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JP2018198608A - プロラクチン受容体結合タンパク質およびそれらの使用 - Google Patents

プロラクチン受容体結合タンパク質およびそれらの使用 Download PDF

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JP2018198608A JP2018143261A JP2018143261A JP2018198608A JP 2018198608 A JP2018198608 A JP 2018198608A JP 2018143261 A JP2018143261 A JP 2018143261A JP 2018143261 A JP2018143261 A JP 2018143261A JP 2018198608 A JP2018198608 A JP 2018198608A
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Abstract

【課題】癌を治療するために使用する抗プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）抗体の提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列を有するＰＲＬＲ結合タンパク質、より詳細には、ＰＲＬＲに対するキメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体及びヒト化抗体の全長又はその抗原結合部分からなる抗体の提供。本抗体はヒトＰＲＬＲに対して高親和性を有し、インビトロ及びインビボでヒトＰＲＬＲ活性を中和する。本抗体の作製方法及び使用方法も提供される。本発明の抗体または抗体部分は、例えば、ｈＰＲＬＲ活性が有害である障害に罹患しているヒト被験体、例えば乳癌などの癌におけるｈＰＲＬＲを検出するため及びヒトＰＲＬＲ活性を阻害するために有用である。抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）も本発明に含まれる。【選択図】なし

Description

本発明は、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）結合タンパク質、ならびに癌を含めた種々の疾患の予防および／または治療におけるこれらの使用に関する。
プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）は、ペプチドホルモンであるプロラクチン（ＰＲＬ）と相互作用する膜貫通受容体である。ＰＲＬＲは、単一の膜貫通ドメインを含有し、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、エリスロポエチンおよびＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカインの受容体と相同である。ＰＲＬＲは乳腺、卵巣、下垂体、心臓、肺、胸腺、脾臓、肝臓、膵臓、腎臓、副腎、子宮、骨格筋、皮膚および中枢神経系の領域に存在する（Ｍａｎｃｉｎｉら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ、２００８、３７（１）：６７−９９頁）。プロラクチンにより活性化されると、ＰＲＬＲは二量体化し、その結果、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を開始するチロシンキナーゼであるヤヌスキナーゼ２が活性化され、また、マイトジェン活性化プロテインキナーゼおよびＳｒｃキナーゼも活性化される。成長ホルモンもＰＲＬＲと結合し、受容体を活性化する。
ＰＲＬＲは、細胞の成長、分化、発生、乳汁分泌および再生を含めた多数の生物学的機能に関与する。ヒトＰＲＬＲ ｃＤＮＡはヘパトーマおよび乳癌ライブラリーから最初に単離された（Ｂｏｕｔｉｎ ら、Ｍｏｌｅｃ．Ｅｎｄｏｃｒ．３：１４５５−１４６１頁、１９８９年）。ヌクレオチド配列により、ラット肝臓ＰＲＬＲよりもはるかに長い細胞質ドメインを伴う５９８アミノ酸の成熟タンパク質が予測された。ＰＲＬＲ遺伝子は成長ホルモン受容体遺伝子と同じ染色体領域内に存在し、５ｐ１３〜ｐ１４にマッピングされている（Ａｒｄｅｎら、Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅ ５３：１６１−１６５頁、１９９０年）。
ヒトＰＲＬＲ遺伝子のゲノムの組織化が決定されている（Ｈｕ，Ｚ．−Ｚ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｍｅｔａｂ．８４：１１５３−１１５６頁、１９９９年）。ＰＲＬＲ遺伝子の５’非翻訳領域は、２つの二者択一的な第１のエクソン：Ｅ１３、ラットおよびマウスＥ１３のヒト対応物、ならびにＥ１Ｎと称される二者択一的な第１のエクソンの新規のヒト型を含有する。５’非翻訳領域は、一般的な非コードエクソン２および翻訳開始コドンを含有するエクソン３の一部も含有する。Ｅ１３エクソンとＥ１Ｎエクソンは互いに対して８００塩基対以内に存在する。これらの２つのエクソンは、ヒト乳房組織、乳癌細胞、生殖腺および肝臓において発現される。全体的に、Ｅ１３を含有する転写物は大多数の組織内によく見られる。ＰＲＬＲ遺伝子産物はエクソン３−１０によりコードされ、エクソン１０は細胞内ドメインの大部分をコードする。Ｅ１３エクソンおよびＥ１Ｎエクソンは、それぞれ、二者択一的なプロモーターＰＩＩＩおよびＰＮから転写される。ＰＩＩＩプロモーターは、げっ歯類プロモーターと同一のＳｐ１エレメントおよびＣ／ＥＢＰエレメントを含有し、ラットおよびマウスの−４８０／−１０６領域と８１％類似している。ＰＮプロモーターは、ＥＴＳファミリータンパク質に対する推定される結合部位および核内受容体に対する半部位を含有する。
ＰＲＬＲは、それらの細胞質ドメインの長さが異なるいくつもの異なるアイソフォームで存在する。ヒト腹部皮下脂肪組織および乳房皮下脂肪組織において４種のＰＲＬＲ ｍＲＮＡアイソフォーム（Ｌ、Ｉ、Ｓ１ａおよびＳ１ｂ）が見い出されている（Ｌｉｎｇ，Ｃ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｍｅｔａｂ．８８：１８０４−１８０８頁、２００３年）。さらに、Ｌ−ＰＲＬＲとＩ−ＰＲＬＲの両方の発現がヒト腹部皮下脂肪組織および乳房皮下脂肪組織において免疫ブロット分析を使用して検出されている。最近の報告により、ヒト乳癌組織および前立腺癌組織においてＰＲＬＲが発現され、活性化されることが示唆された（Ｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６４：４７７４−４７８２頁、２００４年；Ｇｉｌｌら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．、５４：９５６−９６０頁、２００１年；Ｔｏｕｒａｉｎｅら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．、８３：６６７−６７４頁、１９９８年）。前立腺癌検体の５４％において、Ｓｔａｔ５の活性化およびＰＲＬＲの発現が、組織学的悪性度が高いことに関連づけられることが報告された（Ｌｉら、上記）。その他の報告により、原発性乳癌検体がコロニー形成アッセイにおいてＰＲＬに反応することおよび血漿中ＰＲＬ濃度が乳癌リスクと相関することが示唆された（Ｔｗｏｒｏｇｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６４：６８１４−６８１９頁、２００４年；Ｔｗｏｒｏｇｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６６：２４７６−２４８２頁、２００６年）。別の報告により、ＰＲＬトランスジェニックマウスでは悪性乳癌または前立腺過形成が発生することが示された（Ｗｅｎｎｂｏら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．、１００：２７４４−２７５１頁、１９９７年；Ｗｅｎｎｂｏら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１３８：４４１０−４４１５頁、１９９７年）。
ＰＲＬＲモノクローナル抗体により、マウスにおける乳房腫瘍の発生率が低下することが示されている（Ｓｉｓｓｏｍら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３３：５８９−５９５頁、１９８８年）。さらに、ＰＲＬアンタゴニスト（Ｓ１７９Ｄ突然変異ＰＲＬ）により、ヒト前立腺癌細胞株であるＤＵ−１４５の増殖がインビトロで阻害されることおよびＤＵ−１４５によりインビボで腫瘍が誘導されることが示されている（Ｘｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６１：６０９８−６１０４頁、２００１年）。
Ｍａｎｃｉｎｉら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ、２００８、３７（１）：６７−９９頁 Ｂｏｕｔｉｎ ら、Ｍｏｌｅｃ．Ｅｎｄｏｃｒ．３：１４５５−１４６１頁、１９８９年 Ａｒｄｅｎら、Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅ ５３：１６１−１６５頁、１９９０年 Ｈｕ，Ｚ．−Ｚ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｍｅｔａｂ．８４：１１５３−１１５６頁、１９９９年 Ｌｉｎｇ，Ｃ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｍｅｔａｂ．８８：１８０４−１８０８頁、２００３年 Ｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６４：４７７４−４７８２頁、２００４年 Ｇｉｌｌら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．、５４：９５６−９６０頁、２００１年 Ｔｏｕｒａｉｎｅら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．、８３：６６７−６７４頁、１９９８年 Ｔｗｏｒｏｇｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６４：６８１４−６８１９頁、２００４年 Ｔｗｏｒｏｇｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６６：２４７６−２４８２頁、２００６年 Ｗｅｎｎｂｏら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．、１００：２７４４−２７５１頁、１９９７年 Ｗｅｎｎｂｏら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１３８：４４１０−４４１５頁、１９９７年 Ｓｉｓｓｏｍら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１３３：５８９−５９５頁、１９８８年 Ｘｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６１：６０９８−６１０４頁、２００１年
したがって、癌を治療するために治療目的で使用され得るＰＲＬＲ結合タンパク質が依然として必要とされている。
（発明の要旨）
本発明は、ＰＲＬＲ結合タンパク質およびそのコンジュゲートに関する。本発明の結合タンパク質として、それだけには限らないが、抗体、抗原結合部分およびヒトＰＲＬＲと結合することができるその他の抗原結合タンパク質が挙げられる。さらに、本発明は、ＰＲＬＲ結合タンパク質およびそのコンジュゲートを作製し、使用する方法を提供する。
一態様では、本発明は、抗原結合ドメインを含む結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片であって、前記結合タンパク質はプロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）と結合することができ、前記抗原結合ドメインが配列番号９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１５１および１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む結合タンパク質に関する。一実施形態では、少なくとも１つのＣＤＲは、配列番号４０〜４２、４６、４７、４９〜５１、５６〜５８、６２、６３、６５〜６７、７１〜７３、７７、７９〜８１、８５〜８７、９２〜９４、１４９および１５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、結合タンパク質例えば抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３つのＣＤＲを含む。さらに別の実施形態では、３つのＣＤＲは、配列番号４０、４１および４２；配列番号４６、４７および４２；配列番号５６、５７および５８；配列番号６２、６３および５８；配列番号７１、７２および７３；配列番号７１、７７および７３；配列番号８５、８６および８７；配列番号１４９、１５０および８７からなる群から選択される重鎖可変ドメインＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）である。この代わりに、またはそれと組み合わせて、３つのＣＤＲは、配列番号４９、５０および５１；配列番号６５、６６および６７；配列番号７９、８０および８１；ならびに配列番号９２、９３および９４からなる群から選択される軽鎖可変ドメインＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）である。
別の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１つの重鎖可変ドメインＣＤＲセットおよび少なくとも１つの軽鎖可変ドメインＣＤＲセットを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの可変ドメインＣＤＲセットは、
（１）重鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号４０、４１および４２または配列番号４６、４７および４２のいずれか、ならびに軽鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号４９、５０および５１；
（２）重鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号５６、５７および５８または配列番号６２、６３および５８のいずれか、ならびに軽鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号６５、６６および６７；
（３）重鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号７１、７２および７３または配列番号７１、７７および７３のいずれか、ならびに軽鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号７９、８０および８１；ならびに
（４）重鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号８５、８６および８７または配列番号１４９、１５０および８７のいずれか、ならびに軽鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号９２、９３および９４
からなる群から選択される。
その他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ヒトアクセプターフレームワークをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、配列番号１４〜３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらにその他の実施形態では、ヒトアクセプターフレームワークは、少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、フレームワークのアミノ酸配列が、前記ヒトアクセプターフレームワークの配列と少なくとも６５％同一であり、前記ヒトアクセプターフレームワークと同一のアミノ酸残基を少なくとも７０個含む。あるいは、ヒトアクセプターフレームワークは、重要な残基における少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記重要な残基が、
ＣＤＲに隣接している残基；
グリコシル化部位残基；
レア残基（ｒａｒｅ ｒｅｓｉｄｕｅ）；
ヒトＰＲＬＲと相互作用できる残基；
ＣＤＲと相互作用できる残基；
標準的残基；
重鎖可変領域および軽鎖可変領域間の接触残基；
バーニアゾーン内の残基；ならびに
Ｃｈｏｔｈｉａによって定義される可変重鎖ＣＤＲ１およびＫａｂａｔによって定義される第１の重鎖フレームワーク間で重複する領域内の残基
からなる群から選択される。
その他の実施形態では、重要な残基は、２Ｌ、４３Ｌ、４８Ｌ、５８Ｌ、６４Ｌ、８７Ｌ、２７Ｈ、４８Ｈ、６０Ｈ、６３Ｈ、６４Ｈ、６５Ｈ、６７Ｈ、６９Ｈ、７１Ｈ、７３Ｈ、７５Ｈ、９３Ｈからなる群から選択される。別の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、コンセンサスヒト可変ドメインである。
一実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４；配列番号４５；配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０；配列番号６１；配列番号７０；配列番号７４；配列番号７５；配列番号７６；配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は２つの可変ドメインを含み、前記２つの可変ドメインは、
（１）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４または配列番号４５のうちの１つ；および配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３または配列番号５４のうちの１つ；
（２）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０または配列番号６１のうちの１つ；および配列番号６４、配列番号６８または配列番号６９のうちの１つ；
（３）配列番号７０；配列番号７４；配列番号７５または配列番号７６のうちの１つ；および配列番号７８、配列番号８２または配列番号８３のうちの１つ；ならびに
（４）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２または配列番号１２３のうちの１つ；および配列番号９１、配列番号９５または配列番号９６のうちの１つ
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４８；配列番号５２；配列番号５３；配列番号５４；配列番号６４；配列番号６８；配列番号６９；配列番号７８；配列番号８２；配列番号８３；配列番号９１；配列番号９５；および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの可変ドメインを含む。
特定の実施形態では、結合タンパク質は、（ａ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｂ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｄ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｆ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｇ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｈ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｊ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｋ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｌ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｍ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｎ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｏ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｐ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｑ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｒ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｓ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｔ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｕ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｖ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｗ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｘ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｙ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｚ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ａａ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｂｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｃｃ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｄｄ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｅｅ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｆｆ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｇｇ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｈｈ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｊｊ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｋｋ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｌｌ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｍｍ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｎｎ）配列番号１５３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｏｏ）配列番号１５４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；ならびに（ｐｐ）配列番号１５５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖からなる群から選択される重鎖配列および軽鎖配列を含む。
一実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲと結合する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲの生物学的機能を調節することができる。その他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲを中和することができる。さらにその他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、表面プラズモン共鳴によって測定される、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；および少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択される、ＰＲＬＲとの結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。その他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、表面プラズモン共鳴によって測定される、最大で約１０−３ｓ−１；最大で約１０−４ｓ−１；最大で約１０−５ｓ−１；および最大で約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるＰＲＬＲとの解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。別の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、最大で約１０−７Ｍ；最大で約１０−８Ｍ；最大で約１０−９Ｍ；最大で約１０−１０Ｍ；最大で約１０−１１Ｍ；最大で約１０−１２Ｍ；および最大で１０−１３Ｍからなる群から選択されるＰＲＬＲとの解離定数（ＫＤ）を有する。
別の態様では、本発明は、抗体と競合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、
（１）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（２）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０および配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号６４、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（３）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（４）配列番号１１２に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０３に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（５）配列番号１１３に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０４に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（６）配列番号１１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０５に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（７）配列番号１１６に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０７に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（８）配列番号１１７に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０８に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（９）配列番号１１８に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０９に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（１０）配列番号１１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１０に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；ならびに
（１１）配列番号１２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１に記載の可変軽鎖アミノ酸配列
からなる群から選択される重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体と競合する。
別の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、
（１）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（２）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０および配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号６４、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（３）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（４）配列番号１１２に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０３に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（５）配列番号１１３に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０４に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（６）配列番号１１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０５に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；ならびに
（７）配列番号１２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１に記載の可変軽鎖アミノ酸配列
からなる群から選択される重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体と競合する。
別の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１０に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体と競合する。
別の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、
（１）配列番号１１５に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０６に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（２）配列番号１１６に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０７に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；ならびに
（３）配列番号１１７に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０８に記載の可変軽鎖アミノ酸配列
からなる群から選択される重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体と競合する。
別の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む抗体と競合する。その他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む抗体と競合する。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｂ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｄ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｆ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｇ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｈ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｊ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｋ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｌ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｍ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｎ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｏ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｐ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｑ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｒ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｓ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｔ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｕ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｖ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｗ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｘ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｙ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｚ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ａａ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｂｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｃｃ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｄｄ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｅｅ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｆｆ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｇｇ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｈｈ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｊｊ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｋｋ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｌｌ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｍｍ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｎｎ）配列番号１５３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；（ｏｏ）配列番号１５４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；ならびに（ｐｐ）配列番号１５５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖
からなる群から選択される重鎖配列および軽鎖配列を含む抗体と競合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質を対象とする。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｆ１０、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のうちの３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、前記アミノ酸残基のうちの少なくとも５つを含むエピトープと結合する。別の実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｆ１０、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のすべてを含むエピトープと結合する。特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ａｂ１、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６およびＡｂ１４〜Ａｂ２５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｉ９、Ｆ１０、Ｋ１１、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｗ７２、Ｔ７４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｔ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｗ１３９、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のうちの３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、前記アミノ酸残基のうちの少なくとも５つを含むエピトープと結合する。別の実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｉ９、Ｆ１０、Ｋ１１、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｗ７２、Ｔ７４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｔ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｗ１３９、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のすべてを含むエピトープと結合する。特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ａｂ４、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ３５〜Ａｂ４３およびＡｂ５３〜Ａｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｔ１４１、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｒ１４７、Ｅ１５５、Ｗ１５６、Ｅ１５７、Ｉ１５８、Ｈ１５９、Ｆ１６０、Ａ１６１、Ｇ１６２、Ｑ１６３、Ｑ１６４、Ｆ１６７、Ｓ１７１、Ｒ１８３、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｗ１９１およびＷ１９４のうちの１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、前記アミノ酸残基のうちの少なくとも１５個を含むエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｔ１４１、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｒ１４７、Ｅ１５５、Ｗ１５６、Ｅ１５７、Ｉ１５８、Ｈ１５９、Ｆ１６０、Ａ１６１、Ｇ１６２、Ｑ１６３、Ｑ１６４、Ｆ１６７、Ｓ１７１、Ｒ１８３、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｗ１９１およびＷ１９４のすべてを含むエピトープと結合する。特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ａｂ３、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８およびＡｂ４４〜Ａｂ５２からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８またはＷ１９１のうちの少なくとも１個、２個、３個、４個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。いくつかの実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８またはＷ１９１のすべてを含むエピトープと結合する。特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ａｂ１、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ６〜Ａｂ８、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、Ａｂ１４〜Ａｂ２５およびＡｂ３５〜Ａｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸９１〜９６を含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ａｂ１、Ａｂ４、Ａｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ７、Ａｂ１４〜Ａｂ２５、Ａｂ３５〜Ａｂ４３およびＡｂ５３〜Ａｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２の少なくともアミノ酸８〜１００、１８５〜１９１、８〜１４３、または１８３〜１９４内の残基を有するエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ａｂ１、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ６〜Ａｂ８、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、Ａｂ１４〜Ａｂ２５およびＡｂ３５〜Ａｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、ＰＲＬＲと結合することができ、
Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８、Ａｂ９、ｃｈＡｂ９、Ａｂ１０、ｃｈＡｂ１０、Ａｂ１１、ｃｈＡｂ１１、Ａｂ１２、ｃｈＡｂ１２、Ａｂ１３、ｃｈＡｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４およびＡｂ５５
からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分と同じエピトープ特異性を有する結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。
前述の態様の種々の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲの生物学的機能を調節することができる。前述の態様のその他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲのリガンド結合Ｄ１ドメインと結合する。前述の態様のその他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲの二量体化を阻害しないＰＲＬＲのエピトープと結合する。前述の態様のさらなる実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲのＤ２ドメインと結合しない。前述の態様のさらなる実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲのＤ１ドメインのリガンド結合領域と結合する。前述の態様のさらなる実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲとの結合について抗体ＬＦＡ１０２と競合しない。前述の態様のさらなる実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、プロラクチンとＰＲＬＲの結合を遮断する。
本発明の前述の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、結合タンパク質は抗体またはその抗原結合部分である。本発明の前述の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、結合タンパク質はヒト抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明の前述の実施形態のいずれかの結合タンパク質は、結晶化結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片である。
別の態様では、本発明は、結合タンパク質を含み、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む抗体構築物に関する。一実施形態では、前記抗体構築物の結合タンパク質は、免疫グロブリン分子、ジスルフィド連結したＦｖ、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、ダイアボディー、ヒト化抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、Ｆａｂ’、二特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖからなる群から選択される。
この代わりに、またはそれに加えて、前記抗体構築物の結合タンパク質は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメインおよびヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含み得る。
その他の実施形態では、抗体構築物は、配列番号１０−１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン定常ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、上記の抗体構築物を含む抗体コンジュゲートであって、免疫接着分子、造影剤、治療薬および細胞傷害性薬剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む抗体コンジュゲートに関する。一実施形態では、抗体コンジュゲートは、放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識およびビオチンからなる群から選択される造影剤を含む。別の実施形態では、抗体コンジュゲートは、３Ｈ、 １４Ｃ、 ３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏおよび１５３Ｓｍからなる群から選択される放射標識を含む。その他の実施形態では、抗体コンジュゲートは、代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂薬、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス薬からなる群から選択される治療用薬剤または細胞傷害性薬剤を含む。例えば、抗有糸分裂薬は、ドラスタチン、アウリスタチン、メイタンシノイド、植物アルカロイド、タキサンおよびビンカアルカロイドからなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、前記抗体構築物の結合タンパク質はヒトグリコシル化パターンを有する。
特定の実施形態では、抗体構築物は結晶化抗体構築物である。いくつかの実施形態では、結晶化抗体構築物は、担体を含まない医薬制御放出結晶化抗体構築物である。別の実施形態では、抗体構築物は前記抗体構築物の可溶性対応物よりも、インビボで長い半減期を有する。いくつかの実施形態では、抗体構築物は生物活性を保持する。
別の態様では、本発明は、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片のアミノ酸配列をコードする単離された核酸に関する。別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体構築物のアミノ酸配列をコードする単離された核酸であって、前記抗体構築物が、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、核酸に関する。
別の態様では、本発明は、前記単離された核酸を含むベクターを提供する。別の実施形態では、前記ベクターは、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶおよびｐＢＪからなる群から選択される。
別の態様では、本発明は、前記ベクターを含む宿主細胞を提供する。別の実施形態では、前記宿主細胞は原核生物細胞であり、さらにその他の実施形態では、前記宿主細胞は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。その他の実施形態では、前記宿主細胞は真核生物細胞である。いくつかの実施形態では、前記真核生物細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞からなる群から選択される。さらにその他の実施形態では、真核生物細胞は、哺乳動物細胞、トリ細胞および昆虫細胞からなる群から選択される動物細胞であり、その他の実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。別の実施形態では、宿主細胞はＣＯＳであり、その他の実施形態では、宿主細胞は酵母細胞である。いくつかの実施形態では、前記酵母細胞はサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である。その他の実施形態では、宿主細胞は昆虫Ｓｆ９細胞である。
別の態様では、本発明は、ＰＲＬＲと結合することができるタンパク質を産生する方法であって、上記の宿主細胞、例えば上記の抗体構築物のアミノ酸配列をコードする単離された核酸を含むベクターを含む宿主細胞を、培養培地中、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質が産生されるのに十分な条件下で培養することを含む方法に関する。一実施形態では、本発明は、前記方法に従って産生されたタンパク質に関する。
別の態様では、本発明は、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片を放出するための組成物であって、（ａ）本明細書に記載の結晶化結合タンパク質を含む製剤、および１つの成分；ならびに（ｂ）少なくとも１つのポリマー担体を含む組成物に関する。一実施形態では、ポリマー担体は、
ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（酸無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン、硫酸化多糖、これらの混和物および共重合体
からなる群の１つ以上から選択されるポリマーである。別の実施形態では、前記成分は、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、哺乳動物を治療するための方法であって、哺乳動物に前記組成物を有効量で投与するステップを含む方法に関する。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片および医薬として許容される担体を含む医薬組成物に関する。一実施形態では、前記医薬として許容される担体は、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片の吸収または分散を増大させるために有用なアジュバントとして機能する。別の実施形態では、前記アジュバントはヒアルロニダーゼである。
別の態様では、医薬組成物は、ＰＲＬＲ活性が有害である障害を治療するための少なくとも１つのさらなる治療薬をさらに含む。例えば、さらなる薬剤は、治療薬、造影剤、細胞傷害性薬剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断薬；接着分子遮断薬；抗サイトカイン抗体またはその機能性断片；メトトレキセート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫処置、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬物、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、経口用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストからなる群から選択され得る。
別の態様では、本発明は、ヒトＰＲＬＲを、本発明の結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片と接触させ、その結果、ヒトＰＲＬＲ活性が低下することによってヒトＰＲＬＲ活性を低下させる方法を提供する。
別の態様では、本発明は、ヒト被験体に、本発明の結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片を投与し、その結果、ヒト被験体におけるヒトＰＲＬＲ活性が低下することによって、ＰＲＬＲ活性が有害である障害に罹患しているヒト被験体におけるヒトＰＲＬＲ活性を低下させる方法を提供する。
別の態様では、本発明は、被験体に本発明の結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片を投与し、その結果、治療が実現されることによって、被験体をＰＲＬＲ活性が有害である疾患または障害に関して治療するための方法を提供する。一実施形態では、障害は癌である。別の実施形態では、癌は、黒色腫、子宮体癌、リンパ腫、乳癌、卵巣癌、腎癌、胃腸癌、結腸癌、肺癌、膵癌および前立腺癌からなる群から選択される。さらに別の実施形態では、癌は乳癌である。一実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片を被験体に、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内（ｉｎｔｒａｏｓｔｅａｌ）、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻腔内および経皮からなる群から選択される少なくとも１つの様式によって投与する。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ結合タンパク質と特異的に競合する抗ＰＲＬＲ抗体またはその抗原結合断片であって、前記競合が、前記抗体、ヒトＰＲＬＲポリペプチドおよび抗ＰＲＬＲ結合タンパク質を使用する競合結合測定法において検出され得る、抗ＰＲＬＲ抗体またはその抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本発明は、抗ＰＲＬＲ抗体またはその抗原結合断片および少なくとも１つの薬物を含む抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、抗体またはその抗原結合部分が少なくとも３つのＣＤＲを含む、抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲートに関する。
例えば、本発明は、抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４０、４１および４２；配列番号４６、４７および４２；配列番号５６、５７および５８；配列番号６２、６３および５８；配列番号７１、７２および７３；配列番号７１、７７および７３；配列番号８５、８６および８７；配列番号１４９、１５０および８７からなる重鎖可変ドメインＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）から選択される少なくとも３つのＣＤＲを含む、抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。この代わりに、またはそれと組み合わせて、本発明は、抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４９、５０および５１；配列番号６５、６６および６７；配列番号７９、８０および８１；ならびに配列番号９２、９３および９４からなる軽鎖可変ドメインＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）から選択される少なくとも３つのＣＤＲを含む、抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。
上記のＡＤＣの別の実施形態では、薬物は、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節剤、遺伝子療法用ベクター、アルキル化剤、抗血管新生剤、代謝拮抗薬、ホウ素含有薬剤、化学保護剤（ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）、ホルモン、抗ホルモン剤、コルチコステロイド、光活性治療薬（ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ）、オリゴヌクレオチド、放射性核種薬剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤および放射線増感剤からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、薬物が、Ｉｘｅｍｐｒａ、ドラスタチン１０、ドラスタチン１５、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＰＥ、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤまたはアウリスタチンＤ誘導体）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥまたはアウリスタチンＥ誘導体）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦまたはアウリスタチンＦ誘導体）、アウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）、アウリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、アウリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、５−ベンゾイル吉草酸−ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）、メトトレキセート、ダウノルビシン、ビンクリスチン、マイタンシン、マイタンシノール、マイタンシノールのＣ−３エステル、アンサマイトシンＰ１、アンサマイトシンＰ２、アンサマイトシンＰ３、アンサマイトシンＰ４、ドセタキセル、パクリタキセル、ナノ粒子パクリタキセル、ビンデシン硫酸塩、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、アクチノマイシン、ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン系薬、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体、アクチノマイシンＤ、アントラマイシン、チカマイシンＡ、ＤＣ−１８、ＤＣ−８１、マゼトラマイシン、ネオトラマイシンＡ、ネオトラマイシンＢ、ポロトラマイシン、プロトラカルシンＢ、ＳＧ２２８５、シバノミシン、シビロマイシン、トマイマイシン、アントラサイクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、カリチアマイシン、γ１ Ｉ、α２ Ｉ、α３ Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１ Ｉ、ＰＳＡＧ、θＩ １、デュオカルマイシン、アドゼレシン、ビゼレシンおよびカルゼレシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、プリカマイシン、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、レバミソール、癌ワクチン、組換え二価ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン１６型および１８型ワクチン、組換え四価ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６型、１１型、１６型および１８型ワクチン、シプロイセルＴ、サイトカイン、副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン、肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、腫瘍壊死因子、ミュラー管抑制因子、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子、インテグリン、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＮＧＦなどの神経増殖因子、血小板−増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子−Ｉおよび−ＩＩ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、骨誘導因子、インターフェロンα、βおよびγなどのインターフェロン、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２などのインターロイキン（ＩＬ）、腫瘍壊死因子およびＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含めたその他のポリペプチド因子、コロニー−刺激因子、エリスロポエチン（エポエチン）、フィルグラスチム、サルグラモスチム、プロメガポエチン、オプレルベキン、免疫調節性遺伝子治療薬、癌に関連する、突然変異したまたはその他の点で機能障害を起こした（例えば切断された）遺伝子を置き換えるために使用される機能的な治療用遺伝子をコードする核酸、癌を治療するための治療用タンパク質をコードするまたはその他の方法でその産生をもたらす核酸、スルホン酸アルキル、ブスルファン、ナイトロジェンマスタード、クロラムブシル、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミンおよびメルファラン、ニトロソウレア、カルムスチン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ストレプトゾシン、トリアジンおよびヒドラジン、ダカルバジン、プロカルバジン、テモゾロミド、エチレンイミン、チオペタ、ジアジクオン、マイトマイシンＣ、メチルアミン誘導体、エポキシド、アルトレタミン、ジアンヒドロガラクチトール、ジブロモズルシトール、アンジオスタチン、ＡＢＸ ＥＦＧ、Ｃ１−１０３３、ＰＫＩ−１６６、ＥＧＦワクチン、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ２０１６、ＩＣＲ−６２、ＥＭＤ ５５９００、ＣＰ３５８、ＰＤ１５３０３５、ＡＧ１４７８、ＩＭＣ−Ｃ２２５、ＯＳＩ−７７４、エルロチニブ、アンジオスタチン、アレスチン、エンドスタチン、ＢＡＹ１２−９５６６およびｗ／フルオロウラシルまたはドキソルビシン、カンスタチン、カルボキシアミドトリアゾールおよびパクリタキセルと一緒に、ＥＭＤ１２１９７４、Ｓ−２４、ビタキシン、ジメチルキサンテノン酢酸、ＩＭ８６２、インターロイキン−１２、インターロイキン−２、ＮＭ−３、ＨｕＭＶ８３３、ＰＴＫ７８７、ＲｈｕＭａｂ、アンジオザイム、ＩＭＣ−１Ｃ１１、Ｎｅｏｖａｓｔａｔ、マリマスタット、プリノマスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、ＣＯＬ−３、ＭＭ１２７０、ＳＵ１０１、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８、ＳＵ５４１６、パクリタキセルと一緒に、ゲムシタビンおよびシスプラチンと一緒に、ならびにイリノテカンおよびシスプラチンと一緒に、ならびに放射線と一緒に、テコガラン、テモゾロミドおよびＰＥＧインターフェロンα２ｂ、テトラチオモリブデート、ＴＮＰ−４７０、サリドマイド、ＣＣ−５０１３およびＴａｘｏｔｅｒｅと一緒に、タムスタチン、２−メトキシエストラジオール、ＶＥＧＦトラップ、ｍＴＯＲ阻害剤（デフォロリムス、エベロリムスおよびテムシロリムス）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ダサチニブ、スニチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、葉酸アンタゴニスト、メトトレキセート、４−アミノ−葉酸、ロメテレキソール、ペメトレキセド、トリメトレキサート、ピリミジンアンタゴニスト、アザシチジン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン５’−リン酸、５−フルオロウリジン三リン酸、ゲムシタビン、フロクスウリジン、プリンアンタゴニストアザチオプリン、クラドリビン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、６−チオグアニン、アデノシンデアミナーゼ阻害剤、クラドリビン、フルダラビン、ネララビン、ペントスタチン、ボロフィシン、ボルテゾミブ、化学保護剤、アミホスチン、デクスラゾキサン、メスナ、アンドロゲン、エストロゲン、酢酸メドロキシプロゲステロン、プロゲスチン、アミノグルテチミド、アナストロゾール、ビカルタミド、クロロトリアニセン、酢酸シプロテロン、デガレリクス、エキセメスタン、フルタミド、フルベストラント、ゴセレリン、レトロゾール、ロイプロリド、リュープロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、タモキシフェン、トリプトレリン、アスパラギナーゼ、ダカルバジン、ヒドロキシウレア、レバミソール、ミトタン、プロカルバジン、トレチノイン、グルココルチコイド、プレドニゾン、クロマゲン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）、色素、天然に存在するものであるか標準および／または非標準ヌクレオチドを使用して合成されたものであるかにかかわらずアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を含めた）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アプタマー、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、リボザイム、アンジオザイム、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、１１１Ａｇ、６７Ｇａ、１４２Ｐｒ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、２１２Ｐｂ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９９Ｍｏ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１６９Ｅｒ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ｐｂ、Ｃｏ−５８、Ｇａ−６７、Ｂｒ−８０ｍ、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０３ｍ、Ｐｔ−１０９、Ｉｎ−１１１ １、Ｓｂ−１１９、Ｉ−１２５、Ｈｏ−１６１、Ｏｓ−１８９ｍ、Ｉｒ−１９２、Ｄｙ−１５２、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｒａ−２２３、Ｒｎ−２１９、Ｐｏ−２１５、Ｂｉ−２１１、Ａｃ−２２５、Ｆｒ−２２１、Ａｔ−２１７、Ｂｉ−２１３、Ｆｍ−２５５、１１Ｃ、１３Ｎ、１５０、７５Ｂｒ、１９８Ａｕ、２２４Ａｃ、１２６Ｉ、１３３Ｉ、７７Ｂｒ、１１３ｍＩｎ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｕ、１０７Ｈｇ、２０３Ｈｇ、１２１ｍＴｅ、１２２ｍＴｅ、１２５ｍＴｅ、１６５Ｔｍ、１６７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１９７Ｐｔ、１０９Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１６１Ｔｂ、１６６Ｈｏ、１９９Ａｕ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５１Ｃｒ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、２０１Ｔｌ、２２５Ａｃ、７６Ｂｒ、１６９Ｙｂ、タキサン、シスプラチン、メトロニダゾール、ミソニダゾール、脱メチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモラゾール、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ１０６９、ＳＲ４２３３、Ｅ０９、ＲＢ６１４５、ニコチンアミド、５−ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５−ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦＵｄＲ）、ヒドロキシウレア、ヘマトポルフィリン誘導体、フォトフリン（ｒ）、ベンゾポルフィリン誘導体、ＮＰｅ６、スズエチオポルフィリン（ＳｎＥＴ２）、フェオボルビド（ｐｈｅｏｂｏｒｂｉｄｅ）ａ、バクテリオクロロフィルａ、ナフタロシアニン、フタロシアニン、亜鉛フタロシアニン、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エリプチシン、エピルビシン、エトポシド、ラゾキサン、テニポシド、アキシチニブ、ボスチニブ、セジラニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマクサニブ、スニチニブ、バンデタニブ、アブリン、アブリンＡ鎖、アルファ毒素、アレウリテス・ホルジイ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、アマトキシン、クロチン、クルシン、ジアンチンタンパク質、ジフテリア毒素、ジフテリアＡ鎖、
