JP3018186B1 - 抗炎症剤、単球系細胞の増殖抑制剤 - Google Patents
抗炎症剤、単球系細胞の増殖抑制剤Info
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Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
【要約】
【課題】 有効性が高く、かつ安全な抗炎症剤を開発す
る。 【解決手段】 本発明において、ヒトアディポネクチン
が単球及びＢ細胞に対して増殖抑制作用を有している事
が示された。そのような作用を有するヒトアディポネク
チンは、単球及びＢ細胞の増殖抑制剤としてのみなら
ず、抗炎症剤としても有効である。
る。 【解決手段】 本発明において、ヒトアディポネクチン
が単球及びＢ細胞に対して増殖抑制作用を有している事
が示された。そのような作用を有するヒトアディポネク
チンは、単球及びＢ細胞の増殖抑制剤としてのみなら
ず、抗炎症剤としても有効である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトアディポネク
チンの単球増殖抑制作用を利用した、新規抗炎症剤に関
する。
チンの単球増殖抑制作用を利用した、新規抗炎症剤に関
する。
【０００２】
【従来の技術】炎症反応は、組織が感染したり傷ついた
りした時に起こる生体防御反応である。炎症時には微小
血管の拡張と穿孔、血液成分の漏出及び白血球が患部の
炎症組織に遊走する等の現象が起こり、その際に種々の
ケミカルメディエーターが関与する。上述した現象は感
染に対抗するために起こる反応であり、生体防御のため
に作用する。そのような炎症反応は重要な生理的反応で
あるが、過度の炎症反応は生体に多大な障害をもたら
す。そのため、種々の抗炎症剤がこれまでに開発されて
きた。
りした時に起こる生体防御反応である。炎症時には微小
血管の拡張と穿孔、血液成分の漏出及び白血球が患部の
炎症組織に遊走する等の現象が起こり、その際に種々の
ケミカルメディエーターが関与する。上述した現象は感
染に対抗するために起こる反応であり、生体防御のため
に作用する。そのような炎症反応は重要な生理的反応で
あるが、過度の炎症反応は生体に多大な障害をもたら
す。そのため、種々の抗炎症剤がこれまでに開発されて
きた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】現在使用されている抗
炎症剤を大別すると、非ステロイド系抗炎症剤と、糖質
コルチコイドであるステロイド系抗炎症剤がある。これ
らの抗炎症剤は、その作用機序が異なっており、非ステ
ロイド系のアスピリン、フェニルブタゾン、インドメタ
シン等は、シクロオキシゲナーゼの活性抑制によるプロ
スタグランジンの生合成阻害により作用する。これら、
非ステロイド系の抗炎症剤は、鎮痛及び解熱作用も併せ
持つという特徴を有する。非ステロイド系の抗炎症剤
は、安全性が高いために汎用されているが、その抗炎症
作用は必ずしも強力ではない。一方、ステロイド系抗炎
症剤は細胞質中の受容体と結合して核内に取り込まれて
特定の遺伝子を活性化して、リポコルチンの生合成を誘
導する。リポコルチンには、ホスホリパーゼＡ2 の抑制
に伴うシクロオキシゲナーゼ系の経路の抑制作用、ロイ
コトリエンＢ4 の抑制に伴うリポキシゲナーゼ系の経路
の抑制作用等、種々のケミカルメディエーターの抑制に
より抗炎症作用が発現する事が知られている。ステロイ
ド系抗炎症剤は炎症に対して顕著な抑制作用を示し、自
己免疫疾患等にも有効であるが、その強い副作用が問題
となっている。そこで、作用が強力であり、かつ安全性
の高い抗炎症剤の開発が求められている。
炎症剤を大別すると、非ステロイド系抗炎症剤と、糖質
コルチコイドであるステロイド系抗炎症剤がある。これ
らの抗炎症剤は、その作用機序が異なっており、非ステ
ロイド系のアスピリン、フェニルブタゾン、インドメタ
シン等は、シクロオキシゲナーゼの活性抑制によるプロ
スタグランジンの生合成阻害により作用する。これら、
非ステロイド系の抗炎症剤は、鎮痛及び解熱作用も併せ
持つという特徴を有する。非ステロイド系の抗炎症剤
は、安全性が高いために汎用されているが、その抗炎症
作用は必ずしも強力ではない。一方、ステロイド系抗炎
症剤は細胞質中の受容体と結合して核内に取り込まれて
特定の遺伝子を活性化して、リポコルチンの生合成を誘
導する。リポコルチンには、ホスホリパーゼＡ2 の抑制
に伴うシクロオキシゲナーゼ系の経路の抑制作用、ロイ
コトリエンＢ4 の抑制に伴うリポキシゲナーゼ系の経路
の抑制作用等、種々のケミカルメディエーターの抑制に
より抗炎症作用が発現する事が知られている。ステロイ
ド系抗炎症剤は炎症に対して顕著な抑制作用を示し、自
己免疫疾患等にも有効であるが、その強い副作用が問題
となっている。そこで、作用が強力であり、かつ安全性
の高い抗炎症剤の開発が求められている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】ところで、本発明に係る
ヒトアディポネクチンはヒト脂肪組織特異的なコラーゲ
ン様因子である。その遺伝子は発明者らによって単離さ
れており、（参考文献：Kazuhisa Maeda et.al.Bioche
m.Biophys.Res.Communication 221,pp286-289,1996
）、２４４のアミノ酸より構成されるタンパク質であ
る事が知られている。ヒトアディポネクチンタンパク質
のアミノ酸配列を、図１に示す。ヒトアディポネクチン
の生理作用を検討する中で発明者らは、ヒトアディポネ
クチンが単球系の細胞及びＢ細胞系の細胞の増殖を抑制
する現象を見出し、それら血球系細胞の増殖抑制剤とし
て有効である事を示した。上述したように、炎症時には
単球、マクロファージ、好中球等の白血球系細胞が増殖
し、かつ集積する現象が見られる。アディポネクチンに
より増殖が抑制される単球は、そのような細胞性の生体
防御反応において重要な役割を担っている細胞であり、
成熟すると貪食を担うマクロファージとなり、一方では
