JP2018516878A

JP2018516878A - ゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ抽出物

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Publication number: JP2018516878A
Application number: JP2017556577A
Authority: JP
Inventors: クリストフボワサール，; ドミニクインフェルド，; マリー−ソフィーマイジンガー，; フランソワポール，
Original assignee: DSM IP Assets BV
Current assignee: DSM IP Assets BV
Priority date: 2015-06-04
Filing date: 2016-06-02
Publication date: 2018-06-28
Anticipated expiration: 2036-06-02
Also published as: WO2016193390A1; EP3302717A1; CN107690331A; US10888720B2; KR20180015153A; KR102626479B1; BR112017026097A2; EP3302717B1; US20180147136A1; JP6834084B2; BR112017026097B1

Abstract

本発明は、ゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物に関する。さらに、本発明は、そのようなゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、並びにその混合物を含む化粧組成物に関する。【選択図】なし

Description

発明の詳細な説明

本発明は、ゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物に関する。さらに、本発明は、そのようなゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、並びにその混合物を含む化粧組成物に関する。

ヒトが健康に見えることがますます重要になり、限られたしわを持つ美しい皮膚は、常に、良好な健康のしるしとして認識されている。化粧効果を主張する化粧成分は多く存在するが、それらの一部は、処方するのが困難であるか、化粧調合物に難溶性であるか、最終化粧製品の保存の間に不安定であるか、又は日常的に使用される場合毒性の徴候を現すか、若しくはアレルギー反応すら起こす。

老化プロセスにおいて、皮膚の構造及び皮膚の機能の変化から生じる種々の徴候が皮膚に現れる。

原因にかかわらず、老化する皮膚の典型的な徴候は、コラーゲンの産生減少及び既存コラーゲンの分解から生じる弾力性の喪失である。コラーゲンは、繊維構造タンパク質であり、結合組織の細胞外マトリックスの主成分である。コラーゲンは、ヒト皮膚の強度及び弾力性に寄与し、その分解は、皮膚表面の小じわ及び粗く深いしわを含むしわ、すじ、割れ目、隆起、拡大した毛穴、怯え（ｓｃａｒｉｎｅｓｓ）、かさつき皮膚弾力性の喪失、たるみ（目の領域及び顎の膨れを含む）、皮膚の引き締まりの喪失、損なわれたバリア性、変色（目の下のクマを含む）、しみ、黄ばみ、まだらの色素沈着、年齢によるしみ、そばかす、角化症、異常な分化、過角化、弾力線維症、毛細血管拡張症及び他の角質層、真皮、表皮、皮膚血管系の組織学的変化などの皮膚の外観及び／又は機能の変化につながる。さらに、当技術分野には、皮膚に適用するための天然由来のスキンケア成分を提供する、継続した傾向がある。

そのため、特に皮膚の老化に関する化粧上の利益を有し、処方が容易であり、末端消費者にとって安全である天然成分及び天然植物抽出物が引き続き必要とされている。

例えば、ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物などのゲンチアナ抽出物は、皮膚に有益な効果を有するとして従来技術に開示された（ＦＲ２９９０３５０号明細書）。しかし、これらのゲンチアナ抽出物は、ＤＮＡ損傷作用、突然変異誘発作用、及び染色体異常誘発作用を有すると報告された（Ｋ．Ｍｕｓｔａｆａｙｅｖａｅｔａｌ．／Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２０１０，７３，９９−１０３）セコイリドイドグルコシドである相当な量のゲンチオピクロシド（ＣＡＳＮｏ．２０８３１−７６−９）を含む。したがって、安全性の懸念のため、ゲンチアナ抽出物は商業的な化粧製品にはまだ存在しておらず、ゲンチオピクロシドを含まない一方で、有益な化粧効果を与えるゲンチアナ抽出物が引き続き必要とされている。

ここで、発明者らは、優れた化粧上の利益を与える、ゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ抽出物を与える方法を見出した。

したがって、第１の実施形態において、本発明は、実質的にゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物に関する。

別の実施形態において、本発明は、実質的にゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物の調製プロセスであって、
（ｉ）ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の地上部（花、葉、茎）を水／有機溶媒混合物により抽出して、地上部の濾過後に、ゲンチオピクロシドを含む抽出物を得る工程と、それに続いて
（ｉｉ）有機溶媒を除去して水性抽出物を得る工程と、それに続いて
（ｉｉｉ）水性抽出物中のゲンチオピクロシドをゲンチオピクラールに加水分解する工程
を含むプロセスに関する。

ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）（チャボリンドウ（ｓｔｅｍｌｅｓｓｇｅｎｔｉａｎ））は、特に、アルプス、セベンヌ、及びピレネー山脈などの高度８００〜３，０００メートルの山岳地に生えている、スペインからバルカン半島諸国までの中央及び南ヨーロッパに自生するリンドウ科の開花植物の一種である。

それは、高さ２ｃｍ及び幅１０ｃｍ以上に成長する多年性植物である。葉は常緑で、長さ２〜３．５ｃｍであり、根出のロゼットになっており、集団を形成する。トランペット形の頂花は青く、海松色の斑点のある縦の花喉を有する。それらは、長さ３〜６ｃｍの非常に短い花柄で生える。花茎にはしばしば葉がないか、或いは１又は２組の葉を有する。それは日なたを好み、完全に耐寒性であり、晩春及び夏に開花する。この植物は、その属の他の植物と同様に、その花の著しく純粋な濃い青のため、栽培において重んじられている。

ゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）（ナツリンドウ（ｃｒｅｓｔｅｄｇｅｎｔｉａｎ又はｓｕｍｍｅｒｇｅｎｔｉａｎ））は、コーカサス及びトルコに自生するリンドウ科の開花植物の一種である。それは、高さ１５〜２０ｃｍ、幅３０ｃｍに成長する、地面近くで成長する葉状の多年生植物であり、内側に縦縞のある８つまでの鮮やかな青のトランペット形の花を夏につける。それは、肥沃で湿った土と日なたとを必要とする。

