JP3288041B2 - 抗ｒｎａ抗体の検出方法 - Google Patents
抗ｒｎａ抗体の検出方法Info
- Publication number
- JP3288041B2 JP3288041B2 JP50249592A JP50249592A JP3288041B2 JP 3288041 B2 JP3288041 B2 JP 3288041B2 JP 50249592 A JP50249592 A JP 50249592A JP 50249592 A JP50249592 A JP 50249592A JP 3288041 B2 JP3288041 B2 JP 3288041B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rna
- antibody
- test solution
- serum
- antibodies
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、自己免疫疾患の患者に由来する検査液中の
抗RNA抗体の検出及び定量により自己免疫疾患の活動度
をモニターする方法と、該方法を実施するためのキット
とに関する。
抗RNA抗体の検出及び定量により自己免疫疾患の活動度
をモニターする方法と、該方法を実施するためのキット
とに関する。
全身性エリテマトーデス（SLE）患者の血清が核成分
に対する抗体を含んでいることが発見されて以来、該反
応に関与する抗原を明らかにし且つ抗体濃度を測定する
ためのより高度な方法が開発されてきた。抗原及び抗体
の種類を確立するために使用されてきた方法には、補体
結合、血球凝集反応、硫酸アンモニウムによる可溶性免
疫複合体の沈降、寒天中での二重拡散による免疫沈降及
び免疫組織学（immuno−histology）がある。前記反応
は、免疫組織学用血清の希釈、血清によるDNAの結合の
程度、及び固相ラジオイムノアッセイによって定量され
てきた。酵素に結合した抗体の使用は、この種の結合体
をイムノアッセイシステムで放射性標識の代わりに使用
する可能性を開いた。
に対する抗体を含んでいることが発見されて以来、該反
応に関与する抗原を明らかにし且つ抗体濃度を測定する
ためのより高度な方法が開発されてきた。抗原及び抗体
の種類を確立するために使用されてきた方法には、補体
結合、血球凝集反応、硫酸アンモニウムによる可溶性免
疫複合体の沈降、寒天中での二重拡散による免疫沈降及
び免疫組織学（immuno−histology）がある。前記反応
は、免疫組織学用血清の希釈、血清によるDNAの結合の
程度、及び固相ラジオイムノアッセイによって定量され
てきた。酵素に結合した抗体の使用は、この種の結合体
をイムノアッセイシステムで放射性標識の代わりに使用
する可能性を開いた。
Pesceらは（Clinical Chem.20/3,353−359,1974）、
不溶性支持体上で抗原を調製し、検査血清上に抗DNAを
積層し、該血清を、酵素ペルオキシダーゼで標識した抗
ヒトIgGと反応する抗原として使用することからなる方
法を記述している。原則として、不溶性支持体に結合す
るIgGの量は、血清中に含まれている抗体の量に比例す
る。Pesceらは、酵素に結合した第２の抗体を定量シス
テム又は検出システムとして使用する固相非競争結合ア
ッセイが、血清中でDNAに対する抗体を測定するための
有効な方法であることを立証した。
不溶性支持体上で抗原を調製し、検査血清上に抗DNAを
積層し、該血清を、酵素ペルオキシダーゼで標識した抗
ヒトIgGと反応する抗原として使用することからなる方
法を記述している。原則として、不溶性支持体に結合す
るIgGの量は、血清中に含まれている抗体の量に比例す
る。Pesceらは、酵素に結合した第２の抗体を定量シス
テム又は検出システムとして使用する固相非競争結合ア
ッセイが、血清中でDNAに対する抗体を測定するための
有効な方法であることを立証した。
全身性自己免疫疾患の患者は、正常細胞成分に対する
種々の抗体を産生する。特性が十分に解明されている幾
つかの自己抗体系は、特定のタンパク質又は核酸−タン
パク質複合体と反応する（Tan,E.M.（1989）Adv.Immuno
l.44,93−151）。結合組織疾患の患者の血清はしばし
ば、80〜200ヌクレオチドの長さを有する小RNA分子に結
合したタンパク質からなる細胞成分に対する抗体を含ん
でいる。核タイプ（nuclear type）の前記小RNA−タン
パク質複合体（snRNP）に対する自己抗体は主に、SLE又
はSLEオーバーラップ症候群（SLE overlap sydrome
s）の患者の血清中に存在する。既に幾つかの特定抗体
が開示されている。ある抗体は、（U1）snRNP特異的タ
ンパク質、即ち70k、Ａ及びＣのうちの１つ以上を認識
するという事実に起因して、（U1）snRNPだけを沈降さ
せる。別の特定抗体である抗Smは、この種の抗体が前記
snRNPに共通のタンパク質B'/B及びＤを認識するという
事実に起因して、総ての主要核質snRNPを沈降させる
（v.Venrooij及びSillekens,Clin.Exp.Rheum.,1989）。
種々の抗体を産生する。特性が十分に解明されている幾
つかの自己抗体系は、特定のタンパク質又は核酸−タン
パク質複合体と反応する（Tan,E.M.（1989）Adv.Immuno
l.44,93−151）。結合組織疾患の患者の血清はしばし
ば、80〜200ヌクレオチドの長さを有する小RNA分子に結
