[go: up one dir, main page]

JP2018158925A - 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用 - Google Patents

細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2018158925A
JP2018158925A JP2018097686A JP2018097686A JP2018158925A JP 2018158925 A JP2018158925 A JP 2018158925A JP 2018097686 A JP2018097686 A JP 2018097686A JP 2018097686 A JP2018097686 A JP 2018097686A JP 2018158925 A JP2018158925 A JP 2018158925A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
mixture
cytotoxic agent
binding agent
cell binding
chromatography
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2018097686A
Other languages
English (en)
Inventor
ケヴィン チェン、シャオシイ
Xiaoxi Kevin Chen
ケヴィン チェン、シャオシイ
リ、シンファン
Xinfang Li
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Immunogen Inc
Original Assignee
Immunogen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immunogen Inc filed Critical Immunogen Inc
Publication of JP2018158925A publication Critical patent/JP2018158925A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/265—Adsorption chromatography
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/32—Bonded phase chromatography
    • B01D15/325—Reversed phase
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/32—Bonded phase chromatography
    • B01D15/325—Reversed phase
    • B01D15/327—Reversed phase with hydrophobic interaction
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction, e.g. ion-exchange, ion-pair, ion-suppression or ion-exclusion
    • B01D15/361—Ion-exchange
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D71/00—Semi-permeable membranes for separation processes or apparatus characterised by the material; Manufacturing processes specially adapted therefor
    • B01D71/06—Organic material
    • B01D71/30—Polyalkenyl halides
    • B01D71/32—Polyalkenyl halides containing fluorine atoms
    • B01D71/34—Polyvinylidene fluoride
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

