JP3810796B2 - 血液プラスマからフィブリンｉを分離するための方法および装置 - Google Patents

Description

技術分野
本願は、プラスマからフィブリンモノマー等の成分を分離するべく壁によって形成された第２室にプラスマ(血漿)を供給するステップを有する方法に関し、架橋していないフィブリンポリマーを含有している部分は、適当な酵素が添加されている間に分離せしめられる。
背景技術
欧州特許第５９２，２４２号公報(EP-PS No.５９２，２４２)には、フィブリンモノマーを含有する組成剤(配合剤、コンパウンド)を含む所定箇所に接して当該ステップと同時にこのモノマーをフィブリンポリマーに変換させる全く新規なフィブリンシーラント用の方法及び組成剤が記載されている。この「フィブリン」という用語は、フィブリンＩや、フィブリンＩＩとして、及び／又は、デス(des)ββフィブリンとして定義される。
欧州特許第６５４ ６６９号公報から、血液からフィブリンモノマー等のコンポーネントを分離するための方法および装置が知られている。種々の特定の重量(重要性、gravities)を有する幾つかのコンポーネントを含む液体の当該コンポーネントを分離するためのこの方法は、血液を装置の第１室(第１チャンバ)内に集めるステップを有している。当該第１室は、実質的に軸対称な外壁と内壁とによって形成されている。装置は当該チャンバの対称軸を中心として回転せしめられ、これによって、その血液は遠心分離作用を受ける。これにより、血液のコンポーネント(成分)とコンポーネントとの間に、同心の界面(インターフェース)が形成される。プラスマ等の血液のコンポーネントの少なくとも１つは、続いて、装置内の第２室(第２チャンバ)に移動(流動)せしめられる。この移動は、好ましくは、装置の遠心分離が継続している間に、第１室の容積を減じることによって行われる。この実質的に軸対称になっている内壁は、第１室内に設けられており、これにより、すべての血液がその分離に必要な遠心分離の回転(の影響)が確実に受けられるようになっている。この内壁の半径は、所望の回転速度に対応するように構成されており、チャンバのあらゆる部位において、同心分離を維持するのに十分な遠心分離力が加えられる。
第２室において、架橋していないフィブリンポリマーを含む部分は、適切な酵素の手段によってプラスマから分離され、続いて、フィブリンモノマーに再分解(redissolved)され、そして、第２室の容積を減じることにより、フィルターを通してシリンジへ移動(流動)せしめられる。
しかしながら、上記タイプの装置における濾過(filtration)の方法のみによっては、たとえば、血液からフィブリンモノマーを分離する等のコンポーネントの分離において満足のいく結果が得られない、ということが判明した。これは、主として、第２室内においてフィブリンモノマーを含んでいる部分について満足のいく分離を保証することが困難であるという事実に基づいている。従って、液体(流体)の部分が、方法の連続ステップ時に第２室から第１室に続いて流動せしめられている間に、フィブリンの比較的大きい血中含有量が失われることになる。
また、初期のファブリンモノマーの方法において、適切な酵素を含んでいプラスマ内のフィブリノーゲンの上記処理により、架橋していないフィブリンポリマーが形成された。このフィブリンポリマーは、第２室の底に厚いゲルの塊の形態をなしている。所望のファブリンモノマー溶液を形成するために、実質的な撹拌剤(アジテーション、agitation)と結合した有意な量の再溶融緩衝剤(再分解緩衝剤、redissolving buffer)が必要とされた。この結果、幾つかの欠点(障害)が生じた。第１に、たとえば欧州特許第５２９，２４２号公報に記載されているようなフィブリンシーラントとして用いられるための、好ましいフィブリンモノマーの方法は、濃縮されたフィブリンモノマー溶液と、そのゲル塊を分解(溶解)させるために必要とされる多量の再溶解緩衝剤つまり溶剤(溶媒)とを必要とし、これにより、同じように機能しない希釈溶液が形成された。さらに、このゲル塊をフィブリンモノマー溶液内に溶解させるのに必要とされる実質的な撹拌剤(アジテーション、agitation)は、装置及びフィブリンそのものに損傷を生じさせる可能性がある。
したがって、本発明の目的は、血液からフィブリンモノマーなどの成分を分離する改良方法を提供することである。
本発明は、円筒形の室内において、プラスマ部分から、架橋していないフィブリンポリマーを分離させることが可能な方法を含む。このような分離は、上記架橋していないフィブリンポリマーを上記室(チャンバ)の外壁に付着(沈殿、沈積、堆積、deposit)させる遠心分離時に行われる。上記室内に収集された残留している液体部分(流体部分)は上記室から除去され、実質的に壁に付着した状態でチャンバ内に残留している架橋していないフィブリンポリマーを有する部分は、溶剤の追加および遠心分離による撹拌(遠心分離動作、centrifugal agitation)によって溶解される。
酵素を含むプラスマの処理は連続的に行われる遠心分離の間に行われるので、その結果生じた架橋していないフィブリンポリマーに遠心力が加えられると、実質的に室の周方向壁に付着する薄いゲルフィルムとして凝固せしめられることが可能である。遠心分離が停止されると、残留しているプラスマ液は室の底部に沈殿し、何らかの簡便な手段によって除去される。適当な再溶解(再分解)緩衝剤溶液(redissolving buffer solution)を室内に案内し、遠心分離撹拌に対して緩衝剤をゲルでコーティングされた室内に供給することによって、所望のフィブリンモノマー溶液が得られる。上記方法は従来の方法よりも優れた利点を有する。まず、架橋していないゲルの緩衝剤溶液による再溶解(再分解)については、同じ容量のフィブリンゲルで、従来の方法において準備されるフィブリンゲル塊に比べて、広い表面領域について行うことができる点で、非常に効率的である。このため、ゲルは少量の再溶解緩衝剤に溶解されることが可能となり、その結果、濃縮されたフィブリンモノマー溶液となるので望ましい。さらに、ゲルでコーティングされた室内における、緩衝剤溶液における遠心分離撹拌作用は比較的穏やかな方法であるので、装置やフィブリンモノマー製品に損傷を与えることがない。その結果得られる高濃度のフィブリンモノマー溶液のフィブリンモノマーは、１ml当たり１０〜３０mgの範囲内にあり、好ましくは約２５mg/mlである。
本発明はまた、装置の第１環状室に好ましくは抗凝血剤を含む血液を供給するステップを有する方法を含む。該環状室は円筒外壁および円筒内壁によって形成されており、上記壁はいずれも共通軸を中心とする同軸に延在している。また、上記環状室は上壁と底壁とによって形成されており、上壁あるいは底壁は第１室内で位置を変えられるピストンボデーによって形成される。上記方法はさらに、血液を細胞部分とプラスマ部分とに実質的に分離させ、その後ピストンボデーによる作用を受けている間に、その結果形成されたプラスマ部分を外側円筒壁によって形成された第２室へと移動させるべく、上記共通軸を中心として装置を遠心分離にかけるステップを含む。上記外側円筒壁は上記共通軸と同軸をなし、架橋していないフィブリンポリマーを含む部分が第２室内で分離せしめられる一方で、適当な酵素が追加される。本発明では、上記方法は、遠心分離の間、フィブリノーゲンを含むプラスマ部分には酵素が加えられ、その結果、上記第２室の円筒外壁には架橋していないフィブリンポリマーが付着することを特徴とする。第２室の底部に収集された液体部分は、ピストンボデーによる作用を受ける間に第１室へと移動させられる。実質的には円筒壁に付着した状態で第２室内に残留している架橋していないフィブリンポリマーは、溶剤の追加および遠心分離撹拌によって溶解(分解)される。この後、酵素が除去され、必要であれば、上記のように形成されたフィブリンモノマー溶液は、何らかの望ましい収容容器へと移動せしめられる。
したがって、溶液を収集するための殺菌状態が容易に維持される。フィブリンモノマーは、再溶解された後に、従来技術において説明したようなさらなる利用のために、シリンジなどの収容容器へと移動(流動)せしめられる。移動の前に、酵素を何らかの簡便な手段によって除去することも可能である。
