JP2018141021A - 高い炭水化物抗原密度を有するワクチン及び新規サポニンアジュバント - Google Patents

Abstract

【課題】高い炭水化物抗原密度を有するワクチン及び新規サポニンアジュバントを提供する。【解決手段】本発明は、担体タンパク質としてのジフテリア毒素（ＤＴ）と組み合わせる炭水化物抗原を含むワクチンを提供し、炭水化物抗原分子と担体タンパク質分子との数の比が５：１以上である。また、本発明は、新規サポニンアジュバントと、本発明が提供するワクチンの有効量を投与することによってがん細胞を抑制する方法を開示する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年１月４日出願の米国特許出願第６１／７４８，８８０号の優先権を主張し、その全開示を参照により本明細書に組み入れることとする。

がんワクチンは、身体を守るための自然な能力を強化することでがんを治療するように設計されている。特に、がんの治療方法である従来の外科手術、放射線治療及び化学療法に多くの欠点が存在しているので、がんワクチンは常に魅力的な治療方法である。しかし、がん関連炭水化物抗原の低免疫原性及び多くの合成ワクチンは主にＩｇＭと少ない程度のＩｇＧ抗体しか誘導されないを誘導するので、がんワクチンの有効性は依然として低いままである。免疫の認識及び活性化を促すように様々な方法、例えば、アジュバントの使用が発見されている。

現在では免疫応答、特にＩｇＧの免疫応答を向上させるためのがんワクチン及び有効なアジュバントを開発するという満たされていない需要が存在する。よって、本発明は、上記及び他の需要を満たすように炭水化物抗原に対するワクチン及びアジュバントを提供する。

この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１） 米国特許第８５４０９６４号明細書
（特許文献２） 国際公開第２０１３／１４２２４５号明細書
（特許文献３） 米国特許出願公開第２０１２／０３２８６４６号明細書
（特許文献４） 国際公開第２０１１／１５６７７４号明細書
（特許文献５） 国際公開第１９９６／０４０２４２号明細書
（特許文献６） 国際公開第２００９／１２６７３７号明細書
（非特許文献）
（非特許文献１） Ｙｅｎ−Ｌｉｎ Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ｂａｓｅｄ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｗｉｔｈ ａ ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ ａｄｊｕｖａｎｔ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ＰＮＡＳ Ｆｅｂｒｕａｒｙ １２，２０１３ ｖｏｌ．１１０ ｎｏ．７ ２５１７−２５２２

一実施例において、本発明は、炭水化物抗原又はその免疫原性断片を含むトキソイドタンパク質のワクチンを提供するものであり、炭水化物抗原とトキソイドタンパク質との比率が５：１〜３９：１の範囲内である。その比率は炭水化物抗原及びトキソイドタンパク質の分子数の比率を表す。炭水化物抗原とトキソイドタンパク質との比率が５：１〜３９：１の範囲内にあるワクチンのＩｇＧの産生は、炭水化物抗原とトキソイドタンパク質との比率が４：１以下にあるワクチンと比較してより高いことが発見された。

本発明の一実施例では、単離された式（Ｉ）の化合物、

又はその薬学的に許容される塩を提供し、
なお、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオース（β−Ｄ−Ａｐｉｏｓｅ）又はβ−Ｄ−キシロース（β−Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ）から選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ基、アルキル基（ａｌｋｙｌ）又は

から選択される。

本発明のもう一つの実施例では、医薬組成物を提供し、それは、式（Ｉ）の化合物、

又はその薬学的に許容される塩と、
薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供し、
なお、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオース又はβ−Ｄ−キシロースから選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ基、アルキル基又は

から選択される。

本発明の第３実施例では、１８５７化合物Ｖ１Ａ、１８５７化合物Ｖ１Ｂ、１８５７化合物Ｖ２Ａ及び１８５７化合物Ｖ２Ｂを含むＯＢＩ−８２１の新規サポニンアジュバントを提供する。

本発明の第４実施例では、炭水化物抗原又はその免疫原性断片と、ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントとを含むワクチンを提供する。一つの実施例において、ワクチンはさらに担体タンパク質を含む。ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントを含むワクチンのＩｇＧの産生、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性は、ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントを含まないワクチンと比較してより高いことが発見された。

本発明では、（ｉ）がん細胞が抑制されるように本明細書に記載のワクチンの有効量を需要のある個体に投与するステップを含むがん細胞を抑制するための方法と、（ｉｉ）本明細書に記載のワクチンの有効量を需要のある個体に投与するステップを含む免疫応答を誘導するための方法とに向けられている。

本発明はまた、本明細書に記載のワクチンと、薬学的に許容される賦形剤又は担体を含む医薬組成物を提供する。

先に理解しておきたいことは、これらの用語を含む記載は、本出願の主題又は後述する特許請求の範囲の解釈や範囲を限定するものではない。本出願における本発明の実施形態は、発明の概要に定義されるものではなく、後述する特許請求の範囲に定義されるものである。本発明の概要は、本発明の様々な態様の上位概念であり、さらに後述する発明を実施するための形態に係る概念の一部を導入するものである。発明の概要は、請求される主題の重要又は必要な特徴を特定すること、また請求される主題の範囲を単独で判断することを意図していない。本出願の主題は、明細書全体、いずれ又は全ての図面、及び特許請求の範囲の適切な部分を参照して理解されるべきである。

本発明は、添付の図面を参照して、下記の詳細な説明からより明らかになる。

本発明の例示的な実施例は、以下添付の図面を参照して、詳細に説明する。

図１Ａは、２４日目にＧｌｏｂｏ Ｈ／ＫＬＨ／ＯＢＩ−８２１サポニン、Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ／ＯＢＩ−８２１サポニン、Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ／Ｃ３４及びＧｌｏｂｏ Ｈ／ＫＬＨ／Ｃ３４の組成物の抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ ＩｇＧ力価の棒グラフである。図１Ｂは、２４日間にわたる図１Ａに記載された組成物の抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ ＩｇＧ力価の折れ線グラフである。 図２は、２４日間にわたるマウスにおけるＧ２ワクチン（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（８：１））、Ｇ３ワクチン（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（８：１）／ＯＢＩ−８２１）及びＧ４ワクチン（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（２４：１）／ＯＢＩ−８２１）のｉｎ ｖｉｖｏ ＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を示す棒グラフの集合である。図２Ａは、ＡＤＣＤの生データであり、図２Ｂは、ＡＤＣＤの正規化データであり、図２Ｃは、ＣＤＣの生データであり、図２Ｄは、ＣＤＣの正規化データである。 図３Ａ及び図３Ｂは、２４日間にわたる下記組成物の総合的なＩｇＭ及びＩｇＧ力価の折れ線グラフである：Ｇ１（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＫＬＨ／ＯＢＩ−８２１）、Ｇ２（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（３：１）／ＯＢＩ−８２１）、Ｇ３及びＧ４（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（８：１）／ＯＢＩ−８２１）、Ｇ５（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（８：１）／Ｃ３４）、Ｇ６（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＫＬＨ／Ｃ３４）、Ｇ７（Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（１６：１）／ＯＢＩ−８２１）及びＧ８（ＰＢＳ）である。 図４は、１０日目、１７日目、２４日目に図３における組成物のＩｇＭ及びＩｇＧ応答を示す棒グラフの集合である：図（Ａ）〜（Ｃ）は、それぞれ１０日目、１７日目、２４日目の図３に記載された組成物のＩｇＭ応答であり、図（Ｄ）〜（Ｆ）は、それぞれ１０日目、１７日目、２４日目の図３に記載された組成物のＩｇＧ応答である。 図４は、１０日目、１７日目、２４日目に図３における組成物のＩｇＭ及びＩｇＧ応答を示す棒グラフの集合である：図（Ａ）〜（Ｃ）は、それぞれ１０日目、１７日目、２４日目の図３に記載された組成物のＩｇＭ応答であり、図（Ｄ）〜（Ｆ）は、それぞれ１０日目、１７日目、２４日目の図３に記載された組成物のＩｇＧ応答である。 図５Ａ〜５Ｃは、ＯＢＩ−８２１（１９８９及び１８５７化合物を含む）の質量スペクトル画像である。 図５Ａ〜５Ｃは、ＯＢＩ−８２１（１９８９及び１８５７化合物を含む）の質量スペクトル画像である。 図５Ａ〜５Ｃは、ＯＢＩ−８２１（１９８９及び１８５７化合物を含む）の質量スペクトル画像である。 図６は、ＯＢＩ−８２１のＬＣ−ＵＶクロマトグラム画像である。 図７は、ＯＢＩ−８２１のＬＣ／ＭＳクロマトグラム画像の集合である。

