JP2011246400A

JP2011246400A - 水中油型乳化化粧料

Info

Publication number: JP2011246400A
Application number: JP2010121693A
Authority: JP
Inventors: Masaru Kitagawa; 優北川; Kazunori Inamori; 和紀稲森
Original assignee: Toyobo Co Ltd
Current assignee: Toyobo Co Ltd
Priority date: 2010-05-27
Filing date: 2010-05-27
Publication date: 2011-12-08

Abstract

【課題】ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を用いた水中油型乳化化粧料であって、皮膚刺激性がなく、安定性に優れ、使用感にも優れている水中油型乳化化粧料を提供する。
【解決手段】（ａ）ポリ−γ−L−グルタミン酸および／またはその塩を０．６〜４．０質量％、（ｂ）液状油分を０．０１〜０．５質量％含有し、更に好ましくは（ｃ）尿素も５．０〜２０．０質量％含有し、実質的に界面活性剤を含有しないことを特徴とする水中油型乳化水中油型乳化化粧料。
【選択図】なし

Description

本発明は水中油型乳化化粧料、更に詳しくは界面活性剤を配合することなく、液状油分を分散配合してなる水中油型乳化化粧料に関する。

人の皮膚は、角質層によって覆われており、乾燥した大気中においても水分を失うことなく生命活動を維持できるのは、外界と接しているこの角質層が存在しているからであることはよく知られている。角質層は薄く柔軟で且つ体内の水分を保ち、健常な皮膚状態を維持するように調節している。

しかしながら、我々は環境要因等（例えば、温度変化、湿度変化、光、水との接触、洗剤の使用等）により、しばしば表皮に何らかの損傷をきたすことがある。ダメージを受けた皮膚は、硬く、弾力性も失われ、カサカサとした肌荒れ状態となる。こうした肌荒れ皮膚は、近年、急増傾向にあるアトピー性皮膚炎との関連性も指摘されており、深刻なスキントラブルを招く恐れもある。

荒れ肌には、角質細胞の剥離によるものと、乾燥により皮膚の健康状態が悪化して表皮の硬化や損傷に至るものがある。前者の荒れ肌はコレステロール、セラミド、脂肪酸等の角質細胞間脂質の溶出、および紫外線、洗剤等に起因する角質細胞の変性や表皮細胞の増殖・角化バランスの崩壊による角層透過バリアの形成不全等によって発生する。この荒れ肌を予防または治癒する目的で、角質細胞間脂質成分又はそれに類似する合成の角質細胞間脂質を供給するなどの検討が行われている。この角層細胞間脂質は、有棘層と顆粒層の細胞で生合成された層板顆粒が、角層直下で細胞間に放出され、伸展し、層板（ラメラ）構造をとり、細胞間に広がったものである。層板顆粒はグルコシルセラミド、コレステロール、セラミド、リン脂質等から構成されるが、角層細胞間脂質にはグルコシルセラミドは殆ど含まれていない。すなわち、層板顆粒中のグルコシルセラミドは、β−グルコセレブロシダーゼによって加水分解を受け、セラミドに変換され、このセラミドがラメラ構造をとる結果、角層細胞間脂質として角層透過バリアの形成を改善し、荒れ肌防御のバリアの働きを持つと考えられる。洗浄剤による肌荒れはセラミドの補充が有効であり、肌荒れの改善に高い効果を示すことが報告されている（非特許文献１）。

一方、後者の荒れ肌には、水中油型乳化化粧料には皮膚の恒常性維持の他、皮膚からの水分揮散を防止し、皮膚を構成する表皮、角質層に水分を保持させ皮膚に保湿性、柔軟性を保たせみずみずしい肌を保持する等の目的で保湿剤が配合されている。従来より用いられてきた保湿剤としては、オリーブ油、等の植物油やラノリンのような動物由来の脂質に代表される親油性の保湿剤の他に親水性の保湿剤としては、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ソルビトール等の水溶性多価アルコール、ヒアルロン酸及びキサンタンガムのような多糖類、ポリエチレングリコールなどの水溶性高分子、ピロリドンカルボン酸塩及びアミノ酸に代表される低分子量の天然保湿因子、植物抽出エキス等が知られている。