インターロイキンー１やチューマーネクローシスファク
ターアルファなどの炎症性サイトカインを産生する。炎
症反応の過程おいて、単球はそのように重要性な働きを
しており、アディポネクチンは単球の増殖を抑制して集
積を防ぐ事により、抗炎症剤として用いる事ができる。
ヒトアディポネクチンはヒト脂肪組織特異的なコラーゲ
ン様因子である。その遺伝子は発明者らによって単離さ
れており、（参考文献：Kazuhisa Maeda et.al.Bioche
m.Biophys.Res.Communication 221,pp286-289,1996
）、２４４のアミノ酸より構成されるタンパク質であ
る事が知られている。ヒトアディポネクチンタンパク質
のアミノ酸配列を、図１に示す。ヒトアディポネクチン
の生理作用を検討する中で発明者らは、ヒトアディポネ
クチンが単球系の細胞及びＢ細胞系の細胞の増殖を抑制
する現象を見出し、それら血球系細胞の増殖抑制剤とし
て有効である事を示した。上述したように、炎症時には
単球、マクロファージ、好中球等の白血球系細胞が増殖
し、かつ集積する現象が見られる。アディポネクチンに
より増殖が抑制される単球は、そのような細胞性の生体
防御反応において重要な役割を担っている細胞であり、
成熟すると貪食を担うマクロファージとなり、一方では
インターロイキンー１やチューマーネクローシスファク
ターアルファなどの炎症性サイトカインを産生する。炎
症反応の過程おいて、単球はそのように重要性な働きを
しており、アディポネクチンは単球の増殖を抑制して集
積を防ぐ事により、抗炎症剤として用いる事ができる。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明に係るヒトアディポネクチ
ンは、種々の形態の製剤として用いる事ができる。ヒト
アディポネクチンはポリペプチドであるため、投与経路
としては、非経口投与が好ましい。ヒトアディポネクチ
ンの投与量は投与方法、患者の症状、年齢等により異な
るが、通常１回０．１−５００μｇ／ｍｌ、好ましくは
１〜５０μｇ／ｍｌを一日当たり１〜３回である。本発
明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調製した製
剤の形で投与される。製剤用担体としては、製剤分野に
おいて常用され、かつ本発明のヒトアディポネクチンと
反応しない物質が用いられる。
ンは、種々の形態の製剤として用いる事ができる。ヒト
アディポネクチンはポリペプチドであるため、投与経路
としては、非経口投与が好ましい。ヒトアディポネクチ
ンの投与量は投与方法、患者の症状、年齢等により異な
るが、通常１回０．１−５００μｇ／ｍｌ、好ましくは
１〜５０μｇ／ｍｌを一日当たり１〜３回である。本発
明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調製した製
剤の形で投与される。製剤用担体としては、製剤分野に
おいて常用され、かつ本発明のヒトアディポネクチンと
反応しない物質が用いられる。
【０００６】剤型としては、注射剤、懸濁剤、座剤、軟
膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤等が挙げられ
る。これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体
製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解ま
たは懸濁する形であってもよい。注射剤の場合には、ヒ
トアディポネクチンを適当な溶媒に溶解させて調製され
るが、緩衝剤や保存剤を添加してもよい。これらの製剤
は、ヒトアディポネクチンを０．１μｇ／ｍｌ以上、好
ましくは１〜５０μｇ／ｍｌの割合で含有することがで
きる。これらの製剤はまた、治療上価値のある他の成分
を含有していてもよい。
膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤等が挙げられ
る。これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体
製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解ま
たは懸濁する形であってもよい。注射剤の場合には、ヒ
トアディポネクチンを適当な溶媒に溶解させて調製され
るが、緩衝剤や保存剤を添加してもよい。これらの製剤
は、ヒトアディポネクチンを０．１μｇ／ｍｌ以上、好
ましくは１〜５０μｇ／ｍｌの割合で含有することがで
きる。これらの製剤はまた、治療上価値のある他の成分
を含有していてもよい。
【０００７】
【実施例】（コロニー形成能に対するヒトアディポネク
チンの作用）細胞の増殖に必要なコロニー形成に対し
て、アディポネクチンが及ぼす効果を検討した。インフ
ォームドコンセントが得られた健常成人の腸骨から骨髄
細胞を採取して、比重遠心法（リンフォプレップ：ニコ
メッド、オスロ、ノルウェイ）にて単核球を分離した。
得られた骨髄単核球をＲＰＭＩ−１６４０培地で２回洗
浄した後、（１）培地のみ （２）１０μｇ／ｍｌのヒ
トアディポネクチン （３）対照として用いた１０μｇ
／ｍｌのヒト血清アルブミン を含む無血清メチルセル
ロース培地において５×１０4 ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度
で培養して、１４−１６日後に各種造血前駆細胞のコロ
ニー数を、倒立顕微鏡下で測定した。尚、使用した無血
清メチルセルロース培地の組成は、ＩＭＤＭ、メチルセ
ルロース（０．９％）、２−メルカプトエタノール（１
０-4Ｍ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、１％の結晶化ウ
シ血清アルブミン（１％）、ヒトトランスフェリン、ウ
シインシュリン、ｒｈ エリスロポエチン（３Ｕ／ｍ
ｌ）、ｒｈ ＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ｒｈ ＧＭ−
ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）、ｒｈ Ｇ−ＣＳＦ（１０ｎ
ｇ／ｍｌ）、ｒｈ ＩＬ−３（１０ｎｇ／ｍｌ）及びｒ
ｈ ＩＬ−６（１０ｎｇ／ｍｌ）（ベリタス）より成
る。測定は３点で行い、統計的有意差はスチューデント
のｔテストにて検定した。測定した各種造血前駆細胞の
略称は、以下の通りである。 （１）ＣＦＵ−ＧＭ：ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃ
ｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎ
ｉｔｓ（顆粒球−マクロファージコロニー形成細胞であ
り顆粒球、マクロファージ系である） （２）ＣＦＵ−Ｍ：ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎ
ｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔｓ（巨核球コロニー形成
細胞であり巨核球、血小板系である） （３）ＢＦＵ−Ｅ：ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｂｕｒｓｔ
ｃｏｌｏｎｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔｓ（赤芽球コ
ロニー群形成細胞であり、赤芽球系である） （４）ＣＦＵ−Ｍｉｘ：ｍｉｘｅｄ ｅｒｙｔｈｒｏｉ
ｄ−ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｏｌｏｎｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ
ｕｎｉｔｓ（混合コロニー形成細胞である）
チンの作用）細胞の増殖に必要なコロニー形成に対し
て、アディポネクチンが及ぼす効果を検討した。インフ
ォームドコンセントが得られた健常成人の腸骨から骨髄
細胞を採取して、比重遠心法（リンフォプレップ：ニコ
メッド、オスロ、ノルウェイ）にて単核球を分離した。
得られた骨髄単核球をＲＰＭＩ−１６４０培地で２回洗
浄した後、（１）培地のみ （２）１０μｇ／ｍｌのヒ
トアディポネクチン （３）対照として用いた１０μｇ
／ｍｌのヒト血清アルブミン を含む無血清メチルセル
ロース培地において５×１０4 ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度
で培養して、１４−１６日後に各種造血前駆細胞のコロ
ニー数を、倒立顕微鏡下で測定した。尚、使用した無血
清メチルセルロース培地の組成は、ＩＭＤＭ、メチルセ
ルロース（０．９％）、２−メルカプトエタノール（１
０-4Ｍ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、１％の結晶化ウ
シ血清アルブミン（１％）、ヒトトランスフェリン、ウ
シインシュリン、ｒｈ エリスロポエチン（３Ｕ／ｍ
ｌ）、ｒｈ ＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ｒｈ ＧＭ−
ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）、ｒｈ Ｇ−ＣＳＦ（１０ｎ
ｇ／ｍｌ）、ｒｈ ＩＬ−３（１０ｎｇ／ｍｌ）及びｒ
ｈ ＩＬ−６（１０ｎｇ／ｍｌ）（ベリタス）より成
る。測定は３点で行い、統計的有意差はスチューデント
のｔテストにて検定した。測定した各種造血前駆細胞の
略称は、以下の通りである。 （１）ＣＦＵ−ＧＭ：ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃ
ｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎ
ｉｔｓ（顆粒球−マクロファージコロニー形成細胞であ
り顆粒球、マクロファージ系である） （２）ＣＦＵ−Ｍ：ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎ
ｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔｓ（巨核球コロニー形成
細胞であり巨核球、血小板系である） （３）ＢＦＵ−Ｅ：ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｂｕｒｓｔ
ｃｏｌｏｎｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔｓ（赤芽球コ
ロニー群形成細胞であり、赤芽球系である） （４）ＣＦＵ−Ｍｉｘ：ｍｉｘｅｄ ｅｒｙｔｈｒｏｉ
ｄ−ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｏｌｏｎｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ
ｕｎｉｔｓ（混合コロニー形成細胞である）
【０００８】その結果、ヒトアディポネクチンは１０μ
ｇ／ｍｌの濃度でヒト正常骨髄単核球中のＣＦＵ−ＧＭ
（図２）及びＣＦＵ−Ｍ（図３）の生育を約５０％抑制
した。一方、ＢＦＵ−Ｅ（図４）及びＣＦＵ−Ｍｉｘ
（図５）に対しては抑制作用を認めなかった。
ｇ／ｍｌの濃度でヒト正常骨髄単核球中のＣＦＵ−ＧＭ
（図２）及びＣＦＵ−Ｍ（図３）の生育を約５０％抑制
した。一方、ＢＦＵ−Ｅ（図４）及びＣＦＵ−Ｍｉｘ
（図５）に対しては抑制作用を認めなかった。
【０００９】更に、骨髄単核球から、造血前駆細胞のマ
ーカーである、ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅ
ｎｔｉａｔｉｏｎ（ＣＤ）３４の発現を指標に、磁気ビ
ーズ（ミルテニィーバイオテック）を用いてＣＤ３４陽
性細胞を分離して、５００ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度で無
