JP2010500974A

JP2010500974A - 新規のユーカリ抽出物、その調製方法およびその治療利用法

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Publication number: JP2010500974A
Application number: JP2009522297A
Authority: JP
Inventors: フィオリニ−ピュイバレ，クリステル; ファーブル，ベルナール; ショヴァン，セシル; ジュリア，フィリップ
Original assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Current assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Priority date: 2006-08-01
Filing date: 2007-07-27
Publication date: 2010-01-14
Also published as: AU2007283529A1; TN2009000018A1; NZ574429A; MA30592B1; KR20090034401A; CN101511378A; WO2008017752A2; EP2049133A2; FR2904557A1; UA99598C2; MX2009000673A; IL196788A0; TW200820961A; US20090324754A1; WO2008017752A3; NO20090951L; RU2445112C2; RU2009107166A; BRPI0714863A2; AR062165A1

Abstract

本発明は、神経伝達物質の再取り込みの変調から生じる疾患または病変の治療および／または予防を目的とする、医薬品または栄養補助食品の調製のためのユーカリ抽出物の利用法に関するものであって、当該治療および／または予防が、ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの再取り込みの阻害からなるものである。

Description

本発明は、ドーパミン、セロトニンおよび／またはノルアドレナリンといった神経伝達物質の再取り込みの変調から生じる、疾患または病変の治療および／または予防を目的とする医薬品または栄養補助食品の調製のためのユーカリ抽出物の利用に関するものである。好ましくは、前記抽出物は、

という構造式（Ｉ）の化合物のうちの少なくとも一つまたはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものによって富化されており、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基、

基を形成しており、Ｒ２はイソブチル基、α−イソブチル基またはβ−イソブチル基を表わしている。

本発明は同様に、前記神経伝達物質の再取り込みの変調から生じる疾患または病変の治療および／または予防を目的とする医薬品または栄養補助食品の調製のための上述の構造式（Ｉ）の化合物のうちの少なくとも一つの利用にも関するものである。

ユーカリには数多くの種が存在し（６００種超）、その大半がオーストラリアおよびタスマニアの原産であり、少数がニューギニアおよびマレーシア東部の原産である。ユーカリは、フトモモ科に属し、その花の特徴的な形状にその名の由来がある。実際、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓという語は、花の雄しべを覆う（合着した花弁から形成される）蘚蓋のことを意味する、「よく包まれた」という意味をもっている。該ユーカリは、一般的にその原産国（オーストラリア）では高さ８０〜１００ｍに、また、より穏やかな気候においては３〜２０ｍに達し得る美しい大きな木である。すべらかなその樹皮は、灰白色であり、長い帯の形状で剥がれ落ちる。該ユーカリの一般的な特徴は、二型性の葉である。ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓＬａｂｉｌｌの場合、若葉は、青色で円く囲まれた青緑色の卵状楕円形、抱茎型で無柄であるが、成葉は、（両面同等）灰色がかった緑色の鎌の形状で、垂れ下がり、回旋状の葉柄を有しており、縦向きである。蕾は、蘚蓋で覆われた四角錐状の萼によって形成されており、該萼は、開花の際に脱落し、白い長い糸状と黄色の葯の多くの雄しべが現れる。実は、黒色または褐色がかった種子が入っている直径２〜２．５ｃｍのさっ果である。

植物療法で、欧州薬局方においては主に三種、すなわちＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓＬａｂｉｌｌ、Ｅ．ｐｏｌｙｂｒａｃｔｅａＲ．Ｔ．ＢａｋｅｒおよびＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｓｍｉｔｈｉｉＲ．Ｔ．Ｂａｋｅｒが用いられている。最も成長している小枝の葉（鎌状で有柄）、精油およびそれに由来するオイカリプトールが利用される。

ユーカリの葉は従来、呼吸器系の疾患（気管支炎、のどの炎症、鼻づまり、風邪等）を治療するために経口経路および局所的に利用されるか、または、傷、皮膚の潰瘍などを手当てするために塗布で利用されている。ユーカリ精油およびオイカリプトール（または１，８−シネオール）は、その殺菌、粘液溶解および去痰効果から、呼吸器経路の疾患を治療することを目的とする数多くの調製物に入れられる。精油は、防虫剤としておよび獣医療において利用されている。

ユーカリ精油の公知の薬理学的な特性は、今日では、抗菌性、去痰性および鎮咳性（ＷＩＣＨＴＬＭ．ｅｔＡＮＴＯＮＲ．，１９９９ − Ｐｌａｎｔｅｓｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｑｕｅｓ − １７７−１７９）、抗炎症性および抗喘息性（ＪＵＥＲＧＥＮＳｅｔａｌ．，２００３ − Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ１，８−ｃｉｎｅｏｌ（ｅｕｃａｌｙｐｔｏｌ）ｉｎｂｒｏｎｃｈｉａｌａｓｔｈｍａ：ａｄｏｕｂｌｅ−ｂｉｎｄｐｌａｃｅｂｏｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｔｒｉａｌ − Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．，９７（３），２５０− ２５６）、抗糖尿病性（ＳＷＡＮＳＴＯＮｅｔａｌ．，１９９０ − Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｌａｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｆｏｒｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｓｔｕｄｉｅｓｉｎｎｏｒｍａｌａｎｄｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｓｒａｔｓ − Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，３３（８），４６２− ４６４）、抗ヒスタミン性（ＩＫＡＷＡＴＩＺ．ａｎｄａｌ．，２００１ − ＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｓｅｖｅｒａｌＩｎｄｏｎｅｓｉａｎｍｅｄｅｃｉｎａｌｐｌａｎｔｓｆｏｒｔｈｅｉｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｎｈｉｓｔａｍｉｎｅｒｅｌｅａｓｅｆｒｏｍＲＢＬ−２Ｈ３ｃｅｌｌｓ − Ｊ．Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，７５（２−３），２４８−２５６）、抗癌性（ＴＡＫＡＳＡＫＩｅｔａｌ，２０００ − Ｃａｎｃｅｒｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｅｕｇｌｏｂａｌ−ＧｌｆｒｏｍｌｅａｖｅｓｏｆＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｒａｎｄｉｓ − ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔ．，１５５（１）：６１−６５）、抗ウイルス性（ＴＡＫＡＳＡＫＩｅｔａｌ，１９９０ − Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｅｕｇｌｏｂａｌ−Ｇｌ， − Ｇ２ａｎｄＧ３ｆｒｏｍＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｒａｎｄｉｓ，ｔｈｒｅｅｎｅｗｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＥｐｓｔｅｉｎｖｉｒｕｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ - Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３８（５），１４４４−１４４６）、および抗−ＨＩＶ性（ＷＩＣＨＴＬＭ．ｅｔＡＮＴＯＮＲ．，１９９９ − Ｐｌａｎｔｅｓｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｑｕｅｓ − １７７−１７９）である。

予想外かつ驚くべきことに、本出願人は、神経伝達物質の変調から生じる、疾患または病変の治療および／または予防を目的とする医薬品または栄養補助食品の調製のためのユーカリ抽出物の利用を実証した。

したがって、本発明の分野は、興味深い薬理学的特性が観察され、そしてそれにより、療法における新規の利用が検討されるユーカリの抽出物にある。本発明は、すでに数多くの文献において取り上げられているユーカリの精油自体には関係するものではない。

有利には、医薬品または栄養補助食品は、
−神経系の疾病、疾患または障害、
−精神系の疾病、疾患または障害、
−神経系および精神系の疾病、疾患または障害に結びつけられた記憶、注意および不眠障害、
−機能性身体症候群、
−常習性薬物に対する依存、
の群の中から選択された、神経伝達物質の再取り込みの変調から生じる病変の治療および／または予防を目的としている。