このように様々な種類の親水性、親油性の保湿剤が存在するが、安全性を重要視する風潮などから、昨今では動物由来のものや化学合成品は避けられる傾向にあり、好ましくは天然物や微生物による発酵生産物で、さらには生体のみならず環境にも負荷の少ない生分解性の素材が期待され注目を浴びている。

一方で、微生物が生産するバイオポリマーが有望視されている。バイオポリマーの中でも、アミノ酸が縮重合して構成されるポリアミノ酸と呼ばれる一群のバイオポリマーには、様々な機能が見出されており、その潜在能力に注目が集まっている。従来、ポリアミノ酸として、ポリ−γ−グルタミン酸（以下、「ＰＧＡ」と表記することがある）、ポリ−ε−リジンおよびシアノファイシンの３種類が同定されている。

ＰＧＡは、グルタミン酸のα−アミノ基とγ−カルボキシル基とがアミド結合したポリアミノ酸である。ＰＧＡは、古くから日本人に親しまれている納豆の糸引きの主体物質として知られる、吸水性のポリアミノ酸であるが、このように親しまれてきた背景として、その魅力的な機能性によるところが大きい。ＰＧＡの魅力的な機能としては、生分解性及び高吸水性を兼ね備えている点が知られている。これらの機能を利用して、上述した水中油型乳化化粧料をはじめ、医療品、食品等、種々の分野、用途で用いられることが期待されている。

最近、ポリアミノ酸の構造的特徴（構成アミノ酸の光学活性や種類、分子サイズ、結合様式など）がその機能性に強く反映されていることが分かってきた。よく知られているところでは、生分解性と高吸水性を兼ね備えている点が挙げられる。それらの機能を利用し、食品、化粧品、医療品などの多くの分野で、種々の用途があるものと期待されている。しかし、現在、製品化されているＰＧＡは、化学的にヘテロなＤＬ−ＰＧＡである。具体的には、ＰＧＡは、納豆菌やその類縁菌から生産され、Ｄ−グルタミン酸及びＬ−グルタミン酸が不規則に結合しており、その含有比率や、配列は生産菌の培養毎に変動する。一般に、ポリアミノ酸の構造的特徴（構成するアミノ酸の光学活性や種類、分子サイズ、結合様式など）は、その機能に強く影響を与える。上記ＤＬ−ＰＧＡは、分子毎に構造が異なるため、その性質も分子毎に異なる。これでは、所望の品質を有するＤＬ−ＰＧＡを安定して製造することが困難である。

ホモポリ−γ−グルタミン酸を生産する菌も報告されている。例えば、炭疸菌Bacillus anthracisはＤ−グルタミン酸のみからなるポリ−γ−Ｄ−グルタミン酸（以下、Ｄ−ＰＧＡと記載することもある）を生産する事が報告されている（非特許文献２）。しかし、本菌は強い病原性を有する細菌であるため、工業的なＰＧＡ生産菌としては不適切であり、生産されるＤ−ＰＧＡの分子量も小さい。また、好アルカリ性細菌Bacillus haloduransは、Ｌ−グルタミン酸のみからなるポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩（以下Ｌ−ＰＧＡと記載することもある）を生産する事も報告されている（非特許文献３）。しかし、本菌の生産するＬ−ＰＧＡは分子量が極めて小さく、実用的な性能を得るには不十分である。

一方、高分子量のホモポリ−γ−グルタミン酸の生産菌として、好塩性古細菌Natrialba aegyptiacaが分子量１０万〜１００万程度のＬ−ＰＧＡを生産することが報告されている。しかし、本菌は液体培養条件下では分子量が１０万程度と小さい、かつ殆どポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩を生産しないため、工業的な生産菌として問題があった（非特許文献４、特許文献１）。

