JP2010266272A - 検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器 - Google Patents
検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010266272A JP2010266272A JP2009116468A JP2009116468A JP2010266272A JP 2010266272 A JP2010266272 A JP 2010266272A JP 2009116468 A JP2009116468 A JP 2009116468A JP 2009116468 A JP2009116468 A JP 2009116468A JP 2010266272 A JP2010266272 A JP 2010266272A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sample
- specimen
- sample collection
- collecting
- container
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 238000005070 sampling Methods 0.000 title abstract description 15
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 41
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 38
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 20
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 8
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 8
- 239000011800 void material Substances 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 64
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 64
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 64
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 47
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 21
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 39
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 23
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 12
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 10
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 7
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 7
- 239000010794 food waste Substances 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 6
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 3
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 208000035861 hematochezia Diseases 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N skatole Chemical compound C1=CC=C2C(C)=CNC2=C1 ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000001821 nucleic acid purification Methods 0.000 description 1
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000002683 reaction inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 229940074386 skatole Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
【課題】検体中に含まれる不純物や夾雑物の混入を防いで、信頼性の高い核酸の抽出・精製を行うことの可能な検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器を提供する。
【解決手段】空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な材質からなる検体採取部１ａを備えた検体採取部材１を介して、検体Ｅの表面の少なくとも一部をなぞることによって、検体の表層に存在する検出対象物を検体採取部の空隙または細孔に保持する。
【選択図】図１
【解決手段】空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な材質からなる検体採取部１ａを備えた検体採取部材１を介して、検体Ｅの表面の少なくとも一部をなぞることによって、検体の表層に存在する検出対象物を検体採取部の空隙または細孔に保持する。
【選択図】図１
Description
本発明は、検体を採取し、採取した検体を溶液中へ分散するための、検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器に関する。
ヒト由来の検体である、例えば、糞便、口腔粘膜、唾液などは、尿と同様に、低侵襲検査を行うことができ、採取時において人体に対する負担が少ないため、疾患の検査・診断に用いられている。例えば、糞便中の潜血の検査は、消化器系、特に大腸癌などの疾患の検査・診断に欠かせない重要なものとなっている。
しかるに、従来、糞便中の潜血を検査するための糞便採取容器としては、例えば、次の特許文献１に記載のものがある。
また、糞便を用いた疾患の診断方法としては、例えば、次の特許文献２に記載のものがある。
また、糞便から核酸を抽出する遺伝子検査方法が、例えば、次の非特許文献１、２に記載されている。
また、糞便を用いた疾患の診断方法としては、例えば、次の特許文献２に記載のものがある。
また、糞便から核酸を抽出する遺伝子検査方法が、例えば、次の非特許文献１、２に記載されている。
J. Clin. MicroBiol. , 42, 2004, 3490.
J. MicroBiol. Meth. , 72, 2008, 124.
近年、遺伝子検査技術の急速な進歩により、糞便を含む、ヒト由来の検体から核酸を抽出して行う遺伝子検査に関し、少量の検体で迅速且つ簡潔に核酸を測定することを可能にする研究開発が行われてきた。皮膚や組織、糞便などのヒト由来の検体からの核酸の抽出においては、採取した検体から細胞を取り出すために分散溶媒や保存溶媒に均一に撹拌する必要がある。このため、従来は、採取した検体を反応溶液に入れ、試験管ミキサーなどの撹拌装置で混合撹拌し、溶液中に検体を分散させる方法が一般的である。
ところで、検体から核酸を抽出するときに、核酸の増幅を阻害する物質などが抽出液中に混入することが起こる。
そのため、核酸の精製工程は後の増幅、検出工程に影響を与えないようにするために欠かすことができない。
しかし、核酸に類似した性質を有した物質などは、精製段階で除去しきれず、後の増幅反応などに持ち込まれる場合があり、そのような場合に、核酸の増幅反応が起きない、または反応収率の低下などを引き起こし、核酸が検出できないなどの悪影響を与える。
そのため、核酸の精製工程は後の増幅、検出工程に影響を与えないようにするために欠かすことができない。
しかし、核酸に類似した性質を有した物質などは、精製段階で除去しきれず、後の増幅反応などに持ち込まれる場合があり、そのような場合に、核酸の増幅反応が起きない、または反応収率の低下などを引き起こし、核酸が検出できないなどの悪影響を与える。
例えば、ヒト由来の検体として糞便を用いたとき、糞便中の食物残渣などの夾雑物の影響により、核酸の増幅反応が阻害されることが起きる。
採取した検体には、検体中に含まれる不純物や、例えば、食べ物のカスや腸内細菌の死骸などの夾雑物が含まれている。糞便の成分のほとんどは、食物残渣である。この食物残渣に消化液(胆汁・膵液・腸液など)や、腸内細菌、食物を分解した際の分解産物としてインドール・スカトール・アンモニア・乳酸などが混ざって排泄される。また、糞便中に細胞が存在する割合は、非常に少ない。
このため、不純物でそのほとんどを構成されている糞便からの核酸の抽出には、上述の食物残渣や分解産物を持ち込まないようなサンプリング方法が必要となるが、糞便中から、不純物を含まない、細胞や目的物質のみを直接サンプリングする方法は皆無に近い。
このように、検体を溶液に分散させる方法では、細胞とともに不純物も溶液中に分散され、不純物の完全な除去が困難であるため、核酸を抽出・精製する効率が下がっていた。
採取した検体には、検体中に含まれる不純物や、例えば、食べ物のカスや腸内細菌の死骸などの夾雑物が含まれている。糞便の成分のほとんどは、食物残渣である。この食物残渣に消化液(胆汁・膵液・腸液など)や、腸内細菌、食物を分解した際の分解産物としてインドール・スカトール・アンモニア・乳酸などが混ざって排泄される。また、糞便中に細胞が存在する割合は、非常に少ない。
このため、不純物でそのほとんどを構成されている糞便からの核酸の抽出には、上述の食物残渣や分解産物を持ち込まないようなサンプリング方法が必要となるが、糞便中から、不純物を含まない、細胞や目的物質のみを直接サンプリングする方法は皆無に近い。
このように、検体を溶液に分散させる方法では、細胞とともに不純物も溶液中に分散され、不純物の完全な除去が困難であるため、核酸を抽出・精製する効率が下がっていた。
ところで、例えば、糞便を用いた潜血の検査では、採取した糞便を溶液に漬けることで保存が可能であり、しかも採取する糞便の量が極少量で済むことから、糞便を自然拡散によって溶媒中に拡散できるため、採取した検体を機械的に分散させる工程を必要としない。また、糞便中に含まれる血液を測定対象とするため、不純物や夾雑物などの影響を受けにくい。
これに対し、糞便を用いた遺伝子の検査では、糞便中に含まれる細胞から核酸を抽出・精製するために、便潜血検査における採取量に比べて極めて多量の糞便を採取する必要があることから、非常に多くの不純物が検体を分散させた溶液に入りこむ。このため、上記特許文献１に記載の便潜血検査容器を遺伝子検査用の検体採取容器として使用することによっては、核酸を高精度に検出することが困難である。
上述のように、糞便検体から核酸を抽出・精製するプロセスにおいては，検体中に含まれる抽出目的物以外の不純物が多く含まれていることから、不純物の除去が必要となる。現在、不純物を除去するための精製試薬キットとして、抽出した核酸をカラムや磁気ビーズなどで精製するものが市販されている。これら市販の精製試薬キットを用いれば、検体中から目的とする核酸を含む抽出液中に含まれている不純物を除去することは可能である。
ところで、精製試薬キットにおいて一度に処理可能な量は、精製試薬キットのカラムに依存する。そして、一度に大量の溶液を処理する場合には、大量の精製試薬キットが必要となる。また、検体によっては，抽出液中に多量の不純物が混入することがある。このとき、１回の精製で不純物が除去し切れない場合があり、その場合は、複数回の精製工程が必要となる。また、得られた溶液中に不純物が多いと、ＰＣＲなどの増幅反応ができない、核酸を分解するなど、サンプルに影響を与えてしまう。
このため、核酸を抽出する前段階の、検体を採取する時点で、核酸の転写反応、増幅反応などを阻害するような不純物の混入を抑えることが重要となる。
上述のように、糞便を用いた疾患検査としては、現在、便潜血検査が広く行われている。便潜血検査では、糞便中の血液を免疫反応により検出する検査であり、不純物の影響は少なく、核遺伝子検査で必要な、核酸を検体から抽出する一連の工程を全く必要としない。このため、検体を上記特許文献１に記載の採取方法などで採取しても検査に支障は生じない。
これに対し、遺伝子検査は、どれだけ純度の高い核酸を得られるかが、検査結果を左右する。上記特許文献１に記載の採取方法を用いた場合、核酸を高精度に検出することが困難である。
これに対し、遺伝子検査は、どれだけ純度の高い核酸を得られるかが、検査結果を左右する。上記特許文献１に記載の採取方法を用いた場合、核酸を高精度に検出することが困難である。
また、従来、糞便や組織などの検体から、不純物の影響を少なくして核酸を抽出するための他の手段として、ＦＴＡカード（ｗｈａｔｍａｎ社）がある。
例えば、糞便から核酸を抽出する場合、ＦＴＡカード上に糞便を載せ、ＦＴＡカードにあらかじめ浸み込ませた試薬と検体中の細胞とを反応させることで、核酸を抽出することが可能となる。上記非特許文献１、２には、ＦＴＡカードを用いて、糞便などの検体から核酸を抽出し、遺伝子検査を行うことが記載されている。
例えば、糞便から核酸を抽出する場合、ＦＴＡカード上に糞便を載せ、ＦＴＡカードにあらかじめ浸み込ませた試薬と検体中の細胞とを反応させることで、核酸を抽出することが可能となる。上記非特許文献１、２には、ＦＴＡカードを用いて、糞便などの検体から核酸を抽出し、遺伝子検査を行うことが記載されている。
ＦＴＡカードを用いた糞便中からの核酸の抽出方法としては、例えば、糞便を採取し、食塩水などの反応溶液に撹拌混合し、遠心処理をした溶液をＦＴＡカードに塗布し、塗布した部分を切り抜き、抽出試薬にて抽出することにより、核酸を得るという方法がある。
しかし、ＦＴＡカードで一度に処理できる量には限界があるため、一度に大量に核酸を処理することができない。また、検体採取後、早く反応溶液に入れなくてはならないなどの制限がある。
しかし、ＦＴＡカードで一度に処理できる量には限界があるため、一度に大量に核酸を処理することができない。また、検体採取後、早く反応溶液に入れなくてはならないなどの制限がある。
また、検体を直接ＦＴＡカードに乗せ、直接検体からＦＴＡカードに浸透させて核酸を抽出する方法がある。しかし、それでは、従来の液相検体に比べて抽出効率が悪く、核酸の種類によっては抽出できない場合が生ずる。
また、ＦＴＡカードを用いて、糞便を用いた遺伝子検査を行う場合において、採取した糞便をＦＴＡカード上に載せて、糞便の表面全体をＦＴＡカード上で転がして反応させなくてはならないのでは、検体採取時における採取者の負担が大きい。また、ＦＴＡカードによる核酸の抽出は、固相反応であり、検体が空気中に触れる時間が長くなることで核酸が分解されてしまい易い。このため、ＦＴＡカードによる核酸の抽出方法により得られる核酸の量は、従来の液相反応による抽出方法により得られる量に比べて少なくなり、ＲＮＡなどは、ＦＴＡカードを用いても検体から得られないことがある。
このように、ＦＴＡカードを使用した検査は、検体の表層中の細胞から核酸を抽出するため、不純物の混入は少ないものの、検体から得られる核酸の量が少なくなることや検体採取時の操作性の観点から、臨床検査には適していない。
また、ＦＴＡカードを用いて、糞便を用いた遺伝子検査を行う場合において、採取した糞便をＦＴＡカード上に載せて、糞便の表面全体をＦＴＡカード上で転がして反応させなくてはならないのでは、検体採取時における採取者の負担が大きい。また、ＦＴＡカードによる核酸の抽出は、固相反応であり、検体が空気中に触れる時間が長くなることで核酸が分解されてしまい易い。このため、ＦＴＡカードによる核酸の抽出方法により得られる核酸の量は、従来の液相反応による抽出方法により得られる量に比べて少なくなり、ＲＮＡなどは、ＦＴＡカードを用いても検体から得られないことがある。
このように、ＦＴＡカードを使用した検査は、検体の表層中の細胞から核酸を抽出するため、不純物の混入は少ないものの、検体から得られる核酸の量が少なくなることや検体採取時の操作性の観点から、臨床検査には適していない。
また、上記特許文献２には、糞便における横断面と完全な円周面を採取して遺伝子検査を行うことが記載されているが、糞便における完全な円周面を採取することは困難である。また、上記特許文献２に記載の採取方法では、検体の採取量が多くなり、これに伴い上述した不純物や夾雑物などの抽出・精製工程への持込が起こり易いため、所望量の核酸を得るためには、より多量に検体を採取することが必要となる。即ち、特許文献２に記載の採取手法を用いたのでは、糞便中に含まれる細胞から核酸を抽出して、遺伝子検査を行う場合に、検体中に含まれる多数の不純物や夾雑物も採取されてしまい、採取後の精製に手間がかかり、特に核酸を検出する場合は、夾雑物の影響を受けて検出精度にバラツキが生じ易かった。
また、特許文献２に記載の採取方法は、糞便の横断面を採取し、採取した糞便から目的の核酸を抽出し、遺伝子検査を行う手法であり、検体中に含まれている夾雑物の除去については遠心分離による除去を行い、水溶性の不純物の除去については精製キットに依存している。
ところで、直接サンプリングでは、上述したように、採取した糞便中には、目的とする物質、細胞よりも、食物残渣や腸内細菌などがそのほとんどを構成している。このため、直接サンプリングによる不純物の除去は困難である。
ところで、直接サンプリングでは、上述したように、採取した糞便中には、目的とする物質、細胞よりも、食物残渣や腸内細菌などがそのほとんどを構成している。このため、直接サンプリングによる不純物の除去は困難である。
しかるに、上記特許文献２に記載の採取方法を用いて、糞便の横断面をナイフやスコップなどの器具で採取した場合、採取検体中のほとんどが細胞以外のもので構成されている。このため、不純物による分解が起こっても検出に必要な量の核酸が得られるように多く採取する必要があるが、多く採取すると、抽出工程のプロセスにおいて、不純物から水溶性の阻害物質が溶出し、後の増幅工程で反応阻害を引き起こすため、精製に時間がかかるなどの問題が生じる。また、特許文献２に記載の採取方法では、充分量の核酸を得るために、特許文献１に記載の便潜血検査で採取する糞便の量に比べて１００倍以上の糞便が遺伝子検査の際に必要となり、糞便の採取自体が困難である。
本発明は、このような従来の問題点に鑑みてなされたものであり、検体中に含まれる不純物や夾雑物の混入を防いで、信頼性の高い核酸の抽出・精製を行うことの可能な検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器を提供することを目的としている。
上記目的を達成するため、本発明による検体採取方法は、検体から検出対象物を採取する方法であって、空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な材質からなる検体採取部を備えた検体採取部材を介して、検体の表面の少なくとも一部をなぞることによって、該検体の表層に存在する検出対象物を該検体採取部の該空隙または細孔に保持することを特徴としている。
また、本発明の検体採取方法においては、前記検出対象物が細胞であるのが好ましい。
また、本発明による検体採取部材は、空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な材質からなる検体採取部と、前記検体採取部に接続する把持部とからなることを特徴としている。
また、本発明の検体採取部材においては、前記空隙または細孔の径が、０．３〜３ｍｍであるのが好ましい。
また、本発明の検体採取部材においては、前記検体採取部が、親水性を有する多孔質の材質からなるのが好ましい。
また、本発明の検体採取部材においては、前記検体採取部が、網目構造の材質からなるのが好ましい。
また、本発明の検体採取部材においては、前記検体採取部が、合成高分子（プラスチック）から選択されるものからなるのが好ましい。
また、本発明による検体採取部材は、検体から検出対象物を採取する方法であって、上記本発明のいずれかの検体採取部を有する検体採取部材を介して、検体の表面の少なくとも一部をなぞることによって、該検体の表層に存在する検出対象物を該検体採取部の前記空隙または細孔に保持することを特徴としている。
また、本発明による検体採取容器は、少なくともその一端が開口され、検体を分散又は保存、反応させる液体を収容しうるとともに、把持しやすい形状に形成された容器本体と、検体を採取するための検体採取部材と、前記検体採取部材を前記容器本体に収容した状態で、該容器本体に接続する蓋部材とからなり、前記検体採取部材は、その少なくとも一部が、空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な硬さに制御できる材質からなり、検体の少なくとも表面の一部をなぞることによって、該検体の表層に存在する検出対象物を該空隙または細孔に保持できるように構成された検体採取部を備えていることを特徴としている。
また、本発明による検体採取容器は、少なくともその一端が開口され、検体を分散又は保存、反応させる液体を収容しうるとともに、把持しやすい形状に形成された容器本体と、上記本発明のいずれかの検体採取部材と、前記検体採取部材を前記容器本体に収容した状態で、該容器本体に接続する蓋部材とからなることを特徴としている。
また、本発明の検体採取容器においては、前記容器本体が、該検体採取部材を介して採取した検体を分散させるための溶液を備えるのが好ましい。
本発明によれば、検体中に含まれる不純物や夾雑物の混入を防いで、信頼性の高い核酸の抽出・精製を行うことの可能な検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器が得られる。
実施形態の説明に先立ち、本発明の作用効果について説明する。
糞便を構成しているほとんどの物質を除去した状態で、細胞のみ採取時に取り出すことはきわめて困難であり、また細胞が糞便中に不均一に存在していることに鑑み、本発明では、糞便の少なくとも一部、または全体の表面をなぞることで、糞便の表層中に存在している細胞や目的物質を採取するとともに、それらと一緒に採取される、糞便を構成している夾雑物を、大きさが直径３ｍｍ以下の夾雑物のみに制限する方法を提案する。
糞便を構成しているほとんどの物質を除去した状態で、細胞のみ採取時に取り出すことはきわめて困難であり、また細胞が糞便中に不均一に存在していることに鑑み、本発明では、糞便の少なくとも一部、または全体の表面をなぞることで、糞便の表層中に存在している細胞や目的物質を採取するとともに、それらと一緒に採取される、糞便を構成している夾雑物を、大きさが直径３ｍｍ以下の夾雑物のみに制限する方法を提案する。
本発明では、検体採取部材を、直径３ｍｍ以下の空隙を材質表面に有し、また押圧により空隙が変形できる材質で構成し、検体の表面の少なくとも一部をなぞることで、検体を採取し、その中に、目的とする細胞や物質とともに含まれる食物残渣は、大きさが空隙の大きさ以下のもののみに制限されるようにする。
従来の上記特許文献２に記載の手法では、少なくとも検体の横断面を採取しなければならず，採取する検体量が増えるのに対して、本発明の手法のように、検体の表面をなぞることで検体表層の一部を採取すれば、検体を採取する量は少なくなる。
また、本発明によれば、食物残渣を篩い分けるように検体を採取できるため，検体を溶媒に撹拌する際に撹拌棒などの撹拌材に不純物が引っかかりにくくなる。そのため、溶媒とより混合しやすくなり、核酸抽出試薬との反応を効果的に行うことができ、最終的に得られた抽出液中に含まれる、夾雑物由来の核酸増幅反応阻害物の混入を抑えることができる。このため、本発明によれば、抽出した核酸ライブラリーから目的配列のみを増幅する際における反応阻害による増幅効率の低下も抑えることができる。
従来の上記特許文献２に記載の手法では、少なくとも検体の横断面を採取しなければならず，採取する検体量が増えるのに対して、本発明の手法のように、検体の表面をなぞることで検体表層の一部を採取すれば、検体を採取する量は少なくなる。
また、本発明によれば、食物残渣を篩い分けるように検体を採取できるため，検体を溶媒に撹拌する際に撹拌棒などの撹拌材に不純物が引っかかりにくくなる。そのため、溶媒とより混合しやすくなり、核酸抽出試薬との反応を効果的に行うことができ、最終的に得られた抽出液中に含まれる、夾雑物由来の核酸増幅反応阻害物の混入を抑えることができる。このため、本発明によれば、抽出した核酸ライブラリーから目的配列のみを増幅する際における反応阻害による増幅効率の低下も抑えることができる。
具体的には、本発明の検体採取方法は、空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な材質からなる検体採取部を備えた検体採取部材を介して、検体の表面の少なくとも一部をなぞることによって、該検体の表層に存在する検出対象物を該検体採取部の該空隙または細孔に保持する。
このようにすれば、検体採取部に有する空隙または細孔を不純物や夾雑物よりも小さい大きさに形成することにより、検体採取部を介して、余剰な不純物や夾雑物の取り込みを少なくしながら、検体を細かく分散した状態に採取することができる。このため、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。
このようにすれば、検体採取部に有する空隙または細孔を不純物や夾雑物よりも小さい大きさに形成することにより、検体採取部を介して、余剰な不純物や夾雑物の取り込みを少なくしながら、検体を細かく分散した状態に採取することができる。このため、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。
また、検体採取部を押圧により容易に変形可能な材質で構成すれば、検体採取部で検体を採取後に、分散溶液または保存溶液の入った容器に入れ、押圧をかけて、検体採取部を変形することで、空隙または細孔に採取された検体を、溶液中に簡単に分散させることができる。
なお、検体採取部を押圧により容易に破砕可能な材質で構成してもよい。その場合は、破砕された検体採取部の細片は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
このため、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
なお、検体採取部を押圧により容易に破砕可能な材質で構成してもよい。その場合は、破砕された検体採取部の細片は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
このため、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
本発明における検出対象物は、核酸など細胞中の物質である。検体採取部に設ける空隙または細孔の径は、０．３〜３ｍｍ程度にするのが好ましい。このようにすれば、検体採取部検体を採取する際に夾雑物などを極力排除することができる。また、空隙または細孔を有する検体採取部は、例えば、親水性を有する多孔質の材質や網目構造の材質で構成するのが好ましい。網目構造にすると、大きさを制御することができるため、検体表層に存在している細胞などを取り込み易い大きさに容易に加工できる。また、検体採取部は、合成高分子（プラスチック）から選択されるものであるのが好ましい。
以下、本発明の実施形態について、図面を用いて説明する。
第一実施形態
図１は本発明の第一実施形態にかかる検体採取方法及び検体採取部材を示す説明図で、(a)は検体採取部材の斜視図、(b)は(a)に示した検体採取部材を検体採取部側から見た図、(c)は(a)及び(b)に示した検体採取部材を用いて検体を採取する様子を示す概念図である。
第一実施形態の検体採取部材１は、検体採取部１ａと、把持部１ｂとで構成されている。
検体採取部１ａは、孔の径が例えば１〜２ｍｍ程度の細孔（図１ではドット状に示してある）を有するスポンジ状に加工された合成高分子（プラスチック）を、例えば高さ１０×φ２０ｍｍ程度の所定形状に形成して構成されており、押圧により容易に変形可能となっている。
把持部１ｂは、例えば高さ６０×φ１０ｍｍ程度の把持可能な棒状に形成されたポリプロピレンで構成されている。把持部１ｂの一端は、検体採取部１ａと接続している。
第一実施形態
図１は本発明の第一実施形態にかかる検体採取方法及び検体採取部材を示す説明図で、(a)は検体採取部材の斜視図、(b)は(a)に示した検体採取部材を検体採取部側から見た図、(c)は(a)及び(b)に示した検体採取部材を用いて検体を採取する様子を示す概念図である。
第一実施形態の検体採取部材１は、検体採取部１ａと、把持部１ｂとで構成されている。
検体採取部１ａは、孔の径が例えば１〜２ｍｍ程度の細孔（図１ではドット状に示してある）を有するスポンジ状に加工された合成高分子（プラスチック）を、例えば高さ１０×φ２０ｍｍ程度の所定形状に形成して構成されており、押圧により容易に変形可能となっている。
把持部１ｂは、例えば高さ６０×φ１０ｍｍ程度の把持可能な棒状に形成されたポリプロピレンで構成されている。把持部１ｂの一端は、検体採取部１ａと接続している。
そして、第一実施形態の検体採取方法では、このように構成された検体採取部材１の把持部１ｂの外側を把持しながら、図１(c)に示すように、検体採取部１ａを介して糞便Ｅの表面の少なくとも一部をなぞることによって、糞便Ｅの表層に存在する検出対象物を検体採取部１ａの細孔に保持する。
これにより、検体採取部１ａの細孔よりも大きな不純物や夾雑物を取り込むことなく、検体を細かく分散した状態に採取することができる。
検体採取部１ａの細孔に採取した検体は、検体採取部材１を分散溶液または保存溶液の入った容器（図示省略）に入れ、上から押圧をかけて、検体採取部１ａを変形することで、溶液中に簡単に分散させることができる。
このため、第一実施形態の検体採取部材及び検体採取方法によれば、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。さらに、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
検体採取部１ａは上からの押圧により、破砕されるものであっても良い。なお、破砕された検体採取部１ａの細片は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
これにより、検体採取部１ａの細孔よりも大きな不純物や夾雑物を取り込むことなく、検体を細かく分散した状態に採取することができる。
検体採取部１ａの細孔に採取した検体は、検体採取部材１を分散溶液または保存溶液の入った容器（図示省略）に入れ、上から押圧をかけて、検体採取部１ａを変形することで、溶液中に簡単に分散させることができる。
このため、第一実施形態の検体採取部材及び検体採取方法によれば、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。さらに、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
検体採取部１ａは上からの押圧により、破砕されるものであっても良い。なお、破砕された検体採取部１ａの細片は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
第二実施形態
図２は本発明の第二実施形態にかかる検体採取方法及び検体採取部材を示す説明図で、(a)は検体採取部材の斜視図、(b)は(a)に示した検体採取部材を検体採取部側から見た図、(c)は検体採取部の部分拡大図、(d)は(a)〜(c)に示した検体採取部材を用いて検体を採取する様子を示す概念図である。
第二実施形態の検体採取部材１’は、検体採取部１ａ’と、把持部１ｂ’とで構成されている。
検体採取部１ａ’は、孔の径が例えば０．３〜０．５ｍｍ程度の細孔（図２(c)ではドット状に示してある）を有するスポンジ状に加工された合成高分子（プラスチック）を例えば直径２ｍｍ程度の棒状に形成した分離部１ａ1’を、例えばφ１０ｍｍ程度の略同心円状に隙間なく並べて構成されており、押圧により容易に変形されて各分離部１ａ1’に分離可能となっている。
把持部１ｂ’は、例えば高さ６０×φ１０ｍｍ程度の把持可能な棒状に形成されたポリプロピレンで構成されている。把持部１ｂ’の一端は、検体採取部１ａ’と接続している。
図２は本発明の第二実施形態にかかる検体採取方法及び検体採取部材を示す説明図で、(a)は検体採取部材の斜視図、(b)は(a)に示した検体採取部材を検体採取部側から見た図、(c)は検体採取部の部分拡大図、(d)は(a)〜(c)に示した検体採取部材を用いて検体を採取する様子を示す概念図である。
第二実施形態の検体採取部材１’は、検体採取部１ａ’と、把持部１ｂ’とで構成されている。
検体採取部１ａ’は、孔の径が例えば０．３〜０．５ｍｍ程度の細孔（図２(c)ではドット状に示してある）を有するスポンジ状に加工された合成高分子（プラスチック）を例えば直径２ｍｍ程度の棒状に形成した分離部１ａ1’を、例えばφ１０ｍｍ程度の略同心円状に隙間なく並べて構成されており、押圧により容易に変形されて各分離部１ａ1’に分離可能となっている。
把持部１ｂ’は、例えば高さ６０×φ１０ｍｍ程度の把持可能な棒状に形成されたポリプロピレンで構成されている。把持部１ｂ’の一端は、検体採取部１ａ’と接続している。
そして、第二実施形態の検体採取方法では、このように構成された検体採取部材１’の把持部１ｂ’の外側を把持しながら、図２(d)に示すように、検体採取部１ａ’を介して糞便Ｅの表面の少なくとも一部をなぞることによって、糞便Ｅの表層に存在する検出対象物を検体採取部１ａ’の細孔に保持する。
これにより、検体採取部１ａ’の細孔よりも大きな不純物や夾雑物を取り込むことなく、検体を細かく分散した状態に採取することができる。
検体採取部１ａ’の細孔に採取した検体は、検体採取部材１’を分散溶液または保存溶液の入った容器（図示省略）に入れ、上から押圧をかけて、検体採取部１ａ’を変形して分離部１ａ1’に分離させることで、溶液中に簡単に分散させることができる。
このため、第二実施形態の検体採取部材及び検体採取方法によれば、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。さらに、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
検体採取部１ａ’は上からの押圧により、破砕されるものであっても良い。なお、破砕された検体採取部１ａ’の細片は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
これにより、検体採取部１ａ’の細孔よりも大きな不純物や夾雑物を取り込むことなく、検体を細かく分散した状態に採取することができる。
検体採取部１ａ’の細孔に採取した検体は、検体採取部材１’を分散溶液または保存溶液の入った容器（図示省略）に入れ、上から押圧をかけて、検体採取部１ａ’を変形して分離部１ａ1’に分離させることで、溶液中に簡単に分散させることができる。
このため、第二実施形態の検体採取部材及び検体採取方法によれば、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。さらに、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
検体採取部１ａ’は上からの押圧により、破砕されるものであっても良い。なお、破砕された検体採取部１ａ’の細片は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
第三実施形態
図３は本発明の第三実施形態にかかる検体採取容器の概略構成を示す説明図で、(a)は基本構成を示す概念図、(b)は細胞を含んだ検体を検体採取部で採取するときの状態を示す概念図である。
第三実施形態の検体採取部材１”は、検体採取部１ａ”と、把持部１ｂ”とで構成されている。検体採取部１ａ”は、均等に溝または細孔を施し、溝の大きさが例えば１〜３ｍｍ程度を有する弾性プラスチックを、例えば、高さ１５×幅１０×横１０ｍｍ程度の所定形状に形成して構成されており、押圧により容易に変形可能となっている。
把持部１ｂ”は、例えば高さ６０×φ１０ｍｍ程度の把持可能な棒状に形成されたポリプロピレンで構成されている。把持部１ｂ”の一端は、検体採取部１ａ”と接続している。
図３は本発明の第三実施形態にかかる検体採取容器の概略構成を示す説明図で、(a)は基本構成を示す概念図、(b)は細胞を含んだ検体を検体採取部で採取するときの状態を示す概念図である。
第三実施形態の検体採取部材１”は、検体採取部１ａ”と、把持部１ｂ”とで構成されている。検体採取部１ａ”は、均等に溝または細孔を施し、溝の大きさが例えば１〜３ｍｍ程度を有する弾性プラスチックを、例えば、高さ１５×幅１０×横１０ｍｍ程度の所定形状に形成して構成されており、押圧により容易に変形可能となっている。
把持部１ｂ”は、例えば高さ６０×φ１０ｍｍ程度の把持可能な棒状に形成されたポリプロピレンで構成されている。把持部１ｂ”の一端は、検体採取部１ａ”と接続している。
そして、第三実施形態の検体採取方法では、このように構成された検体採取部材１”の把持部１ｂ”の外側を把持しながら、図３(b)に示すように、検体採取部１ａ”を介して糞便Ｅの表面の少なくとも一部をなぞることによって、糞便Ｅの表層に存在する検出対象物を検体採取部１ａ”の細孔に保持する。
これにより、検体採取部１ａ”の細孔よりも大きな不純物や夾雑物を取り込むことなく、検体を細かく分散した状態に採取することができる。
検体採取部１ａ”の細孔に採取した検体は、検体採取部材を分散溶液または保存溶液の入った容器（図示省略）に入れ、上から押圧をかけて、検体採取部１ａ”を変形することで、溶液中に簡単に分散させることができる。
このため、第三実施形態の検体採取部材及び検体採取方法によれば、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。さらに、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
検体採取部１ａ”は上からの押圧により，破砕されるものであっても良い。なお、破砕された検体採取部１ａ”の細片は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
これにより、検体採取部１ａ”の細孔よりも大きな不純物や夾雑物を取り込むことなく、検体を細かく分散した状態に採取することができる。
検体採取部１ａ”の細孔に採取した検体は、検体採取部材を分散溶液または保存溶液の入った容器（図示省略）に入れ、上から押圧をかけて、検体採取部１ａ”を変形することで、溶液中に簡単に分散させることができる。
このため、第三実施形態の検体採取部材及び検体採取方法によれば、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。さらに、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
検体採取部１ａ”は上からの押圧により，破砕されるものであっても良い。なお、破砕された検体採取部１ａ”の細片は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
第四実施形態
図４は本発明の第四実施形態にかかる検体採取容器の概略構成を示す説明図で、(a)は基本構成を示す概念図、(b)は細胞を含んだ検体を検体採取部で採取した検体採取部材を容器本体に収納するときの状態を示す概念図、(c)は容器本体に収容した検体採取部材を押圧して検体採取部を破砕したときの状態を示す概念図である。
第四実施形態の検体採取容器１０は、図４(a)に示すように、容器本体１１と、検体採取部材１２と、蓋部材１３とで構成されている。
容器本体１１は、図４(b)に示すように、その一端１１ａが開口され、検体を分散又は保存、反応させる液体を収容しうるとともに、把持しやすい、高さ１００ｍｍ、直径２０ｍｍ程度の円筒形状に形成されている。そして、図４の例では、容器本体１１は、検体採取部材１２を介して採取した検体を分散・保存させるための溶液１４を備えている。
図４は本発明の第四実施形態にかかる検体採取容器の概略構成を示す説明図で、(a)は基本構成を示す概念図、(b)は細胞を含んだ検体を検体採取部で採取した検体採取部材を容器本体に収納するときの状態を示す概念図、(c)は容器本体に収容した検体採取部材を押圧して検体採取部を破砕したときの状態を示す概念図である。
第四実施形態の検体採取容器１０は、図４(a)に示すように、容器本体１１と、検体採取部材１２と、蓋部材１３とで構成されている。
容器本体１１は、図４(b)に示すように、その一端１１ａが開口され、検体を分散又は保存、反応させる液体を収容しうるとともに、把持しやすい、高さ１００ｍｍ、直径２０ｍｍ程度の円筒形状に形成されている。そして、図４の例では、容器本体１１は、検体採取部材１２を介して採取した検体を分散・保存させるための溶液１４を備えている。
検体採取部材１２は、検体採取部１２ａと、細長状の把持部１２ｂとで構成されている。
検体採取部１２ａは、孔の径が０．５〜２ｍｍ程度の網目構造に加工するとともに、押圧により径が１０ｍｍ以下の粒子に破砕するようにクラック処理を施したプラスチックで構成されている。
把持部１２ｂは、棒状部材で構成されている。棒状部材の一端１２ｂ1には、検体採取部１２ａが接続されている。棒状部材の他端１２ｂ2は、蓋部材１３と接続している。
検体採取部１２ａは、孔の径が０．５〜２ｍｍ程度の網目構造に加工するとともに、押圧により径が１０ｍｍ以下の粒子に破砕するようにクラック処理を施したプラスチックで構成されている。
把持部１２ｂは、棒状部材で構成されている。棒状部材の一端１２ｂ1には、検体採取部１２ａが接続されている。棒状部材の他端１２ｂ2は、蓋部材１３と接続している。
蓋部材１３は、把持可能な形状に形成されている。
また、蓋部材１３の内周部と容器本体１１の外周部には螺子（図示省略）が形成されており、蓋部材１３が容器本体１１に着脱可能になっている。
また、棒状部材は、蓋部材１３が容器本体１１に螺着したときに、容器本体１１の底面１１ｂとで検体採取部１２ａを押圧して破砕可能な長さを有している。
そして、第三実施形態の検体採取容器では、検体を採取した検体採取部材１２を容器本１１体に収納し、蓋部材１３を容器本体１１に螺着して上方から押圧をかけたときに、検体採取部１２ａを構成するプラスチックが変形・破砕して粒子径１０ｍｍ以下の粒子になることで、網目中の細胞が溶液に分散され易くなっている。
また、蓋部材１３の内周部と容器本体１１の外周部には螺子（図示省略）が形成されており、蓋部材１３が容器本体１１に着脱可能になっている。
また、棒状部材は、蓋部材１３が容器本体１１に螺着したときに、容器本体１１の底面１１ｂとで検体採取部１２ａを押圧して破砕可能な長さを有している。
そして、第三実施形態の検体採取容器では、検体を採取した検体採取部材１２を容器本１１体に収納し、蓋部材１３を容器本体１１に螺着して上方から押圧をかけたときに、検体採取部１２ａを構成するプラスチックが変形・破砕して粒子径１０ｍｍ以下の粒子になることで、網目中の細胞が溶液に分散され易くなっている。
そして、第四実施形態の検体採取方法では、このように構成された検体採取部材１２の把持部１２ｂ又は蓋部材１３を把持しながら、検体採取部１２ａを介して糞便の表面の少なくとも一部をなぞることによって、糞便の表層に存在する検出対象物を検体採取部１２ａの細孔に保持する。
これにより、検体採取部１２ａの細孔よりも大きな不純物や夾雑物を取り込むことなく、検体を細かく分散した状態に採取することができる。
細孔に採取した検体は、図４(b)に示すように、検体採取部材１２を分散溶液または保存溶液１４の入った容器本体１１に入れる。さらに、蓋部材１３を容器本体１１に螺着することにより図４(c)に示すように、上方から押圧をかけて、検体採取部１２ａを粒子径５ｍｍ以下の粒子に破砕することで、溶液中に簡単に分散させることができる。なお、破砕された検体採取部１２ａの粒子径５ｍｍ以下の粒子は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
このため、第三実施形態の検体採取部材、検体採取容器及び検体採取方法によれば、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。さらに、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
これにより、検体採取部１２ａの細孔よりも大きな不純物や夾雑物を取り込むことなく、検体を細かく分散した状態に採取することができる。
細孔に採取した検体は、図４(b)に示すように、検体採取部材１２を分散溶液または保存溶液１４の入った容器本体１１に入れる。さらに、蓋部材１３を容器本体１１に螺着することにより図４(c)に示すように、上方から押圧をかけて、検体採取部１２ａを粒子径５ｍｍ以下の粒子に破砕することで、溶液中に簡単に分散させることができる。なお、破砕された検体採取部１２ａの粒子径５ｍｍ以下の粒子は、所望の検出対象物に比べて径が大きいため、溶液中から所望の検出対象物を精製する際に排除し易い。
このため、第三実施形態の検体採取部材、検体採取容器及び検体採取方法によれば、検体を採取後の精製の操作性が向上し、また、検体の採取量を、従来において必要とされていた検体の採取量よりも少なくすることが可能となる。さらに、従来、検体から核酸などを抽出する際に、撹拌などして検体を細かく分散させる工程を簡略化することができる。
次に、本発明の検体採取部材、検体採取容器及び検体採取方法を用いた実施例を説明する。
癌細胞検出試験用糞便の作製
８人の健常人からのそれぞれの糞便に対し、直ちにＭＫＮ４５を添加して混合し、混合した糞便を２ｇ以上量り取り、最終的には２ｇになるように調整、成型後、冷蔵保存した。ＭＫＮ４５は糞便試料２ｇ中に３×１０6個含むように調製した。ＭＫＮ４５細胞は胃がん由来であるが、大腸癌細胞同様、ＣＯＸ２遺伝子を高発現するため、大腸癌細胞のモデルとして用いた。
別の８人の健常人からのそれぞれの糞便を混合し、混合した糞便を１０g量り取り、その表面に上述のＭＫＮ４５細胞を混合した糞便を引き伸ばすようにして塗ることで、癌細胞検出試験用糞便を作製した。
癌細胞検出試験用糞便の作製
８人の健常人からのそれぞれの糞便に対し、直ちにＭＫＮ４５を添加して混合し、混合した糞便を２ｇ以上量り取り、最終的には２ｇになるように調整、成型後、冷蔵保存した。ＭＫＮ４５は糞便試料２ｇ中に３×１０6個含むように調製した。ＭＫＮ４５細胞は胃がん由来であるが、大腸癌細胞同様、ＣＯＸ２遺伝子を高発現するため、大腸癌細胞のモデルとして用いた。
別の８人の健常人からのそれぞれの糞便を混合し、混合した糞便を１０g量り取り、その表面に上述のＭＫＮ４５細胞を混合した糞便を引き伸ばすようにして塗ることで、癌細胞検出試験用糞便を作製した。
実施例１
癌細胞検出試験用糞便の表面部分を第一実施形態の検体採取部材を用いて採取した。採取した糞便を、反応溶液の入った容器に入れ、容器の底面に押し付けて、検体採取部の採取された糞便検体を押し出し、溶液に分散させた。
容器から検体採取部材を取り出し、溶液と糞便を攪拌機にて混合撹拌した後、遠心分離を行い、上清を取り除いた。次いで、核酸抽出試薬を加え、撹拌した後、遠心分離を行い、上清を新しいチューブに移した。その中にクロロホルムを加え、撹拌、遠心分離を行った。その後、上部の水相に含まれる核酸をエタノール沈殿により回収した。
癌細胞検出試験用糞便の表面部分を第一実施形態の検体採取部材を用いて採取した。採取した糞便を、反応溶液の入った容器に入れ、容器の底面に押し付けて、検体採取部の採取された糞便検体を押し出し、溶液に分散させた。
容器から検体採取部材を取り出し、溶液と糞便を攪拌機にて混合撹拌した後、遠心分離を行い、上清を取り除いた。次いで、核酸抽出試薬を加え、撹拌した後、遠心分離を行い、上清を新しいチューブに移した。その中にクロロホルムを加え、撹拌、遠心分離を行った。その後、上部の水相に含まれる核酸をエタノール沈殿により回収した。
比較例１（ＦＴＡカードを用いた糞便採取）
癌細胞検出試験用糞便を直接ＦＴＡカードの上に載せ、該当部分を切り出し、核酸抽出試薬にて核酸の抽出操作を行った。
癌細胞検出試験用糞便を直接ＦＴＡカードの上に載せ、該当部分を切り出し、核酸抽出試薬にて核酸の抽出操作を行った。
比較例２（ナイフ状の検体採取部材を用いた糞便採取）
癌細胞検出試験用糞便を特願２００７-３３０４４２に記載のナイフ状の検体採取部材５１（図５参照）を用いて採取した。このナイフ状の検体採取部材を用いたサンプリングでは、検体の少なくとも表面部分の一部が入るように採取して（図５(a)〜図５(c)参照）、ナイフの間の溝５１ａに、癌細胞検出試験用糞便Ｅを埋めた（図５(d)参照）。溝５１ａに保持された検体を取り出し、反応試薬の入った容器に入れ、ホモジナイズし、遠心分離を行い、上清を取り出し、フェノール・クロロホルム抽出法にて抽出し、スピンカラムにて精製した。
癌細胞検出試験用糞便を特願２００７-３３０４４２に記載のナイフ状の検体採取部材５１（図５参照）を用いて採取した。このナイフ状の検体採取部材を用いたサンプリングでは、検体の少なくとも表面部分の一部が入るように採取して（図５(a)〜図５(c)参照）、ナイフの間の溝５１ａに、癌細胞検出試験用糞便Ｅを埋めた（図５(d)参照）。溝５１ａに保持された検体を取り出し、反応試薬の入った容器に入れ、ホモジナイズし、遠心分離を行い、上清を取り出し、フェノール・クロロホルム抽出法にて抽出し、スピンカラムにて精製した。
比較例３（スプーンとヘラを用いた糞便採取）
スプーン（図６参照）とヘラ（不図示）を用いて特許文献２に記載の採取方法と同様に、癌細胞検出試験用糞便の表面部分と横断面部分を採取した。採取した検体を反応溶液に入れ、ホモジナイズし、遠心分離を行い、上清を取り出し、フェノール・クロロホルム抽出法にて抽出し、スピンカラムにて精製した。
スプーン（図６参照）とヘラ（不図示）を用いて特許文献２に記載の採取方法と同様に、癌細胞検出試験用糞便の表面部分と横断面部分を採取した。採取した検体を反応溶液に入れ、ホモジナイズし、遠心分離を行い、上清を取り出し、フェノール・クロロホルム抽出法にて抽出し、スピンカラムにて精製した。
電気泳動
それぞれの方法で得られた核酸の一部をＲＴ-ＰＣＲ（逆転写酵素-ポリメラーゼ連鎖反応法(Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction)）により逆転写し、反応産物の一部を、ホルマリン、ホルムアミドを混合した溶解バッファーに溶解させた。また、泳動バッファーは０．５μｇ/ｍｌのＥｔＢｒを含む０．０２ＭのＭＯＰＳ緩衝液を使用した。調製したアガロースゲルにサンプルをセットして、１００Ｖ定電圧で約３０分、電気泳動を行った。その後、ＵＶランプを照射し、発光を確認した。
それぞれの方法で得られた核酸の一部をＲＴ-ＰＣＲ（逆転写酵素-ポリメラーゼ連鎖反応法(Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction)）により逆転写し、反応産物の一部を、ホルマリン、ホルムアミドを混合した溶解バッファーに溶解させた。また、泳動バッファーは０．５μｇ/ｍｌのＥｔＢｒを含む０．０２ＭのＭＯＰＳ緩衝液を使用した。調製したアガロースゲルにサンプルをセットして、１００Ｖ定電圧で約３０分、電気泳動を行った。その後、ＵＶランプを照射し、発光を確認した。
このとき、実施例１の第一実施形態の検体採取部材を用いて採取した検体からは，目的のＲＮＡのバンドが確認できた（図７のレーン１参照）。
これに対し、比較例２のナイフ状の検体採取部材５１を用いて採取した検体からは、目的のバンドは非常に薄く、またＲＮＡが分解することで見られるスメアなバンドが確認された（図７のレーン２参照）。
比較例３の特許文献２に記載の方法で採取した検体からは、ＲＮＡのバンドは薄く確認されたが、ＲＮＡの分解も確認された（図７のレーン３参照）。
比較例１のＦＴＡカードを用いて採取した検体からは、バンドは確認されなかった（図７のレーン４参照）。
これに対し、比較例２のナイフ状の検体採取部材５１を用いて採取した検体からは、目的のバンドは非常に薄く、またＲＮＡが分解することで見られるスメアなバンドが確認された（図７のレーン２参照）。
比較例３の特許文献２に記載の方法で採取した検体からは、ＲＮＡのバンドは薄く確認されたが、ＲＮＡの分解も確認された（図７のレーン３参照）。
比較例１のＦＴＡカードを用いて採取した検体からは、バンドは確認されなかった（図７のレーン４参照）。
実施例１、比較例１〜３のそれぞれにおける抽出手法、精製手法、ＲＴ−ＰＣＲ産物の確認の可否を次の表１に示す。
表１
表１
本発明の検体採取方法は、例えば、糞便を用いた遺伝子検査など、採取した検体を効率よく分散させることで、精製プロセスの操作性が向上するため、検体からの核酸等を抽出して解析することが求められる分野に有用である。
１、１’、１”、１２ 検体採取部材
１ａ、１ａ’、１ａ”、１２ａ 検体採取部
１ａ1’ 分離部
１ｂ、１ｂ’、１ｂ”、１２ｂ 把持部
１２ｂ1 一端
１２ｂ2 他端
１０ 検体採取容器
１１ 容器本体
１１ａ 一端
１１ｂ 底面
１３ 蓋部材
１４ 分散溶液
５１ 検体採取部材
５１ａ 溝
Ｅ 糞便
１ａ、１ａ’、１ａ”、１２ａ 検体採取部
１ａ1’ 分離部
１ｂ、１ｂ’、１ｂ”、１２ｂ 把持部
１２ｂ1 一端
１２ｂ2 他端
１０ 検体採取容器
１１ 容器本体
１１ａ 一端
１１ｂ 底面
１３ 蓋部材
１４ 分散溶液
５１ 検体採取部材
５１ａ 溝
Ｅ 糞便
Claims (11)
- 検体から検出対象物を採取する方法であって、空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な材質からなる検体採取部を備えた検体採取部材を介して、検体の表面の少なくとも一部をなぞることによって、該検体の表層に存在する検出対象物を該検体採取部の該空隙または細孔に保持することを特徴とする検体採取方法。
- 前記検出対象物が細胞である請求項１に記載の検体採取方法。
- 空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な材質からなる検体採取部と、
前記検体採取部に接続する把持部とからなることを特徴とする検体採取部材。 - 前記空隙または細孔の径が、０．３〜３ｍｍであることを特徴とする請求項３に記載の検体採取部材。
- 前記検体採取部が、親水性を有する多孔質の材質からなることを特徴とする請求項３及び４に記載の検体採取部材。
- 前記検体採取部が、網目構造の材質からなることを特徴とする請求項３〜４のいずれかに記載の検体採取部材。
- 前記検体採取部が、合成高分子（プラスチック）から選択されるものからなることを特徴とする請求項３〜５のいずれかに記載の検体採取部材。
- 検体から検出対象物を採取する方法であって、請求項３〜７のいずれかに記載の検体採取部を有する検体採取部材を介して、検体の表面の少なくとも一部をなぞることによって、該検体の表層に存在する検出対象物を該検体採取部の前記空隙または細孔に保持することを特徴とする検体採取方法。
- 少なくともその一端が開口され、検体を分散又は保存、反応させる液体を収容しうるとともに、把持しやすい形状に形成された容器本体と、
検体を採取するための検体採取部材と、
前記検体採取部材を前記容器本体に収容した状態で、該容器本体に接続する蓋部材とからなり、
前記検体採取部材は、
その少なくとも一部が、空隙または細孔を有し、押圧により容易に変形可能な硬さに制御できる材質からなり、検体の少なくとも表面の一部をなぞることによって、該検体の表層に存在する検出対象物を該空隙または細孔に保持できるように構成された検体採取部を備えていることを特徴とする検体採取容器。 - 少なくともその一端が開口され、検体を分散又は保存、反応させる液体を収容しうるとともに、把持しやすい形状に形成された容器本体と、
請求項３〜７のいずれかに記載の検体採取部材と、
前記検体採取部材を前記容器本体に収容した状態で、該容器本体に接続する蓋部材とからなることを特徴とする検体採取容器。 - 前記容器本体が、該検体採取部材を介して採取した検体を分散させるための溶液を備えていることを特徴とする請求項９又は１０に記載の検体採取容器。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009116468A JP2010266272A (ja) | 2009-05-13 | 2009-05-13 | 検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009116468A JP2010266272A (ja) | 2009-05-13 | 2009-05-13 | 検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2010266272A true JP2010266272A (ja) | 2010-11-25 |
Family
ID=43363380
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2009116468A Withdrawn JP2010266272A (ja) | 2009-05-13 | 2009-05-13 | 検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2010266272A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105092283A (zh) * | 2015-06-10 | 2015-11-25 | 广州市康立明生物科技有限责任公司 | 一种用于粪便取样装置的取样棒 |
| JP2017136037A (ja) * | 2016-02-05 | 2017-08-10 | ヤマトエスロン株式会社 | Ｐｃｒ用容器 |
-
2009
- 2009-05-13 JP JP2009116468A patent/JP2010266272A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105092283A (zh) * | 2015-06-10 | 2015-11-25 | 广州市康立明生物科技有限责任公司 | 一种用于粪便取样装置的取样棒 |
| JP2017136037A (ja) * | 2016-02-05 | 2017-08-10 | ヤマトエスロン株式会社 | Ｐｃｒ用容器 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2020190562A (ja) | 生体試料から生体分子を収集し、移動し、保管するための装置 | |
| DK2633912T3 (en) | Device for separation by vertical filtration of biological particles contained in a liquid | |
| CN105154314B (zh) | 一种集提取、扩增和检测一体化的基因检测装置 | |
| JP4865709B2 (ja) | 結腸直腸細胞試料採取装置並びにこの装置を備えたキット | |
| JP2017519975A5 (ja) | ||
| CN102203579A (zh) | 检查体用容器 | |
| US10150118B2 (en) | Controlled transfer biological sample collection devices and methods of using such devices | |
| JP2010008106A (ja) | 糞便処理容器及び糞便処理方法 | |
| JP2009115658A (ja) | 糞便試料の調製方法、その調製方法を用いた核酸又はタンパク質の抽出方法、その抽出方法を用いた核酸又はタンパク質の検出方法、その検出方法における糞便試料を用いたがん又は感染症の検出方法、並びに、糞便試料の調製容器 | |
| JP2010266272A (ja) | 検体採取方法、検体採取部材、及び検体採取容器 | |
| AU1260399A (en) | Method for examining kidney diseases | |
| US20060121597A1 (en) | Cytoblock preparation system and methods of use | |
| Stamper et al. | Health assessment of captive and wild-caught West Indian manatees (Trichechus manatus) | |
| US20110111386A1 (en) | Cervical cell collection method | |
| CN101255416B (zh) | 从毛发提取生物物质的方法和用于该方法的毛发取样装置 | |
| EP1766362A1 (en) | Method and apparatus for collecting cells for macromolecular analysis | |
| US20230054102A1 (en) | Liquid- and swab-based collection devices for collecting and preserving biological material | |
| EP0653920A1 (en) | Process for obtaining a non-liquid cell sample | |
| GB2642345A (en) | Apparatus and method for in vitro diagnostic testing | |
| CN100587451C (zh) | 组织特定区域的捕获方法及专用设备 | |
| Vijayan et al. | Diatoms: a review on its forensic significance | |
| Staine et al. | Automated identification of rare sperm becomes possible: Is sperm selection the next frontier in male infertility? | |
| EP2510881A1 (en) | Device and method for recovery of a collected specimen | |
| WO2025059580A1 (en) | Apparatuses and methods for segregating tissue samples for multiple diagnostic modalities, and packaging for same | |
| HK1229006B (zh) | 用於收集、运输及存储来自生物样品的生物分子的装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20120807 |