好ましくは、前記疾患または病変の治療および／または予防は、神経伝達物質の再取り込みの阻害から成る。

本発明の意味合いでは、「神経伝達物質」とは、ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンのことである。

「ユーカリ」とは、本発明の意味合いでは、好ましくは、Ｅｕｄｅｓｍｉａ、ＳｙｍｐｈｏｍｙｒｔｕｓおよびＣｏｒｙｍｂｉａ亜属に属する種、そしてより特定的には、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓＬ．，ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｐｕｌｖｅｒｕｌｅｎｔａＳｉｍｓ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｋａｒｔｚｏｆｆｉａｎａＬ．Ａ．Ｓ．ＪａｈｎｓｏｎｌＢｌａｘｅｌｌ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｍａｃｒｏｃａｒｐａＨｏｏｋ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｃｉｎｅｒｅａＦ．Ｍｕｅｌｌ．ｅｘＢｅｎｔｈ、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｄｏｒｒｉｇｏｅｎｓｉｓ（Ｂｌａｋｅｌｙ）Ｌ．Ａ．Ｓ．ＪｏｈｓｏｎｌＫ．Ｄ．Ｈｉｌｌ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｌｅｐｔｏｐｏｄａＢｅｎｔｈ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓＥｎｄｌ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｖｉｒｉｄｉｓＲ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｐｏｌｙｂｒａｃｔｅａＲ．Ｔ．ＢａｋｅｒおよびＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｓｍｉｔｈｉｉＲ．Ｔ．Ｂａｋｅｒという種である。

これらの例は、本発明を例示するものではあって、その範囲を制限するものではない。

有利には、ユーカリ抽出物は、ユーカリの葉、花、実、茎または幹から得られ、好ましくはユーカリの葉から得られる。

有利には、本発明にしたがって利用されるユーカリ抽出物は、構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体のうちのいずれか一つのものを含むことを特徴とする。

前記構造式（Ｉ）は、なかでもマクロカルパール（ｍａｃｒｏｃａｒｐａｌ）群の四つの化合物を包含する；該化合物は、以下のもののことである：
−マクロカルパールＡ：（５−（（１Ｒ）−１−（（１１Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−３，３，７，１１−テトラメチルトリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共に

基を形成し、Ｒ２はβ−イソブチル基を表わす。

実験式：Ｃ_２８Ｈ_４０Ｏ_６
分子量：４７２ｇ／モル

有利には、本発明に従ったユーカリ抽出物中のマクロカルパールＡの質量分率は０．１％以上、厳密には３％未満である。

−マクロカルパールＢ：（５−（（１Ｓ）−１−（（１１Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−３，３，７，１１−テトラメチルトリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共に

基を形成し、Ｒ２はα−イソブチル基を表わす。

実験式：Ｃ_２８Ｈ_４０Ｏ_６
分子量：４７２ｇ／モル

有利には、本発明に従ったユーカリ抽出物中のマクロカルパールＢの質量分率は０．１％以上、厳密には３％未満である。

−マクロカルパールＣ：（５−（（１Ｒ）−１−（（１１Ｓ）−３，３，１１−トリメチル−７−メチレントリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基を形成し、Ｒ２はβ−イソブチル基を表わす。

実験式：Ｃ_２８Ｈ_３８Ｏ_５
分子量：４５４ｇ／モル

有利には、本発明に従ったユーカリ抽出物中のマクロカルパールＣの質量分率は０．１％以上、厳密には３％未満である。

−マクロカルパールＧ：（５−（１−（３，３，１１−トリメチル−７−メチレントリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基を形成し、Ｒ２はイソブチル基を表わす。

実験式：Ｃ_２８Ｈ_３８Ｏ_５
分子量：４５４ｇ／モル

有利には、本発明に従ったユーカリ抽出物中のマクロカルパールＧの質量分率は０．１％以上、厳密には５％未満である。

前記ユーカリ抽出物は、当業者に既知の、従来の段階に基づいて実施される抽出方法により得られる。

ユーカリ（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｓｐ．）の葉、花、実、茎または幹、またはこれらの部位の混合物は粉砕され、その後、アルカン（ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、シクロヘキサン）、エーテルオキシド（テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル）、エステル（酢酸エチル、酢酸イソプロピル）、アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、オクタノール）、ケトン（メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン）、ハロゲン化炭化水素（クロロホルム、ジクロロメタン）、または、一つまたは複数の水混和性の有機溶媒と水との混合物（例えば水性アルコール混合物）であり得る有機溶媒で抽出される。

抽出は、約１／１〜約１／２０の間に含まれる植物／溶媒比で実施され、二〜三回くり返すことができる。抽出溶媒の温度は、周囲の温度以上であり得、用いられる溶媒の沸とう温度に達し得る。溶媒と植物の接触時間は、約３０分〜約７２時間の間に含まれる。

その後、固体／液体分離を行ない、植物は、濾過または遠心分離によって溶媒から分離される。

得られた濾過物を、
−抽出溶媒の完全な蒸発によって直接完全に乾燥させ、最終的な抽出物を構成してもよいし、
−あるいは、多少とも濃縮されてもよい。
混合抽出溶媒（例えば水性アルコール混合物）の場合、濃縮は、存在する有機溶媒が蒸発するまで続行される。有機溶媒の場合、一定量の水が得られた濃縮物に添加される。水相に、アルカン（例えばヘキサン）、エーテルオキシド（例えばジエチルエーテル）、エステル（例えば酢酸エチル）、アルコール（例えばブタノール）、ケトン（例えばメチルエチルケトン）またはハロゲン化炭化水素（例えばクロロホルム）であり得る非混和性溶媒を添加することにより、液液精製段階が実施される。一回、二回または三回の液液抽出が実施される。統合された有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥させてから、完全に乾燥させることができる。

得られた溶液は、真空下で周囲の温度と沸とう温度の間に含まれる温度で濃縮される。

最終的な抽出物の乾燥は、凍結乾燥または当業者に既知のより従来的な乾燥手段（噴霧化、オーブン等）によって実施される。好ましくは、乾燥温度は約６０℃を超えない。

抽出物は、例えばアスコルビン酸、クエン酸といったような酸化防止剤を、乾燥された抽出物１００ｇに対して約０．０５〜約１ｇの間に含まれる分量で添加することによって安定化され得る。

本発明の極めて傑出した点は、抽出物が構造式（Ｉ）の化合物のうちの少なくとも一つまたはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものによって富化されているため、ユーカリ抽出物の神経伝達物質の再取り込みの阻害という薬理学的特性が一層有利であるという点にある。

したがって、前記ユーカリ抽出物は好ましくは、構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物によって富化されている。

「マクロカルパールＡによって富化されたユーカリ抽出物」というのは、本発明の意味合いでは、そのマクロカルパールＡの質量分率が３％以上、厳密には９０％未満、好ましくは３％以上で５０％未満、より好ましくは３％以上で４０％未満、さらに一層好ましくは３％以上で２０％未満であるユーカリ抽出物のことである。

「マクロカルパールＢによって富化されたユーカリ抽出物」というのは、本発明の意味合いでは、そのマクロカルパールＢの質量分率が３％以上、厳密には９０％未満、好ましくは３％以上で５０％未満、より好ましくは３％以上で４０％未満、さらに一層好ましくは３％以上で２０％未満であるユーカリ抽出物のことである。

「マクロカルパールＣによって富化されたユーカリ抽出物」というのは、本発明の意味合いでは、そのマクロカルパールＣの質量分率が３％以上、厳密には９０％未満、好ましくは３％以上で５０％未満、より好ましくは３％以上で４０％未満、さらに一層好ましくは３％以上で２０％未満であるユーカリ抽出物のことである。