合したタンパク質からなる細胞成分に対する抗体を含ん
でいる。核タイプ（nuclear type）の前記小RNA−タン
パク質複合体（snRNP）に対する自己抗体は主に、SLE又
はSLEオーバーラップ症候群（SLE overlap sydrome
s）の患者の血清中に存在する。既に幾つかの特定抗体
が開示されている。ある抗体は、（U1）snRNP特異的タ
ンパク質、即ち70k、Ａ及びＣのうちの１つ以上を認識
するという事実に起因して、（U1）snRNPだけを沈降さ
せる。別の特定抗体である抗Smは、この種の抗体が前記
snRNPに共通のタンパク質B'/B及びＤを認識するという
事実に起因して、総ての主要核質snRNPを沈降させる
（v.Venrooij及びSillekens,Clin.Exp.Rheum.,1989）。
前述のいずれの場合でも、患者の血清中の抗体は、sn
RNP複合体に含まれているタンパク質と反応する。核酸
は通常免疫原性が低いが、核酸に対する自己抗体の存在
は報告されている。核酸抗体の研究の多くは、抗DNA活
性に関するものであったが、抗ウイルスRNA自己抗体の
具体例も開示されている。
RNP複合体に含まれているタンパク質と反応する。核酸
は通常免疫原性が低いが、核酸に対する自己抗体の存在
は報告されている。核酸抗体の研究の多くは、抗DNA活
性に関するものであったが、抗ウイルスRNA自己抗体の
具体例も開示されている。
snRNPの（Ｕ）RNA成分に対する抗体は希であると考え
られている（Tan,1989）。Wilusz及びKeeneは1986年に
（J.Biol.Chem.,261,5467−5472）、２つの抗RNP血清中
における抗（U1）RNA自己抗体の存在を発表した。この
論文からは、抗RNP及び／又はSm活性と抗（U1）RNA活性
との間の関係について一般的な結論を導き出すことはで
きなかった。Deutscher及びKeeneは1988年（P.N.A.S.,8
5,3299−3303）、前記血清のうちの１つによって認識さ
れる（U1）RNA部分をマッピングし、該部分がRNAの第２
のステムループを含んでいたと発表した。我々は、多数
の抗snRNP血清を抗（U1）RNA抗体の存在に関して検査す
る研究に着手した。CIE（counter immuno−electropho
resis、カウンター免疫電気泳動）及びIB（immuno−blo
tting）でのスクリーニングを介して、抗snRNP活性を含
む118の血清が固定された。RNP免疫沈降の結果、60の血
清が抗（U1）RNPとして分類され、18の血清が抗Smとし
て分類された。25の血清が抗RNA抗体と抗Sm抗体とを含
んでおり、15の血清が抗（U1,U2）RNP活性を示した。
られている（Tan,1989）。Wilusz及びKeeneは1986年に
（J.Biol.Chem.,261,5467−5472）、２つの抗RNP血清中
における抗（U1）RNA自己抗体の存在を発表した。この
論文からは、抗RNP及び／又はSm活性と抗（U1）RNA活性
との間の関係について一般的な結論を導き出すことはで
きなかった。Deutscher及びKeeneは1988年（P.N.A.S.,8
5,3299−3303）、前記血清のうちの１つによって認識さ
れる（U1）RNA部分をマッピングし、該部分がRNAの第２
のステムループを含んでいたと発表した。我々は、多数
の抗snRNP血清を抗（U1）RNA抗体の存在に関して検査す
る研究に着手した。CIE（counter immuno−electropho
resis、カウンター免疫電気泳動）及びIB（immuno−blo
tting）でのスクリーニングを介して、抗snRNP活性を含
む118の血清が固定された。RNP免疫沈降の結果、60の血
清が抗（U1）RNPとして分類され、18の血清が抗Smとし
て分類された。25の血清が抗RNA抗体と抗Sm抗体とを含
んでおり、15の血清が抗（U1,U2）RNP活性を示した。
これら118の血清の総てを、脱タンパク質処理した
（Ｕ）RNAを沈降させる能力について検査した。そのた
めに、十分なプロナーゼ及びフェノール／洗剤処理によ
って精製した完全32P標識Hela細胞RNAだけでなく、invi
troで合成した（Ｕ）RNAも沈降アッセイでの抗原として
使用した。免疫沈降は、IPP/500mM NaCl、10mM Tris
pH7.5及び0.05％Nonidet P40（登録商標）中で実施
した。結果を総合すると、118の血清のうち45の血清
（約40％）が抗（U1）snRNA抗体を含んでいた。これら
の抗体は抗Sm血清中には存在していなかった。前記自己
抗体は常に（U1）snRNAと反応した。これらの自己抗体
は主にSLEオーバーラップ症候群患者の体内に存在す
る。in vitroで合成した（U1）RNA又はin vivoで標識
した完全Hela細胞RNAを用いてストリンジェント条件（5
00mM NaCl）で免疫沈降を行ったところ、抗snRNP活性
を有する約30％のSLE血清と約65％のSLEオーバーラップ
症候群血清とが（U1）RNAに対する抗体を含んでいた。
他の（Ｕ）RNAに対する自己抗体は検出されなかった。i
n vitroで合成した（U1）RNAのステムループを用いる
と、（U1）RNAの個々のステムループの総てに対する抗
体を検出することができる。しかしながら、主要抗原領
域は、（U1）RNAのいわゆる第２の（Ｂ）ステムループ
（Ｂ）及び第４の（Ｅ）ステムループドメインに存在す
