JP2011105659A - エリロポエチン産生促進作用を有するインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物 - Google Patents

Abstract

【課題】低分子性のＥＰＯ（エリスロポエチン）産生促進作用を有する化合物の提供。
【解決手段】下記式で表わされるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物。

［式中、Ｒ¹は、水素原子、Ｃ_1-6アルキル基、カルボキシ−Ｃ_1-6アルキル基、Ｃ_2-7アルコキシカルボニル−Ｃ_1-6アルキル基、Ｒ²、Ｒ³は、水素原子、又はハロゲン原子、Ｒ⁴は、水素原子、ハロゲン原子、又はニトロ基］
【選択図】なし

Description

本発明は、新規なエリスロポエチン産生促進剤に関する。さらに詳細には、エリスロポエチン産生低下に起因する疾患、例えば貧血の予防及び／又は治療剤に関する。

エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ：ＥＰＯ）は、赤芽球前駆細胞から成熟赤血球への成熟と分化に関与する糖タンパク質ホルモンであり、天然に存在する１６５アミノ酸からなる単量体ポリペプチドである（非特許文献１）。

ヒトのＥＰＯは、赤血球の増殖・分化において必須であり、赤血球産生の低下を特徴とする血液疾患の治療に有用である。臨床的には、ＥＰＯは、慢性腎不全（ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ：ＣＲＦ）患者における貧血、自己貯血及び未熟児貧血の治療（非特許文献２〜４）、ＡＩＤＳ及び化学療法を受けている癌患者において使用されている（非特許文献５）。また、ＥＰＯは慢性貧血における有効性も認められている。

ＥＰＯは、成人では主に腎臓で産生されるが、それ以外では、中枢神経系のアストロサイト及びニューロンにおいても産生され、ＥＰＯ及びＥＰＯ受容体は脳−末梢境界の毛細血管において発現している。さらに、ＥＰＯを全身投与すると、ＥＰＯは血液脳関門を通過して、脳及び脊髄虚血、機械的外傷、てんかん、興奮毒及び神経炎症に応答したニューロン細胞の喪失を減少させることが報告されている（非特許文献６〜１０）。

ＥＰＯのようなタンパク質を用いた療法においては、プロテアーゼによる分解を受けやすいことによる血漿半減期の短さ（非特許文献１１、１２）や、循環における化合物の治療有効濃度を維持するために、静脈内注射を頻回行わねばならないなどの問題がある。また、静脈内注射に代わる投与経路として皮下注射があるが、投与部位からの吸収が遅いため、徐放効果は有るものの、血漿中濃度が静脈内注射に比べて有意に低くなる。そこで、同等の治療効果を挙げるためには静脈内注射の場合と同様の回数を注射しなければならず、患者への負担となる。また、ヒト血清ＥＰＯは糖タンパク質であって、ＥＰＯ表面に結合した糖鎖の構造は複雑であり、そのグリコシル化は広範かつ多様であることから、サイズの不均一性を示し、組換えヒトＥＰＯではヒト血清ＥＰＯを再現よく作製することができない、などの問題もある。

従って、上記に示したような貧血を含むＥＰＯ産生低下に起因する疾患の治療において生体利用性の低いＥＰＯでなく、内因性ＥＰＯを増加させる方法及び化合物が当該技術分野において必要とされている。

一方、ＥＰＯの産生量は、転写因子である低酸素誘導性因子（ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ：ＨＩＦ）を介して酸素濃度により制御されていることが知られている（非特許文献１３）。すなわち、通常大気下では、２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素によりプロリン残基がヒドロキシル化されたＨＩＦサブユニット（ＨＩＦ−１α）がユビキチン−プロテアソーム系により分解され、ＥＰＯの産生は促進されないが、低酸素下では、２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素によるＨＩＦ−１αのプロリン残基のヒドロキシル化が抑制され、その結果、安定化されたＨＩＦ−１αは細胞質から核内に移行し、ＨＩＦ−１βと二量体を形成してＥＰＯ遺伝子のｈｙｐｏｘｉａ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｅｌｅｍｅｎｔ（ＨＲＥ）配列に結合して転写を促進し、ＥＰＯの産生を促進する。

このようなＥＰＯ産生機構を利用した２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素などのＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼに対する酵素阻害剤が、ＥＰＯ産生促進剤として報告されている（特許文献１〜４）。