本発明をより明確に理解するために、本明細書で特定の用語が定義される。特に明記しない限り、本明細書に用いられる全ての技術及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。

本明細書に使用される「有効量」という用語は、がんの症状及び徴候を改善するワクチン又は医薬組成物の投与量を指す。その症状及び徴候は、体重の減少、痛み及び臨床的に触知可能な塊又は放射線学的に様々な撮像手段を通して検出可能な腫瘍塊が含まれるが、これらに限定されない。

「個体」という用語は、がんを患う脊椎動物又はがんの治療が必要とされる脊椎動物を指す。個体としては、温血動物、例えば、哺乳動物、例えば、霊長類動物、好ましくはヒトである。非ヒト霊長類も個体に含まれる。「個体」という用語は、飼育動物（例えば、猫、犬等）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ等）及び実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、スナネズミ、モルモット等）が含まれる。よって、獣医学的使用及び医学的製剤は本明細書において意図される。

本明細書に使用される「アルキル基」という用語は、特に説明しない限り、炭素数１〜２０（例えば、Ｃ１〜Ｃ８或いはＣ１〜Ｃ４）の置換又は非置換の直鎖状又は分岐状の一価の炭水化物を指す（他の鎖長、例えば、２１〜３０個は、本発明に含まれる）。アルキル基の例は、メチル（ｍｅｔｈｙｌ）、エチル（ｅｔｈｙｌ）、ｎ−プロピル（ｎ−ｐｒｏｐｙｌ）、ｉ−プロピル（ｉ−ｐｒｏｐｙｌ）、ｎ−ブチル（ｎ−ｂｕｔｙｌ）、ｉ−ブチル（ｉ−ｂｕｔｙｌ）及びｔ−ブチル（ｔ−ｂｕｔｙｌ）が含まれるが、これらに限定されない。

「実質的に純粋な」という用語は、自然な状態のサポニンに結合され、且つ一定及び再現可能なクロマトグラム応答、溶出像及び生物活性を示す化合物が含まれないことを指す。「実質的に純粋な」という用語は、サポニンと他の化合物の人工的又は合成的な混合物を排除する意味ではない。

本発明における全ての数字は、「約」という用語で修飾することができると理解される。

炭水化物の比率の高いワクチン
腫瘍関連炭水化物抗原は、一般的に弱い免疫原性を示す。担体タンパク質と結合（コンジュゲート）させた炭水化物抗原を採用することによって、その炭水化物抗原の免疫原性を向上させる。例えば、約７００個のＧｌｏｂｏ Ｈ分子は１個の無毒性のキーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）タンパク質に結合され、平均約２〜４個のＧｌｏｂｏ Ｈ分子はジフテリア毒素（ＤＴ）に結合され、約８個のＧｌｏｂｏ Ｈ分子はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）に結合され、且つ約６個のＧｌｏｂｏ Ｈ分子は破傷風トキソイドに結合される（米国特許第８，２６８，９６９号の表１）。

本発明は、炭水化物抗原又はその免疫原性断片と、トキソイドタンパク質とを含むワクチンを提供し、炭水化物抗原とトキソイドタンパク質との比率が５：１〜３９：１の範囲内である。その比率は炭水化物抗原又はその免疫原性断片の分子数とトキソイドタンパク質の分子数との比率を反映する。そのワクチンは、炭水化物抗原の分子数とトキソイドタンパク質の分子数との比率が４：１以下にあるワクチンと比較して優れた免疫原性を有する。本発明も他の範囲、即ち、炭水化物抗原又はその免疫原性断片の分子数とトキソイドタンパク質の分子数との比率が４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２１：１、２２：１、２３：１、２４：１、２５：１、２６：１、２７：１、２８：１、２９：１、３０：１、３１：１、３２：１、３３：１、３４：１、３５：１、３６：１、３７：１、３８：１又は３９：１の範囲を含む。

一実施例において、トキソイドタンパク質は破傷風トキソイド（ＴＴ）であり、炭水化物−ＴＴのワクチン中の炭水化物抗原とＴＴとの比率が７：１〜２４：１の範囲内である。

本発明は、炭水化物抗原又はその免疫原性断片と、ジフテリア毒素（ＤＴ）とを含むワクチンを提供し、炭水化物抗原とＤＴとの比率が５：１〜３９：１の範囲内である。その比率は炭水化物抗原又はその免疫原性断片の分子数とＤＴの分子数との比率を反映する。もう一つの実施例において、炭水化物−ＤＴのワクチン中の炭水化物抗原とＤＴとの比率が８：１〜２４：１の範囲内である。

炭水化物抗原の例は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、胚発生段階特異抗原３（ＳＳＥＡ３）（Ｇｂ５とも呼ばれる）、胚発生段階特異抗原４（ＳＳＥＡ４）、Ｇｂ−４、Ｇｂ−３、ルイス抗原、（例えば、ｓＬｅ^ｘ、Ｌｅ^ｘ、ｓＬｅ^ａ、Ｌｅ^ａ、Ｌｅ^ｙ）、多糖体抗原（例えば、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ｓＴｎ（ｃ）、Ｔｎ（ｃ）、トムソン・フリーデンライヒ抗原（Ｔｈｏｍｓｅｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ ａｎｔｉｇｅｎ，ＴＦ（ｃ）））、ガングリオシド（ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ）（例えば、ＧＤ１、ＧＤ２、ＧＤ３、フコシル、ＧＭ１、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＭ３、ＧＤ１α及びＧＭ２）が含まれるが、これらに限られない。他の炭水化物抗原は、α−ガラクトース（α−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、α−マンノース−６−りん酸（α−Ｍａｎ−６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、α−Ｌ−ラムノース（α−Ｌ−Ｒｈａｍｎｏｓｅ）、α−ＧａｌＮＡｃ（Ｔｎ）、α−ＮｅｕＡｃ−ＯＣＨ_２Ｃ_６Ｈ_４−ｐ−ＮＨＣＯＯＣＨ_２、Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧａｌＮＡｃβ（Ｈ ｔｙｐｅｓ３）、ＮｅｕＡｃα２−８ＮｅｕＡｃα、（ＮｅｕＡｃα２−８）２ポリシアル酸、ＮｅｕＡｃａ２−６Ｇａｌｂ、ＮｅｕＡｃｂ２−６Ｇａｌａ（ＳＴｎ）、Ｇａｌａ１−３Ｇａｌｂ１−４ＧｌａＮＡｃｂ （ＮｅｕＡｃａ２−８）３、ＧａｌＮＡｃαａ−３（Ｆｕｃα１−２）Ｇａｌβ（血液型Ａ）、Ｇａｌα１−３（Ｆｕｃα１−２）Ｇａｌβ（血液型Ｂ）、６Ｇａｌ−ＨＳＯ_３−ＳｉａＬｅｘ、６ＧｌｕＮＡｃ−ＨＳＯ_３−ＳｉａＬｅｘ及びα２−６６−シアリル化二分岐Ｎ−グリカン（α２−６ ｓｉａｌｙｌａｔｅｄ ｄｉａｎｔｅｎｎａｒｙ Ｎ−ｇｌｙｃａｎｓ）が含まれるが、これらに限られない。一実施例において、炭水化物抗原はＧｌｏｂｏ Ｈである。「Ｇｌｏｂｏ Ｈ」は、ヒト乳癌細胞系のＭＣＦ−７（Ｍｅｎａｒｄ Ｓ、Ｔａｇｌｉａｂｕｅ Ｅ、Ｃａｎｅｖａｒｉ Ｓ、Ｆｏｓｓａｔｉ Ｇ、Ｃｏｌｎａｇｈｉ ＭＩ （１９８３） Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｒｅａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ． ＣａｎｃｅｒＲｅｓ， ４３， １２９５−３００；及びＢｒｅｍｅｒ ＥＧ、Ｌｅｖｅｒｙ ＳＢ、Ｓｏｎｎｉｎｏ Ｓ、Ｇｈｉｄｏｎｉ Ｒ、Ｃａｎｅｖａｒｉ Ｓ、Ｋａｎｎａｇｉ Ｒ、Ｈａｋｏｍｏｒｉ Ｓ． （１９８４） Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｇｌｙｃｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＭＢｒ１ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍａｍｍａｒｙ ｇｌａｎｄ． Ｊ ＢｉｏｌＣｈｅｍ， ２５９， １４７７３−７）から単離された６糖類（Ｆｕｃα１→２Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１）である。Ｇｌｏｂｏ Ｈは、様々な上皮細胞腫瘍、例えば、結腸癌、卵巣癌、胃癌、膵臓癌、子宮内膜癌、肺癌、前立腺癌及び乳癌（Ｍｅｎａｒｄ Ｓ ｅｔ ａｌ． ｓｕｐｒａ； Ｂｒｅｍｅｒ ＥＧ ｅｔ ａｌ．， ｓｕｐｒａ； Ｃａｎｅｖａｒｉ Ｓ， Ｆｏｓｓａｔｉ Ｇ， Ｂａｌｓａｒｉ Ａ， Ｓｏｎｎｉｎｏ Ｓ， Ｃｏｌｎａｇｈｉ ＭＩ． （１９８３））に発現される。ＧｌｏｂｏＨは、市販（例えば、Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ， ＵＫ）又は当該技術分野において公知の方法によってグリコシドをセラミドに結合するように合成することができる。

