JP2019510048A - 週１回又は隔週１回の投与に適したリラグルチドの粘弾性ゲル - Google Patents

Abstract

本発明は、治療有効量のリラグルチドを含む粘弾性ゲルであって、ブロック又はグラフトコポリマーを有さず、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を特徴とする、粘弾性ゲルに関する。本発明はまた、そのようなゲルをそれを必要とする対象に週１回又は隔週１回で皮下投与することによって血糖値をコントロールする方法を提供する。そのようなゲルの調製方法も提供される。【選択図】図１

Description

本発明は、週１回又は隔週１回の投与のためのリラグルチドの粘弾性ゲル、そのような粘弾性ゲルを投与することによる血糖値をコントロールする方法、及びそのような粘弾性ゲルの代謝疾患の治療における使用に関する。本発明はまた、そのような粘弾性ゲルを作製する方法を提供する。

糖尿病は、特徴的な長期間の合併症を伴う代謝調節不全の疾患であり、とりわけ異常なグルコース代謝である。それは、長期間の薬物療法を必要とする慢性疾患である。ヒトインスリン及び様々なＧＬＰ−１アゴニストを含む様々な非経口抗糖尿病薬が市販されている。

リラグルチドは、ＩＩ型糖尿病に罹患している患者の血糖コントロールを改善するための１日１回の皮下注射として世界中で承認されている。リラグルチドの分子式は、Ｃ_１７２Ｈ_２６５Ｎ_４３Ｏ_５１である。リラグルチドの構造及び配列を以下に示す−

リラグルチドの理論上の分子量は、３７５１．２０Ｄａである。それは、その無水遊離塩基の形態で１８ｍｇのリラグルチドを含有するＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）の商品名で市販されている。Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）による治療は、１週間０．６ｍｇ／日の用量で開始される。それは、０．６ｍｇ〜１．２ｍｇ増加され、さらに必要とされる場合、１日１回１．８ｍｇに増加されてもよい。Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）は、透明で無色の溶液であり、ガラスカートリッジに１８ｍｇのリラグルチドに相当する３ｍＬのリラグルチドの溶液を含有する自己注射可能な使い捨ての事前充填ペンとして供給される。この溶液は、以下の不活性成分：リン酸二ナトリウム二水和物、１．４２ｍｇ；プロピレングリコール、１４ｍｇ；フェノール、５．５ｍｇ；及び注射用水を含有する。水酸化ナトリウム及び塩酸を用いて、溶液のｐＨを８．１５に調節する。保管期限は、２〜８℃で保管したとき、約２年間である。

リラグルチドは、複雑な溶解挙動を示す。リラグルチド及びその酢酸塩は、いずれも不溶性であり、水にわずかに可溶性である。エタノール（１．１ｍｇ／ｍｌ）及びＤＭＳＯなどの一般的な溶媒にもわずかに可溶性である。それは、メタノールに６８ｍｇ／ｍｌまで可溶性である。リラグルチドの希薄注射薬は、ｐＨ約８．０の水酸化ナトリウムを塩基として使用して、リラグルチドを水に溶解することによって調製される。リラグルチドは、０．００１〜１．２ｍＭの範囲の濃度で、主に自己会合ヘプタマー状態にとどまっている。理論に束縛されることを望まないが、リラグルチドのリジン−２６上の脂肪酸側鎖は、自己会合構造の相互作用強度に顕著な効果を有し得、ヘプタマー構造の会合の推進力となり得る。注射部位でのペプチド自己会合及びアルブミン結合は、最先端の針サイズ（少なくとも３１Ｇほどの細さ）で単純な低粘度製剤の１日１回の投薬に好適な薬物動態プロファイルをもたらす。米国特許第６２６８３４３号は、脂肪酸アシル化ＧＬＰ−１アゴニストを開示しており、１つの特定の例は、リラグルチドである。

活性成分リラグルチドは、塩基又はその酢酸塩の形態で商業的に販売されている。リラグルチドは、合成プロセスによって、又はサッカロマイセス・セレヴィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）からの組換えＤＮＡ技術の使用によって調製されてもよい。粗リラグルチドを異なる緩衝液を用いた調製高速液体クロマトグラフィーを使用して精製し、純粋な画分を得る。純粋な画分を脱塩し、凍結乾燥してふわふわした白色の純粋なリラグルチドを得る。

リラグルチド又はリラグルチドの酢酸塩は、塩基を使用してｐＨを７〜１１に調節した水にゆっくりと溶解する。より多くのリラグルチドが添加されると、粉末は、均一で透明なゲルを得るためにさらなる処理を必要とする、濁った、不均一で、不完全な水和又はゲル化混合物を形成する。高濃度のポリペプチドを得るために溶解するプロセスは、遅く、商業的製造には適切ではない、又は理想的ではない。

米国特許第６２６８３４３号明細書

ＧＬＰ−１アゴニストの長期作用性組成物は、当技術分野において既知である。エクセナチドの徐放性製剤は、２０１２年に米国で承認された。この週１回の製剤は、微小球にカプセル化されたエクセナチドからなる。米国特許第２０１４０２２０１３４号は、中鎖トリグリセリドにおいてポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーを含む徐放性微小球懸濁液を使用するエクセナチドの月１回の製剤を開示した。患者のコンプライアンスを高めるために、リラグルチド注射の投与頻度を低くする必要がある。

本発明者らは、リラグルチド又はその酸付加塩を、第１の濃度で注射用水中の非経口的に許容されるアミン塩基溶液に添加すること、及びそのように形成された水溶液を凍結乾燥することによって形成された新規な凍結乾燥混合物を発見した。そのようにして得られた凍結乾燥混合物（リラグルチド／塩基混合物）は、第１の濃度よりも高い第２の濃度でリラグルチド水溶液の調製において問題なく有用である。それは、濃縮溶液の製造、特に限定されるわけではないが、デポー製剤の製造にすぐに使用できる迅速溶解性のリラグルチド形態を提供する点で有利である。それは、貯蔵、輸送、及び取り扱い中に安定性を示す。本発明者らは、リラグルチドと、リラグルチドと非経口的に許容されるアミン塩基との非経口的に許容される混合物と、の新規な凍結乾燥混合物を使用することによって、合成により誘導されたブロック又はグラフトコポリマーを使用することなく新規な粘弾性ゲル組成物をさらに処方した。本発明者らはまた、無機塩基と塩の形態でリラグルチドを使用することにより、高濃度のリラグルチド溶液を作製することができることを見出した。滅菌形態のリラグルチド塩を使用し、注射用の滅菌水に溶解させる場合、溶液は滅菌される。リラグルチド塩が滅菌されていない場合、そのとき、この水溶液は、無菌的に濾過され、凍結乾燥され、次いで、再溶解されて、本発明の新規な粘弾性ゲルを調製するためにさらに使用することができる滅菌形態の高濃度リグルイド溶液を得ることができる。

本発明は、治療有効量のリラグルチドを含む粘弾性ゲルであって、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を含まず、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を特徴とする、粘弾性ゲルを提供する。本発明はまた、そのような粘弾性ゲルを作製する方法、及び週１回又は隔週１回の皮下投与によって代謝障害の治療のためのそのような粘弾性ゲルの使用を提供する。好ましい実施形態では、粘弾性ゲルは、ゲルの約１０重量％〜２５重量％の濃度でリラグルチド、少なくとも１つの両親媒性物質、及び水性ビヒクルを含む。

別の実施形態では、本発明は、治療有効量のリラグルチドを含む粘弾性ゲルの形態で組成物を週１回又は隔週１回で皮下投与することによって、それを必要とする対象における血糖値をコントロールする方法であって、ゲルが、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を含まず、ゲルが、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を特徴とする、方法を提供する。本発明はまた、代謝疾患の治療のための本発明の組成物の使用を提供する。