回転の中央軸の周囲で遠心分離を行うことによって液体から成分を分離させる装置は、外側円筒壁および内側円筒壁によって形成された第１環状室を備え、上記壁はいずれも上記回転軸について同心円上となるようにされている。上記第１環状室は上壁および底壁によって形成されており、底壁は上記第１室内で位置を変えることが可能なピストンボデーによって形成される。上記装置は、第１導管を介して第１室と連通する第２室をさらに備えており、上記第２室は、回転軸について同心円上となるように形成された外側円筒壁と、上記ピストンロッドと、底壁とによって形成されている。上記第２室は、遠心分離の間は第１室の下方に配置されるように構成されている。上記装置はまた、血液を第１室に供給する血液供給手段と、分離を促進する配合物を供給する配合物供給手段と、少なくとも１つの液体収容容器の接続部を収容する収容手段とをさらに備えている。上記収容手段は第２導管を介して第２室と連通している。好ましい実施形態では、ピストンロッドは第１室の内壁を構成している。
本発明に係る方法を実施するための本願の装置は、第１室の上壁にある開口と第２室の底壁にある開口との間に延在する溝を少なくとも１つは備えていることを特徴とする。
この結果、比較的単純な装置であって、問題の部分を一方の室から他方の室へと容易かつ速やかに流動させることがピストンの位置と独立して可能である装置が提供される。このことは特に、フィブリン Ｉを含む部分を分離した後、液体部分を第２室から第１室に移動させることについて当てはまる。後者は特に、遠心分離装置が停止したときに、液体は自動的に第２室の底部に濃縮されているためであって、液体は、例えば、液体を流動溝を上方に移動させるべく第２室内の圧縮空気により作動するピストンによって、第１室へと容易に移動させることができる。
本発明においては、上記溝は、第１室および第２室の外側円筒壁のいずれの内側に延在するとよく、その結果、装置の製造は特に単純で容易となる。
本発明においては、１つ以上の溝の開口は、好ましくは、底壁によって形成される凹部に関連して、室の中央部に設けられている。その結果、問題の液体部分は、直接、溝の入口開口へと容易かつ速やかに案内される。
さらに、あるいは本発明においては、各溝(チャネル)はパイプ(管路)によって形成されており、該パイプは、ピストンボデーを通って直線状に延在しており、パイプは、第１室の上壁および第２室の底壁のそれぞれの端部に設けられており、それは、各チャンバの端部における溝部(チャネル部)に連絡(連通)している。
本発明においては、第１室および第２室は、特に単純な方法では、外側および内側のシリンダによって形成された共通の外側円筒壁を備えている。該シリンダは、互いに密閉状対で適合せしめられており、また、その間に軸方向に延在する溝が形成されている。該シリンダの端部は、ピストンボデーに接続されたピストンロッドの通路となり得る開口を備えた端壁によって形成されることができる。上記ピストンボデーは、第１室の底壁を形成し、上記第１室を第２室と分離させている。上記溝は、シリンダの端壁間で、ピストンロッドに近接している開口へと延在している。
上述したように、本発明の方法は、個々の血液成分(コンポーネント)や、そのような成分を含む溶液を分離したり隔離したりするための改良型プロセスに関する。しかしながら、この方法は、円筒形状の遠心分離装置に適用可能なあらゆる処理(処置)にふさわしい。そこにおいて、第１溶液は、遠心分離時に、触媒、或いは試薬、を以て取り扱われ、溶液は、所望の製品の中間的な形態で、遠心分離装置の壁に付着する。この中間的な形態の物質は、適当な再溶解溶液を用いて、遠心分離撹拌によって再溶解が行われ、上記再溶解溶液内において、所望の濃度の製品を構成する。本明細書に記載されている方法は、第１溶液を他方の溶液から、すなわちプラスマを血液全体から、遠心分離することを含んでいてもよい。他の血液処理(処置、procedure)は、そのような方法から利益を受けることが可能であるが、当該血液処理は、多血小板プラスマや、血小板濃縮物、クリオプレシピテートフィブリノーゲン(cryoprecipitated fibrinogen)や、トロンビン等のプラスマ内に含まれる他のタンパク質や、フィブロネクチン等のいずれかの血液成分の分離に限定されるものではない。好ましくは、その血液は、単一の供血者(ドナー)からのものであり、最も好ましくは、その血液は、その血液成分(コンポーネント)が施されるであろう同一の者からのものである。
この方法は、これ以降、フィブリンモノマー溶液の形成について記載され、一方、本発明の視野は、当該技術に精通した者には理解されるであろうように、それに限定されるべきものではない。
ここに用いられるように、「遠心分離動作(遠心分離による撹拌、centrifugalagitation)」という用語は、本装置の動作について言及される。この装置において、再溶解緩衝剤溶液(再分解緩衝剤溶液、redissolving buffer solution)は、架橋していないフィブリンポリマーゲル等の中間生成物(intermediate product)を再溶解(再分解)するために、上記外チャンバ壁から案内される。そのような動作や、遠心分離動作は、ゲルのすべての露出面積が上記再溶解する溶液に影響されるようにすることを保証するべく遠心分離を含むことができ、また、好ましくは、同一方向に停止したり開始したりする回転を伴ったり、そして／あるいは、逆方向に停止したり開始したりする回転を伴ったりするような遠心分離を含む。典型的な遠心分離動作は、これに限定されるものではないが、あらゆる所望の時間長さ、繰り返される正逆サイクルで２０００〜５０００ＲＰＭで、５〜３０秒間回転させること、好ましくは、５〜１０秒間回転させることを含む。この方法において、１〜２分間、繰り返される正逆サイクルで約３０００ＲＰＭで、５〜１０秒間回転させることが好ましい。上記の如く、これは、その溶剤を初期に分配するために、たとえば、２０秒間、又はそれ以上の間、やや、より遅い回転の後に行うことができる。
ここで用いている「フィブリン」という用語は、フィブリンＩ、フィブリンＩＩや、デス(des)ββフィブリンに言及したものである。
上述したように、本願の装置は、液体を装置の上記第２室の底部から第１室へと移動させるための溝を少なくとも１つ備えている。この特徴は、本発明の好ましい方法を提供するにあたっての明白な利点になっている。従来の上記装置および方法では、架橋していないフィブリンポリマーゲル塊を形成するときに、ピストンプレートおよび第１室内に延在する導管を通して、残留しているプラスマ液を上方に移動させることができるように、ピストンを押し下げる必要があった。従来の方法では、ピストンを液体に接触させねばならない。本願の方法においては、ゲルは第２室の壁に付着しているので、残留しているプラスマ流体に接触するほどピストンを押し下げることはできない。第２室の底部から第１室へと延在する溝を形成し、第２室に気体の入口(大気の入口、atomospheric inlet)を形成することによって、ピストンはわずかに押し下げられ、プラスマ液(流体)を溝の上方および第１室内に移動させるのに十分な圧力を加えることか可能となる。上述したように、室(チャンバ)全体、すなわち外壁全体に延在する１つ以上の溝を形成することが可能である。外壁に溝を形成する好ましい方法は、一方のシリンダが他方のシリンダを密封すべく収められる２つのシリンダよりなる装置を構成することである。外側シリンダの内側、あるいは内側シリンダの外側に、１つ以上の溝を形成することによって、１つ以上の溝が形成される。
本願の装置は、血液全体を所望の血液成分、好ましくは、例えばシーラントとして有用な自系成分(autologous component)に変えることが可能な、単一の閉鎖された自動装置である。
上記装置は、装置を取り付けて位置合わせをし装置を軸の周囲で必要に応じて回転させピストンおよび押圧ロッドを作動させることが可能なドライブユニット内で用いるのに便利である。上記押圧ロッドは、以下の記載から、ピストンの移動を容易にするものであることがわかるであろう。
【図面の簡単な説明】
本願装置及び本願方法の好ましい実施形態を、図面を参照しながら記載する。