上記以外に、Ｌ−ＰＧＡを生産する生物としては、ヒドラ等が挙げられるが、ヒドラの場合も同様に分子量が極めて小さいという問題がある（非特許文献３）。

一方本発明者らは、均一な光学純度でかつ高分子量のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩を液体培養などで大量に調製することを可能とした。より具体的には、数平均分子量が１３０万以上で、かつ均一な光学純度のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩を、培養液１Ｌあたり４．９９ｇ以上の高い生産性で取得している（特許文献２）。

また、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の架橋方法と架橋体（特許文献３）、並びにポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸及びポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体のうち少なくとも一方を含むことを特徴とする皮膚外用剤（特許文献４）の報告がある。

保湿作用を有する成分として、例えばヒアルロン酸は保湿性に優れた生体高分子であり、医薬、化粧料等の分野において種々用いられている。化粧料分野では、一般に平均分子量５０万〜２５０万程度の高分子ヒアルロン酸が保湿成分として用いられており、平均分子量１００万以上のヒアルロン酸は、化粧料中の配合量が概ね０．５質量％を超えると粘度が急激に上昇し、加えて「べたつき」感が強く、使用性や肌へのなじみに難点が生じる。そのため平均分子量１００万以上の高分子ヒアルロン酸では配合量０．５質量％程度以下とし、粘度の上昇抑制を図っている。またヒアルロン酸それ自体は不安定な物質で、熱や機械的剪断力に弱く、粘度低下を引き起こしやすいため、そのナトリウム塩水溶液の形で製品化されていることが多い。

一方、水相（外相）と油相（内相）からなる水中油型乳化組成物では、一般に乳化剤や分散剤として界面活性剤を用いているが、界面活性剤は手荒れや皮膚アレルギー等、皮膚刺激の原因となるという問題があった。

特表２００２−５１７２０４号公報特開２００７−３１４４３４号公報特開２００８−１２０９１０号公報特開２００８−１２０７２５号公報

ジャーナルオブバイオサイエンスアンドバイオエンジニアリング、９４，１８７（２００２） Handy, W. E., and H.N. Rydon,Biochem J., 40, 297-309 (1946) 生物と化学 Vol.40, No.4, p212-214 (2002) Hezayen, F. F., B. H. A. Rehm, B. J. Tindall and A. Steinbuchel, Int. J. Syst. E., 51, 1133-1142(2001)

本発明は、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を用いた水中油型乳化化粧料であって、皮膚刺激性がなく、安定性に優れ、使用感にも優れる水中油型乳化化粧料を提供することを目的とするものである。

斯かる実情において、本発明者らは鋭意研究を行ったところ、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を所定量含む水溶液に液状油分を所定量配合することで、界面活性剤を配合することなく乳化ができ、しかも安定性に優れ、系の粘度の低下を生じず、使用性にも優れる水中油型乳化化粧料が得られることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は以下のような構成からなる。
（１）（ａ）ポリ−γ−L−グルタミン酸および／またはその塩を０．６〜４．０質量％、（ｂ）液状油分を０．０１〜０．５質量％含有し、実質的に界面活性剤を含有しないことを特徴とする水中油型乳化水中油型乳化化粧料。
（２）ポリ−γ−L−グルタミン酸が、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸分子同士の架橋構造を有することを特徴とするポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体であることを特徴とする（１）の水中油型乳化化粧料。
（３）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が１００万以上であることを特徴とする（１）または（２）の水中油型乳化化粧料。
（４）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が２００万以上であることを特徴とする（１）〜（３）のいずれかの水中油型乳化化粧料。
（５）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が３５０万以上であることを特徴とする（１）〜（４）のいずれかの水中油型乳化化粧料。
（６）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の吸水倍率が１０倍以上５０００倍以下であることを特徴とする（１）〜（５）のいずれかの水中油型乳化化粧料。
（７）さらに（ｃ）尿素を５．０〜２０．０質量％含有することを特徴とする（１）〜（６）のいずれかの水中油型乳化水中油型乳化化粧料。
（８）粘度が１０，０００〜１００，０００ｍＰａ・Ｓ（３０℃）であることを特徴とする（１）〜（７）のいずれかの水中油型乳化水中油型乳化化粧料。