【課題】抗体−薬物コンジュゲートよりも安定であり、またより高純度の抗体−薬物コンジュゲートを調製する改善されたプロセスの提供。【解決手段】精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスであって、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記混合物から前記不純物の少なくとも一部を除去し、それによって精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、プロセス。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照により本明細書に組み込まれる２０１２年１０月４日に出願された米国仮特許出願第６１／７０９，８９１号の利益を主張する。
電子的に提出された資料の参照による組み込み
参照によりその全体が本明細書に組み込まれるものは、本明細書と同時に提出され、次のように特定される、コンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表である：２０１３年１０月３日に作成された、「７１４２８７ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ＴＸＴ」という名称の１つの８，２５９バイトＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル。
癌および他の疾患の治療に有用である抗体−薬物コンジュゲートは、一般的に３つの別個の要素：細胞結合剤、リンカー、および細胞毒性剤からなる。一般的に使用される製造プロセスの１つは、細胞結合剤を二官能性リンカーと反応させて、反応基を有するリンカーに共有結合された細胞結合剤を形成する修飾ステップと、修飾された抗体を修飾反応の他の構成成分から精製する精製ステップと、修飾された細胞結合剤を細胞毒性剤と反応させて、（反応基を使用して）リンカーから細胞毒性剤への共有的化学結合を形成する結合ステップと、コンジュゲートを結合反応の他の構成成分から精製する第２の精製ステップとを含む。
近年の臨床試験は、多数の異なる種類の癌の治療における抗体−薬物コンジュゲートの有望な役割を示している。したがって、患者の治療に使用することができる高純度および高安定性のコンジュゲートを生成する必要が存在する。抗体−薬物コンジュゲートの調製における進展にも関わらず、現在のプロセスは、幾つかの要因によって制限される。例えば、これらのプロセスによって生成されるコンジュゲートは、遊離細胞毒性剤（例えば、細胞毒性剤ダイマー関連種）および／または高分子量種（例えば、ダイマーおよび他の高次凝集体）を含む、増加した量の不純物を含む。タンジェント流濾過および吸着クロマトグラフィー等の当該技術分野にて採用されている現在の精製方法は、収率を著しく減少させることなくこれらの不純物を効率的に除去せず、および／または大規模な製造プロセスにとって扱いにくい。
したがって、現在のプロセスによって生成される抗体−薬物コンジュゲートよりも安定性であり、またより高純度の抗体−薬物コンジュゲートを調製する改善されたプロセスに対する必要が依然存在する。本発明は、かかるプロセスを提供する。本発明のこれらおよび他の利点、ならびにさらなる発明の特徴は、本明細書に提供される発明の説明から明らかになるであろう。
発明を解決するための手段
本発明は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去し、それによって精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスを提供する。本発明はまた、本明細書に説明されるプロセスに従って調製される、細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含むコンジュゲートも含む。
ＰＶＤＦ濾過の前の、抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲート反応混合物中に存在する種を示すクロマトグラムである。 ＰＶＤＦ濾過の後の、抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲート反応混合物中に存在する種を示すクロマトグラムである。 複数のＰＶＤＦ膜（ｘ軸）を通した濾過の前後の、抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲート反応混合物中に存在するＤＭ１ダイマー種（ｙ軸）のパーセントを示す線グラフである。
当業者は、細胞毒性剤に化学的に結合された抗体等の細胞結合剤を含むコンジュゲート（「抗体−細胞毒性剤コンジュゲート」）は、典型的には、抗体を、低ｐＨ（すなわち、ｐＨ７．０以下）にて二官能性架橋試薬で修飾することと、結合されたリンカーを有する抗体を精製することと、細胞毒性剤を、結合されたリンカーを有する抗体に結合させることと、抗体−細胞毒性剤コンジュゲートを精製することとによって調製されることを理解するであろう。近年、細胞結合剤に安定して結合されたリンカーの量を最大化すること、およびコンジュゲートの不安定性につながる不要な副反応を最小化することによって、増加した安定性のコンジュゲートを生成する方法が開発されている。例えば、安定して結合されたリンカーを有する細胞結合剤の望ましい種のレベルを増加させ、また不要な反応生成物（例えば、不安定に結合されたリンカーを有する細胞結合剤）のレベルを低減させるために、コンジュゲートを作製するためのプロセスが、１つのステップで（例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２５３０２１号に説明されるプロセスを参照）および／または高ｐＨで（例えば、７以上のｐＨ）（例えば、国際特許出願公開第２０１２／１３５５２２号に説明されるプロセスを参照）実施される方法が、開発されている。かかるプロセスは、増加した安定性のコンジュゲートを生成するにも関わらず、これらのプロセスは、増加したレベルの不純物、例えば、遊離細胞毒性剤（例えば、細胞毒性剤ダイマー関連種）および／または高分子量種（例えば、ダイマーおよび他の高次凝集体）等を有するコンジュゲートをもたらすことが発見されている。タンジェント流濾過および吸着クロマトグラフィー等の当該技術分野にて採用されている現在の精製方法は、収率を著しく減少させることなくこれらの不純物を効率的に除去せず、および／または大規模な製造プロセスにとって扱いにくい。
驚くべきことに、ポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物から、不純物の少なくとも一部を除去するために使用することができることが発見された。具体的には、遊離細胞毒性剤（例えば、細胞毒性剤ダイマー関連種）は、混合物をＰＶＤＦ膜に供することによって、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物から効果的および効率的に除去され得ることが予想外に発見された。したがって、本発明は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をＰＶＤＦ膜に供することを含む、増加した純度および安定性の細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを製造するためのプロセスを提供する。
本発明は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をＰＶＤＦ膜に供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去し、それによって精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスを提供する。ＰＶＤＦ膜は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物中に一般的に見出される種々の不純物を除去するために使用することができる。例えば、ＰＶＤＦ膜は、細胞毒性剤ダイマー、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの凝集体、遊離細胞毒性剤、非結合リンカー、およびこれらの混合物の群から選択される１つ以上の不純物を除去するために使用することができる
。
一実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物は、細胞毒性剤ダイマーを不純物として含み、ＰＶＤＦ膜は、細胞毒性剤ダイマーのいくらかを混合物から除去して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供する。別の実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの凝集体を不純物として含み、ＰＶＤＦ膜は、細胞結合剤細胞毒性剤の凝集体のいくらかを混合物から除去して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供する。別の実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物は、遊離細胞毒性剤を不純物として含み、ＰＶＤＦ膜は、遊離細胞毒性剤のいくらかを混合物から除去して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供する。別の実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物は、非結合リンカーを不純物として含み、ＰＶＤＦ膜は、非結合リンカーのいくらかを混合物から除去して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供する。
好ましい実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物は、リンカーを介して互いに化学的に結合された細胞毒性剤ダイマー（例えば、ＤＭ１−ＭＣＣ−ＤＭ１、ＤＭ１−ＳＰＰ−ＤＭ１、またはＤＭ１−ＣＸ１−１−ＤＭ１）を不純物として含み、ＰＶＤＦ膜は、リンカーを介して互いに化学的に結合された細胞毒性剤ダイマー（例えば、ＤＭ１−ＭＣＣ−ＤＭ１、ＤＭ１−ＳＰＰ−ＤＭ１、またはＤＭ１−ＣＸ１−１−ＤＭ１）のいくらかを混合物から除去して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供する。別の好ましい実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを含む混合物は、リンカーを介して互いに化学的に結合されていない細胞毒性剤ダイマー（例えば、ＤＭ１−ＤＭ１）を不純物として含み、ＰＶＤＦ膜は、リンカーを介して互いに化学的に結合されていない細胞毒性剤ダイマー（例えば、ＤＭ１−ＤＭ１）のいくらかを混合物から除去して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供する。
細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をＰＶＤＦ膜に供するとき、結果として得られる精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートは、混合物をＰＶＤＦ膜に供する前の混合物中の１つ以上の不純物のレベルと比較して、低減されたレベルの少なくとも１つ以上の不純物を含む。例えば、ＰＶＤＦ膜は、混合物をＰＶＤＦ膜に供する前の混合物中の１つ以上の不純物のレベルと比較して、混合物中の１つ以上の不純物の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％）、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはさらには１００％を除去する。一実施形態では、ＰＶＤＦ膜は、混合物をＰＶＤＦ膜に供する前の混合物中の１つ以上の不純物のレベルと比較して、混合物中の１つ以上の不純物の約１０％〜約１００％、約１０％〜約９０％、約２０％〜約１００％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８０％、約３０％〜約１００％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約８０％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約１００％、約５０％〜約８０％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約１００％（例えば、約６０％〜約９０％、約７０％〜約９０％）、約６０％〜約１００％、約７０％〜約１００％、約８０％〜約１００％、約９０％〜約１００％、または約９５％〜約１００％（例えば、約９６％〜約１００％、約９７％〜約１００％、約９８％〜約１００％、約９９％〜約１００％、約９５％〜約９６％、約９５％〜約９７％、約９５％〜約９８％、または約９５％〜約９９％）を除去する。
一実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混
合物のｐＨは、混合物をＰＶＤＦ膜に供する前に調節される。細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物のｐＨは、好ましくは約４〜約９（例えば、約４．５〜約８．５、約５〜約８、約５．５〜約７．５、約６〜約７、約６．５〜約７．５、約７〜約８、約８〜約９、約４．５〜約６、または約４．５〜約５のｐＨ）である。幾つかの実施形態では、混合物のｐＨは、約６〜約６．５（例えば、５．５〜７のｐＨ、５．７〜６．８のｐＨ、５．８〜６．７のｐＨ、５．９〜６．６のｐＨ、または６〜６．５のｐＨ）、約６以下のｐＨ（例えば、約４〜６、約４〜約５．５、約４〜約４．５、約４〜約５、約５〜６のｐＨ）、または約６．５以上のｐＨ（例えば、６．５〜約９、約６．５〜約７、約７〜約９、約７．５〜約９、または６．５〜約８のｐＨ）である。一実施形態では、混合物のｐＨは、７．５超（例えば、７．６〜約９、７．７〜約９、約７．８〜約９、約７．９〜約９、７．６〜約８．５、７．６〜約８、７．７〜約８．５、７．７〜約８、約７．８〜約８．４、約７．８〜約８．２、約８〜約９、または約８〜約８．５のｐＨ）である。例えば、混合物のｐＨは、７．６、７．７、７．８、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、または９のｐＨであり得る。別の実施形態では、混合物のｐＨは、約４．８（例えば、約４．５〜約５、約４．６〜約５、または約４．７〜約４．９）である。
種々のＰＶＤＦ膜が、当該技術分野において既知であり、本明細書に説明される本発明に従って使用することができる。一実施形態では、ＰＶＤＦ膜は、０．２２ミクロンの孔径を有する。別の実施形態では、ＰＶＤＦ膜は、０．４５ミクロンの孔径を有する。別の実施形態では、ＰＶＤＦ膜は、０．４５および０．２２ミクロンの孔径を有する二重層膜（すなわち、二重層０．４５／０．２２ミクロン孔径膜孔径膜）である。
幾つかの実施形態では、ＰＶＤＦ膜は、γ線照射される。他の実施形態では、ＰＶＤＦ膜は、γ線照射されない。
細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを調製するための多数のプロセスが、説明されている（例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２５３０２１号、国際特許出願公開第２０１２／１３５５２２号、米国特許第５，２０８，０２０号、米国特許第６，４４１，１６３号、米国特許第７，８１１，５７２号、米国特許出願公開第２００６／０１８２７５０号、米国特許出願公開第２００８／０１４５３７４号、および米国特許出願公開第２０１１／０００３９６９号を参照）。
一実施形態では、本発明は、細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含むコンジュゲートを調製するためのプロセスであって、修飾反応および結合反応が、単一のステップ内に組み合わされ、その後精製ステップが続き（すなわち、米国特許出願公開第２０１２／０２５３０２１号に説明される１ステッププロセス）、またプロセスが、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、精製ステップの前または後のいずれかにＰＶＤＦ膜に供することを含む、プロセスを提供する。１ステッププロセスは、細胞結合剤（例えば、抗体）を細胞毒性剤と接触させて、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む第１の混合物を形成し、その後、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む第１の混合物を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中でリンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物（例えば、遊離細胞毒性剤および反応副産物）とを含む第２の混合物を提供することを含み、細胞結合剤は、リンカーを介して細胞毒性剤に化学的に結合される。第２の混合物はその後、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供するために精製に供される。細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物は、精製ステップの前、精製ステップの後、またはその双方でＰＶＤＦ膜に供される。
１ステップ反応は好ましくは、約４〜約ｐＨ９のｐＨ（例えば、約４．５〜約８．５、
約５〜約８、約５．５〜約７．５、約６〜約７、約６〜約８、約６〜約９、または約６．５〜約７．５のｐＨ）で実施される。幾つかの実施形態では、反応は、約６〜約８のｐＨ（例えば、約６、約６．５、約７、約７．５、または約８のｐＨ）で実施される。
一実施形態では、反応は、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、約８．５、約８．６、約８．７、約８．８、約８．９、または約９のｐＨで実施される。別の実施形態では、反応は、約７．５〜約９、約７．５〜約８．５、約７．５〜約８、約７．８〜約９、約７．８〜約８．５、約７．８〜約８、約８〜約９、約８〜約８．５、または約８．５〜約９のｐＨで実施される。別の実施形態では、反応は、約７．８のｐＨ（例えば、７．６〜８．０のｐＨまたは７．７〜７．９のｐＨ）で実施される。別の実施形態では、修飾反応は、約８のｐＨ（例えば、７．８〜８．２のｐＨまたは７．９〜８．１のｐＨ）で実施される。
別の実施形態では、反応は、７．５超のｐＨ（例えば、７．６〜約９、７．７〜約９、約７．８〜約９、約７．９〜約９、７．６〜約８．５、７．６〜約８、７．７〜約８．５、７．７〜約８、約７．８〜約８．４、約７．８〜約８．２、約８〜約９、または約８〜約８．５のｐＨ）で実施される。
一実施形態では、接触は、細胞結合剤を提供し、その後、細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させて、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む第１の混合物を形成し、その後、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む第１の混合物を、二官能性架橋試薬と接触させることによって達成される。例えば、一実施形態では、細胞結合剤は、反応容器内に提供され、細胞毒性剤が反応容器に添加され（それによって、細胞結合剤に接触し）、その後、二官能性架橋試薬が細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物に添加される（それによって、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物と接触する）。一実施形態では、細胞結合剤は、反応容器内に提供され、細胞毒性剤は、細胞結合剤を容器に提供した直後に反応容器に添加される。別の実施形態では、細胞結合剤は、反応容器に提供され、細胞毒性剤は、細胞結合剤を容器に提供した後、ある時間間隔（例えば、スペースに細胞結合剤を提供した後、約５分、約１０分、約２０分、約３０分、約４０分、約５０分、約１時間、約１日、またはそれ以上）の後に反応容器に添加される。細胞毒性剤は、素早く（すなわち、約５分、約１０分等の短い時間間隔以内）、またはゆっくりと（ポンプを使用することによって等）添加することができる。
細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物は、その後、細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させた直後か、または細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させた後のある時点（例えば、約５分〜約８時間またはそれ以上）かのいずれかに、二官能性架橋試薬と接触されることができる。例えば、一実施形態では、二官能性架橋試薬は、細胞結合剤を含む反応容器への細胞毒性剤の添加の直後に、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物に添加される。別法として、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物は、細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させた約５分、約１０分、約２０分、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、またはそれ以上後に、二官能性架橋試薬と接触されることができる。
別の実施形態では、細胞毒性剤および二官能性剤は、複数のサイクル（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上のサイクル）を通して添加される。例えば、本発明は：ａ）細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させて、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む第１の混合物を形成し、その後、第１の混合物を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中でリンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物（例えば、遊離細胞毒性剤および反応副産物）とを含む第２の混合物を提供することで
あって、細胞結合剤は、リンカーを介して細胞毒性剤に化学的に結合される、提供することと；ｂ）第２の混合物を細胞毒性剤と接触させて、第３の混合物を形成し、その後、第３の混合物を約４〜約９のｐＨで二官能性架橋試薬と接触させて、第４の混合物を提供することと；ｃ）第４の混合物を精製して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することと、のステップを含むプロセスを提供する。一実施形態では、ステップｂ）は、ステップａ）の後、ある時間間隔（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、またはそれ以上）後に実行される。別の実施形態では、ステップｂ）は、ステップｃ）が実行される前に、複数回（例えば、１、２、３、４回、またはそれ以上）繰り返すことができる。追加のステップｂ）は、初めのステップｂ）の後、ある時間間隔（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、またはそれ以上）後に実行することができる。
別の実施形態では、二官能性架橋試薬は、細胞毒性剤の完全な添加の前に添加される。例えば、一実施形態では、細胞毒性剤は、ある時間間隔にわたって（例えば、約５分、約１０分、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、またはそれ以上にわたって）細胞結合剤に連続的に添加されて、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物を形成する。細胞毒性剤の添加が完了する前に、二官能性架橋試薬は、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物に添加されるが、但し、いかなる時点においても、細胞毒性剤は二官能性架橋試薬のモル過剰である。一実施形態では、二官能性架橋試薬は、ある時間間隔にわたって（例えば、約５分、約１０分、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、またはそれ以上にわたって）連続的に添加される。
細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物を、二官能性架橋試薬と接触させた後、反応は、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、またはそれ以上（例えば、約３０時間、約３５時間、約４０時間、約４５時間、または約４８時間）、進行され得る。
したがって、一実施形態では、本発明は、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスであって、細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させて、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む第１の混合物を形成し、その後、第１の混合物を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中でリンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、リンカーを介して細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含む細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を提供することと、（ｂ）第２の混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、不純物の少なくとも一部を除去し、それによって細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、（ｃ）ステップ（ｂ）の後、精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを不純物からさらに精製し、それによって細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、精製された第３の混合物は、精製された第２の混合物と比較して低減された量の不純物を含む、調製することと、を含む、プロセスを提供する。本明細書に説明される任意の精製方法は、本発明のプロセスで使用することができる。好ましい実施形態では、タンジェント流濾過、吸着クロマトグラフィー、または非吸着クロマトグラフィーが、精製ステップとして利用される。
本発明の一実施形態では、細胞結合剤を二官能性架橋試薬と接触させること（すなわち、修飾反応）は、結合されたリンカーを有する細胞結合剤と１つ以上の不純物（例えば、反応物質および他の副産物）とを含む第１の混合物を生成する。本発明の幾つかの実施形態では、第１の混合物は、安定しておよび不安定に結合されたリンカーを有する細胞結合
剤と、１つ以上の不純物（例えば、反応物質および他の副産物）とを含む。リンカーは、リンカーと細胞結合剤との間の共有結合が、通常の保管条件下で、数カ月〜数年に及び得る一定期間にわたって実質的に弱化または切断されないとき、細胞結合剤に「安定して」結合される。対照的に、リンカーは、リンカーと細胞結合剤との間の共有結合が、通常の保管条件下で、数カ月〜数年に及び得る一定期間にわたって実質的に弱化または切断されるとき、細胞結合剤に「不安定に」結合される。
修飾反応は好ましくは、約４〜約ｐＨ９のｐＨ（例えば、約４．５〜約８．５、約５〜約８、約５．５〜約７．５、約６〜約７、約６〜約８、約６〜約９、または約６．５〜約７．５のｐＨ）で実施される。幾つかの実施形態では、修飾反応は、約６〜約８のｐＨ（例えば、約６、約６．５、約７、約７．５、または約８のｐＨ）で実施される。
一実施形態では、修飾反応は、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、約８．５、約８．６、約８．７、約８．８、約８．９、または約９のｐＨで実施される。別の実施形態では、修飾反応は、約７．５〜約９、約７．５〜約８．５、約７．５〜約８、約７．８〜約９、約７．８〜約８．５、約７．８〜約８、約８〜約９、約８〜約８．５、または約８．５〜約９のｐＨで実施される。別の実施形態では、修飾反応は、約７．８のｐＨ（例えば、７．６〜８．０のｐＨまたは７．７〜７．９のｐＨ）で実施される。別の実施形態では、修飾反応は、約８のｐＨ（例えば、７．８〜８．２のｐＨまたは７．９〜８．１のｐＨ）で実施される。
別の実施形態では、修飾反応は、７．５超のｐＨ（例えば、７．６〜約９、７．７〜約９、約７．８〜約９、約７．９〜約９、７．６〜約８．５、７．６〜約８、７．７〜約８．５、７．７〜約８、約７．８〜約８．４、約７．８〜約８．２、約８〜約９、または約８〜約８．５のｐＨ）で実施される。例えば、本発明のプロセスは、細胞結合剤を、７．６、７．７、７．８、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、または９のｐＨを有する溶液中で二官能性架橋試薬と接触させることを含む。
本発明の一実施形態では、修飾された細胞結合剤の修飾反応中に生成された不純物（例えば、反応物質および副産物）からの精製は、修飾反応によって生成された混合物（すなわち、第１の混合物）を精製プロセスに供することによって実行される。この点に関して、第１の混合物は、タンジェント流濾過（ＴＦＦ）、例えば、膜ベースタンジェント流濾過プロセス、非吸着クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、または選択的析出、または任意の他の好適な精製プロセス、およびこれらの組み合わせを使用して精製することができる。この第１の精製ステップは、精製された第１の混合物、すなわち、本発明に従う精製の前の第１の混合物と比較して、結合されたリンカーを有する増加した濃度の細胞結合剤、および減少した量の非結合二官能性架橋試薬を提供する。好ましくは、第１の混合物は、タンジェント流濾過または吸着クロマトグラフィー（例えば、セラミックハイドロキシアパタイト等のイオン交換クロマトグラフィー）を使用して精製される。
結合されたリンカーを有する細胞結合剤の精製された第１の混合物を得るための第１の混合物の精製後、細胞毒性剤は、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を約４〜約９のｐＨを有する溶液中で細胞毒性剤と反応させることによって、第１の精製された混合物中で結合されたリンカーを有する細胞結合剤に結合されて、第２の混合物を形成し、リンカーを介して細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤と１つ以上の不純物（例えば、遊離細胞毒性剤および反応副産物）とを含む第２の混合物が生成される。
任意に、修飾された細胞結合剤の精製は、省略されてもよい。したがって、本発明の一実施形態では、結合されたリンカーを有する細胞結合剤、ならびに反応物質および他の副産物を含む第１の混合物は、精製プロセスに供されない。かかる状況においては、細胞毒性剤は、架橋試薬と同時に、または架橋試薬の細胞結合剤への添加の後のある時点、例えば、１、２、３時間、またはそれ以上後に添加されてもよい。修飾された細胞結合剤は、修飾された細胞結合剤を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中で細胞毒性剤と反応させることによって、細胞毒性剤（例えば、マイタンシノイド）に結合され、結合ステップは、安定性の細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲート、非安定性の細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲート、結合されていない細胞毒性剤（すなわち、「遊離」細胞毒性剤）、反応物質、および副産物の混合物の形成をもたらす。
結合反応は、好ましくは、約４〜約ｐＨ９のｐＨ（例えば、約４．５〜約８．５、約５〜約８、約５．５〜約７．５、約６．０〜約７、または約６．５〜約７．５のｐＨ）で実施される。幾つかの実施形態では、結合反応は、約６〜約６．５のｐＨ（例えば、５．５〜７のｐＨ、５．７〜６．８のｐＨ、５．８〜６．７のｐＨ、５．９〜６．６のｐＨ、または６〜６．５のｐＨ）、約６以下のｐＨ（例えば、約４〜６、約４〜約５．５、約５〜６のｐＨ）、または約６．５以上のｐＨ（例えば、６．５〜約９、約６．５〜約７、約７〜約９、約７．５〜約９、または６．５〜約８のｐＨ）で実施される。一実施形態では、結合反応は、約４〜ｐＨ６未満のｐＨで、または６．５超〜９のｐＨで実施される。結合ステップが約６．５以上のｐＨで実施されるとき、幾らかのスルフヒドリル含有細胞毒性剤が、ジスルフィド結合形成によってダイマー化される傾向がある。一実施形態では、反応混合物からの微量金属および／もしくは酸素の除去、ならびに酸化防止剤の任意的な添加もしくはより反応性の脱離基を有するリンカーの使用、または１アリコートを超える細胞毒性剤の添加が、かかる状況における効率的な反応を可能にするために必要とされることがある。
結合ステップの後、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物は、精製ステップに供される。この点に関して、結合混合物は、タンジェント流濾過（ＴＦＦ）、例えば、膜ベースタンジェント流濾過プロセス、非吸着クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、または選択的析出、または任意の他の好適な精製プロセス、およびこれらの組み合わせを使用して精製することができる。当業者は、結合ステップ後の精製は、細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含む精製されたコンジュゲートの単離を可能にし、コンジュゲートは、精製ステップ前のコンジュゲートと比較して、低減された量の不純物を有することを理解するであろう。一実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物は、精製前に不純物の少なくとも一部を混合物から除去するために、結合ステップの後および精製ステップの前にＰＶＤＦ膜に供される。別の実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物は、精製後に混合物中に残留する不純物の少なくとも一部を除去するために、精製ステップの後にＰＶＤＦ膜に供される。
したがって、一実施形態では、本発明は、細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含むコンジュゲートを調製するためのプロセスであって、該プロセスは、修飾ステップの後の第１の精製ステップと結合ステップの後の第２の精製ステップとを含み、該プロセスは、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、第２の精製ステップの前かまたは後かのいずれかにＰＶＤＦ膜に供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去することを含む、プロセスを提供する。一実施形態では、本発明は、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスであって、細胞結合剤を二官能性架橋試薬と接触させて、リンカーを細胞結合剤に共有結合させ、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を含む第１の混合物を調製することと、（ｂ）第１の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィ
ー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供し、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤の精製された第１の混合物を調製することと、（ｃ）結合されたリンカーを有する細胞結合剤を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中で細胞毒性剤と反応させることによって、細胞毒性剤を、精製された第１の混合物中で結合されたリンカーを有する細胞結合剤と結合させて、リンカーを介して細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含む細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を調製することと、（ｄ）第２の混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、不純物の少なくとも一部を除去し、それによって細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、（ｅ）ステップ（ｄ）の後、精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを不純物からさらに精製し、それによって細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、精製された第３の混合物は、精製された第２の混合物と比較して低減された量の不純物を含む、調製することと、を含む、プロセスを提供する。
本明細書に説明される任意の精製方法は、本発明のプロセスで使用することができる。本発明の一実施形態では、タンジェント流濾過（ＴＦＦ、クロスフロー濾過、限外濾過、および透析濾過としても既知である）および／または吸着クロマトグラフィー樹脂が、精製ステップで利用される。例えば、本発明のプロセスは、修飾ステップの後のＴＦＦを使用する第１の精製ステップと、結合ステップの後のＴＦＦを使用する第２の精製ステップとを含むことができる。別法として、本発明のプロセスは、修飾ステップの後の吸着クロマトグラフィーを使用する第１の精製ステップと、結合ステップの後の吸着クロマトグラフィーを使用する第２の精製ステップとを含むことができる。本発明のプロセスはまた、修飾ステップの後の吸着クロマトグラフィーを使用する第１の精製ステップと結合ステップの後のＴＦＦを使用する第２の精製ステップ、または修飾ステップの後のＴＦＦを使用する第１の精製ステップと結合ステップの後の吸着クロマトグラフィーを使用する第２の精製ステップとを含むことができる。
本発明の一実施形態では、非吸着クロマトグラフィーが、精製ステップとして利用される。例えば、本発明のプロセスは、修飾ステップ後の非吸着クロマトグラフィーを使用する第１の精製ステップと、結合ステップ後の非吸着クロマトグラフィーを使用する第２の精製ステップとを含むことができる。
