
【化１０】

【００５３】
である。
【００５４】
式ＩＩまたはＩＩＡの化合物（ここで、第一級または第二級アミン窒素原子は保護される）は、一般的に、薬学的組成物において使用される前に脱保護される。アミン保護基Ｒ²¹またはＲ²³の例は、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、第３級ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、フルオレニル−Ｎ−メトキシ−カルボニル（ＦＭＯＣ）および２−［ビフェニリル−（４）］−プロピル−２−オキシカルボニルである。この分子において、１を超えるアミン基が保護される場合、その保護基は、同一であってもよいし、異なってもよい。特に一般式ＩＩおよびＩＩＡの有用な一連の化合物において、Ｒ²⁰はＯＲ⁷であり、Ｒ⁷はＲ¹ＣＯと異なるアミン保護基である。別の好ましいシリーズにおいて、Ｒ²⁰はＯＲ⁷以外である。
【００５５】
一般式ＩＩおよびＩＩＡの化合物において、Ｒ²⁰は、好ましくはＡｒ²であり、および／またはＹ¹は好ましくは、−ＯＣＯＯＲ¹⁷、−ＯＣＯＮＨＲ¹⁸、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたは−ＯＳＯＯＲ¹⁹（ここでＲ¹⁷、Ｒ¹⁸、およびＲ¹⁹は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択される）から選択される。最も好ましくは、脱離基はハロゲン原子、好ましくは塩素である。
【００５６】
本発明は、さらに、式ＩまたはＩＡの化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。薬学的組成物は、筋肉内、腹腔内、肺内、経口または、もっとも好ましくは、静脈内投与に適しているかも知れない。この組成物は、例えば制御または遅延した放出のために、好適なマトリックスを含む。この組成物は、溶液、固体（例えば、粉末）、タブレットまたはインプラントの形態をとってもよいし、固体または溶解形態で式Ｉの化合物を含んでもよい。この化合物は、例えば液体処方物において、微粒子のドラッグデリバリーシステムに組み込まれ得る。好適な賦形剤の具体例としては、ラクトース、スクロース、マンニトール、およびソルビトール；トウモロコシ、コムギ、コメ、ジャガイモ、または他の植物に由来するスターチ；セルロース（メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムのような）；ガム類（アラビアおよびトラガントを含む）；およびタンパク質（ゼラチンおよびコラーゲンのような）が挙げられる。所望されるならば、崩壊剤または可溶化剤（架橋結合されたポリビニルピロリドン、寒天、およびアルギン酸またはその塩（アルギン酸ナトリウムのような）のような）が添加されてもよい。固体組成物は、粉末およびゲルの形態をとってもよいが、より便利に、例えばタブレット、カシェ剤またはカプセル（スパンスルを含む）のような成形型（ｆｏｒｍｅｄ ｔｙｐｅ）をとる。あるいは、リポソーム、ナノソーム、およびナノ粒子を含むより特殊化された型の処方物である。
【００５７】
式Ｉの化合物は、Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９７，ｏｐ．ｃｉｔによって要約されるものに類似する技術を用いて、合成され得る。一連の工程においてＤＮＡアルキル化サブユニットを形成し、そしてジヒドロ−ピロールまたはテトラハイドロキノリン（Ｃ）環の窒素原子を介して、分子の残りにこれを結合させるのが便利である。ＤＮＡアルキル化サブユニットは、Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９７ｏｐ．ｃｉｔ．に記載のように合成されたＤＮＡ結合サブユニット（例えば、その文献に記載されるＰＤＥ−ＩおよびＰＤＥ−ＩＩサブユニット）へ複合体化され得る。ＤＮＡ結合サブユニットは、基ＡｒおよびＡｒ¹を含むものである。
【００５８】
本発明のさらなる局面に従って、
式ＩＩＩまたはＩＩＩＡの化合物
【００５９】
【化１１】

【００６０】
（ここで、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は上記に定義されるとおりであり；
Ｘ²は、Ｈであり；そして
Ｙ²は、脱離基あるいはヒドロキシルまたは保護ヒドロキシル基である）
が、一般式ＩＶ
Ｒ²⁷ＣＯＹ³ ＩＶ
（ここで、Ｒ²⁷は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびＡｒ⁴から選択され；
Ａｒ⁴は
【００６１】
【化１２】

【００６２】
から選択され（ここで、Ｂ²は、ＮまたはＣＲ³²であり；
Ｚ²はＯ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−またはＮＲ³³であり；
各（ｔｈｅ ｏｒ ｅａｃｈ）Ｒ²⁸は、Ｃ_1-4−アルコキシ、Ｃ_1-4−アルキル、ＮＯ₂、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＲ³³、−ＮＨＲ³⁵、−ＮＲ³⁵ ₂、−Ｎ⁺Ｒ³⁵ ₃−、−ＮＨＣＯＲ³⁴、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ³⁶および−ＣＯＯＲ³⁶から選択され；
ｒは０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ²⁹は、アミン保護基であり；
Ｒ³⁰は、アミン保護基、−ＣＯＮＨ₂、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ³⁶または−ＣＯＡｒ⁵であり；
各（ｔｈｅ ｏｒ ｅａｃｈ）Ｒ³¹は、Ｃ_1-4−アルコキシ、Ｃ_1-4−アルキル、ＮＯ₂、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＲ³³、−ＮＨＲ³⁵、−ＮＲ³⁵ ₂、−Ｎ⁺Ｒ³⁵ ₃−、−ＮＨＣＯＲ³⁴、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ³⁶および−ＣＯＯＲ³⁶から選択され；
ｓは０、１または２であり；
Ｒ³²は、Ｈ、Ｃ_1-4−アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、ＮＯ₂、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＲ⁵³、−ＮＨＲ³⁵、−ＮＨＲ³⁵ ₂、−Ｎ^TＲ³⁵ ₃、−ＮＨＣＯＲ³⁴、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ³⁶およびＣＯＯＲ³⁶から選択され；
Ｒ³³は、アミン保護基であり；
Ｒ³⁴は、Ａｒ⁵、Ｃ_1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
Ｒ³⁵は、Ｃ_1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択され；
Ｒ³⁶は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
Ａｒ⁵はＡｒ⁴と同じ基から選択され
Ｙ³は脱離基である（但し、任意の１つの環における多くとも１つのＲ²⁸またはＲ³¹がＡｒ⁵を含む））の化合物と反応される、新規な合成方法が提供される。
【００６３】
Ａ⁵は、好ましくは、
【００６４】
【化１３】

【００６５】
である。
【００６６】
Ｙ³は、例えば、Ｙについて上記に挙げた好ましい脱離基の中から選択される。最も好適には、Ｙ³の定義は、Ｃｌである。あるいは、基Ｙ³はＯＨであり得る。この場合、カップリング反応を補助するカップリング剤を含むことが必要であり得る。
【００６７】
一般式ＩＩＩまたはＩＩＩＡの化合物とカルボン酸または一般式ＩＶの誘導体の間の反応は、このようなカップリングを起こさせる条件下において、行われる。このような条件は、ペプチド結合の形成のために一般的に使用される（例えば、ペプチド合成方法において使用されるような）条件に似ている。
【００６８】
Ｙ²は、ヒドロキシまたは保護ヒドロキシ基あるいは脱離基（これは、Ｙと同じであり得るか、または続く工程においてＹへ転換され得る）である。
【００６９】
カップリングプロセスの後、１つ以上の保護アミン基を脱保護することが所望され得る。任意のこのようなアミン基を介して、例えば他の誘導体化剤（ｄｅｒｉｖａｔｉｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）（グリコシル化合物、ペプチド、ポリマーなど）を用いて、更なる反応が所望される場合、続く反応が起こるもののみを脱保護し、一方他のアミン基を保護形態に保持することが所望される。保護および脱保護のプロトコル並びに適切なアミン保護基の選択ならびにの選択は、ペプチド化学において一般的に利用される技術を用いてなされる。
【００７０】
一般式ＩＩＩまたはＩＩＩＡの中間体のいくつかが新規の化合物であり得ると考えられる。新規の化合物は、一般式ＶまたはＶＡ
【００７１】
【化１４】

【００７２】
（ここで、Ｒ³⁸、Ｒ³⁹、Ｒ⁴⁰、Ｒ⁴¹およびＲ⁴²は、Ｈ、Ｃ_1-4−アルキル、−ＯＨ、Ｃ_1-4−アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ₂、ＮＨＲ⁴³、−ＮＨＣＯＲ⁴⁴、−ＮＲ⁴⁵ ₂、−Ｎ⁺Ｒ⁴⁵ ₃−、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ⁴⁶および−ＣＯＯＲ⁴⁶から選択され、
Ｘ²は、Ｈであり；
Ｙ²は、脱離基あるいはヒドロキシルもしくは保護ヒドロキシル基であり；
Ｒ³⁷は、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｒ⁴³は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリール、アミン保護基から選択され；
Ｒ⁴⁴は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
各Ｒ⁴⁵は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択され；そして
Ｒ⁴⁶は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択される）
を有し得る。
【００７３】
一般式ＩＩＩの化合物において、カルボン酸誘導体と反応する準備のできた化合物（例えば一般式ＩＶ）において、Ｒ²⁴はＨである。このような化合物についての前駆体は、保護形態における環窒素原子を有し、すなわちここで、Ｒ³⁷は保護基を表す。
【００７４】
式Ｖの化合物において、基Ｙ²は、脱離基Ｙについて上記に定義されたものの中から選択され得る。基Ｙ²の性質は、式ＩＩＩ／Ｖの化合物が次の工程において、例えば、一般式ＩＶの化合物と反応するはずである試薬の性質を考慮して、基Ｙ²が不活性化されず且つ式ＩＩＩまたはＶの化合物のダイマーを形成しないように、選択されるべきである。脱離基Ｙ²の好適な例は、ＣｌおよびＢｒである。
【００７５】
式ＩＩＩまたはＩＩＩＡおよびＶまたはＶＡの化合物は、アミン基の置換基に対してオルト位の炭素原子における脱離基置換基Ｙ⁴、および基−ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨＹ⁵（ここで、アニリン誘導体は、環化条件下において反応される）であるＮ−置換基を有するアニリン化合物を出発物質として使用して、触媒の存在下で、環化工程を含む予備工程において、調製され得、ジヒドロピロールあるいはジ−またはテトラヒドロキノリン環が形成される。このような反応のための出発化合物は、一般式ＶＩ
【００７６】
【化１５】