本発明の水中油型乳化化粧料は、皮膚刺激性がなく、安定性に優れ、使用感にも優れている水中油型乳化化粧料である。

本発明の「ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸」とは、Ｌ−グルタミン酸のみからなるホモポリマ−である。その構造は式（Ｉ）にて示される構造である。α−ＣＯＯＨの水素は水素であっても良いし他の金属対イオンでも良い。例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、カルシウム、亜鉛及び鉄等一般的なものあれば限定する必要はない。そのなかでも好ましくはナトリウムである。

本発明の「分子量」とはプルラン標準物質の分子量換算にて算出した数平均分子量（Ｍｎ）のことを指す。

本発明のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸は、既存の方法で得ることができる。たとえば、特許文献２（特開２００７−３１４４３４号公報）に記載された方法で、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を得ることができる。以下に、一例として、特許文献２を参考にしたポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の製造方法を述べるがこれに限定されるものではない。

たとえば、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−に、ナトリアルバエジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３０−８２株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−２０８７２）、ナトリアルバエジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３０−２４３株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−２０８７３）、またはナトリアルバエジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３１−２６４株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−２０８７４）として寄託されている菌株をもちいてポリ−γ−L−グルタミン酸を得る場合、液体培養によりポリ−γ−L−グルタミン酸を得ることができる。または、特許文献２（特開２００７−３１４４３４号公報）に記載された方法で微生物を変異処理し、液体培養によりポリ−γ−L−グルタミン酸を生産できる微生物を作製し、ポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することもできる。また、ナトリアルバエジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）を常法により固相培養し、ポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することもできる。

液体培養する場合には、振とう培養、通気攪拌培養など好気条件などで行うことが望ましい。その際の培養温度は、３０〜５０℃、好ましくは３５〜４５℃が適当である。また、培地のｐＨは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、塩酸、硫酸またそれらの水溶液などによって調整できるが、ｐＨ調整できれば限定されない。培養ｐＨ５．０−９．０、好ましくはｐＨ６．０−８．５で培養するのが望ましい。また、培養期間は、通常２〜７日間程度でよい。また、培養時のＮａＣｌ濃度は１０〜３０％、好ましくは１５〜２５％で培養するのが望ましい。また、ＹｅａｓｔＥｘｔｒａｃｔ濃度は０．１〜１０％、好ましくは０．５〜５．０％濃度で培養するのが望ましい。また、固体培養の場合においても前期液体培養の場合と応用に、培養温度は３０〜５０℃、好ましくは３５〜４５℃、培養時のｐＨは５．０−９．０、好ましくはｐＨ６．０−８．５、培養時のＮａＣｌ濃度は１０−３０％、好ましくは１５〜２５％、ＹｅａｓｔＥｘｔｒａｃｔ濃度は０．１−１０％、好ましくは０．５−５％濃度が採用される。このようにして培養すると、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸は、主として菌体外に蓄積されて前記した培養物中に含まれる。特に限定はされないが、ＰＧＡ生産液体培地−１（２２．５％ＮａＣｌ、２％ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、０．２％ＫＣｌ、３％ＴｒｉｓｏｄｉｕｍＣｉｔｒａｔｅ、１％ＹｅａｓｔＥｘｔｒａｃｔ、０．７５％Ｃａｓａｍｉｎｏａｃｉｄ）を使用してもよく、各添加量は菌株にあわせて適宜調整すればよい。

培養液中のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の定量方法としては、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を含む試料から、硫酸銅やエタノ−ルを用いて沈澱させ、その沈殿物の重量測定およびＫｉｊｅｒｄｅｒ法による総窒素の測定を行なうもの（Ｍ．Ｂｏｖａｒｎｉｃｋ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１４５巻、４１５ペ−ジ、１９４２年）、塩酸加水分解後のグルタミン酸量を測定する方法（Ｒ．Ｄ．Ｈｏｕｓｅｗｒｉｇｔ，Ｃ．Ｂ．Ｔｈｏｒｎｅ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，６０巻、８９ペ−ジ、１９５０年）及び、塩基性色素との定量的な結合を利用した比色法（Ｍ．Ｂｏｖａｒｎｉｃｋｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０７巻、５９３ペ−ジ、１９５４年）が知られているが好ましくは、塩基性色素との定量的な結合を利用した比色法である。