「マクロカルパールＧによって富化されたユーカリ抽出物」というのは、本発明の意味合いでは、そのマクロカルパールＧの質量分率が５％以上、厳密には９０％未満、好ましくは５％以上で５０％未満、より好ましくは５％以上で４０％未満、さらに一層好ましくは５％以上で２０％未満であるユーカリ抽出物のことである。

本出願人は、ドーパミンおよび／またはノルアドレナリンおよび／またはセロトニンの再取り込みにおけるユーカリ抽出物の影響を示した。

これらの神経伝達物質の再取り込みの阻害物質というその薬理学的特性から、前記抽出物は、ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの欠乏から生ずる多くの疾患または病変の治療および／または予防を目的とする医薬品または栄養補助食品の調製に特に有用である。

本発明に従ったユーカリ抽出物を用いた治療および／または予防が可能な疾患または病変のうち、非制限的な趣旨の例証として以下のものを挙げることが適当である：
−神経変性疾病（アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、脳血管障害、頭蓋外傷性傷害）、筋萎縮性側索硬化症、老年性認知症、前頭側頭認知症、血管性認知症、片頭痛、中枢性の神経因性疼痛といったような神経系の疾病、疾患または障害；
−うつ病（内因性、耐性、反応性または医療性）、うつ状態、統合失調症、躁鬱病、全般性不安、ストレス性疾患、パニック発作、強迫神経症、心的外傷後ストレス症候群、注意多動性障害、摂食障害（特に過食症、拒食症）、恐怖症（特に広場恐怖症）、自閉症といったような精神系の疾病、疾患または障害；
−神経系または精神系の、疾病、疾患または障害に付随する記憶、注意および不眠障害；
−慢性疲労症候群、線維筋痛、過敏性大腸症候群、胃食道逆流、性欲減弱、勃起障害、尿失禁といったような機能性身体症候群；
−特にニコチン、アルコール、アヘン製剤、カンナビノイド、精神刺激薬といったような常習性薬物に対する依存。

実際、本発明に従った医薬品または栄養補助食品は、有利には、ニコチン、アルコール、アヘン製剤、カンナビノイド、精神刺激薬に対する離脱を誘発し、禁欲する人への逆戻りの予防を目的としている。

本発明に従った医薬品または栄養補助食品は、有利には、常習性薬物に対する補充治療と、禁断症状群に付随するうつ症候群の予防および／または治療のために利用される。

当業者であれば、治療に、かかる阻害を必要とする他の病変を認識することができるものである。

本出願人は、非制限的な趣旨で、病変とドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンのトリプル再取り込み阻害剤を用いたそれらの治療との関係について言及しているいくつかの参考文献をここに明記する。それぞれの「群」に対し、一つの例を指摘した。

ドーパミン、セロトニンおよびノルアドレナリンは、ニューロンの開発および存続に貢献している（ＬａｕｄｅｒＪ．Ｍ．，ＴｒｅｎｄｓＮｅｕｒｏｓｃｉ，１９９３，１６；２３３）。パーキンソン病といったある種の神経系の病変（ＨｏｒｎｙｋｉｅｗｉｃｚＯ．，ＡｄｖＣｙｔｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９７１，１；３６９）は、ドーパミン欠乏症の結果生じるものである；ドーパミン、セロトニンおよびノルアドレナリンの割合を増大させるモノアミン酸化酵素阻害薬が、パーキンソン病およびその他の神経系の疾患を治療するために利用される（ＥｂａｄｉＭ．，ＣｕｒｒＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ．２００６，７；１５１３）。したがって、本発明に従ったユーカリ抽出物は、これらの神経系の疾病の治療において有利に利用され得る。

うつ病は、気力、意欲および性欲の減弱を伴うことの多い、強い悲しみ、悲観的な考え、卑下の感情を特徴とする、頻繁に起こる気分の病変である。無快感症の名前でも知られている、通常は快適である体験に快楽を感じる能力の不全もまた、うつ病によくみられる症状とみなされる。うつ病は現在、フルオキセチン、シタロプラムまたはパロキセチンといったような選択的セロトニン再取り込み阻害薬、レポキセチンといったような選択的ノルアドレナリン再取り込み阻害薬、また、さらには、ミルナシプランまたはベンラファクシンといったような、セロトニンとノルアドレナリンを混合した再取り込み阻害薬によって治療されている。しかしながら、快楽および自発性においては、側坐核と呼ばれる脳の領域に放出するドーパミン作動性ニューロンに重要な役割が割当てられた（ＫｏｏｂＧ．Ｆ．Ｓｅｍ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９９２，４，１３９；ＳａｌａｍｏｎｅＪ．Ｄ．Ｂｅｈａｖ．ＢｒａｉｎＲｅｓ．１９９４，６１，１１７）。したがってうつ病の症候は、本発明に従ったユーカリ抽出物のようなドーパミン、セロトニン、そしてノルアドレナリンの再取り込み阻害薬によって、有利には治療が可能である。

ニコチンを含めた常習性薬物の吸収は、動物（ＤｉＣｈｉａｒａＧｅｔＩｍｐｅｒａｔｏＡ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．１９８８，８５；５２７４）とヒト（Ｂｒｏｄｙｅｔａｌ．，ＡｍＪＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２００４，１６１；１２１１）における腹部線条体の細胞外ドーパミン濃度を増大させる。たばこの禁断症状群には、うつ病症候群が伴い得る（ＷｉｌｈｅｌｍＫｅｔａｌ．，ＤｒｕｇＡｌｃｏｈｏｌＲｅｖ，２００６，２５；９７）。したがって本発明に従ったユーカリ抽出物は、ニコチンといったような常習性薬物に対する補充治療と、禁断症状に付随する、うつ病症候群の予防または治療のために有利に利用され得る。

ソマトトロピン症とも呼ばれる機能性障害は、多くの生理的機能に関係するものであり、器質的機能障害ではなく（肝臓、心臓等の）臓器の機能の仕方に起因する障害である。機能性身体障害は、後に発生する疾病の起源となる可能性がある。これらの障害のうち線維筋痛は、拡散痛または限局痛、慢性疲労、うつ症状、記憶および集中力障害を付随する障害である（ＲｏｏｋｓＤＳ．，ＣｕｒｒＯｐｉｎＲｈｅｕｍａｔｏｌ．２００７，１９；１１１）。線維筋痛の症状は、ノルアドレナリン／セロトニン混合再取り込み阻害薬によって治療される（ＶｉｔｔｏｎＯ．，ＨｕｍＰｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００４，１９Ｓｕｐｐｌ１：Ｓ２７）。本発明に従ったユーカリ抽出物などにドーパミン作動性を有利なものにする成分を添加することは、機能性身体障害の治療および／または予防を目的とした医薬品または栄養補助食品の調製にとって有利である。

有利には、前記医薬品は経口剤または注入剤型である。

有利には、経口剤型は、錠剤、ゼラチンカプセル、カプセル、例えばシロップ、飲用溶液または飲用懸濁液用粉末などの液体製剤から成る群から選択される。

有利には、前記栄養補助食品（または栄養補給または食事療法用）は、一回分の用量、すなわち、ゼラチンカプセル、糖衣錠、錠剤、丸薬およびその他の類似する型、ならびに、粉末入りの袋、液体入りのアンプル剤、ピペット付きの小瓶で、そして、少量の計測単位で服用することを目的とした液体または粉末の製剤の類似する型でパッケージされる。

本発明に従った構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものによって富化されたユーカリ抽出物から得られる結果は、化学的方法、生化学的方法によって得られるかまたは植物抽出物から得られるかに関わらず、構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものをベースとする全ての組成物に本発明の利点を拡大することができるということを示している。

