JP2011087571A - 細菌分析装置および細菌分析方法 - Google Patents

Abstract

【課題】強アルカリ溶液を装置内に導入する必要のない細菌分析装置を提供する。
【解決手段】この細菌分析装置１は、少なくとも検体と第１酵素とから調製される第１細菌判別用試料とを調製する試料調製部５と、第１細菌判別用試料に含まれる細菌を検出する光学検出部６と、第１細菌判別用試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する分析部３とを備えている。具体的には前記第１酵素は、リゾチームであり、第２酵素は、リゾスタフィンであり、例えば、尿中に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、グラム陰性細菌であるかを判定し、判定結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類を判別。
【選択図】図３

Description

本発明は、細菌分析装置および細菌分析方法に関し、特に、検体に含まれる細菌の種類を判別するための細菌分析装置および細菌分析方法に関する。

従来、検体に含まれる細菌の種類を判別するための装置が知られている（たとえば、特許文献１参照）。

この特許文献１では、フローサイトメータを用いた粒子測定装置を用いて検体に含まれる細菌の種類を判別している。上記特許文献１では、検体から第１測定試料を調製するとともに、検体とアルカリ性溶液とから第２測定試料を調製し、第１測定試料および第２測定試料について、粒子測定装置により計測を行っている。また、第１測定試料の測定結果と第２測定試料の測定結果とに基づいて、細菌がグラム陽性細菌であるかグラム陰性細菌であるかを分析している。上記特許文献１には、アルカリ性溶液として、ｐＨ１４程度のアルカリ性溶液を用いることが記載されている。

特開２００５−１１０６２９号公報

しかしながら、上記特許文献１では、腐食性の強いｐＨ１４程度の強アルカリの溶液を装置内に導入する必要があるという問題点がある。

この発明は、上記のような課題を解決するためになされたものであり、この発明の１つの目的は、強アルカリ溶液を装置内に導入する必要のない細菌分析装置および細菌分析方法を提供することである。

上記目的を達成するために、この発明の第１の局面における細菌分析装置は、少なくとも検体と第１酵素とから調製される第１測定試料を調製する試料調製部と、第１測定試料に含まれる細菌を検出する検出部と、第１測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する情報処理部とを備えている。

この第１の局面による細菌分析装置では、上記のように、検体と第１酵素とから調製される第１測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する情報処理部を設けることによって、腐食性の強い強アルカリ溶液を装置内に導入しなくても、酵素（第１酵素）を用いて検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力することができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、試料調製部は、少なくとも検体から調製される第２測定試料をさらに調製し、検出部は、前記第１測定試料に含まれる細菌および前記第２測定試料に含まれる細菌をそれぞれ検出し、情報処理部は、前記第１測定試料の検出結果および前記第２測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する。このように構成すれば、第１測定試料の検出結果および前記第２測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類を容易に判断することができる。

この場合、好ましくは、情報処理部は、第１測定試料の検出結果と第２測定試料の検出結果とに基づいて、検体に含まれる細菌に対する第１酵素の影響度合いを取得し、影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する。このように構成すれば、特定の細菌に影響する（特定の細菌と反応する）ことがわかっている酵素を第１酵素として用いることにより、第１測定試料の検出結果と第２測定試料の検出結果とに基づいて第１酵素の影響が認められた検体には、その細菌が含まれていると推定することができる。この推定した細菌の種類を、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報として出力することができる。

上記検体に含まれる細菌に対する第１酵素の影響度合いを取得する構成において、好ましくは、情報処理部は、第１測定試料の検出結果および第２測定試料の検出結果のそれぞれに基づいて、第１測定試料および第２測定試料に含まれる細菌数を反映した値を取得するとともに、第１測定試料の細菌数を反映した値と第２測定試料の細菌数を反映した値とに基づいて、検体に含まれる細菌に対する第１酵素の影響度合いを取得し、影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する。このように構成すれば、第１測定試料の細菌数を反映した値と第２測定試料の細菌数を反映した値とに基づいて、検体に含まれる細菌に対する第１酵素の影響度合いを容易に取得することができる。

この場合、好ましくは、情報処理部は、第１測定試料の検出結果および第２測定試料の検出結果のそれぞれに基づいて、第１測定試料に含まれる細菌に関する第１スキャッタグラムおよび第２測定試料に含まれる細菌に関する第２スキャッタグラムを作成するとともに、第１スキャッタグラムおよび第２スキャッタグラムに基づいて、第１測定試料に含まれる細菌数を反映した値および第２測定試料に含まれる細菌数を反映した値を取得する。このように構成すれば、第１スキャッタグラムおよび第２スキャッタグラムに基づいて、容易に、第１測定試料および第２測定試料に含まれる細菌数を反映した値を取得することができる。

上記検体に含まれる細菌に対する第１酵素の影響度合いを取得する構成において、好ましくは、情報処理部は、第１測定試料の検出結果および第２測定試料の検出結果のそれぞれに基づいて、第１測定試料に含まれる細菌に関する第１スキャッタグラムおよび第２測定試料に含まれる細菌に関する第２スキャッタグラムを作成するとともに、第１スキャッタグラムのパターンと第２スキャッタグラムとのパターンとに基づいて、検体に含まれる細菌に対する第１酵素の影響度合いを取得し、影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する。このように構成すれば、第１スキャッタグラムと第２スキャッタグラムとのパターンを比較する（たとえば、第１スキャッタグラムのパターンと第２スキャッタグラムのパターンとの重なる割合を算出する）ことにより、検体に含まれる細菌に対する第１酵素の影響度合いを容易に取得することができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報は、少なくとも、検体に含まれる可能性のある細菌の名称を含む。このように構成すれば、検査者は、検体に含まれる可能性のある細菌の名称を知ることができるので、その検体にどの細菌が含まれているかの判断を容易に行うことができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、表示部をさらに備え、情報処理部は、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を表示部に表示するように制御する。このように構成すれば、検査者は、表示部を見ることによって検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を容易に得ることができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、第１酵素は、細胞膜消化酵素である。このように構成すれば、特定の細菌に影響する（特定の細菌と反応する）細胞膜消化酵素を用いて特定の細菌を減菌させることができるので、細胞膜消化酵素を第１酵素として用いることによって、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力することができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報は、検体に含まれる細菌がグラム陽性細菌であるか否かの情報を含む。このように構成すれば、検査者は、検体に含まれる細菌がグラム陽性細菌であるか否かを容易に判断することができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、ブドウ球菌属のグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌であるかの情報を含む。このように構成すれば、検査者は、出力された情報に基づいて、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、ブドウ球菌属のグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌であるかを容易に判断することができる。

この場合、好ましくは、第１酵素は、リゾチームである。このように構成すれば、リゾチームはブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌に対して反応するので、第１酵素としてリゾチームを用いて細菌の反応の有無を判別することにより、検査者は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、ブドウ球菌属のグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌であるかを容易に判断することができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外の細菌であるかの情報を含む。このように構成すれば、検査者は、出力された情報に基づいて、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外の細菌であるかを容易に判断することができる。

この場合、好ましくは、第１酵素は、リゾスタフィンである。このように構成すれば、リゾスタフィンはブドウ球菌属の細菌に対して反応するので、第１酵素としてリゾスタフィンを用いて細菌の反応の有無を判別することにより、検査者は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外の細菌であるかを容易に判断することができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、試料調製部は、少なくとも検体と第２酵素とから調製される第３測定試料をさらに調製し、検出部は、第１測定試料に含まれる細菌、第２測定試料に含まれる細菌および第３測定試料に含まれる細菌をそれぞれ検出し、情報処理部は、第１測定試料の検出結果、第２測定試料の検出結果および第３測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する。このように構成すれば、第１酵素および第２酵素を用いて、検体に含まれる細菌の種類をより正確に推定することができる。

上記情報処理部が第１〜第３測定試料の検出結果に基づいて検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する構成において、好ましくは、情報処理部は、第１測定試料の検出結果、第２測定試料の検出結果および第３測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、グラム陰性細菌であるかを判定し、判定結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する。このように構成すれば、検査者は、出力された情報に基づいて、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、グラム陰性細菌であるかを容易に判断することができる。

