JP2024074278A - Ｌａｇ－３およびｐｄ－１／ｌａｇ－３抗体 - Google Patents

Abstract

【課題】ヒトＬＡＧ－３に結合して刺激する抗体、並びにヒトＰＤ－１及びヒトＬＡＧ－３の各々に結合して刺激する二重特異性抗体を提供する。【解決手段】重鎖可変領域（ＶＨ）が、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）：特定のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み；軽鎖可変領域（ＶＬ）が、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）：特定のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＶＨ及びＶＬを含むヒトＬＡＧ－３結合ドメインを含む抗体を提供する。また、ヒトＬＡＧ－３及びヒトＰＤ－１の各々に結合する、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。【選択図】なし

Description

本開示は、医学の分野に属する。特に、本開示は、ヒトＬＡＧ－３を刺激する新規抗体、並びにヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１の両方を刺激する新規二重特異性抗体、そのような抗体を含む組成物、並びに自己免疫疾患の治療のためにそのような抗体を使用する方法に関する。

免疫チェックポイント経路は、自己免疫応答および抗癌免疫応答の両方を調節する（Ｉｓａｋｏｖ，Ｎ．，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ２０１６；２（２）：１７）。自己免疫疾患治療では、免疫応答が抑制されるように、免疫阻害経路の効果を促進する、すなわち、刺激することが望ましい。逆に、癌治療では、免疫応答が刺激されるように、免疫阻害経路の効果を阻害すること、すなわち、拮抗することが望ましい。

ＰＤ－１は、Ｉ型細胞膜タンパク質である。ＰＤ－１経路の活性化は、細胞増殖の低減、細胞生存の低減、および炎症性サイトカイン（例えば、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、およびＩＬ－２）の阻害などの免疫細胞活性化の阻害につながる。ＰＤ－１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、単球、および樹状細胞などの直近に活性化された免疫細胞で発現し、その発現は、厳密に制御される。ヒト免疫応答の調節におけるＰＤ－１介在性シグナル伝達の重要性は、アンタゴニストＰＤ－１抗体での癌患者の治療の成功で実証された。更に、自己免疫疾患活性とＰＤ－１経路（Ｍｏｚａｆｆａｒｉａｎ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，２００８）およびＰＤ－１に対する自己抗体（Ｓｈｉ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，２０１７）との間には、他の既知の相関関係がある。ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体は当技術分野で公知である（例えば、国際公開第２０１９／１６８７４５号および国際公開第２０２０／２４７６４８号を参照）。

ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３）は、細胞表面阻害受容体である。ＬＡＧ－３は、Ｔ細胞エフェクター機能を調節し、癌のためのＬＡＧ－３アンタゴニスト療法が評価されている（Ｌｅｃｏｃｑ Ｑ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｓｃｉ．２０２１；２２（１）：７５；Ｃｈｏｃａｒｒｏ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０２２；１４（Ｃ）：１０００７９．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｏｔｅｃｈ．２０２２．１０００７９）。癌の治療のためのＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性アンタゴニスト抗体が開示されている。（Ａｎｇｉｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０２０；２０４（４）：８１０－８１８）。ＬＡＧ－３アゴニスト抗体は、開示されている（（Ａｎｇｉｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０２０；２０４（４）：８１０－８１８）。しかしながら、ＰＤ－１／ＬＡＧ－３デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、以前に報告されていないと考えられる。

ヒトＬＡＧ－３に結合し、Ｔ細胞を枯渇させず、ＬＡＧ－３シグナル伝達経路を刺激し、最適なアゴニスト活性のための望ましい会合速度および解離速度でヒトＰＤ－１およびヒトＬＡＧ－３に結合し、ＰＤ－１およびＬＡＧ－３シグナル伝達経路の各々を同時に刺激し、Ｔ細胞の枯渇によるのではなくＴ細胞受容体シグナル伝達の下方調節を促進することによってＴ細胞増殖を低下させ、免疫学的に関連する状況でヒトＰＤ－１およびヒトＬＡＧ－３を刺激してインビボ有効性を達成し、ヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体とヒトＰＤ－１アゴニスト抗体との組み合わせの効果よりも大きいインビトロおよび／またはインビボでの効果を示し、自己免疫障害の治療および／または予防のための二重特異性分子として十分な効力を示し、ならびに／あるいは薬物切り替えのための有効な代替物を提供するデュアルアゴニスト抗体構築物に関する自己免疫疾患を治療する治療は知られておらず、別のヒトＰＤ－１アゴニスト抗体またはヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体による自己免疫障害の治療中に、少なくとも１つの有害事象および／または無効性（特に、抗薬物抗体（ＡＤＡ）が介在する有効性の低下）のために治療が中断される。

したがって、本開示は、新規ヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体および新規ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。

本開示は、操作されたヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を用いた免疫チェックポイント刺激による自己免疫および／または免疫寛容関連障害の予防、下方調節、または改善に有用な組成物および方法を提供することによって、当技術分野の進歩を提供する。本開示のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、好ましくは、免疫応答の適応性アームの阻害、抗原特異的免疫プロセスの廃止、およびそれによって、基礎疾患病理に直接対処することを通して、免疫病理を改善または回復することが可能であり得る。このような抗体の使用は、臨床的には、治療されている疾患の長期持続性または寛解をもたらし得る。

二重特異性分子の調製は、一般に、予測できない試みであることが知られている。例えば、ＩｇＧ二重特異性抗体を生成するために２つの重鎖および２つの軽鎖を共発現させることにより、いくつかの誤った構築物および望ましくない副産物をもたらし得る（Ｌｅｗｉｓ ＳＭ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１４；３２：１９１－２０２；Ｌｅａｖｅｒ－Ｆａｙ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２０１６；２４：６４１－６５１）。したがって、本開示は、Ｆｃ受容体結合を減少させ、補体結合を最小限に抑え、酸化を最小限に抑え、ヘテロマブの構築物を促進し、ヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１と交差反応性を有し、自己免疫障害の少なくとも１つの前臨床モデルにおいてインビボ効力を示すヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１二重特異性分子を提供する。

本開示は、ヒトＬＡＧ－３に結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗原結合ドメインを含み、
ＶＨは、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）：配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号２を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３を含むＨＣＤＲ３を含み；
ＶＬは、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）：配列番号４を含むＬＣＤＲ１、配列番号５を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６を含むＬＣＤＲ３を含む、抗体を提供する。

好ましい一実施形態では、ＶＨは、配列番号１３を含み、ＶＬは、配列番号１４を含む。

好ましい一実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、配列番号１５を含む定常重（ＣＨ）領域および配列番号１６を含む定常軽（ＣＬ）領域を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、配列番号２２を含む軽鎖（ＬＣ）、および配列番号３７を含む重鎖（ＨＣ）を含み、配列番号３７の３２８位のＸは、リジン残基またはアラニン残基である。別の好ましい実施形態では、配列番号３７の３２８位のＸは、リジン残基である。別の好ましい実施形態では、配列番号３７の３２８位のＸは、アラニン残基である。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、（ａ）配列番号２２を含むＬＣ、および（ｂ）配列番号２１を含むＨＣを含む。別の好ましい実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２２を含むＬＣ、および（ｂ）配列番号３１を含むＨＣを含む。別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、配列番号２１を含むＨＣ、および配列番号２２を含むＬＣを含む。

本開示はまた、ヒトＬＡＧ－３に結合する抗体であって、その抗体は、ＶＨおよびＶＬを含む抗原結合ドメインを含み、
ＶＨは、重鎖相補性決定領域：配列番号４４を含むＨＣＤＲ１、配列番号４５を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４７を含むＨＣＤＲ３を含み；
ＶＬは、軽鎖相補性決定領域：配列番号４８を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９を含むＬＣＤＲ２、および配列番号５０を含むＬＣＤＲ３を含む、抗体を提供する。

好ましい一実施形態では、ＶＨは、配列番号５３を含み、ＶＬは、配列番号５６を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、配列番号５８を含む定常重ＣＨ領域および配列番号６０を含むＣＬ領域を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、配列番号６４を含むＬＣ、および配列番号６１を含むＨＣを含む。

本開示はまた、ヒトＬＡＧ－３に結合する抗体であって、その抗体は、ＶＨおよびＶＬを含む抗原結合ドメインを含み、
ＶＨは、重鎖相補性決定領域：配列番号５１を含むＨＣＤＲ１、配列番号５２を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４７を含むＨＣＤＲ３を含み；
ＶＬは、軽鎖相補性決定領域：配列番号４８を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９を含むＬＣＤＲ２、および配列番号５０を含むＬＣＤＲ３を含む、抗体を提供する。

好ましい一実施形態では、ＶＨは、配列番号５４を含み、ＶＬは、配列番号５６を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、配列番号５８を含むＣＨ領域および配列番号６０を含むＣＬ領域を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、配列番号６４を含むＬＣ、および配列番号６２を含むＨＣを含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである。別の好ましい実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプである。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３の抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。

抗体のＦｃ領域におけるリジンからアラニンへの置換は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを減少させるのに有用でありうる。本開示はまた、配列番号２２または配列番号３７の一方または両方をコードする配列を含む核酸であって、配列番号３７における３２８位のＸが、リジン残基またはアラニン残基である核酸を提供する。好ましい一実施形態では、配列番号３７の３２８位のＸは、リジン残基である。別の好ましい実施形態では、配列番号３７の３２８位のＸは、アラニン残基である。別の好ましい実施形態では、本開示は、核酸を含むベクターを提供する。

別の好ましい実施形態では、本開示は、配列番号２２をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３７をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む組成物であって、配列番号３７の３２８位のＸが、リジン残基またはアラニン残基である、組成物を提供する。

本開示はまた、配列番号６４または配列番号６１の一方または両方をコードする配列を含む核酸を提供する。本開示はまた、配列番号６４または配列番号６２の一方または両方をコードする配列を含む核酸を提供する。

別の好ましい実施形態では、本開示は、配列番号６４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号６１をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む組成物を提供する。

別の好ましい実施形態では、本開示は、配列番号６４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号６２をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む組成物を提供する。

好ましい一実施形態では、本開示は、ベクターを含む細胞を提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、組成物を含む細胞を提供する。別の好ましい実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。別の好ましい実施形態では、細胞または哺乳動物細胞は、単離される。別の好ましい実施形態では、本開示は、抗体が発現される条件下において、細胞を培養し、次いで発現された抗体を培養培地から回収することを含む、抗体を産生する方法を提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、抗体が発現される条件下において、細胞を培養し、発現された抗体を培養培地から回収することによって産生される抗体を提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、本発明のヒトＬＡＧ－３抗体を含む組成物を提供する。

本開示はまた、本発明のヒトＬＡＧ－３抗体、および医薬的に許容され得る賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物を提供する。好ましい一実施形態では、医薬組成物は、アルギニンを含む。

本開示はまた、本発明のヒトＬＡＧ－３抗体、および医薬的に許容され得る賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物のプレフィルドシリンジを提供する。好ましい一実施形態では、医薬組成物は、アルギニンを含む。

本開示はまた、自己免疫疾患の治療を必要とする対象において自己免疫疾患を治療する方法であって、治療有効量の本発明のヒトＬＡＧ－３抗体を対象に投与することを含む方法を提供する。好ましい一実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである。好ましい一実施形態では、自己免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、寛解期にある。

本開示はまた、治療に使用するための本発明のヒトＬＡＧ－３抗体を提供する。

本開示はまた、自己免疫疾患の治療に使用するための本発明のヒトＬＡＧ－３抗体を提供する。好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである。好ましい一実施形態では、自己免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、寛解期にある。

本開示はまた、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスの治療における使用のための、本発明のヒトＬＡＧ－３抗体を含む医薬組成物を提供する。好ましい一実施形態では、免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、寛解期にある。

本開示はまた、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病または全身性エリテマトーデスを治療するための医薬の製造における、本発明のヒトＬＡＧ－３抗体の使用を提供する。

本開示はまた、ヒトＰＤ－１に結合する抗体であって、その抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗原結合ドメインを含み、
ＶＨは、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）：配列番号７を含むＨＣＤＲ１、配列番号８を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９を含むＨＣＤＲ３を含み；
ＶＬは、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）：配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２を含むＬＣＤＲ３を含む、抗体を提供する。

好ましい一実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体ＶＨは、配列番号１７を含み、ＶＬは、配列番号２０を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号１９を含む定常重（ＣＨ）領域および配列番号２０を含む定常軽領域を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号２４を含む軽鎖（ＬＣ）、および配列番号３８を含む重鎖（ＨＣ）を含み、配列番号３８の３２８位のＸは、リジン残基またはアラニン残基である。別の好ましい実施形態では、配列番号３８の３２８位のＸは、リジン残基である。別の好ましい実施形態では、配列番号３８の３２８位のＸは、アラニン残基である。

別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体は、（ａ）配列番号２４を含むＬＣ、および（ｂ）配列番号２３を含むＨＣを含む。別の好ましい実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２４を含むＬＣ、および（ｂ）配列番号３２を含むＨＣを含む。別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号２３を含む重鎖、および配列番号２４を含む軽鎖を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体ＶＨは、配列番号５５を含み、ＶＬは、配列番号５７を含む。別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号５９を含む定常重（ＣＨ）領域および配列番号２０を含む定常軽領域を含む。別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号６５を含む軽鎖、および配列番号６３を含む重鎖を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである。別の好ましい実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプである。