アントンパールＭＣＲ ３０２レオメーターを使用して、本発明の代表的な粘弾性ゲルの剪断ひずみに対する貯蔵弾性率（Ｇ’）と損失弾性率（Ｇ’’）とをプロットしたグラフを示す。降伏値は、線形粘弾性領域の限界値に対応し、流動点は、Ｇ’＝Ｇ’’である応力に対応する。 本発明により調製した水溶液（第２の濃度）（実施例３ａ）と比較して、リラグルチドの水溶液（実施例１ｂ）を調製することが困難であることを実証する画像を示す。 実施例１１のように分析したとき、実施例４の粘弾性ゲルのＣｒｙｏ−ＴＥＭ画像を示す。 比較例１ａ（図４ａ）を実施例４（図４ｂ）のゲル組成物（ゲル１０％）と比較したｄｂ／ｄｂマウスにおける前臨床有効性データを示す。 プラセボと比較して２８日間、実施例４のゲル組成物（ゲル１０％）の毎週の皮下投与によるｄｂ／ｄｂマウスにおける前臨床有効性データを示す。 Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）と比較して２８日間、実施例４のゲル組成物（ゲル１０％）の毎週の皮下投与による食餌誘発糖尿病ラットにおける前臨床有効性データを示す。 Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）と比較して２８日間、実施例４のゲル組成物（ゲル１０％）の毎週の皮下投与による食餌誘発糖尿病ラットにおける前臨床有効性データを示す。 Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）と比較して２８日間、実施例７のゲル組成物（ゲル１５％）の毎週の皮下投与による肥満糖尿病ラットにおける前臨床有効性データを示す。 Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）と比較して２８日間、実施例７のゲル組成物（ゲル１５％）の毎週の皮下投与による肥満糖尿病ラットにおける前臨床有効性データを示す。 ２８日間、実施例８のゲル組成物（ゲル２０％）の毎週の皮下投与によるｄｂ／ｄｂマウスにおける前臨床有効性データを示す。

本発明は、粘弾性ゲルが皮下注射され、単一皮下投与後、約６日〜約１０日間、より具体的には約１週間の期間にわたって、リラグルチドのゆっくりとした徐放を提供する、リラグルチドの長期作用性粘弾性ゲルを提供する。そのような長期作用性粘弾性ゲルは、患者に利便性をもたらし、それによって患者のコンプライアンスを増加させるので、リラグルチドの毎日の注射よりも有利である。本発明はまた、血糖値のコントロールを必要とする対象に皮下投与されると、６日〜約１０日間、より具体的には約１週間の期間にわたり血糖値をコントロールする方法を提供する。本発明の特定の実施形態はまた、隔週１回の皮下投与に好適である。

一実施形態では、本発明は、治療有効量のリラグルチドを含む粘弾性ゲルであって、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を含まず、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を特徴とする、粘弾性ゲルを提供する。本発明はまた、そのような粘弾性ゲルを作製する方法、及び代謝障害の治療のためのそのような粘弾性ゲルの使用を提供する。好ましい実施形態では、ゲルは、皮下投与される。さらに好ましい実施形態では、ゲルは、週１回又は隔週１回で投与され得る。

好ましい実施形態では、粘弾性ゲルは、ゲルの約１０重量％〜２５重量％の濃度でリラグルチド、少なくとも１つの両親媒性物質、及び水性ビヒクルを含む。

別の実施形態では、本発明は、治療有効量のリラグルチドを含む粘弾性ゲルを週１回又は隔週１回で皮下投与することによって、それを必要とする対象における血糖値をコントロールする方法であって、ゲルが、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を含まず、ゲルが、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を特徴とする、方法を提供する。本発明はまた、代謝疾患の治療のための本発明の粘弾性ゲルの使用を提供する。これらの実施形態のそれぞれについて以下に詳細に説明する。

本発明の新規な粘弾性ゲルは、高粘度を有し、放置時に流動性を持たない固形物のように挙動するが、ゲルは、外力が加えられると、例えば、プランジャーによって針を通して押し出されると、注射可能となる。注射後、ゲルは、注射部位でその粘稠度を回復し、それによりデポー効果をもたらす。ゲルは、振動試験を実施する好適なレオメーターを使用してレオロジーパラメーターによって特徴付けられてもよい。振動試験は、周波数及び温度を一定に保ったまま異なる振幅で実施される振幅掃引を伴う。これらの振動試験を使用して、本発明者らは、変形応答及び時間遅れ剪断応力応答を測定し、これらの測定値を使用して貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’を計算した。次いで、剪断ひずみに対する貯蔵弾性率（Ｇ’）及び損失弾性率（Ｇ’’）をプロットした。本発明の代表例のうちの１つの粘弾性ゲルの典型的なグラフを図１に示す。このゲルは、Ｇ’＞Ｇ’’を有する粘弾性ゲルとして特徴付けられた。本発明は、類似のグラフを提供する、すなわち貯蔵弾性率が損失弾性率よりも高い粘弾性ゲルを提供する。振動試験は、降伏値及び流動点を決定するためにも使用される。降伏値は、線形粘弾性領域の限界値に対応し、流動点は、Ｇ’＝Ｇ’’である応力に対応する。本発明の代表例の降伏値及び流動点は、それぞれ２００Ｐａ〜２５００Ｐａ及び３００Ｐａ〜３０００Ｐａの範囲内であることが分かった。振動試験を使用する任意の好適なレオメーターを使用して、レオロジーパラメーターを決定してもよい。本発明は、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を有する粘弾性ゲル組成物を提供する。好ましい実施形態では、降伏値は、７００Ｐａ〜２０００Ｐａであり、流動点は、１０００Ｐａ〜２５００Ｐａである。さらに別の好ましい実施形態では、降伏値は、８００Ｐａ〜２５００Ｐａであり、流動点は、１２００Ｐａ〜３０００Ｐａである。本発明の降伏値及び流動点は、任意の既知の方法によって測定してもよい。本発明者らは、測定のために、１ｍｍの隙間で直径２５ｍｍの平行プレート固定具を使用してアントンパールＭＣＲ ３０２レオメーターを使用した。ひずみ振幅は、１Ｈｚ（又は１０ｒａｄ／ｓ）の一定周波数及び２５℃の温度で０．００１〜１００％まで対数的に変化させた。

粘弾性ゲルは、治療有効量のリラグルチドを含む。リラグルチドは、塩基の形態で、若しくはその塩の形態で、又はそれらの混合物でゲル中に存在してもよい。塩の代表例としては、塩酸、臭化水素酸、ギ酸、酢酸、酒石酸、アスコルビン酸などのような好適な無機酸又は有機酸との塩が挙げられる。塩の代表例としてはまた、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン、ジエチルアミン、メグルミン、リジン、アルギニン、アラニン、ロイシン、オラミン、トロメタミン、コリン、タウリン、ベンザミン、メチルアミン、トリメチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミンなどのような塩基との塩が挙げられる。好ましい実施形態では、リラグルチドは、リラグルチドアセテートの形態で使用してもよい。さらに、「リラグルチド」という用語はまた、リラグルチド塩基と少量の酢酸との混合物を含み、例えば、酢酸は、リラグルチドの３重量％未満で存在してもよく、本発明は、そのような形態のリラグルチドを含む。別の好ましい実施形態では、リラグルチドは、そのナトリウム塩の形態であってもよい。そのような形態のリラグルチドは、市販されている。

本発明の粘弾性ゲル中のリラグルチドの濃度は、ゲルの約５重量％〜３０重量％であってもよい。好ましくは、リラグルチド濃度は、ゲルの１０重量％〜２５重量％である。ゲル中のリラグルチドの濃度は、血糖値をコントロールする必要がある対象において、毎週又は隔週の用量として投与する必要があるゲルの容量又は量を決定する。リラグルチドの毎週又は隔週の用量が多いので、注射量が少なくなるように高濃度のリラグルチド組成物が必要とされる。本発明者らは、リラグルチド塩基又は酢酸塩のようなその酸付加塩の物理化学的特性が、より高濃度のリラグルチドを含む組成物の作製に問題になることを見出した。さらに、リラグルチドは、それ自体が親油性鎖でさらに誘導体化された３２個のアミノ酸のポリマーであり、それが溶解する溶液の粘性性質に寄与するという点で補助的な機能を有することに留意されたい。高濃度の水中では粘性の高い構造を形成する傾向があり、このため高濃度のリラグルチド組成物を作製するには実用上困難である。長期作用性組成物は、より高い用量のリラグルチドを必要とするので、高濃度のリラグルチド組成物の作製が困難であるという課題がある。本発明者らは、組成物中のリラグルチドの充填量を増加させることによって高濃度組成物をもたらす有利な方法を見出した。そのような高濃度のリラグルチド組成物は、当技術分野において既知ではない。本方法のうちの１つでは、リラグルチドと非経口的に許容されるアミン塩基との凍結乾燥混合物が調製される。別の方法では、リラグルチドと無機塩基との塩を使用してもよい。いずれの方法においても、薬物を滅菌形態で使用してもよく、又は薬物の第１の水溶液を調製して、粘弾性ゲルを調製するさらなる工程で使用するために滅菌されてもよい。さらに、本発明者らは、具体的にはリラグルチドが５〜３０％であり、降伏値が２００Ｐａ〜３０００Ｐａの範囲内であり、流動点が３００Ｐａ〜３５００Ｐａの範囲である高濃度の粘弾性ゲルを作製するのに成功し、これは、ある期間にわたってリラグルチドの徐放を提供することによって、毎週の皮下投与後、約６日〜約１０日間の長期作用を提供する。本発明はまた、隔週、すなわち１５日毎に１回の皮下投与に好適な粘弾性ゲルを提供することができる。

