JP2024098641A - Ｇｌｐ－１分泌促進用の剤又は組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】 本発明の目的は、効率的かつ簡便にＧＬＰ－１の分泌を促進することができる、ＧＬＰ－１分泌剤及び組成物を提供することを課題とする。より具体的には、Ｄ－アルロースは、マウスでは３ｇ／ｋｇ用量でＧＬＰ－１分泌の効果を発揮することが知られる一方、１ｇ／ｋｇ用量ではその効果は小さい。そこで、本発明の課題は、Ｄ－アルロースが少量でもＧＬＰ－１分泌の効果が発揮できる新たな手段を提供することにある。
【解決手段】 Ｄ－アルロースに少量のγアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を組み合わせることにより、効率的にＧＬＰ－１分泌を促進することができる。より詳細には、Ｄ－アルロース１質量部に対してγアミノ酪酸を０．０４質量部以上の比で併存させ、これを含んでなる組成物又は剤として提供すれば、上記課題は解決される。
【選択図】図５

Description

本発明は、耐糖能異常の治療又は糖尿病の予防などに有用な、インクレチンホルモンで あるＧＬＰ－１の分泌又は促進用の剤及び組成物に関する。

グルカゴン様ペプチド－１（以降、「ＧＬＰ－１」という。）は、食事摂取に伴い消化管から分泌され、膵β細胞に作用してインスリン分泌を促進するホルモンであって、インクレチンのひとつである。ＧＬＰ－１には種々の作用が認められており、例えば、血糖値を上昇させるホルモンのグルカゴンの分泌を抑制する作用、心拍出量を増加させる作用、高血圧の改善作用、炎症性免疫応答を弱める作用、摂取した食物の胃からの排出を遅らせる作用などがある。

しかし、インクレチンは、インクレチン分解酵素（ＤＰＰ－４）によって速やかに分解される欠点があるため、その分解を抑制する「ＤＰＰ－４阻害剤」やＤＰＰ－４の作用を受けない「インクレチンアナログ」が開発され、副作用の少ないものとして期待されている。しかし、いずれも自然界に存在するものでなく、その製造コストは安価でない。また、これらのほか、アカルボース、ボグリボース、ミグリトールなどの二糖類分解酵素阻害薬（α－ＧＩ剤）もインクレチン分解の抑制作用を有するが、同様に安価でなく、医師の処方が必要であるとの煩雑さもある。

一方、Ｄ－アルロース（Ｄ－プシコースに同じ）は、食品エネルギー値０ｋｃａｌ／ｋｇであることに加えて、蔗糖やでんぷんと同時に経口摂取したときに血糖上昇抑制効果があることが知られ（特許文献１）、ＧＬＰ－１分泌促進剤として利用できることも開示されている（特許文献２）。また、γアミノ酪酸（ＧＡＢＡともいう）は、生体内において抑制系の神経伝達物質としての働きを有し、脳や脊髄等の中枢神経系に特に多く存在することが知られている（特許文献３）。しかし、ＧＡＢＡについては空腹時のＧＬＰ－１分泌促進の効果が確認されたことはなく、また、Ｄ－アルロースに対してＧＡＢＡを組み合わせたときに、ＧＬＰ－１の分泌促進の相乗的効果も確認されていなかった。

特開２００５－２１３２２７号公報 国際公開第ＷＯ２０１７／０１８５００号 特開２００３－２５２７５６号公報

本発明は、安価かつ簡便に入手することができる、ＧＬＰ－１の分泌促進の剤及び組成物を提供することを課題とする。

本発明者らは、Ｄ－アルロースとＧＡＢＡを組み合わせることにより、効率的にＧＬＰ－１の分泌を促進する、特に食前の空腹時に摂取することで効率的にＧＬＰ－１の分泌を促進することを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、以下から構成される。
［１］Ｄ－アルロース及びγアミノ酪酸を含む、ＧＬＰ－１分泌促進用の組成物。
［２］Ｄ－アルロース１質量部に対してγアミノ酪酸を０．０４質量部以上で含む、ＧＬＰ－１分泌促進用の組成物。
［３］１回又は１日用量として、体重１ｋｇ当たりＤ－アルロース８～４００ｍｇに対してγアミノ酪酸を０．８～４０ｍｇで含む、ＧＬＰ－１分泌促進用の組成物。
［４］Ｄ－アルロース及びγアミノ酪酸を含む、ＧＬＰ－１分泌促進剤。
［５］Ｄ－アルロース１質量部に対してγアミノ酪酸を０．０４質量部以上で含む、ＧＬＰ－１分泌促進剤。
［６］１回又は１日用量として、体重１ｋｇ当たりＤ－アルロース８～４００ｍｇに対してγアミノ酪酸を０．８～４０ｍｇで含む、ＧＬＰ－１分泌促進剤。
［７］食前に投与される、［１］～［３］のいずれかに記載の組成物。
［８］食前に投与される、［４］～［６］のいずれかに記載の剤。

