JP2018524595A - 統合失調症の診断で使用するためのペプチドの組み合わせ - Google Patents

Abstract

本発明は概して、統合失調症患者において高レベルで見出される自己抗体が結合している、少なくとも１つの短鎖ペプチドと少なくとも１つのペプチドダイマーとの所定の比の組み合わせを含む組成物に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、概して、統合失調症の診断のための新規ペプチドの組み合わせに関する。

統合失調症とは、幻聴、パラノイア、妄想、緊張病、奇妙な行動および無感情（ｅｍｏｔｉｏｎａｌ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）のような様々な精神的症状を含む症候群である。統合失調症は総人口の約１％が罹患し、社会に対するその経済的ならびに社会的負担は甚大である。発病は若年齢で起こり、したがって、患者は典型的には生涯にわたる医学的および精神医学的監視が必要である。したがって、統合失調症は、産業界で最も費用のかかる疾患の一つとみなされている。

統合失調症は自己免疫過程が関与することが示され、最近、統合失調症患者において血小板に対する自己抗体および細胞傷害性Ｔ細胞が実証された。統合失調症患者における細胞傷害性Ｔ細胞反応は皮膚試験によって診断され、皮膚試験では、ほとんどの統合失調症患者はそれらの自己血小板に対して陽性反応を示す一方で、この試験ではごく少数の試験した非統合失調症の個人だけが陽性反応を示した［１］。

加えて、高レベルの血小板に対する自己抗体が統合失調症患者で観察されたが、躁うつ病、鬱病、人格障害および統合失調性感情障害を患っている患者では観察されなかった［２、３］。

以前の研究は、統合失調症患者の体液中で高レベルで見出される自己抗体と結合するいくつかのタンパク質を実証した［４］。これらのタンパク質は統合失調症患者由来の精製された血小板由来性自己抗体（ＰＡＡ）と反応したが、統合失調症の個人および非統合失調症の個人の血漿または血液サンプル間で識別できなかった。これらのタンパク質のうちの１つである酵素エノラーゼの酵素消化の結果、非統合失調症の個体の血漿サンプルと比較して、統合失調症患者の血漿サンプルに対して実質的により高く結合するフラグメントが得られた。このフラグメントに基づいて、いくつかのさらなるペプチドを合成し、そのような統合失調症の個人のＰＡＡに対して高い結合活性を有するものが単離された。これらの合成されたペプチドは、各々、少なくとも７つのアミノ酸から構成される。

統合失調症の子供におけるＰＡＡレベルに対するクロザピンおよび他の抗精神病薬の効果も研究した［５］。

［先行技術文献］
［１］国際公開第９９／３０１６３号
［２］Ｓｈｉｎｉｔｚｋｙ Ｍ，Ｄｅｃｋｍａｎｎ Ｍ，Ｋｅｓｓｌｅｒ Ａ，Ｓｉｒｏｔａ Ｐ，Ｒａｂｂｓ Ａ，Ｅｌｉｚｕｒ Ａ．Ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｄｅｍｅｎｔｉａ ａｎｄ ｓｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ．Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍｅｎｔａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．１９９１；６２１：２０５−１７．
［３］Ｄｅｃｋｍａｎｎ Ｍ，Ｓｈｉｎｉｔｚｋｙ Ｍ，Ｌｅｙｋｉｎ Ｉ，Ｃｈｅｎｇ Ｄ，Ｇｕｙ Ｊ，Ｓｉｒｏｔａ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍｏｒａｌ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｇａｉｎｓｔ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｉｎ ｓｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ−ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｉｔａｌ Ｊ Ｐｓｙｃｈ Ｂｅｈａｖ Ｓｃｉ，１９９６；６：２９−３４．
［４］国際公開第９９／５１７２５号
［５］Ｅｂｅｒｔ Ｔ，Ｓｃｈｅｃｈｔｍａｎ Ｍ，Ｍｉｄｂａｒｉ Ｙ，Ｗｅｉｚｍａｎ Ａ，Ｓｈｉｎｉｔｚｋｙ Ｍ，Ｓｐｉｖａｋ Ｂ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃｌｏｚａｐｉｎｅ ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ａｎｔｉｐｓｙｃｈｏｔｉｃｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｌｅｖｅｌ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ｓｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ： Ａ Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ Ｆｏｌｌｏｗ−Ｕｐ Ｓｔｕｄｙ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｂｉｏｌｏｇｙ． ２０１５ Ａｐｒ ９；７１（２）：１２０−１２４．
［６］国際公開第０２／０７４７９３
［７］ＮＩＨ ＰＯＬＩＣＹ ＡＮＤ ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ ＯＮ ＴＨＥ ＩＮＣＬＵＳＩＯＮ ＯＦ ＣＨＩＬＤＲＥＮ ＡＳ ＰＡＲＴＩＣＩＰＡＮＴＳ ＩＮ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＶＯＬＶＩＮＧ ＨＵＭＡＮ ＳＵＢＪＥＣＴＳ．Ｍａｒｃｈ ６，１９９８． Ｌｉｎｋ：ｈｔｔｐ：／／ｇｒａｎｔｓ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｒａｎｔｓ／ｇｕｉｄｅ／ｎｏｔｉｃｅ−ｆｉｌｅｓ／ｎｏｔ９８−０２４．ｈｔｍｌ．Ｓｅｅ ａｌｓｏ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐｏｌｉｃｙ，ｄａｔｅｄ Ｏｃｔ．１３，２０１５．Ｌｉｎｋ：ｈｔｔｐ：／／ｇｒａｎｔｓ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｒａｎｔｓ／ｇｕｉｄｅ／ｎｏｔｉｃｅ−ｆｉｌｅｓ／ＮＯＴ−ＯＤ−１６−０１０．ｈｔｍｌ．

