JP2009013160A - Succinoyl trehalose lipid composition, solution and emulsion composition thereof, and method for producing the same - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、バイオサーファクタントに関するものであり、特に、サクシノイルトレハロース脂質(STL:Succinoyl Trehalose Lipid)組成物に関するものである。 The present invention relates to a biosurfactant, and more particularly, to a succinoyl trehalose lipid (STL) composition.
微生物が作り出す機能性物質であるバイオサーファクタントは、疎水性部分と親水性部分とを有する両親媒性物質である。特に、糖脂質型のバイオサーファクタントは、優れた生分解性を示す天然の界面活性剤として注目されており、さらに高い保湿効果および乳化作用を示すため、化粧品、食品等の添加剤としても用いられ得ることが知られている(非特許文献1)。 A biosurfactant, which is a functional substance produced by a microorganism, is an amphiphilic substance having a hydrophobic part and a hydrophilic part. In particular, glycolipid-type biosurfactants are attracting attention as natural surfactants exhibiting excellent biodegradability, and are also used as additives for cosmetics, foods, etc. because they exhibit a higher moisturizing effect and emulsifying action. It is known to obtain (Non-Patent Document 1).
糖脂質型のバイオサーファクタントの一つとして、サクシノイルトレハロース脂質がある。サクシノイルトレハロース脂質は、次のような手法により取得される。 One of the glycolipid type biosurfactants is succinoyl trehalose lipid. The succinoyl trehalose lipid is obtained by the following method.
特許文献1および非特許文献2では、ロドコッカス・エリスロポリス(Rhodococcus erythropolis)SD−74株を、脂肪酸または植物油脂を含む培地中で好気的に培養することによって、サクシノイルトレハロース脂質混合物を生産している。また、特許文献2においては、ロドコッカス エスピー(Rhodococcus sp.)TB−42株を、不飽和炭化水素、ハロゲン炭化水素等を含む培地中で好気的に培養することによって、サクシノイルトレハロース脂質混合物を生産している。
In
このように、サクシノイルトレハロース脂質は、炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られるため、不純物が混ざった混合物として生産される。化粧品、食品等に用いる場合は、上記混合物を精製することが好ましい。特に、脱水および脱油を施し、固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物を得ることは、保存、輸送、使用等の観点から見ても好ましい。 Thus, since succinoyl trehalose lipid is obtained by culturing microorganisms in a medium containing a carbon source, it is produced as a mixture in which impurities are mixed. When used in cosmetics, foods, etc., it is preferable to purify the above mixture. In particular, it is preferable to perform dehydration and deoiling to obtain a solid succinoyl trehalose lipid composition from the viewpoint of storage, transportation, use, and the like.
例えば、非特許文献3では、サクシノイルトレハロース脂質混合物を含む培養液から菌体、残存基質等を除去した後、培養液を酸性にすることでサクシノイルトレハロース脂質を析出させている。そして、この酸析物を水で2回洗浄後にメタノールに溶解させ、この溶液をヘキサンにより3回洗浄した後に、メタノールを留去することによって、固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物を回収している。
しかしながら、従来の手法により取得された固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、薄茶色であった。有色のサクシノイルトレハロース脂質組成物を化粧品、食品等の添加剤として用いる場合、これらの製品を不必要に着色してしまい好ましくない。 However, the solid succinoyl trehalose lipid composition obtained by the conventional method was light brown. When the colored succinoyl trehalose lipid composition is used as an additive for cosmetics, foods, etc., these products are unnecessarily colored, which is not preferable.
また、本発明者らが検討した結果、従来の手法により取得された固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、水性の溶媒にほとんど溶解せず、得られた溶液も濁っていることを見出した。すなわち、従来の固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、水溶液として利用することは困難であった。そのため、機械攪拌等の手法により乳化組成物を得ることも困難であった。 Further, as a result of investigations by the present inventors, it has been found that the solid succinoyl trehalose lipid composition obtained by the conventional method is hardly dissolved in an aqueous solvent, and the resulting solution is also cloudy. That is, the conventional solid succinoyl trehalose lipid composition has been difficult to use as an aqueous solution. Therefore, it is also difficult to obtain an emulsified composition by a technique such as mechanical stirring.
以上のように、従来の手法により取得された固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、(1)有色であり、(2)水性の溶媒にほとんど溶解せず、(3)該組成物を含む溶液を濁らせるという問題を有していた。 As described above, the solid succinoyl trehalose lipid composition obtained by the conventional method is (1) colored, (2) hardly dissolved in an aqueous solvent, and (3) a solution containing the composition. Had the problem of turbidity.
本発明には、上記の問題に鑑みてなされたものであり、上記の問題の少なくとも何れか一つが解消された、高品質なサクシノイルトレハロース脂質組成物を提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above problems, and an object thereof is to provide a high-quality succinoyl trehalose lipid composition in which at least one of the above problems is solved.
本発明者らは、独自の精製方法により得られた固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物において、上記問題が解消されていることを見出し、発明を完成させた。 The present inventors have found that the above problems have been solved in a solid succinoyl trehalose lipid composition obtained by a unique purification method, and have completed the invention.
すなわち、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、以下(A)〜(E)の何れか一つ以上を特徴としている:(A)炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られ、水に少なくとも1質量%溶解し得る;(B)炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られ、白色である;(C)メタノールに5質量%溶解させたときの溶液の吸光度が、波長400nm〜700nmの領域にわたって0.05以下である;(D)水に少なくとも5質量%溶解し得る;または(E)水に1質量%溶解させたときの水溶液の波長660nmにおける光透過率が95%以上である。 That is, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention is characterized by any one or more of the following (A) to (E): (A) culturing a microorganism in a medium containing a carbon source. Obtained and can be dissolved in water by at least 1% by mass; (B) obtained by culturing a microorganism in a medium containing a carbon source and white; (C) of a solution when dissolved by 5% by mass in methanol. Absorbance is 0.05 or less over the wavelength range of 400 nm to 700 nm; (D) at least 5% by weight dissolved in water; or (E) light at a wavelength of 660 nm of an aqueous solution when dissolved at 1% by weight in water. The transmittance is 95% or more.
本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、上記のような特徴を有しており、少なくとも、白色であるか、水性の溶媒に容易に溶解するか、または、水性の溶媒に溶解させたとき透明な溶液となる。したがって、水溶液として扱うことが可能であり、任意の製品の添加剤として用いた場合であっても該製品に不要な着色をしないため、様々な用途に好適に用いることができる。 The solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention has the characteristics as described above, and is at least white, easily dissolved in an aqueous solvent, or dissolved in an aqueous solvent. A clear solution. Therefore, it can be handled as an aqueous solution, and even when used as an additive for an arbitrary product, the product is not unnecessarily colored, and thus can be suitably used for various applications.
本発明に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液は、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物が溶媒に溶解されてなることを特徴としている。上記溶媒は、水性の溶媒であってもよい。 The succinoyl trehalose lipid solution according to the present invention is characterized in that the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention is dissolved in a solvent. The solvent may be an aqueous solvent.
本発明に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液はまた、炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られるサクシノイルトレハロース脂質が、1質量%以上、水性の溶媒に溶解されてなるものであり得る。 The succinoyl trehalose lipid solution according to the present invention may also be one in which succinoyl trehalose lipid obtained by culturing a microorganism in a medium containing a carbon source is dissolved in an aqueous solvent in an amount of 1% by mass or more.
上記サクシノイルトレハロース脂質溶液は、該サクシノイルトレハロース脂質が5質量%以上、上記水性の溶媒に溶解されているものであり得る。 The succinoyl trehalose lipid solution may be one in which the succinoyl trehalose lipid is dissolved in the aqueous solvent in an amount of 5% by mass or more.
上記サクシノイルトレハロース脂質溶液は、波長660nmにおける光透過率が95%以上であり得る。 The succinoyl trehalose lipid solution may have a light transmittance of 95% or more at a wavelength of 660 nm.
以上のように、本発明に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液は、水性の溶媒にサクシノイルトレハロース脂質が溶解しており、透明である。したがって、水溶液であり、任意の製品の添加剤として用いた場合であっても該製品に不要な着色をしないため、様々な用途に好適に用いることができる。 As described above, the succinoyl trehalose lipid solution according to the present invention is transparent because the succinoyl trehalose lipid is dissolved in an aqueous solvent. Therefore, even if it is an aqueous solution and used as an additive for an arbitrary product, the product is not unnecessarily colored, and thus can be suitably used for various applications.
上記サクシノイルトレハロース脂質溶液は、アルカリ金属イオンまたはアルカリ土類金属イオンをさらに含有することが好ましい。 The succinoyl trehalose lipid solution preferably further contains alkali metal ions or alkaline earth metal ions.
上記の構成によれば、サクシノイルトレハロース脂質を水性の溶媒に好適に溶解させることができる。 According to said structure, a succinoyl trehalose lipid can be suitably dissolved in an aqueous solvent.
本発明に係る乳化組成物は、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質と、水性成分と、油性成分とを含んでいることを特徴としている。 The emulsified composition according to the present invention includes the solid succinoyl trehalose lipid according to the present invention, an aqueous component, and an oil component.
上記の構成によれば、乳白色の安定した乳化組成物を提供することができる。 According to said structure, the milky white stable emulsion composition can be provided.
本発明に係る乳化組成物の製造方法は、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質を水性の溶媒に溶解してサクシノイルトレハロース脂質水溶液を調製する工程、および該サクシノイルトレハロース脂質水溶液と、油性成分とを乳化する工程を包含することを特徴としている。 The method for producing an emulsified composition according to the present invention comprises preparing a succinoyl trehalose lipid aqueous solution by dissolving the solid succinoyl trehalose lipid according to the present invention in an aqueous solvent, and the succinoyl trehalose lipid aqueous solution, It includes the step of emulsifying the ingredients.
上記の構成によれば、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質は、容易に水性の溶媒に溶解し得るので、容易に乳化組成物を製造することができる。 According to said structure, since the solid succinoyl trehalose lipid based on this invention can be easily melt | dissolved in an aqueous solvent, an emulsion composition can be manufactured easily.
本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、少なくとも、白色であるか、水性の溶媒に容易に溶解するか、または、水性の溶媒に溶解させたとき透明な溶液となる。したがって、水溶液または乳化組成物として扱うことが可能であり、任意の製品の添加剤として用いた場合であっても該製品に不要な着色をしないため、様々な用途に好適に用いることができる。 The solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention is at least white, easily dissolved in an aqueous solvent, or becomes a transparent solution when dissolved in an aqueous solvent. Therefore, it can be handled as an aqueous solution or an emulsified composition, and even when it is used as an additive for an arbitrary product, the product is not undesirably colored, and thus can be suitably used for various applications.