しかしながら、ＨＩＦにより産生が制御されている遺伝子には、ＥＰＯをコードする遺伝子だけではなく、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）をコードする遺伝子なども挙げられる。ＶＥＧＦは血管新生促進作用を有しており、この機能を介して悪性腫瘍を悪化させる原因となり得ることも報告されている（非特許文献１４、１５）。また、貧血は癌による化学治療によっても引き起こされ、貧血治療薬はそのような化学療法を受けている癌患者に投与されることも考えられることから（非特許文献６）、癌を悪化させるＶＥＧＦなどの産生も促進する可能性のあるＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害作用を有する化合物には、そのような危険性も内包される。

ＥＰＯの産生は、ＥＰＯの５’側に位置するプロモーター及び３’側に位置するエンハンサーにより制御されており、ＨＩＦはエンハンサー中のＨＲＥ配列に結合し、ＥＰＯの産生を促進すると考えられている。加えて、ＧＡＴＡ−２、ＮＦκＢなどもＥＰＯ産生を制御するとされており（非特許文献１６、１７）、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害以外の作用機構でもＥＰＯ産生促進は達成できると考えられる。このようなことからＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害に依存しないＥＰＯ産生促進作用を有する化合物は、貧血治療において有用であると考えられる。

また、前述のように、ＥＰＯは赤芽球前駆細胞の増殖及び成熟を促進するが、ＥＰＯの産生を介さずに赤芽球前駆細胞の成熟・分化を促進する作用を有する化合物も貧血治療薬として有用である。ＥＰＯの有する血球増殖促進作用を増強する活性を有する化合物やＥＰＯのシグナル伝達の重要な制御機構のひとつである脱リン酸化を触媒する造血細胞ホスファターゼに対して阻害作用を有する化合物が報告されているが（特許文献５〜７）、その活性は必ずしも十分とは言えない。また、ＥＰＯ受容体に作用する合成ペプチド、ヘマタイドが報告されているが（非特許文献１８）、ＥＰＯと同等の活性発現には高用量の投与が必要であり、経口投与に適さないという問題点がある。

従って、ＥＰＯ産生促進作用を持つ経口投与可能な低分子性の貧血治療剤が、今後の貧血治療において有用であると考えられる。

一方、本発明に関連する骨格を有するものとして、自己免疫性疾患の治療剤として有効なインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン骨格を有する化合物が報告されている（特許文献８）。

［式中、Ｒ^１は水素であるか、あるいは、ハロゲン基、低級アルキル／アルコキシ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメトキシ基から選択される７位〜１０位における１つ若しくは複数の類似又は異なる置換基を表す；Ｒ^２は類似又は異なるＣ_１〜Ｃ_４アルキル置換基を表す；ＸはＣＯ又はＣＨ_２である；Ｙは、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｒ^３（式中、Ｒ^３は、低級アルキル、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^４又はＮＲ^５Ｒ^６を表し、この場合、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６は独立して、低級アルキル又はシクロアルキルであり、ｎは２〜４の整数である）である；ただし、ＸがＣＨ_２であるとき、ＹはＯＨ又はＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＯＨである］

そして当該文献中には、自己免疫性疾患の一病態として貧血が記載されている。しかしながら、この文献の化合物は、インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン環上の２位及び３位に同時にＣ_１−Ｃ_４アルキル基を有しており、この点で本発明の化合物と異なる。さらに、実施例としては関節炎モデルや実験的アレルギー性脳脊髄炎モデルの評価が記載されているだけであり、リウマチ治療、多発性硬化症治療に関する示唆はあるものの、貧血治療に有効であるかどうかについては明らかではない。さらに、本発明のようなエリスロポエチンの産生を促進する作用に関しての記載や示唆はない。

その他の文献として、抗リウマチ剤としての使用（非特許文献１９）、制癌剤としての使用（特許文献９、１０、非特許文献２０）、ウイルス感染症治療剤としての使用（特許文献１１、非特許文献２１〜２３）等がある。しかしながら、これらの文献においては貧血治療やエリスロポエチンの産生を促進する作用に関しての記載や示唆はない。

特開２００６−１３７７６３号公報 ＷＯ２００３／５３９９７号パンフレット ＷＯ２００５／１１６９６号パンフレット ＷＯ２００７／３８５７１号パンフレット 特表２０００−５３６３６５号公報 特開平１１−１７１７７４号公報 特開２００２−２７５１５９号公報 特表平２００８−５０２６７６号公報 ＷＯ９４／２４１３５号パンフレット ＷＯ９６／１９９９６号パンフレット ＷＯ９６／０００６７号パンフレット

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本発明の目的は、低分子性のＥＰＯ産生促進作用を有する化合物を提供することにある。さらに詳細には、貧血の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。