この場合、好ましくは、第１酵素は、リゾチームであり、第２酵素は、リゾスタフィンである。このように構成すれば、リゾチームはブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌に対して反応するとともにグラム陰性細菌には反応せず、リゾスタフィンはブドウ球菌属の細菌（グラム陽性細菌）に対して反応するとともにグラム陰性細菌には反応しないので、リゾチームおよびリゾスタフィンを用いることにより、検査者は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、グラム陰性細菌であるかを容易に判断することができる。

上記第１酵素がリゾチームである構成において、好ましくは、測定試料中に含まれるリゾチームの濃度は、２．５ｍｇ／ｍＬ以上２０ｍｇ／ｍＬ以下である。このように構成すれば、リゾチームとブドウ球菌属以外のグラム陽性菌との反応性が高まるので、検体に含まれる細菌の種類を容易に判断することができる。

上記第２酵素がリゾスタフィンである構成において、好ましくは、測定試料中に含まれるリゾスタフィンの濃度は、０．５μｇ／ｍＬ以上１００μｇ／ｍＬ以下である。このように構成すれば、リゾスタフィンとブドウ球菌属の細菌との反応性が高まるので、検体に含まれる細菌の種類を容易に判断することができる。

上記第１の局面による細菌分析装置において、好ましくは、検体は、尿である。このように構成すれば、尿を上記第１の局面による細菌分析装置によって分析することにより、尿中に含まれる細菌の種類を容易に判別することができる。

この発明の第２の局面による細菌分析方法は、少なくとも検体と第１酵素とから調製される第１測定試料を調製する工程と、第１測定試料に含まれる細菌を検出する工程と、第１測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程とを備える。

この第２の局面による細菌分析方法では、上記のように、検体と第１酵素とから調製される第１測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力している。このように構成することによって、腐食性の強い強アルカリ溶液を装置内に導入しなくても、酵素（第１酵素）を用いて検体に含まれる細菌の種類を分析することができる。

上記第２の局面による細菌分析方法において、好ましくは、少なくとも検体から調製される第２測定試料を調製する工程と、第２測定試料に含まれる細菌を検出する工程とをさらに備え、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程は、第１測定試料の検出結果および第２測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程を含む。このように構成すれば、第１測定試料の検出結果と第２測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類を容易に判断することができる。

この場合、好ましくは、少なくとも検体と第２酵素とから調製される第３測定試料を調製する工程と、第３測定試料に含まれる細菌を検出する工程とをさらに備え、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程は、第１測定試料の検出結果、第２測定試料の検出結果および第３測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程を含む。このように構成すれば、第１酵素および第２酵素を用いて、検体に含まれる細菌の種類をより正確に推定することができる。

本発明の細菌分析装置及び細菌分析方法によれば、腐食性の強い強アルカリ溶液を装置内に導入しなくても、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力することができる。

本発明の第１実施形態による細菌分析装置の全体構成を示した斜視図である。 図１に示した第１実施形態による細菌分析装置の分析部を示したブロック図である。 図１に示した第１実施形態による細菌分析装置の試料調製部および光学検出部を概略的に示す図である。 図１に示した第１実施形態による細菌分析装置の光学検出部の構造を示す図である。 図１に示した第１実施形態による細菌分析装置の分析動作を説明するためのフローチャートである。 図５に示した第１実施形態による細菌分析装置の分析動作の１次解析処理を説明するためのフローチャートである。 図１に示した第１実施形態による細菌分析装置の分析動作の１次解析処理の解析結果を示す１次解析結果画面を示す図である。 図５に示した第１実施形態による細菌分析装置の分析動作の２次解析処理を説明するためのフローチャートである。 図１に示した第１実施形態による細菌分析装置の分析動作の総合分析処理の解析結果を示す総合分析結果画面を示す図である。 図１に示した第１実施形態による細菌分析装置の分析動作の総合分析処理を説明するためのフローチャートである。 リゾチームを用いた細菌の種類の判定原理を説明するための図である。 図１に示した第１実施形態の変形例による細菌分析装置の分析動作の１次解析処理の解析結果を示す１次解析結果画面を示す図である。 図１に示した第１実施形態の変形例による細菌分析装置の分析動作の総合分析処理の解析結果を示す総合分析結果画面を示す図である。 図１に示した第２実施形態による細菌分析装置の分析動作の総合分析処理を説明するためのフローチャートである。 リゾスタフィンを用いた細菌の種類の判定原理を説明するための図である。 本発明の第３実施形態による細菌分析装置の分析動作を説明するためのフローチャートである。 本発明の第３実施形態による細菌分析装置の分析動作の２次解析処理を説明するためのフローチャートである。 本発明の第３実施形態による細菌分析装置の分析動作の総合分析処理を説明するためのフローチャートである。 リゾチーム濃度と大便連鎖球菌の細菌数との関係を示すグラフである。 リゾスタフィン濃度と黄色ブドウ球菌の細菌数との関係を示すグラフである。 リゾスタフィン濃度とＳ．ｓｃｉｕｒｉの細菌数との関係を示すグラフである。

以下、本発明を具体化した実施形態を図面に基づいて説明する。

（第１実施形態）
図１〜図４を参照して、本発明の第１実施形態による細菌分析装置１の全体構成について説明する。

図１に示すように、第１実施形態による細菌分析装置１は、フローサイトメトリーによって検体の測定を行う測定部２と、測定部２における測定結果を分析する分析部３とを備えている。測定部２は、検体を収容する試験管１００を収納するサンプルラック２００（試験管立て）を移送するためのラックテーブル４と、検体などから測定試料を調製するための試料調製部５と、測定試料から尿中の有形成分や細菌の情報を検出するための光学検出部６と、ラックテーブル４、試料調製部５および光学検出部６などを制御する制御部７とを含んでいる。測定部２の筐体の側面には、アーム２１を介して支持台２２が取り付けられている。この支持台２２にパーソナルコンピュータからなる分析部３が設置されている。また、測定部２と分析部３とはＬＡＮ接続されている。

ラックテーブル４は、サンプルラック２００を所定の検体吸引位置まで移送する機能を有している。

検体吸引位置において、試験管１００に入った検体（尿）は、吸引管８を用いて図示しないシリンジポンプにより吸引されるとともに、後述する測定試料調製部５１に分注される。

図３に示すように、試料調製部５は、検体と所定の液とを混合することにより、測定試料を調製する機能を有している。具体的には、試料調製部５は、測定試料調製部５１と、希釈液保持部５２と、染色液保持部５３と、酵素保持部５４とを含んでいる。第１実施形態では、酵素保持部５４には、細胞壁溶解酵素の一つであるリゾチーム（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ）が保持されている。試料調製部５は、吸引管８を介して検体が分注された測定試料調製部５１に希釈液および染色液を混合することにより、細菌検出用試料を調製することが可能である。また、試料調製部５は、検体が分注された測定試料調製部５１に希釈液、染色液および酵素（リゾチーム）を混合することにより、第１細菌判別用試料を調製することが可能である。試料調製部５において調製された測定試料（細菌検出用試料および第１細菌判別用試料）は、後述する光学検出部６のフローセル６１に導入されるように構成されている。

光学検出部６では、フローサイトメトリーによる光学的な測定が行われる。すなわち、光学検出部６では、測定試料がシース液（図示せず）に包まれた細い流れがフローセル６１において形成されるとともに、この細い流れに対してレーザ光が照射される。具体的な構成としては、図４に示すように、光学検出部６は、半導体レーザからなる光源６２と、光源６２から照射されたレーザ光をフローセル６１の細い流れに集光するコンデンサレンズ６３と、２つの集光レンズ６４および６５と、ダイクロイックミラー６６と、フォトダイオードからなる散乱光受光部６７と、フォトマルチプライヤからなる散乱光受光部６８と、フォトマルチプライヤからなる蛍光受光部６９とを含んでいる。

集光レンズ６４は、レーザ光が照射されたフローセル６１内の測定試料（細い流れ）から発する光のうち、前方散乱光を散乱光受光部６７に集光する機能を有する。集光レンズ６５は、レーザ光が照射されたフローセル６１内の測定試料から発する光のうち、側方散乱光および側方蛍光をダイクロイックミラー６６に集光する機能を有する。ダイクロイックミラー６６は、側方散乱光を散乱光受光部６８に向かって反射するとともに、側方蛍光を蛍光受光部６９の方に透過させるように構成されている。

散乱光受光部６７、散乱光受光部６８および蛍光受光部６９のそれぞれは、受光した光を電気信号に変換するように構成されている。これらの電気信号は、検体に含まれる細菌の形状、数などを反映したものとなる。すなわち、光学検出部６は、測定試料（検体）に含まれる細菌を検出することが可能である。これらの電気信号は、制御部７を介して分析部３に送信される。