る。第４のＥステムループ内のヌクレオチド配列UUCG
（150番目〜154番目）は患者の特異的抗体による認識部
位として極めて重要と思われる。
（Ｕ）RNAを沈降させる能力について検査した。そのた
めに、十分なプロナーゼ及びフェノール／洗剤処理によ
って精製した完全32P標識Hela細胞RNAだけでなく、invi
troで合成した（Ｕ）RNAも沈降アッセイでの抗原として
使用した。免疫沈降は、IPP/500mM NaCl、10mM Tris
pH7.5及び0.05％Nonidet P40（登録商標）中で実施
した。結果を総合すると、118の血清のうち45の血清
（約40％）が抗（U1）snRNA抗体を含んでいた。これら
の抗体は抗Sm血清中には存在していなかった。前記自己
抗体は常に（U1）snRNAと反応した。これらの自己抗体
は主にSLEオーバーラップ症候群患者の体内に存在す
る。in vitroで合成した（U1）RNA又はin vivoで標識
した完全Hela細胞RNAを用いてストリンジェント条件（5
00mM NaCl）で免疫沈降を行ったところ、抗snRNP活性
を有する約30％のSLE血清と約65％のSLEオーバーラップ
症候群血清とが（U1）RNAに対する抗体を含んでいた。
他の（Ｕ）RNAに対する自己抗体は検出されなかった。i
n vitroで合成した（U1）RNAのステムループを用いる
と、（U1）RNAの個々のステムループの総てに対する抗
体を検出することができる。しかしながら、主要抗原領
域は、（U1）RNAのいわゆる第２の（Ｂ）ステムループ
（Ｂ）及び第４の（Ｅ）ステムループドメインに存在す
る。第４のＥステムループ内のヌクレオチド配列UUCG
（150番目〜154番目）は患者の特異的抗体による認識部
位として極めて重要と思われる。
このような、抗（U1）RNA抗体濃度と自己免疫疾患の
活動度との関連は極めて驚愕的なものであった。
活動度との関連は極めて驚愕的なものであった。
本発明では、検査液中の抗RNA抗体の検出を、前記検
査液にRNAを接触させて該RNAと検査液中の抗RNA抗体と
の間に反応を生起させることにより実施することができ
る。その後、RNAと反応する抗体を決定すれば、疾患の
重度を明らかにし、且つその変化を予測することができ
る。
査液にRNAを接触させて該RNAと検査液中の抗RNA抗体と
の間に反応を生起させることにより実施することができ
る。その後、RNAと反応する抗体を決定すれば、疾患の
重度を明らかにし、且つその変化を予測することができ
る。
RNAと反応する抗体の決定は、U1RNAと反応する抗体の
数の定量的決定であるのが好ましい。この決定は、疾患
の重度の変化を明らかにするからである。
数の定量的決定であるのが好ましい。この決定は、疾患
の重度の変化を明らかにするからである。
本発明の方法は、自己免疫疾患SLE又はSLEオーバーラ
ップ症候群の患者の血清中で抗（U1）RNA抗体を検出す
るのに使用できる。
ップ症候群の患者の血清中で抗（U1）RNA抗体を検出す
るのに使用できる。
本発明の方法を実施する場合、使用するRNAは、例え
ば放射性同位体又はビオチンで標識した標識RNAである
のが好ましい。しかしながら、微量滴定皿の内壁のよう
な固相に結合したRNAも本発明の方法の実施に使用し得
る。
ば放射性同位体又はビオチンで標識した標識RNAである
のが好ましい。しかしながら、微量滴定皿の内壁のよう
な固相に結合したRNAも本発明の方法の実施に使用し得
る。
本発明は、本発明の方法を実施するためのテストキッ
トにも関する。
トにも関する。
ここで本発明をより詳細に説明する。以下に述べるよ
うな高速の定量的ドットブロット結合アッセイ（dot−b
lot binding assay）を使用して、疾患の活動度と抗
（U1）RNA抗体の濃度との関連を立証し、第１図に示し
た。第１図のグラフから明らかなように、抗（U1）RNA
活性は、活動的な疾患を有する患者に主として見られ
る。典型的なドットブロット結合アッセイは下記のよう
に実施し得る。T7ポリメラーゼ及び（U1）cDNAを用いて
in vitroで標識（U1）RNA転写体を形成する。RNAの標
識は様々な方法で実施できる（放射性標識、ビオチン
等）。該標識RNAを特定の条件下で、且つ緩衝液中で、
希釈した患者の検査液（血清、血漿等）と共にインキュ
ベートする。患者の抗体は（U1）RNAに結合することが
できる。平衡に達した後（１時間後）、例えばウェル数
96のSchleicher及びSchullのマニホルドを用いて、前記
混合物をドットブロット装置でニトロセルロースシート
に吸収させる。テスト条件下では、単独のRNAはNCシー
トに結合しないが、RNA−抗体複合体は結合する。NCシ
ートを洗浄し、乾燥して、抗体を介してNCに結合した標
識RNAの検出を定性的且つ定量的に実施することができ
る。検査液に接触させる（U1）RNAは、抗体の濃度と結
合（U1）RNAの量との間に直線的な相関が得られるよう
に過剰に存在させることが極めて重要である。本発明の
方法は、（U1）RNAの個々のドメイン又はエピトープ領
域を用いて実施することもできる。これは重要なことで
ある。なぜなら、血清によっては、疾患の重度が、単一
のエトープ領域だけに対する１種類の抗体との間にしか
関連性をもち得ないからである。３年間の先を見越した
研究で、疾患の活動度指数（activity index）と（U
1）RNAに対する抗体活性のレベルとを測定した。驚くべ