本発明者らは、同時係属中の出願のＰＣＴ／ＩＮ第２０１６／０５０１８５号に開示された組成物において必要とされるようなブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物が、本発明による粘弾性ゲルにおいて必須ではないことを見出した。ＰＣＴ／ＩＮ第２０１６／０５０１８５号で請求された組成物は、半固体コンシステンシーで非常に粘性であることが分かり、針を通して押し出すと注射可能となった。しかしながら、本発明は、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を必要としない。これは、糖尿病治療が慢性治療であり、よって、最少数の賦形剤（ｅｘｃｅｐｉｅｎｔｓ）が望ましいため、有利である。本発明は、合成由来のコポリマーの使用を回避する。

好ましい実施形態では、粘弾性ゲルは、治療有効量のリラグルチドを１０〜２５％の濃度で含み、少なくとも１つの両親媒性物質、及び水性ビヒクルを含み、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を含まない。さらに好ましい実施形態では、組成物は、非経口的に許容されるアミン塩基をさらに含んでもよい。

本発明の組成物において使用され得る「両親媒性物質」という用語は、親水性又は親水性（親油性）基の両方を含有する化合物を指す。本発明の粘弾性ゲルに使用するのに好適な両親媒性物質としては、モノ及びジグリセリド、ポリグリセライズ化脂肪酸、ポリエトキシル化脂肪酸、ＰＥＧ−脂肪酸モノ及びジエステル、並びにそれらの混合物、ＰＥＧグリセロール脂肪酸エステル、アルコール−油エステル交換生成物、プロピレングリコール脂肪酸エステル、プロピレングリコールエステルとグリセロールエステルとの混合物、ＰＥＧソルビタン脂肪酸エステル、ＰＥＧアルキルエーテル、ＰＥＧアルキルフェノール、並びにソルビタン脂肪酸エステルが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのモノ、ジ、及びトリグリセリドの例は、グリセロールモノオレエート（ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｍｏｎｏｌｅａｔｅ）、グリセロールモノラウレート、グリセロールモノパルミテート、グリセロールモノステアレート、グリセロールアセテート、グリセロールラウレート、グリセロールカプリレート、グリセロールカプレート、グリセロールモノステアレート、グリセロールジオレエート、カプリル酸モノ、ジグリセリド、ジカプリン、ジミリスチン、ジパルチミン、グリセリルジラウレート、グリセロールトリオレエート、グリセロールトリステアレート、並びに脂肪酸のグリセロールエステルである。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのポリグリセライズ化脂肪酸の例は、ポリグリセリル−２、４、１０、ステアレート、ポリグリセリル−２、３、４、６、１０オレエート、ポリグリセリル−２イソステアレート、ポリグリセリル−１０ラウレート、ポリグリセリル−６リシノレート、ポリグリセリル−１０リノレエート、ポリグリセリル−２、３ジオレエート、ポリグリセリル−３ジステアレート、及びポリグリセリル−１０トリオレエートである。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのポリエトキシル化脂肪酸の例は、ＰＥＧ１−１０ステアレート、ＰＥＧ２オレート、ＰＥＧ４ラウレート、ＰＥＧ４−１００モノオレエート、ＰＥＧ４−モノステアレートであり、本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのＰＥＧ−脂肪酸ジエステル及びモノエステルとの混合物の例は、異なる等級のＰＥＧ、例えば、ＰＥＧ−４ジラウレート、ＰＥＧ−４ジオレエート、ＰＥＧ−４ジステアレート、ＰＥＧ−１０ジパルミテート、ＰＥＧ−６ジラウレート、ＰＥＧ−６ジオレエート、ＰＥＧ−６ジステアレート、ＰＥＧ−８ジラウレート、ＰＥＧ−８ジオレエート、ＰＥＧ−８ジステアレート、ＰＥＧ−１２ジラウレート、ＰＥＧ−１２ジオレエート、ＰＥＧ−１２ジステアレート、ＰＥＧ−３２ジラウレート、ＰＥＧ−３２ジオレエート、ＰＥＧ−３２ジステアレートを有するラウリン酸、オレイン酸、ステアリン酸、パルミチン酸のジエステルである。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのＰＥＧグリセロール脂肪酸エステルの例は、異なる等級のＰＥＧ、例えば、ＰＥＧ−１５グリセリルラウレート、ＰＥＧ−２０グリセリルラウレート、ＰＥＧ−２０グリセリルステアレート、ＰＥＧ−２０グリセリルオレエート、及びＰＥＧ−１５グリセリルオレエートを有するラウリン酸、オレイン酸、ステアリン酸のエステルである。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのアルコール−油エステル交換生成物の例は、ＰＥＧ−５−１０ヒマシ油、ＰＥＧ−５、７、１０水添ヒマシ油、ＰＥＧ−６ピーナッツ油、ＰＥＧ−６核油、ＰＥＧ−６トウモロコシ油、ＰＥＧ−２０コーングリセリド、ＰＥＧ−８及び６カプリル酸／カプリン酸グリセリド、ペンタエリスリチルテトライソステアレート、ペンタエリスリチルジステアレート、ペンタエリスリチルテトラオレエート、ペンタエリスリチルテトラステアレート、ペンタエリスリチルテトラカプリレート／テトラカプレートである。本発明の粘弾性ゲルの両親媒性物質として使用するためのプロピレングリコール脂肪酸エステルの例は、プロピレングリコールモノカプリレート、プロピレングリコールモノラウレート、プロピレングリコールオレエート、プロピレングリコールミリステート、プロピレングリコールリシノレエート、プロピレングリコールジカプリレート／ジカプレート、プロピレングリコールジオクタノエート、プロピレングリコールジラウレート、プロピレングリコールジステアレート、及びプロピレングリコールジカプリレートである。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのプロピレングリコールエステルとグリセロールエステルとの混合物の例は、オレイン酸及びステアリン酸のエステルである。本発明の粘弾性ゲルの両親媒性物質として使用するためのＰＥＧソルビタン脂肪酸エステルの例は、ＰＥＧ−４、６、１０ソルビタンモノラウレート、ＰＥＧ−１０ソルビタンモノパルミテート、ＰＥＧ−４、６、８、１０ソルビタンモノステアレート、ＰＥＧ−５、６、１０ソルビタンモノオレエート、ＰＥＧ−６ソルビタンテトラオレエート、ＰＥＧ−６ソルビタンテトラステアレート、ＰＥＧソルビタンヘキサオレエート、ＰＥＧソルビタンヘキサステアレートである。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのＰＥＧアルキルエーテルの例は、ＰＥＧオレイルエーテル、ＰＥＧラウリルエーテル、ＰＥＧセチルエーテル、及びＰＥＧステアリルエーテルである。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのＰＥＧアルキルフェノールの例は、ＰＥＧ−１０ノニルフェノール及びＰＥＧ−１５オクチルフェノールエーテルである。本発明の粘弾性ゲルにおいて両親媒性物質として使用するためのソルビタン脂肪酸エステルの例は、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタントリオレエート、ソルビタントリステアレート、ソルビタンセスキステアレート、及びソルビタンセスキオレエートである。

粘弾性ゲルにおける使用に好適な両親媒性物質はまた、リン脂質を含んでもよい。本発明で使用されるリン脂質は、植物源、動物源、又は合成源から得てもよい。天然リン脂質は、例えば、大豆、菜種（キャノーラ）種子、小麦胚芽のような植物源、例えば、卵黄、牛乳のような動物材料などから得ることができる。天然リン脂質の例は、大豆レシチン、卵レシチン、モノアシル−ホスファチジルコリン（リゾＰＣ）、大豆ＰＥ、大豆ＰＧ、卵ＰＧ、及び飽和類似体などの酵素修飾天然リン脂質である。合成リン脂質の例は、ＰＥＧ−イル化リン脂質及びカチオン性リン脂質１，２−ジアシル−Ｐ−Ｏ−エチルホスファチジルコリン、又はそれらの混合物である。合成リン脂質の例は、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬｉＰＣ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、１−パルミトイル（ｐａｌｍｉｔｙｏｌ）−ＬＰＣ（ＰａＬＡＣ）、１−オレオイル−ＬＰＣ（ＯｉＬＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、プラスメニルエタノールアミン（ＰｌａＥ）、プラスネニルエタノールアミンのグリセロールアセタール（ＧＡＰｌａＥ）、ジドデシルホスファチジルエタノールアミン（ＤＤＰＥ）、ジエライドイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＬｉＰＥ）、ジオレオイルホスファチジル−Ｎ−モノメチルエタノールアミン（ＤＯＰＥ−Ｍｅ）、ドホスファチジルグリセロール（ＤＰＧ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）が挙げられ、好ましいリン脂質がホスファチジルコリンを含む。好ましくは、ホスファチジルコリンは、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）又はその混合物である。粘弾性ゲルにおける使用に好適な両親媒性物質は、Ｆｏｎｔｅｌｌら、Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ＆Ｐｏｌｙｍｅｒ ｓｃｉｅｎｃｅ、２６８：２６４−２８５（１９９０）に記載されているような非イオン性及び双性イオン性界面活性剤、モノグリセリド、並びにスフィンゴ脂質及びリン脂質を含んでもよい。

