JP2018521984A - 幼若哺乳動物における経口寛容の誘導及び維持において使用するための寛容原性ペプチドとｔｆｇ−ｂとの組み合わせ - Google Patents

Abstract

本発明は、ＴＧＦ−βと、β−ラクトグロブリンの特定配列を含む１つ以上のペプチドとの組み合わせの投与に関する。ペプチドは、低アレルゲン性でありながらも、天然のタンパク質に対する寛容を誘導する能力を保持する。ＴＧＦ−βと、これらの１つ以上のペプチドとの組み合わせは、新しく導入されたタンパク質、特に離乳期に導入されたタンパク質に対する経口寛容を誘導及び維持する治療効果を有する。この組み合わせは、アレルゲンに対する乳児及び幼児の免疫応答を調節する。【選択図】 図１

Description

本発明は、ＴＧＦ−βと、β−ラクトグロブリンの特定配列を含む１つ以上のペプチドと、の組み合わせの投与に関する。ペプチドは、低アレルゲン性でありながらも、天然のタンパク質に対する寛容を誘導する能力を保持する。ＴＧＦ−βと、これらの１つ以上のペプチドとの組み合わせは、新しく導入されたタンパク質、特に離乳期に導入されたタンパク質に対する経口寛容を誘導及び維持する治療効果を有する。この組み合わせにより、アレルゲンに対する乳児及び幼児の免疫応答を調節することができる。

食物アレルギーは、多くの場合、食品中のタンパク質に対する反応により生じ、人生で最初に発症する食物アレルギーは一般的には牛乳アレルギーである。生後数年では免疫系が未発達であり、食物抗原に対する寛容を獲得するのに失敗する場合がある（これは経口寛容の誘導不全とも記載され得る）。その結果、乳幼児、又は小児、又は幼若動物は食物タンパク質に対して過剰な免疫応答を有するようになり、かかるタンパク質に対するアレルギー反応を発症することになる。食物アレルギーは、ヒトだけではなくイヌ及びネコなどといったその他の哺乳動物にも影響を及ぼし得る。

通常、食物過敏症は、免疫感受性の乳幼児、小児、又は幼若動物が、免疫を引き起こし得るアレルゲンを含む新しい食品と初めて遭遇した直後に発症する。少なくともヒトの乳幼児が母乳（母乳は、母親の食事に由来する食物タンパク質を含有し得る）以外で最初に出会う食物タンパク質は、一般的には牛乳タンパク質である。牛乳アレルギー（ＣＭＡ）は、ヒト乳幼児において最も一般的な食物アレルギーであり、全乳児のおよそ２．５％が影響を受けている［Ｓｉｃｈｅｒｅｒ ＳＨ ｅｔ ａｌ．（２０１０），Ｆｏｏｄ ａｌｌｅｒｇｙ，Ｓａｍｐｓｏｎ ＨＡ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１２５）］。牛乳アレルギーの子供のうちおよそ８５％は２〜３歳齢になる前に牛乳アレルギーを発症している。そのため、他の年齢層ではＣＭＡの患者数は少なくなる。

牛乳アレルギーを発症している乳幼児では、卵タンパク質及び穀類タンパク質などといったその他の食物タンパク質に対するアレルギーを発症するリスクが増大していることが一般に認められている。これらのアレルギーは、アトピー性皮膚炎、湿疹、及び喘息などのアトピー性疾患として臨床的に顕在化し得る。牛乳タンパク質に対する経口寛容を無事に獲得した乳幼児でさえ、その後、離乳時に卵タンパク質及び穀類タンパク質などのその他の食物タンパク質が食事に導入された際に、それらのタンパク質に対してアレルギーを発症する場合がある。

ＣＭＡの予防では、母乳の授乳の他、アトピーの親を持ち「リスクのある」無症候性の乳児に対し処方することが推奨される部分加水分解された低アレルゲン性フォーミュラを使用することが第１に推奨されている。このアプローチは、フォーミュラ中に存在する加水分解タンパク質（ペプチド）及び残存する未分解の（完全長）タンパク質（加水分解されていないフォーミュラと比べ、極めて少量ではあるが存在する）による感作予防において効果的であることが実証されている。

したがって、欧州特許第２３３２４２８号は、牛乳ペプチドを含有している加水分解物を含み、経口寛容を誘導可能な処方を開示している。話題に上っているペプチドはウシカゼインに由来するものであることが特定されている。

現在、市場にはカゼイン又はホエイベースの部分加水分解された低アレルゲン性フォーミュラ（例えば、ＮｅｓｔｌｅのＮＡＮ（登録商標）−ＨＡ、ＢＥＢＡ（登録商標）−ＨＡ、及びＷｙｅｔｈ Ｉｎｆａｎｔ ＮｕｔｒｉｔｉｏｎのＳ２６（登録商標）−ＨＡ）の例が数多く存在する。

既にＣＭＡの兆候を示している乳児に関しては、高度加水分解フォーミュラ（例えば、ＮｅｓｔｌｅのＡｌｆａｒｅ（商標）Ａｌｔｅｒａ（商標））、非アレルゲン性代用乳フォーミュラ、例えば、遊離アミノ酸（例えば、ＮｅｓｔｌｅのＡｌｆａｍｉｎｏ（商標））又は大豆ベースのフォーミュラ（例えば、Ｗｙｅｔｈ Ｉｎｆａｎｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、Ｎｅｗ ＹｏｒｋのＳ２６（登録商標）−Ｓｏｙ、ＮＵＲＳＯＹ（商標）、及びＮｅｓｔｌｅのＮＥＳＴＬE（登録商標）Ｇｏｏｄ Ｓｔａｒｔ（登録商標）ＡＬＳＯＹ（登録商標））が、一般的な牛乳又は部分加水分解フォーミュラの好適な代替となり得る。

したがって、現在では、牛乳アレルギーを有する児童に栄養を提供するにあたり、アレルギー反応を誘導しない調製物を見つけること、すなわち非アレルゲン性の処方を提供することが主な焦点となっている。非アレルゲン性フォーミュラ（遊離アミノ酸又は高度加水分解された牛乳タンパク質のいずれかを含有）又は豆乳を乳児に投与することの欠点には、牛乳アレルギーの乳児はかかるフォーミュラによりアレルギー反応を回避できる一方、かかるフォーミュラでは、調整されていない乳製品を将来的に飲用できるようにする牛乳タンパク質アレルゲンに対する経口寛容を獲得できないというものがある。

経口寛容は、経口経路による抗原の投与以前に生じる、抗原に対する細胞性免疫反応及び／又は体液性免疫反応の特異的抑制である。経口免疫寛容は、生後一ヶ月間の免疫系の発達に重要であり、これにより乳児は、副反応なく食物を摂取できるようになる。経口寛容の獲得に失敗するとアレルギーになる。経口寛容の獲得は免疫系の正常な学習に関係しており、結果としてこれにより食物抗原に対する反応が低減する。