血清メチルセルロース培地にて培養した。上記と同様
に、無血清メチルセルロース培地に（１）培地のみ
（２）ヒトアディポネクチン１０μｇ／ｍｌ （３）ヒ
ト血清アルブミン１０μｇ／ｍｌ を添加した３つの条
件下で培養して、造血前駆細胞のコロニー形成を検討し
た。ＣＤ３４陽性細胞の分離は、骨髄単核球から抗ヒト
ＣＤ３抗体及び抗ヒトＣＤ１１抗体を結合させた免疫磁
気ビーズを用いてＣＤ３、ＣＤ１１ｂ陽性細胞を除去し
た後、抗ヒトＣＤ３４抗体結合ビーズを用いて、ＣＤ３
４陽性細胞をソーティングする方法で行った（参考文
献：Takafumi Yokota et.al.Blood 91,pp3263-3272,199
8 ）。ＣＤ３４で精製した後に、培養１４ー１６日目
に、各種造血前駆細胞のコロニー数を倒立顕微鏡下でカ
ウントした。測定は３点で行い、統計的有意差はスチュ
ーデントのｔテストにて検定した。
ーカーである、ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅ
ｎｔｉａｔｉｏｎ（ＣＤ）３４の発現を指標に、磁気ビ
ーズ（ミルテニィーバイオテック）を用いてＣＤ３４陽
性細胞を分離して、５００ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度で無
血清メチルセルロース培地にて培養した。上記と同様
に、無血清メチルセルロース培地に（１）培地のみ
（２）ヒトアディポネクチン１０μｇ／ｍｌ （３）ヒ
ト血清アルブミン１０μｇ／ｍｌ を添加した３つの条
件下で培養して、造血前駆細胞のコロニー形成を検討し
た。ＣＤ３４陽性細胞の分離は、骨髄単核球から抗ヒト
ＣＤ３抗体及び抗ヒトＣＤ１１抗体を結合させた免疫磁
気ビーズを用いてＣＤ３、ＣＤ１１ｂ陽性細胞を除去し
た後、抗ヒトＣＤ３４抗体結合ビーズを用いて、ＣＤ３
４陽性細胞をソーティングする方法で行った（参考文
献：Takafumi Yokota et.al.Blood 91,pp3263-3272,199
8 ）。ＣＤ３４で精製した後に、培養１４ー１６日目
に、各種造血前駆細胞のコロニー数を倒立顕微鏡下でカ
ウントした。測定は３点で行い、統計的有意差はスチュ
ーデントのｔテストにて検定した。
【００１０】その結果、ＣＤ３４により純化したヒト正
常造血前駆細胞の集団に対しても、上記と同様な結果が
得られた。つまり、１０μｇ／ｍｌのヒトアディポネク
チンにより、ＣＦＵ−ＧＭ（図６）及びＣＦＵ−Ｍ（図
７）の生育は抑制されたが、ＢＦＵ−Ｅ（図８）及びＣ
ＦＵ−Ｍｉｘ（図９）の生育は抑制されなかった。以上
の結果より、アディポネクチンは比較的成熟した分化段
階の骨髄単球系前駆細胞に対して、マクロファージやリ
ンパ球等を介さずに、そのクローナルな増殖を抑制する
と考えられた。
常造血前駆細胞の集団に対しても、上記と同様な結果が
得られた。つまり、１０μｇ／ｍｌのヒトアディポネク
チンにより、ＣＦＵ−ＧＭ（図６）及びＣＦＵ−Ｍ（図
７）の生育は抑制されたが、ＢＦＵ−Ｅ（図８）及びＣ
ＦＵ−Ｍｉｘ（図９）の生育は抑制されなかった。以上
の結果より、アディポネクチンは比較的成熟した分化段
階の骨髄単球系前駆細胞に対して、マクロファージやリ
ンパ球等を介さずに、そのクローナルな増殖を抑制する
と考えられた。
【００１１】種々の濃度（０、１、５、１０、５０μｇ
／ｍｌ）のヒトアディポネクチンを含む、無血清メチル
セルロース培地において、ヒト正常骨髄単核球を５×１
０4ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度で培養して、培養１４ー１
６日目に造血前駆細胞のコロニー数を倒立顕微鏡下でカ
ウントした。測定は３点で行い、統計的有意差はスチュ
ーデントのｔテストにて検定した。ヒトアディポネクチ
ンによる、骨髄単球前駆細胞のコロニー形成に対する抑
制作用は、アディポネクチン濃度が５μｇ／ｍｌ以上に
おいて認められ、１０μｇ／ｍｌ以上でほぼ定常状態に
達した（図１０）。尚、骨髄単球前駆細胞のコロニー数
は、ＣＦＵ−ＧＭとＣＦＵ−Ｍの和で求めた。
／ｍｌ）のヒトアディポネクチンを含む、無血清メチル
セルロース培地において、ヒト正常骨髄単核球を５×１
０4ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度で培養して、培養１４ー１
６日目に造血前駆細胞のコロニー数を倒立顕微鏡下でカ
ウントした。測定は３点で行い、統計的有意差はスチュ
ーデントのｔテストにて検定した。ヒトアディポネクチ
ンによる、骨髄単球前駆細胞のコロニー形成に対する抑
制作用は、アディポネクチン濃度が５μｇ／ｍｌ以上に
おいて認められ、１０μｇ／ｍｌ以上でほぼ定常状態に
達した（図１０）。尚、骨髄単球前駆細胞のコロニー数
は、ＣＦＵ−ＧＭとＣＦＵ−Ｍの和で求めた。
【００１２】（コロニー形成能に対するヒトアディポネ
クチンの作用の特異性）１０μｇ／ｍｌのヒトアディポ
ネクチンを含む無血清メチルセルロース培地に、抗アデ
ィポネクチン抗体（アイソタイプＩｇＧ１）又はその対
照抗体（精製ネズミＩｇＧ１：カッペル）を３０μｇ／
ｍｌ添加して、ヒト正常骨髄単核球を５×１０4 ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌの密度で培養した後、培養１４ー１６日目に
造血前駆細胞のコロニー数を倒立顕微鏡下でカウントし
た。測定は３点で行い、統計的有意差はスチューデント
のｔテストにて検定した。ＣＦＵ−ＧＭとＣＦＵ−Ｍの
和で求められる、骨髄単球前駆細胞のコロニー数を求め
たところ、ヒトアディポネクチンによる増殖抑制作用
は、抗アディポネクチン抗体であるモノクローナル抗体
９１０４により、部分的にではあるが阻害された（図１
１）。特異的な抗体により抑制される事から、アディポ
ネクチンの作用の特異性が示された。
クチンの作用の特異性）１０μｇ／ｍｌのヒトアディポ
ネクチンを含む無血清メチルセルロース培地に、抗アデ
ィポネクチン抗体（アイソタイプＩｇＧ１）又はその対
照抗体（精製ネズミＩｇＧ１：カッペル）を３０μｇ／
ｍｌ添加して、ヒト正常骨髄単核球を５×１０4 ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌの密度で培養した後、培養１４ー１６日目に
造血前駆細胞のコロニー数を倒立顕微鏡下でカウントし
た。測定は３点で行い、統計的有意差はスチューデント
のｔテストにて検定した。ＣＦＵ−ＧＭとＣＦＵ−Ｍの
和で求められる、骨髄単球前駆細胞のコロニー数を求め
たところ、ヒトアディポネクチンによる増殖抑制作用
は、抗アディポネクチン抗体であるモノクローナル抗体
９１０４により、部分的にではあるが阻害された（図１
１）。特異的な抗体により抑制される事から、アディポ
ネクチンの作用の特異性が示された。
【００１３】（各種白血病細胞株の増殖及び生存に対す
るヒトアディポネクチンの作用）各種白血病細胞株の増
殖及び生存に対するヒトアディポネクチンの作用を、［
3-Ｈ］チミジンの取り込みアッセイ及びトリパンブルー
色素の排除能アッセイにより検討した。各種の白血病細
胞株をＲＰＭＩ−１６４０培地（ギブコ）で２回洗浄し
た後、９６ウェルのフラットボトムマイクロタイタープ
レート（イワキガラス）に、１ウェルあたり１×１０4
ｃｅｌｌｓ／１００μｌの細胞密度で無血清調整培地に
再懸濁して、ヒトアディポネクチン又はその対照として
用いたヒト血清アルブミン（ケミコンインターナショナ
ルＩＮＣ．）を１０μｇ／ｍｌの濃度で添加して培養し
た。ここで用いた無血清培地は、インシュリン−トラン
スフェリン−亜セレン酸ナトリウム添加物（１０μｇ／
ｍｌ ベーリンガーマンハイム）、化学的に定量された
脂質濃縮物（１％ ギブコ）、ウシ血清アルブミン
（０．２％ ベリタス）及びＬ−グルタミン（２ｍＭ
ギブコ）を含むＲＰＭＩ−１６４０より成る。
るヒトアディポネクチンの作用）各種白血病細胞株の増
殖及び生存に対するヒトアディポネクチンの作用を、［
3-Ｈ］チミジンの取り込みアッセイ及びトリパンブルー
色素の排除能アッセイにより検討した。各種の白血病細
胞株をＲＰＭＩ−１６４０培地（ギブコ）で２回洗浄し
た後、９６ウェルのフラットボトムマイクロタイタープ
レート（イワキガラス）に、１ウェルあたり１×１０4
ｃｅｌｌｓ／１００μｌの細胞密度で無血清調整培地に
再懸濁して、ヒトアディポネクチン又はその対照として
用いたヒト血清アルブミン（ケミコンインターナショナ
ルＩＮＣ．）を１０μｇ／ｍｌの濃度で添加して培養し
た。ここで用いた無血清培地は、インシュリン−トラン
スフェリン−亜セレン酸ナトリウム添加物（１０μｇ／
ｍｌ ベーリンガーマンハイム）、化学的に定量された
脂質濃縮物（１％ ギブコ）、ウシ血清アルブミン
（０．２％ ベリタス）及びＬ−グルタミン（２ｍＭ
ギブコ）を含むＲＰＭＩ−１６４０より成る。
【００１４】細胞増殖に対する影響は、培養２０時間目
に各ウェルに０．５μＣｉの［3-Ｈ］チミジン（比活
性：５Ｃｉ／ｍＭ、アマシャムインターナショナル）を
添加し、４時間後に細胞をセミオートマティックセルハ
ーベスター（モデル１２９５；ファルマシアＬＫＢバイ
オテクノロジー）により回収し、細胞内への取り込みを
液体シンチレーションカウンターで測定して、得られた
測定値からＳｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ（Ｓ
Ｉ）を計算して評価した。細胞の生存率に対する影響
は、培養４８時間目にトリパンブルーを添加して、生細
胞数と死細胞数をヘモサイトメーターを用いてカウント
し、生存率低下を計算して評価した。測定は３点で行
い、統計的有意差はスチューデントのｔテストにて検定
した。ＳＩ及び生存率低下は、３点の平均値をもとにし
て、以下の式により計算した。 ＳＩ＝（アディポネクチン存在下の［3-Ｈ］チミジンの
取り込み）／（ヒトアルブミン存在下の［3-Ｈ］チミジ
ンの取り込み） 生存率低下＝（ヒトアルブミン存在下での生存率）−
（アディポネクチン存在下での生存率）
に各ウェルに０．５μＣｉの［3-Ｈ］チミジン（比活
性：５Ｃｉ／ｍＭ、アマシャムインターナショナル）を
添加し、４時間後に細胞をセミオートマティックセルハ
ーベスター（モデル１２９５；ファルマシアＬＫＢバイ
オテクノロジー）により回収し、細胞内への取り込みを
液体シンチレーションカウンターで測定して、得られた
測定値からＳｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ（Ｓ
Ｉ）を計算して評価した。細胞の生存率に対する影響
は、培養４８時間目にトリパンブルーを添加して、生細
胞数と死細胞数をヘモサイトメーターを用いてカウント
し、生存率低下を計算して評価した。測定は３点で行
い、統計的有意差はスチューデントのｔテストにて検定
した。ＳＩ及び生存率低下は、３点の平均値をもとにし
て、以下の式により計算した。 ＳＩ＝（アディポネクチン存在下の［3-Ｈ］チミジンの
取り込み）／（ヒトアルブミン存在下の［3-Ｈ］チミジ
ンの取り込み） 生存率低下＝（ヒトアルブミン存在下での生存率）−
（アディポネクチン存在下での生存率）
【００１５】その結果、ヒトアディポネクチンは１０μ
ｇ／ｍｌの濃度で骨髄系細胞株であるＴＨＰ１、ＫＵ８
１２、Ｍ１、ＷＥＨＩ３及びＢ細胞株であるＢＡＬＬの
増殖を顕著に抑制した。求めたＳＩは、ＴＨＰ１は０．
３５、ＫＵ８１２は０．８５、Ｍ１は０．７０、ＷＥＨ
Ｉ３は０．８９、ＢＡＬＬは０．５８であった。特にＴ
ＨＰ１、Ｍ１及びＢＡＬＬに対しては強い増殖抑制作用
を示し、細胞死の誘導も認められた。生存率の低下は、
ＴＨＰ１は４２．６％、Ｍ１は３１．１％、ＢＡＬＬは
２４．２％であった。各種細胞における結果をまとめた
ものを、表１に示す。
ｇ／ｍｌの濃度で骨髄系細胞株であるＴＨＰ１、ＫＵ８
１２、Ｍ１、ＷＥＨＩ３及びＢ細胞株であるＢＡＬＬの
増殖を顕著に抑制した。求めたＳＩは、ＴＨＰ１は０．
３５、ＫＵ８１２は０．８５、Ｍ１は０．７０、ＷＥＨ
Ｉ３は０．８９、ＢＡＬＬは０．５８であった。特にＴ
ＨＰ１、Ｍ１及びＢＡＬＬに対しては強い増殖抑制作用
を示し、細胞死の誘導も認められた。生存率の低下は、
ＴＨＰ１は４２．６％、Ｍ１は３１．１％、ＢＡＬＬは
２４．２％であった。各種細胞における結果をまとめた
ものを、表１に示す。
【００１６】
【表１】
【００１７】（マウス骨髄性白血病細胞株Ｍ１に対する
ヒトアディポネクチンの作用）マウス骨髄性白血病細胞
株Ｍ１をＲＰＭＩ−１６４０培地で２回洗浄した後に、
表１と同様の無血清培地に再懸濁して、９６ウェルのフ
ラットボトムマイクロタイタープレートに、１ウェルあ
たり１×１０4 ｃｅｌｌｓ／１００μｌの細胞密度で、
（１）培地のみ （２）１０μｇ／ｍｌヒトアディポネ
クチン （３）１０μｇ／ｍｌヒト血清アルブミン 存
在下の３つの条件下にて培養し、生細胞数と生存率を経
時的（培養２４、４８、７２時間目）に、表１と同様の
トリパンブルー色素排除能アッセイにより評価した。そ
の結果、ヒトアディポネクチンは１０μｇ／ｍｌの濃度
で、Ｍ１細胞の増殖を顕著に抑制した（図１２）。生存
率についても、１０μｇ／ｍｌのアディポネクチンの存
在下において、７２時間後には５０％程度まで低下した
（図１３）。
ヒトアディポネクチンの作用）マウス骨髄性白血病細胞
株Ｍ１をＲＰＭＩ−１６４０培地で２回洗浄した後に、
表１と同様の無血清培地に再懸濁して、９６ウェルのフ
ラットボトムマイクロタイタープレートに、１ウェルあ
たり１×１０4 ｃｅｌｌｓ／１００μｌの細胞密度で、
（１）培地のみ （２）１０μｇ／ｍｌヒトアディポネ
クチン （３）１０μｇ／ｍｌヒト血清アルブミン 存
在下の３つの条件下にて培養し、生細胞数と生存率を経
時的（培養２４、４８、７２時間目）に、表１と同様の
トリパンブルー色素排除能アッセイにより評価した。そ
の結果、ヒトアディポネクチンは１０μｇ／ｍｌの濃度
で、Ｍ１細胞の増殖を顕著に抑制した（図１２）。生存
率についても、１０μｇ／ｍｌのアディポネクチンの存
在下において、７２時間後には５０％程度まで低下した
（図１３）。
【００１８】更に、細胞の形態を検討した。培養４８時
間後のＭ１細胞の形態を、Ｍａｙ−Ｇｒｕｎｗａｌｄ−
Ｇｉｅｍｓａ染色で検討したところ、核クロマチンの凝
集、断片化が認められた（図１４）。そこで、図１１で
見られた増殖抑制がアポトーシスの誘導によるものでは
ないかと考えて、フローサイトメトリー及びＤＮＡの断
片化を検討した。培養後４８時間及び７２時間後の細胞
あたりの核内ＤＮＡ含量を、ヨウ化プロピジウム（Ｐ
Ｉ）でＤＮＡを蛍光染色した後、フローサイトメトリー
で解析した。上述の生細胞数と生存率の検討と同様の細
胞密度に調整したＭ１細胞を、ヒトアディポネクチン又
はヒト血清アルブミン１０μｇ／ｍｌの存在下で、２４
ウェルのフラットボトムプレートにおいて、１ウェルあ
たり１×１０5 ｃｅｌｌｓ／１ｍｌで培養した。各培養
時間後に細胞を回収して、冷却したｐｈｏｓｐｈａｔｅ
−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）（−）で
２回洗浄した後、−２０℃の７０％エタノールに、緩徐
に再懸濁して、−２０℃で一晩固定した。遠心した後、
ペレットを３００μｌのＰＩ溶液に再懸濁して、３７℃
で３０分間、暗所においてインキュベートした後、フロ
ーサイトメトリーにて解析した。ＰＩ溶液の組成は、ク
エン酸ナトリウム（０．１％）、ＮＰ−４０（０．３
％）、ＰＢＳ１ｍｌあたり１００μｇのＲｎａｓｅＡ、
及びＰＢＳ１ｍｌあたり５０μｇのＰＩより構成され
る。その結果、アディポネクチンの存在下において、サ
ブディプロイド（亜二倍体）含量の増加が観察された
（図１５）。
間後のＭ１細胞の形態を、Ｍａｙ−Ｇｒｕｎｗａｌｄ−
Ｇｉｅｍｓａ染色で検討したところ、核クロマチンの凝
集、断片化が認められた（図１４）。そこで、図１１で
見られた増殖抑制がアポトーシスの誘導によるものでは
ないかと考えて、フローサイトメトリー及びＤＮＡの断
片化を検討した。培養後４８時間及び７２時間後の細胞
あたりの核内ＤＮＡ含量を、ヨウ化プロピジウム（Ｐ
Ｉ）でＤＮＡを蛍光染色した後、フローサイトメトリー
で解析した。上述の生細胞数と生存率の検討と同様の細
胞密度に調整したＭ１細胞を、ヒトアディポネクチン又
はヒト血清アルブミン１０μｇ／ｍｌの存在下で、２４
ウェルのフラットボトムプレートにおいて、１ウェルあ
たり１×１０5 ｃｅｌｌｓ／１ｍｌで培養した。各培養
時間後に細胞を回収して、冷却したｐｈｏｓｐｈａｔｅ
−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）（−）で
２回洗浄した後、−２０℃の７０％エタノールに、緩徐
に再懸濁して、−２０℃で一晩固定した。遠心した後、
ペレットを３００μｌのＰＩ溶液に再懸濁して、３７℃
で３０分間、暗所においてインキュベートした後、フロ
ーサイトメトリーにて解析した。ＰＩ溶液の組成は、ク
エン酸ナトリウム（０．１％）、ＮＰ−４０（０．３
％）、ＰＢＳ１ｍｌあたり１００μｇのＲｎａｓｅＡ、
及びＰＢＳ１ｍｌあたり５０μｇのＰＩより構成され
る。その結果、アディポネクチンの存在下において、サ
ブディプロイド（亜二倍体）含量の増加が観察された
（図１５）。
【００１９】培養２４時間及び４８時間後のＤＮＡの断
片化について検討を行った。上述したＭ１細胞の増殖の
検討と同様の細胞密度に調整したＭ１細胞を、ヒトアデ
ィポネクチン又はヒト血清アルブミンの１０μｇ／ｍｌ
存在下で、９０×２０ｍｍディッシュ（スミロン）にお
いて、１ディッシュあたり１×１０6 ｃｅｌｌｓ／１０
ｍｌで培養した。各培養時間後に細胞を回収して、ＤＮ
Ａを抽出した（参考文献：Hiroyuki Sugahara et.al.Th
e Journal of Experimental Medicine 179.pp1757-176
6,1994 ）。得られたＤＮＡを各々５μｇ／レーンで、
エチジウムブロマイドの存在下で電気泳動して、ラダー
状の分解産物の生成により、ＤＮＡの断片化を評価し
た。その結果、アディポネクチンの存在下において、特
に４８時間後に顕著なＤＮＡの断片化が認められた（図
１６）。以上の結果から、アディポネクチンはアポトー
シスの誘導により、白血病細胞株Ｍ１の増殖を抑制する
事が示された。
片化について検討を行った。上述したＭ１細胞の増殖の
検討と同様の細胞密度に調整したＭ１細胞を、ヒトアデ
ィポネクチン又はヒト血清アルブミンの１０μｇ／ｍｌ
存在下で、９０×２０ｍｍディッシュ（スミロン）にお
いて、１ディッシュあたり１×１０6 ｃｅｌｌｓ／１０
ｍｌで培養した。各培養時間後に細胞を回収して、ＤＮ
Ａを抽出した（参考文献：Hiroyuki Sugahara et.al.Th
e Journal of Experimental Medicine 179.pp1757-176
6,1994 ）。得られたＤＮＡを各々５μｇ／レーンで、
エチジウムブロマイドの存在下で電気泳動して、ラダー
状の分解産物の生成により、ＤＮＡの断片化を評価し
た。その結果、アディポネクチンの存在下において、特
に４８時間後に顕著なＤＮＡの断片化が認められた（図
１６）。以上の結果から、アディポネクチンはアポトー
シスの誘導により、白血病細胞株Ｍ１の増殖を抑制する
事が示された。
【００２０】
【発明の効果】本発明において、アディポネクチンが単
球及びＢ細胞に対して増殖抑制作用を有している事が示
された。そのような作用を有するアディポネクチンは、
単球及びＢ細胞の増殖抑制剤として有効であると共に、
炎症において重要な役割を果たしている単球の増殖を抑
制する事から、抗炎症剤として用いる事ができる。
球及びＢ細胞に対して増殖抑制作用を有している事が示
された。そのような作用を有するアディポネクチンは、
単球及びＢ細胞の増殖抑制剤として有効であると共に、
炎症において重要な役割を果たしている単球の増殖を抑
制する事から、抗炎症剤として用いる事ができる。
【図１】 図１は、ヒトアディポネクチンのアミノ酸配
列を示した図である。
列を示した図である。
【図２】 図２は、ヒト骨髄単核球由来のＣＦＵ−ＧＭ
の増殖に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した
図である。
の増殖に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した
図である。
【図３】 図３は、ヒト骨髄単核球由来のＣＦＵ−Ｍの
増殖に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した図
である。
増殖に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した図
である。
【図４】 図４は、ヒト骨髄単核球由来のＢＦＵ−Ｅの
増殖に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した図
である。
増殖に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した図
である。
【図５】 図５は、ヒト骨髄単核球由来のＣＦＵ−Ｍｉ
ｘの増殖に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示し
た図である。
ｘの増殖に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示し
た図である。
【図６】 図６は、ＣＤ３４の発現により精製した、ヒ
ト骨髄単核球由来のＣＦＵ−ＧＭの増殖に対する、ヒト
アディポネクチンの効果を示した図である。
ト骨髄単核球由来のＣＦＵ−ＧＭの増殖に対する、ヒト
アディポネクチンの効果を示した図である。
【図７】 図７は、ＣＤ３４の発現により精製した、ヒ
ト骨髄単核球由来のＣＦＵ−Ｍの増殖に対する、ヒトア
ディポネクチンの効果を示した図である。
ト骨髄単核球由来のＣＦＵ−Ｍの増殖に対する、ヒトア
ディポネクチンの効果を示した図である。
【図８】 図８は、ＣＤ３４の発現により精製した、ヒ
ト骨髄単核球由来のＢＦＵ−Ｅの増殖に対する、ヒトア
ディポネクチンの効果を示した図である。
ト骨髄単核球由来のＢＦＵ−Ｅの増殖に対する、ヒトア
ディポネクチンの効果を示した図である。
【図９】 図９は、ＣＤ３４の発現により精製した、ヒ
ト骨髄単核球由来のＣＦＵ−Ｍｉｘの増殖に対する、ヒ
トアディポネクチンの効果を示した図である。
ト骨髄単核球由来のＣＦＵ−Ｍｉｘの増殖に対する、ヒ
トアディポネクチンの効果を示した図である。
【図１０】 図１０は、骨髄単球系前駆細胞のコロニー
（ＣＦＵ−ＧＭとＣＦＵ−Ｍの和）の増殖に対する、ヒ
トアディポネクチンの効果の濃度依存性を示した図であ
る。
（ＣＦＵ−ＧＭとＣＦＵ−Ｍの和）の増殖に対する、ヒ
トアディポネクチンの効果の濃度依存性を示した図であ
る。
【図１１】 図１１は、骨髄単球系前駆細胞のコロニー
（ＣＦＵ−ＧＭとＣＦＵ−Ｍの和）の増殖に対する、ヒ
トアディポネクチンの効果の特異性を、抗ヒトアディポ
ネクチン抗体を用いて検討した結果を示した図である。
（ＣＦＵ−ＧＭとＣＦＵ−Ｍの和）の増殖に対する、ヒ
トアディポネクチンの効果の特異性を、抗ヒトアディポ
ネクチン抗体を用いて検討した結果を示した図である。
【図１２】 図１２は、白血病細胞株Ｍ１の増殖に対す
る、ヒトアディポネクチンの効果を示した図である。
る、ヒトアディポネクチンの効果を示した図である。
【図１３】 図１３は、白血病細胞株Ｍ１の培養時の生
存率に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した図
である。
存率に対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した図
である。
【図１４】 図１４は、白血病細胞株Ｍ１において、ア
ディポネクチン処理４８時間後における、形態の写真を
示した図である。
ディポネクチン処理４８時間後における、形態の写真を
示した図である。
【図１５】 図１５は、白血病細胞株Ｍ１の核ＤＮＡ含
量に対するヒトアディポネクチンの効果を検討した、フ
ローサイトメトリーの結果を示した図である。
量に対するヒトアディポネクチンの効果を検討した、フ
ローサイトメトリーの結果を示した図である。
【図１６】 図１６は、白血病細胞株Ｍ１の核断片化に
対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した、電気泳
動の写真である。
対する、ヒトアディポネクチンの効果を示した、電気泳
動の写真である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 5/06 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 5/00 ＺＮＡＥ
Claims (9)
- 【請求項１】 単球系細胞又は単球系前駆細胞の増殖を
抑制するのに有効な量のヒトアディポネクチンを含有す
ることを特徴とする、抗炎症剤。 - 【請求項２】 ヒトアディポネクチンを５−２０μｇ／
ｍｌの濃度で含有することを特徴とする、請求項１記載
の抗炎症剤。 - 【請求項３】 単球系細胞又は単球系前駆細胞の増殖を
抑制するのに有効な量のヒトアディポネクチンを含有す
ることを特徴とする、単球系細胞又は単球系前駆細胞の
増殖抑制剤。 - 【請求項４】 ヒトアディポネクチンを５−２０μｇ／
ｍｌの濃度で含有することを特徴とする、請求項３記載
の増殖抑制剤。 - 【請求項５】 Ｂ細胞の増殖を抑制するのに有効な量の
ヒトアディポネクチンを含有することを特徴とする、Ｂ
細胞の増殖抑制剤。 - 【請求項６】 ヒトアディポネクチンを５−２０μｇ／
ｍｌの濃度で含有することを特徴とする、請求項５記載
の増殖抑制剤。 - 【請求項７】 骨髄単球系白血病細胞株およびＢ細胞性
白血病細胞株の増殖を抑制するのに有効な量のヒトアデ
ィポネクチンを含有する事を特徴とする、白血病の治療
剤。 - 【請求項８】 ヒトアディポネクチンを５−２０μｇ／
ｍｌの濃度で含有することを特徴とする、請求項７記載
の白血病の治療剤。 - 【請求項９】 ヒトアディポネクチンを添加する事によ
り、骨髄単球系白血病株およびＢ細胞性白血病株の増殖
を、生体外において抑制する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11061085A JP3018186B1 (ja) | 1999-03-09 | 1999-03-09 | 抗炎症剤、単球系細胞の増殖抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11061085A JP3018186B1 (ja) | 1999-03-09 | 1999-03-09 | 抗炎症剤、単球系細胞の増殖抑制剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP3018186B1 true JP3018186B1 (ja) | 2000-03-13 |
| JP2000256208A JP2000256208A (ja) | 2000-09-19 |
Family
ID=13160927
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11061085A Expired - Lifetime JP3018186B1 (ja) | 1999-03-09 | 1999-03-09 | 抗炎症剤、単球系細胞の増殖抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3018186B1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US8883138B2 (en) | 2010-05-21 | 2014-11-11 | Final Future International, Inc. | Adiponectin production accelerating composition |
| US9181561B2 (en) | 2009-01-29 | 2015-11-10 | Hokusan Co., Ltd. | Adiponectin-containing eating behavior control agent for oral administration |
| US9341634B2 (en) | 2004-03-31 | 2016-05-17 | Kazuhisa Maeda | Method for controlling post-operative sepsis infection by administering adiponectin |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JP5386056B2 (ja) | 2003-11-04 | 2014-01-15 | 第一三共株式会社 | 抗腫瘍剤 |
| EP2017283A4 (en) | 2006-04-28 | 2015-12-30 | Megmilk Snow Brand Co Ltd | Peptides |
| KR20180006881A (ko) | 2015-03-09 | 2018-01-19 | 인테크린 테라퓨틱스, 아이엔씨. | 비알코올성 지방간 질환 및/또는 지방이영양증의 치료 방법 |
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| AU2018249822A1 (en) | 2017-04-03 | 2019-10-31 | Coherus Biosciences Inc. | PPArgamma agonist for treatment of progressive supranuclear palsy |
-
1999
- 1999-03-09 JP JP11061085A patent/JP3018186B1/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
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