好ましくは、本発明の組成物における使用に好適な両親媒性物質は、グリセリルモノオレエート、グリセリルジオレエート、グリセリルトリオレエート、ポリグリセリル（ｐｌｙｇｌｙｄｅｒｙｌ）−３−ジオレエート及びホスファチジルコリン、並びにそれらの混合物から選択されてもよい。さらに好ましい実施形態では、両親媒性物質は、グリセリルモノオレエート、グリセリルジオレエート、グリセリルトリオレエート、及びホスファチジルコリンの混合物である。混合物は、少量の脂肪酸、好ましくはオレイン酸を含んでもよい。例えば、商品名ＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）により入手可能な薬局方等級の市販の両親媒性物質を使用してもよい。ＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）９４８は、モノグリセリド（３２．０〜５２．０％）、ジグリセリド（３０．０〜５０．０％）、及びトリグリセリド（５．０〜２０．０％）の比率で４０％の名目含量のモノグリセリドを含有する、植物源脂肪酸、主にオレイン酸による植物由来グリセロールのエステル化によって製造される。モノ、ジ、及びトリグリセリドの混合物は、以下の名目含量のモノグリセリドに従って異なる比率で入手可能であり、異なる等級のＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）として入手可能である。ＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）はまた、特定の実施例ではグリセリルオレエートと呼ばれている。

一般に、本粘弾性ゲル中のリン脂質とそのモノ、ジ、及びトリグリセリドの混合物との重量比は、５０：５０である。両親媒性物質は、ゲルの４０重量％〜６０重量％の濃度で本発明の粘弾性ゲル中に存在する。好ましくは、両親媒性物質は、ゲルの４５重量％〜５５重量％の濃度で本発明の粘弾性ゲル中に存在する。

本発明の粘弾性ゲルに使用され得る水性ビヒクルは、水と水混和性溶媒との混合物を含む。水は、水溶性又は水混和性成分を溶解するために使用され、少なくとも１つの水混和性溶媒は、両親媒性物質、特に水溶性ではない両親媒性物質を溶解させるために使用されてもよい。粘弾性ゲルにおける使用に好適な水性ビヒクルとしては、水、アルコール、エーテル、エステル、及びケトン、又はそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。アルコールは、ビヒクルのクラスを含んでもよく、例えば、モノオール、ジオール、及びポリオール、例えば、エタノール、グリセロール、ポリエチレングリコール、又はプロピレングリコールを含む。好適なエーテルは、ジエチルエーテル、グリコフロール、ジエチレングリコール、及びポリエチレングリコールを含んでもよい。従来の液体及び半固体組成物とは異なり、本発明の粘弾性ゲルは、本発明の他の成分の全濃度よりも低い液体ビヒクル濃度を有する。水性ビヒクルは、２０％〜４０％の濃度で存在してもよい。好ましい実施形態では、水性ビヒクルは、３０％〜３５％の濃度で存在してもよい。好ましくは、水性ビヒクルは、水、エタノール、プロピレングリコール、グリコフロール、グリセロール、及びそれらの混合物から選択される。

好ましい実施形態では、ゲル組成物は、非経口的に許容されるアミン塩基を含んでもよい。非経口的に許容されるアミン塩基は、リラグルチド塩基又は酢酸塩のようなリラグルチドの酸付加塩を使用する組成物において特に必要とされる。前述したように、リラグルチド塩基又は酢酸塩は、薬物の水への溶解性に関する問題を提示する。したがって、リラグルチド塩基又はリラグルチドの酸付加塩を使用して粘弾性ゲルを調製するために、本発明に従って非経口的に許容されるアミン塩基を使用して、リラグルチドの高濃度溶液を調製することができる。非経口的に許容されるアミン塩基は、本発明の粘弾性ゲル中に、リラグルチドとの凍結乾燥混合物として存在してもよい。本発明はまた、リラグルチドと薬学的に許容されるアミン塩基との有利な凍結乾燥混合物を提供する。本発明者らは、驚くべきことに、リラグルチドが、組成物中に非経口的に許容されるアミン塩基との凍結乾燥混合物として存在するとき、１０％〜２５％の濃度でリラグルチドを含む粘弾性ゲルを調製することができることを見出した。

非経口的に許容されるアミン塩基は、トリエタノールアミン、ジエチルアミン、メグルミン、オルニチン、リジン、アルギニン、アラニン、ロイシン、ジエチルエタノールアミン、オラミン、トリエチルアミン、トロメタミン、グルコサミン、コリン、トリメチルメイン、タウリン、ベンザミン、トリメチルアンモニウムヒドロキシド、エポラミンメチルアミン、ジエチルアミン、トリメチルアミン、メチルエタノールアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミンなどから選択される。好ましくは、非経口的に許容されるアミン塩基は、トロメタミン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、グアニジン、エポラミン、グルコサミン、及びメグルミンから選択される。より好ましくは、非経口的に許容されるアミン塩基は、トロメタミン及びアルギニンから選択される。

別の実施形態では、本発明は、治療有効量のリラグルチドを含む粘弾性ゲルの形態で組成物を週１回又は隔週１回で皮下投与することによって、それを必要とする対象における血糖値をコントロールする方法であって、ゲルが、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を含まず、ゲルが、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を特徴とする、方法を提供する。

「対象における血糖値をコントロールする」という用語は、正常な生理学的範囲に向かって、それを必要とする対象における血糖濃度を低下させることを指し、したがって、糖尿病又は関連障害の治療において有効性を提供する。グルコースの正常な生理学的範囲は、当業者に周知である。「それを必要とする対象」という用語は、血糖値を生理学的レベルまで正常化する必要がある対象、特に糖尿病又は関連障害の治療を必要とする対象を指す。本明細書で使用される「対象」という用語は、ヒト及び動物を含む哺乳動物を指す。

好ましい実施形態では、本発明の方法は、約５％〜約３０％のリラグルチドを含むゲル組成物の皮下投与を提供する。好ましい実施形態では、リラグルチドの濃度は、約１０％〜２５％である。

本発明者らは、注射部位での注射時にその粘稠度を回復し、デポーを提供する粘弾性ゲルを使用して血糖値をコントロールする方法であって、そこからリラグルチドが、約６日〜１０日間、好ましくは約１週間の期間にわたってグルコース低下効果を誘発するために血漿中にゆっくりと放出される、方法を見出した。本発明の方法はまた、隔週投与後約１５日間、グルコース低下効果を提供するために使用してもよい。

さらに好ましい実施形態では、本発明の方法は、リラグルチド、少なくとも１つの両親媒性物質、及び水性ビヒクルの約１０％〜約２５％の濃度でリラグルチドを含むゲル組成物の皮下投与を提供する。両親媒性物質という用語は、上で定義した通りである。両親媒性物質は、ゲルの４０重量％〜６０重量％の濃度で存在してもよい。好ましい実施形態では、両親媒性物質は、ゲルの４５重量％〜５５重量％の濃度で使用されてもよい。本発明の方法において使用され得る両親媒性物質の特定の例は、上記で提供された両親媒性物質の例から選択されてもよい。好ましくは、両親媒性物質は、グリセリルモノオレエート、グリセリルジオレエート、グリセリルトリオレエート、ポリグリセリル−３−ジオレエート、ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物から選択される。より好ましくは、両親媒性物質は、グリセリルモノオレエート、グリセリルジオレエート、グリセリルトリオレエート、及びホスファチジルコリンの混合物である。水性ビヒクルは、ゲルの２０重量％〜４０重量％の濃度で存在してもよい。好ましい実施形態では、水性ビヒクルは、３０％〜３５％の濃度で存在してもよい。水性ビヒクルは、水と水混和性溶媒との混合物を含んでもよい。水は、水溶性又は水混和性成分を溶解するために使用され、少なくとも１つの水混和性溶媒は、両親媒性物質、特に水溶性ではない両親媒性物質を溶解させるために使用されてもよい。好ましくは、水性ビヒクルは、水、エタノール、プロピレングリコール、グリコフロール、及びそれらの混合物から選択される。