なお、試料調製部５による測定試料の調製動作および光学検出部６による測定動作などは、測定部２の制御部７（マイクロコンピュータ）の制御により、図示しない駆動部および電磁弁などを動作させることにより自動的に行われる。

また、分析部３は、図１および図２に示すように、制御部３１（図２参照）と、表示部３２と、入力デバイス３３とから主として構成されたコンピュータによって構成されている。

制御部３１は、図２に示すように、ＣＰＵ３１１と、ＲＯＭ３１２と、ＲＡＭ３１３と、ハードディスク３１４と、読出装置３１５と、入出力インタフェース３１６と、通信部３１７と、画像出力インタフェース３１８とから主として構成されている。ＣＰＵ３１１、ＲＯＭ３１２、ＲＡＭ３１３、ハードディスク３１４、読出装置３１５、入出力インタフェース３１６、通信部３１７および画像出力インタフェース３１８は、バス３１９によって接続されている。

ＣＰＵ３１１は、ＲＯＭ３１２に記憶されているコンピュータプログラムおよびＲＡＭ３１３にロードされたコンピュータプログラムを実行することが可能である。そして、後述する細菌の種類を分析するためのプログラム３４ａをＣＰＵ３１１が実行することにより、コンピュータが分析部３として機能する。

ここで、第１実施形態では、分析部３のＣＰＵ３１１は、通信部３１７を介して測定部２の制御部７から受信する測定データを解析して、検体（尿）に含まれる可能性のある細菌の種類を判定するとともに、その判定結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判断を支援するための情報を出力するように構成されている。具体的には、ＣＰＵ３１１は、測定部２からのデータを解析することによって、検体に含まれる細菌に関するスキャッタグラムを作成するように構成されている。また、ＣＰＵ３１１は、スキャッタグラムに基づいて、検体に含まれる細菌数に対応する数値を算出するように構成されている。ＣＰＵ３１１は、検体から調製される細菌検出用試料の検出結果（スキャッタグラム、細菌数に対応する数値など）と、検体および酵素（リゾチーム）から調製される第１細菌判別用試料の検出結果とに基づいて、検体に含まれる細菌に対する酵素の影響度合いを取得し、その影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判断を支援するための情報を表示部３２に出力するように構成されている。

ＲＯＭ３１２は、マスクＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭなどによって構成されており、ＣＰＵ３１１に実行されるコンピュータプログラムおよびこれに用いるデータなどが記録されている。

ＲＡＭ３１３は、ＳＲＡＭまたはＤＲＡＭなどによって構成されている。ＲＡＭ３１３は、ＲＯＭ３１２およびハードディスク３１４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ３１１の作業領域として利用される。

ハードディスク３１４は、オペレーティングシステムおよびアプリケーションプログラムなど、ＣＰＵ３１１に実行させるための種々のコンピュータプログラムおよびそのコンピュータプログラムの実行に用いるデータがインストールされている。第１実施形態の細菌の種類を分析するプログラムも、このハードディスク３１４にインストールされている。

読出装置３１５は、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、またはＤＶＤ−ＲＯＭドライブなどによって構成されており、可搬型記録媒体３４に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。また、可搬型記録媒体３４には、細菌の種類を分析するプログラム３４ａが格納されており、コンピュータがその可搬型記録媒体３４から細菌の種類を分析するプログラム３４ａを読み出してハードディスク３１４にインストールすることが可能である。

なお、上記細菌の種類を分析するプログラム３４ａは、それぞれ、可搬型記録媒体３４によって提供されるのみならず、電気通信回線（有線、無線を問わない）によってコンピュータと通信可能に接続された外部の機器から上記電気通信回線を通じて提供することも可能である。たとえば、細菌の種類を分析するプログラム３４ａがインターネット上のサーバコンピュータのハードディスク３１４内に格納されており、このサーバコンピュータにコンピュータがアクセスして、細菌の種類を分析するプログラム３４ａをダウンロードし、これらをハードディスク３１４にインストールすることも可能である。

また、ハードディスク３１４には、たとえば、米マイクロソフト社が製造販売するＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）などのグラフィカルユーザインタフェース環境を提供するオペレーティングシステムがインストールされている。以下の説明においては、細菌の種類を分析するプログラム３４ａは、それぞれ上記オペレーティングシステム上で動作するものとしている。

入出力インタフェース３１６は、たとえば、ＵＳＢ、ＩＥＥＥ１３９４、ＲＳ−２３２Ｃなどのシリアルインタフェース、ＳＣＳＩ、ＩＤＥ、ＩＥＥＥ１２８４などのパラレルインタフェース、およびＤ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器などからなるアナログインタフェースなどから構成されている。入出力インタフェース３１６には、入力デバイス３３が接続されており、ユーザがその入力デバイス３３を使用することにより、コンピュータにデータを入力することが可能である。これにより、ユーザは、分析部３に対して測定部２の測定指示（測定オーダの入力）を行うことが可能である。

通信部３１７は、たとえば、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）インタフェースである。分析部３は、通信部３１７を介して、測定部２から測定データを受信可能に構成されている。さらに、分析部３は、通信部３１７を介して、測定部２に制御信号を送信可能である。

画像出力インタフェース３１８は、ＬＣＤまたはＣＲＴなどで構成された表示部３２に接続されており、ＣＰＵ３１１から与えられた画像データに応じた映像信号を表示部３２に出力するように構成されている。表示部３２は、入力された映像信号にしたがって、画像（画面）を表示するように構成されている。

次に、図５〜図１０を参照して、第１実施形態による細菌分析装置１の分析動作について説明する。

まず、検査者は、分析部３において分析の指示を行う。これにより、測定部２において分析が開始される。具体的には、ステップＳ１において、制御部７は、試料調製部５を制御することにより、細菌検出用試料の調製を行う。すなわち、検体（尿）、希釈液および染色液を混合することにより、細菌検出用試料を調製する。この後、調製した細菌検出用試料を光学検出部６に移送する。

次に、ステップＳ２において、制御部７は、細菌検出用試料の測定を行う。具体的には、細菌検出用試料をフローセル６１に流して細い流れを形成し、その流れ（検体）に光源６２からレーザ光を照射する。そして、レーザ光が照射された検体からの前方散乱光、側方散乱光および側方蛍光を、それぞれ、散乱光受光部６７、散乱光受光部６８および蛍光受光部６９により受光する。この散乱光受光部６７、散乱光受光部６８および蛍光受光部６９のそれぞれにおいて、前方散乱光、側方散乱光および側方蛍光は電気信号に変換される。これらの電気信号は、制御部７においてデジタルデータに変換されるとともに、所定の波形処理が施される。このような処理により作製された細菌検出用試料の測定結果（前方散乱光に対応するデータ、側方散乱光に対応するデータ、及び側方蛍光に対応するデータ）は、分析部３に送信される。

次に、ステップＳ３において、分析部３のＣＰＵ３１１により１次解析処理が行われる。すなわち、図６に示すように、ＣＰＵ３１１は、ステップＳ１０において、前方散乱光に対応するデータと、側方蛍光に対応するデータとに基づいて、細菌検出用試料のスキャッタグラムＳ１を作成する。そして、ステップＳ１１において、ＣＰＵ３１１は、スキャッタグラムＳ１のうち、細菌が出現する領域Ａを設定するとともに、ステップＳ１２において、領域Ａ内に含まれるドット数を計数して細菌検出用試料の計数結果Ｂ１を取得する。このドット数（計数結果Ｂ１）は、検体に含まれる細菌数を反映した値となる。そして、ステップＳ１３において、ＣＰＵ３１１は、領域Ａおよび計数結果Ｂ１をハードディスク３１４に記憶する。

そして、ステップＳ４において、ＣＰＵ３１１は、１次解析結果を分析部３（パーソナルコンピュータ）の表示部３２に表示する。具体的には、図７に示すように、ステップＳ１０において作成した細菌検出用試料のスキャッタグラムＳ１と、細菌検出用試料の計数結果Ｂ１とを含む１次解析結果画面Ｃが表示部３２に表示される。１次解析結果画面ＣのスキャッタグラムＳ１には、細菌の分布の状況を示すドットの集合Ｄ１と、集合Ｄ１を囲う領域Ａとが示される。また、分析の結果、細菌が検出された場合には、その旨および検出された細菌の種類を判定するための測定の実行を促すメッセージＥが１次解析結果画面Ｃに合わせて表示される。