本発明は、統合失調症患者において高レベルで見出される自己抗体が結合している、少なくとも１つの短鎖ペプチドと少なくとも１つのペプチドダイマーとの組み合わせを所定の比で含む組成物を提供する。特定の組み合わせは、自己抗体がペプチド系材料と結合することを可能にし、それによって本発明の組成物は統合失調症の診断において最も有用になる。したがって、先行技術のペプチド［４，６］は非統合失調症の個体と比べて統合失調症患者においてより高いレベルで存在する自己抗体と結合することができるが、本発明のペプチドの組み合わせは、非常に改善された親和性および独自の特徴を示し、これによって、子ども（すなわち、ＮＩＨポリシー［７］によると１８歳の年齢よりも下および若年成人は、１８〜１９歳）における統合失調症のより効率的およびより早期の検出を可能にする。

本明細書中で実証するように、当該技術分野のアッセイはせいぜい約２０％の感度しか示さないが、その一方で、本発明の組み合わせは約８０％の感度を示した。

したがって、本発明は、２つの診断上活性な材料、すなわち少なくとも１つのペプチドと前記ペプチドの少なくとも１つのダイマーとを含む組み合わせの形態の診断ツールを企図する。以下でさらに示すように、少なくとも１つのペプチドは、少なくとも１つの硫黄原子を有するアミノ酸、例えばシステインを含み、前記少なくとも１つのペプチドのダイマーは、前記少なくとも１つのペプチドの各々の場合に存在する硫黄原子間に共有結合を形成することによって形成される。したがって、ダイマーは−Ｓ−Ｓ−結合を含む。
第一の態様によると、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物を一般式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の化合物：

と組み合わせて含む組成物を提供し、
式中、
−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド基またはジスルフィドを含む基を意味し、
ＸおよびＸ’の各々は、互いに独立して、存在しない可能性があるか、または各々、Ｌ、ＶおよびＧから選択される少なくとも１つのアミノ酸を含むペンタペプチドであり、
Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４の各々は互いに独立して、存在しない可能性があるか、または各々、アミノ酸、ジアミノ酸もしくはトリアミノ酸であり、
前記Ｘ、Ｘ’、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４の各々は互いに独立して、任意選択的に、少なくとも一つのアミノ酸基で置換されていてもよく、
「−」の各々は結合であり、
式（Ｉａ）および（Ｉｂ）中、Ｘ、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４およびＸ’の各々は、式（Ｉ）においてと同様に選択され、式（Ｉ）の化合物および式（Ｉａ）の化合物または式（Ｉｂ）あるいはその組み合わせ間の比は約１：１〜約１０：１の比である。この範囲内のダイマーとモノマーとの組み合わせが、ますます強固で再現可能なアッセイ結果をもたらすことが観察される。