ジフテリア毒素の非結合性活性断片、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）、ゲロニン、ミトゲリン、モデシンＡ鎖、モモルディカ・カランティア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、ネオマイシン、オンコナーゼ、フェノマイシン、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ポークウィード抗ウイルスタンパク質、シュードモナス内毒素、シュードモナス外毒素、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ鎖、レストリクトシン、リシン、リシンＡ鎖、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）、サパオナリア・オフィスナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、サポリン、アルファ−サルシン、ブドウ球菌性エンテロトキシン−Ａ、破傷風毒素、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ、Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、プロテアソーム阻害剤、ＰＳ−３４１、ＨＤＡＣ阻害剤、ボリノスタット、ベリノスタット、エンチノスタット、モセチノスタット、パノビノスタット、ＣＯＸ−２阻害剤、置換尿素、熱ショックタンパク質阻害剤、ゲルダナマイシン、副腎皮質抑制薬、トリコテシン、Ａ１２、１９Ｄ１２、Ｃｐ７５１−８７１、Ｈ７Ｃ１０、アルファＩＲ３、ＳｃＦＶ／ＦＣ、ＥＭ／１６４、マツズマブ、アービタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、ベクチビックス、ｍＡｂ ８０６、ニモツズマブ、ＡＶＥＯ、ＡＭＧ１０２、５Ｄ５（ＯＡ−５ｄ５）、Ｈ２４４Ｇ１１、Ａｂ＃１４（ＭＭ１２１−１４）、ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、１Ｂ４Ｃ３；２Ｄ１Ｄ１２、ＮＶＰ−ＡＥＷ５４１−Ａ、ＢＭＳ−５３６，９２４（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン）、ＢＭＳ−５５４，４１７、シクロリガン（Ｃｙｃｌｏｌｉｇａｎ）、ＴＡＥ２２６、ＰＱ４０１、Ｉｒｅｓｓａ、ＣＩ−１０３３（ＰＤ１８３８０５）、ラパチニブ（ＧＷ−５７２０１６）、タイケルブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、タルセバ（Ｔａｒｃｅｖａ）、ＰＫＩ−１６６、ＰＤ−１５８７８０、ＥＫＢ−５６９、チロホスチン（Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）ＡＧ １４７８（４−（３−クロロアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン）、ＰＨＡ６６５７５２、ＡＲＱ１９７、カペシタビン、５−トリフルオロメチル−２’−デオキシウリジン、メトトレキセートナトリウム、ラルチトレキセド、ペメトレキセド、テガフール、シトシンアラビノシド（シタラビン）、５−アザシチジン、６−メルカプトプリン（メルカプトプリン、６−ＭＰ）、アザチオプリン、６−チオグアニン、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン（２−ＣｄＡ、２−クロロデオキシアデノシン）、リボヌクレオチド還元酵素阻害剤、シクロホスファミド、ネオサル（Ｎｅｏｓａｒ）、イホスファミド、チオテパ、ＢＣＮＵ→１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア、ＣＣＮＵ→１−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−１−ニトロソウレア（メチルＣＣＮＵ）、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、プロカルバジンＨＣＬ、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、クロラムブシル、メルファラン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシンＨＣＬ、ダウノルビシンクエン酸塩、ミトキサントロンＨＣＬ、アクチノマイシンＤ、エトポシド、トポテカンＨＣｌ、テニポシド、イリノテカンＨＣＬ（ＣＰＴ−ｌｌ）、ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサン、イキサベピロン、メシル酸イマチニブ、リンゴ酸スニチニブ、ソラフェニブトシル酸塩、ニロチニブ塩酸塩一水和物、Ｌ−アスパラギナーゼ、アルファインターフェロン、アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）、ＩＬ−２、アルデスロイキン、プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）、ＩＬ−１２、トレミフェンクエン酸塩、フルベストラント、ラロキシフェンＨＣＬ、アナストラゾール、レトロゾール、ファドロゾール（ＣＧＳ１６９４９Ａ）、エキセメスタン、酢酸リュープロリド、リュープロン、酢酸ゴセレリン、トリプトレリンパモ酸塩、ブセレリン、ナファレリン、セトロレリクス、ビカルタミド、ニルタミド、酢酸メゲストロール、ソマトスタチン類似体、プレドニゾロン、デキサメタゾン、ケトコナゾール、シロリムス、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）、デフォロリムス（ＡＰ２３５７３）およびエベロリムス（ＲＡＤ００Ｉ）からなる群から選択されるＡＤＣを特徴とする。
別の態様では、本発明は、上記のＡＤＣを含む医薬組成物に関する。
さらに別の態様では、本発明は、それを必要とする被験体における癌を治療する方法であって、上記のＡＤＣを投与し、その結果、被験体が治療されることを含む方法に関する。
別の態様では、本発明は、それを必要とする被験体における癌を治療する方法であって、上記のＡＤＣを投与し、その結果、被験体が治療されることを含み、癌が、黒色腫、子宮体癌、リンパ腫、乳癌、卵巣癌、腎癌、胃腸癌、結腸癌、肺癌、膵癌および前立腺癌からなる群から選択される方法に関する。その他の実施形態では、本発明は、それを必要とする被験体における癌を治療する方法であって、上記のＡＤＣを投与し、その結果、被験体が治療されることを含み、癌が乳癌である方法に関する。その他の実施形態では、本発明は、それを必要とする被験体における癌を治療する方法であって、上記のＡＤＣを投与し、その結果、被験体が治療されることを含み、ＡＤＣを被験体に、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻腔内および経皮からなる群から選択される様式によって投与する方法に関する。
マウス抗体Ａｂ５（配列番号１１２）、Ａｂ６（配列番号１１３）、Ａｂ７（配列番号１１４）、Ａｂ８（配列番号１１５）、Ａｂ９（配列番号１１６）、Ａｂ１０（配列番号１１７）、Ａｂ１１（配列番号１１８）、Ａｂ１２（配列番号１１９）およびＡｂ１３（配列番号１２０）の可変重鎖配列のアラインメントを示す図である。 マウス抗体Ａｂ５（配列番号１０３）、Ａｂ６（配列番号１０４）、Ａｂ７（配列番号１０５）、Ａｂ８（配列番号１０６）、Ａｂ９（配列番号１０７）、Ａｂ１０（配列番号１０８）、Ａｂ１１（配列番号１０９）、Ａｂ１２（配列番号１１０）およびＡｂ１３（配列番号１１１）の可変軽鎖配列のアラインメントを示す図である。 マウス抗体Ａｂ５（配列番号１１２）、Ａｂ６（配列番号１１３）、Ａｂ７（配列番号１１４）およびＡｂ８（配列番号１１５）の可変重鎖配列；ならびにそれに由来するヒト化可変重鎖配列、すなわちＡｂ１ ＶＨ．１ｚ（配列番号３９）、Ａｂ１ ＶＨ．１（配列番号４３）、Ａｂ１ ＶＨ．１ａ（配列番号４４）、Ａｂ１ ＶＨ．１ｂ（配列番号４５）、Ａｂ２ ＶＨ．１ｚ（配列番号５５）、Ａｂ２ ＶＨ．１（配列番号５９）、Ａｂ２ ＶＨ．１ａ（配列番号６０）、Ａｂ２ ＶＨ．１ｂ（配列番号６１）、Ａｂ３ ＶＨ．１ｚ（配列番号７０）、Ａｂ３ ＶＨ．１（配列番号７４）、Ａｂ３ ＶＨ．１ａ（配列番号７５）、Ａｂ３ ＶＨ．１ｂ（配列番号７６）、Ａｂ４ ＶＨ．１ｚ（配列番号８４）、Ａｂ４ ＶＨ．１（配列番号８８）、Ａｂ４ ＶＨ．１ａ（配列番号８９）、Ａｂ４ ＶＨ．１ａ．２（配列番号１２１）、Ａｂ４ ＶＨ．１ａ．３（配列番号１２２）、Ａｂ４ ＶＨ．１ｂ（配列番号１２３）、およびＡｂ４ ＶＨ．１ｂ．２（配列番号９０）のアラインメントを示す図である。 マウス抗体Ａｂ５（配列番号１０３）、Ａｂ６（配列番号１０４）、Ａｂ７（配列番号１０５）およびＡｂ８（配列番号１０６）の可変軽鎖配列；ならびにそれらに由来するヒト化可変重鎖配列、すなわちＡｂ１ ＶＬ．１（配列番号４８）、Ａｂ１ ＶＬ．１ａ（配列番号５２）、Ａｂ１ ＶＬ．２（配列番号５３）、Ａｂ１ ＶＬ．２ａ（配列番号５４）、Ａｂ２ ＶＬ．１（配列番号６４）、Ａｂ２ ＶＬ．１ａ（配列番号６８）、Ａｂ２ ＶＬ．１ｂ（配列番号６９）、Ａｂ３ ＶＬ．１（配列番号７８）、Ａｂ３ ＶＬ．１ａ（配列番号８２）、Ａｂ３ ＶＬ．１ｂ（配列番号８３）、Ａｂ４ ＶＬ．１（配列番号９１）、Ａｂ４ ＶＬ．１ａ（配列番号９５）およびＡｂ４ ＶＬ．１ｂ（配列番号９６）のアラインメントを示す図である。 ＳＣＩＤ−ｂｅｉｇｅマウスに埋め込まれたＮｂ２−１１細胞の成長に対する抗ＰＲＬＲ抗体の効果を示すグラフである。抗体を、示されている試験日（７日目、１４日目および２１日目）に投薬した。エラーバーは平均値の標準誤差を示す（実施例３を参照のこと）。 マウス抗体Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１およびＡｂ１２について、ならびにＬＦＡ１０２抗体についてのＰＲＬＲ抗体エピトープの群分けの概要を示す図である（実施例４を参照のこと）。 キメラ抗体およびヒト化抗体ｃｈＡｂ７、Ａｂ３９、Ａｂ４０、ｃｈＡｂ５、Ａｂ３０、ｃｈＡｂ６、Ａｂ１９、Ａｂ２１、ｃｈＡｂ８、Ａｂ４８およびＡｂ４９について、ならびにＬＦＡ１０２抗体についての同時結合アッセイの結果を示す図である。キメラ抗体のヒト化によって各根抗体のコアエピトープは有意に変化しないことが実証されている（実施例４を参照のこと）。 キメラ抗体およびヒト化抗体ｃｈＡｂ７、Ａｂ３９、Ａｂ４０、ｃｈＡｂ５、Ａｂ３０、ｃｈＡｂ６、Ａｂ１９、Ａｂ２１、ｃｈＡｂ８、Ａｂ４８およびＡｂ４９について、ならびにＬＦＡ１０２抗体についてのＰＲＬＲ抗体エピトープの群分けの概要を示す図である（実施例４を参照のこと）。 ＰＲＬ−ＰＲＬＲ三元複合体の構造上にマッピングされたＡｂ６およびＬＦＡ１０２についてのエピトープ表面の図である（実施例５を参照のこと）。 特定の抗ＰＲＬＲ抗体と、以下のｈｕＰＲＬＲ、ｃｙＰＲＬＲおよびｍｕＰＲＬＲとの結合の比較を示すグラフである（実施例１０を参照のこと）。 特定の抗ＰＲＬＲ抗体の、キメラ抗体からヒト化した際の結合の比較を示すグラフである。
本発明は、ＰＲＬＲと結合するヒトＰＲＬＲ結合タンパク質、特に抗ＰＲＬＲ抗体またはその抗原結合部分およびそれらの使用に関する。本発明の種々の態様は、抗体および抗体断片、そのコンジュゲートおよびその医薬組成物、ならびにこのような抗体および断片を作製するための核酸、組換え発現ベクターおよび宿主細胞に関する。ヒトＰＲＬＲを検出するため、インビトロまたはインビボのいずれかでヒトＰＲＬＲ活性を阻害するためおよび乳癌などの障害を予防または治療するための、本発明の抗体の使用方法も本発明に包含される。
本明細書において別段の定義のない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有する。用語の意味および範囲は、明確でなければならないが、任意の潜在的に曖昧な事象では、本明細書において提供される定義は、任意の辞書の定義または外因性の定義を超える先例を取る。さらに、文脈によって別段に必要とされない限り、単数の用語は、複数を含むものとし、複数の用語は、単数を含むものとする。本出願では、「または」の使用は、別段の記述のない限り、「および／または」を意味する。さらに、用語「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などのその他の形態の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「成分」などの用語は、別段の記述のない限り、１つのユニットを含む要素および成分ならびに２以上のサブユニットを含む要素および成分の両方を包含する。
一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝子およびタンパク質および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法ならびにその技術は、当技術分野で周知のものであり、当技術分野でよく使用されるものである。本発明の方法および技術は、別段の指示のない限り、当技術分野で周知の従来法に従って、また、本明細書を通じて引用され、論じられる種々の一般的な参考文献およびより特定の参考文献に記載されるように一般に実施される。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、当技術分野で一般に遂行されるように、または本明細書に記載されるように実施される。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学および医薬品および製薬化学に関連して使用される命名法ならびにその実験室手順および技術は、当技術分野で周知のものであり、当技術分野でよく使用されるものである。標準技術は、化学合成、化学分析、医薬品、製剤および送達ならびに患者の治療のために使用されている。
本発明がより容易に理解され得るように、選択用語が以下に定義される。
用語「ポリペプチド」とは、本明細書で使用される場合、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。用語「ペプチド」および「タンパク質」は、用語ポリペプチドと同義的に使用され、アミノ酸のポリマー鎖も指す。用語「ポリペプチド」は、天然または人工タンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは単量体であってもポリマーであってもよい。
用語「単離されたタンパク質」または「単離されたポリペプチド」は、その起源または供給源に基づいて、その天然状態でそれに付随する天然に会合している成分と会合していないタンパク質またはポリペプチドであり、実質的に、同一種に由来するその他のタンパク質を含まず、異なる種に由来する細胞によって発現されるか、または天然には生じない。したがって、化学的に合成されたまたはそれが天然に生じる細胞とは異なる細胞系において合成されたポリペプチドは、その天然に会合している成分から「単離」される。タンパク質はまた、当技術分野で周知のタンパク質精製技術を使用する単離によって天然に会合している成分を実質的に含まないようにされ得る。
用語「回収すること」とは、本明細書で使用される場合、例えば、当技術分野で周知のタンパク質精製技術を使用する単離によって、ポリペプチドなどの化学種を、天然に会合している成分を実質的に含まないようにすることを指す。
「ヒトＰＲＬＲ」および「ヒトＰＲＬＲ野生型」という用語（本明細書では、ｈＰＲＬＲ、ｈＰＲＬＲｗｔと省略される）は、本明細書で使用される場合、単一の膜貫通クラス１サイトカイン受容体を指す。ヒトＰＲＬＲは、プロラクチンと結合する細胞外領域、膜貫通領域および細胞質内領域を含む。用語ヒトＰＲＬＲは、標準の組換え発現方法によって調製され得る組換えヒトＰＲＬＲ（ｒｈＰＲＬＲ）を包含することが意図されている。表１には、当技術分野で公知であるヒトＰＲＬＲのアミノ酸配列（すなわち、配列番号１）およびその細胞外ドメインのアミノ酸配列（すなわち、配列番号２）が提供される。さらに、ｈＰＲＬＲの種々のアイソフォームが当技術分野で公知であり、以下の表１に記載されている。
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「生物活性」とは、本明細書で使用される場合、プロラクチン受容体のすべての固有の生物学的特性を指す。ＰＲＬＲの生物学的特性として、それだけには限らないが、プロラクチンとの結合性、成長ホルモンとの結合性、胎盤性ラクトゲンとの結合性、ＪＡＫ２キナーゼ活性の活性化、膜貫通受容体タンパク質チロシンキナーゼ活性の活性化、抗アポトーシス活性、細胞表面受容体シグナル伝達、サイトカイン媒介性シグナル伝達、胚着床への関与、ＪＡＫ−ＳＴＡＴカスケード活性、成長ホルモンシグナル伝達に関与するＪＡＫ ＳＴＡＴカスケード活性、乳汁分泌への関与、乳腺腺胞の発達への関与、乳腺上皮細胞分化への関与、乳腺上皮の発達への関与、前立腺成長への関与、細胞接着の調節、上皮細胞分化の調節、ステロイド生合成活性およびＴ細胞活性化が挙げられる。
用語「特異的結合」または「特異的に結合すること」は、本明細書で使用される場合、抗体、タンパク質またはペプチドの、第２の化学種との相互作用に関連して、相互作用が、化学種上の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存していること、例えば、抗体が、広くタンパク質とではなく、特定のタンパク質構造を認識し、結合することを意味する。抗体が、エピトープ「Ａ」に対して特異的である場合には、標識された「Ａ」および抗体を含有する反応物中のエピトープＡ（または遊離の、標識されていないＡ）を含有する分子の存在は、抗体と結合している標識されたＡの量を低減する。
用語「抗体」とは、本明細書で使用される場合、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖、および２つの軽（Ｌ）鎖からなる任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子またはＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特徴を保持する、その任意の機能的断片、突然変異体、変異体または誘導体を広く指す。このような突然変異体、変異体または誘導体抗体形式は、当技術分野で公知である。その限定されない実施形態は以下に論じられている。
全長抗体では、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書において、ＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書において、ＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散財している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細かく分けることができる。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。免疫グロブリン分子は、任意の種類のもの（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原（例えば、ｈＰＲＬＲ）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原−結合機能は、全長抗体の断片によって実施され得るということがわかっている。このような抗体実施形態はまた、２種以上の異なる抗原と特異的に結合する、二特異性、二重特異性または多重特異性形式であり得る。抗体の「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含される結合断片の例として、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片（参照により本明細書に組み込むＷａｒｄら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６頁、Ｗｉｎｔｅｒら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９０／０５１４４ Ａ１）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え法を使用し、ＶＬおよびＶＨ領域対が一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）としても知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６頁；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３頁参照のこと）として製造されることを可能にする合成リンカーによって結合され得る。このような一本鎖抗体もまた、用語抗体の「抗原−結合部分」内に包含されるものとする。ダイアボディーなどの一本鎖抗体のその他の形態も包含される。ダイアボディーは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現されるが、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによって、ドメインが別の鎖の相補的ドメインと対形成するようにし、２つの抗原結合部位を作製する、二価の、二特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ、Ｐ．ら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８頁； Ｐｏｌｊａｋ、Ｒ．Ｊ．ら（１９９４年）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１−１１２３頁参照のこと）。このような抗体結合部分は、当技術分野で公知である（ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ編、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１年）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．７９０頁（ＩＳＢＮ ３−５４０−４１３５４−５））。
用語「抗体構築物」は、本明細書で使用される場合、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインと連結した本発明の抗原結合部分を１つ以上含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合によって結合した２つ以上のアミノ酸残基を含み、１つ以上の抗原結合部分を連結するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは、当技術分野で周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ、Ｐ．ら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８頁；Ｐｏｌｊａｋ、Ｒ．Ｊ．ら（１９９４年）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１−１１２３頁参照のこと）。免疫グロブリン定常ドメインとは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、当技術分野で公知であり、表２に表されている。
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さらに、抗体またはその抗原結合部分は、抗体または抗体部分と１つ以上のその他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合によって形成された、より大きな免疫接着分子の一部であり得る。このような免疫接着分子の例として、四量体ｓｃＦｖ分子を製造するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ、Ｓ．Ｍ．ら（１９９５年）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ６：９３−１０１頁）ならびに二価の、ビオチン化ｓｃＦｖ分子を製造するためのシステイン残基、マーカーペプチドおよびＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ、Ｓ．Ｍ．ら（１９９４年）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３１：１０４７−１０５８頁）が挙げられる。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体部分は、全抗体のそれぞれパパインまたはペプシン消化などの従来技術を使用して全抗体から調製され得る。さらに、抗体、抗体部分および免疫接着分子は、本明細書に記載の標準の組換えＤＮＡ技法を使用して得られ得る。
「単離された抗体」とは、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有するその他の抗体を実質的に含まない抗体を指すものとする（例えば、ｈＰＲＬＲと特異的に結合する単離された抗体は、ｈＰＲＬＲ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ｈＰＲＬＲと特異的に結合する単離された抗体は、その他の種に由来するＰＲＬＲ分子などのその他の抗原に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、その他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない場合がある。
用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むものとする。本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムおよび部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボ体細胞突然変異によって誘発される突然変異）を含み得る。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含まないものとする。
用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、組換え手段によって調製、発現、作製もしくは単離されたすべてのヒト抗体、例えば宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体（以下のセクションＩＩＣにさらに記載されている）、組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．、（１９９７年）ＴＩＢ Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０頁；Ａｚｚａｚｙ Ｈ．およびＨｉｇｈｓｍｉｔｈ Ｗ．Ｅ．、（２００２年）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５頁；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ Ｊ．Ｖ．およびＬａｒｒｉｃｋ Ｊ．Ｗ．（２００２年）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９：１２８−１４５頁；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．およびＣｈａｍｅｓ Ｐ．（２０００年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−３７８頁）、ヒト免疫グロブリン遺伝子にとってトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ら（１９９２年）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５頁；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ Ｓ−Ａ．およびＧｒｅｅｎ Ｌ．Ｌ．（２００２年）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３：５９３−５９７頁；Ｌｉｔｔｌｅ Ｍ．ら（２０００年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２１：３６４−３７０頁を参照のこと）またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列のその他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意のその他の手段によって調製、発現、作製もしくは単離された抗体などを含むものとする。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する。しかし、特定の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列にとってトランスジェニックの動物が使用される場合には、インビボ体細胞突然変異誘発）に付され、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、それと関連している一方で、インビボにおけるヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然に存在しない配列である。一実施形態では、例えば、それだけには限らないが、Ｊｅｒｍｕｔｕｓら、ＰＣＴ公開番号第ＷＯ２００５／００７６９９ Ａ２号に記載されているものなどのヒトＩｇファージライブラリーを使用することなどの、当技術分野で周知の技法を使用して作製され得る、ヒトＰＲＬＲと結合することができる完全ヒト抗体が提供される。
用語「キメラ抗体」とは、ある種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列ならびに別の種に由来する定常領域配列を含む抗体、例えば、ヒト定常領域と連結しているマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
用語「ＣＤＲグラフト化抗体」とは、１つの種に由来するが、ＶＨおよび／またはＶＬの１つ以上のＣＤＲ領域の配列が、別の種のＣＤＲ配列で置換されている重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、例えば、１つ以上のマウスＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置換されている、マウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体を指す。
用語「Ｋａｂａｔ番号付け」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識」は、本明細書において同義的に使用される。当技術分野で認識されるこれらの用語は、抗体の重鎖および軽鎖可変領域中のその他のアミノ酸残基よりも可変（すなわち、超可変）であるアミノ酸残基またはその抗原結合部分を番号付けるシステムを指す（Ｋａｂａｔら（１９７１年）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ、Ｓｃｉ． １９０：３８２−３９１頁およびＫａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ第９１−３２４２）。重鎖可変領域について、超可変領域は、ＣＤＲ１のアミノ酸位置３１〜３５、ＣＤＲ２のアミノ酸位置５０〜６５およびＣＤＲ３のアミノ酸位置９５１０２の範囲である。軽鎖可変領域については、超可変領域は、ＣＤＲ１のアミノ酸位置２４〜３４、ＣＤＲ２のアミノ酸位置５０〜５６およびＣＤＲ３のアミノ酸位置８９〜９７の範囲である。
本明細書で使用される場合、用語「アクセプター」および「アクセプター抗体」とは、フレームワーク領域のうちの１つ以上のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％を提供するまたはコードする抗体または核酸配列を指す。いくつかの実施形態では、用語「アクセプター」とは、定常領域を提供するまたはコードする抗体アミノ酸配列または核酸配列を指す。さらに別の実施形態では、用語「アクセプター」とは、フレームワーク領域のうちの１つ以上および定常領域を提供するまたはコードする抗体アミノ酸配列または核酸配列を指す。特定の実施形態では、用語「アクセプター」とは、１つ以上のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または１００％を提供するまたはコードするヒト抗体アミノ酸または核酸配列を指す。この実施形態により、アクセプターは、ヒト抗体の１つ以上の特定の位置では生じない少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個または少なくとも１０個のアミノ酸残基を含有し得る。アクセプターフレームワーク領域および／またはアクセプター定常領域は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟した抗体遺伝子、機能性抗体（例えば、当技術分野で周知の抗体、開発中の抗体または市販の抗体）に由来するまたはそれらから得られる。
本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」とは、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれに３つのＣＤＲがあり、これらは可変領域のそれぞれのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される。用語「ＣＤＲセット」とは、本明細書で使用される場合、抗原と結合することができる単一の可変領域内に存在する３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なる定義がなされている。ｋａｂａｔにより記載されているシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年）および（１９９１年））は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明白な残基の番号付けシステムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、ｋａｂａｔＣＤＲと称することができる。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７頁（１９８７年）およびＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７−８８３頁（１９８９年））は、ｋａｂａｔＣＤＲ内の特定の下位部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格コンホメーションをとることを見出した。これらの下位部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と示され、ここで、「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖領域および重鎖領域を示す。これらの領域はＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと称することができ、ｋａｂａｔＣＤＲと重複する境界を有する。ｋａｂａｔＣＤＲと重複するＣＤＲを定義するその他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３−１３９頁（１９９５年））およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２（５）：７３２−４５頁（１９９６年））によって記載されている。さらにその他のＣＤＲ境界定義が、上記のシステムの１つに厳密に従わない場合もあるが、それでも、特定の残基または残基の群または全ＣＤＲでさえ、抗原結合に大幅に影響を与えないという予測または実験的知見を踏まえて、短くされる場合も、長くされる場合もあるが、ｋａｂａｔＣＤＲと重複するものとなる。本発明で使用される方法では、これらのシステムのいずれに従って定義されるＣＤＲでも利用することができるが、好ましい実施形態では、ｋａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されるＣＤＲを使用する。
本明細書で使用される場合、用語「標準的」残基とは、Ｃｈｏｔｈｉａら（どちらも参照により本明細書に組み込むＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９０７頁（１９８７年）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９（１９９２年））によって定義される特定の標準的なＣＤＲ構造を定義する、ＣＤＲまたはフレームワーク内の残基を指す。Ｃｈｏｔｈｉａらによると、多くの抗体のＣＤＲの重要な部分は、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性があるにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格コンホメーションを有する。各標準構造は、ループを形成するアミノ酸残基の連続セグメントの１セットのペプチド骨格ねじれ角を主に規定する。
本明細書で使用される場合、用語「ドナー」および「ドナー抗体」とは、１つ以上のＣＤＲを提供する抗体を指す。好ましい実施形態では、ドナー抗体は、フレームワーク領域が得られるまたはそれに由来する抗体とは異なる種に由来する抗体である。ヒト化抗体との関連で、用語「ドナー抗体」とは、１つ以上のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「フレームワーク」または「フレームワーク配列」とは、ＣＤＲを引いた可変領域の残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステムによって決定され得るので、フレームワーク配列の意味は、対応して異なる解釈になる。また、６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３）により、軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域が各鎖上の４つの小領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）に分けられ、ＣＤＲ１がＦＲ１とＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２がＦＲ２とＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３がＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。特定の小領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として特定せずに、その他により称されるフレームワーク領域とは、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わされた複数のＦＲ（ＦＲｓ）を表す。本明細書で使用される場合、ＦＲは、４つの小領域のうちの１つを表し、ＦＲｓはフレームワーク領域を構成する４つの小領域のうちの２つ以上を表す。
ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、当技術分野で公知である。本発明の一実施形態では、ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、表３および表４に記載される配列から選択される。
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本明細書において、用語「生殖系列抗体遺伝子」または「遺伝子断片」とは、特定の免疫グロブリンの発現のための遺伝子再配列および突然変異につながる成熟プロセスを受けていない、非リンパ系細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を指す（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２２（３）：１８３−２００頁（２００２年）；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ４８４：１３−３０頁（２００１年）参照のこと）。本発明の種々の実施形態によって提供される利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子は、成熟抗体遺伝子よりも、種において個体の特徴を示す必須アミノ酸配列構造を保存する可能性が高く、したがって、その種において治療上使用される場合に外来供給源に由来すると認識される可能性が低いという認識から生じる。
本明細書において、用語「重要な残基」とは、抗体、特に、ヒト化抗体の結合特異性および／または親和性に対してより影響を与える可変領域内の特定の残基を指す。重要な残基として、それだけには限らないが、以下：ＣＤＲに隣接している残基、可能性あるグリコシル化部位（Ｎ−またはＯ−グリコシル化部位のいずれかであり得る）、レア残基、抗原と相互作用できる残基、ＣＤＲと相互作用できる残基、標準残基、重鎖可変領域および軽鎖可変領域間の接触残基、バーニアゾーン内の残基および可変重鎖ＣＤＲ１のＣｈｏｔｈｉａ定義および第１の重鎖フレームワークのｋａｂａｔ定義間で重複する領域中の残基のうち１種以上が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「ヒト化抗体」は、対象とする抗原と免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域および非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその変異体、誘導体、類似体または断片である。本明細書において、ＣＤＲに関連して、用語「実質的に」とは、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つの、通常、２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）のすべてを実質的に含む。好ましくは、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖および／またはヒト化重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを始めとする免疫グロブリンの任意のクラス、ならびに制限するものではないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を始めとする任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、２以上のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含んでもよく、特定の定常ドメインは、当技術分野で周知の技術を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するよう選択され得る。
ヒト化抗体のフレームワークおよびＣＤＲ領域は、親配列と正確に対応する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークは、少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、挿入および／または欠失によって突然変異され、その結果、その部位でのＣＤＲまたはフレームワーク残基が、ドナー抗体またはコンセンサスフレームワークのいずれかと対応しなくてもよい。しかし、好ましい実施形態では、このような突然変異は、大規模なものではない。普通、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、最も好ましくは、少なくとも９５％は、親のＦＲおよびＣＤＲ配列のものと対応する。本明細書において、用語「コンセンサスフレームワーク」とは、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書において、用語「コンセンサス免疫グロブリン配列」とは、関連免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も頻繁に生じるアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ１９８７年参照のこと）。免疫グロブリンのファミリーでは、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリーにおいてその位置で最も頻繁に生じるアミノ酸によって占められている。２個のアミノ酸が等しく頻繁に生じる場合には、いずれかがコンセンサス配列中に含まれ得る。
本明細書において、「バーニア」ゾーンとは、ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ、（参照により本明細書に組み込む、１９９２年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ２２４：４８７−４９９頁）によって記載される、ＣＤＲ構造を調整し、抗原に対する適合度を微調整し得るフレームワーク残基のサブセットを指す。バーニアゾーン残基は、ＣＤＲの根底をなす層を形成し、ＣＤＲの構造および抗体の親和性に対して影響を及ぼし得る。
用語「多価結合タンパク質」は、本明細書では、２種以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を示すために使用される。多価結合タンパク質は、３つ以上の抗原結合部位を有するように操作されていることが好ましく、一般に、天然に存在しない抗体である。用語「多重特異性結合タンパク質」とは、２つ以上の関連する標的または関連しない標的と結合することができる結合タンパク質を指す。二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質とは、本明細書で使用される場合、２種以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質であり、四価または多価結合タンパク質である。このようなＤＶＤは、単一特異性、すなわち、１種の抗原と結合することができるものであってもよく、多重特異性、すなわち、２種以上の抗原と結合することができるものであってもよい。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質はＤＶＤ Ｉｇと称される。ＤＶＤ Ｉｇの半分はそれぞれ、重鎖ＤＶＤポリペプチドおよび軽鎖ＤＶＤポリペプチドならびに２つの抗原結合部位を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含み、抗原結合部位あたり、抗原結合に関与する合計６つのＣＤＲを有する。
本明細書で使用される場合、用語「中和（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ）」とは、結合タンパク質がサイトカイン受容体と特異的に結合すると、サイトカイン受容体の生物活性が中和されることを指す。中和結合タンパク質は、ｈＰＲＬＲと結合することによってｈＰＲＬＲの生物活性の阻害をもたらす中和抗体であることが好ましい。好ましくは、中和結合タンパク質は、ｈＰＲＬＲと結合し、ｈＰＲＬＲの生物活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％またはそれ以上低減する。中和結合タンパク質によるｈＰＲＬＲの生物活性の阻害は、当技術分野で周知のｈＰＲＬＲ生物活性の１つ以上の指標を測定することによって評価され得る。例えば、ＰＲＬＲ発現細胞株、例えばヒト乳癌細胞株Ｔ４７ＤにおけるＰＲＬＲ、ｐＳＴＡＴ５またはＥＲＫ１／２のリン酸化の阻害が測定され得る。あるいは、ＰＲＬＲ発現細胞株、例えばヒトＰＲＬＲをトランスフェクトしたＢａｆ３プロＢリンパ系細胞、Ｎｂ２−１１ラットリンパ腫細胞、ＰＲＬＲをトランスフェクトしたＭＤＡ−ＭＢ−２３１−ＰＲＬＲヒト乳癌細胞またはＢＴ４７４ヒト乳癌細胞の増殖の阻害が測定され得る。
用語「活性」は、抗原に対する抗体、例えばｈＰＲＬＲ抗原と結合する抗ｈＰＲＬＲ抗体の結合特異性／親和性および／または抗体、例えばｈＰＲＬＲとの結合によりｈＰＲＬＲの生物活性の阻害、例えば、ＰＲＬＲ発現細胞株、例えばヒト乳癌細胞株Ｔ４７ＤにおけるＰＲＬＲ、ｐＳＴＡＴ５もしくはＥＲＫ１／２のリン酸化の阻害、またはＰＲＬＲ発現細胞株、例えばヒトＰＲＬＲをトランスフェクトしたＢａ／Ｆ３プロＢリンパ系細胞、Ｎｂ２−１１ラットリンパ腫細胞、ＰＲＬＲをトランスフェクトしたＭＤＡ−ＭＢ−２３１−ＰＲＬＲヒト乳癌細胞もしくはＢＴ４７４ヒト乳癌細胞の増殖の阻害をもたらす抗ｈＰＲＬＲ抗体の中和力などの活性を含む。
用語「エピトープ」は、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合部分に特異的に結合することができる任意のポリペプチド決定基を含む。特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面配置を含み、特定の実施形態では、特定の３次元構造的特徴および／または特定の荷電特徴を有し得る。種々の実施形態では、エピトープは、抗原、すなわちＰＲＬＲの一次構造の直線的または連続的なエピトープ、すなわち、アミノ酸の直線的配列であり得る。あるいは、その他の実施形態では、エピトープは、抗原がその二次構造を仮定する場合、特定の３次元形状を有する立体構造エピトープであり得る。例えば、立体構造エピトープは、抗原の非直線的、すなわち非連続的なアミノ酸を含み得る。
特定の実施形態では、エピトープは、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合部分によって結合される抗原の領域である。特定の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合部分は、タンパク質および／または高分子の複合混合物中のその標的抗原を優先的に認識する場合に、抗原と特異的に結合するといえる。特定の実施形態では、抗原、すなわちＰＲＬＲのエピトープは、結合タンパク質が抗原に結合した際の結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合部分から４オングストローム（Å）以内のアミノ酸残基を含む。
本明細書において、用語「表面プラズモン共鳴」とは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出によってリアルタイム生体特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。さらなる説明のためには、Ｊｏｎｓｓｏｎ、Ｕ．ら（１９９３年）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ． ５１：１９−２６頁；Ｊｏｎｓｓｏｎ、Ｕ．ら（１９９１年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：６２０−６２７頁；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ、Ｂ．ら（１９９５年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ． ８：１２５−１３１頁；およびＪｏｈｎｎｓｏｎ、Ｂ．ら（１９９１年）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９８：２６８−２７７頁参照のこと。
用語「ｋｏｎ」とは、本明細書で使用される場合、当技術分野で公知の、抗体／抗原複合体を形成するための、抗体の抗原との会合の結合速度定数を指すものとする。
用語「ｋｏｆｆ」とは、本明細書で使用される場合、当技術分野で公知の、抗体／抗原複合体からの抗体の解離についての解離速度定を指すものとする。
用語「ＫＤ」は、本明細書で使用される場合、当技術分野で公知の、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指すものとする。
用語「標識された結合タンパク質」とは、本明細書で使用される場合、結合タンパク質の同定をもたらす標識が組み込まれたタンパク質を指す。好ましくは、標識は、例えば、放射標識されたアミノ酸の組み込みまたは印をつけたアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的方法もしくは比色法によって検出され得る酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部分のポリペプチドとの結合によって、検出可能なマーカーである。ポリペプチドのための標識の例として、それだけには限らないが、以下が挙げられる：放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、 １４Ｃ、 ３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍ）；蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドホスホール）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ；および、ガドリニウムキレートなどの磁性物質。
用語「抗体薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」は、場合によって治療用薬剤または細胞傷害性薬剤であり得る１種以上の化学的薬剤と化学的に連結した、抗体またはその抗原結合断片などの結合タンパク質を指す。本発明のＡＤＣに使用され得る薬剤の例として、それだけには限らないが、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節性薬剤、遺伝子療法のためのベクター、アルキル化剤、抗血管新生剤、代謝拮抗薬、ホウ素含有薬剤、化学保護剤、ホルモン、抗ホルモン剤、コルチコステロイド、光活性治療薬、オリゴヌクレオチド、放射性核種薬剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤および放射線増感剤が挙げられる。
用語「薬剤」または「薬物」は、本明細書では、化合物、化合物の混合物、生体高分子、または生物物質から作られている抽出物を示すよう使用される。
用語「細胞毒素」または「細胞傷害性薬剤」は、細胞に有害である（例えば、死滅させる）任意の薬剤を含む。本発明の一実施形態では、本明細書に記載の抗体は細胞傷害性薬剤とコンジュゲートしている。
本明細書において、用語「結晶」、および「結晶化された」とは、結晶の形態で存在する抗体またはその抗原結合部分と指す。結晶は、物質の固体状態の１種の形態であり、非晶質固体状態または液晶状態などのその他の形態とは別個である。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）または分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の、規則正しい、反復する３次元の配置からなる。これらの３次元配置は、この分野で十分に理解されている特定の数学的関係に従って配列される。結晶中で反復される基本単位またはビルディングブロックは、非対称単位と呼ばれる。所与の、十分に定義された結晶学的対称と一致する配列中の非対称単位の反復は、結晶の「単位格子」を提供する。３次元すべてにおける規則正しい並進による単位格子の反復は結晶を提供する。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．およびＤｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ、Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、第２版、２０１−１６頁、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９年）を参照のこと。
用語「ポリヌクレオチド」とは、本明細書で使用される場合、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれかまたはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾された形態の２つ以上のヌクレオチドのポリマー形態を指す。この用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態を含むが、二本鎖ＤＮＡであることが好ましい。
用語「単離されたポリヌクレオチド」とは、本明細書で使用される場合、その起源によって、ポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡの、または合成起源の、またはそれらのいくつかの組合せ）を意味するものとし、「単離されたポリヌクレオチド」は、天然に「単離されたポリヌクレオチド」が、それとともに見られるポリヌクレオチドのすべてまたは一部と会合しておらず；天然には連結していないポリヌクレオチドと作動可能に連結され；またはより長い配列の一部として天然には生じない。
用語「ベクター」とは、本明細書で使用される場合、それが連結している別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すものとする。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、その中にさらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターはウイルスベクターであり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノム中にライゲーションされ得るものである。特定のベクターは、それらが導入されている宿主細胞において自己複製できる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。その他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノム内に組み込まれ得、それにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、特定のベクターは、それが作動可能に連結した遺伝子の発現を導くことができる。このようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技法において有用な発現ベクターは、多くの場合、プラスミドの形態である。本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドが、ベクターの最も一般的に使用される形態であるので、互換的に使用され得る。しかし、本発明は、同等の機能を果たす、ウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターのこのようなその他の形態を含むものとする。
用語「作動可能に連結された」とは、記載された成分が、それらがその意図される方法で機能するのを可能にする関係にある近位を指す。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が、制御配列に適合する条件下で達成されるような方法でライゲーションされる。「作動可能に連結された」配列は、対象とする遺伝子と連続している発現制御配列およびトランスで作用するまたは対象とする遺伝子からある距離をおいて制御する発現制御配列の両方を含む。本明細書において、用語「発現制御配列」とは、それらがライゲーションされているコード配列の発現およびプロセシングを達成するために必須であるポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列として、適当な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列；スプライシングおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強する配列；および望ましい場合には、タンパク質分泌を増強する配列が挙げられる。このような制御配列の性質は、宿主生物に応じて異なり；原核生物では、このような制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含み；真核生物では、一般に、このような制御配列は、プロモーターおよび転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、その存在が、発現およびプロセシングにとって不可欠である成分を含むものとし、また、その存在が有利であるさらなる成分、例えば、リーダー配列および融合パートナー配列も含み得る。本発明のタンパク質構築物は、発現カセット、ベクター、組換え宿主細胞ならびに組換えポリタンパク質および単一のオープンリーディングフレーム由来のタンパク質前駆体の組換え発現およびタンパク質分解プロセシングのための方法（例えば、参照により本明細書に組み込むＷＯ２００７／０１４１６２）を含めた、当技術分野で公知の発現ベクターおよび宿主細胞を使用して発現させ、精製することができる。
本明細書において定義される「形質転換」とは、それによって外因性ＤＮＡが宿主細胞に入る任意のプロセスを指す。形質転換は、当技術分野で周知の種々の方法を使用して自然条件または人口条件下で起こり得る。形質転換は、原核生物細胞または真核生物細胞の宿主細胞中に外来核酸配列を挿入するための任意の公知の方法に依存し得る。方法は、形質転換されている宿主細胞に基づいて選択され、それだけには限らないが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクションおよび微粒子銃を挙げることができる。このような「形質転換された」細胞は、挿入されたＤＮＡが、自己複製プラスミドとして、または宿主染色体の一部としてのいずれかで複製できる安定に形質転換された細胞を含む。それらはまた、挿入されたＤＮＡまたはＲＮＡを限定された期間、一時的に発現する細胞を含む。
用語「組換え宿主細胞」（または簡単に「宿主細胞」）とは、本明細書で使用される場合、外因性ＤＮＡが導入されている細胞を指すものとする。このような用語は、特定の対象とする細胞だけでなく、このような細胞の後代も指すことが意図されていることが理解されるべきである。突然変異または環境の影響のいずれかによって後継の世代では特定の修飾が起こり得るので、このような後代は、実際は、親細胞と同一でない場合もあるが、本明細書において、依然として用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。好ましくは、宿主細胞は、生物界のいずれかから選択される原核生物細胞および真核生物細胞を含む。好ましい真核生物細胞は、原生生物、真菌、植物および動物細胞を含む。最も好ましくは、宿主細胞として、それだけには限らないが、原核生物細胞株大腸菌；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ ２９３およびＣＯＳ；昆虫細胞株Ｓｆ９；および真菌細胞サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が挙げられる。
標準技術が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成および組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）のために使用され得る。酵素反応および精製技術は、製造業者の使用説明書に従って、または当技術分野でよく達成されるように、または本明細書に記載されるように実施され得る。前述の技術および手順は、当技術分野で周知の従来の方法に従って、本明細書を通じて引用され論じられる種々の一般的参考文献およびより特定の参考文献に記載されるように概して実施され得る。例えば、いかなる目的に関しても参照により本明細書に組み込む、Ｓａｍｂｒｏｏｋら Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照のこと。
当技術分野で公知のおよび本明細書で使用される場合、「トランスジェニック生物」は、導入遺伝子を含有する細胞を有する生物を指し、ここで、生物（または生物の先祖）に導入された導入遺伝子は、生物では天然に発現されないポリペプチドを発現する。「導入遺伝子」は、トランスジェニック生物が発達する細胞のゲノム中に安定に、作動可能に組み込まれ、トランスジェニック生物の１種以上の細胞種または組織においてコードされた遺伝子産物の発現を指示するＤＮＡ構築物である。
用語「調節する（ｒｅｇｕｌａｔｅ）」および「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」は、本明細書において、同義的に使用され、対象とする分子の活性（例えば、ｈＰＲＬＲの生物活性）における変化または変更を指す。調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）は、対象とする分子の特定の活性または機能の規模の増大または減少であり得る。分子の例示的活性および機能として、それだけには限らないが、結合特徴、酵素活性、細胞受容体活性化およびシグナル変換が挙げられる。
相応して、本明細書において、用語「モジュレーター」とは、対象とする分子の活性または機能（例えば、ｈＰＲＬＲの生物活性）を変化または変更できる化合物である。例えば、モジュレーターは、モジュレーターの不在下で観察された活性または機能の規模と比較して、分子の特定の活性または機能の規模の増大または減少を引き起こし得る。特定の実施形態では、モジュレーターは、分子の少なくとも１種の活性または機能の規模を減少させる阻害剤である。例示的阻害剤として、それだけには限らないが、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディー（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）、炭水化物または小さい有機分子が挙げられる。ペプチボディー（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）は記載されている。例えば、ＷＯ０１／８３５２５。
本明細書において、用語「アゴニスト」とは、対象とする分子と接触させると、アゴニストの不在下で観察された活性または機能の規模と比較して、分子の特定の活性または機能の規模の増大を引き起こすモジュレーターを指す。対象とする特定のアゴニストとして、それだけには限らないが、ｈＰＲＬＲポリペプチドまたはポリペプチド、核酸、炭水化物またはｈＰＲＬＲと結合する任意のその他の分子を挙げることができる。
本明細書において、用語「アンタゴニスト」または「阻害剤」とは、対象とする分子と接触させると、アンタゴニストの不在下で観察された活性または機能の規模と比較して、分子の特定の活性または機能の規模の減少を引き起こすモジュレーターを指す。対象とする特定のアンタゴニストとして、ｈＰＲＬＲの生物学的活性または免疫学的活性を遮断または調節するものが挙げられる。ｈＰＲＬＲのアンタゴニストおよび阻害剤として、それだけには限らないが、タンパク質、核酸、炭水化物またはｈＰＲＬＲと結合する任意のその他の分子を挙げることができる。
用語「プロラクチンとの結合を阻害する」とは、結合タンパク質の、プロラクチン（「ＰＲＬ」）とｈＰＲＬＲの結合を妨げる能力を指す。このようなプロラクチンとの結合の阻害により、プロラクチンとｈＰＲＬＲの結合によって媒介される生物活性が低下または消滅する。
本明細書において、用語「有効量」とは、障害もしくは１種以上のその症状の重篤度および／もしくは期間を低減もしくは寛解させる、障害の前進を防止する、障害の退縮を引き起こす、障害と関連している１種以上の症状の再発、発生、発症もしくは進行を防止する、障害を検出する、または別の治療（例えば、予防薬または治療薬）の予防的効果または治療的効果を増強もしくは改善するのに十分である治療の量を指す。
本明細書において、用語「試料」とは、その広い意味で使用される。本明細書において、「生体試料」とは、それだけには限らないが、生物または以前は生きていた物に由来する物質の任意の量を含む。このような生物として、それだけには限らないが、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよびその他の動物が挙げられる。このような物質として、それだけには限らないが、血液、血清、尿、滑液、細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「ＬＦＡ１０２」とは、ＷＯ２００８０２２２９５Ａ２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）に記載のＩｇＧ１カッパ亜型の抗ＰＲＬＲヒト化抗体を指し、配列番号１５６に記載されている重鎖および配列番号１５７に記載されている軽鎖を含む。ＬＦＡ１０２は、ＰＲＬＲの推定される二量体化領域と非リガンド競合的に結合し、ＰＲＬに誘導されるシグナル伝達を阻害する。ＬＦＡ１０２は、受容体の二量体化の界面を含有すると考えられている膜の近位にあるＰＲＬＲのＤ２ドメインと結合する。ＰＲＬＲはＤ１ドメインとは結合しない（例えば、Ｄａｍｉａｎｏら、２０１３年、Ｍｏｌｅｃ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｉｃｓ、１２：２９５−３０５頁を参照のこと）。このように、ＬＦＡ１０２は、大多数のリガンド結合ポケットを含有するＰＲＬＲのＤ１ドメインと直接接触しないので、ＰＲＬＲ二量体化を阻害することができ、一方で、ＬＦＡ１０２は、プロラクチンが同時にＰＲＬＲと結合することを可能にすると思われる（例えば、Ｄａｍｉａｎｏら、２０１３年、Ｍｏｌｅｃ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｉｃｓ、１２：２９５−３０５頁およびｖａｎら、２０１０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４０４：１１２−２６頁を参照のこと）。
Ｉ．ヒトｈＰＲＬＲと結合する抗体
