JP4599501B2 - 多発性骨髄腫および他の癌の処置におけるＩκＢのインヒビターとしてのカルボリン誘導体 - Google Patents

Description

（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、癌の処置に関する。特に、本発明は、癌細胞の増殖を阻害するため、および癌（多発性骨髄腫を含む）の処置のためのインヒビターＩκＢキナーゼの使用に関する。

（発明の背景）
転写因子ＮＦ−κＢは、Ｒｅｌタンパク質ファミリーのメンバーであり、そして代表的に、ｐ５０およびｐ６５サブユニットから構成されるヘテロダイマーである。ＮＦ−κＢは、細胞質に構成的に存在し、そしてインヒビターのＩκＢファミリーのうちの１つと会合することによって不活性化される。Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａら（ＷＯ ９５／２５５３３）は、ユビキチンプロテアソーム経路がＮＦ−κＢ活性の調節において本質的な役割を果たし、ｐ５０へのｐ１０５のプロセシングおよびインヒビタータンパク質ＩκＢαの分解の両方を担うことを教示する。Ｃｈｅｎら（Ｃｅｌｌ ８４：８５３（１９９６））は、分解前に、ＩκＢαが、マルチサブユニットＩκＢキナーゼ複合体（ＩＫＫ）によってセリン残基３２と３６で選択的にリン酸化されることを教示する。一旦、リン酸化されると、ＩκＢは、２６Ｓプロテアソームによるユビキチン化および分解のための標的にされ、核内へのＮＦ−κＢの移行を可能にする。ここで、ＮＦ−κＢは、標的遺伝子のプロモーターにおける特異的ＤＮＡ配列に結合し、そしてその転写を刺激する。

Ｒｉｔｚｅｌｅｒら（ＷＯ０１／６８６４８）は、ＩκＢキナーゼ阻害活性を有する一連のβ−カルボリン化合物を開示する。Ｒｉｎｅｈａｒｔら（米国特許第４，６３１，１４９号）は、抗ウイルス剤、抗菌剤、および抗腫瘍剤として有用なβ−カルボリン化合物を開示する。

ＮＦ−κＢの調節制御下における遺伝子のタンパク質産物としては、サイトカイン、ケモカイン、細胞接着分子、および細胞増殖および制御を媒介するタンパク質が挙げられる。重要なことに、これらの炎症促進性タンパク質（ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）の多くはまた、オートクライン様式またはパラクリン様式のいずれかで作用し得、さらにＮＦ−κＢ活性化を刺激する。さらに、ＮＦ−κＢは、正常細胞および悪性細胞の増殖において重要な役割を果たす。Ｂａｌｄｗｉｎ（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０７：２４１（２００１））は、ＮＦ−κＢがサイクリンＤ転写（Ｒｂの過剰リン酸化、Ｇ１期〜Ｓ期への移行、およびアポトーシスの阻害に関連する）を上方調節することによって細胞増殖を促進することを教示する。Ｂａｒｇｏｕら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：２９６１（１９９７））は、ＮＦ−κＢが、ホジキン病において構成的に活性化され、そしてＮＦ−κＢの阻害は、これらのリンパ腫細胞の増殖をブロックすることを教示する。さらに、Ｍａｙｏら（Ｓｃｉｅｎｃｅ １７８：１８１２（１９９７））は、ＩκＢαのスーパーリプレッサー（ｓｕｐｅｒ−ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ）の発現を介するＮＦ−κＢの阻害が、Ｈ−Ｒａｓの原癌遺伝子対立遺伝子を発現する細胞においてアポトーシスを誘導することを教示する。

Ｒｅａｄら（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２：４９３−５０６（１９９５））は、ＮＦ−κＢのプロテアソーム媒介型活性化が、細胞接着分子（例えば、Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１、およびＶＣＡＭ−１）の発現を必要とすることを教示する。Ｚｅｔｔｅｒ（Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４：２１９−２２９（１９９３））は、細胞接着分子が、脈管構造へのおよび脈管構造から体内の離れた組織部位への、腫瘍細胞の接着および溢出を指向することによって、インビボでの腫瘍転移および脈管形成に関与することを教示する。さらに、ＢｅｇおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４：７８２（１９９６））は、ＮＦ−κＢが抗アポトーシス制御因子であり、そしてＮＦ−κＢ活性化の阻害が、細胞を環境ストレスおよび細胞傷害性因子により感受性にすることを教示する。

多発性骨髄腫は、形質細胞のＢ細胞悪性疾患である。これは、２番目に一般的な血液悪性疾患（非ホジキンリンパ腫が最も一般的である）を代表する。米国における１年の発病率は、１００，０００人あたり約４人であり、そして北欧での発病率は米国と等しい。Ｇｒｅｅｎｌｅｅら（ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ ５０：７−３３（２０００））は、１年あたり約１３，６００症例の多発性骨髄腫が診断され、この疾患に起因して１年あたり約１１，２００人が死亡している（全ての癌による死の約２％を示す）ことを開示する。多発性骨髄腫は、１９９１年〜１９９５年の期間に、男性および女性の両方における死亡率の増加（それぞれ、５．６％および３．８％増加）を示すわずか３種類の癌のうちの１つである。

多発性骨髄腫は、リンパ節において生じる形質細胞のクローナルな増殖から生じ、そしてこれらの細胞が局在しかつ増殖する骨髄に「ホーミング（ｈｏｍｉｎｇ）」する。この疾患は、骨髄細胞腫瘍、および患者特異的なインタクトなモノクローナル免疫グロブリンの重鎖および／または軽鎖（パラプロテインまたはＭタンパク質）の過剰産生によって特徴付けられる。形質細胞腫瘍は、骨髄腫患者の約５３％において免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）および約２５％において免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）を産生し；これらのＩｇＧおよびＩｇＡ患者の４０％はまた、ベンスジョーンズ蛋白尿を有する。軽鎖骨髄腫は、患者の１５〜２０％において見出され；これらの形質細胞は、遊離のモノクローナルな軽鎖（κまたはλベンスジョーンズタンパク質）のみを分泌し、そして血清Ｍ成分は、通常電気泳動上には存在しない。免疫グロブリンＤ（ＩｇＤ）骨髄腫は、症例の約１％を占める。免疫グロブリンＥ（ＩｇＧ）骨髄腫のほんの少数の症例が報告されている。容易に検出可能な、血液および／または尿中のパラタンパク質の産生は、これらの患者の大部分における腫瘍組織量についての便利なマーカーである。

多発性骨髄腫は、首尾良く処置されない場合、感染に対する抵抗を低下させること、および重要な骨格の崩壊（骨の疼痛、病理学的骨折、および高カルシウム血症）、貧血、腎不全、および頻度は低いものの、神経学的合併症、および過粘稠症候群）を引き起こすことによって、発病率および最終死亡率の進行を導く。Ａｎｄｅｒｓｏｎら（Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３６：３（１９９９））は、患者が細胞傷害性化学療法および／またはステロイドに最初は応答し得るが、患者らは最終的に耐性疾患に罹患することを教示する。この癌は治癒しにくい。ＲａｊｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ（Ｎｅｗ Ｅｎｇ Ｊ Ｍｅｄ ３４１：１６０６−１６０９（１９９９））は、多発性骨髄腫を有する患者の５年生存率が、４０年以上も２９％のままであることを記載する。

Ｖｉｄｒｉａｌｅｓ ＭＢおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ ＫＣ（Ｍｏｌｅｃ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ ２（１）：４２５−４３１（１９９６））は、骨髄における骨髄腫腫瘍細胞体積の増大（骨髄の微小環境に由来する影響をともなう）、ならびに悪性疾患細胞および骨髄間質細胞によるサイトカインの産生に関する複雑な制御が存在することを示唆する。ＩＬ−６は、骨髄腫細胞について重大な増殖因子であり、そしてまた、骨髄腫細胞におけるアポトーシスを阻害する。Ｃｈａｕｈａｎら（Ｂｌｏｏｄ，８７：１１０４（１９９６））は、骨髄腫細胞の骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）への接着が、ＮＦ−κＢ依存性の、ＩＬ−６転写の上方調節を誘導し、さらに骨髄腫の細胞増殖を永続化する。さらに、Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２０：４５１９（２００１））は、多発性骨髄腫細胞がＴＮＦα（ＢＭＳＣにおいてＮＦ−κＢの活性化を誘導する）を分泌し、それによってＢＭＳＣにおいてＩＬ−６の転写および分泌を直接上方調節することを教示する。この参考文献はまた、ＴＮＦα誘導ＮＦ−κＢ活性化が、ＭＭ細胞およびＢＭＳＣの両方におけるＩＣＡＭ−１（ＣＤ５４）およびＶＣＡＭ−１（ＣＤ１０６）の発現の上方調節を生じ、ＭＭ−ＢＭＳＣ結合の増加を生じることを教示する。これらの参考文献によって示唆される多発性骨髄腫におけるＮＦ−κＢの役割と一致して、Ｆｅｉｎｍａｎ Ｒら（Ｂｌｏｏｄ ９３：３０４４（１９９９））は、上昇したレベルのＮＦ−κＢ活性は、再発の多発性骨髄腫において見出されることを教示する。

従って、癌（多発性骨髄腫を含む）の処置にとって有効な、ＮＦ−κＢのインヒビターを同定する必要性が存在している。

（発明の簡単な要旨）
本発明者らは、ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）の特異的インヒビターが、癌細胞増殖を阻害し、ＮＦ−κＢ媒介性の、癌細胞における接着分子発現の上方調節を阻害し、そして細胞間接着を阻害することを発見した。さらに、ＩＫＫの阻害は、薬物誘導性アポトーシスに対するＩＬ−６の保護的効果をブロックする。

従って、第一の局面において、本発明は、癌細胞増殖を阻害するための方法を提供し、この方法は、癌細胞と本明細書中に記載されるようなＩκＢキナーゼインヒビターとを接触させる工程を包含する。第一の実施形態において、このＩκＢキナーゼインヒビターは、式（Ｉ）