図１は、本願発明の好ましい第１実施形態の軸方向断面図である。
図２は、本願発明の好ましい第２実施形態の軸方向断面図である。
図３は、本願発明の好ましい第３実施形態である。
本願発明の好ましい実施形態の記載
本願発明の図１の装置は、実質的に回転対称である部分から構成されており、当該部分は、この装置が中心軸１を中心として遠心分離されるようにそれ自体は周知の容易な方法で、遠心分離装置内に設けられることができることを示している。この図１において、好ましい実施形態の装置は、外容器２と内容器３とが互いに完全にフィット(適合)すると共に軸方向に延在する中間溝４が形成されている部分を除くあらゆる箇所において互いに密に接するような状態で外容器２と内容器３とを備えている。この溝４は、内容器３に構成されている溝により形成されている。この２つの容器２，３は、夫々、上部分５，６を備えている、当該上部分５，６は、ピストン・ロッド８を通過させることができる中央開口７を有している。この中央開口７の周囲に、当該２つの容器は、軸方向に延在する部分９，１０を夫々備えている。当該部分９，１０は、中空になっているピストン・ロッド８に近接して、容器の内側から離れる方向に延在している。上記外容器２は、径方向に短く突出しているフランジ１１に沿って、この中空ピストン・ロッドに接している。この径方向突出フランジ１１は、シール・リング１３を受け入れる凹部１２を備えている。
図１に示すように、上記溝４は、内容器と外容器の円筒壁から上記上部分５，６及び上記軸方向延在部分９，１０を通って開口７の上記シール・リング１３のすぐ下に位置する開口に至るように、内容器と外容器との間に延在している。上記内容器３の軸部分１０は、開口７に接している。当該軸部分１０は、上記中空のピストン・ロッド８を中心とする狭くはあるが動きに制約のない通路が容器２，３の内側に延在するように寸法構成されている。
この外容器２は、直径が同一である円筒部を備えている(図１を参照)。この部分は、この図の下方向に示されるように、切頭円錐形(frusto-conical)の内面１６をなしている変形部１５を通して直径が僅かに大きくなっている円筒部に続いている。この内容器３の端部は、外容器２の上記変形部１５の直径が大きくなっている上記円筒部１４に続く位置に位置している。内容器３の下側端部は、切頭円錐形の外面１７を備えている。この切頭円錐形は、外容器２の内側に位置している切頭円錐形の内面１６の形状に適合(マッチング)している。外環状ディスク１９と内環状ディスク２０が、夫々、内容器３の底端部の直下に設けられている。この内容器３の底端部は、径方向面(半径面、放射面、radial surface)１８を有している。これらのディスクは、互いに近接して接している。しかし、当該ディスクは、それらの間に溝２１を形成している。この溝２１は、中央開口２２から軸方向面(の方向)に延在すると共に、外容器２の内側まで延在している。溝２１は、軸方向延在部２３を通って、外容器２と内容器３との間に位置している上記溝４に連通している。溝２１と軸方向溝部２３とは、外ディスク１９に対向する内ディスク２０の側に形成された溝手段によって適切に形成されている。これらの２つのディスク１９，２０は、図１に示す如く、これらが実質的に切頭円錐形内面及び切頭円錐形外面をなすような傾斜をもって形成されている。これらの２つのディスク１９，２０は、上記中央開口２２に向かって下方向に傾斜している。図１は、また、内ディスク２０が、内容器３の隣接する径方向面１８に接する径方向面(半径面、放射面、radial surface)２４を備えていることを示している。この内ディスク２０の径方向面２４は、シール・リング２６を受け入れるための凹部２５を有して形成されている。
上記２つのディスク１９，２０は、下方向で外容器を閉じるカバー２７の手段により、内容器３の上記径方向面１８に当接する位置に保持されている。このカバー２７は、周方向に延在し外容器２の内側に密に接するスリーブ形状部２８を備えている。このカバー２７は、この外容器２の内側に対して、スリーブ２８の外側に設けた周方向リブ２９と、これに対応するところの外容器２の内側に設けた周方向溝３０とを互いに係合させるべくスナップ作用等の適切な手段をもって確実に保持されている。接続(箇所)の密閉は、外ディスク１９の外周に位置し周方向凹部３１ａに設けられたシール・リング３１の手段により保証されている。上記カバー２７は、さらに、比較的薄く形成された薄壁３２を備えている。この薄壁３２は、図１に示す如く位置に装置下部の底をなすように構成されている。この壁３２は、実質的に、外ディスク１９と内ディスク２０とに対して平行に延在している。この壁３２は、ディスク１９とディスク２０とに隣接しているスリーブ２８の部分の内側から、外容器２の下リム部３３と実質的に面一となる部分に向かって下方向に延在している。この比較的薄い壁３２を補強するために、径方向補強リブ(reinforcing radial rib)３４が一定の間隔をおいて設けられている。これらのリブの内のただ１つが、図１に示されている。このリブ３４は、図１に示すように、壁３２の外側に設けられた部分と部分的に形成されると共に、壁３２の内側に設けられた部分と部分的に形成されている。この後者の部分は、参照符号３５で示されている。この後者の部分は、外ディスク１９の下側に当接するように形成されており、これにより、ディスク１９とディスク２０が信頼できる位置に保持されるようになっている。
外ディスク１９とカバー２７との間で、仕切り手段３６が押圧されるようになっている。この仕切り手段３６は、中央に細長の筒(筒状長手部)３７を有する。この筒状長手部３７は、軸方向内側に突出しかつカバー２７の壁３２と一体的に形成されたピン３８上に設けられている。この筒状長手部３７は、周方向壁ディスク部３９と一体的に形成されている。この周方向壁ディスク部３９は、上記筒状長手部３７から外側に延在している。この周方向壁ディスク部３９は、先ず、カバー２７の壁３２の方向に僅かに下降し、軸方向沿いに短距離延在し、カバーの壁３２に実質的に平行に延在するように続いている。この壁ディスク部３９の端部は、カバー２７上のリブ部３５のショルダ４１上に位置する短い径方向突出縁部４０をもって形成されている。壁ディスク部３９の外縁部４０と、外ディスク１９の下側部との間で、環状のフィルタ・ユニット４２が押圧されている。この環状のフィルタ・ユニット４２は、実質的に、外ディスク１９に隣接する外側に設けられた径方向形成面４３に接している。このような環状フィルタを使用する装置及び方法は、「環状フィルタを備えた遠心分離装置(遠心分離機)」という名称でこれと共に同時になされた出願の主題になっている。
上記仕切り手段３６における安定性を確保するために、好ましい装置においては、筒状長手部３７と壁ディスク部３９との間に、さらに、参照番号４４で示す補強用径方向リブが備えられている。
仕切り手段３６の筒状長手部３７に関してカバー２７の反対側の端部に、参照符号４５で大略示すカプセルが取り付けられている。このようなカプセルは、物質(agents)を第２室７５に選択的に解放するのに適切であり、また、同時になされた出願の主題となっている。このカプセルは、径方向リング４７と一体的に形成されかつ２つの付加的な径方向リング４８，４９を支持する細長の筒状長手部４６を備えている。これらの径方向リング４８，４９は、上記固定されているリング４７のそれらの各側において干渉適合(interference fit)の方法により確保されている。これらの固定されていないリング(loose rings)４８，４９は、夫々、上記固定リング４７から夫々の間隔をおいて、筒状長手部４６に対して周方向ショルダ５０，５１の手段により設けられている。当該３つのディスク４７，４８及び４９は、すべて同一の外径を有しており、これらのディスクは、該ディスクの各縁部沿いに、周方向に位置し変位可能に設けられたスリーブ５２を支持している。