別の実施形態では、本発明は、細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含むコンジュゲートを調製するためのプロセスであって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を含む第１の混合物は、修飾反応の後および結合反応の前に精製に供されず、そのプロセスは、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をＰＶＤＦ膜に供することを含む、プロセスを提供する。修飾された細胞結合剤の精製が省略される場合、本発明は、細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含むコンジュゲートを調製するためのプロセスであって、該プロセスは、修飾ステップ、結合ステップ、および結合ステップの後の第１の精製ステップを含み、該プロセスは、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、第１の精製ステップの前かまたは後かのいずれかにＰＶＤＦ膜に供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去することを含む、プロセスを提供する。一実施形態では、本発明は、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスであって、細胞結合剤を二官能性架橋試薬と接触させて、リンカーを細胞結合剤に共有結合させ、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を含む第１の混合物を調製することと、（ｂ）結合されたリンカーを有する細胞結合剤を細胞毒性剤と反応させることによって、細胞毒性剤を、第１の混合物中で結合されたリンカーを有する細胞結合剤に結合させて、リンカーを介して細胞毒性
剤に化学的に結合された細胞結合剤を含む細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を調製することと、（ｃ）第２の混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、不純物の少なくとも一部を除去し、それによって細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、（ｄ）ステップ（ｃ）の後、精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを不純物からさらに精製し、それによって細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、精製された第３の混合物は、精製された第２の混合物と比較して低減された量の不純物を含み、ステップ（ａ）で調製される結合されたリンカーを有する細胞結合剤（ならびに反応物質および他の副産物）を含む第１の混合物は、ステップ（ｂ）の前には精製プロセスに供されない、調製することと、を含む、プロセスを提供する。本明細書に説明される任意の精製方法は、結合反応の後の精製ステップとして使用することができる。好ましい実施形態では、タンジェント流濾過、吸着クロマトグラフィー、または非吸着クロマトグラフィーが、結合反応の後の精製ステップとして利用される。
一実施形態では、本発明は、細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含むコンジュゲートを調製するためのプロセスであって、該プロセスは、米国特許第６，４４１，１６３号ならびに米国特許出願公開第２０１１／０００３９６９号および同第２００８／０１４５３７４号に説明されるように、予め形成された細胞毒性剤−リンカー化合物を細胞結合剤に結合させることを含み、その後精製ステップが続き、該プロセスは、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、精製ステップの前かまたは後かのいずれかにＰＶＤＦ膜に供することを含む、プロセスを提供する。本明細書に説明される任意の精製方法は、本発明のプロセスで使用することができる。好ましい実施形態では、タンジェント流濾過、吸着クロマトグラフィー、または非吸着クロマトグラフィーが、精製ステップとして利用される。
一実施形態では、細胞毒性剤−リンカー化合物は、細胞毒性剤を、リンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、細胞毒性剤をリンカーに共有結合させることによって、調製される。細胞毒性剤−リンカー化合物は、任意に、細胞毒性剤−リンカー化合物を細胞結合剤と接触させる前に、精製に供される。
本発明の一実施形態では、本明細書に説明される本発明のプロセス（例えば、１ステッププロセス）は、結合ステップの後に２つの別々の精製ステップを含む。本発明のプロセスが、結合ステップの後に２つの別々の精製ステップを含むとき、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物は、不純物の少なくとも一部を混合物から除去するために、精製ステップの双方またはいずれかの前か、または精製ステップの後にＰＶＤＦ膜に供されることができる。本明細書に説明される任意の精製方法は、結合反応の後の精製ステップとして使用することができる。好ましい実施形態では、タンジェント流濾過、吸着クロマトグラフィー、非吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせが、結合反応の後の精製ステップとして利用される。
ペリコン（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ）型システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）、ザルトコンカセット（Ｓａｒｔｏｃｏｎ Ｃａｓｓｅｔｔｅ）システム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ，Ｅｄｇｅｗｏｏｄ，ＮＹ）、およびセントラセット（Ｃｅｎｔｒａｓｅｔｔｅ）型システム（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ）を含む任意の好適なＴＦＦシステムが、精製のために利用されてもよい。
任意の好適な吸着クロマトグラフィー樹脂が、精製のために利用されてもよい。好ましい吸着クロマトグラフィー樹脂としては、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、
疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、混合モードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、色素リガンドクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびこれらの組み合わせが挙げられる。好適なハイドロキシアパタイト樹脂の例としては、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ Ｉ型およびＩＩ型、Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）、ＨＡ Ｕｌｔｒｏｇｅｌハイドロキシアパタイト（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ）、およびセラミックフルオロアパタイト（ＣＦＴ Ｉ型およびＩＩ型、Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適なＨＣＩＣ樹脂の例は、ＭＥＰ Ｈｙｐｅｒｃｅｌ樹脂（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ）である。好適なＨＩＣ樹脂の例としては、ブチル−セファロース、ヘキシル−セファロース（Ｈｅｘｙｌ−Ｓｅｐａｈａｒｏｓｅ）、フェニル−セファロース、およびオクチルセファロース樹脂（全てＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪより）、ならびにＭａｃｒｏ−ｐｒｅｐメチルおよびＭａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ ｔ−ブチル樹脂（Ｂｉｏｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適なイオン交換樹脂の例としては、ＳＰ−セファロース、ＣＭ−セファロース、およびＱ−セファロース樹脂（全てＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪより）、およびＵｎｏｓｐｈｅｒｅ Ｓ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適な混合モードイオン交換器の例としては、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ
ＡＢｘ樹脂（ＪＴ Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ ＮＪ）が挙げられる。好適なＩＭＡＣ樹脂の例としては、キレート化セファロース樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）およびＰｒｏｆｉｎｉｔｙ ＩＭＡＣ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適な色素リガンド樹脂の例としては、ブルーセファロース樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）およびＡｆｆｉ−ｇｅｌ Ｂｌｕｅ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適なアフィニティ樹脂の例としては、細胞結合剤が抗体である場合、プロテインＡセファロース樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、また細胞結合剤が適切なレクチン結合部位を有する場合、レクチンアフィニティ樹脂、例えば、レンチル（Ｌｅｎｔｉ）レクチンセファロース樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）が挙げられる。別法として、細胞結合剤に特異的な抗体が、使用されてもよい。かかる抗体は、例えば、セファロース４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）に固定化され得る。好適な逆相樹脂の例としては、Ｃ４、Ｃ８、およびＣ１８樹脂（Ｇｒａｃｅ Ｖｙｄａｃ，Ｈｅｓｐｅｒｉａ，ＣＡ）が挙げられる。
任意の好適な非吸着クロマトグラフィー樹脂が、精製のために利用されてよい。好適な非吸着クロマトグラフィー樹脂の例としては、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）Ｇ−２５、Ｇ−５０、Ｇ−１００、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（商標）樹脂（例えば、Ｓ−２００およびＳ−３００）、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）樹脂（例えば、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）７５およびＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）２００）、ＢＩＯ−ＧＥＬ（登録商標）樹脂（例えば、Ｐ−６、Ｐ−１０、Ｐ−３０、Ｐ−６０、およびＰ−１００）、および当業者に既知の他のものが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の一実施形態では、本明細書に説明されるプロセスは、混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去することをさらに含む。イオン交換クロマトグラフィー膜は、Ｑ膜等の陰イオン交換膜、またはＳ膜等の陽イオン交換膜であり得る。一実施形態では、イオン交換クロマトグラフィー膜は、エンドトキシン除去交換膜である。好ましい実施形態では、イオン交換クロマトグラフィー膜は
、陰イオン交換膜（例えば、Ｑ膜）である。
陰イオン交換膜は、正荷電微孔性膜である。一実施形態では、正荷電陰イオン交換部分は、第四アンモニウム基である。一実施形態では、正荷電微孔性膜は、多孔性基質およびペンダントカチオン基を有する架橋コーティングを含む（例えば、米国特許第６，７８０，３２７号、同第６，８５１，５６１号、同第７，０９４，３４７号、同第７，２２３，３４１号、同第７，３９６，４６５号に説明されるものを参照）。一実施形態では、多孔性基質は、親水性である（例えば、ポリエーテルスルホンまたは架橋セルロースマトリックス）。別の実施形態では、カチオン基は、第四アンモニウム基である。別の実施形態では、陰イオン交換膜は、多孔性ポリエーテルスルホン基質とペンダント第四アンモニウム基を有する架橋コーティングとを含む正荷電微孔性膜である。
一実施形態では、混合物は、混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜（例えば、Ｑ膜またはＳ膜）に供する前に、ＰＶＤＦ膜に供される。別の実施形態では、混合物は、混合物をＰＶＤＦ膜に供する前に、イオン交換クロマトグラフィー膜に供される。また別の実施形態では、混合物は、混合物をＰＶＤＦ膜に供する前および後に、イオン交換クロマトグラフィー膜に供される。別の実施形態では、混合物は、混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供する前および後に、ＰＶＤＦ膜に供される。
本発明のプロセスは、本明細書に説明される反応（例えば、修飾反応、結合反応、または１ステップ反応）を、当該技術分野において既知である任意の好適な温度で実施することを含む。例えば、反応は、約２０℃またはそれ以下（例えば、約−１０℃（但し、溶液が、例えば、細胞毒性剤および二官能性架橋試薬を溶解させるために使用される有機溶媒の存在によって、凍結を妨げられるのであれば）〜約２０℃、約０℃〜約１８℃、約４℃〜約１６℃）で、室温（例えば、約２０℃〜約３０℃または約２０℃〜約２５℃）で、または高温（例えば、約３０℃〜約３７℃）で生じることができる。一実施形態では、反応は、約１６℃〜約２４℃の温度（例えば、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、または約２５℃）で生じる。
一実施形態では、本明細書に説明される本発明のプロセスは、任意の未反応の細胞毒性剤および／または未反応の二官能性架橋試薬を急冷するための急冷ステップをさらに含む。急冷ステップは、細胞結合剤−細胞毒性剤の精製の前に実施される。別法として、急冷ステップは、細胞結合剤−細胞毒性剤の精製の後に実施される。一実施形態では、本発明のプロセスは、（ａ）細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させて、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物を形成し、その後、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中でリンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、細胞結合剤がリンカーを介して細胞毒性剤に化学的に結合されている細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと、不純物（例えば、遊離細胞毒性剤および反応副産物）とを含む混合物を提供することと、（ｂ）細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、ＰＶＤＦ膜に供することと、（ｃ）ステップ（ｂ）の後、混合物を急冷して、任意の未反応の細胞毒性剤および／または未反応の二官能性架橋試薬を急冷することと、（ｄ）急冷された混合物を、ＰＶＤＦ膜に供することと、（ｅ）任意に、混合物を保持することと、（ｆ）任意に、混合物をＰＶＤＦ膜に供することと、（ｇ）混合物を精製して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することと、を含む。別の実施形態では、本発明のプロセスは、（ａ）細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させて、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物を形成し、その後、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中でリンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、細胞結合剤がリンカーを介して細胞毒性剤に化学的に結合されている細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと、不純物（例えば、遊離細胞毒性剤および反応副産物）とを含む混合物を提供することと、（ｂ）細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む
混合物を、ＰＶＤＦ膜に供することと、（ｃ）任意に、ステップ（ｂ）の後、混合物を急冷して、任意の未反応の細胞毒性剤および／または未反応の二官能性架橋試薬を急冷することと、（ｄ）任意に、急冷された混合物をＰＶＤＦ膜に供することと、（ｅ）混合物を保持することと、（ｆ）混合物をＰＶＤＦ膜に供することと、（ｇ）混合物を精製して、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することと、とを含む。
一実施形態では、混合物は、混合物を急冷試薬と接触させることによって急冷される。本明細書で使用するとき、「急冷試薬」は、遊離細胞毒性剤および／または二官能性架橋試薬と反応する試薬を指す。
一実施形態では、４−マレイミド酪酸、３−マレイミドプロピオン酸、Ｎ−エチルマレイミド、ヨードアセトアミド、またはヨードアセトアミドプロピオン酸等のマレイミドまたはハロアセトアミド急冷試薬は、細胞毒性剤中の任意の未反応の基（チオール等）が、急冷されるのを確実にするために使用することができる。急冷ステップは、細胞毒性剤、特に、未反応のチオール基を有する細胞毒性剤（ＤＭ１等）のダイマー化を防止するのに役立つことができる。ダイマー化された細胞毒性剤は、除去することが困難であり得る。急冷ステップはまた、天然の抗体ジスルフィド基との任意の不要なチオール−ジスルフィド交換反応を最小化することもできる。極性の荷電チオール−急冷試薬（４−マレイミド酪酸または３−マレイミドプロピオン酸等）で急冷すると、過剰の未反応の細胞毒性剤は、精製ステップ中に共有的に連結されたコンジュゲートから容易に分離することができる極性の荷電水溶性付加物へと変換される。非極性の中性チオール−急冷試薬を用いた急冷も、同様に使用することができる。
一実施形態では、混合物は、混合物を未反応の二官能性架橋試薬と反応する急冷試薬と接触させることによって、急冷される。例えば、任意の未反応の二官能性架橋試薬を急冷するために、求核試薬を混合物に添加することができる。求核試薬は好ましくは、リジン、タウリン、およびヒドロキシルアミン等、アミノ基を含有する求核試薬である。
別法として、混合物は、混合物のｐＨを約５．０（例えば、４．８、４．９、５．０、５．１、または５．２）まで低下させることによって急冷される。別の実施形態では、混合物は、ｐＨを６．０未満、５．５未満、５．０未満、４．８未満、４．６未満、４．４未満、４．２未満、４．０未満まで低下させることによって急冷される。別法として、ｐＨは、約４．０（例えば、３．８、３．９、４．０、４．１、または４．２）〜約６．０（例えば、５．８、５．９、６．０、６．１、または６．２）、約４．０〜約５．０、約４．５（例えば、４．３、４．４、４．５、４．６、または４．７）〜約５．０まで低下される。一実施形態では、混合物は、混合物のｐＨを４．８まで低下させることによって急冷される。
好ましい実施形態では、反応（例えば、修飾ステップ、結合ステップ、または１ステップ反応）は、混合物を急冷試薬と接触させる前に、完了まで進行される。この点に関して、急冷試薬は、細胞結合剤と細胞毒性剤とを含む混合物を二官能性架橋試薬と接触させた後、約１時間〜約４８時間（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、または約２５時間〜約４８時間）で、混合物に添加される。
本発明のプロセスは、任意に、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの溶解度および回収を増加させるために、反応ステップ（例えば、修飾ステップ、結合ステップ、または１ステップ反応）へのスクロースの添加を含んでもよい。望ましくは、スクロースは、約
０．１％（重量／体積）〜約２０％（重量／体積）（例えば、約０．１％）（重量／体積）、１％（重量／体積）、５％（重量／体積）、１０％（重量／体積）、１５％（重量／体積）、または２０％（重量／体積））の濃度で添加される。好ましくは、スクロースは、約１％（重量／体積）〜約１０％（重量／体積）（例えば、約０．５％（重量／体積）、約１％（重量／体積）、約１．５％（重量／体積）、約２％（重量／体積）、約３％（重量／体積）、約４％（重量／体積）、約５％（重量／体積）、約６％（重量／体積）、約７％（重量／体積）、約８％（重量／体積）、約９％（重量／体積）、約１０％（重量／体積）、または約１１％（重量／体積））の濃度で添加される。それに加えて、反応ステップはまた、緩衝剤の添加を含むこともできる。当該技術分野において既知である任意の好適な緩衝剤が、使用され得る。好適な緩衝剤としては、例えば、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、およびリン酸緩衝液が挙げられる。一実施形態では、緩衝剤は、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物（ｄｅｈｙｄｒａｔｅ））、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＨＥＰＰＳ（ＥＰＰＳ）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。
一実施形態では、本発明のプロセスは、不安定に結合されたリンカーを細胞結合剤から放出するための１つ以上（例えば、１、２、または３）の保持ステップをさらに含む。保持ステップは、二官能性架橋試薬を用いた細胞結合剤の修飾の後、結合されたリンカーを有する細胞結合剤への細胞毒性剤の結合の後、および／または精製ステップの後に、混合物を保持することを含む。保持ステップが、結合されたリンカーを有する細胞結合剤への細胞毒性剤の結合の後、および／または結合ステップの後の精製ステップの後に、混合物を保持することを含む場合、混合物は、保持ステップの前もしくは後、またはその双方でＰＶＤＦ膜に供されることができる。一実施形態では、プロセスは、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、結合ステップの後に保持ステップに供することを含み、混合物は、保持ステップの後および精製ステップの前にＰＶＤＦ膜に供される。別の実施形態では、プロセスは、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、結合ステップの後に保持ステップに供することを含み、混合物は、保持ステップの後に精製ステップに供され、その後、混合物はＰＶＤＦ膜に供される。混合物は、任意に、混合物をＰＶＤＦ膜に供する前に、第２の保持ステップに供されてもよい。
保持ステップは、溶液を、好適な温度（例えば、約２℃〜約３７℃）で好適な期間（例えば、約１時間〜約１週間）維持して、不安定に結合されたリンカーを細胞結合剤から放出しながら、安定して結合されたリンカーは細胞結合剤から実質的に放出しないことを含む。一実施形態では、保持ステップは、溶液を、低温（例えば、約２℃〜約１０℃または約４℃）で、室温（例えば、約２０℃〜約３０℃または約２０℃〜約２５℃）で、または高温（例えば、約３０℃〜約３７℃）で維持することを含む。
保持ステップの継続時間は、保持ステップが実施される温度に依存する。例えば、保持ステップの継続時間は、最大温度を細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの安定性によって制限した状態で、保持ステップを高温で実施することによって、実質的に低減され得る。保持ステップは、溶液を、約１時間〜約１日（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、または約２４時間）、約５時間〜約１週間、約１２時間〜約１週間（例えば、約１２時間、約１６時間、約２０時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日）
、約１２時間〜約１週間（例えば、約１２時間、約１６時間、約２０時間、約２４時間、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、または約７日）、または約１日〜約１週間、維持することを含むことができる。
一実施形態では、保持ステップは、溶液を、少なくとも約１２時間、最大で１日間、約２℃〜約８℃の温度に維持することを含む。
保持ステップに関するｐＨ値は、好ましくは約４〜約９（例えば、約４．５〜約８．５または約５〜約８）である。一実施形態では、保持ステップに関するｐＨ値は、約５〜約７．５（例えば、約５．５〜約７．５、約６〜約７．５、約６．５〜約７．５、約７〜約７．５、約５〜約７、約５〜約６．５、約５〜約５．５、約５．５〜約７、約６〜約６．５、または約６〜約７）の範囲である。例えば、保持ステップに関するｐＨ値は、約４、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、または約９であり得る。
保持ステップは、細胞結合剤を細胞毒性剤に結合する前または後に、実施することができる。一実施形態では、保持ステップは、二官能性架橋試薬を用いた細胞結合剤の修飾の直後に実施される。例えば、本発明のプロセスは、二官能性架橋試薬を用いた細胞結合剤の修飾の後および結合の前に、保持ステップを含む。細胞結合剤の修飾の後、精製ステップは、保持ステップの前および／または保持ステップの後であるが、結合ステップより前に、実施されてもよい。別の実施形態では、保持ステップは、結合されたリンカーを有する細胞結合剤への細胞毒性剤の結合の直後および精製ステップの前に、実施される。別の実施形態では、保持ステップは、結合および精製ステップの後に実施され、その後、さらなる精製ステップが続く。
特定の実施形態では、保持ステップは、混合物を、約５〜７．５または約６．５〜７．５のｐＨで、約１時間〜約１週間、約２℃〜約室温でインキュベートすることを含むことができる。
一実施形態では、本発明は、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスであって、該プロセスは、外因性ＮＨＳの添加を含む、プロセスを提供する。本明細書で使用するとき、「外因性ＮＨＳ」は、プロセス中に外部源から添加されるＮＨＳを指し、修飾反応中に、二官能性リンカーの加水分解／アミノ分解の結果として生成されるＮＨＳは指さない。
一実施形態では、本発明は、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスであって、該プロセスは、約０．１ｍＭ〜約３００ｍＭの外因性ＮＨＳの添加を含む、プロセスを提供する。例えば、本発明のプロセスは、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．９ｍＭ、約３．０ｍＭ、約３．１ｍＭ、約３．３ｍＭ、約３．５ｍＭ、約３．７ｍＭ、約３．９ｍＭ、約４．０ｍＭ、約４．１ｍＭ、約４．３ｍＭ、約４．５ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．５ｍＭ、約５．７ｍＭ、約５．９ｍＭ、約６．０ｍＭ、約６．１ｍＭ、約６．３ｍＭ、約６．５ｍＭ、約６．７ｍＭ、約６．９ｍＭ、約７．０ｍＭ、約７．１ｍＭ、約７．３ｍＭ、約７．５ｍＭ、約７．７ｍＭ、約７．９ｍＭ、約８．０ｍＭ、約８．１ｍＭ、約８．３ｍＭ、約８．５ｍＭ、約８．７ｍＭ、約８．９ｍＭ、約９．０ｍＭ、約９．１ｍＭ、約９．３ｍＭ、約９．５ｍＭ、約９．７ｍＭ、約９．９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍ
Ｍ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２１０ｍＭ、約２２０ｍＭ、約２３０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭ、約２９０ｍＭ、または約３００ｍＭの外因性ＮＨＳの添加を含む。一実施形態では、本発明のプロセスは、約０．１ｍＭ〜約５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭ、約１．０ｍＭ〜約５ｍＭ、約１．０ｍＭ〜約１０ｍＭ、約５．０ｍＭ〜約１０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約２０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約３０ｍＭ、約３０ｍＭ〜約４０ｍＭ、約４０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約６０ｍＭ、約６０ｍＭ〜約７０ｍＭ、約７０ｍＭ〜約８０ｍＭ、約８０ｍＭ〜約９０ｍＭ、約９０ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１１０ｍＭ、約１１０ｍＭ〜約１２０ｍＭ、約１２０ｍＭ〜約１３０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１４０ｍＭ、約１４０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約１６０ｍＭ、約１６０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭ、約１８０ｍＭ〜約１９０ｍＭ、約１９０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約２００ｍＭ〜約２２０ｍＭ、約２２０ｍＭ〜約２４０ｍＭ、約２４０ｍＭ〜約２６０ｍＭ、約２６０ｍＭ〜約２８０ｍＭ、または約２８０ｍＭ〜約３００ｍＭの外因性ＮＨＳの添加を含む。別の実施形態では、本発明のプロセスは、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約２０〜約１５０ｍＭ、約５０〜約１５０ｍＭ、または約２０〜約１００ｍＭの外因性ＮＨＳの添加を含む。
幾つかの実施形態では、本発明のプロセスは、修飾反応中に二官能性リンカーの加水分解／アミノ分解の結果として生成されるＮＨＳの量に対する、あるモル比の外因性ＮＨＳの添加を含む。当業者は、生成されるＮＨＳの量が使用される二官能性リンカーの量と本質的に同じであるため、特定の修飾の間に生成されるＮＨＳの量を決定することができる。当業者は次に、修飾反応中に生成されるＮＨＳの量に対して、あるモル比の外因性ＮＨＳを反応混合物に添加することができる。一実施形態では、修飾反応中に生成されるＮＨＳの量に対して、約２〜約２００倍の外因性ＮＨＳが添加される。例えば、本発明のプロセスは、修飾反応中に生成されるＮＨＳの量に対して、約２、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約５０、約１００、または約２００倍の外因性ＮＨＳを添加することを含む。
幾つかの実施形態では、本発明のプロセスは、二官能性リンカーの量に対してあるモル比の外因性ＮＨＳの添加を含む。一実施形態では、外因性ＮＨＳの二官能性架橋剤に対するモル比は、約０．５〜約１０００（例えば、約１〜約９００、約５〜約７５０、約５０〜約５００、約１００〜約５００、約０．５〜約５００、または約１００〜約１０００）である。例えば、本発明のプロセスは、二官能性リンカーの量に対して約０．５、約１、約２、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、または１０００倍のＮＨＳを含む。
本発明のプロセスは、細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを調製するプロセス中の任意の時点における、外因性ＮＨＳの添加を含む。例えば、本発明のプロセスは、修飾ステップ（すなわち、細胞結合剤を二官能性リンカーと反応させるステップ）への、結合ステップ（すなわち、修飾された細胞結合剤を細胞毒性剤と反応させるステップ）への、精製ステップへの、または前述のステップのいずれかの間の保持ステップへの外因性ＮＨＳの添加を含む。一実施形態では、本発明のプロセスは、修飾ステップ（すなわち、ＮＨＳは、修飾反応に添加される）への、修飾ステップと精製ステップとの間の保持ステップへの、修飾ステップと結合ステップとの間の保持ステップへの、精製ステップへの、結合ステップへの、結合ステップと精製ステップとの間の保持ステップへの、および／または２
つの精製ステップの間の保持ステップへの外因性ＮＨＳの添加を含む。
一実施形態では、本発明は、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を調製するためのプロセスであって、該プロセスは、細胞結合剤を、外因性ＮＨＳの存在下で二官能性架橋試薬と接触させて、リンカーを細胞結合剤に共有結合させ、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を含む混合物を調製することを含む、プロセスを提供する。
本発明は、細胞毒性剤に化学的に結合された細胞結合剤を含む安定性のコンジュゲートの組成物を調製するためのプロセスであって、該組成物は、不安定なコンジュゲートを実質的に含まない、プロセスを提供する。この点に関して、本発明は、実質的に高い純度および安定性の細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスを提供する。かかる組成物は、コンジュゲートの高い純度および安定性のため、疾患の治療に使用することができる。細胞毒性剤、例えば、マイタンシノイド等に化学的に結合された細胞結合剤、例えば、抗体等を含む組成物は、例えば、米国特許第７，３７４，７６２号に説明されている。本発明の一態様では、実質的に高純度の細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートは、次の特徴のうちの１つ以上を有する：（ａ）コンジュゲート種の約９０％超（例えば、約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％以上）、好ましくは約９５％超が、モノマーである、（ｂ）コンジュゲート調製物もしくは精製されたコンジュゲート中の非結合リンカーレベルが、（総リンカーに対して）約１０％未満（例えば、約９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、もしくは０％以下）である、（ｃ）コンジュゲート種の１０％未満が、架橋されている（例えば、約９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、もしくは０％以下）、（ｄ）コンジュゲート調製物もしくは精製されたコンジュゲート中の遊離細胞毒性剤レベルが、（総細胞毒性剤に対して）約５％未満、約３％未満、約２％未満、（例えば、約１．９％、１．８％、１．７％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、もしくは０％以下）である、（ｆ）コンジュゲート調製物もしくは精製されたコンジュゲート中の細胞毒性ダイマー種レベルが、（総細胞毒性剤に対して）約５％未満、約３％未満、約２％未満（例えば、約１．９％、１．８％、１．７％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、もしくは０％以下）である、および／または（ｅ）保管（例えば、約１週、約２週、約３週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約１年、約２年、もしくは約５年後）に際し、遊離細胞毒性剤における実質的な増加が無い。遊離細胞毒性剤レベルにおける「実質的な増加」は、ある特定の保管時間の後に、遊離細胞毒性剤のレベルにおける増加が、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１．０％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約２．２％、約２．５％、約２．７％、約３．０％、約３．２％、約３．５％、約３．７％、または約４．０％未満であることを意味する。
本明細書で使用するとき、用語「非結合リンカー」は、二官能性架橋試薬に共有的に連結された細胞結合剤であって、該細胞結合剤は、二官能性架橋試薬のリンカーを介して細胞毒性剤に共有的に結合されていない、細胞結合剤を指す（すなわち、「非結合リンカー」は、ＣＢＡ−Ｌによって表すことができ、式中、ＣＢＡは、細胞結合剤を表し、Ｌは、二官能性架橋試薬を表す。対照的に、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートは、ＣＢＡ−Ｌ−Ｄによって表すことができ、式中、Ｄは細胞毒性剤を表す）。
本明細書で使用するとき、用語「細胞毒性剤ダイマー」は、遊離細胞毒性剤を含むダイ
マーであって、細胞毒性剤はリンカーを介して細胞結合剤に化学的に結合されていない、ダイマーを指す。一実施形態では、細胞毒性剤ダイマーは、リンカーを介して互いに化学的に結合される（すなわち、「細胞毒性剤ダイマー」は、Ｄ−Ｌ−Ｄによって表すことができ、式中、Ｄは、細胞毒性剤を表し、Ｌは、二官能性架橋試薬を表す。対照的に、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートは、ＣＢＡ−Ｌ−Ｄによって表すことができ、式中、ＣＢＡは、細胞結合剤を表す）。別の実施形態では、細胞毒性剤ダイマーは、リンカーを介しては互いに化学的に結合されない（すなわち、「細胞毒性剤ダイマー」は、Ｄ−Ｄによって表すことができ、式中、Ｄは、細胞毒性剤を表す。対照的に、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートは、ＣＢＡ−Ｌ−Ｄによって表すことができ、式中、ＣＢＡは、細胞結合剤を表し、Ｌは、二官能性架橋試薬を表す）。一実施形態では、細胞毒性剤ダイマーの一部は、リンカーを介して互いに化学的に結合され、また細胞毒性剤ダイマーの一部は、リンカーを介しては互いに化学的に結合されない（すなわち、「細胞毒性剤ダイマー」は、Ｄ−Ｌ−ＤおよびＤ−Ｄによって表すことができ、式中、Ｄは、細胞毒性剤を表し、Ｌは、二官能性架橋試薬を表す）。一実施形態では、リンカーがＳＭＣＣであり、また細胞毒性剤がＤＭ１である場合、細胞毒性剤ダイマーは、ＤＭ１−ＤＭ１ダイマーおよびＤＭ１−ＭＣＣ−ＤＭ１ダイマーである。
別の実施形態では、リンカーがＳＰＰであり、また細胞毒性剤がＤＭ１である場合、細胞毒性剤ダイマーは、ＤＭ１−ＤＭ１ダイマーおよびＤＭ１−ＳＰＰ−ＤＭ１ダイマーである。
別の実施形態では、リンカーがＣＸ１−１であり、また細胞毒性剤がＤＭ１である場合、細胞毒性剤ダイマーは、ＤＭ１−ＤＭ１ダイマーおよびＤＭ１−ＣＸ１−１−ＤＭ１ダイマーである。
本明細書で使用するとき、用語「遊離細胞毒性剤」は、リンカーを介して細胞結合剤に化学的に結合されていない、任意の形態の細胞毒性剤を指す（すなわち、「遊離細胞毒性剤」としては、Ｄによって表される細胞毒性剤単独、Ｄ−Ｌによって表される、リンカーまたはリンカー誘導体（例えば、加水分解誘導体）と結合された細胞毒性剤、ならびに上に説明されるＤ−ＤおよびＤ−Ｌ−Ｄによって表される細胞毒性剤ダイマーが挙げられ得るが、これらに限定されない）。