本発明の一態様は、高親和性、遅い解離速度および高い中和能を有するＰＲＬＲと結合する、単離されたマウスモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。本発明の第２の態様は、ＰＲＬＲと結合するキメラ抗体を提供する。本発明の第３の態様では、ＰＲＬＲと結合するヒト化抗体またはその抗原結合部分が提供される。抗体またはその部分は、単離された抗体であることが好ましい。本発明の抗体は、中和ヒト抗ＰＲＬＲ抗体であることが好ましい。
Ａ．抗ＰＲＬＲ抗体を作製する方法
本発明の抗体は、当技術分野で公知のいくつかの技術のうちいずれかによって作製され得る。
１．ハイブリドーマ技術を使用する抗ＰＲＬＲモノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマの使用、組換えおよびファージディスプレイ技術またはそれらの組合せを含めた、当技術分野で公知のさまざまな技術を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野で公知のものおよび例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版 １９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１年）（その全文が参照により組み込まれた前記の参考文献）に教示されるものを始めとするハイブリドーマ法を使用して製造され得る。本明細書において、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって製造される抗体に制限されないということも留意されたい。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物クローン、原核生物クローンまたはファージクローンを含めた単一クローンに由来する抗体を指すのであって、それによって製造される方法を指すのではない。
ハイブリドーマ技術を使用して特異的抗体を製造し、スクリーニングする方法は、日常的なものであり、当技術分野で周知である。一実施形態では、本発明は、モノクローナル抗体を作製する方法ならびに本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含む方法によって製造された抗体を提供し、これでは、好ましくは、ハイブリドーマが、本発明の抗原を用いて免疫処置されたマウスから単離された脾細胞を、骨髄腫細胞と融合すること、次いで、融合から得られたハイブリドーマを、本発明のポリペプチドと結合できる抗体を分泌するハイブリドーマクローンについてスクリーニングすることによって作製される（実施例１を参照のこと）。手短には、マウスは、ＰＲＬＲ抗原を用いて免疫処置され得る。好ましい一実施形態では、ＰＲＬＲ抗原は、免疫応答を刺激するようアジュバントとともに投与される。このようなアジュバントとして、完全または不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が挙げられる。このようなアジュバントは、ポリペプチドを局所沈着に隔離することによって、それが迅速分散することから保護し得る、またはそれらは、宿主を、マクロファージおよび免疫系のその他の成分にとって走化性である因子を分泌するよう刺激する物質を含有し得る。好ましくは、ポリペプチドが投与される場合には、免疫処置スケジュールは、数週間にわたって広がっているポリペプチドの２回以上の投与を含む。
ＰＲＬＲ抗原を用いて動物を免疫処置した後、抗体および／または抗体を製造する細胞が動物から得られ得る。抗ＰＲＬＲ抗体を含有する血清が、動物を出血させるまたは屠殺することによって動物から得られる。動物から得られると血清が使用され得、免疫グロブリン画分が血清から得られ得るまたは抗ＰＲＬＲ抗体が血清から精製され得る。この方法で得られた血清または免疫グロブリンは、ポリクローナルであり、したがって、不均一な特性のアレイを有する。
免疫応答が検出されると、例えば、抗原ＰＲＬＲに対して特異的な抗体を、マウス血清において検出し、マウス脾臓を回収し、脾細胞を単離する。次いで、周知の技術によって脾細胞を任意の適した骨髄腫細胞、例えば、ＡＴＣＣから入手可能である細胞株ＳＰ２０から得た細胞に融合する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によってクローニングする。次いで、ハイブリドーマクローンを、ＰＲＬＲと結合できる抗体を分泌する細胞について当技術分野で公知の方法によってアッセイする。一般に、高レベルの抗体を含有する腹水を、陽性ハイブリドーマクローンを用いてマウスを免疫処置することによって作製できる。
別の実施形態では、抗体を産生する不死化されたハイブリドーマは、免疫処置された動物から調製され得る。免疫処置後、当技術分野で周知であるように、動物を屠殺し、脾臓Ｂ細胞を不死化された骨髄腫細胞と融合する。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前掲参照のこと。好ましい一実施形態では、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌細胞株）。融合し、抗生物質選択した後ハイブリドーマを、ＰＲＬＲまたはその部分またはＰＲＬＲを発現する細胞を使用してスクリーニングする。好ましい実施形態では、最初のスクリーニングを、酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、好ましくはＥＬＩＳＡを使用して実施する。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、参照により本明細書に組み込む、ＷＯ００／３７５０４に提供されている。
抗ＰＲＬＲ抗体を産生するハイブリドーマを選択し、クローニングし、以下にさらに論じられる、頑強なハイブリドーマ増殖、高い抗体産生および望ましい抗体特徴と含めた望ましい特徴についてさらにスクリーニングする。ハイブリドーマは、培養され、同系動物において、免疫系を欠く動物、例えば、ヌードマウスにおいてインビボで、またはインビトロで細胞培養において拡大され得る。ハイブリドーマを選択、クローニングおよび拡大する方法は、当業者に周知である。
好ましい一実施形態では、ハイブリドーマは、上記されるマウスハイブリドーマである。別の好ましい実施形態では、ハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマなどの非ヒト、非マウス種において産生される。別の実施形態では、ハイブリドーマは、ヒトハイブリドーマであり、これでは、ヒト非分泌性骨髄腫が、抗ＰＲＬＲ抗体を発現するヒト細胞と融合される。
特定のエピトープを認識する抗体断片は、公知の技術によって作製され得る。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を製造するよう）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を製造するよう）などの酵素を使用する免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって製造され得る。Ｆ（ａｂ’）２断片は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨＩドメインを含有する。
２．ＳＬＡＭを使用する抗ＰＲＬＲモノクローナル抗体
本発明の別の態様では、組換え抗体は、米国特許第５，６２７，０５２号、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０２５５１およびＢａｂｃｏｃｋ、Ｊ．Ｓ．ら（１９９６年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：７８４３−７８４８頁）に記載される、選択されたリンパ球抗体法（ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｅｔｈｏｄ）（ＳＬＡＭ）と当技術分野で呼ばれる手順を使用して、単一の、単離されたリンパ球から作製される。この方法では、セクション１に記載される、対象とする抗体を分泌する単細胞、例えば、免疫処置された動物のいずれか１種から得られたリンパ球は、抗原特異的溶血プラークアッセイを使用してスクリーニングされ、これでは、抗原ＰＲＬＲ、ＰＲＬＲのサブユニットまたはその断片が、ビオチンなどのリンカーを使用してヒツジ赤血球にカップリングされ、ＰＲＬＲに対して特異性を有する抗体を分泌する単細胞を同定するために使用される。対象とする抗体を分泌する細胞を同定した後、重鎖および軽鎖可変領域ｃＤＮＡが逆転写酵素−ＰＣＲによって細胞からレスキューされ、次いで、これらの可変領域が、ＣＯＳまたはＣＨＯ細胞などの哺乳動物宿主細胞において、適当な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）との関連で発現され得る。インビボで選択されたリンパ球から得られた増幅された免疫グロブリン配列を用いてトランスフェクトされた宿主細胞は、インビトロでさらなる分析および選択を、例えば、トランスフェクトされた細胞をパニングし、ＰＲＬＲに対する抗体を発現する細胞を単離することによって受け得る。増幅された免疫グロブリン配列は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１およびＰＣＴ公開番号ＷＯ００／５６７７２に記載されているインビトロ親和性成熟法などによってインビトロでさらに操作され得る。
３．トランスジェニック動物を使用する抗ＰＲＬＲモノクローナル抗体
本発明の別の実施形態では、抗体を、ＰＲＬＲ抗原を用いてヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部またはすべてを含む非ヒト動物を免疫処置することによって産生する。好ましい一実施形態では、非ヒト動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウス、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きな断片を含み、マウス抗体産生に欠陥のある操作されたマウス株である。例えば、Ｇｒｅｅｎら Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３−２１頁（１９９４年）および米国特許第５，９１６，７７１号、同５，９３９，５９８号、同５，９８５，６１５号、同５，９９８，２０９号、同６，０７５，１８１号、同６，０９１，００１号、同６，１１４，５９８号、および同６，１３０，３６４号参照のこと。１９９１年７月２５日に発行されたＷＯ９１／１０７４１、１９９４年２月３日に発行されたＷＯ９４／０２６０２、どちらも１９９６年１０月３１日に発行されたＷＯ９６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５、１９９８年４月２３日に発行されたＷＯ９８／１６６５４、１９９８年６月１１日に発行されたＷＯ９８／２４８９３、１９９８年１１月１２日に発行されたＷＯ９８／５０４３３、１９９９年９月１０日に発行されたＷＯ９９／４５０３１、１９９９年１０月２１日に発行されたＷＯ９９／５３０４９、２０００年２月２４日に発行されたＷＯ００／０９５６０、および２０００年６月２９日に発行されたＷＯ００／３７５０４も参照のこと。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、十分なヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトＭａｂを作製する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびｘ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの、生殖系列立体配置ＹＡＣ断片の導入によってヒト抗体レパートリーのおよそ８０％を含有する。その開示内容を参照により本明細書に組み込む、Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６頁（１９９７年）、ＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ． １８８：４８３−４９５頁（１９９８年）参照のこと。
４．組換え抗体ライブラリーを使用する抗ＰＲＬＲモノクローナル抗体
本発明の抗体を作製するためにインビトロ法も使用され得、ここで、所望の結合特異性を有する抗体を同定するために、抗体ライブラリーがスクリーニングされる。このような組換え抗体ライブラリーをスクリーニングする方法は、当技術分野で周知であり、例えば、Ｌａｎｄｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄら、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓら（１９９１年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０−１３７２頁；Ｈａｙら（１９９２年）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、３：８１−８５頁；Ｈｕｓｅら（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１頁；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらＮａｔｕｒｅ（１９９０年） ３４８：５５２−５５４頁；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３年）ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５−７３４頁；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２年）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６：８８９−８９６頁；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８頁；Ｇｒａｍら（１９９２年）ＰＮＡＳ ８９：３５７６−３５８０頁；Ｇａｒｒａｄら（１９９１年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７３−１３７７頁；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１年）Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９：４１３３−４１３７頁；ならびにＢａｒｂａｓら（１９９１年） ＰＮＡＳ ８８：７９７８−７９８２頁、米国特許出願公開第２００３０１８６３７４号、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１に記載される方法が挙げられ、各々の開示内容を参照により本明細書に組み込む。
組換え抗体ライブラリーは、ＰＲＬＲまたは細胞外ドメインなどのＰＲＬＲの一部を用いて免疫処置した被験体に由来するものであり得る。または、組換え抗体ライブラリーは、ヒトＰＲＬＲを用いて免疫処置されていないヒト被験体から得たヒト抗体ライブラリーなど、天然被験体すなわち、ＰＲＬＲを用いて免疫処置されていないものに由来し得る。本発明の抗体は、ヒトＰＲＬＲを含むペプチドを用いて組換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、それによってＰＲＬＲを認識する抗体を選択することによって選択される。このようなスクリーニングおよび選択を実施する方法は、前述の段落における参考文献に記載されるなど、当技術分野で周知である。特定のＫｏｆｆ速度定数でヒトＰＲＬＲから解離するものなど、ｈＰＲＬＲに対して特定の結合親和性を有する本発明の抗体を選択するために、表面プラズモン共鳴の当技術分野で公知の方法が使用されて、所望のＫｏｆｆ速度定数を有する抗体が選択され得る。特定のＩＣ５０を有するものなど、ｈＰＲＬＲに対して特定の中和活性を有する本発明の抗体を選択するために、ｈＰＲＬＲ活性の阻害を評価するための当技術分野で公知の標準法が使用され得る。
一態様では、本発明は、ヒトＰＲＬＲと結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。好ましくは、抗体は、中和抗体である。種々の実施形態では、抗体は、組換え抗体またはモノクローナル抗体である。
例えば、本発明の抗体はまた、当技術分野で公知の種々のファージディスプレイ法を使用して作製され得る。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保持するファージ粒子の表面にディスプレイされる。特に、このようなファージは、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために利用され得る。対象とする抗原と結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識された抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕獲された抗原を使用して選択または同定され得る。これらの方法において使用されるファージは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換えによって融合された、Ｆａｂ、Ｆｖまたはジスルフィドによって安定化されたＦｖ抗体ドメインを有するファージから発現されるｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む糸状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ法の例として、それぞれを参照によりその全体を本明細書に組み込む、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１−５０頁（１９９５年）；Ａｍｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７−１８６頁（１９９５年）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２４：９５２−９５８頁（１９９４年）；Ｐｅｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ １８７ ９−１８頁（１９９７年）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１−２８０頁（１９９４年）；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；および米国特許第５，６９８，４２６号；同５，２２３，４０９号；同５，４０３，４８４号；同５，５８０，７１７号；同５，４２７，９０８号；同５，７５０，７５３号；同５，８２１，０４７号；同５，５７１，６９８号；同５，４２７，９０８号；同５，５１６，６３７号；同５，７８０，２２５号；同５，６５８，７２７号；同５，７３３，７４３号；および同５，９６９，１０８号に開示されるものが挙げられる。
上記の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージから抗体コーディング領域が単離され、ヒト抗体または任意のその他の所望の抗原結合断片を含む全抗体を作製するために使用され、例えば、以下に詳細に記載される哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含めた任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片を組換え製造するための技術も、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４−８６９頁（１９９２年）；およびＳａｗａｉら、ＡＪＲＩ ３４：２６−３４頁（１９９５年）；およびＢｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３頁（１９８８年）（前記文献を、参照によりその全体を本明細書に組み込む）に開示されるものなど、当技術分野で公知の方法を使用して使用され得る。一本鎖Ｆｖおよび抗体を製造するために使用され得る技術の例として、米国特許第４，９４６，７７８号および同５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８頁（１９９１年）；Ｓｈｕら、ＰＮＡＳ ９０：７９９５−７９９９頁（１９９３年）；およびＳｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４１頁（１９８８年）に記載されるものが挙げられる。
ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリーのスクリーニングの代替として、大きなコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための当技術分野で公知のその他の方法論が、本発明の二重特異性抗体の同定に適用され得る。代替発現系の１つの種類として、ＳｚｏｓｔａｋおよびＲｏｂｅｒｔｓによるＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／３１７００に、ならびにＲｏｂｅｒｔｓ、Ｒ．Ｗ．およびＳｚｏｓｔａｋ、Ｊ．Ｗ．（１９９７年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１２２９７−１２３０２頁に記載される、組換え抗体ライブラリーが、ＲＮＡ−タンパク質融合物として発現されるものがある。この系では、ピューロマイシン、ペプチジルアクセプター抗生物質を３’末端に保持する合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳によって、ｍＲＮＡおよびそれがコードするペプチドまたはタンパク質間の共有結合融合物が作製される。したがって、特異的ｍＲＮＡは、コードされたペプチドまたはタンパク質、例えば、抗体またはその部分の特性、例えば、抗体またはその部分の二重特異性抗原との結合に基づいて、ｍＲＮＡの複雑な混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリー）から濃縮され得る。このようなライブラリーのスクリーニングから回収される抗体またはその部分をコードする核酸配列は、上記の組換え手段によって（例えば、哺乳動物宿主細胞において）発現され得、さらに、突然変異が、最初に選択された配列中に導入されているｍＲＮＡ−ペプチド融合物のスクリーニングのさらなるラウンドによって、または上記の組換え抗体のインビトロでの親和性成熟のためのその他の方法によってのいずれかで、さらなる親和性成熟に付され得る。
別のアプローチでは、本発明の抗体はまた、当技術分野で公知の酵母ディスプレイ法を使用して作製され得る。酵母ディスプレイ法では、抗体ドメインを酵母細胞壁に繋ぎ止め、それらを酵母の表面上にディスプレイするために遺伝学的方法が使用される。特に、このような酵母は、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために利用され得る。本発明の抗体を作製するために使用され得る酵母ディスプレイ法の例として、参照により本明細書に組み込むＷｉｔｔｒｕｐら（米国特許第６，６９９，６５８号）に開示されるものが挙げられる。
Ｂ．組換えＰＲＬＲ抗体の製造
本発明の抗体は、当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれかによって製造され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターが、標準技術によって宿主細胞中にトランスフェクトされている宿主細胞からの発現。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物の宿主細胞に導入するためによく使用されるさまざまな技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含するものとする。原核生物または真核生物の宿主細胞のいずれかにおいて、本発明の抗体を発現することが可能であるが、真核生物細胞における抗体の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞においてが最も好ましいが、これは、このような真核生物細胞（特に、哺乳動物細胞）は、原核生物細胞よりも、適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌する可能性が高いためである。
本発明の組換え抗体を発現するための好ましい哺乳動物宿主細胞として、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｒ．Ｊ．ＫａｕｆｍａｎおよびＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２年） Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １５９：６０１−６２１頁に記載されたＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用される、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ（１９８０年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６−４２２０頁に記載されたｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現、より好ましくは、宿主細胞が増殖される培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって製造される。抗体は、標準タンパク質精製法を使用して培養培地から回収され得る。
宿主細胞はまた、機能的抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子を製造するために使用され得る。上記の手順に対する変法は、本発明の範囲内にあるということは理解されよう。例えば、本発明の抗体の軽鎖および／または重鎖のいずれかの機能的断片をコードするＤＮＡを用いて、宿主細胞をトランスフェクトすることが望ましいものであり得る。組換えＤＮＡ技術はまた、対象とする抗原との結合にとって必須ではない、軽鎖および重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部またはすべてを除去するためにも使用され得る。このような末端切断型ＤＮＡ分子から発現された分子もまた、本発明の抗体によって包含される。さらに、標準化学的架橋法によって本発明の抗体を第２の抗体に架橋することによって、一方の重鎖および一方の軽鎖が本発明の抗体でありもう一方の重鎖および軽鎖が対象の抗原以外の抗原に対して特異的である二機能性抗体も製造され得る。
抗体またはその抗原結合部分を組換え発現するための好ましい系では、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組換え発現ベクター内では、抗体重鎖および軽鎖遺伝子は、各々、この遺伝子の高レベルの転写を駆動するためにＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに作動可能に連結されている。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターでトランスフェクトされているＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保持する。選択された形質転換体宿主細胞は、抗体重鎖および軽鎖の発現を可能にするよう培養され、無傷の抗体が培養培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収するために、標準分子生物学技術が使用される。さらに、本発明は、本発明の宿主細胞を、本発明の組換え抗体が合成されるまで適した培養培地中で培養することによって、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。この方法は、培養培地から組換え抗体を単離することをさらに含み得る。
１．ヒト化抗ＰＲＬＲ抗体
表５は、本発明の好ましいヒト化抗ｈＰＲＬＲ抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列の一覧である。
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本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ１」とは、（ｉ）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖を１つ；ならびに（ｉｉ）配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を１つ含む抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ２」とは、（ｉ）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０および配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖を１つ；ならびに（ｉｉ）配列番号６４、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を１つ含む抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ３」とは、（ｉ）配列番号７０；配列番号７４；配列番号７５および配列番号７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖を１つ；ならびに（ｉｉ）配列番号７８、配列番号８２および配列番号８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を１つ含む抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ４」とは、（ｉ）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖を１つ；ならびに（ｉｉ）配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を１つ含む抗体を指す。
特定の実施形態では、本発明は、以下の表６に記載の重鎖および軽鎖配列を有するヒト化抗体Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４およびＡｂ５５を提供する。
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一実施形態では、本発明は、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ１４に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ１５に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ１６に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ１７に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ１８に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ１９に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２０に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２１に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２２に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２３に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２４に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２５に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２６に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２７に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２８に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ２９に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３０に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３１に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３２に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３３に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３４に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３５に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３６に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３７に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３８に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ３９に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４０に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４１に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４２に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４３に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４４に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４５に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４６に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４７に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４８に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ４９に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ５０に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ５１に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ５２に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１５３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ５３に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１５４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ５４に関する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１５５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Ａｂ５５に関する。
前述の単離された抗ＰＲＬＲ抗体ＣＤＲ配列により、本発明に従って単離され、以下の表７ａまたは７ｂに列挙されているＣＤＲ配列を含むポリペプチドを含む新規のＰＲＬＲ結合タンパク質のファミリーが確立される。好ましいＰＲＬＲ結合性および／またはｈＰＲＬＲに対する中和活性を有する本発明のＣＤＲを作製および選択するために、それだけには限らないが、本明細書に具体的に記載されているものを含めた、本発明の結合タンパク質を作製し、これらの結合タンパク質のＰＲＬＲ結合性および／または中和特性を評価するための当技術分野で公知の標準の方法が使用され得る。
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２．抗ＰＲＬＲキメラ抗体
キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体およびヒト免疫グロブリン定常領域に由来する可変領域を有する抗体などの抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を製造する方法は、当技術分野で公知である。例えば、その全文が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２頁（１９８５年）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４頁（１９８６年）；Ｇｉｌｌｉｅｓら（１９８９年）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２頁；米国特許第５，８０７，７１５号；同４，８１６，５６７号および同４，８１６，３９７号参照のこと。さらに、適当な生物活性のヒト抗体分子に由来する遺伝子と一緒に、適当な抗原特異性のマウス抗体分子から遺伝子をスプライシングすることによって「キメラ抗体」を製造するために開発された技術が使用され得る。例えば、そのそれぞれが参照によりその全文が本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ８１：８５１−８５５頁；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、１９８４年、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８頁；Ｔａｋｅｄａら、１９８５年、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２−４５４頁参照のこと。
特定の実施形態では、本発明のキメラ抗体は、以下の表８に記載されている配列番号１１２；配列番号１１３；配列番号１１４；配列番号１１５；配列番号１１６；配列番号１１７；配列番号１１８；配列番号１１９または配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１０３；配列番号１０４；配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７；配列番号１０８；配列番号１０９；配列番号１１０または配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
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マウス抗体Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２およびＡｂ１３の可変重鎖アミノ酸配列のアラインメントが図１および３に示されている。マウス抗体Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２およびＡｂ１３の可変軽鎖アミノ酸配列のアラインメントが図２および４に示されている。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ５」とは、配列番号１１２に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０３に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ５」とは、配列番号１１２に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１０３に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ６」とは、配列番号１１３に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０４に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ６」とは、配列番号１１３に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１０４に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ７」とは、配列番号１１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０５に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ７」とは、配列番号１１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１０５に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ８」とは、配列番号１１５に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０６に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ８」とは、配列番号１１５に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１０６に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ９」とは、配列番号１１６に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０７に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ９」とは、配列番号１１６に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１０７に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ１０」とは、配列番号１１７に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０８に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ１０」とは、配列番号１１７に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１０８に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ１１」とは、配列番号１１８に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０９に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ１１」とは、配列番号１１８に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１０９に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ１２」とは、配列番号１１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１０に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ１２」とは、配列番号１１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１１０に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「Ａｂ１３」とは、配列番号１２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、用語「ｃｈＡｂ１３」とは、配列番号１２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列、配列番号１０に記載の定常重鎖アミノ酸配列、配列番号１１１に記載の可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１２に記載の定常軽鎖アミノ酸配列を含むキメラ抗体を指す。
３．抗ＰＲＬＲヒト化抗体の作製
ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域を有する所望の抗原と結合する非ヒト種抗体に由来する抗体分子である。既知ヒトＩｇ配列は、例えば、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ−／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ−／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−ｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／−ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌに開示されている。参照により本明細書に各々、全文が組み込まれる、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐｔ． Ｈｅａｌｔｈ （１９８３年）。免疫原性を低減するまたは結合、親和性、結合速度、解離速度、アビディティー、特異性、半減期もしくは当技術分野で公知の任意のその他の適した特徴を低減、増強もしくは改変するために、このような移入された配列が使用され得る。
ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変更、好ましくは、改善するためにＣＤＲドナー抗体に由来する対応する残基で置換され得る。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法によって、例えば、抗原結合にとって重要であるフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリングおよび特定の位置の通常のフレームワーク残基を同定するための配列比較によって同定される（例えば、参照によってその全文が本明細書に組み込まれる、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３頁（１９８８年）参照のこと）。３次元免疫グロブリンモデルはよく利用され、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列のあり得る３次元立体構造を例示し、示すコンピュータプログラムが利用可能である。これらのディスプレイの観察によって、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のあり得る役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原と結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基は、標的抗原に対する親和性の増大などの所望の抗体特徴が達成されるようにコンセンサス配列および移入配列から選択され、組み合わされ得る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接に、最も実質的に関与する。抗体は、それだけには限らないが、それに列挙される参考文献を含め、参照によって各々全文が組み込まれる、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２頁（１９８６年）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４頁（１９８８年）、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２２９６頁（１９９３年）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １９６：９０１頁（１９８７年）、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ． ８９：４２８５頁（１９９２年）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２６２３頁（１９９３年）、Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２８（４／５）：４８９−４９８頁（１９９１年）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４頁（１９９４年）；Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３頁（１９９４年）；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／０９９６７、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１３３４、ＧＢ９１／０１１３４、ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ９０／１４４３０、ＥＰ２２９，２４６、ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９，５９６、ＥＰ２３９，４００、米国特許第５，５６５，３３２号，同５，７２３，３２３号，同５，９７６，８６２号，同５，８２４，５１４号，同５，８１７，４８３号，同５８１４４７６号、同５７６３１９２号、同５７２３３２３号、同５７６６８８６号、同５，７１４，３５２号、同６，２０４，０２３号、同６，１８０，３７０号、同５，６９３，７６２号、同５，５３０，１０１号、同５，５８５，０８９号、同５，２２５，５３９号；同４，８１６，５６７号に記載されるものなど当技術分野で公知の種々の技術を使用してヒト化され得る。
抗ＰＲＬＲヒト化抗体の例が上のセクション１において提供されている。
４．さらなる競合抗体
用語「競合抗体」とは、本明細書では、同じ分子または安定であるが非共有結合により連結した超分子実体、好ましくは同じ分子、すなわちＰＲＬＲを標的とする任意の数の抗体であって、少なくとも１つが、好ましくはその他の抗体のこの標的エピトープへの接近を立体的に妨害することによって、または標的実体におけるその他の抗体に対する標的の親和性を低下させるコンホメーションを誘導および／または安定化することによって、より好ましくは、その他の抗体の標的エピトープに十分に近い、それと重複していている、またはそれと同一である、最も好ましくはそれと重複しているまたは同一である、特にそれと同一であるエピトープと結合することによりその他の抗体の標的エピトープへの接近を直接遮断することによって別の測定可能な結合を特異的に低下させることができる抗体を指す。本明細書では、２つのエピトープは、それらの化学構造、好ましくはそれらのアミノ酸配列の一部を共有している場合、「重複している」といわれ、それらの化学構造、好ましくはそれらのアミノ酸配列が同一である場合、「同一である」といわれる。
特定の実施形態では、競合抗体またはその抗原結合部分は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８、Ａｂ９、ｃｈＡｂ９、Ａｂ１０、ｃｈＡｂ１０、Ａｂ１１、ｃｈＡｂ１１、Ａｂ１２、ｃｈＡｂ１２、Ａｂ１３、ｃｈＡｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４またはＡｂ５５と競合する抗体またはその抗原結合部分である。種々の実施形態では、結合は、実施例４に記載されているプロトコールに従ってアッセイすることができる。
一実施形態では、本発明は、Ａｂ１と競合する抗体、すなわち、（ｉ）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖を１つ；および（ｉｉ）配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を１つ含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２と競合する抗体、すなわち、（ｉ）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０および配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖を１つ；ならびに（ｉｉ）配列番号６４、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を１つ含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３と競合する抗体、すなわち、（ｉ）配列番号７０；配列番号７４；配列番号７５および配列番号７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖を１つ；ならびに（ｉｉ）配列番号７８、配列番号８２および配列番号８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を１つ含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４と競合する抗体、すなわち、（ｉ）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖を１つ；ならびに（ｉｉ）配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を１つ含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ５と競合する抗体、すなわち、配列番号１１２に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０３に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ６と競合する抗体、すなわち、配列番号１１３に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０４に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ７と競合する抗体、すなわち、配列番号１１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０５に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ８と競合する抗体、すなわち、配列番号１１５に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０６に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ９と競合する抗体、すなわち、配列番号１１６に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０７に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１０と競合する抗体、すなわち、配列番号１１７に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０８に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１１と競合する抗体、すなわち、配列番号１１８に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０９に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１２と競合する抗体、すなわち、配列番号１１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１０に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１３と競合する抗体、すなわち、配列番号１２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１４と競合する抗体、すなわち、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１５と競合する抗体、すなわち、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１６と競合する抗体、すなわち、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１７と競合する抗体、すなわち、配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１８と競合する抗体、すなわち、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ１９と競合する抗体、すなわち、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２０と競合する抗体、すなわち、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２１と競合する抗体、すなわち、配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２２と競合する抗体、すなわち、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２３と競合する抗体、すなわち、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２４と競合する抗体、すなわち、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２５と競合する抗体、すなわち、配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２６と競合する抗体、すなわち、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２７と競合する抗体、すなわち、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２８と競合する抗体、すなわち、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ２９と競合する抗体、すなわち、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３０と競合する抗体、すなわち、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３１と競合する抗体、すなわち、配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３２と競合する抗体、すなわち、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３３と競合する抗体、すなわち、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３４と競合する抗体、すなわち、配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３５と競合する抗体、すなわち、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３６と競合する抗体、すなわち、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３７と競合する抗体、すなわち、配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３８と競合する抗体、すなわち、配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ３９と競合する抗体、すなわち、配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４０と競合する抗体、すなわち、配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４１と競合する抗体、すなわち、配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４２と競合する抗体、すなわち、配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４３と競合する抗体、すなわち、配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４４と競合する抗体、すなわち、配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４５と競合する抗体、すなわち、配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４６と競合する抗体、すなわち、配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４７と競合する抗体、すなわち、配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４８と競合する抗体、すなわち、配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ４９と競合する抗体、すなわち、配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ５０と競合する抗体、すなわち、配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ５１と競合する抗体、すなわち、配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ５２と競合する抗体、すなわち、配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ５３と競合する抗体、すなわち、配列番号１５３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ５４と競合する抗体、すなわち、配列番号１５４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
別の実施形態では、本発明は、Ａｂ５５と競合する抗体、すなわち、配列番号１５５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を対象とする。
特定の実施形態では、本発明は、結合タンパク質、例えば、
（１）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（２）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０および配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号６４、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（３）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
（４）配列番号１１２に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０３に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（５）配列番号１１３に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０４に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
（６）配列番号１１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０５に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；ならびに
（７）配列番号１２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１に記載の可変軽鎖アミノ酸配列
からなる群から選択される重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体と競合する抗体に関する。
別の特定の実施形態では、本発明は、結合タンパク質、例えば、配列番号１１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１０に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体と競合する抗体に関する。
５．ＰＲＬＲエピトープ
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｆ１０、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のうちの３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、前記アミノ酸残基のうちの少なくとも５つを含むエピトープと結合する。別の実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｆ１０、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のすべてを含むエピトープと結合する。
特定の実施形態では、前記エピトープと結合する結合タンパク質は、Ａｂ１、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４およびＡｂ２５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｉ９、Ｆ１０、Ｋ１１、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｗ７２、Ｔ７４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｔ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｗ１３９、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のうちの３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、前記アミノ酸残基のうちの少なくとも５つを含むエピトープと結合する。別の実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｉ９、Ｆ１０、Ｋ１１、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｗ７２、Ｔ７４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｔ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｗ１３９、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のすべてを含むエピトープと結合する。
特定の実施形態では、前記エピトープと結合する結合タンパク質は、Ａｂ４、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ５３、Ａｂ５４およびＡｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。別の実施形態では、前記エピトープと結合する結合タンパク質は、Ａｂ２、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３およびＡｂ３４からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｔ１４１、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｒ１４７、Ｅ１５５、Ｗ１５６、Ｅ１５７、Ｉ１５８、Ｈ１５９、Ｆ１６０、Ａ１６１、Ｇ１６２、Ｑ１６３、Ｑ１６４、Ｆ１６７、Ｓ１７１、Ｒ１８３、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｗ１９１、およびＷ１９４のうちの１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、前記アミノ酸残基のうちの少なくとも１５個を含むエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｔ１４１、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｒ１４７、Ｅ１５５、Ｗ１５６、Ｅ１５７、Ｉ１５８、Ｈ１５９、Ｆ１６０、Ａ１６１、Ｇ１６２、Ｑ１６３、Ｑ１６４、Ｆ１６７、Ｓ１７１、Ｒ１８３、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｗ１９１、およびＷ１９４のすべてを含むエピトープと結合する。
特定の実施形態では、前記エピトープと結合する結合タンパク質は、Ａｂ３、Ａｂ８、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１およびＡｂ５２からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８またはＷ１９１のうちの少なくとも１個、２個、３個、４個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。いくつかの実施形態では、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８またはＷ１９１のすべてを含むエピトープと結合する。
特定の実施形態では、前記エピトープと結合する結合タンパク質は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４およびＡｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸９１−９６を含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。