〔1:固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物〕
本発明は、固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物を提供する。本明細書において用いられる場合、用語「組成物」とは、各種成分が一物質中に含有されている形態が意図され、「サクシノイルトレハロース脂質組成物」とは、サクシノイルトレハロース脂質を一成分とする組成物が意図される。一実施形態において、サクシノイルトレハロース脂質は、サクシノイルトレハロース脂質組成物に50質量%以上含まれていればよく、80質量%以上含まれていることが好ましく、90質量%以上含まれていることがより好ましい。また、用語「固形」とは、粉状、顆粒状等を含む、一定の形状を有している物質の性質が意図され、「固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物」とは、サクシノイルトレハロース脂質を一成分とする組成物であって、一定の形状を有しているものが意図される。
[1: Solid succinoyl trehalose lipid composition]
The present invention provides a solid succinoyl trehalose lipid composition. As used herein, the term “composition” is intended to mean a form in which various components are contained in one substance, and “succinoyl trehalose lipid composition” means succinoyl trehalose lipid as one component. Is intended as a composition. In one embodiment, the succinoyl trehalose lipid may be contained in the succinoyl trehalose lipid composition in an amount of 50% by mass or more, preferably 80% by mass or more, and preferably 90% by mass or more. Is more preferable. In addition, the term “solid” is intended to indicate the properties of a substance having a certain shape including powder, granules, etc., and “solid succinoyl trehalose lipid composition” means succinoyl trehalose lipid. Are intended to have a certain shape.
一実施形態において、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られる。 In one embodiment, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention is obtained by culturing a microorganism in a medium containing a carbon source.
本明細書中で使用する限り、「微生物」は、サクシノイルトレハロース脂質を生産し得る微生物であることが意図される。このような微生物は、特に限定されないが、ロドコッカス属に属する微生物であることが好ましく、ロドコッカス・エリスロポリス SD−74株、ロドコッカス・エスピー TB−42株、またはロドコッカス・バイコヌレンシス NBRC 100611株であることが好ましい。 As used herein, “microorganism” is intended to be a microorganism capable of producing succinoyl trehalose lipids. Such a microorganism is not particularly limited, but is preferably a microorganism belonging to the genus Rhodococcus, and is preferably Rhodococcus erythropolis SD-74 strain, Rhodococcus sp. TB-42 strain, or Rhodococcus baikonurensis NBRC 100611 strain. preferable.
本明細書中で使用する限り、「炭素源」とは、上記微生物が培養中に吸収利用する炭素化合物であり、特に天然油脂、炭化水素、脂肪酸、脂肪酸エステル、または高級アルコールであることが好ましい。ここで、炭素化合物は、炭素と水素、窒素等との化合物が意図される。一実施形態において、本発明に係る製造方法において用いられる炭素源は天然油脂であり得、動物油脂であっても植物油脂であってもよいが、入手がより容易であるため、植物油脂であることが好ましい。上記製造方法において用いられる植物油脂は、例えばパーム油、ヤシ油、大豆油、オリーブ油、サフラワー油、菜種油、トウモロコシ油、綿実油、トール油等であることが好ましいが、これに限定されない。 As used herein, the “carbon source” is a carbon compound that is absorbed and utilized by the microorganism during culture, and is preferably a natural fat, hydrocarbon, fatty acid, fatty acid ester, or higher alcohol. . Here, the carbon compound is intended to be a compound of carbon and hydrogen, nitrogen or the like. In one embodiment, the carbon source used in the production method according to the present invention may be natural fats and oils, may be animal fats or vegetable oils, but is vegetable oils and fats because it is easier to obtain. It is preferable. The vegetable oil used in the above production method is preferably, but not limited to, palm oil, coconut oil, soybean oil, olive oil, safflower oil, rapeseed oil, corn oil, cottonseed oil, tall oil, and the like.
また、炭素源として用いる炭化水素としては、n−デカン、n−ウンデカン、n−トリデカン、n−テトラデカン、n−ペンタデカン、n−ヘキサデカン、n−ヘプタデカン、n−オクタデカン、n−ノナデカン等のノルマルアルカン、1−デセン、1−ウンデセン、1−ドデセン、1−トリデセン、1−テトラデセン、1−ペンタデセン、1−ヘキサデセン、1−ヘプタデセン、1−オクタデセン等のノルマルアルケン、等を好適に使用することが可能である。 The hydrocarbon used as the carbon source includes normal alkanes such as n-decane, n-undecane, n-tridecane, n-tetradecane, n-pentadecane, n-hexadecane, n-heptadecane, n-octadecane, n-nonadecane, etc. 1-decene, 1-undecene, 1-dodecene, 1-tridecene, 1-tetradecene, 1-pentadecene, 1-hexadecene, 1-heptadecene, normal alkene such as 1-octadecene, and the like can be suitably used. It is.
炭素源として用いる脂肪酸としては、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸(ラウリン酸)、トリデカン酸、テトラデカン酸(ミリスチン酸)、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸(パルミチン酸)、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸(ステアリン酸)、オレイン酸等を好適に使用することが可能である。また、脂肪酸エステル、ウンデシルアルコール、ドデシルアルコール(ラウリルアルコール)等の高級アルコールを炭素源として用いてもよい。 Fatty acids used as carbon sources include decanoic acid, undecanoic acid, dodecanoic acid (lauric acid), tridecanoic acid, tetradecanoic acid (myristic acid), pentadecanoic acid, hexadecanoic acid (palmitic acid), heptadecanoic acid, octadecanoic acid (stearic acid) It is possible to suitably use oleic acid or the like. Further, higher alcohols such as fatty acid esters, undecyl alcohol, and dodecyl alcohol (lauryl alcohol) may be used as the carbon source.
一つの局面において、炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られるサクシノイルトレハロース脂質は、糖部分がトレハロースであり、トレハロース1モル当りコハク酸および脂肪酸がそれぞれ1〜2モルエステル結合した糖脂質である。この糖脂質の脂肪酸部分は、培養基質である炭素源を変えることによって、それぞれ異なった脂肪酸が結合する。 In one aspect, a succinoyl trehalose lipid obtained by culturing a microorganism in a medium containing a carbon source has a sugar moiety of trehalose, and succinic acid and fatty acid are each linked by 1 to 2 moles of ester per mole of trehalose. It is a lipid. Different fatty acids are bound to the fatty acid portion of the glycolipid by changing the carbon source as a culture substrate.
一実施形態において、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、白色であり得る。一つの局面において、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物をメタノールに5質量%溶解させた溶液は、可視光領域(波長400nm〜700nmの領域)にわたって、吸光度が0.15を超えることがなく、好ましくは0.1を超えることがなく、より好ましくは0.05を超えることがない。なお、上記吸光度は分光光度計(UV−2550、島津製作所)によって測定された値である。 In one embodiment, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention may be white. In one aspect, the solution in which 5% by mass of the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention is dissolved in methanol has an absorbance exceeding 0.15 over the visible light region (wavelength range of 400 nm to 700 nm). And preferably does not exceed 0.1 and more preferably does not exceed 0.05. In addition, the said light absorbency is the value measured with the spectrophotometer (UV-2550, Shimadzu Corporation).
一方、従来技術に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、薄茶色であり(非特許文献3参照)、白色ではなかった。従来技術に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物をメタノールに5質量%溶解させた溶液は、波長が400nm〜550nmの領域において吸光度が0.05を超え、波長が400nm〜450nmの領域において吸光度が0.1を超え、波長が400nm〜420nmの領域において吸光度が0.15を超えていた。 On the other hand, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the prior art is light brown (see Non-Patent Document 3) and not white. A solution in which 5% by mass of a solid succinoyl trehalose lipid composition according to the prior art is dissolved in methanol has an absorbance exceeding 0.05 in a wavelength range of 400 nm to 550 nm, and an absorbance in a wavelength range of 400 nm to 450 nm. Absorbance exceeded 0.15 in the region where the wavelength exceeded 0.1 and the wavelength ranged from 400 nm to 420 nm.
本実施形態に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、白色であるので、様々な用途に好適に用いることができる。例えば、食品、化粧品等の添加剤として本実施形態に係る組成物を用いた場合、食品、化粧品等を不要に着色しないため、好適に用いることができる。 Since the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present embodiment is white, it can be suitably used for various applications. For example, when the composition according to the present embodiment is used as an additive for foods, cosmetics and the like, foods, cosmetics and the like are not unnecessarily colored, and therefore can be suitably used.
一実施形態において、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、水性の溶媒に対する良好な可溶性を有している。一つの局面において、上記組成物は、水に少なくとも1質量%均質に溶解し得、好ましくは、3質量%、5質量%、7質量%、または7.5質量%均質に溶解し得る。一方、従来技術に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、後述するように、水に1質量%以上溶解しない。本実施形態に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、水に均質に溶解するため、水溶液として扱うことが可能であり、水を主成分とした食品または化粧品において好適に用いることができるが、用途はこれに限定されず、水溶液として用い得る用途であれば如何なる用途にも用い得る。 In one embodiment, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention has good solubility in an aqueous solvent. In one aspect, the composition can be dissolved at least 1% by weight homogeneously in water, preferably 3%, 5%, 7%, or 7.5% by weight homogeneously dissolved. On the other hand, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the prior art does not dissolve 1% by mass or more in water, as will be described later. Since the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present embodiment is homogeneously dissolved in water, it can be handled as an aqueous solution and can be suitably used in foods or cosmetics based on water. The application is not limited to this, and any application that can be used as an aqueous solution can be used.
さらに、一実施形態において、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、後述するように、水に溶解させたとき無色透明の溶液となる。上記無色透明を、水溶液の濁度を示す指標として一般に用いられる波長660nmにおける光透過率によって表せば、該光透過率は、95%以上であり得、好ましくは97%以上であり得、より好ましくは99%以上であり得る。なお、上記光透過率は、上記サクシノイルトレハロース脂質組成物を純度が95%以上の水に1質量%溶解し、上記分光光度計を用いて、波長660nmでの光透過率を測定して得られる。 Furthermore, in one embodiment, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention becomes a colorless and transparent solution when dissolved in water, as described later. If the colorless and transparent is represented by the light transmittance at a wavelength of 660 nm, which is generally used as an index indicating the turbidity of an aqueous solution, the light transmittance can be 95% or more, preferably 97% or more, more preferably May be 99% or more. The light transmittance is obtained by dissolving 1% by mass of the succinoyl trehalose lipid composition in water having a purity of 95% or more and measuring the light transmittance at a wavelength of 660 nm using the spectrophotometer. It is done.
後述する実施例において示すように、一実施形態において、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物をpH7.0で水に1質量%溶解させたときの水溶液の、波長660nmにおける光透過率は99.5%となる。一方、従来技術に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、後述する実施例に示すように、水に1質量%混合したときの水溶液の、波長660nmにおける光透過率が4.8%となる。以上のように、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、従来技術に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物と比べ、非常に透明度の高い溶液を形成し得る。 As shown in the Example mentioned later, in one Embodiment, the light transmittance in wavelength 660nm of the aqueous solution when 1 mass% of solid succinoyl trehalose lipid composition concerning this invention is dissolved in water by pH 7.0 is shown. Is 99.5%. On the other hand, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the prior art has a light transmittance of 4.8% at a wavelength of 660 nm of an aqueous solution mixed with 1% by mass of water, as shown in Examples described later. . As described above, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention can form a highly transparent solution compared to the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the prior art.
以上のように、本実施形態に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物を用いれば、後述するような無色透明のサクシノイルトレハロース脂質溶液を作製し得る。 As described above, when the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present embodiment is used, a colorless and transparent succinoyl trehalose lipid solution as described later can be prepared.