検査者は、この１次解析結果画面Ｃを参照して、検出された細菌の種類を判定するための測定を行うか否かを決定する。２次解析を行う場合には、検査者は、分析部３の表示部３２に表示された画面上の図示しない測定指示ボタンを押すことによって、細菌分析装置１に対して測定の指示を行う。また、図５のステップＳ５において、ＣＰＵ３１１は、測定指示ボタンが押されたか否かを判断する。測定指示ボタンが押されない場合には、細菌分析装置１による分析処理は終了する。測定指示ボタンが押された場合には、ＣＰＵ３１１は、測定部２に測定の開始を指示する。

測定部２の制御部７は、測定の指示があった場合、ステップＳ６において、試料調製部５を制御することにより、第１細菌判別用試料の調製を行う。すなわち、検体（尿）、希釈液、染色液に加えて酵素（リゾチーム）を混合することにより、第１細菌判別用試料を調製する。この後、調製した第１細菌判別用試料を光学検出部６に移送する。

次に、ステップＳ７において、制御部７は、ステップＳ２と同様にして第１細菌判別用試料の測定を行う。第１細菌判別用試料の測定結果（前方散乱光に対応するデータ、側方散乱光に対応するデータ、及び側方蛍光に対応するデータ）は、分析部３に送信される。

次に、ステップＳ８において、ＣＰＵ３１１は、第１細菌判別用試料の測定データの解析（２次解析処理）を行う。すなわち、図８に示すように、ステップＳ１４において、前方散乱光に対応するデータと、側方蛍光に対応するデータとに基づいて、第１細菌判別用試料のスキャッタグラムＳ２を作成する。そして、ステップＳ１５において、ステップＳ１１（図６参照）において設定した領域Ａを読み出すとともに、スキャッタグラムＳ２に設定する。そして、ステップＳ１６において、スキャッタグラムＳ２のうち、領域Ａ内に含まれるドット数を計数して第１細菌判別用試料の計数結果Ｂ２を取得する。このドット数（計数結果Ｂ２）は、第１細菌判別用試料に含まれる細菌数を反映した値となる。そして、ステップＳ１７において、計数結果Ｂ２をハードディスク３１４に記憶する。

この後、ステップＳ１８において、総合分析が行われる。

総合分析では、まず、図１０に示すように、ステップＳ１９において、ハードディスク３１４に記憶されている細菌検出用試料の計数結果Ｂ１および第１細菌判別用試料の計数結果Ｂ２を読み出す。次に、ステップＳ２０において、予め設定された所定の閾値をハードディスク３１４から読み出す。

そして、ステップＳ２１において、ＣＰＵ３１１は、計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１≦閾値であるか否かを判断する。なお、計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１は、検体に含まれる細菌に対するリゾチームの影響度合いを示す値である。この影響度合いを閾値と比較することにより、リゾチームの影響度合いを定量的に判断する。計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１≦閾値である場合には、ステップＳ２２において、ＣＰＵ３１１は、検体に含まれる細菌は、ブドウ球菌属以外のグラム陽性球菌であると判定する。また、計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１＞閾値である場合には、ステップＳ２３において、ＣＰＵ３１１は、検体に含まれる細菌は、ブドウ球菌属のグラム陽性球菌またはグラム陰性桿菌であると判定する。

そして、ステップＳ２４において、判定結果を記憶した後、ステップＳ９（図５参照）において、総合分析結果を示す総合分析結果画面Ｆを表示部３２に表示する。図９に示すように、総合分析結果画面Ｆでは、ステップＳ４において１次解析結果画面Ｃに表示したスキャッタグラムＳ１と、ステップＳ１４において作成したスキャッタグラムＳ２と、上記ステップＳ１８（ステップＳ１９〜Ｓ２４）における総合分析の判定結果に基づいた情報とが表示される。スキャッタグラムＳ２には、ドットの集合Ｄ２と、スキャッタグラムＳ１と同様の領域Ａとが示される。図９では、細菌検出用試料の計数結果Ｂ１に比べて第１細菌判別用試料の計数結果Ｂ２が著しく減少しており、第１細菌判別用試料の計数結果Ｂ２／細菌検出用試料の計数結果Ｂ１≦閾値である例を示している。この場合には、ステップＳ２２（図１０参照）において、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属以外のグラム陽性球菌であると判定されており、総合分析結果画面Ｆでは、検出された細菌がグラム陽性球菌であることを示唆するメッセージＧおよび検出された細菌がブドウ球菌ではないことを示唆するメッセージＨが表示される。このメッセージＧおよびＨなどを参考にして、検体に含まれる細菌の種類の判別をすることが可能である。

次に、リゾチームを用いた細菌の種類の判定原理について説明する。

図１１には、下記に示す４種類の細菌のうち、いずれか1種類の菌が含まれる検体について、第１実施形態による細菌分析装置１の分析のように、検体、希釈液および染色液から調製された細菌検出用試料と、検体、希釈液、染色液およびリゾチームから調製された第１細菌判別用試料について、フローサイトメトリーによる測定を行って作成したスキャッタグラムを示している。４種類の細菌は、それぞれ、表皮ブドウ球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、大便連鎖球菌（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。これら４種類の細菌は、尿路感染症の原因菌として知られている。特に単純性尿路感染症では、これら４種類の細菌のうちいずれか１種類の菌によって感染症が引き起こされていることが多い。なお、表皮ブドウ球菌および黄色ブドウ球菌は、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ属）のグラム陽性細菌である。また、大便連鎖球菌は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属（Ｓｔａｐｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ属以外）のグラム陽性細菌である。また、大腸菌は、グラム陰性桿菌である。

図１１に示すように、ブドウ球菌属および大腸菌については、細菌検出用試料の測定結果と第１細菌判別用試料の測定結果との間でドット数に差異は認められない。その一方、大便連鎖球菌については、細菌検出用試料の測定結果に比べて第１細菌判別用試料の測定結果のドット数が減少している。すなわち、リゾチームは、ブドウ球菌属および大腸菌には反応せずに大便連鎖球菌にのみ反応して溶菌させることがわかる。

これにより、検体を２つに分けて、一方の検体でリゾチームを加えない細菌検出用試料を調製し、他方の検体でリゾチームを加えた第１細菌判別用試料を調製し、２つの測定試料の測定結果に基づいて、検体に含まれている細菌が大便連鎖球菌であるか否かを判定することが可能である。

なお、第１細菌判別用試料に含まれるリゾチームの濃度としては、大便連鎖球菌といったＳｔａｐｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ属以外のグラム陽性細菌において、細菌検出用試料の測定結果と第１細菌判別用試料の測定結果との間でドット数に差異が認められる濃度を適宜設定すればよい。好ましくは、第１細菌判別用試料中のリゾチームの濃度が、２．５ｍｇ／ｍＬ以上２０ｍｇ／ｍＬ以下である。リゾチームの濃度が２．５ｍｇ／ｍＬ以上であれば、細菌検出用試料の測定結果と第１細菌判別用試料の測定結果との間でドット数の差を容易に認めることができる。リゾチームの濃度が２０ｍｇ／ｍＬ以下であれば、リゾチームを第１細菌判別用試料中へ容易に溶解させることができるので、第１細菌判別用試料を容易に調製することができる。

また、この第１実施形態のリゾチームを用いた構成では、大便連鎖球菌ではない細菌の判定（ブドウ球菌属とグラム陰性桿菌との間の細菌分析装置１による判定）が困難であるが、ブドウ球菌属のスキャッタグラムのパターンとグラム陰性桿菌のスキャッタグラムのパターンとが相違することを利用して、ブドウ球菌属とグラム陰性桿菌とを判別することが可能である。すなわち、ブドウ球菌属のパターンはドットの分布状態の傾きが大きく（パターンが立ち上がっている）、グラム陰性菌のパターンはドットの分布状態の傾きが小さい（パターンが寝ている）ことなどからブドウ球菌属とグラム陰性桿菌とを判別することが可能である。このように、第１実施形態の細菌分析装置１による分析結果およびスキャッタグラムのパターンの形状に基づいて、ブドウ球菌属と、大便連鎖球菌と、グラム陰性桿菌とを判別することが可能である。