塩基性色素としてはクリスタルバイオレット、アニリンブル−、サフラニンオ−、メチレンブル−、メチルバイオレット、トルイジネブル−、コンゴレッド、アゾカルマイン、チオニン、ヘマトキシリンなどがあげられるが、サフラニンオ−が好ましい。

この培養物からポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を分離、採取するには、硫酸銅やエタノ−ルを用いて沈澱させるなどの前記の公知の方法を用いればよい。一例を挙げると、例えば、培養液を遠心分離し、菌体を取り除く。続いて、得られた上清液に３倍量の水を加え希釈した後、ｐＨを３．０に調整する。ｐＨ調整後、５時間室温で攪拌した。その後、３倍量のエタノ−ルを加え、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を沈殿物として回収した。沈殿物を０．１ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解させ、低分子物質を透析により除去する。透析後、得られた液を核酸除去のため、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅ処理を行っても良いし、次いでタンパク質除去のために、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ処理を行っても良い。Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ処理後、透析により低分子物質を除去しても良い。透析後、凍結乾燥等により、乾燥ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を得ればよい。また、必要により陰イオン交換樹脂を用いた精製を行うことができるが、一般的な条件で精製可能である。

本発明に使用するポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の分子量は、特に限定されないが、好ましくは５０万以上、より好ましくは８０万以上、さらに好ましくは１００万以上、特に好ましくは１３０万以上である。

Ｌ−ＰＧＡの分子量の上限値は特に限定されるものではないが、前述のＬ−ＰＧＡの製造方法によれば、例えば、６００万、最大で１５００万のＬ−ＰＧＡを得ることができる。

このポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩は、古細菌によって生産されるために、納豆菌によって生産されるポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩と比べて特有の臭気が軽減することで、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品または医薬品の用途に利用しても品質を損なうことがない。

ここで、（ａ）成分であるポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸は外相（水相）に配合される。（ａ）成分の配合量は、本発明化粧料中に０．６〜４．０質量％である。配合量が０．６質量％未満では充分な油分散能と粘性が得られず、一方、４．０質量％を超えると粘度が高くなり、均一溶解が困難になるため、好ましくない。

本発明に用いられる（ｂ）成分としての液状油分は内相（分散相。油相）をなす。液状油分は、室温（２５℃）において液状の油分であって、化粧料に一般に用いられ得るものであれば特に限定されるものでなく、例えば、流動パラフィン等の鉱物油；マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、オリーブ油、ホホバ油、ナタネ油、ヒマシ油、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、スクワレン等の天然動植物油；ジャスミン油等の香油；液状エステル油（例えば、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリスリトール、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリル、２−エチルヘキサン酸セチル、２−エチルヘキサン酸ネオペンチルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ２−エチルヘキサン酸ネオペンチルグリコール、イソパルミチン酸イソオクチル、イソノナン酸イソノニル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、ジメチルオクタン酸オクチルドデシル、コハク酸ジ２−エチルヘキシル等や、液状の紫外線吸収剤であるイソプロピル−ｐ−メトキシシンナメート、２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート等のケイ皮酸エステルなど）；シリコーン油（例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等の低粘度の鎖状シリコーン油や、ドデカメチルシクロポリシロキサン、オクタメチルシクロポリシロキサン、デカメチルシクロポリシロキン等の低粘度の環状シリコーン油など）等が挙げられる。ただし、これら例示に限定されるものでない。

中でも、使用性、肌へのなじみ等の点からジメチルポリシロキサン等のシリコーン油が好ましく用いられるが、さらなる肌荒れ改善効果等を目的としてオリーブ油、ホホバ油、ＤＨＡ、ＥＰＡ、スクワレン等の動植物油や、流動パラフィン等の鉱物油、あるいは、付香を目的としたジャスミン油等の香油を用いてもよい。