本明細書で使用される用語「実質的に含まない」は、０．５％未満の濃度を指す。好ましくは、ゲンチオピクロシドの濃度は０．１％未満であり、より好ましくは０．０１％未満であり、最も好ましくは０．００１％未満である。特に、抽出物は、検出可能なゲンチオピクロシドを全く含まない（抽出物中のゲンチオピクロシドの濃度の全ての％は、ＵＰＬＣ（カラム：Ｃ−１８逆相カラム、溶離液：水／アセトニトリル）及び２５４ｎｍでのＵＶ検出により測定された面積％である）。

本発明の全実施形態において、抽出物は、好ましくは、（ｉｉｉ）で得られた水性抽出物から、後の抽出工程（ｉｖ）で除去されるゲンチオピクラールも実質的に含まない。

本発明による全実施形態において、本発明によるゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物中のゲンチオピクラール濃度は、好ましくは１％未満である。より好ましくは、ゲンチオピクラールの濃度は０．５％未満であり、最も好ましくは、とりわけ０．０１％など０．１％未満である。抽出は、抽出物が検出可能なゲンチオピクラールを全く含まなくなるまで実施される（抽出物中のゲンチオピクラールの濃度の全％は、ＵＰＬＣ（カラム：Ｃ−１８逆相カラム、溶離液：水／アセトニトリル）及び２５４ｎｍでのＵＶ検出により測定された面積％である）。

好ましくは、地上部の抽出に使用される有機溶媒は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコール、より好ましくは、メタノール、エタノール、及びイソプロパノール、並びにそれらの混合物からなる群から選択される。最も好ましくは、有機溶媒はエタノールである。

本発明の全実施形態において、水／有機溶媒混合物中の水の量は、好ましくは、溶媒混合物の総重量に対して、１０〜５０重量％の範囲で、最も好ましくは３５〜４５重量％重量％の範囲など、より好ましくは３０〜５０重量％の範囲で選択される。

地上部の抽出に使用される水／有機溶媒混合物の量は、好ましくは、地上部の重量に対して、１〜５０重量％の範囲で、好ましくは５〜３０重量％の範囲で、最も好ましくは、１０〜１２重量％の範囲など５〜１５重量％の範囲で選択される。

好ましい実施形態において、水／有機溶媒混合物は、使用される乾燥された植物部位に対して、好ましくは５〜２０％（ｗ／ｗ）の量の、より好ましくは１０〜２５％（ｗ／ｗ）の量の有効量の活性炭を含む。

好ましい実施形態において、地上部は抽出前に細断される。

ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及びゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の使用（ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及びゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物を得るため）の場合、乾燥された植物部位は、抽出前に混合される。或いは、それぞれの抽出物を個別に調製して、調製後に混合してゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及びゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）からなる抽出物を得ることができる。

地上部の抽出は、好ましくは、３０〜６０℃の範囲、好ましくは４５〜５５℃の範囲から選択される温度で、最も好ましくは約５０℃で、１〜５時間、好ましくは１．５〜３時間の期間実施される。最も好ましくは、抽出は、５０℃で２時間実施される。

水性抽出物中のゲンチオピクロシドのゲンチオピクラールへの加水分解は、好ましくは、β−グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２１）、より好ましくは、エポキシ活性化樹脂、とりわけエポキシ活性化メタクリル／スチレン樹脂などの固相に結合したβ−グルコシダーゼを使用して実施される。そのような樹脂は、例えばピュロライト（Ｐｕｒｏｌｉｔｅ）の商標で市販されている。加水分解は、好ましくは、ゲンチオピクロシドの濃度が、上述の限度内になるまで、しかし、好ましくはゲンチオピクロシドがＵＰＬＣにより全く検出可能でなくなるまで実施される。

ゲンチオピクラールの抽出は、好ましくは、有機溶媒を使用して実施される。ゲンチオピクラールの抽出のための好適な有機溶媒は、当業者により容易に選択することができ、ジエチルエーテル又はｔｅｒｔ−ブチルエーテルなどのエーテル、アセトンなどのケトン、酢酸エチルなどのエステル溶媒、クロロホルム及びジクロロメタンなどのハロゲン化溶媒、並びにトルエン及びベンゼンなどの芳香族炭化水素溶媒を包含する。しかし、ゲンチオピクラールの除去に特に好適な溶媒は酢酸エチルであり、その理由は、所望の化粧効果を達成するのに必要な他の有効成分（とりわけフラボノイド）を除去せずに、ゲンチオピクラールを選択的に除去する利点を有するからである。

溶媒の除去（蒸発）は、当技術分野の標準的な方法により、例えば、５０℃及び５０ミリバール雰囲気でのロータバップ装置中での蒸発により実施できる。

好ましい実施形態において、本発明によるプロセスは、工程（ｉｉ）に続く工程（ｉｉ−１）をさらに含み、その工程は、（ｉｉ）で得られた濃縮された水性抽出物を純粋なエタノール（すなわち、無水ＥＴＯＨ）により処理して、糖類及び／又はタンパク質を沈殿させることと、それに続く濾過及びエタノールの蒸発にある。好ましくは、沈殿は、１時間から３６時間、より好ましくは１２時間〜３０時間、最も好ましくは１８〜２８時間起こる。この工程でのエタノールの量は、好ましくは水性抽出物の量の約２〜８倍、好ましくは約４〜６倍である。沈殿に使用されるエタノールの量は、好ましくは、水性抽出物の量の少なくとも２倍、より好ましくは、量は、水性抽出物の量の４〜６倍から選択される。

好ましい実施形態において、本発明によるゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物は、イソリエンチン（ｉｓｏｒｉｅｎｔｉｎ）として計算されるフラボノイド含量で標準化される。抽出物中の主な活性化学化合物は、イリドイド及びセコイリドイド：スウェルチアマリン、スエロサイド、ゲリドシド、トリフロロシド、及びフラボノイド：イソオリエンチン、イソビテキシン、イソオリエンチン−４’−Ｏ−グルコシド、及びイソサポナリンにある。

特定の有利な実施形態において、本発明による抽出物中のフラボノイド含量は、乾燥抽出物に対して１〜６重量％の範囲、好ましくは２〜５重量％の範囲である。

本発明によるゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物は、水性抽出物としても、乾燥（粉末）形態でも使用できる。