したがって、本発明は、神経伝達物質の再取り込みの変調から生じる、神経系、精神系の疾患または病変およびそれに付随する障害、機能性身体症候群および常習性薬物依存の治療および／または予防を目的とする、医薬品または栄養補助食品の調製のための構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものの利用に関するものでもある。好ましくは、前記疾患または病変の治療および／または予防は、神経伝達物質の再取り込みの阻害から成る。

これらの神経伝達物質の再取り込みの阻害物質というその薬理学的特性のため、構造式（Ｉ）の化合物およびそのジアステレオ異性体は、ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの欠乏の結果としての数多くの疾患または病変を治療しおよび／または予防することを目的とする医薬品または栄養補助食品の調製に特に有用である。

本発明に従った前記化合物を用いて治療および／または予防可能な疾患または病変の中でも、非制限的な趣旨の例証として以下のものを挙げることが適当である：
−神経変性疾病（アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、脳血管障害、頭蓋外傷性傷害）、筋萎縮性側索硬化症、老年性認知症、前頭側頭認知症、血管性認知症、片頭痛、中枢性の神経因性疼痛といったような神経系の疾病、疾患または障害；
−うつ病（内因性、耐性、反応性または医療性）、うつ状態、統合失調症、躁鬱病、全般性不安、ストレス性疾患、パニック発作、強迫神経症、心的外傷後ストレス症候群、注意多動性障害、摂食障害（特に過食症、拒食症）、恐怖症（特に広場恐怖症）、自閉症といったような精神系の疾病、疾患または障害；
−神経系または精神系の、疾病、疾患または障害に付随する記憶、注意および不眠障害；
−慢性疲労症候群、線維筋痛、過敏性大腸症候群、胃食道逆流、性欲減弱、勃起障害、尿失禁といったような機能性身体症候群；
−特にニコチン、アルコール、アヘン製剤、カンナビノイド、精神刺激薬といったような常習性薬物に対する依存。

当業者であれば、その治療にこのような阻害が必要であるその他の病変を認識することができるものである。

有利には、本発明は、ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの再取り込みの変調から生じる、神経系、精神系の疾患または病変およびそれに付随する障害、機能性身体症候群および常習性薬物依存の治療および／または予防を目的とする、医薬品または栄養補助食品の調製のためのマクロカルパールＡ、マクロカルパールＢ、マクロカルパールＣおよび／またはマクロカルパールＧの利用に関するものである。

構造式（Ｉ）の化合物およびそのジアステレオ異性体の形態を用いて実施された試験は、これらの化合物がドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの再取り込みの阻害に作用することを示した。

有利には、前記医薬品は経口剤または注入剤型である。

本発明に従った構造式（Ｉ）の化合物およびそのジアステレオ異性体の形態は、ＴｏｔａｌＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆ（−）−ＭａｃｒｏｃａｒｐａｌＣ．ＳｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅＣｏｕｐｌｉｎｇＲｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈａＮｏｖｅｌＨｅｘａｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄＢｅｎｚｅｎｅＣｒ（ＣＯ）_３ＣｏｍｐｌｅｘａｓａＢｉｏｍｉｍｅｔｉｃＣｈｉｒａｌＢｅｎｚｙｌＣａｔｉｏｎＥｑｕｉｖａｌｅｎｔ／Ｔａｎａｋａ，Ｔｅｔｓｕａｋｉ；Ｍｉｋａｍｉｙａｍａ，Ｈｉｄｅｎｏｒｉ；Ｍａｅｄａ，Ｋｉｍｉｙａ；Ｉｗａｔａ，Ｃｈｕｚｏ；Ｉｎ，Ｙａｓｕｋｏ；Ｉｓｈｉｄａ，Ｔｏｓｈｉｍａｓａ／ＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９８），６３（２６），９７８２−９７９３で記述されている通りの化学的または生化学的合成によってまたは植物抽出物の精製によって得られる。

前記化合物は、「ユーカリ抽出物」または「構造式（Ｉ）の少なくとも一つのマクロカルパールによって富化された抽出物」から単離することが可能である。その精製を可能にする技術は、当業者にとって従来的なクロマトグラフィ法である。抽出物は、固定相としては、好ましくはＳｙｍｅｔｒｙＳｈｉｅｌｄ（登録商標）、５μｍ（Ｗａｔｅｒｓ）である逆相を、そして移動相としては、９５／５／０．１％の割合のアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸混合物を有する分取カラム上で分別される。

構造式（Ｉ）の化合物に対するかかる留分の純度は９０％以上である。好ましくは、このような留分のマクロカルパールＡ、マクロカルパールＢ、マクロカルパールＣおよび／またはマクロカルパールＧの純度は９０％以上である。

本発明に従うと、マクロカルパールＡおよび／またはマクロカルパールＢおよび／またはマクロカルパールＣおよび／またはマクロカルパールＧが太りすぎまたは肥満の治療および／または予防を目的とする、医薬品または栄養補助食品の調製のために利用されることを合理的に想定することができる。

本発明は同様に、

という構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものを含み、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基、

基を形成しており、Ｒ２はイソブチル基、α−イソブチル基またはβ−イソブチル基を表わし、そして
−マクロカルパールＡの質量分率が３％以上、厳密には９０％未満、好ましくは３％以上で５０％未満、より好ましくは３％以上で４０％未満、さらに一層好ましくは３％以上で２０％未満であり、
−マクロカルパールＢの質量分率が３％以上、厳密には９０％未満、好ましくは３％以上で５０％未満、より好ましくは３％以上で４０％未満、さらに一層好ましくは３％以上で２０％未満であり、
−マクロカルパールＣの質量分率が３％以上、厳密には９０％未満、好ましくは３％以上で５０％未満、より好ましくは３％以上で４０％未満、さらに一層好ましくは３％以上で２０％未満であり、そして
−マクロカルパールＧの質量分率が５％以上、厳密には９０％未満、好ましくは５％以上で５０％未満、より好ましくは５％以上で４０％未満、さらに一層好ましくは５％以上で２０％未満であることを特徴とする、ユーカリ富化抽出物にも関するものである。

それゆえに、好ましくは、本発明は、医薬品または栄養補助食品としての前記ユーカリ富化抽出物の利用に関するものである。

最後に、本発明は、このようなユーカリ富化抽出物の調製方法に関するものである。

前記抽出物の獲得方法は、以下の段階から成るものである。
−ユーカリの葉および／または花および／または実および／または茎および／または幹の粉砕。
−有機溶媒または水と一つまたは複数の水混和性の有機溶媒との混合物を用いた少なくとも一回の抽出。
抽出は、約１／１〜約１／２０の間に含まれる植物／溶媒比で実施され、二〜三回くり返すことができる。抽出溶媒の温度は、周囲の温度以上であり得、用いられる溶媒の沸とう温度に達し得る。溶媒と植物の接触時間は、約３０分〜約７２時間の間に含まれる。
好ましくは、溶媒は、アルカン（ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、シクロヘキサン）、エーテルオキシド（テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル）、エステル（酢酸エチル、酢酸イソプロピル）、アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、オクタノール）、ケトン（メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン）、ハロゲン化炭化水素（クロロホルム、ジクロロメタン）、または、水と水混和性の有機溶媒との混合物（例えば水性アルコール混合物）から成る群の中から選択される。
好ましくは、抽出溶媒はジクロロメタンまたは酢酸イソプロピルである。
−水混和性の抽出溶媒の場合、濾過物は完全に乾燥され、そして非水混和性の溶媒中に溶解される。
非水混和性の溶媒の場合、濾過物は濃縮される。
−当業者にとって既知の技術による、固体／液体の分離。