（ｂ）成分の配合量は、本発明化粧料中に０．０１〜０．５質量％であり、好ましくは０．０２〜０．１質量％である。配合量が０．０１質量％未満では乳化の効果が認められず、一方、０．５質量％を超えると液滴が生じるため、好ましくない。

本発明ではさらに、（ｃ）尿素を本発明化粧料中に５．０〜２０．０質量％、配合してもよい。（ｃ）成分を配合することにより、（ａ）成分が水に溶解するのに要する時間を短縮させることができる。（ｃ）成分の配合量が５．０質量％未満では上記溶解時間の短縮化を図るのが難しく、一方、２０．０質量％超では皮膚刺激や肌荒れや使用性の低下の懸念が生じる。

本発明の水中油型乳化化粧料は、３０℃における粘度が１０，０００〜１００，０００ｍＰａ・Ｓであり、好ましくは１３，０００〜１９，０００ｍＰａ・Ｓである。なおここでいう粘度はＢ型粘度計での測定値による。

本発明の水中油型乳化化粧料中、水相（外相）の配合量は５０〜９９．４質量％が好ましく、より好ましくは７５〜９５質量％である。

本発明の水中油型乳化化粧料は、例えば以下のようにして製造することができる。すなわち、撹拌機に水を投入し、ここに（ａ）成分を添加し、充分攪拌して溶解させる。次いで（ｂ）成分を添加し攪拌して、水中油型乳化化粧料とする。なお、（ａ）成分と（ｂ）成分を同時に水に同時添加してもよいが、（ａ）成分を水に溶解させるのには時間がかかるので、（ａ）成分と（ｂ）成分を上記のように順次添加する方が品質の安定化の点から好ましい。本発明ではさらに、（ｃ）成分を加えることによって、（ａ）成分を水へ溶解させるのに要する時間が短縮される。

なお本発明に用いられる水は金属を含まないイオン交換水を用いることができるが、ヒアルロン酸水溶液は微生物に汚染されやすいので、微生物も含まない超純水がより好ましい。

攪拌機は、ステンレス製またはポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）製の金属が溶出しないか、溶出しにくい材質の攪拌羽根を付けたものが好ましく用いられる。攪拌羽根の形状に制限はないが、攪拌羽根同士、または製造釜内面と擦れないもののほうが好ましい。なお、攪拌時間は特に制限はない。

本発明では、一般に乳化化粧料の製造において乳化剤・分散剤として用いられる界面活性剤を実質的に配合しなくとも乳化することができ、本発明水中油型乳化化粧料を得ることができる。

なお本発明の化粧料においては、上記成分の他にさらに、本発明効果を損わない範囲において、他の添加成分を任意に配合することができる。このような成分として、ビタミン類（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ₂、ビタミンＢ₆、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＰ等）、防腐剤（例えば、フェノキシエタノール、パラベン等）、消炎剤（例えば、グリチルリチン酸誘導体、サリチル酸誘導体、ヒノキチオール、アラントイン等）、美白剤（例えば、ユキノシタ抽出物等）、色素、香料、樹脂粉末（例えば、ポリエチレン、ナイロン等）、水溶性高分子等が例示される。ただしこれら例示に限定されるものでない。

本発明の水中油型乳化化粧料は、スキンローション、エッセンス、スキンミルク、スキンクリーム等として用いられる。ただしこれら例示に限定されるものでない。

以下、本発明を実施例に基づき、より詳細に説明する。なお、本発明は、特に実施例に限定されるものではない。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。なお、以下の実施例に示す「％」は全て「重量％」である。