食物タンパク質の構造、抗原の投与量及び投与頻度、並びに宿主の免疫状態などのいくつかの因子が、経口寛容の誘導及び維持に影響するものとして同定されている。

経口寛容は、ある程度は母乳を介し乳児に誘導され得る［Ｍｏｓｃｏｎｉ Ｅ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｒｅａｓｔ ｍｉｌｋ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ａｒｅ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｄｕｃｅｒｓ ｏｆ ｏｒａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｎｅｏｎａｔｅｓ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔ ａｓｔｈｍａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｍｕｃｏｓａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ；３：４６１〜７４ ａｎｄ Ｖｅｒｈａｓｓｅｌｔ ｅｔ ａｌ（２００８）Ｂｒｅａｓｔ ｍｉｌｋ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ａｌｌｅｒｇｉｃ ａｓｔｈｍａ，Ｎａｔ Ｍｅｄｅｃｉｎｅ；１４（２）：１７０〜５］。したがって、卵及びナッツ類などの特定のアレルゲン食物に対し暴露され免疫されている母親から母乳を与えられている乳児は、これらのアレルゲンに対し経口寛容を獲得する。

したがって、経口寛容の誘導に影響し得る因子を更に同定する必要がある。乳児における経口寛容を誘導及び維持することができ、特に、幼若哺乳動物に新しい食物が導入される離乳期に投与され得る、低アレルゲン性又は非アレルゲン性の組成物を提供することは、非常に望ましい。

特に乳児及び幼児における、特にアレルギー発症のリスクのある乳児及び幼児におけるアレルギーの発症を予防又は軽減することのできる、栄養学的な解決法の提供が必要とされている。乳、卵、（樹木になる）ナッツ類、ピーナッツ、甲殻類、小麦及び大豆などといった多様なアレルゲンに対し寛容を誘導することが必要とされている。離乳期中、後者のアレルゲン（latter allergens）が導入されたときの、アレルギー発症の予防又は軽減が必要とされている。母乳を介し特定のアレルゲンに対し誘導された経口寛容の維持が必要とされている。

特に、合成原材料を使用しており、又は原材料の組み合わせを使用しており、生後早期の乳児及び幼児に投与されてよく、かつ将来的にアレルギー体質になる又はアレルギーを発症する可能性又はその際のアレルギーの強度を低減することのできる、栄養学的な介入の設計及び作製が必要とされている。

このような栄養介入は、乳児及び幼児の一般集団に加え、アレルギー体質を有する又はアレルギーの診断を受けた乳児及び幼児の亜母集団にも必要とされている。

概して、アレルギー又はアレルギー症状の軽減を提供すること、乳児及び幼児において、例えば、乳を含む乳（milk including milk）、卵、（樹木になる）ナッツ類、ピーナッツ、甲殻類、小麦、及び大豆などの一般的なアレルゲンに対する寛容を誘導及び維持する手段を開発すること、が必要とされている。

本発明は、鎖長が５〜１２アミノ酸である少なくとも１つの寛容原性ペプチドと、ＴＧＦ−βとの組み合わせを含む、組成物に関する。寛容原性ペプチドは、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７６６４３号、及び国際公開第２０００／４２８６３号において、乳タンパク質、特にβ−ラクトグロブリンに対する寛容を誘導すると記載されている。

ＴＧＦ−βは、初乳と、量は少なくなるものの成熟乳との両方に含まれる生理活性ペプチドである。ＴＧＦ−βは、アトピー性疾患の潜在的な制御因子として同定されている。ＴＧＦ−β−１は、母親がアレルギー体質である場合に、アレルギー体質ではない母体と比べ、成熟乳への分泌が顕著に少ない［Ｒｉｇｏｔｔｉ Ｅ ｅｔ ａｌ．，（２００６）”Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ−ｂｅｔａ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｍｉｌｋ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ．”Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ．３６（５）：６１４〜８］。国際公開第２００９／０４０３１０号は、離乳期の幼若哺乳動物において新しく導入された食物タンパク質に対するアレルギー反応の一次予防のためのＴＧＦ−βの投与方法について記載している。

ＴＧＦ−βは、牛乳にも存在しており、様々な牛乳画分及び市販の乳児用非加水分解フォーミュラ製品（例えば、ＮｅｓｔｌｅのＮＡＮ（登録商標））においてその存在が検出されている。しかしながら、ＴＧＦ−βは乳児用の加水分解フォーミュラの加工中に失われてしまう。

本発明の組成物では、ＴＧＦ−βと寛容原性ペプチド（複数可）との組み合わせにより、結果として、離乳期中及び離乳期後に新しい食物が幼若哺乳動物に導入されたときの、アレルゲンに対するかかる哺乳動物の免疫応答を制御する、組成物が得られる。かかる組成物は、乳タンパク質、特にβ−ラクトグロブリン（ＢＬＧ）に対する経口寛容を誘導することができ、かつかかるＢＬＧに対する経口寛容の獲得を延長すること、並びに母乳の摂取により獲得されたその他の食物タンパク質に対する経口寛容の獲得を延長することもできる。特に、経口寛容は、乳、又は卵、又は（樹木になる）ナッツ類、又はピーナッツ、又は甲殻類、又は小麦若しくは大豆、又は何らかのその他の食物タンパク質などといったアレルゲンにそれまでに暴露されている及び／又は感作されている母体に由来する母乳を与えられた幼若哺乳動物において延長され得る。

ヒト乳児では、本発明の組成物を離乳期中に投与することで、（ｉ）ペプチド及びＴＧＦ−βの存在により、ＢＬＧに対する寛容が誘導及び延長され、（ｉｉ）離乳時に、母乳の授乳を介して乳児又は幼児が既に獲得している食物タンパク質に対する経口寛容が延長される。

かかる組成物を、哺乳動物、特に乳タンパク質に対するアレルギーなどといった食物アレルギーのリスクのある幼若な乳児及び幼児に投与することで、牛乳に対する経口寛容を誘導することができ、かつ牛乳に対する寛容を維持するのに加えて、離乳が開始されることで多様なタンパク質に対し、授乳に誘導された経口寛容を維持することもできる。

かかるペプチドを使用して、ヤギ乳及びバッファロー乳のタンパク質、特にβ−ラクトグロブリンに対する寛容を誘導することもできる。

かかる組成物は、そのままの状態（pure form）、好適な液体に希釈した状態、又は医薬組成物、栄養組成物、若しくは栄養補給剤の形態で投与され得る。

本発明の実施形態によると、組成物中のペプチド（複数可）は、（ｉ）ＢＬＧを含むタンパク性物質の加水分解により分離したペプチド画分、及び／又は（ｉｉ）合成により調製されたペプチド、の形態である。

本発明の実施形態によると、組成物中のＴＦＧ−βは、ＴＧＦ−βを天然に含有する又は強化したホエイ又はカゼインタンパク質の分離物の形態である。

この組成物の主な利点は、哺乳動物において、ウシ、ヒツジ、バッファロー又はヤギの乳タンパク質に対する、特に、β−ラクトグロブリンに対する経口寛容を誘導及び維持するというものである。更に、母乳を介しこれらの哺乳動物において獲得された経口寛容は、本発明の組成物の摂取により、決定的（critical）な離乳期中及び離乳期以降も長時間維持され得る。

これらの哺乳動物は幼若哺乳動物であってよく、親又は兄弟姉妹のうち少なくとも１名がアレルギーを有しており、食物アレルギー、特に牛乳アレルギーを発症する「リスクのある」ヒト乳児又は幼児であってよく、あるいは「リスクのない」ヒト乳児又は幼児であってもよい。したがって、本発明の組成物は、幼若哺乳動物の一般集団に恩恵をもたらす。