上述のように、本発明は、少なくとも二つの活性なペプチド系材料の組成物に関する。第一のものは、一般式（Ｉ）の化合物であって、ジスルフィド結合を含むダイマーであり、他方は一般式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）のペプチドである。本発明の組成物で用いられるダイマーは、典型的には式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）のペプチド成分のダイマーであるように選択される。例えば、ここで、ペプチドは一般式（Ｉａ）：Ｘ_３−Ｘ−Ｘ_１−Ｓ−Ｈを有するものであり、式（Ｉ）のダイマーはＸ_３−Ｘ−Ｘ_１−Ｓ−Ｓ−Ｘ_１−Ｘ−Ｘ_３である。同様に、ペプチドが一般式（Ｉｂ）：Ｈ−Ｓ−Ｘ_２−Ｘ’−Ｘ_４を有するものである場合、式（Ｉ）のダイマーはＸ_４−Ｘ’−Ｘ_２−Ｓ−Ｓ−Ｘ_２−Ｘ’−Ｘ_４である。

言い換えると、式（Ｉ）の化合物および式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の化合物を選択する場合、Ｘ、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４およびＸ’の各々は、式（Ｉ）の化合物が組成物中に存在する式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の少なくとも１つのペプチドのダイマーであるように、独立して選択される。

組み合わせが、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉａ）の化合物および式（Ｉｂ）の化合物の組み合わせであるいくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物であるダイマーは、式（Ｉａ）の化合物または式（Ｉｂ）の化合物のダイマーである。

組成物の少なくとも二つの成分、すなわち、（１）一般式（Ｉ）の化合物と、（２）一般式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）のペプチドとの重量比は少なくとも１：１である。いくつかの実施形態では、一般式（Ｉ）の化合物が過剰である。いくつかの実施形態では、一般式（Ｉ）の化合物は、一般式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）のペプチドの量の少なくとも２倍の量で存在する。いくつかの実施形態では、一般式（Ｉ）の化合物の量は、一般式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）のペプチドの２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍である。

いくつかの実施形態では、本発明の組成物において、一般式（Ｉ）の化合物は、組み合わせの少なくとも５５％を構成する。いくつかの実施形態において、一般式（Ｉ）の化合物は、活性な組み合わせの少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％を構成する。

他の実施形態では、本発明の組成物において一般式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の化合物は、活性な組み合わせの最大で５０％、最大で４５％、最大で４０％、最大で３５％、最大で３０％、最大で２５％、最大で２０％、最大で１５％、最大で１０％または最大で５％を構成する。

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）のダイマーは不斉である、すなわち、二つの異なるペプチドのダイマーであり、式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）のペプチドは、ダイマーを構成する二つのペプチドのいずれかであり得る。

したがって、本発明の組成物に関して式（Ｉ）の化合物を選択する場合、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）のペプチドの同一性は容易に判定することができる。

本明細書中で使用する場合、「アミノ酸」は、当該技術分野で公知の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、２０の天然に存在するアミノ酸のうちのいずれか一つである。他の実施形態において、アミノ酸は、化学的に修飾された２０の天然に存在するアミノ酸のいずれかである。さらなる実施形態において、アミノ酸は合成の天然に存在しないアミノ酸である。

本発明に従って使用されるペプチドを構成するいずれか１つのアミノ酸について言及する場合、アミノ酸は、それらの許容される命名法によるか、または当該技術分野で認められているような一文字表記により言及することができる。例えば、アルファベットのＬで表されるアミノ酸はロイシンである。アルファベットのＶで表されるアミノ酸はバリンである。アルファベットのＧで表されるアミノ酸はグリシンである。アルファベットのＫで表されるアミノ酸はリシンである。アルファベットのＭで表されるアミノ酸はメチオニンであり、アルファベットのＣで表されるアミノ酸はシステインである。したがって、例示的ペプチドモチーフにおいて、「ＬＬＶＶＧ」はロイシン−ロイシン−バリン−バリン−グリシンのペプチドである。特に明確な指示のない限り、図示したペプチド部分または任意のペプチド基の方向性はＣ→ＮまたはＮ→Ｃのいずれかであり得る。

式（Ｉ）の化合物において、ＸおよびＸ’の各々は、独立して、５つのアミノ酸を含むペンタペプチドであり得、アミノ酸の各々はペプチド結合により互いに結合している。ペンタペプチドは、典型的にはアミノ酸Ｌ、ＶおよびＧから構成され、１つ以上の同じアミノ酸が配列に沿って繰り返される。いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は独立して、アミノ酸Ｌ、ＶおよびＧからなるペンタペプチドであり得る。

いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は、ペンタペプチドである場合、表１に示すペプチドから選択することができる。

いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の一方は存在せず、他方は前記定義のペンタペプチドである。他の実施形態において、ＸおよびＸ’の各々はペンタペプチドであり、同一であっても、同一でなくてもよい。いくつかの別の実施形態において、ＸおよびＸ’は互いに異なる。

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）および／または（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の化合物において、ＸおよびＸ’の一方または両方が存在しない。
いくつかの実施形態において、組成物は、構造：

を有する化合物から選択される式（Ｉ）の化合物を含み、各々の前記式中、Ｘ_３、Ｘ_１、Ｘ_２およびＸ_４は前記定義のとおりである。

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、Ｘが存在せず、Ｘ’が前記定義のとおりである化合物であるか、またはＸおよびＸ’の両方が存在しない化合物、またはＸが前記定義のとおりであり、Ｘ’が存在しない化合物である。

上記式中、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４の各々は、互いに独立して、存在しないか、またはアミノ酸、ジアミノ酸もしくはトリアミノ酸であり得る。本明細書中で使用する場合、ジアミノ酸はジペプチド、すなわち、ペプチド結合によって互いに結合した２つのアミノ酸である；トリアミノ酸はトリペプチド、すなわちペプチド結合により互いに結合した３つのアミノ酸である；ここで、「アミノ酸」、「ジアミノ酸」、「トリアミノ酸」の各々のアミノ酸は本明細書中で定義するとおりである。

一般式（Ｉ）で示されるアミノ酸の各々は、少なくとも一つのアミノ酸基で置換されていてもよい。「少なくとも一つのアミノ酸基」は、単一のアミノ酸または、いくつかの実施形態ではペプチド結合により互いに結合したアミノ酸の鎖であるか、または一つ以上のアミノ酸を含む基である。いくつかの実施形態において、置換アミノ酸基は、Ｃ、ＫおよびＭから選択されるアミノ酸であるか、またはＣ、ＫおよびＭから選択されるアミノ酸を含む。特定の実施形態において、少なくとも一つのアミノ酸基は、Ｃ、ＫまたはＭである。他の実施形態において、少なくとも一つのアミノ酸基は、Ｃ、ＫおよびＭの一つ以上を含む。

さらなる実施形態において、アミノ酸基はＣである。さらなる実施形態において、アミノ酸基はＫである。さらなる実施形態において、アミノ酸基はＭである。

いくつかの実施形態において、ジスルフィド基はシスチンから誘導される。いくつかの実施形態において、シスチンは少なくとも一つのアミノ酸で置換されている。

いくつかの実施形態において、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４の各々は、独立して、Ｋ、ＣおよびＭから選択されるアミノ酸を含むアミノ酸、ジアミノ酸またはトリアミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸はＫである。

いくつかの実施形態において、Ｘ_１およびＸ_２の各々は存在せず、Ｘ_３およびＸ_４は、独立して、Ｋ、ＣおよびＭから選択されるアミノ酸を含むアミノ酸、ジアミノ酸またはトリアミノ酸である。

いくつかの実施形態において、Ｘ_１およびＸ_２の各々は、独立して、Ｋ、ＣおよびＭから選択されるアミノ酸を含むアミノ酸、ジアミノ酸またはトリアミノ酸であり、そしてＸ_３およびＸ_４は存在しない。いくつかの実施形態において、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４の少なくとも１つは存在しない。

いくつかの実施形態において、本発明の組成物は一般式（Ｉ）を有する化合物を含み、式中、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４の各々は存在せず、化合物は一般式（ＩＩ）：

を有するものであり、式中、ＸおよびＸ’の各々は前記定義のとおりである。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）の化合物におけるジスルフィド基はシスチンであり、化合物は一般式（ＩＩＩ）：

を有するものであり、式中、ＸおよびＸ’の各々は前記定義のとおりであり、−Ｃ（Ｏ）−はカルボニル基（−Ｃ＝Ｏ）を表し、ＹおよびＹ’の各々は互いに独立して、本明細書において定義する少なくとも一つのアミノ酸である。いくつかの実施形態において、ＹおよびＹ’の各々は独立して、Ｋ、ＣおよびＭから選択される。