きことに、疾患の悪化は主に抗（U1）RNA力価の増加に
関連している。これは現在、３年以上にわたって追跡し
てきた10人以上の患者について判明している。驚いたこ
とに、これらの疾患では、疾患の活動度とRNP−タンパ
ク質（70K及びＡ）に対する抗体の濃度との間の関連は
認められなかった。本発明の方法で抗（U1）RNA活性の
レベルを測定することにより、疾患の活動度のモニター
と、疾患の評価にとって極めて重要である疾患の悪化の
予測とが初めて可能となったのである。
うな高速の定量的ドットブロット結合アッセイ（dot−b
lot binding assay）を使用して、疾患の活動度と抗
（U1）RNA抗体の濃度との関連を立証し、第１図に示し
た。第１図のグラフから明らかなように、抗（U1）RNA
活性は、活動的な疾患を有する患者に主として見られ
る。典型的なドットブロット結合アッセイは下記のよう
に実施し得る。T7ポリメラーゼ及び（U1）cDNAを用いて
in vitroで標識（U1）RNA転写体を形成する。RNAの標
識は様々な方法で実施できる（放射性標識、ビオチン
等）。該標識RNAを特定の条件下で、且つ緩衝液中で、
希釈した患者の検査液（血清、血漿等）と共にインキュ
ベートする。患者の抗体は（U1）RNAに結合することが
できる。平衡に達した後（１時間後）、例えばウェル数
96のSchleicher及びSchullのマニホルドを用いて、前記
混合物をドットブロット装置でニトロセルロースシート
に吸収させる。テスト条件下では、単独のRNAはNCシー
トに結合しないが、RNA−抗体複合体は結合する。NCシ
ートを洗浄し、乾燥して、抗体を介してNCに結合した標
識RNAの検出を定性的且つ定量的に実施することができ
る。検査液に接触させる（U1）RNAは、抗体の濃度と結
合（U1）RNAの量との間に直線的な相関が得られるよう
に過剰に存在させることが極めて重要である。本発明の
方法は、（U1）RNAの個々のドメイン又はエピトープ領
域を用いて実施することもできる。これは重要なことで
ある。なぜなら、血清によっては、疾患の重度が、単一
のエトープ領域だけに対する１種類の抗体との間にしか
関連性をもち得ないからである。３年間の先を見越した
研究で、疾患の活動度指数（activity index）と（U
1）RNAに対する抗体活性のレベルとを測定した。驚くべ
きことに、疾患の悪化は主に抗（U1）RNA力価の増加に
関連している。これは現在、３年以上にわたって追跡し
てきた10人以上の患者について判明している。驚いたこ
とに、これらの疾患では、疾患の活動度とRNP−タンパ
ク質（70K及びＡ）に対する抗体の濃度との間の関連は
認められなかった。本発明の方法で抗（U1）RNA活性の
レベルを測定することにより、疾患の活動度のモニター
と、疾患の評価にとって極めて重要である疾患の悪化の
予測とが初めて可能となったのである。
本発明の方法を使用すれば、医者は患者の病状が悪化
することをある程度まで予測できる。このような予測が
できれば、医者は的確な時点で、患者の病状を改善する
か又は疾患の悪化を防止する薬を処方することができ
る。
することをある程度まで予測できる。このような予測が
できれば、医者は的確な時点で、患者の病状を改善する
か又は疾患の悪化を防止する薬を処方することができ
る。
本発明の方法は、固相に結合したRNAを用いて実施す
ることもできる。このような場合には、前記RNAを結合
した微量滴定皿の小ウェルの壁がしばしば使用されてき
た。検査すべき検査液を微量滴定皿の小ウェル内に導入
する。結合RNAは、抗体、特にSLE又はMCTD症候群患者の
血清中に存在する抗（U1）RNA抗体と反応することがで
き、その結果前記抗（U1）RNA抗体が結合する。免疫化
学反応が生起したか否かを検出するためには、次いで、
例えば、決定すべき自己抗体に対するマーカー付抗体を
使用し得る。該マーカー付抗体は、既に固相上に形成さ
れたRNA−自己抗体複合体と反応する。該マーカー付抗
体は、酵素、好ましくはペルオキシダーゼ酵素が結合す
る抗体からなる。次のステップで、無色の溶液（基質＋
色原体）を加える。酵素は前記溶液を着色化合物に変換
させることができる。
ることもできる。このような場合には、前記RNAを結合
した微量滴定皿の小ウェルの壁がしばしば使用されてき
た。検査すべき検査液を微量滴定皿の小ウェル内に導入
する。結合RNAは、抗体、特にSLE又はMCTD症候群患者の
血清中に存在する抗（U1）RNA抗体と反応することがで
き、その結果前記抗（U1）RNA抗体が結合する。免疫化
学反応が生起したか否かを検出するためには、次いで、
例えば、決定すべき自己抗体に対するマーカー付抗体を
使用し得る。該マーカー付抗体は、既に固相上に形成さ
れたRNA−自己抗体複合体と反応する。該マーカー付抗
体は、酵素、好ましくはペルオキシダーゼ酵素が結合す
る抗体からなる。次のステップで、無色の溶液（基質＋
色原体）を加える。酵素は前記溶液を着色化合物に変換
させることができる。
色の強さは、結合した自己抗体の量に比例する酵素の
量に依存する。前記色は、停止試薬（stop reagent）
の添加によって変えることができる。
量に依存する。前記色は、停止試薬（stop reagent）
の添加によって変えることができる。
検査液中の自己抗体を決定するための前述の方法はサ
ンドイッチ型の方法である。別の免疫化学的方法、例え
ば凝集、阻害もしくは競合反応を使用することもでき
