JP2632754B2 - 脳内グルタミン酸遊離抑制剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、式：

【化１】 で示される（＋）−（４Ｓ）−４，７−ジヒドロ−６−
メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−イソブチル
チエノ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル
（以下、Ｓ−３１２−ｄという）を含有する脳内グルタ
ミン酸遊離抑制剤に関する。更に詳しくは、本発明は、
Ｓ−３１２−ｄを含有する抗てんかん剤、アルツハイマ
−病治療剤、およびハンチントン舞踏病治療剤を提供す
る。

【０００２】

【従来技術】近年、アルツハイマ−病等、老年性痴呆症
の問題が大きな関心をよんでおり、予防または治療薬の
開発が期待されている。該疾患の発症原因としては、脳
内興奮性アミノ酸の一種であるグルタミン酸のレセプタ
−を介する神経細胞の過剰興奮による神経毒作用が報告
されており（現代化学 1987年10月号，篠崎温彦）、そ
れに対して多数の薬物が考案されている。例えば、カト
ウらがブレイン リサ−チの第５１６巻、第１７５頁
（１９９０年）(H.Kato et al; Brain Res. 516175 (19
90))に報告しているＭＫ−８０１等のＮ−メチル−Ｄ−
アスパラギン酸（以下、ＮＭＤＡと言う）チャンネルア
ンタゴニストもその１種であるが、副作用も多く臨床で
使用されるには至っていない。

【０００３】ところで、Ｓ−３１２−ｄは、本発明者ら
によって合成されたジヒドロピリジン系カルシウム拮抗
剤であり、そのラセミ体は既に特開昭６２−１００８７
において開示されている。しかし、その記載によれば、
該拮抗剤は、血管平滑筋に対して選択的なカルシウム拮
抗作用を有し、その結果降圧作用および冠血管拡張作用
を示すので、狭心症、高血圧、脳血流障害、不整脈等の
循環器系疾患の治療に有用とあるだけである。脳血流障
害に関しても、カルシウム拮抗剤が血管拡張作用を有す
ることにより、単に適応が期待される疾患名として記載
されているに過ぎず、治療効果が実験的に確認されてい
るわけではない。この様に、血管拡張作用に基づいて推
測される範囲は、せいぜい脳卒中に対して効果があるこ
とが期待される程度であり、アルツハイマ−病等の老年
性痴呆症に対して効果がある等とは推測できない。

【０００４】

【発明が解決すべき課題】脳内グルタミン酸過剰遊離に
起因する疾患または症状、例えば、てんかん、アルツハ
イマ−病、ハンチントン舞踏病等の予防または治療に有
用な薬物を提供する。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上記課題に鑑み、本発明
者らは、多数の薬物について目的とする薬理作用を種々
検討したところ、Ｓ−３１２−ｄが、脳虚血時に見られ
る海馬領域からのグルタミン酸過剰遊離を抑制する作用
を有することを見出し、本発明を完成した。また、抗痙
攣作用についても種々検討したところ、ＮＭＤＡ痙攣、
ペンチレンテトラゾ−ル（ｐｅｎｔｙｌｅｎｅｔｅｔｒ
ａｚｏｌｅ）痙攣を抑制しないが，ＤＢＡ／２マウスに
おいて音刺激誘発痙攣を強く抑制することを確認した。

【０００６】さらに詳しくは、脳卒中易発症性高血圧自
然発症ラット（以下、ＳＨＲＳＰと言う）を使用して、
両側頚動脈閉塞（以下、ＢＣＡＯと言う）処置により脳
虚血状態にしたところ、海馬領域においてグルタミン酸
が過剰に遊離することを確認した。そこで、Ｓ−３１２
−ｄについて、脳虚血時の海場領域からのグルタミン酸
遊離量の増加に対する作用を、既知のジヒドロピリジン
系カルシウム拮抗剤と比較検討した。その結果、Ｓ−３
１２−ｄの優れた脳内グルタミン酸遊離抑制作用は、類
似のカルシウム拮抗剤には見られない、Ｓ−３１２−ｄ
に特有の作用であることが確認された。さらに、Ｓ−３
１２−ｄは、正常時の海馬領域からのグルタミン酸の遊
離量には影響を及ぼさずに、脳虚血時に見られる過剰遊
離のみを特異的に抑制する作用を有することが明らかと
なった。

【０００７】ところで、グルタミン酸に代表される脳内
興奮性アミノ酸による神経毒作用が関与する疾患として
最近報告されているものに、アルツハイマ−病やハンチ
ントン舞踏病等があげられる。カットマンとアイバ−セ
ンらは、トレンズ イン ニュウロサイエンスの第１０
巻、第２６３頁（１９８７年）(Cotman, C.W. & Iverse
n, L.L, TINS, 10, 263-265 (1987))において、これら
の疾患について、代表的な興奮性アミノ酸受容体である
ＮＭＤＡ受容体の過剰興奮が進行性の病理変化と神経細
胞死を来すのではないかと推定している。

【０００８】更に、マ−チンらによってニュ− イング
ランド ジャ−ナル オブ メディシンの第３１５巻、第
１２６７頁(１９８６年）(Martin, J.B. & Gusella, J.
F., N.Engl. J. Med., 315, 1267-1276 (1986))に報告
されているように、脳内グルタミン酸等の興奮性アミノ
酸の遊離阻害薬の１種として知られるバクロフェン（ｂ
ａｃｌｏｆｅｎ）の臨床試験は、該薬物がハンチントン
舞踏病の進行を抑制する作用を有することを明示してい
る。よって、Ｓ−３１２−ｄは、痙攣やてんかんのみな
らず、脳内グルタミン酸過剰遊離に起因すると考えられ
る疾患または症状、即ち、上記のアルツハイマ−病やハ
ンチントン舞踏病を始めとする種々の老年性痴呆症等の
予防または治療に有用である。

【０００９】また、ＤＢＡ／２マウスにおける痙攣誘発
機構に関する詳細な研究はないが、サルロらによってブ
リティッシュ ジャ−ナル オブ ファルマコロジ−の第
９３巻、第２４７頁（１９８８年）(De Sarro G.B. et
al., Br. J. Pharmacol., 93, 247-256 (1988))に記載
されているように、遊離されたグルタミン酸に代表され
る脳内興奮性アミノ酸がＮＭＤＡ受容体を介して痙攣を
誘発すると推定されている。更に、同様の作用機序が反
射性のてんかん誘発と関連することは、ＤＢＡ／２マウ
スにおけるＮＭＤＡ拮抗薬の抗痙攣作用によって示され
ることが、クロウチェルらによって、ニュウロファルマ
コロジ−の第２３巻、第４６７頁（１９８４年）(Crouc
her, M.J. et al., Neuropharmacology, 23, 467-472
(1984))に報告されている。

【００１０】よって、Ｓ−３１２−ｄがグルタミン酸遊
離抑制作用を有し、かつ音刺激誘発痙攣抑制作用を有す
ることは、Ｓ−３１２−ｄが抗てんかん薬としても有用
であることを示唆している。

【００１１】尚、Ｓ−３１２−ｄは、特開平３−５２８
９０に記載の方法により製造出来る。

【００１２】Ｓ−３１２−ｄは、人または動物に経口的
または非経口的に投与でき、その投与方法に応じて種々
の剤型に製剤化することが出来る。例えば、錠剤、カプ
セル剤、丸剤、顆粒剤、散剤、乳剤等になしうる。ま
た、適当な溶解剤等を使用することにより、水剤、注射
剤等とすることも可能である。製剤化の際には、通常用
いられる担体または賦形剤、例えば乳糖、ショ糖、澱
粉、セルロ−ス、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸
マグネシウム、酸化マグネシウム、硫酸カルシウム、ア
ラビアゴム末、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、安息
香酸ナトリウム等が使用される。

【００１３】また、投与量は治療目的、治療方法等によ
り異なるので、一概には規定出来ないが、成人に対し、
経口的には約１〜５０ｍｇ／日、非経口的には約０．５
〜２０ｍｇ／日が投与される。本発明について更に詳細
に説明するために、以下に試験例および実施例を示す
が、これらは本発明を何等制限するものではない。

【００１４】試験例１ 脳虚血時の海馬ＣＡ１領域でのグルタミン酸遊離量の増
加に対するＳ−３１２−ｄの作用について、調べた。 （被験薬物） Ｓ−３１２−ｄ 対照薬物：ニルバジピン(nilvadipine) ニモジピン(nimodipine) （実験動物）油日ラボラトリ−ズ産の雄性ＳＨＲＳＰの
１２〜１４週令を、１群５匹として使用した。飼育は、
ＣＡ−１試料（日本クレア(製)）と水道水の自由摂取に
より行なわれた。