上記実情に鑑み、本発明者らは、ＥＰＯ産生促進作用を持つ化合物を鋭意探索した結果、下記一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物が、ヒト肝臓癌由来のＨｅｐＧ２細胞を用いた試験においてＥＰＯ産生を促進することを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、次の一般式（１）：

［式中、
Ｒ¹は、水素原子、Ｃ_1-6アルキル基、カルボキシ−Ｃ_1-6アルキル基、Ｃ_2-7アルコキシカルボニル−Ｃ_1-6アルキル基を示し、
Ｒ²、Ｒ³は、同一又は異なってもよく、水素原子、又はハロゲン原子を示し、
Ｒ⁴は、水素原子、ハロゲン原子、又はニトロ基を示す］
で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＥＰＯ産生促進剤に関する。

より詳細には、本発明は下記化合物群：
９−ブロモ−６−メチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
６−エチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
６−メチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
６−メチル−９−ニトロ−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
９−ブロモ−２，４−ジクロロ−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
エチル ２−（６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）アセテート、
メチル ２−（６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）アセテート、
メチル ２−（９−クロロ−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）アセテート、
２−（６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）酢酸、
メチル ２−（９−メチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）アセテート、及び
２−（９−メチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）酢酸
からなる群から選択される前記ＥＰＯ産生促進剤を提供するものである。

また、本発明は、前記一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。

また、本発明は、ＥＰＯ産生促進用の製剤を製造するための、前記一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用（ｕｓｅ）に関する。より詳細には、本発明は、ＥＰＯ産生促進用の製剤を製造するための、前記した化合物群から選ばれるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用を提供するものである。

さらに、本発明は、前記一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ＥＰＯの産生促進が必要とされる患者に投与することを特徴とする、ＥＰＯ産生の促進方法（ｍｅｔｈｏｄ）に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ＥＰＯの産生促進が必要とされる患者に投与することを特徴とする、ＥＰＯ産生の促進方法を提供するものである。

また、本発明は、前記一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を細胞に接触させて、当該細胞におけるＥＰＯの産生を促進させる方法に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を細胞に接触させて、当該細胞におけるＥＰＯの産生を促進させる方法を提供するものである。ここで、「接触」とは、本明細書中で使用するとき、インビトロ又はインビボにおいて、本発明のインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物等が、細胞による前記化合物等の取り込み作用又は細胞表面での相互作用などにより、増殖、分化、生理活性物質の分泌などの細胞の機能を調節するように前記化合物等を細胞に添加することを意味する。

本発明は、優れたＥＰＯ産生促進作用を有している、インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を見出したものであり、ＥＰＯ産生を促進することにより症状が改善される疾患（例えば、慢性腎不全患者における貧血、自己貯血及び未熟児貧血、ＡＩＤＳ及び化学療法を受けている癌患者の貧血、慢性貧血、鉄欠乏性貧血、再生不良性貧血、溶血性貧血、巨赤芽球性貧血などの貧血）の予防及び／又は治療のための医薬組成物として有用である。また、本発明は、ＥＰＯ産生促進作用を有する経口投与可能な低分子性の化合物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。

以下、本発明について詳細に説明する。

本発明における用語の定義は以下のとおりである。

本明細書中で使用するとき、「ハロゲン原子」とは、ハロゲノ基を意味し、具体的にはフッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子等である。

本明細書中で使用するとき、「アルキル基」は、直鎖又は分枝状であってもよい。従って、「Ｃ_1-6アルキル基」には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、４−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、３−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、１−メチルペンチル基、３，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基等の炭素数１〜６個の直鎖又は分枝状のアルキル基が挙げられる。好ましくは、「Ｃ_1-4アルキル基」である。

本明細書中で使用するとき、「カルボキシ−Ｃ_1-6アルキル基」としては、カルボキシメチル基、１−カルボキシエチル基、２−カルボキシエチル基、１−カルボキシプロピル基、２−カルボキシプロピル基、３−カルボキシプロピル基、１−カルボキシブチル基、２−カルボキシブチル基、３−カルボキシブチル基、４−カルボキシブチル基、１−カルボキシペンチル基、２−カルボキシペンチル基、３−カルボキシペンチル基、４−カルボキシペンチル基、５−カルボキシペンチル基、１−カルボキシヘキシル基、２−カルボキシヘキシル基、３−カルボキシヘキシル基、４−カルボキシヘキシル基、５−カルボキシヘキシル基、６−カルボキシヘキシル基等が挙げられる。好ましくは、「カルボキシ−Ｃ_1-4アルキル基」である。