第１実施形態では、上記のように、検体から調製される細菌検出用試料の検出結果および検体とリゾチームとから調製される第１細菌判別用試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する分析部３を設けることによって、腐食性の強い強アルカリ溶液を細菌分析装置１に導入しなくても、腐食性の弱い酵素（リゾチーム）を用いて検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力することができる。

また、第１実施形態では、上記のように、分析部３は、細菌検出用試料の検出結果と第１細菌判別用試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌に対するリゾチームの影響度合いを取得し、影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力している。このように構成することによって、大便連鎖球菌（ブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌）と反応することがわかっているリゾチームを用いることにより、細菌検出用試料の検出結果と第１細菌判別用試料の検出結果に基づいてリゾチームの影響が認められた検体には、その細菌（大便連鎖球菌）が含まれていると推定することができる。この推定した細菌の種類を、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報として出力することができる。

また、第１実施形態では、上記のように、細菌検出用試料の細菌数を反映した値と第１細菌判別用試料の細菌数を反映した値に基づいて、検体に含まれる細菌に対するリゾチームの影響度合いを取得し、影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力している。このように構成することによって、細菌検出用試料の細菌数を反映した値と第１細菌判別用試料の細菌数を反映した値とに基づいて、検体に含まれる細菌に対するリゾチームの影響度合いを容易に取得することができる。

また、第１実施形態では、上記のように、分析部３は、細菌検出用試料の検出結果および第１細菌判別用試料の検出結果のそれぞれに基づいて、細菌検出用試料に含まれる細菌に関するスキャッタグラムＳ１および第１細菌判別用試料に含まれる細菌に関するスキャッタグラムＳ２を作成するとともに、スキャッタグラムＳ１およびスキャッタグラムＳ２に基づいて、細菌検出用試料および第１細菌判別用試料に含まれる細菌数を反映した値（計数結果Ｂ１およびＢ２）を取得している。このように構成することによって、スキャッタグラムＳ１およびスキャッタグラムＳ２に基づいて、容易に、細菌検出用試料および第１細菌判別用試料に含まれる細菌数を反映した値を取得することができる。

また、第１実施形態では、上記のように、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報として、検体に含まれる可能性のある細菌の名称を表示部３２に表示することによって、検査者は、検体に含まれる可能性のある細菌の名称を知ることができるので、その検体にどの細菌が含まれているかの判断を容易に行うことができる。

また、第１実施形態では、上記のように、リゾチームはブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌に対して反応するので、リゾチームを用いることにより、検査者は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、ブドウ球菌属のグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌であるかを容易に判断することができる。

また、第１実施形態では、上記のように、尿を細菌分析装置１によって分析することにより、尿中に含まれる細菌の種類を容易に判別することができる。

また、第１実施形態では、検体にブドウ球菌が含まれているか否かを判断することができる。ブドウ球菌は、特定の薬剤に対して薬剤耐性になる可能性がある。たとえば、メチシリンを投与した場合には、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌に変異することがある。したがって、検体にブドウ球菌が含まれているか否かの判断は臨床検査において重要である。第１実施形態では、細菌分析装置１の総合分析結果画面ＦのメッセージＧおよびＨなどを参考にして、細菌検出用試料のスキャッタグラムＳ１のパターン（ドットの集合Ｄ１）と第１細菌判別用試料のスキャッタグラムＳ２のパターン（ドットの集合Ｄ２）とに基づいて、検体にブドウ球菌が含まれているか否かを判断することができる。

なお、上記第１実施形態では、細菌検出用試料のスキャッタグラムＳ１と第１細菌判別用試料のスキャッタグラムＳ２との領域Ａ内のドットをそれぞれ計数した例を示したが、本発明はこれに限らず、図１２に示す第１実施形態の変形例の１次解析結果画面Ｉのように、領域Ａを指定せずに、スキャッタグラムのドットを全て計数してもよい。

また、上記第１実施形態では、総合分析結果画面Ｆにおいて、細菌検出用試料のスキャッタグラムＳ１と第１細菌判別用試料のスキャッタグラムＳ２とを並べて表示した例を示したが、本発明はこれに限らず、図１３に示す第１実施形態の変形例の総合分析結果画面Ｊのように、細菌検出用試料のスキャッタグラムＳ１のパターン（ドットの集合Ｄ１）と第１細菌判別用試料のスキャッタグラムＳ２のパターン（ドットの集合Ｄ２）とを重ねて１つのスキャッタグラムＫに表示してもよい。これにより、細菌測定用試料のスキャッタグラムＳ１に対する第１細菌判別用試料のスキャッタグラムＳ２のパターンの変化を検査者が容易に認識することができる。

また、上記第１実施形態では、ドットの計数結果の比と所定の閾値とを比較して、細菌の種類の判定を行った例を示したが、本発明はこれに限らず、細菌測定試料のスキャッタグラムのパターン（ドットの集合Ｄ１）と第１細菌判別用試料のスキャッタグラムのパターン（ドットの集合Ｄ２）との重なる領域の割合と、重なる割合について予め設定された所定の閾値とを比較して判定を行ってもよい。このスキャッタグラムのパターンの重なる割合は、検体に含まれる細菌に対するリゾチームの影響度合いを示す値である。このようにパターンの重なり具合でリゾチームの影響度合いを定量する場合には、細菌の種類の判定にスキャッタグラムのドットの計数を行う必要がない。

また、上記第１実施形態では、総合分析結果画面のメッセージの一例を示したが、他のメッセージでもよい。たとえば、ブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌（大便連鎖球菌）であると判定された場合には、「検体にブドウ球菌が含まれていません。検体には連鎖球菌が含まれている可能性があります。」などの細菌の名称を表示するメッセージでもよいし、「検体に含まれるブドウ球菌の数：０」などの細菌数を表示するメッセージでもよい。また、ブドウ球菌属のグラム陽性球菌またはグラム陰性桿菌であると判定された場合には、「検体にはグラム陰性細菌が含まれている可能性があります。」などの細菌の種類を表示するメッセージでもよいし、「検体にブドウ球菌か大腸菌が含まれている可能性があります。」などの細菌の名称を表示するメッセージでもよいし、「検体に含まれるブドウ球菌の数：測定不能」などの細菌数を表示するメッセージでもよい。

（第２実施形態）
次に、図１４を参照して、本発明の第２実施形態による細菌分析装置１について説明する。この第２実施形態では、リゾチームを用いた上記第１実施形態と異なり、リゾスタフィン（Ｌｙｓｏｓｔａｐｈｉｎ）を用いる例について説明する。なお、第２実施形態による細菌分析装置１の構造は、用いる酵素および分析部３の解析処理以外は上記第１実施形態と同様であるので、細菌分析装置１の構造についての説明を省略する。また、分析フローおよび解析フローについても、総合分析処理以外の処理は上記第１実施形態と同様であるので、説明を省略する。

第２実施形態の総合分析処理では、図１４に示したステップＳ１１９およびＳ１２０において、図１０のステップＳ１９およびＳ２０と同様の処理を行う。そして、ステップＳ１２１において、ＣＰＵ３１１は、計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１≦閾値であるか否かを判断する。計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１≦閾値である場合には、ステップＳ１２２において、ＣＰＵ３１１は、検体に含まれる細菌は、ブドウ球菌属のグラム陽性球菌であると判定する。また、計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１＞閾値である場合には、ステップＳ１２３において、ＣＰＵ３１１は、検体に含まれる細菌は、ブドウ球菌属のグラム陽性球菌以外の細菌であると判定する。そして、ステップＳ１２４において、判定結果を記憶した後、総合分析結果を表示部３２の総合分析結果画面に表示する。

なお、上記第２実施形態において、総合分析結果画面では、上記第１実施形態と同様、細菌検出用試料の検出結果のスキャッタグラムと、第１細菌判別用試料の検出結果のスキャッタグラムと、Ｓ１２２およびＳ１２３における総合分析の判定結果に基づいた情報とが表示される。具体的には、検体に含まれている細菌がブドウ球菌属のグラム陽性細菌であると判定された場合には、例えば「検体にブドウ球菌が含まれています」または「検体に含まれるブドウ球菌の数：○○○」などのメッセージが表示される。また、検体に含まれている細菌がブドウ球菌属のグラム陽性球菌以外の細菌であると判定された場合には、例えば「検体にブドウ球菌は含まれていません。」または「検体に含まれるブドウ球菌の数：０」などのメッセージが表示される。