別の好ましい実施形態では、ヒトＰＤ－１の抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。

本開示はまた、配列番号２４または配列番号３８をコードする配列を含む核酸であって、配列番号３８における３２８位のＸは、リジン残基またはアラニン残基である核酸を提供する。好ましい一実施形態では、配列番号３８の３２８位のＸは、リジン残基である。別の好ましい実施形態では、配列番号３８の３２８位のＸは、アラニン残基である。別の好ましい実施形態では、本開示は、核酸を含むベクターを提供する。

別の好ましい実施形態では、本開示は、配列番号２４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３８をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む組成物であって、配列番号３８の３２８位のＸが、リジン残基またはアラニン残基である、組成物を提供する。

本開示はまた、配列番号６４または配列番号６２をコードする配列を含む核酸を提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、核酸を含むベクターを提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、配列番号６４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号６２をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む組成物を提供する。

好ましい一実施形態では、本開示は、ベクターを含む細胞を提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、組成物を含む細胞を提供する。別の好ましい実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。別の好ましい実施形態では、細胞または哺乳動物細胞は、単離される。別の好ましい実施形態では、本開示は、抗体が発現される条件下において細胞を培養し、次いで発現された抗体を培養培地から回収することを含む、抗体を産生する方法を提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、抗体が発現される条件下において細胞を培養し、発現された抗体を培養培地から回収することによって産生される抗体を提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、本発明のヒトＰＤ－１抗体を含む組成物を提供する。

本開示はまた、デュアルアゴニスト抗体が、ヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１の各々に結合する、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。好ましい実施形態では、デュアルアゴニストは、ヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１に同時に結合する。別の好ましい実施形態では、デュアルアゴニストは、同一のＴ細胞上のヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１に同時に結合する。

本開示はまた、配列番号４１（ヒトＬＡＧ－３）のアミノ酸残基１８３～２０２を含むヒトＬＡＧ－３上のエピトープに結合するヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体を提供する。本開示はまた、配列番号４１のアミノ酸残基２０３～２２５を含むヒトＬＡＧ－３上のエピトープに結合するヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体を提供する。本開示はまた、配列番号４１のアミノ酸残基１８３～２０２および配列番号４１のアミノ酸残基２０３～２２５を含むヒトＬＡＧ－３上のエピトープに結合するヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体を提供する。

本開示はまた、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体であって、二重特異性抗体のＬＡＧ－３結合部分が、配列番号４１（ヒトＬＡＧ－３）のアミノ酸残基１８３～２０２を含むヒトＬＡＧ－３上のエピトープに結合する、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。本開示はまた、ヒトＬａｇ－／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体であって、二重特異性抗体のＬＡＧ－３結合部分が、配列番号４１（ヒトＬＡＧ－３）のアミノ酸残基２０３～２２５を含むヒトＬＡＧ－３上のエピトープに結合する、ヒトＬａｇ－／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。本開示はまた、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体であって、二重特異性抗体のＬＡＧ－３結合部分が、配列番号４１（ヒトＬＡＧ－３）のアミノ酸残基１８３～２０２および配列番号４１のアミノ酸残基２０３～２２５を含むヒトＬＡＧ－３上のエピトープに結合する、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。

本開示はまた、本発明のヒトＰＤ－１抗体、および医薬的に許容され得る賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物を提供する。

本開示はまた、自己免疫疾患の治療を必要とする対象において自己免疫疾患を治療する方法であって、治療有効量の本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を対象に投与することを含む方法を提供する。好ましい一実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである。好ましい一実施形態では、自己免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、寛解期にある。別の好ましい実施形態では、対象は、同一のＴ細胞またはＴ細胞の集団上のＬＡＧ－３およびＰＤ－１の存在についてスクリーニングされている。別の好ましい実施形態では、対象は、ＬＡＧ－３およびＰＤ－１が両方とも同一のＴ細胞またはＴ細胞の集団上に存在するものとして同定されている。

本開示はまた、治療に使用するための本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。

本開示はまた、自己免疫疾患の治療に使用するための本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである。好ましい一実施形態では、自己免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、寛解期にある。

本開示はまた、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスの治療における使用のための、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を含む医薬組成物を提供する。好ましい一実施形態では、免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、寛解期にある。

本開示はまた、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病または全身性エリテマトーデスを治療するための医薬の製造における、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体の使用を提供する。

所望される質を促進する突然変異は、当業者に公知である。しかしながら、そのような突然変異があるとしても、いずれが、またはどれだけ多くのそのような突然変異が、いずれの特定の単一特異性抗体または二重特異性抗体の所望される質を促進するかを予測することはできない。本発明は、好ましい二重特異性抗体構築物、Ｃ１ｑ結合の低減または排除、非特異的および自己相互作用の低減または排除、組成物または製剤の粘度の低減、脱アミド残基の排除、および免疫原性の低減の１つまたはそれ以上を促進するアミノ酸残基突然変異を含む抗体を提供する。

好ましい一実施形態では、ＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、本発明のヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体のＣＤＲ（配列番号１～６）およびヒトＰＤ－１アゴニスト抗体のＣＤＲを含む。別の好ましい実施形態では、ＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、本発明のヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体のＣＤＲ（配列番号１～６）および配列番号７～１２のヒトＰＤ－１アゴニスト抗体ＣＤＲ配列を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、
（ａ）第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）および第１の軽鎖可変領域（ＶＬ１）を含むヒトＬＡＧ－３に結合する第１の抗原結合ドメインであって、ＶＨ１が、配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号２を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３を含むＨＣＤＲ３を含み；ＶＬ１が、配列番号４を含むＬＣＤＲ１、配列番号５を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６を含むＬＣＤＲ３を含む、第１の抗原結合ドメイン；ならびに
（ｂ）第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）および第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）を含むヒトＰＤ－１に結合する第２の抗原結合ドメインであって、ＶＨ２が、配列番号７を含むＨＣＤＲ１、配列番号８を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９を含むＨＣＤＲ３を含み；ＶＬ２が、配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２を含むＬＣＤＲ３を含む、第２の抗原結合ドメイン
を含む。

好ましい一実施形態では、ＶＨ１は、配列番号１３を含み、ＶＬ１は、配列番号１４を含む。別の好ましい実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１７を含み、ＶＬ２は、配列番号１８を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含み、第１の重鎖（ＨＣ１）は、第１のＶＨ１および第１の重鎖定常領域を含み、第１の軽鎖（ＬＣ１）は、ＶＬ１および第１の軽鎖定常領域を含み、第２の重鎖（ＨＣ２）は、第２のＶＨ２および第２の重鎖定常領域を含み、第２の軽鎖（ＬＣ２）は、第２のＶＬ２および第２の軽鎖定常領域を含む。別の好ましい実施形態では、第２の軽鎖（ＬＣ２）は、ＶＬ２および第２の軽鎖定常領域を含み、ＨＣ１は、鎖間ジスルフィド結合によってＬＣ１に連結され、ＨＣ２は、鎖間ジスルフィド結合によってＬＣ２に連結され、ＨＣ１は、鎖間ジスルフィド結合によってＨＣ２に連結される。

別の好ましい実施形態では、ＨＣ１は、配列番号３７を含み、配列番号３７の３２８位のＸは、リジンまたはアラニンであり、ＬＣ１は、配列番号２２を含み、ＨＣ２は、配列番号３８を含み、配列番号３８の３２４位のＸは、リジンまたはアラニンであり、ＬＣ２は、配列番号２４を含む。

別の好ましい実施形態では、配列番号３７の３２８位のＸは、リジンであり、配列番号３８の３２４位のＸは、リジンである。別の好ましい実施形態では、配列番号３７の３２８位のＸは、アラニンであり、配列番号３８の３２４位のＸは、アラニンである。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、配列番号２１を含む第１のＨＣ１、配列番号２２を含む第１のＬＣ１、配列番号２３を含む第２のＨＣ２、および配列番号２４を含む第２のＬＣ２を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、配列番号２１を含む第１のＨＣ１、配列番号２２を含む第１のＬＣ１、配列番号２３を含む第２のＨＣ２、および配列番号２４を含む第２のＬＣ２を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、配列番号３１を含む第１のＨＣ１、配列番号２２を含む第１のＬＣ１、配列番号３２を含む第２のＨＣ２、および配列番号２４を含む第２のＬＣ２を含む。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、配列番号１５を含む第１の定常重領域（ＣＨ１）、配列番号１６を含む第１の定常軽領域（ＣＬ１）、配列番号１９を含む第２の定常重領域（ＣＨ２）、および配列番号２０を含む第２の定常軽領域（ＣＬ２）を含む。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、配列番号２９を含むＣＨ１、配列番号１６を含むＣＬ１、配列番号３０を含むＣＨ２、および配列番号２０を含む第２の定常軽領域（ＣＬ２）を含む。

別の好ましい実施形態では、二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。

本開示はまた、配列番号２２、２４、３７、および３８のうちの１つまたはそれ以上をコードする配列を含む核酸であって、配列番号３７の３２８位のＸは、リジン残基またはアラニン残基であり、配列番号３８の３２４位のＸは、リジン残基またはアラニン残基であって、配列番号３７のアミノ酸残基３２８がリジン残基である場合、配列番号３８の３２４位のＸは、リジン残基であり、配列番号３７の３２８位のＸがアラニン残基である場合、配列番号３８の３２４位のＸは、アラニン残基である、核酸を提供する。

本開示はまた、配列番号２２、２４、３７および３８のポリペプチドのうちの１つまたはそれ以上をコードする配列を含む核酸を含む細胞であって、配列番号３７の３２８位のＸは、リジン残基またはアラニン残基であり、配列番号３８のアミノ酸残基３２４は、リジン残基またはアラニン残基であって、配列番号３７の３２８位のＸがリジン残基である場合、配列番号３８の３２４位のＸは、リジン残基であり、配列番号３７の３２８位のＸがアラニン残基である場合、配列番号３８の３２４位のＸは、アラニン残基であり、細胞は、１つまたはそれ以上のポリペプチドを発現することができる、細胞を提供する。

本発明のＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体の別の好ましい実施形態では、ＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、本発明のヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体のＣＤＲ（配列番号４４、４５および４７～５０）およびヒトＰＤ－１アゴニスト抗体のＣＤＲを含む。別の好ましい実施形態では、ＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、本発明のヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体のＣＤＲ（配列番号４４、４５および４７～５０）および配列番号７、４６および９～１２のヒトＰＤ－１アゴニスト抗体ＣＤＲ配列を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、
（ａ）第１のＶＨ１および第１のＶＬ１を含むヒトＬＡＧ－３に結合する第１の抗原結合ドメインであって、ＶＨ１が、配列番号４４を含むＨＣＤＲ１、配列番号４５を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４７を含むＨＣＤＲ３を含み；ＶＬ１が、配列番号４８を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９を含むＬＣＤＲ２、および配列番号５０を含むＬＣＤＲ３を含む、第１の抗原結合ドメイン；ならびに
（ｂ）第２のＶＨ２および第２のＶＬ２を含むヒトＰＤ－１に結合する第２の抗原結合ドメインであって、ＶＨ２が、配列番号７を含むＨＣＤＲ１、配列番号４６を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９を含むＨＣＤＲ３を含み；ＶＬ２が、配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２を含むＬＣＤＲ３を含む、第２の抗原結合ドメイン
を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、配列番号６１を含む第１のＨＣ１、配列番号６４を含む第１のＬＣ１、配列番号６３を含む第２のＨＣ１、および配列番号６５を含む第２のＬＣ１を含む。

別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、配列番号６２を含む第１のＨＣ１、配列番号６４を含む第１のＬＣ１、配列番号６３を含む第２のＨＣ１、および配列番号６５を含む第２のＬＣ１を含む。

別の好ましい実施形態では、二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。

本開示はまた、配列番号６６、６８、６９および７０のうちの１つまたはそれ以上をコードする配列を含む核酸を提供する。本開示はまた、配列番号６１、６３、６４および６５のポリペプチドのうちの１つまたはそれ以上をコードする配列を含む核酸を含む細胞を提供する。

本開示はまた、配列番号６７～７０の１つまたはそれ以上をコードする配列を含む核酸を提供する。本開示はまた、配列番号６２～６５のポリペプチドの１つまたはそれ以上をコードする配列を含む核酸を含む細胞を提供する。

細胞の好ましい一実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。別の好ましい実施形態では、細胞または哺乳動物細胞は、単離される。別の好ましい実施形態では、本開示は、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト抗体が発現される条件下において細胞を培養し、次いで発現された抗体を培養培地から回収することを含む、抗体を産生する方法を提供する。別の好ましい実施形態では、本開示は、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト抗体が発現される条件下において細胞を培養し、発現された抗体を培養培地から回収することによって産生される抗体を提供する。

本開示はまた、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体、および医薬的に許容され得る賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物を提供する。