いくつかの実施形態において、組成物は、一般式（ＩＶ）：

を有する一般式（Ｉ）の化合物を含む。

他の実施形態において、組成物は、式（Ｖ）：

の構造を有する式（Ｉ）の化合物を含み、
式中、ＸおよびＸ’の各々は前記定義のとおりであり、Ｙ’は少なくとも一つのアミノ酸である。

いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々、互いに独立して、少なくとも一つのアミノ酸Ｌ、少なくとも一つのアミノ酸Ｖおよび少なくとも一つのアミノ酸Ｇを含むペンタペプチドである。いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は互いに独立して、少なくとも２つのＬを含むペンタペプチドである。ＸおよびＸ’の各々が互いに独立して少なくとも２つのＶを含むペンタペプチドであるいくつかの実施形態において。いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は互いに独立して、表１のアミノ酸残基から選択されるペンタペプチドである。

表１：本発明の誘導体に従って用いられる可能な５−アミノ酸組み合わせ（ペンタペプチド）。ペプチド結合性は右から左へ、または左から右へ読むことができる。

いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は互いに独立して、アミノ酸残基：

から選択される。

いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は互いに独立して、ＬＬＶＶＧ、ＬＧＶＶＬ、ＶＬＬＶＧ、ＶＬＬＧＶ、ＶＶＬＬＧ、ＶＧＬＬＶおよびＧＶＬＬＶから選択される。

いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は互いに独立して、ＶＬＶＧＬ、ＶＬＧＶＬ、ＬＶＶＬＧ、ＬＶＧＬＶ、ＬＧＶＬＶ、ＬＶＶＧＬ、ＧＶＬＬＶおよびＬＧＶＶＬから選択される。

いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は互いに独立して、ＶＬＬＧＶ、ＧＬＬＶＶ、ＶＶＬＧＬ、ＶＧＬＶＬ、ＬＬＶＶＧ、ＬＬＶＧＶおよびＬＧＶＶＬから選択される。

いくつかの実施形態において、ＸおよびＸ’の各々は互いに独立して、ＬＧＶＶＬおよびＬＶＶＧＬから選択される。

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか一つにおいてＸおよびＸ’の一方または両方は−ＬＧＶＶＬである。

いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、一般式（ＶＩ）または（ＶＩＩ）：

を有する式（Ｉ）の化合物を含み、式中、Ｘ、Ｘ’、ＹおよびＹ’の各々は、互いに独立して、前記定義のとおりである。

いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）〜（ＶＩＩ）中、ＹおよびＹ’の一方または両方はアミノ酸Ｋである。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）〜（ＶＩＩ）中、Ｙ＝Ｙ’であり、アミノ酸Ｋである。

いくつかの実施形態において、本発明の式のいずれか１つにおけるＸおよびＸ’は、独立して、

から選択されるペンタペプチドである。

いくつかの実施形態において、本発明の式のいずれか１つのＸおよびＸ’は、独立して、ＶＶＧＬＬ、ＶＧＬＬＶ、ＧＬＬＶＶ、ＧＶＬＧＬ、ＧＶＶＬＧ、ＬＶＧＶＬ、ＬＶＶＧＬ、ＬＧＶＶＬ、ＧＶＬＶＬおよびＧＬＬＶから選択されるペンタペプチドである。

いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書中で定義される化合物（ＶＩ）を、ＬＶＶＧＬ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ−ＣＨ_２−Ｓ−ＨまたはＨ−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨＹ’−Ｃ（Ｏ）−Ｘ’と組み合わせて含む。

他の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書中で定義するような化合物（ＶＩＩ）を、Ｘ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ−ＣＨ_２−Ｓ−ＨまたはＨ−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨＹ’−Ｃ（Ｏ）−ＬＧＶＶＬと組み合わせて含む。

いくつかの実施形態において、本発明の組成物は式（ＶＩＩＩ）：

の化合物を含む。

式（ＶＩＩＩ）の化合物において、基（ＮＨ−Ｋ）はペンダントであり、−ＣＨ−部分の炭素原子に共有結合している。アミノ酸Ｋは、アミノ酸Ｋおよび−ＣＨ−に結合する−ＮＨ−基にのみ結合する。

いくつかの実施形態において、組成物は、ペプチドＬＶＶＧＬ−ＣＯ−ＣＨ（ＮＨ−Ｋ）−ＣＨ２−ＳＨと組み合わせて式（ＶＩＩＩ）の化合物を含む。

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）のいずれかの化合物はビオチンに結合して提供される。

いくつかの実施形態において、式（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物は、ビオチンに結合して提供される。