〔製造例１；ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の製造〕
Natrialba aegyptica（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０７４９）のＬ乾燥アンプルに、０．４ｍｌのＰＧＡ生産用液体培地（２２．５％ＮａＣｌ、２％ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、０．２％ＫＣｌ、３％ＴｒｉｓｏｄｉｕｍＣｉｔｒａｔｅ、１％ＹｅａｓｔＥｘｔｒａｃｔ、０．７５％Ｃａｓａｍｉｎｏａｃｉｄ）を加えて懸濁液を得た。０．２ｍｌの当該懸濁液を、ＰＧＡ寒天培地（１０％ＮａＣｌ、２％ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、０．２％ＫＣｌ、３％ＴｒｉｓｏｄｉｕｍＣｉｔｒａｔｅ、１％ＹｅａｓｔＥｘｔｒａｃｔ、０．７５％Ｃａｓａｍｉｎｏａｃｉｄ、２％Ａｇａｒ）に接種し、３７℃で３日間培養して、シングルコロニーを得た。

次に、５本の１８ｍｌ容試験管に、それぞれ、３ｍｌのＰＧＡ生産液体培地（２２．５％ＮａＣｌ、２％ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、０．２％ＫＣｌ、３％ＴｒｉｓｏｄｉｕｍＣｉｔｒａｔｅ、１％ＹｅａｓｔＥｘｔｒａｃｔ、０．７５％Ｃａｓａｍｉｎｏａｃｉｄ、ｐＨ７．２）を入れ、さらに、上記シングルコロニーを白金耳で１白金耳掻き取り植菌した。植菌後の試験管を、３７℃、３００ｒｐｍで３日間培養して、さらに、得られた培養液０．５ｍｌを、５０ｍｌＰＧＡ生産液体培地を入れた５００ｍｌ容坂口フラスコ１０本にそれぞれ植菌し、３７℃で５日間培養した。培養後、得られた培養液を遠心し、菌体を取り除いて上清を回収した。

次に、回収した上清に３倍量の水を加え希釈した後、１Ｎ硫酸でｐＨを３．０に調整した。ｐＨを調整した後、室温で５時間攪拌した。その後、３倍量のエタノールを加えて遠心分離を行い、沈殿物を回収した。この沈殿物がＬ−ＰＧＡである。

回収したＬ−ＰＧＡを０．１ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解して、これを、低分子物質等の不純物を除去するために透析した。次に、透析後の液体に含まれる核酸を除去するために、当該液体に、ＭｇＣｌ_２が１ｍＭ、ＤＮａｓｅＩ（ＴＡＫＡＲＡ社製）が１０Ｕ／ｍｌ、ＲＮａｓｅＩ（ニッポンジーン製）が２０μｇ／ｍｌとなるように加えて、３７℃で２時間インキュベートした。次いでタンパク質を除去するために、核酸を除去した後の液体にＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ（タカラバイオ製）を３Ｕ／ｍｌとなるように添加して、３７℃で５時間インキュベートしてＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ処理を行なった。

ＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ処理の後、超純水で透析し、低分子物質を除去した。次に、Ｌ−ＰＧＡを陰イオン交換樹脂（ＱｓｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）に吸着させ、０．５ＭのＮａＣｌ水溶液で洗浄した後、１ＭのＮａＣｌ水溶液で溶出した。得られた溶液を、さらに超純水で透析し、透析後の溶液を凍結乾燥することにより、Ｌ−ＰＧＡのナトリウム塩（以下、「Ｌ−ＰＧＡ・Ｎａ塩」と表記する）を得た。なお、超純水は、ＭｉｌｌｉＱ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製の純水製造装置）で作製した。

〔製造例２；ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の分子量分析−１〕
製造例１で得たＬ−ＰＧＡ・Ｎａ塩の平均分子量を、ＧＰＣ分析にて測定した。その結果、Ｍｗ＝７，５２２，０００、Ｍｎ＝３，７０４，０００、Ｍｗ／Ｍｎ＝２．０３１であることが確認された（プルラン換算）。

なお、ＧＰＣ分析は、以下の条件で行なった。
装置：ＨＬＣ−８２２０ＧＰＣ（東ソー社製）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ α−Ｍ（東ソー社製）
流速：０．６ｍｌ／ｍｉｎ
溶出液：０．１５ＭＮａＣｌ水溶液
カラム温度：４０℃
注入量：１０μｌ
検出器：示差屈折計