炭水化物抗原とトキソイドタンパク質との比率が５：１以上にあるワクチンは、塩基性の条件下、即ち、８を超える又はそれに等しいｐＨ値、９を超える又はそれに等しいｐＨ値、１０を超える又はそれに等しいｐＨ値、１１を超える又はそれに等しいｐＨ値、又は１２を超える又はそれに等しいｐＨ値において製造される。炭水化物抗原とトキソイドタンパク質との比率は、当該技術分野において公知の方法、例えば、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されることができる。米国特許第８，２６８，９６９号、及びＭｏｒｅｌｌｅ Ｗ， Ｆａｉｄ Ｖ， Ｃｈｉｒａｔ Ｆ， Ｍｉｃｈａｌｓｋｉ ＪＣ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ． ２００９； ５３４： ５−２１． ｄｏｉ： １０．１００７／９７８−１−５９７４５−０２２−５＿１． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎ− ａｎｄ Ｏ−ｌｉｎｋｅｄ ｇｌｙｃａｎｓ ｆｒｏｍ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｕｓｉｎｇ ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙも参照されたい。

当該ワクチンは、アジュバントをさらに含むことができ、そのアジュバントはサポニン、例えば、本明細書に記載されたＯＢＩ−８２１、又はαーガラクトシルセラミド（α−Ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ−ｃｅｒａｍｉｄｅ）の合成アナログ（α−ＧａｌＣｅｒ又はＣ１）である。

「αーガラクトシルセラミド」及び「α−ＧａｌＣｅｒ」という用語は、ナチュラルキラーＴ細胞を刺激してヘルパーＴ（ＴＨ）１およびＴＨ２サイトカインの両者を産生する糖脂質を指し、例えば、米国特許第８，２６８，９６９号に開示され、その全開示を参照により本明細書に組み入れることとする。一実施例において、α−ＧａｌＣｅｒのアジュバントは、下記の構造を有する。

なお、Ｒは、（ＣＨ_２）_２４ＣＨ_３、（ＣＨ_２）_７ＰｈＦ、（ＣＨ_２）_１０ＰｈＯＰｈＦ又は（ＣＨ_２）_１０ＰｈＦである。

一実施例において、Ｒが（ＣＨ_２）_１０ＰｈＯＰｈＦであり、下記の構造を有するＣ３４のアジュバントとして知られている。

新規サポニンアジュバント
本発明は、実質的に純粋なＯＢＩ−８２１サポニンを提供することができる。本発明は、実質的に純粋なＯＢＩ−８２１サポニンと、生物活性断片とを含むものである。本発明もまた、不純なＯＢＩ−８２１サポニンを含むことができる。精製したＯＢＩ−８２１サポニンは、本明細書に記載されたワクチンと共に投与する、或いはそれを他の実質的に純粋なサポニン又は非サポニンのジュバントと混合する場合、アジュバントの効果を高めることを示した。

ＯＢＩ−８２１サポニンは、天然に存在するグリコシドであり、例えば、米国特許第５，０５７，５４０号、及び米国特許第６，５２４，５８４号（その内容が本明細書にその全体を参照により援用される）に開示された高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、低圧液体シリカクロマトグラフィー及び親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）によってキラジャサポナリアモリナコルテックス樹（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ ｔｒｅｅ）の皮から高純度で抽出される。高圧液体クロマトグラフィー分析では、ＯＢＩ−８２１は構造に関連する異性化合物の混合物であることを示した。ＯＢＩ−８２１サポニンの異なる精製異性化合物は確認されて本明細書に記載されている。

ＯＢＩ−８２１サポニンは、少なくとも一つの下記単離された式（Ｉ）の化合物を含む。

なお、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオース又はβ−Ｄ−キシロースであり、
Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれＨ基、アルキル基、

（１９８９化合物の脂肪アシル基部分（Ｆａｔｔｙ ａｃｙｌ ｍｏｉｅｔｙ））、又は

（１８５７化合物の脂肪アシル基部分）である。

ＯＢＩ−８２１サポニンは、下記単離された式（Ｉ）の化合物をさらに含んでもよい：（ｉ）Ｒ^１はβ−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２は上記の１９８９化合物の脂肪アシル基部分であり、Ｒ^３はＨ基であり（１９８９化合物Ｖ１Ａ）、（ｉｉ）Ｒ^１はβ−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２はＨ基であり、Ｒ^３は上記の１９８９化合物の脂肪アシル基部分であり（１９８９化合物Ｖ１Ｂ）、（ｉｉｉ）Ｒ^１はβ−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２は上記の１９８９化合物の脂肪アシル基部分であり、Ｒ^３はＨ基であり（１９８９化合物Ｖ２Ａ）、又は（ｉｖ）Ｒ^１はβ−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２はＨ基であり、Ｒ^３は上記の１９８９化合物の脂肪アシル基部分であり（１９８９化合物Ｖ２Ｂ）である。総称として、１９８９化合物Ｖ１Ａ、１９８９化合物Ｖ１Ｂ、１９８９化合物Ｖ２Ａ及び１９８９化合物Ｖ２Ｂは、「１９８９化合物の混合物」と呼ばれる。

表１は、１９８９化合物の混合物中に１９８９化合物の官能基及び各１９８９化合物のモル％をまとめたものである。

ＯＢＩ−８２１サポニンは、下記単離された式（Ｉ）の化合物を含んでもよい：（ｉ）Ｒ^１はβ−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２は上記の１８５７化合物の脂肪アシル基部分であり、Ｒ^３はＨ基であり（１８５７化合物Ｖ１Ａ）、（ｉｉ）Ｒ^１はβ−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２はＨ基であり、Ｒ^３は上記の１８５７化合物の脂肪アシル基部分であり（１８５７化合物Ｖ１Ｂ）、（ｉｉｉ）Ｒ^１はβ−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２は上記の１８５７化合物の脂肪アシル基部分であり、Ｒ^３はＨ基であり（１８５７化合物Ｖ２Ａ）、又は（ｉｖ）Ｒ^１はβ−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２はＨ基であり、Ｒ^３は上記の１８５７化合物の脂肪アシル基部分であり（１８５７化合物Ｖ２Ｂ）である。総称として、１８５７化合物Ｖ１Ａ、１８５７化合物Ｖ１Ｂ、１８５７化合物Ｖ２Ａ及び１８５７化合物Ｖ２Ｂは、「１８５７化合物の混合物」と呼ばれる。

表２は、１８５７化合物の混合物中に１８５７化合物の官能基及び各１８５７化合物のモル％をまとめたものである。

ＯＢＩ−８２１サポニンは、一つ又は複数の下記化合物を含む：（ｉ）１８５７化合物Ｖ１Ａ、（ｉｉ）１８５７化合物Ｖ１Ｂ、（ｉｉｉ）１８５７化合物Ｖ２Ａ、（ｉｉｉ）１８５７化合物Ｖ２Ｂ、（ｉｖ）１９８９化合物Ｖ１Ａ、（ｖ）１９８９化合物Ｖ１Ｂ、（ｖｉ）１９８９化合物Ｖ２Ａ、又は（ｖｉｉ）１９８９化合物Ｖ２Ｂである。ＯＢＩ−８２１サポニンにおける１８５７化合物の混合物と１９８９化合物の混合物との百分率が下記範囲内にある：
（ｉ）約１モル％〜約１５モル％の１８５７化合物の混合物、及び
（ｉｉ）約８５モル％〜約９９モル％の１９８９化合物の混合物。