一実施形態では、遊離細胞毒性剤は、ＤＭ１、ＭＣＣ−ＤＭ１、ハイドロ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ＤＭ１−ＳＰＰ、ＤＭ１−ＴＰＡ、ＤＭ１−ＤＭ１、ＤＭ１−ＭＣＣ−ＤＭ１、およびＤＭ１−ＳＰＰ−ＤＭ１を含む。
本明細書で使用するとき、用語「細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの凝集体」は、共有的または非共有的に互いに結合された２つ以上の細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを指す（例えば、リンカーを介して共有的に結合された２つ以上の細胞結合剤細胞毒性
剤コンジュゲート）。
一実施形態では、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲート中の細胞毒性剤の細胞結合剤に対する平均モル比は、約１〜約１０、約２〜約７、約３〜約５、約２．５〜約４．５（例えば、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５）、約３．０〜約４．０、約３．２〜約４．２、約４．５〜５．５（例えば、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５）である。
細胞結合剤は、細胞、典型的におよび好ましくは、動物細胞（例えば、ヒト細胞）に結合する、任意の好適な薬剤であり得る。細胞結合剤は好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドまたはグリコトープである。好適な細胞結合剤としては、例えば、抗体（例えば、モノクローナル抗体およびその断片）、インターフェロン（例えば、α、β、γ）、リンホカイン（例えば、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ホルモン（例えば、インスリン、ＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）、ＭＳＨ（メラニン細胞刺激ホルモン）、アンドロゲンおよびエストロゲン等のステロイドホルモン）、例えば、表皮増殖因子（ＥＧＦ）、形質転換増殖因子α（ＴＧＦ−α）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、例えば、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦ（Ｂｕｒｇｅｓｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ５：１５５−１５８（１９８４））等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）等の増殖因子およびコロニー刺激因子、栄養輸送分子（例えば、トランスフェリン）、ビタミン（例えば、葉酸）、ならびに細胞の表面で標的分子に特異的に結合する任意の他の薬剤または分子が挙げられる。
細胞結合剤が抗体である場合、それは、ポリペプチドであり、また膜通過分子（例えば、受容体）または増殖因子等のリガンドであってもよい抗原に結合する。例示的な抗原としては、レニン等の分子；ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンを含む、成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；α−１−抗トリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；ｖｍｃ因子（ｆａｃｔｏｒ ｖｍｃ）、第ＩＸ因子、組織因子（ＴＦ）、およびフォンヴィルブランド因子等の凝固因子；タンパク質Ｃ等の抗凝固因子；心房性ナトリウム利尿性因子；肺表面活性物質；ウロキナーゼまたはヒト尿もしくは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）等のプラスミノーゲン活性化因子；ボンベシン；トロンビン；造血増殖因子；腫瘍壊死因子−αおよび−β；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化で調節され通常はＴ細胞で発現され分泌される）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１−α）；ヒト血清アルブミン等の血清アルブミン；ミュラー管阻害物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；β−ラクタマーゼ等の微生物タンパク質；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；ＣＴＬＡ−４等の細胞毒性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；ホルモンもしくは増殖因子のための受容体；タンパク質ＡもしくはＤ；リウマチ因子；骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニュートロフィン−３、−４、−５、もしくは−６（ＮＴ−３、ＮＴ４、ＮＴ−５、もしくはＮＴ−６）等の神経栄養因子、またはＮＧＦ−β等の神経成長因子；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；ａＦＧＦおよびｂＦＧＦ等の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）；ＦＧＦＲ２／４およびＦＧＦＲ３等の線維芽細胞増殖因子受容体、表皮増殖因子（ＥＧＦ）；ＴＧＦ−α、およびＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、もしくはＴＧＦ−β５を含むＴＧＦ−β等の形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子−Ｉおよび−ＩＩ（ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩ）；ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ＥｐＣＡＭ、ＧＤ３、Ｆ
ＬＴ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＳＴＥＡＰ、ＣＥＡ、ＴＥＮＢ２、ＥｐｈＡ受容体、ＥｐｈＢ受容体、葉酸受容体、ＦＯＬＲ１、メソテリン、クリプト（ｃｒｉｐｔｏ）、αｖβ６、インテグリン、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、トランスフェリン受容体、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、ＩＲＴＡ５；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２等のＣＤタンパク質、または米国特許出願公開第２００８／０１７１０４０号もしくは米国特許出願公開第２００８／０３０５０４４号に開示され、参照によりその全体が組み込まれる、１つ以上の腫瘍関連抗原もしくは細胞表面受容体に結合する抗体；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン−α、−β、および−γ等のインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＧ−ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１０；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；例えば、ＨＩＶエンベロープの一部等のウイルス性抗原；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ−４、およびＶＣＡＭ等のインテグリン；ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、もしくはＨＥＲ４受容体等の腫瘍関連抗原；エンドグリン、ｃ−Ｍｅｔ、ＩＧＦ１Ｒ、例えば、ＰＣＡ３、ＰＳＡ、ＰＳＧＲ、ＮＧＥＰ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＴＭＥＦＦ２、およびＳＴＥＡＰ１等の前立腺抗原；ＬＧＲ５、Ｂ７Ｈ４、および上に列挙されるポリペプチドのいずれかの断片が挙げられる。
それに加えて、骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦは、急性骨髄性白血病を罹病した細胞に対する細胞結合剤として使用することができる。活性化Ｔ細胞に結合するＩＬ−２は、移植片拒絶の防止のため、移植片対宿主疾患の療法および防止のため、ならびに急性Ｔ細胞白血病の治療のために使用することができる。メラニン細胞に結合するＭＳＨは、メラノーマに関する抗体が使用され得るように、メラノーマの治療のために使用することができる。葉酸は、卵巣および他の腫瘍上に発現される葉酸受容体を標的するために使用することができる。表皮増殖因子は、肺および頭頸部等の扁平上皮癌を標的するために使用することができる。ソマトスタチンは、神経芽細胞腫および他の腫瘍型を標的するために使用することができる。
胸および睾丸の癌は、細胞結合剤として、それぞれ、エストロゲン（またはエストロゲン類似体）またはアンドロゲン（またはアンドロゲン類似体）を用いて、成功裏に標的されることができる。
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、任意の免疫グロブリン、任意の免疫グロブリン断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｄｓＦｖ、ｓＦｖ、小型抗体（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、三重特異型抗体（ｔｒｉｂｏｄｙ）、四重特異型抗体（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）（Ｐａｒｈａｍ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：２８９５−２９０２（１９８３）；Ｓｐｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１３：４７０−４７８（１９７４）；Ｎｉｓｏｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．８９：２３０−２４４（１９６０），Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，７：２４８６−２４９７（２００８），Ｃａｒｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｓ．，６：３４３−３５７（２００６））、または、細胞の表面上で抗原に結合することができる免疫グロブリンキメラ（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有するもの）を指す。任意の好適な抗体が、細胞結合剤として使用することができる。当業者は、適切な抗体の選択は、標的される細胞集団に依存するであろうことを理解するであろう。この点に関して、特定の細胞集団（典型的におよび好
ましくは、罹病細胞集団）内で選択的に発現される細胞表面分子（すなわち、抗原）の型および数は、本発明の組成物における使用のための適切な抗体の選択に決定的な影響を及ぼすであろう。細胞表面発現プロフィールは、腫瘍細胞型を含む多様な細胞型に関して既知であり、未知である場合は、通常の分子生物学および組織化学技術を使用して決定することができる。
抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得るが、最も好ましくは、モノクローナル抗体である。本明細書で使用するとき、「ポリクローナル」抗体は、典型的には免疫動物の血清中に含有される、抗体分子の不均質な集団を指す。「モノクローナル」抗体は、特定の抗原に特異的である抗体分子の均質な集団を指す。モノクローナル抗体は典型的には、Ｂリンパ球（「Ｂ細胞」）の単一クローンによって生成される。モノクローナル抗体は、標準ハイブリドーマ技術を含む、当業者に既知である種々の技術を使用して得ることができる（例えば、Ｋoｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ． Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．，５：５１１−５１９（１９７６），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ
Ｐｒｅｓｓ（１９８８）、およびＣ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２００１）を参照）。手短に述べると、モノクローナル抗体を生成するハイブリドーマ方法は典型的には、任意の好適な動物、典型的におよび好ましくは、マウスに、抗原（すなわち、「免疫原」）を注射することを含む。その後、動物を屠殺し、その脾臓から単離したＢ細胞を、ヒト骨髄腫細胞と融合させる。ハイブリッド細胞が生成され（すなわち、「ハイブリドーマ」）、これは、無制限に増殖し、所望のインビトロの特異性を有する高力価の抗体を連続的に分泌する。当該技術分野において既知である任意の適切な方法が、所望の特異性を有する抗体を生成するハイブリドーマ細胞を同定するために使用することができる。かかる方法としては、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット分析、および放射免疫測定法が挙げられる。ハイブリドーマの集団は、個々のクローンを単離するためにスクリーニングされ、その各々は、抗原に対する単一の抗体種を分泌する。各ハイブリドーマは、単一のＢ細胞との融合に由来するクローンであるため、それが生成する全ての抗体分子は、その抗原結合部位およびアイソタイプを含め、構造が同一である。モノクローナル抗体はまた、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（例えば、Ｈａｓｋａｒｄ ａｎｄ Ａｒｃｈｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，７４（２）：３６１−６７（１９８４）、およびＲｏｄｅｒ ｅｔ
ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１２１：１４０−６７（１９８６）を参照）、バクテリオファージベクター発現系（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５−８１（１９８９）を参照）、またはＦａｂおよびｓｃＦｖ（一本鎖可変領域）等の抗体断片を含むファージディスプレイライブラリ（例えば、米国特許第５，８８５，７９３号および同第５，９６９，１０８号、ならびに国際特許出願公開第９２／０１０４７号および同第９９／０６５８７号を参照）を含む、他の好適な技術を使用して発生されてもよい。
モノクローナル抗体は、任意の好適な動物から単離するか、または任意の好適な動物内で生成することができるが、好ましくは、哺乳類、より好ましくは、マウスまたはヒト、また最も好ましくは、ヒト内で生成される。マウス内で抗体を生成するための方法は、当業者に周知であり、また本明細書に説明される。ヒト抗体に関して、当業者は、ポリクローナル抗体は、適切な抗原を用いてワクチン接種または免疫化されたヒト対象の血清から単離することができることを理解するであろう。別法として、ヒト抗体は、マウス等の非ヒト動物内でヒト抗体を生成するための既知の技術を適合することによって、発生させることができる（例えば、米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、および同第５，７１４，３５２号、ならびに米国特許出願公開第２００２／０１９７２６６Ａ１号を参照）。
ヒトにおける治療的用途に理想的な選択ではあるが、ヒト抗体、特にヒトモノクローナル抗体は、典型的には、マウスモノクローナル抗体よりも発生させることが困難である。マウスモノクローナル抗体は、しかしながら、ヒトに投与される場合、迅速な宿主抗体応答を誘発し、これは、抗体−細胞毒性剤コンジュゲートの治療的または診断的潜在性を低減させる可能性がある。これらの厄介な問題を回避するために、モノクローナル抗体は好ましくは、ヒト免疫系によって「異物」であると認識されない。
この目的を達成するために、ファージディスプレイが、抗体を発生させるために使用することができる。この点に関して、抗体の抗原結合可変（Ｖ）ドメインをコード化するファージライブラリは、標準的な分子生物学および組み換えＤＮＡ技術を使用して発生させることができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２００１）を参照）。所望の特異性を有する可変領域をコード化するファージは、所望の抗原への特異的結合に関して選択され、選択される可変ドメインを含む完全ヒト抗体が再構成される。再構成された抗体をコード化する核酸配列は、ハイブリドーマ生成に使用される骨髄腫細胞等の好適な細胞株内に導入され、その結果、モノクローナル抗体の特徴を有するヒト抗体が、細胞によって分泌される（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，上記参照、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，上記参照、および米国特許第６，２６５，１５０号を参照）。別法として、モノクローナル抗体は、特定のヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックであるマウスから発生させることができる。かかる方法は、当該技術分野において既知であり、また例えば、米国特許第５，５４５，８０６号および同第５，５６９，８２５号、ならびにＪａｎｅｗａｙ ｅｔ
ａｌ．，上記参照に説明される。
最も好ましくは、抗体は、ヒト化抗体である。本明細書で使用するとき、「ヒト化」抗体は、抗体の抗原結合ループを形成するマウスモノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）が、ヒト抗体分子のフレームワーク上にグラフト化される抗体である。マウスおよびヒト抗体のフレームワークの類似性のため、このアプローチは、ヒト抗体と抗原的に同一であるが、ＣＤＲ配列が由来するマウスモノクローナル抗体と同一の抗原に結合するモノクローナル抗体を生成することが、当該技術分野において一般的に受け入れられている。ヒト化抗体を発生させるための方法は、当該技術分野において周知であり、また例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，上記参照、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、および同第５，６９３，７６１号、欧州特許第０２３９４００Ｂ１号、ならびに英国特許第２１８８６３８号に詳細に説明される。ヒト化抗体はまた、米国特許第５，６３９，６４１号およびＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５：９５９−９７３（１９９４）に説明される抗体再表面化技術を使用して発生させることもできる。本発明の組成物のコンジュゲートに採用される抗体は、最も好ましくは、ヒト化モノクローナル抗体であるが、ヒトモノクローナル抗体およびマウスモノクローナル抗体もまた、上に説明される通り本発明の範囲内である。
少なくとも１つの抗原結合部位を有し、したがって、標的細胞の表面上に存在する少なくとも１つの抗原または受容体を認識および結合する抗体断片もまた、本発明の範囲内である。この点に関して、無傷抗体分子のタンパク質分解的切断は、抗原を認識および結合する能力を保つ種々の抗体断片を生成することができる。例えば、プロテアーゼパパインによる抗体分子の限定消化は、典型的には３つの断片を生成し、そのうちの２つは、同一であり、親抗体分子の抗原結合活性を保つため、Ｆａｂ断片と称される。酵素ペプシンによる抗体分子の切断は、通常、２つの抗体断片を生成し、そのうちの１つは、抗体分子の抗原結合アームを保ち、またしたがってＦ（ａｂ’）２断片と称される。ジチオスレイト
ールまたはメルカプトエチルアミンによるＦ（ａｂ’）２断片の還元は、Ｆａｂ’断片と称される断片を生成する。一本鎖可変領域断片（ｓＦｖ）抗体断片は、合成ペプチドを介して軽抗体鎖の可変（Ｖ）ドメインに連結された抗体重鎖のＶドメインを含む切断されたＦａｂ断片からなり、通常の組み換えＤＮＡ技術を使用して発生させることができる（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，上記を参照）。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片（ｄｓＦｖ）は、組み換えＤＮＡ技術によって調製することができる（例えば、Ｒｅｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７：６９７−７０４（１９９４）を参照）。しかしながら、本発明の文脈における抗体断片は、これらの例示的な抗体断片の型に限定されない。所望の細胞表面受容体または抗原を認識および結合する任意の好適な抗体断片が、採用され得る。抗体断片は、例えば、Ｐａｒｈａｍ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２８９５−２９０２（１９８３）、Ｓｐｒｉｎｇ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１３：４７０−４７８（１９７４）、およびＮｉｓｏｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，８９：２３０−２４４（１９６０）にさらに説明される。抗体−抗原結合は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、免疫沈降、および競合的阻害アッセイ（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，上記参照および米国特許出願公開第２００２／０１９７２６６Ａ１号を参照）等の当該技術分野において既知である任意の好適な方法を使用して分析することができる。
それに加えて、抗体は、キメラ抗体またはその抗原結合断片であり得る。「キメラ」とは、抗体が、少なくとも２つの異なる種（例えば、マウス免疫グロブリン可変領域と組み合わされたヒト免疫グロブリン定常領域等の２つの異なる免疫グロブリン）から得られた、またはそれらに由来する、少なくとも２つの免疫グロブリンまたはその断片を含むことを意味する。抗体はまた、ドメイン抗体（ｄＡｂ）またはその抗原結合断片であり得、例えば、ラクダ抗体（例えば、Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，３：７５２，（１９９６）を参照）、またはサメ抗体、例えば、新規抗原受容体（ＩｇＮＡＲ）等（例えば、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３７４：１６８（１９９５）、およびＳｔａｎｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０５：１７７０−１７７３（２００４）を参照）である。
任意の好適な抗体が、本発明の文脈において使用することができる。例えば、モノクローナル抗体Ｊ５は、急性リンパ芽球性白血病共通抗原（ＣＡＬＬＡ）に対して特異的であるマウスＩｇＧ２ａ抗体であり（Ｒｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８３：５８３−５８５（１９８０））、ＣＡＬＬＡを発現する細胞を標的するために使用することができる（例えば、急性リンパ芽球性白血病細胞）。モノクローナル抗体ＭＹ９は、ＣＤ３３抗原に特異的に結合するマウスＩｇＧ１抗体であり（Ｇｒｉｆｆｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｒｅｓ．，８：５２１（１９８４））、ＣＤ３３を発現する細胞を標的するために使用することができる（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞）。同様に、モノクローナル抗体抗Ｂ４（Ｂ４とも称される）は、Ｂ細胞上のＣＤ１９抗原に結合するマウスＩｇＧ１抗体であり（Ｎａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３））、Ｂ細胞またはＣＤ１９を発現する罹病細胞を標的するために使用することができる（例えば、非ホジキンリンパ腫細胞および慢性リンパ芽球性白血病細胞）。Ｎ９０１は、小細胞肺癌を含む、神経内分泌起源（ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｒｉｇｉｎ）の細胞上に見出されるＣＤ５６（神経細胞接着分子）抗原に結合するマウスモノクローナル抗体であり、薬物が神経内分泌起源の細胞を標的とするようコンジュゲートにおいて使用することができる。Ｊ５、ＭＹ９、およびＢ４抗体は、好ましくは、コンジュゲートの一部としてのそれらの使用の前に、再表面化またはヒト化される。抗体の再表面化またはヒト化は、例えば、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：９６９−７３（１９９４）に説明される。一実施形態では、抗Ｂ４抗体は、ｈｕＢ４である。別の実施形態では、抗Ｂ４抗
体は、重鎖および軽鎖を含み、該重鎖は、次の配列
ＱＶＱＬＶＱＰＧＡＥ ＶＶＫＰＧＡＳＶＫＬ ＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴ ＳＮＷＭＨＷＶＫＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＥ ＩＤＰＳＤＳＹＴＮＹ ＮＱＮＦＱＧＫＡＫＬ ＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹ ＭＥＶＳＳＬＲＳＤＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＧＳ ＮＰＹＹＹＡＭＤＹＷ ＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ ＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧ ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ ＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰ ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰ ＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ ＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ ＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳ ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ ＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣ ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ ＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶ ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１）
を有し、該軽鎖は、次の配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＩ ＭＳＡＳＰＧＥＲＶＴ ＭＴＣＳＡＳＳＧＶＮ ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧ ＴＳＰＲＲＷＩＹＤＴ ＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲ ＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹ ＳＬＴＩＳＳＭＥＰＥ ＤＡＡＴＹＹＣＨＱＲ ＧＳＹＴＦＧＧＧＴＫ ＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰ ＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥ ＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶ ＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥ ＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡ ＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶ ＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹ ＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫ ＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡ ＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳ ＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥ Ｃ（配列番号２）
を有する。
それに加えて、モノクローナル抗体Ｃ２４２は、ＣａｎＡｇ抗原に結合し（例えば、米国特許第５，５５２，２９３号を参照）、コンジュゲートが、大腸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、および胃癌等の、ＣａｎＡｇ発現腫瘍を標的するために使用することができる。ＨｕＣ２４２は、モノクローナル抗体Ｃ２４２のヒト化形態である（例えば、米国特許第５，５５２，２９３号を参照）。ＨｕＣ２４２が生成されるハイブリドーマは、ＥＣＡＣＣ識別番号９００１２６０１で寄託されている。ＨｕＣ２４２は、ＣＤＲグラフト化手法（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、および同第５，６９３，７６２号を参照）または再表面化技術（例えば、米国特許第５，６３９，６４１号を参照）を使用して調製することができる。ＨｕＣ２４２は、コンジュゲートが、例えば、大腸癌細胞、膵臓癌細胞、非小細胞肺癌細胞、および胃癌細胞等のＣａｎＡｇ抗原を発現する腫瘍細胞を標的するために使用することができる。
卵巣癌および前立腺癌細胞を標的するために、抗ＭＵＣ１抗体が、コンジュゲート中の細胞結合剤として使用することができる。抗ＭＵＣ１抗体としては、例えば、抗ＨＭＦＧ−２（例えば、Ｔａｙｌｏｒ−Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２８：１７−２１（１９８１）を参照）、ｈＣＴＭ０１（例えば、ｖａｎ Ｈｏｆ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５６：５１７９−５１８５（１９９６）を参照）、およびＤＳ６が挙げられる。前立腺癌細胞はまた、抗前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）をＪ５９１等の細胞結合剤として使用することによって、コンジュゲートを用いて標的することもできる（例えば、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５７：３６２９−３６３４（１９９７）を参照）。さらに、乳癌、前立腺癌、および卵巣癌等のＨｅｒ２抗原を発現する癌細胞は、抗ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブを細胞結合剤として使用することによって、コンジュゲートを用いて標的することができる。ＩＩＩ型欠失変異体、ＥＧＦＲｖＩＩＩ等の表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）およびその変異型を発現する細胞は、抗ＥＧＦＲ抗体を使用することによって、コンジュゲートを用いて標的することができる。抗ＥＧＦＲ抗体は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１１／０５８３８５号および同第ＰＣＴ／ＵＳ１１／０５８３７８号に説明される。抗ＥＧＦＲ
ｖＩＩＩ抗体は、米国特許第７，７３６，６４４号および同第７，６２８，９８６号、ならびに米国特許出願公開第２０１０／０１１１９７９号、同第２００９／０２４００３８号、同第２００９／０１７５８８７号、同第２００９／０１５６７９０号、および同第２００９／０１５５２８２号に説明される。米国特許第７，９８２，０２４号に説明されるもの等のインスリン様増殖因子受容体に結合する抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体もまた、コンジュゲートにおいて使用することができる。ＣＤ２７Ｌ、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＥｐｈＡ２、インテグリン、ＣＤ３７、葉酸、ＣＤ２０、ＰＳＧＲ、ＮＧＥＰ、ＰＳＣＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＳＴＥＡＰ１、エンドグリン、およびＨｅｒ３に結合する抗体もまた、コンジュゲートにおいて使用することができる。
一実施形態では、抗体は、ｈｕＮ９０１、抗ＣＤ３３抗体（例えば、ｈｕＭｙ９−６）、ｈｕＢ４、ｈｕＣ２４２、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、ビバツズマブ、シブロツズマブ、リツキシマブ、ｈｕＤＳ６、国際特許出願公開第２０１０／１２４７９７号に説明される抗メソテリン抗体（ＭＦ−Ｔ等）、米国特許出願公開第２０１０／００９３９８０号に説明される抗クリプト（ｃｒｉｐｔｏ）抗体（ｈｕＢ３Ｆ６等）、米国特許出願公開第２００７／０１８３９７１号に説明される抗ＣＤ１３８抗体（Ｂ−Ｂ４もしくはヒト化Ｂ−Ｂ４またはｎＢＴ０６２等）、国際特許出願公開第２０１２／０５８５９２号および同第２０１２／０５８５８８号に説明される抗ＥＧＦＲ抗体（ＥＧＦＲ−７等）、米国特許第７，７３６，６４４号および同第７，６２８，９８６号ならびに米国特許出願公開第２０１０／０１１１９７９号、同第２００９／０２４００３８号、同第２００９／０１７５８８７号、同第２００９／０１５６７９０号、および同第２００９／０１５５２８２号に説明される抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、国際特許出願公開第２０１１／０３９７２１号および同第２０１１／０３９７２４号に説明されるヒト化ＥｐｈＡ２抗体（２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４等）、国際特許出願公開第２００８／０４７２４２号に説明される抗ＣＤ３８抗体（ｈｕ３８ＳＢ１９等）、国際特許出願公開第２０１１／１０６５２８号、および米国特許出願公開第２０１２／０００９１８１号に説明される抗葉酸受容体抗体（例えば、ｈｕＭｏｖｌ９バージョン１．０もしくは１．６等）、米国特許第５，９５８，８７２号、同第６，５９６，７４３号、および同第７，９８２，０２４号に説明される抗ＩＧＦ１Ｒ抗体、米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５３号に説明される抗ＣＤ３７抗体（例えば、ｈｕＣＤ３７−３バージョン１．０等）、米国特許出願公開第２００６／０１２７４０７号に説明される抗インテグリンαｖβ６抗体（例えば、ＣＮＴＯ９５）、ならびに国際特許出願公開第２０１２／０１９０２４号に説明される抗Ｈｅｒ３抗体からなる群から選択される。本発明の一実施形態では、抗体は、ｈｕＮ９０１、またはＣＮＴＯ９５ではない。一実施形態では、抗ＣＤ３７抗体は、ｈｕＣＤ３７−３であり、該抗体は、可変重鎖および可変軽鎖を含み、該可変重鎖は、次の配列
ＱＶＱＶＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＴＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＴＳＧＶＳＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＳＬＫＳＲＬＳＩＫＫＤＨＳＫＳＱＶＦＬＫＬＮＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＹＣＡＫＧＧＹＳＬＡＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３）
を有し、該可変軽鎖は、次の配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＳＶＧＥＲＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＲＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＬＶＮＶＡＴＮＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＴＹＹＣＱＨＹＷＧＴＴＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４）
を有する。
細胞結合剤は、好ましくは抗体であるが、細胞結合剤はまた、非抗体分子であることもできる。好適な非抗体分子としては、例えば、インターフェロン（例えば、α、β、またはγインターフェロン）、リンホカイン（例えば、インターロイキン２（ＩＬ−２）、ＩＬ−３、ＩＬ−４、またはＩＬ−６）、ホルモン（例えば、インスリン）、増殖因子（例えば、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、およびＶＥＧＦ）、コロニー刺激因子（例えば、Ｇ
−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦ（例えば、Ｂｕｒｇｅｓｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，５：１５５−１５８（１９８４）を参照）、ソマトスタチン、およびトランスフェリン（例えば、Ｏ’Ｋｅｅｆｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０：９３２−９３７（１９８５）を参照）が挙げられる。例えば、骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦは、急性骨髄性白血病細胞を標的するための細胞結合剤として使用することができる。それに加えて、活性化Ｔ細胞に結合するＩＬ−２は、移植片拒絶の防止のため、移植片対宿主疾患の療法および防止のため、ならびに急性Ｔ細胞白血病の治療のために使用することができる。表皮増殖因子（ＥＧＦ）は、肺癌および頭頸部癌等の扁平上皮癌を標的するために使用することができる。ソマトスタチンは、神経芽腫細胞および他の腫瘍細胞型を標的するために使用することができる。