【００１５】（試験方法） ［両側頚動脈閉塞（ＢＣＡＯ）処置］海馬ＣＡ１領域を
虚血状態にするために、ＢＣＡＯ処置を行なった。ま
ず、ハロセン（Halothane）（３％）麻酔下で、腹側頚
部切開後、剥離された両側頚動脈の回りにナイロン糸を
懸け、その糸の両端をそれぞれチュ−ブの２つの穴に通
して、左右別々に背部皮外へ露出した。次に、露出した
糸の両端を強く引きクレンメで留めることにより、両側
頚動脈を閉塞させた。ＢＣＡＯ解除は、クレンメを外し
てラットの腹側下部に取り付けた糸をゆっくりと引き下
げることにより行なった。チュ−ブは夏目製作所（株）
製の ダブル ル−メン ＰＥ チュ−ブ(double lumen PE
tube)を使用した。尚、ＢＣＡＯ処置中は、ハロセンの
吸入を中止した。

【００１６】［局所脳血流量の測定］血流量の測定は、
レ−ザ−ドップラ−組織血流計のニ−ドル型センサ−
（４５０μｍΦ）を、微小透析用プロ−ブを固定した位
置の対側の海馬ＣＡ１領域に挿入して行なった。ＢＣＡ
Ｏ処置による虚血状態の判断は、ラット致死後の血流量
を０とした時に、ＢＣＡＯ処置中の血流量が０になるこ
とを基にして行なった。

【００１７】［被験薬物の投与方法］Ｓ−３１２−ｄ
０.３ｍｇ／ｋｇ、ニルバジピン ３ｍｇ／ｋｇ、ニモジ
ピン３ｍｇ／ｋｇをそれぞれポリエチレングリコ−ル４
００に溶解し、ＢＣＡＯ処置の４０分前に十二指腸内に
投与した。［微小透析法によるグルタミン酸遊離量の測
定方法］ハロセン（１−２％）麻酔下でラットを脳定位
固定装置に伏臥位に固定し、人工呼吸装置（１ｃｃ／１
００ｇｂｗ×６０回／分）を装着し、腹下部に保温マッ
トを敷き３７℃に保温した。ラット頭蓋を露出させドリ
ル孔を開け、海馬ＣＡ１領域に微小透析用のプロ−ブ
（ＢＡＳ社製のＣＭＡ／１０，２ｍｍ）をゆっくりと挿
入した。手術時の組織傷害の影響を軽減するために、測
定は手術後３時間経過してから開始した。プロ−ブ内部
を微量注入用のポンプ（ＢＡＳ社製のＣＭＡ／１００）
により２μｌ／ｍｉｎの速度でリンゲル液で潅流し、５
分間隔で潅流液を分取した。サンプリングは、ＢＣＡＯ
処置の１０分前から開始し、ＢＣＡＯ処置を２０分間行
なった後、さらにＢＣＡＯ解除後２０分間行ない、得ら
れたサンプルをそのままグルタミン酸の定量に使用し
た。

【００１８】［ＨＰＬＣによるグルタミン酸の定量］基
本的には、ライフ サイエンスの第４３巻、第９１３頁
（１９８８年）（B.A.Donzanti et al, Life Sci 43 91
3 (1998))に記載のドンザンチらの方法に準じてＨＰＬ
Ｃ−ＥＣＤ法にて行なった。即ち、グルタミン酸のサン
プルをオルト−フタルアルデヒド／ベ−タ−メルカプト
エタノ−ル（o-phtalaldehyde/β-mercaptoetanol）溶
液と２分間反応させた後、逆相カラムに注入し、流出し
たグルタミン酸の酸化還元電流を測定した。測定条件 使用カラム：Ｃ18，粒子径３mm,８cm×４.６mm カラム温度：３９℃ 移動相 ：０.１Ｍ リン酸緩衝液(ｐＨ６.４),０.１３ｍＭ Ｎａ₂ＥＤＴＡ, ２２％ ＭｅＯＨの混合液 流速 ：１ｍｌ／分

【００１９】（試験結果）［ＢＣＡＯ処置および再開通
時の局所脳血流量の変化について］結果を図１に示す。
ＢＣＡＯ処置により局所脳血流量はほぼ完全に停止して
いたが、再開通時にはもとのレベルまで回復した。

【００２０】［ＢＣＡＯ処置によるグルタミン酸遊離量
の増加に対するＳ−３１２−ｄの作用について］結果を
図２に示す。薬物非投与（正常群）の場合と比較する
と、Ｓ−３１２−ｄの前投与により、正常時のグルタミ
ン酸基礎遊離量は影響を受けずに、ＢＣＡＯ処置による
脳虚血時に見られるグルタミン酸の過剰遊離のみが抑制
されることが確認された。しかし、対照薬物であるニル
バジピンおよびニモジピンは過剰遊離に対する抑制作用
を示さず、むしろ促進作用を示した。 （考察）以上のように、Ｓ−３１２−ｄが、正常時のグ
ルタミン酸基礎遊離量には影響を与えずに、脳虚血時の
過剰遊離に対してのみ示す抑制作用は、バクロフェン
（ｂａｃｌｏｆｅｎ）等の従来の脳内興奮性アミノ酸遊
離阻害薬には見られない特異的な遊離抑制作用である。
この抑制作用は、脳虚血時のみならず、その他の異常
時、例えば、痙攣を始めとする神経過興奮時などにおけ
るグルタミン酸の過剰遊離に対しても発現すると考えら
れるので、臨床上極めて有用である。

【００２１】試験例２ ＤＢＡ／２マウスの音刺激誘発痙攣に対するＳ−３１２
−ｄの作用について調べた。 （被験薬物） Ｓ−３１２−ｄ 対照薬物：Ｓ−３１２−ｌ ニカルジピン(Nicardipine) ニモジピン(Nimodipine) フルナリジン(Flunarizine) ただし、Ｓ−３１２−ｌは、Ｓ−３１２−ｄの光学異性
体である（−）−（４Ｒ）−４，７−ジヒドロ−６−メ
チル−４−（３−ニトロフェニル）−３−イソブチルチ
エノ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチルを
表わす。

【００２２】（実験動物） ３週令のＤＢＡ／２マウス（油日ラボラトリ−ズ産，体
重７〜１１ｇ）を雌雄各５匹づつで一群１０匹として使
用した。 （試験方法）Ｓ−３１２−ｄおよびニカルジピンはポリ
エチレングリコ−ル溶液として、その他の薬物はアラビ
アゴム懸濁液として、経口投与した。１時間後、超音波
洗浄器による音刺激（７０〜９０ｄＢ）をＤＢＡ／２マ
ウスに１分間与え、発現する強直性痙攣による死亡を指
標にしてプロビット法（Ｐｒｏｂｉｔ法）により抗痙攣
作用のＥＤ５０値を算出した。

【００２３】（試験結果）用量依存的に抗痙攣作用を示
した薬物は、Ｓ−３１２−ｄおよびフルナリジンの２種
であった。一方、代表的なジヒドロピリジン系カルシウ
ム拮抗剤であるニカルジピン、ニモジピン、およびＳ−
３１２−ｌは、４０％以下の抗痙攣作用しか示さなかっ
た。それぞれの活性は、ニカルジピン、ニモジピンが２
０〜８０ｍｇ／ｋｇ用量範囲で最高３０％と４０％の抑
制を示し、Ｓ−３１２−ｌは、１０〜８０ｍｇ／ｋｇ用
量範囲で最高３０％の抑制を示すのみであった。これら
の結果を図３および表１に示す。

【表１】

【００２４】次に、実施例１〜３を表２に示す。

【表２】

【００２５】

【発明の効果】Ｓ−３１２−ｄは、脳内海馬領域におけ
るグルタミン酸過剰遊離に対して、特異的な抑制作用を
示す。よって、従来のジヒドロピリジン系カルシウム拮
抗剤においては見られなかった効果、即ち、脳内グルタ
ミン酸過剰遊離に起因すると考えられる各種の脳神経障
害、例えばアルツハイマ−病やハンチントン舞踏病等の
老年性痴呆症に対する予防または治療効果を有し、更に
抗てんかん薬としても有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、脳卒中易発症性高血圧自然発症ラット
（ＳＨＲＳＰ）における両側頚動脈閉塞（ＢＣＡＯ）処
置時の局所脳血流量の変化を示す。縦軸は局所脳血流量
の相対的変化、横軸は時間（分）を表わす。

【図２】図２は、ＢＣＡＯ処置によるグルタミン酸過剰
遊離に対する各薬物の作用を表わす。縦軸は、グルタミ
ン酸遊離率変化（％）、横軸は時間（分）を表わす。

【図３】図３は、ＤＢＡ／２マウスの音刺激による痙攣
致死に対する各薬物の抑制作用を表わす。縦軸は痙攣抑
制率（％）、横軸は投与量（ｍｇ／ｋｇ）を表わす。

Claims (4)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （＋）−（４Ｓ）−４，７−ジヒドロ−
   ６−メチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−イソブ
   チルチエノ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メ
   チルを含有する脳内グルタミン酸遊離抑制剤。
2. 【請求項２】 請求項１記載の化合物を含有する抗てん
   かん剤。
3. 【請求項３】 請求項１記載の化合物を含有するアルツ
   ハイマ−病治療剤。
4. 【請求項４】 請求項１記載の化合物を含有するハンチ
   ントン舞踏病治療剤。