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、ビオチンと結合する場合の式（ＶＩＩＩ）の化合物である：

別の態様において、本発明は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物ならびに式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の少なくとも１つの化合物の、診断組成物の調製のための使用を提供する。

さらなる態様において、診断法において使用するための式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物ならびに式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の少なくとも１つの化合物の組み合わせが提供される。

いくつかの実施形態において、組成物は、いくつかの実施形態では、年齢１８歳未満の子供である個人における統合失調症の診断のためのものである。

別の態様において、本発明は、対象における統合失調症の診断のための方法であって：
・統合失調症発症の疑いがある対象から得られる血液サンプルを本明細書中で定義されるように本発明による組成物と接触させ、
・前記ペプチド成分の非統合失調症の個体由来のサンプルに対する結合レベルよりも高いレベルは、前記対象が統合失調症に罹患している可能性が高いことを示すように、組成物中に存在するペプチド成分の前記サンプルに対する結合レベルを判定することを含む方法を提供する。本発明のいずれの組成物も、本明細書中で定義される二つまたはそれ以上のペプチド系材料を含み得るので、結合は、前記ペプチド系材料のいずれか一つ以上のものであり得る。

当業者には容易に理解されるように、本明細書中で定義する診断、すなわち、組成物中に存在するペプチド成分の前記サンプルに対する結合のレベルの決定は、ペプチドの結合を用いて測定可能なシグナルを生成し、それに基づいて統合失調症の診断が達成される、関連する技術分野で一般的な多くの（例えば、化学的、生物学的）検出方法によって達成することができる。使用できる検出方法のいくつかの非限定例としては、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光蛋白質再構成法（ＢｉＦＣ）、化学的架橋とそれに続く高質量マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析法、近接ライゲーション（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ｌｉｇａｔｉｏｎ）アッセイ（ＰＬＡ）、二重偏波干渉法（ＤＰＩ）、静的光散乱（ＳＬＳ）、表面プラズモン共鳴、蛍光偏光／異方性、蛍光相関分光法、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、タンパク質−タンパク質ドッキング、等温滴定熱力測定法（ＩＴＣ）およびマイクロスケール熱拡散（ｔｈｅｒｍｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）（ＭＳＴ）が挙げられる。

いくつかの実施形態において、方法は、少なくとも１つの他の診断アッセイによって判定された個体において統合失調症の可能性が高いことを確認するのに使用するためのものである。

いくつかの実施形態において、検出方法はＥＬＩＳＡである。

別の態様において、本発明は、統合失調症の診断で使用するためのキットであって、抗ヒト免疫グロブリン（ｈＩｇ）抗体またはそのフラグメント上に固定された本明細書中で定義する一つ以上のペプチド系材料を含む支持体と、化学発光タグまたはアルカリホスファターゼもしくはホースラディッシュペルオキシダーゼなどの酵素に結合した抗ヒト免疫グロビン（ｈＩｇ）抗体またはそのフラグメントを含む検出アッセイを実施するための試薬と、使用説明書とを含むキットを提供する。

当業者には容易に理解されるように、本発明のキットおよび診断組成物はまた、本明細書中で記載する統合失調症の診断における前記キットおよび診断組成物の使用に適した追加の試薬および成分も含み得る。そのような試薬および成分のいくつかの非限定例としては、緩衝液、希釈剤、担体、化学安定剤、防腐剤、塩、酵素、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液として）および停止溶液が挙げられる。

本発明のキットはさらに、本明細書中で記載する統合失調症の診断における前記キットの使用に必要な試薬レザバーおよび任意の追加成分（例えば、使い捨てピペット）も含み得る。

いくつかの実施形態において、抗ｈＩｇ抗体を検出可能なマーカーと複合体形成させる。いくつかの実施形態では、前記抗ｈＩｇ抗体の代わりに、キットは一つ以上のペプチド系材料を含み、これは試験したサンプル中に存在するＰＡＡと結合し、前記ペプチド系材料は検出可能なマーカーと複合体形成している。

[実施例]
実施例１：ペプチドのダイマー化対アッセイの感度
ペプチドサンプルＩ〜Ｘの各々１０μｌをＭＡＬＤＩ−ＭＳ分析に使用して、形成されたモノマー対ダイマーの比を評価した。