る。適当な酵素としては、特に、アルカリ性ホスファタ
ーゼ、ウレアーゼ及び既述のペルオキシダーゼ、好まし
くはホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）を使
用し得る。
ンドイッチ型の方法である。別の免疫化学的方法、例え
ば凝集、阻害もしくは競合反応を使用することもでき
る。適当な酵素としては、特に、アルカリ性ホスファタ
ーゼ、ウレアーゼ及び既述のペルオキシダーゼ、好まし
くはホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）を使
用し得る。
固相としては、前述の微量滴定皿の小ウェルの壁の代
わりに、管もしくは毛管、メンブラン、フィルター、テ
ストストリップ、粒子の表面、例えばラテックス粒子、
赤血球、染料ゾル、金属ゾル又はゾル粒子状の金属化合
物の表面を使用し得る。
わりに、管もしくは毛管、メンブラン、フィルター、テ
ストストリップ、粒子の表面、例えばラテックス粒子、
赤血球、染料ゾル、金属ゾル又はゾル粒子状の金属化合
物の表面を使用し得る。
標識物質としては、マーカーとしての前述の酵素に代
えて、特に放射性同位体、蛍光化合物、染料ゾル、金属
ゾル又はゾル粒子状の金属化合物を使用し得る。
えて、特に放射性同位体、蛍光化合物、染料ゾル、金属
ゾル又はゾル粒子状の金属化合物を使用し得る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒ ｓ，Ｖｏｌ．６，ｐ．33−38（1983) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/53 - 33/579
Claims (11)
- 【請求項１】（U1）RNAを自己免疫疾患の患者由来の検
査液と接触させて、該（U1）RNAと該検査液中に存在す
る抗体との間で形成される免疫複合体を検出することに
より、結合組織自己免疫疾患の活動度をモニターする方
法。 - 【請求項２】上記RNAと反応する抗体の決定が、該RNAと
反応する抗体の数の定量的決定であることを特徴とする
請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】抗RNA抗体が抗（U1）RNA反応性抗体である
ことを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。 - 【請求項４】抗（U1）RNA反応性抗体が、（U1）RNAのＢ
ステムループドメインを含むRNAに対して反応性を示す
ことを特徴とする請求項３に記載の方法。 - 【請求項５】抗（U1）RNA反応性抗体が、（U1）RNAのＥ
ステムループドメインを含むRNAに対して反応性を示す
ことを特徴とする請求項３に記載の方法。 - 【請求項６】（U1）RNAが核酸配列UUCGを含むことを特
徴とする請求項１又は２に記載の方法。 - 【請求項７】（U1）RNAが修飾又は標識されたRNAである
ことを特徴とする請求項１から６のいずれか一項に記載
の方法。 - 【請求項８】（U1）RNAが固相に結合していることを特
徴とする請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項９】検査液が血清、血漿又は血液であることを
特徴とする請求項１から８のいずれか一項に記載の方
法。 - 【請求項１０】検査液が、SLE又はSLEオーバーラップ症
候群の患者に由来する血清、血漿又は血液であることを
特徴とする請求項９に記載の方法。 - 【請求項１１】請求項１に記載の方法を実施するための
テストキットであって、該キットは、（U1）RNA及び（U
1）RNAと上記検査液中に存在する抗体との間で形成され
る免疫複合体を検出する手段を含むことを特徴とする、
前記キット。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT91200121.1 | 1991-01-22 | ||
| EP91200121 | 1991-01-22 | ||
| PCT/EP1992/000106 WO1992013276A1 (en) | 1991-01-22 | 1992-01-16 | Method for detection of anti-rna-antibodies |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06504620A JPH06504620A (ja) | 1994-05-26 |
| JP3288041B2 true JP3288041B2 (ja) | 2002-06-04 |
Family
ID=8207502
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP50249592A Expired - Fee Related JP3288041B2 (ja) | 1991-01-22 | 1992-01-16 | 抗ｒｎａ抗体の検出方法 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5385824A (ja) |
| EP (1) | EP0568554B1 (ja) |
| JP (1) | JP3288041B2 (ja) |
| KR (1) | KR100244799B1 (ja) |
| AT (1) | ATE126599T1 (ja) |
| AU (1) | AU658860B2 (ja) |