〔製造例３；ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の分子量分析−２〕
製造例１において、１．０ＭのＮａＣｌ水溶液溶出した後、さらに、１ＮＨＣｌを用いて、ｐＨを２．０に調製した以外は、製造例１と同様の操作を行なって得たＬ−ＰＧＡ・Ｎａ塩の平均分子量をＧＰＣ分析により測定した。その結果、Ｍｗ＝２，８８８，０００、Ｍｎ＝１，３２７，０００、Ｍｗ／Ｍｎ＝２．１７６であることが確認された（プルラン換算）。なお、本製造例におけるＧＰＣ分析は、製造例２と同様の操作で行なった。

〔製造例４；ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体の作製〕
製造例１で得たＬ−ＰＧＡ・Ｎａ塩の５％水溶液を作製した。

次に、Ｌ−ＰＧＡ・Ｎａ塩水溶液を、窒素を用いて３分間バブリングした後、蓋付き１０ｍｌサンプル瓶に、２ｍｌ分取して蓋を閉めた。

次に、サンプル瓶に、線源をコバルト６０とするγ線照射装置を用いてγ線を照射した。照射線量は、５ｋＧｙとなるように照射した。γ線照射後に得られた生成物を、サンプル瓶から取り出し、余分な水分を８０メッシュの金網で水切りした後、凍結乾燥することで、Ｌ−ＰＧＡ架橋体粉末を得た。なお、上記余分な水分には、未架橋のＬ−ＰＧＡが含まれており、当該水切りは、未架橋のＬ−ＰＧＡを除去することが主たる目的である。

（実施例１、比較例１〜２）
下記表１に示す組成の化粧料（試料）を調製し、これを用いて下記方法により評価試験を行った。結果を表１に示す。

［粘度］
試料の粘度を下記条件で試料調製の翌日に測定した。
装置：ビスメトロン粘度計ＶＤ型（芝浦システム（株））
温度：３０℃
ローターＮｏ．４
回転数：６ｒｐｍ
回転時間：６０秒

［油相と水相の分離］
試料調製後、１ヶ月間、冷蔵庫（５℃）にて放置し、油滴（０．１ｍｍ以上）の有無を目視で観察した。

［使用性に関する官能試験］
各試料を女性パネル（２０名）が実使用し、「刺激がない」、「べたつき感が少ない」、「肌になじみやすい」、「使用しやすい粘度である」、「しっとり感がある」の各評価項目につき、そうであると回答した人数を記した。

本発明は、ポリ−γ−L−グルタミン酸および／またはその塩および液状油分を含有することにより、皮膚刺激性がなく、安定性に優れ、使用感にも優れている、界面活性剤を配合することなく、液状油分を分散配合してなる水中油型乳化化粧料を提供することができる。さらに、従来のポリ−γ−L−グルタミン酸よりも、原料コストが安価であり、大量生産可能となり、長期にわたる使用に十分に耐え得ることからも、産業界に大きく寄与することが期待される。

Claims

（ａ）ポリ−γ−L−グルタミン酸および／またはその塩を０．６〜４．０質量％、（ｂ）液状油分を０．０１〜０．５質量％含有し、実質的に界面活性剤を含有しないことを特徴とする水中油型乳化水中油型乳化化粧料。
ポリ−γ−L−グルタミン酸が、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸分子同士の架橋構造を有することを特徴とするポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体であることを特徴とする請求項１に記載の水中油型乳化化粧料。
ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が１００万以上であることを特徴とする請求項１または２に記載の水中油型乳化化粧料。
ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が２００万以上であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の水中油型乳化化粧料。
ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が３５０万以上であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の水中油型乳化化粧料。
ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の吸水倍率が１０倍以上５０００倍以下であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の水中油型乳化化粧料。
さらに（ｃ）尿素を５．０〜２０．０質量％含有することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の水中油型乳化水中油型乳化化粧料。
粘度が１０，０００〜１００，０００ｍＰａ・Ｓ（３０℃）であることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の水中油型乳化水中油型乳化化粧料。