本明細書中で使用するとき、「アルコキシ基」は、直鎖又は分枝状であってもよい。従って、「Ｃ_2-7アルコキシカルボニル−Ｃ_1-6アルキル基」としては、メトキシカルボニルメチル基、エトキシカルボニルメチル基、プロポキシカルボニルメチル基、ブトキシカルボニルメチル基、ペンチルオキシカルボニルメチル基、ヘキシルオキシカルボニルメチル基、１−（メトキシカルボニル）エチル基、２−（メトキシカルボニル）エチル基、１−（メトキシカルボニル）プロピル基、２−（メトキシカルボニル）プロピル基、３−（メトキシカルボニル）プロピル基、１−（メトキシカルボニル）ブチル基、２−（メトキシカルボニル）ブチル基、３−（メトキシカルボニル）ブチル基、４−（メトキシカルボニル）ブチル基、１−（メトキシカルボニル）ペンチル基、２−（メトキシカルボニル）ペンチル基、３−（メトキシカルボニル）ペンチル基、４−（メトキシカルボニル）ペンチル基、５−（メトキシカルボニル）ペンチル基、１−（メトキシカルボニル）ヘキシル基、２−（メトキシカルボニル）ヘキシル基、３−（メトキシカルボニル）ヘキシル基、４−（メトキシカルボニル）ヘキシル基、５−（メトキシカルボニル）ヘキシル基、６−（メトキシカルボニル）ヘキシル基等が挙げられる。好ましくは、「Ｃ_2-5アルコキシカルボニル−Ｃ_1-4アルキル基」である。なお、アルコキシカルボニルにおける「Ｃ_2-7」や「Ｃ_2-5」等の記載は、カルボニル炭素を含んだ炭素数を表す。

その他、ここに定義のない基については、通常の定義に従う。

一般式（１）中、Ｒ¹における「Ｃ_1-4アルキル基」としては、メチル基、エチル基が好ましい。

一般式（１）中、Ｒ¹における「カルボキシＣ_1-4アルキル基」としては、カルボキシメチル基が好ましい。

一般式（１）中、Ｒ¹における「Ｃ_2-5アルコキシカルボニルＣ_1-4アルキル基」としては、メトキシカルボニルメチル基、エトキシカルボニルメチル基が好ましい。

一般式（１）中、Ｒ²、Ｒ³における「ハロゲン原子」としては、塩素原子が好ましい。

なお、Ｒ²、Ｒ³の置換位置は１位〜４位のいずれでもよいが、２位及び４位がより好ましい。

一般式（１）中、Ｒ⁴における「ハロゲン原子」としては、塩素原子、臭素原子が好ましい。

一般式（１）中、Ｒ⁴における「Ｃ_1-4アルキル基」としては、メチル基が好ましい。

なお、R⁴の置換位置は７位〜１０位のいずれでもよいが、９位がより好ましい。

本発明の一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物の具体例として、下記化合物を挙げることができる。

本発明の一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明のインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、若しくはそれらの結晶多形、又はこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。

本発明の一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物の医薬として許容される塩としては、具体的には、化合物を塩基性化合物として扱う場合は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等）との酸付加塩等が挙げられ、化合物を酸性化合物として扱う場合には、無機塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、バリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等）や有機塩（例えば、ピリジニウム塩、ピコリニウム塩、トリエチルアンモニウム塩等）が挙げられる。

本発明の一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノールなどのアルコールとの溶媒和物）が挙げられる。

本発明の一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物は、公知の方法により製造することができる。製造法の一例として、ＷＯ９４／２４１３５号公報に記載の方法を以下に示すが、なんらこれに限定されるものではない。

［式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴は前記と同じものを示し、Ｘはハロゲン原子等の脱離基を示す］

１，２−フェニレンジアミン化合物（Ｉ）とイサチン化合物（ＩＩ）とを、酢酸などの有機酸中で加熱縮合することによりＲ^１が水素原子であるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物（１ａ）を製造することができる。化合物（１ａ）を、必要に応じて水素化ナトリウムの存在下に、ハロゲン化アルキル（ヨウ化メチル、ヨウ化エチル等）又はハロゲノ酢酸誘導体（ブロモ酢酸、ブロモ酢酸エチル等）である化合物（ＩＩＩ）とジメチルスルホキシドなどの非プロトン性極性溶媒中で反応させることによって、Ｒ^１がＣ_1-6アルキル基、カルボキシ−Ｃ_1-6アルキル基、Ｃ_2-7アルコキシカルボニル−Ｃ_1-6アルキル基である化合物（１ｂ）を製造することができる。また、Ｒ^１がカルボキシ−Ｃ_1-6アルキル基である化合物は、Ｒ^１がＣ_2-7アルコキシカルボニル−Ｃ_1-6アルキル基である化合物（１ｂ）を通常の加水分解反応に供することによって製造することもできる。