の化合物またはその立体異性体もしくは生理学的に許容性の塩であり、ここで：
Ｂ_６、Ｂ_７、Ｂ_８、およびＢ_９は、炭素原子および窒素原子からなる群から独立して選択され、ここで、合計２つ以下のＢ_６、Ｂ_７、Ｂ_８、およびＢ_９は、窒素原子であり；そして
ケースａ）において：
置換基Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、互いに独立して、以下の１．１．〜１．１８．のいずれかである：
１．１． 水素原子、
１．２． ハロゲン、
１．３． −ＣＮ、
１．４． −ＣＯＯＨ、
１．５． −ＮＯ_２、
１．６． −ＮＨ_２、
１．７． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるか、または以下からなる群より独立して選択される置換基によって１置換〜５置換されている、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル：
１．７．１ 非置換であるかまたはハロゲンもしくは−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルによって１置換〜５置換されている、フェニル
１．７．２ ハロゲン、
１．７．３ −ＮＨ_２、
１．７．４ −ＯＨ、
１．７．５ Ｒ^ｌ６が、水素原子または−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルである、−ＣＯＯＲ^１６、
１．７．６ −ＮＯ_２、
１．７．７ −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、ｙは、０、１または２であり、Ｒ^１４は、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、フェニル（これは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている）、アミノまたは−Ｎ（Ｒ^１３）_２であり、
ここで、各Ｒ^１３は、独立して、水素原子、フェニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、または−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であり、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上で定義された通りであり、そしてここで、アルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義された基から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されているか、あるいは、
これら２つのＲ^１３基は、これらが結合する窒素原子と一緒になって５〜７個の環原子を有する複素環を形成する、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
１．７．８ −Ｏ−フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−Ｏ−フェニル、
１．７．９ ラジカルであって、ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソキサゾリジン、２−イソキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェン、およびチオモルホリン、からなる群から選択される、ラジカル、
１．７．１０ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキルまたは、
１．７．１１ ＝Ｏ、
１．８． −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、
１．９． −ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５であって、ここで、Ｒ^１５は、
１．９．１ ラジカルであって、ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソキサゾリジン、２−イソキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェンおよびチオモルホリンからなる群から選択され、
ここで、このラジカルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されている、ラジカル、
１．９．２ −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基および−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル（アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている）からなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
１．９．３ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、
１．９．４ −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記１．７．７で定義される通りである、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、あるいは
１．９．５ フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ_３、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかもしくは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されているか、またはこのフェニルラジカルの２つの置換基は、共にジオキソラン環を形成する、フェニル、
である、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５、
１．１０． −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
１．１１． −Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、フェニルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキルであり、ここで、アルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２、
１．１２． −Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、上記の１１に定義された通りである、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２、
１．１３． −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
１．１４． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、
１．１５． −Ｏ−（Ｃ_０〜Ｃ_４）−アルキル−（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、
１．１６． −（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７に定義された通りである、−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２、
１．１７． −ＣＦ_３、あるいは、
１．１８． −ＣＦ_２−ＣＦ_３であり；
Ｒ^４は、以下の１．〜１４．のいずれかである：
１． −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
２． −ＣＦ_３、
３． −ＣＦ_２−ＣＦ_３、
４． −ＣＮ、
５． −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
６． −ＮＨ_２、
７． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは互いに独立して以下で１置換〜５置換されている、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル：
７．１ フェニルであって、このフェニルは、非置換であるかまたはハロゲンもしくは−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルで１置換〜５置換されている、フェニル、
７．２ ハロゲン、
７．３ −ＮＨ_２、
７．４ −ＯＨ、
７．５ −ＣＯＯＲ^１６であって、ここで、Ｒ^１６は、水素原子または−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルである、−ＣＯＯＲ^１６、
７．６ −ＮＯ_２、
７．７ −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、ｙは、０、１または２であり、Ｒ^１４は、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、フェニル（このフェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている）、アミノ、および−Ｎ（Ｒ^１３）_２であり、
ここで、各Ｒ^１３は、独立して、水素原子、フェニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、または−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であり、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上で定義された通りであり、そしてここで、アルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義された基から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されているか、あるいは、
これら２つのＲ^１３基は、これらが結合する窒素原子と一緒になって５〜７個の環原子を有する複素環を形成する、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
７．８ −Ｏ−フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−Ｏ−フェニル、
７．９ ラジカルであって、ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソキサゾリジン、チオフェン、２−イソキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリンおよびチオモルホリンからなる群から選択される、ラジカル、
７．１０ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキルまたは、
７．１１ ＝Ｏ、
８． −Ｎ（Ｒ^１７）_２であって、ここで、各Ｒ^１７は、独立して、水素原子、フェニル，−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、または−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であり、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上で定義された通りであり、そしてアルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義された基から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されているか、あるいは、該２つのＲ^１７基は、これらが結合する窒素原子と一緒になって５〜７個の環原子を有する複素環を形成する、−Ｎ（Ｒ^１７）_２、
９． −ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５であって、ここで、Ｒ^１５は、
９．１ ラジカルであって、ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソキサゾリジン、２−イソキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェンおよびチオモルホリンからなる群から選択され、
ここで、該ラジカルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されている、ラジカル、
９．２ −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル（アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている）からなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル
９．３ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、
９．４ −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７で定義された通りであるが、ただし、−Ｎ（Ｒ^１３）_２は−ＮＨ_２ではない、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、あるいは
９．５ フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ_３、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかもしくは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されているか、または該フェニルラジカルの２つの置換基は、共にジオキソラン環を形成する、フェニル、
である、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５、
１０． −Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、フェニルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキルであり、ここで、アルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２
１１． −Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、上記１０．で定義された通りである、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２、
１２． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、
１３． −Ｏ−（Ｃ_０〜Ｃ_４）−アルキル−（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、あるいは、
１４． −（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記１．７．７に定義された通りである、−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２；
Ｒ^５は、以下の１．〜１６．のいずれかである：
１． 水素原子、
２． −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．４で定義される群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
３． −Ｃ（Ｏ）−Ｒ^９であって、ここで、Ｒ^９は、−ＮＨ_２、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル（このアルキルは、非置換であるかまたは７．１〜７．４で定義された基から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている）または−Ｎ（Ｒ^１３）_２であり、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７で定義した通りである、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^９、あるいは
４． −Ｓ（Ｏ）_２−Ｒ^９であって、ここで、Ｒ^９は、上記の３．で定義した通りであるか；あるいは、
Ｒ^４とＲ^５とは、それらが結合する原子と一緒になって、複素環を形成するか；あるいは
Ｒ^３とＲ^５とは、それらが結合する原子と一緒になって、環内にさらなる酸素原子を含有する複素環を形成し；そして
Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、互いに独立して水素原子またはメチルである；あるいは
ケースｂ）において：
置換基Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^４は、互いに独立して、上記ケースａ）における１．１〜１．１８に定義した通りであり；
Ｒ^３は、以下の１．〜１６．のいずれかであり：
１． −ＣＦ_３、
２． −ＣＦ_２−ＣＦ_３、
３． −ＣＮ、
４． −ＣＯＯＨ、
５． −ＮＯ_２、
６． −ＮＨ_２、
７． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは互いに独立して、以下によって１置換〜５置換されている、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル：
７．１ フェニルであって、フェニルは、非置換であるかまたはハロゲンもしくは−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルによって１置換〜５置換されている、フェニル、
７．２ ハロゲン、
７．３ −ＮＨ_２、
７．４ −ＯＨ、
７．５ −ＣＯＯＲ^１６であって、ここで、Ｒ^ｌ６は、水素原子または−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルである、−ＣＯＯＲ^１６、
７．６ −ＮＯ_２、
７．７ −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、ｙは、０、１または２であり、そしてＲ^１４は、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、フェニル（このフェニルは、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義されている置換基からなる群より独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている）、アミノおよび−Ｎ（Ｒ^１３）_２であり、
ここで、各Ｒ^１３は、独立して、水素原子、フェニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、または−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であり、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上で定義された通りであり、そして、ここで、アルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義された基から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されているか、あるいは
これら２つのＲ^１３基は、これらが結合する窒素原子と一緒になって５〜７個の環原子を有する複素環を形成する、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
７．８ −Ｏ−フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義された置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−Ｏ−フェニル
７．９ ラジカルであって、ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソキサゾリジン、２−イソキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェンおよびチオモルホリンからなる群から選択される、ラジカル、
７．１０ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキルまたは、
７．１１ ＝Ｏ、
８． −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、
９． −ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５であって、ここで、Ｒ^１５は、
９．１ ラジカルであって、ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソキサゾリジン、２−イソキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェンおよびチオモルホリンからなる群から選択され、
ここで、このラジカルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されている、ラジカル、
９．２ −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基および−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル（アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている）からなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
９．３ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、
９．４ −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７．で定義される通りである、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、あるいは
９．５ フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ_３、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかもしくは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されているか、またはこのフェニルラジカルの２つの置換基は、共にジオキソラン環を形成する、フェニル、
である、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５、
１０． −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
１１． −Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、フェニルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキルであり、ここで、アルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２、
１２． −Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、上記の１１．に定義された通りである、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２、
１３． −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
１４． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、
１５． −Ｏ−（Ｃ_０〜Ｃ_４）−アルキル−（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、あるいは
１６． −（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７に定義された通りである、−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２；
Ｒ^５は、上記のケースａ）におけるＲ^５の通りであり；そして
Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、互いに独立して水素原子またはメチルである。

第二の実施形態において、ＩκＢキナーゼインヒビターは、式（ＩＩ）

の化合物またはその立体異性体もしくは生理学的に許容性の塩であって、ここで：
Ｒ^１およびＲ^２は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ、アミノ、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル、ニトロ、−ＣＦ_３、−ＣＦ_２−ＣＦ_３、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４または−Ｎ（Ｒ^１８）_２であって、ここで、
ｙは、１または２であり；
Ｒ^１４は、アミノ、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、またはフェニルであり、ここで、アルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは式（Ｉ）について１．７．１〜１．７．１１において定義された置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されており：
各Ｒ^１８は、独立して、水素原子、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ピリジル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであり、ここで、ピリジルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１に定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルからなる群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されており、そしてここで、アルキルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されているか；または、
これら２つのＲ^１８基は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、５〜７個の環原子を有する複素環を形成し；
Ｒ^３は、シアノ、アミノ、−Ｏ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、ニトロ、−ＣＦ_３、−ＣＦ_２−ＣＦ_３、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、または−Ｎ（Ｒ^１８）_２であって、ここで、
ｙは、１または２であり；
Ｒ^１４は、アミノ、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、またはフェニルであり、ここで、アルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されており；
各Ｒ^１８は、独立して、水素原子、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ピリジル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであり、ここで、ピリジルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１に定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルからなる群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されており、そしてここで、アルキルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されているか；または、
これら２つのＲ^１８基は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、５〜７個の環原子を有する複素環を形成し；そして
Ｒ^５は、水素原子、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^９、または−Ｓ（Ｏ）_２−Ｒ^９であって、ここで、
Ｒ^９は、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、またはフェニルであり；
アルキルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．４で定義された置換基の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されており；そして
フェニルは、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義された置換基および−Ｎ（Ｒ^１８）_２の群から独立して選択される置換基で１置換〜３置換されており、ここで、Ｒ^１８は、上で定義された通りである。

第二の局面において、本発明は、癌を処置するための方法を提供し、この方法は、本発明の第一の局面に記載されるようなＩκＢキナーゼインヒビターを、癌を有する患者に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、この癌は、多発性骨髄腫である。

（発明の詳細な説明）
本発明は、癌細胞増殖を阻害するための方法に関する。特に、本発明は、本明細書中に記載されるようなＩκＢキナーゼインヒビターを癌細胞に投与することによる、癌細胞増殖を阻害するための方法を提供する。本発明はさらに、癌細胞を有する患者にＩκＢキナーゼインヒビターを投与することによる、癌を処置するための方法を提供する。

本明細書中で言及される発行された特許および刊行された科学文献は、当業者に入手可能な知見を確立する。本明細書中で引用される全ての特許、特許出願および参考文献は、これらの各々が具体的かつ個々に参考として援用されることが示されるのと同じ程度まで、本明細書によって参考として援用される。不一致の場合、本開示が優先である。