本発明の粘弾性ゲルは、皮下又は筋肉内注射によって投与されてもよい。より好ましくは、本発明の粘弾性ゲルは、皮下注射によって投与されてもよい。

本発明はまた、代謝障害の治療における本発明の粘弾性ゲルの使用を提供する。より具体的には、本組成物は、グルコースレベルにおけるコントロールから恩恵を受ける疾患、例えば、ＩＩ型高血糖症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、心臓血管障害、肥満、腎障害、ＣＮＳ障害、眼障害などにおいて有用であり得る。

本発明者らは、前臨床試験において本発明の代表的な粘弾性ゲル組成物の有効性を試験し、そのデータは、下記の実施例１２〜１５に提供される。粘弾性ゲル組成物は、糖尿病マウスへ単一皮下投与すると、約１週間、血糖値の低下をもたらすことが分かった（図４）。さらに、複数用量研究でも血糖値の安定した低下が見られた（図５、６、８、及び１０参照）。さらに、本発明の粘弾性ゲルの投与における血糖の変化率は、Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）の毎日投与又はＴｒｕｌｉｃｉｔｙ（商標）の毎週の投与と同等又はそれ以上であることが分かった。本発明の粘弾性ゲルは、Ｈｂ１Ａｃレベルを低下させるのにも有効である（図７及び図９）。したがって、本発明の粘弾性ゲルは、２型糖尿病、高血糖症、又は耐糖能障害の予防又は治療ばかりでなく肥満のような代謝疾患の治療にも有用である。

本発明の粘弾性ゲルは、当技術分野において既知の方法によって調製されてもよい。本発明の組成物を調製するために本発明者らが使用したプロセスを本明細書の以下に提示する。プロセスは、大まかに２つの工程を含む：第１の工程は、リラグルチドとアミン塩基との凍結乾燥混合物の調製であり、第２の工程は、第１の工程の凍結乾燥混合物を使用して水溶液を調製し、それを両親媒性物質の非水溶液とさらに混合することを伴う。リラグルチドがリラグルチドの塩基又は酢酸塩のような酸付加塩として使用される組成物の場合、第１及び第２の工程は、以下に記載されるように実施されてもよい。代わりに、無機塩基とのリラグルチド塩を使用する場合には、リラグルチドアセテートに関連する問題なしに、５％〜３０％の高濃度のリラグルチドを直接作製することが可能である。リラグルチドのナトリウム塩は、近年、滅菌形態で市販されるようになった。同じものを注射用水に溶解して、滅菌形態の高濃度水溶液を直接得ることができる。リラグルチド塩が滅菌されていない場合、そのとき、この水溶液は、無菌的に濾過され、凍結乾燥され、次いで、再溶解されて、滅菌形態の高濃度のリラグルチド溶液を得ることができるプロセスは、以下の段階的な様式で記載される。

本発明の凍結乾燥混合物は、以下を含むプロセスによって調製することができる：
ａ．注射用水中の非経口的に許容されるアミン塩基溶液を調製すること。

ｂ．工程（ａ）の溶液にこの溶液を撹拌しながら、リラグルチド又はその酸付加塩を添加して、第１の濃度で第１の水溶液を形成すること。

ｃ．任意に、工程（ｂ）の第１の水溶液を無菌濾過によって滅菌すること。

ｄ．溶液を凍結乾燥して凍結乾燥混合物を得ること。

非経口的に許容されるアミン塩基の量は、第１の水溶液のｐＨが約６．７〜約１０の範囲にあるような量であり、凍結乾燥混合物は、第１の濃度よりも高い第２の濃度で水溶液を調製するために適合される。

凍結乾燥混合物を調製するためのプロセスの工程ａ及びｂは、成分を必要に応じて、溶解及び混合して、所望の最終生成物を得ることを伴う従来の技術を使用して行われる。必要量の注射用水を好適な容器に入れる。秤量した量の非経口的に許容されるアミン塩基を、穏やかに撹拌しながら注射用水に溶解させる。リラグルチドをゆっくり添加し、撹拌して分散させる。約６．７〜約１０の範囲の第１の濃度の水溶液のｐＨが得られ、溶液が透明になるまで撹拌しながら、非経口的に許容されるアミン塩基（固体又は溶液として）がさらに添加される。あるいは、非経口的に許容されるアミン塩基の量を最適化することができ、次いで、注射用水中の非経口的に許容されるアミン塩基溶液に、リラグルチドを撹拌しながら徐々に添加して、約６．７〜約１０の範囲の溶液を得てもよい。好ましくは、溶液のｐＨは、約６．７〜約８．５の範囲であり、より好ましくは約７．０〜約８．３の範囲である。アミン塩基は、典型的には、リラグルチドに対して、１：１〜１：６のモル比で使用され、例えば、トロメタミンは、３％〜１８％で使用され、アルギニン又はヒスチジンは、４．０％〜２５％で使用される。リラグルチドの酸付加塩が組成物中に使用される場合、追加のアミンが必要とされ得る。第１の水溶液は、無菌濾過、好ましくは０．２μメンブランフィルターによる濾過によって滅菌されていてもよい。

本明細書における「第１の濃度」は、リラグルチドの凍結乾燥混合物を調製するために、非経口的に許容されるアミン塩基を含有する水性ビヒクル中にリラグルチド又はその酸付加塩を溶解することによって調製されるリラグルチド水溶液の濃度を指す。第１の濃度は、０．２μｍフィルターを通して濾過できるその能力によって限定される。典型的には、第１の濃度は、約０．５〜３０％ｗ／ｗの範囲、好ましくは約５〜２０％ｗ／ｗの範囲であってもよい。高濃度を作製する能力は、使用される塩基のタイプにも依存する。

第１の濃度の第１の水溶液は、個々のバイアルなどの容器に所望の容量まで充填され、バイアルは、凍結乾燥プロセスに供される。バルク製造の場合、溶液は、冷凍乾燥トレイ／容器に所望の容量まで充填され、凍結乾燥プロセスに供される。クロスコンタミネーション及びフライアウトの両方を防止するために特有の拡張ポリテトラフルオロエチレン（ｅＰＴＦＥ）メンブレン技術を使用する完全に密閉された１回だけの使用の使い捨て容器であり、凍結乾燥中の水蒸気の自由な交換を可能にする、Ｇｏｒｅ（登録商標）Ｌｙｏｇａｕｒｄ（登録商標）トレイ（Ｗ．Ｌ．Ｇｏｒｅ ＆ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｉｎｃ．製）などの冷凍乾燥トレイが使用される。凍結乾燥プロセスは、従来の様式で行われる。凍結乾燥薬物を含有するトレイは、予め滅菌した紙袋／アルミニウムパウチに個別に包装し、密封して−２０℃で保存される。

本発明者らは、本発明の凍結乾燥混合物が濃縮溶液の製造、特に限定されないがデポー組成物の製造に容易に使用することができる、すぐに使用できる迅速溶解性のリラグルチド形態であることを発見した。したがって、高濃度、例えば１０％〜２５％でリラグルチドを含む長期作用性組成物を容易に調製することができ、その調製のプロセスは、商業的製造に理想的である。したがって、本発明は、リラグルチドと非経口的に許容されるアミン塩基との凍結乾燥混合物、特に好ましいのはリラグルチドとトロメタミンとの凍結乾燥混合物、及びリラグルチドとアルギニンとの凍結乾燥混合物を提供する。

別の態様では、リラグルチドと非経口的に許容されるアミン塩基との凍結乾燥混合物を含む本発明のゲル組成物は、以下を含む：
ａ）上記の本発明のプロセスによる凍結乾燥混合物を調製すること。

ｂ）凍結乾燥混合物を注射用水に溶解し、必要に応じて無菌濾過によって溶液を滅菌することによって、第２の濃度で水溶液を調製すること。

ｃ）水混和性溶媒中の両親媒性物質の非水溶液を調製し、無菌濾過によって溶液を滅菌すること。

ｄ）工程（ｃ）の溶液を工程（ｂ）の溶液に無菌的に添加し、混合すること。

本明細書における「第２の濃度」は、リラグルチド及び非経口的に許容されるアミン塩基を含む本発明の凍結乾燥混合物を溶解することによって調製されたリラグルチド水溶液の濃度を指す。第２の濃度は、約１〜６０％ｗ／ｗの範囲、好ましくは約１５〜５０％ｗ／ｗの範囲で調製されてもよい。

週１回又は隔週１回の投与に適した本発明のゲル組成物を作製するための工程ｂ）は、本発明のプロセスにより調製された凍結乾燥混合物を注射用水に溶解することによって、第２の濃度で水溶液を調製することを伴う。溶液は、成分を必要に応じて溶解及び混合して、所望の最終生成物を得ることを伴う製薬産業の従来技術を使用して調製される。この第２の濃度での水溶液は、リラグルチドの濃度に応じて、溶液若しくは半粘性溶液、又は透明なゲルの形態であってもよい。第２の濃度の水溶液は、無菌濾過、好ましくは０．２μメンブランフィルターによる濾過によって滅菌されていてもよい。