コンジュゲートは、任意の好適な細胞毒性剤を含むことができる。本明細書で使用するとき、「細胞毒性剤」は、細胞の死をもたらす、細胞死を誘発する、または細胞生存を減少させる任意の化合物を指す。好適な細胞毒性剤としては、例えば、マイタンシノイドおよびマイタンシノイド類似体、タキソイド、ＣＣ−１０６５およびＣＣ−１０６５類似体、ならびにドラスタチンおよびドラスタチン類似体が挙げられる。本発明の好ましい実施形態では、細胞毒性剤は、マイタンシノールおよびマイタンシノール類似体を含む、マイタンシノイドである。マイタンシノイドは、微小管形成を阻害し、哺乳類細胞に対して毒性の高い化合物である。好適なマイタンシノール類似体の例としては、修飾芳香環を有するもの、および他の位置に修飾を有するものが挙げられる。かかるマイタンシノイドは、例えば、米国特許第４，２５６，７４６号、同第４，２９４，７５７号、同第４，３０７，０１６号、同第４，３１３，９４６号、同第４，３１５，９２９号、同第４，３２２，３４８号、同第４，３３１，５９８号、同第４，３６１，６５０号、同第４，３６２，６６３号、同第４，３６４，８６６号、同第４，４２４，２１９号、同第４，３７１，５３３号、同第４，４５０，２５４号、同第５，４７５，０９２号、同第５，５８５，４９９号、同第５，８４６，５４５号、および同第６，３３３，４１０号に説明される。
修飾芳香環を有するマイタンシノール類似体の例としては、（１）Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４，２５６，７４６号）（アンサマイトシンＰ２のＬＡＨ還元によって調製される）、（２）Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４，３６１，６５０号および同第４，３０７，０１６号）（ストレプトマイセスまたはアクチノミセスを用いた脱メチル化、またはＬＡＨを用いた脱塩素処理によって調製される）、および（３）Ｃ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４，２９４，７５７号）（塩化アシルを用いたアシル化によって調製される）が挙げられる。
芳香環以外の位置に修飾を有するマイタンシノール類似体の例としては、（１）Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４，４２４，２１９号）（マイタンシノールとＨ２ＳまたはＰ２Ｓ５との反応によって調製される）、（２）Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４，３３１，５９８号）、（３）Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４，４５０，２５４号）（ノカルジアから調製される）、（４）Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４，３６４，８６６号）（ストレプトマイセスによるマイタンシノールの変換によって調製される）、（５）Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４，３１３，９４６号および同第４，３１５，９２９号）（トレウィアヌディフローラ（Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｉｆｌｏｒａ）から単離される）、（６）Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４，３６２，６６３号および同第４，３２２，３４８号）（ストレプトマイセスによるマイタンシノールの脱メチル化によって調製される）、および（７）４，５−デオキシ（米国特許第４，３７１，５３３号）（三塩化チタン／マイタンシノールのＬＡＨ還元によって調製される）が挙げられる。
本発明の好ましい実施形態では、コンジュゲートは、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシンとしても既知であるチオール含有マイタンシノイドＤＭ１を、細胞毒性剤として利用する。ＤＭ１の構造は、式（Ｉ）によって表される：
本発明の別の好ましい実施形態では、コンジュゲートは、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシンとしても既知であるチオール含有マイタンシノイドＤＭ４を、細胞毒性剤として利用する。ＤＭ４の構造は、式（ＩＩ）によって表される：
他のマイタンシンが、本発明の文脈において使用されてもよく、例えば、硫黄原子を担持する炭素原子上のモノアルキルまたはジアルキル置換を担持するチオールおよびジスルフィド含有マイタンシノイドが挙げられる。特に好ましいのは、Ｃ−３位置に、（ａ）Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、またはＣ−２０デスメチル官能性を有するマイタンシノイド、および（ｂ）ヒンダードスルフヒドリル基を担持するアシル基を有するアシル化されたアミノ酸側鎖を有するマイタンシノイドであって、チオール官能性を担持するアシル基の炭素原子が、１つまたは２つの置換基を有し、該置換基が、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、またさらに、置換基のうちの１つが、Ｈであり得、アシル基が、カルボニル官能性と硫黄原子との間に少なくとも３個の炭素原子の直鎖長を有する、マイタンシノイドである。
本発明の文脈における使用のためのさらなるマイタンシンとしては、式（ＩＩＩ）：
によって表される化合物が挙げられ、式中、Ｙ’は、（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ９＝ＣＲ１０）ｐ（Ｃ≡Ｃ）ｑＡｏ（ＣＲ５Ｒ６）ｍＤｕ（ＣＲ１１＝ＣＲ１２）ｒ（Ｃ≡Ｃ）ｓＢｔ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルまたはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｒ２はまた、Ｈであり得、
Ａ、Ｂ、Ｄは、３〜１０個の炭素原子を有するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル、単純もしくは置換アリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、各々独立して、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔは、各々独立して、０または１〜５の整数であるが、但しｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔのうちの少なくとも２つは常に０ではなく、
Ｚは、Ｈ、ＳＲ、もしくはＣＯＲであり、Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、または単純もしくは置換アリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルである。
式（ＩＩＩ）の好ましい実施形態としては、（ａ）Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、メチルであり、Ｚは、Ｈである、（ｂ）Ｒ１およびＲ２は、メチルであり、Ｚは、Ｈである、（ｃ）Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、メチルであり、Ｚは、−ＳＣＨ３である、ならびに（ｄ）Ｒ１およびＲ２は、メチルであり、Ｚは、−ＳＣＨ３である、式（ＩＩＩ）の化合物が挙げられる。
かかるさらなるマイタンシンとしてはまた、式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）、または（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）：
によって表される化合物が挙げられ、式中、Ｙは、（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｒ２はまた、Ｈであり得、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、各々独立して、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して、１〜５の整数であり、さらにｎは０であり得、
Ｚは、Ｈ、ＳＲ、またはＣＯＲであり、Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する環式アルキルもしくはアルケニル、または単純もしくは置換アリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｍａｙは、Ｃ−３、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、またはＣ−２０デスメチルに側鎖を担持するマイタンシノイドを表す。
式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）、および（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）の好ましい実施形態としては、（ａ）Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、メチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々、Ｈであり、ｌおよびｍは各々、１であり、ｎは、０であり、Ｚは、Ｈである、（ｂ）Ｒ１およびＲ２は、メチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は各々、Ｈであり、ｌおよびｍは、１であり、ｎは、０であり、Ｚは、Ｈである、（ｃ）Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、メチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々、Ｈであり、ｌおよびｍは各々、１であり、ｎは、０であり、Ｚは、−ＳＣＨ３である、または（ｄ）Ｒ１およびＲ２は、メチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は各々、Ｈであり、ｌおよびｍは、１であり、ｎは、０であり、Ｚは、−ＳＣＨ３である、式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）、および（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）の化合物が挙げられる。
好ましくは、細胞毒性剤は、式（ＩＶ−Ｌ）によって表される。
さらなる好ましいマイタンシンとしてはまた、式（Ｖ）：
によって表される化合物も挙げられ、式中、Ｙは、（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺを表し、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｒ２はまた、Ｈであり得、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、各々独立して、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して、１〜５の整数であり、さらにｎは０であり得、
Ｚは、Ｈ、ＳＲ、もしくはＣＯＲであり、Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、または単純もしくは置換アリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルである。
式（Ｖ）の好ましい実施形態としては、（ａ）Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、メチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々、Ｈであり、ｌおよびｍは各々、１であり、ｎは、０であり、Ｚは、Ｈである、（ｂ）Ｒ１およびＲ２は、メチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は各々、Ｈであり、ｌおよびｍは、１であり、ｎは、０であり、Ｚは、Ｈである、（ｃ）Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、メチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は各々、Ｈであり、ｌおよびｍは各々、１であり、ｎは、０であり、Ｚは、−ＳＣＨ３である、または（ｄ）Ｒ１およびＲ２は、メチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は各々、Ｈであり、ｌおよびｍは、１であり、ｎは、０であり、Ｚは、−ＳＣＨ３である、式（Ｖ）の化合物が挙げられる。
またさらに好ましいマイタンシンとしては、式（ＶＩ−Ｌ）、（ＶＩ−Ｄ）、または（ＶＩ−Ｄ，Ｌ）：
によって表される化合物が挙げられ、式中、Ｙ２は、（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺ２を表し、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｒ２はまた、Ｈであり得、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、各々独立して、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖 環式アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して、１〜５の整数であり、さらにｎは０であり得、
Ｚ２は、ＳＲまたはＣＯＲであり、Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、または単純もしくは置換アリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｍａｙは、マイタンシノイドである。
さらなる好ましいマイタンシンとしては、式（ＶＩＩ）：
によって表される化合物が挙げられ、式中、Ｙ２’は、（ＣＲ７Ｒ８）ｌ（ＣＲ９＝ＣＲ１０）ｐ（Ｃ≡Ｃ）ｑＡｏ（ＣＲ５Ｒ６）ｍＤｕ（ＣＲ１１＝ＣＲ１２）ｒ（Ｃ≡Ｃ）
ｓＢｔ（ＣＲ３Ｒ４）ｎＣＲ１Ｒ２ＳＺ２を表し、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖 分枝鎖もしくはアルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、さらにＲ２はＨであり得、
Ａ、Ｂ、およびＤは、各々独立して、３〜１０個の炭素原子を有するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル、単純もしくは置換アリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、各々独立して、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換フェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルであり、
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔは、各々独立して、０または１〜５の整数であるが、但し、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、およびｔのうちの少なくとも２つは、常に０ではなく、Ｚ２は、ＳＲまたは−ＣＯＲであり、Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくはアルケニル、３〜１０個の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式アルキルもしくはアルケニル、または単純もしくは置換アリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルラジカルである。
式（ＶＩＩ）の好ましい実施形態としては、Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、メチルである、式（ＶＩＩ）の化合物が挙げられる。
マイタンシノイドに加えて、コンジュゲートにおいて使用される細胞毒性剤は、タキサンまたはその誘導体であることができる。タキサンは、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））（細胞毒性天然物）とドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））（半合成誘導体）とを含む化合物のファミリーであり、これらはいずれも、癌の治療において幅広く使用される。タキサンは、チューブリンの脱重合を阻害し、細胞死をもたらす紡錘体阻害剤である。ドセタキセルおよびパクリタキセルは、癌の治療に有用な薬剤であるが、その抗腫瘍活性は、正常な細胞に対するその非特異的毒性のため、制限される。さらに、パクリタキセルおよびドセタキセルの様な化合物は、それ自身、細胞結合剤のコンジュゲートとして使用するには十分な効能がない。
細胞毒性剤コンジュゲートの調製における使用に好ましいタキサンは、式（ＶＩＩＩ）：
のタキサンである。
本発明の文脈において使用することができるタキサンを合成するための方法は、抗体等の細胞結合剤にタキサンを結合させるための方法と併せて、米国特許第５，４１６，０６４号、同第５，４７５，０９２号、同第６，３４０，７０１号、同第６，３７２，７３８号、同第６，４３６，９３１号、同第６，５９６，７５７号、同第６，７０６，７０８号、同第６，７１６，８２１号、および同第７，３９０，８９８号に詳細に説明される。
細胞毒性剤はまた、ＣＣ−１０６５またはその誘導体であることもできる。ＣＣ−１０６５は、ストレプトマイセスゼレンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｚｅｌｅｎｓｉｓ）の培養液から単離される効能のある抗腫瘍抗生物質である。ＣＣ−１０６５は、ドキソルビシン、メトトレキサート、およびビンクリスチン等の一般的に使用される抗癌剤よりも、インビトロで約１０００倍効能がある（Ｂｈｕｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．，４２：３５３２−３５３７（１９８２））。ＣＣ−１０６５およびその類似体は、米国特許第５，５８５，４９９号、同第５，８４６，５４５号、同第６，３４０，７０１号、および同第６，３７２，７３８号に開示される。ＣＣ−１０６５の細胞毒性有効性は、そのアルキル化活性およびそのＤＮＡ結合またはＤＮＡ挿入活性と相関している。これらの２つの活性は、分子の別々の部分に存在する。この点に関して、アルキル化活性は、シクロプロパピロロインドール（ＣＰＩ）サブユニットに含有され、またＤＮＡ結合活性は、ＣＣ−１０６５の２つのピロロインドールサブユニットに存在する。
幾つかのＣＣ−１０６５類似体が、当該技術分野において既知であり、また同様にコンジュゲートにおいて細胞毒性剤として使用することができる（例えば、Ｗａｒｐｅｈｏｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３１：５９０−６０３（１９８８）を参照）。ＣＰＩ部分がシクロプロパベンズインドール（ＣＢＩ）部分によって置き換えられた、一連のＣＣ−１０６５類似体が開発されている（Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５５：５８２３−５８３３（１９９０）、およびＢｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１： １１５−１２０（１９９
１））。これらのＣＣ−１０６５類似体は、マウスにおいて遅延毒性を引き起こすことなく、親薬物の高いインビトロの有効性を維持する。ＣＣ−１０６５と同様に、これらの化合物は、ＤＮＡの副溝に共有的に結合して、細胞死を引き起こすアルキル化剤である。
ＣＣ−１０６５類似体の治療効力は、腫瘍部位への標的された送達を通じてインビボでの分配を変化させることによって大きく改善することができ、非標的組織に対するより低い毒性をもたらし、またしたがって、より低い全身毒性をもたらす。この目的を達成するために、腫瘍細胞を特異的に標的する細胞結合剤を有するＣＣ−１０６５の類似体および誘導体のコンジュゲートが、生成されている（例えば、米国特許第５，４７５，０９２号、同第５，５８５，４９９号、および同第５，８４６，５４５号を参照）。これらのコンジュゲートは、典型的には、インビトロの高い標的特異性細胞毒性、およびマウスにおけるヒト腫瘍異種移植モデルにおける抗腫瘍活性を示す（例えば、Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５：４０７９−４０８４（１９９５）を参照）。
ＣＣ−１０６５類似体を合成するための方法は、米国特許第５，４７５，０９２号、同第５，５８５，４９９号、同第５，８４６，５４５号、同第６，５３４，６６０号、同第６，５８６，６１８号、同第６，７５６，３９７号、および同第７，３２９，７６０号に詳細に説明される。
メトトレキサート、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロランブシル、カリケアマイシン、チューブリシンおよびチューブリシン類似体、デュオカルマイシンおよびデュオカルマイシン類似体、ドラスタチンおよびドラスタチン類似体等の薬物も、本発明の細胞毒性剤として使用することができる。ドキソルビシン（ｄｏｘａｒｕｂｉｃｉｎ）およびダウノルビシン化合物（例えば、米国特許第６，６３０，５７９号を参照）もまた、細胞毒性剤として使用することができる。
細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートは、インビトロ方法によって調製されてもよい。細胞毒性剤を抗体に連結するために、連結基が使用される。好適な連結基は、当該技術分野において周知であり、ジスルフィド基、酸不安定性基、感光性基、ペプチダーゼ不安定性基、およびエステラーゼ不安定性基、ならびに非切断可能連結基が挙げられる。
本発明によると、細胞結合剤は、二官能性架橋試薬を細胞結合剤と反応させることによって修飾され、それによって、細胞結合剤へのリンカー分子の共有結合をもたらす。本明細書で使用するとき、「二官能性架橋試薬」は、２つの反応基を所有する試薬を指し、そのうちの一方は、細胞結合剤と反応することができ、それに対しもう一方は、細胞毒性剤と反応して、細胞結合剤を細胞毒性剤と連結し、それによってコンジュゲートを形成することができる。
任意の好適な二官能性架橋試薬は、リンカー試薬が、許容可能な毒性プロファイルを提供しながら、それぞれ、細胞毒性剤および細胞結合剤の治療特性、例えば、細胞毒性、および標的特性の保持を提供する限り、本発明と関連して使用することができる。好ましくは、リンカー分子は、（上に説明する通り）化学結合を介して細胞毒性剤を細胞結合剤に結び付け、その結果、細胞毒性剤および細胞結合剤は、互いに化学的に結合（例えば、共有結合）される。
一実施形態では、細胞結合剤は、ジスルフィド結合、酸不安定性結合、感光性結合、ペプチダーゼ不安定性結合、およびエステラーゼ不安定性結合からなる群から選択される化学結合を介して、細胞毒性剤に化学的に結合される。
一実施形態では、二官能性架橋試薬は、非切断可能リンカーを含む。非切断可能リンカーは、マイタンシノイド、タキサン、またはＣＣ−１０６５類似体等の細胞毒性剤を、安定的で共有的な様式で細胞結合剤に連結することが可能な任意の化学的部分である。したがって、非切断可能リンカーは、細胞毒性剤または細胞結合剤が活性のままである条件下では、酸誘発性切断、光誘発性切断、ペプチダーゼ誘発性切断、エステラーゼ誘発性切断、およびジスルフィド結合切断に実質的に耐性である。
細胞毒性剤と細胞結合剤との間に非切断可能リンカーを形成する好適な架橋試薬は、当該技術分野において周知である。一実施形態では、細胞毒性剤は、チオエーテル結合を介して細胞結合剤に化学的に結合される。別の実施形態では、細胞毒性剤は、アミド結合を介して細胞結合剤に連結される。非切断可能リンカーの例としては、細胞毒性剤との反応のためのマレイミド系部分またはハロアセチル系部分を有するリンカーが挙げられる。かかる二官能性架橋剤は、当該技術分野において周知であり（米国特許出願公開第２０１０／０１２９３１４号、同第２００９／０２７４７１３号、同第２００８／００５０３１０号、同第２００５／０１６９９３３号、およびＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．Ｐ．Ｏ． Ｂｏｘ １１７，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ ６１１０５、米国を参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、ＳＭＣＣの「長鎖」類似体（ＬＣ−ＳＭＣＣ）であるＮ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロアート）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチラート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−（ｐ−マレイミドフェニル）イソシアナート（ＰＭＰＩ）が挙げられるが、これらに限定されない。ハロアセチル系部分を含む架橋試薬としては、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、Ｎ−スクシンイミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ビス−マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、５−マレイミドバレリアン酸ＮＨＳ（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｖａｌｅｒｉｃ ａｃｉｄ ＮＨＳ）、ＨＢＶＳ、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）−ブタン酸ヒドラジド・ＨＣｌ（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル−（４−ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス−マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビス−マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス−マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス−マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（スルホ−ＳＩＡＢ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢＳ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチルオキシ（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｕｔｒｙｌｏｘｙ））スルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｄｅ）エステル（スルホ−ＧＭＢＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシシンイミド（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｍｉｄｏ）エステル（スルホ−ＥＭＣＳ）、Ｎ−（κ−マレイミドウンデカノイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＫＭＵＳ）、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチラート（スルホ−ＳＭＰＢ）、ＣＸ１−１、スルホ−Ｍａｌ、およびＰＥＧｎ−Ｍａｌが挙げられる。好ましくは、二官能性架橋試薬は、ＳＭＣＣである。
一実施形態では、連結試薬は、切断可能リンカーである。好適な切断可能リンカーの例としては、ジスルフィド含有リンカー、酸不安定性リンカー、感光性リンカー、ペプチダーゼ不安定性リンカー、およびエステラーゼ不安定性リンカーが挙げられる。ジスルフィド含有リンカーは、生理的条件下で生じ得るジスルフィド交換を介して切断可能なリンカーである。酸不安定性リンカーは、酸のｐＨで切断可能なリンカーである。例えば、エンドソームおよびリソソーム等のある特定の細胞内区画は、酸性ｐＨ（ｐＨ４〜５）を有し、酸不安定性リンカーを切断するのに好適な条件を提供する。感光性リンカーは、光が到達可能な多くの体腔および体表面において有用である。さらに、赤外光は、組織を貫通することができる。ペプチダーゼ不安定性リンカーは、細胞の内側または外側のある特定のペプチドを切断するために使用することができる（例えば、Ｔｒｏｕｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９：６２６−６２９（１９８２）、およびＵｍｅｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，４３：６７７−６８４（１９８９）を参照）。一実施形態では、切断可能リンカーは、緩やかな条件下、すなわち、細胞毒性剤の活性が影響を受けない細胞内の条件下で切断される。
一実施形態では、細胞毒性剤は、ジスルフィド結合を介して細胞結合剤に連結される。リンカー分子は、細胞結合剤と反応することができる反応性の化学基を含む。一実施形態では、二官能性架橋試薬は、細胞結合剤のリジン残基とのアミド結合を形成することができる反応性の部分を含む。細胞結合剤のリジン残基とのアミド結合を形成することができる反応性の部分の例としては、カルボン酸部分および反応性のエステル部分、例えば、Ｎ−スクシンイミジルエステル、Ｎ−スルホスクシンイミジルエステル、ニトロフェニル（例えば、２または４−ニトロフェニル）エステル、ジニトロフェニル（例えば、２，４−
ジニトロフェニル）エステル、スルホ−テトラフルオロフェニル（ｔｅｔｒａｆｌｕｒｏｐｈｅｎｙｌ）（例えば、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）エステル、およびペンタフルオロフェニルエステル等が挙げられる。
細胞結合剤との反応のための好ましい反応性の化学基は、Ｎ−スクシンイミジルエステルおよびＮ−スルホスクシンイミジルエステルである。それに加えて、リンカー分子は、細胞毒性剤と反応して、ジスルフィド結合を形成することができる反応性の化学基、好ましくは、ジチオピリジル基を含む。ジスルフィド結合を介して細胞毒性剤との細胞結合剤の連結を可能にする二官能性架橋試薬は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（例えば、Ｃａｒｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１７３：７２３−７３７（１９７８）を参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）（例えば、米国特許第４，５６３，３０４号を参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）（例えば、ＣＡＳ登録番号３４１４９８−０８−６を参照）、およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）（例えば、米国特許出願公開第２００９／０２７４７１３号を参照）が挙げられる。ジスルフィド基を導入するために使用することができる他の二官能性架橋試薬は、当該技術分野において既知であり、米国特許第６，９１３，７４８号、同第６，７１６，８２１号、ならびに米国特許出願公開第２００９／０２７４７１３号および同第２０１０／０１２９３１４号に説明され、それらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
非切断可能リンカーを形成する硫黄原子を欠失する他の架橋試薬もまた、本発明の方法において使用することができる。かかるリンカーは、ジカルボン酸系部分由来であり得る。好適なジカルボン酸系部分としては、一般式（ＩＸ）：
ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨ
（ＩＸ）、
のα，ω−ジカルボン酸が挙げられるが、これに限定されず、式中、Ｘは、２〜２０個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基であり、Ｙは、３〜１０個の炭素原子を担持するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル基であり、Ｚは、６〜１０個の炭素原子を担持する置換または非置換芳香族基、またはヘテロ原子がＮ、Ｏ、またはＳから選択される置換もしくは非置換複素環式基であり、ｌ、ｍ、およびｎは、各々０または１であるが、但しｌ、ｍ、およびｎは、全て同時には０ではない。
本明細書に開示される非切断可能リンカーの多くは、米国特許出願公開第２００５／０１６９９３３Ａｌ号に詳細に説明される。
本発明のプロセスによって生成される最終的な精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートは、細胞毒性剤、二官能性架橋剤、および細胞結合剤を含む。本発明の好ましい実施形態では、細胞毒性剤はＤＭ１であり、二官能性架橋剤はＳＭＣＣであり、細胞結合剤はｈｕＣＤ３７−３抗体である。本発明の別の好ましい実施形態では、細胞毒性剤はＤＭ１であり、二官能性架橋剤はＳＭＣＣであり、細胞結合剤はＥＧＦＲ−７Ｒ抗体である。本発明の好ましい実施形態では、細胞毒性剤はＤＭ１であり、二官能性架橋剤はＳＭＣＣであり、細胞結合剤は抗ＥＦＧＲｖＩＩＩ抗体である。本発明の好ましい実施形態では、細胞毒性剤はＤＭ１であり、二官能性架橋剤はＳＭＣＣであり、細胞結合剤は抗ＣＤ２７Ｌ抗体である。本発明の好ましい実施形態では、細胞毒性剤はＤＭ１であり、二官能性架橋剤はＳＭＣＣであり、細胞結合剤はトラスツズマブである。
以下の実施例は、本発明をさらに例証するが、勿論その範囲をいかなるようにも制限するものと解釈されるべきではない。
実施例１
本実施例は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をＰＶＤＦ膜に供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去し、それによって精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスを実証する。
抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲートを、１ステッププロセス（米国特許出願公開第２０１２／０２５３０２１号に説明される）によって調製した。反応混合物を、ＰＶＤＦフィルタを通して連続的に汲み上げ、濾過された液体を収集し、ＤＭ１ダイマー種に関して分析した。図１に示される通り、ＤＭ１−ＤＭ１およびＤＭ１−ＭＣＣ−ＤＭ１を含む、ＰＶＤＦ濾過の前に存在したＤＭ１ダイマー種（図１Ａ参照）は、ＰＶＤＦ濾過によって効率的に除去された（図１Ｂ参照）。
本実施例に反映される実験の結果は、ＰＶＤＦ濾過は、細胞毒性剤ダイマー等の遊離細胞毒性剤を、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物から効果的に除去することができることを実証する。
実施例２
本実施例は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、ＰＶＤＦ膜に単独で、またはイオン交換クロマトグラフィー膜と組み合わせて供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去し、それによって、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスを実証する。
抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲートを、１ステッププロセス（米国特許出願公開第２０１２／０２５３０２１号に説明される）によって調製した。反応混合物を、ＰＶＤＦ膜フィルタ、またはＰＶＤＦ膜フィルタとＱ膜（イオン交換クロマトグラフィー膜）との組み合わせを通して濾過した。下の表１に示される通り、ＰＶＤＦ膜フィルタとＱ膜との組み合わせは、ＰＶＤＦ膜フィルタ単独よりも多いＤＭ１ダイマー種を除去した。
本実施例に反映される実験の結果は、ＰＶＤＦ濾過は、単独でか、またはＱ膜と組み合わせてかのいずれかで使用されるとき、細胞毒性剤ダイマー等の遊離細胞毒性剤を、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物から効果的に除去することができることを実証する。
実施例３
本実施例は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物を、ＰＶＤＦ膜に繰り返し供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去し、それによって、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスを実証する。
抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲートを、１ステッププロセス（米国特許出願公開第２０１２／０２５３０２１号に説明される）によって調製した。反応混合物を、ＰＶＤＦ膜フィルタを通して２回かまたは３回かのいずれかで濾過した。ＤＭ１ダイマー（ＤＭ１−ＤＭ１およびＤＭ１−ＭＣＣ−ＤＭ１）のパーセントを、濾過の前および後に測定した。図２に示される通り、追加のＰＶＤＦ膜濾過は、ＤＭ１ダイマー種をさらに除去することができる。
本実施例に反映される実験の結果は、ＰＶＤＦ濾過は、細胞毒性剤ダイマー等の遊離細胞毒性剤を、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物から効果的に除去することができることを実証する。
実施例４
本実施例は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をＰＶＤＦ膜に供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去し、それによって精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスを実証する。
ｈｕＮ９０１−ＳＰＰ−ＤＭ１コンジュゲートを、１ステッププロセス（米国特許出願公開第２０１２／０２５３０２１号に説明される）によって調製した。手短に述べると、ｈｕＮ９０１抗体を、修飾緩衝剤（５０ｍＭのリン酸カリウム、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５）中へ透析濾過し、その後、２．５ｍｇ／ｍｌで、リンカーに対して１．５５モル過剰のＤＭ１および抗体に対して７モルのＳＰＰリンカーを用いて、周囲温度で２４〜２８時間、１０％（体積／体積）のＤＭＡを含有する５０ｍＭのリン酸カリウム、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５の緩衝剤中で結合させた。
その後、反応混合物を、０．２２μｍのＤｕｒａ ｐｏｒｅ ＰＶＤＦフィルタを通して濾過した。ＰＶＤＦ濾過の前および後に反応混合物中に存在した遊離細胞毒性剤の量を、ＨＰＬＣによって測定した。結果は、下の表３に示される。