特定の実施形態では、前記エピトープと結合する結合タンパク質は、Ａｂ１、Ａｂ４、Ａｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ７、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ５３、Ａｂ５４およびＡｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。別の実施形態では、前記エピトープと結合する結合タンパク質は、Ａｂ２、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３およびＡｂ３４からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、配列番号２の少なくともアミノ酸８〜１００、１８５〜１９１、８〜１４３、または１８３〜１９４内の残基を有するエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。特定の実施形態では、前記エピトープと結合する結合タンパク質は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４およびＡｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である。
別の態様では、本発明は、ＰＲＬＲと結合することができ、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８、Ａｂ９、ｃｈＡｂ９、Ａｂ１０、ｃｈＡｂ１０、Ａｂ１１、ｃｈＡｂ１１、Ａｂ１２、ｃｈＡｂ１２、Ａｂ１３、ｃｈＡｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４およびＡｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分と同じエピトープ特異性を有する結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片に関する。
前述の態様の種々の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲの生物学的機能を調節することができる。前述の態様のその他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲを中和することができる。前述の態様のその他の実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲの二量体化を阻害しないＰＲＬＲのエピトープと結合する。前述の態様のさらなる実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲのＤ２ドメインと結合しない。前述の態様のさらなる実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲのＤ１ドメインのリガンド結合領域と結合する。前述の態様のさらなる実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、ＰＲＬＲとの結合について抗体ＬＦＡ１０２と競合しない。前述の態様のさらなる実施形態では、結合タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合断片は、プロラクチンとＰＲＬＲの結合を遮断する。
Ｃ．抗体の産生および抗体産生細胞株
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、例えば当技術分野で公知のいくつかのインビトロアッセイおよびインビボアッセイのいずれか１つによって評価される、ＰＲＬＲ活性を低下させるまたは中和する高い能力を示すことが好ましい。例えば、ＰＲＬＲ発現細胞株、例えばヒト乳癌細胞株Ｔ４７ＤにおけるＰＲＬＲ、ｐＳＴＡＴ５またはＥＲＫ１／２のリン酸化の阻害が測定され得る。あるいは、ＰＲＬＲ発現細胞株、例えばヒトＰＲＬＲをトランスフェクトしたＢａｆ３プロＢリンパ系細胞またはＮｂ２−１１ラットリンパ腫細胞の増殖の阻害が測定され得る。好ましい実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分はヒトＰＲＬＲと結合し、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＰＲＬＲから解離するまたは約１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＰＲＬＲ活性を阻害する。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−２ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＰＲＬＲから解離し得る、または約１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＰＲＬＲ活性を阻害し得る。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＰＲＬＲから解離し得る、または約１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＰＲＬＲ活性を阻害し得る。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＰＲＬＲから解離し得る、または約１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０でＰＲＬＲ活性を阻害し得る。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＰＲＬＲから解離し得る、または約１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０でＰＲＬＲ活性を阻害し得る。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴によって決定される約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＰＲＬＲから解離し得る、または約１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０でＰＲＬＲ活性を阻害し得る。
プロラクチンは、ＰＲＬＲと結合し、ホモ二量体化を誘導する。ＰＲＬＲは内因性キナーゼ活性を有さないが、ＦＹＮおよびＪＡＫ２などのプロテインキナーゼを伴う（Ｋｌｉｎｅ，Ｊ．Ｂ．ら（１９９９年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：３５４６１−３５４６８頁）。プロラクチンの結合により、ＪＡＫ２および細胞外シグナル関連キナーゼ−１および細胞外シグナル関連キナーゼ−２（ＥＲＫ１およびＥＲＫ２）を通じて転写因子−５（ＳＴＡＴ５）のシグナル伝達因子およびアクチベーターが活性化される（Ｈｕａｎｇ，Ｙ．ら、（２００６年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２５：７５６５−７５７６頁）。ＪＡＫ２によりリン酸化されたＳＴＡＴ５ＡおよびＳＴＡＴ５Ｂはホモ二量体およびヘテロ二量体を形成し、細胞の成長および分化に影響を及ぼす遺伝子発現を調節する（Ｈｅｎｎｉｇｈａｕｓｅｎ，Ｌ．およびＲｏｂｉｎｓｏｎ，Ｇ．Ｗ．（２００１年）Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｃｅｌｌ １：４６７−４７５頁）。プロラクチンによるＰＲＬＲの活性化により、単独では細胞増殖が刺激され、デキサメタゾンと組み合わせると細胞株における乳房の特定の遺伝子発現、例えば、γ−カゼインが刺激される（Ｓａｓａｋｉ，Ｍ．ら（１９９６年）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｊ．４３：４５−５２頁）。さらに、ＰＲＬＲは、ヒト乳癌組織および前立腺癌組織において過剰発現されることが見出されている（Ｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６４：４７７４−４７８２頁、２００４年；Ｇｉｌｌら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．、５４：９５６−９６０頁、２００１年；Ｔｏｕｒａｉｎｅら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．、８３：６６７−６７４頁、１９９８年）。リン酸化および増殖アッセイにより、本明細書に記載の抗体がプロラクチン媒介性リン酸化および増殖を阻害することが実証された。例えば、実施例２ならびに表１３および１４に記載の通り、ＰＲＬＲ抗体がＰＲＬＲのリン酸化を阻害することが示された。さらに、実施例２ならびに表１３および１４に記載の通り、ＰＲＬＲ抗体がＰＲＬＲ発現細胞株、例えばヒトＰＲＬＲをトランスフェクトしたＢａｆ３プロＢリンパ系細胞およびＮｂ２−１１ラットリンパ腫細胞の増殖を阻害することが示された。さらに、実施例３に記載の通り、ＰＲＬＲ抗体、特にＡＢ５がインビボ試験において腫瘍の成長を低下させることが示された。本明細書に開示されている１つの特定の抗体、すなわちＡｂ１２がＰＲＬＲアゴニスト活性を示すことが示された。
抗体を実施例１に記載の通りヒト化した。フレームワーク復帰突然変異を、可変ドメインの新規合成によってまたは変異原性オリゴヌクレオチドプライマーおよびポリメラーゼ連鎖反応によってまたはＣＤＲグラフトのそれぞれについて復帰突然変異およびその他の突然変異の種々の組合せの両方を可能にすることによってＣＤＲグラフト化抗体配列に導入した。機能的特徴付けのためにマウスモノクローナルＰＲＬＲ抗体のヒト化可変領域をＩｇＧ発現ベクターにクローニングした。
特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域を含む。好ましくは、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、抗体は、軽鎖定常領域、κ軽鎖定常領域またはλ軽鎖定常領域のいずれかを含み得る。好ましくは、抗体は、κ軽鎖定常領域を含む。または、抗体部分は、例えば、Ｆａｂ断片または一本鎖Ｆｖ断片であり得る。
抗体エフェクター機能を変更するためのＦｃ部分中のアミノ酸残基の置換は、当技術分野で公知である（Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６４８，２６０号；同５６２４８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原抗体複合体の半減期／クリアランス速度を媒介する。いくつかの場合には、これらのエフェクター機能は、治療用抗体にとって望ましいものであるが、別の場合には、治療目的によって、不必要またはさらに有害であることもある。特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特に、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、それぞれ、ＦｃγＲｓおよび補体Ｃ１ｑとの結合によって、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。さらに別の実施形態では、抗体のエフェクター機能が変更されるよう抗体の定常領域、例えば、抗体のＦｃ領域において少なくとも１個のアミノ酸残基が置換される。
一実施形態は、本発明の抗体または抗体部分が、誘導体化されるまたは１つ以上の機能的分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に連結されている、標識された結合タンパク質を提供する。例えば、本発明の標識された結合タンパク質は、本発明の抗体または抗体部分を（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合による会合またはその他によって）抗体または抗体部分の、別の分子（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）との会合を媒介し得る１つ以上のその他の分子実体、例えば、別の抗体（例えば、二特異性抗体またはダイアボディー）、検出可能な薬剤、医薬品、タンパク質もしくはペプチド、および／または有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節剤、遺伝子療法用ベクター、アルキル化剤、抗血管新生剤、代謝拮抗薬、ホウ素含有薬剤（ｂｏｒｏｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、化学保護剤、ホルモン、抗ホルモン剤、コルチコステロイド、光活性治療薬、オリゴヌクレオチド、放射性核種薬剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線増感剤およびこれらの組合せからなる群から選択される細胞傷害性薬剤もしくは治療用薬剤と機能的に連結することによって誘導体化され得る。
それを用いて本発明の抗体または抗体部分が誘導体化され得る有用な検出可能な薬剤として、蛍光化合物が挙げられる。例示的蛍光検出可能薬剤として、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリンなどが挙げられる。抗体はまた、検出可能な酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどを用いて誘導体化され得る。抗体は検出可能な酵素で誘導体化される場合には、酵素が使用して、検出可能な反応生成物を生じるさらなる試薬を加えることによって検出される。例えば、検出可能な薬剤西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合には、過酸化水素およびジアミノベンジジンの添加が、着色された反応生成物につながり、これは、検出可能である。抗体はまた、ビオチンで誘導体化され、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的測定によって検出され得る。
本発明の別の実施形態は、結晶化結合タンパク質を提供する。好ましくは、本発明は、本明細書に開示される、全抗ＰＲＬＲ抗体およびその断片の結晶、このような結晶を含む製剤および組成物に関する。一実施形態では、結晶化結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物よりも、インビボで長い半減期を有する。別の実施形態では、結合タンパク質は、結晶化後に生物活性を保持する。
本発明の結晶化結合タンパク質は、当技術分野で公知の、参照により本明細書に組み込むＷＯ０２０７２６３６に開示される方法に従って製造され得る。
本発明の別の実施形態は、グリコシル化結合タンパク質を提供し、これでは、抗体またはその抗原結合部分は、１個以上の炭水化物残基を含む。新生インビボタンパク質製造は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセシングを受け得る。特に、糖（グリコシル）残基が、酵素的に添加され得る、グリコシル化として知られるプロセス。共有結合によって連結しているオリゴ糖側鎖を有する得られたタンパク質は、グリコシル化タンパク質または糖タンパク質として知られる。抗体は、Ｆｃドメインならびに可変ドメイン中に１個以上の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、Ｆｃドメインのエフェクター機能に対して重要な効果を有するが、抗原結合または抗体の半減期に対しては最小の効果しか有さない（Ｒ．Ｊｅｆｆｅｒｉｓ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ． ２１（２００５年）、１１−１６頁）。対照的に、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に対して効果を有し得る。可変ドメイン中のグリコシル化は、おそらくは立体障害のために、抗体結合親和性に対して負の効果を有するか（Ｃｏ、Ｍ．Ｓ．ら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３年） ３０：１３６１−１３６７頁）、または抗原に対する親和性の増大をもたらし得る（Ｗａｌｌｉｃｋ、Ｓ．Ｃ．ら．、Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９８８年） １６８：１０９９−１１０９頁；Ｗｒｉｇｈｔ、Ａ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．（１９９１年） １０：２７１７−２７２３頁）。
本発明の一態様は、結合タンパク質のＯ−またはＮ−結合型グリコシル化部位が突然変異されているグリコシル化部位突然変異体の作製を対象とする。当業者ならば、標準的な周知の技術を使用してこのような突然変異体を作製できる。生物活性を保持するが、結合活性が増大または低下しているグリコシル化部位突然変異体が、本発明の別の目的である。
さらに別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合部分のグリコシル化が修飾される。例えば、脱グリコシル化抗体が作製され得る（すなわち、抗体がグリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増大させるよう変更され得る。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１つ以上の部位を変更することによって達成され得る。例えば、１つ以上の可変領域グリコシル化部位の脱離、それによるその部位でのグリコシル化の脱離をもたらす１つ以上の+がなされ得る。このような脱グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増大させ得る。このようなアプローチは、このそれぞれの全体が参照により本明細書に組み込む、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００３０１６４６６Ａ２および米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載されている。
さらに、またはあるいは、フコシル残基の量が低減されている低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体または二分するＧｌｃＮＡｃ構造が増大している抗体などの、変更された種類のグリコシル化を有する本発明の修飾された抗体が作製され得る。このように変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能を高めると実証されている。このような炭水化物修飾は、例えば、グリコシル化機構が変更された宿主細胞において抗体を発現させることによって達成され得る。グリコシル化機構が変更された細胞は、当技術分野で記載されており、本発明の組換え抗体を発現させ、それによって、グリコシル化が変更された抗体を製造する宿主細胞として使用され得る。例えば、このそれぞれの全体が参照により本明細書に組み込む、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００２年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０頁；Ｕｍａｎａら（１９９９年）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１頁ならびに欧州特許第ＥＰ １，１７６，１９５号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／０３５８３５；ＷＯ９９／５４３４２８０を参照のこと。
タンパク質グリコシル化は、対象とするタンパク質のアミノ酸配列ならびにタンパク質が発現される宿主細胞に応じて変わる。種々の生物が、種々のグリコシル化酵素（例えば、グリコシルトランスフェラーゼおよびグリコシダーゼ）を産生し、入手可能な種々の基質（ヌクレオチド糖）を有し得る。このような因子のために、タンパク質グリコシル化パターンおよびグリコシル残基の組成物は、特定のタンパク質が発現される宿主系に応じて異なり得る。本発明において有用なグリコシル残基として、それだけには限らないが、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミンおよびシアル酸が挙げられる。好ましくは、グリコシル化結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるようなグリコシル残基を含む。
異なるタンパク質グリコシル化が、異なるタンパク質特徴をもたらし得ることは、当業者にとって公知である。例えば、酵母などの微生物宿主において製造され、酵母内因性経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の有効性は、ＣＨＯ細胞株などの哺乳動物細胞において発現された同一タンパク質のものと比較して、低減され得る。このような糖タンパク質はまた、ヒトにおいて免疫原性であり得、投与後のインビボ半減期の減少を示す。ヒトおよびその他の動物における特定の受容体は、特定のグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の迅速なクリアランスを促進し得る。その他の有害作用として、タンパク質フォールディングにおける変化、溶解度、プロテアーゼに対する感受性、輸送、運搬、区画化、分泌、その他のタンパク質または因子による認識、抗原性またはアレルゲン性が挙げられる。したがって、開業医は、特定の組成およびグリコシル化のパターン、例えば、ヒト細胞においてまたは意図される対象動物の種特異的細胞において産生されるものと同一のまたは少なくとも同様のグリコシル化組成およびパターンを有する治療用タンパク質を好み得る。
宿主細胞のものとは異なるグリコシル化タンパク質を発現することは、異種グリコシル化酵素を発現するよう宿主細胞を遺伝的に修飾することによって達成され得る。開業医は、当技術分野で公知の技術を使用して、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体またはその抗原結合部分を作製し得る。例えば、酵母株は、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するよう遺伝的に修飾されており、その結果、これらの酵母株において産生されたグリコシル化されたタンパク質（糖タンパク質）は、動物細胞、特に、ヒト細胞のものと同一であるタンパク質グリコシル化を示す（米国特許公開第２００４００１８５９０号および同２００２０１３７１３４号およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２００５１００５８４ Ａ２）。
本発明はまた、結合タンパク質に加えて、このような本発明の結合タンパク質に特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体を対象とする。抗Ｉｄ抗体とは、一般に、別の抗体の抗原結合領域と関連している独特の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、結合タンパク質またはそのＣＤＲ含有領域を用いて動物を免疫処理することによって調製され得る。免疫処理された動物は、免疫化抗体のイディオタイプの決定基を認識し、それに応じて抗Ｉｄ抗体を産生する。抗Ｉｄ抗体はまた、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を産生するさらに別の動物において免疫応答を誘発する「免疫原」として使用され得る。
さらに、対象とするタンパク質は、種々のグリコシル化酵素を発現し、その結果、ライブラリーのメンバー宿主細胞が、変異体グリコシル化パターンを有する対象とするタンパク質を産生するよう遺伝子操作された宿主細胞のライブラリーを使用して発現され得るということは当業者によって理解されよう。次いで、開業医は、特定の新規グリコシル化パターンを有する対象とするタンパク質を選択および単離し得る。好ましくは、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、生物学的特性の改善または変更を示す。
ＩＩ．抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）
本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体は抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するために薬剤とコンジュゲートされ得る。抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）により、疾患、例えば癌の治療における抗体の治療有効性が、１種以上の薬剤を腫瘍関連抗原、例えばＰＲＬＲ発現腫瘍などの標的組織に選択的に送達するＡＤＣの能力に起因して増大し得る。したがって、本発明は、治療的使用、例えば癌の治療のための抗ＰＲＬＲ ＡＤＣを提供する。
本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣは、１種以上の薬物部分と連結した抗ＰＲＬＲ抗体、すなわちＰＲＬＲに特異的に結合する抗体を含む。本発明のＡＤＣの特異性は、抗体、すなわち抗ＰＲＬＲの特異性によって定義される。一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体を、ＰＲＬＲを発現している形質転換された癌細胞の内部に送達される１つ以上の細胞毒素と連結する。本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣに使用され得る薬物の例は、同様に、抗体と１種以上の薬物をコンジュゲートするために使用され得るリンカーが以下に提供される。用語「薬物」および「薬剤」は、本明細書では互換的に使用される。用語「連結した」および「コンジュゲートした」も、本明細書では互換的に使用される。
Ａ．コンジュゲーションのための薬物
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、１種以上の薬物を、対象とする細胞、例えばＰＲＬＲを発現する形質転換された癌細胞にターゲティングするためのＡＤＣに使用され得る。本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣにより、１種以上の薬物が特定の細胞に送達されるので、例えば多くの場合に抗癌療法に伴って見られる副作用を軽減し得るターゲティング療法がもたらされる。本発明のＡＤＣに使用され得る薬物、すなわち、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体とコンジュゲートされ得る薬物の例は以下に提供され、これらとして、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節性薬剤、遺伝子療法用ベクター、アルキル化剤、抗血管新生剤、代謝拮抗薬、ホウ素含有薬剤、化学保護剤、ホルモン剤、グルココルチコイド、光活性治療薬、オリゴヌクレオチド、放射性同位元素、放射線増感剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、およびこれらの組合せが挙げられる。
１．有糸分裂阻害剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は癌を治療するための１種以上の有糸分裂阻害剤とコンジュゲートされ得る。用語「有糸分裂阻害剤」とは、本明細書で使用される場合、癌細胞に特に重要な生物学的プロセスである有糸分裂または細胞分裂を遮断する細胞傷害性薬剤および／または治療用薬剤を指す。有糸分裂阻害剤により微小管が不安定化し、したがって、多くの場合、微小管重合または微小管解重合に影響が及ぶことによって細胞分裂が妨げられる。したがって、一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、チューブリン重合を阻害することによって微小管形成を不安定化する１種以上の有糸分裂阻害剤とコンジュゲートされる。一実施形態では、本発明のＡＤＣに使用される有糸分裂阻害剤はＩｘｅｍｐｒａ（イキサベピロン）である。本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣに使用され得る有糸分裂阻害剤の例が以下に提供される。
ａ．ドラスタチン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのドラスタチンとコンジュゲートされ得る。ドラスタチンは、インド洋アメフラシであるドラベッラ・アウリクラリア（Ｄｏｌａｂｅｌｌａ ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ）から単離される短いペプチド化合物である（Ｐｅｔｔｉｔら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９７６年、９８、４６７７頁を参照のこと）。ドラスタチンの例として、ドラスタチン１０およびドラスタチン１５が挙げられる。ドラスタチン１５は、ドラベッラ・アウリクラリアに由来する７−サブユニットデプシペプチドであり、同じ生物体から得られる５−サブユニットペプチドである抗チューブリン剤ドラスタチン１０と構造的に関連する強力な抗有糸分裂薬である。したがって、一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣは、本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体および少なくとも１つのドラスタチンを含む。下記のアウリスタチンはドラスタチン１０の合成誘導体である。
ｂ．アウリスタチン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのアウリスタチンとコンジュゲートされ得る。アウリスタチンは、微小管ダイナミクスおよびＧＴＰ加水分解に干渉し、それにより、細胞分裂を阻害することによる抗癌活性を有することが一般に示されているドラスタチン類似体の群を表す。例えば、アウリスタチンＥ（米国特許第５，６３５，４８３号）は、抗癌剤ビンクリスチンと同じチューブリン上の部位に結合することによってチューブリン重合を阻害する化合物である海洋天然物ドラスタチン１０の合成類似体である（Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔ、Ｐｒｏｇ．Ｃｈｅｍ．Ｏｒｇ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ、７０：１−７９頁（１９９７年））。ドラスタチン１０、アウリスタチンＰＥおよびアウリスタチンＥは、４アミノ酸を有し、そのうちの３つがドラスタチンクラスの化合物に独特である直鎖状のペプチドである。アウリスタチンサブクラスの有糸分裂阻害剤の例示的な実施形態として、それだけには限らないが、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤまたはアウリスタチンＤ誘導体）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥまたはアウリスタチンＥ誘導体）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦまたはアウリスタチンＦ誘導体）、アウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）、アウリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、アウリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）および５−ベンゾイル吉草酸−ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）が挙げられる。アウリスタチン誘導体の合成および構造は、そのそれぞれが参照により本明細書に組み込む、米国特許出願公開第２００３−００８３２６３号、同第２００５−０２３８６４９号および同第２００５−０００９７５１号；国際特許公開第ＷＯ０４／０１０９５７号、国際特許公開第ＷＯ０２／０８８１７２号および米国特許第６，３２３，３１５号；同第６，２３９，１０４号；同第６，０３４，０６５号；同第５，７８０，５８８号；同第５，６６５，８６０号；同第５，６６３，１４９号；同第５，６３５，４８３号；同第５，５９９，９０２号；同第５，５５４，７２５号；同第５，５３０，０９７号；同第５，５２１，２８４号；同第５，５０４，１９１号；同第５，４１０，０２４号；同第５，１３８，０３６号；同第５，０７６，９７３号；同第４，９８６，９８８号；同第４，９７８，７４４号；同第４，８７９，２７８号；同第４，８１６，４４４号；および同第４，４８６，４１４号に記載されている。
一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）とコンジュゲートされる。モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）は、チューブリンの重合を遮断することによって細胞分裂を阻害する。ＭＭＡＦは荷電したＣ末端フェニルアラニン残基を有し、それにより、その非荷電の対応するＭＭＡＥと比較してその細胞傷害活性が弱毒化されている。ＭＭＡＦは、毒性が極度であるので、それ自体を薬物として使用することはできないが、それを癌細胞に向けるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）と連結することができる。一実施形態では、抗ＰＲＬＲ抗体に対するリンカーは細胞外液中で安定であるが、コンジュゲートが腫瘍細胞に進入するとカテプシンによって切断され、したがって、抗有糸分裂機構が活性化される。
一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのＭＭＡＥ（モノ−メチルアウリスタチンＥ）とコンジュゲートされる。モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ、ベドチン）は、チューブリンの重合を遮断することによって細胞分裂を阻害する。ＭＭＡＥも、毒性が極度であるので、それ自体を薬物として使用することはできない。最近の癌療法の開発では、ＭＭＡＥは癌細胞における特異的なマーカー発現を認識し、ＭＭＡＥを癌細胞に向けるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）と連結される。一実施形態では、ＭＭＡＥを抗ＰＲＬＲ抗体と連結するリンカーは細胞外液（すなわち、培地または細胞の外部の環境）中で安定であるが、ＡＤＣが特定の癌細胞抗原と結合し癌細胞に進入するとカテプシンによって切断され、したがって、毒性のＭＭＡＥが放出され、強力な抗有糸分裂機構が活性化される。ＭＭＡＦおよびＭＭＡＥの構造が以下に提供される。
Figure 2018198608
ｃ．メイタンシノイド
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのメイタンシノイドとコンジュゲートされ得る。メイタンシノイドは、高等植物であるニシキギ科、クロウメモドキ科およびトウダイグサ科ならびにセン類のいくつかの種のメンバーから最初に単離された強力な抗腫瘍剤である（Ｋｕｐｃｈａｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：１３５４−１３５６頁 ［１９７２年］；Ｗａｎｉら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．３９０：［１９７３］；Ｐｏｗｅｌｌら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．４６：６６０−６６６頁 ［１９８３年］；Ｓａｋａｉら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５１ ：８４５−８５０頁 ［１９８８年］；およびＳｕｗａｎｂｏｒｉｒｕｘら、Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ４６：１１７−１２０頁［１９９０年］）。証拠により、メイタンシノイドが、微小管タンパク質チューブリンの重合を阻害することによって有糸分裂を阻害し、それにより、微小管の形成を妨げることが示唆される（例えば、米国特許第６，４４１，１６３号およびＲｅｍｉｌｌａｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１８９、１００２−１００５頁（１９７５年）を参照のこと）。メイタンシノイドは、細胞培養モデルを使用してインビトロにおいて、および実験動物系を使用してインビボにおいて、腫瘍細胞の成長を阻害することが示されている。さらに、メイタンシノイドの細胞傷害性は従来の化学療法剤、例えば、メトトレキセート、ダウノルビシンおよびビンクリスチンなどの１，０００倍である（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号を参照のこと）。
メイタンシノイドは、マイタンシン、マイタンシノール、マイタンシノールのＣ−３エステルならびにその他のマイタンシノール類似体および誘導体を含むことが当技術分野で公知である（例えば、そのそれぞれが参照により本明細書に組み込む、米国特許第５，２０８，０２０号および同第６，４４１，１６３号を参照のこと）。マイタンシノールのＣ−３エステルは天然に存在するものであっても合成的に得られるものであってもよい。さらに、天然に存在するＣ−３マイタンシノールエステルと合成Ｃ−３マイタンシノールエステルはどちらも、単純なカルボン酸を有するＣ−３エステルまたはＮ−メチル−Ｌ−アラニンの誘導体を有するＣ−３エステルに分類され得、後者は前者よりも細胞傷害性である。合成メイタンシノイド類似体も当技術分野で公知であり、例えば、Ｋｕｐｃｈａｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２１、３１−３７頁（１９７８年）に記載されている。
本発明のＡＤＣに使用するための適切なメイタンシノイドは、当技術分野で公知の方法を使用して、天然の供給源から単離、合成により作製、または半合成により作製され得る。さらに、メイタンシノイドは、最終的なコンジュゲート分子において十分な細胞傷害性が保存される限りは、任意の適切な様式で改変され得る。この点について、メイタンシノイドは、抗体が連結され得る適切な官能基を欠く。メイタンシノイドを抗体と連結してコンジュゲートを形成するために連結部分が利用されることが望ましく、これは節ＩＩＢに詳しく記載されている。例示的なメイタンシノイド、メルタンシン（ＤＭ１）の構造が以下に提供される。
Figure 2018198608
メイタンシノイドの代表的な例として、それだけに限らないが、ＤＭ１（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン；メルタンシン、薬物メイタンシノイド１とも称される；ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｃｈａｒｉら（１９９２年）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ５２：１２７頁も参照のこと）、ＤＭ２、ＤＭ３（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン）、ＤＭ４（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン）およびマイタンシノール（合成メイタンシノイド類似体）が挙げられる。メイタンシノイドのその他の例は、参照により本明細書に組み込む米国特許第８，１４２，７８４号に記載されている。
アンサマイトシンは、種々の細菌性供給源から単離されているメイタンシノイド抗生物質の群である。これらの化合物は強力な抗腫瘍活性を有する。代表的な例として、それだけには限らないが、アンサマイトシンＰ１、アンサマイトシンＰ２、アンサマイトシンＰ３およびアンサマイトシンＰ４が挙げられる。
一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのＤＭ１とコンジュゲートされる。一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのＤＭ２とコンジュゲートされる。一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのＤＭ３とコンジュゲートされる。一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのＤＭ４とコンジュゲートされる。
ｄ．植物アルカロイド
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの植物アルカロイド、例えば、タキサンまたはビンカアルカロイドとコンジュゲートされ得る。植物アルカロイドは、特定の種類の植物から作製される化学療法治療物質である。ビンカアルカロイドはニチニチソウ植物（カタランタス・ロゼア（ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅａ））から作製され、タキサンはタイヘイヨウイチイ（Ｐａｃｉｆｉｃ Ｙｅｗ）木（イチイ属）の樹皮から作製される。ビンカアルカロイドおよびタキサンはどちらも微小管阻害剤としても公知であり、これらについて以下により詳細に記載する。
タキサン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのタキサンとコンジュゲートされ得る。用語「タキサン」とは、本明細書で使用される場合、微小管作用の機構を有し、タキサン環構造および細胞増殖抑制活性に必要である立体特異的な側鎖を含む構造を有する抗悪性腫瘍薬のクラスを指す。用語「タキサン」には、親水性の誘導体および疎水性の誘導体の両方を含めた種々の公知の誘導体も含まれる。タキサン誘導体として、それだけに限らないが、そのそれぞれが参照により本明細書に組み込む、国際特許出願第ＷＯ９９／１８１１３号に記載のガラクトース誘導体およびマンノース誘導体；ＷＯ９９／１４２０９に記載のピピペラジノ誘導体およびその他の誘導体；ＷＯ９９／０９０２１、ＷＯ９８／２２４５１および米国特許第５，８６９，６８０号に記載のタキサン誘導体；ＷＯ９８／２８２８８に記載の６−チオ誘導体；米国特許第５，８２１，２６３号に記載のスルフェンアミド誘導体；ならびに米国特許第５，４１５，８６９号に記載のタキソール誘導体が挙げられる。タキサン化合物は、そのすべてが明白に参照により組み込まれる、米国特許第５，６４１，８０３号、同第５，６６５，６７１号、同第５，３８０，７５１号、同第５，７２８，６８７号、同第５，４１５，８６９号、同第５，４０７，６８３号、同第５，３９９，３６３号、同第５，４２４，０７３号、同第５，１５７，０４９号、同第５，７７３，４６４号、同第５，８２１，２６３号、同第５，８４０，９２９号、同第４，８１４，４７０号、同第５，４３８，０７２号、同第５，４０３，８５８号、同第４，９６０，７９０号、同第５，４３３，３６４号、同第４，９４２，１８４号、同第５，３６２，８３１号、同第５，７０５，５０３号および同第５，２７８，３２４号においても以前に記載されている。タキサンのさらなる例として、それだけには限らないが、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ；Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、パクリタキセル（ＡｂｒａｘａｎｅまたはＴａｘｏｌ；Ａｂｒａｘｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）およびナノ粒子パクリタキセル（ＡＢＩ−００７／Ａｂｒａｘｅｎｅ；Ａｂｒａｘｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）が挙げられる。
一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのドセタキセルとコンジュゲートされる。一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのパクリタキセルとコンジュゲートされる。
ビンカアルカロイド
一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのビンカアルカロイドとコンジュゲートされる。ビンカアルカロイドは、チューブリンに作用し、微小管の形成を妨げることにより癌細胞の分裂する能力を阻害することによって働く、細胞周期に特異的な薬物のクラスである。本発明のＡＤＣに使用され得るビンカアルカロイドの例として、それだけには限らないが、ビンデシン硫酸塩、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビンが挙げられる。
２．抗腫瘍抗生物質
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、１つ以上の、癌を治療するための抗腫瘍抗生物質とコンジュゲートされ得る。本明細書で使用される場合、用語「抗腫瘍抗生物質」とは、ＤＮＡに干渉することによって細胞の成長を遮断するものであり、微生物から作製される抗悪性腫瘍薬を意味する。多くの場合、抗腫瘍抗生物質は、ＤＮＡ鎖を破壊するか、またはＤＮＡ合成を遅くするもしくは停止させる。本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣに含められ得る抗腫瘍抗生物質の例として、それだけには限らないが、下でより詳細に記載されているアクチノマイシン（例えば、ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン系薬）、アントラサイクリン、カリチアマイシンおよびデュオカルマイシンが挙げられる。
ａ．アクチノマイシン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのアクチノマイシンとコンジュゲートされ得る。アクチノマイシンは、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の細菌から単離される抗腫瘍抗生物質のサブクラスである。アクチノマイシンの代表的な例として、それだけには限らないが、アクチノマイシンＤ（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ［アクチノマイシン、ダクチノマイシン、アクチノマイシンＩＶ、アクチノマイシンＣ１としても公知］、Ｌｕｎｄｂｅｃｋ，Ｉｎｃ．）、アントラマイシン、チカマイシンＡ、ＤＣ−１８、マゼトラマイシン、ネオトラマイシンＡ、ネオトラマイシンＢ、ポロトラマイシン、プロトラカルシンＢ、ＳＧ２２８５、シバノミシン、シビロマイシンおよびトマイマイシンが挙げられる。一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン系薬（ＰＢＤ）とコンジュゲートされる。ＰＤＢの例として、それだけには限らないが、アントラマイシン、チカマイシンＡ、ＤＣ−８１、マゼトラマイシン、ネオトラマイシンＡ、ネオトラマイシンＢ、ポロトラマイシン、プロトラカルシンＢ、ＳＧ２２８５、シバノミシン、シビロマイシンおよびトマイマイシンが挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのアクチノマイシン、例えば、アクチノマイシンＤまたは少なくとも１つのＰＢＤ、例えば、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体とコンジュゲートされる。
ｂ．アントラサイクリン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのアントラサイクリンとコンジュゲートされ得る。アントラサイクリンは、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の細菌から単離される抗腫瘍抗生物質のサブクラスである。代表的な例として、それだけには限らないが、ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ、Ｂｅｄｆｏｒｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；ドキソルビシン塩酸塩、ヒドロキシダウノルビシンおよびＲｕｂｅｘとも称される）、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ、Ｐｆｉｚｅｒ）およびイダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ；Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのアントラサイクリン、例えばドキソルビシンとコンジュゲートされる。
ｃ．カリチアマイシン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのカリチアマイシンとコンジュゲートされ得る。カリチアマイシンは、土壌生物体であるミクロモノスポラ・エキノスポラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）に由来するエンジイン抗生物質のファミリーである。カリチアマイシンは、ＤＮＡの副溝に結合し、二本鎖ＤＮＡの破壊を誘導し、その他の化学療法薬と比較して１００倍増加した細胞死を生じさせる（Ｄａｍｌｅら（２００３年）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３：３８６頁）。本発明における薬物コンジュゲートとして使用され得るカリチアマイシンの調製物が当技術分野で公知である。米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号および同第５，８７７，２９６号を参照のこと。使用され得るカリチアマイシの構造類似体として、それだけには限らないが、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１Ｉ、ＰＳＡＧおよびθＩ１が挙げられる（Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：３３３６−３３４２頁（１９９３年）、Ｌｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８：２９２５−２９２８頁（１９９８年）および上述の米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号および同第５，８７７，２９６号）。したがって、一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのカリチアマイシンとコンジュゲートされる。
ｄ．デュオカルマイシン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのデュオカルマイシンとコンジュゲートされ得る。デュオカルマイシンは、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の細菌から単離される抗腫瘍抗生物質のサブクラスである（ＮａｇａｍｕｒａおよびＳａｉｔｏ（１９９８年）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、３４巻、１２号を参照のこと）。デュオカルマイシンは、ＤＮＡの副溝に結合し、Ｎ３位における核酸塩基アデニンをアルキル化する（Ｂｏｇｅｒ（１９９３年）Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌ Ｃｈｅｍ ６５（６）：１１２３頁；およびＢｏｇｅｒおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９９５年）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９２：３６４２頁）。デュオカルマイシンの合成類似体として、それだけには限らないが、アドゼレシン、ビゼレシンおよびカルゼレシンが挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのデュオカルマイシンとコンジュゲートされる。
ｅ．その他の抗腫瘍抗生物質
前述のものに加えて、本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣに使用され得るさらなる抗腫瘍抗生物質として、ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、マイトマイシンおよびプリカマイシン（ミトラマイシンとしても公知である）が挙げられる。
３．免疫調節性薬剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの免疫調節剤とコンジュゲートされ得る。本明細書で使用される場合、「免疫調節剤」という用語は、免疫応答を刺激または改変し得る薬剤を指す。一実施形態では、免疫調節剤は、被験体の免疫応答を増強する免疫刺激剤である。別の実施形態では、免疫調節剤は、被験体の免疫応答を妨げるまたは低下させる免疫抑制剤である。免疫調節剤により、骨髄細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球および顆粒球）またはリンパ系細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）ならびにそれらのさらに分化した任意の細胞が調節され得る。代表的な例として、それだけには限らないが、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）およびレバミソール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ）が挙げられる。本発明のＡＤＣに使用され得る免疫調節性薬剤のその他の例として、それだけには限らないが、癌ワクチン、サイトカインおよび免疫調節性遺伝子療法薬が挙げられる。
ａ．癌ワクチン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、癌ワクチンとコンジュゲートされ得る。本明細書で使用される場合、用語「癌ワクチン」とは、腫瘍に特異的な免疫応答を引き出す組成物（例えば腫瘍抗原およびサイトカイン）を指す。応答は、癌ワクチンを投与することまたは本発明の場合では、抗ＰＲＬＲ抗体および癌ワクチンを含むＡＤＣを投与することにより、被験体自身の免疫系から引き出される。好ましい実施形態では、免疫応答により、体内の腫瘍細胞（例えば、原発性腫瘍細胞または転移性腫瘍細胞）の根絶がもたらされる。癌ワクチンの使用には、一般に、例えば特定の癌細胞の表面上に存在するまたは癌形成を容易にすることが示されている特定の感染因子の表面上に存在する特定の抗原または抗原の群を投与することが伴う。いくつかの実施形態では、癌ワクチンの使用は予防目的であり、その他の実施形態では、当該使用は治療目的である。本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣに使用され得る癌ワクチンの非限定的な例として、組換え二価ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン１６型および１８型ワクチン（Ｃｅｒｖａｒｉｘ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、組換え四価ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６型、１１型、１６型および１８型ワクチン（Ｇａｒｄａｓｉｌ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏｍｐａｎｙ）ならびにシプロイセルＴ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ、Ｄｅｎｄｒｅｏｎ）が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、免疫刺激剤または免疫抑制剤のいずれかである少なくとも１つの癌ワクチンとコンジュゲートされる。
ｂ．サイトカイン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのサイトカインとコンジュゲートされ得る。用語「サイトカイン」とは、一般に、細胞間メディエーターとして別の細胞に作用する１つの細胞集団により放出されるタンパク質を指す。サイトカインは、腫瘍部位において免疫エフェクター細胞および間質細胞を直接刺激し、細胞毒性エフェクター細胞による腫瘍細胞の認識を増強する（ＬｅｅおよびＭａｒｇｏｌｉｎ（２０１１年）Ｃａｎｃｅｒｓ ３：３８５６頁）。多数の動物腫瘍モデル試験により、サイトカインが広範な抗腫瘍活性を有することが実証され、これは、癌療法のためのいくつものサイトカインに基づくアプローチに変換されている（ＬｅｅおよびＭａｒｇｏｌｉ、上記）。近年、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８およびＩＬ−２１を含めたいくつものサイトカインが進行癌の患者に対する臨床試験に入っている（ＬｅｅおよびＭａｒｇｏｌｉ、上記）。
本発明のＡＤＣに使用され得るサイトカインの例として、それだけには限らないが、副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦなどの神経増殖因子；血小板−増殖因子；形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子−Ｉおよびインスリン様増殖因子−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロンα、βおよびγなどのインターフェロン、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−Ｃ−ＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２などのインターロイキン（ＩＬ）；腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含めたその他のポリペプチド因子が挙げられる。本明細書で使用される場合、用語サイトカインは、天然の供給源由来のタンパク質または組換え細胞培養物由来のタンパク質およびネイティブな配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。したがって、一実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体およびサイトカインを含むＡＤＣを提供する。
ｃ．コロニー−刺激因子（ＣＳＦ）
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）とコンジュゲートされ得る。コロニー刺激因子（ＣＳＦ）は、赤血球の生成に関して骨髄を補助する増殖因子である。いくつかの癌治療（例えば、化学療法）は白血球（感染症と戦うのに役立つ）に影響を及ぼす可能性があるので、白血球レベルの支持および免疫系の強化を助けるためにコロニー−刺激因子が導入され得る。コロニー−刺激因子は、骨髄移植後にも、新しい骨髄が白血球の産生を開始するのを助けるために使用され得る。本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣに使用され得るＣＳＦの代表的な例として、それだけには限らないが、エリスロポエチン（エポエチン）、フィルグラスチム（Ｎｅｏｐｏｇｅｎ（果粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）としても公知である；Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）、サルグラモスチム（Ｌｅｕｋｉｎｅ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子およびＧＭ−ＣＳＦ）；Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、プロメガポエチンおよびオプレルベキン（組換えＩＬ−１１；Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体およびＣＳＦを含むＡＤＣを提供する。
４．遺伝子療法
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの、遺伝子療法のための核酸とコンジュゲートされ得る（直接または担体を介して間接的に）。遺伝子療法とは、一般に、遺伝物質を、疾患が治療されるように設計して遺伝物質を細胞に導入することを指す。免疫調節剤に関係するので、遺伝子療法は、癌細胞の増殖を阻害するまたは癌細胞を死滅させる被験体の自然の能力を刺激するために使用される。一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣは、癌に関連する、突然変異したまたはその他の点で機能障害を起こした（例えば切断された）遺伝子を置き換えるために使用される機能的な治療用遺伝子をコードする核酸を含む。その他の実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣは、癌を治療するための治療用タンパク質をコードするまたはその他の方法でその産生をもたらす核酸を含む。治療用遺伝子をコードする核酸は、抗ＰＲＬＲ抗体と直接コンジュゲートされ得る、あるいは、担体を通じて抗ＰＲＬＲ抗体とコンジュゲートされ得る。遺伝子療法のための核酸を送達するために使用され得る担体の例として、それだけには限らないが、ウイルスベクターまたはリポソームが挙げられる。
５．アルキル化剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、１つ以上のアルキル化剤とコンジュゲートされ得る。アルキル化剤は、アルキル基をＤＮＡに結合させる抗悪性腫瘍化合物のクラスである。本発明のＡＤＣに使用され得るアルキル化剤の例として、それだけには限らないが、スルホン酸アルキル、エチレンイミン、メチルアミン誘導体、エポキシド、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、トリアジンおよびヒドラジンが挙げられる。
ａ．スルホン酸アルキル
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのスルホン酸アルキルとコンジュゲートされ得る。スルホン酸アルキルは、一般式：Ｒ−ＳＯ２−Ｏ−Ｒ１（式中、ＲおよびＲ１は一般にはアルキル基またはアリール基である）を有するアルキル化剤のサブクラスである。スルホン酸アルキルの代表的な例として、それだけには限らないが、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；Ｂｕｓｕｌｆｅｘ ＩＶ、ＰＤＬ ＢｉｏＰｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．）が挙げられる。
ｂ．ナイトロジェンマスタード
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのナイトロジェンマスタードとコンジュゲートされ得る。このサブクラスの抗癌化合物の代表的な例として、それだけには限らないが、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；Ｎｅｏｓａｒ、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）、エストラムスチン（エストラムスチンリン酸エステルナトリウムまたはＥｓｔｒａｃｙｔ）、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）、イホスファミド（Ｉｆｅｘ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、メクロレタミン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ、Ｌｕｎｄｂｅｃｋ Ｉｎｃ．）およびメルファラン（ＡｌｋｅｒａｎまたはＬ−Ｐａｍまたはフェニルアラニンマスタード；ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）が挙げられる。
ｃ．ニトロソウレア
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのニトロソウレアとコンジュゲートされ得る。ニトロソウレアは、脂溶性のアルキル化剤のサブクラスである。代表的な例として、それだけには限らないが、カルムスチン（ＢＣＮＵ［ＢｉＣＮＵ、Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレアまたは１、３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアとしても公知である］、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、フォテムスチン（Ｍｕｐｈｏｒａｎとしても公知である）、ロムスチン（ＣＣＮＵまたは１−（２−クロロ−エチル）−３−シクロヘキシル−１−ニトロソウレア、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ニムスチン（ＡＣＮＵとしても公知である）およびストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ、Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。
ｄ．トリアジンおよびヒドラジン
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのトリアジンまたはヒドラジンとコンジュゲートされ得る。トリアジンおよびヒドラジンは、窒素を含有するアルキル化剤のサブクラスである。いくつかの実施形態では、これらの化合物は、自然に分解するまたは代謝されて、アルキル基の核酸、ペプチド、および／またはポリペプチドへの移入を容易にし、それにより、変異原性、発癌性または細胞毒性効果を引き起こすアルキルジアゾニウム中間体を生じ得る。代表的な例として、それだけには限らないが、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ、Ｂａｙｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）、プロカルバジン（Ｍｕｔａｌａｎｅ、Ｓｉｇｍａ−Ｔａｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）およびテモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）が挙げられる。
ｅ．その他のアルキル化剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのエチレンイミン、メチルアミン誘導体またはエポキシドとコンジュゲートされ得る。エチレンイミンは、一般には少なくとも１つのアジリジン環を含有するアルキル化剤のサブクラスである。エポキシドは、３つの環原子のみを有する環状エーテルを特徴とするアルキル化剤のサブクラスを表す。
エチレンイミンの代表的な例として、それだけには限らないが、チオペタ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ、Ａｍｇｅｎ）、ジアジクオン（アジリジニルベンゾキノン（ＡＺＱ）としても公知である）およびマイトマイシンＣが挙げられる。マイトマイシンＣは、アジリジン環を含有する天然物であり、ＤＮＡの架橋を通じて細胞毒性を誘導すると思われる（Ｄｏｒｒ ＲＴら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９８５年；４５；３５１０頁；Ｋｅｎｎｅｄｙ ＫＡら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９８５年；４５；３５４１頁）。メチルアミン誘導体およびそれらの類似体の代表的な例として、それだけには限らないが、アルトレタミン（Ｈｅｘａｌｅｎ、ＭＧＩ Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．）が挙げられ、これはヘキサメチルメラミンおよびヘキサスタットとしても公知である。抗癌化合物のこのクラスのエポキシドの代表的な例として、それだけには限らないが、ジアンヒドロガラクチトールが挙げられる。ジアンヒドロガラクチトール（１，２：５，６−ジアンヒドロズルシトール）は、アジリジンと化学的に関連し、一般に、上記と同様の機構によってアルキル基の移入を容易にする。ジブロモズルシトールは加水分解されてジアンヒドロガラクチトールになり、したがってエポキシドのプロドラッグである（Ｓｅｌｌｅｉ Ｃら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｒｅｐ．１９６９年；５３；３７７頁）。
６．抗血管新生剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの抗血管新生剤とコンジュゲートされ得る。抗血管新生剤は、新しい血管の成長を阻害する。抗血管新生剤は、それらの効果をさまざまな方法で発揮する。いくつかの実施形態では、これらの薬剤は、増殖因子のその標的に到達する能力に干渉する。例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、細胞表面上の特定の受容体に結合することによって血管新生の開始に関与する主要なタンパク質の１つである。したがって、ＶＥＧＦとその同起源の受容体の相互作用を妨げる特定の抗血管新生剤は、ＶＥＧＦにより血管新生が開始されるのを妨げる。その他の実施形態では、これらの薬剤は、細胞内シグナル伝達カスケードに干渉する。例えば細胞表面上の特定の受容体が誘発されると、その他の化学的シグナルのカスケードが開始されて血管の成長が促進される。したがって、特定の酵素、例えば、例えば細胞増殖に寄与する細胞内シグナル伝達カスケードを容易にすることが公知であるいくつかのチロシンキナーゼが癌治療の標的である。その他の実施形態では、これらの薬剤は細胞間のシグナル伝達カスケードに干渉する。さらに、その他の実施形態では、これらの薬剤は、細胞の成長を活性化および促進する特定の標的を無効にするまたは血管細胞の成長を直接干渉する。３００種を超える物質において、多数の直接的な阻害効果および間接的な阻害効果を伴う血管新生阻害性が発見されている。
本発明のＡＤＣに使用され得る抗血管新生剤の代表的な例として、それだけには限らないが、アンジオスタチン、ＡＢＸ ＥＦＧ、Ｃ１−１０３３、ＰＫＩ−１６６、ＥＧＦ ワクチン、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ２０１６、ＩＣＲ−６２、ＥＭＤ ５５９００、ＣＰ３５８、ＰＤ１５３０３５、ＡＧ１４７８、ＩＭＣ−Ｃ２２５（Ｅｒｂｉｔｕｘ、ＺＤ１８３９（Ｉｒｅｓｓａ）、ＯＳＩ−７７４、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）、アンジオスタチン、アレスチン、エンドスタチン、ＢＡＹ１２−９５６６およびｗ／フルオロウラシルまたはドキソルビシン、カンスタチン（ｃａｎｓｔａｔｉｎ）、カルボキシアミドトリアゾールおよびパクリタキセルと一緒に、ＥＭＤ１２１９７４、Ｓ−２４、ビタキシン、ジメチルキサンテノン酢酸、ＩＭ８６２、インターロイキン−１２、インターロイキン−２、ＮＭ−３、ＨｕＭＶ８３３、ＰＴＫ７８７、ＲｈｕＭａｂ、アンジオザイム（ａｎｇｉｏｚｙｍｅ）（リボザイム）、ＩＭＣ−１Ｃ１１、Ｎｅｏｖａｓｔａｔ、マリマスタット、プリノマスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、ＣＯＬ−３、ＭＭ１２７０、ＳＵ１０１、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８、ＳＵ５４１６、パクリタキセルと一緒に、ゲムシタビンおよびシスプラチンと一緒に、ならびにイリノテカンおよびシスプラチンと一緒に、ならびに放射線と一緒に、テコガラン（ｔｅｃｏｇａｌａｎ）、テモゾロミドおよびＰＥＧインターフェロンα２ｂ、テトラチオモリブデート、ＴＮＰ−４７０、サリドマイド、ＣＣ−５０１３およびＴａｘｏｔｅｒｅと一緒に、タムスタチン、２−メトキシエストラジオール、ＶＥＧＦトラップ、ｍＴＯＲ阻害剤（デフォロリムス、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびテムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．））、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ、Ｂｒｙｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）、ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ラパチニブ（タイケルブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ、ＢａｙｅｒおよびＯｎｙｘ）、ホスホイノシチド ３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）が挙げられる。