本発明によれば、低用量で大きな効果を発揮することができるため、また、Ｄ－アルロースとＧＡＢＡにはヒト食経験が豊富であるため、安全性の高いＧＬＰ－１の分泌剤又は組成物を低コストで提供することができる。

アルロース１ｇ／ｋｇ、ＧＡＢＡ２００ｍｇ／ｋｇ、アルロース１ｇ／ｋｇとＧＡＢＡ２００ｍｇ／ｋｇ、又は生理食塩水をマウスに投与したときの摂食量の変化を示す図である。 アルロース０．５ｇ／ｋｇ、ＧＡＢＡ２０ｍｇ／ｋｇ、アルロース０．５ｇ／ｋｇとＧＡＢＡ２０ｍｇ／ｋｇ、又は生理食塩水をマウスに投与したときの摂食量の変化を示す図である。 アルロース０．５ｇ／ｋｇ、ＧＡＢＡ１０ｍｇ／ｋｇ、アルロース０．５ｇ／ｋｇとＧＡＢＡ１０ｍｇ／ｋｇ、又は生理食塩水をマウスに投与したときの摂食量の変化を示す図である。 アルロース１ｇ／ｋｇ、ＧＡＢＡ２００ｍｇ／ｋｇ、アルロース１ｇ／ｋｇとＧＡＢＡ２００ｍｇ／ｋｇ、又は生理食塩水をマウスに投与したときの門脈血漿中のトータルＧＬＰ－１（ｐＭ）を示す図である。 アルロース０．５ｇ／ｋｇ、ＧＡＢＡ２０ｍｇ／ｋｇ、アルロース０．５ｇ／ｋｇとＧＡＢＡ２０ｍｇ／ｋｇ、又は生理食塩水をマウスに投与したときの門脈血漿中のトータルＧＬＰ－１（ｐＭ）を示す図である。

以下、本発明について具体的に詳述するが、本発明はこれらに限定されるものでない。

本発明の剤又は組成物は、ＧＬＰ－１の分泌を促進するものであるから、耐糖能異常の治療や糖尿病に対する予防・治療など、ＧＬＰ－１の機能を介した様々な生理機能及び疾病・症状の改善に極めて有用なものとなる。

「Ｄ－アルロース」は、別名Ｄ－プシコースともいい、ズイナ等植物から抽出したもの、アルカリ異性化法によりＤ－グルコースやＤ－フラクトースを原料に異性化したもの（例えば、松谷化学工業株式会社の製品「レアシュガースウィート」）、微生物又はその組換体から得られる酵素（イソメラーゼやエピメラーゼ等）を利用する酵素法により、Ｄ－グルコースやＤ－フラクトースを原料として異性化したもの（例えば、松谷化学工業株式会社の製品「Ａｓｔｒａｅａ」）などがある。

「ＧＡＢＡ」は、γアミノ酪酸の略称であり、動植物界に広く分布するアミノ酸の一種であって、ほ乳動物の脳や脊髄の中枢神経系における抑制性神経伝達物質としてよく知られている。このＧＡＢＡは、発酵法などにより商業生産され（例えば、特開２０００－２１００７５号公報）、近年では、血圧改善、ストレス緩和、疲労感の軽減、睡眠の改善、認知機能の改善の機能性関与成分として機能性表示食品に多く用いられるようになってきたことから、一般消費者にもその機能が広く知られるところとなっている。

本発明のＤ－アルロースとＧＡＢＡを含む組成物は、摂取したときにＧＬＰ－１分泌促進の効果を発揮するため、両成分は必須であるが、その組み合わせ比について特に限定はない。もっとも、効率よく当該効果を発揮するためには、Ｄ－アルロース１質量部に対してＧＡＢＡ０．０４質量部以上の比率で用いるのがよい。また、具体的な投与量としては、後述のマウスの実験結果などから、体重１ｋｇ当たりＤ－アルロース０．１～５ｇ、０．１～３ｇ若しくは０．５～３ｇに対し、ＧＡＢＡ１０～５００ｍｇ、２０～３００ｍｇ若しくは２０～２００ｍｇであると考えられる。なお、これをJournal of Basic Clinical Pharmacy, March-May2016,7(2):27-31「A simple practice guide for dose conversion between animals and human」の表１及び数式２（ヒト用量＝マウス用量×３／３７）を参照し、ヒト用量に換算すると、ヒト体重１ｋｇ当たりＤ－アルロース８～４００ｍｇ、８～２４０ｍｇ若しくは４０～２４０ｍｇに対し、ＧＡＢＡ０．８～４０ｍｇ、１．６～２４ｍｇ若しくは１．６～１６ｍｇである。

本発明の組成物は、ＧＬＰ－１分泌の効果を発揮する有効量を含有すれば、粉末、顆粒、錠剤、液状、ゲル状など、どのような形状でもよい。また、一日の投与回数は問わず、上記有効量を１回で投与できる形態か、分割して投与できる形態のいずれであってもよい。さらに投与タイミングについては、特に問わないが、本発明の効果が如何なく発揮されるためには、食事と同時に摂取するのでなく、空腹時、例えば、食前２時間以上前、食前２時間～３０分前、食前３０分前～１０分前、又は食前１０分前から食直前に、摂取することが好ましい。

本発明の組成物の投与対象は、哺乳類の動物であればよく、その個体の病態の程度はとくに問わないが、耐糖能異常の傾向にある個体、肥満傾向にある個体においてその効果が発揮されやすい。

以下に、本発明の組成物の優れた効果を実験結果によって具体的に示す。

＜実験動物の準備＞
実験動物として、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウスを用いた。マウスは個別ケージ内であらかじめ１週間以上予備飼育し、実験者によるハンドリングをして、飼育・実験環境（１２時間の明暗サイクル。７：３０～１９：３０が明期。室温２３±２℃。湿度５５±１０％。）に順化させた。餌は、日本クレア社のＣＥ－２飼料（栄養バランスのとれた一般的なマウス用飼料、３．４ｋｃａｌ／ｋｇ）とし、水とともに自由摂取とした。動物実験は、京都府立大学の動物実験委員会のガイドラインに従い、承認を得て実施した。

＜被験試料＞
Ｄ－アルロースは、松谷化学工業（株）の「Ａｓｔｒａｅａ」（結晶Ｄ－アルロース純度９５％以上）を、ＧＡＢＡは、（株）ファーマフーズのラクトギャバン（γアミノ酪酸純度９５％以上）を用いた。ＧＡＢＡのエネルギー量は３．９５ｋｃａｌ／ｋｇとして計算した。

＜ＧＬＰ－１の測定＞
トータルＧＬＰ-１の定量分析は、ＥＬＩＳＡキット（ミリポア社製、ＥＺＧＬＰ１Ｔ-３６Ｋ）を用いて行った。

＜データ解析の方法＞
以降の実験データは、平均値±標準誤差で表記する。実験１～３の結果については、各時間において一元配置分散分析により解析をし、有意な場合はＴｕｋｅｙ’ｓ検定にて各群間の有意差を検定した。実験４～５は、一元配置分散分析により解析をし、有意な場合はＴｕｋｅｙ’ｓ検定にて各群間の有意差を検定した。なお、有意水準は５％に設定した。実験１～３の結果である図１～３の＊及び＊＊は、それぞれｐ＜０．０５及びｐ＜０．０１を意味する。実験４～５の結果である図４～５の異なるアルファベットは、ｐ＜０．０５を意味する。

＜被験物質投与後の摂食量変化（実験１）＞
実験前日の１８時から当日９時４５分までの約１６時間、上の手順で順化させたマウス（１０週齢、５匹×４群）を絶食させておき、Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）、ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）、［Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）］のいずれかの水溶液、又は生理食塩水を、各々１０ｍｌ／ｋｇの容量で単回経口胃内投与した。経口投与直後となる１０時００分にＣＥ－２飼料を含む餌鉢をケージ内に再設置し、餌の摂食量を０．５、１、２、３、６、２４時間後まで経時的に測定した（図１）。摂取した餌の量は累積摂食量（ｋｃａｌ）とし、これには投与したＧＡＢＡのエネルギー（３．９５ｋｃａｌ／ｇ）も含まれる。その結果、０．５～６時間後の［Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）］投与群における摂食量は、ほかの群における摂食量より格段に低減していた。０．５時間の結果において、Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）もしくはＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）の単独投与においても、生理食塩水投与群と比較すると優位な摂食低減作用が認められたが、［Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）］投与群においては、Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）もしくはＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）単独投与群よりも有意に摂食量は低減した。そして、２～６時間後の［Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）］投与群における摂食量も、Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）もしくはＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）単独投与群よりも有意に低減した。一方、２４時間後には投与群間に摂食量の差は認められなかった。

＜被験物質投与後の摂食量変化（実験２）＞
被験物質の効果が発揮される適切な用量を検討するため、Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）、ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）、［Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）］のいずれかの水溶液、又は生理食塩水を、各々１０ｍｌ／ｋｇの容量で投与する実験を、実験１と同様の手順で行った（但し、マウスは９週齢、６匹×４群）。その結果（図２）、０．５～６時間後の［Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）］投与群における摂食量は、ほかの群における摂食量より格段に低減していた。Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）はいずれの時間帯においても有意な摂食低減作用は観察されなかった。ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）は、投与０．５～１時間後の摂食量を有意に低減させたが、この作用は短期的な作用であった。［Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）］投与群は、投与６時間後まで比較的長期間、有意に摂食量を低減させた。一方、２４時間後には投与群間に摂食量の差は認められなかった。

＜被験物質投与後の摂食量変化（実験３）＞
引き続き、被験物質の効果が発揮される適切な用量を検討するため、Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）、ＧＡＢＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）、［Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）］のいずれかの水溶液、又は生理食塩水を、各々１０ｍｌ／ｋｇの容量で投与する実験を、実験１と同様の手順で行った（但し、マウスは１１週齢、６匹×４群）。その結果（図３）、０．５時間後の［Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）］投与群における摂食量は、ほかの群における摂食量より低減していたが、１時間後以降は、投与群間に摂食量の差は認められなかった。

＜被験物質投与後の門脈血漿中トータルＧＬＰ－１濃度（実験４）＞
実験当日９時から１４時までの５時間（＝明期の５時間）、上の手順で順化させたマウス（２０～２２週齢、９匹×４群）を絶食させておき、Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）、ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）、Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの水溶液、又は生理食塩水を、各々１０ｍｌ／ｋｇの容量で単回経口胃内投与した。絶食を継続したまま、投与１時間後にイソフルラン麻酔をかけ、門脈から採血してその血漿ＧＬＰ－１を測定した（図４）。その結果、生理食塩水群と比較して、Ｄ－アルロース単独投与群（１ｇ／ｋｇ）の血漿トータルＧＬＰ－１濃度は有意に高値であった。そして、［Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）］投与群の血漿トータルＧＬＰ－１濃度は、Ｄ－アルロース単独投与群（１ｇ／ｋｇ）の値よりも有意に高値を示した。

＜被験物質投与後の門脈血漿中トータルＧＬＰ－１濃度（実験５）＞
実験前日１８時から当日９時までの１６時間（＝一晩）、上の手順で順化させたマウス（１５週齢、６匹×４群）を絶食させておき、Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）、ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）、［Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）］のいずれかの水溶液、又は生理食塩水を、各々１０ｍｌ／ｋｇの容量で単回経口胃内投与した。絶食を継続したまま、投与１時間後にイソフルラン麻酔をかけ、門脈から採血してその血漿ＧＬＰ－１を測定した（図５）。その結果、他群との比較において、［Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）］投与群でのみ有意にトータルＧＬＰ－１量が増加した。

＜考察＞
Ｄ－アルロース０．５ｇ／ｋｇ、ＧＡＢＡ２０ｍｇ／ｋｇ又は２００ｍｇ／ｋｇの各単独投与群において、有意なトータルＧＬＰ－１量の増加は認められなかった。一方、［Ｄ－アルロース（１ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２００ｍｇ／ｋｇ）］、［Ｄ－アルロース（０．５ｇ／ｋｇ）＋ＧＡＢＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）］の各併用投与群においては、有意なトータルＧＬＰ－１量の増加が認められた。

以上より、本発明のＤ－アルロースとＧＡＢＡが併存する組成物又は剤は、ＧＬＰ－１分泌促進の組成物又は剤として有利に利用できる。

Claims (8)

1. Ｄ－アルロース及びγアミノ酪酸を含む、ＧＬＰ－１分泌促進用の組成物。
2. Ｄ－アルロース１質量部に対してγアミノ酪酸を０．０４質量部以上で含む、ＧＬＰ－１分泌促進用の組成物。
3. １回又は１日用量として、体重１ｋｇ当たりＤ－アルロース８～４００ｍｇに対してγアミノ酪酸を０．８～４０ｍｇで含む、ＧＬＰ－１分泌促進用の組成物。
4. Ｄ－アルロース及びγアミノ酪酸を含む、ＧＬＰ－１分泌促進剤。
5. Ｄ－アルロース１質量部に対してγアミノ酪酸を０．０４質量部以上で含む、ＧＬＰ－１分泌促進剤。
6. １回又は１日用量として、体重１ｋｇ当たりＤ－アルロース８～４００ｍｇに対してγアミノ酪酸を０．８～４０ｍｇで含む、ＧＬＰ－１分泌促進剤。
7. 食前に投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
8. 食前に投与される、請求項４～６のいずれか一項に記載の剤。