| CA (1) | CA2101166C (ja) |
| DE (1) | DE69204157T2 (ja) |
| DK (1) | DK0568554T3 (ja) |
| ES (1) | ES2078733T3 (ja) |
| FI (1) | FI107359B (ja) |
| GR (1) | GR3017975T3 (ja) |
| IE (1) | IE66750B1 (ja) |
| WO (1) | WO1992013276A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA92389B (ja) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5576186A (en) * | 1994-09-01 | 1996-11-19 | The University Of Kansas | Diagnosis and monitoring of rheumatological diseases by detection of anti-EF1-α antibodies |
| ATE332368T1 (de) * | 1997-01-21 | 2006-07-15 | Gen Hospital Corp | Selektion von proteinen mittels rns-protein fusionen |
| CA2426540A1 (en) * | 2000-10-20 | 2002-07-25 | Biocardia, Inc. | Leukocyte expression profiling |
| US6905827B2 (en) * | 2001-06-08 | 2005-06-14 | Expression Diagnostics, Inc. | Methods and compositions for diagnosing or monitoring auto immune and chronic inflammatory diseases |
| US7026121B1 (en) * | 2001-06-08 | 2006-04-11 | Expression Diagnostics, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection |
| US7235358B2 (en) | 2001-06-08 | 2007-06-26 | Expression Diagnostics, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection |
| US7892745B2 (en) * | 2003-04-24 | 2011-02-22 | Xdx, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection |
| US7645575B2 (en) * | 2004-09-08 | 2010-01-12 | Xdx, Inc. | Genes useful for diagnosing and monitoring inflammation related disorders |
| EP1885889A4 (en) * | 2005-05-11 | 2010-01-20 | Expression Diagnostics Inc | METHOD FOR MONITORING THE OPERATING STATUS OF TRANSPLANTS OVER GENLISTS |
| AU2007309726A1 (en) * | 2006-04-07 | 2008-05-02 | Xdx, Inc. | Steroid responsive nucleic acid expression and prediction of disease activity |
| US7993832B2 (en) * | 2006-08-14 | 2011-08-09 | Xdx, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring the status of transplant rejection and immune disorders |
| US8148067B2 (en) * | 2006-11-09 | 2012-04-03 | Xdx, Inc. | Methods for diagnosing and monitoring the status of systemic lupus erythematosus |
| WO2012068107A2 (en) * | 2010-11-17 | 2012-05-24 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Autoantibody to rna-protein complex detected by quantitative pcr |
| EP3134732A2 (en) * | 2014-04-24 | 2017-03-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for detecting anti-drug antibodies |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4784942A (en) * | 1984-11-05 | 1988-11-15 | The Board Of Regents For The University Of Oklahoma | Monoclonal antibodies against autoimmune RNA proteins |