本発明の好ましい実施態様においては、一回または複数回の液液抽出が、塩基、好ましくは炭酸ナトリウム（Ｎａ_２ＣＯ_３）の添加によって実施される。統合された塩基性水相は、酸、好ましくは塩酸（ＨＣｌ）の添加により酸性化され、その後、非水混和性溶媒を用いて実施される一回または複数回の液液抽出によって抽出される。有利には、酸性化により、約１に等しいｐＨが得られる。

統合された有機相は、硫酸ナトリウム上で乾燥され、そして、真空下で周囲温度から沸とう温度まで変動する温度で濃縮され得る

濃縮物は、好ましくは６０℃を超えない温度で従来的な乾燥手段（噴霧化、オーブン等）により乾燥され、マクロカルパールＧによって富化された抽出物を構成する。この抽出物は、例えばアスコルビン酸またはクエン酸といったような酸化防止剤を、乾燥された抽出物１００ｇに対して０．０５〜１ｇの間に含まれる分量で添加することによって安定化され得る。

本発明の特定の実施態様において、ユーカリ抽出物またはいわゆる「構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものによって富化された」ユーカリ抽出物は、同様に、抽出溶媒として超臨界流体を用いる抽出方法によっても得られる。

ユーカリ（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｓｐ．）の葉、花、実、茎または幹またはこれらの部位の混合物は粉砕あるいは粉砕されず、次に、二酸化炭素であり得る超臨界流体を用いて抽出される。

超臨界ＣＯ_２による一回目の抽出は、好ましくは、以下の条件下で実施される：
−流体の温度は約４０℃〜約８０℃の間、そして好ましくは約４０℃〜約６０℃の間である；
−その圧力は約８０バール〜約２５０バールの間、そして好ましくは約１００バール〜約２００バールの間に含まれる；
−抽出時間は約１時間〜約６時間の間に含まれる；
−流量は、抽出すべき材料の分量および利用されるオートクレーブのサイズに応じて当業者によって調節されるものとする。好ましくは、本発明に従った方法において用いられるＣＯ_２の流量は、
・２００〜１０００グラムの間に含まれる、好ましくは約５００グラムの分量の植物について、
・そして、２〜１０リットルの間に含まれる、好ましくは約５リットルの容量のオートクレーブについては、
２〜１５ｋｇ／時、有利には８〜１２ｋｇ／時の間に含まれる。

この抽出の第一段階においては、アルコール（エタノールを含む）、エーテルオキシド、エステルまたはこれらの溶媒のうちの二つ以上のものの混合物群の有機共溶媒を添加することが可能である。

このように抽出された植物は、その後、任意の形で二回目の抽出に付され得る。抽出流体は好ましくは、共溶媒を伴うまたは伴わない超臨界ＣＯ_２である。作業条件は以下の通りである：
−流体の温度は約４０℃〜約８０℃の間、好ましくは約４０℃〜約６０℃の間である；
−その圧力は約８０バール〜約２５０バールの間、好ましくは約１００バール〜約２００バールの間に含まれる；
−流量は、
・２００〜１０００グラムの間に含まれる、好ましくは約５００グラムの分量の植物について、
・そして、２〜１０リットルの間に含まれる、好ましくは約５リットルの容量のオートクレーブについては、
２〜１５ｋｇ／時、有利には８〜１２ｋｇ／時の間に含まれる。

有利には、抽出は、約１／０．１および１／５の間に含まれる植物／共共溶媒の質量比で実施される。

この抽出の第二段階は、必要であれば繰返すことができる。追加の抽出段階毎の抽出時間は、約１時間〜約３時間の間に含まれる。

その後に、得られた抽出物の蒸発を行なう。

当業者であれば、多少とも富化されたユーカリ抽出物を得るために超臨界流体によるこの方法の作業条件を調節するだろう。

最終的な抽出物の乾燥は、凍結乾燥または当業者にとっては既知のより従来的な乾燥手段（噴霧化、オーブン等）によって実施される。

好ましくは、乾燥温度は約６０℃を超えない。

抽出物は、例えばアスコルビン酸、クエン酸といった酸化防止剤を、乾燥された抽出物１００ｇに対して約０．０５ｇ〜約１ｇの間に含まれる分量で添加することによって安定化され得る。

本発明は、以下の実施例を用いることでより良く理解されるものであるが、それはその範囲を制限するものではない。

Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓ抽出物の調製

Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓの葉を粉砕し、そして周囲温度で５倍の体積のエタノールを用いて抽出する。植物と溶媒の接触時間は４８時間である。

植物を濾過によって溶媒から分離する。

このようにして得られた抽出物を６０℃の温度で真空下で乾燥させる。

このようにして得られた抽出物は、実施例５に示されるインビトロ試験に利用される。

得られた濾過物は、乾燥された抽出物１００ｇに対して約０．６５ｇのマクロカルパールＡ、約０．７ｇのマクロカルパールＢ、約０．４ｇのマクロカルパールＣそして約１ｇのマクロカルパールＧを含有する。

Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓ抽出物の調製

Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓの葉の粉砕し、そして５倍の体積の５０％ｖ／ｖのエタノールを用いて還流で三回抽出する。植物と溶媒の接触時間は約１時間である。

植物を濾過によって溶媒から分離する。

得られた濾過物を０．５倍の体積まで濃縮する。ジクロロメタンを添加することで液液精製を実施する。三回の液液抽出を実施する。有機相を統合し、硫酸ナトリウム上で乾燥させる。最終的な抽出物の乾燥を６０℃の真空下で実施する。

得られた抽出物は、乾燥された抽出物１００ｇに対して約１．３ｇのマクロカルパールＡ、約１．４ｇのマクロカルパールＢ、約０．８ｇのマクロカルパールＣそして約２ｇのマクロカルパールＧを含有する。

Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓ抽出物の調製

Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓの葉を粉砕し、そして約１時間で、５倍の体積のエタノール‐水５０％ｖ／ｖの混合物を用いて還流で二回抽出する。

植物を濾過によって溶媒から分離する。

得られた濾過物を濃縮し、クエン酸を乾燥された抽出物１００ｇに対して０．１ｇ添加することで安定化させる。

濃縮物を冷凍し、凍結乾燥により乾燥させる。

得られた抽出物は、乾燥された抽出物１００ｇに対して約０．３ｇのマクロカルパールＡ、約０．３５ｇのマクロカルパールＢ、約０．２ｇのマクロカルパールＣそして約０．５ｇのマクロカルパールＧを含有する。

５３７ｇのユーカリの葉を粉砕し、オートクレーブに入れる。これらの葉を、１０ｋｇ／時の流量、１５０バール、４０℃で、超臨界ＣＯ_２を用いて４時間抽出する。

かくして抽出した葉は、１５０バール、５０℃で、超臨界ＣＯ_２／エタノール混合物を用いて二回目の抽出を受ける。重量が１の植物に対して１倍の体積のエタノールを用いる。かくして２時間１５分の間抽出を行ない、その後３０分間同じ作業条件下で、ＣＯ_２を単独で通して葉を乾燥させる。

２７３．７ｇの抽出物を回収し、これを溶媒の蒸発により乾燥させる。このようにして、乾燥された抽出物１００ｇに対して６．８５ｇのマクロカルパールＧを含有する抽出物２７．９ｇが得られる。

セロトニン、ドーパミンおよびノルアドレナリンの再取り込みについてのＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓの葉の抽出物の評価