かかる組成物は、例えばイヌ及びネコなどのコンパニオンアニマルに投与されてもよい。

好ましい実施形態では、組成物は、鎖長が５〜１２アミノ酸であり、かつペプチド画分の形態で配列番号１〜配列番号８のペプチド配列を含む、少なくとも１つのペプチドを含む。幼若哺乳動物又は成体哺乳動物に投与され得るペプチド（複数可）の１日用量は、体重１ｋｇ当たり０．４〜５０μｍｏｌ、好ましくは体重１ｋｇ当たり０．９〜４０μｍｏｌであり得る。

幼若哺乳動物に投与され得るＴＧＦ−βの１日用量は、体重１ｋｇ当たり６００〜４０００ｎｇ、好ましくは体重１ｋｇ当たり９００〜１６００ｎｇ、及びより好ましくは体重１ｋｇ当たり９５０〜１３００ｎｇであり得る。

組成物の投与は、好ましくは、離乳期中に行われるものの、離乳期を開始する前に行われてもよい。ヒトにおいては、投与は、出生時から、又は１ヶ月齢、２ヶ月齢、３ヶ月齢、４ヶ月齢、５ヶ月齢、若しくは６ヶ月齢から、又はヒト以外の乳が初めて乳児若しくは幼児の食事に導入されたとき、若しくは導入される直前に開始されてよい。組成物は、概して毎日、又は１日おきに投与される。しかしながら投与は、もう少し規則性を減じて、例えば２日おきに行われてもよい。投与期間は、少なくとも１ヶ月、好ましくは、少なくとも３ヶ月、及びより好ましくは少なくとも６ヶ月、又は最大１年までとすることができる。投与は更に長期間なされてもよく、例えば、最大３年まで行われてもよい。

組成物は、ベース組成物、すなわち、例えば、ヒト母乳強化剤、乳児用スターターフォーミュラ、又は乳児用フォローアップフォーミュラ、又はグローアップミルクに加えられてもよい。ベース組成物は「非アレルゲン性」組成物又は「低アレルゲン性」組成物であってよい。

組成物は、原材料又はプレバイオティクスを更に含む、好ましくは、２’フコシルラクトース、ラクト−ジフコテトラオース、３フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−フコペントースＩ、ラクト−Ｎ−フコペントースＩＩ、ラクト−Ｎ−フコペントースＩＩＩ、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、ラクト−Ｎ−テトラオース、３’シアリルラクトース、６’シアリルラクトース、３’シアリルラクト−Ｎ−テトラオース、６’シアリル−ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、イヌリン、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、短鎖フラクトオリゴ糖（短鎖ＦＯＳ）、イヌリン、ガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）、グラングリオシド（glanglioside）、部分加水分解されたグアーガム、アカシアガム、大豆ガム、又はこれらの混合物から選択された原材料又はプレバイオティクスを含む、組成物として投与され得る。

ペプチドは、更に原材料又はプロバイオティクスを含む、好ましくはラクトバチルス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバチルス・ラムノサス（Lactobacillusrhamnosus）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・ラクチス（Bifidobacterium lactis）、及びビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacteriumbreve）から選択された原材料又はプレバイオティクスを含む、組成物として投与され得る。

食物アレルギーによる下痢。１２週目に、食物アレルギー性の下痢に対する感受性について６群のマウスを試験した：マウスは未処置の母マウスにより授乳され（白色のバー）、あるいはＯＶＡに暴露し感作させた母マウスにより授乳され、離乳後９週の間で水（斜線入りの白色のバー）、ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡ（斜線入りの白色のバー）、又はＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡ（斜線入りの暗灰色のバー）のいずれかを経口摂取した。実験は２回行った；実験１では、１群当たり６匹のマウスを割り付け、実験２では、１群当たり１０〜１１匹のマウスを割り付けた。左側のパネルでは、データは、オボアルブミン（実験１）による最後の３チャレンジ、及び２チャレンジ（実験２）の間に観察された下痢スコアの平均＋平均値の標準誤差を表す。右側のパネルは、最後の３チャレンジ（実験１）又は２チャレンジ（実験２）中のＯＶＡチャレンジ中に下痢（スコア３以上）を示したマウスの割合（％）を示す。

マン・ホイットニーのノンパラメトリック検定を使用した、記載の群間の統計的有意性は、上記比較カラムに記載のｐ値により示す。

本発明において、用語「寛容」は、特異的な免疫不応答状態として認識される。免疫応答の体液性（抗体）経路と細胞介在性（リンパ細胞など）経路の両方が寛容の誘導により抑止され得る。経口寛容の破綻は、食物アレルギーの根本原因であるものと考えられる。

用語「アレルゲン」は、哺乳動物において、特に「リスクのある」乳児及び幼児などといった幼若哺乳動物においてアレルギー反応を惹起し得る、タンパク質又はペプチドであるとして理解される。幼若な乳児及び幼児は、親又は兄弟姉妹のうち少なくとも１名がアトピーである場合にタンパク質アレルギーの「リスクがある」とみなされる。

用語「寛容原性ペプチド」は、天然のタンパク質の各部分に相当するタンパク質断片（proteic fragments）であって、３００〜６０００Ｄａ（３〜５０アミノ酸）、及び好ましくは５００〜３０００Ｄａ、及びより好ましくは５００〜１４００Ｄａの大きさであり、未変性のタンパク質に対する特異的な経口寛容を誘導し得る、タンパク質断片であるとして理解される。

用語「非アレルゲン性」組成物は、窒素源を含有し良好にバランスの取れたアミノ酸組成を有する組成物であるとして理解される。「非アレルゲン性」は、残存ホエイタンパク質が１ｐｐｍを超過せず、かつ残存総カゼインが１０ｐｐｍを超過しない乳タンパク質として定義される。

用語「低アレルゲン性組成物」は、アレルゲン性の低い組成物であるとして理解される。

用語「〜で感作されている」とは、アレルゲンへの暴露後にアレルゲン特異的なＩｇＧ１抗体及び／又はＩｇＥ抗体を産生するようになっていることを意味する。

用語「加水分解率」は、組成物中のタンパク質画分が加水分解されている程度を意味する。加水分解率は、タンパク質加水分解物中の遊離アミノ窒素基と反応するトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）などの試薬を用い評価することができる。ホエイタンパク質ベースの加水分解物に関しては、「部分的な」タンパク質加水分解物において、窒素に反応するＴＮＢＳ（％アミノ−Ｎ／ＴＮとして表される）は、通常８〜１５％の範囲であり、概して、タンパク質の高度加水分解物は、窒素反応ＴＮＢＳの％アミノＮ ／ＴＮは３０〜４５％であることを特徴とする。

用語「離乳」は、ヒト母乳の代用乳（乳児用フォーミュラなど）及び／又は補完的な液状食又は固形食の導入を意味する。

用語「乳児」は、生涯の最も早期の、生後間もなくから歩行可能になるまでの期間（通常、およそ１２ヶ月）の小児を意味する。

用語「幼児」は、年齢の高くない、通常、１歳齢から２歳齢半までの小児を意味する。

「ＴＧＦ−β」又は「形質転換増殖因子−β」は、別個の、但し密接に関連した、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２などとして記載され、特にヒト母乳中に見られる、少なくとも５つの生物活性ペプチド群を意味する（ＴＧＦ−β１及びＴＧＦ−β２）（Ｌｉ ｅｔ ａｌ，Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−Ｂ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６ ２４：９９〜１４６）。ＴＧＦ−βは種間で高度に保存されている（アミノ酸配列相同性は９８％超）。