７．代謝拮抗薬
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの代謝拮抗薬とコンジュゲートされ得る。代謝拮抗薬は、標準的な細胞内物質と非常に類似した化学療法治療物質の種類である。細胞により代謝拮抗薬が細胞代謝に組み込まれると、結果は細胞について陰性であり、例えば細胞は分裂することができない。代謝拮抗薬は、それらが干渉する物質に応じて分類される。本発明のＡＤＣに使用され得る代謝拮抗薬の例として、それだけには限らないが、下により詳細に記載されている、葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキセート）、ピリミジンアンタゴニスト（例えば、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、カペシタビンおよびゲムシタビン）、プリンアンタゴニスト（例えば、６−メルカプトプリンおよび６−チオグアニン）ならびにアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、クラドリビン、フルダラビン、ネララビンおよびペントスタチン）が挙げられる。
ａ．葉酸代謝拮抗薬
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの葉酸代謝拮抗薬とコンジュゲートされ得る。葉酸代謝拮抗薬は、葉酸と構造的に類似した代謝拮抗薬のサブクラスである。代表的な例として、それだけには限らないが、メトトレキセート、４−アミノ−葉酸（アミノプテリンおよび４−アミノプテロイン酸としても公知である）、ロメテレキソール（ＬＭＴＸ）、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｐｔａ、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）およびトリメトレキサート（Ｎｅｕｔｒｅｘｉｎ、Ｂｅｎ Ｖｅｎｕｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）が挙げられる。
ｂ．プリンアンタゴニスト
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのプリンアンタゴニストとコンジュゲートされ得る。プリン類似体は、プリンとして公知の化合物の群と構造的に類似した代謝拮抗薬のサブクラスである。プリンアンタゴニストの代表的な例として、それだけには限らないが、アザチオプリン（Ａｚａｓａｎ、Ｓａｌｉｘ；Ｉｍｕｒａｎ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ［２−ＣｄＡとしても公知である］、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ［６−メルカプトエタノールとしても公知である］、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ、Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ、２’−デオキシコホルマイシン（ＤＣＦ）としても公知である）、６−チオグアニン（Ｌａｎｖｉｓ［チオグアニンとしても公知である］、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）が挙げられる。
ｃ．ピリミジンアンタゴニスト
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのピリミジンアンタゴニストとコンジュゲートされ得る。ピリミジンアンタゴニストは、プリンとして公知の化合物の群と構造的に類似した代謝拮抗薬のサブクラスである。ピリミジンアンタゴニストの代表的な例として、それだけには限らないが、アザシチジン（Ｖｉｄａｚａ、Ｃｅｌｇｅｎｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ、Ｒｏｃｈｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、シタラビン（シトシンアラビノシドおよびアラビノシルシトシンとしても公知である、Ｂｅｄｆｏｒｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、デシタビン（Ｄａｃｏｇｅｎ、Ｅｉｓａｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ、Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｅｆｕｄｅｘ、Ｖａｌｅａｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ）、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン５’−リン酸（ＦｄＵＭＰ）、５−フルオロウリジン三リン酸およびゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）が挙げられる。
８．ホウ素含有薬剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのホウ素含有薬剤とコンジュゲートされ得る。ホウ素含有薬剤は、細胞増殖に干渉する癌治療用化合物のクラスを含む。ホウ素含有薬剤の代表的な例として、それだけに限らないが、ボロフィシン（ｂｏｒｏｐｈｙｃｉｎ）およびボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ、Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。
９．化学保護剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの化学保護剤とコンジュゲートされ得る。化学保護剤は、身体を化学療法の特定の毒作用から保護するために役立つ化合物のクラスである。化学保護剤は、化学療法薬の毒作用から健康な細胞を保護しながら、同時に、投与された化学療法薬によって癌細胞が治療されることが可能になるように、種々の化学療法と共に投与され得る。代表的な化学保護剤として、それだけには限らないが、累積用量のシスプラチンに付随する腎毒性を低下させるために使用されるアミホスチン（Ｅｔｈｙｏｌ、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．）、アントラサイクリン（Ｔｏｔｅｃｔ）の投与によって引き起こされる溢血を治療するためおよび抗腫瘍抗生物質ドキソルビシン（Ｚｉｎｅｃａｒｄ）の投与によって引き起こされる心臓に関連する合併症を治療するためのデクスラゾキサン（Ｔｏｔｅｃｔ、Ａｐｒｉｃｕｓ Ｐｈａｒｍａ；Ｚｉｎｅｃａｒｄ）、およびイホスファミドを用いた化学療法治療の間の出血性膀胱炎を予防するために使用されるメスナ（Ｍｅｓｎｅｘ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）が挙げられる。
１０．ホルモン剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのホルモン剤とコンジュゲートされ得る。ホルモン剤（合成ホルモンを含める）は、内因的に産生される内分泌系のホルモンの産生または活性に干渉する化合物である。いくつかの実施形態では、これらの化合物は、細胞の成長に干渉するまたは細胞毒性効果を生じる。非限定的な例として、アンドロゲン、エストロゲン、酢酸メドロキシプロゲステロン（Ｐｒｏｖｅｒａ、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）およびプロゲスチンが挙げられる。
１１．抗ホルモン剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの抗ホルモン剤とコンジュゲートされ得る。「抗ホルモン」剤は、特定の内在性ホルモンの産生を抑制し、および／またはその機能を妨げる薬剤である。一実施形態では、抗ホルモン剤は、アンドロゲン、エストロゲン、プロゲステロンおよびゴナドトロピン−放出ホルモンで構成される群から選択されるホルモンの活性に干渉し、それにより、種々の癌細胞の成長に干渉する。抗ホルモン剤の代表的な例として、それだけには限らないが、アミノグルテチミド、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、酢酸シプロテロン（Ｃｙｐｒｏｓｔａｔ、Ｂａｙｅｒ ＰＬＣ）、デガレリクス（Ｆｉｒｍａｇｏｎ、Ｆｅｒｒｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）、フルタミド（Ｄｒｏｇｅｎｉｌ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｌｔｄ）、フルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ゴセレリン（Ｚｏｌｏｄｅｘ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ロイプロリド（Ｐｒｏｓｔａｐ）、リュープロン、酢酸メドロキシプロゲステロン（Ｐｒｏｖｅｒａ、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）、酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ）、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびトリプトレリン（Ｄｅｃａｐｅｔｙｌ、Ｆｅｒｒｉｎｇ）が挙げられる。
１２．コルチコステロイド
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのコルチコステロイドとコンジュゲートされ得る。コルチコステロイドは、炎症を減少させるために本発明のＡＤＣに使用され得る。コルチコステロイドの例として、それだけには限らないが、グルココルチコイド、例えば、プレドニゾン（Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎ Ｃｏｍｐａｎｙ、ａ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）挙げられる。
１３．光活性治療薬
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの光活性治療薬とコンジュゲートされ得る。光活性治療薬として、処理された細胞が特定の波長の電磁放射線に曝露されると死滅するように利用される化合物が挙げられる。治療的に関連性のある化合物は、組織を透過する波長の電磁放射線を吸収する。好ましい実施形態では、化合物は、十分に活性化されると細胞または組織に対して毒性の光化学的効果を生じさせることができる無毒性の形態で投与される。その他の好ましい実施形態では、これらの化合物は癌性組織により保持され、正常組織からは容易に取り除かれる。非限定的な例として、種々のクロマゲン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）および色素が挙げられる。
１４．オリゴヌクレオチド
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドとコンジュゲートされ得る。オリゴヌクレオチドは、遺伝情報のプロセシングに干渉することによって働く短い核酸鎖で構成される。いくつかの実施形態では、ＡＤＣに使用するためのオリゴヌクレオチドは、修飾されていない一本鎖および／または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ分子であり、その他の実施形態では、これらの治療用オリゴヌクレオチドは、化学修飾された一本鎖および／または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ分子である。一実施形態では、ＡＤＣに使用されるオリゴヌクレオチドは、比較的短く（１９−２５ヌクレオチド）、細胞に存在する核酸標的の全プールの独特の核酸配列とハイブリダイズする。重要なオリゴヌクレオチド技術のいくつかとして、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を含める）、アプタマー、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびリボザイムが挙げられる。
ａ．アンチセンスオリゴヌクレオチド
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドとコンジュゲートされ得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡとＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋハイブリダイゼーションによって結合するように設計されている。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＰＲＬＲの領域、ドメイン、部分またはセグメントをコードするヌクレオチドと相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約５ヌクレオチドから約１００ヌクレオチドまで、約１０ヌクレオチドから約５０ヌクレオチドまで、約１２ヌクレオチドから約３５ヌクレオチドまで、および約１８ヌクレオチドから約２５ヌクレオチドまでを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＰＲＬＲ遺伝子の領域、部分、ドメインまたはセグメントと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％相同である。いくつかの実施形態では、ＰＲＬＲ遺伝子の少なくとも１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個または１００個の連続したヌクレオチドにわたって実質的な配列相同性が存在する。好ましい実施形態では、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドのサイズは、１２ヌクレオチドから２５ヌクレオチドまでの長さにわたり、大多数のアンチセンスオリゴヌクレオチドは１８ヌクレオチドから２１ヌクレオチドの長さである。オリゴヌクレオチドが標的ＲＮＡと結合するとＲＮＡの機能を阻害するために活用され得る多数の機構が存在する（Ｃｒｏｏｋｅ ＳＴ．（１９９９年）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１４８９、３０−４２頁）。最もよい特徴付けられたアンチセンス機構により、ＲＮアーゼＨまたはＲＮＡ干渉機構に関連するヌクレアーゼなどの内在性細胞ヌクレアーゼによって標的とされたＲＮＡが切断される。しかし、スプライシングの調節または翻訳静止などの非触媒機構によって標的遺伝子の発現を阻害するオリゴヌクレオチドも遺伝子機能の強力および選択的なモジュレーターであり得る。
最近多いに注目されている別のＲＮアーゼ依存性アンチセンス機構はＲＮＡｉである（Ｆｉｒｅら（１９９８年）Ｎａｔｕｒｅ、３９１、８０６−８１１頁．；Ｚａｍｏｒｅ ＰＤ．（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９６、１２６５−１２６９頁）。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二本鎖ＲＮＡにより遺伝子発現が配列特異的に阻害される転写後プロセスである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ効果は比較的長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の導入によって実現されるが、好ましい実施形態では、このＲＮＡｉ効果はより短い二本鎖ＲＮＡ、例えば低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）および／またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の導入によって実現される。さらに別の実施形態では、ＲＮＡｉは、標的遺伝子と相補的なｄｓＲＮＡを生成させるプラスミドの導入によっても実現され得る。前述の実施形態のそれぞれにおいて、二本鎖ＲＮＡは、細胞内の特定の標的配列の遺伝子発現に干渉するように設計される。一般に、機構は、リボヌクレアーゼを相同なｍＲＮＡ標的に向け（概説、Ｒｕｖｋｕｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９４：７９７頁（２００１年））、次いで、対応する内在性ｍＲＮＡを分解し、それにより遺伝子発現の調節をもたらす、ｄｓＲＮＡの短いＲＮＡへの変換を伴う。特に、ｄｓＲＮＡは、抗増殖性を有し、それにより、治療への適用を構想することも可能になることが報告されている（Ａｕｂｅｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ ８８：９０６頁（１９９１年））。例えば、合成ｄｓＲＮＡは、マウスにおける腫瘍の成長を阻害し（Ｌｅｖｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、６２：３５７−３６１頁（１９６９年））、白血病マウスの治療において活性であり（Ｚｅｌｅｚｎｉｃｋら、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１３０：１２６−１２８頁（１９６９年））、マウス皮膚に化学的に誘導された腫瘍形成を阻害する（Ｇｅｌｂｏｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ １６７：２０５−２０７頁（１９７０年））ことが示されている。したがって、好ましい実施形態では、本発明は、乳癌を治療するためのＡＤＣへのアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用を提供する。その他の実施形態では、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチド治療を開始するための組成物および方法であって、ｄｓＲＮＡが標的細胞のＰＲＬＲの発現にｍＲＮＡレベルで干渉する、組成物および方法を提供する。上記で使用される場合、ｄｓＲＮＡとは、天然に存在するＲＮＡ、部分的に精製されたＲＮＡ、組換えによって作製されたＲＮＡ、合成ＲＮＡ、ならびに、天然に存在するＲＮＡとは、標準ではないヌクレオチド、非ヌクレオチド材料、ヌクレオチド類似体（例えばロックド核酸（ＬＮＡ））、デオキシリボヌクレオチドおよびそれらの任意の組合せを含むことによって異なる変更されたＲＮＡを指す。本発明のＲＮＡは、本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドに基づく調節を媒介する能力を有しさえすれば天然のＲＮＡと十分に類似している。
ｂ．アプタマー
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのアプタマーとコンジュゲートされ得る。アプタマーは、その他の分子と結合するその能力に基づいてランダムなプールから選択されている核酸分子である。抗体と同様に、アプタマーは、標的分子と顕著な親和性および特異性で結合することができる。多くの実施形態では、アプタマーは、標的タンパク質との相互作用を可能にする複雑な配列依存性の３次元形状であり、それにより抗体−抗原相互作用と類似した、しっかりと結合した複合体がもたらされ、それにより、前記タンパク質の機能に干渉すると仮定される。それらの標的タンパク質としっかりと、特異的に結合するアプタマーの特定の能力により、標的化分子療法としてのそれらの潜在性が際立つ。
ｃ．ＣｐＧオリゴヌクレオチド
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのＣｐＧオリゴヌクレオチドとコンジュゲートされ得る。細菌ＤＮＡおよびウイルスＤＮＡは、ヒトにおける自然免疫と特異免疫の両方の強力な活性化因子であることが公知である。これらの免疫学的特性は、細菌ＤＮＡに見い出される非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドモチーフと関連づけられている。これらのモチーフがヒトでは稀であるという事実に起因して、ヒト免疫系は、これらのモチーフを感染の早期指標として認識し、その後、免疫応答を開始する進化した能力を有する。したがって、このＣｐＧモチーフを含有するオリゴヌクレオチドは、抗腫瘍免疫応答を開始するために活用され得る。
ｄ．リボザイム
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのリボザイムとコンジュゲートされ得る。リボザイムは、長さが約４０ヌクレオチドから１５５ヌクレオチドまでにわたる、触媒作用のあるＲＮＡ分子である。リボザイムは、特定のＲＮＡ分子を認識し、切断するその能力により、治療薬の潜在的な候補になる。代表的な例として、アンジオザイムが挙げられる。
１５．放射性核種薬剤（放射性同位元素）
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの放射性核種薬剤とコンジュゲートされ得る。放射性核種薬剤は、放射性崩壊を起こすことができる不安定な核を特徴とする薬剤を含む。上首尾の放射性核種による治療のための基礎は、癌細胞による放射性核種の十分な濃度および長期にわたる保持に依存する。考慮すべきその他の因子として、放射性核種の半減期、放出された粒子のエネルギーおよび放出された粒子が移動し得る最大範囲が挙げられる。好ましい実施形態では、治療薬は、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、１１１Ａｇ、６７Ｇａ、１４２Ｐｒ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、２１２Ｐｂ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９９Ｍｏ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１６９Ｅｒ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、および２１１Ｐｂからなる群から選択される放射性核種である。オージェ−放出粒子を伴って実質的に崩壊する放射性核種も好ましい。例えば、Ｃｏ−５８、Ｇａ−６７、Ｂｒ−８０ｍ、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０３ｍ、Ｐｔ−１０９、Ｉｎ−１１１ １、Ｓｂ−１１９、Ｉ−１２５、Ｈｏ−１６１、Ｏｓ−１８９ｍおよびＩｒ−１９２。有用なベータ−粒子−放出核種の崩壊エネルギーは、Ｄｙ−１５２、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｒａ−２２３、Ｒｎ−２１９、Ｐｏ−２１５、Ｂｉ−２１１、Ａｃ−２２５、Ｆｒ−２２１、Ａｔ−２１７、Ｂｉ−２１３およびＦｍ−２５５であることが好ましい。有用なアルファ−粒子−放出放射性核種の崩壊エネルギーは、好ましくは２，０００−１０，０００ｋｅＶ、より好ましくは３，０００−８，０００ｋｅＶ、最も好ましくは４，０００−７，０００ｋｅＶである。使用されるさらなる潜在性放射性同位元素として、１１Ｃ、１３Ｎ、１５０、７５Ｂｒ、１９８Ａｕ、２２４Ａｃ、１２６Ｉ、１３３Ｉ、７７Ｂｒ、１１３ｍＩｎ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｕ、１０７Ｈｇ、２０３Ｈｇ、１２１ｍＴｅ、１２２ｍＴｅ、１２５ｍＴｅ、１６５Ｔｍ、１６７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１９７Ｐｔ、１０９Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１６１Ｔｂ、１６６Ｈｏ、１９９Ａｕ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５１Ｃｒ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、２０１Ｔｌ、２２５Ａｃ、７６Ｂｒ、１６９Ｙｂ、などが挙げられる。
１６．放射線増感剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つの放射線増感剤とコンジュゲートされ得る。用語「放射線増感剤」は、本明細書で使用される場合、電磁放射線に対して放射線増感されるべき細胞の感度を増大させるため、および／または電磁放射線を用いて治療可能な疾患の治療を促進するために、動物に治療有効量で投与される分子、好ましくは低分子量の分子と定義される。放射線増感剤は、癌細胞を放射線療法に対してより感受性する一方で、一般には正常な細胞に対する影響ははるかに少ない薬剤である。したがって、放射線増感剤は、放射標識した抗体またはＡＤＣと組み合わせて使用され得る。放射線増感剤の添加により、放射標識した抗体または抗体断片を単独で用いた治療と比較して有効性が増強され得る。放射線増感剤は、Ｄ．Ｍ．Ｇｏｌｄｂｅｒｇ（編）、Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（１９９５年）に記載されている。放射線増感剤の例として、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、タキサンおよびシスプラチンが挙げられる。
放射線増感剤は、Ｘ線の電磁放射線によって活性化され得る。Ｘ線により活性化された放射線増感剤の代表的な例として、それだけには限らないが、以下が挙げられる：メトロニダゾール、ミソニダゾール、脱メチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモラゾール、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ１０６９、ＳＲ４２３３、Ｅ０９、ＲＢ６１４５、ニコチンアミド、５−ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５−ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦＵｄＲ）、ヒドロキシウレア、シスプラチンならびにその治療的に有効な類似体および誘導体が挙げられる。あるいは、放射線増感剤は、光線力学的療法（ＰＤＴ）を使用して活性化され得る。光線力学的放射線増感剤の代表的な例として、それだけには限らないが、ヘマトポルフィリン誘導体、フォトフリン（ｒ）、ベンゾポルフィリン誘導体、ＮＰｅ６、スズエチオポルフィリン（ＳｎＥＴ２）、フェオボルビド（ｐｈｅｏｂｏｒｂｉｄｅ）ａ、バクテリオクロロフィル ａ、ナフタロシアニン、フタロシアニン、亜鉛フタロシアニンならびにその治療的に有効な類似体および誘導体が挙げられる。
１７．トポイソメラーゼ阻害剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのトポイソメラーゼ阻害剤とコンジュゲートされ得る。トポイソメラーゼ阻害剤は、正常な細胞周期の間に、触媒し、次いで破壊し、ＤＮＡ鎖のリン酸ジエステル骨格を再結合させることによってＤＮＡ構造の変化を制御する酵素であるトポイソメラーゼ酵素（トポイソメラーゼＩおよびＩＩ）の作用に干渉するように設計された化学療法剤である。ＤＮＡトポイソメラーゼＩ阻害剤の代表的な例として、それだけには限らないが、カンプトテシンおよびその誘導体イリノテカン（ＣＰＴ−１１、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）およびトポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩ阻害剤の代表的な例として、それだけには限らないが、アムサクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エリプチシン、エピルビシン、エトポシド、ラゾキサンおよびテニポシドが挙げられる。
１８．チロシンキナーゼ阻害剤
本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、少なくとも１つのチロシンキナーゼ阻害剤とコンジュゲートされ得る。チロシンキナーゼは、リン酸基をアミノ酸チロシンに結合させる機能を果たす細胞内酵素である。タンパク質チロシンキナーゼの機能する能力を遮断することにより、腫瘍の成長を阻害することができる。本発明のＡＤＣに使用され得るチロシンキナーゼの例として、それだけには限らないが、アキシチニブ、ボスチニブ、セジラニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマクサニブ、スニチニブおよびバンデタニブが挙げられる。
１９．その他の薬剤
本発明のＡＤＣに使用され得るその他の薬剤の例として、それだけには限らないが、アブリン（例えばアブリンＡ鎖）、アルファ毒素、アレウリテス・ホルジイ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、アマトキシン、クロチン、クルシン、ジアンチンタンパク質、ジフテリア毒素（例えばジフテリアＡ鎖およびジフテリア毒素の非結合活性断片）、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮアーゼ）、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、モデシンＡ鎖、モモルディカ・カランティア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、ネオマイシン、オンコナーゼ、フェノマイシン、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ポークウィード抗ウイルスタンパク質、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）内毒素、シュードモナス外毒素（例えば外毒素Ａ鎖（シュードモナス・アエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来））、レストリクトシン、リシンＡ鎖、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）、サパオナリア・オフィスナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、サポリン、アルファ−サルシン、ブドウ球菌性エンテロトキシン−Ａ、破傷風毒素、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ、Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、プロテアソーム阻害剤（例えばＰＳ−３４１［ボルテゾミブまたはＶｅｌｃａｄｅ］）、ＨＤＡＣ阻害剤（ボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．））、ベリノスタット、エンチノスタット、モセチノスタットおよびパノビノスタット）、ＣＯＸ−２阻害剤、置換尿素、熱ショックタンパク質阻害剤（例えばゲルダナマイシンおよびその多数の類似体）、副腎皮質抑制薬およびトリコテシン（例えば、ＷＯ９３／２１２３２を参照のこと）が挙げられる。その他の薬剤として、アスパラギナーゼ（Ｅｓｐａｒ、Ｌｕｎｄｂｅｃｋ Ｉｎｃ．）、ヒドロキシウレア、レバミソール、ミトタン（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）およびトレチノイン（Ｒｅｎｏｖａ、Ｖａｌｅａｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）も挙げられる。
本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣに使用され得る上述の薬物部分の群は、薬物の特定の例が２つ以上のカテゴリーにおいて見い出すことができる、例えば、アンサマイトシンは有糸分裂阻害剤および抗腫瘍抗生物質のどちらでもあるという点で、排他的なものではないことに留意するべきである。
上記の薬物部分の立体異性体のすべて、すなわちＤのキラル炭素におけるＲ立体配置およびＳ立体配置の任意の組合せが本発明の化合物として考えられている。
上記の薬剤（すなわち、抗体とコンジュゲートしていない裸の薬剤）も本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体との併用療法に使用され得る。一実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ抗体は、癌を治療するための併用療法において前述の薬剤のいずれかと一緒に使用され、この場合、薬剤は抗ＰＲＬＲ抗体を被験体に投与する前、それと同時にまたはその後に投与される。
Ｂ．リンカー
本発明は、薬物を標的化送達するための抗ＰＲＬＲ ＡＤＣを提供する。本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣは抗ＰＲＬＲ抗体および薬物を含み、それにより抗体および薬物をリンカーを通じて結合させることができる。したがって、一実施形態では、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、リンカー、細胞傷害性薬物および抗ＰＲＬＲ抗体を含む。用語「リンカー」とは、本明細書で使用される場合、抗体と薬物部分を共有結合させる、共有結合または原子の鎖を含む化学的部分を指す。ＡＤＣは、抗体および薬物と結合するための反応性官能基を有するリンカーを使用して調製される。例えば、システインのチオールまたはアミン、例えば抗体のＮ末端またはアミノ酸側鎖、例えばリシンなどによりリンカーの官能基との結合が形成され得る。
リンカーは、細胞外で安定であることが好ましい。ＡＤＣは、細胞内に輸送または送達される前に、安定であり、無傷なままであること、すなわち、抗体と薬物部分が連結したままであることが好ましい。リンカーは標的細胞の外部では安定であり、細胞の内部ではいくつかの効果的な速度で切断され得る。有効なリンカーは、（ｉ）抗体の特異的な結合性を維持し、（ｉｉ）コンジュゲートまたは薬物部分の送達、例えば細胞内送達を可能にし、および（ｉｉｉ）細胞傷害性の細胞死滅効果、細胞増殖抑制効果、またはその他の点での薬物部分の治療効果を維持する。ＡＤＣの安定性は、質量分析、ＨＰＬＣおよび分離／分析技法ＬＣ／ＭＳなどの標準の分析技法によって測定することができる。
一般に、ＡＤＣは、少なくとも１つの薬物単位と共有結合により連結した抗体を含む。薬物単位は、直接共有結合により連結していてもよく、リンカーを介していてもよい。抗体と薬物部分の共有結合には、リンカーが２つの反応性官能基を有すること、すなわち反応性の点で二価性であることが必要である。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテンおよびレポーター基などの２つ以上の機能的または生物学的に活性な部分を結合させるために有用な二価リンカー試薬は公知であり、方法にはそれらにより生じるコンジュゲートが記載されている（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ， Ｇ．Ｔ．（１９９６年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ； Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ： Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２３４−２４２頁）。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは次式（式Ｉ）：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ（Ｉ）
またはその医薬として許容される塩もしくは溶媒和化合物を有し、
式中、Ｌは抗体、例えば本発明の抗ＰＲＬＲ抗体であり；
（ＬＵ−Ｄ）はリンカー−薬物部分であり、
ここでＬＵ−は、リンカー単位（リンカーとも称される）であり、
−Ｄは、標的細胞、例えばＰＲＬＲを発現している細胞に対して例えば細胞増殖抑制性、細胞傷害性またはその他の点での治療的活性を有する薬物部分であり；
ｐは、１から２０までの整数である。
いくつかの実施形態では、ｐは１から１０まで、１から９まで、１から８まで、１から７まで、１から６まで、１から５まで、１から４まで、１から３まで、または１から２までにわたる。いくつかの実施形態では、ｐは２から１０まで、２から９まで、２から８まで、２から７まで、２から６まで、２から５まで、２から４までまたは２から３までにわたる。その他の実施形態では、ｐは１、２、３、４、５または６である。いくつかの実施形態では、ｐは２、４、６または８である。
いくつかの実施形態では、−Ｄ部分は同じである。さらに別の実施形態では、−Ｄ部分は異なる。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは次式（ＩＩ）：
Ｌ−（Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−Ｄ）ｐ（ＩＩ）
またはその医薬として許容される塩もしくは溶媒和化合物を有し、
式中、
Ｌは抗体、例えば抗ＰＲＬＲ抗体であり、
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−は、リンカー単位（ＬＵ）であり、
ここで、−Ａ−は、場合による引き伸ばし単位（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ ｕｎｉｔ）であり、
ａは０または１であり、
各−Ｗ−は、それぞれ独立に、アミノ酸単位（またはいくつかの実施形態では、グルクロニド単位、米国特許出願公開第２０１２／０１０７３３２Ａ１号も参照のこと）であり、
ｗは、０から１２までにわたる整数であり、
−Ｙ−は、自壊性（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）スペーサー単位であり、
ｙは０、１または２であり；
−Ｄは、標的細胞、例えばＰＲＬＲを発現している細胞に対して例えば細胞増殖抑制性、細胞傷害性またはその他の点での治療的活性を有する薬物単位であり；
ｐは、１から２０までの整数である。
いくつかの実施形態では、ａは０または１であり、ｗは０または１であり、ｙは０、１または２である。いくつかの実施形態では、ａは０または１であり、ｗは０または１であり、ｙは０または１である。いくつかの実施形態では、ｐは１から１０まで、１から９まで、１から８まで、１から７まで、１から６まで、１から５まで、１から４まで、１から３まで、または１から２までにわたる。いくつかの実施形態では、ｐは２から８まで、２から７まで、２から６まで、２から５まで、２から４までまたは２から３までにわたる。その他の実施形態では、ｐは１、２、３、４、５または６である。いくつかの実施形態では、ｐは２または４である。いくつかの実施形態では、ｗがゼロでない場合、ｙは１または２である。いくつかの実施形態では、ｗが１から１２までである場合、ｙは１または２である。いくつかの実施形態では、ｗは２から１２までであり、ｙは１または２である。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｗおよびｙは０である。
複数の抗体を含む組成物については、薬物負荷量は、抗体当たりの薬物分子の平均数であるｐで表される。薬物負荷量は、抗体当たり薬物（Ｄ）１から２０までにわたり得る。コンジュゲーション反応の調製物中の抗体当たりの薬物の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイおよびＨＰＬＣなどの従来の手段によって特徴付けられ得る。ｐを単位としたＡＤＣの定量分布も決定され得る。いくつかの場合には、ｐがその他の薬物負荷量を伴うＡＤＣからの特定の値である場合の均一なＡＤＣの分離、精製および特徴付けは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって実現され得る。例示的な実施形態では、ｐは２から８までである。
ＡＤＣの生成は、当業者に公知の任意の技法によって実現され得る。本発明のＡＤＣは、本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体、薬物および場合によって薬物と抗体を結合させるリンカーを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４；配列番号４５；配列番号４８；配列番号５２；配列番号５３；配列番号５４；配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０；配列番号６１；配列番号６４；配列番号６８；配列番号６９；配列番号７０；配列番号７４；配列番号７５；配列番号７６；配列番号７８；配列番号８２；配列番号８３；配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号９１；配列番号９５；配列番号９６；配列番号１０３；配列番号１０４；配列番号１０５；配列番号１０６；配列番号１０７；配列番号１０８；配列番号１０９；配列番号１１０；配列番号１１１；配列番号１１２；配列番号１１３；配列番号１１４；配列番号１１５；配列番号１１６；配列番号１１７；配列番号１１８；配列番号１１９；配列番号１２０、配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３に記載されている少なくとも１つの可変領域を含む抗ＰＲＬＲ抗体である。薬物およびリンカーと抗体との共有結合のためにいくつもの異なる反応が利用可能である。これは、リシンのアミン基、グルタミン酸およびアスパラギン酸の遊離のカルボン酸基、システインのスルフヒドリル基および芳香族アミノ酸の種々の部分を含めた抗体とアミノ酸残基の反応によって実現され得る。共有結合の最も一般的に使用される非特異的方法のうちの１つは、化合物のカルボキシ（またはアミノ）基と抗体のアミノ（またはカルボキシ）基を連結するカルボジイミド反応である。さらに、ジアルデヒドまたはイミドエステルなどの二官能性薬剤が、化合物のアミノ基と抗体のアミノ基を連結するために使用されてきた。シッフ塩基反応も、薬物と抗体を結合させるために利用可能である。この方法は、グリコールまたはヒドロキシ基を含有する薬物を過ヨウ素酸酸化させ、したがって形成されるアルデヒドを、次いで結合剤と反応させることを含む。結合は、抗体のアミノ基とのシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートも、薬物と抗体を共有結合させるためのカップリング剤として使用され得る。その他の技法は当業者には公知であり、本発明の範囲内に入る。
特定の実施形態では、リンカーの前駆体である中間体を適切な条件下で薬物と反応させる。特定の実施形態では、薬物または中間体の反応性基が使用される。薬物と中間体または誘導体化された薬物との反応の生成物を、その後、抗ＰＲＬＲ抗体と適切な条件下で反応させる。例示的なリンカー、引き伸ばし単位、アミノ酸単位、自壊性スペーサー単位の合成および構造は、そのそれぞれの全体が参照により本明細書に組み込む、米国特許出願公開第２００３００８３２６３号、同第２００５０２３８６４９号および同第２００５０００９７５１号に記載されている。リンカーの例が以下に提供される。
好ましい実施形態では、リンカーは、細胞外の環境に対して実質的に感受性ではない。本明細書で使用される場合、リンカーとの関連で「細胞外の環境に対して実質的に感受性ではない」とは、ＡＤＣが細胞外の環境（例えば、血漿中）に存在する場合に、抗体−薬物コンジュゲート化合物の試料中のリンカーの約２０％以下、一般には約１５％以下、より一般には約１０％以下、さらにより一般には約５％以下、約３％以下、または約１％以下が切断されることを意味する。リンカーが細胞外の環境に対して実質的に感受性ではないかどうかは、例えば、抗体−薬物コンジュゲート化合物を血漿と一緒に所定の期間（例えば、２時間、４時間、８時間、１６時間、または２４時間）にわたってインキュベートし、次いで、血漿中に存在する遊離の薬物の量を定量化することによって決定され得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは細胞内の条件下で切断可能であり、したがって、リンカーの切断により、薬物単位が抗体から細胞内環境に放出される。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーはｐＨ−感受性である、すなわち、特定のｐＨ値における加水分解に対して感受性である。一般には、ｐＨ−感受性リンカーは酸性条件下で加水分解性である。例えば、リソソーム中で加水分解される酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）が使用され得る（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；５，８２４，８０５号；５，６２２，９２９号；ＤｕｂｏｗｃｈｉｋおよびＷａｌｋｅｒ、１９９９、Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７−１２３頁；Ｎｅｖｉｌｌｅら、１９８９年、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３−１４６６１頁を参照のこと）。このようなリンカーは、血液中などの中性ｐＨ条件下で比較的安定であるが、リソソームのおおよそのｐＨであるｐＨ５．５または５．０を下回ると不安定である。特定の実施形態では、加水分解性リンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、治療薬とアシルヒドラゾン結合を介して結合するチオエーテルなど（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号を参照のこと））である。
その他の実施形態では、リンカーは、還元性条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−５−アセチルチオ酢酸）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）酪酸（ｂｕｔｙｒａｔｅ））およびＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴを使用して形成することができるものを含めた種々のジスルフィドリンカーが当技術分野で公知である（例えば、Ｔｈｏｒｐｅら、１９８７年、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：５９２４−５９３１頁；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋら、Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕ．Ｐｒｅｓｓ、１９８７を参照のこと。米国特許第４，８８０，９３５号も参照のこと）。
いくつかの実施形態では、リンカーは、切断剤、例えば、細胞内環境内（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ内）に存在する酵素によって切断可能である。リンカーは、例えば、それだけには限らないが、リソソームまたはエンドソームのプロテアーゼを含めた、細胞内のペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチジルリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸の長さであるまたは少なくとも３アミノ酸の長さである。切断剤として、カテプシンＢおよびＤおよびプラスミンを挙げることができ、これらはすべて、ジペプチド薬物誘導体を加水分解し、それにより活性な薬物の標的細胞内部への放出をもたらすことが公知である（例えば、ＤｕｂｏｗｃｈｉｋおよびＷａｌｋｅｒ、１９９９、Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７−１２３頁を参照のこと）。ＰＲＬＲ発現細胞内に存在する酵素によって切断可能なペプチジルリンカーが最も典型的である。このようなリンカーの例は、例えば、その全体があらゆる目的について参照により本明細書に組み込む米国特許第６，２１４，３４５号に記載されている。特定の実施形態では、細胞内のプロテアーゼによって切断可能なペプチジルリンカーは、Ｖａｌ−ＣｉｔリンカーまたはＰｈｅ−Ｌｙｓリンカーである（例えば、ｖａｌ−ｃｉｔリンカーを用いたドキソルビシンの合成が記載されている米国特許第６，２１４，３４５号を参照のこと）。治療薬の細胞内タンパク質分解性放出を使用する１つの利点は、薬剤がコンジュゲートすると一般には弱毒化され、またコンジュゲートの血清中での安定性が一般には高いことである。
その他の実施形態では、本発明のＡＤＣのリンカーは、マロン酸塩リンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎら、１９９５年、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５：１３８７−９３頁）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕら、１９９５年、Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１２９９−１３０４）または３’−Ｎ−アミド類似体（Ｌａｕら、１９９５年、Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１３０５−１２）である。
さらにその他の実施形態では、リンカー単位は切断可能ではなく、薬物は、例えば抗体分解によって放出される。その全体が参照により本明細書に組み込む米国特許出願公開第２００５０２３８６４９号を参照のこと。ＡＤＣが実質的に細胞の外部にあるままであり、標的細胞表面上の特定の受容体と相互作用し、その結果、ＡＤＣの結合により、特定の細胞のシグナル伝達経路が開始される（または妨げられる）ように、切断不可能なリンカーを含むＡＤＣを設計することができる。
いくつかの実施形態では、リンカー単位は、実質的に親水性のリンカー（例えば、ＰＥＧ４Ｍａｌおよびスルホ−ＳＰＤＢ）である。親水性リンカーは、薬物が抵抗性の癌細胞からＭＤＲ（多剤耐性）または機能的に同様の輸送体によって排出されるのを防ぐために使用され得る。
その他の実施形態では、切断されると、リンカーは細胞の成長および／または細胞増殖を直接または間接的に阻害するように機能する。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、切断されると挿入剤として機能し得、それにより、高分子の生合成（例えばＤＮＡ複製、ＲＮＡ転写および／またはタンパク質合成）が阻害される。
その他の実施形態では、リンカーは、リンカー単位−薬物および／または薬物単独が隣接する細胞に拡散することによってバイスタンダー死滅（隣接する細胞の死滅）が容易になるように設計される。その他の実施形態では、リンカーは細胞の内部移行を促進するものである。
立体障害をうけているジスルフィドが存在することにより、特定のジスルフィド結合の安定性が増大し得、それによりＡＤＣの効力が増強される。したがって、一実施形態では、リンカーは、立体障害をうけているジスルフィド結合を含む。立体障害をうけているジスルフィドとは、特定の分子環境内に存在するジスルフィド結合を指し、環境は、ジスルフィド結合の低下を防止するまたは少なくとも部分的に阻害する一般には同じ分子または化合物内の原子の特定の空間的配置または方向を特徴とする。したがって、ジスルフィド結合の近位にかさのある（または立体障害をうけている）化学的部分および／またはかさのあるアミノ酸の側鎖が存在することにより、ジスルフィド結合の低下をもたらし得るジスルフィド結合の潜在的な相互作用が防止されるまたは少なくとも部分的に阻害される。
特に、上述のリンカーの種類は相互排他的ではない。例えば、一実施形態では、本発明のＡＤＣに使用されるリンカーは、細胞の内部移行を促進する切断不可能なリンカーである。
上記の式ＩＩに記載の通り、いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＲＬＲ ＡＤＣは引き伸ばし単位を含む。引き伸ばし単位（Ａ）は、存在する場合、抗体を、存在する場合にはアミノ酸単位（−Ｗ−）と連結することができる、存在する場合にはスペーサー単位（−Ｙ−）と連結することができる、または、薬物（−Ｄ）と連結することができる（式ＩＩ参照）。天然または化学的操作によるもののいずれかの、本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体上に存在し得る有用な官能基として、それだけには限らないが、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマーヒドロキシル基およびカルボキシルが挙げられる。適切な官能基はスルフヒドリルおよびアミノである。一実施例では、スルフヒドリル基は、抗ＰＲＬＲ抗体の分子内ジスルフィド結合を低下させることによって作製され得る。別の実施形態では、スルフヒドリル基は、抗ＰＲＬＲ抗体のリシン部分のアミノ基と２−イミノチオラン（トラウト試薬）またはその他のスルフヒドリル生成試薬の反応によって作製され得る。特定の実施形態では、抗ＰＲＬＲ抗体は、組換え抗体であり、１つ以上のリシン部分を有するように操作されている。その他の特定の実施形態では、組換え抗ＰＲＬＲ抗体は、さらなるスルフヒドリル基、例えばさらなるシステインを有するように操作されている。
一実施形態では、引き伸ばし単位は、抗体の硫黄原子との結合を形成する。硫黄原子は抗体のスルフヒドリル基に由来し得る。この実施形態の代表的な引き伸ばし単位は、以下に示される式ＩＩＩａおよびＩＩＩｂの角括弧内に示されている
Figure 2018198608
 （式中、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは上で定義された通りであり、Ｒ１７は、
−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルケニレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキニレン−、カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）−、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルケニレン）−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキニレン）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−アリーレン、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−アリーレン、アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（カルボシクロ）−、Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（カルボシクロ）−、−（カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン、−ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（ヘテロシクロ）−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキニレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−、
から選択され、ｒは、１〜１０にわたる整数であり、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｅ）、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｏ）、複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏ）およびアリーレン基は、単独であるか別の基の一部であるかにかかわらず、場合によって置換されている。いくつかの実施形態では、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｅ）、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｏ）、複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏ）およびアリーレン基は、単独であるか別の基の一部であるかにかかわらず非置換型である。いくつかの実施形態では、Ｒ１７は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（カルボシクロ）−、−（カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（ヘテロシクロ）−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−；から選択され、ｒは、１〜１０にわたる整数であり、前記アルキレン基は非置換型であり、残りの基は場合によって置換されている。）
例示的な引き伸ばし単位は以下に記載されている式ＩＩＩａのものであり、式中、Ｒ１７は−（ＣＨ２）５−である（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）。
Figure 2018198608
別の例示的な引き伸ばし単位は以下に記載されている式ＩＩＩａのものであり、式中、Ｒ１７は−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−であり、ｒは２である、（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）。
Figure 2018198608
別の例示的な引き伸ばし単位は式ＩＩＩａのものであり、式中、Ｒ１７はアリーレン−またはアリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−である。いくつかの実施形態では、アリール基は、非置換フェニル基である。さらに、別の例示的な引き伸ばし単位は以下に記載されている式ＩＩＩｂのものであり、式中、Ｒ１７は−（ＣＨ２）５−である（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）。
Figure 2018198608
特定の実施形態では、引き伸ばし単位は抗ＰＲＬＲ抗体単位の硫黄原子と引き伸ばし単位の硫黄原子の間のジスルフィド結合を介して抗ＰＲＬＲ抗体と連結している。この実施形態の代表的な引き伸ばし単位は式ＩＶの角括弧内に示されており（以下を参照のこと、およびＵ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）、Ｒ１７、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは上で定義された通りである。
Figure 2018198608
以下に示されている式のＳ部分（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）は、文脈により別段の指定のない限り、抗体の硫黄原子を指すことに留意するべきである。
Figure 2018198608
さらにその他の実施形態では、引き伸ばしは、抗体の第１級アミノ基または第２級アミノ基と結合を形成することができる反応性部位を含有する。これらの反応性部位の例として、それだけには限らないが、スクシンイミドエステル、４ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、酸無水物、酸塩化物、スルホニルクロリド、イソシアネートおよびイソチオシアネートなどの活性化エステルが挙げられる。この実施形態の代表的な引き伸ばし単位は、式Ｖａおよび式Ｖｂの角括弧内に示されており（以下を参照のこと（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと））、Ｒ１７、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは上で定義された通りである。
Figure 2018198608
いくつかの実施形態では、引き伸ばしは、抗体上に存在し得る修飾された炭水化物（−ＣＨＯ）基に対して反応性である反応性部位を含有する。例えば、炭水化物は、過ヨウ素酸ナトリウムなどの試薬を使用して穏やかに酸化され得、生じた酸化された炭水化物の（−ＣＨＯ）単位は、Ｋａｎｅｋｏら、１９９１年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２：１３３−４１頁に記載されているものなどのヒドラジド、オキシム、１級アミンまたは２級アミン、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレートおよびアリールヒドラジドなどの官能性を含有する引き伸ばしを用いて凝縮され得る。この実施形態の代表的な引き伸ばし単位は、式ＶＩａ、式ＶＩｂおよび式ＶＩｃの角括弧内に示されており（以下を参照のこと（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）−Ｒ１７−、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは上で定義されている通りである。
Figure 2018198608
アミノ酸単位（−Ｗ−）は、存在する場合、スペーサー単位が存在する場合には引き伸ばし単位とスペーサー単位を連結し、スペーサー単位が存在しない場合には引き伸ばし単位と薬物部分を連結し、引き伸ばし単位およびスペーサー単位が存在しない場合には抗体単位と薬物単位を連結する。Ｗｗ−は、例えば、モノペプチド、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチド単位であり得る。各−Ｗ−単位は、それぞれ独立に、以下の角括弧に示されている式を有し（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）ｗは、０から１２までにわたる整数であり、
Figure 2018198608
Ｒ１９は
水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシルベンジル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−、フェニル、シクロヘキシル、
であり、その他の非限定的な代表的なＲ１９基は以下に記載されている。
Figure 2018198608
いくつかの実施形態では、アミノ酸単位は、薬物（−Ｄ）を遊離させるために、癌または腫瘍に関連するプロテアーゼを含めた１種以上の酵素によって酵素的に切断され得、これは、一実施形態では、放出されるとインビボでプロトン化されて薬物をもたらす。
特定の実施形態では、アミノ酸単位は、天然アミノ酸を含み得る。その他の実施形態では、アミノ酸単位は、非天然アミノ酸を含み得る。例示的なＷｗ単位は、式（ＶＩＩ）（以下に記載されている（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと））、
Figure 2018198608
 （式中、Ｒ２０およびＲ２１は以下に記載されている通りである；
Figure 2018198608
 ）
式（ＶＩＩＩ）（以下に記載されている（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと））、
Figure 2018198608
 （式中、Ｒ２０、Ｒ２１およびＲ２２は以下に記載されている通りである；
Figure 2018198608
 ）
および式（ＩＸ）（以下に記載されている（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと））、
Figure 2018198608
 （式中、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３は以下に記載されている通りである：
Figure 2018198608
 ）
で表される。
例示的なアミノ酸単位として、それだけには限らないが、式ＶＩＩの単位（式中、Ｒ２０はベンジルであり、Ｒ２１は−（ＣＨ２）４ＮＨ２である；Ｒ２０はイソプロピルであり、Ｒ２１は−（ＣＨ２）４ＮＨ２である；またはＲ２０はイソプロピルであり、Ｒ２１は−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２である）が挙げられる。別の例示的なアミノ酸単位は、式ＶＩＩＩの単位（式中、Ｒ２０はベンジルであり、Ｒ２１はベンジルであり、Ｒ２２は−（ＣＨ２）４ＮＨ２である）である。
有用な−ＷＷ−単位は、特定の酵素、例えば腫瘍に関連するプロテアーゼによる酵素的切断に関するそれらの選択性で設計および最適化され得る。一実施形態では、−Ｗｗ−単位は、その切断がカテプシンＢ、ＣおよびＤ、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒されるものである。一実施形態では、−Ｗｗ−は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドである。Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２またはＲ２３が水素以外である場合、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２またはＲ２３が結合している炭素原子はキラルである。Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２またはＲ２３が結合している各炭素原子は、それぞれ独立に、（Ｓ）立体配置または（Ｒ）立体配置にある。
アミノ酸単位の一実施形態では、アミノ酸単位はバリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）である。別の態様では、アミノ酸単位はフェニルアラニン−リシン（すなわち、ｆｋ）である。アミノ酸単位のさらに別の態様では、アミノ酸単位はＮ−メチルバリン−シトルリンである。さらに別の態様では、アミノ酸単位は、５−アミノバレリン酸、ホモフェニルアラニンリシン、テトライソキノリンカルボキシレートリシン、シクロヘキシルアラニンリシン、イソニペコチン酸リシン、ベータアラニンリシン、グリシンセリンバリングルタミンおよびイソニペコチン酸である。
あるいは、いくつかの実施形態では、−Ｗ−は、引き伸ばし単位およびスペーサー単位が存在する場合には引き伸ばし単位とスペーサー単位を連結し、スペーサー単位が存在しない場合には引き伸ばし単位と薬物部分を連結し、引き伸ばし単位およびスペーサー単位が存在しない場合にはリンカー単位と薬物を連結するグルクロニド単位である。グルクロニド単位は、β−グルクロニダーゼ酵素によって切断され得る部位を含む（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）。いくつかの実施形態では、グルクロニド単位は、グリコシド結合（−Ｏ’−）によって以下に記載されている式の自壊性基（Ｚ）と連結した糖部分（Ｓｕ）を含む（参照により本明細書に組み込むＵＳ２０１２／０１０７３３２も参照のこと）。
Figure 2018198608
グリコシド結合（−Ｏ’−）は、一般には、ヒトリソソームβ−グルクロニダーゼによって切断可能な結合などのβ−グルクロニダーゼ切断部位である。グルクロニド単位との関連で、用語「自壊性基」とは、２つまたは３つの間隔があいた化学的部分（すなわち、糖部分（グリコシド結合によって）、薬物単位（直接またはスペーサー単位によって間接的に）、いくつかの実施形態では、リンカー（直接または引き伸ばし単位によって間接的に）を共有結合により連結し合わせて安定な分子にすることができるジまたはトリ官能性化学的部分を指す。自壊性基は、糖部分とのその結合が切断されると第１の化学的部分（例えば、スペーサーまたは薬物単位）から自然に分離される。
いくつかの実施形態では、糖部分（Ｓｕ）は、ピラノースなどの環状ヘキソース、またはフラノースなどの環状ペントースである。いくつかの実施形態では、ピラノースは、グルクロニドまたはヘキソースである。糖部分は通常β−Ｄコンホメーションにある。特定の実施形態では、ピラノースは、β−Ｄ−グルクロニド部分（すなわち、β−グルクロニダーゼによって切断可能である、グリコシド結合によって自壊性基−Ｚ−と連結したβ−Ｄ−グルクロン酸）である。いくつかの実施形態では、糖部分は非置換型（例えば、天然に存在する環状ヘキソースまたは環状ペントース）である。その他の実施形態では、糖部分は、置換されたβ−Ｄ−グルクロニド（すなわち、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、硫黄、窒素または低級アルキルなどの１つ以上の基で置換されたグルクロン酸であり得る。
いくつかの実施形態では、自壊性基Ｚは、本明細書にさらに記載されているｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）単位である。その他の適切な自壊性基は当技術分野で公知である。
いくつかの実施形態では、グルクロニド単位は以下に記載されている式のうちの１つを有する（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）。
Figure 2018198608
 式中、Ｓｕは糖部分であり、グリコシド結合は、Ｓｕと自壊性基Ｚの間の酸素結合を含み、各Ｒは、それぞれ独立に、水素、ハロ（例えば、クロロ、ブロモ、フルオロなど）、−ＣＮ、−ＮＯ２、またはその他の電子求引基もしくは電子供与基であるが、ただし、グルクロニド単位（特にＺ）はグリコシド結合が切断されると自壊する。いくつかの実施形態では、各Ｒは、それぞれ独立に、水素、ハロ（例えば、クロロ、ブロモ、フルオロなど）、−ＣＮまたは−ＮＯ２である。
いくつかの実施形態では、グルクロニド単位は以下に記載されている式のうちの１つを有する（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）。
Figure 2018198608
 式中、Ｓｕは糖部分であり、グリコシド結合（−Ｏ’−）は、Ｓｕと自壊性基Ｚの間の酸素結合を含み、各Ｒは、それぞれ独立に、水素である。
いくつかの実施形態では、自壊性基（Ｚ）は、糖部分、薬物（直接またはスペーサー単位を介して間接的に）およびリンカー（直接または引き伸ばし単位を介して間接的に）と共有結合で連結している。いくつかの実施形態では、薬物リンカーコンジュゲートは以下に記載されている式を有する（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）。
Figure 2018198608
 式中、Ｓｕ、Ｏ’、Ｚ、Ｙ、ｙ、Ｄ、Ａおよびａは、本明細書で定義されている。一般には１個から２０個までのこのような薬物−リンカーコンジュゲートが、リンカーと連結され得る。
いくつかの実施形態では、グルクロニド単位を含むＡＤＣは以下に記載されている式のうちの１つを有し（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）、式中、Ｓｕ、Ｙ、ｙ、Ｄ、Ａ、ａおよびＬは、本明細書に記載の通り定義される。
Figure 2018198608
いくつかの実施形態では、グルクロニド単位を含むＡＤＣは以下に記載されている式を有し（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）、式中、Ｙ、ｙ、Ｄ、Ａ、ａおよびＬは、本明細書で定義されている。
Figure 2018198608
いくつかの実施形態では、グルクロニド単位を含むＡＤＣは以下に記載されている式を有し（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）、式中、Ｙ、ｙ、ＤおよびＬは、本明細書に記載の通り定義される。
Figure 2018198608
いくつかの実施形態では、グルクロニド単位を含むＡＤＣは以下に記載されている式を有し（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）、式中、Ｙ、ｙ、ＤおよびＬは、本明細書に記載の通り定義される。
Figure 2018198608
いくつかの実施形態では、グルクロニド単位を含むＡＤＣは以下に記載されている式を有し（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）、式中、Ｄは本明細書に記載の通りであり、ｍＡｂはモノクローナル抗体である。
Figure 2018198608
実施形態の別の群では、リンカーは、以下に記載されている式に従って薬物と連結された（直接または間接的に）自壊性基（Ｚ）と連結された糖部分（Ｓｕ）と連結されており（直接または間接的に）（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）、Ａ、ａ、Ｓｕ、Ｏ’、Ｚ、ｗ、Ｙ、ｙ、ＤおよびＬは、本明細書に記載の通り定義される。
Figure 2018198608
例えば、糖部分（Ｓｕ）は抗体と直接または引き伸ばし単位を介して間接的に連結され得る。自壊性基（Ｚ）は薬物と直接またはスペーサー単位を介して間接的に連結され得る。
関連する実施形態では、薬物−リンカー化合物は以下に記載されている式を有し（ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）、Ａ、ａ、Ｓｕ、Ｏ’、Ｚ、ｗ、Ｙ、ｙおよびＤは、本明細書で定義されている。
Figure 2018198608
一般には１個から２０個までのこのような薬物−リンカー化合物が抗体と連結され得る。
スペーサー単位（−Ｙ−）は、存在する場合、アミノ酸単位が存在する場合にはアミノ酸単位（またはグルクロニド単位、ＵＳ２０１２／０１０７３３２Ａ１も参照のこと）と薬物単位を連結する。あるいは、スペーサー単位は、アミノ酸単位が存在しない場合には引き伸ばし単位と薬物単位を連結する。同様に、アミノ酸単位と引き伸ばし単位がどちらも存在しない場合には、スペーサー単位は薬物単位と抗体単位を連結する。
スペーサー単位は、２つの一般的な種類：非自壊性または自壊性のものである。非自壊性スペーサー単位は、アミノ酸単位（またはグルクロニド単位）が抗体−薬物コンジュゲートから切断された後、特に酵素的に切断された後にスペーサー単位の一部または全部が薬物部分と結合したままであるものである。非自壊性スペーサー単位の例として、それだけには限らないが、（グリシン−グリシン）スペーサー単位およびグリシンスペーサー単位が挙げられる（どちらも以下のスキーム１に示されている（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと））。
Figure 2018198608
グリシン−グリシンスペーサー単位またはグリシンスペーサー単位を含有するコンジュゲートが酵素（例えば腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼまたはリンパ球関連プロテアーゼ）による酵素的切断を受ける場合、グリシン−グリシン−薬物部分またはグリシン−薬物部分はＬ−Ａａ−Ｗｗ−から切断される。一実施形態では、標的細胞内で非依存性加水分解反応が起こり、それにより、グリシン−薬物部分結合が切断され、薬物が遊離する。
いくつかの実施形態では、非自壊性スペーサー単位（−Ｙ−）は−Ｇｌｙ−である。いくつかの実施形態では、非自壊性スペーサー単位（−Ｙ−）は−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−である。
一実施形態では、スペーサー単位が存在しない（ｙ＝０）薬物−リンカーコンジュゲートまたはその医薬として許容される塩もしくはこれらの溶媒和物が提供される。
あるいは、自壊性スペーサー単位を含有するコンジュゲートは−Ｄを放出し得る。本明細書で使用される場合、用語「自壊性スペーサー」とは、２つの間隔があいた化学的部分を共有結合により連結し合わせて安定な３部分からなる分子にすることができる二官能性化学的部分を指す。自壊性スペーサーは、第１の部分との結合が切断されると第２の化学的部分から自然に分離される。
いくつかの実施形態では、−Ｙｙ−は、フェニレン部分がＱｍで置換されたｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）単位であり、ここで、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ１−Ｃ８アルケニル、−Ｃ１−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり、ｍは、０から４までにわたる整数である。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は、単独であるか別の基の一部であるかにかかわらず、場合によって置換されていてよい。
いくつかの実施形態では、−Ｙ−は、ＰＡＢ基のアミノ窒素原子を介して−Ｗｗ−と連結され、カーボネート基、カルバメート基またはエーテル基を介して−Ｄと直接結合されたＰＡＢ基である。いかなる特定の理論または機構にも縛られることなく、以下のスキーム２（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）は、Ｔｏｋｉら、２００２年、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２頁に記載されている、カルバメート基またはカーボネート基を介して−Ｄと直接結合されたＰＡＢ基の薬物放出の可能性のある機構を示す。
Figure 2018198608
スキーム２では、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ１−Ｃ８アルケニル、−Ｃ１−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり、ｍは、０から４までにわたる整数であり、ｐは１から約２０までにわたる。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は、単独であるか別の基の一部であるかにかかわらず、場合によって置換されていてよい。
いかなる特定の理論または機構にも縛られることなく、以下のスキーム３（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）は、エーテル結合またはアミン結合を介して−Ｄと直接結合されたＰＡＢ基の薬物放出の可能性のある機構を示し、ここで、Ｄは薬物の一部である酸素基または窒素基である。
Figure 2018198608
スキーム３では、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ１−Ｃ８アルケニル、−Ｃ１−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり、ｍは、０から４までにわたる整数であり、ｐは１から約２０までにわたる。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は、単独であるか別の基の一部であるかにかかわらず、場合によって置換されていてよい。
自壊性スペーサーのその他の例として、それだけには限らないが、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（Ｈａｙら、１９９９年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）およびオルトまたはパラ−アミノベンジルアセタールなどの、ＰＡＢ基と電子的に類似した芳香族化合物が挙げられる。置換型および非置換型の４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら、１９９５年、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］環系およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍら、１９７２年、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）および２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙら、１９９０年、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）などのアミド結合が加水分解されると環化を受けるスペーサーが使用され得る。グリシンのα−位で置換されたアミン含有薬物の脱離（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら、１９８４年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）も自壊性スペーサーの例である。
一実施形態では、スペーサー単位は、多数の薬物を組み込み、放出するために使用され得る、以下のスキーム４（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）に示されている分枝ビス（ヒドロキシメチル）−スチレン（ＢＨＭＳ）単位である。
Figure 2018198608
上記のスキーム４では、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ１−Ｃ８アルケニル、−Ｃ１−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり、ｍは、０から４までにわたる整数であり、ｎは０または１であり、ｐは１から約２０までにわたる。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は、単独であるか別の基の一部であるかにかかわらず、場合によって置換されていてよい。
一態様では、スペーサー単位（−Ｙｙ−）は式（Ｘ）−（ＸＩＩ）（以下を参照のこと（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと））によって表され、式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ１−Ｃ８アルケニル、−Ｃ１−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり、ｍは０から４までにわたる整数である。
Figure 2018198608
アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は、単独であるか別の基の一部であるかにかかわらず、場合によって置換されていてよい。
ＡＤＣを含む式Ｉおよび式ＩＩの複数の実施形態は、以下に記載されている（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）構造を有する化合物、
Figure 2018198608
 （式中、ｗおよびｙは、それぞれ０、１または２である）および以下に記載されている（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）構造を有する化合物、
Figure 2018198608
 （式中、ｗおよびｙはそれぞれ０である）および以下に記載されている（Ｕ．Ｓ．８，３０９，０９３も参照のこと）化合物
Figure 2018198608
 も含み得る。
さらにその他の実施形態では、スペーサー単位（−Ｙ−）は、存在する場合、グルクロニド単位が存在する場合、それと薬物部分を連結する。いくつかの実施形態では、これらの実施形態のスペーサー単位は自壊性スペーサーである。この場合、用語「自壊性スペーサー」とは、２つの間隔があいた化学的部分を共有結合により連結し合わせて通常安定な３部分からなる分子にすることができる二官能性化学的部分を指す。自壊性スペーサーは、第１の部分との結合が切断されると第２の化学的部分から自然に分離される。
いくつかの実施形態では、−Ｙ−は、自壊性基のメチレン炭素原子を介して−Ｗｗ−と連結されており、カーボネート基、カルバメート基またはエーテル基を介して−Ｄと直接連結されている。
いくつかの実施形態では、−Ｙｙ−は、フェニレン部分がＱｍで置換されているｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）単位であり、Ｑは本明細書で定義されており、ｍは、０から４までにわたる整数である。別の実施形態では、−Ｙｙ−はカーボネート基であり得る。
自壊性スペーサーのその他の例として、それだけには限らないが、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（例えば、Ｈａｙら、１９９９年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７を参照のこと）およびオルトまたはパラ−アミノベンジルアセタールなどの、ＰＡＢ基と電子的に類似した芳香族化合物が挙げられる。置換型および非置換型の４−アミノ酪酸アミド（例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら、１９９５年、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２：２２３を参照のこと）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］環系およびビシクロ［２．２．２］環系（例えば、Ｓｔｏｒｍら、１９７２年、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５を参照のこと）および２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（例えば、Ａｍｓｂｅｒｒｙら、１９９０年、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７を参照のこと）などの、アミド結合が加水分解されると環化を受けるスペーサーが使用され得る。グリシンのα−位で置換されたアミン含有薬物の脱離（例えば、Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら、１９８４年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７を参照のこと）も自壊性スペーサーの例である。
その他の適切なスペーサー単位は、参照により本明細書に組み込む、公開された米国特許出願第２００５−０２３８６４９号に開示されている。
ＡＤＣを生成するための別のアプローチは、抗ＰＲＬＲ抗体と対象とする薬物を連結する異種二官能性架橋剤の使用を伴う。架橋剤はＮ−スクシンイミジル４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）−ペンタノエートまたは高度に水溶性の類似体Ｎ−スルホサクシニミジル４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）−ペンタノエート、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＮＰＢ）およびＮ−スルホサクシニミジル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＳＮＰＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−メチル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＭＮＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（５−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキシアミド−２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＣＰＢ）またはＮ−スルホサクシニミジル４−（５−Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキシアミド−２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＳＣＰＢ））であることが好ましい。架橋剤Ｎ−スクシンイミジル４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）−ペンタノエート、Ｎ−スルホサクシニミジル４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）−ペンタノエート、ＳＰＤＢ、ＳＮＰＢ、ＳＳＮＰＢ、ＳＭＮＰ、ＳＣＰＢ、またはＳＳＣＰＢを用いて改変された本発明の抗体は、今度は小過剰のチオール部分を含有する特定の薬物と反応して優れた収率のＡＤＣをもたらすことができる。架橋剤は、以下に記載されている式（米国特許第６，９１３，７４８号も参照のこと）の化合物であることが好ましい
Figure 2018198608
 （式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は同じであるまたは異なり、Ｈ、メチル、エチル、または３−６個の炭素原子を有する直鎖アルキル、分枝アルキルもしくは環状アルキルであり、ｎは０または１から４までの整数であり、ＸおよびＹは同じであるまたは異なり、Ｈ、ＣＯＮＲ４Ｒ５またはＮＯ２であるが、ただし、ＸおよびＹは両方が同時にＨではなく、Ｒ４およびＲ５は同じであるまたは異なり、それぞれＨ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、ＺはＳＯ３ −Ｍ＋またはＨであり、ここでＭ＋は金属イオンまたはテトラアルキルアンモニウムイオンを表すが、ただし、Ｘおよび／またはＹがＮＯ２である場合、ＺはＨではない）。さらなる異種二官能性架橋剤およびそれを使用してＡＤＣを作製する方法は、明白に参照により本明細書に組み込む米国特許第６，９１３，７４８号に記載されている。
一実施形態では、荷電リンカー（プロ荷電リンカーとも称される）が抗ＰＲＬＲ抗体と薬物をコンジュゲートしてＡＤＣを形成するために使用される。荷電リンカーとして、細胞プロセシング後に荷電したリンカーが挙げられる。細胞プロセシング後に特定のＡＤＣまたは薬物上のリンカー内に荷電基が存在することにより、（ｉ）ＡＤＣの水溶性がより大きいこと、（ｉｉ）水溶液中より高い濃度で作動できること、（ｉｉｉ）抗体当たり、より多数の薬物分子と連結することができ、それにより、潜在的により高い効力がもたらされること、（ｉｖ）荷電したコンジュゲート種が標的細胞の内側に保持され、それにより、より高い効力がもたらされる潜在性があることおよび（ｖ）荷電した薬物種を細胞から移出することをできなくする、多剤耐性細胞の感受性の改善などのいくつかの有利な点がもたらされる。いくつかの適切な荷電したまたはプロ荷電した架橋剤の例およびこれらの合成は米国特許第８，２３６、３１９の図１から図１０までに示されており、参照により本明細書に組み込む。荷電したまたはプロ荷電した架橋剤は、ＡＤＣ、特に２個から２０個までの薬物がコンジュゲートしたＡＤＣの溶解性を有意に増大させるスルホン酸置換基、リン酸置換基、カルボキシル置換基または四級アミン置換基を含有するものであることが好ましい。プロ荷電した部分を含有するリンカーから調製されたコンジュゲートは、細胞においてコンジュゲートが代謝された後に１つ以上の荷電した部分を生じる。
さらなる実施形態では、本発明のＡＤＣは、以下に記載されている式（米国特許第８，２３６、３１９号も参照のこと）
Figure 2018198608
 （式中、Ｙ’は抗体との反応を可能にする官能基を表し；Ｑは、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ペプチド結合、ヒドラゾン結合、エステル結合、エーテル結合、カルバメート結合またはアミド結合を介した薬物の連結を可能にする官能基を表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は同じであるまたは異なり、Ｈ、１個から６個までの炭素原子を有する直鎖アルキル、３個から６個までの炭素原子を有する分枝アルキルまたは環状アルキル、２個から６個までの炭素原子を有する直鎖、分枝アルケニルまたは環状アルケニルまたはアルキニル、陰イオン、例えば、それだけには限らないが、ＳＯ３ −、Ｘ−ＳＯ３ −、ＯＰＯ３ ２−、Ｘ−ＯＰＯ３ ２−、ＰＯ３ ２−、Ｘ−ＰＯ３ ２−、ＣＯ２−など、陽イオン、例えば、それだけには限らないが、複素環を含有する窒素、Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１３、またはＸ−Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１３またはフェニルなどであり、ここで、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は同じであるまたは異なり、Ｈ、１個から６個までの炭素原子を有する直鎖アルキル、または３個から６個までの炭素原子を有する分枝アルキルまたは環状アルキルであり；Ｘは、フェニルまたは１個から６個までの炭素原子を有する直鎖アルキル、または３個から６個までの炭素原子を有する分枝アルキルまたは環状アルキルを表し；ｌ、ｍおよびｎは０または１から４までの整数であり、Ａは、フェニルまたは置換フェニルであり、ここで置換基は、１個から６個までの炭素原子を有する直鎖アルキル、または３個から６個までの炭素原子を有する分枝アルキルまたは環状アルキル、または陰イオン、例えば、それだけには限らないが、ＳＯ３ −、Ｘ−ＳＯ３ −、ＯＰＯ３ ２−、Ｘ−ＯＰＯ３ ２−、ＰＯ３ ２−、Ｘ−ＰＯ３ ２−、ＣＯ２−などおよび陽イオン、例えば、それだけには限らないが、複素環を含有する窒素、Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１３またはＸ−Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１３などから選択される荷電した置換基であり、ここで、Ｘは上記と同じ定義を有し、ｇは０または１であり；Ｚは、場合による式（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐのポリエチレンオキシ単位であり、ｐは０もしくは２から約１０００までの整数またはＥ１およびＥ２が同じであるもしくは異なり、Ｃ＝Ｏ、Ｏ、もしくはＮＲ１４であるＦ１−Ｅ１−Ｐ−Ｅ２−Ｆ２単位であり、ここでＲ１４はＨ、１個から６個までの炭素原子を有する直鎖アルキル、３個から６個までの炭素原子を有する分枝アルキルもしくは環状アルキル、２個から６個までの炭素原子を有する直鎖、分枝もしくは環状のアルケニルもしくはアルキニルであり；Ｐは、２アミノ酸から２０アミノ酸の間の長さのペプチド単位であり、ここでＥ１またはＥ２は末端窒素、末端炭素を通じてまたはペプチドのアミノ酸のうちの１つの側鎖を通じてペプチドと連結されていてよく；Ｆ１およびＦ２は同じであるまたは異なり、場合による式（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐのポリエチレンオキシ単位であり、ここで、ｐは０または２から約１０００までの整数であるが、ただし、ＺがＦ１−Ｅ１−Ｐ−Ｅ２−Ｆ２でない場合には、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０の少なくとも１つが荷電した置換基であるまたはｇが１である場合には、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０の少なくとも１つが荷電した置換基である）を有するリンカーを含む。
抗体との反応を可能にする官能基Ｙ’の例として、薬剤、例えば、それだけには限らないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、ジニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステルなど；チオール反応性薬剤、例えば、それだけには限らないが、ピリジルジスルフィド、ニトロピリジルジスルフィド、マレイミド、ハロ酢酸およびカルボン酸塩化物などと反応するアミンが挙げられる。
薬物の連結を可能にする官能基Ｑの例として、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ペプチド結合、ヒドラゾン結合、エステル結合、カルバメート結合、またはアミド結合による連結を可能にする基が挙げられる。このような官能基として、それだけには限らないが、チオール、ジスルフィド、アミノ、カルボキシ、アルデヒド、マレイミド、ハロアセチル、ヒドラジンおよびヒドロキシが挙げられる。
直鎖アルキルの例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルおよびヘキシルが挙げられる。３から６個の炭素原子を有する分枝アルキルまたは環状アルキルの例として、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。
２から６個の炭素原子を有する直鎖アルケニルの例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニルが挙げられる。２から６個の炭素原子を有する分枝アルケニルまたは環状アルケニルの例として、イソブテニル、イソペンテニル、２−メチル−１−ペンテニル、２−メチル−２−ペンテニルが挙げられる。
２から６個の炭素原子を有する直鎖アルキニルの例として、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルが挙げられる。最大６個の炭素原子を有する分枝アルキニルまたは環状アルキニルの例として、３−メチル−１−ブチニル、３−メチル−１−ペニニル、４−メチル−２−ヘキシニルが挙げられる。
一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９、またはＲ１０のうちの１つがスルホン酸、リン酸またはトリアルキルアンモニウムから選択される荷電した置換基であり、残りはＨであり、ｌ、ｇおよびｍはそれぞれ０であり、ｎ＝１であり、ＱおよびＹ’はそれぞれ独立に、ジスルフィド置換基、マレイミド、ハロアセチル基、またはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。別のより好ましい実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９、またはＲ１０のうちの１つはスルホン酸であり、残りはＨであり、ｌ、ｇおよびｍはそれぞれ０であり、ｎ＝１であり、Ｑは、ジスルフィド部分、マレイミド部分またはハロアセチル部分であり、Ｙ’は、マレイミド部分またはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。別のより好ましい実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９、またはＲ１０のうちの１つはスルホン酸であり、残りはＨであり、ｌ、ｇおよびｍはそれぞれ０であり、ｎ＝１であり、Ｑは、ピリジルジチオ基またはニトロピリジルジチオ基、マレイミド部分またはハロアセチル部分であり、Ｙ’は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。
本組成物および方法で使用され得るリンカーのさらなる例として、バリン−シトルリン；マレイミドカプロイル；アミノ安息香酸；ｐ−アミノベンジルカルバモイル（ＰＡＢ）；リソソーム酵素により切断可能なリンカー；マレイミドカプロイル−ポリエチレングリコール（ＭＣ（ＰＥＧ）６−ＯＨ）；Ｎ−メチルバリンシトルリン；Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）；およびＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）が挙げられる（ＵＳ２０１１／００７６２３２も参照のこと）。本発明において使用するための別のリンカーとして、アビジン−ビオチンを含有するＡＤＣをもたらすためのアビジン−ビオチン連結が挙げられ（米国特許第４，６７６，９８０号、ＰＣＴ公開番号第ＷＯ１９９２／０２２３３２Ａ２、同第ＷＯ１９９４／０１６７２９Ａ１号、同第ＷＯ１９９５／０１５７７０Ａ１号、同第ＷＯ１９９７／０３１６５５Ａ２号、同第ＷＯ１９９８／０３５７０４Ａ１号、同第ＷＯ１９９９／０１９５００Ａ１号、同第ＷＯ２００１／０９７８５Ａ２号、同第ＷＯ２００１／０９０１９８Ａ１号、同第ＷＯ２００３／０９３７９３Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０５００１６Ａ２号、同第ＷＯ２００５／０８１８９８Ａ２号、同第ＷＯ２００６／０８３５６２Ａ２号、同第ＷＯ２００６／０８９６６８Ａ１号、同第ＷＯ２００７／１５００２０Ａ１号、同第ＷＯ２００８／１３５２３７Ａ１号、同第ＷＯ２０１０／１１１１９８Ａ１号、同第ＷＯ２０１１／０５７２１６Ａ１号、同第ＷＯ２０１１／０５８３２１Ａ１号、同第ＷＯ２０１２／０２７４９４Ａ１号およびＥＰ７７６７１Ｂ１も参照のこと）、ここで、いくつかのこのようなリンカーは、ビオチニダーゼによる切断に対して抵抗性である。本発明において使用するためのさらなるリンカーは、コヒーシン−ドッケリンを含有するＡＤＣをもたらすためのコヒーシン／ドッケリン対を含有し得る（ＰＣＴ公開番号第ＷＯ２００８／０９７８６６Ａ２号、同第ＷＯ２００８／０９７８７０Ａ２号、同第ＷＯ２００８／１０３９４７Ａ２号および同第ＷＯ２００８／１０３９５３Ａ２号を参照のこと）。
本発明において使用するためのさらなるリンカーは、非ペプチドポリマー（例として、それだけには限らないが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、多糖、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、ＰＬＡ（ポリ（乳酸））、ＰＬＧＡ（ポリ（乳酸−グリコール酸））およびこれらの組合せが挙げられ、ここで、好ましいポリマーはポリエチレングリコールである）を含有し得る（ＰＣＴ公開番号第ＷＯ２０１１／０００３７０号も参照のこと）。ＷＯ２００４−０１０９５７、米国特許出願公開第２００６００７４００８号、米国特許出願公開第２００５０２３８６４９号および米国特許出願公開第２００６００２４３１７号にもさらなるリンカーが記載されている（これらのそれぞれの全体があらゆる目的について参照により本明細書に組み込む）。
マイタンシノイドを含む本発明のＡＤＣに関しては、マイタンシノイド上の多くの位置が、連結部分と化学的に連結する位置として機能し得る。一実施形態では、マイタンシノイドは、マイタンシノールのＣ−３エステルおよびその類似体である反応性化学基を含有する連結部分を含み、ここで連結部分はジスルフィド結合を含有し、化学反応基はＮ−スクシンイミジルエステルまたはＮ−スルホスクシンイミジルエステルを含む。例えば、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシで修飾されたＣ−１５位およびヒドロキシ基を有するＣ−２０位はすべて有用である。最も好ましい連結部分はマイタンシノールのＣ−３位と連結する。
ＩＩＩ．抗ＰＲＬＲ抗体の使用
本発明の抗ヒトＰＲＬＲ抗体またはその一部の、ヒトＰＲＬＲと結合する能力を考慮すると、これらは、酵素連結免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織の免疫組織化学的検査などの従来のイムノアッセイを使用してヒトＰＲＬＲ（例えば、血清または血漿などの生体試料中の）を検出するために使用され得る。本発明は、生体試料中のヒトＰＲＬＲを検出するための方法であって、生体試料を本発明の抗体または抗体部分と接触させ、ヒトＰＲＬＲと結合した抗体（または抗体部分）または結合していない抗体（または抗体部分）のいずれかを検出して、それにより、生体試料中のヒトＰＲＬＲを検出することを含む方法を提供する。抗体は、結合した抗体または結合していない抗体の検出を容易にするために検出可能な物質を用いて直接または間接的に標識される。適した検出可能な物質として、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が挙げられる。適した酵素の例として、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適した補欠分子族複合体の例として、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；適した蛍光物質の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例として、ルミノールが挙げられ；適した放射性物質の例として、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏまたは１５３Ｓｍが挙げられる。
抗体を標識する代わりに、ヒトＰＲＬＲは、生体液中で、検出可能な物質で標識されたｒｈＰＲＬＲ標準物質および標識されていない抗ヒトＰＲＬＲ抗体を利用する競合イムノアッセイによってアッセイされ得る。このアッセイでは、生体試料、標識されたｒｈＰＲＬＲ標準物質および抗ヒトＰＲＬＲ抗体を組み合わせ、標識されていない抗体と結合した標識されたｒｈＰＲＬＲ標準物質の量が決定される。生体試料中のヒトＰＲＬＲの量は、抗ＰＲＬＲ抗体と結合した標識されたｒｈＰＲＬＲ標準物質の量に反比例する。同様に、ヒトＰＲＬＲは、生体液中で、検出可能な物質で標識されたｒｈＰＲＬＲ標準物質および標識されていない抗ヒトＰＲＬＲ抗体を利用する競合イムノアッセイによってもアッセイされ得る。
本発明の抗体および抗体部分は、インビトロおよびインビボの両方で、ヒトＰＲＬＲ活性を中和できることが好ましい。したがって、本発明のこのような抗体および抗体部分は、例えば、ｈＰＲＬＲを含有する細胞培養物において、本発明の抗体が交差反応するＰＲＬＲを有する、ヒト被験体において、またはその他の哺乳動物被験体においてｈＰＲＬＲ活性を阻害するために使用され得る。一実施形態では、本発明は、ｈＰＲＬＲを、抗体または本発明の抗体部分と接触させ、その結果、ｈＰＲＬＲ活性が阻害されることを含む、ｈＰＲＬＲ活性を阻害する方法を提供する。例えば、ｈＰＲＬＲを含有する、または含有すると疑われる細胞培養では、培養物においてｈＰＲＬＲ活性を阻害するために、本発明の抗体または抗体部分が培養培地に添加され得る。
別の実施形態では、本発明は、被験体において、有利なことに、ＰＲＬＲ活性が有害である疾患または障害を患っている被験体からｈＰＲＬＲ活性を低下させる方法を提供する。本発明は、このような疾患または障害を患っている被験体においてＰＲＬＲ活性を低下させる方法を提供し、この方法は、被験体に、本発明の抗体または抗体部分を投与し、その結果、被験体におけるＰＲＬＲ活性が低下されることを含む。好ましくは、ＰＲＬＲは、ヒトＰＲＬＲであり、被験体は、ヒト被験体である。または、被験体は、本発明の抗体が結合できるＰＲＬＲを発現する哺乳動物であり得る。さらに、被験体は、ＰＲＬＲが導入されている（例えば、ＰＲＬＲの投与によってまたはＰＲＬＲ導入遺伝子の発現によって）哺乳動物であり得る。本発明の抗体は、治療目的でヒト被験体に投与され得る。さらに、本発明の抗体は、獣医学的目的で、またはヒト疾患の動物モデルとして、抗体が結合できるＰＲＬＲを発現する非ヒト哺乳動物に投与され得る。後者に関して、このような動物モデルは、抗体の治療効力を評価するのに有用であり得る（例えば、投与量のおよび投与の経時的推移の試験）。
本明細書において、用語「ＰＲＬＲ活性は有害である障害」とは、疾患および障害を患っている被験体におけるＰＲＬＲ活性の存在が、障害の病態生理に関与するまたは障害の悪化の一因である因子であるとわかっているまたはその疑いがあるその他の障害を含むものとする。したがって、ＰＲＬＲ活性が有害である障害とは、ＰＲＬＲ活性の低下が、症状および／または障害の進行を軽減すると期待される障害である。このような障害は、例えば、上記の抗ＰＲＬＲ抗体を使用して検出され得る、障害を患っている被験体の体液におけるＰＲＬＲ濃度（例えば、被験体の血清、血漿、滑液などにおける、ＰＲＬＲ濃度）の増大によって証明され得る。本発明の抗体、例えば、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８、Ａｂ９、ｃｈＡｂ９、Ａｂ１０、ｃｈＡｂ１０、Ａｂ１１、ｃｈＡｂ１１、Ａｂ１３、ｃｈＡｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４またはＡｂ５５、その変異体、またはその抗原結合断片を用いて治療され得る障害の非限定的な例として、本発明の抗体の医薬組成物に関する下のセクションおいて考察されている障害が挙げられる。例えば、適切な障害として、それだけには限らないが、黒色腫、リンパ腫、乳癌、卵巣癌、腎癌、胃腸癌、結腸癌、肺癌、膵癌、子宮体癌および前立腺癌を含めたさまざまな癌が挙げられるが、これだけには限らない。特定の実施形態では、癌は、乳癌、腎癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮体癌または肺癌である。特定の実施形態では、癌は乳癌である。特定の実施形態では、癌は前立腺癌である。
別の実施形態では、本発明は、「ＰＲＬＲの低発現または活性の低下に関連する障害」の治療に関する。本明細書で使用される場合、用語「ＰＲＬＲの低発現または活性の低下に関連する障害」は、ＰＲＬＲの低発現または活性の低下が、障害の病態生理に関与するまたは障害の悪化の一因である因子であることが示されているまたはその疑いがある疾患およびその他の障害を含むものとする。したがって、ＰＲＬＲ活性の増大により、これらの障害の症状および／または進行が緩和されることが予想される。このような障害は、例えば、例えば上記の抗ＰＲＬＲ抗体を使用して検出され得る、障害に罹患している被験体の生体液におけるＰＲＬＲの濃度の低下（例えば、被験体の血清、血漿、滑液などにおけるＰＲＬＲの濃度の低下）によって証明され得る。本発明の抗体、例えば、Ａｂ１２、そのｃｈＡｂ１２変異体、またはその抗原結合断片を用いて治療され得る障害の非限定的な例として、乳房発達の増強または乳汁分泌の増加が挙げられる。
ＩＶ．医薬組成物
本発明はまた、本発明の抗体またはその抗原−結合部分と、医薬上許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明の抗体を含む医薬組成物は、それだけには限らないが、障害の診断、検出またはモニタリングにおいて；障害またはその１つ以上の症状の予防、治療、管理または寛解において、および／または研究において使用される。特定の実施形態では、組成物は、本発明の１種以上の抗体を含む。別の実施形態では、ＰＲＬＲ活性が有害である障害を治療するための医薬組成物は、本発明の１種以上の抗体および本発明の抗体以外の１種以上の予防薬または治療薬を含む。好ましくは、障害またはその１種以上の症状の予防、治療、管理または寛解のために有用であるとわかっている、またはそれにおいて使用されていた、または現在使用されている予防薬または治療薬。これらの実施形態に一致して、組成物は、担体、希釈液または賦形剤をさらに含み得る。
本発明の抗体または抗体部分は、被験体に投与するのに適した医薬組成物中に組み込まれ得る。通常、医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分および医薬として許容される担体を含む。本明細書において、「医薬として許容される担体」としては、生理学的に適合される、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。医薬として許容される担体の例として、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどならびにそれらの組合せのうち１種以上が挙げられる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコールまたは塩化ナトリウムを含むことが好ましい。医薬として許容される担体は、抗体または抗体部分の有効期間または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、保存料またはバッファーなどの微量の補助物質をさらに含み得る。
種々の送達系が公知であり、本発明の１種以上の抗体または本発明の１種以上の抗体の組合せおよび障害または１種以上のその症状を予防、管理、治療または寛解するのに有用な予防薬または治療薬、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルにおけるカプセル封入、抗体または抗体断片を発現できる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、ＷｕおよびＷｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２６２：４４２９−４４３２頁（１９８７年））、レトロウイルスまたはその他のベクターの一部としての核酸の構築物を投与するために使用され得る。本発明の予防薬または治療薬を投与する方法として、それだけには限らないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内の、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与および粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路）が挙げられる。さらに、肺の投与は、例えば、吸入器または噴霧器およびエアロゾル化剤を有する製剤の使用によって使用され得る。例えば、参照によりその全文が本明細書に各々、組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号、同５，９８５，３２０号、同５，９８５，３０９号、同５，９３４，２７２号、同５，８７４，０６４号、同５，８５５，９１３号、同５，２９０，５４０号、および同４，８８０，０７８号；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６およびＷＯ９９／６６９０３参照のこと。一実施形態では、本発明の抗体、併用療法または本発明の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（登録商標）肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。特定の実施形態では、本発明の予防薬または治療薬は、筋肉内に、静脈内に、腫瘍内に、経口によって、鼻腔内に、肺にまたは皮下に投与される。予防薬または治療薬は、任意の従来経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜内層を通る吸収によって（例えば、経口粘膜、直腸および腸管粘膜など）投与され得、またその他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与され得る。投与は、全身であっても局所であってもよい。
特定の実施形態では、本発明の予防薬または治療薬を、治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましいものであり得；これは、例えば、制限するものではないが、局所注入として、注射によって、またはインプラントによって達成され得、前記インプラントは、サイラスティックメンブラン、ポリマー、線維性マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））またはコラーゲンマトリックスなどのメンブランおよびマトリックスを含めた多孔性または非多孔性材料である。一実施形態では、有効量の本発明の１種以上の抗体アンタゴニストが、障害またはその症状を予防、治療、管理および／または寛解させるために被験体に罹患領域に局所的に投与される。別の実施形態では、有効量の本発明の１種以上の抗体が、有効量の本発明の抗体以外の１種以上の治療（例えば、１種以上の予防薬または治療薬）と組み合わせて、障害またはその１種以上の症状を予防、治療、管理および／または寛解させるために被験体の罹患領域に局所的に投与される。
別の実施形態では、本発明の予防薬または治療薬は、制御放出または持続放出系で送達され得る。一実施形態では、制御放出または持続放出を達成するためにポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ、上記；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７年、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ． １４：２０頁；Ｂｕｃｈｗａｌｄら、１９８０年、Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７頁；Ｓａｕｄｅｋら、１９８９年、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ． ３２１：５７４頁を参照のこと）。別の実施形態では、ポリマー材料は、本発明の療法の制御放出または持続放出を実現するために使用され得る（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．（１９７４年）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ、Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ、ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４年）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ、１９８３年、Ｊ．、Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照のこと； Ｌｅｖｙら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９年、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら、１９８９年、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７ １：１０５）；米国特許第５，６７９，３７７号；米国特許第５、９１６，５９７；米国特許第５，９１２，０１５号；米国特許第５，９８９，４６３号；米国特許第５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開番号第ＷＯ９９／１５１５４号；およびＰＣＴ公開番号第ＷＯ９９／２０２５３号も参照のこと。持続放出製剤において使用されるポリマーの例として、それだけには限らないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）およびポリオルトエステルが挙げられる。好ましい一実施形態では、持続放出製剤において使用されるポリマーは、不活性であり、漏出性の不純物を含まず、保存に対して安定であり、無菌であり、生分解性である。さらに別の実施形態は、制御放出または持続放出系は、予防標的または治療標的に近接して配置され得、したがって、全身用量の画分のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、Ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上記、２巻、１１５−１３８頁（１９８４年）参照のこと）。
制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒによる概説（１９９９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：１５２７−１５３３頁）において論じられている。本発明の１種以上の治療薬を含む持続放出製剤を作製するために当業者に公知の任意の技法が使用され得る。例えば、それぞれの全体が参照により本明細書に組み込む、米国特許第４，５２６、９３８号、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／０５５４８、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９６／２０６９８、Ｎｉｎｇら、１９９６年、「Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｕｓｉｎｇ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ Ｇｅｌ」、Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、３９：１７９−１８９頁、Ｓｏｎｇら、１９９５年、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｌｕｎｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ」、ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５０：３７２−３９７頁、Ｃｌｅｅｋら、１９９７年、「Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｂＦＧＦ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４頁およびＬａｍら、１９９７年、「Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０頁を参照のこと。
特定の実施形態では、本発明の組成物が、予防薬または治療薬をコードする核酸である場合には、そのコードされる予防薬または治療薬の発現を促進するために、適当な核酸発現ベクターの一部として構築することおよび細胞内になるようにそれを投与することによって、例えば、レトロウイルスベクターを使用することによって（米国特許第４，９８０，２８６号参照のこと）、または直接注射によって、または微粒子銃を使用することによって（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、ＤｕＰｏｎｔ）、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤を用いてコーティングすることによって、または核に入ると知られているホメオボックス様ペプチドと関連して投与することによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら、１９９１年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６４−１８６８頁参照のこと）、核酸はインビボで投与され得る。または、核酸は、相同組換えによる発現のために細胞内に導入され、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれる得る。
本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するよう製剤される。投与経路の例として、それだけには限らないが、非経口（例えば、静脈内の）、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜および直腸投与が挙げられる。特定の実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内または局所投与に適している医薬組成物として、常法に従って製剤される。通常、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張性水性バッファー中の溶液である。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤および注射の部位での疼痛を和らげるためリグノカムン（ｌｉｇｎｏｃａｍｎｅ）などの局所麻酔薬も含み得る。
本発明の組成物が、局所的に投与される場合には、組成物は、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアゾール、溶液、エマルジョンの形態または当業者に周知のその他の形態で製剤され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．（１９９５年）参照のこと。噴霧できない局所投与形には、局所適用に適合する担体または１種以上の賦形剤を含み、好ましくは、水より大きい動粘性係数を有する粘性から半固体または固体形態が、通常使用される。適した製剤として、制限するものではなく、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、散剤、リニメント剤、軟膏（ｓａｌｖｅｓ）などが挙げられ、これらは、必要に応じて、例えば、浸透圧などの種々の特性に影響を及ぼすために、滅菌され、または補助剤（例えば、保存料、安定化剤、湿潤剤、バッファーまたは塩）と混合される。その他の適した局所投与形として、好ましくは、固体または液体不活性担体と組み合わせた有効成分が、加圧された揮発性物質（例えば、ガス状噴射剤、例えば、ｆｒｅｏｎ）との混合物中にまたはスクイーズボトル中にパッケージされている噴霧性エアゾール製剤が挙げられる。必要に応じて、保湿剤または保水剤も、医薬組成物および投与形に添加され得る。このようなさらなる成分の例は、当技術分野で周知である。
本発明の方法が、組成物の鼻腔内投与を含む場合には、組成物は、エアゾール形態、スプレー、ミストまたは液滴の形態で製剤され得る。特に、本発明に従って使用するための予防薬または治療薬は、適した噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の適したガス）を使用して、加圧パックまたは噴霧器からエアゾールスプレーの体裁という形態で送達され得ることが好都合である。加圧エアゾールの場合には、投与単位は、定量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。化合物およびラクトースまたはデンプンなどの適した散剤基剤の散剤ミックスを含有する、吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）または吸入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）において使用するためのカプセル剤およびカートリッジ（例えば、ゼラチンからなる）が製剤され得る。
本発明の方法が、経口投与を含む場合には、組成物は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ジェルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で経口的に製剤され得る。錠剤またはカプセル剤は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはグリコール酸ナトリウムデンプン）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの医薬として許容される賦形剤を用い、従来の手段によって調製され得る。錠剤は、当技術分野で周知の方法によってコーティングされてもよい。経口投与のための液体製剤は、それだけには限らないが、溶液、シロップ剤または懸濁液の形態をとり得る、またはそれらは使用前に水もしくはその他の適した媒体で構成するための乾燥製剤として調製され得る。このような液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または硬化食用脂肪）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアガム）；非水性媒体（例えば、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコールまたは精留植物油）；および保存料（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などの医薬として許容される添加剤を用い、従来の手段によって調製され得る。製剤はまた、必要に応じて、バッファー塩、矯味剤、着色剤および甘味剤も含有し得る。経口投与用製剤は、予防薬または治療薬の徐放、制御放出または持続放出のために適宜製剤され得る。
本発明の方法は、例えば、エアロゾル化剤を用いて製剤された組成物の吸入器または噴霧器の使用による肺の投与を含み得る。例えば、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号、同５，９８５，３２０号、同５，９８５，３０９号、同５，９３４，２７２号、同５，８７４，０６４号、同５，８５５，９１３号、同５，２９０，５４０号および同４，８８０，０７８号；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６およびＷＯ９９／６６９０３参照のこと。特定の実施形態では、本発明の抗体、併用療法および／または本発明の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（登録商標）肺薬剤送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。
本発明の方法は、注射による（例えば、ボーラス注射または連続注入による）非経口投与用に製剤された組成物の投与を含み得る。注射用製剤は、防腐剤を加えた単位投与形で（例えば、アンプル中で、または複数用量容器中で）提示され得る。組成物は、油性または水性媒体中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとり得、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの処方剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔｓ）を含有し得る。または、有効成分は、使用前に適した媒体（例えば、滅菌発熱物質不含水）を用いて構成するための散剤形態であり得る。
本発明の方法は、デポー製剤として製剤された組成物の投与をさらに含み得る。このような長時間作用型製剤は、移植（例えば、皮下に、または筋肉内に）によって、または筋肉注射によって投与され得る。したがって、例えば、組成物は、適したポリマー物質または疎水性物質を用いて（例えば、許容されるオイル中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂を用いて、または難溶性誘導体として（例えば、難溶性塩として）製剤され得る。
本発明の方法は、中性のまたは塩の形態として製剤された組成物の投与を包含する。医薬として許容される塩として、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されるものなどの陰イオンを用いて形成されるもの、ならびにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの陽イオンを用いて形成されるものが挙げられる。
一般に、組成物の成分は、別個に、または単位投与形中に一緒に混合されて、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密閉された容器中の無水凍結乾燥散剤または無水濃縮物として供給される。投与様式が注入である場合には、組成物は、滅菌医薬等級水または生理食塩水を含有する注入ビンを用いて分配され得る。投与様式が注射によってである場合には、滅菌注射水または生理食塩水のアンプルは、成分が投与に先立って混合され得るように提供され得る。
特に、本発明はまた、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物のうち１種以上が、薬剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密閉された容器中にパッケージングされることを提供する。一実施形態では、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物のうち１種以上が、密閉された容器中の無水滅菌凍結乾燥散剤または無水濃縮物として供給され、（例えば、水または生理食塩水を用いて）被験体に投与するための適当な濃度に再構成され得る。好ましくは、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物のうち１種以上は、少なくとも５ｍｇ、より好ましくは、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇまたは少なくとも１００ｍｇの単位投与量で密閉された容器中の無水滅菌凍結乾燥散剤として供給される。本発明の凍結乾燥予防薬または治療薬または医薬組成物は、その元の容器中で、２℃から８℃の間で保存されなくてはならず、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物は、再構成された後、１週間以内に、好ましくは、５日以内に、７２時間以内に、４８時間以内に、２４時間以内に、１２時間以内に、６時間以内に、５時間以内に、３時間以内にまたは１時間以内に投与されなくてはならない。代替の実施形態では、本発明の予防薬または治療薬または医薬組成物のうち１種以上が、薬剤の量および濃度を示す密閉された容器中の液体形態で供給される。投与される組成物の液体形態は、密閉された容器中で、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ供給されることが好ましく、より好ましくは、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌまたは少なくとも１００ｍｇ／ｍｌである。液体形態は、その元の容器中で、２℃から８℃の間で保存されなくてはならない。
本発明の抗体および抗体部分は、非経口投与に適した医薬組成物中に組み込まれ得る。好ましくは、抗体または抗体部分は、０．１〜２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射用溶液として調製される。注射用溶液は、フリントまたはアンバーバイアル、アンプルまたは薬剤充填済みシリンジ中の液体または凍結乾燥投与形のいずれかからなり得る。バッファーは、ｐＨ５．０から７．０（最適には、ｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適には、５〜１０ｍＭであり得る。その他の適したバッファーとして、それだけには限らないが、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが挙げられる。溶液の毒性を改変するために、塩化ナトリウムが、０〜３００ｍＭ（最適には、液体投与形には１５０ｍＭ）の濃度で使用され得る。凍結乾燥投与形には、凍結保護物質、主に０〜１０％スクロース（最適には、０．５〜１．０％）が含まれ得る。その他の適した凍結保護物質として、トレハロースおよびラクトースが挙げられる。凍結乾燥投与形には、充填剤、主に、１〜１０％マンニトール（最適には、２〜４％）も含まれ得る。液体および凍結乾燥投与形の両方において、安定化剤、主に、１〜５０ｍＭ Ｌ−メチオニン（最適には、５〜１０ｍＭ）も使用され得る。その他の適した充填剤として、グリシン、アルギニンが挙げられ、０〜０．０５％ポリソルベート−８０（最適には、０．００５〜０．０１％）として含まれ得る。さらなる界面活性剤として、それだけには限らないが、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられる。非経口投与用の注射用溶液として調製された本発明の抗体および抗体部分を含む医薬組成物は、アジュバントとして有用である薬剤、例えば、吸収を増大させるよう使用されるものまたは治療用タンパク質（例えば、抗体）の分散物をさらに含み得る。特に有用なアジュバントとして、Ｈｙｌｅｎｅｘ（登録商標）（組換えヒトヒアルロニダーゼ）などのヒアルロニダーゼがある。注射用溶液におけるヒアルロニダーゼの添加は、非経口投与、特に、皮下投与後のヒトバイオアベイラビリティを改善する。また、少ない疼痛および不快感しか伴わない、より大きな注射部位容積（すなわち、１ｍｌ超）および注射部位反応の最小の発生率を可能にする。（参照により本明細書に組み込むＷＯ２００４０７８１４０、ＵＳ２００６１０４９６８を参照のこと。）。
本発明の組成物は、種々の形態であり得る。これらとして、例えば、液体溶液（例えば、注射用溶液および注入用溶液）、分散物または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤などの液体、半固体および固体投与形が挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式および治療適用に応じて変わる。通常好ましい組成物は、その他の抗体を用いるヒトの受動免疫処置に使用されるものと類似の組成物などの注射用溶液または注入用溶液の形態である。好ましい投与様式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい一実施形態では、抗体は、静脈内注入または注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、抗体は、筋肉内注射または皮下注射によって投与される。
治療用組成物は、通常、無菌で、製造および保存の条件下で安定でなくてはならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソームまたは高い薬物濃度に適したその他の秩序構造として製剤され得る。滅菌注射用溶液は、適当な溶媒中の必要な量で活性化合物（すなわち、抗体または抗体部分）を、必要に応じて上記で列挙された成分のうち１種またはそれらの組合せとともに組み込むこと、続いて、濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散物は、活性化合物を、基本分散媒および上記で列挙されたもののうち必要なその他の成分を含有する滅菌媒体に組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌凍結乾燥散剤の場合には、好ましい調製方法は、真空乾燥ならびに有効成分および先に滅菌濾過したその溶液に由来する任意のさらなる所望の成分の散剤が得られる噴霧乾燥である。溶液の適切な流動度は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散物の場合には必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持され得る。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
多くの治療適用にとって、好ましい投与経路／様式は、皮下注射、静脈内注射または注入であるが、本発明の抗体および抗体部分は、当技術分野で公知の種々の方法によって投与され得る。投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて変わるということは、当業者ならば理解されよう。特定の実施形態では、活性化合物は、化合物を迅速放出から保護する担体を用い、例えば、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含めた制御放出製剤として調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーは使用され得る。このような製剤を調製するための多数の方法が、特許権が取られているか、当業者には一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７８年を参照のこと。
特定の実施形態では、本発明の抗体または抗体部分は、例えば、不活性希釈液または同化食用担体とともに経口投与され得る。化合物（および必要に応じて、その他の成分）はまた、ハードまたはソフトシェルゼラチンカプセル剤中に封入される、錠剤に打錠される、または被験体の食事に直接組み込まれ得る。経口治療的投与には、化合物は、賦形剤とともに組み込まれ、摂取可能な錠剤、頬側錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウェーハなどの形態で使用され得る。本発明の化合物を、非経口投与以外によって投与するには、化合物をその不活化を防ぐ物質とコーティングするまたは化合物をその不活化を防ぐ物質と同時投与する必要があり得る。
その他の実施形態では、本発明の抗体または抗体部分は、ポリマーに基づく種とコンジュゲートされ得、その結果、前記ポリマーに基づく種により、前記本発明の抗体または抗体部分に十分なサイズが付与され得、その結果、前記本発明の抗体または抗体部分に透過性の増強および効果の保持（ＥＰＲ効果）の利益がもたらされる（ＰＣＴ公開番号第ＷＯ２００６／０４２１４６Ａ２号および米国特許公開第２００４／００２８６８７Ａ１号、同第２００９／０２８５７５７Ａ１号および同第２０１１／０２１７３６３Ａ１号および米国特許第７，６９５，７１９号も参照のこと。（これらそれぞれの全体があらゆる目的について参照により本明細書に組み込む。））。
補足の活性化合物もまた、組成物中に組み込まれ得る。特定の実施形態では、本発明の抗体または抗体部分は、ＰＲＬＲ活性が有害である障害を治療するために有用である１種以上のさらなる治療薬と製剤および／または同時投与される。例えば、本発明の抗ｈＰＲＬＲ抗体または抗体部分は、その他の標的と結合する１種以上のさらなる抗体（例えば、のサイトカインと結合する抗体または細胞表面分子と結合する抗体）と製剤および／または同時投与され得る。さらに、本発明の１種以上の抗体は、前述の治療薬のうち２種以上と組み合わせて使用され得る。このような併用療法は、投与される治療薬の低い投与量を、したがって、種々の単剤療法と関連している潜在的な毒性または複雑性を避けながら利用することが有利であり得る。
特定の実施形態では、ＰＲＬＲへの抗体またはその断片は、当技術分野で公知の半減期延長媒体と連結される。このような媒体として、それだけには限らないが、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコールおよびデキストランが挙げられる。このような媒体は、例えば、いかなる目的に対しても参照により本明細書に組み込む、米国出願公開第０９／４２８０８２号および公開されたＰＣＴ出願番号ＷＯ９９／２５０４４に記載されている。