| WO1990010229A1 (en) * | 1989-02-27 | 1990-09-07 | Biostar Medical Products, Inc. | Method and diagnostic test kit for detection of autoimmune antibody |
-
1992
- 1992-01-16 CA CA002101166A patent/CA2101166C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-16 IE IE920132A patent/IE66750B1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-01-16 ES ES92902145T patent/ES2078733T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-16 DK DK92902145.9T patent/DK0568554T3/da active
- 1992-01-16 US US08/090,147 patent/US5385824A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-16 JP JP50249592A patent/JP3288041B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-01-16 KR KR1019930702203A patent/KR100244799B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1992-01-16 DE DE69204157T patent/DE69204157T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-16 AT AT92902145T patent/ATE126599T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-01-16 EP EP92902145A patent/EP0568554B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-16 AU AU11615/92A patent/AU658860B2/en not_active Ceased
- 1992-01-16 WO PCT/EP1992/000106 patent/WO1992013276A1/en not_active Ceased
- 1992-01-20 ZA ZA92389A patent/ZA92389B/xx unknown
-
1993
- 1993-07-21 FI FI933291A patent/FI107359B/fi not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-11-07 GR GR950403085T patent/GR3017975T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．６，ｐ．３３−３８（１９８３） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI933291L (fi) | 1993-08-18 |
| IE66750B1 (en) | 1996-02-07 |
| AU658860B2 (en) | 1995-05-04 |
| IE920132A1 (en) | 1992-07-29 |
| EP0568554A1 (en) | 1993-11-10 |
| DE69204157D1 (de) | 1995-09-21 |
| GR3017975T3 (en) | 1996-02-29 |
| WO1992013276A1 (en) | 1992-08-06 |
| DE69204157T2 (de) | 1996-03-21 |
| CA2101166A1 (en) | 1992-07-23 |
| US5385824A (en) | 1995-01-31 |
| KR100244799B1 (ko) | 2000-03-02 |
| ES2078733T3 (es) | 1995-12-16 |
| KR930703612A (ko) | 1993-11-30 |
| CA2101166C (en) | 2003-05-20 |
| JPH06504620A (ja) | 1994-05-26 |
| ZA92389B (en) | 1992-09-30 |
| ATE126599T1 (de) | 1995-09-15 |
| FI107359B (fi) | 2001-07-13 |
| DK0568554T3 (da) | 1995-12-04 |
| FI933291A0 (fi) | 1993-07-21 |
| AU1161592A (en) | 1992-08-27 |