本開示はまた、自己免疫疾患の治療を必要とする対象において自己免疫疾患を治療する方法であって、治療有効量の本発明の二重特異性抗体を対象に投与することを含む方法を提供する。好ましい一実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである。別の好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、寛解期にある。別の好ましい実施形態では、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、対応する単一特異性ヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体と対応する単一特異性ヒトＰＤ－１抗体との組み合わせの効果よりも大きい効果をインビトロおよび／またはインビボで示す。

本開示はまた、治療に使用するための本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。

本開示はまた、自己免疫疾患の治療に使用するための本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を提供する。好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである。好ましい一実施形態では、自己免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、寛解期にある。

本開示はまた、自己免疫疾患の治療における使用のための、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、寛解期にある。

本開示はまた、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病または全身性エリテマトーデスを治療するための医薬の製造における、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体の使用を提供する。好ましい一実施形態では、免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、寛解期にある。

本明細書に記載の治療方法に言及する実施形態では、そのような実施形態はまた、その治療に使用するための、または代替的にその治療に使用するための医薬品の製造に使用するための、更なる実施形態でもある。

好ましい一実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３抗体または本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、実質的に純粋である。別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３抗体または本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、無菌である。

本明細書で使用される「自己免疫疾患」という用語は、自己の細胞および／若しくは組織または移植された細胞および／若しくは組織に対する不適切または望ましくない免疫反応から生じる望ましくない状態を指す。「自己免疫疾患」という用語は、体液性または細胞性免疫応答によって媒介されるかにかかわらず、そのような状態を含むことを意味する。例示的な自己免疫疾患または障害は、これらに限定されないが、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、固形臓器移植拒絶、血管炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）、多発性硬化症（ＭＳ）、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）、乾癬（ＰｓＯ）、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、シェーグレン症候群（ＳｊＳ）、自己免疫性肝炎、強皮症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧血、慢性アレルギー性疾患（喘息、花粉症、またはアレルギー性鼻炎など）、クローン病、男性または女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、自然流産、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、慢性ウイルス感染症、および重症筋無力症を含む。本開示の目的のために、好ましい自己免疫疾患は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、固形臓器移植拒絶、血管炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）、多発性硬化症（ＭＳ）、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）、乾癬（ＰｓＯ）、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、関節リウマチ（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、シェーグレン症候群（ＳｊＳ）、自己免疫性肝炎、および強皮症である。

好ましい実施形態では、免疫疾患は、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、関節リウマチである。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、潰瘍性大腸炎である。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、１型糖尿病である。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、全身性エリテマトーデスである。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、活動性疾患である。別の好ましい実施形態では、免疫疾患は、寛解期にある。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、ヒトＬＡＧ－３に結合するが、Ｔ細胞を枯渇させない。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、ＬＡＧ－３シグナル伝達経路を刺激する。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、最適なアゴニスト活性のための望ましい会合速度および解離速度でヒトＰＤ－１およびヒトＬＡＧ－３に結合する。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、ＰＤ－１およびＬＡＧ－３シグナル伝達経路の各々を同時に刺激する。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、Ｔ細胞の枯渇によるのではなく、Ｔ細胞受容体シグナル伝達の下方調節を促進することによって、Ｔ細胞増殖を減少させる。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、免疫学的に関連する状況においてヒトＰＤ－１およびヒトＬＡＧ－３を刺激して、インビボ有効性を達成する。

別の好ましい実施形態では、本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、ヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体とヒトＰＤ－１アゴニスト抗体との組み合わせの効果よりも大きい効果をインビトロおよび／またはインビボで示す。

本開示はまた、（ａ）本発明のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を、レポーター遺伝子の酵素アクセプターサブユニットに融合させたヒトＰＤ－１の細胞外ドメインおよび酵素ドナーサブユニットに融合させたヒトＬＡＧ－３の細胞外ドメインを発現する細胞と接触させること；（ｂ）接触させた細胞を、二重特異性抗体がヒトＰＤ－１の細胞外ドメインおよびヒトＬＡＧ－３の細胞外ドメインに結合するのに適した条件下でインキュベートすること；（ｃ）細胞をレポーター化合物と接触させること；（ｄ）レポーター化合物の量をアッセイすること；および（ｅ）細胞に結合する二重特異性抗体についてのＩＣ５０を決定することを含む方法を提供する。好ましい一実施形態では、レポーター遺伝子の酵素アクセプターサブユニットは、β－ガラクトシダーゼであり、酵素ドナーサブユニットは、β－ガラクトシダーゼのＰＫ１酵素ドナーサブユニットである。別の好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、１）配列番号２１の重鎖（ＨＣ）および配列番号２２の軽鎖（ＬＣ）、ならびに２）配列番号２３のＨＣおよび配列番号２４のＬＣを含む。別の好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、１）配列番号３１のＨＣおよび配列番号２２のＬＣ、ならびに２）配列番号３２のＨＣおよび配列番号２４のＬＣを含む。別の好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、１）配列番号６１のＨＣおよび配列番号６４のＬＣ、ならびに２）配列番号６３のＨＣおよび配列番号６５のＬＣを含む。別の好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、１）配列番号６２のＨＣおよび配列番号６４のＬＣ、ならびに２）配列番号６３のＨＣおよび配列番号６５のＬＣを含む。

本明細書で使用される場合、「ＰＤ－１」は、プログラム細胞死１を指し、プログラム死１（ＰＤ－１；ＣＤ２７９）としても知られており、細胞外ＩｇＶドメイン、続いて膜貫通および細胞内ドメインを含有する拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリーに属するＩ型細胞膜タンパク質である。

本明細書で使用される場合、「ｈＰＤ－１」または「ヒトＰＤ－１」は、野生型ヒトＰＤ－１、例えば、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を有する野生型ヒトＰＤ－１（すなわち、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００５００９．２）を指す。

ＰＤ－１ポリペプチド「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、膜貫通および細胞質ドメインを本質的に含まないＰＤ－１ポリペプチドの形態を指す。好ましくは、ＰＤ－１ ＥＣＤは、膜貫通および細胞質ドメインの１％未満を有し、より好ましくは、ＰＤ－１ ＥＣＤは、そのようなドメインの０．５％未満を有する。更により好ましくは、ヒトＰＤ－１ ＥＣＤポリペプチドは、配列番号４０に示される通りである。ＰＤ－１ポリペプチドＥＣＤは、当該技術分野で知られる方法を使用して調製され得る。あるいは、ヒトＰＤ－１ポリペプチドＥＣＤは、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；参照番号１０３７７－Ｈ０８）およびＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ；ｃａｔ．＃８９８６－ＰＤ）などの様々な販売業者から商業的に購入され得る。

本明細書で使用される場合、「ＬＡＧ－３」は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する、ＣＤ２２３としても知られるリンパ球活性化遺伝子３を指す。ＬＡＧ－３、ＬＡＧ３、Ｌａｇ－３およびＬａｇ３という用語は同義である。

本明細書で使用される場合、「ｈＬＡＧ－３」または「ヒトＬＡＧ－３」は、野生型ヒトＬＡＧ－３、好ましくは、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を有する野生型ヒトＬＡＧ－３（すなわち、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００２２７７）を指す。

ＬＡＧ－３ポリペプチド「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、膜貫通および細胞質ドメインを本質的に含まないＬＡＧ－３ポリペプチドの形態を指す。好ましくは、ＬＡＧ－３ ＥＣＤは、膜貫通および細胞質ドメインの１％未満を有し、より好ましくは、ＬＡＧ－３ ＥＣＤは、そのようなドメインの０．５％未満を有する。更により好ましくは、ヒトＬＡＧ－３’ ＥＣＤポリペプチドは、配列番号４２に示される通りである。ＬＡＧ－３ポリペプチドＥＣＤは、当該技術分野で知られる方法を使用して調製され得る。あるいは、ヒトＬＡＧ－３ポリペプチドＥＣＤは、Ｂｅｒｔｙｎ Ｂｉｏｒｅａｇｅｎｔ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３２０８３）などの様々な販売業者から商業的に購入され得る。

本明細書で使用される場合、「ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体」は、ヒトＰＤ－１に結合する抗体を指し、インビボで投与される場合、抗二本鎖ＤＮＡ（ｄｓ－ＤＮＡ）力価の低減、疾患スコアの低減、または炎症性サイトカインの低減などのうちの少なくとも１つの有意に低下した自己免疫活性をもたらす。

本明細書で使用される場合、「ヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体」は、ヒトＬＡＧ－３に結合する抗体を指し、インビボで投与される場合、抗二本鎖ＤＮＡ（ｄｓ－ＤＮＡ）力価の低減、疾患スコアの低減、または炎症性サイトカインの低減などの少なくとも１つの有意に低下した自己免疫活性をもたらす。好ましい一実施形態では、ＬＡＧ－３アゴニスト抗体は「抗体Ｅ」であり、これは、配列番号２１のＨＣおよび配列番号２２のＬＣを有するヒトＬＡＧ－３結合アゴニスト抗体を指す。

別の好ましい実施形態では、ＬＡＧ－３アゴニスト抗体は、配列番号３１のＨＣおよび配列番号２２のＬＣを有する抗体である抗体Ｅの変異体である。

別の好ましい実施形態では、ＬＡＧ－３アゴニスト抗体は「抗体Ｆ」であり、これは、配列番号６１のＨＣおよび配列番号６４のＬＣを有するヒトＬＡＧ－３結合アゴニスト抗体を指す。

別の好ましい実施形態では、ＬＡＧ－３アゴニスト抗体は、配列番号６２のＨＣおよび配列番号６４のＬＣを有する抗体である抗体Ｆの変異体である。

別の好ましい実施形態では、ＬＡＧ－３アゴニスト抗体は、アミノ酸残基３０にセリンからヒスチジンへの置換およびアミノ酸残基６１にトレオニンからセリンへの置換を有する配列番号６１のＨＣおよび配列番号６４のＬＣを有する抗体である、本明細書で「抗体Ｇ」と呼ばれる抗体Ｆの変異体である。

本明細書で使用される場合、「ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト抗体」は、（ａ）配列番号１～１２、または（ｂ）配列番号４４、４５および４７～５０並びに７、４６および９～１２のＣＤＲ配列を含む抗体を指す。好ましい実施形態では、デュアルアゴニスト抗体は、１）配列番号１３の可変重鎖（ＶＨ）配列および配列番号１４の可変軽鎖（ＶＬ）配列、並びに２）配列番号１７のＶＨ配列および配列番号１８のＶＬ配列を含む。別の好ましい実施形態では、デュアルアゴニスト抗体は「抗体Ａ」であり、これは、１）配列番号２１のＨＣおよび配列番号２２のＬＣ、並びに２）配列番号２３のＨＣおよび配列番号２４のＬＣを有するヒトＰＤ－１結合およびヒトＬＡＧ－３結合デュアルアゴニスト抗体を指す。別の好ましい実施形態では、デュアルアゴニスト抗体は「抗体Ｂ」であり、これは、１）配列番号３１のＨＣおよび配列番号２２のＬＣ、並びに２）配列番号３２のＨＣおよび配列番号２４のＬＣを有するヒトＰＤ－１結合およびヒトＬＡＧ－３結合抗体を指す。抗体ＡおよびＢは、ヒトＬＡＧ－３上の同一のエピトープに結合する。

別の好ましい実施形態では、デュアルアゴニスト抗体は、１）配列番号５３の可変重鎖ＶＨ配列および配列番号５６の可変軽鎖ＶＬ配列、並びに２）配列番号５５のＶＨ配列および配列番号５７のＶＬ配列を含む。別の好ましい実施形態では、デュアルアゴニスト抗体は「抗体Ｃ」であり、これは、１）配列番号６１のＨＣおよび配列番号６４のＬＣ、並びに２）配列番号６３のＨＣおよび配列番号６５のＬＣを有するヒトＰＤ－１結合およびヒトＬＡＧ－３結合デュアルアゴニスト抗体を指す。抗体ＣおよびＤは、抗体ＡおよびＢが結合するヒトＬＡＧ－３上のエピトープとは異なる、ヒトＬＡＧ－３上の同一のエピトープに結合する。

好ましい実施形態では、デュアルアゴニスト抗体は、１）配列番号５４の可変重鎖ＶＨ配列および配列番号５６の可変軽鎖ＶＬ配列、並びに２）配列番号５５のＶＨ配列および配列番号５７のＶＬ配列を含む。別の好ましい実施形態では、デュアルアゴニスト抗体は「抗体Ｄ」であり、これは、１）配列番号６２のＨＣおよび配列番号６４のＬＣ、並びに２）配列番号６３のＨＣおよび配列番号６５のＬＣを有するヒトＰＤ－１結合およびヒトＬＡＧ－３結合デュアルアゴニスト抗体を指す。

本明細書に開示される抗ヒトＬＡＧ－３／抗ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト分子、例えば、デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、開示される最初のそのようなデュアルアゴニスト分子であると考えられる。

本明細書における開示は、同一のＴ細胞上にヒトＬＡＧ－３標的タンパク質およびＰＤ－１標的タンパク質の両方を含有するＴ細胞集団の最初の報告であるとも考えられる。本明細書における開示は、ヒトＬＡＧ－３がＣＤ４＋Ｔ細胞上よりもＣＤ８＋Ｔ細胞上でより高度に発現され、ヒトＰＤ－１がＣＤ８＋Ｔ細胞上よりもＣＤ４＋Ｔ細胞上でより高度に発現されるという最初の報告であるとも考えられる。本明細書における開示は、同一のＴ細胞上のヒトＬＡＧ－３標的タンパク質の濃度よりも高い濃度のヒトＰＤ－１標的タンパク質を含有するＴ細胞集団の最初の報告であるとも考えられる。好ましい一実施形態では、Ｔ細胞の表面上のＰＤ－１タンパク質対ＬＡＧ－３タンパク質の比は、約２：１、約２．５：１、約３：１、約３．５：１、約４：１、約４．５：１、約５：１、約５．５：１または約６：１である。別の好ましい実施形態では、Ｔ細胞の表面上のＰＤ－１タンパク質対ＬＡＧ－３タンパク質の比は、約３：１～約５：１である。

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体の実施形態には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性若しくは多重特異性抗体、またはコンジュゲート抗体が含まれる。抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ）、および任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）であってもよい。好ましい実施形態では、本発明の抗体または二重特異性抗体はＩｇＧ１である。

本開示の例示的な抗体は、４つのポリペプチド鎖：鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）から構成された、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）型抗体である。４つのポリペプチド鎖の各々のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００～１２５個以上のアミノ酸の可変領域を含む。４つのポリペプチド鎖の各々のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を含有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域から構成される。ＩｇＧアイソタイプは、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）に更に分割され得る。

ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が局在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に更に細分することができる。ＣＤＲはタンパク質の表面上に露出しており、抗原結合特異性のための抗体の重要な領域である。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成されており、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の３つのＣＤＲを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。アミノ酸残基のＣＤＲへの割り当ては、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、Ｎｏｒｔｈ（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，「Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））、またはＩＭＧＴ（ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９９；２７：２０９－２１２参照）に記載されるものを含む、周知のスキームによって実施され得る。本明細書の開示では、Ｋａｂａｔ法を使用してアミノ酸残基をＣＤＲに割り当てる。

本開示の実施形態はまた、本明細書で使用される場合、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ｓｃＦａｂ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄ断片などの、抗原または抗原のエピトープと特異的に相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部を含む、抗体断片または抗原結合断片を含む。

用語「抗原結合ドメイン」は、本明細書で使用される場合、抗原または抗原のエピトープに結合する部分を指す。例えば、本発明のヒトＬＡＧ－３抗体中の抗原結合ドメインは、ヒトＬＡＧ－３（配列番号４１）またはその断片、例えば、ＬＡＧ－３ ＥＣＤ（配列番号４２）に結合する。本発明の二重特異性抗体は、２つの抗原結合ドメインを含み、その一方は、ヒトＬＡＧ－３（配列番号４１）またはその断片、例えば、ＬＡＧ－３ ＥＣＤ（配列番号４２）に結合し、他方は、ヒトＰＤ－１（配列番号３９）またはその断片、例えば、ＰＤ－１ ＥＣＤ（配列番号４０）に結合する。

本明細書で使用される「二重特異性」という用語は、２つの異なる抗原結合ドメインを含む分子を指す。二重特異性結合分子は、２つの異なる抗原または同じ抗原の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性分子の例示的な実施形態は、本明細書に開示される二重特異性抗体を含む。

用語「刺激する」は、本明細書で使用される場合、抗体、抗体断片、または結合分子が、抗原に関連する１つまたはそれ以上の活性または機能を誘導または増加させる能力を指す。

好ましくは、本開示の抗体は、ヒトＩｇＧ１サブタイプであるＦｃ部分を含有する。ヒトＩｇＧ１がＦｃ－ガンマ受容体ファミリー（ＦｃγＲ）およびＣ１ｑに結合することは周知である。これらの受容体との相互作用は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができる。好ましい実施形態では、本発明のモノクローナル抗ヒトＬＡＧ－３抗体は実質的なＡＤＣＣ活性を示さない。別の好ましい実施形態では、本発明のモノクローナル抗ヒトＬＡＧ－３抗体はＡＤＣＣ活性を示さない。別の好ましい実施形態では、本発明の抗ヒトＬＡＧ－３／抗ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、実質的なＡＤＣＣ活性を示さない。別の好ましい実施形態では、本発明の抗ヒトＬＡＧ－３／抗ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、ＡＤＣＣ活性を示さない。

好ましい実施形態では、本発明のモノクローナル抗ヒトＬＡＧ－３抗体は、Ｔ細胞を実質的に枯渇させない。別の好ましい実施形態では、本発明のモノクローナル抗ヒトＬＡＧ－３抗体は、Ｔ細胞を枯渇させない。別の好ましい実施形態では、本発明の抗ヒトＬＡＧ－３／抗ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、Ｔ細胞を実質的に枯渇させない。別の好ましい実施形態では、本発明の抗ヒトＬＡＧ－３／抗ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、Ｔ細胞を枯渇させない。

ＣＨ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒトおよび他の哺乳動物の重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知である。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、例えば、標準的なＰＣＲ増幅によって取得され得る。

ＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子に変換され得る。ヒトおよび他の哺乳動物の軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知である。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって取得され得る。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であることができる。好ましい一実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ－３抗体の軽鎖定常領域はカッパ定常領域である。別の好ましい実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ－３／抗ＰＤ－１デュアルアゴニスト抗体について、抗ＬＡＧ－３アームの軽鎖定常領域はカッパ定常領域であり、抗ＰＤ－１アームの軽鎖定常領域はラムダ定常領域である。

「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書で互換的に使用される場合、天然ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、および／またはヌクレオチドの類似体を組み込んだＤＮＡ、ｃＤＮＡ、およびＲＮＡ分子等の一本鎖および／または二本鎖ヌクレオチド含有分子を含むヌクレオチドのポリマーを指す。本開示のポリヌクレオチドはまた、例えば、ＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼまたは合成反応によってその中に組み込まれた基質を含んでもよい。

本開示のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列に作動可能に連結された後に宿主細胞において発現し得る。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、およびジヒドロ葉酸レダクターゼを含む。

本開示の抗体は、哺乳動物細胞において容易に産生することができ、この非限定的な例は、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３、またはＣＯＳ細胞を含む。宿主細胞は、当該技術分野において周知の技術を使用して培養される。

目的のポリヌクレオチド配列（例えば、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび発現制御配列）を含むベクターは、細胞宿主のタイプに応じて異なる周知の方法によって宿主細胞に導入することができる。

タンパク質精製の様々な方法は、抗体を含むがこれらに限定されないタンパク質を精製するために使用されることができ、そのような方法は、当該技術分野で知られている。

本開示の別の実施形態では、細胞、抗体、または抗体をコードする核酸は単離形態で提供される。本明細書で使用する場合、「単離」という用語は、細胞環境で見出される任意の他の高分子種を含まないか、または実質的に含まない、細胞、タンパク質、ペプチド、または核酸を指す。「実質的に含まない」とは、本明細書中で使用する場合、目的のタンパク質、ペプチド、または核酸が（モル基準で）８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超の対象の高分子種を含むことを意味する。

本開示の抗体、またはそれを含む医薬組成物は、非経口経路によって投与されることができ、この非限定的な例は、皮下投与および静脈内投与である。本開示の抗体は、医薬的に許容され得る担体、希釈剤、または賦形剤とともに単回投与または複数回投与で患者に単独で投与され得る。本開示の医薬組成物は、当技術分野で周知の方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ ｅｄ．（２０１２），Ａ．Ｌｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ）によって調製することができ、本明細書に開示される抗体、および１つまたはそれ以上の医薬的に許容され得る担体、希釈剤、または賦形剤を含むことができる。

ヒトＰＤ－１（配列番号３９）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ、好ましくは、配列番号４０に示されるヒトＰＤ－１ ＥＣＤについてのヒトＰＤ－１アゴニスト抗体の親和性に関して本明細書で使用される、「ヒトＰＤ－１に結合する」とは、他に示されない限り、これに限定されないが、２５℃または３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約１×１０^－７Ｍ、約１ｘ１０^－８Ｍ、約１ｘ１０^－９Ｍ、約５ｘ１０^－９Ｍ、または約１ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄを意味することが意図される。より好ましくは、本開示のヒトＰＤ－１アゴニスト抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号３９）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号４０）に、２５℃または３７℃でのＳＰＲバイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約１ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。更により好ましくは、そのような抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号３９）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号４０）についての、２５℃または３７℃でのＳＰＲバイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約５ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０Ｍの親和性を有するであろう。更により好ましくは、そのような抗体は、それぞれ（本質的に本明細書に記載されるＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）８Ｋを使用するＳＰＲによって決定されるように）、約１．０ｘ１０^－４～約１．０ｘ１０^－３および約１．３ｘ１０^５～約２．０×１０^５のヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号４０）のＫ_ｏｎおよびＫ_ｏｆｆ値を有するであろう。

ヒトＬＡＧ－３（配列番号４１）またはヒトＬＡＧ－３ ＥＣＤ、好ましくは、配列番号４２に示されるヒトＬＡＧ－３ ＥＣＤについてのヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体の親和性に関して本明細書で使用される、「ヒトＬＡＧ－３に結合する」とは、他に示されない限り、これに限定されないが、２５℃または３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約１×１０^－７Ｍ、約１ｘ１０^－８Ｍ、約１ｘ１０^－９Ｍ、約５ｘ１０^－９Ｍ、または約１ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄを意味することが意図される。より好ましくは、本開示のヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体は、ヒトＬＡＧ－３（すなわち、配列番号４１）またはヒトＬＡＧ－３（例えば、配列番号４２）に、２５℃または３７℃でのＳＰＲバイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約１ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。更により好ましくは、そのような抗体は、ヒトＬＡＧ－３（すなわち、配列番号４１）またはヒトＬＡＧ－３（例えば、配列番号４２）についての、２５℃または３７℃でのＳＰＲバイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約５ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０Ｍの親和性を有するであろう。更により好ましくは、そのような抗体は、それぞれ（本質的に本明細書に記載されるＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）８Ｋを使用するＳＰＲによって決定されるように）、約１．０ｘ１０^－４～約１．０ｘ１０^－３および約１．３ｘ１０^５～約２．０×１０^５のヒトＬＡＧ－３ＥＣＤ（例えば、配列番号４０）のＫ_ｏｎおよびＫ_ｏｆｆ値を有するであろう。

本明細書で特に示されない限り、「ＬＡＧ－３」は、ヒトＬＡＧ－３を指し、「ＰＤ－１」は、ヒトＰＤ－１を指す。

本明細書で使用される、「結合する」という用語は、２つの分子、例えば、本発明の抗体とＬＡＧ－３、ＰＤ－１、またはＬＡＧ－３とＰＤ－１の両方との間の分子相互作用を指す。「二重特異性結合」という用語は、ヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１への結合を指す。

「選択的に結合する」または「特異的に結合する」という用語は、本発明の抗体が、ヒトＬＡＧ－３、若しくはＰＤ－１、またはヒトＬＡＧ－３とヒトＰＤ－１に、他の物質よりもより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、より大きな親和性で、または上記のいくつかの組み合わせで相互作用することを意味する。一実施形態では、「特異的に結合する」は、本発明の抗体がヒトＬＡＧ－３、若しくはヒトＰＤ－１、またはヒトＬＡＧ－３とヒトＰＤ－１の両方に、約０．１ｍＭ以下のＫ_Ｄで結合することを意味する。別の実施形態では、「特異的に結合する」は、本発明の抗体がヒトＬＡＧ－３、若しくはヒトＰＤ－１、またはヒトＬＡＧ－３とヒトＰＤ－１の両方に、約０．０１ｍＭ以下のＫ_Ｄで結合することを意味する。別の実施形態では、「特異的に結合する」は、本発明の抗体がヒトＬＡＧ－３、若しくはヒトＰＤ－１、またはヒトＬＡＧ－３とヒトＰＤ－１の両方に、約０．００１ｍＭ以下のＫ_Ｄで結合することを意味する。別の実施形態では、「特異的に結合する」は、本発明の抗体がヒトＬＡＧ－３、若しくはヒトＰＤ－１、またはヒトＬＡＧ－３とヒトＰＤ－１の両方に、約０．０００１ｍＭ以下のＫ_Ｄで結合することを意味する。別の実施形態では、本発明の抗体は、抗体がヒトＰＤ－１に結合するＫ_Ｄとは異なるＫ_ＤでヒトＬＡＧ－３に結合する。別の実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ－１に結合するよりも約１０倍強くヒトＬＡＧ－３に結合する。

一実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＬＡＧ－３、若しくはヒトＰＤ－１、またはヒトＬＡＧ－３とヒトＰＤ－１の両方に結合するｓｃＦｖ分子である。別の実施形態では、ｓｃＦｖ分子は、ヒトＬＡＧ－３、若しくはヒトＰＤ－１、またはヒトＬＡＧ－３とヒトＰＤ－１の両方に特異的に結合する。

本明細書で使用される「実質的に純粋な」という用語は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％混入物質が含まれていない材料、例えば、本発明の抗体を指す。

「ＬＡＧ－３」の類義語は、ＬＡＧ－３およびＣＤ２２３である。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、記述された値または値の範囲のプラスまたはマイナス１０パーセントを意味する。例えば、「約」１２は、１０．８（両端を含む）～１３．２（両端を含む）の範囲の値を含み；約１０重量％は、９（両端を含む）～１１（両端を含む）重量％等を含む組成物を包含する。

本明細書で使用される場合、「適応性免疫」という用語は、免疫応答のアームを含み、これは、免疫応答の生来のアームとは対照的に、抗原特異的であり、同じ抗原での再刺激時に増強された二次抗原特異的免疫応答を示す。

「治療すること（treating）」（または「治療する（treat）」または「治療（treatment）」）という用語は、既存の症状、障害、状態、または疾患の進行または重症度を遅延、妨害、抑制、緩和、停止、軽減、または反転させることを指す。

「有効量」とは、研究者、医師、または他の臨床医によって探索されている組織、系、動物、哺乳動物、またはヒトの生物学的若しくは医学的反応、または所望の治療効果を誘発する本発明の抗体、またはそのような抗体を含む医薬組成物の量を意味する。抗体の有効量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、並びに個体における所望の応答を誘発する抗体の能力などの因子に応じて変動し得る。有効量はまた、抗体の任意の毒性効果または有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。そのような利益には、移植された臓器の免疫寛容の増加；安定化された自己免疫疾患または障害；または自己免疫障害の徴候や症状の改善などのいずれか１つまたはそれ以上が含まれる。有効量は、既知技法の使用によって、かつ同様の状況下で得られる結果を観察することによって、当業者によって容易に決定することができる。患者についての有効量を決定する際に、多数の因子が、担当診断医によって考慮され、これらの因子としては、患者のサイズ、年齢、および全般的な健康状態；関連する特定の疾患または障害；疾患若しくは障害の程度、または関与、または重症度；個々の患者の応答、投与される特定の化合物；投与様式；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択された投与レジメン；併用薬の使用；並びに他の関連する状況が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の抗体を投与するための投薬計画は、最適な所望の反応（例えば、治療効果）を提供するように調整され得る。

本明細書で使用される場合、患者の「有効応答」、または治療に対する患者の「応答性」という用語は、本開示の抗体の投与の際に患者に付与される臨床上または治療上の利益を指す。そのような利益には、以下：移植された臓器の免疫寛容の増加；安定化された自己免疫疾患または障害；または自己免疫障害の徴候や症状の改善などのいずれか１つまたはそれ以上が含まれる。

本明細書に開示される方法の潜在的な利点は、許容される忍容性、毒性、および／または有害事象を含む許容される安全性プロファイルで自己免疫障害に罹患している患者において著しいおよび／または長期の緩和をもたらす可能性であり、したがって患者は、全体的な治療方法から利点を得る。本開示の治療の有効性は、これらに限定されないが、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）２０、ＡＣＲ５０、ＡＣＲ７０、Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ Ａｒｅａ ａｎｄ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ（ＰＡＳＩ）５０、ＰＡＳＩ７５、ＰＡＳＩ９０、ＰＡＳＩ１００、Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｌｕｐｕｓ Ｅｒｙｔｈｍａｔｏｓｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ（ＳＬＥＤＡＩ）を含む、様々な自己免疫障害のための治療を評価する際に一般的に使用される様々なエンドポイントによって測定することができる。例えば、免疫細胞活性化マーカー、炎症の尺度、細胞周期依存性バイオマーカー測定視覚化、および／または疼痛評価を通した応答の測定を含む、本開示の任意の特定の療法の有効性を決定することへの様々な他のアプローチを任意に使用することができる。

本明細書で使用される場合、「修飾ヒトＩｇＧ１」という用語は、少なくとも１つのヒトＦｃガンマ受容体へのヒトＩｇＧ１の結合を低減するように操作されたヒトＩｇＧ１を意味する。典型的には、これは、Ｆｃガンマ受容体、例えば、Ｐ３２９Ａ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ突然変異への抗体の結合の低減につながる残基を変異させることによって実施される。

インビトロでＬＡＧ－３活性をアッセイするための方法は当業者に公知である（例えば、Ａｎｇｉｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０２０；２０４（４）：８１０－８１８）。

ＰＤ－１活性をインビトロでアッセイするための方法は、当業者に公知である（例えば、Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ ２０１８；６（１）：３１）。

免疫活性のインビボマウスモデルは、本明細書に示されるように、および開示されるように、当業者に周知である（例えば、Ｖｉｎｃｅｌｅｔｔｅ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ．２００７；９（６）：Ｒ１２３．ｄｏｉ：１０．１１８６／ａｒ２３３１）。

本開示のＤＮＡ分子は、本開示の抗体中のポリペプチドのうちの少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする非天然ポリヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ分子である。

本開示のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列に作動可能に連結された後に宿主細胞において発現され得る。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般的に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、およびジヒドロ葉酸レダクターゼを含有する。

目的のポリヌクレオチド配列（例えば、本発明の抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび発現制御配列）を含有する発現ベクターは、宿主細胞のタイプに応じて異なる既知の方法によって宿主細胞に導入することができる。

本開示の抗体は、哺乳動物宿主細胞において容易に産生され得、この非限定的な例には、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３、またはＣＯＳ細胞が含まれる。宿主細胞は、当該技術分野において既知の技術を使用して培養され得る。

タンパク質精製の様々な方法を用いて本開示の抗体を精製してもよく、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８２：８３－８９（１９９０）およびＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。

本明細書で参照される配列は、表１ａおよび１ｂに列記される配列番号に従って番号付けされる。表１ａおよび１ｂ中の配列は、他に示されない限り、アミノ酸配列である。

配列番号１５および２９は、配列番号１５がアミノ酸残基２０５位にリジンを含み、配列番号２９が２０５位にアラニン残基を含むことを除いて、同一である。

配列番号１９および３０は、配列番号１９がアミノ酸残基２０５位にリジンを含み、配列番号３０が２０５位にアラニン残基を含むことを除いて、同一である。

配列番号２１および３１は、配列番号２１がアミノ酸残基３２８位にリジンを含み、配列番号３１が３２８位にアラニン残基を含むことを除いて、同一である。

配列番号２３および３２は、配列番号２３がアミノ酸残基３２４位にリジンを含み、配列番号３２が３２４位にアラニン残基を含むことを除いて、同一である。

配列番号３５（ＬＡＧ－３＿ＣＨ＿Ｘ）は、コンセンサス配列であり、アミノ酸残基２０５位にＸ残基を含有し、これは配列番号１５の２０５位のリジン残基および配列番号２９の２０５位のアラニン残基にそれぞれ対応する。

配列番号３６（ＰＤ－１＿ＣＨ＿Ｘ）は、コンセンサス配列であり、アミノ酸残基２０５位にＸ残基を含有し、これはそれぞれ、配列番号２９の２０５位のリジン残基および配列番号３０の２０５位のアラニン残基に対応する。

配列番号３７（ＬＡＧ－３＿ＨＣ＿Ｘ）は、コンセンサス配列であり、アミノ酸残基３２８位にＸ残基を含有し、これはそれぞれ配列番号２１の３２８位のリジン残基および配列番号３１の３２８位のアラニン残基に対応する。

配列番号３８（ＰＤ－１＿ＨＣ＿Ｘ）は、コンセンサス配列であり、アミノ酸残基３２４にＸ残基を含有し、これはそれぞれ、配列番号２３の３２４位のリジン残基および配列番号３２の３２４位のアラニン残基に対応する。

抗体発現および精製
本発明のヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体および本開示のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、基本的に以下のように発現および精製され得る。最適な所定の重鎖：軽鎖ベクター比率を使用して抗体を分泌するための発現系、または重鎖および軽鎖の両方をコードする単一のベクター系で、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯなどの適切な宿主細胞を、一過的または安定的のいずれかでトランスフェクトしてもよい。本開示の抗体または二重特異性抗体は、重鎖および軽鎖（本発明のヒトＬＡＧ－３アゴニスト抗体の場合）、または第１の重鎖、第１の軽鎖、第２の重鎖および第２の軽鎖（本開示のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体の場合）をコードする１つまたはそれ以上のＤＮＡ分子を使用して抗体を分泌するための発現系で一過的または安定的のいずれかでトランスフェクトされ得る。

抗体は、多くの一般的に使用される技術のうちの１つを使用して精製され得る。例えば、培地は、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）のような適合緩衝液で平衡化された、ＭａｂＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、またはＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に簡便に適用され得る。カラムは、非特異的結合成分を除去するために洗浄され得る。結合抗体は、例えば、ｐＨ勾配（２０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．０）から１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）から１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ３．０）など）によって溶出され得る。抗体画分は、紫外線吸光度またはＳＤＳ－ＰＡＧＥなどによって検出され得、次いで、プールされてもよい。意図する使用に応じて、更なる精製は任意選択的である。精製抗体は、一般的な技術を使用して濃縮および／または滅菌濾過され得る。可溶性凝集体、多量体および誤対合は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、マルチモーダル、親和性またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去され得る。精製抗体は、－７０℃で直ちに凍結されてもよく、または凍結乾燥されてもよい。

ヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１への結合
Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００（Ｃｙｔｉｖａ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を用いて、ＬＡＧ－３可溶性細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対するＬＡＧ－３抗体の結合速度および親和性、並びに可溶性ＬＡＧ－３－ＥＣＤおよびＰＤ－１－ＥＣＤに対する二重特異性抗体（ヒト：Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、カタログ番号１０３７７－Ｈ０８Ｈ；カニクイザル：Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、カタログ番号９０３１１－Ｃ０８Ｈ）を表面プラズモン共鳴法によって測定した。試料を、５ｇ／ＬのＢＳＡ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈカタログ番号００１－０００－１６１）ランニング緩衝液を含むＨＢＳ－ＥＰ＋（１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．６）（Ｔｅｋｎｏｖａカタログ番号Ｈ８０２２）中で希釈した。ＰｒｉｓｍＡ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒチップ（カタログ番号２９６５０２６３）はＣｙｔｉｖａから購入する。

結合を抗体捕捉法によって多サイクル速度論を使用して評価した。各サイクルは、ＰｒｉｓｍＡチップへの抗体捕捉のためには１０μＬ／分、分析物の会合（１２０秒の接触時間）および解離（９００秒）のためには１００μＬ／分の流速で、３７℃または２５℃のいずれかで実施した。各サイクルは以下の工程からなった：フローセル上に１２５ＲＵ（ＬＡＧ－３アーム）、２９４ＲＵ（ＰＤ－１アーム）および６３ＲＵ（ＬＡＧ－３抗体）のＲｍａｘ値を標的とするＨＢＳ－ＥＰ＋中に１μｇ／ｍＬの二重特異性抗体の注入、ＨＢＳ－ＥＰ＋中への分析物の注入（ヒトＰＤ－１－ＥＣＤ－Ｈｉｓ（配列番号４０）およびヒトＬＡＧ－３－Ｈｉｓ（配列番号４２）の両方について２倍連続希釈により６２．５ｎＭ～０．２５ｎＭの濃度範囲）、続いて９００秒間の解離期、および１０μＬ／分の流速を利用して６０秒間の接触時間にわたって１０μＬの１０ｍＭグリシン塩酸塩、ｐＨ１．５を使用した再生。全ての分析物濃度を、単量体分子量（ＭＷ）値を利用して決定した。ＬＡＧ－３－ＥＣＤおよびＰＤ－１－ＥＣＤの会合速度（ｋ_ｏｎ）および解離速度（ｋ_ｏｆｆ）を、０ｎＭブランク減算に加えてフローセル１の参照減算による二重参照を使用して評価し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン４．１で「１：１（ラングミュア）結合」モデルに当てはめた。解離定数（Ｋ_Ｄ）を、関係Ｋ_Ｄ＝Ｋ_ｏｆｆ／Ｋ_ｏｎに従って結合速度から算出した。化学量論＝［ＲＵ_ｍａｘ／ＲＵ_捕捉］／［ＭＷ_分析物／ＭＷ_抗体］（式中、ＭＷ_抗体Ａは１５０ｋＤａである）。値を、平均±標準偏差として報告する。

上記のように本質的に行われた実験では、表２および表３の結果が得られた。表２ａの結果は、抗体ＥがヒトおよびカニクイザルＬＡＧ－３－ＥＣＤに結合したことを実証している。表２ｂの結果は、抗体ＦがヒトＬＡＧ－３－ＥＣＤに結合したことを実証している。表２ｃの結果は、抗体Ｇがヒトに結合し、試験した濃度ではカニクイザルＬＡＧ－３－ＥＣＤに結合しなかったことを実証している。表３ａの結果は、抗体ＡがヒトＰＤ－１－ＥＣＤ、ヒトＬＡＧ－３－ＥＣＤ、カニクイザルＰＤ－１－ＥＣＤおよびカニクイザルＬＡＧ－３－ＥＣＤに結合したことを実証している。表３ｂの結果は、抗体ＢがヒトＰＤ－１－ＥＣＤ、ヒトＬＡＧ－３－ＥＣＤ、カニクイザルＰＤ－１－ＥＣＤおよびカニクイザルＬＡＧ－３－ＥＣＤに結合したことを実証している。表３ｃの結果は、抗体ＣがヒトＰＤ－１－ＥＣＤおよびヒトＬＡＧ－３－ＥＣＤに結合したことを実証している。表３ｄの結果は、抗体ＤがヒトＰＤ－１－ＥＣＤおよびヒトＬＡＧ－３－ＥＣＤに結合したことを実証している。

^ａ１０００ｎＭまで結合が観察されず。

^ａ１０００ｎＭまで結合が観察されず。

^ｂＳＳ：定常状態平衡モデル。速いオン速度および速いオフ速度に起因して、動態パラメータを適合させることができない。

末梢単核細胞結合アッセイ
細胞表面ヒトまたはカニクイザルＬＡＧ－３／ＰＤ－１に結合する本明細書に開示されるヒトＬＡＧ－３／ＰＤ－１デュアルアゴニスト抗体の能力は、フローサイトメトリーアッセイを使用して測定することができる。

簡単に説明すると、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なヒトＴｒｉｍａ ＬＲＳ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から、Ｆｉｃｏｌｌ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ＃１７１４４００２）を使用して単離し、０．５ｕｇ／ｍＬプレート結合抗ＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３００３０２）を用いて３日間、完全ＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＃ＭＴ１００４１ＣＶ；１０％ ＦＣＳ、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃ＭＴ３５０１１ＣＶ；１ＸＧｌｕｔａｍａｘ、Ｇｉｂｃｏ＃３５０５００６１；１ＸＰ／Ｓ、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３０００２ＣＩ；１ＸＢＭＥ、Ｇｉｂｃｏ＃２１９８５０２３；１ＸＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏ＃１１１４００５０、１Ｘピルビン酸ナトリウム、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃２５－０００－ＣＩ）中、３７℃ ５％ ＣＯ２で活性化した。

カニクイザルＰＢＭＣを、ＰＢＳ中の９０％Ｆｉｃｏｌｌ（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃２１－０３１－ＣＭ）を使用して全血液（ＢｉｏＩＶＴ＃ＮＨＰ０１ＷＢＫ２－００００８６１）から単離し、上記のように、２ｕｇ／ｍＬプレート結合抗ＣＤ３（ＢＤ＃５５１９１６）を用いて３日間、ＲＰＭＩ中で活性化した。

細胞を、それぞれの標識抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ｓ２００２６、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ｃ２００２９）の１０～１２ポイント、３倍連続希釈物と共に４℃で３０分間インキュベートした（ＰＢＳ＋２％ ＦＣＳ中、３０ｕｇ／ｍＬで開始し、以下を含有する：ＣＤ４ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃１２－００４７－４２またはＢｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３４４６３４；ＣＤ８ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃２５－００８８－４２；ヒト細胞についてＣＤ３ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ５６－００３８－８２、カニクイザル細胞についてＢＤ＃５５７９１７；ヒト細胞についてＣＤ３３ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ４５－０３３８－４２；Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃６５－０８６５－１８。完全に洗浄した後、細胞をＢＤ ＦｏｒｔｅｓｓａまたはＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ２０サイトメーターで処理し、データをＦｌｏｗｊｏソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。それぞれの抗体によって結合された細胞のパーセントを定量し、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）でグラフ化する。

本質的に上記のように行われた実験では、表４のデータが得られた。抗体Ａおよび抗体Ｂは、表４ａ（ｎ＝３）に示されるように、細胞膜発現ヒトＬＡＧ－３／ＰＤ－１およびカニクイザルＬＡＧ－３／ＰＤ－１に結合した。抗体Ｃおよび抗体Ｄは、表４ｂ（ｎ＝３）に示されるように、細胞膜発現ヒトＬＡＧ－３／ＰＤ－１およびカニクイザルＬＡＧ－３／ＰＤ－１に結合した。抗体Ｅおよび抗体Ｆは、表４ｃ（ｎ＝３）に示されるように、細胞膜発現ヒトＬＡＧ－３に結合した。

ＰＤ－１およびＬＡＧ－３二量体化アッセイ
ＰＤ－１およびＬＡＧ－３の二量体化の誘導を、細胞ベースの酵素断片相補性アッセイにおいて測定した。このアッセイでは、２つの受容体を一緒に近接させることにより、測定可能な発光シグナルが用量依存的に誘導される。

アッセイのために、細胞株およびアッセイ成分を含むＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｕ２ＯＳ ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二量体化アッセイ（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ）を利用した。細胞株は、β－ガラクトシダーゼのＥＡ（酵素アクセプター）サブユニットに融合したヒトＰＤ－１の細胞外ドメイン（ａａ１～１９９）およびβ－ガラクトシダーゼのＰＫ１酵素ドナーサブユニットに融合したヒトＬＡＧ－３の細胞外ドメイン（ａａ１～４７７）を発現するＵ２ＯＳ細胞株であった（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ＃８３－０００９Ｃ３）。細胞を、２５０μｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢおよび５００μｇ／ｍｌのＧ４１８を添加したＡｓｓａｙＣｏｍｐｌｅｔｅ（商標）Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｋｉｔ－１０３培地（＃９２－３１０３Ｇ）中で維持した。

Ｃｅｌｌ Ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ Ｒｅａｇｅｎｔ（＃９２－０００９）で剥離した後、細胞株を５，０００細胞／ウェル（８０μｌ Ｃｅｌｌ Ｐｌａｔｉｎｇ ５試薬（＃９３－０５６３Ｒ５Ａ）中）で、９６ウェル白色不透明プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３５－３２９６）に播種した。細胞を３７℃、９０％ ＲＨ、５％ ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、化合物（最終濃度の５倍）をポリプロピレンプレート中でタンパク質希釈緩衝液（＃９２－００２３Ｍ）に１：５で段階希釈した。化合物を、濃度ごとに三連のウェルで２０μｌで細胞に添加した。（化合物の最終濃度範囲は０．００１２８～１００ｎＭであった。）細胞を３７℃、９０％ ＲＨ、５％ ＣＯ_２で３０分間インキュベートした。プレートを室温に１０分間冷却し、次いで、１００μｌ／ウェルのＦｌａｓｈ基質／細胞アッセイ緩衝液混合物（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｆｌａｓｈ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ、＃９３－０２４７から）を添加した。プレートは、室温の暗所で１時間、撹拌せずにインキュベートした。プレートをＴｏｐＳｅａｌｓ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で密封し、次いで発光をＢｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｎｅｏ２マルチモードリーダー（ウェル当たり０．１秒、ＰＭＴゲイン１３５）で読み取った。

ＰＤ－１およびＬＡＧ－３二量体化の誘導についてのＥＣ５０値を、Ｌｏｇ変換Ｘ値を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９で計算した。対数変換したデータに対して非線形回帰（曲線当てはめ）分析（シグモイド用量応答、可変勾配）を行って、ＥＣ５０値を得てもよい。

本質的にこのアッセイに記載されるように実施された実験において、抗体Ａは、２．９７ｎＭ＋／－１．１４（ＳＥ）のＥＣ５０平均でＰＤ－１およびＬＡＧ－３二量体化を用量依存的に誘導し（表５ａ）、一方、抗体Ｂは、２．４７ｎＭ＋／－１．２６（ＳＥ）のＥＣ５０平均を有した（表５ｂ）。ヒトＬＡＧ－３アゴニストアーム＋ヒトＰＤ－１アゴニストアームの組み合わせは、このアッセイにおいてＰＤ－１およびＬＡＧ－３二量体化を誘導しなかった。

表５ａのデータはまた、抗体Ａおよび抗体Ｂが、細胞ベースの系においてヒトＰＤ－１およびヒトＬＡＧ－３に結合する（およびそれらを近接させる）ことを示す。

表５ｂのデータはまた、抗体Ｃおよび抗体Ｄが、細胞ベースの系においてヒトＰＤ－１およびヒトＬＡＧ－３に結合する（およびそれらを近接させる）ことを示す。

表５ａおよび５ｂに示されるデータは、２つの実験のうちの１つからの相対発光単位である。

Ｔ細胞増殖の阻害
ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト
二重特異性抗体がＴ細胞増殖を阻害する能力は、以下のように測定することができる。

簡潔に説明すると、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なヒトＴｒｉｍａ ＬＲＳ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から、Ｆｉｃｏｌｌ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ＃１７１４４００２）を用いて単離した。単離されたＰＢＭＣを増殖色素（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃６５－０８４２－９０）で室温で３０分間標識し、次いで完全に洗浄する。

標識されたＰＢＭＣを、それぞれの抗体の１０～１２ポイント、３倍連続希釈を用いて、最終３０ｕｇ／ｍＬで開始して、完全ＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃ＭＴ１００４１ＣＶ；１０％ ＦＣＳ、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃ＭＴ３５０１１ＣＶ；１ＸＧｌｕｔａｍａｘ、Ｇｉｂｃｏ＃３５０５００６１；１ＸＰ／Ｓ、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３０００２ＣＩ；１ＸＢＭＥ、Ｇｉｂｃｏ＃２１９８５０２３；１Ｘ ＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏ＃１１１４００５０、１Ｘピルビン酸ナトリウム、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃２５－０００－ＣＩ）中、室温にて３０分間処理した。次いで、細胞を、完全ＲＰＭＩ中で最終４ｎｇ／ｍＬのＳＥＢ（Ｔｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＢＴ２０２１Ｍ）で、５％ＣＯ_２により３７℃で３日間刺激した。次いで、細胞を徹底的に洗浄した。

４℃で３０分間、細胞を以下で染色した：非競合ＰＤ－１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ３２９９０４；ＣＤ４ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃１２－００４７－４２またはＢｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３４４６３４；ＣＤ３３，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃４５－０３３８－４２；ＣＤ８ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃２５－００８８－４２；Ａｌｅｘａ ６４７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａ２０１８６にコンジュゲートされた内部非競合ＬＡＧ－３；ＣＤ３ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ５６－００３８－８２およびＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＃６５－０８６５－１８。完全に洗浄した後、細胞をＢＤ ＦｏｒｔｅｓｓａまたはＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ２０サイトメーターで処理し、データをＦｌｏｗｊｏソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。増殖した細胞のパーセントを定量し、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）でグラフ化する。

本質的に上記のように実施した実験において、抗体Ａ～Ｄは各々、表６ａおよび６ｂに示すように、ヒト初代Ｔ細胞増殖を阻害した。抗体ＥおよびＦはまた、表６ｃに示されるように、初代Ｔ細胞増殖を各々阻害した。

マウス移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）インビボモデル
本発明のＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体の免疫調節活性を実証するために、異種ＧｖＨＤのヒト化モデルを利用することができる。このモデルは、免疫不全マウスにヒトＰＢＭＣを移植することによって作製される。ヒト免疫細胞は、マウスを異物として認識し、免疫応答を開始して、ヒト炎症促進性サイトカインの有意な増加、免疫細胞活性化、増殖および組織への溢出をもたらし、最終的に体重減少および多臓器機能不全をもたらす。重要なことに、炎症応答はヒト細胞によって駆動され、したがって、ヒト特異的治療をモデルにおいて調べることができる。

簡単に記載すると、雌ＮＳＧマウス（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ、ＪＡＸ Ｌａｂｓ、ストック＃０５５５７）は、７２℃、１２時間の明：暗サイクル下でケージあたり３匹収容され、飼料および水を自由に摂取させる（ｎ＝７６）。ヒトＰＢＭＣは、製造業者の指示（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ）に従ってＳｅｐＭａｔｅ ５０ Ｆｉｃｏｌｌ調製チューブを使用して、血液ドナー（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ）から入手されるＬＲＳチューブから単離する。新たに単離したＰＢＭＣをＰＢＳに１．２×１０^８細胞／ｍＬで懸濁し、０日目に１００μＬ ＰＢＭＣ懸濁液を静脈内にマウスに移植する（１．２×１０^７／マウス）。７２匹のマウスにＰＢＭＣを与え、４匹のマウスは非生着対照のままである。

生着後１日目に、マウスを９つの体重適合群（ｎ群（ｎ＝８／群））に分け、二重特異性抗体を０．１、１．０または３．０ｍｇ／ｋｇで皮下投与する。投与を、実験の残りの間、毎週続ける。健康診断および体重測定を定期的に行う。それらの開始体重の２０％を喪失した、または明らに苦しんでいるマウスを安楽死させる。このモデルに共通する臨床徴候は、ボサボサの毛、丸まった体、衰弱、および呼吸または運動困難である。

アイソタイプ対照マウスの大部分が疾患の進行により安楽死を必要としている場合、全てマウスを犠死させる。全ての屠殺マウスについて、イソフルラン麻酔下で心臓穿刺によって血液をＥＤＴＡチューブに採取する。更に、１０日目の暫定血液試料を後眼窩洞から得る。両方の収集物からの血液を、ヒト血漿サイトカイン分析のために遠心分離によって清澄化する。体重変化を、それらのベースライン体重のパーセンテージ：（日（ｘ）体重／０日目体重）^＊１００として計算する。研究の終了前に安楽死を必要とするマウスは、最後の体重測定を最後まで順列させる。血漿サイトカインは、製造業者の指示に従ってＭｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｈｕｍａｎ Ｔｈ１／Ｔｈ２ １０－Ｖｐｌｅｘ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）を使用して測定する。データをグラフ化し、Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して統計を計算する。群間の体重の差を、Ｔｕｋｅｙの事後検定を伴う２－ｗａｙ ＲＭ－ＡＮＯＶＡによって決定する。血漿サイトカインレベルの差は、Ｔｕｋｅｙの事後検定を伴う１－ｗａｙ ＡＮＯＶＡによって決定する。ｐ＜０．０５の場合、試験群間の差は、有意であるとみなされる。

ＮＳＧマウスにおける著しい消耗によって証明されるように、誘発されたＧｖＨＤからのヒトＰＢＭＣの生着は、生着後３６日目に試験終了を必要とした。ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体による治療は、用量依存的なマウスにおける体重減少の低減によって測定されるように、疾患進行を有意に減弱させることができる。更に、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、疾患進行に関連する血漿ヒト炎症促進性サイトカインの顕著な増加を阻害することができる。したがって、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体は、ヒト免疫細胞病原性を減弱することができ、ヒト化ＧｖＨＤモデルにおいて疾患進行を低減することができる。

アミノ酸およびヌクレオチド配列
配列番号１（ＬＡＧ－３ ＨＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨ

配列番号２（ＬＡＧ－３ ＨＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＷＩＮＰＮＳＧＤＴＮＹＡＱＫＦＱＧ

配列番号３（ＬＡＧ－３ ＨＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＡＲＥＧＤＳＳＧＷＨＧＧＷＦＤＰ

配列番号４（ＬＡＧ－３ ＬＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＡＥＧＳＴＹＬＤ

配列番号５（ＬＡＧ－３ ＬＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＹＴＬＳＹＲＡＳ

配列番号６（ＬＡＧ－３ ＬＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＭＱＲＶＥＦＰＹＴ

配列番号７（ＰＤ－１ ＨＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳ

配列番号８（ＰＤ－１ ＨＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＥＦＱＧ

配列番号９（ＰＤ－１ ＨＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳ

配列番号１０（ＰＤ－１ ＬＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＱＡＳＱＳＰＮＮＬＬＡ

配列番号１１（ＰＤ－１ ＬＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＹＧＡＳＤＬＰＳ

配列番号１２（ＰＤ－１ ＬＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＱＮＮＹＹＶＧＰＶＳＹＡ

配列番号１３（ＬＡＧ－３可変重アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＹＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＤＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＤＳＳＧＷＨＧＧＷＦＤＰＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号１４（ＬＡＧ－３可変軽アミノ酸配列）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＤＳＡＥＧＳＴＹＬＤＷＦＬＲＫＰＧＤＳＰＱＬＬＩＹＴＬＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＲＶＥＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号１５（ＬＡＧ－３定常重アミノ酸配列）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＤＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＲＰＲＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＶＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号１６（ＬＡＧ－３定常軽アミノ酸配列）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＫＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

配列番号１７（ＰＤ－１可変重アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳＷＶＲＫＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＥＦＱＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号１８（ＰＤ－１可変軽アミノ酸配列）
ＲＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＰＮＮＬＬＡＷＹＱＤＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＤＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＮＮＹＹＶＧＰＶＳＹＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号１９（ＰＤ－１定常重アミノ酸配列）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＤＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＭＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号２０（ＰＤ－１定常軽アミノ酸配列）
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配列番号２１（ＬＡＧ－３重鎖アミノ酸配列）
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配列番号２２（ＬＡＧ－３軽鎖アミノ酸）
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配列番号２３（ＰＤ－１重鎖アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳＷＶＲＫＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＥＦＱＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＤＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＭＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号２４（ＰＤ－１軽鎖アミノ酸配列）
ＲＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＰＮＮＬＬＡＷＹＱＤＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＤＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＮＮＹＹＶＧＰＶＳＹＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＹＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＷＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣ

配列番号２５（ＬＡＧ－３重鎖ＤＮＡ配列）
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配列番号２６（ＬＡＧ－３軽鎖ＤＮＡ配列）
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＴＧＧＡＴＡＧＴＧＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＣＡＣＣＴＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＧＴＴＣＣＴＧＡＧＡＡＡＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＴＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＣＧＣＴＴＴＣＣＴＡＣＣＧＧＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＣＡＣＴＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＧＡＧＧＧＴＡＧＡＡＴＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＡＴＴＣＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ

配列番号２７（ＰＤ－１重鎖ＤＮＡ配列）
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配列番号２８（ＰＤ－１軽鎖ＤＮＡ配列）
ＡＧＡＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＡＴＡＡＣＣＴＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＧＡＣＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＧＡＴＣＴＧＣＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＴＴＡＴＧＴＧＧＧＡＣＣＡＧＴＧＡＧＣＴＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＡＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＡＧＣＧＴＴＡＣＣＣＴＴＴＴＣＣＣＡＣＣＧＡＧＣＴＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＡＡＧＣＡＡＣＣＴＴＧＧＴＣＴＧＣＴＡＣＡＴＡＴＣＡＧＡＴＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＣＣＧＴＡＧＣＡＴＧＧＡＡＡＧＣＴＧＡＴＴＣＡＴＣＣＣＣＴＧＴＧＡＡＧＧＣＣＧＧＴＧＴＴＧＡＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＣＡＡＡＣＡＡＴＣＴＡＡＣＡＡＴＡＡＡＴＡＣＧＣＧＧＣＡＴＧＧＴＣＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＴＧＡＣＡＣＣＣＧＡＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＴＣＡＣＡＧＡＴＣＴＴＡＣＡＧＣＴＧＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＣＣＧＴＣＧＣＧＣＣＣＡＣＴＧＡＧＴＧＣ

配列番号２９（抗体ＢのＬＡＧ－３定常重アミノ酸配列）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＤＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＲＰＲＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＶＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号３０（抗体ＢのＰＤ－１定常重アミノ酸配列）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＤＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＭＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号３１（抗体ＢのＬＡＧ－３重鎖アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＹＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＤＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＤＳＳＧＷＨＧＧＷＦＤＰＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＤＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＲＰＲＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＶＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号３２（抗体ＢのＰＤ－１重鎖アミノ酸配列）
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配列番号３３（抗体ＢのＬＡＧ－３重鎖ＤＮＡ配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＴＡＣＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＣＣＴＡＡＣＡＧＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＧＧＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＡＧＧＧＧＡＣＴＣＡＴＣＡＧＧＡＴＧＧＣＡＣＧＧＡＧＧＧＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＣＣＴＧＧＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＣＡＣＴＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＡＧＣＴＣＧＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＧＡＣＴＣＴＧＧＣＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＧＣＣＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＡＧＡＣＣＡＣＧＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＧＴＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ

配列番号３４（抗体ＢのＰＤ－１重鎖ＤＮＡ配列）
ＣＡＡＧＴＧＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＧＧＧＧＧＣＡＧＡＡＧＴＧＡＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＧＣＴＴＣＧＧＴＧＡＡＡＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＡＧＴＧＴＣＣＧＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＧＡＧＣＡＡＡＴＡＣＧＡＣＡＴＧＴＣＡＴＧＧＧＴＣＡＧＡＡＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＧＡＴＴＡＴＣＴＡＴＡＣＡＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＧＡＴＴＡＣＧＣＣＣＡＡＧＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＴＧＡＧＧＡＴＡＣＧＴＣＣＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＧＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＧＡＣＣＧＧＡＡＡＣＣＣＡＴＡＣＴＡＣＡＣＣＡＡＴＧＧＡＴＴＣＡＡＴＡＧＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＴＡＣＴＣＴＴＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＡＧＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＧＣＣＡＣＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＧＣＣＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＡＴＧＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ

配列番号３５（ＬＡＧ－３＿ＣＨ＿Ｘアミノ酸配列）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＤＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＸＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＲＰＲＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＶＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＸはＫまたはＡである）

配列番号３６（ＰＤ－１＿ＣＨ＿Ｘアミノ酸配列）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＸＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＤＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＭＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＸはＫまたはＡである）

配列番号３７（ＬＡＧ－３＿ＨＣ＿Ｘアミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＹＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＤＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＤＳＳＧＷＨＧＧＷＦＤＰＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＤＳＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＸＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＲＰＲＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＶＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＸはＫまたはＡである）

配列番号３８（ＰＤ－１＿ＨＣ＿Ｘアミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳＷＶＲＫＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＥＦＱＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＸＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＤＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＭＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（ＸはＫまたはＡである）

配列番号３９（ヒトＰＤ－１のアミノ酸配列）
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ

配列番号４０（ヒトＰＤ－１ ＥＣＤ－Ｈｉｓアミノ酸配列）
ＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＨＨＨＨＨＨＨＨ

配列番号４１（ヒトＬＡＧ－３アミノ酸配列）
ＭＷＥＡＱＦＬＧＬＬＦＬＱＰＬＷＶＡＰＶＫＰＬＱＰＧＡＥＶＰＶＶＷＡＱＥＧＡＰＡＱＬＰＣＳＰＴＩＰＬＱＤＬＳＬＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹＴＶＬＳＶＧＰＧＧＬＲＳＧＲＬＰＬＱＰＲＶＱＬＤＥＲＧＲＱＲＧＤＦＳＬＷＬＲＰＡＲＲＡＤＡＧＥＹＲＡＡＶＨＬＲＤＲＡＬＳＣＲＬＲＬＲＬＧＱＡＳＭＴＡＳＰＰＧＳＬＲＡＳＤＷＶＩＬＮＣＳＦＳＲＰＤＲＰＡＳＶＨＷＦＲＮＲＧＱＧＲＶＰＶＲＥＳＰＨＨＨＬＡＥＳＦＬＦＬＰＱＶＳＰＭＤＳＧＰＷＧＣＩＬＴＹＲＤＧＦＮＶＳＩＭＹＮＬＴＶＬＧＬＥＰＰＴＰＬＴＶＹＡＧＡＧＳＲＶＧＬＰＣＲＬＰＡＧＶＧＴＲＳＦＬＴＡＫＷＴＰＰＧＧＧＰＤＬＬＶＴＧＤＮＧＤＦＴＬＲＬＥＤＶＳＱＡＱＡＧＴＹＴＣＨＩＨＬＱＥＱＱＬＮＡＴＶＴＬＡＩＩＴＶＴＰＫＳＦＧＳＰＧＳＬＧＫＬＬＣＥＶＴＰＶＳＧＱＥＲＦＶＷＳＳＬＤＴＰＳＱＲＳＦＳＧＰＷＬＥＡＱＥＡＱＬＬＳＱＰＷＱＣＱＬＹＱＧＥＲＬＬＧＡＡＶＹＦＴＥＬＳＳＰＧＡＱＲＳＧＲＡＰＧＡＬＰＡＧＨＬＬＬＦＬＩＬＧＶＬＳＬＬＬＬＶＴＧＡＦＧＦＨＬＷＲＲＱＷＲＰＲＲＦＳＡＬＥＱＧＩＨＰＰＱＡＱＳＫＩＥＥＬＥＱＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＱＬ

配列番号４２（ヒトＬＡＧ－３ ＥＣＤ－Ｈｉｓアミノ酸配列）
ＬＱＰＧＡＥＶＰＶＶＷＡＱＥＧＡＰＡＱＬＰＣＳＰＴＩＰＬＱＤＬＳＬＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹＴＶＬＳＶＧＰＧＧＬＲＳＧＲＬＰＬＱＰＲＶＱＬＤＥＲＧＲＱＲＧＤＦＳＬＷＬＲＰＡＲＲＡＤＡＧＥＹＲＡＡＶＨＬＲＤＲＡＬＳＣＲＬＲＬＲＬＧＱＡＳＭＴＡＳＰＰＧＳＬＲＡＳＤＷＶＩＬＮＣＳＦＳＲＰＤＲＰＡＳＶＨＷＦＲＮＲＧＱＧＲＶＰＶＲＥＳＰＨＨＨＬＡＥＳＦＬＦＬＰＱＶＳＰＭＤＳＧＰＷＧＣＩＬＴＹＲＤＧＦＮＶＳＩＭＹＮＬＴＶＬＧＬＥＰＰＴＰＬＴＶＹＡＧＡＧＳＲＶＧＬＰＣＲＬＰＡＧＶＧＴＲＳＦＬＴＡＫＷＴＰＰＧＧＧＰＤＬＬＶＴＧＤＮＧＤＦＴＬＲＬＥＤＶＳＱＡＱＡＧＴＹＴＣＨＩＨＬＱＥＱＱＬＮＡＴＶＴＬＡＩＩＴＶＴＰＫＳＦＧＳＰＧＳＬＧＫＬＬＣＥＶＴＰＶＳＧＱＥＲＦＶＷＳＳＬＤＴＰＳＱＲＳＦＳＧＰＷＬＥＡＱＥＡＱＬＬＳＱＰＷＱＣＱＬＹＱＧＥＲＬＬＧＡＡＶＹＦＴＥＬＳＳＰＧＡＱＲＳＧＲＡＰＧＡＬＰＡＧＨＧＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨ

配列番号４３（カニクイザルＬＡＧ－３ ＥＣＤ－Ｈｉｓアミノ酸配列）
ＭＷＥＡＱＦＬＧＬＬＦＬＱＰＬＷＶＡＰＶＫＰＰＱＰＧＡＥＩＳＶＶＷＡＱＥＧＡＰＡＱＬＰＣＳＰＴＩＰＬＱＤＬＳＬＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＰＡＰＧＨＰＰＶＰＧＨＲＰＡＡＰＹＳＷＧＰＲＰＲＲＹＴＶＬＳＶＧＰＧＧＬＲＳＧＲＬＰＬＱＰＲＶＱＬＤＥＲＧＲＱＲＧＤＦＳＬＷＬＲＰＡＲＲＡＤＡＧＥＹＲＡＴＶＨＬＲＤＲＡＬＳＣＲＬＲＬＲＶＧＱＡＳＭＴＡＳＰＰＧＳＬＲＴＳＤＷＶＩＬＮＣＳＦＳＲＰＤＲＰＡＳＶＨＷＦＲＳＲＧＱＧＲＶＰＶＱＧＳＰＨＨＨＬＡＥＳＦＬＦＬＰＨＶＧＰＭＤＳＧＬＷＧＣＩＬＴＹＲＤＧＦＮＶＳＩＭＹＮＬＴＶＬＧＬＥＰＡＴＰＬＴＶＹＡＧＡＧＳＲＶＥＬＰＣＲＬＰＰＡＶＧＴＱＳＦＬＴＡＫＷＡＰＰＧＧＧＰＤＬＬＶＡＧＤＮＧＤＦＴＬＲＬＥＤＶＳＱＡＱＡＧＴＹＩＣＨＩＲＬＱＧＱＱＬＮＡＴＶＴＬＡＩＩＴＶＴＰＫＳＦＧＳＰＧＳＬＧＫＬＬＣＥＶＴＰＡＳＧＱＥＨＦＶＷＳＰＬＮＴＰＳＱＲＳＦＳＧＰＷＬＥＡＱＥＡＱＬＬＳＱＰＷＱＣＱＬＨＱＧＥＲＬＬＧＡＡＶＹＦＴＥＬＳＳＰＧＡＱＲＳＧＲＡＰＧＡＬＲＡＧＨＡＡＡＨＨＨＨＨＨＳＧＳ

配列番号４４（ＬＡＧ－３ ＨＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳ

配列番号４５（ＬＡＧ－３ ＨＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＲＩＦＴＳＧＴＴＮＹＮＰＥＬＫＳ

配列番号４６（ＰＤ１ ＨＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＫＦＱＧ

配列番号４７（ＬＡＧ－３ ＨＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＡＲＹＤＡＦＤＩ

配列番号４８（ＬＡＧ－３ ＬＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ

配列番号４９（ＬＡＧ－３ ＬＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＹＧＡＳＳＲＡＴ

配列番号５０（ＬＡＧ－３ ＬＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＱＱＹＧＳＳＰＩＴ

配列番号５１（ＬＡＧ－３ ＨＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＴＶＳＧＧＳＩＨＳＹＹＷＳ

配列番号５２（ＬＡＧ－３ ＨＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＲＩＦＴＳＧＳＴＮＹＮＰＥＬＫＳ

配列番号５３（ＬＡＧ－３可変重アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳＷＩＲＫＰＡＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＦＴＳＧＴＴＮＹＮＰＥＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号５４（ＬＡＧ－３可変重アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＨＳＹＹＷＳＷＩＲＫＰＡＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＦＴＳＧＳＴＮＹＮＰＥＬＫＳＲＶＴＭＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号５５（ＰＤ－１可変重アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳＷＶＲＹＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号５６（ＬＡＧ－３可変軽アミノ酸配列）
ＲＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＦＱＤＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号５７（ＰＤ－１可変軽アミノ酸配列）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＰＮＮＬＬＡＷＹＱＲＫＰＧＤＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＤＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＮＮＹＹＶＧＰＶＳＹＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号５８（ＬＡＧ－３定常重アミノ酸配列）
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配列番号５９（ＰＤ－１定常重アミノ酸配列）
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配列番号６０（ＬＡＧ－３定常軽アミノ酸配列）
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配列番号６１（ＬＡＧ－３重鎖アミノ酸配列）
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配列番号６２（ＬＡＧ－３重鎖アミノ酸配列）
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配列番号６３（ＰＤ－１重鎖アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳＷＶＲＹＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＳＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＭＣＬＶＹＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号６４（ＬＡＧ－３軽鎖アミノ酸）
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配列番号６５（ＰＤ－１軽鎖アミノ酸配列）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＰＮＮＬＬＡＷＹＱＲＫＰＧＤＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＤＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＮＮＹＹＶＧＰＶＳＹＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＹＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＷＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣ

配列番号６６（ＬＡＧ－３重鎖ＤＮＡ配列）
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配列番号６７（ＬＡＧ－３重鎖ＤＮＡ配列）
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配列番号６８（ＰＤ－１重鎖ＤＮＡ配列）
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配列番号６９（ＬＡＧ－３軽鎖ＤＮＡ配列）
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配列番号７０（ＰＤ－１軽鎖ＤＮＡ配列）
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Claims (45)

1. 重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むヒトＬＡＧ－３結合ドメインを含む抗体であって、
   前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）：配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号２を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３を含むＨＣＤＲ３を含み；
   前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）：配列番号４を含むＬＣＤＲ１、配列番号５を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６を含むＬＣＤＲ３を含む、抗体。
2. 前記ＶＨが、配列番号１３を含み、前記ＶＬが、配列番号１４を含む、請求項１に記載の抗体。
3. 配列番号２２を含む軽鎖（ＬＣ）、および配列番号３７を含む重鎖（ＨＣ）を含む、請求項１または請求項２に記載の抗体。
4. 配列番号３７の３２８位のＸが、リジン残基である、請求項３に記載の抗体。
5. 配列番号３７の３２８位のＸが、アラニン残基である、請求項３に記載の抗体。
6. （ａ）配列番号２２を含むＬＣ、および（ｂ）配列番号２１を含むＨＣを含む、請求項３に記載の抗体。
7. （ａ）配列番号２２を含むＬＣ、および（ｂ）配列番号３１を含むＨＣを含む、請求項３に記載の抗体。
8. ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
9. ヒトＩｇＧ１アイソタイプである、請求項８に記載の抗体。
10. 抗原結合ドメインが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１または請求項２に記載の抗体。
11. 配列番号２２および配列番号３７の一方または両方をコードする配列を含む、核酸。
12. 配列番号３７の３２８位のＸが、リジン残基である、請求項１１に記載の核酸。
13. 配列番号３７の３２８位のＸが、アラニン残基である、請求項１１に記載の核酸。
14. 請求項１１に記載の核酸を含む、ベクター。
15. 配列番号２２をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３７をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、組成物。
16. 請求項１４に記載のベクターを含む、細胞。
17. 請求項１５に記載の組成物を含む、細胞。
18. 哺乳動物細胞である、請求項１６または１７に記載の細胞。
19. 抗体を産生する方法であって、前記抗体が発現する条件下において、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の細胞を培養し、次いで前記発現した抗体を前記培養培地から回収することを含む、方法。
20. 前記抗体が発現する条件下において、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の細胞を培養し、次いで前記発現した抗体を前記培養培地から回収することによって産生される、抗体。
21. 請求項１～１０および２０のいずれか一項に記載の抗体を含む、組成物。
22. ヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１の各々に結合する、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
23. 請求項２２に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体であって、前記二重特異性抗体が、
    （ａ）第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）および第１の軽鎖可変領域（ＶＬ１）を含むヒトＬＡＧ－３に結合する第１の抗原結合ドメインであって、
    前記ＶＨ１が、配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号２を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３を含むＨＣＤＲ３を含み；
    前記ＶＬ１が、配列番号４を含むＬＣＤＲ１、配列番号５を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６を含むＬＣＤＲ３を含む、第１の抗原結合ドメイン、ならびに
    （ｂ）第２の重鎖可変領域（ＶＨ２）および第２の軽鎖可変領域（ＶＬ２）を含むヒトＰＤ－１に結合する第２の抗原結合ドメインであって、
    前記ＶＨ２が、配列番号７を含むＨＣＤＲ１、配列番号８を含むＨＣＤＲ２、および配列番号９を含むＨＣＤＲ３を含み；
    前記ＶＬ２が、配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１２を含むＬＣＤＲ３を含む、第２の抗原結合ドメイン
    を含む、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
24. 前記ＶＨ１が、配列番号１３を含み、前記ＶＬ１が、配列番号１４を含む、請求項２３に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
25. 前記ＶＨ２が、配列番号１７を含み、前記ＶＬ２が、配列番号１８を含む、請求項２３または２４に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
26. 請求項２２～２４のいずれか一項に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体であって、前記抗体が、２つの重鎖および２つの軽鎖を含み、
    前記第１の重鎖（ＨＣ１）が、前記第１のＶＨ１および第１の重鎖定常領域を含み、
    前記第１の軽鎖（ＬＣ１）が、前記ＶＬ１および第１の軽鎖定常領域を含み、
    前記第２の重鎖（ＨＣ２）が、前記第２のＶＨ２および第２の重鎖定常領域を含み、
    前記第２の軽鎖（ＬＣ２）が、前記第２のＶＬ２および第２の軽鎖定常領域を含む、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
27. 請求項２６に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体であって、
    前記ＨＣ１が、配列番号３７を含み、
    前記ＬＣ１が、配列番号２２を含み、
    前記ＨＣ２が、配列番号３８を含み、および
    前記ＬＣ２が、配列番号２４を含む、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
28. 配列番号３７の３２８位のＸが、リジンであり、配列番号３８の３２４位のＸが、リジンである、請求項２７に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
29. 配列番号３７の３２８位のＸが、アラニンであり、配列番号３８の３２４位のＸが、アラニンである、請求項２７に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
30. 配列番号２１を含む第１のＨＣ１、配列番号２２を含む第１のＬＣ１、配列番号２３を含む第２のＨＣ１、および配列番号２４を含む第２のＬＣ１を含む、請求項２７に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
31. 配列番号３１を含む第１のＨＣ１、配列番号２２を含む第１のＬＣ１、配列番号３２を含む第２のＨＣ１、および配列番号２４を含む第２のＬＣ１を含む、請求項２７に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
32. 前記第１の抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖであり、前記第２の抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖである、請求項２３に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
33. 配列番号２２、２４、３７、および３８のうちの１つまたはそれ以上をコードする配列を含む核酸であって、配列番号３７のアミノ酸残基３２８がリジン残基である場合、配列番号３８の３２４位のＸが、リジン残基であり、配列番号３７の３２８位のＸがアラニン残基である場合、配列番号３８の３２４位のＸがアラニン残基である、核酸。
34. 配列番号２２、２４、３７および３８のポリペプチドのうちの１つまたはそれ以上をコードする配列を含む核酸を含む細胞であって、配列番号３７の３２８位のＸがリジン残基である場合、配列番号３８の３２４位のＸが、リジン残基であり、配列番号３７の３２８位のＸがアラニン残基である場合、配列番号３８の３２４位のＸが、アラニン残基であり、前記細胞が前記１つまたはそれ以上のポリペプチドを発現することができる、細胞。
35. 哺乳動物細胞である、請求項３４に記載の細胞。
36. ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト抗体を産生する方法であって、前記抗体が発現する条件下において、請求項３４または請求項３５に記載の細胞を培養し、次いで前記発現した抗体を前記培養培地から回収することを含む、方法。
37. 前記抗体が発現する条件下において、請求項３４または請求項３５に記載の細胞を培養し、次いで前記発現した抗体を前記培養培地から回収することによって産生される、ヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト抗体。
38. 請求項および２２～３２のいずれか一項に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト抗体、および医薬的に許容され得る賦形剤、希釈剤または担体を含む、医薬組成物。
39. 自己免疫疾患の治療を必要とする対象において自己免疫疾患を治療する方法であって、治療有効量の請求項２２～３２のいずれか一項に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を前記対象に投与することを含む、方法。
40. 前記自己免疫疾患が、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである、請求項３９に記載の方法。
41. 治療に使用するための、請求項２２～３２のいずれか一項に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
42. 自己免疫疾患の治療に使用するための、請求項２２～３２のいずれか一項に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体。
43. 前記自己免疫疾患が、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスである、請求項４２に記載の使用。
44. 関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病、または全身性エリテマトーデスの治療における使用のための、請求項２２～３２のいずれか一項に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体を含む、医薬組成物。
45. 関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、１型糖尿病または全身性エリテマトーデスを治療するための医薬の製造における、請求項２３～３２のいずれか一項に記載のヒトＬＡＧ－３／ヒトＰＤ－１デュアルアゴニスト二重特異性抗体の使用。

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