特定の実施形態では、本発明の抗体または本発明の別の予防薬または治療薬をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列が、遺伝子療法によって、障害またはその１種以上の症状を治療、予防、管理または寛解させるために投与される。遺伝子療法とは、発現されたまたは発現可能な核酸を被験体に投与することによって実施される治療を指す。本発明のこの実施形態では、核酸はそのコードされた抗体または予防効果もしくは治療効果を媒介する本発明の予防薬もしくは治療薬を生成する。
当技術分野で入手可能な遺伝子療法のための方法のいずれかも、本発明に従って使用され得る。遺伝子療法の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３年、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５頁；ＷｕおよびＷｕ、１９９１年、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５頁；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、１９９３年、Ａｎｎ． Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ． ３２：５７３−５９６頁；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２頁（１９９３年）；およびＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ、１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６２：１９１−２１７頁；５月、１９９３年、ＴＩＢＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５頁を参照のこと。使用され得る組換えＤＮＡ技術の当技術分野でよく知られている方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９３年）；およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９０年）に記載されている。遺伝子療法の種々の方法の詳細な説明は、参照により本明細書に組み込む、米国公開第２００５００４２６６４ Ａ１号に提供されている。
別の態様では、本出願は、被験体におけるＰＲＬＲに関連する障害を治療する（例えば、治癒する、抑制する、寛解させる、発症を遅延させるもしくは予防する、または再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｒ ｒｅｌａｐｓｅ）を予防する）または予防する方法を特徴とする。方法は、被験体にＰＲＬＲ結合剤（特にアンタゴニスト）、例えば本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体またはその断片を、ＰＲＬＲに関連する障害を治療または予防するために十分な量で投与するステップを含む。ＰＲＬＲアンタゴニスト、例えば抗ＰＲＬＲ抗体またはその断片は、被験体に単独でまたは本明細書に記載のその他の治療モダリティと組み合わせて投与され得る。
別の態様では、本出願は、試料中のＰＲＬＲの存在をインビトロ（例えば、血清、血漿、組織、生検などの生体試料）で検出するための方法を提供する。本主題の方法は、障害、例えば癌を診断するために使用され得る。方法は、（ｉ）試料または対照試料を本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体またはその断片と接触させるステップと、（ｉｉ）抗ＰＲＬＲ抗体またはその断片と試料または対照試料の間の複合体の形成を検出するステップであって、試料中の複合体の形成に対照試料と比較して統計的に有意な変化があることにより、試料中のＰＲＬＲの存在が示されるステップとを含む。
さらに別の態様では、本出願は、ＰＲＬＲの存在をインビボで検出するための方法を提供する（例えば、被験体におけるインビボ画像診断）。本主題の方法は、障害、例えばＰＲＬＲに関連する障害を診断するために使用され得る。方法は、（ｉ）本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体またはその断片を、抗体または断片とＰＲＬＲの結合が可能になる条件下で被験体または対照の被験体に投与するステップと、（ｉｉ）抗体または断片とＰＲＬＲの間の複合体の形成を検出するステップであって、被験体における複合体の形成に対照被験体と比較して統計的に有意な変化があることにより、ＰＲＬＲの存在が示されるステップとを含む。
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、このような疾患を治療するために単独で、または組み合わせて使用され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたはさらなる薬剤、例えば、治療薬と組み合わせて使用される場合があり、例えば、前記のさらなる薬剤は、その意図される目的のために当業者によって選択されるということは理解されなくてはならない。例えば、さらなる薬剤は、本発明の抗体によって治療されている疾患または状態を治療するのに有用であると技術分野で認識されている治療薬であり得る。さらなる薬剤はまた、治療用組成物に有益な性質を付与する薬剤、例えば、組成物の粘性に影響を及ぼす薬剤であり得る。
本発明内に含まれる組合せは、その意図される目的にとって有用な組合せであるということは理解されなければならない。以下に示された薬剤は例示目的であって、制限であるとは意図されない。本発明の一部である組合せは、本発明の抗体および以下の一覧から選択される少なくとも１種のさらなる薬剤であり得る。組合せはまた、形成された組成物がその意図される機能を遂行し得るようなものであれば、２種以上のさらなる薬剤、例えば、２種または３種のさらなる薬剤を含み得る。
併用療法は、１種以上のさらなる治療薬、例えば、本明細書にさらに記載されている１種以上のサイトカインおよび増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症薬（例えば、全身性抗炎症薬）、抗線維化薬、代謝阻害剤、酵素阻害剤および／または細胞毒性または細胞増殖抑制薬剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節性薬剤、遺伝子療法のためのベクター、アルキル化剤、抗血管新生剤、代謝拮抗薬、ホウ素含有薬剤、化学保護剤、ホルモン、抗ホルモン剤、コルチコステロイド、光活性治療薬、オリゴヌクレオチド、放射性核種薬剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、または放射線増感剤と一緒に製剤化され、および／またはそれと同時投与される１種以上のＰＲＬＲアンタゴニスト、例えば抗ＰＲＬＲ抗体またはその断片を含み得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ結合タンパク質、例えば抗ＰＲＬＲ抗体は、抗癌剤または抗悪性腫瘍薬と組み合わせて使用される。用語「抗癌剤」および「抗悪性腫瘍薬」とは、癌性成長などの悪性腫瘍を治療するために使用される薬物を指す。薬物療法は、単独で、または外科手術または放射線療法などのその他の治療と組み合わせて使用され得る。いくつかのクラスの薬物は、癌治療において、関与する器官の性質に応じて使用され得る。例えば、乳癌は、一般に、エストロゲンにより刺激され、性ホルモンを不活化する薬物を用いて治療され得る。同様に、前立腺癌は、男性ホルモンであるアンドロゲンを不活化する薬物を用いて治療され得る。本発明の抗ＰＲＬＲ抗体と併せて使用され得る抗癌剤として、とりわけ、以下の薬剤が挙げられる：
Figure 2018198608
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本明細書に記載の抗ＰＲＬＲ抗体は、上記の抗癌剤に加えて、節ＩＩに記載されている薬剤と組み合わせて投与され得る。さらに、上述の抗癌剤は本発明のＡＤＣにも使用され得る。
特定の実施形態では、抗ＰＲＬＲ抗体は、ＰＲＬＲ活性に関連する疾患を治療するために、単独でまたは抗体と併せてまたは相乗的に作用する別の抗癌剤と一緒に投与され得る。このような抗癌剤として、例えば、当技術分野で周知の薬剤（例えば細胞毒、化学療法剤、小分子および放射線）が挙げられる。抗癌剤の例として、それだけには限らないが、パノレックス（Ｐａｎｏｒｅｘ）（Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｃｏｍｅ）、リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ）（ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｈｏｆｆｍａｎ ｌａ Ｒｏｃｈｅ）、マイロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）（Ｗｙｅｔｈ）、キャンパス（Ｃａｍｐａｔｈ）（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ゼヴァリン（Ｚｅｖａｌｉｎ）（ＩＤＥＣおよびＳｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）、ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）（Ｃｏｒｉｘａ／ＧＳＫ）、アービタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）（Ｉｍｃｌｏｎｅ／ＢＭＳ）、アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）およびハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｈｏｆｆｍａｎ ｌａ Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。その他の抗癌剤として、それだけには限らないが、その内容がこれによって参照により組み込まれる米国特許第７，５９８，０２８号および国際公開第ＷＯ２００８／１００６２４号に開示されているものが挙げられる。１種以上の抗癌剤が、本発明の抗体またはその抗原結合部分の投与と同時またはその前またはその後に投与され得る。
１種以上のＰＲＬＲアンタゴニスト、例えば抗ＰＲＬＲ抗体またはその断片と同時投与され得、および／または一緒に製剤化され得る好ましいさらなる治療薬のさらなる例として、それだけには限らないが、とりわけ、吸入されたステロイド；ベータ−アゴニスト、例えば、短時間作用性または長時間作用性ベータ−アゴニスト；ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体のアンタゴニスト；ＡＤＶＡＩＲなどの配合剤；ＩｇＥ阻害剤、例えば抗ＩｇＥ抗体（例えばＸＯＬＡＩＲ）；ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えばＰＤＥ４阻害剤）；キサンチン；抗コリン薬；クロモリンなどの肥満細胞−安定化剤；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３およびＨ４を含めたヒスタミンまたはその受容体のアンタゴニストならびにプロスタグランジンＤまたはその受容体のアンタゴニスト（ＤＰ１およびＣＲＴＨ２）のうちの１つ以上が挙げられる。このような組合せは、喘息およびその他の呼吸器疾患を治療するために使用され得る。１種以上の抗ＰＲＬＲ抗体またはその断片と同時投与され得、および／または一緒に製剤化され得る治療薬のさらなる例として、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦ受容体、例えば、ｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋＤ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ））の可溶性断片；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン性受容体アンタゴニスト；ＴＧＦ−ベータアンタゴニスト；インターフェロンガンマ；ピルフェニドン；化学療法剤、例えば、メトトレキセート、レフルノミド、またはシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、例えばＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、ＭＫ−２およびＮＦｋＢ阻害剤のうちの１つ以上が挙げられる。
その他の好ましい組合せは、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；その他のヒトサイトカインまたは増殖因子、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−３１、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦおよびエンドセリン−１、ならびにこれらのサイトカインおよび増殖因子の受容体に対する抗体またはアンタゴニストである。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡなどの細胞表面分子またはＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）を始めとするそのリガンドに対する抗体と組み合わせられ得る。
治療薬の好ましい組合せは、炎症カスケードにおける異なる点で干渉し得る；好ましい例として、キメラ、ヒト化またはヒトＴＮＦ抗体のようなＴＮＦアンタゴニスト、アダリムマブ、（ＨＵＭＩＲＡ；Ｄ２Ｅ７；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２９１３１）、ＣＡ２（レミケード（商標））、ＣＤＰ５７１および可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦ受容体、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）（商標）またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（レネルセプト）およびまたＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤が挙げられる。同様に、ＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１−変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）が同じ理由で有効であり得る。その他の好ましい組合せとして、インターロイキン４が挙げられる。
本発明の医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分の「治療上有効な量」または「予防上有効な量」を含み得る。「治療上有効な量」とは、所望の治療結果を達成するのに必要な投与量で、期間で、有効な量を指す。抗体または抗体部分の治療上有効な量は、当業者によって決定され得、個体の病状、年齢、性別および体重ならびに個体における抗体または抗体部分の所望の反応を誘発する能力などの因子に従って変わり得る。治療上有効な量はまた、抗体または抗体部分の任意の毒性または有害な作用が、治療上有益な作用によって凌がれるものである。「予防上有効な量」とは、所望の予防結果を達成するのに必要な投与量で、期間で、有効な量を指す。通常、予防上の用量は、被験体において疾患に先立って、または疾患の初期段階で使用されるので、予防上有効な量は、治療上有効な量よりも少ないものとなる。
投与計画は、最適な所望の反応（例えば、治療反応または予防反応）を提供するよう調整され得る。例えば、単回ボーラスが投与される場合も、いくつかの分割用量が経時的に投与される場合も、または治療状況の危急によって、用量が比例的に減少または増加される場合もある。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を単位投与形で製剤することは特に有利である。本明細書において、単位投与形とは、治療される哺乳動物被験体のための単位投与量として適合している、物理的に別個の単位を指し；各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生じるよう算出された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位投与形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成される特定の治療効果または予防効果および（ｂ）個体における感受性の治療のための、このような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、それらによって直接的に依存する。
本発明の抗体または抗体部分の治療的または予防的に有効な量の例示的な、非限定的範囲は０．１〜２０ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇである。投与量の値は、軽減される状態の種類および重篤度に応じて変わり得るということは留意されたい。任意の特定の被験体にとって、特定の投与計画は、個体の必要性および組成物を投与し、組成物の投与を監督している人の専門科の判断に従って、経時的に調整されなければならないということおよび本明細書に示される投与量範囲は、単に例示的なものであって、特許請求される組成物の範囲または実施を制限しようとするものではないということはさらに理解されなくてはならない。
本明細書に記載された本発明の方法のその他の適した改変および適合は、明らかであり、本発明の範囲または本明細書に記載された実施形態から逸脱することなく、適した等価物を使用して行われ得るということは、当業者には容易に明らかとなる。ここで、本発明を詳細に記載したが、これは、単に例示目的で含まれるのであって、本発明を制限するものではない以下の実施例を参照することによってより明確に理解される。
［実施例１］：抗ヒトＰＲＬＲモノクローナル抗体の作製および単離
１ ＰＲＬＲ抗体のヒト化
１．１ ＣＤＲグラフト化ヒト化ＰＲＬＲ抗体を構築するためのヒト生殖系列配列の選択
以下の通り、ヒト化方法体系を適用することにより、モノクローナル抗体Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７およびＡｂ８のＶＨ鎖およびＶＬ鎖のＣＤＲ配列を種々のヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列にグラフト化した：
１．１．１ Ａｂ６
Ａｂ１とは、マウスＡｂ６に由来するヒト化抗体を指す。本発明のモノクローナル抗体Ａｂ６のＶＨ配列およびＶＬ配列とのアラインメントに基づいて、以下の既知ヒト配列を選択した：
１．重鎖アクセプター配列を構築するためのＩＧＨＶ１−６９＊０２およびＩＧＨＪ６＊０１
２．軽鎖アクセプター配列を構築するためのＩＧＫＶ１−１２＊０１またはＩＧＫＶ３−１５＊０１およびＩＧＫＪ４＊０１
Ａｂ６の対応するＶＨ ＣＤＲおよびＶＬ ＣＤＲを前記アクセプター配列にグラフト化することにより、ＣＤＲグラフト化され、ヒト化され、改変されたＶＨ配列およびＶＬ配列を調製した。
１．１．２ Ａｂ５
Ａｂ２とは、マウスＡｂ５に由来するヒト化抗体を指す。本発明のモノクローナル抗体Ａｂ５のＶＨ配列およびＶＬ配列とのアラインメントに基づいて、以下の既知ヒト配列を選択した：
１．重鎖アクセプター配列を構築するためのＩＧＨＶ１−６９＊０１およびＩＧＨＪ４＊０１
２．軽鎖アクセプター配列を構築するためのＩＧＫＶ２−２９＊０２およびＩＧＫＪ４＊０１
Ａｂ５の対応するＶＨ ＣＤＲおよびＶＬ ＣＤＲを前記アクセプター配列にグラフト化することにより、ＣＤＲグラフト化され、ヒト化され、改変されたＶＨ配列およびＶＬ配列を調製した。
１．１．３ Ａｂ８
Ａｂ３とは、マウスＡｂ８に由来するヒト化抗体を指す。本発明のモノクローナル抗体Ａｂ８のＶＨ配列およびＶＬ配列とのアラインメントに基づいて、以下の既知ヒト配列を選択した：
１．重鎖アクセプター配列を構築するためのＩＧＨＶ１−１８＊０１およびＩＧＨＪ６＊０１
２．軽鎖アクセプター配列を構築するためのＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１およびＩＧＫＪ２＊０１
Ａｂ８の対応するＶＨ ＣＤＲおよびＶＬ ＣＤＲを前記アクセプター配列にグラフト化することにより、ＣＤＲグラフト化され、ヒト化され、改変されたＶＨ配列およびＶＬ配列を調製した。
１．１．４ Ａｂ７
Ａｂ４とは、マウスＡｂ７に由来するヒト化抗体を指す。本発明のモノクローナル抗体Ａｂ７のＶＨ配列およびＶＬ配列とのアラインメントに基づいて、以下の既知ヒト配列を選択した：
１．重鎖アクセプター配列を構築するためのＩＧＨＶ１−６９＊０６およびＩＧＨＪ４＊０１
２．軽鎖アクセプター配列を構築するためのＩＧＫＶ２−２９＊０２およびＩＧＫＪ４＊０１
Ａｂ７の対応するＶＨ ＣＤＲおよびＶＬ ＣＤＲを前記アクセプター配列にグラフト化することにより、ＣＤＲグラフト化され、ヒト化され、改変されたＶＨ配列およびＶＬ配列を調製した。
１．２ ＣＤＲグラフト化抗体への潜在的なフレームワーク復帰突然変異の導入
潜在的なフレームワーク復帰突然変異を有するヒト化抗体を作製するために、突然変異を同定し、当技術分野で周知の方法により、可変ドメインの新規合成または変異原性オリゴヌクレオチドプライマーおよびポリメラーゼ連鎖反応によってまたはその両方によってＣＤＲグラフト化抗体配列に導入した。以下の通りＣＤＲグラフトのそれぞれについて復帰突然変異およびその他の突然変異の種々の組合せを構築した。これらの突然変異についての残基番号は、ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づいた。
１．２．１ Ａｂ１
重鎖Ａｂ１ＶＨ．１ｚについては、以下の残基のうちの１つ以上を以下の通り復帰突然変異させた：Ｍ４８→Ｉ、Ｖ６７→Ａ、Ｉ６９→ＬおよびＡ７１→Ｖ。さらなる突然変異は以下を含んだ：Ｑ１→Ｅ、Ｙ２７→Ｇ、Ｎ６０→Ａ、Ｋ６４→ＱおよびＤ６５→Ｇ。
軽鎖Ａｂ１ＶＬ．１については、以下の残基のうちの１つ以上を以下の通り復帰突然変異させた：Ａ４３→Ｓ、Ｇ６４→ＤおよびＹ８７→Ｆ。
１．２．２ Ａｂ２
重鎖Ａｂ２ＶＨ．１ｚについては、以下の残基のうちの１つ以上を以下の通り復帰突然変異させた：Ｍ４８→Ｉ、Ｖ６７→Ａ、Ｉ６９→Ｌ、Ａ７１→ＶおよびＴ７５→Ｓ。さらなる突然変異は以下を含んだ：Ｑ１→Ｅ、Ｙ２７→Ｇ、Ｎ６０→ＡおよびＫ６４→Ｑ。
軽鎖Ａｂ２ＶＬ．１については、以下の残基のうちの１つ以上を以下の通り復帰突然変異させた：Ｉ２→ＶおよびＹ８７→Ｆ。
１．２．３ Ａｂ３
重鎖Ａｂ３ＶＨ．１ｚについては、以下の残基のうちの１つ以上を以下の通り復帰突然変異させた：Ｍ４８→Ｉ、Ｖ６７→Ａ、Ｍ６９→Ｌ、Ｔ７１→ＶおよびＴ７３→Ｎ。さらなる突然変異は以下を含んだ：Ｑ１→Ｅ、Ｎ６０→Ａ、Ｆ６３→Ｌ、Ｋ６４→ＱおよびＳ６５→Ｇ。
軽鎖Ａｂ３ＶＬ．１については、以下の残基のうちの１つ以上を以下の通り復帰突然変異させた：Ａ４３→ＰおよびＩ４８→Ｖ。
１．２．４ Ａｂ４
重鎖Ａｂ４ ＶＨ．１ｚについては、以下の残基のうちの１つ以上を以下の通り復帰突然変異させた：Ｍ４８→Ｉ、Ｖ６７→Ａ、Ｉ６９→Ｌ、Ａ７１→Ｖ、Ｋ７３→Ｒ、Ｔ７５→ＳおよびＡ９３→Ｇ。さらなる突然変異は以下を含んだ：Ｑ１→Ｅ。
軽鎖Ａｂ４ ＶＬ．１については、以下の残基のうちの１つ以上を以下の通り復帰突然変異させた：Ｉ２→ＶおよびＹ８７→Ｆ。
１．３ ＣＤＲグラフト化抗体にフレームワーク復帰突然変異を含有するＰＲＬＲに対するヒト化抗体の作製
以下のマウスモノクローナルＰＲＬＲ抗体のヒト化可変領域を機能的特徴付けのためにＩｇＧ発現ベクターにクローニングした。
１．３．１ Ａｂ１
Figure 2018198608
Figure 2018198608
１．３．２ Ａｂ２
Figure 2018198608
Ａｂ３
Figure 2018198608
１．３．３ Ａｂ４
Figure 2018198608
［実施例２］：ＰＲＬＲ抗体の結合および活性のアッセイ
本発明のＰＲＬＲ抗体の結合および活性を以下の通りアッセイした。
２．１ Ｔ４７Ｄ ｐＰＲＬＲ ＥＬＩＳＡ
Ｔ４７Ｄ細胞を、９６ウェルプレート中、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中、ウェル当たり６０，０００個でプレーティングし、一晩インキュベートした。次の日に、細胞培養培地を、ＦＢＳを伴わないＲＰＭＩ１６４０培地に切り換えた。次いで、細胞を、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳバッファーに０．００１μｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬまでにわたる濃度で希釈した試験ＰＲＬＲ抗体を用いて３７℃で６０分処理した。処理の最後に、細胞を、１００ｎｇ／ｍＬのｈＰＲＬ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて３７℃で１５分刺激した。次いで、細胞を、細胞溶解バッファー（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いて４℃で２０分溶解した。細胞溶解物を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓからのヒトリン光体−ＰＲＬＲ ＥＬＩＳＡ ＤｕｏＳｅｔ ＩＣキット（＃ＤＹＣ４０５８）を使用してリン酸ＰＲＬＲレベルについて分析した。結果が表１３に示されている。
ＰＲＬＲのリン酸化は受容体の刺激に対する直接応答であり、この活性の遮断はＰＲＬＲシグナル伝達の阻害と相関するので、このアッセイを最初のスクリーニングとして使用した。すべての抗体でＰＲＬＲのリン酸化の阻害が示された。
２．２ 細胞増殖アッセイ
２．２．１ Ｂａｆ３−ｘＰＲＬＲ細胞増殖アッセイ
操作されたＢａｆ３−ｘＰＲＬＲ細胞株を、１０％ＦＢＳおよび１０ｎｇ／ｍＬのｈＰＲＬ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を伴うＲＰＭＩ１６４０培地中で維持した。細胞を、９６ウェルプレート中、１０ｎｇ／ｍＬのｈＰＲＬを含有する通常培養培地にウェル当たり１０，０００個で播種した。次いで、細胞を、０．１％ＢＳＡを伴うＰＢＳバッファーに０．００１〜１０ｕｇ／ｍＬの濃度で希釈した試験ＰＲＬＲ抗体を用いて３７℃で３日間処理した。インキュベートした後、細胞増殖を、標準のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。結果が表１３に示されている。
２．２．２ Ｎｂ２−１１細胞増殖アッセイ
Ｎｂ２−１１細胞（Ｓｉｇｍａ）を完全培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％ＦＢＳ、１０％ウマ血清、０．０５ｍＭの２−メルカプトエタノール、０．０７５％炭酸水素ナトリウム）中で維持した。細胞を、アッセイの前日に一定培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％ウマ血清、０．０５ｍＭの２−メルカプトエタノール、０．０７５％炭酸水素ナトリウム）プラス１％ＦＢＳに切り換えた。ＰＲＬ依存性増殖アッセイのために、Ｎｂ２−１１細胞を洗浄し、一定培地プラス１ｎｇ／ｍＬのｈＰＲＬ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）に１ｍＬ当たり細胞２５０，０００個で再懸濁させた。細胞を９６ウェルプレートにウェル当たり９０μＬでプレーティングし、０．１％ＢＳＡを伴うＰＢＳバッファーに最終濃度０．００１〜１０μｇ／ｍＬで希釈した試験ＰＲＬＲ抗体１０μＬを用いて３７℃で３日間処理した。インキュベートした後、細胞増殖を、標準のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。結果が表１３に示されている。
２．２．３ 結論
マウス、カニクイザルおよびヒトＰＲＬＲ発現を発現しているラットＮｂ−２１１細胞およびＢａ／Ｆ３細胞はすべて、増殖に関してＰＲＬＲシグナル伝達に依存し、したがって、インビトロにおけるこれらの異なる種についての細胞におけるＰＲＬＲシグナル伝達の遮断を評価するためにこの感受性アッセイを使用した。ヒト結果は、ｐＰＲＬＲアッセイを用いて見られたものと同様であった。活性は、一般に、ヒト化型において維持され、例えば、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３およびＡｂ４．Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１１およびＡｂ１３により、カニクイザルＰＲＬＲおよびヒトＰＲＬＲについてＰＲＬＲ阻害が実証され、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９およびＡｂ１３が特に効果的であった。Ａｂ２、Ａｂ４およびＡｂ７ではマウスＰＲＬＲおよびラットＰＲＬＲについて特に効果的なＰＲＬＲ阻害活性が実証された。
２．３ 細胞外ドメイン（ＥＣＤ）についてのＥＬＩＳＡ結合アッセイ
プレートを、ヒトＰＲＬＲ ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質、マウスＰＲＬＲ ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質およびラットＰＲＬＲ ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質についてはヤギ抗ヒトＦｃ領域抗体（１μｇ／ｍｌ）を用い、カニクイザルＰＲＬＲ ＥＣＤ−ｈｉｓ６タンパク質については１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中マウス抗ｈｉｓを用いて一晩コーティングした。マウス抗体に対するカニクイザルＰＲＬＲ ＥＣＤ結合実験については、カニクイザルＰＲＬＲ ＥＣＤ−ｈｉｓ６タンパク質を直接ＥＬＩＳＡプレートと結合させた。プレートを、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて１時間にわたってブロッキングし、洗浄バッファー（１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）を用いて洗浄した（３×）。ＥＣＤタンパク質を、結合バッファー（洗浄バッファープラス１０％Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ）中で適切な抗体と結合させ（１時間）、洗浄し（３×、洗浄バッファー）、次いで、結合バッファー中で抗体の段階希釈物と一緒にインキュベートした（１時間）。洗浄後（３×、洗浄バッファー）、結合バッファー中でＨＲＰとコンジュゲートした二次抗体を結合させ（１時間）、洗浄し（３×、洗浄バッファー）、ＴＭＢ基質（Ｐｉｅｒｃｅ）と一緒に３〜５分インキュベートしてシグナルを生じさせ、２Ｎ Ｈ２ＳＯ４を用いて停止させ、４５０ｎＭでスキャンした。ＧｒａｐｈＰａｄ５（Ｐｒｉｚｍ）を用いて曲線をフィッティングし、ＧｒａｐｈＰａｄ５の曲線フィッティング機能を用いてＥＣ５０を決定した。結果が表１３に示されている。
結合ＥＬＩＳＡデータは増殖阻害データと相関した。
２．４ ＦＡＣＳ結合アッセイ：
Ｎｂ２−１１細胞およびＢａｆ３−ｘＰＲＬＲ細胞をＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ）に１ｍＬ当たり細胞２百万個で再懸濁させた。細胞を丸底９６ウェルプレート（ウェル当たり１００μＬ）に加え、試験ＰＲＬＲ抗体を用いて４℃で１時間処理した。次いで、細胞を、ＦＡＣＳバッファーを用いて２回洗浄し、ＡＬＥＸＡ４８８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とコンジュゲートした二次抗体と一緒に４℃で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳバッファー中で２回洗浄した後、細胞をＰＢＳ中１％ホルムアルデヒドに再懸濁させた。細胞を、ＬＳＲＩＩフローサイトメーターを使用して分析した。結果が表１３に示されている。
ＦＡＣＳデータも増殖データと相関した。ヒト化抗体はＦＡＣＳ結合アッセイに供さなかった。
２．５ Ｂｉａｃｏｒｅ結合
ランニングバッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）であった。６００ｎＭ、６６．６７ｎＭおよび７．４１ｎＭ（３点、９倍段階希釈）の［ＰＲＬＲ］をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して１：１結合モデル（ｌｏｃａｌ Ｒｍａｘ、ＭＴ ｔｅｒｍ ｉｎｃｌｕｄｅｄ）にフィッティングする。結果が表１４に示されている。
Ｂｉａｃｏｒｅデータにより、より詳細な生化学的結合情報がもたらされる。このアッセイではヒト化抗体のマウスＰＲＬＲに対するより低い親和性結合がより正確に定量化される。
図１１の結果の解析により、ｃｈＡｂ７がヒトＰＲＬＲに対して高親和性を有することが実証される。さらに、ヒト化抗体Ａｂ３６およびＡｂ３９を作製するためにキメラ抗体をヒト化する際に、親和性はそれぞれ約４５分の１および約２２分の１低下する。親和性の低下は、主にｋｏｆｆ速度の変化に起因する。Ａｂ３６に対して実施された復帰突然変異（すなわちＡｂ５３）により抗体親和性は改善されなかったが、Ａｂ３９に対して実施された復帰突然変異（すなわちＡｂ５４およびＡｂ５５）により、親和性がｃｈＡｂ７を用いて観察された親和性よりもおよそ４分の１および５分の１弱いレベルにまで増大した。図１０の結果の解析により、ｍＡｂの全てが、マウスＰＲＬＲに対して有意におよび比例して弱い結合速度を示すことが示された。
Figure 2018198608
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Figure 2018198608
Figure 2018198608
Figure 2018198608
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［実施例３］：異種移植片腫瘍の成長阻害アッセイ
Ｎｂ２−１１ラットリンパ腫異種移植片腫瘍の成長に対するＰＲＬＲ抗体の効果を評価した。マトリゲル（フェノールレッドを含まない、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌａｂｗａｒｅ）を含有するＳ−ＭＥＭ培地（カルシウム非含有、グルタミン非含有、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に懸濁させた癌細胞百万個を、試験０日目に、雌ＳＣＩＤ−ｂｅｉｇｅマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ Ｌａｂｓ、群当たり１０匹）の右後側腹部の皮下に接種した。７日目にサイズを釣り合わせた時に抗体またはビヒクル（標準の生理食塩水）の投与（ＩＰ）を開始した。腫瘍を、サイズを釣り合わせた時に開始して週２回、カリパス対によって測定し、腫瘍容積を式Ｖ＝Ｌ×Ｗ２／２（Ｖ：容積、ｍｍ３；Ｌ：長さ、ｍｍ、Ｗ：幅、ｍｍ）に従って算出した。腫瘍容積は、実験の持続時間にわたって各群の平均腫瘍容積が＞１０００ｍｍ３のエンドポイントに達するまで測定した。結果が図５および表１５示されている。
Figure 2018198608
［実施例４］：抗ＰＲＬＲエピトープの群分け
本発明のＰＲＬＲ抗体のエピトープの群分けを、以下の通りペアワイズ結合アッセイを使用して決定した。
マウス抗体：Ａｂ５−Ａｂ１２
ランニングバッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％界面活性物質）であった。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００および各フローセル内に抗マウスＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ）または抗ヒトＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ）を伴うＣＭ５センサーチップを使用してアッセイを実施した。ＰＲＬＲ抗体をフローセル中に捕捉した。次いで、抗原を注射する前に対照抗体（５０μｇ／ｍｌ）を注射することによってフローセルをブロッキングした。次いで、第２のＰＲＬＲ抗体（１０μｇ／ｍｌ）を注射した。各ペアワイズ結合アッセイについて、時間に応じた結合応答を分析した。相互結合アッセイも実施した。マウス抗体Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１およびＡｂ１２を用いて実施したアッセイの結果が図６に示されている。
キメラ抗体およびヒト化抗体
ランニングバッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％界面活性物質）であった。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００および４つのフローセル全てに約２０００ＲＵまでの抗ヒトＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ）がアミン−カップリングされたＣＭ５センサーチップを使用し、１２℃でアッセイを実施した。
フローセル２、３＆４に別々の試験ｍＡｂを捕捉した（フローセル１は参照であり、試験ｍＡｂを含まなかった）。次いで、アイソタイプ対照ｍＡｂを５０μｇ／ｍｌで注射することによって４つのフローセル全てをブロッキングした。次いで、４つのフローセル全てに抗原またはバッファーのみを注射した（バッファーのみはダブルリファレンスのために、各ｍＡｂ対に対して個別に行った）。次いで、４つのフローセル全てに第２の試験ｍＡｂを１０μｇ／ｍｌで注射した。次いで、４つのフローセル全てを、グリシン、ｐＨ１．５を用いて再生した。
時間に応じた応答結合を各ペアワイズ結合アッセイについて分析した。相互結合アッセイも実施した。ｃｈＡｂ７、Ａｂ３９、Ａｂ４０、ｃｈＡｂ５、Ａｂ３０、ｃｈＡｂ６、Ａｂ１９、Ａｂ２１、ｃｈＡｂ８、Ａｂ４８、Ａｂ４９およびＬＦＡ１０２を用いて実施した同時結合アッセイの結果が図７および図８に示されている。
これらのアッセイをキメラ抗体とヒト化抗体の両方を使用して実施し、キメラ抗体とヒト化抗体の両方がＰＲＬＲの同じ領域を認識することが実証された。図７は、各根平均抗体のキメラ形態およびヒト化形態がＰＲＬＲとの結合について互いと競合するかどうかを決定するために実施した抗体結合アッセイの結果を示す。これらの結果は、各根平均抗体のキメラ形態およびヒト化形態が互いと競合することを示しており、したがって、キメラ抗体のヒト化により、任意の所与の根平均抗体に対するコアエピトープは有意に変化しないことが示唆される。言い換えれば、キメラ操作またはヒト化により、大多数の抗体について相対的なエピトープの群分けは親マウス抗体のエピトープの群分けと比較して変化しなかった。しかし、マウスｍＡｂについての以前のエピトープの群分けと比較した場合に、Ａｂ８に由来するｍＡｂに対するＡｂ５に由来するｍＡｂについてエピトープの群分けに小さな移動があった。この差は、実際のエピトープの変化とは対照的に、マウスフレームワークとヒトフレームワークの間の立体的な差異に起因する可能性がより高い。同様の結果について、Ｚｅｔｔｌｉｔｚ、Ｋ．Ａ．ら、Ｍｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（２０１０年）４６：２６５−２７８頁を参照のこと。
［実施例５］：ｃｈＡｂ６（Ｆａｂ）−ＰＲＬＲ複合体の結晶化
ｃｈＡｂ６ Ｆａｂ断片−ＰＲＬＲ複合体の構造の結晶化を実施し、以下の通り分析した。
ｃｈＡｂ６ Ｆａｂ断片の調製および精製：
ｃｈＡｂ６のＦａｂ断片を、以下に詳述されている通り、親ｍＡｂのパパイン切断によって調製した。パパインを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中５０ｍＭのシステインを用いて活性化した。ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中ｍＡｂ ｃｈＡｂ６とパパインをパパイン対ｍＡｂの重量比１：７７で混合し、３７℃で１時間インキュベートした。６．２５ｍＭのヨードアセトアミドを用いて反応をクエンチした。混合物を８ｍｌのＭａｂ ＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製し、Ｆａｂ断片をフロースルーとして採取した。Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してフロースルーを濃縮した。濃縮された混合物を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファー中に予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ２００ ＨｉＰｒｅｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。Ｆａｂ断片を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる。）をプールし、−８０℃で凍結させた。試料純度を分析用ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析によって評価した。
ｃｈＡｂ６ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体調製物：
組換えヒトＰＲＬＲを哺乳動物発現系において発現させ、その後、当技術分野で周知の技法を使用して精製した。組換えヒトＰＲＬＲおよびｃｈＡｂ６ Ｆａｂタンパク質を１．１５：１のモル比で混合し、２２℃で２時間インキュベートした。複合体試料を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファーで予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ２００ ＨｉＰｒｅｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に毎分１ｍｌでローディングした。複合体を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる。）をプールし、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して４４ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。試料純度を分析用ＳＥＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した。過剰なＦａｂ−複合体タンパク質を−８０℃で凍結させて貯蔵した。
ｃｈＡｂ６ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体の結晶化：
タンパク質複合体は５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ中４３．９ｍｇ／ｍｌでもたらされ、結晶化試験のためにそれを使用して３０ｍｇ／ｍｌまで希釈した。蒸気拡散技法を使用して１７℃で結晶を成長させた。リザーバー溶液は２５％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ ３３５０、０．１Ｍのビス−トリス、ｐＨ５．５、０．１Ｍの硫酸アンモニウムであった。タンパク質とリザーバー溶液の比１：１を使用して結晶化ドロップを作製した。１０％（ｖ／ｖ）プロピレングリコールを使用して結晶を凍結保護した。Ｃａｎａｄｉａｎ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ（Ｓａｓｋａｔｏｏｎ、Ｃａｎａｄａ）において、１００Ｋで、気体窒素の下で回折データを採取した。
ｃｈＡｂ６ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体のＸ線構造：
Ｘ線回折データを１．９３Åの分解能に拡張し、ＨＫＬ２０００（ＨＫＬ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ）を用いて完全なデータセットを処理した。結晶学的空間群は斜方晶Ｐ２１２１２１であり、単位格子パラメータはａ＝６２Å、ｂ＝８３Åおよびｃ＝１３５Åである。収集されたデータセットについての統計値が表１６に提供される。
Figure 2018198608
構造決定：
結晶構造を分子置換によって決定した。ＶｈＶｌ部分、ＣｈＣｌ部分およびＰＲＬＲ部分についての部分検索モデルを作製し、ＣＣＰ４ ｓｕｉｔｅ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｓ（Ｗｉｎｎら、２０１１年）中のプログラムＭＯＬＲＥＰ（Ｖａｇｉｎら、１９９７年）を使用して逐次的に配置した。非対称単位は分子複合体を１つ含有し、対称性の相手により、分子間接触を伴う結晶性格子が完成する。プログラムａｕｔｏＢＵＳＴＥＲ（Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ，Ｌｔｄ）および図式解析の反復ラウンドを使用して座標をデータに対して精密化し、プログラムＣＯＯＴ（Ｅｍｓｌｅｙら、２０１０年）を用いて電子密度に再構築した。得られた構造についての統計値が表１７に提供される：
Figure 2018198608
ＰＲＬＲ細胞外ドメインと多数のｃｈＡｂ６ Ｆａｂ ＣＤＲの間に分子間接触が観察される。接触は重大な疎水性および親水性の相互作用で構成され、架橋した水分子を含む。これらの接触には、配列番号１０４および１１３のＣＤＲのＨ１、Ｈ２、Ｈ３およびＬ２が直接関与する。抗原上の接触面積は、配列番号２のＰＲＬＲ残基：Ｅ８、Ｆ１０、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１によって定義される組織分布的領域を含むＰＲＬＲドメインの交点にあるエピトープ表面を包含する。前述のＰＲＬＲのアミノ酸残基はｃｈＡｂ６ Ｆａｂと結合した際、それから４Å以内にある。
Ａｂ６およびＬＦＡ１０２についてのＰＲＬ−ＰＲＬＲ三元複合体の構造上にマッピングされたエピトープ表面の図が図９に示されている。
［実施例６］：ｃｈＡｂ７（Ｆａｂ）−ＰＲＬＲ複合体の結晶化
ｃｈＡｂ７ Ｆａｂ断片−ＰＲＬＲ複合体の構造の結晶化を実施し、以下の通り分析した。
ｃｈＡｂ７ Ｆａｂ断片の調製および精製：
ｃｈＡｂ７のＦａｂ断片を、以下に詳述されている通り、親ｍＡｂのパパイン切断によって調製した。パパインを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中５０ｍＭのシステインを用いて活性化した。ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中ｍＡｂ ｃｈＡｂ７とパパインをパパイン対ｍＡｂの重量比１：１００で混合し、３７℃で１時間インキュベートした。６ｍＭのヨードアセトアミドを用いて反応をクエンチした。混合物を５ｍｌのＭａｂ ＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製し、Ｆａｂ断片をフロースルーとして採取した。Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してフロースルーを濃縮した。濃縮された混合物を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファー中に予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ２００ ＨｉＰｒｅｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。Ｆａｂ断片を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる）をプールし、−８０℃で凍結させた。試料純度を分析用ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析によって評価した。
ｃｈＡｂ７ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体調製物：
組換えヒトＰＲＬＲを哺乳動物発現系において発現させ、その後、当技術分野で周知の技法を使用して精製した。組換えヒトＰＲＬＲおよびｃｈＡｂ７ Ｆａｂタンパク質を２：１のモル比で混合し、４℃で２時間インキュベートした。複合体試料を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファーで予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ２００ ＨｉＰｒｅｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に毎分１ｍｌでローディングした。複合体を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる）をプールし、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して１８ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。試料純度を分析用ＳＥＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した。過剰なＦａｂ−複合体タンパク質を−８０℃で凍結させて貯蔵した。
ｃｈＡｂ７ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体の結晶化：
タンパク質は５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのアジ化ナトリウム中１７．６ｍｇ／ｍｌでもたらされ、もたらされた濃度で使用した。４℃で蒸気拡散技法を使用して結晶を成長させた。リザーバー溶液は２２％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ４０００、０．１Ｍの酢酸ナトリウム、０．２Ｍの硫酸アンモニウムであった。タンパク質とリザーバー溶液の比１：１を使用して結晶化ドロップを作製した。１５％（ｖ／ｖ）プロピレングリコールを使用して結晶を凍結保護した。Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅ（Ａｒｇｏｎｎｅ、ＩＬ）において１００Ｋ １７ＩＤ ｌｉｎｅ（ＩＭＣＡ−ｃａｔ）で気体窒素の下で回折データを採取した。
ｃｈＡｂ７ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体のＸ線構造：
Ｘ線回折データを２．０Åの分解能まで拡張し、ａｕｔｏＰＲＯＣ（Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ，Ｌｔｄ）を用いて完全なデータセットを処理した。結晶空間群は単斜Ｐ２１であり、単位格子パラメータはａ＝９９Å、ｂ＝８５Å、ｃ＝１０１Åおよびベータ＝９３°である。収集されたデータセットについての統計値が表１８に提供される。
Figure 2018198608
構造決定：
結晶構造を分子置換によって決定した。ＶｈＶｌ部分、ＣｈＣｌ部分およびＰＲＬＲ部分についての部分検索モデルを作製し、ＣＣＰ４ ｓｕｉｔｅ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｓ（Ｗｉｎｎら、２０１１年）中のプログラムＭＯＬＲＥＰ（Ｖａｇｉｎら、１９９７年）を使用して逐次的に配置した。非対称単位は、同様に配置され、完全な結晶格子のために対称性の相手と分子間接触でパッキングされた２分子複合体を含有する。プログラムａｕｔｏＢＵＳＴＥＲ（Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ，Ｌｔｄ）および図式解析の反復ラウンドを使用して座標をデータに対して精密化し、プログラムＣＯＯＴ（Ｅｍｓｌｅｙら、２０１０年）を用いて電子密度に再構築した。得られた構造についての統計値が表１９に提供される：
Figure 2018198608
ＰＲＬＲ／ｃｈＡｂ７ Ｆａｂ複合体構造：
ＰＲＬＲ細胞外ドメインと多数のｃｈＡｂ７ Ｆａｂ ＣＤＲの間に分子間接触が観察される。抗体と結合した際の受容体の埋もれた表面積は１１９８Å２である。接触は重大な疎水性および親水性の相互作用で構成され、架橋した水分子を含む。これらの接触には、配列番号１０５および１１４のＣＤＲのＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１およびＬ２が直接関与する。抗原上の接触面積は、配列番号２のＰＲＬＲ残基：Ｅ８、Ｉ９、Ｆ１０、Ｋ１１、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｗ７２、Ｔ７４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｔ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｗ１３９、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１によって定義される組織分布的領域を含むＰＲＬＲドメインの交点にあるエピトープ表面を包含する。前述のＰＲＬＲのアミノ酸残基はｃｈＡｂ７ Ｆａｂと結合した際、それから４Å以内にある。
結合したｃｈＡｂ７のＰＲＬＲに対する位置により、ｃｈＡｂ７がプロラクチンとＰＲＬＲの結合を妨げることが示唆される。
実施例５および実施例６の所見は一致して、ｃｈＡｂ６およびｃｈＡｂ７がほぼ同じエピトープに対して相補的な相互作用を示すことを実証している。２つの抗体間の保存された重鎖特徴は、ＰＲＬＲ結合における重鎖相互作用の重要性を示唆する。
［実施例７］：ｃｈＡｂ８（Ｆａｂ）−ＰＲＬＲ複合体の結晶化
ｃｈＡｂ８ Ｆａｂ断片−ＰＲＬＲ複合体の構造の結晶化を実施し、以下の通り分析した。
ｃｈＡｂ８ Ｆａｂ断片の調製および精製：
ｃｈＡｂ８のＦａｂ断片を、以下に詳述されている通り、親ｍＡｂのパパイン切断によって調製した。パパインを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中５０ｍＭのシステインを用いて活性化した。ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中ｍＡｂ ｃｈＡｂ８とパパインをパパイン対ｍＡｂの重量比１：９３で混合し、３７℃で１時間インキュベートした。５ｍＭのヨードアセトアミドを用いて反応をクエンチした。混合物を８ｍｌのＭａｂ ＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製し、Ｆａｂ断片をフロースルーとして採取した。Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してフロースルーを濃縮した。濃縮された混合物を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファー中に予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ２００ ＨｉＰｒｅｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。Ｆａｂ断片を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる。）をプールし、−８０℃で凍結させた。試料純度を分析用ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析によって評価した。
ｃｈＡｂ８ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体調製物：
組換えヒトＰＲＬＲを哺乳動物発現系において発現させ、その後、当技術分野で周知の技法を使用して精製した。組換えヒトＰＲＬＲおよびｃｈＡｂ８ Ｆａｂタンパク質を１．１６：１のモル比で混合し、２２℃で２時間インキュベートした。複合体試料を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファーで予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ２００ ＨｉＰｒｅｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に毎分１ｍｌでローディングした。複合体を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる。）をプールし、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して３８ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。試料純度を分析用ＳＥＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した。過剰なＦａｂ−複合体タンパク質を−８０℃で凍結させて貯蔵した。
ｃｈＡｂ８−ＰＲＬＲ複合体の結晶化：
タンパク質複合体は５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ中３８ｍｇ／ｍｌでもたらされ、結晶化試験のためにそれを使用して３０ｍｇ／ｍｌまで希釈した。蒸気拡散技法を使用して１７℃で結晶を成長させた。リザーバー溶液は２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ ８０００、０．１Ｍのカコジル酸ナトリウム、ｐＨ５．５、０．２硫酸アンモニウムであった。タンパク質とリザーバー溶液の比１：１を使用して結晶化ドロップを作製した。１０％（ｖ／ｖ）プロピレングリコールを使用して結晶を凍結保護した。Ｃａｎａｄｉａｎ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ（Ｓａｓｋａｔｏｏｎ、Ｃａｎａｄａ）において、１００Ｋで、気体窒素の下で回折データを採取した。
ｃｈＡｂ８ Ｆａｂ−ＰＬＲ複合体のＸ線構造：
Ｘ線回折データを２．５５Åの分解能に拡張し、ＨＫＬ２０００（ＨＫＬ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ）を用いて完全なデータセットを処理した。結晶学的空間群は斜方晶Ｐ２１２１２１であり、単位格子パラメータはａ＝５５Å、ｂ＝８９Åおよびｃ＝１８６Åである。収集されたデータセットについての統計値が表２０に提供される。
Figure 2018198608
構造決定：
結晶構造を分子置換によって決定した。ＶｈＶｌ部分、ＣｈＣｌ部分およびＰＲＬＲ部分についての部分検索モデルを作製し、ＣＣＰ４ ｓｕｉｔｅ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｓ（Ｗｉｎｎら、２０１１年）中のプログラムＭＯＬＲＥＰ（Ｖａｇｉｎら、１９９７年）を使用して逐次的に配置した。非対称単位は分子複合体を１つ含有し、対称性の相手により、分子間接触を伴う結晶性格子が完成する。プログラムａｕｔｏＢＵＳＴＥＲ（Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ，Ｌｔｄ）および図式解析の反復ラウンドを使用して座標をデータに対して精密化し、プログラムＣＯＯＴ（Ｅｍｓｌｅｙら、２０１０年）を用いて電子密度に再構築した。得られた構造についての統計値が表２１に提供される：
Figure 2018198608
ＰＲＬＲ／ｃｈＡｂ８ Ｆａｂ複合体構造：
ＰＲＬＲ細胞外ドメインと多数のｃｈＡｂ８ Ｆａｂ ＣＤＲの間に分子間接触が観察される。接触は重大な疎水性および親水性の相互作用で構成され、架橋した水分子を含む。これらの接触には、配列番号１０６および１１５のＣＤＲのＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１およびＬ３が直接関与する。抗原上の接触面積は、配列番号２のＰＲＬＲ残基：Ｒ２５、Ｔ１４１、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｒ１４７、Ｅ１５５、Ｗ１５６、Ｅ１５７、Ｉ１５８、Ｈ１５９、Ｆ１６０、Ａ１６１、Ｇ１６２、Ｑ１６３、Ｑ１６４、Ｆ１６７、Ｓ１７１、Ｒ１８３、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｗ１９１およびＷ１９４によって定義される組織分布的領域を含むＰＲＬＲドメインの交点にあるエピトープ表面を包含する。前述のＰＲＬＲのアミノ酸残基はｃｈＡｂ８ Ｆａｂと結合した際、それから４Å以内にある。
［実施例８］：ｃｈＡｂ５（Ｆａｂ）の結晶化
ｃｈＡｂ５ Ｆａｂ断片の構造の結晶化を実施し、以下の通り分析した。
ｃｈＡｂ５ Ｆａｂ断片の調製および精製：
ｃｈＡｂ５のＦａｂ断片を、以下に詳述されている通り、親ｍＡｂのパパイン切断によって調製した。パパインを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中５０ｍＭのシステインを用いて活性化した。ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中ｍＡｂ ｃｈＡｂ５とパパインをパパイン対ｍＡｂの重量比１：１００で混合し、３７℃で１時間インキュベートした。５．５ｍＭのヨードアセトアミドを用いて反応をクエンチした。混合物を５ｍｌのＭａｂ ＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製し、Ｆａｂ断片をフロースルーとして採取した。Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してフロースルーを濃縮した。濃縮された混合物を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファー中に予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ２００ ＨｉＰｒｅｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。Ｆａｂ断片を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる）をプールし、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して３１．３ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。試料純度を分析用ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析によって評価した。
ｃｈＡｂ５の結晶化：
タンパク質は５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのアジ化ナトリウム中３１．３ｍｇ／ｍＬでもたらされ、結晶化試験のためにタンパク質バッファーで２０ｍｇ／ｍｌまで希釈した。４℃で蒸気拡散技法を使用して結晶を成長させた。リザーバー溶液は２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ３３５０、０．２Ｍのギ酸ナトリウムであった。タンパク質とリザーバー溶液の比１：１を使用して結晶化ドロップを作製した。１５％（ｖ／ｖ）プロピレングリコールを使用して結晶を凍結保護した。Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅ（Ａｒｇｏｎｎｅ、ＩＬ）において１００Ｋ １７ＩＤ ｌｉｎｅ（ＩＭＣＡ−ＣＡＴ）で気体窒素の下で回折データを採取した。
ｃｈＡｂ５のＸ線構造
Ｘ線回折データを２．１Åの分解能まで拡張し、ａｕｔｏＰＲＯＣ（Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ，Ｌｔｄ）を用いて完全なデータセットを処理した。結晶空間群は単斜Ｐ２１であり、単位格子パラメータはａ＝７２Å、ｂ＝６６Å、ｃ＝９２Åおよびベータ＝９６°である。収集されたデータセットについての統計値が表２２に提供される。
Figure 2018198608
構造決定：
結晶構造を分子置換によって決定した。ＶｈＶｌ部分およびＣｈＣｌ部分についての部分検索モデルを作製し、ＣＣＰ４ ｓｕｉｔｅ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｓ（Ｗｉｎｎら、２０１１年）中のプログラムＭＯＬＲＥＰ（Ｖａｇｉｎら、１９９７年）を使用して逐次的に配置した。非対称単位は、同様のコンホメーションであり、完全な結晶格子のために対称性の相手と分子間接触でパッキングされた２つの（２）Ｆａｂ分子を含有する。プログラムａｕｔｏＢＵＳＴＥＲ（Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ，Ｌｔｄ）および図式解析の反復ラウンドを使用して座標をデータに対して精密化し、プログラムＣＯＯＴ（Ｅｍｓｌｅｙら、２０１０年）を用いて電子密度に再構築した。得られた構造についての統計値が表２３に提供される：
Figure 2018198608
ｃｈＡｂ５ Ｆａｂ構造：
ｃｈＡｂ５をＰＲＬＲとの複合体由来のｃｈＡｂ７ Ｆａｂにオーバーレイすることにより、密接な構造アラインメントが示され、ＶｈＶｌドメインのアラインメントされたＣ−アルファ座標について０．６７ÅのＲＭＳＤがもたらされる。比較により、これらの密接に関連するＦａｂについての非常に類似した構造的なコンホメーションの予測される態様が強調され、異なるアミノ酸の位置における同様のコンホメーションの証拠がもたらされる。アラインメントされた構造についてＰＲＬＲとの界面の検査により、ｃｈＡｂ５のコンホメーションとの重度の衝突がないことが示される。
ｃｈＡｂ５のモデルとｃｈＡｂ７の、これらのそれぞれの結晶構造に基づくオーバーレイにより、抗体の差異はわずかであり、同様のコンホメーションを共有することが示唆される。前記に基づいて、ｃｈＡｂ５はｃｈＡｂ７と同様のエピトープを有し、同様のＰＲＬＲ相互作用を伴うことが予想される。
［実施例９］：ＬＦＡ−１０２−ＰＲＬＲ複合体の結晶化
ＬＦＡ１０２−ＰＲＬＲ複合体の構造の結晶化を実施し、以下の通り分析した。
ＬＦＡ−１０２ Ｆａｂ断片の調製および精製：
ＬＦＡ−１０２のＦａｂ断片を、以下に詳述されている通り、親ｍＡｂのパパイン切断によって調製した。パパインを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中５０ｍＭのシステインを用いて活性化した。ＰＢＳ、ｐＨ７．４バッファー中ｍＡｂ ＬＦＡ−１０２とパパインをパパイン対ｍＡｂの重量比１：１００で混合し、３７℃で１時間インキュベートした。５ｍＭのヨードアセトアミドを用いて反応をクエンチした。混合物を２０ｍｌのＭａｂ ＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製し、Ｆａｂ断片をフロースルーとして採取した。Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してフロースルーを濃縮した。濃縮された混合物を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファー中に予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ３００ ＨＲカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。Ｆａｂ断片を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる。）をプールし、−８０℃で凍結させた。試料純度を分析用ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析によって評価した。
ＬＦＡ−１０２ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体調製物：
組換えヒトＰＲＬＲを哺乳動物発現系において発現させ、その後、当技術分野で周知の技法を使用して精製した。組換えヒトＰＲＬＲおよびＬＦＡ−１０２ Ｆａｂタンパク質を１．１：１のモル比で混合し、４℃で３時間インキュベートした。複合体試料を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５バッファーで予め平衡化した２．６ｃｍ×６０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ ３００ ＨＲカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に毎分１ｍｌでローディングした。複合体を含有する画分（２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によってモニタリングされる。）をプールし、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５ Ｂｉｏｍａｘ ３０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心デバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して１８ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。試料純度を分析用ＳＥＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した。過剰なＦａｂ−複合体タンパク質を−８０℃で凍結させて貯蔵した。
ＬＦＡ−１０２ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体の結晶化：
タンパク質は５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのアジ化ナトリウム中２０．７ｍｇ／ｍｌでもたらされ、もたらされた濃度で使用した。４℃で蒸気拡散技法を使用して結晶を成長させ、リザーバーは４５％（ｗ／ｖ）２−メチル−２、４−ペンタンジオール（ＭＰＤ）、０．１Ｍのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．５、０．１Ｍのリン酸二水素アンモニウムであった。これらの溶液条件を用いると、さらなる凍結保護物質は必要なく、したがって、結晶はドロップから直接引き出され、それを液体窒素中で凍結冷却した。Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅ（Ａｒｇｏｎｎｅ、ＩＬ）において１００Ｋ １７ＩＤ ｌｉｎｅ（ＩＭＣＡ−ｃａｔ）で気体窒素の下で回折データを採取した。
ＬＦＡ−１０２ Ｆａｂ−ＰＲＬＲ複合体のＸ線構造：
Ｘ線回折データを２．２５Åの分解能まで拡張し、ａｕｔｏＰＲＯＣ（Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ，Ｌｔｄ）を用いて完全なデータセットを処理した。結晶学的空間群は単斜Ｃ２であり、単位格子パラメータはａ＝９８Å、ｂ＝１１９Å、ｃ＝８１Åおよびベータ＝１０７°である。収集されたデータセットについての統計値が表２４に提供される。
Figure 2018198608
構造決定：