本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、一実施形態において、炭素源を含む培地中で微生物を培養する工程と、上記培養工程によって得られた生成物を析出させる析出工程と、上記析出工程によって得られた析出物からSTL組成物を抽出する抽出工程と、上記抽出工程によって得られた抽出物から脂溶性物質を取り除く脂溶性物質除去工程とを包含する製造方法により製造され得る。以下上記製造方法について詳細に説明する。 In one embodiment, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention includes a step of culturing a microorganism in a medium containing a carbon source, a precipitation step of precipitating a product obtained by the culture step, and It can be produced by a production method including an extraction step for extracting the STL composition from the precipitate obtained by the precipitation step and a fat-soluble substance removal step for removing the fat-soluble substance from the extract obtained by the extraction step. Hereinafter, the production method will be described in detail.
(培養工程)
炭素源を含む培地中で微生物を培養する工程は慣用的な方法に従って行われ、炭素源を添加した培地に、必要に応じて窒素源、無機塩等の栄養分を添加してもよい。培地中に添加される炭素源としては、上述した各炭素源が好適に用いられ、培地中の炭素源の添加濃度は、5〜20質量%であることが好ましく、10質量%であればより好ましい。培地中に添加される窒素源としては、微生物の培養に際して通常使用される窒素含有の有機物または無機物が用いられ、例えば硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、リン酸水素カリウム、リン酸二水素カリウム等を使用可能である。上述した他に、微生物の生育に必要であれば、酵母エキス、ペプトン等の栄養素を培地に添加してもよい。
(Culture process)
The step of culturing microorganisms in a medium containing a carbon source is performed according to a conventional method, and nutrients such as a nitrogen source and inorganic salts may be added to the medium to which the carbon source has been added, as necessary. As the carbon source added to the medium, each of the carbon sources described above is preferably used, and the concentration of the carbon source in the medium is preferably 5 to 20% by mass, and more preferably 10% by mass. preferable. As the nitrogen source added to the medium, organic or inorganic substances containing nitrogen that are usually used for culturing microorganisms are used. For example, sodium nitrate, potassium nitrate, potassium hydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, etc. can be used. is there. In addition to the above, nutrients such as yeast extract and peptone may be added to the medium if necessary for the growth of microorganisms.
培養は、振とう攪拌による好気的条件下で行われ、培養温度は、20〜35℃であることが好ましく、30℃であることがより好ましい。培養pHは、5.5〜9.5であることが好ましい。また、培養期間は、15〜50g/lの濃度のサクシノイルトレハロース脂質混合物が生成されるまで培養することが好ましく、後述する実施例においては、培養5日後にサクシノイルトレハロース脂質濃度が15g/lに達していることから、5〜12日間培養することが好ましい。 The culture is performed under aerobic conditions by shaking and stirring, and the culture temperature is preferably 20 to 35 ° C, more preferably 30 ° C. The culture pH is preferably 5.5 to 9.5. In addition, the culture period is preferably cultured until a succinoyl trehalose lipid mixture having a concentration of 15 to 50 g / l is produced. In the examples described later, the succinoyl trehalose lipid concentration is 15 g / l after 5 days of culture. Therefore, it is preferable to culture for 5 to 12 days.
炭素源を含む培地中で微生物を培養する工程においては、当該微生物を本培養する前にシード培養してもよい。微生物をシード培養することによって、最適な条件に微生物を調整することが可能であり、その結果効率良くサクシノイルトレハロース脂質を製造することができる。 In the step of culturing a microorganism in a medium containing a carbon source, seed culture may be performed before the microorganism is main-cultured. By seed-culturing the microorganism, it is possible to adjust the microorganism to optimum conditions, and as a result, succinoyl trehalose lipid can be produced efficiently.
(析出工程)
次に、上記培養工程によって微生物によって産生された生成物(STL)を析出させる(析出工程)。つまり、微生物が培地中に生成するSTLを含む培地あるいは培養液に対して析出を行う。このとき、析出の対象となる当該培地あるいは当該培養液は、微生物を培養した培養液を遠心分離し、培養液中から菌体および残存基質を取り除いたものであってもよい。ここで、「析出させる」とは、培地中に溶解した物質を、固体として取り出すことが意図される。すなわち、本発明に係る析出工程においては、培養工程において微生物が培地中に生成した糖脂質を、培地中から固形物として取り出すことができる。
(Precipitation process)
Next, the product (STL) produced by the microorganism in the culture step is deposited (precipitation step). That is, precipitation is performed on a medium or culture solution containing STL produced by microorganisms in the medium. At this time, the culture medium or the culture solution to be deposited may be obtained by centrifuging the culture solution in which the microorganism is cultured and removing the cells and the remaining substrate from the culture solution. Here, “precipitating” is intended to take out a substance dissolved in a medium as a solid. That is, in the precipitation step according to the present invention, the glycolipid produced in the medium by the microorganism in the culture step can be taken out from the medium as a solid.
析出工程では、培養液中からSTLを固形物として分離することができる方法であれば特に限定されず、慣用的な方法が用いられ得る。たとえば、上記培養工程において微生物を培養した培地を酸性にし、培地中の酸性物質を析出させることによって酸性の糖脂質であるSTLを析出させることができる(酸析)。具体的には、培養液中(対象物)のpHを低下させることにより析出させる。培養液のpHを低下させるためには、酸性物質、たとえば、HClを添加すればよい。その後、たとえば、遠心処理を行い析出物を取り出す。以下、析出工程を経て得られた生成物を、「析出生成物」と称する。 The precipitation step is not particularly limited as long as it is a method capable of separating STL as a solid from the culture solution, and a conventional method can be used. For example, STL, which is an acidic glycolipid, can be precipitated by acidifying the medium in which the microorganisms are cultured in the culturing step and precipitating an acidic substance in the medium (acid precipitation). Specifically, it is precipitated by lowering the pH of the culture solution (object). In order to lower the pH of the culture solution, an acidic substance such as HCl may be added. Thereafter, for example, a centrifugal treatment is performed to take out the precipitate. Hereinafter, the product obtained through the precipitation step is referred to as “deposition product”.
(抽出工程)
次に、析出生成物からSTL組成物を抽出する(抽出工程)。抽出工程では、析出生成物に、水と相溶せず、かつ糖脂質が可溶である溶媒を添加することによって、析出生成物中に含まれるSTLを溶媒層に溶解させる。ついで、STLが溶解した溶媒層を分離することによって、水溶性物質を除去したSTL組成物を得ることができる。なお、「水溶性物質」は、水に対して可溶な物質であり、培地中から析出させた固形物状の析出物が水と共に包含している塩等の水溶性の不純物であるといえる。ここで、「塩」とは酸の水素原子を金属または他の金属性基で置き換えた化合物である。
(Extraction process)
Next, an STL composition is extracted from the precipitated product (extraction process). In the extraction step, the STL contained in the precipitation product is dissolved in the solvent layer by adding a solvent that is incompatible with water and soluble in glycolipid to the precipitation product. Subsequently, the STL composition from which the water-soluble substance has been removed can be obtained by separating the solvent layer in which the STL is dissolved. The “water-soluble substance” is a substance that is soluble in water, and can be said to be a water-soluble impurity such as a salt contained in the solid precipitate precipitated from the medium together with water. . Here, the “salt” is a compound in which a hydrogen atom of an acid is replaced with a metal or other metallic group.
微生物を培養した培地から析出させた上述の析出生成物は、含水しており水溶性の不純物を多く含んでいる。このような析出生成物は、さらに脂溶性の不純物を含んでおり、固形物状であるため、これを水で洗浄しても析出物内部に含まれる水溶性物質を十分に取り除くことは困難であったが、水と相溶せず、かつ糖脂質が可溶である溶媒を用いた抽出工程により、水溶性物質を除去したSTL組成物を得ることができる。 The above-described precipitation product precipitated from the culture medium in which the microorganism is cultured contains water and contains a large amount of water-soluble impurities. Such a precipitation product further contains fat-soluble impurities and is in the form of a solid, so even if it is washed with water, it is difficult to sufficiently remove the water-soluble substance contained in the precipitate. However, an STL composition from which water-soluble substances have been removed can be obtained by an extraction process using a solvent that is incompatible with water and in which the glycolipid is soluble.
抽出工程においては、溶媒を添加して抽出する対象物である析出物から完全に水溶性物質を取り除く必要はなく、抽出処理の前後において、析出物中の水溶性物質の量が減少していればよい。これにより、不純物の含有量が低下したSTL組成物を得ることが可能である。 In the extraction process, it is not necessary to completely remove the water-soluble substance from the precipitate, which is an object to be extracted by adding a solvent, and the amount of the water-soluble substance in the precipitate is reduced before and after the extraction process. That's fine. Thereby, it is possible to obtain an STL composition having a reduced impurity content.
ここで、析出物に添加する溶媒としては、水溶性物質を溶解しえる他の溶媒(たとえば水)と相溶せず、かつ糖脂質が可溶である溶媒を用いることができる。そのような溶媒としては、エステル系溶媒、アルコール系溶媒、または炭化水素系溶媒が挙げられ、具体的には、例えば酢酸エチル、1−ブタノール、キシレン等が挙げられる。析出物に添加する溶媒の量は、析出物量に対して0.1〜10倍質量であることが好ましく、析出物量と同等であることがより好ましい。 Here, as the solvent to be added to the precipitate, a solvent that is incompatible with another solvent (for example, water) that can dissolve the water-soluble substance and is soluble in glycolipid can be used. Examples of such solvents include ester solvents, alcohol solvents, and hydrocarbon solvents, and specific examples include ethyl acetate, 1-butanol, and xylene. The amount of the solvent added to the precipitate is preferably 0.1 to 10 times the mass of the precipitate, and more preferably the same as the amount of the precipitate.
抽出工程について、溶媒として酢酸エチルを用いた場合を例にして説明する。まず、培養液から培養生成物を析出させ、析出した析出物に酢酸エチルを添加し十分に攪拌し、酢酸エチル層および水層の2層に分離させる。ついで、上層に形成された酢酸エチル層を分液漏斗等によって分離する。酢酸エチル層には水溶性物質は溶解せず、STLが溶解しているため、酢酸エチル層を分離することによって糖脂質から水溶性物質を除去することが可能である。ついで、例えばエヴァポレーター等を用いて、酢酸エチル層から酢酸エチルを除去することによって、水溶性物質が除去された固体状のSTL組成物を得ることができる。 The extraction process will be described with reference to the case where ethyl acetate is used as a solvent. First, a culture product is precipitated from the culture solution, ethyl acetate is added to the deposited precipitate, and the mixture is sufficiently stirred and separated into two layers, an ethyl acetate layer and an aqueous layer. Next, the ethyl acetate layer formed in the upper layer is separated by a separatory funnel or the like. Since the water-soluble substance is not dissolved in the ethyl acetate layer and the STL is dissolved, it is possible to remove the water-soluble substance from the glycolipid by separating the ethyl acetate layer. Subsequently, the solid STL composition from which the water-soluble substance is removed can be obtained by removing ethyl acetate from the ethyl acetate layer using, for example, an evaporator.