本発明の凍結乾燥混合物は、リラグルチド塩基又はその酸付加塩と比較して、週１回又は隔週１回の投与に適したリラグルチドの粘弾性ゲルの調製において有利な特性を提供する。例えば、それは、単一工程プロセスによって任意の所望の濃度を処方することが可能な粉末をすぐに使用できる。本発明の凍結乾燥混合物は、周囲の貯蔵、輸送、及び取り扱いで溶解性の向上及び安定性の改善を示す。塩基のタイプに応じて、溶液のより高いゲル化濃度が達成される。これは、本発明の重要な側面であり、それは、週１回又は隔週１回の投与に適したゲル組成物を注射容量を減らして処方するのが好ましいからである。この凍結乾燥混合物を使用して調製された水溶液は、第２の濃度での水溶液であり、２〜８℃の温度で保たれたとき、高濃度のリラグルチドで透明な透過性であり安定的である。これは、本発明の凍結乾燥混合物を使用して作製された溶液が透明のままである図２から明らかである。一方、実施例１（ｂ）のように水及びトロメタミンの溶液中にリラグルチドアセテートを添加することによって、リラグルチドの水溶液を調製すると、濁った、不均一で、不完全に水和した又は部分的にゲル化した混合物が生じたのに対して、凍結乾燥混合物を使用して調製された水溶液は、透明なゲルを形成する。本発明の別の態様は、より高い濃度の溶液又はゲル化の作製を可能にする非経口的に許容されるアミン塩基の選択である。例えば、アルギニンとのリラグルチドは、２８％の濃度で流動性の液体のままであり、３９％の濃度でゲルを形成する一方、トロメタミンとのリラグルチドは、２８％の濃度でゲルを形成する。

週１回又は隔週１回の投与のための本発明のゲル組成物を作製するためのプロセスの工程ｃ）は、水混和性溶媒中の両親媒性物質溶液の調製を伴う。粘弾性ゲル中の両親媒性物質は、粘弾性ゲルの４０重量％〜６０重量％の濃度で存在する。これは、６０〜７０℃の温度で撹拌しながら両親媒性物質を水混和性溶媒に溶解することによって調製される。プロセスは、撹拌機を使用することによって混合する従来の方法を伴う。典型的には、必要量の溶媒は、撹拌機を備えたタンク中に入れられる。混合物の温度を６０〜７０℃に維持しながら、脂質を撹拌しながらゆっくりと添加する。この両親媒性物質の非水溶液は、無菌濾過によって、好ましくは０．２μのメンブランフィルターを通して濾過することによって滅菌されていてもよい。

プロセスの工程ｄ）は、撹拌を使用して第２の濃度で両親媒性物質の非水性溶液を水溶液に添加し粘弾性ゲルの形態でゲル組成物を形成することを伴う。

［実施例］
本発明の実施例の組成を詳細に説明する。しかしながら、本開示は、例示的な実施例に限定されず、様々な他の方法で実現することができることに留意されたい。

［実施例１ａ（比較例）］

組成物の製造プロセス：
（Ａ）相Ｉ：リラグルチド（５ｍｇ）、トロメタミン（０．５ｍｇ）、及びポリソルベート−８０（２．５ｍｇ）を注射用水（２０ｍｇ）に溶解し、２０〜２５℃に保った。

（Ｂ）相ＩＩ：大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）（４２．５ｍｇ）、グリセロールオレエート（モノ、ジ、及びトリオレエートと遊離脂肪酸との混合物）（グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）：グリセリルジオレエート（Ｇｌｙｃｅｒｙｌ ｄｉｏｏｌｅａｔｅ）（ＧＤＯ）：グリセリルトリオレエート（ＧＴＯ）＝４４：４２：９）（４２．５ｍｇ）、プロピレングリコール（５ｍｇ）、エタノール（１０ｍｇ）を混合し、撹拌下６０〜７０℃の温度で１５〜２０分間、溶解した。

（Ｃ）相ＩＩＩ：６０〜７０℃の温度で撹拌を使用して相Ｉに相ＩＩを添加して濃縮ゲル相を形成させた。降伏値及び流動点を、アントンパールＭＣＲ ３０２レオメーターによって、１ｍｍの隙間で２５ｍｍ直径の平行板固定具を使用して測定した。ひずみ振幅は、１Ｈｚ（又は１０ｒａｄ／ｓ）の一定周波数及び２５℃の温度で０．００１〜１００％まで対数的に変化させた。降伏値は、４６．９５Ｐａであり、流動点は、７８．７４Ｐａであると決定された。本実施例は、ゲル生成物を糖尿病マウスに皮下投与した実施例１２による前臨床試験で試験した。図４ａに示すように、ゲルは、本発明の実施例と比較して血糖値を低下させるのに有効ではなかった（図４ｂ）。

［実施例１ｂ（比較例）］
リラグルチドアセテートの水溶液の調製

バイアルに注入するために穏やかな撹拌下でトロメタミンを水に溶解した。上記溶液に添加したときのリラグルチドアセテートの場合、図２に示すように、濁った、不均一で、不完全に水和した又は部分的にゲル化した混合物が生じた
［実施例２］
リラグルチド及びトロメタミンを有する第２の濃度での水溶液の調製、並びにそれを凍結乾燥して凍結乾燥混合物を作製する

注射用水をバイアルに入れた。穏やかな撹拌下である量のトロメタミンを注射用水に溶解した。リラグルチドアセテートを撹拌しながら上記溶液に添加した。ｐＨを測定し、必要に応じて、６．５〜８．５のｐＨが得られ、溶液が透明になるまで撹拌しながらトロメタミンを添加した。次いで、リラグルチドの第１の濃度の水溶液（２．５％ｗ／ｗ）を０．２μｍメンブランフィルターで濾過し、バイアルに充填し、凍結乾燥した。凍結乾燥混合物中のリラグルチドのアッセイは、９１．１％であった。

［実施例３］
リラグルチドとトロメタミンとを含有する凍結乾燥混合物からの第２の濃度での水溶液の調製
第２の濃度での３つの異なる溶液を以下のように調製した：
ａ）第２の濃度でのリラグルチドの水溶液（１１．１％ｗ／ｗ）

実施例２の凍結乾燥混合物を注射用の滅菌水に溶解して、図２に示すように透明で透過性の第２の濃度の水溶液（１１．１％ｗ／ｗの濃度でリラグルチドを含有する）を得た。これを２０〜２５℃に保った。

（ｂ）第２の濃度でのリラグルチドの水溶液（２０％ｗ／ｗ）

実施例２の凍結乾燥混合物を注射用の滅菌水に溶解し、第２の濃度の水溶液（２０％ｗ／ｗの濃度でリラグルチドを含有する）を得た。これを２０〜２５℃に保った。

（ｃ）第２の濃度でのリラグルチドの水溶液（２８．６％ｗ／ｗ）

実施例２の凍結乾燥混合物を注射用の滅菌水に溶解し、第２の濃度の水溶液（２８．６％ｗ／ｗ）を得た。これを２０〜２５℃に保った。

［実施例４］
第２の濃度の水溶液を使用したゲル組成物の調製

両親媒性物質の非水溶液−大豆ホスファチジルコリン（Ｌｉｐｏｉｄ Ｓ１００）、グリセロールオレエート（ＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）９４８、モノ、ジ、及びトリオレエートと遊離脂肪酸との混合物）をプロピレングリコール及びエタノールに６０〜７０℃で１５〜２０分間撹拌しながら溶解し、０．２μｍメンブランフィルターで濾過した。

ゲル組成物−両親媒性物質の非水性溶液を実施例３（ｃ）の第２の濃度で３６．７％ｗ／ｗの水溶液（２８．６％の濃度でリラグルチドを含む）に添加し、撹拌機を使用して混合して５０〜７０℃で撹拌を使用してゲルを形成させた。脂質ゲルは、半固体粘稠性の黄色がかった粘性である。降伏値及び流動点は、アントンパールＭＣＲ ３０２レオメーターによって、１ｍｍの隙間で２５ｍｍ直径の平行板固定具を使用して測定した。ひずみ振幅は、１Ｈｚ（又は１０ｒａｄ／ｓ）の一定周波数及び２５℃の温度で０．００１〜１００％まで対数的に変化させた。降伏値は、９３３．２Ｐａであり、流動点は、１３２７Ｐａであると決定された。