次に、リゾスタフィンを用いた細菌の種類の判定原理について説明する。

図１５に示すように、図１１に示すリゾチームの場合と同様にして、検体、希釈液および染色液から調製された測定試料と、検体、希釈液、染色液およびリゾスタフィンから調製された測定試料について、フローサイトメトリーによりスキャッタグラムを作成した。

図１５に示すように、大便連鎖球菌および大腸菌については、細菌検出用試料の測定結果と第１細菌判別用試料の測定結果との間でドット数に差異は認められない。その一方、ブドウ球菌属（表皮ブドウ球菌および黄色ブドウ球菌）については、細菌検出用試料の測定結果に比べて第１細菌判別用試料の測定結果のドット数が減少している。すなわち、リゾスタフィンは大便連鎖球菌および大腸菌には反応せずにブドウ球菌属にのみ反応することがわかる。

これにより、検体を２つに分けて、一方の検体でリゾスタフィンを加えずに測定試料を調製し、他方の検体でリゾスタフィンを加えて測定試料を調製し、２つの測定試料の測定結果に基づいて、検体に含まれている細菌がブドウ球菌属であるか否かを判定することが可能である。

なお、第１細菌判別用試料に含まれるリゾスタフィンの濃度としては、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌などＳｔａｐｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ属のグラム陽性球菌において、上記細菌検出用試料の測定結果と上記第１細菌判別用試料の測定結果との間でドット数に差異が認められる濃度を適宜設定すればよい。好ましくは、第１細菌判別用試料中のリゾスタフィンの濃度が、０．５μｇ／ｍＬ以上１００μｇ／ｍＬ以下である。リゾスタフィンが上記の濃度範囲であれば、細菌検出用試料の測定結果と第１細菌判別用試料の測定結果との間でドット数の差を容易に認めることができる。さらに好ましくは第１細菌判別用試料中のリゾスタフィンの濃度が０．５μｇ／ｍＬ以上２．５μｇ／ｍＬ以下のときである。このとき、細菌検出用試料の測定結果と第１細菌判別用試料の測定結果との間でドット数の差をより容易に認めることができるので、検体に含まれる細菌の種類をより容易に判断することができる。

第２実施形態では、上記のように、ブドウ球菌属細菌に特異的な細胞壁溶解酵素であるリゾスタフィンを用いて細菌の反応の有無を判別することによって、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属であることを容易に判定することができる。

また、第２実施形態では、上記のように、リゾスタフィンはブドウ球菌属のグラム陽性細菌に対して反応するので、リゾスタフィンを用いることにより、検査者は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属のグラム陽性細菌であるか、ブドウ球菌属以外の細菌であるかを容易に判断することができる。

第２実施形態のその他の効果は、上記第１実施形態と同様である。

（第３実施形態）
次に、図１６〜図１８を参照して、本発明の第３実施形態による細菌分析装置１について説明する。この第３実施形態では、上記第１および第２実施形態と異なり、リゾチームおよびリゾスタフィンの２つの酵素を用いて細菌の分析を行う例について説明する。なお、第３実施形態による細菌分析装置１の構造は、用いる酵素および分析部３の解析処理以外は上記第１実施形態と同様であるので、細菌分析装置１の構造についての説明を省略する。

第３実施形態の分析動作としては、まず、図１６のステップＳ２０１〜Ｓ２０４において、ＣＰＵ３１１は、図５のステップＳ１〜Ｓ４と同様の処理を行う。そして、検査者は、上記第１実施形態と同様に、１次解析結果画面を参照して、２次解析を行うか否かを決定する。２次解析を行う場合には、検査者は、分析部３の表示部３２に表示された画面上の図示しない測定指示ボタンを押すことによって、細菌分析装置１に対して２次解析の指示を行う。また、ステップＳ２０５において、ＣＰＵ３１１は、測定指示ボタンが押されたか否かを判断する。測定指示ボタンが押されない場合には、細菌分析装置１による分析処理は終了する。測定指示ボタンが押された場合には、ＣＰＵ３１１は、測定部２に２次解析の開始を指示する。

測定部２の制御部７は、２次解析の指示があった場合、ステップＳ２０６およびＳ２０７において、試料調製部５を制御することにより、第１細菌判別用試料および第２細菌判別用試料の調製を行う。すなわち、検体（尿）、希釈液、染色液に加えて酵素（リゾチーム）を混合することにより、第１細菌判別用試料を調製するとともに、検体（尿）、希釈液、染色液に加えて酵素（リゾスタフィン）を混合することにより、第２細菌判別用試料を調製する。

次に、ステップＳ２０８において、第１細菌判別用試料および第２細菌判別用試料のそれぞれの検出（測定）が行われる。測定結果（前方散乱光に対応するデータ、側方散乱光に対応するデータ、及び側方蛍光に対応するデータ）は、分析部３に送信される。

次に、ステップＳ２０９において、分析部３により２次解析処理が行われる。すなわち、図１７のステップＳ２１１において、第１細菌判別用試料の前方散乱光に対応するデータと、側方蛍光に対応するデータとに基づいて、第１細菌判別用試料の検出結果のスキャッタグラムを作成する。そして、ステップＳ２１２において、１次解析のスキャッタグラムで設定した領域（図７の領域Ａ参照）を読み出すとともに、第１細菌判別用試料のスキャッタグラムに設定する。そして、ステップＳ２１３において、第１細菌判別用試料のスキャッタグラムのうち、領域内に含まれるドット数を計数して計数結果Ｂ２を取得する。このドット数（計数結果Ｂ２）は、第１細菌判別用試料に含まれる細菌数を反映した値となる。そして、ステップＳ２１４において、計数結果をハードディスク３１４に記憶する。

また、ステップＳ２１５〜Ｓ２１８において、ステップＳ２１１〜Ｓ２１４と同様にして、第２細菌判別用試料の検出結果のスキャッタグラムの作成、領域内に含まれるドット数の計数およびドットの計数結果Ｂ３の記憶が行われる。

この後、ステップＳ２１９において、総合分析（図１８参照）が行われる。

総合分析では、まず、図１８のステップＳ２２０において、ハードディスク３１４に記憶されている細菌検出用試料の計数結果Ｂ１および第１細菌判別用試料の計数結果Ｂ２を読み出す。次に、ステップＳ２２１において、予め設定された所定の閾値をハードディスク３１４から読み出す。

そして、ステップＳ２２２において、ＣＰＵ３１１は、計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１≦閾値であるか否かを判断する。計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１≦閾値である場合には、ステップＳ２２３において、ＣＰＵ３１１は、検体に含まれる細菌はブドウ球菌属以外のグラム陽性球菌であると判定する。この後、ステップＳ２２９において、判定結果を記憶する。

また、計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１＞閾値である場合には、ステップＳ２２４において、ＣＰＵ３１１は、ハードディスク３１４に記憶されている細菌検出用試料の計数結果Ｂ１および第２細菌判別用試料の計数結果Ｂ３を読み出す。次に、ステップＳ２２５において、予め設定された所定の閾値をハードディスク３１４から読み出す。そして、ステップＳ２２６において、計数結果Ｂ３／計数結果Ｂ１≦閾値であるか否かを判断する。計数結果Ｂ３／計数結果Ｂ１≦閾値である場合には、ステップＳ２２７において、ＣＰＵ３１１は、検体に含まれる細菌はブドウ球菌属のグラム陽性球菌であると判定する。計数結果Ｂ３／計数結果Ｂ１＞閾値である場合には、ステップＳ２２８において、検体に含まれる細菌は、グラム陰性桿菌であると判定する。ここで、既に上記ステップＳ２２２において検体に含まれる細菌が大便連鎖球菌でないこと（検体に含まれる細菌がブドウ球菌属またはグラム陰性桿菌であること）が判別されているので、ステップＳ２２８において計数結果Ｂ３／計数結果Ｂ１＞閾値である場合（リゾスタフィンの影響がない場合）には、検体に含まれる細菌が大便連鎖球菌でもなく、ブドウ球菌属でもないことが推定される。これにより、ステップＳ２２８において計数結果Ｂ３／計数結果Ｂ１＞閾値である場合には、検体に含まれる細菌がグラム陰性桿菌であると判定することが可能である。