【００７７】
（ここで、Ｒ³⁸〜Ｒ⁴²およびＸ²は、式ＩＶの化合物における場合と同じものであり；
Ｒ⁴⁷は、アミン保護基であり、
Ｚ¹およびＺ²のうち一方がＹ⁵であり且つ他方がＨであり；
Ｙ⁵は、Ｙ²と異なるか、または同じ脱離基であり；そして
Ｙ⁴は、ラジカル脱離基である）
によって表され得る。
【００７８】
ジヒドロピロール環を形成するための環化について、基Ｚ¹はＹ⁵であり、そしてＹ⁵はＨまたは脱離基（好ましくは、Ｙ²と同じ基）であり、ここで基Ｙ⁵は、合成のこの工程において脱離基として有効でない。この反応は、適切な触媒の存在下において、必要に応じてフリーラジカル捕捉剤（ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｔｒａｐ）の存在下で、行われる。基Ｙ⁴は、ラジカル脱離基（ハロゲン（好ましくは、ＩまたはＢｒ）のような）であるべきである。Ｙ⁵がＨである化合物ＶＩを用いる環化反応を実行するのに適するラジカルは、２，２，６，６−テトラメチルピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）のようなニトロキシ化合物である。Ｙ⁵が脱離基である場合、環化は、アゾイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）から誘導されるラジカルの存在下において行われ得る。このようなラジカル環化工程に好適な触媒は、トリブチルスズハイドライドのようなスズハイドライド化合物である。このような合成経路は、実施例１および３において図示される。
【００７９】
６員環を形成するための環化について、Ｚ²がＹ⁵であり且つＹ⁵が脱離基（好ましくは、トリアルキルスタンニル基）である化合物ＶＩを使用すること、および適切な触媒パラジウム錯体（テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロライドまたはパラジウム（ＩＩ）アセテートのような）の存在下において反応を行うことが好ましい。このジヒドロキノリン中間体は、例えばペルオキシド試薬を用いて、酸化され、エポキシドであるさらなる中間体を形成する。このエポキシド中間体は、好適な選択的還元剤（ジアルキルアルミニウムハイドライドのような）を用いて還元され、対応するテトラヒドロキノリンアルコール（これは、例えば、カーボンテトラクロライド／トリフェニルホスフィンを用いて、引き続きハロゲン化される）を生産する。この反応は、実施例２において説明される。
【００８０】
一般式ＶＩの化合物は、１，３−ジハロプロペン化合物を用いる対応するアニリン誘導体のナトリウム塩のアルキル化によって、生成され得る。
【００８１】
一般式Ｖのカルボン酸誘導体は、Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９７ ｏｐ．ｃｉｔにおいて一般的に記載される方法を用いて合成され得、例えば、ＰＤＥ−ＩおよびＰＤＥ−ＩＩは、Ｕｍｅｚａｗａ合成、Ｒｅｅｓ−Ｍｏｏｄｙ合成、Ｍａｇｎｕｓ合成、Ｃａｖａ−Ｒａｗａｌ合成、Ｂｏｇｅｒ−Ｃｏｌｅｍａｎ合成、Ｓｕｎｄｂｅｒｇ合成、Ｍａｒｔｉｎ合成、Ｔｏｊｏ合成を用いて合成され得る。インドール−２−カルボン酸は、市販されている。デュオカルマイシンのＤＮＡ結合サブユニットの他のアナログ、およびその反応性カルボン酸誘導体は、Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ，ｏｐ．ｃｉｔ．およびＵＳ−Ａ−５８４３９３７によって記載される。
【００８２】
本発明は、正常な状態の場合に細胞毒性効果をほとんどまたは全く有さないけれども、ＣＹＰ酵素による酸化またはヒドロキシル化によって活性化されるときに高度に細胞毒性である（すなわち、相当増強された細胞毒性を有する）広範囲なプロドラッグの創作に関する。これは、セルフ−ターゲッティングドラッグデリバリーシステム（ｓｅｌｆ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ）（ここで、非毒性（または無視してもよい毒性）化合物が患者へ投与（例えば、全身的な方法において）され得、その後その化合物は、腫瘍細胞の部位において活性化され（腫瘍内活性化）、腫瘍細胞を殺すよう働く高度に細胞毒性を示す化合物を形成する）を提供する。ＣＹＰアイソフォームが正常な細胞によって発現されないという事実は、この化合物の活性化が腫瘍細胞の部位においてのみ起こり、それにより腫瘍細胞のみが影響を受け、それゆえセルフ−ターゲッティングシステムが提供されることを意味する。
【００８３】
本発明のプロドラッグは、体内のどの部位においても腫瘍の処置において有用であるという明らかな利点を有し、このことは、転移を受けた腫瘍（これは、普通、部位特異的な治療に影響されにくい）でさえも処置され得ることを意味している。
【００８４】
このプロドラッグは、抗腫瘍プロドラッグであり得る。腫瘍の例としては、ガン（悪性新生物）および他の新生物（例えば、良性腫瘍）が挙げられる。このプロドラッグは、シトクロムＰ４５０のアイソフォームによるヒドロキシル化によって活性化され得る。
【００８５】
プロドラッグの選択的ヒドロキシル化およびそれによる活性化をもたらすための腫瘍細胞内のＣＹＰ発現に頼る様々な通常の手順において、腫瘍組織と正常組織との間の選択性は、２つの部分手順において高められる。従って、（ａ）シトクロムＰ４５０遺伝子およびシトクロムＰ４５０リダクターゼ遺伝子を有するウイルスベクターで腫瘍細胞を感染させること（ここで、腫瘍細胞によるシトクロムＰ４５０遺伝子およびシトクロムＰ４５０リダクターゼ遺伝子の発現は、腫瘍内において、化学療法剤のその細胞毒性型への酵素的変換を可能にし、これによって、腫瘍細胞は、プロドラッグ化学療法剤に対して選択的に感受性を示す（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ）ようになる）（ｂ）腫瘍細胞をプロドラッグ化学療法剤と接触させ、それにより腫瘍細胞を選択的に殺すこと。
【００８６】
これらのプロドラッグは、ベンズ（ｅ）ジヒドロインドールまたはベンズ−テトラヒドロキノリン誘導体である。それらの抗腫瘍プロドラッグとしての具体的な使用は、今までに、示唆も開示もされておらず、それらが活性化されヒドロキシル化された形態を有するプロドラッグであるという示唆も全くなされていない。式（Ｉ）の化合物が既に同定および製造されていた場合でも、それらは、その低い（または無視してもよい）細胞毒性ゆえに、抗腫瘍剤として認められていなかった。従って、本発明のプロドラッグの腫瘍内ヒドロキシル化は、驚くべき予測不可能な有効性をそれらに与える。
【００８７】
ヒドロキシル化形態のプロドラッグはＤＮＡの副溝（ｍｉｎｏｒ ｇｒｏｏｖｅ）において結合し且つＮ３位でプリン塩基をアルキル化する強力なＤＮＡアルキル化剤である。それ自体では、それらは、作用の正確な生物学的メカニズムが知られていないが、テンプレートおよびＤＮＡの他の機能の崩壊（ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）を伴う強力な細胞毒性剤である。ＤＮＡのテンプレート機能の一般的な阻害は、体内の全ての分裂する細胞に対して影響し、全体的に毒性を示し、そして治療設定（ｓｅｔｔｉｎｇ）において受け入れ難い副作用を導くであろう。しかしながら、特定のアイソフォームのシトクロムＰ４５０を過剰発現する腫瘍細胞におけるヒドロキシル化型の標的化された生産は、それらの細胞においてのみ特異的な細胞毒性効果を導くであろう。非−ヒドロキシル化形態は、実質的に、全ての細胞に対して非−毒性である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００８８】
以下の実施例は、本発明を説明する。
実施例１
【００８９】
【化１６】

【００９０】
１．１ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）ナフチルアミン（Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｎａｐｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
２−ナフトエ酸（２−ｎａｐｔｈｏｉｃ ａｃｉｄ）（１００ｍｇ、０．５８１ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（３３ｍＬ）溶液をＥｔ₃Ｎ（９６μＬ、０．７ｍｍｏｌ）および４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）で処理した。ジフェニルホスフォリルアジド（０．１５ｍｌ、０．７ｍｍｏｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を加温し、１４ｈの間還流した。この混合物を２５℃まで冷却し、そしてその溶媒を真空下において取り除いた。残渣をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中に溶解し、そして有機相を１０％水性ＨＣｌ（３×１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ヘキサン中の１０％ ＥｔＯＡｃ）による精製によって、２（０．１０８ｍｇ、７７％）を淡黄色固体として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）２４３（［Ｍ⁺ Ｈ］⁺ 予測２４３）２６９（［Ｍ⁺Ｎａ］⁺予測２６９）。
【００９１】
１．２ ２−ナフチルアミン（２−Ｎａｐｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
化合物１．１（１．５ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中に溶解し、これにＥｔＯＡｃ中の２．５Ｍ ＨＣｌが添加された。この反応混合物を３０分間攪拌した。次いで、生じる溶液をｓａｔ’ｄ ａｑ．ＮａＨＣＯ₃（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、そして濃縮した。この残渣をヘキサン中の２０％ＥｔＯＡｃから結晶化し、３．３（０．７４ｇ、８４％）を淡褐色結晶として得た：¹Ｈ ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δｐｐｍ ７．１２−７．３２（ｍ，３Ｈ），６．９６（ｔ，１Ｈ），６．８０（ｔ，１Ｈ），６．５６（ｓ，１Ｈ），６．５２（ｄｄ，１Ｈ），３．４６（ｂｒ ｓ，２Ｈ）； ＦＡＢ ＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）１４３（［Ｍ＋Ｈ］⁺予測１４３），１６５（［Ｍ＋Ｎａ］⁺予測１６５）。
【００９２】
１．３ １−ブロモ−２−ナフチルアミン（１−Ｂｒｏｍｏ−２−ｎａｐｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
１．２（１００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）、ＴｓＯＨ（４８ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６ｍＬ）溶液を攪拌し、０℃に冷却した。生じた混合物へＮＩＳ（１２５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（６ｍＬ）を添加し、この溶液を２５℃まで温めた。３ｈ後、さらなるＮＩＳ（３１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。１ｈ後、この混合物を１０％水性ＮａＨＣＯ₃（１０ｍＬ）で希釈し、ＣＨＣｌ₃（３×１０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を合わせ（ｃｏｍｂｉｎｅｄ）、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、次いで濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ヘキサン中の３０％ ＥｔＯＡｃ）によって精製し、１．３（１１０ｍｇ、５９％）を茶−黄色（ｂｒｏｗｎ−ｙｅｌｌｏｗ）オイルとして得た：¹Ｈ ＮＭＲ（２５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δｐｐｍ ８．０４（ｄ，１Ｈ），７．６８（ｄ，１ Ｈ），７．６２（ｄ，１Ｈ），７．５０（ｔ，１Ｈ），７．２８（ｔ，１Ｈ），７．００（ｄ，１Ｈ），４．４０（ｂｒ ｓ，２Ｈ）；ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）：２２１（［Ｍ＋Ｈ］⁺予測２２１），２４３（［Ｍ＋Ｎａ］⁺予測２４３）。
【００９３】
１．４ Ｎ−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−ブロモ−２−ナフチルアミン（Ｎ−Ｄｉ （ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−１−ｂｒｏｍｏ−２−ｎａｐｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
１．３ （１００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）溶液をＢｏｃ−ジカーボネート（２１９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、Ｅｔ₃Ｎ（６２μｌ、０．４５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４．５ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を５０℃にて、２４ｈ還流した。生じた混合物をＨ₂Ｏ（２×１０ｍＬ）、５％ＨＣｌ（１０ｍＬ）および最後に再びＨ₂Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、そして濃縮した。反応物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂ ＣＨ₂Ｃｌ₂／ヘキサン１：１）によって精製し、１．４（１２５ｍｇ、７２％）を無色固体として得た。¹Ｈ ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δｐｐｍ ８．３２（ｄ，１Ｈ），７．８６（ｄ，１Ｈ），７．８０（ｄ，１Ｈ），７．５２−７．６８（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄ，１Ｈ），１．５０ （ｓ，１８Ｈ）；ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）４２２（［Ｍ＋Ｈ］⁺予測４２２），４４６（［Ｍ＋Ｎａ］⁺予測４４６）。
【００９４】
１．５ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−ブロモ−２−ナフチルアミン （Ｎ−（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−１−ｂｒｏｍｏ−２−ｎａｐｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
化合物１．４（５０ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１６μＬ、０．２１３ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）溶液で処理し、４５ｍｉｎ攪拌した。この混合物を濃縮し、そしてヘキサンから結晶化し、１．５（１３ｍｇ、３４％）を白色結晶として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）３２３（［Ｍ＋Ｈ］⁺予測３２３），３４６（［Ｍ＋Ｎａ］⁺予測３４６）。
【００９５】
１．６ Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−（３−クロロ−２−プロペン−１−イル）−１−ブロモ−２−ナフチルアミン（Ｎ−（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−Ｎ−（３−ｃｈｌｏｒｏ−２−ｐｒｏｐｅｎ−１−ｙｌ）−１−ｂｒｏｍｏ−２−ｎａｐｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
１．５（５０ ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）の溶液を０℃に冷却し、ＮａＨ（９．８ｍｇ、０．４０８ｍｍｏｌ）を添加した。生じた混合物を１５ｍｉｎ攪拌し、そして１，３ジクロロプロペン（３８μＬ、０．４１ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を２５℃まで温め、９０ｍｉｎ攪拌した。この混合物を濃縮し、その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ヘキサン中の１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、１．６（５６ｍｇ、９３％）を透明フィルムとして得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）３９６（［Ｍ＋Ｈ］⁺予測３９６），４１８（［Ｍ＋Ｎａ］⁺ 予測４１８）。
【００９６】
１．７ ３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−（クロロメチル）−１， ２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール
１．６（５５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の無水トルエン（５ｍＬ）溶液を１５ｍｉｎの間、Ｎ₂を用いて脱気し（ｄｅｇａｓｓｅｄ）、次いで９０℃まで加熱した。Ｂｕ₃ＳｎＨ（６５μｌ、０．２５ｍｍｏｌ）を、４分割し、１ｈかけて添加し、生じた混合物を１ｈ攪拌した。次いで、この溶液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ヘキサン中の１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、不純物を含む（ｉｍｐｕｒｅ）３．８．を得た。次いで、この固体を、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）中に溶解し、これにＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中の１Ｍ ＫＦ溶液（１ｍｌ）を添加した。この溶液を４５ｍｉｎ攪拌し、その後、不溶性沈殿物を濾過し、残った溶液を濃縮し、精製１．７（３４ｍｇ、８７％）を淡黄色オイル状フィルムとして得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）３１７（［Ｍ＋Ｈ］⁺予測３１７）。
【００９７】
１．８ １−（クロロメチル）−３−［（５−メトキシインドール−２−イル）カルボニル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール
化合物１．７（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１００μＬ）中の２．５ Ｍ ＨＣｌで処理し、そしてこの溶液を３０ｍｉｎ間攪拌した。窒素の流れ（ｓｔｒｅａｍ）の下において溶媒を取り除き、灰色残渣をＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解した。５−メトキシインドール−２−カルボン酸（１７ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１７ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を１６ｈ攪拌した。溶媒を真空下において取り除き、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１）にかけ、生成物を赤色オイル（１１ｍｇ、９４％）として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）３９１（Ｍ＋Ｈ⁺予測３９１）。
【００９８】
実施例２
【００９９】
【化１７】

【０１００】
２．１ ２−［Ｎ−（３−（トリブチルスタンニル）−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−１−ナフタレン（２− ［Ｎ− （３− （ｔｒｉｂｕｔｙｌｓｔａｎｎｙｌ）−２−ｐｒｏｐｅｎ−Ｉ−ｙｌ）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｏｘｙ）ｃａｒｂｏｎｙｌ）］ ａｍｉｎｏ−１−ｎａｐｔｈａｌｅｎｅ）
１−ベンゾイル−５−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ−４−ヨードインドール（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中で攪拌し、ナトリウムハイドライド（２６ｍｇ、０．６６ ｍｍｏｌ、オイル中の６０％ディスパージョン、３当量）を添加した。１５ｍｉｎ後、この懸濁液をＥ／Ｚ−１−トリブチルスタンニル−３−ブロモプロペン （２７０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、３当量）で処理し、生じた溶液をＲＴにて、１６ｈ攪拌した。この溶液を濃縮し、水（１０ｍＬ）を添加した。この水溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、次いで濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって生成物（１２０ｍｇ、７８％）を黄色固体として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）：６９９（Ｍ＋Ｈ⁺予測６９９）。
【０１０１】
２．２ １，２−ジヒドロ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−５，６−ベンゾキノリン
１−ベンゾイル−５−［Ｎ−（３−（トリブチルスタンニル）−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）］アミノ−４−ヨードインドール（１００ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３２ｍｇ、０．２当量）をトルエン（２ｍＬ）中で、５０℃にて、Ｎ₂下において、４ｈ攪拌した。次いで、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物を赤色オイル（３８ｍｇ、９９％）として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）：２８２（Ｍ＋Ｈ⁺予測２８２）。
【０１０２】
２．３ ３，４−エポキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−ベンゾキノリン
１，２−ジヒドロ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−５，６−ベンゾキノリン（１００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）およびＭＣＰＢＡ（９１ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．５当量）をＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）中で−３０℃にて、Ｎ₂下において、６ｈ攪拌した。次いで、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％ 酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物（１０１ｍｇ、９５％）を得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）：２９８（Ｍ＋Ｈ⁺予測２９８）。
【０１０３】
２．４ ４−ヒドロキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−ベンゾキノリン
３，４−エポキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−ベンゾキノリン（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ ｍＬ）中のＤｉｂａｌ−Ｈ（９１ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．５当量）で、−７８℃〜−３０℃にて、Ｎ₂下において、処理した。１ｈ後、水（２ｍＬ）の添加によって、この反応液をクエンチし、そして生じた溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、濃縮した。溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって生成物（５５ｍｇ、５４％）を無色固体として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）：３００（Ｍ＋Ｈ⁺予測３００），３２２（Ｍ＋Ｎａ⁺ 予測３２２）。
【０１０４】
２．５ ４−クロロ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−ベンゾキノリン
ＲＴにて、ＰＰｈ₃（１７５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、２当量）およびＣＣｌ₄（２００μＬ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）調製溶液を用いて、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−ベンゾキノリン（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を処理した。４ｈ後、この溶媒を真空中において取り除いた。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％ 酢酸エチル／ヘキサン）によって、該クロライドをオイル（６５ｍｇ、６３％）として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）：３１８（Ｍ＋Ｈ⁺予測３１８），３４０（Ｍ＋Ｎａ⁺ 予測３４０）。続いて、この生成物を脱保護し、さらに実施例１．８に類似するプロセス工程によって５−メトキシインドール−２−カルボン酸のようなＤＮＡ−結合サブユニットへ複合体化させてもよい。
【０１０５】
実施例３ 化合物１．８の生物学的試験
材料および方法
【０１０６】
３．１ 試験化合物とミクロソームのインキュベーション混合物
ＮＡＤＰＨ補充した（ＮＡＤＰＨ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ）ラット肝ミクロソームを用いて、ＣＹＰ酵素による試験化合物活性化を行った。インキュベーション混合物は、ミクロソームタンパク質（１ｍｇ／ｍｌ）、還元−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート（ＮＡＤＰＨ、１０ｍＭ）およびリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、１００ｍＭ）を含んでいた。ＤＭＳＯ（２０μｌ）中の試験化合物（０．０１−１００μＭ 最終濃度）を、ミクロソームインキュベーション混合物（０．５ｍｌ）へ添加し、そして６０分間、３７Ｃにてインキュベートした。コントロールのインキュベート物は試験化合物を含み、ミクロソームインキュベーション混合物は０時間にて終了させた。全てのインキュベーション物は、等量の氷冷アセトニトリルの添加により終了され、次いで３分間微量遠心された（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅｄ）。この上清のアリコートを培養中の細胞へ添加し、次いで細胞毒性を以下に記載のように測定した。
【０１０７】
３．２ 細胞培養物に基づく細胞毒性測定
１０％透析ＦＢＳおよびＧ４１８（４００μｇ／ｍｌ）を補充したＭＥＭ中で、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を増殖させた。全ての細胞を、９６ウェルプレート中において、１０００細胞／ウェルの開始密度にてシーディングし（ｓｅｅｄｅｄ）し、３７℃にて、２４時間インキュベートした。次いで、試験化合物／ミクロソーム／アセトニトリル上清のアリコート（０．１ｍｌ）をＣＨＯ細胞へ添加した。次いで、細胞を２４時間、３７℃、５％ＣＯ₂にてインキュベートした。この時間の後に、ＭＴＴ（５０μｌ； ２ｍｇ／ｍｌ ストック溶液）を各ウェルへ添加し、細胞をさらに４時間インキュベートした。この間、生存能のある細胞（ｖｉａｂｌｅ ｃｅｌｌｓ）のミトコンドリアデヒドロゲナーゼによって、ＭＴＴ、水素アクセプターテトラゾリウム塩、をホルマザン色素に還元した。培地を細胞からアスピレーションし（ａｓｐｉｒａｔｅｄ）、ＤＭＳＯ（１００μｌ／ウェル）を添加し、着色したホルマザン色素を可溶化した。次いで、９６−ウェルプレート中のホルマザン色素の吸光度を５５０ｎｍにて測定した。ＣＨＯ細胞増殖の休止（ａｒｒｅｓｔ）に及ぼす試験化合物によるミクロソーム活性化の影響は、ミクロソームインキュベーションを伴うまたは伴わないＩＣ₅₀（細胞増殖を５０％だけ阻害する濃度）を比較することによって測定され得た。
【０１０８】
【表１】

【０１０９】
培養中のチャイニーズハムスター卵巣細胞の生存に及ぼす化合物３．９およびその代謝（活性化）産物の影響。細胞は、化合物３．９とＮＡＤＰＨ補強されたラット肝ミクロソームとの反応混合物からの上清と共に、２４時間インキュベートされた。ＩＣ₅₀は、細胞増殖を５０％だけ阻害するために必要とされる薬物の濃度を表す。値は、３回の実験についての平均＋ｓｄとして表される。代謝の全詳細についての方法を参照のこと。
ＡＦ＝活性ファクター（すなわち、＋化合物１．８活性化について得られるＩＣ₅₀細胞毒性値の比）
＊は、ｐ＞０．０５における有意性（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ）を表す。【Technical field】
[0001]
  The present invention relates to aromatic oxidation / hydroxylation activated prodrugs, and in particular to anti-tumor prodrugs and those that are specifically activated by the oxidation / hydroxylation activity of the cytochrome P450 family of enzymes.
[Background]
[0002]
  Many conventional cytotoxic drugs are known that can be used for therapeutic purposes. However, they typically suffer from the problem that they are generally cytotoxic and thus may affect cells other than those required to be destroyed. This may involve targeted drug delivery systems (eg, direct injection at the site of tumor tissue, or cytotoxicity to antibodies that specifically recognize antigens that are presented only on the surface of cancer cells, for example) Can be somewhat eliminated by the use of binding agents. Alternatively, electromagnetic radiation can be used to cause a chemical change to be cytotoxic to the drug at the desired site. However, all of these techniques have more or less some limitations and disadvantages.
[0003]
  The compound (+)-CC-1065 and duocarmycins are naturally occurring representatives of the class of DNA alkylating agents. This naturally occurring compound consists of a DNA alkylation unit based on a pyrrolo [3,2-e] indole core (having one or two subunits) that confers DNA binding ability. CC-1065 and duocarmycin A contain a spirocyclic cyclopropane group responsible for DNA alkylation properties. Duocarmycin B₂, C₂And D₂Is a precursor to cyclopropane actives and is believed to contain a methyl group that is substituted (by a leaving group) at the 8-position on the dihydropyrrole ring. CC-1065 has been synthesized by a variety of routes (summarized by Boger et al. In Chem. Rev. 1997, 97, 787-828).
[0004]
  In US-A-4413132, the first synthesis of CC-1065's left-handed subunit is described. The synthesis is based on Winstein Ar-3 'alkylation into which a cyclopropane ring is introduced. In the previous step, the A ring (of the indole core) is introduced by reaction of α-thiomethyl ester with aniline using chemistry based on Gassman's Oxindol synthesis. Aniline is considered to be important for DNA alkylation done in the final product.₂It has a protected phenolic hydroxyl group that is ortho to the group. CC-1065 has broad antitumor activity, but is too toxic to normal cells and is not clinically useful.
[0005]
  Boger et al (1997) op. cit also describes various deep-structured structural modifications of the DNA-alkylated subunit, where the pyrrolo 'A' ring is replaced by other aromatic ring structures. In one class of analogs, the substituted ring is a benzene ring.
[0006]
  Targeting delivery of CC-1065 and analogs by conjugating drugs to polymers or specific binding agents (such as antibodies or biotin described in US 5,843,937) via DNA binding subunits Attempts have been made to achieve this. Boger et al. In Synthesis 1999 SI, 1505-1509, a prodrug of 1,2,9,9a-tetrahydrocyclopropa (c) benz [e] indole-4-one where the cyclopropane ring opening of the compound The ring-opened version is derived by reaction of the phenol group to form esters and carbamates).
[0007]
  Tet. Letts. (1998) 39, 2227-2230, Boger et al. Synthesized various precursors to alkylated subunits of duocarmycin and CC-1065 analogs that have deep-seated structural modification of the alkylated subunits. Describe. One of the synthesized compounds is a benzodihydroindole derivative:
[0008]
[Chemical 1]

[0009]
  J. et al. Org. Chem. (2000), 65/13, 4101-4111, the corresponding ring-closed indoline compound (CBI derivative) obtained from its benzodihydroindole derivative is bound to the DNA-binding subunit of CC-1065, It was shown to have DNA alkylating activity. Analogs of alkylated subunit precursors in which the benz moiety is substituted with methoxy or cyano have also been synthesized. Similar compounds are described in WO-A-9745411 and WO-A-9732850. At '411, the benz moiety can be substituted with cyano at the 7-position, or the cyclopropane group can be difluoro substituted. The 7-methoxy CBI compound is described at '850.
[0010]
  In WO-A-9811101, the phenolic hydroxyl group in the B ring of a CBI type compound is replaced by an amino, nitro or thiol-based group.
[0011]
  J. et al. Am. Chem. Soc. (1991), 113, 3980-3983, Boger et al describe a study to identify features of CC-1065 analogs that contribute to the selectivity of DNA alkylation. The compounds tested in vitro had an alkylating subunit based on 2,3-dihydroindole and also contained a 6-deshydroxy analog. These are 10 more than those of 6-hydroxy compounds.^FourIt was shown to have some DNA alkylating properties, albeit at twice the concentration.
[0012]
  The present invention relates to precursors of analog CC-1065, which does not have a hydroxyl group in the B ring of the alkylating subunit and is therefore substantially inactive as a DNA alkylating agent by itself. .
[0013]
  Enzyme CYP1B1 (a member of the cytochrome P450 (CYP) family of xenobiotic metabolizing enzymes) is frequently expressed in a wide range of human cancers (including breast, colon, lung, esophagus, skin, lymph node, brain and testicular cancer) And that it could not be detected in normal tissues (Murray, GI et al., 15 July 1997, Cancer Research, 57m 3026-3031 and WO-A-9712246). This led to the conclusion that expression of cytochrome P450 isoforms in tumor cells provides a molecular target for the development of new anti-tumor drugs that can be selectively activated by CYP enzymes in tumor cells. No examples were given. Many other CYP isoforms have been shown to be expressed in various tumors. Many of the CPYs expressed in tumors are found in Patterson, LH et al, (1999) Anticancer Drug Des. 14 (6), 473-486.
[0014]
  In WO-A-99 / 40056, prodrugs of styrene- and chalcone-derivatives are described. Each hydroxylated form formed in situ of this prodrug is a potent tyrosine kinase (TK) inhibitor. Inhibition of TK activity contributes to tumor inhibition and cell destruction. This prodrug is activated by a microsomal preparation that expresses the CYP1B1 enzyme and has cytotoxic activity against cell lines that express the enzyme, while cells that are very low against cell lines that do not express the enzyme It was shown to have toxic activity.
DISCLOSURE OF THE INVENTION
[Problems to be solved by the invention]
[0015]
  The present invention relates to a novel class of prodrugs that are predicted to be hydroxylated in situ by CYP enzymes, particularly enzymes that are expressed at high levels in tumors. In particular, this prodrug is believed to be metabolizable by the CYP1B1 enzyme. Some of the compounds are new. The present invention relates to the first therapeutic use of a wide range of compounds, and their syntheses and intermediates used therein.
[Means for Solving the Problems]
[0016]
  According to a first aspect of the invention, there is provided a novel use of a compound of general formula I or IA or a salt thereof in the manufacture of a composition for use in a method of treatment by treatment of animals:
[0017]
[Chemical 2]

[0018]
(Where X is H;
  Y is a leaving group
  R¹Are —Ar, —NH₂, OR⁷Or R⁷Is;
  R², R^Three, R^Four, R^FiveAnd R⁶Are independently H, C_1-4Alkyl, -OH, C_1-4Alkoxy, -CN, Cl, Br, I, -NO₂, -NH₂, -NHR¹⁶, -NR¹⁶ ₂, -N⁺R¹⁶ _Three; -NHCOR⁸, -COOH, -CONHR⁹, -NHCOOR⁹And -COOR⁹Selected from;
  R⁷, R⁸And R⁹Is independently C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, optionally substituted heteroaryl and ligand;
  Ar is
[0019]
[Chemical Formula 3]

[0020]
(Where B is N or CR^TenIs;
R^TenOH, C_1-4Alkoxy, C_1-4Alkyl, -NO₂, -NH₂, -CN, Cl, Br, I, -NHCOR¹⁴, -COOH, -CONHR¹⁵, -NHCOOR¹⁵And -COOR¹⁵And H are selected;
Z is O, S,-CH = CH-, or NH;
Each R¹¹OH, C_1-4Alkoxy, C_1-4Alkyl, -NO₂, -NH₂, -NHR¹⁶, -NR¹⁶ ₂, -N⁺R¹⁶ _Three, -CN, Cl, Br, I, -NHCOR¹⁴, -COOH, -CONHR¹⁵, -NHCOOR¹⁵And COOR¹⁵Selected from;
n is an integer ranging from 0 to 4;
R¹²H, -COAr¹, -CONH₂, -COOH, -COOR¹⁵Or -COR¹⁵Is;
Each R¹³OH, C_1-4Alkoxy, C_1-4Alkyl, -NO₂, -NH₂, -NHR¹⁶, -NR¹⁶ ₂, -N⁺R¹⁶ _Three, -CN, Cl, Br, I, -NHCOR¹⁴, -COOH, -CONHR¹⁵, -NHCOOR¹⁵And -COOR¹⁵Selected from;
m is 0, 1 or 2;
R¹⁴Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, optionally substituted heteroaryl, C_7-12Aralkyl, Ar¹And selected from ligands;
R¹⁵Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, optionally substituted heteroaryl and ligand;
Each R¹⁶Is independently C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl and optionally substituted heteroaryl; and
Ar¹Is selected from the same group as Ar (provided that at most one group R in any one ring).¹¹Or R¹³Is the group Ar¹including. )))
Ar¹Is preferably
[0021]
[Formula 4]

[0022]
It is.
[0023]
  Although this compound may also have veterinary uses, the animals to be treated are generally humans. The indications treated are generally cancer (adenocarcinoma, leukemia, lymphoma, melanoma, myeloma, sarcoma, teratocarcinoma, and especially adrenal gland, bladder, bone, bone marrow, brain, breast, cervix). ), Gallbladder, ganglia, gastrointestinal tract, heart, kidney, liver, lung, muscle, ovary, pancreas, parathyroid, penis, prostate, salivary gland, skin, spleen, testis, thymus, thyroid And cancer of the uterus).
[0024]
  A tumor can be defined, for example, as a tumor that expresses high levels of CYP1B1.
[0025]
  In the present invention, the leaving group Y is, for example, among groups having utility in nucleophilic substitution reactions. A suitable example of a leaving group is -OCOOR¹⁷, -OCONHR¹⁸, Cl, Br, I or -OSOOR¹⁹(Where R¹⁷, R¹⁸And R¹⁹Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl and optionally substituted heteroaryl). Most preferably the leaving group is a halogen atom, preferably chlorine.
[0026]
  Optional substituents on the phenyl, aralkyl and heteroaryl groups are C_1-4-Alkyl, halogen, hydroxyl, C_1-4-Alkoxy, -NH₂, -NHR¹⁶, -NR¹⁶ ₂, -N⁺R¹⁶ _Three, -NO₂, -CN, -COOH, -NHCOR¹⁴, -CONHR¹⁵, -NHCOOR¹⁵, COOR¹⁵Etc.
[0027]
  In the present invention, the term ligand includes groups having specific targeting properties (eg, useful in enzyme or gene-directed and enzyme prodrug-type environments). The ligand can be an oligopeptide, biotin, avidin, or streptavidin, a polymer group, an oligonucleotide or a protein. Preferably, it is like an antibody or fragment, antigen, sense or antisense oligonucleotide, or one of avidin, streptavidin and biotin (ie it is one component of a specific binding pair) Has specific binding properties. Alternatively, it is a group designed for passive targeting (such as a polymeric group) or a group designed to maintain stability or reduce immunogenicity (such as a hydrophilic group) obtain. US-A-58493737 discloses suitable ligands for complexing to these types of actives and methods for carrying out the complexation.
[0028]
  In a pharmaceutically active compound, R¹Is OR⁷It is other than.
[0029]
  In general, for the optimized DNA binding capacity, in the compounds of general formula I the group R¹Is the group Ar. Often the compound may contain two aromatic groups linked to each other. In such compounds, the group R of the Ar group¹¹One of the groups R¹²Is optionally the group Ar¹It is. For some compounds it may be desirable to link three or more such aromatic groups, while one group Ar and one group Ar¹Is preferably present. Thus, the group Ar which is a pyrrolo-dihydroindole type group¹In the radical R¹²Is a group -COAr¹Should be other than. The group Ar, one of the other types of groups¹In the above, preferably the substituent R¹¹Or R¹³Should not be present, or in some cases, or if any substituents are present, such substituents are group Ar¹Should not be included.
[0030]
  According to one embodiment of the invention, the substituent Ar is a group
[0031]
[Chemical formula 5]

[0032]
It is.
[0033]
  In such a group Ar, B is preferably CR^TenIt is. R^TenIs preferably H. Although furan (Z = O) and thiophene (Z = S) analogs are generated for complexation to DNA alkylation units and may have useful DNA binding properties, the definition of Z is preferably NH. Similarly the group Ar¹In which the groups B and Z are selected from the same preferred groups. Preferably n is at least 1 and the group R¹¹Is one of -NHCOAr¹It is. In this embodiment, Ar¹Is preferably a group
[0034]
[Chemical 6]

[0035]
(Where B and Z are the same as in Ar).
[0036]
  In another embodiment, the substituent Ar is a group
[0037]
[Chemical 7]

[0038]
It is.
[0039]
  R in Ar¹²Is preferably -COOR¹⁵More preferably, the group -COAr¹(Where -Ar¹Are preferably the same type of group).
[0040]
  Groups Ar and Ar¹In both groups, m in the indole-type group is preferably zero.
[0041]
  Ar and Ar¹A number of substituents R¹¹May be present. Most preferably, such substituents are C_1-4-Selected from among alkoxy groups.
[0042]
  In compounds of formula I, the core indole ring of the DNA alkylating subunit is preferably a benzene ring (R²Is hydrogen), while the benz ring is unsubstituted (R^Three, R^Four, R^FiveAnd R⁶Can be all hydrogen atoms) or R^Three~ R⁶One or more of cyano group, alkoxy group, group -COOR^TenOr C_1-4-Represents an alkyl group (preferably methyl).
[0043]
  In one preferred embodiment R^FiveIs alkoxy, preferably methoxy and R², R^Three, R^Four, R⁶Are all H.
[0044]
  In another embodiment, R^FiveIs cyano and R², R^Three, R^FourAnd R⁶Is H.
[0045]
  In the compound of formula I, X is H. It is believed that the hydroxylation of a compound occurs in situ at the carbon atom to which X is attached, thereby activating the compound that allows it to act as a DNA alkylating agent.
[0046]
  Many of the compounds of general formula I and their salts are considered novel compounds. According to a further aspect of the present invention, there is provided a novel compound of general formula II or a salt thereof,
[0047]
[Chemical 8]

[0048]
(Where R², R^Three, R^FiveAnd R⁶Is as defined above;
  X¹Is H;
  Y¹Is a leaving group;
  R²⁰Is -R⁷, -OR⁷, NH₂Or Ar²Is;
  R⁷Is as defined above;
  Ar²Is
[0049]
[Chemical 9]

[0050]
(Where B¹Is N or CR^{twenty two}Is;
  Z¹Is O, S, —CH═CH—, or NR^{twenty one}Is;
  R^{twenty one}Is an amine protecting group;
  Each (the or each) R^{twenty two}OH, C_1-4Alkoxy C_1-4Alkyl, NO₂, -NHR^{twenty one}, -NHR²⁶, -NR²⁶ ₂, -N⁺R²⁶ _Three, -CN, Cl, Br, I, -NHCOR^{twenty five}, -COOH, -CONHR⁷And -COOR^{twenty five}Selected from;
  p is an integer ranging from 0 to 4;
  R^{twenty three}H, COAr^Three, -CONH₂, -COOH, -CONHR⁷Or -COR⁷Or an amine protecting group;
  Each (the or each) R^{twenty four}OH, C_1-4Alkoxy C_1-4Alkyl, -NO₂, -NHR^{twenty one}, -NHR²⁶, -NR²⁶ ₂, -N⁺R²⁶ _Three, -CN, Cl, Br, I, -NHCOR^{twenty five}, -COOH, -CONHR⁷, And -COOR⁷Selected from;
  q is 0, 1 or 2;
  R^{twenty five}Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, optionally substituted heteroalkyl, C_7-12-Aralkyl Ar^ThreeAnd selected from ligands;
  R²⁶Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl and optionally substituted heteroaryl; and
  Ar^ThreeIs Ar²Selected from the same group (provided that at most one group R in any one ring)^{twenty two}Or R^{twenty four}Is the group Ar^Threeincluding))).
[0051]
  Ar^ThreeIs preferably
[0052]
[Chemical Formula 10]

[0053]
It is.
[0054]
  A compound of formula II or IIA, where the primary or secondary amine nitrogen atom is protected, is generally deprotected prior to use in a pharmaceutical composition. Amine protecting group R^{twenty one}Or R^{twenty three}Examples of are benzyl, benzyloxycarbonyl, tertiary butyloxycarbonyl (BOC), fluorenyl-N-methoxy-carbonyl (FMOC) and 2- [biphenylyl- (4)]-propyl-2-oxycarbonyl. In this molecule, when more than one amine group is protected, the protecting groups may be the same or different. Particularly in a useful series of compounds of the general formulas II and IIA, R²⁰Is OR⁷And R⁷Is R¹An amine protecting group different from CO. In another preferred series, R²⁰Is OR⁷It is other than.
[0055]
  In compounds of general formulas II and IIA, R²⁰Is preferably Ar²And / or Y¹Is preferably -OCOOR¹⁷, -OCONHR¹⁸, Cl, Br, I or -OSOOR¹⁹(Where R¹⁷, R¹⁸And R¹⁹Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, and optionally substituted heteroaryl. Most preferably the leaving group is a halogen atom, preferably chlorine.
[0056]
  The present invention further provides a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I or IA and a pharmaceutically acceptable excipient. The pharmaceutical composition may be suitable for intramuscular, intraperitoneal, intrapulmonary, oral, or most preferably intravenous administration. The composition comprises a suitable matrix, for example for controlled or delayed release. The composition may take the form of a solution, solid (eg, powder), tablet or implant, and may contain a compound of formula I in solid or dissolved form. The compound can be incorporated into a particulate drug delivery system, for example, in a liquid formulation. Specific examples of suitable excipients include lactose, sucrose, mannitol, and sorbitol; starch derived from corn, wheat, rice, potato, or other plants; cellulose (methylcellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, or carboxymethylcellulose) Gums (including Arabic and tragacanth); and proteins (such as gelatin and collagen). If desired, disintegrating or solubilizing agents (such as cross-linked polyvinyl pyrrolidone, agar, and alginic acid or a salt thereof such as sodium alginate) may be added. The solid composition may take the form of a powder and a gel, but more conveniently takes a formed type such as a tablet, cachet or capsule (including spunsul). Alternatively, it is a more specialized type of formulation that includes liposomes, nanosomes, and nanoparticles.
[0057]
  Compounds of formula I are described in Boger et al, 1997, op. It can be synthesized using techniques similar to those summarized by cit. It is convenient to form the DNA alkylation subunit in a series of steps and attach it to the rest of the molecule via the nitrogen atom of the dihydro-pyrrole or tetrahydroquinoline (C) ring. DNA alkylation subunits are described in Boger et al, 1997 op. cit. Can be complexed to DNA binding subunits synthesized as described in (eg, PDE-I and PDE-II subunits described in that document). The DNA binding subunit comprises the groups Ar and Ar¹Is included.
[0058]
  According to a further aspect of the invention,
Compound of formula III or IIIA
[0059]
Embedded image

[0060]
(Where R², R^Three, R^Four, R^FiveAnd R⁶Is as defined above;
  X²Is H; and
  Y²Is a leaving group or a hydroxyl or protected hydroxyl group)
Is represented by the general formula IV
            R²⁷Coy^Three            IV
(Where R²⁷Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12Aralkyl, optionally substituted heteroaryl and Ar^FourSelected from;
  Ar^FourIs
[0061]
Embedded image

[0062]
(Where B²Is N or CR³²Is;
  Z²Is O, S, -CH = CH- or NR³³Is;
  Each (the or each) R²⁸Is C_1-4-Alkoxy, C_1-4-Alkyl, NO₂, CN, Cl, Br, I, -NHR³³, -NHR³⁵, -NR³⁵ ₂, -N⁺R³⁵ _Three-, -NHCOR³⁴, -COOH, -CONHR³⁶And -COOR³⁶Selected from;
  r is an integer ranging from 0 to 4;
  R²⁹Is an amine protecting group;
  R³⁰Is an amine protecting group, -CONH₂, -COOH, -COR³⁶Or -COAr^FiveIs;
  Each (the or each) R³¹Is C_1-4-Alkoxy, C_1-4-Alkyl, NO₂, CN, Cl, Br, I, -NHR³³, -NHR³⁵, -NR³⁵ ₂, -N⁺R³⁵ _Three-, -NHCOR³⁴, -COOH, -CONHR³⁶And -COOR³⁶Selected from;
  s is 0, 1 or 2;
  R³²H, C_1-4-Alkoxy, C_1-4Alkyl, NO₂, -CN, Cl, Br, I, -NHR⁵³, -NHR³⁵, -NHR³⁵ ₂, -N^TR³⁵ _Three, -NHCOR³⁴, -COOH, -CONHR³⁶And COOR³⁶Selected from;
  R³³Is an amine protecting group;
  R³⁴Is Ar^Five, C_1-4-Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, optionally substituted heteroaryl and ligand;
  R³⁵Is C_1-4-Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl and optionally substituted heteroaryl;
  R³⁶Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, optionally substituted heteroaryl and ligand;
  Ar^FiveIs Ar^FourIs selected from the same group
  Y^ThreeIs a leaving group (provided that at most one R in any one ring²⁸Or R³¹Is Ar^FiveAnd a novel synthetic method is provided.
[0063]
  A^FiveIs preferably
[0064]
Embedded image

[0065]
It is.
[0066]
  Y^ThreeIs selected, for example, from the preferred leaving groups listed above for Y. Most preferably, Y^ThreeIs defined as Cl. Alternatively, the group Y^ThreeCan be OH. In this case, it may be necessary to include a coupling agent that assists the coupling reaction.
[0067]
  The reaction between the compound of general formula III or IIIA and the carboxylic acid or derivative of general formula IV is carried out under conditions that cause such coupling. Such conditions are similar to those commonly used for peptide bond formation (eg, as used in peptide synthesis methods).
[0068]
  Y²Is a hydroxy or protected hydroxy group or leaving group, which can be the same as Y or can be converted to Y in a subsequent step.
[0069]
  It may be desirable to deprotect one or more protected amine groups after the coupling process. Via any such amine group, for example using other derivatizing agents (glycosyl compounds, peptides, polymers, etc.), if further reactions are desired, only those where subsequent reactions occur. It is desirable to deprotect while retaining other amine groups in protected form. The protection and deprotection protocols and the selection and selection of suitable amine protecting groups are made using techniques commonly used in peptide chemistry.
[0070]
  It is believed that some of the intermediates of general formula III or IIIA can be novel compounds. The new compounds have the general formula V or VA
[0071]
Embedded image

[0072]
(Where R³⁸, R³⁹, R⁴⁰, R⁴¹And R⁴²H, C_1-4-Alkyl, -OH, C_1-4-Alkoxy, -CN, Cl, Br, I, NO₂, NHR⁴³, -NHCOR⁴⁴, -NR⁴⁵ ₂, -N⁺R⁴⁵ _Three-, -COOH, -CONHR⁴⁶And -COOR⁴⁶Selected from
  X²Is H;
  Y²Is a leaving group or a hydroxyl or protected hydroxyl group;
  R³⁷Is H or an amine protecting group;
  R⁴³H, C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, and optionally substituted heteroaryl, an amine protecting group;
  R⁴⁴Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, optionally substituted heteroaryl and ligand;
  Each R⁴⁵Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, and optionally substituted heteroaryl; and
  R⁴⁶Is C_1-4Alkyl, optionally substituted phenyl, C_7-12-Selected from aralkyl, optionally substituted heteroaryl and ligand)
Can have.
[0073]
  In compounds of general formula III, ready to react with carboxylic acid derivatives (eg general formula IV), R^{twenty four}Is H. Precursors for such compounds have a ring nitrogen atom in a protected form, ie where R³⁷Represents a protecting group.
[0074]
  In the compound of formula V, the group Y²May be selected from among those defined above for the leaving group Y. Group Y²In view of the nature of the reagents that the compound of formula III / V should react in the next step, for example with the compound of general formula IV,²Should not be inactivated and do not form dimers of compounds of formula III or V. Leaving group Y²Preferred examples of are Cl and Br.
[0075]
  The compounds of formula III or IIIA and V or VA are the leaving group substituent Y at the carbon atom ortho to the substituent of the amine group.^FourAnd the group -CH₂CH = CHY^Five(Wherein the aniline derivative is reacted under cyclization conditions) using an aniline compound having an N-substituent as a starting material, in a preliminary step including a cyclization step in the presence of a catalyst, Can be prepared to form a dihydropyrrole or di- or tetrahydroquinoline ring. The starting compounds for such reactions are of general formula VI
[0076]
Embedded image

[0077]
(Where R³⁸~ R⁴²And X²Is the same as in the compound of formula IV;
  R⁴⁷Is an amine protecting group;
  Z¹And Z²One of them is Y^FiveAnd the other is H;
  Y^FiveIs Y²Different or the same leaving group; and
  Y^FourIs a radical leaving group)
Can be represented by:
[0078]
  For the cyclization to form a dihydropyrrole ring, the group Z¹Is Y^FiveAnd Y^FiveIs H or a leaving group (preferably Y²The same group), where the group Y^FiveIs not effective as a leaving group in this step of the synthesis. This reaction is carried out in the presence of a suitable catalyst, optionally in the presence of a free radical trap. Group Y^FourShould be a radical leaving group (such as halogen (preferably I or Br)). Y^FiveA suitable radical for carrying out the cyclization reaction using compound VI wherein is H is a nitroxy compound such as 2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxy (TEMPO). Y^FiveWhen is a leaving group, the cyclization can be carried out in the presence of a radical derived from azoisobutyronitrile (AIBN). A suitable catalyst for such a radical cyclization step is a tin hydride compound such as tributyltin hydride. Such a synthetic route is illustrated in Examples 1 and 3.
[0079]
  For cyclization to form a 6-membered ring, Z²Is Y^FiveAnd Y^FiveUsing a compound VI wherein is a leaving group (preferably a trialkylstannyl group) and a suitable catalytic palladium complex (tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0), bis (triphenylphosphine) palladium (II It is preferred to carry out the reaction in the presence of () chloride or palladium (II) acetate). This dihydroquinoline intermediate is oxidized, for example using a peroxide reagent, to form a further intermediate that is an epoxide. This epoxide intermediate is reduced using a suitable selective reducing agent (such as a dialkylaluminum hydride) and the corresponding tetrahydroquinoline alcohol (eg, using carbon tetrachloride / triphenylphosphine, followed by halogen Produced). This reaction is illustrated in Example 2.
[0080]
  Compounds of general formula VI can be produced by alkylation of the sodium salt of the corresponding aniline derivative using a 1,3-dihalopropene compound.
[0081]
  Carboxylic acid derivatives of the general formula V are described in Boger et al, 1997 op. For example, PDE-I and PDE-II can be synthesized using Umezawa synthesis, Rees-Moody synthesis, Magnus synthesis, Cava-Rawal synthesis, Boger-Colleman synthesis, Sundberg synthesis. , Martin synthesis, and Tojo synthesis. Indole-2-carboxylic acid is commercially available. Other analogs of the DNA binding subunit of duocarmycin and its reactive carboxylic acid derivatives are described by Boger et al, op. cit. And U.S. Pat. No. 5,843,937.
[0082]
  The present invention is highly cytotoxic when activated by oxidation or hydroxylation by the CYP enzyme (ie, significantly enhanced cells, although it has little or no cytotoxic effect under normal conditions). It relates to the creation of a wide range of prodrugs (which are toxic). This is because a self-targeting drug delivery system (where non-toxic (or negligible toxic) compounds can be administered to a patient (eg, in a systemic manner) and then The compound is activated at the site of the tumor cells (intratumoral activation) to form a highly cytotoxic compound that acts to kill the tumor cells). The fact that the CYP isoform is not expressed by normal cells indicates that activation of this compound occurs only at the site of the tumor cells, thereby affecting only the tumor cells and thus providing a self-targeting system. means.
[0083]
  The prodrugs of the present invention have the obvious advantage of being useful in the treatment of tumors at any site in the body, which means that tumors that have undergone metastasis (which usually affect site-specific therapy) Is difficult to be treated).
[0084]
  The prodrug can be an antitumor prodrug. Examples of tumors include cancer (malignant neoplasms) and other neoplasms (eg, benign tumors). This prodrug can be activated by hydroxylation with an isoform of cytochrome P450.
[0085]
  In various routine procedures that rely on CYP expression in tumor cells to effect selective hydroxylation of the prodrug and thereby activation, the selectivity between tumor tissue and normal tissue is enhanced in the two partial procedure. It is done. Therefore, (a) infecting tumor cells with a viral vector having a cytochrome P450 gene and a cytochrome P450 reductase gene (wherein the expression of cytochrome P450 gene and cytochrome P450 reductase gene by the tumor cell (B) making the tumor cell a prodrug (b) making the tumor cell selectively sensitized to the prodrug chemotherapeutic agent) Contact with a chemotherapeutic agent, thereby selectively killing tumor cells.
[0086]
  These prodrugs are benz (e) dihydroindole or benz-tetrahydroquinoline derivatives. The specific use of them as anti-tumor prodrugs has never been suggested or disclosed, nor is there any suggestion that they are prodrugs with activated and hydroxylated forms. . Even when compounds of formula (I) were already identified and manufactured, they were not recognized as anti-tumor agents because of their low (or negligible) cytotoxicity. Thus, intratumoral hydroxylation of the prodrugs of the present invention gives them surprising and unpredictable efficacy.
[0087]
  The hydroxylated form of the prodrug is a powerful DNA alkylating agent that binds in the minor groove of DNA and alkylates the purine base at the N3 position. As such, they are potent cytotoxic agents that are not known for the exact biological mechanism of action, but involve disruption of other functions of the template and DNA. General inhibition of the template function of DNA will affect all dividing cells in the body, will be totally toxic and will lead to unacceptable side effects in the therapeutic setting. However, the targeted production of hydroxylated forms in tumor cells overexpressing certain isoforms of cytochrome P450 will lead to specific cytotoxic effects only in those cells. Non-hydroxylated forms are substantially non-toxic to all cells.
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
[0088]
  The following examples illustrate the invention.
Example 1
[0089]
Embedded image

[0090]
  1.1 N- (tert-butyloxycarbonyl) naphthylamine (N- (tert-butyloxycarbonyl) naptylamine)
  A solution of 2-naphthoic acid (100 mg, 0.581 mmol) in t-BuOH (33 mL) was added to Et._ThreeTreated with N (96 μL, 0.7 mmol) and 4Å molecular sieves (1 g). Diphenylphosphoryl azide (0.15 ml, 0.7 mmol) was added and the reaction mixture was warmed and refluxed for 14 h. The mixture was cooled to 25 ° C. and the solvent was removed under vacuum. The residue is dissolved in EtOAc (10 mL) and the organic phase is washed with 10% aqueous HCl (3 × 15 mL), dried (MgSO 4)._Four) And concentrated. Flash chromatography (SiO₂, 10% EtOAc in hexanes) afforded 2 (0.108 mg, 77%) as a pale yellow solid. FABMS (NBA / Nal) 243 ([M⁺H]⁺Prediction 243) 269 ([M⁺Na]⁺Prediction 269).
[0091]
  1.2 2-Naphthylamine
  Compound 1.1 (1.5 g, 6.17 mmol) was dissolved in EtOAc (10 mL) to which 2.5 M HCl in EtOAc was added. The reaction mixture was stirred for 30 minutes. The resulting solution is then washed with sat'd aq. NaHCO_ThreeDilute with (50 mL) and extract with EtOAc (2 × 25 mL). The combined organic layers are dried (MgSO_Four) And concentrated. The residue was crystallized from 20% EtOAc in hexanes to give 3.3 (0.74 g, 84%) as light brown crystals:¹1 H NMR (250 MHz, CDCl_Three) Δ ppm 7.12-7.32 (m, 3H), 6.96 (t, 1H), 6.80 (t, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.52 (dd, 1H) 3.46 (br s, 2H); FAB MS (NBA / Nal) 143 ([M + H]⁺Prediction 143), 165 ([M + Na]⁺Prediction 165).
[0092]
  1.3 1-Bromo-2-naphthylamine
  A solution of 1.2 (100 mg, 0.7 mmol), TsOH (48 mg, 0.28 mmol) in THF (6 mL) was stirred and cooled to 0 ° C. NIS (125 mg, 0.56 mmol) and THF (6 mL) were added to the resulting mixture and the solution was warmed to 25 ° C. After 3 h, additional NIS (31 mg, 0.14 mmol) was added. After 1 h, the mixture was washed with 10% aqueous NaHCO3._Three(10 mL) diluted with CHCl_ThreeExtracted with (3 × 10 mL). The organic layers are combined and dried (MgSO_Four) And then concentrated. The residue is flash chromatographed (SiO₂, 30% EtOAc in hexanes) to give 1.3 (110 mg, 59%) as a brown-yellow oil:¹1 H NMR (250 MHz, CDCl_Three) Δ ppm 8.04 (d, 1H), 7.68 (d, 1 H), 7.62 (d, 1H), 7.50 (t, 1H), 7.28 (t, 1H), 7. 00 (d, 1H), 4.40 (brs, 2H); FABMS (NBA / Nal): 221 ([M + H]⁺Prediction 221), 243 ([M + Na]⁺Prediction 243).
[0093]
  1.4 N-di (tert-butyloxycarbonyl) -1-bromo-2-naphthylamine (N-Di (tert-butyloxycarbonyl) -1-bromo-2-naptylamine)
  1.3 (100 mg, 0.37 mmol) CH₂Cl₂(5 mL) solution of Boc-dicarbonate (219 mg, 1.0 mmol), Et_ThreeTreated with N (62 μl, 0.45 mmol) and DMAP (4.5 mg, 0.037 mmol). The reaction was refluxed at 50 ° C. for 24 h. The resulting mixture is H₂O (2 × 10 mL), 5% HCl (10 mL) and finally H again₂Washed with O (10 mL). Combine the organic layers and dry (MgSO_Four) And concentrated. The reaction was flash chromatographed (SiO₂  CH₂Cl₂/ Hexane 1: 1) to give 1.4 (125 mg, 72%) as a colorless solid.¹1 H NMR (250 MHz, CDCl_Three) Δ ppm 8.32 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.52-7.68 (m, 2H), 7.32 (d, 1H) , 1.50 (s, 18H); FABMS (NBA / Nal) 422 ([M + H]⁺Prediction 422), 446 ([M + Na]⁺Prediction 446).
[0094]
  1.5 N- (tert-Butyloxycarbonyl) -1-bromo-2-naphthylamine (N- (tert-Butyloxycarbonyl) -1-bromo-2-naphthylamine)
  Compound 1.4 (50 mg, 0.107 mmol) was added to TFA (16 μL, 0.213 mmol) in CH.₂Cl₂Treated with (2 mL) solution and stirred for 45 min. The mixture was concentrated and crystallized from hexanes to give 1.5 (13 mg, 34%) as white crystals. FABMS (NBA / Nal) 323 ([M + H]⁺Prediction 323), 346 ([M + Na]⁺Prediction 346).
[0095]
  1.6 N- (tert-Butyloxycarbonyl) -N- (3-chloro-2-propen-1-yl) -1-bromo-2-naphthylamine (N- (tert-Butyloxycarbonyl) -N- (3- chloro-2-propen-1-yl) -1-bromo-2-naptylamine)
  A solution of 1.5 (50 mg, 0.14 mmol) and DMF (5 mL) was cooled to 0 ° C. and NaH (9.8 mg, 0.408 mmol) was added. The resulting mixture was stirred for 15 min and 1,3 dichloropropene (38 μL, 0.41 mmol) was added. The solution was warmed to 25 ° C. and stirred for 90 min. The mixture is concentrated and the residue is flash chromatographed (SiO 2₂, 10% EtOAc in hexanes) to give 1.6 (56 mg, 93%) as a clear film. FABMS (NBA / Nal) 396 ([M + H]⁺Prediction 396), 418 ([M + Na]⁺Prediction 418).
[0096]
  1.7 3- (tert-Butyloxycarbonyl) -1- (chloromethyl) -1,2-dihydro-3H−Benz [e] Indole
  A solution of 1.6 (55 mg, 0.12 mmol) and AIBN (8 mg, 0.05 mmol) in anhydrous toluene (5 mL) for 15 min.₂Was degassed with and then heated to 90 ° C. Bu_ThreeSnH (65 μl, 0.25 mmol) was divided into 4 portions and added over 1 h and the resulting mixture was stirred for 1 h. The solution is then concentrated and flash chromatography (SiO 2₂, 10% EtOAc in hexane) and impure 3.8. Got. The solid was then dissolved in EtOAc (2 mL) and to this was added a 1M KF solution (1 ml) in EtOAc (1 mL). The solution was stirred for 45 min, after which the insoluble precipitate was filtered and the remaining solution was concentrated to give purified 1.7 (34 mg, 87%) as a pale yellow oily film. FABMS (NBA / Nal) 317 ([M + H]⁺Prediction 317).
[0097]
  1.8 1- (Chloromethyl) -3-[(5-methoxyindol-2-yl) carbonyl] -1,2-dihydro-3H-benz [e] indole
  Compound 1.7 (10 mg, 0.03 mmol) was treated with 2.5 M HCl in EtOAc (100 μL) and the solution was stirred for 30 min. The solvent was removed under a stream of nitrogen and the gray residue was dissolved in DMF (1 mL). 5-Methoxyindole-2-carboxylic acid (17 mg, 0.09 mmol) and EDC (17 mg, 0.09 mmol) were added and the mixture was stirred for 16 h. The solvent is removed under vacuum and the residue is flash chromatographed (SiO 2₂, EtOAc / hexane 1: 1) to give the product as a red oil (11 mg, 94%). FABMS (NBA / Nal) 391 (M + H⁺Prediction 391).
[0098]
  Example 2
[0099]
Embedded image

[0100]
  2.1 2- [N- (3- (tributylstannyl) -2-propen-1-yl) -N-((tert-butyloxy) carbonyl) amino-1-naphthalene (2- [N- (3- (Tributylstannyl) -2-propen-I-yl) -N-((tert-butyoxy) carbonyl)] amino-1-napthalene)
  1-benzoyl-5- (tert-butyloxycarbonyl) amino-4-iodoindole (100 mg, 0.22 mmol) was stirred in DMF (1 mL) and sodium hydride (26 mg, 0.66 mmol, 60 in oil). % Dispersion, 3 equivalents) was added. After 15 min, the suspension was treated with E / Z-1-tributylstannyl-3-bromopropene (270 mg, 0.66 mmol, 3 eq) and the resulting solution was stirred at RT for 16 h. The solution was concentrated and water (10 mL) was added. The aqueous solution was extracted with ethyl acetate (3 × 10 mL) and the organic layers were combined, dried and then concentrated. Flash chromatography (SiO₂10% ethyl acetate / hexane) gave the product (120 mg, 78%) as a yellow solid. FABMS (NBA / Nal): 699 (M + H⁺Prediction 699).
[0101]
  2.2 1,2-dihydro-1-((tert-butyloxy) carbonyl) -5,6-benzoquinoline
  1-benzoyl-5- [N- (3- (tributylstannyl) -2-propen-1-yl) -N-((tert-butyloxy) carbonyl)] amino-4-iodoindole (100 mg, 0.14 mmol ) And tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0) (32 mg, 0.2 eq.) In toluene (2 mL) at 50 ° C., N₂Under stirring for 4 h. The solvent was then removed under vacuum. Chromatography (SiO₂10% ethyl acetate / hexane) gave the product as a red oil (38 mg, 99%). FABMS (NBA / Nal): 282 (M + H⁺Prediction 282).
[0102]
  2.3 3,4-Epoxy-1-((tert-butyloxy) carbonyl) -1,2,3,4-tetrahydro-5,6-benzoquinoline
  1,2-dihydro-1-((tert-butyloxy) carbonyl) -5,6-benzoquinoline (100 mg, 0.36 mmol) and MCPBA (91 mg, 0.54 mmol, 1.5 eq) were added to CH.₂Cl₂(2 mL) at −30 ° C., N₂Under stirring for 6 h. The solvent was then removed under vacuum. Chromatography (SiO₂10% ethyl acetate / hexane) gave the product (101 mg, 95%). FABMS (NBA / Nal): 298 (M + H⁺Prediction 298).
[0103]
  2.4 4-Hydroxy-1-((tert-butyloxy) carbonyl) -1,2,3,4-tetrahydro-5,6-benzoquinoline
  3,4-Epoxy-1-((tert-butyloxy) carbonyl) -1,2,3,4-tetrahydro-5,6-benzoquinoline (100 mg, 0.34 mmol) in Dibal- in THF (2 mL) H (91 mg, 0.54 mmol, 1.5 eq) at −78 ° C. to −30 ° C., N₂Processed below. After 1 h, the reaction was quenched by the addition of water (2 mL) and the resulting solution was extracted with ethyl acetate (3 × 10 mL), the organic layers were combined, dried and concentrated. The solvent was removed under vacuum. Chromatography (SiO₂10% ethyl acetate / hexane) gave the product (55 mg, 54%) as a colorless solid. FABMS (NBA / Nal): 300 (M + H⁺Prediction 300), 322 (M + Na⁺Prediction 322).
[0104]
  2.5 4-Chloro-1-((tert-butyloxy) carbonyl) -1,2,3,4-tetrahydro-5,6-benzoquinoline
  At RT, PPh_Three(175 mg, 0.66 mmol, 2 eq) and CCl_Four(200 μL) CH₂Cl₂(2 mL) Using the prepared solution, CH₂Cl₂4-hydroxy-1-((tert-butyloxy) carbonyl) -1,2,3,4-tetrahydro-5,6-benzoquinoline (100 mg, 0.33 mmol) in (2 mL) was treated. After 4 h, the solvent was removed in vacuo. Chromatography (silica gel, 2 × 15 cm, 10% ethyl acetate / hexanes) gave the chloride as an oil (65 mg, 63%). FABMS (NBA / Nal): 318 (M + H⁺Prediction 318), 340 (M + Na⁺Prediction 340). This product may then be deprotected and further conjugated to a DNA-binding subunit such as 5-methoxyindole-2-carboxylic acid by process steps similar to Example 1.8.
[0105]
  Example 3 Biological Testing of Compound 1.8
  Materials and methods
[0106]
  3.1 Incubation mixture of test compound and microsomes
  Test compound activation with CYP enzyme was performed using NADPH supplemented rat liver microsomes. The incubation mixture contained microsomal protein (1 mg / ml), reduced-nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH, 10 mM) and phosphate buffer (pH 7.4, 100 mM). Test compounds (0.01-100 μM final concentration) in DMSO (20 μl) were added to the microsomal incubation mixture (0.5 ml) and incubated for 60 minutes at 37C. The control incubation contained the test compound and the microsomal incubation mixture was terminated at 0 hours. All incubations were terminated by the addition of an equal volume of ice-cold acetonitrile and then microfuged for 3 minutes. An aliquot of this supernatant was added to the cells in culture and then cytotoxicity was measured as described below.
[0107]
  3.2 Cytotoxicity measurement based on cell culture
  Chinese hamster ovary (CHO) cells were grown in MEM supplemented with 10% dialyzed FBS and G418 (400 μg / ml). All cells were seeded at a starting density of 1000 cells / well in 96 well plates and incubated at 37 ° C. for 24 hours. An aliquot (0.1 ml) of test compound / microsome / acetonitrile supernatant was then added to CHO cells. The cells were then allowed to sit for 24 hours at 37 ° C., 5% CO₂Incubated at After this time, MTT (50 μl; 2 mg / ml stock solution) was added to each well and the cells were incubated for an additional 4 hours. During this time, MTT, hydrogen acceptor tetrazolium salt, was reduced to formazan dye by mitochondrial dehydrogenase from viable cells. The medium was aspirated from the cells and DMSO (100 μl / well) was added to solubilize the colored formazan dye. The absorbance of the formazan dye in the 96-well plate was then measured at 550 nm. The effect of microsome activation by test compounds on the arrest of CHO cell proliferation is the IC with or without microsome incubation.₅₀(Concentration that inhibits cell growth by 50%) could be measured by comparing.
[0108]
[Table 1]

[0109]
Effect of compound 3.9 and its metabolic (activated) products on the survival of Chinese hamster ovary cells in culture. Cells were incubated for 24 hours with supernatant from a reaction mixture of compound 3.9 and NADPH-enhanced rat liver microsomes. IC₅₀Represents the concentration of drug required to inhibit cell proliferation by 50%. Values are expressed as mean + sd for 3 experiments. See method for full details of metabolism.
AF = activity factor (ie + IC obtained for compound 1.8 activation)₅₀Cytotoxicity ratio)
* Represents the significance at p> 0.05.

Claims (19)

Use of a compound of general formula I or IA or a salt thereof in the manufacture of a composition for use in a method of treatment of a tumor by treatment of an animal:

(Where X is H;
Y is —OCOOR ¹⁷ , —OCONHR ¹⁸ , Cl, Br, I and —OSOOR ¹⁹ (where R ¹⁷ , R ¹⁸ and R ¹⁹ are C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _{7- At} least one leaving group selected from ₁₂ -aralkyl and heteroaryl or substituted heteroaryl ;
R ¹ is —Ar, —NH ₂ , R ⁷ or —OR ⁷ ;
R ² , R ³ , R ⁴ R ⁵ and R ⁶ are each independently H, C _1-4 alkyl, —OH, C _1-4 alkoxy, —CN, Cl, Br, I, —NO ₂ , Selected from —NH ₂ , —NHR ¹⁶ , —NR ¹⁶ ₂ , —N ⁺ R ¹⁶ ₃ ; —NHCOR ⁸ , —COOH, —CONHR ⁹ , —NHCOOR ⁹ and —COOR ⁹ ;
R ⁷ , R ⁸ and R ⁹ are independently selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl, heteroaryl or substituted heteroaryl and a ligand;
Ar is

(Where B is N or CR ¹⁰ ;
R ¹⁰ is OH, C _1-4 alkoxy, C _1-4 alkyl, —NO ₂ , —NH ₂ , —CN, Cl, Br, I, —NHCOR ¹⁴ , —COOH, —CONHR ¹⁵ , —NHCOOR ¹⁵ , -Selected from COOR ¹⁵ and H;
Z is O, S, —CH═CH— or NH;
Each R ¹¹ is OH, C _1-4 alkoxy, C _1-4 alkyl, —NO ₂ , —NH ₂ , —NHR ¹⁶ , —NR ¹⁶ ₂ , —N ⁺ R ¹⁶ ₃ , —CN, Cl, Br, Selected from I, —NHCOR ¹⁴ , —COOH, —CONHR ¹⁵ , —NHCOOR ¹⁵ and COOR ¹⁵ ;
n is an integer ranging from 0 to 4;
R ¹² is H, —COAr ¹ , —CONH ₂ , —COOH, —COR ¹⁵ or —COOR ¹⁵ ;
Each R ¹³ is OH, C _1-4 alkoxy, C _1-4 alkyl, —NO ₂ , —NH ₂ , —NHR ¹⁶ , —NR ¹⁶ ₂ , —N ⁺ R ¹⁶ ₃ , —CN, Cl, Br, I, -NHCOR ^14, -COOH, are selected from -CONHR ^15, -NHCOOR ¹⁵ and -COOR ^15;
m is 0, 1 or 2;
R ¹⁴ is selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, heteroaryl or substituted heteroaryl, C _7-12 aralkyl, Ar ¹ and a ligand;
R ¹⁵ is selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl and heteroaryl or substituted heteroaryl and a ligand;
Each R ¹⁶ is independently selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl and heteroaryl or substituted heteroaryl; and Ar ¹ is the same group as Ar (Provided that at most one group R ¹¹ or R ¹³ in any one ring comprises the group Ar ¹ )) The use according to claim 1, wherein the animal is a human. Y is, C l, Br, and I or we selected, use according to claim 1 or 2, wherein. A compound of general formula I as defined in any of claims 1 and 3 for use in the treatment of animals by therapy. A pharmaceutical composition comprising a compound of general formula I as defined in any of claims 1 and 3 and a pharmaceutically acceptable excipient. Compound of general formula II or IIA or salt thereof

Wherein R ² , R ³ , R ⁵ and R ⁶ are as defined in claim 1;
X ¹ is H;
Y ¹ is —OCOOR ¹⁷ , —OCONHR ¹⁸ , Cl, Br, I and —OSOOR ¹⁹ (where R ¹⁷ , R ¹⁸ and R ¹⁹ are C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _{7 At} least one leaving group selected from _-12 -aralkyl and heteroaryl or substituted heteroaryl ;
R ²⁰ is R ⁷ , —OR ⁷ , NH ₂ or Ar ² ;
R ⁷ is selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl, heteroaryl or substituted heteroaryl and a ligand;
Ar ² is

(Where B ¹ is N or CR ²² ;
Z ¹ is O, S, —CH═CH—, or NR ²¹ ;
R ²¹ is an amine protecting group;
Each R ²² is OH, C _1-4 alkoxy C _1-4 alkyl, NO ₂ , —NHR ²¹ , —NHR ²⁶ , —NR ²⁶ ₂ , —N ⁺ R ²⁶ ₃ , —CN, Cl, Br, I, Selected from —NHCOR ²⁵ , —COOH, —CONHR ⁷ and —COOR ⁷ ;
p is an integer ranging from 0 to 4;
R ²³ is H, COAr ³ , —CONH ₂ , —COOH or —COR ⁷ , or is an amine protecting group;
Each R ²⁴ is OH, C _1-4 alkoxy C _1-4 alkyl, NO ₂ , —NHR ²¹ , —NHR ²⁶ , —NR ²⁶ ₂ , —N ⁺ R ²⁶ ₃ , —CN, Cl, Br, I, Selected from —NHCOR ²⁵ , —COOH, —CONHR ⁷ , and —COOR ⁷ ;
q is 0, 1 or 2;
R ²⁵ is selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, heteroalkyl or substituted heteroalkyl, C _7-12 -aralkyl, Ar ³ and a ligand;
R ²⁶ is selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl and heteroaryl or substituted heteroaryl; and Ar ³ is selected from the same groups as Ar ² (However, at most one group R ²² or R ²⁴ in any one ring includes the group Ar ³ ))) Y ¹ is, C l, Br, and I or we selected, the compounds of claim 6. 7. A compound according to claim 6 selected from:
3- (tert-butyloxycarbonyl) -1- (chloromethyl) -1,2-dihydro-3H-benz [e] indole;
1- (chloromethyl) -3-[(5-methoxyindol-2-yl) carbonyl] -1,2-dihydro-3Hbenz [e] indole;
4-chloro-1-((tert-butyloxy) carbonyl) -1,2,3,4-tetrahydro-5,6-benzoquinoline; and 4-chloro-1-((5 methoxyindol-2-yl) carbonyl ) -1,2,3,4-tetrahydro-5,6-benzoquinoline. 9. A compound according to any of claims 6-8 for use in the treatment of animals by therapy. A pharmaceutical composition comprising the compound according to any one of claims 6 to 8 and a pharmaceutically acceptable excipient. Compound of formula III or IIIA

Wherein R ² , R ³ , R ⁴ , R ⁵ and R ⁶ are as defined in claim 1;
X ² is H; and Y ² is —OCOOR ¹⁷ , —OCONHR ¹⁸ , Cl, Br, I and —OSOOR ¹⁹ (where R ¹⁷ , R ¹⁸ and R ¹⁹ are C _1-4 alkyl, At least one leaving group selected from phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl, and heteroaryl or substituted heteroaryl) or a hydroxyl or protected hydroxyl group)
Is the general formula IV
R ²⁷ COY ³ IV
Wherein R ²⁷ is selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl, heteroaryl or substituted heteroaryl and Ar ⁴ ;
Ar ⁴ is

(Where B ² is N or CR ³² ;
Z ² is O, S, —CH═CH— or NR ³³ ;
Each R ²⁸ is C _1-4 -alkoxy, C _1-4 -alkyl, NO ₂ , CN, Cl, Br, —NHR ³³ , —NHR ³⁵ , —NR ³⁵ ₂ , —N ⁺ R ³⁵ ₃ —, — Selected from NHCOR ³⁴ , —COOH, —CONHR ³⁶ and —COOR ³⁶ ;
r is an integer ranging from 0 to 4;
R ²⁹ is an amine protecting group;
R ³⁰ is an amine protecting group, —CONH ₂ , —COOH, —COR ³⁶ or —COAr ⁵ ;
Each R ³¹ is C _1-4 -alkoxy, C _1-4 -alkyl, NO ₂ , —CN, Cl, Br, —NHR ³³ , —NHR ³⁵ , —NR ³⁵ ₂ , —N ⁺ R ³⁵ ₃ , I , —NHCOR ³⁴ , —COOH, —CONHR ³⁶ , and —COOR ³⁵ ;
s is 0, 1 or 2;
R ³² is H C _1-4 -alkoxy, C _1-4 alkyl, NO ₂ , CN, Cl, Br, I, —NHR ³³ , —NHR ³⁵ , —NR ³⁵ ₂ , —N ⁺ R ³⁵ ₃ , — Selected from NHCOR ³⁴ , —COOH, —CONHR ³⁶ and COOR ³⁶ ;
R ³³ is an amine protecting group;
R ³⁴ is selected from Ar ⁵ , C _1-4 -alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl, heteroaryl or substituted heteroaryl and a ligand;
R ³⁵ is selected from C _1-4 -alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl and heteroaryl or substituted heteroaryl;
R ³⁶ is selected from C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl, heteroaryl or substituted heteroaryl and a ligand;
Ar ⁵ is selected from the same group as Ar ⁴ and Y ³ is —OCOOR ¹⁷ , —OCONHR ¹⁸ , Cl, Br, I and —OSOOR ¹⁹ (where R ¹⁷ , R ¹⁸ and R ¹⁹ are C _{1 -4} alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _7-12 -aralkyl, and at least one leaving group selected from heteroaryl or substituted heteroaryl (provided that many in any one ring At least one R ²⁸ or R ³¹ is NHCOAr ⁵ )))
A method of synthesis which is reacted with a compound of The process according to claim 11, which is carried out in the presence of an amide coupling agent. 13. The amine deprotection step in which any or all groups R ²⁹ (if any) and / or any or all groups R ³³ (if any) are subsequently replaced by H is followed in claim 11 or 12 The method described. Y ² is, C l, Br, and I or we selected, method of any of claims 11 to 13. Formula VI

Wherein R ^{38 to} R ⁴² , X ² and Y ² are the same as in the compound of formula III;
R ⁴⁷ is an amine protecting group;
One of Z ¹ and Z ² is Y ⁵ and the other is H;
Y ⁵ is —OCOOR ¹⁷ , —OCONHR ¹⁸ , Cl, Br, I and —OSOOR ¹⁹ (where R ¹⁷ , R ¹⁸ and R ¹⁹ are C _1-4 alkyl, phenyl or substituted phenyl, C _{7 -12} -aralkyl, and at least one leaving group selected from heteroaryl or substituted heteroaryl, which is a leaving group that is different from or the same as Y ² ; and Y ⁴ is halogen )
15. A compound of formula III or IIIA is produced in a series of preliminary steps comprising a cyclization step in which is cyclized via an aryl radical-alkene cyclization step in the presence of a catalyst. The method described. 16. The method of claim 15, wherein Z < ¹ > is Y < ² > and the cyclization step is performed in the presence of free radicals to form a dihydropyrrole ring. 16. The method of claim 15, wherein the free radical is generated from azoisobutyronitrile or is a 2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxy free radical. The process according to claim 16 or 17, wherein the catalyst is tributyltin hydride. Z ² is Y ⁵ , Y ⁵ is a trialkyltin radical, and the cyclization step is performed in the presence of a palladium complex to produce tetrahydroquinoline (which is oxidized to form an epoxide, which is then reduced 16. The method of claim 15, wherein if Y ² is other than hydroxyl, the hydroxyl group is subsequently converted to Y ² .