ラットのシナプスにインビトロで取込み試験を実施した。

１）セロトニン（または５−ＨＴ）の再取り込みの評価
この評価のために利用したプロトコルは、Ｐｅｒｏｖｉｃ，Ｓ．ａｎｄＭｕｌｌｅｒＷ．Ｅ．Ｇ．，１９９５ − Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｆｉｌｅｏｆｈｙｐｅｒｉｃｕｍｅｘｔｒａｃｔ：ｅｆｆｅｃｔｏｎｓｅｒｏｔｏｎｉｎｕｐｔａｋｅｂｙｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｆｏｒｓｃｈ．ＤｒｕｇＲｅｓ．，４５：１１４５−１１４８に記述されているものである。

その原理は以下の通りである：
ラットの脳由来のシナプスを、実施例１にしたがって調製したＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓ抽出物または１１８ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、２．５ｍＭのＭｇＳＯ_４、１．２ｍＭのＮａＨ_２ＰＯ_４、２５ｍＭのＮａＨＣＯ_３、１１ｍＭのグルコース、１０μＭのＥＧＴＡおよび５０μＭのアスコルビン酸を含有する緩衝液（ｐＨ＝７．４）中のイミプラミン（基準）の存在下または不在下（対照）で、０．１μＣｉの〔^３Ｈ〕−セロトニンと共に３７℃で１５分間インキュベートする。

基準アクティビティを、再取り込みをブロックするために、１０μＭのイミプラミンの存在下で、３７℃で１５分間同一の混合物をインキュベートすることによって決定する。

試料をインキュベーションの後にガラス繊維ろ紙（ＧＢ／Ｂ，Ｐａｃｋａｒｄ）を介して真空下で素早く濾過し、遊離〔^３Ｈ〕−セロトニンを除去するために、氷冷インキュベーション緩衝液を用いて二回漱ぐ。ろ紙を乾燥させ、シンチレーションカクテル（ＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔＯ，Ｐａｃｋａｒｄ）を用いたシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ，Ｐａｃｋａｒｄ）により、保持された放射能を測定する。

結果は、対照の〔^３Ｈ〕−セロトニン再取り込み阻害率で表現されている（表１参照）。

２）ドーパミン（またはＤＡ）の再取り込みの評価
この評価のために利用したプロトコルは、ＪａｎｏｗｓｋｙＡ．ＢｅｒｇｅｒＰ．，ＶｏｃｃｉＦ．，ＬａｂａｒｃａＲ．，ＳｋｏｌｎｉｃｋＰ．，ａｎｄＰａｕｌＳ．Ｍ．，１９９６ − Ｃｈａｒｃａｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍ− ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ［^３Ｈ］ＧＢＲ− １２９３５ｂｉｎｄｉｎｇｉｎｂｒａｉｎ：ａｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄｆｏｒｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌａｂｅｌｌｉｎｇｏｆｔｈｅｄｏｐａｍｉｎｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｃｏｍｐｌｅｘ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，４６，１２７２−１２７６で記述されたものである。

その原理は以下の通りである：
シナプス培地（ラットの線条体のシナプス）を、実施例１にしたがって調製したＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓ抽出物または緩衝溶液中のＧＢＲ１２９０９（基準）の存在下または不在下（対照）で、０．１μＣｉの〔^３Ｈ〕−ＤＡと共に３７℃で１５分間インキュベートする（セロトニンの再取り込みを参照のこと）。

基準アクティビティを、再取り込みをブロックするために、１０μＭのＧＢＲ１２９０９の存在下で、３７℃で１５分間同一の混合物をインキュベートすることによって決定する。

試料をインキュベーションの後にガラス繊維ろ紙（ＧＢ／Ｂ，Ｐａｃｋａｒｄ）を介して真空下で素早く濾過し、遊離〔^３Ｈ〕−ドーパミンを除去するために、氷冷インキュベーション緩衝液を用いて二回漱ぐ。ろ紙を乾燥させ、シンチレーションカクテル（ＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔＯ，Ｐａｃｋａｒｄ）を用いたシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ，Ｐａｃｋａｒｄ）により、保持された放射能を測定する。

結果は、対照の〔^３Ｈ〕−ドーパミンの再取り込み阻害率で表現されている（表１参照）。

３）ノルアドレナリン（またはＮＥ）の再取り込みの評価
この評価のために利用したプロトコルは、Ｐｅｒｏｖｉｃ，Ｓ．ａｎｄＭｕｌｌｅｒＷ．Ｅ．Ｇ．，１９９５ − Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｆｉｌｅｏｆｈｙｐｅｒｉｃｕｍｅｘｔｒａｃｔ：ｅｆｆｅｃｔｏｎｓｅｒｏｔｏｎｉｎｕｐｔａｋｅｂｙｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｆｏｒｓｃｈ．ＤｒｕｇＲｅｓ．，４５：１１４５−１１４８に記述されているものである。

その原理は以下の通りである：
シナプス培地（ラットの視床下部のシナプス）を、実施例１にしたがって調製したＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓ抽出物または緩衝溶液中のプロトリプチリン（基準）の存在下または不在下（対照）で、０．１μＣｉの〔^３Ｈ〕−ＮＥと共に３７℃で２０分間インキュベートする（セロトニンの再取り込みを参照のこと）。

基準アクティビティを、再取り込みをブロックするために、１０μＭのプロトリプチリンの存在下で３７℃で２０分間同一の混合物をインキュベートすることによって決定する。

試料をインキュベーションの後にガラス繊維ろ紙（ＧＢ／Ｂ、Ｐａｃｋａｒｄ）を通して真空下で素早く濾過し、遊離〔^３Ｈ〕−ＮＥを除去するために、氷冷インキュベーション緩衝液を用いて二回漱ぐ。ろ紙を乾燥させ、シンチレーションカクテル（ＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔＯ，Ｐａｃｋａｒｄ）を用いたシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ，Ｐａｃｋａｒｄ）により、保持された放射能を測定する。

結果は、対照の〔^３Ｈ〕−ノルアドレナリンの再取り込み阻害率で表現されている（表１参照）。

４）結果：
結果は、評価された神経伝達物質の再取り込み阻害率で表現されている（表１参照）。

表１：セロトニン、ドーパミンおよびノルアドレナリンの再取り込みについてのＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓの葉の抽出物の評価

１０μｇ／ｍｌでのセロトニンとドーパミン、１００μｇ／ｍｌの三つの神経伝達物質の再取り込みの有意な阻害が観察される。

マクロカルパールＧによって富化されたユーカリ抽出物と、マクロカルパールＧ無しのユーカリ抽出物と、そして純粋なマクロカルパールＧの評価

Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓの葉を粉砕し、そして５倍の体積のジクロロメタンを用いて抽出する。抽出は、１時間で、還流にて二回実施する。

その後に真空下で濾過を行なう。統合された濾過物を２倍の体積まで濃縮する。

１倍の体積の０．１Ｍ炭酸ナトリウム（Ｎａ_２ＣＯ_３）を添加することにより三回の液液抽出を実施する。

使い古したジクロロメタン相を保持する。硫酸ナトリウム上での乾燥、濃縮、６０℃の真空下での完全な乾燥の後に得られた残渣は、「マクロカルパールが減少した抽出物」（マクロカルパールＧの質量分率は０．１％未満）を構成する。

統合された塩基性水相を、およそ１に等しいｐＨが得られるまで１Ｍ塩酸（ＨＣｌ）の添加により酸性化し、その後、ジクロロメタンを用いて三回の液液抽出により抽出する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濃縮し、最高で６０℃の真空下で完全に乾燥させる。得られた乾燥された残渣は、「マクロカルパールＧによって富化された抽出物」を構成する。これは７％のマクロカルパールＧ質量分率を包含する。

富化された抽出物を、固定相としては、ＳｙｍｅｔｒｙＳｈｉｅｌｄ（登録商標）、５μｍ（Ｗａｔｅｒｓ）である逆相を、そして移動相としては、９５／５／０．１％の割合のアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸の混合物を有する分取カラム上で分別する。得られた留分のマクロカルパールＧの純度は、約９７％である。

次に用いられるプロトコルは、セロトニンの再取り込みの評価に関しては、実施例５のものと同一である。得られた結果は、下記の表２に列挙している。

表２：「マクロカルパールＧによって富化された抽出物」、「マクロカルパールＧ無しの抽出物」、およびマクロカルパールＧによって富化された留分のセロトニン再取り込みの活性の比較

マクロカルパールＧの含有量が高いほど、セロトニン再取り込み阻害率がより有意となることが観察される。

ハイパーフォリンの再取り込みと比較した神経伝達物質の再取り込みにおける、マクロカルパールＡ、マクロカルパールＢ、マクロカルパールＣおよびマクロカルパールＧの５０％の阻害濃度（ＣＩ_５０）の決定

続くプロトコルは、実施例５のものである。プロトコルは、マクロカルパールＡ、Ｂ、ＣおよびＧおよびハイパーフォリンの異なる濃度毎に繰返した。

得られた阻害曲線から、以下のＣＩ_５０値を得るこができた。

表３：セロトニン、ノルアドレナリンおよびドーパミンの再取り込みに対する、マクロカルパールＡ、マクロカルパールＢ、マクロカルパールＣおよびマクロカルパールＧの５０％の阻害濃度（ＣＩ_５０）の決定

これらの結果から、四つの化合物が神経伝達物質の再取り込みの阻害活性の担体であることを明らかにすることができた。さらには、これらの四つの化合物の活性レベルがほぼ等しいことがわかる。

ＷＩＣＨＴＬＭ．ｅｔＡＮＴＯＮＲ．，１９９９ − Ｐｌａｎｔｅｓｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｑｕｅｓ − １７７−１７９ＪＵＥＲＧＥＮＳｅｔａｌ．，２００３ − Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ１，８−ｃｉｎｅｏｌ（ｅｕｃａｌｙｐｔｏｌ）ｉｎｂｒｏｎｃｈｉａｌａｓｔｈｍａ：ａｄｏｕｂｌｅ−ｂｉｎｄｐｌａｃｅｂｏｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｔｒｉａｌ − Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．，９７（３），２５０− ２５６ＳＷＡＮＳＴＯＮｅｔａｌ．，１９９０ − Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｌａｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｆｏｒｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｓｔｕｄｉｅｓｉｎｎｏｒｍａｌａｎｄｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｓｒａｔｓ − Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，３３（８），４６２− ４６４ＩＫＡＷＡＴＩＺ．ａｎｄａｌ．，２００１ − ＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｓｅｖｅｒａｌＩｎｄｏｎｅｓｉａｎｍｅｄｅｃｉｎａｌｐｌａｎｔｓｆｏｒｔｈｅｉｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｎｈｉｓｔａｍｉｎｅｒｅｌｅａｓｅｆｒｏｍＲＢＬ−２Ｈ３ｃｅｌｌｓ − Ｊ．Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．，７５（２−３），２４８−２５６ＴＡＫＡＳＡＫＩｅｔａｌ，２０００ − Ｃａｎｃｅｒｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｅｕｇｌｏｂａｌ−ＧｌｆｒｏｍｌｅａｖｅｓｏｆＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｒａｎｄｉｓ − ＣａｎｃｅｒＬｅｔｌ．，１５５（１）：６１−６５ＴＡＫＡＳＡＫＩｅｔａｌ．，１９９０ − Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｅｕｇｌｏｂａｌ−Ｇｌ， − Ｇ２ａｎｄＧ３ｆｒｏｍＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｒａｎｄｉｓ，ｔｈｒｅｅｎｅｗｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＥｐｓｔｅｉｎｖｉｒｕｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ - Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３８（５），１４４４−１４４６ＷＩＣＨＴＬＭ．ｅｔＡＮＴＯＮＲ．，１９９９ − Ｐｌａｎｔｅｓｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｑｕｅｓ − １７７−１７９

Claims

ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの再取り込みの変調から生じる、神経系、精神系の疾患または病変およびそれに付随する障害、機能性身体症候群および常習性薬物依存の治療および／または予防を目的とする、医薬品または栄養補助食品の調製のためのユーカリ抽出物の利用法。
前記神経系、精神系の疾患または病変およびそれに付随する障害、機能性身体症候群および常習性薬物依存の治療および／または予防が、ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの再取り込みの阻害から成ることを特徴とする、請求項１に記載の利用法。
前記ユーカリ抽出物が、

という構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものを含み、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基、

基を形成しており、Ｒ２はイソブチル基、α−イソブチル基またはβ−イソブチル基を表わすことを特徴とする、請求項１に記載の利用法。
構造式（Ｉ）の化合物がマクロカルパールＡ（５−（（１Ｒ）−１−（（１１Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−３，３，７，１１−テトラメチルトリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共に

基を形成し、Ｒ２はβ−イソブチル基を表わすこと；およびユーカリ抽出物中のその質量分率が０．１％以上、厳密には３％未満であることを特徴とする、請求項３に記載の利用法。
構造式（Ｉ）の化合物がマクロカルパールＢ（５−（（１Ｓ）−１−（（１１Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−３，３，７，１１−テトラメチルトリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共に

基を形成し、Ｒ２はα−イソブチル基を表わすこと；およびユーカリ抽出物中のその質量分率が０．１％以上、厳密には３％未満であることを特徴とする、請求項３に記載の利用法。
構造式（Ｉ）の化合物がマクロカルパールＣ（５−（（１Ｒ）−１−（（１１Ｓ）−３，３，１１−トリメチル−７−メチレントリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基を形成し、Ｒ２はβ−イソブチル基を表わすこと；およびユーカリ抽出物中のその質量分率が０．１％以上、厳密には３％未満であることを特徴とする、請求項３に記載の利用法。
構造式（Ｉ）の化合物がマクロカルパールＧ（５−（１−（３，３，１１−トリメチル−７−メチレントリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基を形成し、Ｒ２はイソブチル基を表わすこと；およびユーカリ抽出物中のその質量分率が０．１％以上、厳密には５％未満であることを特徴とする、請求項３に記載の利用法。
前記ユーカリ抽出物が、請求項３に規定されているような構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物によって富化されていることを特徴とする、請求項１に記載の利用法。
ユーカリ抽出物がマクロカルパールＡによって富化されており、マクロカルパールＡによって富化された前記抽出物が、３％以上、厳密には９０％未満の質量分率のマクロカルパールＡを含有することを特徴とする、請求項８に記載の利用法。
ユーカリ抽出物がマクロカルパールＢによって富化されており、マクロカルパールＢによって富化された前記抽出物が、３％以上、厳密には９０％未満の質量分率のマクロカルパールＢを含有することを特徴とする、請求項８に記載の利用法。
ユーカリ抽出物がマクロカルパールＣによって富化されており、マクロカルパールＣによって富化された前記抽出物が、３％以上、厳密には９０％未満の質量分率のマクロカルパールＣを含有することを特徴とする、請求項８に記載の利用法。
ユーカリ抽出物がマクロカルパールＧによって富化されており、マクロカルパールＧによって富化された前記抽出物が、５％以上、厳密には９０％未満の質量分率のマクロカルパールＧを含有することを特徴とする、請求項８に記載の利用法。
抽出物が、Ｅｕｄｅｓｍｉａ、ＳｙｍｐｈｏｍｙｒｔｕｓおよびＣｏｒｙｍｂｉａ亜属に属する種、そしてＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓＬ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｐｕｌｖｅｒｕｌｅｎｔａＳｉｍｓ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｋａｒｔｚｏｆｆｉａｎａＬ．Ａ．Ｓ．ＪｏｈｎｓｏｎｌＢｌａｘｅｌｌ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｍａｃｒｏｃａｒｐａＨｏｏｋ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｃｉｎｅｒｅａＦ．Ｍｕｅｌｌ．ｅｘＢｅｎｔｈ、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｄｏｒｒｉｇｏｅｎｓｉｓ（Ｂｌａｋｅｌｙ）Ｌ．Ａ．Ｓ．ＪｏｈｎｓｏｎｌＫ．Ｄ．Ｈｉｌｌ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｌｅｐｔｏｐｏｄａＢｅｎｔｈ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓＥｎｄｌ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｖｉｒｉｄｉｓＲ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｐｏｌｙｂｒａｃｔｅａＲ．Ｔ．ＢａｋｅｒおよびＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｓｍｉｔｈｉｉＲ．Ｔ．Ｂａｋｅｒという種の中から選択されたユーカリに由来していることを特徴とする、請求項１に記載の利用法。
ユーカリ抽出物が、ユーカリの葉、花、実、茎および幹から成る群の中から選択されていることを特徴とする、請求項１に記載の利用法。
神経系、精神系の病変または疾患またはそれに付随する障害、機能性身体症候群または常習性薬物依存が、
−神経変性疾病（アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、脳血管障害、頭蓋外傷性傷害）、筋萎縮性側索硬化症、老年性認知症、前頭側頭認知症、血管性認知症、片頭痛、中枢性の神経因性疼痛といったような神経系の疾病；
−うつ病（内因性、耐性、反応性または医療性）、うつ状態、統合失調症、躁鬱病、全般性不安、ストレス性疾患、パニック発作、強迫神経症、心的外傷後ストレス症候群、注意多動性障害、摂食障害（特に過食症、拒食症）、恐怖症（特に広場恐怖症）、自閉症といったような精神系の疾病；
−神経系の病変または精神系の障害に付随する記憶、注意および不眠障害；
−慢性疲労症候群、線維筋痛、過敏性大腸症候群、胃食道逆流、性欲減弱、勃起障害、尿失禁といったような機能性身体症候群；
−特にニコチン、アルコール、アヘン製剤、カンナビノイド、精神刺激薬といったような常習性薬物に対する依存、
を含む群の中から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の利用法。
医薬品が経口剤または注入剤型であることを特徴とする、請求項１に記載の利用法。
ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの再取り込みの変調から生じる、神経系、精神系の疾患または病変およびそれに付随する障害、機能性身体症候群および常習性薬物依存の治療および／または予防を目的とする、医薬品または栄養補助食品の調製のための、

という構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものの利用法であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基、

基を形成しており、Ｒ２はイソブチル基、α−イソブチル基またはβ−イソブチル基を表わす利用法。
前記神経系、精神系の疾患または病変およびそれに付随する障害、機能性身体症候群および常習性薬物依存の治療および／または予防が、ドーパミンおよび／またはセロトニンおよび／またはノルアドレナリンの再取り込みの阻害から成ることを特徴とする、請求項１７に記載の利用法。
構造式（Ｉ）の化合物が、
−マクロカルパールＡ（５−（（１Ｒ）−１−（（１１Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−３，３，７，１１−テトラメチルトリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共に

基を形成し、Ｒ２はβ−イソブチル基を表わし、
−マクロカルパールＢ（５−（（１Ｓ）−１−（（１１Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−３，３，７，１１−テトラメチルトリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共に

基を形成し、Ｒ２はα−イソブチル基を表わし、
−マクロカルパールＣ（５−（（１Ｒ）−１−（（１１Ｓ）−３，３，１１−トリメチル−７−メチレントリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基を形成し、Ｒ２はβ−イソブチル基を表わし、または
−マクロカルパールＧ（５−（１−（３，３，１１−トリメチル−７−メチレントリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）であり、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基を形成し、Ｒ２はイソブチル基を表わすことを特徴とする、請求項１７に記載の利用法。
マクロカルパールＡ、マクロカルパールＢ、マクロカルパールＣまたはマクロカルパールＧが化学合成、生化学合成または植物抽出物から得られることを特徴とする、請求項１７に記載の利用法。
神経系、精神系の病変または疾患またはそれに付随する障害、機能性身体症候群または常習性薬物依存が、
−神経変性疾病（アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、脳血管障害、頭蓋外傷性傷害）、筋萎縮性側索硬化症、老年性認知症、前頭側頭認知症、血管性認知症、片頭痛、中枢性の神経因性疼痛といったような神経系の疾病；
−うつ病（内因性、耐性、反応性または医療性）、うつ状態、統合失調症、躁鬱病、全般性不安、ストレス性疾患、パニック発作、強迫神経症、心的外傷後ストレス症候群、注意多動性障害、摂食障害（特に過食症、拒食症）、恐怖症（特に広場恐怖症）、自閉症といったような精神系の疾病；
−神経系の病変または精神系の障害に付随する記憶、注意および不眠障害；
−慢性疲労症候群、線維筋痛、過敏性大腸症候群、胃食道逆流、性欲減弱、勃起障害、尿失禁といったような機能性身体症候群；
−特にニコチン、アルコール、アヘン製剤、カンナビノイド、精神刺激薬といった常習性薬物に対する依存
を含む群の中から選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の利用法。
医薬品が経口剤または注入剤型であることを特徴とする、請求項１７に記載の利用法。
という構造式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物またはそのジアステレオ異性体の形態のうちのいずれか一つのものを含み、これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基、

基を形成しており、Ｒ２はイソブチル基、α−イソブチル基またはβ−イソブチル基を表わし、そして
−マクロカルパールＡ（５−（（１Ｒ）−１−（（１１Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−３，３，７，１１−テトラメチルトリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）の質量分率が３％以上、厳密には９０％未満であり（これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共に

基を形成し、Ｒ２はβ−イソブチル基を表わす）、
−マクロカルパールＢ（５−（（１Ｓ）−１−（（１１Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−３，３，７，１１−テトラメチルトリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ−１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）の質量分率が３％以上、厳密には９０％未満であり（これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共に

基を形成し、Ｒ２はα−イソブチル基を表わす）、
−マクロカルパールＣ（５−（（１Ｒ）−１−（（１１Ｓ）−３，３，１１−トリメチル−７−メチレントリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）の質量分率が３％以上、厳密には９０％未満であり（これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基を形成し、Ｒ２はβ−イソブチル基を表わす）、
−および、マクロカルパールＧ（５−（１−（３，３，１１−トリメチル−７−メチレントリシクロ（６．３．０．０（２，４））ウンデカ１１−イル）−３−メチルブチル）−２，４，６−トリヒドロキシベンゼン−１，３−ジカルバルデヒド）の質量分率が５％以上、厳密には９０％未満である（これにおいて、Ｒ１はそれが結びつけられている炭素と共にＣ＝ＣＨ_２基を形成し、Ｒ２はイソブチル基を表わす）ことを特徴とする、ユーカリ抽出物。
−ユーカリの葉および／または花および／または実および／または茎および／または幹の粉砕；
−共溶媒を用いたまたは用いない超臨界流体による少なくとも一回の抽出、
抽出物の回収および場合によっては抽出物の乾燥、
または、有機溶媒または水と水混和性の有機溶媒との混合物を用いた少なくとも一回の抽出、固体／液体の分離および濾過物の富化
という段階を含むことを特徴とする、請求項２３に記載の抽出物の調製方法。
有機溶媒がジクロロメタンまたは酢酸イソプロピルであることを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
富化段階が、塩基の添加による少なくとも一回の液液抽出、酸性化そして次に非水混和性の溶媒による少なくとも一回の液液抽出に対応することを特徴とする、請求項２４に記載の方法。