そして、ステップＳ２２９において、判定結果を記憶した後、ステップＳ２１０（図１６参照）において、総合分析結果を表示部３２の総合分析結果画面に表示する。総合分析結果画面では、細菌検出用試料の検出結果のスキャッタグラムと、第１細菌判別用試料の検出結果のスキャッタグラムおよび第２細菌判別用試料の検出結果のスキャッタグラムと、上記ステップＳ２２３、Ｓ２２７およびＳ２２８における判定結果に基づいた情報とが表示される。計数結果Ｂ１、Ｂ２およびＢ３も総合分析結果画面に表示される。具体的には、検体に含まれている細菌がブドウ球菌属以外のグラム陽性球菌であると判定された場合には、たとえば、「検体に連鎖球菌が含まれている？」または「検体にブドウ球菌は含まれていません。検体に連鎖球菌が含まれている可能性があります。」または「検体に含まれるブドウ球菌の数：０」などのメッセージが表示される。検体に含まれている細菌がブドウ球菌属のグラム陽性球菌であると判定された場合には、たとえば、「検体にブドウ球菌が含まれている？」または「検体にブドウ球菌が含まれています。」または、「検体に含まれるブドウ球菌の数：○○○」などのメッセージが表示される。検体に含まれている細菌がグラム陰性桿菌であると判定された場合には、たとえば、「検体に大腸菌が含まれている？」または「検体にブドウ球菌は含まれていません。検体に大腸菌が含まれている可能性があります。」または、「検体に含まれるブドウ球菌の数：０」などのメッセージが表示される。

第３実施形態では、上記のように、細菌検出用試料の検出結果、第１細菌判別用試料の検出結果および第２細菌判別用試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力することによって、リゾチームおよびリゾスタフィンを用いて、検体に含まれる細菌の種類（ブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、グラム陰性細菌であるか）をより正確に推定することができる。

なお、今回開示された実施形態は、すべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は、上記した実施形態の説明ではなく特許請求の範囲によって示され、さらに特許請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれる。

たとえば、上記第１〜第３実施形態では、リゾチームまたはリゾスタフィンを用いて細菌の種類を判定した例を示したが、本発明はこれに限らず、特定の細菌に反応する酵素（細胞膜消化酵素）があれば、その酵素を用いて判定を行ってもよい。このような酵素を用いることにより、上記第１〜第３実施形態で説明した細菌の種類以外の細菌についても判定することが可能である。

また、上記第１〜第３実施形態では、検体が尿である例について説明したが、本発明はこれに限らず、フローサイトメトリーで計測可能な検体であれば、血液などの他の検体でもよい。

また、上記第１〜第３実施形態では、分析部３において細菌の種類を分析する例について説明したが、本発明はこれに限らず、測定部２の制御部７において分析を行ってもよい。

また、上記第１〜第３実施形態では、細菌分析装置１で細菌検出用試料を調製し測定を行う例について説明したが、本発明はこれに限らず、別の装置によって細菌検出用試料を調製し測定を行い、得られた測定結果を細菌分析装置１の分析部３に送信し、この測定結果と細菌判別用試料の測定結果とを用いて総合分析を行っても良い。このとき、測定結果は、電気通信回線（有線、無線を問わない）によって分析部３と通信可能に接続された外部の機器から上記電気通信回線を通じて提供することができる。

また、上記第１〜第３実施形態では、測定試料調製部５１が１つである例について説明したが、本発明はこれに限らず、測定試料調製部を２つ以上備える構成であっても良い。例えば、測定試料調製部を２つ備え、細菌検出用試料と第１細菌判別用試料をそれぞれ別々の測定試料調製部で調製するように構成してもよい。

また、上記第１〜第３実施形態では、吸引管８が１つである例について説明したが、本発明はこれに限らず、吸引管を２つ以上備える構成であっても良い。例えば、測定試料調製部と吸引管とを２つずつ備え、細菌検出用試料と第１細菌判別用試料とをそれぞれ別々の吸引管を介して別々の測定試料調製部に分注するように構成してもよい。

また、上記第１〜第３実施形態では、検体に含まれる細菌に対する酵素の影響度合いを、「計数結果Ｂ２／計数結果Ｂ１」で示した例について説明したが、本発明はこれに限らず、影響度合いを、例えば「計数結果Ｂ２−計数結果Ｂ１」で示してもよいし、「計数結果Ｂ２／（計数結果Ｂ１＋計数結果Ｂ２）」で示してもよい。

また、上記第１〜第３実施形態では、総合分析結果を表示部３２に出力する例について説明したが、本発明はこれに限らず、総合分析結果を紙などに印字してもよいし、他の装置などに送信してもよい。

また、上記第１〜第３実施形態では、酵素を用いない１次解析を行った後、酵素を用いる２次解析を検査者が指示した場合に２次解析を行う例について説明したが、本発明はこれに限らず、検査者の指示を待たずに１次解析と２次解析とを自動的に行うように構成してもよい。

また、上記第１〜第３実施形態では、細菌検出用試料を調製し測定を行い、測定結果によって２次解析が必要であるか否かを決定し、２次解析が必要である場合には第１細菌判別用試料を調製し測定を行う例について説明したが、本発明はこれに限らず、２次解析が必要であるか否かに関係なく、細菌検出用試料と第１細菌判別用試料の両方を調製し測定を行うように構成してもよい。

［実施例］
実施例１：リゾチームの至適濃度の検討
測定試料中のリゾチームの至適濃度を調べるため、リゾチーム濃度を変化させた測定試料における細菌数を、全自動尿中有形成分分析装置ＵＦ−１０００ｉ（商品名）（シスメックス社製）を用いて測定した。
（１）測定試料の調製
まず、大便連鎖球菌を細菌培養液に加え、一晩培養した。細菌培養液は、一般細菌用液体培地であるハートインヒュージョン培地（日水製薬製）を、取扱い説明書に従い、加温融解した後に高圧蒸気滅菌して使用した。
次に、一晩培養した細菌培養液をハートインヒュージョン培地中に１／５００希釈となるように添加し攪拌した。この培養液を３５℃、４時間培養したものを大便連鎖球菌試料とした。
（２）細菌数の測定
上記大便連鎖球菌試料に、終濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるようにリゾチーム（和光純薬製）を添加し、ヒートブロックで３７℃、５分間反応させた。
反応後の試料に含まれる細菌数を、全自動尿中有形成分分析装置ＵＦ−１０００ｉ（商品名）（シスメックス社製）を使用した。希釈液にはＵＦＩＩパック−ＢＡＣ（商品名）（シスメックス社製）を、染色液にはＵＦＩＩサーチ−ＢＡＣ（商品名）（シスメックス社製）をそれぞれ用いて、ＵＦ−１０００ｉの取扱説明書に従って試料中に含まれる細菌数を測定した。
なお、終濃度が、０ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、および、５ｍｇ／ｍＬとなるようにリゾチームを添加した試料についても、それぞれ上記と同様の方法で細菌数を測定した。
（結果）
リゾチームの濃度が０ｍｇ／ｍLの試料に含まれる細菌数を１００とした時の、各濃度における細菌数を表すグラフを図１９に示す。
図１９のグラフより、リゾチームの終濃度が２．５ｍｇ／ｍＬ以上のとき、リゾチームを添加していない試料と比較して、試料に含まれる細菌数が減少していることが分かった。また、リゾチームの終濃度が高くなるにつれて、試料に含まれる細菌数が減少していることが分かった。すなわち、リゾチームと細菌との反応は、リゾチームの濃度依存的な反応であることが分かった。このことから、測定試料中に含まれるリゾチーム濃度が高まるほど、細菌の種類をより容易に判断できることが示唆された。

実施例２：リゾスタフィンの至適濃度の検討
測定試料中のリゾスタフィンの至適濃度を調べるため、リゾスタフィン濃度を変化させた測定試料における細菌数を、全自動尿中有形成分分析装置ＵＦ−１０００ｉ（商品名）（シスメックス社製）を用いて測定した。
（１）測定試料の調製
まず、黄色ブドウ球菌を細菌培養液に加え、一晩培養した。細菌培養液は、一般細菌用液体培地であるハートインヒュージョン培地（日水製薬製）を、取扱い説明書に従い、加温融解した後に高圧蒸気滅菌して使用した。
次に、一晩培養した細菌培養液をハートインヒュージョン培地中に１／１０００希釈となるように添加し攪拌した。この培養液を３５℃、４時間培養したものを黄色ブドウ球菌試料とした。
また、上記の黄色ブドウ球菌の代わりに、Ｓ．Ｓｃｉｕｒｉを用いて、上記と同様の方法にてＳ．Ｓｃｉｕｒｉ試料を作製した。
（２）細菌数の測定
上記黄色ブドウ球菌試料に、終濃度が１．０μｇ／ｍＬとなるようにリゾスタフィン（和光純薬製）を添加し、ヒートブロックで３７℃、５分間反応させた。
反応後の試料に含まれる細菌数を、全自動尿中有形成分分析装置ＵＦ−１０００i（商品名）（シスメックス社製）を使用して測定した。希釈液にはＵＦＩＩパック−ＢＡＣ（商品名）（シスメックス社製）を、染色液にはＵＦＩＩサーチ−ＢＡＣ（商品名）（シスメックス社製）をそれぞれ用いて、ＵＦ−１０００ｉの取扱説明書に従って試料中に含まれる細菌数を測定した。
また、終濃度が、０μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、５．０μｇ／ｍＬ、１０．０μｇ／ｍＬ、および、１００．０μｇ／ｍＬになるようにリゾスタフィンを添加した試料についても、それぞれ上記と同様の方法で細菌数を測定した。
また、Ｓ．Ｓｃｉｕｒｉ試料についても上記と同様の方法で測定した。
（結果）
リゾスタフィンの濃度が０μｇ／ｍＬの試料に含まれる細菌数を１００とした時の、各濃度における細菌数を示すグラフを図２０（黄色ブドウ球菌）および図２１（Ｓ．Ｓｃｉｕｒｉ）に示す。
図２０および図２１のグラフより、黄色ブドウ球菌試料及びＳ．Ｓｃｉｕｒｉ試料のいずれにおいても、リゾスタフィンの終濃度が０．５μｇ／ｍＬ以上１００μｇ／ｍＬ以下の試料では、リゾスタフィンを添加しなかった時の細菌数と比べて、細菌数は減少していることが分かった。さらに、リゾスタフィンの終濃度が０．５μｇ／ｍＬ以上２．５μｇ／ｍＬ以下のとき、リゾスタフィンと細菌との反応性が最も高く、細菌数はほぼ０となることが分かった。すなわち、リゾスタフィンと黄色ブドウ球菌試料及びＳ．Ｓｃｉｕｒｉ試料との反応は、リゾチームの反応のように濃度依存的な反応ではなく、至適濃度が存在することが分かった。
このことから、リゾスタフィンの終濃度が０．５μｇ／ｍＬ以上１００μｇ／ｍＬ以下のとき、測定試料中に含まれる細菌の種類を容易に判断でき、さらにリゾスタフィンの終濃度が０．５μｇ／ｍＬ以上２．５μｇ／ｍＬ以下のとき、細菌の種類をより容易に判断できることが示唆された。

１ 細菌分析装置
３ 分析部（情報処理部）
５ 試料調製部
６ 光学検出部（検出部）
３２ 表示部
Ｓ１ スキャッタグラム（第１スキャッタグラム）
Ｓ２ スキャッタグラム（第２スキャッタグラム）

Claims (23)

1. 少なくとも検体と第１酵素とから調製される第１測定試料を調製する試料調製部と、
   前記第１測定試料に含まれる細菌を検出する検出部と、
   前記第１測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する情報処理部と、を備える細菌分析装置。
2. 前記試料調製部は、少なくとも検体から調製される第２測定試料をさらに調製し、
   前記検出部は、前記第１測定試料に含まれる細菌および前記第２測定試料に含まれる細菌をそれぞれ検出し、
   前記情報処理部は、前記第１測定試料の検出結果および前記第２測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する、請求項１に記載の細菌分析装置。
3. 前記情報処理部は、前記第１測定試料の検出結果と前記第２測定試料の検出結果とに基づいて、検体に含まれる細菌に対する前記第１酵素の影響度合いを取得し、前記影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する、請求項２に記載の細菌分析装置。
4. 前記情報処理部は、前記第１測定試料の検出結果および前記第２測定試料の検出結果のそれぞれに基づいて、前記第１測定試料に含まれる細菌数を反映した値および前記第２測定試料に含まれる細菌数を反映した値を取得するとともに、前記第１測定試料の細菌数を反映した値と前記第２測定試料の細菌数を反映した値とに基づいて、検体に含まれる細菌に対する前記第１酵素の影響度合いを取得し、前記影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する、請求項３に記載の細菌分析装置。
5. 前記情報処理部は、前記第１測定試料の検出結果および前記第２測定試料の検出結果のそれぞれに基づいて、前記第１測定試料に含まれる細菌に関する第１スキャッタグラムおよび前記第２測定試料に含まれる細菌に関する第２スキャッタグラムを作成するとともに、前記第１スキャッタグラムおよび前記第２スキャッタグラムに基づいて、前記第１測定試料に含まれる細菌数を反映した値および前記第２測定試料に含まれる細菌数を反映した値を取得する、請求項４に記載の細菌分析装置。
6. 前記情報処理部は、前記第１測定試料の検出結果および前記第２測定試料の検出結果のそれぞれに基づいて、前記第１測定試料に含まれる細菌に関する第１スキャッタグラムおよび前記第２測定試料に含まれる細菌に関する第２スキャッタグラムを作成するとともに、前記第１スキャッタグラムのパターンと前記第２スキャッタグラムとのパターンとに基づいて、検体に含まれる細菌に対する前記第１酵素の影響度合いを取得し、前記影響度合いに基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する、請求項３に記載の細菌分析装置。
7. 前記検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報は、少なくとも、検体に含まれる可能性のある細菌の名称を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の細菌分析装置。
8. 表示部をさらに備え、
   前記情報処理部は、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を前記表示部に表示するように制御する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の細菌分析装置。
9. 前記第１酵素は、細胞壁溶解酵素である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の細菌分析装置。
10. 前記検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報は、検体に含まれる細菌がグラム陽性細菌であるか否かの情報を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の細菌分析装置。
11. 前記検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、ブドウ球菌属のグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌であるかの情報を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細菌分析装置。
12. 前記第１酵素は、リゾチームである、請求項１１に記載の細菌分析装置。
13. 前記検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報は、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外の細菌であるかの情報を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細菌分析装置。
14. 前記第１酵素は、リゾスタフィンである、請求項１３に記載の細菌分析装置。
15. 前記試料調製部は、少なくとも検体と第２酵素とから調製される第３測定試料をさらに調製し、
    前記検出部は、前記第１測定試料に含まれる細菌、前記第２測定試料に含まれる細菌および前記第３測定試料に含まれる細菌をそれぞれ検出し、
    前記情報処理部は、前記第１測定試料の検出結果、前記第２測定試料の検出結果および前記第３測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する、請求項１に記載の細菌分析装置。
16. 前記情報処理部は、前記第１測定試料の検出結果、前記第２測定試料の検出結果および前記第３測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌がブドウ球菌属の細菌であるか、ブドウ球菌属以外のグラム陽性細菌であるか、グラム陰性細菌であるかを判定し、判定結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する、請求項１５に記載の細菌分析装置。
17. 前記第１酵素は、リゾチームであり、
    前記第２酵素は、リゾスタフィンである、請求項１５または１６に記載の細菌分析装置。
18. 測定試料に含まれるリゾチームの濃度が、２．５ｍｇ／ｍＬ以上２０ｍｇ／ｍＬ以下である、請求項１２または１７に記載の細菌分析装置。
19. 測定試料に含まれるリゾスタフィンの濃度が、０．５μｇ／ｍＬ以上１００μｇ／ｍＬ以下である、請求項１４または１７に記載の細菌分析装置。
20. 検体は、尿である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の細菌分析装置。
21. 少なくとも検体と第１酵素とから調製される第１測定試料を調製する工程と、
    前記第１測定試料に含まれる細菌を検出する工程と、
    前記第１測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程とを備える、細菌分析方法。
22. 少なくとも検体から調製される第２測定試料を調製する工程と、
    前記第２測定試料に含まれる細菌を検出する工程とをさらに備え、
    検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程は、前記第１測定試料の検出結果および前記第２測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程と含む、請求項２１に記載の細菌分析方法。
23. 少なくとも検体と第２酵素とから調製される第３測定試料を調製する工程と、 前記第３測定試料に含まれる細菌を検出する工程とをさらに備え、
    前記検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程は、前記第１測定試料の検出結果、前記第２測定試料の検出結果および前記第３測定試料の検出結果に基づいて、検体に含まれる細菌の種類の判別を支援する情報を出力する工程を含む、請求項２２に記載の細菌分析方法。

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