図に示すように、下部ディスク４９は、仕切り手段３６の筒状長手部３７の上端に接している。これにより、カプセル４５の軸方向の位置が決められる。この位置は、さらに、変位可能(移動可能)なスリーブ５２が当該軸方向に変位(移動)せしめられたときに、カプセルの該スリーブ５２が図に示す如くその下端によって外ディスク１９が有し中央開口２２内に位置する最も内側のエッジ５３と密閉状態に係合するように、構成されている。スリーブ５２のこの位置において、スリーブ５２を取り囲む内ディスク２０内のスペースと、外ディスク１９と内ディスク２０との間に形成されている溝２１に対する入り口開口とが連通する。この変位可能なスリーブ５２の軸方向長さは、外ディスク２０との係合が、図に示す如く、スリーブ５２の軸方向下方への変位(移動)時にスリーブ５２の上端が上記固定リング４７との係合から解放される前に生じるように、構成されている。スリーブ５２の内径は、また、仕切り手段３６の壁ディスク部３９の軸方向延在部の外径に対して、スリーブ５２のカバー２７方向下方への連続的な変位によって一旦それが外ディスク１９との係合から解放されたときにスリーブ５２が仕切り手段３６と固定状態に係合せしめられるように構成されている。仕切り手段３６の軸部分の長さは、また、最も低い位置に位置しているスリーブ５２が仕切り手段３６によって実質的に完全に受け入れられるように、スリーブ５２の軸長さに対応している。
図に示すように、中空のピストン・ロッド８は、外容器２及び内容器３内に周方向ピストン５５を備えている。このピストン５５は、シール・リング５６を介して内容器３の内側と密閉状態で係合している。
ルアー・カプリング(Luer-coupling)５７、あるいは他の適当なカプリング手段が、周知のシリンジ５８を受け入れるべく、上記中空ピストン・ロッド８内に構成されている。この周知のシリンジ５８は、該シリンジ５８の内容物に作用させるためのピストン作用プラグ５９を備えている。このカプリング５７は、実質的に、切頭円錐形状６０を介して、ピストン５５における中央開口６１と連通する長手方向筒として形成されている。この長手方向筒５７は、径方向内側に延在するウェブ６２を備えている。このウェブ６２により、シリンジ５８を出た液体は、軸方向経路から逸れる方向に案内され、これにより、該液体は、その下に位置する細長の筒４６の周囲に対応するカプセル４５の内側に案内される。筒４６の後者の長さは、ピストン５５がカバー２７に近接する最も下方に位置するときに、それが中空ピストンロッド８内の長手筒５７と密閉状態で係合可能な長さに寸法構成されている。この接続が密閉状態でよりよく行われるように、筒５７の長さ方向の内側は、ピストン５５に隣接する端部で直径が徐々に減じられるように形成されている。
軸突出スカート６３が、ピストン５５の中央開口６１を中心として、該ピストン５５と一体的に形成されている。このスカート６３は、ピストン５５の適切な変位によってカプセル４５の上記変位可能なスリーブ５２の上記位置への上記変位(移動)を生じさせることができるような直径及び長さをもって形成されている。当該変位において、それは、２つのディスク１９，２０を貫通する中央開口２２の内リム５３と係合せしめられ、これに続いて、仕切り手段３６と係合せしめられることになる。
弾性を有する環状リップ密閉手段６４が、図１に示すように、容器２，３の内側上部における中空ピストンの周囲に保持されている。このリップ密閉手段６４は、液体が容器２，３の内側から溝４方向に不用意に流出することを防止するために構成されているものである。しかし、このリップ密閉手段６４は、ピストン５５を介して力が作用せしめられたときに、液体の通過を許容する。
図１の上部に示すように、外容器２及び内容器３には、開口６６に連通するホース５に対する接続部が夫々備えられている。この接続部は周知のものであり、従って、詳細には示していない。しかし、これは、所望時に、ホースへ接続されないようにすることも可能である。加えて、適切なフィルターを備えた空気抜き取り用開口が、周知の方法で備えられている。従って、この開口も、また、詳細には図示及び記載していない。
通路６９が、仕切り手段３６とカバー２７との間に位置する領域から、仕切り手段３６の長手方向筒の内側及びカプセル４５の長手方向筒の内側を通して、上方に向けて形成されている。この通路により、筒４６の後者の長さがピストンロッド８の内側に位置している長手方向筒５７に接続されたとき、液体は、上記領域からシリンジ５８へ移動できるようになっている。カバー２７内において、ピン３８の最も下に位置する部分には、平面状の軸方向面をもって形成されている該ピン３８によって、通路６６が形成されている。このピン３８は、実質的に円形の断面を有している。結果的に、該ピンと、長手方向筒３７の内側の隣接部分との間にスペースが形成されている。ピン３８の真上には、領域６７が設けられている。当該領域６７において、上記仕切り手段３６の内径は僅かに小さくなっている。これにより、図１に示す如く、該領域の真上に小さいフィルタ６８を配置することが可能になっている。この構成により、液体は、カプセル４５の長手方向筒４６内に流動する前に、当該フィルタを通過することになる。
上記装置は、第１環状室７０を備えている。この第１環状室７０は、分離室とも呼ばれ、円筒状内壁７１をなす中空ピストン８により内側が形成されており、外容器２及び内容器３によって形成されている円筒状外壁７２により外側が形成されている。図１に示す如く、周知の使用位置に位置しているとき、上記環状室７０は、外容器２及び内容器５の各底部５及び６により形成された上壁７３によって上方が形成されている。環状室７０は、ピストン５５によって形成されている底部壁７４によって下方が形成されている。第２室７５は、反応室とも呼ばれ、ピストン５５の下に形成されている。該第２室は、第１室７０と同様に、同一の円筒状外壁７２によって外側が形成されている。この第２室７５は、外ディスク１９及び内ディスク２０により形成されている第２底壁７６によって下方が形成されている。カプセル４５は、この第２室内部の中央に備えられている。第２底壁７６の下には、第３室７７が設けられている。この第３室７７は、濾過室とも呼ばれ、仕切り手段３６と、環状フィルタ・ユニット４２とにより形成されている。加えて、この第３室７７は、外ディスク１９及び内ディスク２０の中央開口２２により形成されている通路を通して、第２室７５と連通している。上記仕切り手段３６の下には、第４室７８が形成されている。この第４室７８は、カバー２７の壁部３２によって下方が形成されると共に、該カバー２７のスリーブ２８の部分及び外ディスク１９の下側によって形成されている。
上記の如く、上記装置は、主として、たとえば、血液からフィブリンモノマー等の成分を分離するのに相応しいものであり、この目的のために、第２室７５、そして、好ましくは、カプセル４５の上部室８０は、バトロクソビン(batroxobin)等の適切な酵素により前以て充填される。欧州特許第５９２，２４２号公報から理解されるように、トロンビンのようなすべての酵素が用いられることができる。このような酵素は、トロンビンそのものや、同様の活性を有する他のあらゆる物質を含んでいる。この後者の物質としては、たとえば、アンクロドや、アクチン(Acutin)や、ベニム(Venyyme)や、アスペラーゼ(Asperase)や、バトロパーゼ(Batropase)や、クロタバーゼ(Crotabase)や、フラボルソビン(Flavorxobin)や、ガボナーゼ(Gabonase)や、好ましいバトロクソビンが挙げられる。バトロクソビンは、ビオチンに化学的に結合することができ、これは、バトロクソビンが周知の方法によりアビジン−アガロース(avidin-agarose)複合物(コンポジション)に含まれているアビジンの手段により捕らえられることを可能にする合成物質である。従って、アビジン−アガロースは、カプセルの最も下のチャンバ８１内に見いだされる。ビオチン−バトロクソビン(biotin-batroxobin)複合物と、アビジン−アガロース複合物は、カプセルが装置内に配置される前に、カプセル４５内の各チャンバ８０，８１に比較的容易に充填される。
最後に、シリンジ５８は、例えば、酢酸で希釈したアセテートから準備されるｐＨ−４の緩衝剤の溶解を行う溶液を含むように設定される。シリンジ５８は後に、所望のフィブリンモノマー溶液を収容するのに用いられる。
他の周知の緩衝剤もまた使用可能である。その再度溶解(redissolving)する緩衝剤は、あらゆる酸緩衝剤溶液であることができる。当該溶液は、好ましくは、１〜５の間のｐＨを有する。適切な例として、酢酸、コハク酸、グルクロン酸、システイン酸、クロトン酸、イタコン酸、クルトニック酸(glutonic acid)、ギ酸、アスパラギン酸、アジピン酸、そして、これらの何れかの塩が挙げられる。コハク酸、アスパラギン酸、アジピン酸、そして、たとえば酢酸ナトリウム(sodium acetate)等の酢酸塩が好ましい。また、可溶化(solubilization)は、カオトロピック薬剤(chaotropic agent)の手段により、ｐＨがニュートラルである状態で行われることが可能である。適切な薬剤には、尿素、臭化ナトリウム(sodium bromide)、グアニジン塩酸塩、ＫＣＮＳ、沃化カリウム、そして臭化カリウム(potassium bromide)が含まれる。これらの酸緩衝剤や、これらのカオトロピック薬剤の濃度や容量は、欧州特許第５９２，２４２号公報に記載されている。
血液の供給時において、或いは、血液の供給直後、ピストン・ロッド８は、装置の内側に押し込まれ、これにより、カプセル４５の変位可能なスリーブ５２は下方に移動せしめられ、底壁７６を通って貫通路内に密閉状態で係合せしめられ、て第２室７７方向へ移動する。この結果、カプセルの最も上に位置する部屋８０の内側に収容されているビオチン−バトロクソビン複合物へのアクセスが同時に可能になる。あるいは、最も上に位置する部屋８０は、プラスマ部分が第２室に移動(流動)せしめられた後に開放される。
装置が使用準備完了状態にあるとき、血液サンプルが、不図示の針とホース６５を通して、周知の方法で、第１室内に供給される。この血液サンプルは、好ましくは、また周知の方法で、抗凝血剤と混合される。血液をホース６５及び開口６６を通して第１室７０の内部に供給するとき、空気は、周知の方法によって該室から取り除かれる。血液の供給後、ホース６５は取り外される。そして、開口６６が閉じられて密閉される。次いで、この血液を収容した本装置は、とりわけ、種々の部分を密閉状態で圧縮するのを補助する遠心分離装置(遠心分離機)内に配置される。この遠心分離装置により、本装置は、回転軸１を中心として回転せしめられる。遠心分離の結果、血液は、第１室７０内で、プラスマの部分に分離される。このプラスマの部分は、血液の他の部分よりも径方向内側に溜まる。該他の部分は赤血球や白血球を含んでいる。欧州特許第５９２，２４２号公報に記載されているように、所望時には遠心の速度や時間を変化させることによって、どちらの部分にも、血小板が含まれるようにすることができる。本発明が用いている遠心分離装置の速度は、通常、２，０００〜１０，０００ＲＰＭの範囲であり、工程の種々の箇所において必要とされるのに応じて、また、欧州特許第６５４，６６９号公報に記載されているように、変えてもよい。
血液の上記プラスマと上記他の部分との間の境界(interface)が安定したとき、つまり、分離が完全に行われたとき、第１室７０の容積は、ピストン・ロッド８により、つまりピストン５５が回転継続時に引き抜かれることにより、減じられる。その結果として、先ず、存在している可能性がある空気の内層が溝４，２１を通って第２室７５内に案内される。そして、さらに、ピストン５５を移動させることにより、プラスマもまた第２室７５内に案内されることを示唆している。このピストン５５の移動は、プラスマの全体的な層が強制的に第２室７５内に案内されたときに、つまり血液のプラスマの部分と他の部分との境界が第１室７０の内壁７１に達したときに、停止される。これは、最も上の部屋８０がまだ開放されていない場合には、バトロクソビンが解放されるように行われるべきである。
第２室７５内において、プラスマの部分は、架橋していないフィブリンモノマーに直ちに重合するところのバトロクソビン酵素に接し、この結果、フィブリンモノマーは、プラスマの部分から解放される。このプロセスは、本装置が連続的に遠心作用を受けている間行われ、この結果、フィブリンポリマーは、プラスマ部分の残りの部分から効果的に分離される。このフィブリンポリマーは、ビオチン−バトロクソビン複合物の反応によって形成され、円筒状外壁７２沿いに粘着ゲル層として形成(沈殿、settling)される。この分離が完了したとき、遠心分離は停止せしめられ、プラスマ部分の他の比較的(流動する)液状部分は、第１室７０から第２室７５に空気を移動させるべく持ち上げられた後に押し下げられるピストン５５によって、第１室７０に容易に押し戻されることができる。フィブリンポリマーは外壁に残留して滑り始めてもよいが、その場合、ポリマーは余剰分の液体よりも遅い速度で滑り落ちる。したがって、この移動は、フィブリンポリマーを含む粘着層が溝２１に達する前に、比較的に容易にかつ速やかになされることができる。この粘着層が溝２１の入り口に極めて早く達することを防止するために、上方に突出するリング状歯８２を形成する等のさらなる手段を任意に有することができる。この歯８２は、底７６に点線で示している。この遠心分離／廃液処理(処置)は、所望時には、フィブリンポリマーから可能な限り多くのプラスマ流体を得るために、２回以上実行されることができる。
一旦プラスマ部分の残りの部分が第２室７５から駆逐されたとき、カプセル４５の変位自在のスリーブ５２は、さらに、下方向へ移動せしめられ、最も下に位置する室８１へのアクセスが可能になる。同時に、或いは、スリーブの後者の(上記した)変位に関連して、シリンジ５８のプラグ５９は、外部からのスピンドル作用(spindle action)によって、完全に下方向へ押圧される。これにより、ｐＨ−４の緩衝剤は、第２室７５に移動せしめられる。これは、遠心動作が開始される間に行われる。このｐＨ−４の緩衝剤が加えられることにより、フィブリンポリマーはそこで溶解せしめられる。そして、カプセル４５内においてより下に位置する部屋８１内のアビジン−アガロース複合物の存在により、ビオチン−バトロクソビン複合物は、周知の方法で、アジピンにより結合される。ピストン５５が連続的に変位することにより、カプセル４５の変位可能なスリーブ５２は、仕切り手段３６と係合せしめられ、底壁７６との係合が解かれる。この結果、第３室７７に対してアクセスが自由になる。結果として、第２室７５の内容物は、自由に下方向に流動して第３室内に流れることができる。好ましくは、遠心分離中に、再溶解(redissolving)が行われる。この遠心分離動作は、遠心分離や、正転や逆転動作に関する一連の停止及び開始動作を含むとよい。
遠心分離が連続的に行われることにより、フィブリンモノマー溶液は、アガロースや、ビオチン−アビジン捕捉システム(biotin-avidin capture system)を介してそれに結合されるバトロクソビンの比較的大きな粒子を保持する環状フィルター・ユニット４２を介して第３室内で分離されることができる。フィブリンモノマー溶液が、上記遠心分離の結果、最も下に位置する第４室７８内を通過したとき、遠心分離動作は中止され、そして、フィブリンモノマー溶液はプラグ５９を新たに退避させる(引っ込める)ことによりシリンジ５８に容易に流動せしめられる。カプセル４５の筒状長手部４６の上端は、シリンジ５８との接続をなす細長の筒４７と係合している。
遠心分離が連続的に実行されている間にフィブリンポリマーが第２室７５内でプラスマ部分から分離されることにより、また、フィブリンモノマー溶液が遠心分離によって第３室７７内で分離されることにより、問題となっている血液サンプルから得られるフィブリンモノマーの量は比較的多い可能性がある。
本発明は、好ましい実施形態を参照して説明してきた。しかしながら、本発明の視野から離れることなく、多数の変形形態を構成することが可能である。
図２は、そのような変形形態の例を示しており、図１に示した本発明の実施形態に多かれ少なかれ対応している本発明の第２実施形態が示されている。図２の実施形態は、第１室９０と、ピストン９２によって隔てられた第２室９１とを備えている。このピストン９２は、内側に上記第１室を形成する中空ピストン・ロッド９３を備えている。外側には、２つの室(チャンバ)が、当該２つの室９０，９１を形成するために、実質的に管状である部材９４の部分と、外側円筒壁９５とによって形成されている。上方には、第１室９０が、上壁８５によって形成されている。この上壁８５は、管状部材９４にねじ込まれているリング９６の手段によって、上記管状部材９４に固定された上カバーによって形成されている。この上壁８５には、中空ピストン・ロッド９３を通過させるための貫通穴が形成されている。下方には、第２室９１が底壁９６によって形成されている。この底壁９６は、管状部材９４内に位置し周囲方向に延在する内フランジによって形成されている。第２室９１に隣接する位置において、上記管状部材９４は、切頭円錐形状面９７を備えている。この切頭円錐形状面９７は、第２室９１の中央に向けてピストン９２から離れる方向に傾斜している。この底壁９６には、中央貫通路９８が第３室９９方向に形成されている。この第３室９９は、仕切り手段１００と、環状フィルター・ユニット１０１とによって形成されている。この環状フィルター・ユニット１０１は、底壁９６と仕切り手段１００との間に挿入されており、第４環状室１０２方向に案内している。この第４室１０２は、スレッドによって上記管状部材９４に固定されたカップ形状のカバー１０３との間に形成されている。このカバー１０３は、中間リブ１０３によって、仕切り手段１００を管状部材９４の中央所定位置に保持すると共に、上記環状フィルター・ユニット１０１を押圧している。
カプセル１０５は、中央に位置すると共に上方に突出するピン１０４上に取り付けられている。このピン１０４は、仕切り手段１００上に設けられている。このカプセル１０５は、ディスク形状のリング１０７，１０８を有する環状部１０６を備えている。このディスク形状のリング１０７，１０８は、環状部１０６にルース(loosely)に取り付けられている。このリング１０７，１０８によって、変位可能に構成されたスリーブの手段により、参照符号ＡＡ及びＢＢで夫々示される酵素を収容するための室(チャンバ)が形成されている。このディスク形状のリングは、管状部材１０６の外周によりその上に形成されたショルダの手段によって、細長の筒１０６上に相互に所定間隔をおいて取り付けられている。該管状部材の直径は、下から上へ向けて減じている。
第１室９０の上から第２室９１の底方向に、貫通溝１１５，１１６が形成されている。これらの溝は、夫々に固定された細長の筒１１７，１１８の手段によって形成されている。これらの細長の筒１１７，１１８は、装置の回転軸に平行に延在しており、上壁９５及び底壁に形成された開口に関連する端部に固定されている。これらの細長の筒とチャンバとの間の溝接続は、夫々、適切なボアとその中に固定されたプラグとによってなされている。細長のパイプ１１７，１１８は、ピストン９２内のそれらの各開口を通して延在している。漏れを防止するように、密閉リングが至る所に設けられている。
ピストン９２の内側中央には、中空ピストン・ロッド９３内のシリンジ１２１と、カプセル１０５の筒長さ１０６の端部とに接続されるためのカプリング１２０が固定されている。このカプリング１２０は、第２室９１内に突出しカプセル１０５上に設けられた変位可能なスリーブ１１０に影響を与えるスカート１２２を支持している。図示するように、このスリーブ１１０の外径は、第３室９９に至る下方向に延在する貫通路９８の直径に対応して構成されている。これにより、スリーブ１１０は、底壁９６によって、あらゆる位置、従って、また最も低い位置、に案内されかつ保持される。この最も低い位置において、スリーブ１０５は、カプセル内で最も低い位置にあるディスク形状のリング１０９には係合しないようになっている。これにより、液体が、第２室９１から下方向の第３室９９内に流動可能となっている。溝１２３は、第４室１０２から延在しており、仕切り手段１００上に設けられているピン１０４を貫通するように中央上方に形成されている。さらに、この溝１２３は、カプセル１０５の管状部材１０６を貫通するように上方に形成されている。これにより、流体は、そこから、シリンジ１２１内に流入することができるようになっている。
図２の装置は、図１の装置と全く同様な方法で使用される。ここにおいて、勿論、血液を供給するためにホースをそれに接続するための手段がまた備えられている。
図１および図２と同様の基本的要素を多数有する他の実施形態を図３に示す。液体移動溝４は、一方が他方に収められる内側容器３又は外側容器２のいずれかに形成されたスロットによって形成されるとよい。図３に示すように、溝４は、各上側部分５と６との間で上方に延在し、(図１に示す如く)ショルダエリア３００内に開口しており、軸方向に延在する部材９と１０との間には達していない。弾性リップシーリング手段６４は、ショルダエリア３００に直接隣接しており、リップシーリング手段６４を通過して流動する所望の液体（例えばプラスマ）は、ポーションシャフト８と軸方向に延在する内側部材１０との間を流動することなく、上部５と６の間で、溝４の開口へと直接流動することが可能である。
図３に示した他の変形形態では、図１に示した歯８２は「フィブリンフィルタ」３１０に代えられている。このフィブリンフィルタ３１０は、カプセル４５の周囲で、第２室７５の底部に近接して、(例えば枠あるいは円形リング上で)環状に配置された１組の歯である。フィルタ３１０は１つ以上の部位において底壁７６に接続されているが、実質的には、余剰分の液体がより効率的に排出されることができるように、底壁７６の近くで開口している。図１の装置を用いる場合、フィブリンポリマーは歯８２によって所望の通りに保持されるが、余剰分の液体がフィブリンポリマーの後方に入り込む(trap)可能性がある。しかし、上記構成はその緩和を促進する。
さらなる改変点が図３に示されている。特にシリンジ５８については、シリンジ５８の回りを実質的に取り巻く保護ホルダ３２０が示されている。ホルダ３２０は、円筒形、すなわちシリンジ５８の形状に大略対応する形状であるとよい。ホルダの上部に、ホルダの蓋３２２がシリンジ５８に対して取り外し可能に取り付けられており、この蓋は、所望の製品(例えばフィブリンモノマー溶液)を得るためのシリンジ内における工程が完了した後、シリンジ５８およびホルダ３２０を装置から簡便に取り外すためのハンドルをなす。ホルダ３２０は、処理の間、シリンジ５８を保護できるように、プラスチック又はポリマー材より製作されている。さらに、シリンジに作業者が直接触れることはないので、シリンジをより遠くの使用ステーションに移動する際に汚すことがない。本願装置のキットの一構成要素として、ホルダ３２０を有すると共に必要な酸緩衝剤溶液を収容する、予め殺菌されたシリンジ５８が備えられている場合には、特に、取り外し可能に底部に位置する蓋(図示せず)を、ホルダ３２０用として利用してもよい。図３中には、また、シリンジカプラー３２４が示されている。シリンジカプラー３２４は、例えば、上下に移動するロッド(図示せず)の作動によって、蓋３２２内を軸方向にスライド自在である。ロッドは、装置の駆動ユニットの一部であってよい。プラグ５９は、カプラー３２４を、ロック及び非ロックの両状態で受け入れるように構成している。これは、例えば、プラグ５９の内側の水平方向の受け部３２８を越えた位置に凹部３２６を設けると同時に、この凹部に対応する隆起部３３０をカプラー３２４のシャフトに設けることによって実施可能である。これらの部材の寸法と形状は、カプラー３２４を最小限の力で下方へ押すことによってプラグ５９を下方へ移動させることができ、このとき、隆起部３３０が押されて水平部３２８を越えてしまうことのないように選択される。このようにして、カプラー３２４は、プラグ５９の位置を変えずに上方へ戻ることができる。カプラー３２４がプラグ５９に係合している際にカプラー３２４に僅かに大きい下方への圧力が加わると、プラグ５９がカプラー３２４と共に所定位置に移動する場合には、隆起部３３０は、凹部３２６にロックされることになる。
図３にはまた、軸方向に突出しているスカート６３が、ピストン５５の底部内に確実に適合(フィット)している別部材として示されている。
種々の装置の部分をなす上記部材は、適切なプラスチック部材から射出成型により容易に製造される。問題となっている装置は、従って、また、比較的安価であり、使い捨て装置として使用されるに相応しい。
したがって、所望の材料であればどのような材料を使用してもよい。好ましくは、医療装置産業で知られているような照射安定型ポリマーを使用する。好ましい実施形態において、外側の容器とピストンはポリカーボネートで形成し、シリンジホルダと蓋とプランジャーはポリプロピレン、フィルタはポリエチレン、シリンジはガラス、Ｏ型リングはシリコン、また、他の部分はスチレンアクリロニトリルで形成している。
本発明は、装置の好ましい実施形態を参照しながら記載した。しかしながら、本発明に係る方法は、蓋によって閉じられることができるカップの手段によって、無菌状態の実験室内において容易に実施されることが可能である。プラスマ及び酵素は、カップ内に充填され、撹拌され、続く遠心分離によって、結合していないフィブリン・ポリマーが、上記の如くカップの底又は壁上に分離される。残りのプラスマの部分が取り除かれた後、その結合していないフィブリン・ポリマーは、溶剤(溶媒、solvent)の追加によって、また、上記同様の遠心分離によって、再溶解(redissolved)せしめられる。
実 例
１４０mlの血液と、２０mlの硝酸ナトリウムの抗凝血剤(ＵＳＰ)とが、上記装置の第１室７０内に案内された。この組み合わせ(コンビネーション)は、プラスマと血球とを分離するために、約６０００ＲＰＭで約２分間、遠心分離装置にかけられた。その分離を維持するために遠心分離を継続している間、最も内側の相つまりプラスマを第２室７５に流動させるように、ピストンを持ち上げた。約６０ｍｌのプラスマが流動した。これは、上記の如くカプセル４５の上側のチャンバ８０を通して第２室７５内に案内された３０ユニットのビオチン化バトロクソビン(biotenylated batroxobin)をもって処理された。このプラスマとアブロクソビン(abroxobin)とは、たとえば、約２０００〜３０００ＲＰＭ等の低速度で混合された後に、９０００ＲＰＭで９分間遠心分離された。
上記架橋していないフィブリンポリマーゲルは、円筒壁上に薄いゲル層として沈殿(precipitated)した。そして、回転は停止せしめられた。残りの(他の)プラスマ流体(リンパ液、mserum)は、次いで、第１室７０内に戻された。これに次いで、９０００ＲＰＭで１分間遠心分離することを２度行い、これにより、ゲル内のリンパ液を可能な限り取り除いた。このような各１分間の遠心分離に続いて、余分なリンパ液は、第１室７０に流動せしめられた。
この後、２４ｍＭの塩化カルシウムを含む０．２Ｍの酢酸ナトリウム(ｐＨ４．０)３．５mlを含む緩衝剤溶液は、シリンジ５８から第２室７５内に案内された。このとき、フィブリンポリマーゲルを溶解させてフィブリンモノマーを含む溶液を形成するために、正転及び反転サイクルを繰り返すように夫々約３０００ＲＰＭで５〜１０秒間、遠心分離が２分間実行された。このようにして準備された溶液に対して、カプセル４５のより低い位置にあるチャンバ８１を介して、アビジン−アガロースが添加された。次いで、正転及び反転サイクルを繰り返すように夫々約３０００ＲＰＭで５〜１０秒間、遠心分離が５分間実行された。この結果得られた溶液は、フィブリンモノマーと、アビジン−アガロース：ビオチン−バトロクソビンの複合体(a complex of avidin-agarose:biotin-batroxobin)を含んでいた。
この溶液は、第３室７７内に流動せしめられ、遠心分離により、９０００ＲＰＭで１分間、２０μｍの環状ポレックス・フィルタ(Porex filter)を通して濾過された。この結果得られたフィブリンモノマー溶液は、前記したように、シリンジ５８内に収容され、約２５mg/mlのフィブリンモノマーが収容された。
このようにして形成されたフィブリンモノマー溶液(このケースにおいては、フィブリンＩ)は、フィブリンＩと緩衝剤との比率が５：１である０．７５Ｍの炭酸ナトリウム緩衝剤／重炭酸ナトリウム緩衝剤を含むそのようなシーラント(密閉剤、密閉物質)を必要とする箇所に投与(co-administration)することにより再重合されてフィブリンシーラントが形成された。

Claims (29)

1. プラスマからフィブリンを分離するための方法にして、
   上記プラスマを、外壁と底壁とによって形成された反応室に供給するステップと、
   上記プラスマのフィブリノーゲンを、該フィブリノーゲンを架橋していないフィブリンポリマーに転化させることが可能な薬剤に接触させるステップと、
   上記接触ステップ時に、上記プラスマから上記架橋していないフィブリンポリマーを分離して上記外壁に薄いゲルフィルムとして付着させるべく、上記反応室とプラスマと薬剤とに十分な遠心分離力を加えるステップとを有する方法。
2. 上記架橋していないポリマーゲルを上記外壁に有している上記反応室に、フィブリンモノマーの溶液が形成されるように溶剤を添加することによって、上記架橋していないフィブリンポリマーを溶解させるステップをさらに有する、プラスマからフィブリンモノマーを分離するための請求項１に記載の方法。
3. 血液を分離室に供給するステップと、
   比重がより大きい血球相と比重がより小さいプラスマ相とを同心に遠心分離させるのに十分な遠心分離力を上記分離室に加えるステップと、
   上記プラスマを上記反応室に供給する間、上記遠心分離力を維持するステップとをさらに有する、請求項１に記載の方法。
4. 上記分離室および上記反応室は、単一装置の共通軸を中心として整列している、請求項３に記載の方法。
5. 可動ピストンは、上記分離室と上記反応室とを分離すると共に、上記反応室の上壁と上記分離室の底壁とを構成している、請求項４に記載の方法。
6. 上記架橋していないフィブリンポリマーの形成の後に上記反応室内に残留している上記プラスマ液は、上記架橋していないフィブリンポリマーが上記溶剤によって溶解される前に、上記分離室へ流動せしめられるようにした、請求項３に記載の方法。
7. 血液からフィブリンモノマー溶液を分離するための方法にして、
   外壁と、上壁と、底壁としての可動ピストンとによって形成された円筒状分離室内に、血液を供給するステップと、
   プラスマ部分と細胞部分とを同心に遠心分離させるのに十分な遠心分離力を作用させるべく、上記分離室をその長手軸を中心として回転させるステップと、
   上記回転継続時にそのように分離されたプラスマを上記分離室と同軸に整列した円筒状反応室に移動溝を通して供給するステップであって、上記反応室はさらに、底壁と、上記分離室と共通の外壁と、上壁としての上記ピストンとによって形成されており、上記流動溝は上記反応室の底部から上記分離室へ延在しており、上記供給は上記プラスマを上記流動溝に沿って強制的に流動させるべく上記分離室の容積を減じるような上記ピストンの上方移動によってなされるようにしたステップと、
   上記プラスマを、上記プラスマ内のフィブリノーゲンを架橋していないフィブリンポリマーに転化させることが可能な薬剤に接触させるステップであって、上記接触は上記架橋していないフィブリンポリマーを上記反応室の上記外壁上に付着させるべく回転継続時に行われるステップと、
   残留しているプラスマ液を上記反応室の底に排出すべく上記回転を停止させるステップと、
   上記残留しているプラスマ液を上記流動管路および上記分離室内に強制的に戻すように上記反応室内の空気に十分な圧力を加えるべく上記ピストンをわずかに下方に移動させるステップにして、上記架橋していないフィブリンポリマーが上記ピストンのわずかな移動により実質的に乱されないようにしたステップと、
   溶剤を上記反応室内に案内するステップと、
   フィブリンモノマーと上記溶剤とを含む溶液を形成すべく、上記溶剤が上記架橋していないフィブリンポリマーを溶解するように、上記反応室を撹拌するステップとを含む方法。
8. プラスマを収容して遠心分離するべく構成された外壁と底壁とにより形成された反応室と、
   上記プラスマのフィブリノーゲンを、架橋していないフィブリンポリマーに転化させることが可能な薬剤を上記反応室内に案内するための手段と、
   上記プラスマから上記架橋していないフィブリンポリマーを分離して該架橋していないフィブリンポリマーを上記反応室の上記外壁に付着させることが十分に可能であるように、上記反応室およびその中のプラスマおよび薬剤を遠心分離する手段とを備えた、プラスマからフィブリンを分離するための装置。