表３に示される通り、測定した全ての遊離細胞毒性剤種（すなわち、ＤＭ１、ＤＭ１−ＴＰＡ、ＤＭ１−ＳＰＰ、ＤＭ１−ＤＭ１、およびＤＭ１−ＳＰＰ−ＤＭ１）の量は、ＰＶＤＦ濾過によって低減された。特に、双方の細胞毒性剤ダイマー種、ＤＭ１−ＤＭ１およびＤＭ１−ＳＰＰ−ＤＭ１は、ＰＶＤＦ濾過によって著しく低減された。
本実施例に反映される実験の結果は、ＰＶＤＦ濾過は、遊離細胞毒性剤を、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物から効果的に除去することができることを実証する。
実施例５
本実施例は、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をＰＶＤＦ膜に供して、不純物の少なくとも一部を混合物から除去し、それによって精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスを実証する。
ＨｕＮ９０１抗体を、ＳＰＰと１６．０ｍｇ／ｍｌの濃度で、１１．０ｍｇ／ｇの抗体の比率で（４．７Ｘモル比）、５％（体積／体積）のＤＭＡを有する５０ｍＭのＫＰｉ、５０ｍＭのＫＣｌ、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５の緩衝剤中で、２３℃で合計１８０分、常に撹拌しながら修飾した。その後、修飾された抗体を、初めのＳＰＰリンカーに対して１．８倍のモル過剰のＤＭ１と共に、２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で、２ｍＭのＥＤＴＡ、７．７ｍＭのクエン酸、および５％のＤＭＡを有する１５ｍＭのＫＰｉ緩衝剤中で、ｐＨ５．３で２３時間、２３℃で常に撹拌しながら結合させた。その後、反応混合物を、０．２２μｍのＤｕｒａ ｐｏｒｅ ＰＶＤＦフィルタを通して濾過した。ＰＶＤＦ濾過の前および後に反応混合物中に存在した遊離細胞毒性剤の量を、ＨＰＬＣによって測定した。結果は、下の表４に示される。
表４に示される通り、測定した全ての遊離細胞毒性剤種（すなわち、ＤＭ１−ＴＰＡ、ＤＭ１、ＤＭ１−ＤＭ１、およびＤＭ１−ＳＰＰ−ＤＭ１）の量は、ＰＶＤＦ濾過によって低減された。特に、双方の細胞毒性剤ダイマー種、ＤＭ１−ＤＭ１およびＤＭ１−ＳＰＰ−ＤＭ１は、ＰＶＤＦ濾過によって著しく低減された。
本実施例に反映される実験の結果は、ＰＶＤＦ濾過は、遊離細胞毒性剤を、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物から効果的に除去することができることを実証する。
出版物、特許出願、および特許を含む本明細書に引用される全ての参考文献は、各参考文献が、個別にかつ明確に参照により組み込まれることが示されており、またその全体が本明細書に記載されているのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明を説明する文脈における「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」および同様の指示対象の使用は（特に、以下の特許請求の範囲の文脈において）、本明細書に別段に指定のない限り、または明確に文脈と矛盾しない限り、単数と複数との双方を表すものと解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、別段に指定のない限り、制約のない用語と解釈される（すなわち、「含むが、これらに限定されない」ことを意味する）。本明細書における値の範囲の記述は、本明細書に別段に指定のない限り、単にその範囲内の各別個の値を個別に指す簡略化された方法としての機能を果たし、また各別個の値は、それが本明細書に個別に記述されるかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に説明される全ての方法は、本明細書に別段に指定のない限り、または明確に文脈と矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提供される任意のおよび全ての例、または例示的な語（例えば、「等」）の使用は、別段に請求されない限り、単に本発明をより良く明らかにするように意図され、本発明の範囲に制限を設けるものではない。本明細書中のいかなる語も、任意の非請求の要素を、本発明の実践に必須のものと指示していると解釈されるべきではない。
本発明の好ましい実施形態は、本明細書に説明され、発明者に既知である本発明を実施するための最良の形態を含む。これらの好ましい実施形態の変形は、前述の説明を読めば当業者にとって明らかになり得る。発明者は、当業者にかかる変形を適切に採用することを期待し、また発明者は、本発明が、本明細書に具体的に説明されるものと異なって実践されることを意図する。したがって、本発明は、適用される法によって認められる通り、添付の特許請求の範囲に記述される主題の全ての修正および等価物を含む。さらに、全て
の変形における上に説明される要素の任意の組み合わせは、本明細書に別段に指定のない限り、または明確に文脈と矛盾しない限り、本発明に包括される。