第一の局面において、本発明は、ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）インヒビターを癌細胞に投与することによる、癌細胞増殖を阻害するための方法を提供する。好ましくは、このような阻害は特異的である。すなわち、ＩＫＫインヒビターは、別の無関係の生物学的影響を生じるのに必要なインヒビターの濃度よりも低い濃度で、ＩＫＫがＩκＢαをリン酸化する能力を低減させる。好ましくは、ＩＫＫ阻害活性に必要なインヒビター濃度は、無関係の生物学的影響を生じるのに必要な濃度よりも、少なくとも１／２低く、より好ましくは少なくとも１／５低く、なおより好ましくは少なくとも１／１０低く、そして最も好ましくは少なくとも１／２０低い。ＩＫＫ阻害活性に必要なインヒビター濃度は、実施例に記載されるアッセイを含む、ＩＫＫ活性を測定するための任意の適切なアッセイによって決定され得る。無関係の生物学的影響を生じるのに必要なインヒビター濃度は、酵素アッセイ、レセプター結合アッセイおよび／または薬理学的アッセイのパネルにインヒビターを供することによって、決定され得る。

いくつかの好ましいＩＫＫインヒビターは、Ｒｉｚｅｌｅｒら、ＷＯ０１／６８６４８（その全教示は、その全体が本明細書により参考として援用される）に記載される化合物を含むβ−カルボリン化合物であり、この特許文献中に開示される全ての化合物、式および合成手順を含む。

従って、いくつかの実施形態において、本発明のこの局面による方法は、癌細胞と式（Ｉ）のＩκＢキナーゼインヒビター：

またはその立体異性体もしくは薬学的に許容性の塩とを接触させる工程を包含し、ここで：
Ｂ_６、Ｂ_７、Ｂ_８、およびＢ_９は、炭素原子および窒素原子からなる群から独立して選択され、ここで、合計で２つ以下のＢ_６、Ｂ_７、Ｂ_８、およびＢ_９は、窒素原子であり；そして
ケースａ）において：
置換基、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、互いに独立して、以下の１．１．〜１．１８．である：
１．１． 水素原子、
１．２． ハロゲン、
１．３． −ＣＮ、
１．４． −ＣＯＯＨ、
１．５． −ＮＯ_２、
１．６． −ＮＨ_２、
１．７． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、このアルキルは、非置換であるかまたは以下：
１．７．１ フェニルであって、このフェニルは、非置換であるかまたはハロゲンもしくは−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルによって１置換〜５置換されている、フェニル
１．７．２ ハロゲン、
１．７．３ −ＮＨ_２、
１．７．４ −ＯＨ、
１．７．５ −ＣＯＯＲ^１６であって、ここで、Ｒ^ｌ６は、水素原子または−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルである、−ＣＯＯＲ^１６、
１．７．６ −ＮＯ_２、
１．７．７ −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、ｙは、０、１または２であり、Ｒ^１４は、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、フェニル（このフェニルは、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている）、アミノ、または−Ｎ（Ｒ^１３）_２であり、ここで、各Ｒ^１３は、独立して、水素原子、フェニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、または−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であり、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上で定義された通りであり、そしてここで、アルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義された基から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されているか、あるいは、
これらの２つのＲ^１３基は、これらが結合する窒素原子と一緒になって５〜７個の環原子を有する複素環を形成する、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
１．７．８ −Ｏ−フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−Ｏ−フェニル、
１．７．９ ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソオキサゾリジン、２−イソオキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェン、およびチオモルホリンからなる群から選択される、ラジカル、
１．７．１０ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキルまたは、
１．７．１１ ＝Ｏ、
からなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
１．８． −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、
１．９． −ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５であって、ここで、Ｒ^１５は、
１．９．１ ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソオキサゾリジン、２−イソオキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェン、およびチオモルホリン、からなる群から選択されるラジカルであって、ここで、このラジカルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されている、ラジカル、
１．９．２ −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基および−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル（このアルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている）からなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
１．９．３ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、
１．９．４ −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７で定義される通りである、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、あるいは
１．９．５ フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ_３、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかもしくは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されているか、またはフェニルラジカルの２つの置換基は、共にジオキソラン環を形成する、フェニル、
である、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５、
１．１０． −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
１．１１． −Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、フェニルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキルであり、ここで、アルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２、
１．１２． −Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、上記の１１．に定義された通りである、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２、
１．１３． −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
１．１４． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、
１．１５． −Ｏ−（Ｃ_０〜Ｃ_４）−アルキル−（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、
１．１６． −（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７に定義された通りである、−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２、
１．１７． −ＣＦ_３、あるいは、
１．１８． −ＣＦ_２−ＣＦ_３；
Ｒ^４は、以下の１．〜１４．である：
１． −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
２． −ＣＦ_３、
３． −ＣＦ_２−ＣＦ_３、
４． −ＣＮ、
５． −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
６． −ＮＨ_２、
７． Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは互いに独立して以下：
７．１ フェニルであって、このフェニルは、非置換であるかまたはハロゲンもしくは−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルで１置換〜５置換されている、フェニル、
７．２ ハロゲン、
７．３ −ＮＨ_２、
７．４ −ＯＨ、
７．５ −ＣＯＯＲ^１６であって、ここで、Ｒ^１６は、水素原子または−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルである、−ＣＯＯＲ^１６、
７．６ −ＮＯ_２、
７．７ −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、ｙは、０、１または２であり、Ｒ^１４は、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、フェニル（このフェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている）、アミノ、および−Ｎ（Ｒ^１３）_２であり、ここで、各Ｒ^１３は、独立して、水素原子、フェニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、または−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であり、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上で定義された通りであり、そしてここで、アルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義された基から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されているか、あるいは、
これらの２つのＲ^１３基は、これらが結合する窒素原子と一緒になって５〜７個の環原子を有する複素環を形成する、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
７．８ −Ｏ−フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−Ｏ−フェニル、
７．９ ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソオキサゾリジン、チオフェン、２−イソオキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、およびチオモルホリンからなる群から選択される、ラジカル、
７．１０ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキルまたは、
７．１１ ＝Ｏ、
によって互いに独立して１置換〜５置換されている、Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
８． −Ｎ（Ｒ^１７）_２であって、ここで、各Ｒ^１７は、独立して、水素原子、フェニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、または−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であり、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上で定義された通りであり、そしてアルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義された基から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されているか、あるいは、これらの２つのＲ^１７基は、これらが結合する窒素原子と一緒になって５〜７個の環原子を有する複素環を形成する、−Ｎ（Ｒ^１７）_２、
９． −ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５であって、ここで、Ｒ^１５は、
９．１ ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソオキサゾリジン、２−イソオキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェン、およびチオモルホリンからなる群から選択されるラジカルであって、ここで、このラジカルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されている、ラジカル、
９．２ −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基および−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル（このアルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている）からなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル
９．３ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、
９．４ −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７で定義された通りであるが、ただし、−Ｎ（Ｒ^１３）_２は−ＮＨ_２ではない、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、あるいは
９．５ フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ_３、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかもしくは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されているか、またはフェニルラジカルの２つの置換基は、共にジオキソラン環を形成する、フェニル、
である、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５、
１０． −Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、フェニルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキルであり、ここで、アルキルまたはフェニルは、上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２
１１． −Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、上記１０．で定義された通りである、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２、
１２． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、
１３． −Ｏ−（Ｃ_０〜Ｃ_４）−アルキル−（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、あるいは、
１４． −（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記１．７．７に定義された通りである、−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２；
Ｒ^５は、以下の１．〜４．である：
１． 水素原子、
２． −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．４で定義される群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
３． −Ｃ（Ｏ）−Ｒ^９であって、ここで、Ｒ^９は、−ＮＨ_２、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル（このアルキルは、非置換であるかまたは７．１〜７．４で定義された基から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている）または−Ｎ（Ｒ^１３）_２であり、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７で定義した通りである、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^９、
４． −Ｓ（Ｏ）_２−Ｒ^９であって、ここで、Ｒ^９は、上記の３．で定義した通りであるか；あるいは、
Ｒ^４とＲ^５は、それらが結合する原子と一緒になって、複素環を形成するか；あるいは
Ｒ^３とＲ^５は、それらが結合する原子と一緒になって、環内にさらなる酸素原子を含有する複素環を形成し；そして
Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、互いに独立して水素原子またはメチルである；あるいは
ケースｂ）において：
置換基Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^４は、互いに独立して、上記ケースａ）における１．１〜１．１８に定義した通りであり；
Ｒ^３は、以下であり：
１． −ＣＦ_３、
２． −ＣＦ_２−ＣＦ_３、
３． −ＣＮ、
４． −ＣＯＯＨ、
５． −ＮＯ_２、
６． −ＮＨ_２、
７． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、このアルキルは、非置換であるかまたは以下：
７．１ フェニルであって、このフェニルは、非置換であるかまたはハロゲンもしくは−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルによって１置換〜５置換されている、フェニル
７．２ ハロゲン、
７．３ −ＮＨ_２、
７．４ −ＯＨ、
７．５ −ＣＯＯＲ^１６であって、ここで、Ｒ^ｌ６は、水素原子または−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルである、−ＣＯＯＲ^１６、
７．６ −ＮＯ_２、
７．７ −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、ｙは、０、１または２であり、そしてＲ^１４は、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、フェニル（このフェニルは、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義されている置換基からなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている）、アミノおよび−Ｎ（Ｒ^１３）_２であり、
ここで、各Ｒ^１３は、独立して、水素原子、フェニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、または−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であり、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上で定義された通りであり、そして、ここで、アルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは１．７．１〜１．７．１１で定義された基から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されているか、あるいは
これらの２つのＲ^１３基は、これらに結合する窒素原子と一緒になって５〜７個の環原子を有する複素環を形成する、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
７．８ −Ｏ−フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記１．７．１〜１．７．１１で定義された置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−Ｏ−フェニル
７．９ ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソオキサゾリジン、２−イソオキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェン、およびチオモルホリンからなる群から選択される、ラジカル、
７．１０ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキルまたは、
７．１１ ＝Ｏ、
によって互いに独立して１置換〜５置換されている、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
８． −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、
９． −ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５であって、ここで、Ｒ^１５は、
９．１ ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソオキサゾリジン、２−イソオキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェン、およびチオモルホリンからなる群から選択されるラジカルであって、ここで、このラジカルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されている、ラジカル、
９．２ −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基および−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル（このアルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている）からなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
９．３ −（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、
９．４ −Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７で定義される通りである、−Ｎ（Ｒ^１３）_２、あるいは
９．５ フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ_３、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかもしくは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されているか、またはフェニルラジカルの２つの置換基は、共にジオキソラン環を形成する、フェニル、
である、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５、
１０． −Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４であって、ここで、Ｒ^１４およびｙは、上記の１．７．７に定義された通りである、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、
１１． −Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、フェニルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキルであり、ここで、アルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１２、
１２． −Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２であって、ここで、Ｒ^１２は、上記の１１．に定義された通りである、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ^１２、
１３． −（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであって、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されている、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、
１４． −Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、
１５． −Ｏ−（Ｃ_０〜Ｃ_４）−アルキル−（Ｃ_３〜Ｃ_７）−シクロアルキル、または
１６． −（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２であって、ここで、Ｒ^１３は、上記の１．７．７に定義された通りである、−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル−Ｎ（Ｒ^１３）_２；
Ｒ^５は、上記のケースａ）におけるＲ^５として定義される通りであり；そして
Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８は、互いに独立して水素原子またはメチルである。