［実施例５］
アルギニンとともにリラグルチドを含有する凍結乾燥混合物の調製

注射用水をバイアルに入れた。必要な第１の部の量のアルギニンを、穏やかな撹拌下で注射用水に溶解した。リラグルチドアセテートを撹拌しながら上記溶液に添加した。残りのアルギニンを７．０のｐＨが得られ、溶液が透明になるまで撹拌しながら添加した。次いで、水溶液を０．２μｍメンブランフィルターで濾過し、バイアルに充填し、凍結乾燥した。凍結乾燥混合物中のリラグルチドのアッセイは、９９．９％であった。

［実施例６］
リラグルチドとアルギニンとを含有する凍結乾燥混合物からの第２の濃度での水溶液の調製
第２の濃度での３つの異なる溶液を以下のように調製した：
（ａ）第２の濃度でのリラグルチドの水溶液（２８．６％ｗ／ｗ）

実施例５の凍結乾燥混合物を注射用の滅菌水に溶解し、ｐＨ７を有する第２の濃度の水溶液（２８．６％ｗ／ｗ）を得た。これを２０〜２５℃に保った。

（ｂ）第２の濃度でのリラグルチドの水溶液（３９．４％ｗ／ｗ）

実施例５の凍結乾燥混合物を注射用の滅菌水に溶解し、ｐＨ７を有する第２の濃度の水溶液（３９．４％ｗ／ｗ）を得た。これを２０〜２５℃に保った。

（ｃ）第２の濃度でのリラグルチドの水溶液（４４．４％ｗ／ｗ）

実施例５の凍結乾燥混合物を注射用の滅菌水に溶解し、ｐＨ７を有する第２の濃度の水溶液（４４．４％ｗ／ｗ）を得た。これを２０〜２５℃に保った。

（ｄ）第２の濃度でのリラグルチドの水溶液（４８．７％ｗ／ｗ）

実施例５の凍結乾燥混合物を注射用の滅菌水に溶解し、ｐＨ７を有する第２の濃度の水溶液（４８．７％ｗ／ｗ）を得た。これを２０〜２５℃に保った。

［実施例７］
実施例６の第２の濃度の水溶液を使用したゲル組成物の調製

両親媒性物質の非水溶液−大豆ホスファチジルコリン（Ｌｉｐｏｉｄ Ｓ１００）、グリセロールオレエート（ＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）９４８、モノ、ジ、及びトリオレエートと遊離脂肪酸との混合物）をプロピレングリコール及びエタノールに６０〜７０℃で１５〜２０分間撹拌しながら溶解し、０．２μｍメンブランフィルターで濾過した。

ゲル組成物−両親媒性物質の非水性溶液を実施例６（ｂ）の第２の濃度での４２．１％ｗ／ｗの水溶液（３９．４％ｗ／ｗの濃度でリラグルチドを含む）に添加し、撹拌機を使用して混合して５０〜７０℃で撹拌を使用してゲルを形成させた。脂質ゲルは、半固体粘稠性の黄色がかった粘性である。降伏値及び流動点は、アントンパールＭＣＲ ３０２レオメーターによって、１ｍｍの隙間で２５ｍｍ直径の平行板固定具を使用して測定した。ひずみ振幅は、１Ｈｚ（又は１０ｒａｄ／ｓ）の一定周波数及び２５℃の温度で０．００１〜１００％まで対数的に変化させた。降伏値は、１８０５Ｐａであり、流動点は、２３９６Ｐａであると決定された。

［実施例８］
実施例６の第２の濃度の水溶液を使用したゲル組成物の調製

両親媒性物質の非水溶液−大豆ホスファチジルコリン（Ｌｉｐｏｉｄ Ｓ１００）、グリセロールオレエート（ＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）９４８、モノ、ジ、及びトリオレエートと遊離脂肪酸との混合物）をプロピレングリコール及びエタノールに６０〜７０℃で１５〜２０分間撹拌しながら溶解し、０．２μｍメンブランフィルターで濾過した。

ゲル組成物−両親媒性物質の非水性溶液を実施例６（ｃ）の第２の濃度で４６．５％ｗ／ｗの水溶液（４４．４％ｗ／ｗの濃度でリラグルチドを含む）に添加し、撹拌機を使用して混合して５０〜７０℃で撹拌を使用してゲルを形成させた。脂質ゲルは、半固体粘稠性の黄色がかった粘性である。降伏値及び流動点は、アントンパールＭＣＲ ３０２レオメーターによって、１ｍｍの隙間で２５ｍｍ直径の平行板固定具を使用して測定した。ひずみ振幅は、１Ｈｚ（又は１０ｒａｄ／ｓ）の一定周波数及び２５℃の温度で０．００１〜１００％まで対数的に変化させた。降伏値は、１９０２Ｐａであり、流動点は、２４４８Ｐａであると決定された。

［実施例９］
実施例６の第２の濃度の水溶液を使用したゲル組成物の調製

両親媒性物質の非水溶液−大豆ホスファチジルコリン（Ｌｉｐｏｉｄ Ｓ１００）、グリセロールオレエート（ＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）９４８、モノ、ジ、及びトリオレエートと遊離脂肪酸との混合物）をプロピレングリコール及びエタノールに６０〜７０℃で１５〜２０分間撹拌しながら溶解し、０．２μｍメンブランフィルターで濾過した。

ゲル組成物−両親媒性物質の非水性溶液を実施例６（ｄ）の第２の濃度で５７．２％ｗ／ｗの水溶液（４８．７％ｗ／ｗの濃度でリラグルチドを含む）に添加し、撹拌機を使用して混合して５０〜７０℃で撹拌を使用してゲルを形成させた。脂質ゲルは、半固体粘稠性の黄色がかった粘性である
［実施例１０］

リラグルチド（ＬｉｒａＧｌｕｔｉｄｅに相当するリラグルチドＮａ）を注射用水に溶解することによって、水相を調製した。水相を２０〜２５℃に保つ。別途、大豆フェノキシカリン（Ｌｉｐｏｉｄ Ｓ１００）、モノ、ジ、及びトリオレエートと遊離脂肪酸とのグリセロールオレエート混合物−ＩＭＷＩＴＯＲ（登録商標）９４８）、グリセリルトリオレエート（ＧＴＯ）、プロピレングリコール、及びエタノールを６０〜７０℃で２０〜４０分間撹拌下で混合し、０．２μｍメンブランフィルターで濾過することによって、脂質相を調製した。次いで、脂質相を水相に添加し、５０〜７０℃の温度で撹拌を使用して混合し脂質ゲルを形成させた。

［実施例１１］
非経口組成物を注射するときのデポーの形成をシミュレートするために、ＷＦＩに分散させたときの実施例４のゲルのモルホロジーを透過電子顕微鏡（ＴＥＭ）技術を使用して調べた。実施例４の脂質ゲルを１．０ｍｇ／ｍｌの濃度のＷＦＩ（６．０〜７．０のｐＨ）に４０〜６０℃の温度において５〜１０分間撹拌下で分散させ、５〜１０分間超音波処理して特有の相を形成させた。ＦＥＩのＴｅｃｎａｉ（商標）スピリット低温−透過電子顕微鏡をモルホロジー研究に使用した。ゲル分散液の試料を標準的な炭素被覆銅グリッド（メッシュ）上に滴下し、風乾した。ＴＥＭ画像を１２０ｋＶの加速電圧で動作する透過型電子顕微鏡で視認し、分析した。実施例４のゲルは、ゲルを注射用水に分散させると立方晶構造を示す。緻密な立方晶相も少数の層状粒子（小胞）とともに観察された（図３参照）。これは、皮下部位での注射時にゲルが崩壊する機構を表す。

［実施例１２］
前臨床有効性研究は、２型糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスモデルで実施した。動物を５日間順化させた。０日目に、各動物の体重を測定した。約１００μＬの血液を採取することによって、ベースライン値を決定し、２型糖尿病のｄｂ／ｄｂマウスモデルにおいて、前臨床有効性研究を実施した。すべての動物を５日間順化させた。０日目に、各動物の体重を測定し、眼窩後叢から約１０μＬの血液を採取し、血糖値測定器（血糖測定器、Ｏｎｅ ＴｏｕｃｈＴＭ ＵｌｔｒａＴＭ；ＬＩＦＥＳＣＡＮ、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）を使用してグルコースストリップを用いて血糖濃度を測定したこれをベースライン値（０時間）とみなした。動物をそれぞれ４匹の雄及び４匹の雌の動物を含有する治療群に無作為化した。実施例４のゲルの単一計算用量（１０ｍｇ／ｋｇ）を動物の頚部領域に皮下注射した。血液を採取し、注射後１、４、８、１２、２４、４８、９６、１４４、及び１６８時間での血糖濃度を測定した。データは、ベースラインと比較して、スチューデントのペアｔ検定によるＰＲＩＳＭ（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄバージョン５．０４ ２０１１年１２月１０日）を使用して分析した。実施例４のゲル組成物（ゲル１０％）は、それぞれ図４（ａ）及び４（ｂ）で実証されるように、比較例１（比較例）と比較して７日間著しく良好なグルコース低下効果を示した。