なお、上述の説明では、析出工程と抽出工程とを順次行う場合について説明したが、必ずしもこれに限られない。例えば、培養生成物を培地または培養液中から析出させずに、生成物が溶解した培地または培養液に溶媒を添加し溶媒層を分離することによって、水溶性物質を取り除いたSTL組成物を得ることも可能である。このとき、微生物を培養した培養液から、遠心分離等によって、菌体および残存基質を取り除いたものを、溶媒を用いて水溶性物質を除去する対象としてもよい。すなわち、抽出工程において、溶媒を用いて水溶性物質を除去する対象となる物質は、培養中の微生物が培地中に生成するSTLを含む培地あるいは培養液、または、反応系から分離された固体状のSTL混合物であってもよい。 In the above description, the case where the precipitation process and the extraction process are sequentially performed has been described, but the present invention is not necessarily limited thereto. For example, an STL composition from which a water-soluble substance has been removed is obtained by adding a solvent to a medium or culture solution in which the product is dissolved without precipitating the culture product from the medium or culture solution and separating the solvent layer. It is also possible. At this time, what remove | excluded the microbial cell and the residual substrate from the culture solution which culture | cultivated microorganisms by centrifugation etc. is good also as a target which removes a water-soluble substance using a solvent. That is, in the extraction step, a substance that is a target for removing a water-soluble substance using a solvent is a medium or culture solution containing STL produced by a microorganism in culture in the medium, or a solid state separated from a reaction system. STL mixtures of
この抽出工程までを経て得られた生成物を「抽出生成物」と称する。 The product obtained through this extraction step is referred to as “extraction product”.
(脂溶性物質除去工程)
次に、上記脱水生成物から、脂溶性物質を取り除く(脂溶性物質除去工程)。ここで「脂溶性物質」とは、油脂に対して可溶な物質であることが意図される。
(Fat-soluble substance removal process)
Next, the fat-soluble substance is removed from the dehydrated product (fat-soluble substance removing step). Here, the “fat-soluble substance” is intended to be a substance that is soluble in fats and oils.
水溶性物質が取り除かれた固形物状のSTL組成物から脂溶性物質を取り除く方法は、STLと脂溶性物質とを分離させることが可能な方法であれば特に限定されず、慣用的な方法を用いることができる。例えば、まず、抽出生成物から溶媒を留去し、ついで、溶媒を留去して得られた固形物に糖脂質と脂溶性物質とを分離させることが可能な溶媒を添加し、当該溶媒層を除去することによって、脂溶性物質が除去された糖脂質を得ることができる。これにより、糖脂質から効率よく脂溶性の不純物を取り除くことができる。 The method for removing the fat-soluble substance from the solid STL composition from which the water-soluble substance has been removed is not particularly limited as long as it is a method capable of separating the STL and the fat-soluble substance, and a conventional method is used. Can be used. For example, the solvent is first distilled off from the extracted product, and then a solvent capable of separating the glycolipid and the fat-soluble substance is added to the solid obtained by distilling off the solvent, and the solvent layer is added. By removing, a glycolipid from which the fat-soluble substance has been removed can be obtained. Thereby, fat-soluble impurities can be efficiently removed from the glycolipid.
ここで、糖脂質と脂溶性物質とを分離させることが可能な溶媒とは、糖脂質が難溶または不溶であり、脂溶性物質が可溶な溶媒である。このような溶媒として、例えばヘキサンを用いた場合、培養液から析出した生成物から、溶媒を用いて水溶性物質を除去した後、この溶媒を留去して得られる固形物をヘキサンに懸濁し、ろ過または遠心分離してヘキサンを除去する。これにより、STL組成物から効率よく脂溶性の不純物を取り除くことができる。 Here, the solvent capable of separating the glycolipid and the fat-soluble substance is a solvent in which the glycolipid is hardly soluble or insoluble and the fat-soluble substance is soluble. For example, when hexane is used as such a solvent, water-soluble substances are removed from the product precipitated from the culture solution using the solvent, and then the solid obtained by distilling off the solvent is suspended in hexane. Filter, or centrifuge to remove hexane. Thereby, fat-soluble impurities can be efficiently removed from the STL composition.
〔2.サクシノイルトレハロース脂質溶液〕
本発明はまた、サクシノイルトレハロース脂質溶液を提供する。用語「サクシノイルトレハロース脂質溶液」とは、サクシノイルトレハロース脂質を包含する溶液が意図される。
[2. Succinoyl trehalose lipid solution)
The present invention also provides a succinoyl trehalose lipid solution. The term “succinoyl trehalose lipid solution” intends a solution comprising succinoyl trehalose lipid.
一実施形態において、本発明に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液は、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物が溶媒に溶解されてなる。上記溶媒は、サクシノイルトレハロース脂質を溶解し得る溶媒であればよく、そのような溶媒としては、上述したように、水性の溶媒、またはその他の溶媒(有機溶媒等)を用い得る。当業者であれば、上記溶液の用途に合わせて適宜溶媒を選択し得る。 In one embodiment, the succinoyl trehalose lipid solution according to the present invention is obtained by dissolving the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the present invention in a solvent. The solvent may be any solvent that can dissolve the succinoyl trehalose lipid, and as such a solvent, as described above, an aqueous solvent or other solvent (such as an organic solvent) can be used. A person skilled in the art can appropriately select a solvent according to the use of the solution.
本明細書において、用語「水性の溶媒」は、水または親水性の溶媒を主体とした溶媒が意図される。つまり、水性の溶媒の成分としては、水以外に水と相溶(混和)し得る物質を用いることができる。水性の溶媒には、特に、疎水性の液体が全く含まれていないものが好ましい。このような水性の溶媒の成分としては、水または炭素数1〜4の低級アルコール、多価アルコールおよびその混合溶媒等を好ましく用いることができる。 In the present specification, the term “aqueous solvent” is intended to be a solvent mainly composed of water or a hydrophilic solvent. That is, as the component of the aqueous solvent, a substance that is compatible (miscible) with water can be used in addition to water. In particular, the aqueous solvent preferably contains no hydrophobic liquid. As a component of such an aqueous solvent, water, a C1-C4 lower alcohol, a polyhydric alcohol, a mixed solvent thereof, or the like can be preferably used.
炭素数1〜4の低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールを例示することができる。また、多価アルコールとしては、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、ポリプロピレングリコール、ジグリセリン、ポリグリセリン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレングリコール、1,3−プロパンジオール、1,4−プロパンジオール、1,3−ブタンジオールを例示することができる。 Examples of the lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms include methanol, ethanol, propanol, isopropanol, and butanol. Polyhydric alcohols include propylene glycol, dipropylene glycol, glycerin, polypropylene glycol, diglycerin, polyglycerin, ethylene glycol, diethylene glycol, polyethylene glycol, 1,3-propanediol, 1,4-propanediol, 1, An example is 3-butanediol.
一実施形態において、本発明に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液は、炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られるサクシノイルトレハロース脂質が1質量%以上、水性の溶媒に溶解されてなり、好ましくは、サクシノイルトレハロース脂質が3質量%、5質量%、または7質量%以上、水性の溶媒に溶解されてなる。後述するように、従来技術に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、1質量%以上水性の溶媒に溶解し得ず、したがって、従来、炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られるサクシノイルトレハロース脂質が1質量%以上水性の溶媒に溶解されてなる溶液は存在していなかった。本実施形態に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液は、水性の溶媒にサクシノイルトレハロース脂質が高濃度に溶解しているので、保存、輸送、使用等の際に好適に用いることができる。 In one embodiment, the succinoyl trehalose lipid solution according to the present invention comprises 1% by mass or more of succinoyl trehalose lipid obtained by culturing a microorganism in a medium containing a carbon source, and is preferably dissolved in an aqueous solvent. Is prepared by dissolving succinoyl trehalose lipid in an aqueous solvent in an amount of 3% by mass, 5% by mass, or 7% by mass or more. As will be described later, the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the prior art cannot be dissolved in an aqueous solvent of 1% by mass or more, and thus conventionally obtained by culturing microorganisms in a medium containing a carbon source. There was no solution in which succinoyl trehalose lipid was dissolved in an aqueous solvent of 1% by mass or more. The succinoyl trehalose lipid solution according to this embodiment can be suitably used for storage, transportation, use, and the like because the succinoyl trehalose lipid is dissolved in an aqueous solvent at a high concentration.
一つの局面において、本実施形態に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液は無色透明である。上記無色透明を、水溶液の濁度を示す指標として一般に用いられる波長660nmにおける光透過率によって表せば、該光透過率は、95%以上であり得、好ましくは97%以上であり得、より好ましくは99%以上であり得る。なお、上記光透過率は、上記分光光度計を用いて、波長660nmでの光透過率を測定して得られる。上述したように、従来技術に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物は、溶解した溶液を濁らせるため、従来、サクシノイルトレハロース脂質が1質量%以上水性の溶媒に溶解されてなる溶液において、波長660nmでの光透過率が5%以上である溶液は存在していなかった。本実施形態に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液は、無色透明の水溶液なので、例えば、食品、化粧品等の添加剤として用いた場合、食品、化粧品等を不要に着色しないため好ましい。 In one aspect, the succinoyl trehalose lipid solution according to this embodiment is colorless and transparent. If the colorless and transparent is represented by the light transmittance at a wavelength of 660 nm, which is generally used as an index indicating the turbidity of an aqueous solution, the light transmittance can be 95% or more, preferably 97% or more, more preferably May be 99% or more. The light transmittance is obtained by measuring the light transmittance at a wavelength of 660 nm using the spectrophotometer. As described above, since the solid succinoyl trehalose lipid composition according to the prior art makes the dissolved solution cloudy, conventionally, in the solution in which succinoyl trehalose lipid is dissolved in an aqueous solvent of 1% by mass or more, the wavelength There was no solution having a light transmittance at 660 nm of 5% or more. Since the succinoyl trehalose lipid solution according to the present embodiment is a colorless and transparent aqueous solution, for example, when used as an additive for foods, cosmetics, etc., it is preferable because it does not unnecessarily color foods, cosmetics, etc.
(調製方法)
本発明に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液の調製方法について以下に説明する。一実施形態において、本発明に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液は、炭素源を含む培地中で微生物を培養して得られる固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物を溶媒に溶解させることによって調製させる。上記溶媒が有機溶媒である場合、定法を用いれば容易にサクシノイルトレハロース脂質溶液を調製し得る。
(Preparation method)
A method for preparing a succinoyl trehalose lipid solution according to the present invention will be described below. In one embodiment, the succinoyl trehalose lipid solution according to the present invention is prepared by dissolving a solid succinoyl trehalose lipid composition obtained by culturing a microorganism in a medium containing a carbon source in a solvent. When the solvent is an organic solvent, a succinoyl trehalose lipid solution can be easily prepared using a conventional method.
上記溶媒が水性の溶媒である場合は、例えば、以下の方法によってサクシノイルトレハロース脂質溶液を調製し得る。 When the solvent is an aqueous solvent, for example, a succinoyl trehalose lipid solution can be prepared by the following method.
まず、上記固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物と水性の溶媒とを混合して混合液とする。このとき、上記固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物の主成分であるサクシノイルトレハロース脂質は、分子構造中にカルボキシル基を有する酸性の物質であるため、上記混合液は、通常酸性となっている。 First, the solid succinoyl trehalose lipid composition and an aqueous solvent are mixed to obtain a mixed solution. At this time, since the succinoyl trehalose lipid which is the main component of the solid succinoyl trehalose lipid composition is an acidic substance having a carboxyl group in the molecular structure, the mixed solution is usually acidic.