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）のＩＫＫのインヒビターは、ケースａ）の化合物であり、ここで：
Ｂ_６、Ｂ_７、Ｂ_８、およびＢ_９は、それぞれ炭素原子であり；そして
Ｒ^４は、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^１５であって、ここで、Ｒ^１５は、上記の９．１〜９．５に定義される通りである。

いくつかの好ましい実施形態において、Ｒ^１５は、
ピロリジン、テトラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソオキサゾリジン、２−イソオキサゾリン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェン、およびチオモルホリンからなる群から選択されるラジカルであって、ここで、このラジカルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されている、ラジカル；または
フェニルであって、ここで、フェニルは、非置換であるかまたは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ_３、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜５置換されており、ここで、アルキルは、非置換であるかもしくは上記の１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されているか、またはフェニルラジカルの２つの置換基は、共にジオキソラン環を形成する、フェニル、
である。

いくつかの実施形態において、本発明のこの局面による方法は、癌細胞と式（ＩＩ）のＩκＢキナーゼインヒビター：

またはその立体異性体もしくは薬学的に許容性の塩とを接触させる工程を包含し、ここで：
Ｒ^１およびＲ^２は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ、アミノ、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル、ニトロ、−ＣＦ_３、−ＣＦ_２−ＣＦ_３、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、または−Ｎ（Ｒ^１８）_２であって、ここで、
ｙは、１または２であり；
Ｒ^１４は、アミノ、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、またはフェニルであり、ここで、これらのアルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基からなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されており；
各Ｒ^１８は、独立して、水素原子、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ピリジル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであり、ここで、ピリジルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されており、そしてここで、アルキルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されているか；または、
これらの２つのＲ^１８基は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、５〜７個の環原子を有する複素環を形成し；
Ｒ^３は、シアノ、アミノ、−Ｏ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、ニトロ、−ＣＦ_３、−ＣＦ_２−ＣＦ_３、−Ｓ（Ｏ）_ｙ−Ｒ^１４、または−Ｎ（Ｒ^１８）_２であって、ここで、
ｙは、１または２であり；
Ｒ^１４は、アミノ、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、またはフェニルであり、ここで、このアルキルまたはフェニルは、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されており；
各Ｒ^１８は、独立して、水素原子、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−ピリジル、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−フェニル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたは−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキルであり、ここで、ピリジルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基、−ＣＦ_３、ベンジル、および−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されており、そしてここで、アルキルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義される置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されているか；または、
これらの２つのＲ^１８基は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、５〜７個の環原子を有する複素環を形成し；そして
Ｒ^５は、水素原子、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ^９、または−Ｓ（Ｏ）_２−Ｒ^９であって、ここで、
Ｒ^９は、−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_１０）−アルキル、またはフェニルであり；
アルキルは、各場合において、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．４で定義された置換基の群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されており；そして
フェニルは、非置換であるかまたは式（Ｉ）の化合物について１．７．１〜１．７．１１で定義された置換基の群および−Ｎ（Ｒ^１８）_２から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換されており、ここで、Ｒ^１８は、上で定義された通りである。

いくつかの実施形態において、ＩＫＫインヒビターは、上記のような式（ＩＩ）の化合物であり、ここで：
Ｒ^１は、ブロモ、−ＣＦ_３またはクロロであり；
Ｒ^２は、水素原子またはＯ−（Ｃ_１〜Ｃ_２）−アルキルであり；
Ｒ^３は、−Ｎ（Ｒ^１８）_２であって、ここで、各Ｒ^１８は、独立して、水素原子、−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−ピリジル、−Ｃ（Ｏ）−フェニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_７）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_４）−アルキルであって、ここで、アルキルまたはフェニルは、各場合において、非置換であるかまたはハロゲンおよび−Ｏ−（Ｃ_１〜Ｃ_２）−アルキルからなる群から独立して選択される置換基（単数または複数）で１置換〜３置換され；そして
Ｒ^５は、水素原子、メチルまたは−Ｓ（Ｏ）_２−ＣＨ_３である。

種々の他の実施形態において、ＩＫＫインヒビターは、式（ＩＩ）の化合物であり、ここで：
Ｒ^１はクロロであり、Ｒ^３は、−Ｈ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_３であり、そしてＲ^２およびＲ^５は、それぞれ水素原子であるか；または
Ｒ^１は、クロロであり、Ｒ^３は、−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−ピリジルであって、ここで、ピリジルは、非置換であるかまたはクロロで置換されており、Ｒ^２は、水素原子または−Ｏ−ＣＨ_３であり、そしてＲ^５は、水素原子であるか；または
Ｒ^１は、クロロであり、Ｒ^３は、−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−フェニルであって、ここでフェニルは、フルオロによって１置換または２置換されており、そしてＲ^２およびＲ^５は、それぞれ水素原子である。

いくつかの特に好ましい実施形態において、ＩＫＫインヒビターが、Ｎ−（６−クロロ−９Ｈ−カルボリン−８−イル）−ニコチンアミド（そのビスメチルスルホン酸塩、ビストリフルオロ酢酸塩およびビス塩酸塩を含む）、Ｎ−（６−クロロ−９Ｈ−カルボリン−８−イル）−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド（その塩酸塩を含む）、Ｎ−（６−クロロ−７−メトキシ−９Ｈ−カルボリン−８−イル）−ニコチンアミド（そのビストリフルオロ酢酸塩およびビス塩酸塩を含む）、ならびに６−クロロ−Ｎ−（６−クロロ−９Ｈ−カルボリン−８−イル）−ニコチンアミドからなる群より選択される。

１つの特に好ましい実施形態において、本発明のこの局面に従う方法は、癌細胞を、Ｎ−（６−クロロ−９Ｈ−βーカルボリン−８−イル）ニコチンアミドまたはその立体異性体もしくは生理学的に許容可能な塩と接触させる工程を包含する。

式（Ｉ）または式（ＩＩ）のＩκＢキナーゼインヒビターは、好ましくは、Ｒｉｚｅｌｅｒら、ＷＯ ０１／６８６４８に記載されるように合成される。塩形成可能である式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物の生理学的に許容可能な塩（その立体異性体形態を含む）の調製は、当該分野で公知の方法に従って実行され得る。塩基性試薬（例えば、水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、アルコキシド、およびアンモニアも）または有機塩基（例えば、トリメチルアミン、もしくはトリエチルアミン、エタノールアミンまたはトリエタノールアミン）あるいは塩基性アミノ酸（例えば、リジン、オルニチンまたはアルギニン）を用いると、そのカルボン酸は、安定なアルカリ金属アンモニウム塩、安定なアルカリ土類金属アンモニウム塩、または必要に応じて置換されたアンモニウム塩を形成する。式Ｉの化合物が塩基性基を含む場合、安定な酸付加塩もまた、強酸を使用して調製され得る。このために、無機酸および有機酸の両方（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタン硫酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、４−ブロモベンゼンスルホン酸、シクロヘキシルアミドスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、またはトリフルオロ酢酸）が、適切である。

用語「アルキル」とは、それ自体でかまたは別の置換基上の一部として、他のように示されない限りは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖の炭化水素ラジカル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔｉａｒｙ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、ノニル、オクチル、デカニル、あるいは、３〜７個の単離原子を有するシクロアルキル（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシル、またはシクロヘプチル））を意味する。

用語「アルコキシ」とは、それ自体でかまたは別の置換基上の一部として、他のように示されない限りは、−Ｏ−アルキルまたは−Ｏ−置換アルキルを意味する。

用語「５〜７個の環原子を有する複素環」とは、１、２、または３個のヘテロ原子を環構成員として含む、５〜７個の環構成員を有する単環式飽和系のラジカルを指す。ヘテロ原子の例は、Ｎ、ＯおよびＳである。５〜７個の環原子を有するそのような複素環の例としては、ピロリジン、テロラヒドロピリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、フラン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、オキソラン、イミダゾリン、イソキサゾリジン、２−イソキサゾリジン、イソチアゾリジン、２−イソチアゾリン、チオフェン、およびチオモルホリンが挙げられるが、これらに限定されない。

他のように示されない限り、用語「アリール」とは、単独でかまたは別の置換基の一部であるかに関わらず、１つの原子を除去することにより芳香族分子から誘導された有機ラジカルを指す。そのようなアリール基の非限定的例としては、フェニル、ピリジル、チアゾリル、モルホリニル、およびナフチルが挙げられる。

用語「置換アルキル」とは、ハロゲン基、ニトロ基、スルホ基、アミノ基、置換アミノ基、カルボキシ基、アルコキシ基、−Ｏ−アリール基、−Ｏ−置換アリール基、およびヒドロキシル基のうちの１つ以上のラジカルによって、１つ以上の位置で置換されている、アルキルラジカルを意味する。

用語「置換アリール」とは、ハロゲン基、アルキル基、置換アルキル基、ニトロ基、スルホ基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基、置換アリール基、またはヒドロキシル基のうちの１つ以上のラジカルによって、１つ以上の位置で置換されているアリールラジカルを意味し、１〜３個の基によって１〜３個の位置で置換されているアリールラジカルが好ましい。

用語「置換アミノ」とは、−Ｎ（Ｒ^１３）_２を指し、ここで、Ｒ^１３は、各存在において、水素原子、スルホ、アルキル、アリール、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−アリール、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アルキル、またはＣ（Ｏ）−Ｏ−アリールからなる群より独立して選択され、各アルキルまたはアリールは、独立して置換され得る。

用語「スルホ」とは、−Ｓ（Ｏ）ｙ−Ｒ^１４を指し、ここで、Ｒ^１４は、アルキル、アリール、置換アリール、置換アルキル、アミノ、または置換アミノであり、ｙは、０、１または２である。

用語「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味するものとして理解される。

用語「−（Ｃ_１〜Ｃ_ｎ）−アルキル」とは、その炭素鎖が直鎖状または分枝状であり、かつ１個〜ｎ個の炭素原子を含む、炭化水素ラジカルを意味するものとして理解される。

本発明の目的のために、用語「癌細胞」とは、異常に増殖する任意の細胞を指し、その細胞としては、膵臓癌細胞、結腸癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞、腎臓癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、胃癌細胞、食道癌細胞、肝細胞癌細胞、または頭部および頸部の癌細胞、黒色腫細胞、白血病細胞、および多発性骨髄腫細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、この癌細胞は、細胞培養物（初代培養物および不死化細胞株を含む）中で増殖される。他のいくつかの実施形態において、この癌細胞は、動物（好ましくは、哺乳動物）中にある。本明細書中で使用される場合、用語「哺乳動物」は、ラット、マウス、イヌ、ブタ、ウサギ、非ヒト霊長類、およびヒトを包含するが、これらに限定されない。

第２の局面において、本発明は、癌を処置するための方法を提供し、この方法は、癌を有する患者に、ＩκＢキナーゼインヒビターを投与する工程を包含する。本発明のこの局面における使用のために好ましいＩκＢキナーゼインヒビターは、本発明の第１の局面における使用のために記載されるＩκＢキナーゼインヒビターである。

本明細書中で使用される場合、用語「癌」とは、制御されていない異常な増殖を患者身体中の細胞がしている状態を意味するために、使用される。異常な細胞は、固形腫瘍を形成するように増殖し得るし、または多数の細胞を形成するように増殖し得る（例えば、白血病）。好ましくは、本発明の癌は、転移性である。癌は、制御されていない異常な細胞増殖であると規定されているので、この用語は、正常な細胞増殖（例えば、幹細胞または精母細胞の増殖）を包含しない。

いくつかの実施形態において、その癌患者は、血液学的悪性腫瘍を有する。血液学的悪性腫瘍の非限定的例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、ホジキン病（ＨＤ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、マクログロブリン血症（Ｗａｌｄｓｔｒｏｍ’ｓ）、脊髄形成異常症候群（ＭＤＳ）（過剰な芽細胞を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢ）および形質転換におけるＲＡＥＢ（ＲＡＥＢ−Ｔ）を含む）、ならびに骨髄増殖性症候群が挙げられる。他のいくつかの実施形態において、その癌患者は、前立腺癌、結腸癌、乳癌、前立腺癌（アンドロゲン依存性前立腺癌およびアンドロゲン非依存性前立腺癌を含む）、腎臓癌、肺癌、卵巣癌、胃癌、食道癌、肝細胞癌、または頭部および頸部の癌または黒色腫に罹患している。他のいくつかの実施形態において、その癌患者は、脳腫瘍、骨腫瘍、または軟組織肉腫に罹患している。

このＩκＢキナーゼインヒビターは、薬学的に受容可能な任意の経路（非経口経路（静脈内経路、皮下経路、および筋肉内経路を含む）、経口経路、舌下経路、皮内経路、局所経路、経鼻経路、気管内経路、直腸内経路、眼内経路および膣内経路を含むが、これらに限定されない）によって、投与され得る。約７０ｋｇ重量である成体患者の処置のために、式（Ｉ）または式（ＩＩ）に従う化合物の効力に依存して、一日用量約２０ｍｇ〜１０００ｍｇの活性化合物（好ましくは約１００ｍｇ〜５００ｍｇ）が、示される。しかし、特定の条件下で、より高い一日用量または低い一日用量さえ、適切であり得る。この一日用量の投与は、個々の用量単位の形態または多数のより少ない投与単位の形態の単回投与、および特定の間隔での分割した用量の複数回投与の両方が、実行され得る。

単一治療レジメンおよび併用療法レジメンの両方が、本発明の範囲内に企図される。本発明の目的のために、用語「単一治療」とは、別の抗腫瘍剤と同時に処置することのない、ＩκＢキナーゼインヒビターを用いる処置を指す。本発明の目的のために、用語「併用療法」とは、ＩκＢキナーゼインヒビターと別の抗腫瘍剤とを用いる同時治療を指す。用語「同時」とは、同時処置、連続的処置、および交互の処置を包含することが意図される。

いくつかの実施形態において、その抗腫瘍剤は、細胞傷害性化学療法、放射線療法または免疫療法からなる群より選択される。ＩκＢキナーゼインヒビターと組み合わせて使用するために適切な細胞傷害性薬剤の非限定的例としては、ゲムシタビン、イリノテカン、５−フルオロウリシル、タキサン（例えば、タキソールまたはタキソテール）、白金剤（例えば、シスプラチンまたはカルボプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、ミトキサントロン、およびＤｏｘｉｌ^ＴＭ）、アルキル化剤（例えば、メルファランおよびシクロホスファミド）、フルダラビンおよびデキサメタゾンが挙げられる。

他のいくつかの実施形態において、このＩκＢキナーゼインヒビターは、ＮＦ−κＢの活性を阻害する別の薬剤（プロテアソームインヒビターが挙げられるが、これに限定されない）とともに投与される。ＩκＢキナーゼインヒビターと組み合わせて使用するために適切なプロテアソームインヒビターの例としては、Ａｄａｍｓら、米国特許第５，７８０，４５４号（１９９８）、同第６，０６６，７３０号（２０００）および同第６．０８３，９０３号（２０００）に開示されるインヒビターが、挙げられるがこれらに限定されない。このような一つのプロテアソームインヒビターは、Ｎ−ピラジンカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン−Ｌ−ロイシンボロン酸である。

以下の実施例は、本発明の特定の好ましい実施形態をさらに例示するために示され、本発明の範囲を限定することは意図されない。

（実施例１：材料および方法）
（ＭＭ由来細胞株および親ＭＭ細胞）
Ｄｅｘ感受性（ＭＭ．１Ｓ）ヒトＭＭ細胞株を、スティーブン・ローゼン博士（Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）より親切にも提供された。ＲＰＭＩ８２２６細胞およびＵ２６６ヒトＭＭ細胞を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から得た。すべてのＭＭ細胞株を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．ＭＯ）、２μＭ Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン（Ｐｅｎ）および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｓｔｒｅｐ）（ＧＩＢＣＯ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を含むＲＰＭＩ−１６４０中で培養した。親ＭＭ細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ分離システム（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、親ＢＭ吸引液から精製した。ＭＭ細胞の純度を、ＰＥ結合体化抗ＣＤ１３８抗体（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｃｏ．）を使用するフローサイトメトリーによって確認した。

（ＢＭＳＣ培養物）
ＢＭ検体を、ＭＭに罹患している患者から得た。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｉｐａｑｕｅ密度沈降により分離した単核球（ＭＮＣ）を使用して、以前に記載されたように（Ｕｃｈｉｙａｍａら、Ｂｌｏｏｄ ８２：３７１２〜３７２０（１９９３））、長期ＢＭ培養物を樹立した。接着細胞単層が発達したときに、細胞を、０．２５％トリプシンと０．０２％ ＥＤＴＡとを含むハンクス緩衝化生理食塩水溶液（ＨＢＳＳ）中で収集し、洗浄し、そして遠心分離によって収集した。

（インヒビター）
プロテアソームインヒビターＰＳ−３４１およびＩκＢαキナーゼ（ＩＫＫ）インヒビター化合物１（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を、ＤＭＳＯ中に溶解し、そして使用するまで−２０℃にて保存した。ＰＳ−３４１および化合物１を、使用する直前に培養媒地中に希釈した。ＰＳ−３４１および化合物１コントロール培地は、＜０．１％のＤＭＳＯを含んだ。ＭＡＰＫキナーゼ（ＭＥＫ）インヒビターであるＰＤ９８０５９を、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（Ｂｅｒｖｅｒｌｙ，ＭＡ）から購入した。

（ＤＮＡ合成）
増殖を、以前に記載されたように（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら、Ｂｌｏｏｄ ９６：２９４３（２０００））して測定した。ＭＭ細胞（３×１０^４細胞／ウェル）を、培地、ＰＳ−３４１、化合物１、および／またはＤｅｘもしくは組換えヒトＩＬ−６（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）の存在下で、９６ウェル培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）中で、３７℃にて４８時間インキュベートした。ＤＮＡ合成を、［^３Ｈ］−チミジン（［^３Ｈ］−ＴｄＲ、ＮＥＮ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）取り込みによって測定した。細胞を、［^３Ｈ］ＴｄＲ（０．５μＣｉ／ウェル）を用いて、４８時間培養のうちの最後の８時間の間パルスした。すべての実験は、三連で行った。

（増殖阻害アッセイ）
ＭＭ増殖に対するＰＳ−３４１および化合物１の阻害効果を、細胞の３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル臭化四ナトリウム（ＭＴＴ）色素吸収を測定することによって、アッセイした。４８時間培養物からの細胞を、各ウェルに対して５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ １０μＬを用いて、４８時間培養の最後の４時間パルスし、その後、０．０４Ｎ ＨＣｌを含む１００μＬイソプロパノールを用いてパルスした。吸光度を、分光計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐ．，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ ＣＡ）を使用して５７０ｎｍで測定した。

（イムノブロッティング）
ＭＭ細胞を、ＰＳ−３４１または化合物１とともに培養し、収集し、洗浄し、溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４０、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ＮａＦ、２ｍＭ Ｎａ_３ＶＯ_４、１ｍＭ ＰＭＳＦ、５μｇ／ｍＬロイペプチンン、および５μｇ／ｍＬアプロチニン）を用いて溶解した。ホスホ−ＩκＢα、ＩκＢα、ホスホ−ＭＡＰＫ、ホスホ−ＳＴＡＴ３、ＥＰＫ２またはα−チューブリンの検出のために、細胞溶解物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、ＰＶＤＦ膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に移し、そして抗ホスホ−ＩκＢα Ａｂ、抗ＩκＢα Ａｂ、抗ホスホ−ＭＡＰＫ Ａｂ、または抗ホスホＳＴＡＴ３ Ａｂ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）および抗α−チューブリン（Ｓｉｇｍａ）Ａｂを用いて免疫ブロットした。

（電気泳動移動度シフトアッセイ）
電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）を、以前の研究（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２０：４５１９（２００１）；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：３０７１（２００１）におけるように実行した。簡単に述べると、ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＰＳ−３４１（５μＭ、１時間）および化合物１（１０μＭ、９０分間）とともにプレインキュベートし、その後、ＴＮＦα（５ｎｇ／ｍＬ）を用いて１０分間または２０分間刺激した。その後、細胞をペレットにし、４００μＬの低張度溶解緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、１０ｍＭ ＫＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１ｍＭ Ｎａ_３ＶＯ_４、５ｍＭ ＮａＦ、１ｍＭ ＰＭＳＦ、５μｇ／ｍＬロイペプチン、５μｇ／ｍＬアプロチニン）中に再懸濁し、氷上に２０分間維持した。４℃にて遠心分離（１４０００ｇで５分間）した後、核ペレットを、１００μＬ高張度溶解緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、４００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ Ｎａ_３ＶＯ_４、５ｍＭ ＮａＦ、１ｍＭ ＰＭＳＦ、５μｇ／ｍＬロイペプチン、５μｇ／ｍＬアプロチニン）を用いて氷上で２０分間抽出した。４℃にて遠心分離（１４０００ｇで５分間）した後、その上清を核抽出物として収集した。二本鎖ＮＦ−κＢコンセンサスオリゴヌクレオチドプローブ（５’−ＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＣ−３’；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈ．）を、［^３２Ｐ］ＡＴＰ（５０μＣｉ、２２２ＴＢｑ／ｍＭ；ＮＥＮ、Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を用いて末端標識した。１ｎｇのオリゴヌクレオチドおよび５μｇの核タンパク質を含む結合反応を、全容量１０μＬの結合緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５ｍＭ ＤＴＴ、４％グリセロール（ｖ／ｖ）、および０．５μｇポリ（ｄＩ−ｄＣ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｅａｐａｃｋ，ＮＪ）中にて、室温で２０分間実行した。スーパーシフト分析のために、１μｇの抗ｐ６５ ＮＦ−κＢ Ａｂを、この反応を混合する５分間前に添加し、その直後に、放射性標識プローブを添加した。そのサンプルを、４％ポリアクリルアミドゲル上にローディングし、Ｗｈａｔｍａｎ紙（Ｗｈａｔｍａｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，Ｕ．Ｋ．）に移し、そしてオートラジオグラフィーによって可視化した。

（フローサイトメトリー分析）
細胞周期分析に関して、化合物１（１０μＭ）、Ｄｅｘ（１μＭ）、ＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍＬ）、またはコントロール培地中で２４〜４８時間にわたって培養したＭＭ細胞を収集し、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、７０％エタノールで固定し、そして１０μｇ／ｍＬのＲＮａｓｅ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）で処理した。次いで、細胞をヨウ化プロピジウム（ＰＩ，Ｓｉｇｍａ）（５μｇ／ｍＬ）で染色した。ＩＣＡＭ−１発現の検出に関しては、化合物１（１０μＭ）の存在下または不存在下でＴＮＦα（５ｎｇ／ｍＬ）中で培養したＭＭ細胞を収集し、ＰＢＳで洗浄し、そしてマウスＩｇＧアイソタイプコントロールまたはＦＩＴＣ結合体化マウス抗ヒトＣＤ５４ Ａｂを用いて染色した。細胞周期プロファイルおよびＩＣＡＭ−１発現の両方を、Ｅｐｉｃｓ（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ）フローサイトメーターを、先の研究（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２０：４５１９（２００１））においての通りに用いて決定した。

（ＢＭ中のパラクリンＭＭ細胞増殖に対する化合物１の影響）
ＢＭＳＣに付着性のＭＭ細胞中の増殖刺激およびシグナル伝達を評価するために、３×１０^４個のＭＭ．１Ｓ細胞を、化合物１の存在下または不存在下で、ＢＭＳＣコーティング９６ウェルプレート中で４８時間にわたって培養した。ＤＮＡ合成を、上記の通りに測定した。Ｄｕｏｓｅｔ ＥＬＩＳＡ（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、化合物１の存在下または不存在下での、ＭＭ．１Ｓ細胞を伴うかまたは伴わない、ＢＭＳＣの４８時間培養物の上清中のＩＬ−６を測定した。

（統計分析）
コントロール培養物に対して薬物処理培養物中で観察された差の統計学的有意性を、Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔ検定を用いて決定した。最小レベルの有意性は、Ｐ＜０．０５であった。

（実施例２：Ｎ−（６−クロロ−９Ｈ−β−カルボリン−８−イル）−ニコチンアミド（化合物１）の合成）

水（８９ｍＬ）および１ＭＨＣ１水溶液（２９．８ｍＬ、２９．８ｍｍｏｌ）中のノルハルマン（ｎｏｒｈａｒｍａｎ）（２．０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（３．１７ｇ、２３．８ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液をＲＴで６時間にわたって、次いで０℃〜５℃にて１２時間にわたって攪拌した。この反応物を水（１００ｍＬ）で希釈し、そして固体Ｋ_２ＣＯ_３（４．３ｇ）で慎重に塩基性化した。ＲＴにて１時間にわたって攪拌した後、この生成物を収集し、そして水で洗浄した。粗製生成物をクロロホルム中で１時間にわたって還流し、そして１５℃まで冷却した後濾過して、２．０５ｇの７−クロロ−カルボリンを得た。

濃硝酸（２０ｍＬ）中の７−クロロ−β−カルボリン（５００ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の混合物を、ＲＴにて２２時間攪拌した。この反応混合物を、冷たい（３℃〜５℃）水（５０ｍＬ）中に慎重に注ぎ、そして２時間攪拌した後、沈澱物を収集した。固体を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５０ｍＬ）中に懸濁し、そしてＲＴにて１２時間攪拌した。生成物を濾過し、そして水で洗浄して、５５０ｍｇの７−クロロ−９−ニトロ−β−カルボリンを提供した。

６５℃〜７０℃のＥｔＯＨ（１４ｍＬ）中の７−クロロ−９−ニトロ−β−カルボリン（５４８ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）の懸濁物に、塩化スズ二水和物（２．５ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）を添加した。その後、６Ｍ ＨＣｌ水溶液（１４ｍＬ）を滴下した。この混合物を７０℃〜８０℃で３．５時間にわたって攪拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中にゆっくりと分配した。水相を抽出（２回）し、そして合わせた有機溶液を乾燥（ブライン；ＮａＳＯ_４）し、そして濃縮して４８４ｍｇの９−アミノ−７−クロロ−β−カルボリンを得た。

ピリジン（１５０ｍＬ）中の９−アミノ−７−クロロ−β−カルボリン（２．７５ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の冷（３〜５℃）溶液に、ニコチニルクロリドヒドロクロリド（２．８２ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物をＲＴまで温め、そして２０時間攪拌した後、この反応物を水（１００ｍＬ）および１Ｍ ＮａＯＨ（２５ｍＬ）で希釈した。ＲＴにて１時間にわたって攪拌した後、この混合物を水（２００ｍＬ）中に注いだ。この混合物を１時間にわたって静置し、そして生成物を濾過し、水で洗浄し、ＲＴにて減圧下で乾燥した後、３．８０ｇの表題化合物を提供した。

（実施例３：化合物１は、ＩκＢキナーゼ活性を阻害する）
（ＩκＢキナーゼ複合体の単離）
ＩκＢキナーゼ複合体を、１０ｍＬのＨｅＬａ Ｓ３細胞抽出物Ｓ１００画分を４０ｍＬの５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）で最初に希釈することによって調製した。次いで、４０％硫酸アンモニウムを添加し、そして氷上で３０分間インキュベートした。沈澱したペレットを５ｍＬのＳＥＣ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＤＴＴ、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ２−グリセロホスフェート）に再溶解し、２０，０００×ｇにて１５分間遠心分離により明澄化し、そして０．２２μｍフィルターユニットによって濾過した。サンプルを、ＳＥＣ緩衝液で平衡化した。３２０ｍＬ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ−６ ＦＰＬＣカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）にローディングし、２ｍＬ／分の流速で４℃で操作した。６７０ｋＤａ分子量マーカーにまたがる画分を活性化のためにプールした。

（ＩκＢキナーゼ複合体の活性化）
キナーゼ含有プールを、３７℃で４５分間にわたる１００ｎＭ ＭＥＫＫ１Δ、２５０μＭ ＭｇＡＴＰ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、５ｍＭ ＤＴＴ、１０ｍＭ ２−グリセロホスフェート、および２．５μＭ Ｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎ−ＬＲを用いたインキュベーションによって活性化した。活性化酵素を、将来の使用のために、−８０℃で保存した。

（ＩκＢキナーゼ活性のアッセイ）
９６ウェルプレート１ウェルあたり、２μＬ ＤＭＳＯ中の種々の濃度の化合物を、アッセイ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ ＤＴＴ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１０ｍＭ ２−グリセロホスフェート、２．５μＭ ＭＩｃｒｏｃｙｓｔｉｎ−ＬＲ）で［２５：１］希釈した活性化酵素４３μＬとともに２５℃にて３０分間にわたってプレインキュベートした。２００μＭストック溶液の５μｌのペプチド基質（ビオチン−（ＣＨ_２）_６−ＤＲＨＤＳＧＬＤＳＭＫＤ−ＣＯＮＨ_２）を各ウェルに添加し、そして１時間にわたってインキュベートし、その後、１５０μＬの５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、０．１％ ＢＳＡ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ＋［１：２００］抗体を用いてクエンチングした。１ウェルあたりの１００μＬのクエンチングしたキナーゼ反応サンプルおよびホスホ−ペプチド−較正標準物（ビオチン−（ＣＨ_２）_６−ＤＲＨＤＳ［ＰＯ３］ＧＬＤＳＭＫＤ−ＣＯＮＨ_２、アッセイ緩衝液中の連続希釈した）を、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ａプレート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）に移し、そして攪拌しながら２時間にわたってインキュベートした。ＰＢＳでの３回の洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合体化したストレプトアビジン（０．５μｇ／ｍＬを１００μＬ）を、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／０．１％ ＢＳＡで希釈し、３０分間添加した。ＰＢＳでの５回の洗浄後、１００μＬのＴＭＢ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）を添加し、そして１００μＬの０．１８Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４を添加することによって発色を停止させた。吸光度のシグナルを、４５０ｎｍにて記録した。較正曲線標準を、４パラメーター用量応答式を用いて線形回帰によって当てはめた。この標準曲線に基づいて、候補薬学的因子の阻害活性を決定するために、キナーゼ活性のレベルを算出した。阻害化合物１は、このアッセイにおいて０．０５２μＭのＩＣ_５０を示す。

（実施例４：化合物１は、ＭＭ．１Ｓ細胞および患者ＭＭ細胞におけるＩ−κＢαリン酸化を阻害する）
化合物１によるＩκＢαリン酸化の阻害を、ＴＮＦαによって誘発される、ＭＭ．１Ｓ細胞および患者ＭＭ細胞においてアッセイした。図１Ａにおいて見られるように、ＩκＢαのセリンリン酸化および分解は、ＤＭＳＯコントロール培地中の細胞のＴＮＦα処理の５分後および１０分後に有意に誘導され、一方、ＩκＢαのリン酸化および分解は、ＭＭ．１Ｓ細胞の化合物１前処理によって完全にブロックされた。化合物１の用量依存性効果を研究するために、ＭＭ．１Ｓ細胞を１．２５μＭ〜４０μＭの化合物１で９０分間前処理し、次いでＴＮＦα（５ｎｇ／ｍＬ）によって刺激した。図１Ｂにおいて見られ得るように、ＩκＢαのリン酸化は、５μＭ以上の化合物１によって完全に阻害された。ＭＭ．１Ｓ細胞においてのように、化合物１はまた、患者ＭＭ細胞においてＴＮＦαによって誘発されるＩκＢαのリン酸化および分解を阻害した（図１Ｃ）。これらの結果は、ＩκＢαのリン酸化および分解に対する化合物１の時間依存性でかつ用量依存性の阻害効果を実証する。

（実施例５：化合物１は、ＭＭ．１Ｓ細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を阻害する）
ＮＦ−κＢ活性化は、ＩκＢαのリン酸化、ユビキチン付加、および分解を必要とするので、本発明者らは次に、ＥＭＳＡによって評価した場合に、化合物１がＮＦ−κＢ活性化を阻害し得るか否かを調べた。ＤＭＳＯコントロール培地または化合物１（１０μＭにて９０分間）のいずれかで前処理したＭＭ．１Ｓ細胞を、ＴＮＦα（０〜２０分間にわたって５ｎｇ／ｍＬ）によって刺激した。図２において見られ得るように、ＮＦ−κＢ活性化は、化合物１での前処理によって完全に阻害された。ＰＳ−３４１は、依然に報告されたように、ＮＦ−κＢ活性化の阻害についてのポジティブコントロールとして役立った（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２０：４５１９（２００１）；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：３０７１（２００１））。

（実施例６：化合物１は、ＭＭ細胞株の生存率を低下させる）
ＭＭ細胞に対する化合物１の直接的影響を研究するために、［３Ｈ］−ＴｄＲ取り込みを、化合物１（１．５μＭ〜５０μＭ）の存在下で４８時間にわたって培養したＭＭ．１Ｓ細胞株、Ｕ２６６細胞株およびＲＰＭＩ８２２６細胞株において測定した。２０％〜５０％の増殖阻害が、１２．５μＭを超える用量の化合物１にて観察された（図３Ａ）。対照的に、ＰＳ−３４１は、０．０２〜０．００５のＩＣ５０にて試験した全ての細胞株における［^３Ｈ］−ＴｄＲ取り込みを完全に阻害した（図３Ｂ）。これらの結果は、ＮＦ−κＢ活性化の完全遮断は、ＭＭ細胞株中のＤＮＡ合成の５０％を超える阻害を達成できないこと、およびＰＳ−３４１による完全阻害が、別のシグナル伝達経路（例えば、ｐ４２／４４ ＭＡＰＫ（Ｏｇａｔａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：２２１２（１９９７）））の阻害によって媒介されることを示す。

ＰＩ染色によって評価した細胞周期プロファイルもまた、これらのＭＭ細胞株において調べた。興味深いことに、化合物１は、Ｕ２６６細胞においてＧ１増殖休止を誘導したが、アポトーシスを誘導しなかった（図４）。同様の結果が、ＲＰＭＩ８２２６細胞において観察された（データは示さず）。これらのデータは、ＮＦ−κＢ遮断がＭＭ細胞においてＧ１増殖休止を誘導することを示す。

（実施例７：化合物１は、ＭＭ．１Ｓ細胞におけるｐ４２／４４ ＭＡＰＫのリン酸化にもＳＴＡＴ３のリン酸化にも影響を与えない）
図５において見られ得るように、ＩＬ−６は、ＭＭ．１Ｓ細胞におけるｐ４２／４４ ＭＡＰＫおよびＳＴＡＴ３の両方のリン酸化を誘導し、そしてこのＭＥＫ１インヒビターであるＰＤ９８０５９は、ｐ４２／４４ ＭＡＰＫリン酸化を選択的に阻害する。ＰＳ−３４１はまた、ｐ４２／４４ ＭＡＰＫリン酸化を阻害する；しかし、化合物１は、ｐ４２／４４ ＭＡＰＫのリン酸化またはＳＴＡＴ３のリン酸化のいずれをも阻害しない。ＩＬ−６によって誘発されたＡｋｔのリン酸化はまた、化合物１の前処理によって影響されなかった（データは示さず）。これらの結果は、ＩＬ−６によって誘発される、ＭＭ．１Ｓ細胞における他の公知のシグナル伝達経路に影響を与えずに、化合物１がＮＦ−κＢを特異的にブロックすることを示す。

（実施例８：Ｄｅｘは、ＭＭ．１Ｓ細胞においてＩκＢαタンパク質をアップレギュレートし、そしてＮＦ−κＢ活性化に対する化合物１の阻害効果を増強する）
ＭＭ．１Ｓ細胞をＤｅｘ（１μＭにて０〜３６時間）の存在下で培養し、そしてＩκＢαタンパク質の発現を、ウェスタンブロッティングによって評価した。図６Ａにおいて見られ得るように、Ｄｅｘは、ＩκＢα発現を有意に誘導し、そしてＩＬ−６は、ＩκＢαのＤｅｘ誘導性アップレギュレーションを部分的にブロックした。ＮＦ−κＢ活性化を次に、ＩＬ−６を伴うかまたは伴わない、Ｄｅｘの存在下で調べた。ＭＭ．１Ｓ細胞におけるＮＦ−κＢのＴＮＦα誘導性活性化は、Ｄｅｘでの前処理によって取り消される（図６Ｂ）。化合物１はまた、ＭＭ．１Ｓ細胞における、ＴＮＦαによって誘発されるＮＦ−κＢ活性化を用量依存様式で阻害し、そしてＤｅｘでの前処理は、化合物１の阻害効果を増強する（図６Ｃ）。これらの結果は、Ｄｅｘが、関連したＧ１増殖休止およびアポトーシスを伴って、ＩκＢαのアップレギュレーションを介してＮＦ−κＢ活性化を阻害することを示唆する。

ＭＭ．１Ｓ細胞におけるＩκＢαのＴＮＦα誘導性リン酸化に対するＤｅｘ、化合物１、ＰＳ−３４１および／またはＩＬ−６の効果を次に調べた。図７において見られ得るように、Ｄｅｘ、ＰＳ−３４１および／またはＩＬ−６は、ＩκＢαのＴＮＦα誘導性リン酸化を阻害しない；さらに、ＰＳ−３４１は、プロテオソーム活性の阻害およびＩκＢαの蓄積に起因して、ＩκＢαのリン酸化を増強する。対照的に、化合物１は、ＩＬ−６の存在下または不存在下では、ＩκＢαのリン酸化を阻害する。Ｄｅｘは、ＩκＢαのＴＮＦα誘導性分解を阻害し、一方、ＩＬ−６は、この効果をブロックする。ＰＳ−３４１および化合物１の両方とも、ＩＬ−６の存在下または不存在下で、ＩκＢαの分解を阻害する。

（実施例９：ＭＭにおけるＤｅｘおよび／またはＩＬ−６の存在下での化合物１の増殖阻害効果）
図８Ａにおいて見られ得るように、Ｄｅｘは、ＭＭ．１Ｓ細胞のＩＬ−６誘導性増殖を阻害したが、化合物１は、その効果を増強しなかった。重要なことに、ＭＭ．１Ｓ細胞における構成的ＤＮＡ合成およびＩＬ−６誘導性ＤＮＡ合成は両方とも、用量依存性様式で、化合物１の存在下で取り消された（図８Ｂ）。さらに、Ｄｅｘ誘導性増殖阻害に対するＩＬ−６の増殖効果もまた、化合物１によって取り消された（図８Ｃ）。これらのデータは、ＩＬ−６による細胞増殖および細胞生存の促進が、少なくとも部分的に、ＮＦ−κＢシグナル伝達系路を介して媒介されることを示唆する。

サリドマイド（Ｔｈａ１）およびその免疫調節誘導体（ＩＭｉＤ３）は以前に、ＭＭ．１Ｓ細胞増殖を阻害することおよびＩＬ−６がこのＩＭｉＤ効果を取り消すことが報告されている（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら、Ｂｌｏｏｄ ９６：２９４３（２０００））。それゆえ、Ｔｈａ１およびＩＭｉＤ３で処理したＭＭ．１Ｓ細胞のＤＮＡ合成に対する化合物１の影響を、ＩＬ−６の存在下または非存在下で研究した。図９において見られ得るように、ＩＭｉＤ３は、ＭＭ．１Ｓ細胞におけるＤＮＡ合成を用量依存性様式（０．２５μＭ〜１μＭ）で有意（ｐ＜０．００１）に阻害した。ＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍＬ）は、ＩＭｉＤ３の影響を克服した；しかし、重要なことには、化合物１は、ＩＭｉＤ３に対するＩＬ−６の阻害効果を中和した。これらの研究は、ＮＦ−κＢ遮断が、Ｔｈａ１／ＩＭｉＤに対する耐性を克服し得ることを示唆する。

（実施例１０：化合物１は、ＭＭ細胞に対するＴＮＦα誘導性ＩＣＡＭ−１発現を阻害する）
ＴＮＦαは、ＢＭＳＣおよびＭＭ細胞の両方に対するＩＣＡＭ−１発現およびＶＣＡＭ−１発現を誘導することが示されており、そしてプロテアソームインヒビターであるＰＳ−３４１は、これらの分子の誘導をブロックする（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：３０７１（２００１））。ＰＳ−３４１は特異的ＮＦ−κＢインヒビターではないので、ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１のＴＮＦα誘導性アップレギュレーションがＮＦ−κＢによって媒介されると、これらの研究から結論することはできない。しかし、図１０において見られ得るように、化合物１はまた、ＭＭ．１Ｓ細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞に対するＩＣＡＭ−１発現のＴＮＦα誘導性アップレギュレーションを阻害する。この結果は、ＴＮＦαによるＩＣＡＭ−１のアップレギュレーションがＮＦ−κＢの活性化によって媒介されることを強く示唆する。

（実施例１１：ＴＮＦαおよび化合物１は、ＭＭ．１Ｓ細胞におけるアポトーシスを誘発する）
ＴＮＦαは、ＭＭ．１Ｓ細胞において、中程度の増殖を誘導するが、アポトーシスを誘導しない（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２０：４５１９（２００１））。ＮＦ−κＢ活性化が化合物１によってブロックされた場合に、ＴＮＦαがＭＭ．１Ｓ細胞におけるアポトーシスを誘導するという仮定を試験するために、ＭＭ．１Ｓ細胞を、化合物１の存在下または非存在下で、ＴＮＦαとともに培養した。図１１において見られ得るように、ＴＮＦα処理は、ＭＴＴアッセイによって評価したＭＭ．１Ｓ細胞の生存率に影響を与えない；しかし、化合物１の存在下では、この細胞の生存率は、有意（ｐ＜０．００１）に減少した。例えば、ＴＮＦα（１ｎｇ／ｍＬ）は、１０μＭ化合物１の存在下でＭＭ．１Ｓ細胞の６０％増殖阻害を誘導した。ＭＭ．１Ｓの生存率に対するこの影響はまた、トリパンブルー排除によって確認される（データは示さず）。これらの研究は、ＮＦ−κＢが、ＴＮＦα誘導性アポトーシスに対するＭＭ．１Ｓ細胞の保護を媒介することを示唆する。

（実施例１２：パラクリンＭＭ細胞増殖およびＩＬ−６分泌に対する化合物１の影響）
ＩＬ−６転写およびＩＬ−６分泌、ならびにＢＭ環境における関連のパラクリンＭＭ細胞増殖を調節する際のＮＦ−κＢ活性化の役割を研究するために、ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＢＭＳＣとともに、またはＢＭＳＣを伴わずに、化合物１の存在下または非存在下で培養した。図１２Ａにおいて見られ得るように、化合物１は、ＢＭＳＣにおけるＩＬ−６の構成的分泌を用量依存性様式でブロックする。重要なことに、ＢＭＳＣに対するＭＭ．１Ｓ細胞の接着は、ＩＬ−６分泌の増加（１．６倍、ｐ＜０．０１）を誘発し、そして化合物１はまた、この応答を用量依存様式でブロックする。ＢＭＳＣに対するＭＭ．１Ｓ細胞の接着はまた、ＭＭ．１Ｓ細胞増殖の増加（１．９倍）を誘発し、そして化合物１は同様に、この増強を用量依存様式で阻害する（図１２Ｂ）。これらのデータは、ＭＭ細胞接着によって誘発されるＢＭＳＣからのＩＬ−６分泌の誘導が、ＮＦ−κＢによって媒介される（Ｃｈａｕｈａｎら，Ｂｌｏｏｄ ８７：１１０４（１９９６））という仮説を確認し、そして化合物１がこの効果を取り消し得ることを示す。

（等価物）
上記の発明は、明確さおよび理解を目的として幾分詳細に記載されてきたが、本開示を読むことにより、形態および詳細の種々の変更が、本発明および添付の特許請求の範囲の真の範囲から逸脱することなくなされ得ることが当業者によって理解される。

図１はＩκＢαのリン酸化および分解に対する、化合物１の影響を示すイムノブロットである。（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、化合物１で前処理し（１０μＭで９０分間）、次いでＴＮＦα刺激した（５ｎｇ／ｍＬで０〜２０分間）。（Ｂ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、０．１２５〜４０μＭの化合物１で９０分間前処理し、その後、ＴＮＦα刺激した（５ｎｇ／ｍＬで５分間）。（Ｃ）患者のＭＭ細胞を、化合物１で前処理し（１０μＭで９０分間）、次いでＴＮＦα刺激した（５ｎｇ／ｍＬで０〜１０分間）。細胞を溶解し、電気泳動し、次いで抗ホスホＩκＢα Ａｂおよび抗ＩκＢＡｂでイムノブロットした。これらの結果は、化合物１が、ＴＮＦαによって誘発されるＩκＢαのリン酸化および分解をブロックすることを示す。 図２は、ＮＦ−κＢの活性化に対する化合物１の影響の、電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）分析の結果を示す。ＭＭ．１Ｓ細胞を、化合物１で前処理し（１０μＭで９０分間）、次いでＴＮＦα刺激した（５ｎｇ／ｍＬで０〜２０分間）。この細胞の核抽出物を、ＥＭＳＡに供した。ＰＳ−３４１は、Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：３０７１（２００１）に記載されるように、ＮＦ−κＢ活性化の阻害についてのポジティブコントロールとして作用した。これらの結果は、化合物１が、ＴＮＦαによって誘発されるＮＦ−κＢ活性化をブロックすることを示す。 図３は、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株におけるＤＮＡ合成に対する、化合物１（Ａ）およびＰＳ−３４１（Ｂ）の影響を決定するためのアッセイのグラフ表示である。ＭＭ．１Ｓ（黒丸）細胞、Ｕ２６６（黒三角）細胞およびＲＰＭＩ８２２６（黒四角）細胞を、化合物１（１．５〜５．０μＭ）またはＰＳ−３４１（０．００００１〜１０μＭ）の存在下で、４８時間培養した。ＤＮＡ合成を、[^３Ｈ]−ＴｄＲ取り込みによって評価した。 図４は、細胞周期プロフィールに対する化合物１の影響を示す。Ｕ２６６細胞を、化合物１の存在下で培養し（１０μＭで２４時間、３６時間および４８時間）、回収し、ＰＩで染色し、そしてフローサイトメトリーによって細胞周期プロフィールについて分析した。これらの結果は、化合物１が、Ｇ１増殖停止を誘導したことを示す。 図５は、ｐ４２／４４ ＭＡＰＫまたはＳＴＡＴ３のリン酸化に対する化合物１の影響を示すイムノブロットである。ＭＭ．１Ｓ細胞を、化合物１（１０μＭで９０分間）またはＰＳ−３４１（５μＭで６０分間）で前処理し、次いでＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬで５分間）刺激した。これらの細胞を回収し、溶解し、電気泳動し、そして抗ホスホＳＴＡＴ３ Ａｂ、抗ホスホｐ４２／４４ ＭＡＰＫ Ａｂおよび抗ｐ４２／４４ ＭＡＰＫ Ａｂでイムノブロットした。これらの結果は、化合物１が、ＭＭ．１Ｓ細胞においてｐ４２／４４ ＭＡＰＫのリン酸化にもＳＴＡＴ３のリン酸化にも影響を与えないことを示す。 図６は、ＩκＢαタンパク質発現およびＮＦ−κＢ活性化に対するデキサメタソン（Ｄｅｘ）の影響を示す。（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＩＬ−６の存在下または非存在下で、Ｄｅｘの存在下で培養した（１μＭで０〜３６時間）。これらの細胞を、回収し、溶解し、電気泳動し、そして抗ホスホＩκＢα Ａｂでイムノブロットした。（Ｂ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＤＭＳＯコントロールまたはＤｅｘのいずれかと共に培養し（１μＭで１８時間）、ＴＮＦα（５ｎｇ／ｍＬ）またはＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬ）で刺激し、そして核抽出物をＥＭＳＡに供して、ＮＦ−κＢ活性化を評価した。（Ｃ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＤＭＳＯコントロールまたはＤｅｘのいずれかを用いて前処理し（１μＭで１８時間）、次いで化合物１の存在下でインキュベートした（２．５〜１０μＭで９０分間）。これらの細胞を回収し、そして核抽出物をＥＭＳＡに供して、ＮＦ−κＢ活性化を評価した。 図７は、ＴＮＦα誘導性のＩκＢαリン酸化に対する、Ｄｅｘ、化合物１、ＰＳ−３４１および／またはＩＬ−６の影響を示すイムノブロットである。ＭＭ．１Ｓ細胞を、Ｄｅｘ（１μＭで１８時間）、ＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬで１８時間）、ＰＳ−３４１（５μＭで６０分間）または化合物１（１０μＭで９０分間）の存在下で培養し、次いで、ＴＮＦαによって刺激した（５ｎｇ／ｍＬで５分間）。これらの細胞を、回収し、溶解し、電気泳動し、次いで抗ホスホＩκＢα Ａｂおよび抗ＩκＢα Ａｂでイムノブロットした。これらの結果は、ＩＬ−６が、ＴＮＦαによって誘発されるＩκＢαのリン酸化に影響を与えないことを示す。 図８は、細胞増殖に対する化合物１の影響のグラフ表示である。（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＤＭＳＯコントロール（白四角）、または１．５μＭ

、３μＭ

、６μＭ

、１２．５μＭ

、２５μＭ

および５０μＭ（黒四角）の化合物１と共に、０．０１μＭおよび０．１μＭのＤｅｘの非存在下または存在下で、４８時間培養した。（Ｂ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＤＭＳＯコントロール（白四角）、または１．５μＭ

、３μＭ

、６μＭ

または１２．５μＭ（黒四角）の化合物１と共に、０．５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬおよび５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６の非存在下または存在下で、４８時間培養した。（Ｃ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＤＭＳＯコントロール（白四角）、または０．４μＭ

、２μＭ

または１０μＭ（黒四角）の化合物１と共に、Ｄｅｘ（０．１μＭ）および／またはＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬ）の存在下で、４８時間培養した。ＤＮＡ合成を、[^３Ｈ]−ＴｄＲ取り込みによって評価した。これらの結果は、化合物１が、増殖を阻害し、そしてＤｅｘ誘導性の増殖阻害に対するＩＬ−６の保護効果をブロックすることを示す。
図９は、ＩＬ−６の存在下または非存在下での、免疫調節性誘導体ＩＭｉＤ３で処理した細胞における細胞増殖に対する、化合物１の影響のグラフ表示である。（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＤＭＳＯコントロール（白四角）または２５μＭ

、５０μＭ

または１００μＭ（黒四角）のサリドマイド（Ｔｈａｌ）と共に、化合物１（１０μＭ）の存在下または非存在下で、かつＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬ）有りまたは無しで、４８時間培養した。（Ｂ）ＭＭ．１Ｓ細胞を、ＤＭＳＯコントロール（白四角）または０．２５μＭ

、０．５μＭ

または１μＭ（黒四角）のＩＭｉＤ３と共に、化合物１（１０μＭ）の存在下または非存在下で、かつＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬ）有りまたは無しで、４８時間培養した。ＤＮＡ合成を、[^３Ｈ]−ＴｄＲ取り込みによって評価した。これらの結果は、化合物１が、ＩＭｉＤ３に対するＩＬ−６の保護効果に打ち勝つことを示す。
図１０は、ＭＭ細胞上でのＴＮＦα誘導性のＩＣＡＭ−１発現に対する、化合物１の影響を示す。ＭＭ．１Ｓ細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞を、ＤＭＳＯコントロール（太線）、ＴＮＦα（５ｎｇ／ｍＬ）単独（細線）またはＴＮＦα＋化合物１（ ）と共に２４時間培養した。これらの細胞を回収し、アイソトープコントロール（破線）またはＦＩＴＣ結合体化抗ＩＣＡＭ−１ Ａｂで染色し、そしてフローサイトメトリーを用いて分析した。これらの結果は、化合物１が、ＭＭ細胞上でのＴＮＦα誘導性のＩＣＡＭ−１発現を阻害することを示す。 図１１は、ＴＮＦαが、化合物１で処理したＭＭ．１Ｓ細胞においてアポトーシスを誘導することを示す。ＭＭ．１Ｓ細胞を、０．２ｎｇ／ｍＬおよび１ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαと共に、化合物１の非存在下（白四角）または２．５μＭ

、５μＭ

、１０μＭ（黒四角）の化合物１の存在下で、４８時間培養した。細胞生存率を、ＭＴＴアッセイによって評価した。
図１２は、化合物１が、パラクリンＭＭ細胞増殖およびＭＭ細胞の接着によって誘発されるＢＭＳＣにおけるＩＬ−６分泌を阻害することを示す。ＢＭＳＣ、ＢＭＳＣ＋ＭＭ．１Ｓ細胞またはＭＭ．１Ｓ細胞単独を、ＤＭＳＯコントロール（白四角）または０．４μＭ

、２μＭ

または１０μＭ（黒四角）の化合物１の存在下で、４８時間培養した。（Ａ）ＩＬ−６レベルを、ＥＬＩＳＡによって培養物上清中で測定し、そして（Ｂ）ＤＮＡ合成を、[^３Ｈ]−ＴｄＲ取り込みによって評価した。

Claims (5)

1. 癌細胞増殖を阻害するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、式（ＩＩ）のＩκＢキナーゼのインヒビター：
   

   

   またはその立体異性体もしくは生理学的に許容性の塩を含有し、ここで：
   Ｒ^１ は、クロロであり；
   Ｒ^２は、水素原子または−Ｏ−Ｃ _１ −アルキルであり；
   Ｒ^３は、−ＮＨ（Ｒ^１８ ）であって、ここで、
   Ｒ ^１８は、−Ｃ（Ｏ）−ピリジルであり、ここで、ピリジルは、非置換であるかまたは−Ｃ _１ −アルキルで１置換されており；そして
   Ｒ^５は、水素原子であり、
   該癌細胞が、多発性骨髄腫細胞である、
   薬学的組成物。
2. 請求項１に記載の薬学的組成物であって、前記ＩκＢキナーゼのインヒビターがＮ−（６−クロロ−９Ｈ−β−カルボリン−８−イル）−ニコチンアミドまたはその立体異性体もしくは生理学的に許容性の塩である、薬学的組成物。
3. 請求項１〜２のいずれか一項に記載の薬学的組成物であって、前記癌細胞が動物中に存在する、薬学的組成物。
4. 請求項３に記載の薬学的組成物であって、前記動物が哺乳動物である、薬学的組成物。
5. 多発性骨髄腫を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、Ｎ−（６−クロロ−９Ｈ−β−カルボリン−８−イル）−ニコチンアミドまたはその立体異性体もしくは生理学的に許容性の塩を含有する、薬学的組成物。

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