すべてのモル％は、０．１％の増加量で変更することができる（例えば、約８７％〜約９０％、約９０．５％〜約９７％、約３．５％〜約１１％、約１０〜約１４％）。

１９８９化合物の混合物は、約６０〜７０モル％の１９８９化合物Ｖ１Ａ、約１〜５モル％の１９８９化合物Ｖ１Ｂ、約３０〜４０モル％の１９８９化合物Ｖ２Ａ及び約０．１〜３モル％の１９８９化合物Ｖ２Ｂを含んでもよい。すべてのモル％は、０．１％の増加量で変更することができる（例えば、６５％、２．５％、３５．６％）。

１８５７化合物の混合物は、約６０〜７０モル％の１８５７化合物Ｖ１Ａ、約１〜５モル％の１８５７化合物Ｖ１Ｂ、約３０〜４０モル％の１８５７化合物Ｖ２Ａ及び約０．１〜３モル％の１８５７化合物Ｖ２Ｂを含んでもよい。すべてのモル％は、０．１％の増加量を変更することができる（例えば、６７％、１．５％、３３．９％）。

もう一つの実施例において、実質的に純粋なＯＢＩ−８２１は、粗キラジャサポナリアモリナコルテックス樹抽出物から精製され、そのＯＢＩ−８２１は、逆相ＨＰＬＣによって５μｍの粒度、１００オングストロームの孔サイズ、４．６ｍｍ ＩＤ × ２５ｃｍＬを有する対称Ｃ１８カラムに、流速１ｍｌ／ｍｉｎで移動相Ａが０．１％トリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）を含有する蒸留水であり、移動相Ｂが０．１％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）であり、且つＡ：Ｂが９５％：５％〜７５％：２５％の移動相を含む溶出プログラムを用いて１１分に分析する場合、溶媒ピークを除いて、クロマトグラムのすべてのピーク総面積の９０％又は以上を占める単一主要なピークであることを特徴とする。

一実施例において、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物と、薬学的に許容される担体と、
を含み、

なお、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオース又はβ−Ｄ−キシロースであり、
Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれＨ基、アルキル基又は

（１８５７化合物の脂肪アシル基部分）である。

当該ワクチンは、炭水化物抗原又はその免疫原性断片と、ＯＢＩ−８２１サポニンとを含んでもよい。もう一つの実施例において、ワクチンは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、Ｇｂ−４又はその混合物から選択される炭水化物抗原と、ＤＴと、ＯＢＩ−８２１サポニンとを含む。また一つの実施例において、ワクチンは、炭水化物抗原又はその免疫原性断片と、担体タンパク質と、ＯＢＩ−８２１サポニンとを含む。担体タンパク質の非限定的な例は、トキソイドタンパク質と、非トキソイドタンパク質（例えば、ＫＬＨ）とを含む。

トキソイドタンパク質
炭水化物抗原と結合されたトキソイドタンパク質は、ジフテリア毒素（ＤＴ）又は破傷風トキソイド（ＴＴ）であってもよい。

毒素は、例えば、ホルムアルデヒド（ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）、グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ）、ＵＤＰ−ジアルデヒド（ＵＤＰ−ｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ）、過酸化物（ｐｅｒｏｘｉｄｅ）、酸素（ｏｘｙｇｅｎ）での処理又は変異（例えば、組換え法を用いる）により、不活化することができる。Ｒｅｌｙｖｅｌｄ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ９３：２４， １９８３． Ｗｏｏｄｒｏｗ ａｎｄ Ｌｅｖｉｎｅ， ｅｄｓ．， Ｎｅｗ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８９． Ｇｅｎｔｈ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｆ． ａｎｄ Ｉｍｍｕｎ．， ６８（３）：１０９４−１１０１， ２０００．組換え法を用いて毒性の低減した変異ジフテリア毒素を生産する。米国特許第５，０８５，８６２号、米国特許第５，２２１，６１８号、米国特許第５，２４４，６５７号、米国特許第５，３３２，５８３号、米国特許第５，３５８，８６８号、米国特許第５，４３３，９７５号。

ＤＴはジフテリア毒素交差反応物質（ＤＴ−ＣＲＭ）又はジフテリアトキソイドである。ＤＴ−ＣＲＭは、変異ジフテリア毒素であり、例えば、変異又は化学修飾によって十分なＡＤＰ−リボシル基を有しないようにする。ＤＴ−ＣＲＭの非限定的な例は、ＤＴ−ＣＲＭ ３０、ＤＴ−ＣＲＭ ４５、ＤＴ−ＣＲＭ １７６、ＤＴ−ＣＲＭ １９７及びＤＴ−ＣＲＭ ２２８を含む。ジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒドで不活化されたジフテリア毒素である。ＤＴは、市販又は当該技術分野において公知の方法によって調製することができ、例えば、米国特許第５，６１４，３８２号に記載の組換えＤＮＡ技術、その全開示を参照により本明細書に組み入れることとする。

本明細書に記載されたワクチンの炭水化物抗原は、米国特許第５，６１４，３８２号に記載の合成方法によってｐ−ニトロフェニルリンカー（ｐ−ｎｉｔｒｔｏｐｈｅｎｙｌ ｌｉｎｋｅｒ）を通じて担体タンパク質と共役されることができ、その全開示を参照により本明細書に組み入れることとする。

本発明のワクチンは、一つ又は複数の下記活性を誘導することができる：ＩｇＭ力価より高いＩｇＧ力価、より高い補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性及び／又はより高い抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性である。もう一つの実施例において、ワクチンは、一つ又は複数の下記細胞を誘導することができる：ナチュラルキラー細胞、ＣＤ４＋ Ｔリンパ球又はＣＤ８＋ Ｔリンパ球であり。他の測定可能な免疫学的パラメータは、Ｔヘルパー細胞の活性化を含むが、これらに限定されない。

本発明もまた、本明細書に記載されたワクチンと、薬学的に許容される媒剤と、賦形剤又は担体とを含む医薬組成物を提供する。適切な媒剤は、例えば、水、生理食塩水、右旋糖（ｄｅｘｔｒｏｓｅ）、グリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、エタノール（ｅｔｈａｎｏｌ）又はそれらの類似物、及びそれらの組み合わせである。また、媒剤は、他の賦形剤、例えば、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤又はアジュバントを含んでもよい。薬学的に許容される担体は、医薬組成物の吸収又はクリアランス率を向上又は低下させるための生理学的に許容される化合物を含んでもよい。生理学的に許容される化合物は、例えば、炭水化物（例えば、グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）又はデキストラン（ｄｅｘｔｒａｎｓ））、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）又はグルタチオン（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ））、キレート剤、低分子量タンパク質、洗剤、リポソーム担体又は他の安定剤及び／又は緩衝剤を含んでもよい。賦形剤は、非イオン界面活性剤、ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｏｌｌｉｄｏｎｅ）、ヒト血清アルブミン、水酸化アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、麻酔作用を有する薬剤、様々な非修飾及び誘導体化されたシクロデキストリン（ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ）であってもよい。好ましくは、非イオン界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０を含んでもよい。好ましくは、ポリビニルピロリドンは、Ｐｌａｓｄｏｎｅ Ｃ１５（医薬品グレードのポリビニルピロリドン）であってもよい。麻酔作用を有する薬剤は、ベンジルアルコール（ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ）であることが好ましい。他の生理学的に許容される化合物は、湿潤剤、乳化剤、分散剤又は防腐剤である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ」）を参照する。本発明の医薬組成物は、補助物質、例えば、薬剤、サイトカイン又は他の生物応答修飾剤をさらに含んでもよい。その賦形剤又は担体を含む医薬組成物は公知の方法によって調製される。

当該ワクチンは、下記投与経路に適するように製剤化することができる：吸入投与又は皮下投与を介する筋肉内投与、皮内投与、経口投与、経皮投与、経鼻投与、経頬投与、経直腸投与、経膣投与である。好適な免疫原性を誘導すれば、他の投与経路を用いることもできる。

本発明の医薬組成物は、液体溶液または懸濁液として、或いは注射前に液体媒剤中の溶液又は懸濁物に適するような固体形態として、注射可能物質を調製されることができる。医薬組成物もまた、固体形態、乳化、活性成分を封入されたリポソーム製剤又は持続送達するための微粒子担体で調製されることができる。例えば、医薬組成物は、ワクチンを持続的に放出させることのできるように、例えば、エチレン酢酸ビニルコポリマー（ｅｔｈｙｌｅｎｅｖｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ）およびＨｙｔｒｅｌ（登録商標）コポリマーの非吸収性不浸透性ポリマー、例えば、ヒドロゲルの膨潤性ポリマー、または再吸収性縫合糸の作成に利用されるようなコラーゲンおよび特定のポリ酸またはポリエステルの再吸収性ポリマー、油乳剤、油中水型乳剤、水中油中水型乳剤、部位特定の乳剤、持続性（ｌｏｎｇ−ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ）乳剤、粘着性乳剤（ｓｔｉｃｋｙｅｍｕｌｓｉｏｎ）、マイクロエマルション、ナノエマルション、リポソーム、微小粒子、ミクロスフェア、ナノスフェア、ナノ粒子、および様々な天然または合成ポリマーの形態とすることができる。

本発明の化合物の薬学的に許容される塩及びその生理学的機能性誘導体は、例えば、アルカリ金属（例えば、ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ）、カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ））、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ）、マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ））、アンモニウム（ａｍｍｏｎｉｕｍ）及びＮＸ_４ ^＋（ＸはＣ_１−Ｃ_４アルキル基）の適切な塩基から誘導される塩である。アミノ基の薬学的に許容される塩は、有機カルボン酸（ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄｓ）の塩、例えば、酒石酸、脂肪族、脂環式、芳香族、複素環式、カルボン酸及びスルホン酸クラスの有機酸、例えば、ギ酸、グルクロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、サリチル酸、ヒドロキシ安息香酸（ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ）、フェニル酢酸（ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃ）、マンデル酸（ｍａｎｄｅｌｉｃ）、エンボン酸（パモ酸）（ｅｍｂｏｎｉｃ （ｐａｍｏｉｃ））、メタンスルホン酸（ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ）、エタンスルホン酸（ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ）、ベンゼンスルホン酸（ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ）、パントテン酸（ｐａｎｔｏｔｈｅｎｉｃ）、トルエンスルホン酸（ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ）、２−ヒドロキシエタンスルホン酸（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ）、スルファニル酸（ｓｕｌｆａｎｉｌｉｃ）、ステアリン酸（ｓｔｅａｒｉｃ）、アルギン酸（ａｌｇｅｎｉｃ）、ヒドロキシ酪酸（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒｉｃ）、シクロヘキシルアミノスルホン酸（ｃｙｃｌｏｃｈｅｘｙｌａｍｉｎｏｓｕｌｆｏｎｉｃ）、ガラクタル酸（ｇａｌａｃｔａｒｉｃ）及びガラクツロン酸（ｇａｌａｃｔｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、及びそれらの類似物、ラクトビオン酸（ｌａｃｔｏｂｉｏｎｉｃ）、フマル酸、及びこはく酸、有機スルホン酸、例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、イセチオン酸（ｉｓｏｔｈｉｏｎｉｃ）、ベンゼニルスルホン酸（ｂｅｎｚｅｎｙｌｅｓｕｌｆｏｎｉｃ）及びｐ−トルエンスルホン酸（ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄｓ）、及び無機酸、例えば、塩化水素酸（ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ）、臭化水素酸（ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｃ）、ヨウ化水素酸（ｈｙｄｒｏｉｏｄｉｃ）、硝酸、炭酸、硫酸、スルファミン酸及びりん酸、及びそれらの類似物が含まれる。ヒドロキシ基（ｈｙｄｒｏｘｙ ｇｒｏｕｐ）を含有する化合物の薬学的に許容される塩は、前記化合物のアニオンを、たとえば、Ｎａ^＋、ＮＨ_４ ^＋又はＮＸ_４ ^＋（式中、Ｘは、例えばＣ_１〜Ｃ_４アルキル基である）、Ｃａ^＋＋、Ｌｉ^＋、Ｍｇ^＋＋、又はＫ^＋及び亜鉛という好適なカチオンと組み合わせるもの、或いは第一級、第二級及び第三級アミン、環状アミン、Ｎ，Ｎ’ジベンジルエチレンジアミン（Ｎ，Ｎ’−ｄｉｂｅｎｚｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ）、クロロプロカイン（ｃｈｌｏｒｏｐｒｏｃａｉｎｅ）、コリン、ジエタノールアミン（ｄｉｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）、エチレンジアミン（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ）、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）（ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ （Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｃａｍｉｎｅ））、及びプロカイン（ｐｒｏｃａｉｎｅ）及びそれらの類似物から製造される有機塩である。これらすべての塩は、従来の方法に従って対応する化合物から調製され、例えば、適切な酸又は塩基を遊離形態の化合物と反応させて調製することができる。

免疫応答を誘導する／がん細胞を抑制する方法
本発明のもう一つの態様は、免疫応答を誘導する方法に関するものであり、それは本明細書に記載のワクチンを需要のある個体に投与するステップを含む。免疫応答は、ＮＫ細胞応答、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性、及びＩｇＭとＩｇＧの産生を含むが、これらに限定されない。

もう一つの態様において、本発明は、がん細胞を抑制する方法を提供するものであり、それは本明細書に記載のワクチンを需要のある個体に投与するステップを含む。一実施例において、がんは、乳癌、肺癌、食道癌、直腸癌、胆管癌、肝癌、頬癌、胃癌、結腸癌、鼻咽頭癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ／ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、脳腫瘍、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚部癌、子宮内膜癌、膵臓癌、睾丸癌、膀胱癌、頭頚部癌、口腔癌、神経内分泌癌、副腎癌、甲状腺癌、骨癌、皮膚癌（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌又は黒色腫）から選択される。もう一つの実施例において、がんは、Ｇｌｏｂｏ Ｈを発現するがんである。Ｇｌｏｂｏ Ｈを発現するがんの非限定的な例は、乳癌、肺癌、胃癌、結腸癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌及び子宮内膜癌が含まれる。ワクチンにより生成された抗体（例えば、Ｇｌｏｂｏ Ｈ抗体）は、本質的にＧｌｏｂｏ Ｈを発現する癌を抑制する。

特定の実施形態において、ワクチンの有効量は、所望の免疫効果を誘導するための量であり、例えば、個体における特定の炭水化物抗原（例えば、Ｇｌｏｂｏ Ｈ）に対するＩｇＧの産生を刺激するための量である。ワクチン又は医薬組成物の有効量又は投与量は、炭水化物抗原量、用いられたアジュバントの種類、投与経路及び治療される個体の年齢、体格及び病状に応じて変更する。免疫原性を誘導するためのワクチン又は医薬組成物の精確な量は、医師により決定される。

当該ワクチンは、数か月から数年の間の長期の免疫保護効果を達成するために、特定の時間間隔で単回又は複数回の追加抗原投与量を有する又は有しない開始用量（ｓｔａｔ ｄｏｓｅ）として投与可能である。投与頻度は、様々な要因、例えば、症状の重症度、望ましい免疫保護の程度、前記組成物が予防または治療目的で使用するか否かなどによって変化することができる。例えば、一実施例において、本発明の前記組成物が月１回、月２回、月３回、隔週（ｑｏｗ）、週１回（ｑｗ）、週２回（ｂｉｗ）、週３回（ｔｉｗ）、週４回、週５回、週６回、隔日（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）で投与される。当該ワクチンもまた、他の従来の治療、例えば、化学療法、標的治療又はがん治療のための腫瘍関連炭水化物抗原を標的とする抗体を同時又は順次に投与することができる。

本発明は、更に下の例によって説明され、但し、それらは説明の目的で提供するものであり、本発明を限定することを企図するものではない。本発明に記載された特定の実施例に本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなくに様々な変更及び修正が可能であり、且つ同様又は類似の結果を得ることは、当業者によって理解されるものである。

実施例１：炭水化物／トキソイドタンパク質の比率の高いワクチンの調製及びＯＢＩ−８２１の抽出
Ｇｌｏｂｏ Ｈは、当該技術分野において公知の方法を通してＫＬＨ又はＤＴと結合され、例えば、米国特許第６，５４４，９５２号又は第８，２６８，９６９号に記載の方法に従って、その全開示を参照により本明細書に組み入れることとする。得られたワクチンは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ：ＤＴ（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率＝２〜４：１）を含む。

複合糖質を生産させる基本手順
複合糖質は以下のように調製する。

ＢＳＡ、ＤＴ−ＣＲＭ１９７、および破傷風トキソイド（Ａｄｉｍｍｕｎｅ、台湾）をｐＨ７．２の１００ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（約５ｍｇ／ｍｌ）、３０〜４０当量のＧｌｏｂｏ Ｈハーフエステル３５を加える。混合物を室温で２４時間穏やかに攪拌する。次に、前記混合物を脱イオン水で希釈し、脱イオン水を５回取り換ながら透析する。そしてその溶液を凍結乾燥して白色粉末にする。得られたＧｌｏｂｏ Ｈ−タンパク質結合体をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析によって特徴づけられ、炭水化物組み込み率を測定することができる。４１（ＧＨ−ＢＳＡ）はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦで７６０２９に観測され、４２（ＧＨ−ＤＴ−ＣＲＭ１９７）は６２１８３に観測され、４３（ＧＨ−ＴＴ）は１６２９０２に観測され、４４（ＧＨ−ＢａＭＶ）は測定されなかった。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで複合糖質を分析する。複合糖質および一次担体タンパク質はｄｄＨ_２Ｏ（約１μｇ／μｌ）で戻すことができる。マトリックスであるシナピン酸（ｓｉｎａｐｉｎｉｃ ａｃｉｄ）をアセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）および脱イオン水１：１で新たに調製し、最終マトリックスを０．１％のＴＦＡを含む１０ｍｇ／ｍＬの濃度にする。マトリックスおよび複合糖質を穏やかにロードして混合した後、プレートを空気乾燥させた。測定前にウシ血清アルブミンを用いる校正が必要である。各複合糖質および一次タンパク質サンプルを線形ポジティブモードで検出した。平均分子量は、担体タンパク質上に組み込まれた炭水化物分子の平均値で計算することができる。

炭水化物抗原分子：トキソイドタンパク質分子の比率が５：１以上のワクチンは、下記ステップに従って製造する。
（ａ）１０ｍｌ〜２５ｍｌのＧｌｏｂｏ Ｈ（ＯＢＩ Ｐｈａｒｍａから購入可能、台湾）及びｐ−ニトロフェニルエステルリンカー（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ｅｓｔｅｒ ｌｉｎｋｅｒ）（ＯＢＩ Ｐｈａｒｍａから購入可能である、台湾）を２５μｌのＤＭＦ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入可能、米国）に溶解する。
（ｂ）２５ｍｇのＤＴを２．５ｍｌのリン酸緩衝液（即ち、ｐＨ＞８の塩基性緩衝液）で溶解する。
（ｃ）ステップ（ａ）の混合物をステップ（ｇ）の混合物に加えて室温で一晩置く。得られた混合物のｐＨが８〜９．２である。

結果：ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ測定で、１０ｍｌのＧｌｏｂｏ ＨはＧｌｏｂｏ Ｈ：ＤＴ（８：１）を含むワクチンを得て、２５ｍｌのＧｌｏｂｏ ＨはＧｌｏｂｏ Ｈ：ＤＴ（２４：１）を含むワクチンを得る。

ＯＢＩ−８２１サポニンの調製
ＯＢＩ−８２１サポニンの調製は、下記ステップに従ってキラジャサポナリアモリナコルテックス樹抽出物から抽出する。
（ａ）大きい粒子径のＣ１８の逆相クロマトグラフィーによってキラジャサポナリアモリナコルテックス樹抽出物を予め濾過し、そしてシリカ系の順相分取クロマトグラフィーによって精製する。上記によって、粗ＯＢＩ−８２１を得る。
（ｂ）続いて、大きい粒子径のＣ１８の逆相クロマトグラフィーによってステップ（ａ）の粗ＯＢＩ−８２１を予め濾過し、そして分取逆相ＨＰＬＣを行う。ＯＢＩ−８２１物質は脱塩及び凍結乾燥処理で順次に生成する。

キラジャサポナリアモリナコルテックス樹の皮から抽出された精製ＯＢＩ−８２１サポニンは、質量スペクトルによって分析する。図５Ａにおける１９８９．０１にある質量ピーク、図５Ｂにおける１９８９．１２にある質量ピーク及び１９８９．１３にある質量ピークは、約１９８９の分子量を有する化合物が存在することを示した。約１９８９の分子量を有する化合物のモル比は、図５Ａにおける８９．８％、図５Ｂにおける９６．８％及び図５Ｃにおける８７．０％である。同様に、図５Ａにおける１８５６．９７にある質量ピーク、図５Ｂにおける１８５６．０２にある質量ピーク及び１８５７．０９にある質量ピークは、約１８５７の分子量を有する化合物が存在することを示した。約１８５７の分子量を有する化合物のモル比は、図５Ａにおける１０．２％、図５Ｂにおける３．２％及び図５Ｃにおける１３％である。

精製ＯＢＩ−８２１サポニンは、更にクロマトグラフィーによって分析する。図６は、ＬＣ−ＵＶクロマトグラムの画像（カラム：ＰｏｌｙＬＣＰｏｌｙＨＹＤＲＯＸＹＥＴＨＹＬ Ａ ２００ ＊ ４．６ ｍｍ ５μｍ， ３００ Ａ）である。第１ピークは、１９８９化合物Ｖ１（Ａ及びＢ）及び１８５７化合物Ｖ１（Ａ及びＢ）（約６５．９４％）が存在することを示し、第２ピークは、１９８９化合物Ｖ２（Ａ及びＢ）及び１８５７ 化合物Ｖ２（Ａ及びＢ）（約３４．０６％）が存在することを示した。図７はＬＣ／ＭＳクロマトグラムの画像（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ ＯＤＳ １５０＊２．１ ｍｍ）である。上部の図における第１ピークは、１９８９化合物Ｖ１Ｂ及びＶ２Ｂ（約２．２％）が存在することを示し、第４ピークは、１９８９化合物Ｖ１Ａ及びＶ２Ａ（約９７．８％）が存在することを示した。下部の図における第２ピークは、１８５７化合物Ｖ１Ｂ及び１８５７化合物Ｖ２Ｂ（約１．９％）が存在することを示し、第３ピークは、１８５７化合物Ｖ１Ａ及び１８５７化合物Ｖ２Ａが存在することを示した。

実施例２：炭水化物／トキソイドタンパク質の比率の高いワクチンの免疫原性及びＯＢＩ−８２１サポニンアジュバント効果
ＣＬ５７Ｂ／６マウスを用いて例１におけるＧｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（８：１）のワクチンのｉｎ ｖｉｖｏ免疫原性及びＯＢＩ−８２１サポニンアジュバント効果の評価を行う。

約８週齢のＣＬ５７Ｂ／６マウスを下記試験群の４群に無作為に群分した。

第１回注射前又は０日目及び各注射後の３日目（即ち、１０日目、１７日目及び２４日目）に眼窩又は顔面静脈より抗凝固剤なしで血液サンプルを採取する。血液サンプルを遠心分離して血清及び血液細胞を分離する。ＥＬＩＳＡ分析を行うための血清を採取して−２０℃で保存する。各マウスからの血清を抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ ＩｇＧの分析に用いるために連続希釈する。Ｇｌｏｂｏ Ｈ−セラミドをアッセイプレートにコートして一晩置いて、次いで、１×ブロッキングバッファーで３０分ブロッキングしてＰＢＳＴで洗淨する。希釈された血清サンプルをアッセイプレートに加えて、室温（ＲＴ）で１時間インキュベートして洗淨する。ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＡＰ二次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）をサンプルに加えて、ＲＴで４５分インキュベートする。プレートを再び洗淨して、続いて色素原基質を加えて３７℃で２０分インキュベートする。停止液を加えることによって反応を中止する。４０５ｎｍの波長でプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）によって吸光度（ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ）を定量する。統計分析のためにＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ ｔ−ｔｅｓｔを使用する。図１Ａ及び図１Ｂは、測定されたワクチンの抗ＧｌｏｂｏＨ ＩｇＧ力価の定量を示した。

結果：Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（比率８：１）免疫マウスからＩｇＧ力価は、Ｃ３４アジュバントを含有するＧｌｏｂｏ Ｈ／ＫＬＨのＩｇＧ力価より有意に高い（Ｐ＜０．０１）である。Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（比率８：１）免疫マウスからＩｇＧ力価は、ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントを含有するＧｌｏｂｏ Ｈ／ＫＬＨのＩｇＧ力価より有意に高い（図１（Ａ）を参照）である。使用された担体タンパク質の種類に問わず、ＯＢＩ−８２１サポニンは、Ｃ３４アジュバントと比較して統計的に有意に高いＩｇＧ力価を誘導する（Ｐ＜０．０１、図１（Ａ）及び図１（Ｂ）を参照）。

実施例３：ＡＤＣＣ及びＣＤＣのアッセイで炭水化物／トキソイドタンパク質の比率の高いワクチンの免疫原性及びＯＢＩ−８２１サポニンアジュバント効果の評価を行う
ルイスラット（Ｌｅｗｉｓ ｒａｔｓ）の４群が表３におけるワクチンで免疫される。

０日目、７日目、１４日目及び２１日目にラットを表３におけるワクチンで皮下投与によって免疫する。第１回注射前（即ち、０日目）、及び１０日目、１７及び２４日目に末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及び血漿を採取する。

当該技術分野において公知のカルセイン−ＡＭ法（Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭ ｒｅｌｅａｓｅ ｍｅｔｈｏｄ）によってＡＤＣＣ及びＣＤＣのアッセイを行う。ステップは下記のように記載されている。

カルセイン−ＡＭで標的細胞を標識する。

ＭＣＦ−７乳癌細胞（標的細胞）を２ｍＭＬ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム及び０．０１ｍｇ／ｍＬインシュリン、１０％ウシ胎仔血清を含有する最小必須培地に培養する。標的細胞を９６ウェルプレート（５×１０^３ｃｅｌｌｓ／ウェル）に加えて、３７℃で５％ＣＯ２の加湿で一晩培養する。培地を除去して、各ウェルをリン酸バッファー（ＰＢＳ）で１回洗淨する。１００Ｌの２０Ｍカルセイン−Ａ溶液を各ウェル（２ｎｍｏｌ／ウェル）に加えて、３７℃で５％ＣＯ２の加湿で２時間インキュベートする。上清を乾燥させて、各ウェルをＰＢＳで３回洗淨する。

血漿サンプルで標的細胞を培養する。

「Ｔｏｔａｌ ｒｅｌｅａｓｅ」及び「Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ」の対照群を除いて、血漿サンプルを熱非働化して、５０Ｌの１／５Ｘ熱非働化血漿サンプルを各ウェルに加える。５０ＬのＰＢＭＣ又は血清を加えた後、最終希釈倍数が１／１０Ｘにする。プレートを３７℃（暗所）で３０分インキュベートする。

ＰＢＭＣ又は補体で標的細胞を培養する。

インキュベートした後、「Ｔｏｔａｌ ｒｅｌｅａｓｅ」及び「Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ」の対照群を除いて、ＡＤＣＣアッセイにおいて５０マイクロリットルのＰＢＭＣ（２ｘ１０^６ ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）（Ｅ：Ｔ比＝２０：１にする）を各ウェルに加え、且つＣＤＣアッセイにおいて５０マイクロリットルの１／１０Ｘ希釈された血清を各ウェルに加える。混合物の反応を３７℃で５％ＣＯ２の加湿で４時間インキュベートする。インキュベート時間の最後の１５分に、２％ Ｔｒｉｔｏｎ溶液を含有するフェノールレッドなしのＭＥＭ（５０マイクロリットル）を「Ｔｏｔａｌ ｒｅｌｅａｓｅ」の対照群に加えて、且つフェノールレッドなしのＭＥＭ（５０マイクロリットル）を「Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ」の対照群に加える。各プレートを１００ｇで５分遠心分離して、続いて８０マイクロリットルの上清を黒色９６ウェルプレートに移す。蛍光は４８５ ｎｍの励起波長及び５３８ ｎｍの発光波長で測定する。

図２Ａ〜図２Ｄは、Ｇ２、Ｇ３及びＧ４ワクチンのｉｎ ｖｉｖｏ ＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を示す。

結果：図２Ｂ及び図２Ｄに示すように、２４日目にＧ３ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントを有する）のＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性は、Ｇ２ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントを有しない）のＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性と比較してより高い。図２Ｂ及び図２Ｄに示すように、２４日目にＧ４ワクチン（Ｇｏｌｂｏ Ｈ／ＤＴ 比が２４：１）のＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性は、Ｇ３ワクチン（Ｇｏｌｂｏ Ｈ／ＤＴ 比が８：１）のＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性と比較してより高い。この結果によって、ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントと、炭水化物抗原／トキソイドタンパク質の比率が５：１以上のワクチンとがより長く持続するＡＤＣＣ及びＣＤＣ応答を誘導且つ強化することを示した。

実施例４：炭水化物／トキソイドタンパク質の比率の高いワクチンの免疫原性及びＯＢＩ−８２１サポニンアジュバント効果の評価
ＣＬ５７Ｂ／６マウス又はＢａｌｂ／ｃマウスを用いて例１におけるＧｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（８：１）のワクチン及びＧｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（１６：１）のワクチンと、ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントとのｉｎ ｖｉｖｏ評価を行う。

約８週齢のＣＬ５７Ｂ／６マウスを下記試験群の８群に無作為に群分した。

第１回注射前又は０日目、１０日目、１７日目及び２４日目に眼窩又は顔面静脈より抗凝固剤なしで血液サンプルを採取する。血液サンプルを遠心分離して血清及び血液細胞を分離する。ＥＬＩＳＡ分析を行うための血清を採取して−２０℃で保存する。各マウスからの血清を抗Ｇｌｏｂｏ Ｈ ＩｇＧの分析に用いるために連続希釈する。図３Ａ、図３Ｂ及び図４は、測定されたワクチンの抗ＧｌｏｂｏＨ ＩｇＭ力価及び抗ＧｌｏｂｏＨ ＩｇＧ力価の定量を示した。

結果：ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントを有するワクチンは、Ｃ３４アジュバントを有するワクチンより統計的に有意に高い抗ＧｌｏｂｏＨ ＩｇＭ及び抗ＧｌｏｂｏＨ ＩｇＧを誘導することを示した（図３Ａ、図３Ｂ及び図４を参照）。なお、下記統計的に有意な差が確認された。

●１７日目にＧ３ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニン）のＩｇＭ力価は、Ｇ５ワクチン（Ｃ３４）のＩｇＭ力価より有意に高い（ｐ＝０．０２）、
●１７日目にＧ１ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニン）のＩｇＭ力価は、Ｇ６ワクチン（Ｃ３４）のＩｇＭ力価より有意に高い（ｐ＝０．０３）、
●２４日目にＧ３ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニン）のＩｇＭ力価は、Ｇ５ワクチン（Ｃ３４）のＩｇＭ力価より有意に高い（ｐ＝０．０３）、
●１７日目にＧ３ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニン）のＩｇＧ力価は、Ｇ５ワクチン（Ｃ３４）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．００１）、
●１７日目にＧ１ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニン）のＩｇＧ力価は、Ｇ６ワクチン（Ｃ３４）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．００３）、
●２４日目にＧ３ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニン）のＩｇＧ力価は、Ｇ５ワクチン（Ｃ３４）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．００３）、及び
●２４日目にＧ１ワクチン（ＯＢＩ−８２１サポニン）のＩｇＧ力価は、Ｇ６ワクチン（Ｃ３４）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．００４）。

この結果によって、ＯＢＩ−８２１サポニンアジュバントは、Ｃ３４アジュバントと比較してＩｇＭ及びＩｇＧ応答を有意に強化することを示した。

１７日目及び２４日目にＧｌｏｂｏ Ｈ／ＫＬＨ／ＯＢＩ−８２１サポニン（Ｇ１）は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（３：１）／ＯＢＩ−８２１サポニン（Ｇ２）と比較して有意に高いＩｇＭ及びＩｇＧ力価を誘導する。特定の理論に縛られるものではないが、Ｇ１は高い炭水化物の密度（ＫＬＨ担体タンパク質当たり約７００のＧｌｏｂ Ｈユニット）を有し、且つ強力な免疫応答を誘導するのに対し、Ｇ２は低い炭水化物の密度（ＤＴ担体タンパク質当たり３のＧｌｏｂｏ Ｈユニット）を有し、且つ弱い免疫応答を誘導すると考えられる。なお、下記統計的に有意な差が確認された。

●１７日目にＧ１ワクチン（ＫＬＨ）のＩｇＭ力価は、Ｇ２ワクチン（ＤＴ）のＩｇＭ力価より有意に高い（ｐ＝０．００３）、
●２４日目にＧ１ワクチン（ＫＬＨ）のＩｇＭ力価は、Ｇ２ワクチン（ＤＴ）のＩｇＭ力価より有意に高い（ｐ＝０．０３）、
●２４日目にＧ１ワクチン（ＫＬＨ）のＩｇＧ力価は、Ｇ２ワクチン（ＤＴ）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．００４）。

１７日目及び２４日目にＧｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が８：１）／ＯＢＩ−８２１サポニン（Ｇ３及びＧ４）と、Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が１６：１）／ＯＢＩ−８２１サポニン（Ｇ７）とのＩｇＭ及びＩｇＧ力価は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＫＬＨ／ＯＢＩ−８２１サポニン（ＧＩ）のＩｇＭ及びＩｇＧ力価に相当する（図４を参照）。ＧＨ−ＤＴ（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が８：１）は、ＧＨ−ＫＬＭ（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が７００：１）と比較して低い炭水化物の密度を有するが、ＧＨ−ＫＬＭの免疫原性に相当することを示した。

Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴの比率（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が８：１又は１６：１）の高いワクチンは、Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴの比率（３：１）の低いワクチンと比較してより高い及び長く持続するＩｇＭ及びＩｇＧ力価を誘導する。なお、下記統計的に有意な差が確認された。

●１７日目にＧ３ワクチン（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が８：１）のＩｇＭ力価は、Ｇ２ワクチン（３：１の比率）のＩｇＭ力価より有意に高い（ｐ＝０．０２）、
●１７日目にＧ７ワクチン（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が１６：１）のＩｇＭ力価は、Ｇ２ワクチン（３：１の比率）のＩｇＭ力価より有意に高い（ｐ＝０．００６）、
●１７日目にＧ３ワクチン（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が８：１）のＩｇＧ力価は、Ｇ２ワクチン（３：１の比率）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．０１）、
●１７日目にＧ７ワクチン（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が１６：１）のＩｇＧ力価は、Ｇ２ワクチン（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が３：１）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．０３）、
●２４日目にＧ３ワクチン（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が８：１）のＩｇＧ力価は、Ｇ２ワクチン（３：１の比率）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．０１）、
●２４日目にＧ７ワクチン（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が１６：１）のＩｇＧ力価は、Ｇ２ワクチン（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が３：１）のＩｇＧ力価より有意に高い（ｐ＝０．０１）、
１７日目及び２５日目にＧｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が８：１）／ＯＢＩ−８２１サポニン（Ｇ３）及びＧｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（１６：１）／ＯＢＩ−８２１サポニン（Ｇ７）のＩｇＭ力価は、Ｇｌｏｂｏ Ｈ／ＤＴ（Ｇｌｏｂｏ ＨとＤＴとの分子の比率が３：１）／ＯＢＩ−８２１サポニン（Ｇ２））のＩｇＭ力価より有意に高い（ｐ＜０．０５）。

本明細書中に引用されるすべての公報、特許および特許出願は、その全体が参照により本明細書中に援用されることが具体的かつ個別に示唆されるのと同程度に、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、本明細書中に開示される実施形態の範囲によって限定されるべきではなく、それら実施形態は、本発明の個々の局面の単なる例示として意図される。本明細書中に記載されるものに加えて、本発明のモデルおよび方法に対する種々の改変は、前述の説明および教示によって当業者に明らかとなり、そして同様に本発明の範囲内に含まれることを意図される。このような改変または他の実施形態は、本発明の正確な範囲および趣旨から逸脱することなく実施され得る。

Claims (23)

1. 単離された式（Ｉ）の化合物、
   又はその薬学的に許容される塩であって、
   式中、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオース又はβ−Ｄ−キシロースから選択され、
   Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ基、アルキル基又は
   から選択される、化合物。
2. Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２は、
   であり、Ｒ^３は、Ｈ基である、請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２は、Ｈ基であり、Ｒ^３は、
   である、請求項１に記載の化合物。
4. Ｒ^１は、β−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２は、
   であり、Ｒ^３は、Ｈ基である、請求項１に記載の化合物。
5. Ｒ^１は、β−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２は、Ｈ基であり、Ｒ^３は、
   である、請求項１に記載の化合物。
6. 医薬組成物であって、
   式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩と、
   薬学的に許容される担体と、
   を含み、
   式中、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオース又はβ−Ｄ−キシロースから選択され、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ基、アルキル基又は
   から選択される、医薬組成物。
7. 単離された以下の１８５７化合物Ｖ１Ａ、以下の１８５７化合物Ｖ１Ｂ、以下の１８５７化合物Ｖ２Ａ、及び以下の１８５７化合物Ｖ２Ｂからなる群から選択される一つ又は複数の化合物を含む、ＯＢＩ−８２１サポニン：
   １８５７化合物Ｖ１Ａ：式（Ｉ）において、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２は、
   であり、Ｒ^３は、Ｈ基である化合物；
   １８５７化合物Ｖ１Ｂ：式（Ｉ）において、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２は、Ｈ基であり、Ｒ^３は、
   である化合物；
   １８５７化合物Ｖ２Ａ：式（Ｉ）において、Ｒ^１は、β−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２は、
   であり、Ｒ^３は、Ｈ基である化合物；
   １８５７化合物Ｖ２Ｂ：Ｒ^１は、β−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２は、Ｈ基であり、Ｒ^３は、
   である化合物。
8. 単離された以下の１９８９化合物Ｖ１Ａ、以下の１９８９化合物Ｖ１Ｂ、以下の１９８９化合物Ｖ２Ａ、及び以下の１９８９化合物Ｖ２Ｂからなる群から選択される一つ又は複数の化合物をさらに含む、請求項７に記載のＯＢＩ−８２１サポニン：
   １９８９化合物Ｖ１Ａ：式（Ｉ）において、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２は、
   であり、Ｒ^３は、Ｈ基である化合物；
   １９８９化合物Ｖ１Ｂ：式（Ｉ）において、Ｒ^１は、β−Ｄ−アピオースであり、Ｒ^２は、Ｈ基であり、Ｒ^３は、
   である化合物；
   １９８９化合物Ｖ２Ａ：式（Ｉ）において、Ｒ^１は、β−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２は、
   であり、Ｒ^３は、Ｈ基である化合物；
   １９８９化合物Ｖ２Ｂ：式（Ｉ）において、Ｒ^１は、β−Ｄ−キシロースであり、Ｒ^２は、Ｈ基であり、Ｒ^３は、
   である化合物。
9. 約１〜約１５モル％の１８５７化合物の混合物と、約８５〜約９９モル％の１９８９化合物の混合物とを含み、
   この際、前記１８５７化合物の混合物は、約６０〜約７０モル％の請求項７に記載の１８５７化合物Ｖ１Ａと、約１〜約５モル％の請求項７に記載の１８５７化合物Ｖ１Ｂと、約３０〜約４０モル％の請求項７に記載の１８５７化合物Ｖ２Ａと、約０．１〜約３モル％の請求項７に記載の１８５７化合物Ｖ２Ｂとを含み、かつ、
   前記１９８９化合物の混合物は、約６０〜約７０モル％の請求項８に記載の１９８９化合物Ｖ１Ａと、約１〜約５モル％の請求項８に記載の１９８９化合物Ｖ１Ｂと、約３０〜約４０モル％の請求項８に記載の１９８９化合物Ｖ２Ａと、約０．１〜約３モル％の請求項８に記載の１９８９化合物Ｖ２Ｂとを含む、ＯＢＩ−８２１サポニン。
10. （ａ）炭水化物抗原又はその免疫原性断片と、
    （ｂ）請求項７〜９のいずれか１項に記載のＯＢＩ−８２１サポニンと、
    を含む、ワクチン。
11. 前記炭水化物抗原又は免疫原性断片が、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、Ｇｂ−４又はそれらの混合物から選択される、請求項１０に記載のワクチン。
12. 担体タンパク質をさらに含む、請求項１０又は１１に記載のワクチン。
13. 前記担体タンパク質が、ジフテリア毒素（ＤＴ）である、請求項１２に記載のワクチン。
14. 前記ジフテリア毒素が、ジフテリア毒素交差反応物質又はジフテリアトキソイドである、請求項１３に記載のワクチン。
15. 前記ジフテリア毒素交差反応物質が、ＣＲＭ３０、ＣＲＭ４５、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ１９７、又はＣＲＭ２２８から選択される、請求項１４に記載のワクチン。
16. 前記担体タンパク質が、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）である、請求項１２に記載のワクチン。
17. （ａ）請求項１０〜１６のいずれか１項に記載のワクチンと、
    （ｂ）薬学的に許容される担体と、
    を含む、医薬組成物。
18. 請求項１０〜１６のいずれか１項に記載のワクチンを含む、がん細胞の抑制剤。
19. 前記がんが、Ｇｌｏｂｏ Ｈを発現するがんである、請求項１８に記載の抑制剤。
20. 前記Ｇｌｏｂｏ Ｈを発現するがんが、乳癌、肺癌、胃癌、結腸癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮内膜癌、食道癌、直腸癌、胆管癌、肝癌、頬癌、鼻咽頭癌、腎臓癌、子宮頚部癌、睾丸癌、膀胱癌、頭頚部癌、口腔癌、神経内分泌癌、副腎癌、甲状腺癌、骨癌、皮膚癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、黒色腫又は脳腫瘍である、請求項１９に記載の抑制剤。
21. ヒトに投与されて用いられる、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の抑制剤。
22. 患者におけるがん細胞を抑制するための医薬の製造における、請求項１０〜１６のいずれ１項に記載のワクチンの使用。
23. 前記患者がヒトである、請求項２２に記載の使用。