特定の好ましい実施形態において、本発明によるゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ抽出物は、ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及びゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の地上部の混合物の抽出物である。より好ましくは、混合物は、５／９５質量／質量〜５０／５０質量／質量で構成される比率のゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）とゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）にあり、さらにより好ましくは、ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）とゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の比率は１０／９０質量／質量〜３０／７０質量／質量で構成され、最も好ましくは、ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）とゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の地上部の比率は１５／８５質量／質量〜２５／７５質量／質量で構成される。

驚くべきことに、本発明によるゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物の使用が、より詳細には抗加齢効果に関する有益な化粧効果を示すことが分かった。

そのため、本発明は、そのようなゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物を含む化粧組成物にも関する。さらに、本発明は、そのようなゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物を含む組成物の化粧用途に関する。本発明は、化粧処理の方法であって、そのような処理を求める個人の皮膚に、そのようなゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物を含む化粧組成物を、局所適用することを含む方法にも関する。

本明細書で使用される用語「化粧組成物」は、ヒトの体の外表面のあらゆる部分（すなわち、表皮、髪系、爪、唇、及び外性器）又は歯及び口腔の粘膜を、専ら又は主に洗浄するために、それらに香りを付けるために、それらの外観を変えるために、それらを保護するために、それらを良好な状態に維持するために、又は体臭を矯正するために、それらと接触して配置されるように意図されるあらゆる物質又は調合物を指すが、そのような洗浄、香りづけ、保護、変化、維持、又は矯正が、全面的に疾患の治療又は保護の目的である場合は除かれる。

好ましくは、本発明の全実施形態において、本発明による化粧組成物は、（乾物に基づき）０．００１〜２０重量％のゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物、ゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、又はその混合物を含む。より好ましくは、化粧組成物は、０．０１〜１０重量％の、さらにより好ましくは、化粧組成物は、０．０１〜５重量％のゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物、ゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、又はその混合物を含む。

本発明によると、ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物、ゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、又はその混合物は、それ自体でも、カプセル化された形態、例えばリポソーム形態でも使用できる。リポソームは、好ましくは、ステロール又はフィトステロールを添加してもしなくても、レシチンにより形成される。有効成分のカプセル化は、単独でも、他の有効成分と一緒でもよい。他の実施形態には、ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物、ゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、又はその混合物を分解から保護する目的の、又は制御された送達のための固体又は半固体カプセルがある。好適なカプセル化技術は、例えば、国際公開第０１８０８２３号パンフレット、国際公開第９９０３４５０号パンフレット、国際公開第９３１７７８４号パンフレット、又はＦｒａｇｒａｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ（２００１），２９（２），８３−９０に記載されている。

本発明による好ましい化粧組成物は局所組成物であり、より好ましくは、それは、従来の化粧用担体をさらに含み、さらにより好ましくは、それは、スキン（顔及び体）ケア調合物、装飾用調合物、光保護調合物、又は機能性調合物である。

スキンケア調合物の例は、特に、フェイスクリーム、ボディオイル、ボディローション、ボディゲル、トリートメントクリーム、皮膚保護軟膏、シェービングフォーム又はゲルなどの髭剃り用調合物、保湿ゲル、保湿スプレー、リバイタライジングボディスプレー、セルライトゲル、顔及び／又は体用保湿剤、顔及び／又は体用クレンザー、並びにフェイスマスクである。最も好ましいのはフェイスケア製品である。

本発明による好ましい局所化粧組成物は、スキンケア調合物、又は機能性調合物である。

装飾用調合物の例は、特に、口紅、アイシャドウ、マスカラ、ドライ及びモイスト化粧製剤、ルージュ、パウダー、並びに／又は日焼けローションである。

機能性調合物の例は、非限定的に、ホルモン、ビタミン類、野菜及び／又は果実抽出物、抗加齢成分、及び／又は抗微生物性（抗菌性又は抗真菌性）成分などのさらなる有効成分を含む化粧組成物である。

本発明による使用のための化粧組成物は、液体、ローション、濃厚ローション、ゲル、クリーム、ミルク、軟膏、ペースト、パウダー、メークアップ、又は固体チューブスティックの形態でよく、任意選択でエアゾールとして包装されることもあり、エアゾールムースなどのムース、フォーム又はスプレーフォーム、スプレー、スティック、ゲル、プラスター、パウダー、クレンザー、石鹸、又はエアゾール若しくはワイプの形態で提供できる。好ましい局所組成物は、クリーム、エマルション、ゲル、軟膏、ローション、チンキ、スプレー、ムース、クレンジング組成物、又はフォームを含む。

別の実施形態において、本発明による使用のための化粧組成物は、少なくとも１種の紫外線遮断剤、及び／又は保湿剤、及び／又は抗加齢剤、及び／又はスキントーン剤、及び従来の化粧用担体をさらに含む点を特徴とする。

従来の化粧用担体は、局所組成物に従来使用される賦形剤又は希釈剤を含む。化粧用及び皮膚科用の補助剤及び添加剤の必要量は、所望の製品に基づき、当業者により容易に決定できる。

局所化粧組成物の種類及び局所化粧調合物の調製並びにさらなる好適な添加剤に関して、該当する文献、例えば、ＮｏｖａｋＧ．Ａ．，ＤｉｅｋｏｓｍｅｔｉｓｃｈｅｎＰｒａｐａｒａｔｅ − Ｂａｎｄ２，ＤｉｅｋｏｓｍｅｔｉｓｃｈｅｎＰｒａｐａｒａｔｅ − Ｒｅｚｅｐｔｕｒ，Ｒｏｈｓｔｏｆｆｅ，ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅＧｒｕｎｄｌａｇｅｎ（ＶｅｒｌａｇｆｕｒＣｈｅｍ．ＩｎｄｕｓｔｒｉｅＨ．ＺｉｏｌｋｏｗｓｋｉＫＧ，Ａｕｇｓｂｕｒｇ）を参照できる。

好ましくは、本発明に使用される局所化粧組成物は、溶媒又は脂肪性物質中の懸濁液又は分散液の形態であるか、或いはエマルション又はマイクロエマルション（とりわけ、Ｏ／Ｗ又はＷ／Ｏ型、Ｏ／Ｗ／Ｏ又はＷ／Ｏ／Ｗ型）、ＰＥＴ−エマルション、多層エマルション、ビッカリングエマルション（ｂｉｃｋｅｒｉｎｇｅｍｕｌｓｉｏｎ）、ハイドロゲル、アルコール性ゲル、リポゲル、単相又は多相溶液、又はベシクル分散液、及び他の通常の組成物の形態であり、それらは、ペンにより、マスクとして、又はスプレーとしても適用できる。エマルションは、アニオン性、非イオン性、カチオン性、又は両性界面活性剤も含み得る。

本発明に使用される局所化粧組成物は、保存剤／酸化防止剤、脂肪性物質／油、水、有機溶媒、シリコーン、増粘剤、柔軟剤、乳化剤、日焼け止め、消泡剤、保湿剤、香料、界面活性剤、充填剤、金属封鎖剤、アニオン性、カチオン性、非イオン性、又は両性のポリマー又はその混合物、噴射剤、酸性化剤又は塩基性化剤、染料、着色剤、顔料又はナノ顔料、例えば、紫外線を物理的に遮断することにより光防御効果を与えるのに適したもの、又は通常局所化粧組成物に処方されるあらゆる他の成分などの通常の化粧用補助剤及び添加剤も含み得る。化粧用及び皮膚科用の補助剤及び添加剤の必要量は、所望の製品に基づいて、本分野の当業者により容易に選択でき、非限定的に実施例において説明される。乳化剤、増粘剤、界面活性成分、及び被膜形成剤などの通常の化粧用補助剤及び添加剤は相乗性を示すことがあり、それは、通常の試行又は局所化粧組成物の処方に関する通常の考察により本分野の専門家により決定できる。

典型的には、局所化粧組成物は、乳化剤、可溶化剤などのような界面活性成分も含む。乳化剤は、２種以上の非混和性成分を均質に合わせることを可能にする。さらに、乳化剤は、組成物を安定化させるように作用する。本発明に使用できる可溶化剤には、ＰＥＧ／ＰＰＧ−１８／１８ジメチコン、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、ステアリン酸ＰＥＧ−２０、ステアリン酸ＰＥＧ−３０グリセリル、及びヤシ油脂肪酸ＰＥＧ−７グリセリルがあるがこれらに限定されない。Ｏ／Ｗ、Ｗ／Ｏ、Ｏ／Ｗ／Ｏ、又はＷ／Ｏ／Ｗエマルション／マイクロエマルションを形成するために本発明に使用できる乳化剤には、オレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、イソステアリン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、ジイソステアリン酸ポリグリセリル−３、オレイン酸／イソステアリン酸のポリグリセロールエステル、ヘキサリシノール酸（ｈｅｘａｒｉｃｉｎｏｌａｔｅ）ポリグリセリル−６、オレイン酸ポリグリセリル−４、オレイン酸ポリグリセリル−４／ヤシ油脂肪酸ＰＥＧ−８プロピレングリコール、オレアミドＤＥＡ、ミリスチン酸ＴＥＡ、ステアリン酸ＴＥＡ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、ラウリン酸カリウム、リシノール酸カリウム、ヤシ脂肪酸ナトリウム、牛脂脂肪酸ナトリウム、ヒマシ油脂肪酸カリウム、オレイン酸ナトリウム、及びその混合物がある。さらに、１種以上の合成ポリマーを乳化剤として使用できる。例えば、ＰＶＰエイコセンコポリマー、アクリラート／Ｃ_{１０〜３０}アルキルアクリラートクロスポリマー、アクリラート／ステアレス−２０メタクリラートコポリマー、ＰＥＧ−２２／ドデシルグリコールコポリマー、ＰＥＧ−４５／ドデシルグリコールコポリマー、及びその混合物。好ましい乳化剤は、ＰＶＰエイコセンコポリマー、アクリラート／Ｃ_{１０〜３０}−アルキルアクリラートクロスポリマー、イソステアリン酸ＰＥＧ−２０ソルビタン、イソステアリン酸ソルビタン、及びその混合物である。１種以上の乳化剤は、本発明に使用される局所化粧組成物の総重量の約０．０１重量％〜約２０重量％の総量で存在する。好ましくは、約０．１重量％〜約１０重量％の乳化剤が使用される。

局所化粧組成物の脂質相は、好都合には、鉱油及び鉱物蝋；カプリニン酸（ｃａｐｒｉｎｉｃａｃｉｄ）若しくはカプリル酸のトリグリセリド及びヒマシ油などの油；油若しくは蝋及び他の天然若しくは合成の油から、好ましい実施形態において、脂肪酸と、アルコール、例えば、イソプロパノール、プロピレングリコール、グリセリンとのエステル、又は脂肪族アルコールと、カルボン酸若しくは脂肪酸とのエステル；アルキルベンゾアート；及び／又はジメチルポリシロキサン、ジエチルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン、シクロメチコンなどのシリコーンオイル、並びにその混合物から選択できる。

本発明の局所化粧組成物のエマルション、マイクロエマルション、オレオゲル、水性分散液、又は脂肪分散液の油相に組み込むことができる例示的な脂肪性物質は、好都合には、飽和及び／又は不飽和、直鎖又は分岐鎖の３〜３０個の炭素原子のアルキルカルボン酸と飽和及び／又は不飽和、直鎖及び／又は分岐鎖の３〜３０個の炭素原子のアルコールとのエステル並びに芳香族カルボン酸と、飽和及び／又は不飽和、直鎖又は分岐鎖の３〜３０個の炭素原子のアルコールとのエステルから選択される。そのようなエステルは、好都合には、パルミチン酸オクチル、ヤシ脂肪酸オクチル、イソステアリン酸オクチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソノナン酸セテアリル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸イソプロピル、オレイン酸イソプロピル、ステアリン酸ｎ−ブチル、ラウリン酸（ｌａｕｒｅａｔｅ）ｎ−ヘキシル、オレイン酸ｎ−デシル、ステアリン酸イソオクチル、ステアリン酸イソノニル、イソノナン酸イソノニル、パルミチン酸２−エチルヘキシル、ラウリン酸２−エチルヘキシル、ステアリン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−オクチルドデシル、ヘプタン酸ステアリル、オレイン酸オレイル、エルカ酸オレイル、オレイン酸エルシル、エルカ酸エルシル、ステアリン酸トリデシル、トリメリト酸トリデシル、並びにそのようなエステルの合成、半合成、又は天然の混合物、例えば、ホホバ油から選択できる。

本発明に従って使用する局所化粧組成物における使用に好適な他の脂質成分には、レシチン及び脂肪酸トリグリセリド、すなわち、飽和及び／又は不飽和、直鎖又は分岐鎖の８〜２４個の炭素原子のカルボン酸、好ましくは１２〜１８個の炭素原子のカルボン酸のトリグリセロールエステルなどの極性の油があり、その一方で、脂肪酸トリグリセリドは、好ましくは、合成、半合成、又は天然の油（例えば、ココグリセリド、オリーブ油、ヒマワリ油、大豆油、落花生油、ナタネ油、スイートアーモンドオイル、パーム油、ヤシ油、ヒマシ油、水添ヒマシ油、コムギ油（ｗｈｅａｔｏｉｌ）、グレープシードオイル、マカダミアナッツオイル、及びその他）；直鎖及び／又は分岐鎖の炭化水素及び蝋などの無極性の油、例えば、鉱油、ワセリン（ペトロラタム）；パラフィン、スクアラン及びスクアレン、ポリオレフィン、水添ポリイソブテン及びイソヘキサデカン、好ましいポリオレフィンはポリデセンである；ジカプリリルエーテルなどのジアルキルエーテル；好ましくはシクロメチコン（オクタメチルシクロテトラシロキサン；セチルジメチコン、ヘキサメチルシクロトリシロキサン、ポリジメチルシロキサン、ポリ（メチルフェニルシロキサン）などの直鎖又は環式シリコーンオイル、並びにそれらの混合物から選択される。

本発明により使用するための局所化粧組成物に好都合に組み込むことができる他の脂質成分は、イソエイコサン；ジヘプタン酸ネオペンチルグリコール；ジカプリル酸／ジカプリン酸プロピレングリコール；コハク酸ジ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル；ブチレングリコールカプリラト（ｃａｐｒｙｌａｔ）／カプラト（ｃａｐｒａｔ）；Ｃ_{１２〜１３}−アルキルラクタート；ジ−Ｃ_{１２〜１３}アルキルタートラート；トリイソステアリン；ジペンタエリスリチルヘキサカプリラト（ｈｅｘａｃａｐｒｙｌａｔ）／ヘキサカプラート；モノイソステアリン酸プロピレングリコール；トリカプリリン；ジメチルイソソルビド（ｉｓｏｓｏｒｂｉｄ）である。特に有益なものは、Ｃ_{１２〜１５}−アルキルベンゾアートとイソステアリン酸２−エチルヘキシルとの混合物、Ｃ_{１２〜１５}−アルキルベンゾアートとイソノナン酸イソトリデシルとの混合物、並びにＣ_{１２〜１５}−アルキルベンゾアートと、イソステアリン酸２−エチルヘキシルと、イソノナン酸イソトリデシルとの混合物の使用である。

本発明による使用のための局所化粧組成物の油相は、蜜蝋、シナ蝋、マルハナバチ蝋などの天然の植物性又は動物性の蝋及び昆虫の他の蝋、並びにシアバター及びカカオバターも含み得る。

本発明に従って使用される局所化粧組成物に保湿剤を組み込んで、皮膚の水和又は水分補給を保つことができる。保護コーティングを与えることにより水が皮膚から蒸発することを防ぐ保湿剤は軟化剤と呼ばれる。さらに、軟化剤は、皮膚表面に軟化作用又は鎮静作用も与え、一般的に局所使用に安全であると考えられる。好ましい軟化剤には、鉱油、ラノリン、ペトロラタム、カプリン酸／カプリル酸トリグリセルアルデヒド、コレステロール、ジメチコン（ｄｉｍｅｔｉｃｏｎｅ）、シクロメチコン（ｃｙｃｌｏｍｅｔｉｃｏｎｅ）などのシリコーン、アーモンド油、ホホバ油、アボカドオイル、ヒマシ油、ゴマ油、ヒマワリ油、ヤシ油、及びグレープシードオイル、カカオバター、オリーブ油アロエ抽出物、オレイン酸及びステアリン酸などの脂肪酸、セチル及びヘキサデシル（ＥＮＪＡＹ）などの脂肪族アルコール、アジピン酸ジイソプロピル、ヒドロキシ安息香酸エステル、Ｃ_９〜１５−アルコールの安息香酸エステル、イソノナン酸イソノニル、ポリオキシプロピレンブチルエーテル及びポリオキシプロピレンセチルエーテルなどのエーテル、並びにＣ_{１２〜１５}−アルキルベンゾアート、及びそれらの混合物がある。最も好ましい軟化剤は、ヒドロキシ安息香酸エステル、アロエベラ、Ｃ_{１２〜１５}−アルキルベンゾアート、及びそれらの混合物である。軟化剤は、局所化粧組成物の総重量の約１重量％〜約２０重量％の量で存在する。軟化剤の好ましい量は、約２重量％〜約１５重量％であり、最も好ましくは約４重量％〜約１０重量％である。

水と結合し、それにより水を皮膚表面上に保持する保湿剤は、保水剤と呼ばれる。グリセリン、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、乳酸、ピロリドンカルボン酸、尿素、リン脂質、コラーゲン、エラスチン、セラミド、レシチンソルビトール、ＰＥＧ−４、及びそれらの混合物などの好適な保水剤は、本発明の局所化粧組成物に組み込むことができる。追加の好適な保湿剤は、ヒアルロン酸、キトサン、及び／又は例えば、ＳＯＬＡＢＩＡＳによるＦｕｃｏｇｅｌ（登録商標）１０００（ＣＡＳ−Ｎｒ．１７８４６３−２３−５）として利用可能なフコースに富む多糖などの水溶性及び／又は膨潤性／及び／又は水ゲル化多糖類のファミリーのポリマー性の保湿剤である。１種以上の保水剤は、任意選択で、本発明の局所化粧組成物に、約０．５重量％〜約８重量％、好ましくは約１重量％〜約５重量％で存在する。

本発明に使用するための好ましい局所化粧組成物の水相は、通常の化粧用添加剤、例えば、アルコール、特に低級アルコール、好ましくはエタノール及び／又はイソプロパノール、低級ジオール又はポリオール及びそれらのエーテル、好ましくはプロピレングリコール、グリセリン、エチレングリコール、エチレングリコールモノエチル−又はモノブチルエーテル、プロピレングリコールモノメチル−又は−モノエチル−又は−モノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチル−又はモノエチルエーテル及び類似の製品、ポリマー、泡安定剤；電解質及び特に１種以上の増粘剤などを含み得る。しかし、好ましくは、本発明に使用するための局所化粧組成物はエタノールを含まず、より好ましくは、それらはアルコールを含まず、最も好ましくは、それらは有機溶媒を含まないが、その理由は、そのような化合物が皮膚刺激を起こし得るからである。

製品の粘稠性を好適にするのを助けるために、本発明に使用するための局所化粧組成物に使用できる増粘剤には、カルボマー、二酸化ケイ素、ケイ酸マグネシウム及び／又はケイ酸アルミニウム、蜜蝋、ステアリン酸、ステアリルアルコール多糖類及びキサンタンガムなどのそれらの誘導体、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアクリルアミド、アクリラートクロスポリマー、好ましくは、９８０、９８１、１３８２、２９８４、５９８４タイプのカーボポール（登録商標）単独又はその混合物などのカルボマーがある。

例えば、乳化剤又は起泡剤／泡安定剤などの成分を中和するために、本発明の局所化粧組成物に含まれ得る好適な中和剤には、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムなどのアルカリ水酸化物；ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、アミノメチルプロパノール、及びこれらの混合物などの有機塩基；アルギニン及びリジンなどのアミノ酸、並びに前記のいずれかのあらゆる組み合わせがあるが、これらに限定されない。中和剤は、本発明の局所化粧組成物に、約０．０１重量％〜約８重量％の量で、好ましくは、１重量％〜約５重量％の量で存在してよい。

本発明による使用のための局所化粧組成物への電解質の添加は、疎水性乳化剤の挙動を変えるために必要になり得る。そのため、本発明に従って使用するためのエマルション／マイクロエマルションは、好ましくは、非限定的に、クロライド、スルファート、カーボナート、ボラート、及びアルミナートなどのアニオンを含む１種又は数種の塩の電解質を含み得る。他の好適な電解質は、非限定的に、ラクタート、アセタート、ベンゾアート、プロピオナート、タータラート、及びシトラートなどの有機アニオンに基づくものであり得る。カチオンとして、好ましくは、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカリ金属又はアルカリ土類金属、マグネシウムイオン、鉄イオン、又は亜鉛イオンが選択される。特に好ましい塩は、塩化カリウム及び塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、及びこれらの混合物である。電解質は、本発明の局所化粧組成物に約０．０１重量％〜約８重量％の量で存在し得る。

ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物、ゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、又はその混合物、及び従来の化粧用担体を含む化粧組成物を提供することも本発明の目的である。本発明の好ましい化粧用担体はグリセリンである。

本発明は、上述の化粧組成物の、ヒトの皮膚への化粧用途のための使用にも関する。化粧用途は、好ましくは局所であり、少なくとも１日１回、例えば、１日２回又は３回の皮膚への、好ましくは顔への適用により実施される。

本発明による化粧用途は、皮膚細胞の炎症を阻害すること、加齢を妨げること、真皮及び表皮の細胞によるタンパク質の合成を刺激すること、皮膚細胞を酸化ストレスから保護すること、真皮細胞によるグリコサミノグリカンの合成を刺激すること、皮膚細胞中のコラゲナーゼ及び／又はエラスターゼを阻害することを含む、皮膚の加齢及び、特にしわの出現と戦うことから選択される。より詳細には、それは、コラーゲンＩＶ合成の誘導、ヒアルロナン産生の増加、カスパーゼ（ｃａｓｐａｓａｅ）−３の減少、炎症性サイトカインの誘導から選択される。

さらに、本発明は、化粧処理の方法であって、そのような処理を求める個人の皮膚に、本発明の先の実施形態の全てに定義されたゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物、ゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、又はそれらの混合物を含む化粧組成物を局所適用することを含む方法に関する。

用語「有効量」は、生理学的効果を得るのに必要な量を指す。生理学的効果は、１つの適用投与量によっても、反復された適用によっても得ることができる。投与される用量は、もちろん、治療の頻度及び望まれる効果など公知の因子により変化することがあり、当業者により調整され得る。

本発明は、本発明の先の実施形態の全てに定義された、約０．２μｇ〜約２００μｇのゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）抽出物、ゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物、又はそれらの混合物が、１日あたり皮膚の１平方センチメートルあたりに適用される、上述の方法にも関する。

皮膚加齢を妨げることにおける薬剤の有用性は、当技術分野に公知である方法により決定できる。

本発明は、以下の実施例により、それに限定されることなくさらに説明される。

［実施例］
［実施例１：スキンケア組成物］

［実施例２：ゲンチオピクロシド／ゲンチオピクラールを含まないゲンチアナ抽出物の調製：］
［ａ−固相に結合した酵素の調製（文献から公知である工程）］
酵素β−グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２１）（１００ｍｇ）を、８２ｍｌの緩衝液（ｐＨ＝７．７５）に溶解させた１５．４ｍｇのグルコースと共に室温で１時間インキュベートした。

樹脂ピュロライトＥＣＲ８２１４Ｆを、別に、３０ｍｌの緩衝液（ｐＨ＝７．７５）と５分間混合し、次いで濾過する（洗浄工程）。

次いで、濾過した樹脂を、酵素を含む２５℃の緩衝液に加え、２４時間穏やかに混合した。２４時間後、溶液を濾過し、得られた樹脂を、６０ｍｌの緩衝液（ｐＨ＝７．７５）で、及び６０ｍｌの脱イオン水で２回洗浄した。次いで、樹脂を８０ｍｌの緩衝液（ｐＨ＝７．７５）に混合し、１ｍｌのＢＳＡ（ビス（トリメチルシリル）アセトアミド）を加えた。懸濁液を２４時間穏やかに混合した。２４時間後、樹脂を濾過し、１００ｍｌの脱イオン水で２回洗浄した。

緩衝液は、１４．４ｍｌのＫＨ_２ＰＯ_４溶液（６８ｇ／５００ｍｌ）と８６．６ｍｌのＫ_２ＨＰＯ_４溶液（８７．１ｇ／５００ｍｌ）との混合物である。

［ｂ−ゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ抽出物の調製：ゲンチアナ抽出物中のゲンチオピクロシドのゲンチオピクラールへの変換］
ｂ−１）ゲンチアナ種（ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ））の希少高山植物の５０ｇの地上部（花、葉、茎）の抽出物を、以下の通り調製した：細断した乾燥植物を、１０倍（ｗ／ｗ）の６０％エタノール（活性炭含む）により５０℃で２時間２回抽出した。次いで、抽出物を濾過し、５０℃及び５０ミリバール雰囲気でロータベイパー装置中で濃縮して、濃縮水溶液を得た。糖及びタンパク質を沈殿させるために、純エタノール（水溶液の重量の５倍量）をこの濃縮物に加え、次いで、濾過後に、エタノールを、ロータベイパー装置中でもう一度除去すると、約３６％（面積％）のゲンチオピクロシド（ＵＰＬＣにより決定：Ｃ１８逆相カラム、溶離液（ｅｌｕｅｎ）：水／アセトニトリル、検出：２５４ｎｍ）を含む約５４ｇの水性抽出物が生じ、それを次の工程ｂ−２）に使用した。

ｂ−２）ｂ−１）に記載の通り得られた水溶液を、２８℃のフラスコ（浴）に入れ、工程ａ）で調製した酵素（５ｇ）（白色粉末）を抽出物溶液に加えた。反応を２、３日の間に実施し、ＵＰＬＣにより追跡した。ゲンチオピクロシドの変換のパーセンテージを詳細にモニターした。必要な場合、補足量の結合した酵素を加えた（ａｄｄｅ）。ゲンチオピクロシドが完全にゲンチオピクラールに変換すると、濾過及びその後の濾過された樹脂の５０ｍｌの脱イオン水による洗浄により反応を停止した。洗浄溶液を、主溶液と共に回収した。

再使用するために、酵素と結合した固相を洗浄し、乾燥（凍結乾燥）させた。

［ｃ−ゲンチオピクラールの除去］
工程ｂ−２）で得られた溶液（１００ｍｌ）を、等量の酢酸エチル（１００ｍｌ）で２回抽出した。次いで、有機相と水相を分離した。水溶液をＵＰＬＣ：Ｃ１８逆相カラム、溶離液：水／アセトニトリル、検出：２５４ｎｍ）により分析して、ゲンチオピクラールが完全に除去されたか否かを決定した。必要な場合、１００ｍｌ酢酸エチルによる３回目の抽出を実施した。残存する痕跡量の酢酸エチルを除去するために、得られた水相を真空下で蒸留した。最終的に得られた水溶液を、製剤に直接使用することも、乾燥抽出物製造にも使用できる。

個別のゲンチアナからの抽出物又はゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）／ゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の比率１５／８５質量／質量若しくは２５／７５質量／質量での両植物の混合物としての抽出物で試験を実施した。

［実施例３：ゲンチアナ抽出物のヒアルロナン産生に対する効果：］
ゲンチアナ抽出物（ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）／ゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）、２５／７５ｍ／ｍ）を使用した。

正常ヒト線維芽細胞（ＮＨＦ）Ｐ２＋１を、５０００細胞／ウェルで、９６ウェル細胞培養プレート（Ｎｕｎｃｌｏｎ）中で、ＭＥＭ１０％ＦＣＳ（ＰａｎＢｉｏｔｅｃｈ）中に播種した。３日の増殖後、ゲンチアナ抽出物溶液を、ＦＣＳなしで培地に加え、細胞をさらに３日インキュベートした。増殖培地中の分泌されたヒアルロナンを、ヒアルロナンアッセイキット（Ｋ−１２００、Ｅｃｈｅｌｏｎ、ＳａｌｔＬａｋｅＣｉｔｙ，Ｕｔａｈ）を使用して測定した。

未処理の細胞と比べて、発明者らは、０．００１％ゲンチアナ抽出物によるヒアルロナン産生の２６±４．９％の増加を示し、陽性対照として作用するＴＧＦβｌ（１０ｎｇ／ｍｌ）は４５．６±１．１％刺激された。

［実施例４：ゲンチアナ抽出物のＣＰＤ修復（シクロブタン型ピリミジンダイマー）に対する効果：］
平均で４０００００の細胞を、６ウェルプレートに播種した。増殖培地中の終夜のインキュベーションの後に、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、１ｍｌのＰＢＳでオーバーレイし、２０ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢを照射した。その後、細胞を、増殖培地及びゲンチアナ抽出物と共にインキュベートした。定められた時点で、細胞をトリプシン処理し、ＤＮＡを、ＱｉａｇｅｎのＤＮＡ単離キットを使用して単離した。２００ｎｇのＤＮＡをＥＬＩＳＡプレートにスポッティングし、１：２０００に希釈したＫａｍｉｙａのビオチン化抗ＣＰＤ抗体を使用してＣＰＤを検出した。抽出物は、ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及びゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）、２５／７５ｍ／ｍからなる。

以下の表中のこれらの結果は、０．１％ゲンチアン（Ｇｅｎｔｉａｎ）抽出物による４時間後に、ＣＰＤ修復の４０％増加を示す。

［実施例５：ゲンチアナ抽出物の炎症性サイトカイン及びＭＭＰに対する効果：］
［材料及び方法］
［サイトカイン及びＭＭＰの測定］
正常ヒトケラチン生成細胞（ＮＨＫ）Ｐ４＋１を、ＣｎＴ−０７増殖培地（ＣＥＬＬｎＴＥＣ、Ｂｅｒｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中でサブコンフルエントに増殖させた。太陽光シミュレーター（ＳＯＬ５００ＲＦ、Ｄｒ．Ｈｏｅｎｌｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により１００ｍＪ／ｃｍ^２のＵＶＢを照射した後、細胞を、０．１％ゲンチアナ抽出物（ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及びゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）、２５／７５ｍ／ｍ）又はビヒクルを含むＣｎＴ−０７中で２４時間再びインキュベートした。細胞培養上清を経時的に回収し、サイトカイン及びＭＭＰをＬｕｍｉｎｅｘ１００装置で測定するまで、−２０Ｃで凍結した。Ｌｕｍｉｎｅｘ１００測定は、製造者の説明に従って、多項目特注キット（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｃｕｓｔｏｍｍａｄｅｋｉｔ）（Ｐａｎｏｍｉｃｓ、Ｉｔａｌｙ）を使用して実施した。

炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＭＭＰ−１放出の阻害が、以下の表で強調されて見出された。

実施例８の結果の表：ＵＶ照射されたが未処理の細胞に比べた、０．１％ゲンチアナ抽出物で処理されたＵＶＢ照射された細胞のサイトカイン放出の阻害％。

［実施例６：ゲンチアナ抽出物による細胞内活性酸素種産生の減少：：］
［活性酸素種（ＲＯＳ）の検出］
細胞内ＲＯＳ発生を、ＲＯＳ特異的なプローブＨ_２ＤＣＦ−ＤＡ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ）を使用して決定した。蛍光生成物ＤＣＦへのＨ_２ＤＣＦ−ＤＡの酸化は、細胞内酸化ストレスの全体的な程度の指標として機能する。

初代ヒト線維芽細胞を、５０００細胞／ウェルで、９６ウェル細胞培養プレートに、ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ中に播種した。２４時間後、ゲンチアナ抽出物（ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及びゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）、２５／７５ｍ／ｍ）を溶液に加え、細胞をさらに７２時間インキュベートした。化合物処理後に、発明者らは、細胞を、Ｈ_２ＤＣＦ−ＤＡ（２５μΜ）及びＨＢＳＳ／２．５％ＨＥＰＥＳ中のＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８（１ｕｇ／ｍｌ）と共に、４５分間、３７℃で暗所でインキュベートした。発明者らは、細胞を、ＨＢＳＳ／ＨＥＰＥＳで２回洗浄し、内部に取り入れられなかったＨ_２ＤＣＦ−ＤＡを除去し、それらを３０％Ｈ_２Ｏ_２に曝した。ＲＯＳ産生を、蛍光プレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘＧｅｍｉｎｉＸＳ）で３０分後に（５２０ｎＭで）測定し、ＤＮＡ含量に対して規格化した。

この試験で、発明者らは、未処理の細胞に比べて、０．０５％ゲンチアナ抽出物により処理された細胞における細胞内ＲＯＳ産生の３０％減少を示した。

このデータ全ては、インビトロで光老化及び抗加齢に対する陽性の効果を示す。

Claims

実質的にゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物の調製プロセスであって、
（ｉ）ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の地上部（花、葉、茎）を、水／有機溶媒混合物により抽出して、濾過後に、ゲンチオピクロシドを含む抽出物を得る工程、それに続いて
（ｉｉ）前記有機溶媒の除去により、水性抽出物を得る工程、それに続いて
（ｉｉｉ）前記水性抽出物中のゲンチオピクロシドのゲンチオピクラールへの加水分解の工程
を含む調製プロセス。
工程（ｉ）における前記抽出が、水／エタノール混合物により実施される、請求項１に記載のプロセス。
工程（ｉｉｉ）のゲンチオピクロシドのゲンチオピクラールへの前記加水分解が、β−グルコシダーゼにより、好ましくはエポキシ活性化メタクリル／スチレン樹脂に固定化されたβ−グルコシダーゼにより実施される、請求項１又は２に記載のプロセス。
前記加水分解が、ゲンチオピクロシドの濃度が０．１％未満に、好ましくは０．０１％未満に、最も好ましくは０．００１％未満になるまで実施される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロセス。
（ｉｉｉ）で得られた前記水性抽出物からの抽出によるゲンチオピクラールの除去にある工程（ｉｖ）を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロセス。
ゲンチオピクラールが、有機溶媒、好ましくは酢酸エチルによる抽出により除去される、請求項５に記載のプロセス。
ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及びゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の地上部の混合物が、ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）とゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の５／９５質量／質量〜５０／５０質量／質量の比率で使用される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のプロセス。
ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）とゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の比率が、１０／９０質量／質量〜３０／７０質量／質量で構成される、請求項７に記載のプロセス。
ゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）とゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）の比率が、１５／８５質量／質量〜２５／７５質量／質量で構成される、請求項７に記載のプロセス。
請求項１〜９のいずれか一項に記載のプロセスにより得られるゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物。
請求項１０に記載のゲンチオピクロシドを含まないゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物を含む化粧組成物。
前記化粧組成物の総重量に対して、乾物で０．００１〜２０重量％のゲンチアナ・アカウリス（Ｇｅｎｔｉａｎａａｃａｕｌｉｓ）及び／又はゲンチアナ・セプテムフィダ（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｅｐｔｅｍｆｉｄａ）抽出物を含む、請求項１１に記載の化粧組成物。
グリセリンをさらに含む、請求項１１又は１２に記載の化粧組成物。
ヒトの皮膚への化粧用途のための請求項１１〜１３のいずれか一項に開示された組成物の使用。
前記化粧用途が、しわの減少を特徴とする皮膚の老化との戦い、コラーゲン合成の誘導、及び／又は細胞内活性酸素種産生の減少から選択される、請求項１４に記載の使用。