本発明は、離乳時に幼若哺乳動物において乳タンパク質に対する及び新しく導入された食物タンパク質に対するアレルギー反応の一次予防に使用するための、ＢＬＧに由来し鎖長が５〜１２アミノ酸である特定のセットの寛容原性ペプチドのうちの少なくとも１つと、ＴＧＦ−βとの組み合わせを含む組成物に関する。

鎖長が５〜１２アミノ酸であり、配列番号１〜８のうちの１つの配列を含む少なくとも１つのペプチドが本発明の組成物中に存在する。配列番号１〜８のペプチド配列を表１に示す。配列番号１〜５の寛容原性ペプチド配列の特定及び特性評価は、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７６６４３号に記載される。

配列番号６のペプチド、ＩＤＡＬＮＥＮＫ、配列番号７のペプチド、ＶＬＤＴＤＹ、及び配列番号８のペプチド、ＥＶＤＤＥＡＬＥＫは、これまでに国際公開第２０００／４２８６３号で経口寛容の誘導因子として特定されている。かかるペプチドは、以下の文書において、より長鎖のペプチド配列の一部として同定された。

国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７６６４３号では、発明者らは主要組織適合抗原（ＭＨＣ）のクラスＩＩ受容体、ＨＬＡ−ＤＲを発現しているヒト細胞による細胞ベースのアッセイを使用して、表１の、部分加水分解された乳児フォーミュラＮＡＮ（登録商標）−ＨＡ（ＮｅｓｔｌｅのＢＥＢＡ（登録商標）ＨＡとしても知られる）中に存在するペプチド配列を、ＨＬＡ受容体に結合するものとして同定した。

かかる特許出願では、ＨＬＡ受容体がペプチド配列をＴ細胞に提示することにより寛容が誘導されるという、経口寛容の誘導における初期過程を説明している。したがって、寛容の発達は、ＭＨＣによるペプチド配列の認識に大きく依存する。ＭＨＣのペプチド結合領域は、平均１０アミノ酸、最小で５アミノ酸のアミノ酸からなるペプチドの、ペプチド配列又は集合体を認識する。ペンタペプチドは、胃腸管で消化を受けて５〜１８アミノ酸に大きさを減じたペプチドを生成する、より長鎖のペプチド配列（又は更にはタンパク質）に含まれ得る。これにより、遊離アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、及びテトラペプチドからなる乳清の高度加水分解生成物が経口寛容を誘導しない理由が一部説明される。

表１のペプチドの、ｉｎ ｖｉｖｏでの経口寛容誘導能は、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７６６４３号において、ＢＬＧに対する感作についての実験マウスモデルにおいて更に確認されている。

本発明の組成物に含まれる１つのペプチド又は複数のペプチドは、５〜１２アミノ酸の鎖長を有し、かつ各ペプチドは配列番号１〜８（表１を参照のこと）から選択される配列を含む。したがって、ペプチド（複数可）は、特定の鎖長（５〜１２アミノ酸）を有する。

ペンタマー（鎖長が５アミノ酸）より短いペプチドは、寛容原性の効果を提供する一方、１２−ｍｅｒを超過するペプチドではアレルゲン性に関するリスクが高くなるものと考えられる。

したがって、ペプチドは、配列番号１〜８から選択された配列のうちいずれか１つの配列を含む５−ｍｅｒ、６−ｍｅｒ、７−ｍｅｒ、８−ｍｅｒ、９−ｍｅｒ、１０−ｍｅｒ、１１−ｍｅｒ、又は１２−ｍｅｒであってよい。したがって、ペプチドは、次の配列、ＩＶＴＱＴＭ（配列番号１）又はＩＶＴＱＴＭ（配列番号１）、又はＫＧＬＤＩＱＫ（配列番号２）、又はＤＡＱＳＡＰＬＲ（配列番号３）、ＶＥＥＬＫＰＴＰＥ（配列番号４）、ＩＩＡＥＫ（配列番号５）、ＩＤＡＬＮＥＮＫ（配列番号６）、ＶＬＤＴＤＹ（配列番号７）、又はＥＶＤＤＥＡＬＥＫ（配列番号８）を含み、５−ｍｅｒ、６−ｍｅｒ、７−ｍｅｒ、８−ｍｅｒ、９−ｍｅｒ、１０−ｍｅｒ １１−ｍｅｒ、又は１２−ｍｅｒである任意のペプチドであってよい。

本発明の組成物に含まれるペプチドは、配列番号１〜８の配列を含むペプチドのいずれか１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、５つ、６つ、７つ、更には８つ全ての組み合わせであってよい。

本発明の一実施形態によると、分離ペプチドは、当業者に知られる標準法により合成されてもよい。あるいは、本発明の別の実施形態によると、分離ペプチドは、天然の供給源、例えば、乳（例えば牛乳）、あるいは好ましくは例えばペプチドの製造又は濃縮のため調整（modified）され、処理されている乳画分などから、濃縮又は抽出されてもよい。乳タンパク質が酵素又は別の手法により加水分解されている乳加水分解物は、当業界で知られる方法により生成され得る。本発明のペプチドを含むペプチド画分の、乳加水分解物からの抽出、分離、及び同定方法も、当業者に知られている。本発明のペプチドはこれらの方法により生成され得る。

配列番号１〜５のペプチドの調製及び特性評価は、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７６６４３号に詳細に記載されている。かかる特許文献に記載されている方法を使用して、本発明の組成物に含められるペプチドを調製してもよい。配列番号６〜８のペプチドの製造及び特性評価は、国際公開第２０００／４２８６３号に詳細に記載されている。

本発明の一実施形態によると、投与されるペプチド（複数可）の１日用量は、体重１ｋｇ当たり０．４〜５０μｍｏｌ、好ましくは０．９〜４０μｍｏｌの範囲である。例えば、ペプチドが乳児用フォーミュラの一部として投与される場合、ペプチドは、粉末１ｇ当たり５０〜１５０μｇの濃度でフォーミュラ中に存在し得る。５ヶ月齢の乳児の場合、乳児用フォーミュラの典型的な用量は、各回スプーン７杯の粉末を１日当たり３ボトルになり、６ヶ月齢以上の乳幼児の場合、各回スプーン７杯の粉末を１日当たり２ボトルになる。用量は、６ヶ月齢の乳幼児の平均体重が約８ｋｇであり、１２ヶ月齢では約９．５ｋｇであることに基づいたものである。

国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７６６４３号は、ウシ、バッファロー、家畜種のヤギ、ヒツジ、及びムフロンのＢＬＧでは配列番号１〜５の配列が高度に保存されている（配列相同性１００％）ことが特定されたと記載されている。したがって、これらの配列を含む乳供給源のいずれもが、牛乳に対する経口寛容を誘導可能であり、その逆もまた可能であるものと考えられる。したがって、本発明者らは、本発明者らにより特定されたペプチドは、これらの供給源のいずれに由来するＢＬＧに対しても経口寛容を誘導可能であると主張する。

本発明の一実施形態によると、本発明の組成物は、経口寛容を誘導するのに十分な量で、好ましくはウシＢＬＧに対する経口寛容を完了するのに十分な量で投与される。ＢＬＧはヒツジ又はヤギに由来するものであってもよい。完全な経口寛容とは、牛乳、特にウシＢＬＧを用いＤＢＰＣＦＣ（二重盲検食物負荷試験）を実施した後で、アレルギー反応が観察されないことを意味する。

本発明の一実施形態によると、ペプチドは、全タンパク質の０．０１％〜５％、及び好ましくは０．１％〜０．５％の量で存在し得る。

本発明の組成物はＴＧＦ−βも含む。

ＴＧＦ−βは、例えば、欧州特許第３１３５１５号又は国際公開第９２／００９９４号に記載の通り、乳から分離されたポリペプチド増殖因子の形態であってもよい。あるいは、好ましい場合には組換ＴＧＦ−βを使用してもよい。

更に、ＴＧＦ−βは、哺乳動物乳のホエイ画分とカゼイン画分の両方に主に活性型で存在する。したがって、本発明の組成物に含められるＴＧＦ−βは、哺乳動物乳に由来する、例えば、牛乳、ヤギ乳、バッファロー乳、又はラクダ乳に由来するホエイ画分又はカゼイン画分の形態であり得る。

本発明に使用され得る、ＴＧＦ−βを含有する乳画分は、Ａｒｍｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎｅｓ（Ｆｒａｎｃｅ）から製品名ＴＭ０３０１（商標）Ｐｒｏｔａｒｍｏｒ ８６５ Ｓｂ（商標）若しくはＶｉｔａｌａｒｍｏｒで、又はＡｄｖｉｔｅｃｈ（Ｃａｎａｄａ）から製品名ＸＰ−８２８Ｌ（商標）で入手可能なＴＧＦ−βを含有するホエイタンパク質画分である。

本発明の実施形態によると、本発明の組成物は、乾燥組成物１ｇ当たり１２〜３００ｎｇ のＴＧＦ−β、好ましくは、乾燥組成物１ｇ当たり４５〜１００ｎｇのＴＧＦ−β、より好ましくは、乾燥組成物１ｇ当たり６５〜８５ｎｇのＴＧＦ−βを含有する、ヒト母乳強化剤、乳児用フォーミュラ、好ましくはフォローオンフォーミュラである。

本発明の一実施形態によると、投与されるＴＧＦ−βの１日用量は、体重１ｋｇ当たり６００〜４０００ｎｇ、好ましくは９００〜１６００ｎｇ、及びより好ましくは９５０〜１３００ｎｇの範囲である。

好ましくは、本発明の実施形態による組成物は、ＴＧＦ−β１とＴＧＦ−β２の両方を含有する。好ましくは、ＴＧＦ−β１及びＴＧＦ−β２は、２：１〜１：２０の比であり、より好ましくは、１：１０〜１：２０、例えば、１：１６の比である。

組成物は、幼若哺乳動物にそれのみ（例えば、そのもの又は水若しくは母乳で希釈したもの）を直接経口投与してもよく、又は乳児用乳フォーミュラ、フォローオンフォーミュラ、若しくはグローアップミルク、又は例えば、ヒト母乳強化剤などの食事補給剤といった組成物として直接経口投与してもよい。栄養供給中に使用される何らかのミルクサポート、乳児用非乳系フォーミュラ、乳幼児用シリアル又はヨーグルト、乳幼児用のチーズのミールプディング、乳飲料又は果汁飲料、スムージー、スナック若しくはビスケット、又はその他の焼成品にも添加され得る。組成物は、ドライフード若しくはキブル、ウェットフード若しくは缶詰といった形態のペットフード及び飲料、又は補給剤にも添加され得る。

本発明の一実施形態によると、組成物は、低アレルゲン性組成物又は非アレルゲン性組成物に添加される。組成物は、例えば、低アレルゲン性のヒト母乳強化剤、早産児用フォーミュラ、乳児用スターターフォーミュラ、フォローオンフォーミュラ、食事補給剤、又はグローアップミルクに添加されてもよい。組成物は、例えば、非アレルゲン性のヒト用母乳強化剤、早産児用フォーミュラ、乳児用スターターフォーミュラ、フォローオンフォーミュラ、食事補給剤、又はグローアップミルクに添加されてもよい。低アレルゲン性組成物及び非アレルゲン性組成物は、通常、高度加水分解タンパク質分離物を含有する。好ましい実施形態では、組成物は、加水分解率が８〜１５％である乳加水分解物を含む低アレルゲン性組成物に添加される。組成物のタンパク質画分が部分加水分解物又は高度加水分解物として存在する場合、ＴＧＦ−βは、完全長（加水分解を受けていない）ＴＧＦ−β（ＴＧＦ−β１及びＴＧＦ−β２）を組成物中に確実に存在させるため、別々に添加され得る。

一方、本発明の一実施形態によると、組成物が、加水分解を受けていない（例えば、ホエイ）タンパク質画分を含むと、ＴＧＦ−β含量を必要レベルにするため追加する必要のあるＴＧＦ−β量は少なくなり、あるいは全く添加しなくてもよくなる。本発明の実施形態によると、組成物のタンパク質分離物は加水分解されず、又は高度加水分解されず、配列番号１〜８の配列を含む寛容原性ペプチドが組成物に別個に添加される。部分加水分解されたタンパク質分離物を含む低アレルゲン性組成物の場合、配列番号１〜８の配列を含む寛容原性ペプチドを組成物に別個に添加してもよい。

本発明の組成物は、離乳期の幼若哺乳動物において新しく導入された食物タンパク質に対するアレルギー反応を予防するための液体栄養剤又は栄養薬剤として、記載の用量で使用され得る。したがって、特に組成物は、ＢＬＧ（ウシ、バッファロー、家畜種のヤギ、ヒツジ、及びムフロンのいずれかに由来）に対する経口寛容の誘導のために、また幼若哺乳動物による母乳の摂取を介しＢＬＧ又はその他の食物タンパク質に対し獲得された経口寛容の維持のために使用される。

記載の治療効果は、離乳期中、及び場合により離乳期前の幼若哺乳動物に組成物を与えることによって得られる。このような組成物は、乳児及び幼児に投与されてよく、あるいはアレルギーの兆候又はアレルギーに対する感受性を示している乳児及び幼児の亜母集団に投与されてよい。

本発明の組成物により誘導される、ＢＬＧに対する経口寛容は、中期（治療中、又は治療から１ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月又は１８ヶ月以内）でアレルギーの緩和をもたらし得る。

更に、母乳の摂取により獲得された経口寛容の延長又は維持が、離乳期中に新しく導入された食物に対するアレルギー症状の発症を予防する。母乳の摂取を通して獲得された経口寛容は、特定期間後に失われる（例えば、マウスでは１２週間［Ｍｏｓｃｏｎｉ ｅｔ ａｌ（２０１０）］）。したがって、この既に獲得された経口寛容の延長又は維持は、できるだけ長く食物アレルギー及びアトピー性疾患の発症を低減させるのに非常に効果的な方法である。

この効果は、実施例１の、オボアルブミンアレルギーのマウスモデルの実験により実証される。この例では、離乳中の仔マウス集団に、（ｉ）水、（ｉｉ）ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡフォーミュラ、又は（ｉｉｉ）ＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡフォーミュラのいずれかが与えられた。レジメン（ｉｉｉ）は、本発明の実施形態による組成物である。ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡは、配列番号１〜５の５種類のペプチドを全て含有する。３通りのレジメン群のそれぞれに含まれる仔マウスは、未処置の（オボアルブミンに暴露されていない）母マウス又はオボアルブミン（ＯＶＡ）に暴露されておりかつ感作されている母マウスのいずれによる授乳を受けているかをもとに更に２つの分集団に分割される。

次に、概略するとオボアルブミン／水酸化アルミニウム（アジュバント）の腹腔内投与後に経口ＯＶＡチャレンジを行なうことからなる食物アレルギー誘導プロトコルを、仔マウスに対し適用した。次に、仔マウスのアレルギー症状、特に、下痢を評価した（実験１）。第２セットのＯＶＡチャレンジを行い（実験２）、アレルギー症状、特に下痢を再評価した。

図１はこの実験の結果を示し、かつ実施した２つの実験において、１２週目では、ＯＶＡに暴露し感作させた母マウスによる授乳を受けかつ離乳後にＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡ強化フォーミュラを摂取したマウス群のみで、未処置の母による授乳を受け離乳後に水を摂取したマウス（対照群）と比較して、食物アレルギーによる下痢に対する感受性が有意に減少していること例示する。

実験１及び実験２を併せて分析すると、ＯＶＡ暴露を受けた母マウスより授乳を受け、ＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡを更に摂取したマウス集団では、ＯＶＡチャレンジ時に下痢となったマウスはわずか２２％であったのに対し、暴露を受けていない母マウスより授乳を受け、水を摂取したマウスのうち６０％もが下痢となった。ＯＶＡ暴露を受けた母マウスより授乳を受け、離乳後に水を摂取したマウスのうち下痢となったのは４３％であった。

第２の実験では第１の実験よりも食物アレルギーが重症であったが、実験１よりも良好に予防されてさえいた。更に、対照群では最後２回のチャレンジでマウスの８０％がアレルギー性の下痢となったのに対し、ＯＶＡに対し免疫され暴露された母マウスによる授乳を受け、離乳後にＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡを摂取したマウスのうち、下痢となったのはわずか２５％であった。

２つの実験により得られた結果を収集すると、ＯＶＡに対し免疫され暴露された母マウスによる授乳を受け、離乳時にＮＡＮ（登録商標）−ＨＡフォーミュラを摂取したマウス群でも統計的に有意な予防が観察された。しかしながらこの場合、ＯＶＡに対し免疫され暴露された母マウスにより授乳され、離乳時にＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡ強化フォーミュラを摂取したマウスで観察されたものと比較して予防の再現性は低く、その程度は弱かった。

ここにはデータを掲載しないが、仔マウスへの授乳中（すなわち、授乳期中）にアレルゲンに対し暴露されたもののかかるアレルゲンに対し感作はしていない母マウスにより授乳された仔マウスにおいても経口寛容の誘導及び延長が観察された。この効果は、アレルゲンに対し暴露され感作された母マウスにより授乳された仔マウスで観察されたものほど顕著ではなかった。したがって、概略すると、本発明の組成物は、ＢＬＧに対する経口寛容を誘導し、かつこれらの食物アレルゲンに暴露されているものの、これらの食物アレルゲンに対し感作される必要のない母体に由来する母乳の摂取により導入された食物アレルゲンに対する経口寛容を延長する。母マウスを介した食物アレルゲンへの暴露は、概して授乳期中のものである。概して、離乳中の幼若哺乳動物に対する本発明の組成物の投与は、概して授乳期中に食物アレルゲンに暴露されておりかつ場合によりかかる食物アレルゲンにより感作されている母マウスから授乳を受けている幼若哺乳動物において、食物アレルゲンに対する経口寛容を延長する。食物アレルゲンは、例えば、乳、又は卵、又は（樹木になる）ナッツ類、又はピーナッツ、又は甲殻類、又は小麦若しくは大豆、又は何らかのその他の食物タンパク質であり得る。経口寛容の延長は、食物アレルゲンに既に感作されている母体による授乳を受けた幼若哺乳動物においてより顕著であった。

ＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡ強化は、乳児への投与に適した本発明の組成物の一実施形態の一例である。

したがって、本出願者らは、本発明の組成物が、母乳の摂取により導入されるアレルゲンに対する経口寛容を延長／維持し、かつ離乳期中に、幼若哺乳動物における、これらのアレルゲンへの暴露時のアレルギー症状の発症を予防することを実証した。

本発明による組成物は、組成物が投与される幼若哺乳動物が、ＢＬＧに対し暴露され感作された母体に由来する乳を摂取しているかは不問として、ＢＬＧに対する経口寛容を誘導する能力も有する。

組成物は、幼若哺乳動物が、アレルゲン、特に、乳、又は卵、又は（樹木になる）ナッツ類、又はピーナッツ、又は甲殻類、又は小麦若しくは大豆、又は何らかのその他の食物タンパク質などといったアレルゲンにそれまでに暴露されている及び／又は感作されている母体に由来する母乳の摂取により獲得した経口寛容を維持する能力も有する。

本発明の実施形態によると、組成物は、離乳中及び離乳後の幼若哺乳動物における乳タンパク質に対する及び新しく導入された食餌性タンパク質に対するアレルギー反応の一次予防に使用するために投与され得る。本発明の実施形態によると、組成物は、離乳中及び離乳後の幼若哺乳動物におけるアトピー性疾患の一次予防に使用するために投与され得る。一実施形態によると、幼若哺乳動物は、アレルギーを発症するリスクがある。

組成物の投与は、好ましくは、新しい食物が幼若哺乳動物に導入される離乳期中に行われる。しかしながら、投与は、免疫系の「刺激」のため、離乳期を開始する前に行われてもよい。ヒトにおいては、生後から主に母乳を与えられていた場合、多くの場合、離乳期は約４ヶ月齢、又は５ヶ月齢、又は６ヶ月齢で開始される。一方で、生後に母親が主として与えていたのが母乳ではなかった場合（母乳以外の食物が導入されていた場合）、離乳期の開始は、生後少なくとも１ヶ月、２ヶ月、若しくは３ヶ月、又は更には１週間、２週間、又は３週間に早められてもよい。

本発明の組成物が最大の治療効果を発揮するためには、投与は規則的でかつ頻繁である必要があり、多くの場合、例えば毎日、又は１日おきになされる必要がある。しかしながら、投与は、例えば、もう少し規則性を減じて２日おきに行われてもよい。投与は少なくとも１日１回であるとよい。投与は授乳毎でも、あるいはもう少し低頻度であってもよい。例えば、１日１回、又は２回又は３回、又は４回、又は５回以上であってもよい。組成物の１日当たりの投与回数は、乳児又は幼児の年齢、授乳回数、及び保護者の希望にも応じる。

投与期間は、少なくとも１ヶ月、好ましくは、少なくとも３ヶ月、及びより好ましくは少なくとも６ヶ月、又は最大１年までとすることができる。投与は更に長期間なされてもよく、例えば、最大３年まで行われてもよい。

本発明のペプチドの投与期間は、継続的なものであっても断続的なものであってもよい。効果をより持続させたければ継続投与が好ましい。しかしながら、幼若哺乳動物又は成体哺乳動物では、断続的な様式（例えば、１日おきの投与、又は１ヶ月につき１週間の間連日投与、又は１週間おきに１週間の連日投与）が好ましい効果を誘導する場合がある。

好ましくは投与は、毎日（１日１回又は数回）、又は週毎（１週間に４回、又は３回、又は２回、又は１回）になされる。

配列番号１〜８の配列のいずれかを含む寛容原性ペプチド（複数可）とＴＧＦ−βとを含む組み合わせは、他の化合物は併用せずに単独で、そのまま、又は水若しくはヒト母乳などの乳で希釈して、又はその他の化合物（栄養補助食品、栄養補給剤、薬剤、担体、香味料、消化性若しくは非消化性原材料）との混合物として投与されてもよい。

かかる組み合わせは、ヒト母乳強化剤組成物又はその他の栄養補給剤組成物の一部として、例えば、幼若な乳児又は幼児に投与することができる。ペプチド（複数可）とＴＧＦ−βとの組み合わせを含む組成物は、医薬組成物に添加されてもよい。

本発明の一実施形態によると、ペプチド（複数可）と、ＴＧＦ−βペプチドとの組み合わせは、哺乳動物、特に、ヒト及びペットを対象とする組成物のベース組成物に添加されてよく、又は組み込まれてよい。ベース組成物は、未処理の（加水分解されていない）タンパク質を含有してもよい。ベース組成物は、乳児用フォーミュラ、フォローアップフォーミュラ、又は乳児若しくは幼児用の栄養組成物であってよい。

本発明の一実施形態によると、ペプチド（複数可）と、ＴＧＦ−βペプチドとの組み合わせは、哺乳動物、特に、ヒト及びペットを対象とする低アレルゲン性組成物のベース組成物に添加されてよく、又は組み込まれてよい。したがって、ペプチドが添加される、又はペプチドが組み込まれ得るベースフォーミュラは、例えば、乳タンパク質が部分加水分解されている低アレルゲン性（ＨＡ）フォーミュラであってよい。ベースフォーミュラは、乳タンパク質が高度に加水分解されている、若しくは遊離アミノ酸で置き換えられている、非アレルゲン性フォーミュラ、又は大豆ベースのものなどの牛乳代用乳であってもよい。ベースフォーミュラは、例えば、乳児用フォーミュラ、フォローアップフォーミュラ、又は特に生理学的／病理学的状態の乳児若しくは幼児用の栄養組成物であってよい。

一実施形態では、フォーミュラは基本的な乳児用フォーミュラであり、かかるベースフォーミュラは、ペプチド又はタンパク質は含まず、アミノ酸だけを含む。

一実施形態では、ベースフォーミュラのタンパク質又はペプチドは、未処理のスイートホエイ又はｃＧＭＰが除去されているスイートホエイ加水分解物に一部又は完全に由来する。ウシホエイから実質的に全てのカゼイングリコマクロペプチド（スレオニンに富み、トリプトファンの少ない画分）を除去することにより、α−ラクトアルブミン（トリプトファンが非常に豊富な画分）の割合を増大させることのできるプロセスについては、欧州特許第８８０９０２号が参照される。この変性スイートホエイ画分をスキムミルクと組み合わせて、ある程度の遊離Ｌ−ヒスチジン及びＬ−アルギニンを添加することで（ＥＣ指令により求められるこれらのアミノ酸の最低量を充足することを目的とする）、処方は、特に同等のトリプトファンレベル及びスレオニンレベルを特徴とするヒト母乳に十分に近いアミノ酸プロファイルを有するようになり、ヒトに適したタンパク質含量への調整が可能になる。

上記最適化ペプチドプロファイルと併せて投与されたとき、ペプチド（複数可）とＴＧＦ−βとの組み合わせが、アミノ酸プロファイルの最適化と相乗的に作用して経口寛容の誘導及び維持を送達しつつ、タンパク質栄養価の最適化をもたらすことは理解されたい（最適な定量的方法においてタンパク質要求量を充足することにより、ペプチド及びＴＧＦ−βの効果が増強され得る）。

本発明の組成物のペプチドは、例えば、乳児用フォーミュラの一部として、粉末１ｇ当たり５０〜１５０μｇの濃度で投与され得る。

一実施形態では、ペプチド（複数可）とＴＧＦ−βとの組み合わせが添加された低アレルゲン性のベース組成物は、窒素、ペプチド又は遊離アミノ酸、及び特にウシ若しくはヤギ若しくはヒツジ由来の乳タンパク質などの供給源として、例えば、ホエイタンパク質、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、ウシ血清アルブミン、カゼイン酸、カゼイネート、又はα、β、κ−カゼインを含有し得る。窒素源は、全エネルギーの少なくとも７〜２５％を提供し得る。

ビタミン類及びミネラル類は、典型的な栄養補給剤の例である。好ましい実施形態では、組成物は、幼若哺乳動物の免疫に対する上記効果を増強するその他の化合物とともに投与される。かかる化合物は、乳児の免疫応答に相乗的に又は別個に影響する、及び／又はペプチドの効果を増強する、プロバイオティクス及びプレバイオティクスなどといったその他の活性化合物であり得る。

既知のプロバイオティクス化合物の例は、バチルス（Bacillus）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterum）、ラクトバチルス・サッカロマイス（Lactobacillus Saccharomyce）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）、エンテロコッカス・フェシウム（E.Faecium）、エシェリキア・コリ・ニッスル（E. Coli Nissle）である。特に、プロバイオティクス及び非複製プロバイオティクス、例えば、ラクトバチルス（Lactobacillus）属、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属又はこれらの組み合わせ、例えば、ラクトバチルス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）属、ラクトバチルス・ラムノサス（Lactobacillusrhamnosus）属、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）属、ビフィドバクテリウム・ラクチス（Bifidobacterium lactis）属、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacteriumbreve）属、又はこれらの組み合わせ、及びこれらの細菌の応用。

プレバイオティクス及び更なる原材料は、好ましくは、２’フコシルラクトース、ラクト−ジフコテトラオース、３フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−フコペントースＩ、ラクト−Ｎ−フコペントースＩＩ、ラクト−Ｎ−フコペントースＩＩＩ、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、ラクト−Ｎ−テトラオース、３’シアリルラクトース、６’シアリルラクトース、３’シアリルラクト−Ｎ−テトラオース、６’シアリル−ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、イヌリン、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、短鎖フラクトオリゴ糖（短鎖ＦＯＳ）、ガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）、グラングリオシド（glanglioside）、部分加水分解されたグアーガム、アカシアガム、大豆ガム、又はこれらの混合物から選択される。

第１の炭水化物と相乗的に作用し、キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）ガム、アカシアガム、スターチ、部分加水分解されたグアーガム、又はこれらの混合物からなる群から選択される、第２の炭水化物などといったその他の炭水化物が存在してもよい。１種又は１種以上の炭水化物は、組成物の１日用量中に、約１ｇ〜２０ｇ、又は１％〜８０％、又は２０％〜６０％で存在してもよい。あるいは、炭水化物は、ドライ組成物の１０％〜８０％で存在する。

一実施形態では、栄養組成物は、国際公開第２００７／０９０８９４号に記載のオリゴ糖ミックスを含む（全般的に教示されており、特に実施例１において教示されている）。栄養組成物は、特にＧＯＳと組み合わせて使用されてもよい。ベースフォーミュラは、ＧａｌＮＡｃα１，３Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃ及びＧａｌβ１，６ＧａｌＮＡｃα１，３Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃからなる群から選択された、５〜７０重量％の少なくとも１種のＮ−アセチルオリゴ糖と、Ｇａｌβ１，６Ｇａｌ、Ｇａｌβ１，６Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃ Ｇａｌβ１，６Ｇａｌβ１，６Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１，３Ｇａｌβ１，３Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１，３Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１，６Ｇａｌβ１，６Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１，６Ｇａｌβ１，３Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃ Ｇａｌβ１，３Ｇａｌβ１，６Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃ、及びＧａｌβ１，３Ｇａｌβ１，３Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃからなる群から選択された２０〜９０重量％の少なくとも１つの中性オリゴ糖と、ＮｅｕＡｃα２，３Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃ、及びＮｅｕＡｃα２，６Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃからなる群から選択された５〜５０重量％の少なくとも１つのシアリルオリゴ糖と、を含むオリゴ糖混合物を提供し得る。

１種以上の必須長鎖脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）が組成物に含有されてもよい。添加され得るＬＣ−ＰＵＦＡの例は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）及びアラキドン酸（ＡＡ）である。ＬＣ−ＰＵＦＡは、組成物中に存在する脂肪酸の０．０１％超を構成するような濃度で添加されてもよい。

所望される場合、栄養組成物には食品等級の１種以上の乳化剤を含めることもできる（例えば、モノ及びジグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、レシチン、及びモノ若しくはジグリセリド、又はこれらの混合物）。同様に、好適な塩及び安定剤を含めてもよい。香味料を組成物に添加することもできる。

ペプチド（複数可）とＴＧＦ−βとの組み合わせは、予定日前に出生した乳児又は低体重の乳児のための、乳児用「早産用フォーミュラ」組成物、「スターターフォーミュラ」組成物、又は「フォローオンフォーミュラ」組成物に組み込まれてよく、あるいはかかる組成物中に存在してもよい。このようなスターターフォーミュラの例は実施例２で与えられる。

実施例１：
配列番号１〜８の配列を有するペプチドとＴＧＦ−βとを含む組成物を離乳時の仔ラットに投与することによる効果を調査するためのｉｎ ｖｉｖｏ試験を実施した。具体的には、組成物の投与後、食物アレルギーに対する仔マウスの防御を測定した。

実験は、オボアルブミン（ＯＶＡ）に暴露し感作させた母体由来の母乳を介し取り込ませたＯＶＡにより食物アレルギーの一時的な予防を誘導可能であることを利用して設計した。離乳後に乳児用部分加水分解フォーミュラＮＡＮ（登録商標）−ＨＡ又はＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡフォーミュラを投与することで食物アレルギー予防の維持に生じる効果を１２週目に評価した。

以下の６群に対し、２つの独立した試行（同条件）を実施した。
仔マウスには、未処置の母マウスにより授乳させ、離乳後、以下の経口レジメンを採用した：
水又はＮＡＮ（登録商標）−ＨＡフォーミュラ又はＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡフォーミュラ

仔マウスには、ＯＶＡに暴露し免疫した母マウスにより授乳させ、離乳後、以下の経口レジメンを採用した：
水又はＮＡＮ（登録商標）−ＨＡフォーミュラ又はＴＧＦ−β強化ＮＡＮ（登録商標）−ＨＡフォーミュラ

実験１では、１群当たり６匹のマウスを割り付け、実験２では、１群当たり１０〜１１匹のマウスを割り付けた。簡潔に、交配前にＯＶＡ吸着水酸化アルミニウムを２回腹腔内投与することによりマウスを免疫し、あるいはかかる免疫はしなかった。送達時に、未処置の仔マウスは、未処置又は免疫した母マウスにより育成され、３週間の間、１週間に３回、２ｍｇのＯＶＡを経口投与された（授乳期）。１２週齢の時点でマウスを離乳させ、簡潔には、１３週及び１５週の時点でＯＶＡ（５０μｇ）／水酸化アルミニウム（１ｍｇ）を腹腔内投与した後、１７週の時点で胃内ＯＶＡ（５０μｇ）チャレンジを週に３回行なうことからなる、食物アレルギー誘導プロトコルにかけた（Ｂｒａｎｄｔ ｅｔ ａｌ．２００３のものを改変）。

対照群において５０％超のマウスが下痢を示したとき、マウスを屠殺した（母には未処置、離乳後に水）。

チャレンジの１時間後に下痢スコアをもとに食物アレルギーを判断した：
０：正常／硬便
１：柔らかく、粘り気があり、良好に形状を保っている便
２：形状が損なわれている便
３：液状の下痢を１回（one episode）
４：液状の下痢を２回以上（2 or more episodes）
結果は、マン・ホイットニーのノンパラメトリック試験を用い比較した。図１に示す。

実施例２：
本発明により使用するための乳児用フォーミュラの組成物の例を以下に示す。この組成物は例示目的でのみ与えられる。

Claims (15)

1. 配列番号１〜８から選択された配列を含み５〜１２アミノ酸の鎖長を有する少なくとも１つのペプチドと、
   ＴＧＦ−βと、
   を含む栄養組成物。
2. 加水分解率が８〜１５％である乳加水分解物を含む、請求項１に記載の栄養組成物。
3. 前記少なくとも１つのペプチドが、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ又は８つのペプチドであり、それぞれが配列番号１〜８から選択された異なる配列を含み、かつ５〜１２アミノ酸の鎖長を有する、請求項１又は２に記載の組成物。
4. 前記１つ又は複数のペプチドが乳由来のものであり、特に、β−ラクトグロブリン由来のものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
5. 前記１つ又は複数のペプチドが、（ｉ）β−ラクトグロブリンを含むタンパク質性物質の加水分解から分離したペプチド画分、及び／又は（ｉｉ）合成的に調製された１つ又は複数のペプチドとして存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
6. 前記ＴＧＦ−βが、ウシ、ヤギ、バッファロー又はラクダの乳に由来するホエイ画分若しくはカゼイン画分の形態、又は組換ＴＧＦ−βの形態である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
7. ヒト母乳強化剤、スターターフォーミュラ、又はフォローオンフォーミュラである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
8. 前記ＴＧＦβが、ＴＧＦβ−１及びＴＧＦβ−２の混合物であり、好ましくは、ＴＧＦβ−１のＴＧＦβ−２に対する比が２：１〜１：２０であり、より好ましくは１：１０〜１：２０の範囲である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
9. 離乳期中及び離乳期後の幼若哺乳動物における、ＢＬＧに対する経口寛容の誘導及び維持、並びに母乳の摂取を介して獲得されたその他の食物タンパク質に対する経口寛容の維持において使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
10. 離乳中及び離乳後の幼若哺乳動物において、乳タンパク質及び新しく導入された食物タンパク質に対する、アレルギー反応の一次予防に使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
11. 離乳中及び離乳後の幼若哺乳動物におけるアトピー性疾患の一次予防に使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
12. 前記幼若哺乳動物がヒトの乳児又は幼児である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
13. 前記幼若哺乳動物が、乳、卵、（樹木になる）ナッツ類、ピーナッツ、甲殻類、小麦若しくは大豆、又は何らかのその他の食物タンパク質に摂食中に暴露されたことのある母体に由来する母乳を授乳されたことがある、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
14. 前記幼若哺乳動物に、アレルギーを発症するリスクがある、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
15. コンパニオンアニマルに投与される、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の組成物。