| EP0568554B1 (en) | 1995-08-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3786970B2 (ja) | オリゴヌクレオチド抗体複合体による抗原の検出 | |
| JP3288041B2 (ja) | 抗ｒｎａ抗体の検出方法 | |
| EP0019620B1 (en) | Insolubilized methylated albumin conjugates for autoimmune disease fluoroimmunoassays | |
| JP2001504586A (ja) | イムノｒｎａにより蛋白質を検出する方法 | |
| Pisetsky et al. | A simple enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies to native DNA | |
| JPH03229153A (ja) | リュウマチ病の診断に有用な特異的抗体または抗原の存在を検出する方法およびそれに用いられるテストキット | |
| WO2001042793A2 (en) | Diagnostic assay for stroke | |
| JPH1078435A (ja) | 被検物質の免疫化学的測定における感度の上昇 | |
| US5783453A (en) | Non-separation specific binding chemiluminescent assay | |
| JP3558645B2 (ja) | 甲状腺自己免疫疾患の臨床診断薬としてのポリクローナルヒト抗−ｈＴｇ自己抗体の使用及び患者血清中での抗−ｈＴｇ自己抗体の検出用添加薬 | |
| FI100276B (fi) | Menetelmä analyyttien ei-kilpailevaa määritystä varten | |
| EP0460097A1 (en) | Method and diagnostic test kit for detection of anti-cardiolipin | |
| US4251514A (en) | Insolubilized deoxyribonucleic acid (DNA) | |
| US5183735A (en) | Method and diagnostic test kit for detection of anti-dsDNA antibodies | |
| EP0460102A1 (en) | Method and diagnostic test kit for detection of autoimmune antibody | |
| US4254097A (en) | Method of detecting antibodies to human thyroglobulin | |
| Robitaille et al. | Antinuclear antibodies and nuclear antigens in rheumatoid synovial fluids | |
| Moncé et al. | A comparison of two fixatives on IFA HEp-2 slides for the detection of antinuclear antibodies | |
| Heinzerling et al. | Significance of levels of specific immunoglobulins to DNA in SLE patients' sera detected by solid phase radioimmunoassay | |
| JP2509840B2 (ja) | 免疫測定法及び免疫測定用試薬キット | |
| Will et al. | Reaction of human auto-antibodies with antigens of polytene chromosomes of Drosophila | |
| Ali et al. | Anti-DNA antibodies in autoimmune disorders by ELISA using nylon as the solid phase | |
| JPH04286957A (ja) | 遺伝子検出方法 | |
| Heinzerling et al. | Elevated levels of antibodies to polyuridylic acid detected and quantitated in systemic scleroderma patients by solid phase radioimmunoassay | |
| JPH0228558A (ja) | 超高感度特異的抗体の測定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080315 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090315 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100315 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110315 Year of fee payment: 9 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |