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JP2015157770A - Cosmetics - Google Patents

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JP2015157770A
JP2015157770A JP2014032308A JP2014032308A JP2015157770A JP 2015157770 A JP2015157770 A JP 2015157770A JP 2014032308 A JP2014032308 A JP 2014032308A JP 2014032308 A JP2014032308 A JP 2014032308A JP 2015157770 A JP2015157770 A JP 2015157770A
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Hiroshi Tanaka
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Naris Cosmetics Co Ltd
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Naris Cosmetics Co Ltd
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Abstract

【課題】表皮バリア機能を向上させて健全な表皮を形成させるとともに、真皮線維芽細胞の老化を抑制させることにより、張り・弾力のある皮膚を形成しうる、副作用がなく、安全性に優れた剤及び化粧料の提供。更には、一成分で複数の肌悩みを一度に解決出来る有効成分の提供。【解決手段】百合科ワスレグサ属のヤブカンゾウ、ホンカンゾウ、ゼンテイカ(ニッコウキスゲ)、ホソバキスゲ、マンシュウキスゲ等の黄花菜の根部を乳酸菌により発酵させて得られる発酵物を有効成分として配合する細胞分化促進剤、バリア機能改善剤、SA−β−Gal活性抑制剤、ラジカル消去促進剤、及び化粧料。前記乳酸菌は、Lactobacillus plantarumであることが好ましい。【選択図】図−1[PROBLEMS] To improve the epidermal barrier function to form a healthy epidermis and to suppress the aging of dermal fibroblasts, thereby forming a skin with elasticity and elasticity, which has no side effects and is excellent in safety. Provision of cosmetics and cosmetics. Furthermore, the provision of an active ingredient that can solve multiple skin problems with one ingredient at a time. A cell differentiation promoter comprising a fermented product obtained by fermenting the roots of yellow rapes such as Yakukan elephant, Honkan elephant, Zentica (Nikkoukigege), Hosobakisuge, Manshuukigege, etc., by lactic acid bacteria as an active ingredient Function improving agent, SA-β-Gal activity inhibitor, radical scavenger, and cosmetics. The lactic acid bacterium is preferably Lactobacillus plantarum. [Selection] Figure 1

Description

本願発明は黄花菜の根部を乳酸菌で発酵させて得られた発酵物を有効成分とする各種剤であり、細胞分化促進効果、バリア機能改善効果、細胞老化抑制効果、SA-β-Gal活性抑制効果、DPPHラジカル消去活性効果が高い代謝物を有効成分として含有する化粧料に関する。 The present invention is a variety of agents containing as an active ingredient a fermented product obtained by fermenting the root part of yellow rape with lactic acid bacteria. Cell differentiation promoting effect, barrier function improving effect, cell aging inhibiting effect, SA-β-Gal activity inhibiting The present invention relates to a cosmetic containing a metabolite having a high DPPH radical scavenging activity effect as an active ingredient.

本願発明で用いる黄花菜は、ゆり科ワスレグサ属ヤブカンゾウ(Hemerocallis fulva var. kwanso)、ゼンテイカ(ニッコウキスゲ)(H.dumortieri var.esculenta)、ホンカンゾウ(H.fulva var.fulva)、マンシュウキスゲ(H.flava L.)、ホソバキスゲ(H.flava var. minor)及びこれら類縁植物の総称である。市場で「黄花菜」と称して一般に流通しているのは、黄花菜の「蕾」を乾燥したもので金針菜とも言われ、中華料理では水で戻してスープの具にして食されている。黄花菜を利用した化粧料は、その使用部位を特定しない記載がある場合においても、実際に効果を確認しているのは「黄花菜」の「蕾」である。
具体的には特許文献1には抗酸化、抗炎症、美白作用のある皮膚外用組成物の記載が、特許文献2には線維芽細胞賦活作用、チロシナーゼ活性抑制作用の記載が、特許文献3には脂肪組織の分解を促進することによる痩身効果の記載が、特許文献4にはむくみ防止・改善効果、肌のひきしめ効果の記載が、特許文献5にはタンパク質糖化抑制作用によるシワ改善作用、くすみ改善作用の記載が、特許文献6にはTie2活性化効果により、血管の正常化又は安定化によるしわ防止・改善効果の記載が示されている。しかし、これらの効果はいずれも黄花菜植物そのものの抽出物を利用した効果を記載しているものである。
一方、特許文献7には、ユリ科ワスレグサ属に属する植物をタンパク分解酵素等で処理した後、酵母で発酵させて、脱顆粒抑制作用とプロスタグランジンE2生成抑制作用、ラジカル消去作用が得られる発酵物を配合したことを特徴とする化粧料の例が記載されている。
The yellow flower vegetables used in the present invention are those of the genus Forget-me-nots (Hemerocallis fulva var. Kwanso), Zentika (H. dumortieri var. L.), H.flava var. Minor, and these related plants. In the market, it is commonly known as “Yellow Vegetables”, which is dried “Yellow Vegetables” and is also called “Golden Needle”. In Chinese cuisine, it is reconstituted with water and eaten as a soup ingredient. Even when there is a description that does not specify the use site of the cosmetics using yellow rape, it is “bamboo” of “yellow rape” that has actually confirmed the effect.
Specifically, Patent Document 1 describes an external composition for skin having antioxidation, anti-inflammatory and whitening effects, Patent Document 2 describes a fibroblast activation action and a tyrosinase activity inhibitory action. Describes the slimming effect by accelerating the degradation of adipose tissue, Patent Document 4 describes the effect of preventing and improving swelling, and the effect of skin tightening, and Patent Document 5 describes the wrinkle improving action by suppressing protein glycation, dullness. The description of the improvement action is described in Patent Document 6, which describes the wrinkle prevention / improvement effect by normalizing or stabilizing the blood vessel due to the Tie2 activation effect. However, each of these effects describes an effect using an extract of a yellow rape plant itself.
On the other hand, Patent Document 7 obtains a degranulation inhibitory action, a prostaglandin E2 production inhibitory action, and a radical scavenging action by treating a plant belonging to the genus Forget-me-not with a proteolytic enzyme and then fermenting it with yeast. The example of the cosmetics characterized by mix | blending fermented material is described.

しかし、これまでワスレグサ属植物を乳酸菌で発酵させて得られた発酵物を配合したことを特徴とした化粧料の例はない。酵母菌は、自然界では樹液、花蜜、果実などに多く生息しており、糖類を分解してアルコールと炭酸ガスを産生するため古くから、パン、ビール、ワイン、ウイスキー、みそなど、様々な食品の製造に利用されてきた。一方、乳酸菌は糖類を分解して乳酸を産生するため、野菜や豆、米や麦などの植物素材を発酵させることにより、これらの素材の味や香りに変化を与え、産生された乳酸により他の微生物の繁殖を抑えて保存性を向上させることなどに利用されてきた。 However, there are no examples of cosmetics characterized by blending fermented products obtained by fermenting forget-me-not plants with lactic acid bacteria. Yeasts are abundant in sap, nectar, fruits, etc. in the natural world, and since they decompose sugars to produce alcohol and carbon dioxide, they have long been used in various foods such as bread, beer, wine, whiskey, and miso. Has been used for manufacturing. On the other hand, since lactic acid bacteria decompose saccharides to produce lactic acid, fermenting vegetable materials such as vegetables, beans, rice, and wheat will change the taste and aroma of these materials, and the produced lactic acid will It has been used to improve the storage stability by suppressing the growth of microorganisms.

このように酵母菌と乳酸菌では、同じ糖類を分解しても代謝される成分は大きく異なっている。したがって、ワスレグサ植物を乳酸菌で発酵処理した場合においても、酵母菌の発酵により産生された物質とは大きく異なっているものと考えられる。 Thus, yeast and lactic acid bacteria are greatly different in components that are metabolized even if the same saccharide is decomposed. Therefore, even when a forget-me-not plant is fermented with a lactic acid bacterium, it is considered that the forget-me-not plant is greatly different from a substance produced by fermentation of a yeast.

特開2006−052165JP 2006-052165 A 特開2006−143670JP 2006-143670 A 特開2007−297372JP2007-297372 特開2009−091317JP2009-091317 特開2011−195530JP2011-195530 特開2011−201811JP 2011-201811 A 特開2008−050326JP2008-050326

本願発明の課題は副作用がなく、安全性に優れた各種剤を提供することにより、表皮バリア機能を向上させて健全な表皮を形成させるとともに、真皮線維芽細胞の老化を抑制させることにより、張り・弾力のある皮膚を形成しうる化粧料を提供することである。
付属的には、一つの有効成分で複数の肌悩みを一度に解決することが出来る有効成分を提供することを課題とする。
The object of the present invention is to provide various agents having no side effects and excellent safety, thereby improving the epidermal barrier function to form a healthy epidermis and suppressing aging of dermal fibroblasts. -To provide cosmetics that can form elastic skin.
In addition, it is an object to provide an active ingredient that can solve a plurality of skin problems at once with one active ingredient.

本願発明者はかかる従来技術の問題点に鑑み、それらの問題点を解消する方法について鋭意研究を重ねた結果、黄花菜の根部を乳酸菌により発酵させて得られる発酵物を持いることにより上記課題を解決することができることを見出し、本願発明を完成するに至った。 In view of the problems of the prior art, the inventor of the present application has conducted extensive research on methods for solving these problems, and as a result, has the above-mentioned problem by having a fermented product obtained by fermenting the root of yellow rape with lactic acid bacteria. Has been found to be able to be solved, and the present invention has been completed.

ゆり科植物の黄花菜の根部を、乳酸菌により発酵させて得られた発酵物は、発酵処理前の黄花菜根部抽出物と比較して強い細胞分化促進効果、バリア機能改善効果、細胞老化抑制効果、SA-β-Gal活性抑制効果、ラジカル消去作用を有するものであることが判明した。しかし、発酵処理を行わなかった抽出物には、細胞分化促進効果、細胞老化抑制効果、SA-β-Gal活性抑制効果、DPPHラジカル消去作用は弱く、乳酸菌で発酵処理されることにより植物中の成分が変化し、効果が増強されたと考えられた。 The fermented product obtained by fermenting the root part of the lily family plant with lactic acid bacteria is stronger in promoting cell differentiation, improving the barrier function, and suppressing the cell aging than the extract of yellow flower rape before fermentation treatment. And SA-β-Gal activity inhibitory effect and radical scavenging action. However, the extract that has not been subjected to fermentation treatment has weak cell differentiation promoting effect, cell aging inhibitory effect, SA-β-Gal activity inhibitory effect, and DPPH radical scavenging action. It was thought that the ingredients changed and the effect was enhanced.

細胞分化の評価基準を示す。The evaluation criteria of cell differentiation are shown.

以下、本願発明について詳細に説明する。
まず、本願発明の概要を説明する。
大きくは次の工程に分けられる。
(第一工程)黄花菜の根部を浸出させた浸出液を得る工程。
(第二工程)第一工程で得られた浸出液に、予め培養しておいた乳酸菌を植菌し、一定条件下で培養して発酵処理物を得る工程。
(第三工程)第二工程で得られた発酵処理物をろ過等により、発酵培養液と残渣に分ける工程。
(第四工程)第三工程で得られた残渣に更に溶媒等を加えて発酵抽出液を得る工程。
本願では、第三工程、第四工程で得られた有効物を利用する。
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
First, an outline of the present invention will be described.
It is roughly divided into the following steps.
(1st process) The process of obtaining the leaching liquid which leached the root part of yellow flower vegetables.
(Second step) A step of inoculating a lactic acid bacterium previously cultured in the leachate obtained in the first step and culturing it under a certain condition to obtain a fermented product.
(Third step) A step of dividing the fermented product obtained in the second step into a fermentation broth and a residue by filtration or the like.
(4th process) The process of adding a solvent etc. to the residue obtained at the 3rd process, and obtaining a fermentation extract.
In this application, the effective substance obtained by the 3rd process and the 4th process is utilized.

本願発明における用語は、以下のように定義する。
(1)浸出液とは、本願で用いる黄花菜の根部を精製水、エタノール等の溶媒で浸出させたものを言い、黄花菜の根部をろ過等により取り除く前の段階のものを指す。適宜熱を加えた、所謂植物抽出液も含まれる。
(2)培養前エキスとは、浸出液から黄花菜の根部をろ過等により、取り除いたものを指す。
(3)発酵処理物とは、浸出液に乳酸菌等を植菌し、一定期間培養したものを指す。
(4)発酵培養液とは、発酵処理物から、ろ過等により発酵させた根部を取り除いたものを指す。
(5)発酵抽出液とは、(4)にて取り除いた発酵済みの根部に、更に精製水などの抽出溶媒を加え、一定条件下で抽出した後、ろ過などにより残渣を取り除いたものを指す。
(6)発酵物とは、発酵培養液と発酵抽出液を合わせた総称である。
本願では、後に乳酸菌で処理した場合と酵母菌で処理した場合の比較実験を行っているが、両者を区別する為、「発酵処理物」を「乳酸菌発酵処理物」と、「発酵培養液」を「乳酸菌発酵培養液」と、「発酵抽出液」を「乳酸菌発酵抽出液」と表示する場合があるが同義である。
また、上記(1)から(6)に定義される処理を行うにあたり、乳酸菌に代えて酵母菌を使用した場合は、「酵母発酵処理物」、「酵母発酵培養液」、「酵母発酵抽出液」、「酵母発酵物」と称する。この場合において「酵母」を「酵母菌」と称する場合があるが、同義である。
The terms in the present invention are defined as follows.
(1) The leaching solution refers to a product obtained by leaching the root part of yellow rapeseed used in the present application with a solvent such as purified water or ethanol, and refers to a stage before the root part of yellow rapeseed is removed by filtration or the like. So-called plant extracts that are appropriately heated are also included.
(2) The pre-culture extract refers to an extract obtained by removing the roots of yellow rape from the leachate by filtration or the like.
(3) The fermented product refers to a product obtained by inoculating a leachate with lactic acid bacteria or the like and culturing for a certain period.
(4) The fermentation broth refers to a product obtained by removing the root portion fermented by filtration or the like from the fermented product.
(5) The fermented extract refers to a product obtained by adding an extraction solvent such as purified water to the fermented root part removed in (4), extracting under certain conditions, and then removing the residue by filtration or the like. .
(6) The fermented product is a general term that combines a fermentation broth and a fermentation extract.
In the present application, a comparative experiment is performed when the lactic acid bacterium is treated later and the yeast is treated. However, in order to distinguish between the two, the “fermented product” is referred to as the “lactic acid bacterium fermented product” and the “fermentation culture solution”. Are sometimes synonymous with “lactic acid bacteria fermentation broth” and “fermentation extract” as “lactic acid bacteria fermentation extract”.
In addition, when performing the treatment defined in (1) to (6) above, when yeast is used instead of lactic acid bacteria, “yeast fermentation processed product”, “yeast fermentation culture solution”, “yeast fermentation extract” "," Yeast fermented product ". In this case, “yeast” is sometimes referred to as “yeast”, but it is synonymous.

本願発明の第一工程で用いられる黄花菜の根部は、ゆり科植物のワスレグサ属ヤブカンゾウ(Hemerocallis fulva var. kwanso)、ゼンテイカ(ニッコウキスゲ)(H.dumortieri var.esculenta)、ホンカンゾウ(H.fulva var.fulva)、マンシュウキスゲ(H.flava L.)、ホソバキスゲ(H.flava var. minor)及びこれら類縁植物の根部を用いることが出来る。 本願で用いる根部とは、一般概念として根と称される部分全体を指し、地下茎等、地中に伸びた茎の部分を取り出して使用することも可能である。   The roots of yellow flowers used in the first step of the present invention are the genus forget-me-nots, Hemerocallis fulva var. Kwanso, Zentica (H. dumortieri var. Esculenta), H. fulva), Manchurian (H.flava L.), Hosobakisu (H.flava var. minor) and the roots of these related plants can be used. The root part used in the present application refers to the entire part called a root as a general concept, and it is also possible to take out and use a part of a stem extending into the ground such as an underground stem.

本願発明の第一工程の浸出液を得る為の溶媒は、水或いは低級アルコール類(メタノール、エタノール、プロパノールなど)もしくはグリコール類(エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、グリセリンなど)又はこれらとの混液等が用いることができる。また、必要に応じて乳酸菌の増殖に必要な糖源、栄養素、微量生育因子なども添加しておくことが好ましい。黄花菜の根部と浸出液との混合比(重量比)は、黄花菜の根部の乾燥重量換算で一般に1:1〜1:1000、好ましくは1:5〜1:100、より好ましくは1:10〜1:50の範囲である。 The solvent for obtaining the leachate in the first step of the present invention is water, lower alcohols (methanol, ethanol, propanol, etc.) or glycols (ethylene glycol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, etc.) or these And a mixed solution thereof can be used. Moreover, it is preferable to add sugar sources, nutrients, trace growth factors, and the like necessary for the growth of lactic acid bacteria as needed. The mixing ratio (weight ratio) between the roots of yellow rape and the leachate is generally 1: 1 to 1: 1000, preferably 1: 5 to 1: 100, more preferably 1:10 in terms of dry weight of the root of yellow rape. It is in the range of ˜1: 50.

本願発明の第一工程における浸出液は次のようにして得られる。
まず、浸出しようとする黄花菜の根部を前記溶媒に浸漬、または分散させる。この場合、黄花菜の根部は生のまま用いても、又予め乾燥もしくは半乾燥した上用いてもよい。又、形状としては、採取したものをそのまま用いることもできるが、細断或いは粉砕して微細化すれば、後の発酵工程において発酵効率を上げることができる。本願発明においては、当該浸出液は、浸出させた黄花菜根部を取り除かないまま、次工程である発酵工程に供する。乳酸菌を植菌して発酵させることにより、黄花菜根部の組織を乳酸菌により分解させることが出来る。これにより、従来法による抽出では抽出できなかった成分も抽出が可能となり、今までにない効果を得られる。もっとも、浸出を十分に行っている場合等においては、根部から成分を十分抽出出来ているので、黄花菜根部を取り除いて使用しても差し支えない。この場合は抽出された成分が乳酸菌により発酵されて、新たな有効成分に変換される。その意味では、通常の植物エキスに該当する状態のものであっても浸出液として利用することが出来る。
The leachate in the first step of the present invention is obtained as follows.
First, the root part of yellow rape to be leached is immersed or dispersed in the solvent. In this case, the roots of yellow rape may be used as they are, or may be used after being dried or semi-dried in advance. In addition, as the shape, the collected one can be used as it is, but if it is shredded or pulverized and refined, the fermentation efficiency can be increased in the subsequent fermentation process. In this invention, the said leaching liquid is provided to the fermentation process which is a next process, without removing the leached yellow flower rape root part. By inoculating and fermenting lactic acid bacteria, the tissue of the yellow rapeseed root can be decomposed by lactic acid bacteria. This makes it possible to extract components that could not be extracted by the extraction by the conventional method, and an unprecedented effect can be obtained. However, in the case where the leaching is sufficiently performed, the components can be sufficiently extracted from the root portion, so that the yellow rape root portion may be removed and used. In this case, the extracted component is fermented by lactic acid bacteria and converted into a new active ingredient. In that sense, even in a state corresponding to a normal plant extract, it can be used as a leachate.

この黄花菜の根部を浸出させた浸出液は、このまま発酵工程に供することができる。黄花菜の根部を溶媒に浸出させるだけで十分であり、浸出時間は特段設ける必要はないが、黄花菜の腐敗など生じない程度に一定時間の浸出時間を適宜設けても良い。浸出液は、これを発酵工程に供する前に、殺菌を行って発酵の障害となる雑菌を除去することが好ましい。この場合、雑菌除去方法としては、発酵に供する黄花菜の根部を予め殺菌用エタノール等で洗浄殺菌した上、無菌水等の無菌媒体に懸濁する方法で浸出させてもよく、又黄花菜の根部を溶媒に浸出させ、浸出液を得た後、加熱殺菌する方法を用いるようにしてもよい。
加熱殺菌法としては、黄花菜を加えた発酵液を105〜121℃で10〜20分間加熱するオートクレーブ殺菌法や、黄花菜を加えた発酵液を80〜90℃に60〜120分間保持することを1日1回2〜3日間繰り返す間断殺菌法が一般に用いられる。もっとも、本殺菌工程は必須工程ではない。次工程の発酵工程において障害にならなければ、本殺菌工程を省いても差し支えない。
The leachate obtained by leaching the roots of yellow flowers can be used for the fermentation process as it is. It is sufficient that the root part of yellow rape is leached in a solvent, and it is not necessary to provide a special leaching time. Before the leachate is subjected to a fermentation process, it is preferable to sterilize and remove miscellaneous bacteria that hinder fermentation. In this case, as a method for removing germs, the roots of yellow rape vegetables to be subjected to fermentation may be preliminarily washed and sterilized with ethanol for sterilization and then leached by a method of suspending in a sterile medium such as sterile water. A method may be used in which the root is leached in a solvent to obtain a leachate and then heat sterilized.
As the heat sterilization method, an autoclave sterilization method in which the fermented liquid added with yellow flower vegetables is heated at 105 to 121 ° C. for 10 to 20 minutes, or the fermented liquid added with yellow flower vegetables is maintained at 80 to 90 ° C. for 60 to 120 minutes. The intermittent sterilization method is generally used once a day for 2-3 days. However, this sterilization process is not an essential process. If it does not become an obstacle in the next fermentation process, this sterilization process may be omitted.

本願発明の第二工程である発酵工程で用いられる菌は乳酸菌である。本願発明で用いる乳酸菌は、乳酸菌に属する菌であれば特に限定はされない。市販のヨーグルトや、また自然界からも容易に分離することができる。また、微生物分譲機関においても分譲されているため、当該菌株を購入して利用することが可能である。なお分離の方法は、特開2012−105639に記載の方法等により分離が可能である。 The bacterium used in the fermentation process which is the second process of the present invention is a lactic acid bacterium. The lactic acid bacteria used in the present invention are not particularly limited as long as they belong to lactic acid bacteria. It can be easily separated from commercially available yogurt or from nature. Moreover, since it is also distributed in the microorganism distribution agency, it is possible to purchase and use the strain. Separation can be performed by a method described in JP 2012-105639 A or the like.

具体的には、例えばラクトバシルス プランタラム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバシルス デルブルッキー(L. delbrueckii)、ラクトバシルス ブレビス(L. brevis)、ラクトバシルス カゼイ(L. casei)等のラクトバシルス(Lactobacillus)属の乳酸菌;ロイコノストック メセンテロイズ(Leuconostoc mesenteroides)、ロイコノストック シトレウム(L. citreum)等のロイコノストック(Leuconostoc)属の乳酸菌; ストレプトコッカス フェーカリス(Streptococcus faecalis)、ストレプトコッカス ピオジェネス(S. pyogenes)等のストレプトコッカス(Streptococcus)属の乳酸菌;エンテロコッカス カゼリフラバス(Enterococcus caseliflavus)、エンテロコッカス サルフレウス(E. sulfreus)等のエンテロコッカス(Enterococcus)属の乳酸菌;ラクトコッカス プランタラム(Lactococcus plantarum)、ラクトコッカス ラフィノラクティス(L. rafinolactis)等のラクトコッカス(Lactococcus)属の乳酸菌;ペディオコッカス ダムノサス(Pediococcus damnosus)、ペディオコッカス ペントサセウス(P. pentosaceus)等のペディオコッカス(Pediococcus)属の乳酸菌が挙げられる。それら乳酸菌のうちでも、得られる発酵物の有効性の観点とさらに極度の嫌気性でなく取り扱い易いという点から、ラクトバシルス プランタラム(Lactobacillus plantarum)、およびラクトバシルス デルブルッキー(Lactobacillus delbrueckii)の使用が最も好ましい。尚、Lactobacillus delbrueckii は、ヨーグルトの製造に用いられる代表的な乳酸菌であるため、市販のヨーグルトや、また自然界からも容易に分離することができる。Lactobacillus plantarumは植物性乳酸菌といわれ、漬物などに多く存在している菌で、容易に分離することができる。   Specifically, lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus such as Lactobacillus plantarum, L. delbrueckii, L. brevis, L. casei, etc .; Lactic acid bacteria of the genus Leuconostoc such as Leuconostoc mesenteroides and L. citreum; Streptococcus such as Streptococcus faecalis and Streptococcus such as Streptococcus pyogenes Lactic acid bacteria; Enterococcus caseliflavus, Enterococcus lactic acid bacteria such as E. sulfreus; Lactococcus plantarum, Lactococcus plantarum, Lactococcus lactic acid bacteria such as L. rafinolactis; Pediococcus damnosus, Pediococcus genus such as P. pentosaceus It is done. Among these lactic acid bacteria, the use of Lactobacillus plantarum and Lactobacillus delbrueckii is most preferable from the viewpoint of the effectiveness of the obtained fermented product and the fact that it is not extremely anaerobic and easy to handle. . Since Lactobacillus delbrueckii is a typical lactic acid bacterium used for the production of yogurt, it can be easily separated from commercially available yogurt and from the natural world. Lactobacillus plantarum is said to be a plant lactic acid bacterium and is abundant in pickles and can be easily isolated.

乳酸菌の培養培地としては、乳酸菌全体の良好な生育を示す培地として開発されたMRS培地を用いることが出来る。(MRS培地組成:ペプトン10g、牛肉エキス10g、酵母エキス5g、グルコース20g、Tween80 1g、K2HPO4 2g、酢酸ナトリウム 5g、クエン酸二アンモニウム 2g、MgSO4・7H2O 0.2g、MnSO4・nH2O 0.05g、精製水1L) As a culture medium for lactic acid bacteria, an MRS medium developed as a medium showing good growth of the entire lactic acid bacteria can be used. (MRS medium composition: peptone 10 g, beef extract 10 g, yeast extract 5 g, glucose 20 g, Tween 80 1 g, K 2 HPO 4 2 g, sodium acetate 5 g, diammonium citrate 2 g, MgSO 4 .7H 2 O 0.2 g, MnSO 4・ NH 2 O 0.05g, purified water 1L)

乳酸菌の合成培地の培地組成としては、最低限の炭素源と窒素源とリン源を含んでいれば良く、炭素源としては、リボース、アラビノース、キシロース、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、ラムノース等の単糖類、シュクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、セロビオース等の二糖類、またラフィノース、マルトトリオース等の三糖類を用いることができる。これらから1種以上含有していれば良い。窒素源としては、尿素、硝酸塩として硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、アンモニウム塩として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、また、アミノ酸として、トリプトファン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、セリン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、プロリン、チロシン等の窒素含有化合物を用いることができ、これらから1種以上含有していれば良い。リン源としては、リン酸塩を用いることが出来、リン酸1水素カリウム、リン酸2水素カリウム、リン酸アンモニウムを用いることができ、これらから1種以上含有していれば良い。 As a medium composition of a lactic acid bacteria synthetic medium, it is sufficient to include a minimum carbon source, a nitrogen source and a phosphorus source. Examples of the carbon source include ribose, arabinose, xylose, glucose, fructose, mannose, galactose, and rhamnose. Disaccharides such as monosaccharides, sucrose, maltose, lactose, trehalose and cellobiose, and trisaccharides such as raffinose and maltotriose can be used. One or more of these may be contained. Nitrogen sources include urea, potassium nitrate as nitrate, sodium nitrate, calcium nitrate, ammonium salts as ammonium sulfate and ammonium chloride, and amino acids as tryptophan, lysine, methionine, phenylalanine, threonine, valine, isoleucine, leucine, histidine, alanine, Nitrogen-containing compounds such as arginine, asparagine, serine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, proline, and tyrosine can be used, and one or more of these may be contained. As the phosphorus source, phosphate can be used, and potassium monohydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, and ammonium phosphate can be used, and one or more of these may be contained.

合成培地の基本培地としては、前記炭素源と窒素源とリン源を含んでいれば十分であるが、乳酸菌は栄養要求性が厳密であるため、その他にビタミン源、ミネラル源を追加することも必要である。ビタミン源としては、例えばビオチン、チアミン(ビタミンB1)、リボフラビン、ピリドキシン(ビタミンB6)、パントテン酸、アスコルビン酸、ヨウ酸、シアノコバラミン、イノシトール、ニコチン酸、コリン、カルニチン、パラアミノ安息香酸、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド等を用いることができる。ミネラル源としては、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、ナトリウム、ヨウ素、コバルト等が挙げられ、これらを供給できる具体的な成分としては、例えば、硝酸カルシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合物を用いることができる。 The basic medium of the synthetic medium is sufficient if it contains the carbon source, nitrogen source and phosphorus source. However, since lactic acid bacteria have strict auxotrophy, vitamin sources and mineral sources may be added. is necessary. Examples of vitamin sources include biotin, thiamine (vitamin B1), riboflavin, pyridoxine (vitamin B6), pantothenic acid, ascorbic acid, iodic acid, cyanocobalamin, inositol, nicotinic acid, choline, carnitine, paraaminobenzoic acid, nicotinamide adenidine Nucleotides and the like can be used. Examples of mineral sources include potassium, calcium, magnesium, sulfur, iron, manganese, zinc, boron, copper, molybdenum, sodium, iodine, cobalt, and the like. Specific components that can supply these include, for example, calcium nitrate. , Potassium chloride, calcium chloride, magnesium sulfate, sodium sulfate, ferrous sulfate, ferric sulfate, manganese sulfate, zinc sulfate, boric acid, copper sulfate, sodium molybdate, molybdenum trioxide, potassium iodide, cobalt chloride, etc. These compounds can be used.

本願発明においては、上記成分を適宜組み合わせて基本培地とする。勿論、天然成分を含まない合成培地で、微生物の増殖が悪い場合には少量の天然物を組み合わせた培地で、培養することも可能である。 In the present invention, the above components are appropriately combined to form a basic medium. Of course, it is also possible to culture in a synthetic medium containing no natural components and in a medium in which a small amount of natural products are combined when the growth of microorganisms is poor.

前記以外の培地組成であっても、乳酸菌が資化・増殖できる物質であれば、本願発明に適用されるのは勿論である。さらに、培地には低級アルコール類(メタノール、エタノール、プロパノールなど)もしくはグリコール類(エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、グリセリンなど)等を添加して基本培地としても良い。 Of course, the medium composition other than the above can be applied to the present invention as long as it is a substance capable of assimilating and growing lactic acid bacteria. Furthermore, a lower alcohol (methanol, ethanol, propanol, etc.) or glycols (ethylene glycol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, etc.) or the like may be added to the medium to form a basic medium.

本願発明においては、乳酸菌は、乾燥状態、または凍結状態で保存しておき、使用時において、前記基本培地等で予め培養しておく。この段階での培養は、それぞれの菌が生育出来れば常法通りで差し支えない。 In the present invention, the lactic acid bacteria are stored in a dry state or a frozen state, and are cultured in advance in the basic medium or the like at the time of use. The culture at this stage may be performed as usual as long as each bacterium can grow.

本願発明の第二工程における、乳酸菌の植菌工程における接種量は、浸出液に対し10〜1010個/mLが適量である。接種量が上記の範囲より多くなっても発酵の進行時間は殆ど変わらず、一方上記の範囲より少なくなると発酵完了までに長時間を要することとなって好ましくない。 The amount of inoculation in the inoculation step of lactic acid bacteria in the second step of the present invention is an appropriate amount of 10 8 to 10 10 cells / mL with respect to the leachate. Even if the inoculation amount exceeds the above range, the fermentation progress time hardly changes. On the other hand, if the inoculation amount is less than the above range, it takes a long time to complete the fermentation.

発酵温度は一般に5〜50℃の範囲、好ましくは乳酸菌の生育至適温度である25〜40℃の範囲である。発酵日数は、至適温度に於いて一般に3〜50日、好ましくは7〜35日の範囲である。発酵日数が上記の一般的範囲より短くなると発酵が十分に行われず発酵物の有効性が低下する場合がある。一方35日を越えて長くしても有効性のそれ以上の有効性は認められなく好ましくない。発酵工程は静置で行えば十分であるが、発酵時間の短縮等の為、振とう培養、通気培養を行うことも可能である。上記条件で発酵工程を経た浸出液を発酵処理物と称す。この段階では溶媒と植物体が混在した状態である。以上の発酵処理が終ったならば、発酵を停止させる為、発酵処理物に80〜120℃で15〜120分程度の加熱殺菌処理を施す。 The fermentation temperature is generally in the range of 5 to 50 ° C, preferably in the range of 25 to 40 ° C, which is the optimum temperature for growth of lactic acid bacteria. The number of days of fermentation is generally in the range of 3 to 50 days, preferably 7 to 35 days, at the optimum temperature. When fermentation days become shorter than said general range, fermentation may not fully be performed but the effectiveness of fermented material may fall. On the other hand, even if it is longer than 35 days, the effectiveness beyond that is not recognized, which is not preferable. It is sufficient that the fermentation process is carried out by standing, but for shortening the fermentation time, it is also possible to carry out shaking culture and aeration culture. The leachate which passed through the fermentation process on the said conditions is called a fermentation processed material. At this stage, the solvent and the plant are mixed. When the above fermentation process is completed, in order to stop the fermentation, the fermented product is subjected to a heat sterilization process at 80 to 120 ° C. for about 15 to 120 minutes.

第三工程では、前記殺菌処理を終わった発酵処理物を、これをそのまま、或いは一般的かつ好適にはろ過或いは遠心分離などの固液分離手段によって液相を分取し、発酵培養液とする。発酵培養液はこのまま用いることが出来るが、さらに必要ならば希釈もしくは濃縮によって適宜の濃度とした上、化粧料の配合原料として供する。又、場合によっては、固液分離後の液相を、スプレードライ法、凍結乾燥法など常法に従って固体化し、さらに必要に応じて粉砕して粉末状とした上、化粧料に配合するようにしてもよい。 In the third step, the fermented product after the sterilization treatment is used as it is, or generally and preferably by separating the liquid phase by solid-liquid separation means such as filtration or centrifugation to obtain a fermentation broth. . The fermentation broth can be used as it is, but if necessary, it is diluted or concentrated to an appropriate concentration and used as a cosmetic raw material. In some cases, the liquid phase after solid-liquid separation is solidified according to conventional methods such as spray-drying and freeze-drying, and pulverized as necessary to form a powder and then blended into cosmetics. May be.

第四工程では、第三工程で分離した黄花菜の根部に、水あるいは低級アルコール(エタノール、プロパノール)、もしくはグリコール類(エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、グリセリンなど)又はこれらとの混液等を抽出溶媒として用いて加熱抽出して発酵抽出液とする。
尚、発酵抽出液を得る際の抽出温度、及び抽出時間は目的に応じて適宜調整可能であるが、殺菌処理を兼ねて抽出温度は、80〜120℃、好ましくは90℃〜105℃である。抽出時間は、15〜120分間、好ましくは30〜60分間である。
In the fourth step, water or lower alcohol (ethanol, propanol), or glycols (ethylene glycol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, etc.) or these are added to the roots of yellow rapeseed separated in the third step. A mixed extract or the like is used as an extraction solvent to extract by heating to obtain a fermentation extract.
In addition, although the extraction temperature and extraction time at the time of obtaining a fermented extract can be suitably adjusted according to the objective, extraction temperature is also 80-120 degreeC also serving as a disinfection process, Preferably it is 90 to 105 degreeC. . The extraction time is 15 to 120 minutes, preferably 30 to 60 minutes.

得られた発酵物は細胞分化促進剤、バリア機能改善剤、SA-β-Gal活性抑制剤、DPPHラジカル消去剤として用いることが出来る。また、発酵物を配合してなる化粧料としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、洗顔料などの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リキッドファンデーション、メイクアッププレスドパウダーなどのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディーシャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。 The obtained fermented product can be used as a cell differentiation promoter, a barrier function improver, an SA-β-Gal activity inhibitor, and a DPPH radical scavenger. Cosmetics containing fermented products include basic cosmetics such as emulsions, creams, lotions, essences, packs, facial cleansers, and makeup makeup such as lipsticks, foundations, liquid foundations, and makeup pressed powders. And cosmetics such as cosmetics, facial cleansers, body shampoos, soaps and the like, as well as bath agents, but of course are not limited thereto.

本願発明の化粧料中に於ける発酵物の配合量は、得られた培養液の蒸発残分に換算して0.0001〜10質量%、好ましくは0.01〜1質量%の範囲である。 The blending amount of the fermented product in the cosmetic of the present invention is in the range of 0.0001 to 10% by mass, preferably 0.01 to 1% by mass in terms of the evaporation residue of the obtained culture solution. .

本願発明の化粧料には、上記の必須成分の他に、通常化粧料に用いられる配合成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。 In addition to the above-mentioned essential ingredients, the cosmetics of the present invention include compounding ingredients usually used in cosmetics such as oily ingredients, surfactants, moisturizers, thickeners, antiseptic / disinfectants, powder ingredients, ultraviolet rays. Absorbers, pigments, fragrances and the like can be appropriately blended as necessary.

ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類;ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類;ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類;流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類;ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、cis−11−エイコセン酸などの脂肪酸類;ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類;ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、2−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル(ステアリン酸オクチルドデシル等)などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。 Here, as the oil component, for example, olive oil, jojoba oil, castor oil, soybean oil, rice oil, rice germ oil, palm oil, palm oil, cacao oil, meadow foam oil, sheer butter, tea tree oil, avocado oil, Oils derived from plants such as macadamia nut oil and plant-derived squalane; Fats derived from animals such as mink oil and turtle oil; waxes such as beeswax, carnauba wax, rice wax, lanolin; liquid paraffin, petrolatum, paraffin wax, squalane, etc. Hydrocarbons; fatty acids such as myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, isostearic acid, cis-11-eicosenoic acid; higher alcohols such as lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol; isopropyl myristate, palmitic acid Isopropyl, me Butyl phosphate, 2-ethylhexyl glycerides, higher fatty acid octyldodecyl (octyl stearate dodecyl and the like), and the synthetic esters and synthetic triglycerides such like.

界面活性剤としては,例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤;脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪酸アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤;第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪酸アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、2−アルキル−1−アルキル−1−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、N,N−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤;N,N−ジメチル−N−アルキル−N−カルボキシメチルアンモニオベタイン、N,N,N−トリアルキル−N−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、N−アシルアミドプロピル−N′,N′−ジメチル−N′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。 Examples of the surfactant include polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, polyoxyethylene glycerin fatty acid ester, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene Nonionic surfactants such as oxyethylene sorbitol fatty acid esters; fatty acid salts, alkyl sulfates, alkylbenzene sulfonates, polyoxyethylene alkyl ether sulfates, polyoxyethylene fatty acid amine sulfates, polyoxyethylene alkyl phenyl ether sulfates, Polyoxyethylene alkyl ether phosphates, α-sulfonated fatty acid alkyl ester salts, polyoxyethylene alkyl phenyl ether phosphates, etc. ON surfactant: quaternary ammonium salt, primary to tertiary fatty acid amine salt, trialkylbenzylammonium salt, alkylpyridinium salt, 2-alkyl-1-alkyl-1-hydroxyethylimidazolinium salt, N N, N-dimethyl-N-alkyl-N-carboxymethylammoniobetaine, N, N, N-trialkyl-N-, N, N-dimethyl-N-alkyl-N-carboxymethylammoniobetaine Amphoteric surfactants such as alkylene ammoniocarboxybetaine and N-acylamidopropyl-N ′, N′-dimethyl-N′-β-hydroxypropylammoniosulfobetaine can be used.

保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、ポリエチレングリコールなどのグリコール類、マルチトール、ソルビトール、キシリトール、トレハロース、グルコース等の糖類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、ムコ多糖類(例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など)、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、加水分解シルク蛋白質、NMF関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、フィトステロール、大豆リン脂質、イソステアリン酸コレステリル、海藻抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体等が挙げられる。 Examples of the humectant include glycols such as glycerin, propylene glycol, dipropylene glycol, 1,3-butylene glycol, polyethylene glycol, sugars such as maltitol, sorbitol, xylitol, trehalose, glucose, sodium pyrrolidonecarboxylate, mucopoly Sugars (eg, hyaluronic acid and its derivatives, chondroitin and its derivatives, heparin and its derivatives, etc.), elastin and its derivatives, collagen and its derivatives, hydrolyzed silk protein, NMF related substances, lactic acid, urea, higher fatty acid octyldodecyl, Examples include phytosterol, soybean phospholipid, cholesteryl isostearate, seaweed extract, various amino acids, and derivatives thereof.

増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン、ファーセララン等の褐藻、緑藻或いは紅藻由来成分、ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類;ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリグルタミン酸及びその誘導体、グルコシルトレハロースと加水分解水添デンプンを主体とする糖化合物等が挙げられる。 Examples of thickeners include, for example, brown algae such as alginic acid, agar, carrageenan, fucoidan, and fartheraran, green algae or red algae-derived components, pectin, locust bean gum, polysaccharides such as aloe polysaccharide, gums such as xanthan gum, tragacanth gum, guar gum and the like , Cellulose derivatives such as carboxymethylcellulose and hydroxyethylcellulose, synthetic polymers such as polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, carboxyvinyl polymer, acrylic acid / methacrylic acid copolymer; hyaluronic acid and its derivatives, polyglutamic acid and its derivatives, glucosyl trehalose And sugar compounds mainly composed of hydrolyzed hydrogenated starch.

防腐・殺菌剤としては、例えばパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類;フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャーマル(イミダゾデイニールウレア)、1,2−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、プロポリスエキス等がある。 Examples of the antiseptic / bactericidal agent include paraoxybenzoates such as methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, and butyl paraoxybenzoate; phenoxyethanol, dichlorophene, hexachlorophene, chlorhexidine hydrochloride, benzalkonium chloride , Salicylic acid, ethanol, undecylenic acid, phenols, jarmal (imidazodenyl urea), 1,2-pentanediol, various essential oils, bark distillate, propolis extract and the like.

粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、6−又は12−ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー等がある。 Examples of the powder component include sericite, titanium oxide, talc, kaolin, bentonite, zinc oxide, magnesium carbonate, magnesium oxide, zirconium oxide, barium sulfate, silicic anhydride, mica, 6- or 12-nylon powder, polyethylene powder. , Silk powder, cellulosic powder and the like.

紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸2−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、2,4−ジヒドロキシベンゾフェノン、2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノン−5−スルホン酸塩、4−ターシャリーブチル−4−メトキシベンゾイルメタン、2−(2−ヒドロキシ−5−メチルフェニル)ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。 Examples of the ultraviolet absorber include ethyl paraaminobenzoate, ethylhexyl paradimethylaminobenzoate, amyl salicylate and derivatives thereof, 2-ethylhexyl paramethoxycinnamate, octyl cinnamate, oxybenzone, 2,4-dihydroxybenzophenone, 2-hydroxy-4 -Methoxybenzophenone-5-sulfonate, 4-tertiarybutyl-4-methoxybenzoylmethane, 2- (2-hydroxy-5-methylphenyl) benzotriazole, urocanic acid, ethyl urocanate, aloe extract, etc. .

さらに必要ならば、本発明で用いる発酵物の作用効果及び特長を損なわない範囲で、他の活性成分(美白剤、皮膚老化防止・肌荒れ改善剤、抗炎症剤等)を配合してもよく、かかるものとしては、例えば美白剤であれば、トラネキサム酸及びその誘導体、t−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン誘導体、エラグ酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、胎盤抽出物、システイン、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、ハマメリス抽出物、イタドリ抽出物、甘草抽出物、ゲンノショウコ抽出物、ナツメ抽出物、シャクヤク抽出物、トウキ抽出物、モモ抽出物、緑藻類、紅藻類又は褐藻類の海藻の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物(例えばリノール酸メントールエステルなど)、2,5−ジヒドロキシ安息香酸誘導体等が、皮膚老化防止・肌荒れ改善成分であれば、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、セラミドなどの細胞間脂質、胎盤抽出物、ニコチン酸及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体(ジカリウム塩等)、t−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンA前駆体、ビタミンA及びその誘導体、ビタミンE及びその誘導体、アラントイン、α−ヒドロキシ酸類、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、コエンザイムQ−10、アデノシン、α−リポ酸、ピコリン、カルニチン及びその誘導体、ゲンチアナエキス、甘草エキス、ハトムギエキス、カミツレエキス、ニンジンエキス、アロエエキスなどの生薬抽出エキス、緑藻類、紅藻類又は褐藻類の海藻の抽出物、ソウハクヒエキス、ブナ抽出物、キダチアロエ抽出物、マンネンロウ抽出物、イチョウ抽出物、スギナ抽出物、ベニバナ抽出物、オタネニンジン抽出物、セイヨウニワトコ抽出物、ハゴロモグサ抽出物、レンゲ抽出物、マンゴー抽出物、卵殻膜抽出タンパク質、デオキシリボ核酸カリウム塩、紫蘭根抽出物、ムラサキシキブ抽出物、イネ抽出物等が、又抗炎症成分であれば、例えばグアイアズレンスルホン酸ナトリウム、グアイアズレンスルホン酸エチルなどのアズレン誘導体、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルレチン酸ステアリルなどのグリチルリチン酸誘導体、アラントイン、カンゾウ抽出物、クジン抽出物、シャクヤク抽出物、ボタンピ抽出物、レンギョウ抽出物、リュウタン抽出物、トウキンセンカ抽出物、パセリ抽出物、オトギリソウ抽出物等が挙げられる。抗酸化剤としては、例えばスーパーオキシドディスムターゼ(Superoxide dismutase)、カタラーゼなどの生体内活性酸素分解酵素、ビタミンE、ビタミンDなどのビタミン類及びその誘導体、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ユビデカキノン(ユビキノン)、ルチン、ルチングルコシド、γ−オリザノール等がある。 Furthermore, if necessary, other active ingredients (whitening agent, skin aging prevention / rough skin improvement agent, anti-inflammatory agent, etc.) may be blended within the range that does not impair the effects and features of the fermented product used in the present invention. Examples of such a whitening agent include tranexamic acid and its derivatives, t-cycloamino acid derivatives, kojic acid and its derivatives, ascorbic acid and its derivatives, hydroquinone derivatives, ellagic acid and its derivatives, resorcinol derivatives, placental extraction , Cysteine, Sakuhakuhi extract, Yukinoshita extract, Hamamelis extract, Itadori extract, Licorice extract, Gentian extract, Jujube extract, Peonies extract, Sugi extract, Peach extract, Green algae, Red algae or Brown algae Seaweed extracts, linoleic acid and its derivatives or processed products (eg menthol linoleate) Ester, etc.), 2,5-dihydroxybenzoic acid derivatives, etc., are components for preventing skin aging and improving rough skin, collagen derived from animals or fish and derivatives thereof, elastin and derivatives thereof, intercellular lipids such as ceramide, placenta extraction Nicotinic acid and derivatives thereof, glycyrrhizic acid and derivatives thereof (dipotassium salt, etc.), t-cycloamino acid derivatives, vitamin A precursor, vitamin A and derivatives thereof, vitamin E and derivatives thereof, allantoin, α-hydroxy acids, diisopropyl Amine dichloroacetate, γ-amino-β-hydroxybutyric acid, coenzyme Q-10, adenosine, α-lipoic acid, picoline, carnitine and its derivatives, gentian extract, licorice extract, pearl barley extract, chamomile extract, carrot extract, aloe extract, etc. Herbal medicine extract , Green algae, red algae or brown algae seaweed extract, Sakuhakuhi extract, beech extract, Kidachi aloe extract, mannenrou extract, ginkgo biloba extract, horsetail extract, safflower extract, rapeseed extract, elderberry extract For example, guaiazulene sulfonic acid can be used as an anti-inflammatory component, for example, Guagomogusa extract, astragalus extract, mango extract, eggshell membrane extract protein, deoxyribonucleic acid potassium salt, purple orchid root extract, purple plant extract, rice extract, etc. Azulene derivatives such as sodium and ethyl guaiazulenesulfonate, glycyrrhizic acid derivatives such as dipotassium glycyrrhizinate and stearyl glycyrrhetinate, allantoin, licorice extract, cucumber extract, peony extract, button pi extract, forsythia extract, ryutan extract Things, toe calendula extract, parsley extract, Hypericum extract, and the like. Antioxidants include, for example, superoxide dismutase, bioactive oxygen-degrading enzymes such as catalase, vitamins such as vitamin E and vitamin D and derivatives thereof, butylhydroxyanisole, butylhydroxytoluene, propyl gallate, There are ubidecaquinone (ubiquinone), rutin, rutin glucoside, γ-oryzanol and the like.

以下、本願発明における発酵物の効果試験の実施例を示す。さらに、発酵物を用いた皮膚組成物への応用処方例等について述べるが、ここに記載された実施例に限定されるものではない。なお、以下に於いて、部はすべて質量部を、又%はすべて質量%を意味する。 Examples of fermented product effect tests in the present invention will be described below. Furthermore, although the application formulation example etc. to the skin composition using fermented material are described, it is not limited to the Example described here. In the following, all parts are parts by mass, and all% are% by mass.

黄花菜の根部浸出液に植菌する乳酸菌の調製
乳酸菌は(独)製品評価技術基盤機構より分譲を受けたLactobacillus plantarum(NBRC 101975)を用いた。乳酸菌の培養はMRS培地にて、培地30mlに、分譲を受けた菌株の1白金耳を摂取し、30℃にて3日間静置培養を行い、乳酸菌培養液とした。(MRS培地組成:ペプトン10g、牛肉エキス10g、酵母エキス5g、グルコース20g、Tween80 1g、K2HPO4 2g、酢酸Na 5g、クエン酸二アンモニウム 2g、MgSO4・7H2O 0.2g、MnSO4・nH2O 0.05g、精製水1L)
Lactobacillus plantarum (NBRC 101975), which was sold by the National Institute for Product Evaluation Technology, was used as the lactic acid bacterium to inoculate the root exudate of yellow rape. Lactic acid bacteria were cultured in MRS medium, 30 ml of the medium was inoculated with 1 platinum loop of the strain that had been transferred, and statically cultured at 30 ° C. for 3 days to obtain a lactic acid bacteria culture solution. (MRS medium composition: peptone 10 g, beef extract 10 g, yeast extract 5 g, glucose 20 g, Tween 80 1 g, K 2 HPO 4 2 g, sodium acetate 5 g, diammonium citrate 2 g, MgSO 4 .7H 2 O 0.2 g, MnSO 4・ NH 2 O 0.05g, purified water 1L)

発酵処理物の調製
乾燥黄花菜の根部10gにグルコース1gおよび精製水100mlを加え、室温で浸出させた。その後、105℃、15分間滅菌処理を行い、浸出液を得た。冷却後前記乳酸菌培養液5mlを前記浸出液に加えよく撹拌した。乳酸菌を植え付けた浸出液は30℃にて28日間静置培養を行い、黄花菜根部発酵処理物を得た。
Preparation of Fermentation Processed Product 1 g of glucose and 100 ml of purified water were added to 10 g of dried yellow rape roots and leached at room temperature. Thereafter, sterilization was performed at 105 ° C. for 15 minutes to obtain a leachate. After cooling, 5 ml of the lactic acid bacteria culture solution was added to the leachate and stirred well. The leachate in which the lactic acid bacteria were planted was subjected to stationary culture at 30 ° C. for 28 days to obtain a yellow flower rape root fermented product.

黄花菜の根部の乳酸菌発酵物の調製
得られた発酵処理物は、発酵工程を停止させる為、105℃、15分間の滅菌処理を行う。滅菌後、ろ布で培養液を絞り出す。ろ液は6,000rpm×10min.で遠心分離を行い、上清を取り効果試験の発酵培養液とした。さらに、ろ布に残った黄花菜の根部残渣1gに、精製水を10mlの割合で加え、105℃、15分間滅菌抽出した。滅菌抽出後、ろ布で抽出液を絞り出し、効果試験の黄花菜根部発酵抽出液とした。また、陰性対照物として[0042]で黄花菜を添加しない乳酸菌だけで培養を行った後、遠心分離処理を行った培養液(「無植物・発酵培養液」)を調製した。
Preparation of Fermented Lactobacillus at the Root of Yellow Flower Vegetables The obtained fermented product is sterilized at 105 ° C. for 15 minutes in order to stop the fermentation process. After sterilization, the culture solution is squeezed out with a filter cloth. The filtrate was centrifuged at 6,000 rpm × 10 min., And the supernatant was taken as a fermentation broth for effect test. Further, purified water was added at a ratio of 10 ml to 1 g of yellow root vegetable residue remaining on the filter cloth, and sterilized and extracted at 105 ° C. for 15 minutes. After sterilization extraction, the extract was squeezed out with a filter cloth to obtain a yellow flower rape fermentation extract of the effect test. Further, as a negative control, a culture solution (“plant-free / fermented culture solution”) was prepared after culturing only with lactic acid bacteria without adding yellow flower vegetables in [0042].

本願発明における乳酸菌を用いて得られた発酵物が、酵母菌を用いて得られた発酵物より優位性があることを示す為、酵母菌を用いて同様の試験を行った。
黄花菜の根部浸出液に植菌する酵母菌の調製酵母菌は(独)製品評価技術基盤機構より分譲を受けたSaccharomyces cereviciae(NBRC 0308)を用いた。酵母菌の培養は、YNB(Yeast Nitrogen Base) with Ammonium Sulfate 合成培地にグルコースを2.0%添加した(以下、本明細書中では、YNB-SG培地と称す)培地50mlに分譲を受けた菌株の1白金耳を摂取し、25℃にて5日間静置培養を行い、酵母菌培養液とした。
<YNB-SG培地組成>
硫酸アンモニウム5,000、リン酸二水素カリウム1,000、硫酸マグネシウム500、塩化ナトリウム100、塩化カルシウム100、ビオチン0.002、パントテン酸カルシウム0.4、葉酸0.002、イノシトール2.0、ナイアシン0.4、パラアミノ安息香酸0.2、塩酸ピリドキシン0.4、リボフラビン0.2、塩酸チアミン0.4、ホウ酸0.5、硫酸銅0.04、ヨウ化カリウム0.1、塩化第二鉄0.2、硫酸マンガン0.4、モリブデン酸ナトリウム0.2、硫酸亜鉛0.4、グルコース20,000(単位は全てmg/L)。
In order to show that the fermented product obtained using the lactic acid bacterium in the present invention is superior to the fermented product obtained using the yeast, the same test was performed using the yeast.
Saccharomyces cereviciae (NBRC 0308), which was sold by the National Institute for Product Evaluation Technology, was used as the yeast for inoculating the root exudate of yellow rape. Yeast culture was performed by adding 2.0% glucose to YNB (Yeast Nitrogen Base) with synthetic medium (hereinafter referred to as YNB-SG medium) in 50 ml medium. 1 platinum ear was ingested, and static culture was performed at 25 ° C. for 5 days to obtain a yeast culture solution.
<YNB-SG medium composition>
Ammonium sulfate 5,000, potassium dihydrogen phosphate 1,000, magnesium sulfate 500, sodium chloride 100, calcium chloride 100, biotin 0.002, calcium pantothenate 0.4, folic acid 0.002, inositol 2.0, niacin 0 .4, 0.2 paraaminobenzoic acid, pyridoxine hydrochloride 0.4, riboflavin 0.2, thiamine hydrochloride 0.4, boric acid 0.5, copper sulfate 0.04, potassium iodide 0.1, ferric chloride 0.2, manganese sulfate 0.4, sodium molybdate 0.2, zinc sulfate 0.4, glucose 20,000 (unit is mg / L).

酵母菌発酵処理物の調製
乾燥黄花菜の根部10gにグルコース1gおよび精製水100mlを加え、室温で浸出させた。その後、105℃、15分間滅菌処理を行い、浸出液を得た。冷却後前記酵母菌培養液5mlを前記浸出液に加えよく撹拌した。酵母菌を植え付けた浸出液は25℃にて28日間静置培養を行い、酵母菌発酵処理物を得た。
Preparation of Yeast Fermentation Treated Product 1 g of glucose and 100 ml of purified water were added to 10 g of roots of dried yellow rape and leached at room temperature. Thereafter, sterilization was performed at 105 ° C. for 15 minutes to obtain a leachate. After cooling, 5 ml of the yeast culture solution was added to the leachate and stirred well. The leachate in which the yeast was planted was subjected to stationary culture at 25 ° C. for 28 days to obtain a yeast fermented product.

黄花菜の根部の酵母菌発酵物の調製
得られた発酵処理物は、発酵工程を停止させる為、105℃、15分間の滅菌処理を行う。滅菌後、ろ布で培養液を絞り出す。ろ液は6,000rpm×10min.で遠心分離を行い、上清を取り効果試験の黄花菜の根部の酵母菌発酵培養液とした。さらに、ろ布に残った黄花菜の根部残渣1gに、精製水を10mlの割合で加え、105℃、15分間滅菌抽出した。滅菌抽出後、ろ布で抽出液を絞り出し、効果試験の黄花菜の根部の酵母菌発酵抽出液とした。また、陰性対照物として[0049][0050]で黄花菜を添加しない酵母菌だけで培養を行った後、遠心分離処理を行った培養液を調製した。
Preparation of Fermented Yeast Fermented Product of Yellow Flower Vegetables The obtained fermented product is sterilized at 105 ° C. for 15 minutes in order to stop the fermentation process. After sterilization, the culture solution is squeezed out with a filter cloth. The filtrate was centrifuged at 6,000 rpm × 10 min., And the supernatant was taken to obtain a yeast fermentation culture solution for the root part of yellow rape of the effect test. Further, purified water was added at a ratio of 10 ml to 1 g of yellow root vegetable residue remaining on the filter cloth, and sterilized and extracted at 105 ° C. for 15 minutes. After sterilization extraction, the extract was squeezed out with a filter cloth, and used as a yeast fermentation extract of the root of yellow rape of effect test. Further, as a negative control, after culturing only with yeasts to which yellow flowers were not added in [0049] [0050], a culture solution subjected to centrifugation treatment was prepared.

<細胞分化促進効果・バリア機能改善効果>
バリア機能が異常な皮膚においては、未分化状態の角質細胞が多く、正常な角層が形成されなくなっている。このため、肌の炎症が起こりやすく、またその炎症により、バリア機能が異常になるという悪循環を繰り返す原因となっている。
従って、細胞分化を促進することが出来れば、バリア機能改善効果が期待出来ると考えられる。
そこで、黄花菜の根部の乳酸菌発酵物の細胞分化促進効果を確認した。
<Cell differentiation promoting effect and barrier function improving effect>
In skin with an abnormal barrier function, there are many undifferentiated keratinocytes, and a normal stratum corneum is not formed. For this reason, skin inflammation is likely to occur, and this inflammation causes a vicious cycle in which the barrier function becomes abnormal.
Therefore, if cell differentiation can be promoted, an effect of improving the barrier function can be expected.
Then, the cell differentiation promotion effect of the lactic-acid-bacteria fermented material of the root part of yellow flower vegetables was confirmed.

細胞の培養
細胞:Hacat細胞
培地:Humedia KG2
D-MEM (Ca濃度:1.8mM)
固定液:Mildform 10NM(和光純薬工業)
染色:0.05%ナフトールブルーブラック溶液(9%酢酸、0.1M酢酸ナトリウム)
ヒト表皮細胞であるHacat細胞をHumedia KG2(クラボウ)培地で培養した。
細胞を12 well plateに50%コンフルーエント程度に植え付け培養した。翌日各試料を添加した。添加後、72時間培養後に細胞を固定し、ナフトールブルーブラック溶液で染色し、細胞の形態を顕微鏡観察し、分化の程度を判定した。
Cell culture cells: Hacat cell culture medium: Humedia KG2
D-MEM (Ca concentration: 1.8 mM)
Fixing solution: Mildform 10NM (Wako Pure Chemical Industries)
Staining: 0.05% naphthol blue black solution (9% acetic acid, 0.1M sodium acetate)
Hacat cells, which are human epidermal cells, were cultured in Humedia KG2 (Kurabo) medium.
Cells were planted in a 12-well plate to about 50% confluence and cultured. The next day, each sample was added. After the addition, the cells were fixed after culturing for 72 hours, stained with a naphthol blue black solution, the morphology of the cells was observed with a microscope, and the degree of differentiation was determined.

細胞分化の評価
表皮細胞であるケラチノサイトは分化すると細胞同士が接着し、無定形の形を取る。一方、未分化の細胞は一つ一つの細胞が独立し、お互いに接着しないことが一般に知られている。ケラチノサイトの分化は培地内のCa濃度により促進される。[図-1]の写真のようにHacat細胞をCa濃度1.8mMのD-MEM培地で培養すると細胞は完全に分化し(評価点5番の写真に該当)、Ca濃度が低いHumedia KG2培地では細胞は未分化の状態で増殖する(評価点1番の写真に該当)。この未分化と分化状態の細胞同士の接着具合を5段階で顕微鏡による目視評価を行い、細胞分化度を評価した。細胞分化度の判定基準は[図-1]に示した基準により判定を行った。
Evaluation of cell differentiation When keratinocytes, which are epidermal cells, differentiate, the cells adhere to each other and take an amorphous form. On the other hand, it is generally known that undifferentiated cells are independent of each other and do not adhere to each other. Differentiation of keratinocytes is promoted by the Ca concentration in the medium. As shown in the photograph in [Fig.-1], when Hacat cells are cultured in a D-MEM medium with a Ca concentration of 1.8 mM, the cells are completely differentiated (corresponding to the photograph with the evaluation score of 5), and the Humedia KG2 medium with a low Ca concentration Then, the cells proliferate in an undifferentiated state (corresponding to the photograph with the evaluation score 1). The degree of adhesion between undifferentiated and differentiated cells was visually evaluated with a microscope in five stages to evaluate the degree of cell differentiation. The criteria for cell differentiation were determined according to the criteria shown in [Fig. 1].

[図-1]の細胞分化度評価の評価基準に基づき、各試料を添加した場合の細胞分化度の結果を[表−1]に示した。なお、細胞への発酵物の添加量は、[0042]にて調製したものを培地に2.5%添加して実験を行った。比較例-3として黄花菜の根部の培養前エキス(以下、「黄花菜・根・培養前エキス」)、比較例-4として黄花菜を添加しないで乳酸菌だけで培養を行った後、遠心分離処理を行った培養液(以下、「無植物・発酵培養液」)、実施例-1として黄花菜の根部の発酵培養液(以下、「黄花菜・根・発酵培養液」)、実施例-2として黄花菜の根部の発酵抽出液(以下、「黄花菜・根・発酵抽出液」)の結果を示した。尚、試料内容を示す際には、同様に示している。比較例-3の黄花菜・根・培養前エキスでは、細胞分化度評点が2点でほとんど細胞分化促進効果を示さなかった。しかし、実施例-1の黄花菜・根・発酵培養液では細胞分化度評点が5点、また実施例-2として黄花菜・根・発酵抽出液の細胞分化度評点も5点を示し非常に高い細胞分化促進効果を示した。また、陰性対照として試験を行った比較例-4は、細胞分化度評点は1であり、乳酸菌の培養液だけでは細胞分化促進効果が無いことが示された。なお、比較例-2のHumedia KG2培地で培養した未分化細胞の細胞分化度評点は1、D-MEM培地で培養した分化細胞の細胞分化度評点を5として判定した。以上の結果から、乳酸菌による発酵処理により黄花菜・根部から抽出される成分が変化し、細胞分化促進効果が高まったことがわかった。 [Table-1] shows the results of the cell differentiation degree when each sample was added based on the evaluation criteria of the cell differentiation degree evaluation in [Fig.-1]. The experiment was performed by adding 2.5% of the fermented product added to the cells to the medium prepared in [0042]. As comparative example-3, extract of yellow rapeseed before cultivation (hereinafter referred to as “yellow rapeseed / root / precultured extract”), and as comparative example-4, culturing was carried out only with lactic acid bacteria without adding yellow rapeseed, followed by centrifugation. Treated culture fluid (hereinafter referred to as “plant-free / fermented culture fluid”), Example-1 fermentation culture fluid for root of yellow rape (hereinafter referred to as “yellow rapeseed / root / fermented culture fluid”), Example- 2 shows the result of the fermented extract of the root of yellow rape (hereinafter referred to as “yellow rapeseed / root / fermented extract”). In addition, when showing the sample content, it shows similarly. The yellow flower vegetable / root / pre-culture extract of Comparative Example-3 showed a cell differentiation degree rating of 2 and showed almost no cell differentiation promoting effect. However, in Example-1 yellow flower vegetable / root / fermentation broth, the cell differentiation score was 5 points, and in Example-2, yellow flower vegetable / root / fermentation extract also showed 5 cell differentiation score. It showed a high cell differentiation promoting effect. Further, Comparative Example-4, which was tested as a negative control, had a cell differentiation degree score of 1, indicating that the lactic acid bacteria culture solution alone has no cell differentiation promoting effect. In addition, the cell differentiation degree score of the undifferentiated cells cultured in the Humedia KG2 medium of Comparative Example-2 was determined as 1, and the cell differentiation degree score of the differentiated cells cultured in the D-MEM medium was determined as 5. From the above results, it was found that the components extracted from yellow flower vegetables and roots were changed by fermentation treatment with lactic acid bacteria, and the effect of promoting cell differentiation was enhanced.

<SA-β-Gal活性を抑制効果・細胞老化度改善効果>
加齢とともに進行するハリ・弾力の低下、たるみ等の皮膚の機能低下は、細胞レベルの老化によって引き起こされている。
一方、ヒトの皮膚線維芽細胞においては細胞継代、および採取されたヒトの年齢とともに細胞中のSA-β-Gal活性(senescence-associated beta-galactosidase)が増加することが知られており、SA-β-Gal活性は細胞の老化マーカーとして使用されている。
従って、SA-β-Gal活性を抑制することが出来れば、細胞老化抑制効果が期待出来ると考えられる。
そこで、黄花菜の根部の乳酸菌発酵代謝物のSA-β-Gal活性を確認した。
<SA-β-Gal activity inhibitory effect / cell aging improvement effect>
Decrease in skin functions such as elasticity, elasticity and sagging that progress with aging is caused by aging at the cellular level.
On the other hand, in human skin fibroblasts, it is known that SA-β-Gal activity (senescence-associated beta-galactosidase) in cells increases with the passage of cells and the age of collected humans. -β-Gal activity has been used as a cellular senescence marker.
Therefore, if the SA-β-Gal activity can be suppressed, it is considered that a cell aging inhibitory effect can be expected.
Therefore, the SA-β-Gal activity of the fermented metabolite of lactic acid bacteria at the root of yellow rape was confirmed.

SA-β-Gal活性の測定による細胞老化度の測定
細胞の培養
細胞:正常ヒト線維芽細胞NB1-RGB(理化学研究所)
培地:D-MEM FBS10%
正常ヒト線維芽細胞NB1-RGBを培養し、細胞培養液に過酸化水素200μMを1日2時間添加した。これを連続で2日間繰り返すことにより、細胞老化を起こさせた。この細胞に[0042]で調製した試料を細胞培養培地に2.5%の濃度で3日間添加した後、SA-β-Gal染色を行い、細胞の染色度合いにより細胞老化度を測定した。なお、陽性対照としてはニコチンアミドを用いた。
SA-β-Gal染色
固定液で5分間細胞を固定する。細胞をPBS(−)で洗浄後、SA-β-Gal溶液を添加して、37℃で16時間放置した。SA-β-Gal染色液で染色した細胞を集め、2N-NaOH溶液で溶解し、655nmの吸光度を測定(A値)し、SA-β-Gal活性を測定した。 溶解液の一部は、BCA法で540nmの吸光度を測定(B値)し、タンパク量を測定した。下記の計算式により細胞タンパク量当りのSA-β-Gal活性を求めた。

SA-β-Gal活性
=655nmの吸光度値(A値)/BCA法で測定した540nmの吸光度値(B値)

固定液 :ホルムアルデヒド液(試薬ホルマリン37%濃度)5mLにPBS(−)95mLを加える。
X-Gal溶液 :20mgのX-Gal(和光純薬)を1mLのDMSOに溶解する。
SA-β-Gal染色液 :X-Galが1mg/mLの濃度になるように、下記の染色bufferに溶解する。
染色Buffer :40mMクエン酸:40mMリン酸水素二ナトリウム(1:3)で
pH6.0に調製した水溶液に以下の4試薬を溶解する。
5mMフェロシアン化カリウム
5mMフェリシアン化カリウム
150mM NaCl
2mM MgCl2
BCA法 :下記のC液とD液を50:1の割合で測定直前に混合する。
2N-NaOHに溶解した細胞溶解液40μLに、C液とD液の混合液200μLを添加し、37℃で30分間反応させた後、540nmの吸光度を測定し、タンパク量とする。
C液 Sodium bicinchoninate 10g
NaCO 20g
Sodium tartrate 1.6g
NaOH 4g
NaHCO 9.5g
精製水で溶解後、10N-NaOHでpHを11.25に調整した後、1Lにする。
D液 CuSO・5H2O 4g
精製水で100mLとする。
Measurement of cell aging by measuring SA-β-Gal activity Cultured cells: Normal human fibroblasts NB1-RGB (RIKEN)
Medium: D-MEM FBS 10%
Normal human fibroblasts NB1-RGB were cultured, and 200 μM hydrogen peroxide was added to the cell culture medium for 2 hours a day. This was repeated for 2 days in succession to cause cell senescence. After the sample prepared in [0042] was added to the cells at a concentration of 2.5% for 3 days, SA-β-Gal staining was performed, and the degree of cell aging was measured based on the degree of cell staining. Note that nicotinamide was used as a positive control.
Fix cells with SA-β-Gal staining fixative for 5 minutes. After washing the cells with PBS (−), an SA-β-Gal solution was added and left at 37 ° C. for 16 hours. Cells stained with the SA-β-Gal staining solution were collected, dissolved in 2N-NaOH solution, the absorbance at 655 nm was measured (A value), and SA-β-Gal activity was measured. A part of the lysate was measured for absorbance at 540 nm (B value) by the BCA method, and the amount of protein was measured. The SA-β-Gal activity per cell protein amount was determined by the following calculation formula.

SA-β-Gal activity = absorbance value at 655 nm (A value) / absorbance value at 540 nm measured by BCA method (B value)

Fixing solution: 95 mL of PBS (−) is added to 5 mL of formaldehyde solution (reagent formalin 37% concentration).
X-Gal solution: 20 mg of X-Gal (Wako Pure Chemical Industries) is dissolved in 1 mL of DMSO.
SA-β-Gal staining solution: Dissolve in the following staining buffer so that X-Gal has a concentration of 1 mg / mL.
Staining Buffer: 40 mM citric acid: 40 mM disodium hydrogen phosphate (1: 3)
The following 4 reagents are dissolved in an aqueous solution adjusted to pH 6.0.
5 mM potassium ferrocyanide
5 mM potassium ferricyanide 150 mM NaCl
2 mM MgCl 2
BCA method: The following C liquid and D liquid are mixed at a ratio of 50: 1 immediately before measurement.
To 40 μL of cell lysate dissolved in 2N-NaOH, 200 μL of a mixture of solution C and solution D is added and reacted at 37 ° C. for 30 minutes, and then the absorbance at 540 nm is measured to determine the amount of protein.
Liquid C Sodium bicinchoninate 10g
Na 2 CO 3 20g
Sodium tartrate 1.6g
NaOH 4g
9.5 g of NaHCO 3
After dissolving with purified water, the pH is adjusted to 11.25 with 10N NaOH, and then adjusted to 1L.
D solution CuSO 4 · 5H 2 O 4g
Make up to 100 mL with purified water.

[表-2]にSA-β-Gal活性の測定による細胞老化度の結果を示した。比較例-5の過酸化水素200μM濃度で2時間細胞処理を2回行った細胞ではSA-β-Gal活性評点が13.8であった。これに対して過酸化水素処理を行わなかった比較例-6の細胞では、SA-β-Gal活性評点は5.36であった。また、比較例-7の過酸化水素処理200μM濃度で2時間細胞処理を2回行った後、ニコチンアミドを5mM添加して培養した細胞では、SA-β-Gal活性評点は、5.63であり、ニコチンアミド5mMの添加により、細胞老化度が抑制されていることがわかった。さらに、黄花菜・根・培養前エキスを添加した比較例-8では、SA-β-Gal活性評点が5.61点であった。また、陰性対照として試験を行った比較例-9は、SA-β-Gal活性評点が13.3であり、乳酸菌の培養液だけでは細胞老化抑制効果が無いことが示された。しかし、実施例-3の黄花菜・根・発酵培養液添加区ではSA-β-Gal活性評点が4.78点、また実施例-4として黄花菜・根・発酵抽出液添加区のSA-β-Gal活性評点も2.69点を示し非常に高い細胞老化抑制効果を示した。この結果より、乳酸菌による発酵処理により黄花菜・根から抽出される成分が変化し、細胞老化抑制効果が高まったことがわかった。 [Table-2] shows the results of cell aging degree by measuring SA-β-Gal activity. SA-β-Gal activity score was 13.8 in cells that were treated twice for 2 hours at a concentration of 200 μM hydrogen peroxide in Comparative Example-5. On the other hand, SA-β-Gal activity score was 5.36 in the cell of Comparative Example-6 which was not treated with hydrogen peroxide. In addition, in the cells cultured in hydrogen peroxide-treated 200 μM concentration in Comparative Example 7 twice for 2 hours and then added with 5 mM nicotinamide, the SA-β-Gal activity score is 5.63. It was found that the degree of cellular aging was suppressed by the addition of 5 mM nicotinamide. Furthermore, in Comparative Example-8 to which yellow flower vegetables, roots and pre-culture extract were added, the SA-β-Gal activity score was 5.61 points. In addition, Comparative Example 9 tested as a negative control had an SA-β-Gal activity score of 13.3, indicating that there was no cell aging inhibitory effect only with the culture solution of lactic acid bacteria. However, the SA-β-Gal activity score was 4.78 points in Example-3 added with yellow flowers, roots, and fermentation broth, and as Example-4, SA-β-Gal activity score was added in SA- The β-Gal activity score was 2.69, indicating a very high cell aging inhibitory effect. From these results, it was found that the components extracted from yellow flowers and roots were changed by fermentation treatment with lactic acid bacteria, and the effect of inhibiting cell aging was enhanced.

<ラジカル消去効果>
細胞内で生成された活性酸素は、細胞を構成する成分に不可逆的な化学変化を引き起こすことにより細胞にダメージを与え、そのダメージが加齢とともに蓄積して細胞機能の低下を引き起こし、細胞老化につながることが知られている。
一方、DPPH(ジフェニルピクリルヒドラジル)は人工的に作られた安定なラジカルで、抗酸化剤のスクリーニング試験として一般に使用されている。
従って、DPPHラジカルを消去できる物質は、活性酸素による細胞構成成分の酸化劣化を防ぎ、細胞機能の低下を防止する効果、さらには老化抑制効果が期待できると考えられる。
そこで、黄花菜の根部の乳酸菌発酵代謝物のDPPHラジカル消去活性を確認した。
<Radical scavenging effect>
Reactive oxygen generated in the cell damages the cell by causing irreversible chemical changes in the components that make up the cell, and the damage accumulates with age, leading to a decrease in cell function, leading to cell aging. It is known to connect.
On the other hand, DPPH (diphenylpicrylhydrazyl) is an artificially generated stable radical and is generally used as a screening test for antioxidants.
Therefore, it is considered that a substance capable of scavenging DPPH radicals can be expected to prevent oxidative deterioration of cell constituents due to active oxygen, prevent a decrease in cell function, and further suppress aging.
Therefore, the DPPH radical scavenging activity of lactic acid bacteria fermentation metabolites in the roots of yellow flowers was confirmed.

DPPHラジカル消去活性試験
[0042]で調製した試料および0mM、0.3mM、0.5mM、0.7mM、1.0mM、3.0mM、5.0mM、10mMのTrolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid)溶液10μLに、下記の割合で用事調製したDPPH溶液190μLを加え、15分後に540nmの吸光度を測定し、DPPHラジカル消去能を評価した。 濃度既知のTrolox溶液の吸光度から検量線を作成し、試料のDPPHラジカル消去能の強さをtrolox当量として表示した。
Trolox溶液:trolox 25mgをDMSO (Dimethyl sulfoxide)10mlに溶解し、trolox10mM溶液とした。
DPPH溶液
0.4mM-DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) 40
400mM-MES buffer(2-Morpholinoethanesulfonic acid )(PH6.1)10
蒸留水 30
Samples prepared in DPPH radical scavenging activity test [0042] and 0 mM, 0.3 mM, 0.5 mM, 0.7 mM, 1.0 mM, 3.0 mM, 5.0 mM, 10 mM Trolox (6-hydroxy-2,5 , 7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid) solution was added 190 μL of DPPH solution prepared at the following rate, and after 15 minutes, the absorbance at 540 nm was measured to evaluate DPPH radical scavenging ability. A calibration curve was prepared from the absorbance of Trolox solution of known concentration, and the strength of DPPH radical scavenging ability of the sample was displayed as trolox equivalent.
Trolox solution: 25 mg of trolox was dissolved in 10 ml of DMSO (Dimethyl sulfoxide) to prepare a trolox 10 mM solution.
DPPH solution 0.4 mM-DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) 40
400 mM MES buffer (2-Morpholinoethanesulfonic acid) (PH6.1) 10
Distilled water 30

[表-3]にDPPHラジカル消去能の結果を示した。
黄花菜・根・発酵前エキスを添加した比較例-10では、DPPHラジカル消去能が0.37mM trolox当量であった。しかし、実施例-5の黄花菜・根・発酵培養液添加区では0.94mM trolox当量、また実施例-6として黄花菜・根・発酵抽出液添加区では0.72mM trolox当量を示し非常に高い酸化抑制効果を示した。また、陰性対照として試験を行った比較例-11では、DPPHラジカル消去能が0.11mM trolox当量であり、乳酸菌の培養液だけではDPPHラジカル消去活性が無いことが示された。さらに、比較対照として比較例-12には酵母菌により黄花菜の根部を発酵処理した酵母菌発酵培養液のDPPHラジカル消去能を示した。比較例-12のDPPHラジカル消去能は、0.39mM trolox当量であったことから、酵母菌の発酵処理によるDPPHラジカル消去効果は低いものであることがわかった。
陰性対照として試験を行った比較例-13のDPPHラジカル消去能が0.13mM trolox当量であり、酵母菌の培養液だけではDPPHラジカル消去活性が無いことも示された。
この結果より、乳酸菌による発酵処理により黄花菜・根部から抽出される成分が変化し、DPPHラジカル消去活性能が高まったことが明らかとなった。
The results of DPPH radical scavenging ability are shown in [Table-3].
In Comparative Example-10 to which yellow flower vegetable, root, and pre-fermentation extract were added, the DPPH radical scavenging ability was 0.37 mM trolox equivalent. However, 0.94 mM trolox equivalent in Example 5 added with yellow flowers, roots and fermentation broth, and 0.72 mM trolox equivalent in Example 5 added with yellow flowers, roots and fermentation extract. It showed a high oxidation inhibition effect. In Comparative Example 11 tested as a negative control, the DPPH radical scavenging ability was 0.11 mM trolox equivalent, and it was shown that there was no DPPH radical scavenging activity only in the culture solution of lactic acid bacteria. Further, as a comparative control, Comparative Example-12 showed the DPPH radical scavenging ability of the yeast fermentation broth obtained by fermenting the roots of yellow rape with yeast. Since the DPPH radical scavenging ability of Comparative Example-12 was 0.39 mM trolox equivalent, it was found that the DPPH radical scavenging effect by the fermentation treatment of yeast was low.
The DPPH radical scavenging ability of Comparative Example-13, which was tested as a negative control, was 0.13 mM trolox equivalent, and it was also shown that there was no DPPH radical scavenging activity in the yeast culture alone.
From these results, it was clarified that the DPPH radical scavenging activity increased due to the change in the components extracted from yellow flower vegetables and roots by fermentation treatment with lactic acid bacteria.

ヒトでの効果確認試験
被験者として、20〜60歳の女性10名に1日2回(朝、夜)連続1ヵ月間、試験品と比較品のそれぞれの皮膚外用剤を使用させ、塗布部位の状態を試験前後で比較し、改善効果を調べた。本試験には、試験品として処方例7で示した皮膚外用剤を用い(実施例−7)、比較品には処方例7に示した皮膚外用剤から乳酸菌発酵物(黄花菜・根・発酵培養液、および発酵抽出液)を除き、黄花菜・根・発酵前エキスと置き換えた皮膚外用剤を作成し(比較例−12)、その使用による効果について調べた。評価は肌の弾力に関する評価項目を表-4に、肌の潤いに関する評価項目を表-5に示す基準に従って行った。本発明の有効成分を配合した皮膚外用剤を毎日使用しながら肌の状態を塗布開始前及び1ヶ月塗布後におけるアンケートで集計し、効果の確認を行った。結果は表−6、7に示す。表中の数字は、人数を示している。表−6からも明らかなように、乳酸菌発酵物の入った試験品の皮膚外用剤では、肌の弾力評価点数が78点を示した。一方、試験品から発酵物を除き、黄花菜・根・発酵前エキスと置き換えた比較品では、評価点数が38点であった。この結果から明らかなように、乳酸菌の発酵物を添加することにより高い肌の弾力効果が得られることが明らかとなった。さらに、表-7より、乳酸菌発酵物の入った試験品の皮膚外用剤では、肌の潤い評価点数が80点を示した。一方、試験品から発酵物を除き、黄花菜・根・発酵前エキスと置き換えた比較品では、評価点数が40点であった。この結果から明らかなように、乳酸菌の発酵物を添加することにより高い肌の潤い効果が得られることが明らかとなった。
As human test subjects, 10 females aged 20 to 60 years were allowed to use the skin preparations for the test and comparison products twice a day (morning and evening) for 1 month in succession. The state was compared before and after the test, and the improvement effect was investigated. In this test, the skin external preparation shown in Formulation Example 7 was used as a test product (Example-7), and the comparative product was a lactic acid bacteria fermented product (yellow rape, root, fermentation) from the skin external preparation shown in Formulation Example 7. Except for the culture solution and the fermentation extract), an external preparation for skin was prepared by replacing yellow flower vegetables, roots, and the pre-fermentation extract (Comparative Example-12), and the effects of its use were examined. Evaluation was performed according to the criteria shown in Table 4 for evaluation items related to skin elasticity and Table 5 for evaluation items related to skin moisture. While using the external preparation for skin containing the active ingredient of the present invention every day, the skin condition was tabulated before and after the application for 1 month to confirm the effect. The results are shown in Tables 6 and 7. The numbers in the table indicate the number of people. As is clear from Table-6, the skin external evaluation agent containing the fermented lactic acid bacteria showed a skin elasticity evaluation score of 78 points. On the other hand, in the comparative product in which the fermented product was removed from the test product and replaced with yellow flower vegetables, roots and the pre-fermentation extract, the evaluation score was 38 points. As is clear from this result, it was revealed that a high skin elasticity effect can be obtained by adding a fermented product of lactic acid bacteria. Furthermore, according to Table-7, in the skin external preparation of the test product containing the lactic acid bacteria fermented product, the skin moisturizing evaluation score was 80 points. On the other hand, the comparative product in which the fermented product was removed from the test product and replaced with yellow flower vegetables, roots, and the pre-fermentation extract had an evaluation score of 40 points. As is clear from this result, it was revealed that a high skin moisturizing effect can be obtained by adding fermented lactic acid bacteria.

次に、本願発明の発酵物を配合した処方例を示すが、本願発明はこれに限定されるものでない。 Next, although the formulation example which mix | blended the fermented material of this invention is shown, this invention is not limited to this.

化粧料の処方例
以下の化粧料の処方例で示す発酵処理液は、[0042]で示した方法で調製した、各培養液、抽出液を示す。尚、「発酵培養液(黄花菜・根)」は、「黄花菜の根部の乳酸菌発酵培養液」を意味する。以下、同様に示す。
(処方例1)化粧用クリーム(質量%)
a)ミツロウ・・・2.0
b)ステアリルアルコール・・・5.0
c)ステアリン酸・・・8.0
d)スクワラン・・・10.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレート・・・3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.)・・・1.0
g)発酵培養液(黄花菜・根)・・・5.0
h) 発酵抽出液(黄花菜・根)・・・5.0
i)1,3−ブチレングリコール・・・5.0
j)水酸化カリウム・・・0.3
k)防腐剤・酸化防止剤・・・適量
l)精製水・・・残部
製法
a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。i)〜l)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。その後、g)、h)を加え、攪拌し均一に溶解する。
Examples of cosmetic preparations The fermentation treatment liquids shown in the following examples of cosmetic preparations represent the respective culture solutions and extracts prepared by the method shown in [0042]. The “fermentation culture solution (yellow flower vegetables / root)” means “the lactic acid bacteria fermentation culture solution of the root of yellow flower vegetables”. Hereinafter, it shows similarly.
(Formulation Example 1) Cosmetic cream (mass%)
a) Beeswax 2.0
b) Stearyl alcohol ... 5.0
c) Stearic acid ... 8.0
d) Squalane ... 10.0
e) Self-emulsifying glyceryl monostearate 3.0
f) Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.) ... 1.0
g) Fermentation broth (yellow rape and root) ... 5.0
h) Fermented extract (yellow rape and root) ... 5.0
i) 1,3-butylene glycol ... 5.0
j) Potassium hydroxide ... 0.3
k) Preservatives / Antioxidants: appropriate amount
l) Heat and dissolve purified water: remaining manufacturing methods a) to f) and keep at 80 ° C. Heat up to i) to l), keep at 80 ° C., add to a) to f), emulsify, and cool to 40 ° C. with stirring. Thereafter, g) and h) are added and stirred to dissolve uniformly.

化粧料の処方例
(処方例2)化粧用クリーム(質量%)
a)ミツロウ・・・2.0
b)ステアリルアルコール・・・5.0
c)ステアリン酸・・・8.0
d)スクワラン・・・10.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレート・・・3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.)・・・1.0
g)発酵培養液(黄花菜・根)・・・10.0
h) 発酵抽出液(黄花菜・根)・・・5.0
i)1,3−ブチレングリコール・・・5.0
j)水酸化カリウム・・・0.3
k)防腐剤・酸化防止剤・・・適量
l)精製水・・・残部
製法
a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。i)〜l)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。その後、g)、h)を加え、攪拌し均一に溶解する。
Cosmetic Formulation Example (Formulation Example 2) Cosmetic Cream (mass%)
a) Beeswax 2.0
b) Stearyl alcohol ... 5.0
c) Stearic acid ... 8.0
d) Squalane ... 10.0
e) Self-emulsifying glyceryl monostearate 3.0
f) Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.) ... 1.0
g) Fermentation broth (yellow rape, root) ... 10.0
h) Fermented extract (yellow rape and root) ... 5.0
i) 1,3-butylene glycol ... 5.0
j) Potassium hydroxide ... 0.3
k) Preservatives / Antioxidants: appropriate amount
l) Heat and dissolve purified water: remaining manufacturing methods a) to f) and keep at 80 ° C. Heat up to i) to l), keep at 80 ° C., add to a) to f), emulsify, and cool to 40 ° C. with stirring. Thereafter, g) and h) are added and stirred to dissolve uniformly.

(処方例3)乳液(質量%)
a)ミツロウ・・・0.5
b)ワセリン・・・2.0
c)スクワラン・・・8.0
d)ソルビタンセスキオレエート・・・0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)・・・1.2
f)発酵抽出液(黄花菜・根)・・・0.1
g) 発酵培養液(黄花菜・根)・・・1.0
h)1,3−ブチレングリコール・・・7.0
i)カルボキシビニルポリマー・・・0.2
j)水酸化カリウム・・・0.1
k)精製水・・・残部
l)防腐剤・酸化防止剤・・・適量
m)エタノール・・・7.0
製法
a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。h)〜k)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。50℃でf)、g)、m)を添加し、40℃まで攪拌、冷却する。
(Prescription Example 3) Emulsion (mass%)
a) Beeswax 0.5
b) Petrolatum 2.0
c) Squalane ... 8.0
d) Sorbitan sesquioleate ... 0.8
e) Polyoxyethylene oleyl ether (20EO) 1.2
f) Fermentation extract (yellow flower vegetables / root) ... 0.1
g) Fermentation broth (yellow rape, root) ... 1.0
h) 1,3-butylene glycol 7.0
i) Carboxyvinyl polymer 0.2
j) Potassium hydroxide ... 0.1
k) Purified water: balance
l) Preservatives / Antioxidants: appropriate amount
m) Ethanol: 7.0
The production methods a) to e) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. Heat up to h) to k), keep at 80 ° C., add to a) to e), emulsify, and cool to 50 ° C. with stirring. Add f), g), m) at 50 ° C., stir to 40 ° C. and cool.

(処方例4)化粧水(質量%)
a)発酵抽出液(黄花菜・根)・・・0.01
b)発酵培養液(黄花菜・根)・・・0.001
c)グリセリン・・・5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.)・・・1.0
e)エタノール・・・6.0
f)香料・・・適量
g)防腐剤・酸化防止剤・・・適量
h)精製水・・・残部製法
a)〜h)までを混合し、均一に溶解する。
(Formulation Example 4) Lotion (mass%)
a) Fermented extract (yellow flower vegetables / root) ・ ・ ・ 0.01
b) Fermentation broth (yellow rape, root) ... 0.001
c) Glycerin ... 5.0
d) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.O.) ... 1.0
e) Ethanol ... 6.0
f) Fragrance: appropriate amount
g) Preservatives / Antioxidants ...
h) Purified water: The remaining preparations a) to h) are mixed and dissolved uniformly.

(処方例5)化粧水(質量%)
a)発酵培養液(黄花菜・根)・・・0.001
b)発酵抽出液(黄花菜・根)・・・10.0
c)グリセリン・・・5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.)・・・1.0
e)エタノール・・・6.0
f)香料・・・適量
g)防腐剤・酸化防止剤・・・適量
h)精製水・・・残部
製法
a)〜h)までを混合し、均一に溶解する。
(Formulation Example 5) Lotion (mass%)
a) Fermentation broth (yellow flower vegetables / root) ... 0.001
b) Fermentation extract (yellow flower vegetables / root) ... 10.0
c) Glycerin ... 5.0
d) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.O.) ... 1.0
e) Ethanol ... 6.0
f) Fragrance: appropriate amount
g) Preservatives / Antioxidants ...
h) Purified water: The remaining preparations a) to h) are mixed and dissolved uniformly.

(処方例6)洗顔料(質量%)
a)ステアリン酸・・・12.0
b)ミリスチン酸・・・14.0
c)ラウリン酸・・・5.0
d)ホホバ油・・・3.0
e)グリセリン・・・10.0
f)ソルビトール・・・15.0
g)1,3−ブチレングリコール・・・10.0
h)POE(20)グリセロールモノステアリン酸・・・2.0
i)水酸化カリウム・・・5.0
j)水・・・残部
k)キレート剤・・・適量
l)香料・・・適量
m)発酵抽出液(黄花菜・根)・・・1.0
n)発酵培養液(黄花菜・根)・・・1.0
製法
a)〜h)までを加熱溶解し70℃に保つ。j)にi)を溶解後a)〜h)に加えケン化する。その後k)、l)を入れ攪拌しながら冷却する。50℃でm)、n)を添加し、40℃まで攪拌、冷却する。
(Formulation Example 6) Face wash (mass%)
a) Stearic acid ... 12.0
b) Myristic acid 14.0
c) Lauric acid ... 5.0
d) Jojoba oil ... 3.0
e) Glycerin 10.0
f) Sorbitol ... 15.0
g) 1,3-butylene glycol ... 10.0
h) POE (20) Glycerol monostearic acid 2.0
i) Potassium hydroxide ... 5.0
j) Water ... balance k) chelating agent ... appropriate amount l) perfume ... appropriate amount m) fermented extract (yellow rape, root) ... 1.0
n) Fermentation broth (yellow rape, root) ... 1.0
The manufacturing methods a) to h) are dissolved by heating and maintained at 70 ° C. After i) is dissolved in j), it is added to a) to h) and saponified. Then, k) and l) are added and cooled with stirring. Add m), n) at 50 ° C., stir to 40 ° C. and cool.

(処方例7)エッセンス(質量%)
a)発酵抽出液(黄花菜・根)・・・2.0
b)発酵培養液(黄花菜・根)・・・2.0
c)カルボキシビニルポリマー・・・0.05
d)L-アルギニン・・・適量
e)グリセリン・・・5.0
f)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.)・・・1.0
g)エタノール・・・6.0
h)香料・・・適量
i)防腐剤・酸化防止剤・・・適量
j)精製水・・・残部
製法
c)をj)の一部で分散した後、d)を加えてpHを6.5に調製する。その後a)〜j)までを混合し、均一に溶解する。
(Prescription Example 7) Essence (mass%)
a) Fermented extract (yellow rape, root) ... 2.0
b) Fermentation broth (yellow flowers, roots) ... 2.0
c) Carboxyvinyl polymer ... 0.05
d) L-arginine ... appropriate amount
e) Glycerin ... 5.0
f) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.O.) ... 1.0
g) Ethanol ... 6.0
h) Fragrance: appropriate amount
i) Preservatives / Antioxidants ...
j) Purified water: The rest of the production method c) is dispersed in a part of j), and d) is added to adjust the pH to 6.5. Then, a) to j) are mixed and dissolved uniformly.

尚、本願発明において浸出液、抽出液等に用いる浸出溶媒、抽出溶媒は、特段示していない場合は、すべて精製水である場合を示しているが、抽出溶媒の種類を問わず、精製水を用いた場合と同様の効果が得られた。また、黄花菜は特段示していない場合は、すべてヤブカンゾウを用いた場合を示しているが、他のゼンテイカ(ニッコウキスゲ)、ホンカンゾウ、マンシュウキスゲ、ホソバキスゲを使用した場合にも同様の効果が得られた。 In the present invention, the leaching solvent and the extraction solvent used for the leaching solution, the extraction solution and the like are all purified water unless otherwise indicated, but the purified water is used regardless of the type of the extraction solvent. The same effect as that obtained was obtained. In addition, when yellow rape is not particularly shown, it shows the case of using all edible licorice, but the same effect was obtained when using other zentika (Nikkoukigege), Honkanzo, Manshuukigege, Hosobakigege .

以上詳述したごとく、本発明によれば、一つの有効成分により、線維芽細胞の老化が抑制され、それに伴い肌の弾力が回復し、シワ・たるみが少なくなるとともに、細胞分化促進されることにより肌理が整い、肌のバリア機能を回復させることが可能となった。


As described above in detail, according to the present invention, the aging of fibroblasts is suppressed by one active ingredient, the elasticity of the skin is restored, wrinkles and sagging are reduced, and cell differentiation is promoted. This makes it possible to improve the texture and restore the skin barrier function.


Claims (6)

黄花菜の根部を乳酸菌により発酵させて得られる発酵物を有効成分として配合したことを特徴とする細胞分化促進剤。 A cell differentiation promoting agent comprising, as an active ingredient, a fermented product obtained by fermenting a root of yellow rape with lactic acid bacteria. 黄花菜の根部を乳酸菌により発酵させて得られる発酵物を有効成分として配合したことを特徴とするバリア機能改善剤。 A barrier function improving agent comprising a fermented product obtained by fermenting a root of yellow rape with lactic acid bacteria as an active ingredient. 黄花菜の根部を乳酸菌により発酵させて得られる発酵物を有効成分として配合したことを特徴とするSA-β-Gal活性抑制剤。 A SA-β-Gal activity inhibitor characterized by containing as an active ingredient a fermented product obtained by fermenting the roots of yellow flowers with lactic acid bacteria. 黄花菜の根部を乳酸菌により発酵させて得られる発酵物を有効成分として配合したことを特徴とするラジカル消去促進剤。 A radical scavenging promoter characterized in that a fermented product obtained by fermenting the roots of yellow flower vegetables with lactic acid bacteria is blended as an active ingredient. 乳酸菌がLactobacillus plantarumであることを特徴とする請求項1乃至4記載の剤。 The agent according to any one of claims 1 to 4, wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus plantarum. 黄花菜の根部を乳酸菌により発酵させて得られる発酵物を有効成分として配合したことを特徴とする化粧料。
A cosmetic comprising a fermented product obtained by fermenting a root portion of yellow rape with lactic acid bacteria as an active ingredient.
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