結晶構造を分子置換によって決定した。ＶｈＶｌ部分、ＣｈＣｌ部分およびＰＲＬＲ部分についての部分検索モデルを作製し、ＣＣＰ４ ｓｕｉｔｅ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｓ（Ｗｉｎｎら、２０１１年）中のプログラムＭＯＬＲＥＰ（Ｖａｇｉｎら、１９９７年）を使用して逐次的に配置した。非対称単位は分子複合体を１つ含有し、対称性の相手により、分子間接触を伴う結晶性格子が完成する。プログラムａｕｔｏＢＵＳＴＥＲ（Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ，Ｌｔｄ）および図式解析の反復ラウンドを使用して座標をデータに対して精密化し、プログラムＣＯＯＴ（Ｅｍｓｌｅｙら、２０１０年）を用いて電子密度に再構築した。得られた構造についての統計値が表２５に提供される：
Figure 2018198608
ＰＲＬＲ／ｃｈＡｂ７ Ｆａｂ複合体構造：
ＰＲＬＲとＬＦＡ１０２の間の分子間接触には、ＬＦＡ１０２（配列番号１５６および１５７）のＣＤＲのＬ１、Ｌ３、Ｈ２およびＨ３が関与する。抗原上の接触面積は、配列番号２のＰＲＬＲ残基：Ｅ１４５、Ｅ１５５、Ｗ１５６、Ｅ１５７、Ｉ１５８、Ｈ１５９、Ｆ１６０、Ａ１６１、Ｇ１６２、Ｑ１６４、Ｌ１７０およびＳ１７１によって定義されるエピトープを包含する。前述のＰＲＬＲのアミノ酸残基はＬＦＡ１０２と結合した際、それから４Å以内にある。
結合したＬＦＡ１０２のＰＲＬＲに対する位置により、ＬＦＡ１０２はＰＲＬＲ二量体化を阻害するが、プロラクチンとＰＲＬＲの同時結合をもうすこしで可能にすると思われることが示唆される。
［実施例１０］：抗ＰＲＬＲ抗体とｃｙＰＲＬＲおよびｍｕＰＲＬＲの結合
特定の抗ＰＲＬＲ抗体とｃｙＰＲＬＲおよびｍｕＰＲＬＲの結合を評価するために以下の通りアッセイを実施した。
ランニングバッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ２０）であった。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００、４つ全てのフローセル中、約８０００まで抗マウスＦｃ（Ｐｉｅｒｃｅ ３１１７０）または抗ヒトＦｃ（Ｐｉｅｒｃｅ ３１１２５）がアミンカップリングされたＣＭ５センサーチップを使用してアッセイを実施した。
フローセル２、３または４にｍＡｂを捕捉した。抗原を注射した（毎分８０μｌで２分）。濃度は、５００ｎＭから７．４ｎＭまで９倍段階希釈した３点、およびバッファーのみであった。解離を１５分モニタリングした。１０ｍＭのグリシン、ｐＨ１．５の２回の連続した注射（毎分６０μで６０秒および１０秒）を用いて再生を実施した。
結果が図１０に示されている。カニクイザルＰＲＬＲおよびヒトＰＲＬＲの結合性速度は試験された抗体について実質的には同一である。しかし、試験された抗体はそれぞれ、ｍｕＰＲＬＲに対しては有意におよび比例して弱い結合速度を示す。
Figure 2018198608
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Claims (111)

  1. 抗原結合ドメインを含む結合タンパク質であって、前記結合タンパク質はプロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）と結合することができ、前記抗原結合ドメインが配列番号９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１５１および１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＣＤＲを含む、結合タンパク質。
  2. 少なくとも１つのＣＤＲが、配列番号４０〜４２、４６、４７、４９〜５１、５６〜５８、６２、６３、６５〜６７、７１〜７３、７７、７９〜８１、８５〜８７、９２〜９４、１４９および１５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
  3. 結合タンパク質が、少なくとも３つのＣＤＲを含む、請求項１または２に記載の結合タンパク質。
  4. 少なくとも３つのＣＤＲが、配列番号４０、４１および４２；配列番号４６、４７および４２；配列番号５６、５７および５８；配列番号６２、６３および５８；配列番号７１、７２および７３；配列番号７１、７７および７３；配列番号８５、８６および８７；配列番号１４９、１５０および８７からなる群から選択される重鎖可変ドメインＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）である、請求項１から３までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  5. 少なくとも３つのＣＤＲが、配列番号４９、５０および５１；配列番号６５、６６および６７；配列番号７９、８０および８１；ならびに配列番号９２、９３および９４からなる群から選択される軽鎖可変ドメインＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）である、請求項１から３までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  6. 配列番号４０、４１および４２；配列番号４６、４７および４２；配列番号５６、５７および５８；配列番号６２、６３および５８；配列番号７１、７２および７３；配列番号７１、７７および７３；配列番号８５、８６および８７；配列番号１４９、１５０および８７からなる群から選択される重鎖可変ドメインＣＤＲセットをさらに含む、請求項５に記載の結合タンパク質。
  7. 少なくとも２つの可変ドメインＣＤＲセットが、
    （１）重鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号４０、４１および４２または配列番号４６、４７および４２のいずれか、ならびに軽鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号４９、５０および５１；
    （２）重鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号５６、５７および５８または配列番号６２、６３および５８のいずれか、ならびに軽鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号６５、６６および６７；
    （３）重鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号７１、７２および７３または配列番号７１、７７および７３のいずれか、ならびに軽鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号７９、８０および８１；ならびに
    （４）重鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号８５、８６および８７または配列番号１４９、１５０および８７のいずれか、ならびに軽鎖可変ドメインＣＤＲセット配列番号９２、９３および９４
    からなる群から選択される、請求項６に記載の結合タンパク質。
  8. ヒトアクセプターフレームワークをさらに含む、請求項１から７までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  9. ヒトアクセプターフレームワークが、配列番号１４〜３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の結合タンパク質。
  10. ヒトアクセプターフレームワークが、少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、フレームワークのアミノ酸配列が、ヒトアクセプターフレームワークの配列と少なくとも６５％同一であり、ヒトアクセプターフレームワークと同一のアミノ酸残基を少なくとも７０個含む、請求項８に記載の結合タンパク質。
  11. ヒトアクセプターフレームワークが、重要な残基における少なくとも１つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、重要な残基が、
    ＣＤＲに隣接している残基；
    グリコシル化部位残基；
    レア残基；
    ヒトＰＲＬＲと相互作用できる残基；
    ＣＤＲと相互作用できる残基；
    標準的残基；
    重鎖可変領域および軽鎖可変領域間の接触残基；
    バーニアゾーン内の残基；ならびに
    Ｃｈｏｔｈｉａによって定義される可変重鎖ＣＤＲ１およびｋａｂａｔによって定義される第１の重鎖フレームワーク間で重複する領域内の残基
    からなる群から選択される、請求項１０に記載の結合タンパク質。
  12. 重要な残基が、２Ｌ、４３Ｌ、４８Ｌ、５８Ｌ、６４Ｌ、８７Ｌ、２７Ｈ、４８Ｈ、６０Ｈ、６３Ｈ、６４Ｈ、６５Ｈ、６７Ｈ、６９Ｈ、７１Ｈ、７３Ｈ、７５Ｈ、９３Ｈからなる群から選択される、請求項１０に記載の結合タンパク質。
  13. コンセンサスヒト可変ドメインである、請求項１２に記載の結合タンパク質。
  14. 配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４；配列番号４５；配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０；配列番号６１；配列番号７０；配列番号７４；配列番号７５；配列番号７６；配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの可変ドメインを含む、請求項１から１３までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  15. ２つの可変ドメインを含み、２つの可変ドメインが、
    （１）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４または配列番号４５のうちの１つ；および配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３または配列番号５４のうちの１つ；
    （２）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０または配列番号６１のうちの１つ；および配列番号６４、配列番号６８または配列番号６９のうちの１つ；
    （３）配列番号７０；配列番号７４；配列番号７５または配列番号７６のうちの１つ；および配列番号７８、配列番号８２または配列番号８３のうちの１つ；ならびに
    （４）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２または配列番号１２３のうちの１つ；および配列番号９１、配列番号９５または配列番号９６のうちの１つ
    からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１から１４までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  16. 配列番号４８；配列番号５２；配列番号５３；配列番号５４；配列番号６４；配列番号６８；配列番号６９；配列番号７８；配列番号８２；配列番号８３；配列番号９１；配列番号９５；および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの可変ドメインを含む、請求項１から１５までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  17. （ａ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｂ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｄ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｆ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｇ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｈ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｊ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｋ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｌ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｍ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｎ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｏ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｐ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｑ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｒ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｓ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｔ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｕ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｖ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｗ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｘ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｙ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｚ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ａａ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｂｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｃｃ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｄｄ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｅｅ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｆｆ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｇｇ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｈｈ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｊｊ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｋｋ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｌｌ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｍｍ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｎｎ）配列番号１５３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｏｏ）配列番号１５４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；ならびに
    （ｐｐ）配列番号１５５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖
    からなる群から選択される重鎖配列および軽鎖配列を含む、請求項１から１６までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  18. ＰＲＬＲのリガンド結合Ｄ１ドメインと結合する、請求項１から１７までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  19. プロラクチンとＰＲＬＲの結合を阻害する、請求項１から１８までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  20. ＰＲＬＲの生物学的機能を調節することができる、請求項１から１９までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  21. ＰＲＬＲを中和することができる、請求項１から２０までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  22. 表面プラズモン共鳴によって測定される、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１；および少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択される、ＰＲＬＲとの結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項１から２１までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  23. 表面プラズモン共鳴によって測定される、最大で約１０−３ｓ−１；最大で約１０−４ｓ−１；最大で約１０−５ｓ−１；および最大で約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるＰＲＬＲとの解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項１から２２までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  24. 最大で約１０−７Ｍ；最大で約１０−８Ｍ；最大で約１０−９Ｍ；最大で約１０−１０Ｍ；最大で約１０−１１Ｍ；最大で約１０−１２Ｍ；および最大で１０−１３Ｍからなる群から選択されるＰＲＬＲとの解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１から２３までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  25. ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質であって、
    （１）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
    （２）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０および配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号６４、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
    （３）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
    （４）配列番号１１２に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０３に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
    （５）配列番号１１３に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０４に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
    （６）配列番号１１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０５に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
    （７）配列番号１１６に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０７に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
    （８）配列番号１１７に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０８に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
    （９）配列番号１１８に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０９に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
    （１０）配列番号１１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１０に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；ならびに
    （１１）配列番号１２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１に記載の可変軽鎖アミノ酸配列
    からなる群から選択される重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体と競合する、結合タンパク質。
  26. （１）配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
    （２）配列番号５５；配列番号５９；配列番号６０および配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号６４、配列番号６８および配列番号６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
    （３）配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖；
    （４）配列番号１１２に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０３に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
    （５）配列番号１１３に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０４に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；
    （６）配列番号１１４に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１０５に記載の可変軽鎖アミノ酸配列；ならびに
    （７）配列番号１２０に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１１に記載の可変軽鎖アミノ酸配列
    からなる群から選択される重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体と競合する、請求項２５に記載の結合タンパク質。
  27. 配列番号１１９に記載の可変重鎖アミノ酸配列および配列番号１１０に記載の可変軽鎖アミノ酸配列を含む抗体と競合する、請求項２５に記載の結合タンパク質。
  28. 配列番号３９；配列番号４３；配列番号４４および配列番号４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む抗体と競合する、請求項２５に記載の結合タンパク質。
  29. 配列番号８４；配列番号８８；配列番号８９；配列番号９０；配列番号１２１；配列番号１２２および配列番号１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖；ならびに配列番号９１、配列番号９５および配列番号９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む抗体と競合する、請求項２５に記載の結合タンパク質。
  30. ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質であって、
    （ａ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｂ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｃ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｄ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｆ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｇ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｈ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｊ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｋ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２７のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｌ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１２８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｍ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｎ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｏ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｐ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｑ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｒ）配列番号１３５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｓ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３２のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｔ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３３のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｕ）配列番号１３６のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｖ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｗ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｘ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｙ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｚ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ａａ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｂｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｃｃ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｄｄ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４０のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｅｅ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｆｆ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｇｇ）配列番号１４３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｈｈ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｊｊ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｋｋ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４４のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｌｌ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｍｍ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｎｎ）配列番号１５３のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；
    （ｏｏ）配列番号１５４のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖；ならびに
    （ｐｐ）配列番号１５５のアミノ酸配列を有する重鎖；および配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖
    からなる群から選択される重鎖配列および軽鎖配列を含む抗体と競合する、結合タンパク質。
  31. 配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｆ１０、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のうちの３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質。
  32. エピトープが、アミノ酸残基のうちの少なくとも５個を含む、請求項３１に記載の結合タンパク質。
  33. エピトープが、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｆ１０、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のすべてを含む、請求項３１に記載の結合タンパク質。
  34. Ａｂ１、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６およびＡｂ１４〜Ａｂ２５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である、請求項３１から３３までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  35. 配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｉ９、Ｆ１０、Ｋ１１、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｗ７２、Ｔ７４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｔ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｗ１３９、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のうちの３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質。
  36. エピトープが、アミノ酸残基のうちの少なくとも５個を含む、請求項３５に記載の結合タンパク質。
  37. エピトープが、配列番号２のアミノ酸残基Ｅ８、Ｉ９、Ｆ１０、Ｋ１１、Ｃ１２、Ｒ２５、Ｅ４３、Ｇ４４、Ｗ７２、Ｔ７４、Ｉ７６、Ｄ９１、Ｅ９２、Ｌ９３、Ｙ９４、Ｖ９５、Ｄ９６、Ｔ９８、Ｙ９９、Ｉ１００、Ｗ１３９、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｆ１６０、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｙ１９０およびＷ１９１のすべてを含む、請求項３５に記載の結合タンパク質。
  38. Ａｂ４、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ３５〜Ａｂ４３およびＡｂ５３〜Ａｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である、請求項３５から３７までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  39. 配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｔ１４１、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｒ１４７、Ｅ１５５、Ｗ１５６、Ｅ１５７、Ｉ１５８、Ｈ１５９、Ｆ１６０、Ａ１６１、Ｇ１６２、Ｑ１６３、Ｑ１６４、Ｆ１６７、Ｓ１７１、Ｒ１８３、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｗ１９１およびＷ１９４のうちの１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質。
  40. エピトープが、アミノ酸残基のうちの少なくとも１５個を含む、請求項３９に記載の結合タンパク質。
  41. エピトープが、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｔ１４１、Ｌ１４３、Ｅ１４５、Ｒ１４７、Ｅ１５５、Ｗ１５６、Ｅ１５７、Ｉ１５８、Ｈ１５９、Ｆ１６０、Ａ１６１、Ｇ１６２、Ｑ１６３、Ｑ１６４、Ｆ１６７、Ｓ１７１、Ｒ１８３、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８、Ｗ１９１およびＷ１９４のすべてを含む、請求項３９に記載の結合タンパク質。
  42. Ａｂ３、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８およびＡｂ４４〜Ａｂ５２からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である、請求項３９から４１までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  43. 配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８またはＷ１９１のうちの少なくとも１個、２個、３個、４個またはすべてを含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質。
  44. エピトープが、配列番号２のアミノ酸残基Ｒ２５、Ｋ１８５、Ｄ１８７、Ｈ１８８またはＷ１９１のすべてを含む、請求項４３に記載の結合タンパク質。
  45. 配列番号２のアミノ酸９１〜９６を含むＰＲＬＲ中のエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質。
  46. Ａｂ１、Ａｂ４、Ａｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ７、Ａｂ１４〜Ａｂ２５、Ａｂ３５〜Ａｂ４３およびＡｂ５３〜Ａｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分を含む、請求項４５に記載の結合タンパク質。
  47. 配列番号２の少なくともアミノ酸８〜１００、１８５〜１９１、８〜１４３、または１８３〜１９４内の残基を有するエピトープと結合する、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質。
  48. Ａｂ１、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ６〜Ａｂ８、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、Ａｂ１４〜Ａｂ２５およびＡｂ３５〜Ａｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分である、請求項４４または４７に記載の結合タンパク質。
  49. ＰＲＬＲと結合することができ、ならびにＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、ｃｈＡｂ５、Ａｂ６、ｃｈＡｂ６、Ａｂ７、ｃｈＡｂ７、Ａｂ８、ｃｈＡｂ８、Ａｂ９、ｃｈＡｂ９、Ａｂ１０、ｃｈＡｂ１０、Ａｂ１１、ｃｈＡｂ１１、Ａｂ１２、ｃｈＡｂ１２、Ａｂ１３、ｃｈＡｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４およびＡｂ５５からなる群から選択される抗体またはその抗原結合部分と同じエピトープ特異性を有する結合タンパク質。
  50. ＰＲＬＲの生物学的機能を調節することができる、請求項２５から４９までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  51. ＰＲＬＲのリガンド結合Ｄ１ドメインと結合する、請求項２５から５０までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  52. ＰＲＬＲの二量体化を阻害しないＰＲＬＲのエピトープと結合する、請求項２５から５１までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  53. ＰＲＬＲのＤ２ドメインと結合しない、請求項２５から５２までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  54. プロラクチンとＰＲＬＲの結合を阻害する、請求項２５から５３までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  55. ＰＲＬＲとの結合について抗体ＬＦＡ１０２と競合しない、請求項２５から５４までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  56. 抗体である、請求項１から５５までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  57. 請求項１から５６までのいずれか一項に記載の結合タンパク質を含む抗体構築物であって、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、抗体構築物。
  58. 結合タンパク質が、
    免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結したＦｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディー、多重特異性抗体、二重特異性抗体および二特異性抗体
    からなる群から選択される、請求項５７に記載の抗体構築物。
  59. 結合タンパク質が、
    ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメインおよびヒトＩｇＡ定常ドメイン
    からなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項５７から５８までのいずれか一項に記載の抗体構築物。
  60. 配列番号１０〜１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項５７から５９までのいずれか一項に記載の抗体構築物。
  61. 請求項５７から６０までのいずれか一項に記載の抗体構築物を含む抗体コンジュゲートであって、免疫接着分子、造影剤、治療薬および細胞傷害性薬剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む抗体コンジュゲート。
  62. 薬剤が放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識およびビオチンからなる群から選択される造影剤である、請求項６１に記載の抗体コンジュゲート。
  63. 造影剤が、３Ｈ、 １４Ｃ、 ３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏおよび１５３Ｓｍからなる群から選択される放射標識である、請求項６１に記載の抗体コンジュゲート。
  64. 薬剤が代謝拮抗薬、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂薬、アントラサイクリン、毒素およびアポトーシス薬からなる群から選択される治療用薬剤または細胞傷害性薬剤である、請求項６１に記載の抗体コンジュゲート。
  65. 抗有糸分裂薬が、ドラスタチン、アウリスタチン、メイタンシノイド、植物アルカロイド、タキサンおよびビンカアルカロイドからなる群から選択される、請求項６４に記載の抗体コンジュゲート。
  66. 結合タンパク質がヒトグリコシル化パターンを有する、請求項５７から６５までのいずれか一項に記載の抗体構築物。
  67. 結合タンパク質が結晶化結合タンパク質である、請求項１から５６までのいずれか一項に記載の結合タンパク質。
  68. 抗体構築物が結晶化抗体構築物である、請求項５７から６６までのいずれか一項に記載の抗体構築物。
  69. 結晶化抗体構築物が、担体を含まない医薬制御放出結晶化抗体構築物である、請求項６８に記載の抗体構築物。
  70. 抗体構築物が、前記抗体構築物の可溶性対応物よりも、インビボで長い半減期を有する、請求項６８または６９に記載の抗体構築物。
  71. 生物活性を保持する、請求項６８から７０までのいずれか一項に記載の抗体構築物。
  72. 請求項１から５６までのいずれか一項に記載の結合タンパク質のアミノ酸配列をコードする単離された核酸。
  73. 請求項５７から６６までのいずれか一項に記載の抗体構築物のアミノ酸配列をコードする単離された核酸。
  74. 請求項７３に記載の単離された核酸を含むベクター。
  75. ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶおよびｐＢＪからなる群から選択される、請求項７４に記載のベクター。
  76. 請求項７４または７５に記載のベクターを含む宿主細胞。
  77. 宿主細胞が原核生物細胞または真核生物細胞である、請求項７６に記載の宿主細胞。
  78. 原核生物宿主細胞が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、請求項７７に記載の宿主細胞。
  79. 真核生物細胞が、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞からなる群から選択される、請求項７７に記載の宿主細胞。
  80. 動物細胞が、哺乳動物細胞、トリ細胞および昆虫細胞からなる群から選択される、請求項７９に記載の宿主細胞。
  81. ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、酵母細胞および昆虫Ｓｆ９細胞からなる群から選択される、請求項７６に記載の宿主細胞。
  82. 酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である、請求項８１に記載の宿主細胞。
  83. ＰＲＬＲと結合することができるタンパク質を産生する方法であって、請求項７６から８２までのいずれか一項に記載の宿主細胞を、培養培地中、ＰＲＬＲと結合することができる結合タンパク質が産生されるのに十分な条件下で培養することを含む方法。
  84. 請求項８３に記載の方法に従って産生されたタンパク質。
  85. 結合タンパク質を放出するための組成物であって、
    （ａ）請求項６７に記載の結晶化結合タンパク質、および１つの成分を含む製剤；ならびに
    （ｂ）少なくとも１つのポリマー担体
    を含む組成物。
  86. ポリマー担体が、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（酸無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン、硫酸化多糖、これらの混和物および共重合体からなる群の１つ以上から選択されるポリマーである、請求項８５に記載の組成物。
  87. １つの成分が、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項８５または８６に記載の組成物。
  88. 哺乳動物を治療するための方法であって、哺乳動物に請求項８５から８７までのいずれか一項に記載の組成物を有効量で投与するステップを含む方法。
  89. 請求項１から５６までのいずれか一項に記載の結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
  90. 医薬として許容される担体が、結合タンパク質の吸収または分散を増大させるために有用なアジュバントとして機能する、請求項８９に記載の医薬組成物。
  91. アジュバントがヒアルロニダーゼである、請求項９０に記載の医薬組成物。
  92. ＰＲＬＲ活性が有害である障害を治療するための少なくとも１つのさらなる治療薬をさらに含む、請求項８９から９１までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
  93. さらなる薬剤が、治療薬、造影剤、細胞傷害性薬剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断薬；接着分子遮断薬；抗サイトカイン抗体またはその機能性断片；メトトレキセート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫処置、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬品、抗鬱薬、抗精神病薬、刺激薬、喘息薬物、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、経口用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される、請求項９２に記載の医薬組成物。
  94. ヒトＰＲＬＲ活性を低下させる方法であって、ヒトＰＲＬＲ活性が低下されるように、ヒトＰＲＬＲを、請求項１から５６までのいずれか一項に記載の結合タンパク質と接触させることを含む方法。
  95. ＰＲＬＲ活性が有害である障害に罹患しているヒト被験体におけるヒトＰＲＬＲ活性を低下させる方法であって、ヒト被験体におけるヒトＰＲＬＲ活性が低下されるように、ヒト被験体に請求項１から５６までのいずれか一項に記載の結合タンパク質を投与することを含む方法。
  96. 治療が実現されるように、被験体に請求項１から５６までのいずれか一項に記載の結合タンパク質を投与することにより、被験体をＰＲＬＲ活性が有害である疾患または障害に関して治療するための方法。
  97. 障害が癌である、請求項９６に記載の方法。
  98. 癌が、黒色腫、子宮体癌、リンパ腫、乳癌、卵巣癌、腎癌、胃腸癌、結腸癌、肺癌、膵癌および前立腺癌からなる群から選択される、請求項９７に記載の方法。
  99. 癌が乳癌である、請求項９７に記載の方法。
  100. 結合タンパク質が被験体に、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内（ｉｎｔｒａｏｓｔｅａｌ）、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻腔内および経皮からなる群から選択される様式によって投与される、請求項９６から９９までのいずれか一項に記載の方法。
  101. 請求項１から５６までのいずれか一項に記載の抗ＰＲＬＲ結合タンパク質と特異的に競合する抗ＰＲＬＲ抗体またはその抗原結合断片であって、競合は、抗体、ヒトＰＲＬＲポリペプチドおよび抗ＰＲＬＲ結合タンパク質を使用する競合結合測定法において検出することができる、抗ＰＲＬＲ抗体またはその抗原結合断片。
  102. 抗ＰＲＬＲ抗体またはその抗原結合断片および少なくとも１つの薬物を含む抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、抗体またはその抗原結合部分が少なくとも３つのＣＤＲを含む、抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
  103. 抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４０、４１および４２；配列番号４６、４７および４２；配列番号５６、５７および５８；配列番号６２、６３および５８；配列番号７１、７２および７３；配列番号７１、７７および７３；配列番号８５、８６および８７；配列番号１４９、１５０および８７からなる重鎖可変ドメインＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）から選択される少なくとも３つのＣＤＲを含む、請求項１０２に記載の抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
  104. 抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４９、５０および５１；配列番号６５、６６および６７；配列番号７９、８０および８１；ならびに配列番号９２、９３および９４からなる軽鎖可変ドメインＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）から選択される少なくとも３つのＣＤＲを含む、請求項１０２または１０３に記載の抗ＰＲＬＲ抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
  105. 薬物が、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、免疫調節剤、遺伝子療法用ベクター、アルキル化剤、抗血管新生剤、代謝拮抗薬、ホウ素含有薬剤、化学保護剤、ホルモン、抗ホルモン剤、コルチコステロイド、光活性治療薬、オリゴヌクレオチド、放射性核種薬剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤および放射線増感剤からなる群から選択される、請求項１０２から１０４までのいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  106. 薬物が、Ｉｘｅｍｐｒａ、ドラスタチン１０、ドラスタチン１５、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＰＥ、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤまたはアウリスタチンＤ誘導体）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥまたはアウリスタチンＥ誘導体）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦまたはアウリスタチンＦ誘導体）、アウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）、アウリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、アウリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、５−ベンゾイル吉草酸−ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）、メトトレキセート、ダウノルビシン、ビンクリスチン、マイタンシン、マイタンシノール、マイタンシノールのＣ−３エステル、アンサマイトシンＰ１、アンサマイトシンＰ２、アンサマイトシンＰ３、アンサマイトシンＰ４、ドセタキセル、パクリタキセル、ナノ粒子パクリタキセル、ビンデシン硫酸塩、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、アクチノマイシン、ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン系薬、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体、アクチノマイシンＤ、アントラマイシン、チカマイシンＡ、ＤＣ−１８、マゼトラマイシン、ネオトラマイシンＡ、ネオトラマイシンＢ、ポロトラマイシン、プロトラカルシンＢ、ＳＧ２２８５、シバノミシン、シビロマイシン、トマイマイシン、アントラサイクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、カリチアマイシン、γ１ Ｉ、α２ Ｉ、α３ Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１ Ｉ、ＰＳＡＧ、θＩ １、デュオカルマイシン、アドゼレシン、ビゼレシンおよびカルゼレシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、プリカマイシン、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、レバミソール、癌ワクチン、組換え二価ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン１６型および１８型ワクチン、組換え四価ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）６型、１１型、１６型および１８型ワクチン、シプロイセルＴ、サイトカイン、副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン、肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、腫瘍壊死因子、ミュラー管抑制因子、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子、インテグリン、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＮＧＦなどの神経増殖因子、血小板−増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インスリン様増殖因子−Ｉおよび−ＩＩ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、骨誘導因子、インターフェロンα、βおよびγなどのインターフェロン、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２などのインターロイキン（ＩＬ）、腫瘍壊死因子およびＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含めたその他のポリペプチド因子、コロニー−刺激因子、エリスロポエチン（エポエチン）、フィルグラスチム、サルグラモスチム、プロメガポエチン、オプレルベキン、免疫調節性遺伝子治療薬、癌に関連する、突然変異したまたはその他の点で機能障害を起こした（例えば切断された）遺伝子を置き換えるために使用される機能的な治療用遺伝子をコードする核酸、癌を治療するための治療用タンパク質をコードするまたはその他の方法でその産生をもたらす核酸、スルホン酸アルキル、ブスルファン、ナイトロジェンマスタード、クロラムブシル、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミンおよびメルファラン、ニトロソウレア、カルムスチン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ストレプトゾシン、トリアジンおよびヒドラジン、ダカルバジン、プロカルバジン、テモゾロミド、エチレンイミン、チオペタ、ジアジクオン、マイトマイシンＣ、メチルアミン誘導体、エポキシド、アルトレタミン、ジアンヒドロガラクチトール、ジブロモズルシトール、アンジオスタチン、ＡＢＸ ＥＦＧ、Ｃ１−１０３３、ＰＫＩ−１６６、ＥＧＦワクチン、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ２０１６、ＩＣＲ−６２、ＥＭＤ ５５９００、ＣＰ３５８、ＰＤ１５３０３５、ＡＧ１４７８、ＩＭＣ−Ｃ２２５、ＯＳＩ−７７４、エルロチニブ、アンジオスタチン、アレスチン、エンドスタチン、ＢＡＹ１２−９５６６およびｗ／フルオロウラシルまたはドキソルビシン、カンスタチン、カルボキシアミドトリアゾールおよびパクリタキセルと一緒に、ＥＭＤ１２１９７４、Ｓ−２４、ビタキシン、ジメチルキサンテノン酢酸、ＩＭ８６２、インターロイキン−１２、インターロイキン−２、ＮＭ−３、ＨｕＭＶ８３３、ＰＴＫ７８７、ＲｈｕＭａｂ、アンジオザイム、ＩＭＣ−１Ｃ１１、Ｎｅｏｖａｓｔａｔ、マリマスタット、プリノマスタット、ＢＭＳ−２７５２９１、ＣＯＬ−３、ＭＭ１２７０、ＳＵ１０１、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８、ＳＵ５４１６、パクリタキセルと一緒に、ゲムシタビンおよびシスプラチンと一緒に、ならびにイリノテカンおよびシスプラチンと一緒に、ならびに放射線と一緒に、テコガラン、テモゾロミドおよびＰＥＧインターフェロンα２ｂ、テトラチオモリブデート、ＴＮＰ−４７０、サリドマイド、ＣＣ−５０１３およびＴａｘｏｔｅｒｅと一緒に、タムスタチン、２−メトキシエストラジオール、ＶＥＧＦトラップ、ｍＴＯＲ阻害剤（デフォロリムス、エベロリムスおよびテムシロリムス）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ダサチニブ、スニチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、葉酸アンタゴニスト、メトトレキセート、４−アミノ−葉酸、ロメテレキソール、ペメトレキセド、トリメトレキサート、ピリミジンアンタゴニスト、アザシチジン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン５’−リン酸、５−フルオロウリジン三リン酸、ゲムシタビン、フロクスウリジン、プリンアンタゴニストアザチオプリン、クラドリビン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、６−チオグアニン、アデノシンデアミナーゼ阻害剤、クラドリビン、フルダラビン、ネララビン、ペントスタチン、ボロフィシン、ボルテゾミブ、化学保護剤、アミホスチン、デクスラゾキサン、メスナ、アンドロゲン、エストロゲン、酢酸メドロキシプロゲステロン、プロゲスチン、アミノグルテチミド、アナストロゾール、ビカルタミド、クロロトリアニセン、酢酸シプロテロン、デガレリクス、エキセメスタン、フルタミド、フルベストラント、ゴセレリン、レトロゾール、ロイプロリド、リュープロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、タモキシフェン、トリプトレリン、アスパラギナーゼ、ダカルバジン、ヒドロキシウレア、レバミソール、ミトタン、プロカルバジン、トレチノイン、グルココルチコイド、プレドニゾン、クロマゲン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）、色素、天然に存在するものであるか標準および／または非標準ヌクレオチドを使用して合成されたものであるかにかかわらずアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を含めた）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アプタマー、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、リボザイム、アンジオザイム、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、１１１Ａｇ、６７Ｇａ、１４２Ｐｒ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、２１２Ｐｂ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９９Ｍｏ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１６９Ｅｒ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ｐｂ、Ｃｏ−５８、Ｇａ−６７、Ｂｒ−８０ｍ、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０３ｍ、Ｐｔ−１０９、Ｉｎ−１１１ １、Ｓｂ−１１９、Ｉ−１２５、Ｈｏ−１６１、Ｏｓ−１８９ｍ、Ｉｒ−１９２、Ｄｙ−１５２、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｒａ−２２３、Ｒｎ−２１９、Ｐｏ−２１５、Ｂｉ−２１１、Ａｃ−２２５、Ｆｒ−２２１、Ａｔ−２１７、Ｂｉ−２１３、Ｆｍ−２５５、１１Ｃ、１３Ｎ、１５０、７５Ｂｒ、１９８Ａｕ、２２４Ａｃ、１２６Ｉ、１３３Ｉ、７７Ｂｒ、１１３ｍＩｎ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｕ、１０７Ｈｇ、２０３Ｈｇ、１２１ｍＴｅ、１２２ｍＴｅ、１２５ｍＴｅ、１６５Ｔｍ、１６７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１９７Ｐｔ、１０９Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１６１Ｔｂ、１６６Ｈｏ、１９９Ａｕ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５１Ｃｒ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、２０１Ｔｌ、２２５Ａｃ、７６Ｂｒ、１６９Ｙｂ、タキサン、シスプラチン、メトロニダゾール、ミソニダゾール、脱メチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモラゾール、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ１０６９、ＳＲ４２３３、Ｅ０９、ＲＢ６１４５、ニコチンアミド、５−ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５−ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦＵｄＲ）、ヒドロキシウレア、ヘマトポルフィリン誘導体、フォトフリン（ｒ）、ベンゾポルフィリン誘導体、ＮＰｅ６、スズエチオポルフィリン（ＳｎＥＴ２）、フェオボルビド（ｐｈｅｏｂｏｒｂｉｄｅ）ａ、バクテリオクロロフィルａ、ナフタロシアニン、フタロシアニン、亜鉛フタロシアニン、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エリプチシン、エピルビシン、エトポシド、ラゾキサン、テニポシド、アキシチニブ、ボスチニブ、セジラニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマクサニブ、スニチニブ、バンデタニブ、アブリン、アブリンＡ鎖、アルファ毒素、アレウリテス・ホルジイ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、アマトキシン、クロチン、クルシン、ジアンチンタンパク質、ジフテリア毒素、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮアーゼ）、ゲロニン、ミトゲリン、モデシンＡ鎖、モモルディカ・カランティア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、ネオマイシン、オンコナーゼ、フェノマイシン、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ポークウィード抗ウイルスタンパク質、シュードモナス内毒素、シュードモナス外毒素、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由
    来の外毒素Ａ鎖、レストリクトシン、リシン、リシンＡ鎖、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）、サパオナリア・オフィスナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、サポリン、アルファ−サルシン、ブドウ球菌性エンテロトキシン−Ａ、破傷風毒素、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ、Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、プロテアソーム阻害剤、ＰＳ−３４１、ＨＤＡＣ阻害剤、ボリノスタット、ベリノスタット、エンチノスタット、モセチノスタット、パノビノスタット、ＣＯＸ−２阻害剤、置換尿素、熱ショックタンパク質阻害剤、ゲルダナマイシン、副腎皮質抑制薬、トリコテシン、Ａ１２、１９Ｄ１２、Ｃｐ７５１−８７１、Ｈ７Ｃ１０、アルファＩＲ３、ＳｃＦＶ／ＦＣ、ＥＭ／１６４、マツズマブ、アービタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、ベクチビックス、ｍＡｂ ８０６、ニモツズマブ、ＡＶＥＯ、ＡＭＧ１０２、５Ｄ５（ＯＡ−５ｄ５）、Ｈ２４４Ｇ１１、Ａｂ＃１４（ＭＭ１２１−１４）、ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、１Ｂ４Ｃ３；２Ｄ１Ｄ１２、ＮＶＰ−ＡＥＷ５４１−Ａ、ＢＭＳ−５３６，９２４（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン）、ＢＭＳ−５５４，４１７、シクロリガン（Ｃｙｃｌｏｌｉｇａｎ）、ＴＡＥ２２６、ＰＱ４０１、Ｉｒｅｓｓａ、ＣＩ−１０３３（ＰＤ１８３８０５）、ラパチニブ（ＧＷ−５７２０１６）、タイケルブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、タルセバ（Ｔａｒｃｅｖａ）、ＰＫＩ−１６６、ＰＤ−１５８７８０、ＥＫＢ−５６９、チロホスチン（Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）ＡＧ １４７８（４−（３−クロロアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン）、ＰＨＡ６６５７５２、ＡＲＱ１９７、カペシタビン、５−トリフルオロメチル−２’−デオキシウリジン、メトトレキセートナトリウム、ラルチトレキセド、ペメトレキセド、テガフール、シトシンアラビノシド（シタラビン）、５−アザシチジン、６−メルカプトプリン（メルカプトプリン、６−ＭＰ）、アザチオプリン、６−チオグアニン、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン（２−ＣｄＡ、２−クロロデオキシアデノシン）、リボヌクレオチド還元酵素阻害剤、シクロホスファミド、ネオサル（Ｎｅｏｓａｒ）、イホスファミド、チオテパ、ＢＣＮＵ→１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア、ＣＣＮＵ→１，−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−１−ニトロソウレア（メチルＣＣＮＵ）、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、プロカルバジンＨＣＬ、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、クロラムブシル、メルファラン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシンＨＣＬ、ダウノルビシンクエン酸塩、ミトキサントロンＨＣＬ、アクチノマイシンＤ、エトポシド、トポテカンＨＣＬ、テニポシド、イリノテカンＨＣＬ（ＣＰＴ−ｌｌ）、ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサン、イキサベピロン、メシル酸イマチニブ、リンゴ酸スニチニブ、ソラフェニブトシル酸塩、ニロチニブ塩酸塩一水和物、Ｌ−アスパラギナーゼ、アルファインターフェロン、アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ）、ＩＬ−２、アルデスロイキン、プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）、ＩＬ−１２、トレミフェンクエン酸塩、フルベストラント、ラロキシフェンＨＣＬ、アナストラゾール、レトロゾール、ファドロゾール（ＣＧＳ１６９４９Ａ）、エキセメスタン、酢酸リュープロリド、リュープロン、酢酸ゴセレリン、トリプトレリンパモ酸塩、ブセレリン、ナファレリン、セトロレリクス、ビカルタミド、ニルタミド、酢酸メゲストロール、ソマトスタチン類似体、プレドニゾロン、デキサメタゾン、ケトコナゾール、シロリムス、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）、デフォロリムス（ＡＰ２３５７３）およびエベロリムス（ＲＡＤ００Ｉ）からなる群から選択される、請求項１０２から１０５までのいずれか一項に記載のＡＤＣ。
  107. 請求項１０２から１０６までのいずれか一項に記載のＡＤＣを含む医薬組成物。
  108. 治療を必要とする被験体における癌を治療する方法であって、被験体が治療されるように、請求項１０２から１０７までのいずれか一項に記載のＡＤＣを投与すること含む方法。
  109. 癌が、黒色腫、子宮体癌、リンパ腫、乳癌、卵巣癌、腎癌、胃腸癌、結腸癌、肺癌、膵癌および前立腺癌からなる群から選択される、請求項１０８に記載の方法。
  110. 癌が乳癌である、請求項１０８に記載の方法。
  111. ＡＤＣを被験体に、
    非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内（ｉｎｔｒａｏｓｔｅａｌ）、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、頬側、舌下、鼻腔内および経皮
    からなる群から選択される様式によって投与する、請求項１０８から１１０までのいずれか一項に記載の方法。
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