表２からわかるように、２０％ＤＭＳＯ／８０％ＤＤＷ溶媒系を使用して、８時間後に、ペプチのドの約８０〜９０％はダイマー形態であった。

弱塩基性条件はシステイン残基のダイマー化／酸化を促進することに注意されたい。これにために、アンモニア溶液を反応が起こる前に添加した。希アンモニアはダイマーの形成を完了させるのに有用であった。全サンプルをＭＡＬＤＩ−ＭＳ技術によって分析した。

表２：ペプチドのダイマー化対感度アッセイの感度（ＡＣＮ＝アセトニトリル；ＤＤＷ＝二回蒸留水；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；ＴＦＥ＝トリフルオロエタノール；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド）。表２中のデータは、低容量ストレプトアビジン（ＳＡ）でコーティングされたチューブを使用して得られた。

表２中のデータは、高容量ストレプトアビジン（ＳＡ）でコーティングされたチューブを使用して得られた。これらの改善された実験条件下で、ＯＤ値は１．６〜１．７から２．５超まで上昇した。ビオチン−ペプチド間のスペーサーアームを変更した。「標準的ＬＣ」（アミノヘキサン酸）の代わりに、−ＳＧＳＧ−鎖（セリン−グリシン−セリン−グリシン）を使用した。

実施例２：疾患発症時の若年統合失調症患者におけるＰＡＡレベルの測定による統合失調症の診断のための血液スクリーニング試験における８０〜９０％の本明細書中で記載するダイマーを含む混合物の使用

ＰＡＡの血中力価を、最適化ＥＬＩＳＡ試験を用いて盲検的に評価し、線形光学密度（ＯＤ）スケールを用いて結果を表した。ＯＤ読取値を、統合失調症と診断された小児／若年成人患者（ｎ＝２８）（年齢１３〜１９歳）および対照（ｎ＝３７）（年齢１３〜１９歳）からの血液サンプルについて採点した。全参加者の血液サンプルを匿名で試験し、コード番号のもとで採点した。１．４ＯＤ単位超を示した試験を陽性と定義した。

表３〜５は、小児／若年成人（年齢１３〜１９歳）の患者および対照の両方についてのスクリーニング試験の結果を示す。

表３：小児／若年成人患者（１３〜１９歳）についてのスクリーニング結果

表４：小児／若年成人対照（１３〜１９歳）についてのスクリーニング結果

表５Ａ〜Ｂは、小児／若年成人患者および対照スクリーニング試験の概要を提供する。

上記表から明らかなように、若年統合失調症患者、年齢１３〜１９歳のＰＡＡ価は対照群のＰＰＡ価よりも有意に高かった（１．７２±０．５５ＯＤ単位対１．０６±０．４３；Ｐ＜１．０５×１０^−６）。

実施例３：非統合失調症小児／若年成人患者に関するデータ。

表６：非統合失調症小児および若年成人患者。^ａ行為障害（ＣＤ）は、他者の基本的権利または主な年齢に適した規範に違反する反復的かつ持続的行動パターンによって現れる、小児期または青年期（０〜１７歳）で診断される心理的障害である。これらの行動は、多くの場合、「反社会的行動」と呼ばれる。これは、反社会的人格障害の前兆として見られることが多く、その個人が１８才になるまでは診断されない。^ｂ人格（性格）障害は、様々な状況にわたって示され、個人の文化によって受け入れられるものから著しく逸脱した、行動、認識、および内的経験の持続的不適応パターンによって特徴づけられる精神障害の一種である（１８歳以上）。

表６から明らかなように、１２〜１９歳の非統合失調症小児および若年成人患者６２症例のうち３例だけが、この統合失調症の診断試験で陽性を示し、本明細書中で記載する統合失調症の診断方法が統合失調症と他の非統合失調症障害（例えば人格および行為障害）とを識別する信頼性の高いアッセイ（約５％の低い偽陽性）であることを示す。

Claims (16)

1. 一般式（Ｉ）：
   

   

   を有する化合物と、一般式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）：
   

   

   （式中、
   −Ｓ−Ｓ−はジスルフィド結合またはジスルフィド結合を含む基を示し、
   ＸおよびＸ’は、互いに独立して、存在しない可能性があるか、または各々、Ｌ、ＶおよびＧから選択される少なくとも一つのアミノ酸を含むペンタペプチドであり、
   Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４の各々は互いに独立して、存在しない可能性があるか、またはアミノ酸、ジアミノ酸もしくはトリアミノ酸であり、
   Ｘ、Ｘ’、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４の各々は互いに独立して、少なくとも一つのアミノ酸基によって任意に置換されていてもよく、
   「−」の各々は結合であり、
   前記式（Ｉａ）および（Ｉｂ）中、Ｘ、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４およびＸ’の各々は式（Ｉ）においてと同様に選択される）
   の少なくとも一つの化合物とを含む組成物であって、
   前記式（Ｉ）の化合物と前記式（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物との比が約１：１〜約１０：１である、前記組成物。
2. 前記式（Ｉ）の化合物が：
   