9. 溶剤内にフィブリンモノマーを含むフィブリンモノマー溶液を形成するように、上記外壁に付着せしめられた上記架橋していないフィブリンポリマーを十分に溶解するべく、上記溶剤を上記反応室内に案内するための手段をさらに備えた、請求項８に記載の装置。
10. 上記架橋していないフィブリンポリマーを形成した後に残留しているあらゆるプラスマ流体を上記反応室から流動させるための手段をさらに備えた、請求項９に記載の装置。
11. 上記液体流動手段は、上記反応室の底に形成された開口を有する流動溝を１つ以上備えている、請求項１０に記載の装置。
12. 血液を分離室内に供給する血液供給手段と、
    上壁と、外壁と、底壁をなす可動ピストンとによって形成された円筒分離室と、
    上記分離室の下方にあって、該分離室と共通軸を有し、かつ共通の外壁を有する円筒反応室であって、上記可動ピストンは反応室の上壁をなす円筒反応室と、
    上記反応室内に、フィブリノーゲンを架橋していないフィブリンポリマーに転化させることが可能な薬剤を案内するための手段と、
    上記ピストンの作用によって、上記分離室と上記反応室との間で液体の流動を可能にすべく、上記反応室の底部から上記分離室へ延在する流動溝手段と、
    上記分離室内のプラスマと血液とを十分に同心遠心分離させ、上記反応室内に形成された架橋していないフィブリンポリマーを上記反応室の上記外壁に十分に付着させるように、装置を上記軸を中心として回転させるための手段とを備えた、血液からフィブリンを分離するための装置。
13. 溶剤を上記反応室内に案内するための手段をさらに備えた、請求項１２に記載の装置。
14. 上記流動溝は上記分離室の上壁へ延在している、請求項１２に記載の装置。
15. 上記流動手段は、上記分離室及び上記反応室の外壁を通して延在する溝を１つ以上備えている、請求項１２に記載の装置。
16. 上記流動手段は、上記分離室及び上記反応室を通して直線状に延在する管状溝を１つ以上備えている、請求項１２に記載の装置。
17. 外側円筒容器内に確実に適合する内側円筒容器を備えており、上記容器のいずれかに設けられたスロットが上記外壁内の上記流動溝を形成している、請求項１５に記載の装置。
18. 上記外側容器内で上記内側容器の底壁に対して確実にディスクが設けられており、
    該ディスクは、上記流動溝を、上記反応室の外壁から上記反応室の上記底壁の中央部又は中央部近傍まで延長するようなスロットを備えている、請求項１７に記載の装置。
19. 上記ピストンはさらに、上記分離室の形状が環状であるように、上記分離室の中央部と上記分離室の上壁内の開口とを通って上方に延在する、該ピストンと一体形成されたピストンシャフトを備えている、請求項１２に記載の装置。
20. 上記ピストンシャフトは、中空であり、溶剤を投与するための手段を備えており、上記ピストンとシャフトと投与手段とは、上記溶剤を上記反応室内に投与するように構成されている、請求項１９に記載の装置。
21. 上記投与手段は、上記ピストン内の第２液体流動手段と流動可能に連通しているシリンジカートリッジである、請求項２０に記載の装置。
22. プラスマからフィブリンモノマーを分離するための方法であって、壁によって形成された室にプラスマを供給するステップを含み、適当な酵素が追加されている間に架橋していないフィブリンポリマーを含む部分を分離する方法において、
    架橋していないフィブリンポリマーの上記室のプラスマ部分からの分離が、上記架橋していないフィブリンポリマーを上記室の外壁に付着させる遠心分離時に行われ、
    上記室内で収集され残留している液体部分は上記室から除去され、
    実質的に壁に付着した状態で上記室内に残留している架橋していないフィブリンポリマーを含む部分は、溶剤の追加と遠心分離による撹拌とによって溶解せしめられることを特徴とする方法。
23. 装置の環状の第１室に、抗凝血剤を含む血液を供給するステップを含み、
    該環状室は、円筒外壁と円筒内壁と上壁と底壁とによって形成されており、
    上記円筒外壁と上記円筒内壁とは、いずれも共通軸に対して同軸に延在しており、
    上記上壁あるいは上記底壁は上記第１室内で変位可能なピストンボデーによって形成され、
    血液を細胞部分とプラスマ部分とに実質的に分離させた後に、ピストンボデーを移動させて上記形成されたプラスマ部分を外側円筒壁で形成された第２室へ流動させるべく、上記共通軸を中心として装置を遠心分離させるステップを有し、
    上記外側円筒壁は上記共通軸と同軸に延在し、
    架橋していないフィブリンポリマーを含む部分が適当な酵素が添加されている間に第２室内で分離せしめられ、
    遠心分離時に、フィブリノーゲンを含むプラスマ部分は酵素と接しめられ、その結果、上記第２室の外側円筒壁に架橋していないフィブリンポリマーが付着せしめられ、第２室の底に収集された液体部分は、ピストンボデーによる作用を受けている間に上記第１室へと流動せしめられ、
    実質的に円筒壁に付着した状態で上記第２室内に残留している架橋していないフィブリンポリマーは、溶剤の追加および遠心分離による撹拌によって溶解せしめられるようにした、請求項２２に記載の方法。
24. 中央の回転軸の周囲で遠心分離を行うことによってプラスマからフィブリンを分離する装置にして、
    上記回転軸を中心として同心円状に設けられた外側円筒壁及び内側円筒壁と上壁と底壁とによって形成された環状の第１室を備え、
    上記底壁は上記第１室内で変位可能なピストンボデーによって形成され、
    第１導管を通して上記第１室と連通する第２室をさらに備えており、
    上記第２室は、上記回転軸を中心として同心円状に設けられた外側円筒壁及び内側円筒壁と、上記ピストンボデーと、底壁とによって形成されており、
    上記第２室は、遠心分離時に、上記第１室の下方に配置され、架橋していないフィブリンポリマーを上記第２室の上記外側円筒壁に付着させるように構成されており、
    血液を第１室に供給する血液供給手段と、プラスマのフィブリノーゲンを架橋していないフィブリンポリマーに転化させることが可能な薬剤を上記第２室に供給する薬剤供給手段と、少なくとも１つの液体収容容器の接続部を収容する収容手段とをさらに備え、
    上記収容手段は第２導管を通して上記第２室と連通しており、
    上記第１導管は、上記第１室の上壁に形成された開口と上記第２室の底壁に形成された開口との間に延在する溝を少なくとも１つを備えた装置。
25. 上記少なくとも１つの溝は、上記第１室および上記第２室の外側円筒壁の内側を通して延在することを特徴とする、請求項２４に記載の装置。
26. 上記第２室の底壁に形成された少なくとも１つの溝の開口は、底壁によって形成された凹部に接続する上記第２室の中央部に設けられたことを特徴とする、請求項２５に記載の装置。
27. 各溝は、上記ピストンボデーを通って直線状に延在する管路によって形成されており、
    管路の端部は、上記第１室の上壁および上記第２室の底壁にそれぞれ設けられており、それは各室に端部を有する溝部と連通していることを特徴とする、請求項２４に記載の装置。
28. 上記第１室および上記第２室は、外側シリンダと内側シリンダとによって形成された共通の外側円筒壁を備えており、
    該両シリンダは、互いに密閉状態で適合せしめられており、
    該両シリンダ間には軸方向に延在する溝が形成されており、
    該両シリンダの一端部は、上記ピストンボデーに接続されたピストンロッドの通路となり得る開口を備えた端壁により形成され、
    上記ピストンボデーは、上記第１室の底壁を形成すると共に、上記第１室を上記第２室から分離させており、
    上記溝は、上記シリンダの端壁間で、ピストンロッドに近接している開口へ延在していることを特徴とする、請求項２５または２６に記載の装置。
29. 上記第２室の上記底壁は、密閉状態で接しその間に溝を形成する２つの壁部によって形成されており、
    該溝は、一端部で上記外側円筒壁に形成された溝と連通しており、他端で上記第２室内で底壁の中央部分に近接して開口している、請求項２７に記載の装置。

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