ここで、上記サクシノイルトレハロース脂質組成物を十分に溶解させるためには、上記混合液を中性にすることが好ましい。上記混合液の中和は、例えば、水酸化ナトリウム溶液などのアルカリ性物質を該混合液に添加して、アルカリ金属イオンまたはアルカリ土類金属イオンを該混合液にさらに包含させることによって行い得る。 Here, in order to sufficiently dissolve the succinoyl trehalose lipid composition, it is preferable to neutralize the mixed solution. Neutralization of the mixed solution can be performed, for example, by adding an alkaline substance such as a sodium hydroxide solution to the mixed solution and further including alkali metal ions or alkaline earth metal ions in the mixed solution.
アルカリ金属イオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン等を用い得、アルカリ土類金属イオンとしては、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、ベリリウムイオン等を用い得るが、これらに限られない。上記溶媒のpHを適切に調整し得るイオンであればよい。 As alkali metal ions, sodium ions, potassium ions, lithium ions and the like can be used. As alkaline earth metal ions, magnesium ions, calcium ions, beryllium ions and the like can be used, but not limited thereto. Any ion that can appropriately adjust the pH of the solvent may be used.
また、高濃度の上記固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物を水性の溶媒に溶解させる場合、完全に溶解させるために、上記混合液を超音波処理することが好ましい。 Further, when the solid succinoyl trehalose lipid composition having a high concentration is dissolved in an aqueous solvent, it is preferable to ultrasonically treat the mixed solution in order to completely dissolve the composition.
〔3:乳化組成物〕
本発明はさらに、乳化組成物を提供する。用語「乳化組成物」とは、乳化によって得られる組成物が意図され、エマルションと称されることもある。
[3: Emulsified composition]
The present invention further provides an emulsified composition. The term “emulsified composition” intends a composition obtained by emulsification and is sometimes referred to as an emulsion.
一実施形態において、本発明に係る乳化組成物は、本発明の固形のサクシノイルトレハロース脂質と、水性成分と、油性成分とを含んでいる。本実施形態に係る乳化組成物は、乳白色であり、長期にわたって安定している。また、乳化成分であるサクシノイルトレハロース脂質の含量が低い場合であっても良好に乳化させることができるため、低コストで大量の乳化組成物を製造することができる。 In one embodiment, the emulsified composition according to the present invention contains the solid succinoyl trehalose lipid of the present invention, an aqueous component, and an oily component. The emulsified composition according to this embodiment is milky white and stable over a long period of time. Moreover, even when the content of succinoyl trehalose lipid, which is an emulsifying component, is low, it can be favorably emulsified, so that a large amount of an emulsified composition can be produced at low cost.
上記水性成分としては、本発明に係るサクシノイルトレハロース脂質溶液に用いられる水性の溶媒を好適に用いることができる。 As said aqueous component, the aqueous solvent used for the succinoyl trehalose lipid solution based on this invention can be used conveniently.
上記油性成分としては、1気圧25℃において液状またはペースト状のものが好ましく、特に液状油が好ましい。 The oil component is preferably liquid or pasty at 1 atm. 25 ° C., and particularly preferably liquid oil.
このような液状油としては、たとえば、炭化水素類、高級アルコールエステル類、高級脂肪酸エステル類、トリグリセリド類、シリコーン油類、高級アルコール類、高級脂肪酸類、動植物油類、コレステロール脂肪酸エステル類、ステロール類、ステロールエステル類、ポリフェノール類が挙げられ、好ましいものとしては、ミネラル油、流動パラフィン、スクアラン、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソオクチル、ミリスチン酸イソトリデシル、ミリスチン酸オクタデシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリルコレステリルエステル、2−エチルヘキサン酸トリグリセリド、2−エチルヘキサン酸セチル、ヒマワリ油、オリーブ油、ホホバ油、ツバキ油、グレープシード油、アボカド油、マカダミアナッツ油、アーモンド油、米胚芽油、丁字油、オレンジ油、トウヒ油、オクタメチルトリシロキサン、デカメチルテトラシロキサン、メチルポリシロキサン、高重合メチルポリシロキサンなどのジメチルシリコーン油;オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサシロサン、メチルシクロポリシロキサン、メチルポリシクロシロキサンなどの環状シリコーン油;ポリエーテル変性シリコーン油、メチルフェニルポリシロキサンなどのメチルフェニルシリコーン油などが挙げられる。これらを単独で用いてもよいし、2種類以上を組み合わせて用いてもよい。 Examples of such liquid oils include hydrocarbons, higher alcohol esters, higher fatty acid esters, triglycerides, silicone oils, higher alcohols, higher fatty acids, animal and vegetable oils, cholesterol fatty acid esters, and sterols. Sterol esters, polyphenols, and preferred are mineral oil, liquid paraffin, squalane, isopropyl palmitate, isopropyl myristate, isooctyl myristate, isotridecyl myristate, octadecyl myristate, octyldodecyl myristate, Stearyl cholesteryl ester, 2-ethylhexanoic acid triglyceride, cetyl 2-ethylhexanoate, sunflower oil, olive oil, jojoba oil, camellia oil, grape seed oil, avocado oil Dimethyl silicone oils such as macadamia nut oil, almond oil, rice germ oil, clove oil, orange oil, spruce oil, octamethyltrisiloxane, decamethyltetrasiloxane, methylpolysiloxane, highly polymerized methylpolysiloxane; octamethylcyclotetrasiloxane , Cyclic silicone oils such as decamethylcyclopentasiloxane, dodecamethylcyclohexacyclosan, methylcyclopolysiloxane, and methylpolycyclosiloxane; polyether-modified silicone oils, methylphenyl silicone oils such as methylphenylpolysiloxane, and the like. These may be used alone or in combination of two or more.
本発明にかかる乳化組成物において、STLの含有量は、0.01質量%〜5質量%であることが好ましく、0.05質量%〜1質量%であることがより好ましい。乳化組成物に対して、STLの含有量が、0.01質量%より小さい場合には、乳化が不十分になるおそれがあるという問題があり、5質量%を超える場合には、使用量が多くなり経済的ではないという問題がある。 In the emulsified composition according to the present invention, the content of STL is preferably 0.01% by mass to 5% by mass, and more preferably 0.05% by mass to 1% by mass. When the STL content is less than 0.01% by mass relative to the emulsified composition, there is a problem that emulsification may be insufficient. There is a problem that it is more economical.
また、本発明に係る乳化組成物において、含まれる水性成分と油性成分との質量比は、水性成分:油性成分が、95:5〜30:70であることが好ましく、95:5〜50:50であることがより好ましい。上記質量比が、30:70よりも油性成分の比率が高い場合には、油が完全に乳化しないおそれがあるという問題がある。 In the emulsified composition according to the present invention, the aqueous component: oil component is preferably 95: 5 to 30:70, and the mass ratio of the aqueous component and the oil component contained is 95: 5 to 50: More preferably, it is 50. When the mass ratio is higher than 30:70, the oil may not be completely emulsified.
なお、本発明に係る乳化組成物に用いられる固形のSTLは、STLの塩であってもよい。本明細書において、STLの塩とは、上述の製造方法により得られたSTLにおいて、1分子あるいは2分子エステル結合しているコハク酸のカルボキシル基のうち、一方あるいは両方のカルボキシル基の水素原子が他の金属カチオンまたは金属性基により置き換えられたものを指す。 The solid STL used in the emulsified composition according to the present invention may be an STL salt. In the present specification, the STL salt means that one or both of the carboxyl groups of the succinic acid carboxyl groups bonded to one or two molecules of the STL obtained by the above-described production method have a hydrogen atom. Refers to those replaced by other metal cations or metallic groups.
本発明に係る乳化組成物に含まれるSTLの塩は、STLと、アルカリ金属またはアルカリ土類金属との塩であることが好ましい。この場合、STLを水性の溶媒に良好に溶解することができる。 The STL salt contained in the emulsified composition according to the present invention is preferably a salt of STL and an alkali metal or alkaline earth metal. In this case, STL can be dissolved well in an aqueous solvent.
STLとの塩を構成するアルカリ金属として、例えばナトリウム、カリウム、リチウム等、アルカリ土類金属として、例えばカルシウム、マグネシウム、ベリリウム等が挙げられ、ナトリウムまたはカリウムが好ましく、特にナトリウムが好ましい。STLのナトリウム塩は、水溶性が高く、溶媒に対する溶解度がさらに向上するという利点がある。 Examples of the alkali metal constituting the salt with STL include sodium, potassium, lithium and the like, and examples of the alkaline earth metal include calcium, magnesium, beryllium and the like. Sodium or potassium is preferable, and sodium is particularly preferable. The sodium salt of STL is highly water-soluble and has the advantage that the solubility in a solvent is further improved.
STLの塩は、STLを、例えば、水酸化ナトリウム等のアルカリ金属またはアルカリ土類金属を含むアルカリ性化合物を用いて中和することによって得られる。具体的には、以下の手法によりSTLの塩を得ることができる。まず、STLを1質量%〜5質量%の水溶液となるように水と混合し、スターラーにより攪拌しながら任意のアルカリ性化合物を添加して水溶液を中和し、STLを溶解させる。このとき、最終的なpHが、7.0〜7.2となるようにアルカリ性化合物の添加量などを制御する。ついで、得られた水溶液を凍結乾燥することにより、STLの塩を得ることができる。なお、後述する本発明に係る乳化組成物の製造方法においては、上述のように得られた固形のSTLの塩を用いてもよく、凍結乾燥する前のアルカリにより中和されたSTL溶解液(STLの塩が溶解した水溶液)を用いてもよい。 The salt of STL can be obtained by neutralizing STL with an alkaline compound containing an alkali metal or alkaline earth metal such as sodium hydroxide. Specifically, an STL salt can be obtained by the following method. First, STL is mixed with water so as to be a 1% by mass to 5% by mass aqueous solution, and an arbitrary alkaline compound is added while stirring with a stirrer to neutralize the aqueous solution, thereby dissolving the STL. At this time, the amount of the alkaline compound added is controlled so that the final pH becomes 7.0 to 7.2. Subsequently, the resulting aqueous solution is freeze-dried to obtain an STL salt. In addition, in the manufacturing method of the emulsion composition which concerns on this invention mentioned later, the solid STL salt obtained as mentioned above may be used, and the STL solution (neutralized with alkali before freeze-drying ( An aqueous solution in which a salt of STL is dissolved may be used.
(製造方法)
次に、本発明にかかる乳化組成物の製造方法について説明する。乳化組成物の製造方法は、目的とする乳化組成物を得ることができればその製造方法は特に限定されることはなく、様々な方法をとることができる。
(Production method)
Next, the manufacturing method of the emulsion composition concerning this invention is demonstrated. The production method of the emulsion composition is not particularly limited as long as the intended emulsion composition can be obtained, and various methods can be adopted.
一実施形態において、本発明に係る乳化組成物の製造方法は、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質を水性の溶媒に溶解してサクシノイルトレハロース脂質水溶液を調製する工程、および該サクシノイルトレハロース脂質水溶液と、油性成分とを乳化する工程を包含している。上述したように、本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質は、容易に水性の溶媒に溶解し得るので、本実施形態に係る乳化組成物の製造方法によれば、容易に乳化組成物を製造することができる。 In one embodiment, the method for producing an emulsified composition according to the present invention comprises preparing a succinoyl trehalose lipid aqueous solution by dissolving the solid succinoyl trehalose lipid according to the present invention in an aqueous solvent, and the succinoyl trehalose. A step of emulsifying the aqueous lipid solution and the oily component is included. As described above, since the solid succinoyl trehalose lipid according to the present invention can be easily dissolved in an aqueous solvent, the emulsion composition according to the present embodiment can be easily manufactured. can do.
上記サクシノイルトレハロース脂質水溶液の調製は、本発明に係るSTLを水性の溶媒に溶解させればよいのであって、上述のように行うことができる。なお、水性の溶媒に溶解させるSTLは、STLの塩であってもよい。 The succinoyl trehalose lipid aqueous solution can be prepared as described above by dissolving the STL according to the present invention in an aqueous solvent. The STL dissolved in the aqueous solvent may be a salt of STL.
上記サクシノイルトレハロース脂質水溶液と、油性成分との乳化は、例えば、上記サクシノイルトレハロース水溶液に対して、上述したような質量比となるように油性成分を添加し、ホモジナイザー等の周知慣用技術を用いて攪拌することによって行うことができる。 For emulsification of the succinoyl trehalose lipid aqueous solution and the oil component, for example, the oil component is added to the succinoyl trehalose aqueous solution so that the mass ratio is as described above, and a well-known conventional technique such as a homogenizer is used. And stirring.
また、他にも、STLの塩を水性の溶媒に溶解させることによって上記サクシノイルトレハロース脂質水溶液を調製した場合、該サクシノイルトレハロース脂質水溶液から水性ゲル状組成物を調製した後に、該水性ゲル状組成物に対して、上記と同様に油性成分を添加し、攪拌することによっても上記乳化を行うことができる。 In addition, when the succinoyl trehalose lipid aqueous solution is prepared by dissolving a salt of STL in an aqueous solvent, an aqueous gel composition is prepared from the succinoyl trehalose lipid aqueous solution, and then the aqueous gel-like composition is prepared. The above emulsification can also be carried out by adding an oil component to the composition and stirring the composition.
上記サクシノイルトレハロース脂質水溶液からの水性ゲル状組成物の調製は、以下のような手順により行うことができる。まず、STLの塩を含む溶液を酸性にする。この処理は、例えば、STLの塩を含む溶液に塩酸等の酸性物質を添加することによって行われ得る。STLの塩を含む溶液は中性であり、当該溶液中に酸性物質を添加することによって、溶液を酸性、好ましくはpH6.0〜6.9にする。これにより、STLの塩を含む溶液を容易にゲル化させることができる。 Preparation of the aqueous gel composition from the succinoyl trehalose lipid aqueous solution can be performed by the following procedure. First, the solution containing the STL salt is acidified. This treatment can be performed, for example, by adding an acidic substance such as hydrochloric acid to a solution containing an STL salt. The solution containing the STL salt is neutral, and an acidic substance is added to the solution to make the solution acidic, preferably pH 6.0 to 6.9. Thereby, the solution containing the salt of STL can be easily gelled.
なお、溶液の状態を安定させるために、溶液を一定時間静置することが好ましい。また、水性ゲル状組成物を調製するための上記サクシノイルトレハロース脂質液は、溶液全量に対してSTLの塩が2質量%〜30質量%の濃度で溶解されていることが好ましい。さらに、上記水溶液中の水性成分の含有量は、水性ゲル状組成物全量の70質量%〜98質量%であることが好ましく、より好ましくは90質量%〜97質量%である。 In addition, in order to stabilize the state of a solution, it is preferable to leave a solution for a fixed time. Further, in the succinoyl trehalose lipid solution for preparing an aqueous gel-like composition, it is preferable that a salt of STL is dissolved at a concentration of 2% by mass to 30% by mass with respect to the total amount of the solution. Furthermore, the content of the aqueous component in the aqueous solution is preferably 70% by mass to 98% by mass, and more preferably 90% by mass to 97% by mass, based on the total amount of the aqueous gel composition.
〔その他〕
本発明に係る固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物、サクシノイルトレハロース脂質溶液、および乳化組成物には、本発明の効果を損なわない範囲において、紫外線吸収剤、抗酸化剤および香料が配合されていてもよい。
[Others]
The solid succinoyl trehalose lipid composition, the succinoyl trehalose lipid solution, and the emulsified composition according to the present invention are blended with an ultraviolet absorber, an antioxidant, and a fragrance as long as the effects of the present invention are not impaired. Also good.
紫外線吸収剤とは、通常サンスクリーン化粧品などに用いられ、紫外線A波あるいは紫外線B波、またはその両方を低減させ、皮膚に対する紫外線の有害作用を低減させることのできる物質のことをいう。 The ultraviolet absorber is a substance that is usually used in sunscreen cosmetics and the like, and can reduce ultraviolet A wave, ultraviolet B wave, or both, and reduce harmful effects of ultraviolet rays on the skin.
このような紫外線吸収剤としては、p−アミノ安息香酸、グリセリル−p−アミノ安息香酸、アミル−p−N,N−ジメチルアミノ安息香酸、2−エチルヘキシル−p−N,N−ジメチルアミノ安息香酸などのp−アミノ安息香酸誘導体;2,4−ジイソプロピルケイ皮酸メチル、2,4−ジイソプロピルケイ皮酸エチル、p−メトキシケイ皮酸カリウム、p−メトキシケイ皮酸ナトリウム、p−メトキシケイ皮酸イソプロピル、p−メトキシケイ皮酸2−エチルヘキシル、p−メトキシケイ皮酸2−エトキシエチル、p−エトキシケイ皮酸エチルなどのケイ皮酸誘導体;2,4−ジヒドロキシベンゾフェノン、2,2’,4,4’−テトラヒドロキシベンゾフェノン、2−ヒドロキシ−4−メトキシ−5−スルホベンゾフェノンナトリウム、2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノン−5−スルホン酸、2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノン、2,2’−ジヒドロキシ−4,4’−ジメトキシベンゾフェノン、2,2’−ジヒドロキシ−4,4’−ジメトキシ−5−スルホベンゾフェノンナトリウムなどのベンゾフェノン誘導体;サリチル酸−2−エチルヘキシル、サリチル酸フェニル、サリチル酸−3,3,5−トリメチルシクロヘキシルなどのサリチル酸誘導体;2−(2’−ヒドロキシ−5’−メトキシフェニル)ベンゾトリアゾール、4−tert−ブチル−4’−メトキシベンゾイルメタンなどが挙げられる。
Such ultraviolet absorbers include p-aminobenzoic acid, glyceryl-p-aminobenzoic acid, amyl-p-N, N-dimethylaminobenzoic acid, 2-ethylhexyl-pN, N-dimethylaminobenzoic acid. P-aminobenzoic acid derivatives such as
これらのうち、常温で固体のものは液状油に溶解または分散させて用いることができる。常温で液状またはペースト状のものは、それ自身液状油として用いることもできるし、他の液状油と混合して用いることもできる。それ自身液状油として用いることができるもののうち好ましいのは、p−メトキシケイ皮酸2−エチルヘキシル、または4−tert−ブチル−4’−メトキシベンゾイルメタンのp−メトキシケイ皮酸2−エチルヘキシル溶液である。 Among these, those that are solid at room temperature can be used by dissolving or dispersing in liquid oil. The liquid or paste-like material at normal temperature can be used as a liquid oil itself, or can be used by mixing with other liquid oils. Among those that can themselves be used as liquid oils, 2-ethylhexyl p-methoxycinnamate or 2-ethylhexyl p-methoxycinnamate in 4-tert-butyl-4′-methoxybenzoylmethane is preferred. is there.
また、抗酸化剤および香料は、常温で固体のものは液状油に溶解または分散して用いることができる。常温で液状またはペースト状のものは、それ自身液状油として用いることもできるし、他の液状油と混合して用いることもできる。用いることのできる抗酸化剤としては、たとえば、トコフェロール、酢酸トコフェロール、およびビタミンA類(たとえば、レチノイン酸、レチノイン酸エステル、レチノール、レチノイドなど)が挙げられる。 Antioxidants and fragrances that are solid at room temperature can be used by dissolving or dispersing in liquid oil. The liquid or paste-like material at normal temperature can be used as a liquid oil itself, or can be used by mixing with other liquid oils. Antioxidants that can be used include, for example, tocopherol, tocopherol acetate, and vitamins A (for example, retinoic acid, retinoic acid ester, retinol, retinoid, etc.).
本発明の固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物、サクシノイルトレハロース脂質溶液、および乳化組成物の用途としては、好ましくは化粧品、またはその添加剤が挙げられ、たとえばクリーム、ローション、クレンジングジェル、クレンジングクリームなどの基礎化粧料;ファンデーション、アイシャドウ、リップカラー、リップグロスなどのメーキャップ化粧料;ヘアクリーム、スタイリングジェル、ヘアワックスなどの頭髪用化粧料;シャンプー、リンス、ハンドソープ、ボディーソープ、洗顔フォームなどの洗浄料などに好適に用いることができる。 Applications of the solid succinoyl trehalose lipid composition, succinoyl trehalose lipid solution, and emulsified composition of the present invention preferably include cosmetics, or additives thereof, such as creams, lotions, cleansing gels, cleansing creams, etc. Makeup cosmetics such as foundation, eye shadow, lip color, lip gloss; hair cosmetics such as hair cream, styling gel, hair wax; shampoo, rinse, hand soap, body soap, facial cleansing foam, etc. It can be suitably used as a cleaning material.
本発明の固形のサクシノイルトレハロース脂質組成物、サクシノイルトレハロース脂質溶液、および乳化組成物を化粧料またはその添加剤の用途に使用する場合には、化粧料に通常用いられる任意の成分を、本発明の効果を損なわない範囲において、配合することができる。 When the solid succinoyl trehalose lipid composition, succinoyl trehalose lipid solution, and emulsified composition of the present invention are used for cosmetics or additives, any ingredients commonly used in cosmetics are added. It can mix | blend in the range which does not impair the effect of invention.
このような成分としては、たとえば、ワセリン、マイクロクリスタリンワックスなどの炭化水素類;ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピルなどのエステル類、トリイソオクタン酸グリセリル、オリーブ油などのトリグリセライド類;メチルフェニルポリシロキサン、メチルポリシロキサンなどのシリコーン油類;セタノール、ベヘニルアルコールなどの高級アルコール類、ステアリン酸、オレイン酸などの脂肪酸類;グリセリン、1,3−ブタンジオール、プロピレングリコールなどの多価アルコール類;エタノール、イソプロピルアルコールなどの低級アルコール類;非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性界面活性剤、増粘剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、エモリエント剤、乳化剤、可溶化剤、抗炎症剤、保湿剤、防腐剤、pH調整剤、色素、香料、粉体類、水などが挙げられる。中でもステアリン酸、ベヘニルアルコールが好ましい。これらの好ましい含有量は、化粧料全量に対して0.01質量%〜10質量%であり、さらに好ましくは0.1質量%〜5質量%である。このようにして得られる化粧料は、皮膚刺激が少なく、クレンジング剤、保湿剤、クリーム、およびローションとしてきわめて優れている。 Examples of such components include hydrocarbons such as petrolatum and microcrystalline wax; esters such as octyldodecyl myristate and isopropyl myristate, glyceryl triisooctanoate and triglycerides such as olive oil; methylphenylpolysiloxane, methyl Silicone oils such as polysiloxane; higher alcohols such as cetanol and behenyl alcohol; fatty acids such as stearic acid and oleic acid; polyhydric alcohols such as glycerin, 1,3-butanediol, and propylene glycol; ethanol, isopropyl alcohol, etc. Lower alcohols: nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants, thickeners, UV absorbers, antioxidants, emollients, emulsifiers, Solubilizing agents, anti-inflammatory agents, humectants, preservatives, pH adjusting agents, dyes, perfumes, powders such, and water. Of these, stearic acid and behenyl alcohol are preferred. These preferable contents are 0.01 mass%-10 mass% with respect to cosmetics whole quantity, More preferably, they are 0.1 mass%-5 mass%. The cosmetics thus obtained have little skin irritation and are extremely excellent as cleansing agents, moisturizers, creams and lotions.
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。 The present invention is not limited to the above-described embodiments, and various modifications are possible within the scope shown in the claims, and embodiments obtained by appropriately combining technical means disclosed in different embodiments. Is also included in the technical scope of the present invention.
また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。 Moreover, all the academic literatures and patent literatures described in this specification are incorporated herein by reference.
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例によって何ら限定されない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention more concretely, this invention is not limited at all by these Examples.
〔実施例1:STLの生産〕
非特許文献2に記載の方法に従って、ロドコッカス・エリスロポリス SD−74株を以下の条件でシード培養した。本実施例において用いたロドコッカス・エリスロポリス SD−74株は、植物油脂資化性菌として分離され、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに、「受託番号:FERM P−21299」として寄託されている。
[Example 1: Production of STL]
According to the method described in
500ml容坂口フラスコ中のFPY培地100ml(フルクトース2%、ポリペプトン0.5%、酵母エキス0.5%、NaNO30.1%、KH2PO40.1%、MgSO4−7H2O0.02%)にプレート上に形成された菌体コロニーを植菌し、30℃で38時間振とう培養を行った。
100 ml FPY medium in a 500 ml Sakaguchi flask (
改変MedD培地(1L当たり、KH2PO45.44g、K2HPO410.45g、KNO33g、MgSO4−7H2O0.1g、K2SO435g、酵母エキス3g、パーム油100mlを含む溶液を、水道水で1Lにメスアップ)6000mlに、シード培養後の培養液全量を接種し、以下の条件で本培養を開始した。10Lジャー培養槽を用いて、培養温度30℃で、500rpmで攪拌させながら培養した。培地のpHを7.0に設定し、5N KOHを自動添加することによって培地のpHを維持した。
Per modified MedD medium (1L, KH 2 PO 4 5.44g ,
〔実施例2:STLの定量〕
上記本培養中の培地から、2日に1回程度サンプリングを行い、培養液中のSTL濃度を以下に示すように定量した。
[Example 2: Determination of STL]
Sampling was performed about once every two days from the medium during the main culture, and the STL concentration in the culture was quantified as follows.
サンプリングした培養液を15000rpmで10分間遠心分離し、上層の油成分が混入しないように注意して水層を抜き出した。抜き出した液体を適宜希釈した後、以下に示すアンスロン硫酸法によってトレハロース濃度を定量した。まず、希釈した試料1mlにアンスロン試薬(75%硫酸に0.2%の濃度でアンスロンを溶解させることによって、測定時に調製)5mlを添加し攪拌した。攪拌後の溶液を沸騰水中で10分間反応させ、5分間氷冷することによって反応を停止させた後、室温で20分間放置した。 The sampled culture solution was centrifuged at 15000 rpm for 10 minutes, and the aqueous layer was extracted with care so that the upper oil component was not mixed. After the extracted liquid was appropriately diluted, the trehalose concentration was quantified by the following anthrone sulfate method. First, 5 ml of anthrone reagent (prepared at the time of measurement by dissolving anthrone in 75% sulfuric acid at a concentration of 0.2%) was added to 1 ml of the diluted sample and stirred. The stirred solution was reacted in boiling water for 10 minutes, quenched with ice for 5 minutes, and allowed to stand at room temperature for 20 minutes.
得られた反応液に対して波長620nmの吸光度を測定した。スタンダードとして4mMトレハロースを20倍希釈したものを用いた。STLは1分子のトレハロースを含んでいるため、トレハロース濃度としてSTL濃度を定量した。STLの分子量を840としてSTLの質量濃度を算出した。結果を図1に示す。培養開始120時間後にパーム油600mlを追加し、200時間後にパーム油300mlをさらに追加した。図1のSTL生産のタイムコースに示すように、培養285時間後に培養液のSTL濃度が37g/Lになった。
The absorbance at a wavelength of 620 nm was measured for the obtained reaction solution. A standard obtained by diluting 4
〔実施例3:STLの分離・精製〕
実施例1で得られた培養285時間後の培養液860mlを、6000rpmで30分間遠心分離し、液中の菌体および残存基質を除去した後、6N HClを40ml添加し、溶液のpHを2.98にした。溶液中に白色のゲル状析出物が析出した。この溶液を6000rpmで30分間遠心分離することによって、液層を除去した結果、湿重量182gの析出物が得られた。
[Example 3: Separation and purification of STL]
860 ml of the culture solution obtained after 285 hours of culture obtained in Example 1 was centrifuged at 6000 rpm for 30 minutes to remove cells and residual substrate in the solution, and then 40 ml of 6N HCl was added to adjust the pH of the solution to 2 .98. A white gel-like precipitate was deposited in the solution. As a result of removing the liquid layer by centrifuging this solution at 6000 rpm for 30 minutes, a precipitate having a wet weight of 182 g was obtained.
得られた析出物に186gの酢酸エチルを添加し、十分に攪拌した。水層と酢酸エチル層とに分離した溶液を、分液漏斗を用いて分離し上層の酢酸エチル層を回収した。回収した酢酸エチル溶液から、エヴァポレーターを用いて酢酸エチルを除去した。酢酸エチルを除去して得られた固形物を等量のヘキサンで懸濁した後、懸濁液を遠心分離してヘキサンを除去する工程を3回繰り返した。ヘキサンを除去して得られた液体をエヴァポレーターで乾固し、白色固形物12.6gを得た。この白色固形物を50g/lの濃度で蒸留水中に加え、NaOHを添加して中性にしたところ、白色固形物が蒸留水中で溶解し始めた。さらに溶液を超音波処理したところ、約5分後には白色固形物が蒸留水中に完全に溶解した。 186 g of ethyl acetate was added to the resulting precipitate and stirred thoroughly. The solution separated into the aqueous layer and the ethyl acetate layer was separated using a separatory funnel, and the upper ethyl acetate layer was recovered. Ethyl acetate was removed from the collected ethyl acetate solution using an evaporator. After suspending the solid substance obtained by removing ethyl acetate with an equal amount of hexane, the process of centrifuging the suspension to remove hexane was repeated three times. The liquid obtained by removing hexane was dried with an evaporator to obtain 12.6 g of a white solid. When this white solid was added to distilled water at a concentration of 50 g / l and neutralized by adding NaOH, the white solid began to dissolve in distilled water. When the solution was further sonicated, the white solid was completely dissolved in distilled water after about 5 minutes.
さらに検討しところ、上述の方法で得た白色固形物は、7.5%の濃度であっても水溶液中に均質に溶解させることが可能であった。 Further examination revealed that the white solid obtained by the above-described method could be uniformly dissolved in the aqueous solution even at a concentration of 7.5%.
〔比較例1:従来技術に係るSTLの分離・精製〕
実施例1で得られた培養液を、6000rpmで30分間遠心分離し、液中の菌体および残存基質を除去した後、6N HClを加え、溶液のpHを3以下とした。析出した酸析物(271.5g)に滅菌水500mLを加えてよく懸濁させた後に遠心分離し、上澄みを捨てることによって、該酸析物を洗浄した。洗浄後の酸析物の湿重量は125.9gであった。
[Comparative Example 1: Separation and purification of STL according to prior art]
The culture solution obtained in Example 1 was centrifuged at 6000 rpm for 30 minutes to remove cells and residual substrate in the solution, and then 6N HCl was added to adjust the pH of the solution to 3 or less. To the precipitated acid precipitate (271.5 g), sterilized water (500 mL) was added and suspended well, followed by centrifugation, and the supernatant was discarded to wash the acid precipitate. The wet weight of the acid deposit after washing was 125.9 g.
次に、メタノールを500mLを加えて上記酸析物を完全に溶かし、ヘキサンを500mL加えてよく攪拌した後に、メタノール層を分液した。このヘキサンを用いた操作を3回繰り返した。最後に、メタノールを留去し、薄茶色の固形物(17.1g)を得た。以上に記載の、従来の方法で製造したSTLの固形物(薄茶色)は、1%の濃度でも水溶液中に溶解しなかった。以下、実施例上記の方法で製造したSTLの固形物(以下、新法STLと称する)および、従来の方法で製造したSTLの固形物(以下、従来法STLと称する)とについて、さらに詳しく比較する。 Next, 500 mL of methanol was added to completely dissolve the acid precipitate, and 500 mL of hexane was added and stirred well, and then the methanol layer was separated. This operation using hexane was repeated three times. Finally, methanol was distilled off to obtain a light brown solid (17.1 g). The STL solid (light brown) produced by the conventional method described above did not dissolve in the aqueous solution even at a concentration of 1%. Hereinafter, the STL solid material produced by the above-described method (hereinafter referred to as the new method STL) and the STL solid material produced by the conventional method (hereinafter referred to as the conventional method STL) will be compared in more detail. .
〔実施例4:STL溶液の吸光スペクトルの測定〕
上記の方法で製造したSTLの固形物は、上述したように、従来の方法で製造したSTLの固形物とは異なり、白色であった。これを定量的に観察するために、STL溶液の可視光領域での吸光スペクトルを測定した。
[Example 4: Measurement of absorption spectrum of STL solution]
As described above, the STL solid produced by the above method was white, unlike the STL solid produced by the conventional method. In order to observe this quantitatively, the absorption spectrum in the visible light region of the STL solution was measured.
新法STLおよび従来法STLをそれぞれメタノールに溶解させ、濃度が5質量%のSTL溶液を調製した。なお、新法STLはメタノールに完全に溶解したが、従来法STLはメタノールに完全に溶解せず、一部成分がとけ残っていた。そのため、従来法STL溶液については、フィルター(0.45μm)を通し、透明な液体とした。 The new method STL and the conventional method STL were each dissolved in methanol to prepare an STL solution having a concentration of 5% by mass. Although the new method STL was completely dissolved in methanol, the conventional method STL was not completely dissolved in methanol, and some components remained undissolved. Therefore, the conventional STL solution was passed through a filter (0.45 μm) to obtain a transparent liquid.
上記のように調製したSTL溶液の可視光領域での吸光スペクトルを分光光度計(UV−2550、島津製作所)を用いて測定した。結果を図2に示す。図2に示すように、新法STL溶液は、全領域で吸光度が0.05を超えることは無かった。一方、従来法STLは、波長が550nm以下の領域において、吸光度が高くなって(0.05を超えて)いた。すなわち、新法STLは白色であり、従来法STLが着色されていることが定量的に示された。 The absorption spectrum in the visible light region of the STL solution prepared as described above was measured using a spectrophotometer (UV-2550, Shimadzu Corporation). The results are shown in FIG. As shown in FIG. 2, the absorbance of the new method STL solution did not exceed 0.05 in all regions. On the other hand, in the conventional method STL, the absorbance was high (greater than 0.05) in the wavelength region of 550 nm or less. That is, the new method STL was white, and it was quantitatively shown that the conventional method STL was colored.
〔実施例5:STL水溶液の光透過率の測定〕
新法STLを用いて、pH7.0、濃度1%(w/v)のSTL水溶液を調製した。また、同様に、従来法STLについても、pH7.0にて、1%(w/v)となる量にて、純水に混合した。ただし、従来法STLは1%(w/v)の濃度では、水に完全に溶解しなかった。
[Example 5: Measurement of light transmittance of STL aqueous solution]
An STL aqueous solution having a pH of 7.0 and a concentration of 1% (w / v) was prepared using the new method STL. Similarly, the conventional method STL was also mixed with pure water in an amount of 1% (w / v) at pH 7.0. However, the conventional method STL was not completely dissolved in water at a concentration of 1% (w / v).
次に、波長660nmにおけるそれぞれの光透過率を上記分光光度計を用いて測定した。その結果、波長660nmにおける光透過率は、新法STLの水溶液が99.5%、従来法STLの混合液が4.8%となった。新法STLは、従来法STLに比べ非常に透明度の高い水溶液を形成し得ることができることが示された。 Next, each light transmittance in wavelength 660nm was measured using the said spectrophotometer. As a result, the light transmittance at a wavelength of 660 nm was 99.5% for the aqueous solution of the new method STL and 4.8% for the mixed solution of the conventional method STL. It has been shown that the new method STL can form an aqueous solution having a very high transparency compared to the conventional method STL.
〔実施例6:STLの保水力測定〕
実施例3で得られたSTLの保水力測定を以下の方法で行った。まず、5質量%の濃度でSTLを蒸留水に溶解し、NaOHによりpHを7.0にすることによって、STL(ナトリウム塩)の5質量%水溶液を調製した。また、比較対照として、グリセリンの5質量%水溶液を調製した。
[Example 6: Measurement of water retention capacity of STL]
The water holding capacity of the STL obtained in Example 3 was measured by the following method. First, 5 mass% aqueous solution of STL (sodium salt) was prepared by dissolving STL in distilled water at a concentration of 5 mass% and adjusting the pH to 7.0 with NaOH. As a comparative control, a 5% by mass aqueous solution of glycerin was prepared.
ついで、5×5cmに切り取ったろ紙に、上記のように調製した各5質量%水溶液10μlを浸透させ、ろ紙の質量変化を毎分8分まで測定した。経時的な質量変化をグラフ化し、グラフの傾きから水分蒸発速度を算出した。さらに水のみを浸透させたろ紙の質量変化を測定し、算出した傾きを100として、相対水分蒸発速度を算出した。相対水分蒸発速度から、次式により相対保水力を算出した。結果を表1に示す。
相対保水力(%)=100−相対水分蒸発速度
Next, 10 μl of each 5% by mass aqueous solution prepared as described above was infiltrated into the filter paper cut to 5 × 5 cm, and the mass change of the filter paper was measured up to 8 minutes per minute. The change in mass over time was graphed, and the water evaporation rate was calculated from the slope of the graph. Furthermore, the mass change of the filter paper in which only water was infiltrated was measured, and the calculated inclination was set to 100, and the relative water evaporation rate was calculated. From the relative water evaporation rate, the relative water retention capacity was calculated by the following equation. The results are shown in Table 1.
Relative water retention capacity (%) = 100-relative water evaporation rate
表1に示すように、保水力を有することが一般的に知られているグリセリンよりも、本発明により得られたSTLは高い保水力を示した。すなわち、本発明に係る製造方法によって製造したSTLは、高い保水力を有しているため、例えば保湿剤として化粧品用途等に好適に用いられ得る。 As shown in Table 1, the STL obtained according to the present invention showed higher water retention capacity than glycerin, which is generally known to have water retention capacity. That is, since the STL manufactured by the manufacturing method according to the present invention has a high water retention capacity, it can be suitably used as a moisturizing agent, for example, for cosmetic use.
〔実施例7:STLの耐硬水性試験〕
実施例3で得られたSTLの耐硬水性試験を以下の方法で行った。まず、0.1質量%のSTL水溶液(pH7.0)を調製した。また、比較対照として、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム(LAS)の0.1質量%水溶液を調製した。
[Example 7: Hard water resistance test of STL]
The STL hard water resistance test obtained in Example 3 was conducted by the following method. First, a 0.1 mass% STL aqueous solution (pH 7.0) was prepared. As a comparative control, a 0.1% by mass aqueous solution of sodium linear alkylbenzene sulfonate (LAS) was prepared.
ついで、上記のように調製した各0.1質量%水溶液80gに対して、CaCl2水溶液(炭酸カルシウム換算で10質量%)を添加して、5分間攪拌することにより様々な硬度を有する水溶液を調製した。得られた水溶液について、波長650nmにおける光透過率を測定した。光透過率の測定結果を図3に示す。 Next, an aqueous solution having various hardnesses is obtained by adding CaCl 2 aqueous solution (10% by mass in terms of calcium carbonate) to 80 g of each 0.1% by mass aqueous solution prepared as described above and stirring for 5 minutes. Prepared. About the obtained aqueous solution, the light transmittance in wavelength 650nm was measured. The measurement result of the light transmittance is shown in FIG.
図3に示すように、STL水溶液は、300ppmの硬度においても不溶性の塩を形成せず、LASに比べ非常に優れた耐硬水性を示した。すなわち、本発明に係るSTLは、優れた耐硬水性を有しているため、例えば、様々な成分が配合される化粧品においても濁りまたは沈殿を生じさせることがないため、化粧品添加剤等として好適に用いることができる。 As shown in FIG. 3, the STL aqueous solution did not form an insoluble salt even at a hardness of 300 ppm, and showed very good hard water resistance compared to LAS. That is, since the STL according to the present invention has excellent hard water resistance, for example, it does not cause turbidity or precipitation even in cosmetics in which various components are blended, and thus is suitable as a cosmetic additive or the like. Can be used.
〔実施例8:STLの起泡力の測定〕
実施例3で得られたSTLの起泡力の測定を以下の方法で行った。まず、0.1質量%のSTL水溶液(pH7.0)を調製した。また、比較対照として、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム(LAS)の0.1質量%水溶液を調製した。
[Example 8: Measurement of foaming force of STL]
The foaming force of the STL obtained in Example 3 was measured by the following method. First, a 0.1 mass% STL aqueous solution (pH 7.0) was prepared. As a comparative control, a 0.1% by mass aqueous solution of sodium linear alkylbenzene sulfonate (LAS) was prepared.
ついで、上記のように調製した各0.1質量%水溶液50gをそれぞれ異なるミキサーに充填した。そして、各水溶液を、3000rpmの回転速度で、一回につき15秒間ずつ複数回にわたって攪拌した。各回の攪拌直後における液面の高さを図4に示す。 Next, 50 g of each 0.1% by mass aqueous solution prepared as described above was filled in different mixers. Each aqueous solution was stirred at a rotational speed of 3000 rpm for 15 seconds at a time. FIG. 4 shows the height of the liquid level immediately after each stirring.
図4に示すように、STL水溶液は、攪拌してもほとんど泡を発生させず、LASに比べ低発泡性の界面活性剤であることが示された。すなわち、低発泡性の界面活性剤である本発明に係るSTLは、例えば、化粧品の一成分として用いた場合、製品を泡立たせることないため、化粧品添加剤等として好適に用いることができる。 As shown in FIG. 4, the aqueous STL solution hardly generated bubbles even when stirred, indicating that it is a low foaming surfactant compared to LAS. That is, the STL according to the present invention, which is a low-foaming surfactant, can be suitably used as a cosmetic additive or the like because, for example, when used as a component of cosmetics, the product does not foam.
〔実施例9:乳化組成物の調製〕
実施例3で得られたSTLを、NaOHにより中和しながら蒸留水に溶解させ、0.1質量%の濃度でSTLのナトリウム塩を含むSTL水溶液を調製した。
[Example 9: Preparation of emulsion composition]
The STL obtained in Example 3 was dissolved in distilled water while neutralizing with NaOH to prepare an STL aqueous solution containing a sodium salt of STL at a concentration of 0.1% by mass.
ついで、後述する4種の油性成分5mlそれぞれに対して、調製したSTL水溶液5mlを添加して、ホモジナイザー(株式会社ニチオン製ヒスコトロン)にて、1分間処理を行なった。油性成分としては、スクアラン(関東化学社製特級)、流動パラフィン(和光純薬製一級)、菜種油(MPバイオメディカルズ)、シリコーン油(KF−968、信越シリコーン社)をそれぞれ用いた。このようにして、調製された乳化組成物は、4種ともに乳白色であり、10分経過しても、分離することのない安定したエマルションであった。 Then, 5 ml of the prepared STL aqueous solution was added to 5 ml of each of the 4 types of oily components described below, and the mixture was treated for 1 minute with a homogenizer (Hiscotron manufactured by Nithion Corporation). As the oil component, squalane (special grade manufactured by Kanto Chemical Co., Inc.), liquid paraffin (first grade manufactured by Wako Pure Chemical Industries), rapeseed oil (MP Biomedicals), and silicone oil (KF-968, Shin-Etsu Silicone) were used. The emulsion compositions thus prepared were all milky white and were stable emulsions that did not separate even after 10 minutes.
本発明を用いれば、サクシノイルトレハロース脂質を水溶液として扱うことが可能であり、任意の製品の添加剤として用いた場合であっても該製品に不要な着色をしないため、様々な用途、たとえば、化粧品の保湿剤、乳化剤、化粧水の分散剤、食品の乳化剤、塗料の乳化剤等、化粧品、食品、塗料等の製造分野において好適に用いることができる。 By using the present invention, succinoyl trehalose lipid can be handled as an aqueous solution, and even when used as an additive for any product, the product is not unnecessarily colored. It can be suitably used in the field of manufacturing cosmetics, foods, paints, etc., such as cosmetic moisturizers, emulsifiers, cosmetic water dispersants, food emulsifiers and paint emulsifiers.
Claims (13)
該サクシノイルトレハロース脂質水溶液と、油性成分とを乳化する工程
を包含することを特徴とする乳化組成物の製造方法。 A step of preparing a succinoyl trehalose lipid aqueous solution by dissolving the solid succinoyl trehalose lipid composition according to any one of claims 1 to 5 in an aqueous solvent, and the succinoyl trehalose lipid aqueous solution and an oil component And a process for emulsifying the emulsion composition.
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