   

   から選択され、式中、Ｘ_３、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ’、ＸおよびＸ_４の各々が請求項１で定義するとおりである、請求項１に記載の組成物。
3. 前記式（Ｉ）の化合物が一般式（ＩＩ）：
   

   

   を有するものであり、式中、Ｘ’およびＸの各々が請求項１で定義するとおりである、請求項１に記載の組成物。
4. 前記式（Ｉ）の化合物が一般式（ＩＩＩ）：
   

   

   を有するものであり、式中、ＸおよびＸ’の各々は請求項１で定義したとおりであり、−Ｃ（Ｏ）−はカルボニル基を表し、ＹおよびＹ’の各々は互いに独立して少なくとも一つのアミノ酸である、請求項１に記載の化合物組成物。
5. 前記式（Ｉ）の化合物が一般式（ＩＶ）：
   

   

   を有するものであり、式中、ＹおよびＸ’の各々が互いに独立して少なくとも一つのアミノ酸である、請求項１に記載の組成物。
6. 前記式（Ｉ）の化合物が一般式（Ｖ）：
   

   

   を有するものであり、式中、Ｙ’が少なくとも一つのアミノ酸である、請求項１に記載の組成物。
7. 前記式（Ｉ）および（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物において、ＸおよびＸ’の各々が互いに独立して、
   

   

   からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
8. 式（Ｉ）および（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物において、ＸおよびＸ’の一方または両方が−ＬＧＶＶＬである、請求項７に記載の組成物。
9. 前記式（Ｉ）の化合物がＬＶＶＧＬ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ−ＣＨ_２−Ｓ−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨＹ’−Ｃ（Ｏ）−ＬＧＶＶＬであり、前記式（Ｉａ）の化合物がＬＶＶＧＬ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ−ＣＨ_２−Ｓ−ＨまたはＨ−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨＹ’−Ｃ（Ｏ）−ＬＧＶＶＬである、請求項８に記載の組成物。
10. 一般式（ＶＩ）または（ＶＩＩ）：
    

    

    （式中、Ｘ、Ｘ’、ＹおよびＹ’の各々は互いに独立して、請求項１で定義するとおりである）の化合物を含む組成物。
11. ＬＶＶＧＬ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ−ＣＨ_２−Ｓ−ＨまたはＨ−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨＹ’−Ｃ（Ｏ）−Ｘ’と組み合わせて一般式（ＶＩ）の化合物を含む、請求項１０に記載の組成物。
12. Ｘ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ−ＣＨ_２−Ｓ−ＨまたはＨ−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨＹ’−Ｃ（Ｏ）−ＬＧＶＶＬと組み合わせて一般式（ＶＩＩ）の化合物を含む、請求項１０に記載の組成物。
13. 統合失調症の診断で使用するための、請求項１から１２のいずれかに記載の組成物。
14. 対象における前記統合失調症の診断のための方法であって
    ａ）統合失調症発症の疑いがある対象から得られる血液サンプルを式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物ならびに式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の少なくとも１つの化合物の組み合わせと接触させ、
    ｂ）式（Ｉ）、（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の前記化合物の前記サンプルに対する結合のレベルを測定し、
    ｃ）非統合失調症の個体からのサンプルに対する前記化合物の結合レベルよりも高いレベルは、前記個体が統合失調症に罹患している可能性が高いことを示す、前記方法。
15. 少なくとも１つの他の診断アッセイによって判定される個体における統合失調症の可能性が高いことを確認するのに使用するための、請求項１４に記載の方法。
16. 統合失調症の診断で使用するためのキットであって、
    ａ）式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物と式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）の少なくとも１つの化合物とを組み合わせで含む支持体と、
    ｂ）検出アッセイを実施するための試薬であって、それによって前記化合物が試験したサンプル中に存在するＰＡＡに結合する、前記試薬と、
    ｃ）使用説明書と
    を含む、前記キット。