［実施例１３］
複数用量有効性研究−前臨床有効性研究は、実施例１０に記載の手順に従って実施した。実施例４のゲル組成物（ゲル１０％）を１０ｍｇ／ｋｇのリラグルチド（ヒト等量の５倍）で０、７、１４、及び２１日目に毎週注射した。血液を０ｄ（１ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１ｄ、２ｄ、４ｄ、６ｄ、７ｄ予備用量）、７ｄ（１ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、８ｄ、９ｄ、１１ｄ、１３、１４ｄ予備用量）、１４ｄ（１ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１５ｄ、１６ｄ、１８ｄ、２０ｄ、２１ｄ予備用量）、及び２１ｄ（１ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、２２ｄ、２３ｄ、２５ｄ、２７ｄ、２８ｄ）の注射後間隔で採取し、血糖値を測定した。実施例４のゲル組成物（ゲル１０％）は、プラセボと比較して、図５に示すように、４週間目まで血糖値％の有意な低下を示した。

［実施例１４］
２型糖尿病の食餌誘発性ラットモデル（インスリン抵抗性Ｔ２Ｄについて）に対して、実施例４のゲル組成物（ゲル１０％）の複数用量前臨床有効性研究を実施した。前臨床有効性研究は、実施例１０に記載の手順に従って実施した。実施例４のゲル組成物をＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）と比較した。Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）を０．２ｍｇ／ｋｇのヒト等量で２８日間毎日注射した（１．８ｍｇが、Ｖｉｃｔｏｚａの承認用量である）。実施例４のゲル組成物を１０ｍｇ／ｋｇのリラグルチド（ヒト等量の５倍）で０、７、１４、及び２１日目に毎週注射した。血液は、０ｄ（１、４、８、１２ｈ）、１ｄ、２ｄ、４ｄ、６ｄ、７ｄ（１、４、８、１２ｈ）、８ｄ、９ｄ、１１ｄ、１３ｄ、１４ｄ（１、４、８、１２ｈ）、１５ｄ、１６ｄ、１８ｄ、２１ｄ（１、４、８、１２ｈ）、２２ｄ、２３ｄ、２５ｄ、２７ｄ、及び２８ｄの注射後間隔で採取し、血糖値、ＨｂＡ１Ｃ％を０、１４、及び２８日目に測定した。ＨｂＡ１Ｃ％は、キット（ＢｉｏＳｙｓｔｅｍ、Ｓｐａｉｎ）を使用して測定した。

結果を図６に示すが、実施例４及び市販のリラグルチド溶液（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））のゲル組成物（ゲル１０％）は、４週間目まで血糖値％の有意な低下を示した；血糖値の最適な低下は、それぞれ−４３．０７％及び−３２．３５％であった。ＨｂＡ１Ｃの結果を図７に示す。プラセボと比較して、実施例４及びＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）のゲル組成物（ゲル１０％）についてそれぞれ１．８６％及び１．８５％としてのＨｂＡ１Ｃ低下。

同様に、実施例７のゲル組成物（ゲル１５％）の複数用量前臨床有効性研究を上記の手順に従って、肥満糖尿病（ＺＤＦ）Ｔ２Ｄラットモデルで実施した。結果を図８に示すが、２つの異なる用量（５及び１０ｍｇ／ｋｇ）、溶液（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）毎日注射）、及び溶液（Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ（商標）毎週注射）におけるゲル組成物（ゲル１５％）は、血糖値％の有意な低下を示した、脂質ゲル及びＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）は、４週間目までの血糖値％の有意な低下を示した；Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ（商標）は、各毎週のＳＣ投与のみの後２．５〜３日目まで有意な低下を示した。ＨｂＡ１Ｃの結果を図９に示す。プラセボと比較して、２つの異なる用量（５及び１０ｍｇ／ｋｇ）、溶液（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）毎日注射）、及び溶液（Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ（商標）毎週注射）におけるゲル組成物について、それぞれ２．３７、２．５１、２．３６、及び１．０３としてのＨｂＡ１Ｃ％低下。

［実施例１５］
前臨床有効性研究は、実施例１２で上記の手順に従って実施した。血液は、０ｄ（０、１、４、８、１２ｈ）、１ｄ、２ｄ、３ｄ、４ｄ、５ｄ、７ｄ（０、１、４、８、１２ｈ）、８ｄ、１１ｄ、１４ｄ（０、１、４、８、１２ｈ）、１５ｄ、１８ｄ、２１ｄ（０、１、４、８、１２ｈ）、２２ｄ、２５ｄ、及び２８ｄの注射後間隔で採取し、血糖値を測定した。実施例８のゲル組成物（ゲル２０％）を、１０ｍｇ／ｋｇのリラグルチド（ヒト等量の４倍）で０、７、１４、及び２１日目に毎週注射して、血糖値を測定した。ゲル組成物（ゲル２０％）は、図１０に示すように、４週間目まで血糖値％の有意な低下を示した。

Claims (18)

1. 治療有効量のリラグルチドを含む粘弾性ゲルであって、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を含まず、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を特徴とする、粘弾性ゲル。
2. リラグルチドが前記ゲルの約５重量％〜３０重量％の濃度で存在する、請求項１に記載の粘弾性ゲル。
3. 前記ゲルの約１０重量％〜２５重量％の濃度でのリラグルチド、少なくとも１つの両親媒性物質、及び水性ビヒクルを含む、請求項２に記載の粘弾性ゲル。
4. 前記両親媒性物質が前記ゲルの４０重量％〜６０重量％の濃度で存在し、前記水性ビヒクルが前記ゲルの２０重量％〜４０重量％の濃度で存在する、請求項３に記載の粘弾性ゲル。
5. 前記両親媒性物質がグリセリルモノオレエート、グリセリルジオレエート、グリセリルトリオレエート、ポリグリセリル−３−ジオレエート、ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物から選択される、請求項３に記載の粘弾性ゲル。
6. 前記両親媒性物質がグリセリルモノオレエート、グリセリルジオレエート、グリセリルトリオレエート、及びホスファチジルコリンの混合物である、請求項５に記載の粘弾性ゲル。
7. 前記水性ビヒクルが、水と水混和性溶媒との混合物である、請求項３に記載の粘弾性ゲル。
8. 前記粘弾性ゲルが非経口的に許容されるアミン塩基をさらに含む、請求項３に記載の粘弾性ゲル
9. 前記非経口的に許容されるアミン塩基が、トロメタミン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、グアニジン、エポラミン、グルコサミン、及びメグルミンから選択される、請求項８に記載の粘弾性ゲル
10. 血糖値のコントロールを必要とする対象において、血糖値をコントロールする方法であって、前記方法が、治療有効量のリラグルチドを含む粘弾性ゲルを前記対象に週１回又は隔週１回で皮下投与することを含み、前記ゲルが、ブロック若しくはグラフトコポリマー、又はそれらの混合物を含まず、前記ゲルが、２００Ｐａ〜３０００Ｐａの降伏値及び３００Ｐａ〜３５００Ｐａの流動点を特徴とする、方法。
11. 前記粘弾性ゲルが前記粘弾性ゲルの約５重量％〜３０重量％の濃度でリラグルチドを含む、請求項１０に記載の方法。
12. 前記粘弾性ゲルが前記粘弾性ゲルの約１０重量％〜２５重量％の濃度でのリラグルチド、少なくとも１つの両親媒性物質、及び水性ビヒクルを含む、請求項１１に記載の方法。
13. 前記両親媒性物質が前記粘弾性ゲルの４０重量％〜６０重量％の濃度で存在し、前記水性ビヒクルが前記粘弾性ゲルの２０重量％〜４０重量％の濃度で存在する、請求項１２に記載の方法。
14. 前記両親媒性物質が、グリセリルモノオレエート、グリセリルジオレエート、グリセリルトリオレエート、ポリグリセリル−３−ジオレエート、ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物から選択される、請求項１２に記載の方法。
15. 前記両親媒性物質が、グリセリルモノオレエート、グリセリルジオレエート、グリセリルトリオレエート、及びホスファチジルコリンの混合物である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記水性ビヒクルが水と水混和性溶媒との混合物である、請求項１２に記載の方法。
17. 前記粘弾性ゲルが非経口的に許容されるアミン塩基をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
18. 前記非経口的に許容されるアミン塩基が、トロメタミン、アルギニン、ヒスチジン、リジン、グアニジン、エポラミン、グルコサミン、及びメグルミンから選択される、請求項１７に記載の方法。

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