Claims (98)

  1. 精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを調製するためのプロセスであって、細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記混合物から前記不純物の少なくとも一部を除去し、それによって精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供することを含む、プロセス。
  2. 前記プロセスは、２、３、または４回連続して繰り返される、請求項１に記載のプロセス。
  3. 前記プロセスは、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供して、前記混合物から前記不純物の少なくとも一部を除去することをさらに含む、請求項１または２に記載のプロセス。
  4. 前記混合物は、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供する前にＰＶＤＦ膜に供される、請求項３に記載のプロセス。
  5. 前記混合物は、前記混合物をＰＶＤＦ膜に供する前にイオン交換クロマトグラフィー膜に供される、請求項３に記載のプロセス。
  6. 請求項１に記載のプロセスであって、前記プロセスは、
    （ａ）細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させて、前記細胞結合剤と前記細胞毒性剤とを含む第１の混合物を形成し、その後、前記第１の混合物を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中でリンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、前記リンカーを介して前記細胞毒性剤に化学的に結合された前記細胞結合剤を含む前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を提供することと、
    （ｂ）前記第２の混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を除去し、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、
    （ｃ）ステップ（ｂ）の後、前記精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを前記不純物からさらに精製し、それによって前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、前記精製された第３の混合物は、前記精製された第２の混合物と比較して低減された量の前記不純物を含む、調製することと、を含む、プロセス。
  7. ステップ（ｂ）は、ステップ（ｃ）の前に２、３、または４回連続して繰り返される、請求項６に記載のプロセス。
  8. 吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｃ）で利用される、請求項６または７に記載のプロセス。
  9. 前記吸着クロマトグラフィーは、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、混合モードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、色素リガンドクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６〜８のいずれかに記載のプロセス。
  10. 前記吸着クロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィーである、請求項９に記載のプロセス。
  11. 前記イオン交換クロマトグラフィーは、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ）クロマトグラフィーである、請求項１０に記載のプロセス。
  12. タンジェント流濾過は、ステップ（ｃ）で利用される、請求項６または７に記載のプロセス。
  13. ステップ（ａ）における前記接触は、前記細胞結合剤を反応容器内に提供し、前記細胞毒性剤を前記反応容器に添加して、前記細胞結合剤と前記細胞毒性剤とを含む前記第１の混合物を形成し、その後、前記二官能性架橋試薬を前記第１の混合物に添加することによって達成される、請求項６〜１２のいずれかに記載のプロセス。
  14. ステップａとｂまたはステップｂとｃの間に、前記混合物を保持して、前記細胞結合剤から前記不安定に結合されたリンカーを放出することをさらに含む、請求項６〜１３のいずれかに記載のプロセス。
  15. 前記混合物は、約２℃〜約８℃の温度で約２０時間保持される、請求項１４に記載のプロセス。
  16. ステップ（ａ）と（ｂ）の間に、前記第２の混合物を急冷して、任意の未反応の細胞毒性剤および／または未反応の二官能性架橋試薬を急冷することをさらに含む、請求項６〜１５のいずれかに記載のプロセス。
  17. 前記混合物は、前記第２の混合物を、前記遊離細胞毒性剤と反応する急冷試薬と接触させることによって急冷される、請求項１６に記載のプロセス。
  18. 前記急冷試薬は、４−マレイミド酪酸、３−マレイミドプロピオン酸、Ｎ−エチルマレイミド、ヨードアセトアミド、およびヨードアセトアミドプロピオン酸からなる群から選択される、請求項１７に記載のプロセス。
  19. 前記プロセスは、ステップ（ａ）と（ｂ）の間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供することをさらに含む、請求項６〜１８のいずれかに記載のプロセス。
  20. 前記プロセスは、ステップ（ｂ）と（ｃ）の間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供することをさらに含む、請求項６〜１９のいずれかに記載のプロセス。
  21. 請求項１に記載のプロセスであって、前記プロセスは、
    （ａ）細胞結合剤を二官能性架橋試薬と接触させて、リンカーを前記細胞結合剤に共有結合させ、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を含む第１の混合物を調製することと、
    （ｂ）前記第１の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供し、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤の精製された第１の混合物を調製することと、
    （ｃ）結合されたリンカーを有する前記細胞結合剤を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中で細胞毒性剤と反応させることによって、細胞毒性剤を、前記精製された第１の混合物中で結合されたリンカーを有する前記細胞結合剤に結合させて、前記リンカーを介して前
    記細胞毒性剤に化学的に結合された前記細胞結合剤を含む前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を調製することと、
    （ｄ）前記第２の混合物をポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を除去して、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、
    （ｅ）ステップ（ｄ）の後、前記精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを前記不純物からさらに精製し、それによって前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、前記精製された第３の混合物は、前記精製された第２の混合物と比較して低減された量の前記不純物を含む、調製することと、を含む、プロセス。
  22. ステップ（ｄ）は、ステップ（ｅ）の前に２、３、または４回連続して繰り返される、請求項２１に記載のプロセス。
  23. 前記プロセスは、ステップ（ｃ）と（ｄ）との間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供することをさらに含む、請求項２１または２２に記載のプロセス。
  24. 前記プロセスは、ステップ（ｄ）と（ｅ）との間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供することをさらに含む、請求項２１または２２に記載のプロセス。
  25. 吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｂ）および（ｄ）で利用される、請求項２１〜２４のいずれかに記載のプロセス。
  26. タンジェント流濾過は、ステップ（ｂ）で利用され、吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｄ）で利用される、請求項２１〜２４のいずれかに記載のプロセス。
  27. 吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｂ）で利用され、タンジェント流濾過は、ステップ（ｄ）で利用される、請求項２１〜２４のいずれかに記載のプロセス。
  28. 前記吸着クロマトグラフィーは、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、混合モードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、色素リガンドクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２１〜２７のいずれかに記載のプロセス。
  29. 前記吸着クロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィーである、請求項２８に記載のプロセス。
  30. 前記イオン交換クロマトグラフィーは、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ）クロマトグラフィーである、請求項２９に記載のプロセス。
  31. タンジェント流濾過は、ステップ（ｂ）および（ｄ）で利用される、請求項２１〜２４のいずれかに記載のプロセス。
  32. 非吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｂ）および（ｄ）で利用される、請求項２１〜２４のいずれかに記載のプロセス。
  33. ステップ（ｃ）における前記溶液は、スクロースを含む、請求項２１〜３２のいずれかに記載のプロセス。
  34. ステップ（ｃ）における前記溶液は、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、およびリン酸緩衝液からなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項２１〜３３のいずれかに記載のプロセス。
  35. ステップ（ｃ）における前記溶液は、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物（ｄｅｈｙｄｒａｔｅ））、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＨＥＰＰＳ（ＥＰＰＳ）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項２１〜３３のいずれかに記載のプロセス。
  36. （ｆ）ステップａとｂ、ステップｂとｃ、ステップｃとｄ、およびステップｄとｅのうちの少なくとも１つの間に、前記混合物を保持して、前記細胞結合剤から前記不安定に結合されたリンカーを放出することをさらに含む、請求項２１〜３５のいずれかに記載のプロセス。
  37. 請求項１に記載のプロセスであって、前記プロセスは：
    （ａ）細胞結合剤を二官能性架橋試薬と接触させて、リンカーを前記細胞結合剤に共有結合させ、それによって、結合されたリンカーを有する細胞結合剤を含む第１の混合物を調製することと、
    （ｂ）結合されたリンカーを有する前記細胞結合剤を細胞毒性剤と反応させることによって、細胞毒性剤を、前記第１の混合物中で結合されたリンカーを有する前記細胞結合剤に結合させて、前記リンカーを介して前記細胞毒性剤に化学的に結合された前記細胞結合剤を含む前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を調製することと、
    （ｃ）前記第２の混合物を、ポリビニルジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を除去して、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、
    （ｄ）ステップ（ｃ）の後、前記精製された第２の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを前記不純物からさらに精製し、それによって前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、前記精製された第３の混合物は、前記精製された第２の混合物と比較して低減された量の前記不純物を含む、調製することと、を含む、プロセス。
  38. 前記第１の混合物は、ステップ（ａ）と（ｂ）の間では精製に供されない、請求項３７に記載のプロセス。
  39. ステップ（ｃ）は、ステップ（ｄ）の前に２、３、または４回連続して繰り返される、請求項３７または３８に記載のプロセス。
  40. 前記プロセスは、ステップ（ｂ）と（ｃ）との間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供することをさらに含む、請求項３７〜３９のいずれかに記載のプロセス。
  41. 前記プロセスは、ステップ（ｃ）と（ｄ）との間に、前記混合物をイオン交換クロマトグラフィー膜に供することをさらに含む、請求項３７〜３９のいずれかに記載のプロセス。
  42. 吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｄ）で利用される、請求項３７〜４１のいずれかに記載のプロセス。
  43. 前記吸着クロマトグラフィーは、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、混合モードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、色素リガンドクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４２に記載のプロセス。
  44. 前記吸着クロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィーである、請求項４３に記載のプロセス。
  45. 前記イオン交換クロマトグラフィーは、セラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴ）クロマトグラフィーである、請求項４４に記載のプロセス。
  46. タンジェント流濾過は、ステップ（ｄ）で利用される、請求項３７〜４１のいずれかに記載のプロセス。
  47. 非吸着クロマトグラフィーは、ステップ（ｄ）で利用される、請求項３７〜４１のいずれかに記載のプロセス。
  48. ステップ（ｂ）における前記溶液は、スクロースを含む、請求項３７〜４７のいずれかに記載のプロセス。
  49. ステップ（ｂ）における前記溶液は、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、およびリン酸緩衝液からなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項３７〜４８のいずれかに記載のプロセス。
  50. ステップ（ｂ）における前記溶液は、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＨＥＰＰＳ（ＥＰＰＳ）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項３７〜４８のいずれかに記載のプロセス。
  51. （ｅ）ステップａとｂ、ステップｂとｃ、およびステップｃとｄのうちの少なくとも１つの間に、前記混合物を保持して、前記細胞結合剤から前記不安定に結合されたリンカーを放出することをさらに含む、請求項３７〜５０のいずれかに記載のプロセス。
  52. 前記１つ以上の不純物は、細胞毒性剤ダイマー、前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの凝集体、遊離細胞毒性剤、非結合リンカー、およびそれらの混合物の群から選択される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載のプロセス。
  53. 前記混合物は、不純物として細胞毒性剤ダイマーを含み、前記細胞毒性剤ダイマーのいくらかは、前記精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供するために前記混合物から除去される、請求項５１に記載のプロセス。
  54. 前記細胞毒性剤ダイマーは、ＤＭ１−ＤＭ１を含む、請求項５３に記載のプロセス。
  55. 前記細胞毒性剤ダイマーは、ＤＭ１−ＭＣＣ−ＤＭ１を含む、請求項５３に記載のプロセス。
  56. 前記細胞毒性剤ダイマーは、ＤＭ１−ＤＭ１およびＤＭ１−ＭＣＣ−ＤＭ１を含む、請求項５３に記載のプロセス。
  57. 前記混合物は、前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの凝集体を不純物として含み、前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの前記凝集体のいくらかは、前記精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供するために前記混合物から除去される、請求項５２に記載のプロセス。
  58. 前記混合物は、遊離細胞毒性剤を不純物として含み、前記遊離細胞毒性剤のいくらかは、前記精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供するために前記混合物から除去される、請求項５２に記載のプロセス。
  59. 前記混合物は、非結合リンカーを不純物として含み、前記非結合リンカーのいくらかは、前記精製された細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを提供するために前記混合物から除去される、請求項５２に記載のプロセス。
  60. ＰＶＤＦ膜に供される前記混合物のｐＨは、約４〜約９である、請求項１〜５９のいずれかに記載のプロセス。
  61. 前記混合物のｐＨは、約７〜約８である、請求項６０に記載のプロセス。
  62. 前記混合物のｐＨは、約８〜約９である、請求項６０に記載のプロセス。
  63. 前記混合物のｐＨは、約８．５である、請求項６２に記載のプロセス。
  64. 前記混合物のｐＨは、約４．５〜約５．５である、請求項６０に記載のプロセス。
  65. 前記混合物のｐＨは、約４．８である、請求項６４に記載のプロセス。
  66. 前記１つ以上の不純物の少なくとも５０％は、前記混合物から除去される、請求項１〜６５のいずれかに記載のプロセス。
  67. 前記１つ以上の不純物の少なくとも７５％は、前記混合物から除去される、請求項１〜６５のいずれかに記載のプロセス。
  68. 前記１つ以上の不純物の少なくとも９０％は、前記混合物から除去される、請求項１〜６５のいずれかに記載のプロセス。
  69. 前記ＰＶＤＦ膜は、０．２２ミクロン孔径膜、０．４５ミクロン孔径膜、および二重層０．４５／０．２２ミクロン孔径膜からなる群から選択される、請求項１〜６８のいずれ
    かに記載のプロセス。
  70. 前記ＰＶＤＦ膜は、γ線照射される、請求項１〜６９のいずれかに記載のプロセス。
  71. ステップ（ａ）における前記接触は、約７〜約９のｐＨを有する溶液中で生じる、請求項６〜７０のいずれかに記載のプロセス。
  72. ステップ（ａ）における前記溶液は、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、およびリン酸緩衝液からなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項６〜７０のいずれか一項に記載のプロセス。
  73. ステップ（ａ）における前記溶液は、ＨＥＰＰＳＯ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸））、ＰＯＰＳＯ（ピペラジン−１，４−ビス−（２−ヒドロキシ−プロパン−スルホン酸）無水物）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＨＥＰＰＳ（ＥＰＰＳ）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝剤を含む、請求項７１に記載のプロセス。
  74. ステップ（ａ）における前記接触は、約１６℃〜約２４℃の温度で生じる、請求項６〜７３のいずれかに記載のプロセス。
  75. ステップ（ａ）における前記接触は、約０℃〜約１５℃の温度で生じる、請求項６〜７３のいずれかに記載のプロセス。
  76. 前記二官能性架橋試薬は、酸不安定性リンカー、ジスルフィド含有リンカー、感光性リンカー、ペプチダーゼ不安定性リンカー、またはエステラーゼ不安定性リンカーである、請求項６〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  77. 前記二官能性架橋試薬は、ジスルフィド含有切断可能リンカーである、請求項６〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  78. 前記二官能性架橋試薬は、非切断可能リンカーである、請求項６〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  79. 前記二官能性架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジルエステル部分、Ｎ−スルホスクシンイミジルエステル部分、マレイミド系部分、またはハロアセチル系部分を含む、請求項６〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  80. 前記二官能性架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）からなる群から選択される、請求項７７に記載のプロセス。
  81. 前記二官能性架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロアート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、β−マレイミドプロピルオキシ
    −スクシンイミジルエステル（ＢＭＰＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチラート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−（ｐ−マレイミドフェニル）イソシアナート（ＰＭＰＩ）、スルホ−Ｍａｌ、ＰＥＧ４−Ｍａｌ、およびＣＸ１−１からなる群から選択される、請求項７８に記載のプロセス。
  82. 前記細胞結合剤は、抗体、インターフェロン、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インスリン、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびトランスフェリンからなる群から選択される、請求項１〜８１のいずれかに記載のプロセス。
  83. 前記細胞結合剤は、抗体である、請求項８２に記載のプロセス。
  84. 前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項８３に記載のプロセス。
  85. 前記抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項８４に記載のプロセス。
  86. 前記細胞結合剤は、ｈｕＢ４、ｈｕＣ２４２、トラスツズマブ、ビバツズマブ、シブロツズマブ、ｈｕＤＳ６、リツキシマブ、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２７Ｌ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、インテグリン標的抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗葉酸受容体抗体、抗Ｈｅｒ３抗体、Ｂ−Ｂ４抗体、および抗ＩＧＦＩＲ抗体からなる群から選択される抗体である、請求項８２に記載のプロセス。
  87. 前記細胞毒性剤は、マイタンシノイド、タキサン、およびＣＣ１０６５からなる群から選択される請求項１〜８６のいずれかに記載のプロセス。
  88. 前記細胞毒性剤は、マイタンシノイドである、請求項８７に記載のプロセス。
  89. 前記マイタンシノイドは、チオール基を含む、請求項８８に記載のプロセス。
  90. 前記マイタンシノイドは、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）またはＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）である、請求項８９に記載のプロセス。
  91. 前記細胞毒性剤は、ＤＭ１であり、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣであり、前記細胞結合剤は、ｈｕＣＤ３７−３抗体である、請求項１〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  92. 前記細胞毒性剤は、ＤＭ１であり、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣであり、前記細胞結合剤は、ＥＧＦＲ−７Ｒ抗体である、請求項１〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  93. 前記細胞毒性剤は、ＤＭ１であり、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣであり、前記細胞結合剤は、抗ＥＦＧＲｖＩＩＩ抗体である、請求項１〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  94. 前記細胞毒性剤は、ＤＭ１であり、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣであり、前記細胞結合剤は、抗ＣＤ２７Ｌ抗体である、請求項１〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  95. 前記細胞毒性剤は、ＤＭ１であり、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣであり、前記細胞結合剤は、トラスツズマブである、請求項１〜７５のいずれかに記載のプロセス。
  96. 請求項６〜１８のいずれかに記載のプロセスであって、前記プロセスは、
    （ａ）細胞結合剤を細胞毒性剤と接触させて、前記細胞結合剤と前記細胞毒性剤とを含む第１の混合物を形成し、その後、前記第１の混合物を、約４〜約９のｐＨを有する溶液中でリンカーを含む二官能性架橋試薬と接触させて、前記リンカーを介して前記細胞毒性剤に化学的に結合された前記細胞結合剤を含む前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートと１つ以上の不純物とを含む第２の混合物を提供することと、
    （ｂ）前記第２の混合物をＰＶＤＦ膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を前記混合物から除去し、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第２の混合物を提供することと、
    （ｃ）ステップ（ｂ）の後、前記精製された第２の混合物を急冷して、任意の未反応の細胞毒性剤および／または未反応の二官能性架橋試薬を急冷することと、
    （ｄ）ステップ（ｃ）の後、前記急冷された混合物をＰＶＤＦ膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を前記混合物から除去し、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を提供することと、
    （ｅ）前記精製された第３の混合物を保持して、前記不安定に結合されたリンカーを前記細胞結合剤から放出することと、
    （ｆ）任意に、ステップ（ｃ）の後、前記精製された第３の混合物をＰＶＤＦ膜に供して、前記不純物の少なくとも一部を前記混合物から除去し、それによって前記細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第４の混合物を提供することと、
    （ｇ）ステップ（ｆ）の後、前記精製された第４の混合物を、タンジェント流濾過、選択的析出、非吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、またはこれらの組み合わせに供して、前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートを前記不純物からさらに精製し、それによって前記細胞結合剤−細胞毒性剤コンジュゲートの精製された第３の混合物を調製することであって、前記精製された第３の混合物は、前記精製された第２の混合物と比較して低減された量の前記不純物を含む、調製することと、を含む、プロセス。
  97. ステップ（ｂ）の前記第２の混合物は、約８．５のｐＨを有する、請求項９６に記載のプロセス。
  98. ステップ（ｄ）の前記急冷された混合物は、約４．８のｐＨを有する、請求項９７に記載のプロセス。
JP2018097686A 2012-10-04 2018-05-22 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用 Pending JP2018158925A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261709891P 2012-10-04 2012-10-04
US61/709,891 2012-10-04

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2015535823A Division JP6345181B2 (ja) 2012-10-04 2013-10-04 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020019654A Division JP2020079294A (ja) 2012-10-04 2020-02-07 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2018158925A true JP2018158925A (ja) 2018-10-11

Family

ID=50435472

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2015535823A Active JP6345181B2 (ja) 2012-10-04 2013-10-04 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用
JP2018097686A Pending JP2018158925A (ja) 2012-10-04 2018-05-22 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用
JP2020019654A Pending JP2020079294A (ja) 2012-10-04 2020-02-07 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2015535823A Active JP6345181B2 (ja) 2012-10-04 2013-10-04 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020019654A Pending JP2020079294A (ja) 2012-10-04 2020-02-07 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用

Country Status (15)

Country Link
US (2) US10035817B2 (ja)
EP (1) EP2904089A4 (ja)
JP (3) JP6345181B2 (ja)
CN (2) CN109200290A (ja)
AU (2) AU2013326881B2 (ja)
CA (1) CA2886993A1 (ja)
HK (1) HK1213288A1 (ja)
IL (2) IL238110B (ja)
IN (1) IN2015DN03202A (ja)
MX (1) MX359599B (ja)
NZ (1) NZ707091A (ja)
RU (2) RU2018122734A (ja)
SG (2) SG10201702737TA (ja)
WO (1) WO2014055877A1 (ja)
ZA (1) ZA201502992B (ja)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2662096A1 (en) 2005-08-24 2013-11-13 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
PT2437790T (pt) 2009-06-03 2019-06-04 Immunogen Inc Métodos de conjugação
CN107537040A (zh) 2011-03-29 2018-01-05 伊缪诺金公司 通过一步法制备类美登素抗体缀合物
AU2013326881B2 (en) 2012-10-04 2018-08-02 Immunogen, Inc. Use of a PVDF membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
AU2015252518B2 (en) * 2014-04-29 2019-11-14 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. New stable antibody-drug conjugate, preparation method therefor, and use thereof
CN113842468B (zh) 2014-09-02 2025-08-29 伊缪诺金公司 用于配制抗体药物缀合物组合物的方法
CN105797603A (zh) * 2016-04-13 2016-07-27 伊美特(上海)环保科技有限公司 一种亲水性中空纤维超滤膜及其制备工艺
CN106995639A (zh) * 2017-04-18 2017-08-01 安徽省康宇水电机械成套设备有限公司 一种低成本水下防腐材料
CN108549763B (zh) * 2018-04-09 2021-06-01 电子科技大学 一种用于离子推进器数值模拟的电荷交换碰撞mcc方法
CN112830937B (zh) * 2019-11-22 2025-04-04 上海医药集团股份有限公司 一种美登素dm1聚合物的制备方法
WO2022188740A1 (en) 2021-03-08 2022-09-15 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Antibody-immune agonist conjugate and applications thereof
JP2024514174A (ja) 2021-04-14 2024-03-28 ジーンクアンタム ヘルスケア （スーチョウ） シーオー．， エルティーディー． リンカー、コンジュゲート及びその用途
CN120957726A (zh) * 2023-03-21 2025-11-14 启德医药科技（苏州）有限公司 抗体-药物偶联物与癌症疗法的组合及其用途

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04266829A (ja) * 1990-11-15 1992-09-22 Brunswick Corp 免疫結合体を形成するための抗体の化学修飾
WO1999005317A1 (en) * 1997-07-28 1999-02-04 The New York Blood Center, Inc. Method for purifying viral nucleic acids
JP2008531484A (ja) * 2005-02-11 2008-08-14 イムノゲン インコーポレーティッド 安定な薬物複合体を調製するための方法
JP2009506032A (ja) * 2005-08-24 2009-02-12 イムノゲン インコーポレーティッド メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）抗体複合体の調製方法
JP2010533703A (ja) * 2007-07-19 2010-10-28 サノフイ−アベンテイス 新規トマイマイシン誘導体を含む細胞毒性剤およびこれらの治療的使用
WO2011039724A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 Sanofi-Aventis Antibodies that specifically bind to the epha2 receptor

Family Cites Families (160)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE430062B (sv) 1977-03-04 1983-10-17 Pharmacia Fine Chemicals Ab Kopplings- eller tioleringsreagens
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4664911A (en) 1983-06-21 1987-05-12 Board Of Regents, University Of Texas System Immunotoxin conjugates employing toxin B chain moieties
DE3584012D1 (de) 1985-01-22 1991-10-10 Saint Gobain Vitrage Verfahren zur herstellung eines pulvers auf basis von indium-formiat zur herstellung einer duennen beschichtung auf einem substrat, insbesondere auf glas.
GB8600582D0 (en) 1986-01-10 1986-02-19 Ca Minister Nat Defence Purifying biological materials
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4859449A (en) 1987-09-14 1989-08-22 Center For Molecular Medicine And Immunology Modified antibodies for enhanced hepatocyte clearance
US5241078A (en) 1988-06-14 1993-08-31 Cetus Oncology Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5024834A (en) 1988-07-12 1991-06-18 Cetus Corporation Thioether linked immunotoxin conjugates
CA2006408A1 (en) 1988-12-27 1990-06-27 Susumu Iwasa Bispecific monoclonal antibody, its production and use
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5714149A (en) 1989-02-10 1998-02-03 Celltech Therapeutics Limited Crosslinked antibodies and processes for their preparation
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6316003B1 (en) 1989-12-21 2001-11-13 Whitehead Institute For Biomedical Research Tat-derived transport polypeptides
US5137877B1 (en) 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
DK0814159T3 (da) 1990-08-29 2005-10-24 Genpharm Int Transgene, ikke-humane dyr, der er i stand til at danne heterologe antistoffer
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5252714A (en) 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
SE9102074D0 (sv) 1991-07-03 1991-07-03 Kabi Pharmacia Ab Tomour antigen specific antibody
SE470006B (sv) 1991-09-26 1993-10-25 Corline Systems Ab Nytt konjugat, dess framställning och användning samt substrat preparerat med konjugatet
US5885793A (en) 1991-12-02 1999-03-23 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5556623A (en) 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
IL111748A0 (en) 1993-12-03 1995-01-24 Zeneca Ltd Proteins
US5580853A (en) 1994-03-22 1996-12-03 New England Deaconess Hospital Modified polypeptides with increased biological activity
US5919758A (en) 1994-03-22 1999-07-06 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with altered biological activity
US5747446A (en) 1994-03-22 1998-05-05 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified polypeptides with increased biological activity
US5612474A (en) 1994-06-30 1997-03-18 Eli Lilly And Company Acid labile immunoconjugate intermediates
WO1996039183A1 (en) 1995-05-31 1996-12-12 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for targeted delivery of effector molecules
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5958872A (en) 1996-04-01 1999-09-28 Apoptosis Technology, Inc. Active survival domains of IGF-IR and methods of use
US6340461B1 (en) 1996-12-17 2002-01-22 David Stephen Terman Superantigen based methods and compositions for treatment of diseases
US6462070B1 (en) 1997-03-06 2002-10-08 The General Hospital Corporation Photosensitizer conjugates for pathogen targeting
US6371975B2 (en) 1998-11-06 2002-04-16 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers
ATE282092T1 (de) 1997-06-11 2004-11-15 Borean Pharma As Trimerisierendes modul
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
JP2002501721A (ja) 1997-08-01 2002-01-22 モルフォシス・アクチェンゲゼルシャフト 多量体（ポリ）ペプチドコンプレックスのメンバーをコードする核酸配列を同定するための新規方法およびファージ
US5965714A (en) 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
MXPA00003108A (es) 1997-10-03 2001-07-01 Polisacaridos formadores de iminas, preparacion de los mismos y el uso como adyuvantes e inmunoestimulan
US6121236A (en) 1998-03-24 2000-09-19 The Children's Medical Center Corporation Multivalent ligands which modulate angiogenesis
EP1073667A2 (en) 1998-04-28 2001-02-07 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Polysaccharide-antigen conjugates
US5981564A (en) 1998-07-01 1999-11-09 Universite Laval Water-soluble derivatives of paclitaxel, method for producing same and uses thereof
US6312694B1 (en) 1998-07-13 2001-11-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Cancer treatment methods using therapeutic conjugates that bind to aminophospholipids
US6780327B1 (en) 1999-02-25 2004-08-24 Pall Corporation Positively charged membrane
TW593241B (en) 1999-04-20 2004-06-21 Hoffmann La Roche Carbamic acid derivatives
AUPQ014799A0 (en) 1999-05-04 1999-05-27 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
EP2289549A3 (en) 1999-10-01 2011-06-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
EP1242401B1 (en) 1999-11-24 2006-12-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
WO2001049698A1 (en) 1999-12-29 2001-07-12 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
US20020197266A1 (en) 2000-02-08 2002-12-26 Waldemar Debinski Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
US6632979B2 (en) 2000-03-16 2003-10-14 Genentech, Inc. Rodent HER2 tumor model
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US6596503B1 (en) 2000-08-18 2003-07-22 East Carolina University Monoclonal antibody DS6, tumor-associated antigen CA6, and methods of use thereof
US20060062786A1 (en) 2000-11-08 2006-03-23 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
MX349009B (es) 2001-01-05 2017-07-06 Pfizer Anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento similar a insulina.
CA2436092A1 (en) 2001-01-29 2002-08-08 Idec Pharmaceutical Corporation Modified antibodies and methods of use
WO2002098885A1 (en) 2001-02-07 2002-12-12 Beth Israel Deaconess Medical Center Modified psma ligands and uses related thereto
US20030003048A1 (en) 2001-04-26 2003-01-02 Chun Li Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
JP2004533449A (ja) 2001-05-11 2004-11-04 ボード　オブ　リージェンツ，　ザ　ユニバーシティ　オブ　テキサス　システム Ｃｄ２６を発現している細胞に関連する疾患の治療としての抗ｃｄ２６モノクローナル抗体
EP1258255A1 (en) 2001-05-18 2002-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Conjugates of an antibody to CD44 and a maytansinoid
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
MXPA03010804A (es) 2001-06-01 2004-11-22 Cornell Res Foundation Inc Anticuerpos modificados para antigeno de membrana especifico de la prostata y usos de los mismos.
TW593239B (en) 2001-06-04 2004-06-21 Kevin Dale Allen One-step production of 1,3-propanediol from ethylene oxide and syngas with a catalyst with a phospholanoalkane ligand
ATE419005T1 (de) 2001-12-11 2009-01-15 Merck & Co Inc Staphylococcus aureus exopolysaccharid und verfahren
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US20050031627A1 (en) 2002-01-03 2005-02-10 Mazzola Gregory J Methods for preparing immunoconjugates
US7591994B2 (en) 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
KR100788093B1 (ko) 2002-04-26 2007-12-21 제넨테크, 인크. 단백질의 비친화성 정제
HUE030806T2 (hu) 2002-05-02 2017-05-29 Wyeth Holdings Llc Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok
US20090068178A1 (en) 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
CN1671741A (zh) 2002-06-21 2005-09-21 拜奥根Idec公司 浓缩抗体的缓冲剂制剂及其使用方法
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
ATE499116T1 (de) 2002-08-16 2011-03-15 Immunogen Inc Vernetzer mit hoher reaktivität und löslichkeit und ihre verwendung bei der herstellung von konjugaten für die gezielte abgabe von kleinmolekularen arzneimitteln
EP1549350B1 (en) 2002-10-08 2008-09-24 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Pharmaceutically active oligosaccharide conjugates
DK2348124T3 (en) 2002-10-30 2014-03-10 Nuevolution As Synthesis of a bifunctional complex
AU2003285878B2 (en) 2002-11-07 2011-04-28 Immunogen, Inc. Anti-CD33 antibodies and method for treatment of acute myeloid leukemia using the same
KR101424624B1 (ko) 2003-05-14 2014-07-31 이뮤노젠 아이엔씨 약물 콘쥬게이트 조성물
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
NZ542695A (en) 2003-05-20 2009-04-30 Immunogen Inc Improved cytotoxic agents comprising new maytansinoids
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
EP2457587A1 (en) 2003-06-27 2012-05-30 Amgen Fremont Inc. Anitbodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof
US20050074425A1 (en) 2003-07-02 2005-04-07 Polycord, Inc. Method for delivering polymerized therapeutic agent compositions and compositions thereof
WO2005044998A2 (en) 2003-11-05 2005-05-19 Palingen, Inc. Enhanced b cell cytotoxicity of cdim binding antibody
US20050175619A1 (en) 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
US20110064754A1 (en) 2005-03-03 2011-03-17 Center For Molecular Medicine And Immunology Immunoconjugates Comprising Poxvirus-Derived Peptides and Antibodies Against Antigen-Presenting Cells for Subunit-Based Poxvirus Vaccines
WO2005094882A1 (en) 2004-03-03 2005-10-13 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Modified antibodies to prostate-specific membrane antigen and uses thereof
WO2005115477A2 (en) 2004-04-13 2005-12-08 Quintessence Biosciences, Inc. Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents
US20060073528A1 (en) 2004-05-14 2006-04-06 Jean-Michel Lecerf Measurement methods
CA2564076C (en) 2004-05-19 2014-02-18 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
RU2402548C2 (ru) 2004-05-19 2010-10-27 Медарекс, Инк. Химические линкеры и их конъюгаты
EP1753463A2 (en) 2004-06-01 2007-02-21 Genentech, Inc. Antibody drug conjugates and methods
US20060045877A1 (en) 2004-08-30 2006-03-02 Goldmakher Viktor S Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof
SV2006002258A (es) 2004-10-08 2006-09-19 Wyeth Corp Inmunoterapia de trastornos autoinmunes
EP1817341A2 (en) 2004-11-29 2007-08-15 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
ES2539126T3 (es) 2004-12-09 2015-06-26 Janssen Biotech, Inc. Inmunoconjugados anti integrina, métodos para su producción y su uso
US7408030B2 (en) 2005-01-13 2008-08-05 North Carolina State University Purification of immunoglobulins using affinity chromatography and peptide ligands
US20110166319A1 (en) 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
JP2008531060A (ja) 2005-03-04 2008-08-14 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 相補性決定残基の合理的改変を介して免疫グロブリン可変領域をヒト化する方法
MX2007012817A (es) 2005-04-15 2007-12-12 Immunogen Inc Eliminacion de poblacion celular heterogenea o mezclada en tumores.
GB2427360A (en) 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
JP5436856B2 (ja) 2005-07-15 2014-03-05 アンジオケム インコーポレーティッド 薬学的複合体における担体としてのアプロチニンポリペプチドの使用
BRPI0614100A2 (pt) 2005-08-03 2011-03-09 Immunogen Inc formulações de imunoconjugado lìquidas
CA2625426A1 (en) 2005-09-22 2007-03-29 Hadasit Medical Research Services & Development Limited Dextran and arabinogalactan conjugates of therapeutically active compounds
EP1940470B1 (en) 2005-09-26 2013-04-17 Medarex, Inc. Antibody-drug conjugates and their use
JP5199108B2 (ja) 2005-11-14 2013-05-15 ユニヴァーシティー オブ サザン カリフォルニア インテグリン結合小分子
US7964415B2 (en) 2006-04-26 2011-06-21 Cardiogenics Inc. Stable water-soluble polyethylenimine conjugates and methods of use thereof
SG172656A1 (en) 2006-05-30 2011-07-28 Genentech Inc Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
MX2009000709A (es) * 2006-07-18 2009-02-04 Sanofi Aventis Anticuerpo antagonista contra epha2 para el tratamiento de cancer.
US20080213349A1 (en) 2006-09-11 2008-09-04 Deepak Ramesh Thakker Liposome Complexes Containing Pharmaceutical Agents and Methods
WO2008057683A2 (en) * 2006-10-03 2008-05-15 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
RU2487877C2 (ru) 2008-04-30 2013-07-20 Иммьюноджен, Инк. Высокоэффективные конъюгаты и гидрофильные сшивающие агенты (линкеры)
MY197840A (en) 2008-04-30 2023-07-20 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
GB0811743D0 (en) 2008-06-26 2008-07-30 Hemosol Biopharma Inc Composition
CA2742846A1 (en) 2008-11-17 2010-05-20 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable fusogenic lipids for nucleic acids delivery systems
EP2393362B1 (en) 2009-02-05 2016-08-24 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
UY32560A (es) 2009-04-29 2010-11-30 Bayer Schering Pharma Ag Inmunoconjugados de antimesotelina y usos de los mismos
PT2437790T (pt) 2009-06-03 2019-06-04 Immunogen Inc Métodos de conjugação
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux
UY32913A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Nuevos maitansinoides y el uso de dichos maitansinoides para preparar conjugados con un anticuero
MY171234A (en) 2010-02-24 2019-10-04 Immunogen Inc Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof
NZ602176A (en) 2010-03-12 2015-01-30 Immunogen Inc Cd37-binding molecules and immunoconjugates thereof
WO2012019024A2 (en) 2010-08-04 2012-02-09 Immunogen, Inc. Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof
CN105399831A (zh) 2010-10-29 2016-03-16 伊缪诺金公司 非拮抗性egfr结合分子及其免疫偶联物
CA2815277A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Immunogen, Inc. Novel egfr-binding molecules and immunoconjugates thereof
US20120149732A1 (en) 2010-12-14 2012-06-14 Alexander Chucholowski Multifunctional linkers and methods for the use thereof
PL2675479T3 (pl) 2011-02-15 2016-09-30 Cytotoksyczne pochodne benzodiazepiny
MX2013011201A (es) 2011-03-29 2013-12-16 Immunogen Inc Proceso para la elaboracion de conjugados de mejor homogeneidad.
SG193997A1 (en) 2011-03-29 2013-11-29 Immunogen Inc Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
CN107537040A (zh) 2011-03-29 2018-01-05 伊缪诺金公司 通过一步法制备类美登素抗体缀合物
UA125636C2 (uk) 2011-04-01 2022-05-11 Іммуноджен, Інк. Способи ідентифікації раку, який може реагувати на анти-folr1 антитіло або анти-folr1 імунокон'югат
US20130071482A1 (en) 2011-09-20 2013-03-21 The University Of Kentucky Research Foundation Block copolymer cross-linked nanoassemblies as modular delivery vehicles
HK1203364A1 (en) 2011-12-13 2015-10-30 Immunogen, Inc. Use of n-hydroxysuccinimide to improve conjugate stability
RU2015116883A (ru) 2012-10-04 2016-11-27 Иммуноджен, Инк. Применение ионообменной мембраны для удаления примесей из конъюгатов клеточносвязывающего агента с цитотоксическим агентом
WO2014055842A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
AU2013326881B2 (en) 2012-10-04 2018-08-02 Immunogen, Inc. Use of a PVDF membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
ES2722924T3 (es) 2012-12-05 2019-08-20 Univ Heidelberg Ruprecht Karls Conjugados de proteínas y péptidos multivalentes de penetración celular y sus usos

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04266829A (ja) * 1990-11-15 1992-09-22 Brunswick Corp 免疫結合体を形成するための抗体の化学修飾
WO1999005317A1 (en) * 1997-07-28 1999-02-04 The New York Blood Center, Inc. Method for purifying viral nucleic acids
JP2008531484A (ja) * 2005-02-11 2008-08-14 イムノゲン インコーポレーティッド 安定な薬物複合体を調製するための方法
JP2009506032A (ja) * 2005-08-24 2009-02-12 イムノゲン インコーポレーティッド メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）抗体複合体の調製方法
JP2010533703A (ja) * 2007-07-19 2010-10-28 サノフイ−アベンテイス 新規トマイマイシン誘導体を含む細胞毒性剤およびこれらの治療的使用
WO2011039724A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 Sanofi-Aventis Antibodies that specifically bind to the epha2 receptor

Also Published As

Publication number Publication date
HK1213288A1 (zh) 2016-06-30
US10035817B2 (en) 2018-07-31
MX359599B (es) 2018-09-12
IL238110B (en) 2019-08-29
IN2015DN03202A (ja) 2015-10-02
SG10201702737TA (en) 2017-05-30
IL238110A0 (en) 2015-05-31
ZA201502992B (en) 2019-10-30
CA2886993A1 (en) 2014-04-10
NZ707091A (en) 2018-12-21
RU2661083C2 (ru) 2018-07-11
US20190031712A1 (en) 2019-01-31
JP2020079294A (ja) 2020-05-28
JP6345181B2 (ja) 2018-06-20
JP2016502501A (ja) 2016-01-28
US20150225446A1 (en) 2015-08-13
CN109200290A (zh) 2019-01-15
EP2904089A4 (en) 2016-05-25
WO2014055877A1 (en) 2014-04-10
AU2013326881B2 (en) 2018-08-02
RU2015116882A (ru) 2016-11-27
EP2904089A1 (en) 2015-08-12
AU2018241056A1 (en) 2018-10-25
RU2018122734A (ru) 2018-07-24
MX2015004257A (es) 2016-02-09
SG11201502429YA (en) 2015-04-29
CN105209592A (zh) 2015-12-30
AU2013326881A1 (en) 2015-05-07
IL268378A (en) 2019-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11090390B2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
JP6345181B2 (ja) 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートを精製するためのｐｖｄｆ膜の使用
AU2012236403B2 (en) Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
WO2012135522A2 (en) Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
US20150306242A1 (en) Process for preparing stable antibody maytansinoid conjugates
WO2013090590A1 (en) Use of n-hydroxysuccinimide to improve conjugate stability
JP2015535215A (ja) 細胞結合剤細胞毒性剤コンジュゲートから不純物を除去するためのイオン交換膜の使用
NZ616509B2 (en) Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
NZ616516B2 (en) Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
NZ712414B2 (en) Preparation of antibody maytansinoid conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20180621

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20180621

RD01 Notification of change of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426

Effective date: 20180810

RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20180810

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20180810

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20190507

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20190806

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20191008