また、副反応を回避する目的で、適宜官能基の保護脱保護を組み合わせて反応を行ってもよい。保護、脱保護条件としては一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考にして行うことができる。

前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。

さらに、各種の異性体は、異性体間の物理化学的性質の差を利用し、常法により単離できる。例えばラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き、光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。

本発明のＥＰＯ産生促進剤又は貧血治療・予防剤は、一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。

投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。

経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該技術分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。

経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。

注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としては、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。

坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。

上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。

本発明の一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり１ｍｇから１０００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。

次に、実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。なお、実施例に使用した被検化合物１〜５はChembridge社より入手したものを、被検化合物６〜１１はChemDiv社より入手したものを使用した。

実施例１
本発明のインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物によるＥＰＯ産生促進活性は、ＥＰＯプロモーター活性に基づいて測定した。
＜材料と方法＞
ｐＧＬ３ ｂａｓｉｃ（プロメガ）のルシフェラーゼ遺伝子にヒトＥＰＯの５’プロモーター領域、及び３’エンハンサー領域を連結したベクターをリポフェクションによってヒト肝臓癌由来である細胞株ＨｅｐＧ２に遺伝子導入した。得られた安定発現株（ＨｅｐＧ２ ＥＰＯ−ｌｕｃ）を被検化合物の評価に使用した。次に、ＨｅｐＧ２ ＥＰＯ−ｌｕｃは、１０％ウシ胎児血清を含む最小必須培地（ＭＥＭ）（シグマ）を用いて９６ウェルプレートの各ウェルに５×１０³細胞ずつ播種した。その後、ＤＭＳＯに溶解した被検化合物を最終濃度７．５μＭとなるように各ウェルに添加し、培地量を１ウェルあたり１００μｌとした。酸素濃度を４％としたＣＯ₂インキュベーターで２４時間インキュベート後、ＥＰＯプロモーター活性として、Ｂｒｉｇｈｔ―Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（プロメガ）を１００μｌ／ウェルで添加し、直ちに、ＡＲＶＯ（パーキンエルマー）を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。上記方法は、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍに添付された取扱説明書に準じた。

化合物を添加しない未刺激状態でのＥＰＯプロモーター活性を１００％とし、各化合物により誘導されたＥＰＯプロモーター活性（％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ）を算出した。結果を表２に示す。

＜結果＞
被検化合物を濃度７．５μＭ添加することにより、ＥＰＯ産生促進が認められた（表２参照）。特に、化合物３、５、１１は１０００％を超える強力なＥＰＯ産生促進作用を有していた。以上のことから、これらの化合物にはＥＰＯ産生促進作用があることが明らかとなり、貧血治療剤として有用であることがわかった。

本発明は、一般式（１）で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＥＰＯ産生促進作用を有していることを初めて見出し、優れたＥＰＯ産生促進作用を有する経口投与可能な低分子性の貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、低分子性の新たな貧血の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。

Claims (3)

1. 次の一般式（１）：
   

   

   ［式中、
   Ｒ¹は、水素原子、Ｃ_1-6アルキル基、カルボキシ−Ｃ_1-6アルキル基、Ｃ_2-7アルコキシカルボニル−Ｃ_1-6アルキル基を示し、
   Ｒ²、Ｒ³は、同一又は異なってもよく、水素原子、又はハロゲン原子を示し、
   Ｒ⁴は、水素原子、ハロゲン原子、又はニトロ基を示す］
   で表されるインドロ［２，３−ｂ］キノキサリン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＥＰＯ産生促進剤。
2. 下記の化合物群：
   ９−ブロモ−６−メチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
   ６−エチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
   ６−メチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
   ６−メチル−９−ニトロ−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
   ９−ブロモ−２，４−ジクロロ−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン、
   エチル ２−（６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）アセテート、
   メチル ２−（６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）アセテート、
   メチル ２−（９−クロロ−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）アセテート、
   ２−（６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）酢酸、
   メチル ２−（９−メチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）アセテート、及び
   ２−（９−メチル−６Ｈ−インドロ［２，３−ｂ］キノキサリン−６−イル）酢酸
   からなる群から選ばれる、請求項１に記載のＥＰＯ産生促進剤。
3. 請求項１又は２に記載のＥＰＯ産生促進剤を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤。