JP2009067771A

JP2009067771A - Therapeutic method for neurological disease

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Publication number: JP2009067771A
Application number: JP2008138349A
Authority: JP
Inventors: Sinil Kim; キム，シニル; Stephen B Howell; ビー．ハウエル，ステフェン
Original assignee: Pacira Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Pacira Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2008-05-27
Filing date: 2008-05-27
Publication date: 2009-04-02

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method whereby a dispersion system containing a therapeutic agent can effectively be administered from the lumber vertebra, even when a primary lesion of a neurological disease is a cranial area such as the vicinity of the cerebral ventricle. <P>SOLUTION: The method of treating a human neurological disease, which is chronic and is particularly hard in achieving a clinical effect, comprises the followings. The therapeutic agent which is contained in the lipid-containing synthetic membrane vesicle dispersion system, is administered to the area of a neurological disease, particularly, to a cerebrospinal fluid (CSF), enabling an effective amount of the drug to exist continuously for a long time. <P>COPYRIGHT: (C)2009,JPO&INPIT

Description

本発明は、ヒトの脳脊髄液（ＣＳＦ）に治療用薬剤をデリバリーするにあたって、徐放性の賦形剤を使用する神経学的疾患の治療方法に関する。 The present invention relates to a method for treating neurological diseases using sustained-release excipients in delivering therapeutic agents to human cerebrospinal fluid (CSF).

神経学的疾患は、治療が特に困難な疾患に属するものである。こうした疾患の治療を複雑にしている主要な要因として、薬剤を全身投与した場合に、多くの薬剤が血管脳関門を通過できないことがある。従来のドラッグデリバリーがこうした必要性に応えることができないことは、慢性の神経学的疾患、たとえば良性あるいは悪性の細胞増殖、または各種のウイルス性病因物質によって生じる疾患に際して特に問題がある。 Neurological diseases belong to diseases that are particularly difficult to treat. A major factor complicating the treatment of these diseases is that many drugs cannot cross the vascular brain barrier when administered systemically. The inability of conventional drug delivery to meet these needs is particularly problematic in chronic neurological diseases such as benign or malignant cell growth or diseases caused by various viral pathogens.

治療が最も困難な慢性の神経学的疾患の一つが、転移性浸潤によって生じる疾患、たとえば髄膜炎である。新生物性髄膜炎は、癌による軟髄膜の転移性浸潤によって生じ、急性白血病、リンパ腫、あるいは乳癌や肺癌の合併症であることが多い。剖検による研究では、固形腫瘍の患者の５−８％で、疾病の過程で軟髄膜への転移が生じていることが示されている。有効な全身治療によって生存率が上昇したこともあって、新生物性髄膜炎の発症率が上昇している可能性も具体的に示されている（Bleyer, Curr. Probl. Cancer, 12: 184, 1988）。 One of the most difficult chronic neurological diseases to treat is a disease caused by metastatic infiltration, such as meningitis. Neoplastic meningitis is caused by metastatic infiltration of the leptomeninges by cancer and is often a complication of acute leukemia, lymphoma, or breast and lung cancer. Autopsy studies have shown that 5-8% of patients with solid tumors have metastasized to the leptomeninges during the course of the disease. There is a specific indication that neoplastic meningitis is likely to have increased due to increased survival with effective systemic treatment (Bleyer, Curr. Probl. Cancer, 12: 184, 1988).

新生物性髄膜炎の標準的治療法としては、薬剤を単独で、あるいは組み合わせて鞘内に投与する化学療法と、放射線療法とがある。脳脊髄幹全体を照射する放射線療法は、往々にして重篤な骨髄抑制を生じ、白血病性髄膜炎の場合を除き、活性の軟髄膜炎疾患を抑制するうえで不十分であった（Kogan, in Principle and Practice of Radiation Oncology, Perez, et al. eds., Lippincott, Philadelphia, PA, pp. 1280-1281, 1987）。同様に、全身化学療法も、活性の髄膜炎性悪性疾患では一般的に有効というわけではなく、これは、薬剤の血液−脳関門透過性が悪いためである（Blasberg, et al., Can. Treat. Rep., 61: 633, 1977; Shapiro, et al., New Eng. J. Med., 293: 161, 1975）。新生物性髄膜炎の鞘内治療で最も一般に使用される３種の化学療法剤の１種であるシタラビンは、細胞周期特異性の薬剤で、ＤＮＡの合成中のみ細胞を死滅させる薬剤である。
Bleyer, Curr. Probl. Cancer, 12: 184, 1988 Kogan, in Principle and Practice of Radiation Oncology, Perez, et al. eds., Lippincott, Philadelphia, PA, pp. 1280-1281, 1987 Blasberg, et al., Can. Treat. Rep., 61: 633, 1977; Shapiro, et al., New Eng. J. Med., 293: 161, 1975 Standard treatments for neoplastic meningitis include chemotherapy, in which the drugs are administered alone or in combination in the sheath, and radiation therapy. Radiation therapy that irradiates the entire cerebrospinal stem often results in severe myelosuppression and is insufficient to control active leptomeningitis disease, except in cases of leukemic meningitis ( Kogan, in Principle and Practice of Radiation Oncology, Perez, et al. Eds., Lippincott, Philadelphia, PA, pp. 1280-1281, 1987). Similarly, systemic chemotherapy is not generally effective in active meningococcal malignancies because of poor drug blood-brain barrier permeability (Blasberg, et al., Can Treat. Rep., 61: 633, 1977; Shapiro, et al., New Eng. J. Med., 293: 161, 1975). Cytarabine, one of the three most commonly used chemotherapeutic agents for endothecal treatment of neoplastic meningitis, is a cell cycle specific drug that kills cells only during DNA synthesis .
Bleyer, Curr. Probl. Cancer, 12: 184, 1988 Kogan, in Principle and Practice of Radiation Oncology, Perez, et al. Eds., Lippincott, Philadelphia, PA, pp. 1280-1281, 1987 Blasberg, et al., Can. Treat. Rep., 61: 633, 1977; Shapiro, et al., New Eng. J. Med., 293: 161, 1975

したがって、シタラビンのような薬剤を用いて最適の腫瘍死滅率を得るには、薬剤を絶えず静注したり、毎日頻繁に注射したりして、脳脊髄液中で治療有効量を長期にわたって保持する必要がある。こうした処置は、患者にとっては不快であり、医師にとっては時間を要し、感染性髄膜炎の危険性が増大するおそれもある。したがって、治療用薬剤が神経学的疾患と接触しつづけて軽減効果を発揮しうるような徐放性のデポの処方が必要とされている。本発明は、こうした必要性に応えるものである。 Therefore, for optimal tumor killing with drugs such as cytarabine, the drug is continuously administered intravenously or frequently injected daily to maintain a therapeutically effective amount in the cerebrospinal fluid over time There is a need. Such a procedure is uncomfortable for the patient, time consuming for the physician, and may increase the risk of infectious meningitis. Therefore, there is a need for a sustained release depot formulation that allows therapeutic agents to continue to contact neurological diseases and exert a mitigating effect. The present invention addresses these needs.

本発明は、治療用薬剤を分散系の一部として投与すると、ヒトの各種の神経学的疾患を治療する際の、治療用薬剤の臨床有効性を大きく向上させることができるという重要な発見から出発したものである。治療に際してこうしたアプローチをとると、比較的長期にわたって薬剤を有効な用量レベルに保持して、神経学的疾患が絶えず薬剤に暴露されているようにすることが可能となる。驚くべきことに、神経学的疾患の原発巣が頭蓋領域、たとえば脳室近辺であっても、治療用薬剤を含有する分散系を腰椎から効果的に投与することが可能である。 The present invention is based on the important discovery that when a therapeutic agent is administered as part of a dispersion system, the clinical effectiveness of the therapeutic agent in treating various human neurological diseases can be greatly improved. It is a departure. This approach in treatment allows the drug to be maintained at an effective dose level for a relatively long period of time so that the neurological disease is constantly exposed to the drug. Surprisingly, it is possible to effectively administer a dispersion containing a therapeutic agent from the lumbar spine even if the primary lesion of the neurological disease is in the cranial region, eg near the ventricle.

本発明は、神経学的疾患を軽減するにあたって、治療用薬剤を脳脊髄液（ＣＳＦ）に投与する方法に関する。治療用薬剤が神経学的疾患を軽減するうえで驚くべき効果を有しているのは、治療用薬剤を分散系中に存在させたことによって、脳室腔内に治療用薬剤が持続的に存在しうるようになったからである。本発明の方法を用いると、治療用薬剤を神経学的疾患の領域に持続的に存在させることができるので、慢性で、臨床上の効果が特に達成しにくいこうした疾患を治療する上で特に有効な手段が得られる。 The present invention relates to a method of administering a therapeutic agent to cerebrospinal fluid (CSF) in alleviating neurological diseases. The surprising effect of therapeutic agents in reducing neurological disease is that the therapeutic agent is present in the disperse system so that the therapeutic agent is sustained in the ventricular cavity. This is because it can exist. With the method of the present invention, the therapeutic agent can be made to persist in the area of neurological disease, so it is particularly effective in treating such diseases that are chronic and difficult to achieve clinical effects. Can be obtained.

「神経学的疾患」という用語は、適切な治療用薬剤に対して応答しやすい脳、脊柱、ならびに関連組織、たとえば髄膜で生ずる任意の疾患を称するものである。本発明の方法が有効な各種神経学的疾患には、細胞増殖性疾患に関連した疾患もある。「細胞増殖性疾患」という用語は、悪性ならびに非悪性の細胞群で、周囲の組織と形態学的外観が往々にして異なるものを包含する。したがって、細胞増殖性疾患は、良性腫瘍あるいは悪性腫瘍に起因する疾患である可能性がある。後者の場合には、悪性腫瘍を、さらに、原発性の腫瘍、または転移性の腫瘍、すなわち全身の各部位から拡散してきた腫瘍として特徴づけることができる。原発性腫瘍は、グリア細胞（星状細胞腫、欠乏起膠腫、膠芽細胞腫）、脳室上衣細胞（脳室上衣腫）、ならびに支持組織（髄膜腫、シュバン細胞腫、脈絡叢のパピロマ）から生じることがある。子どもの場合、腫瘍はどちらかといえば原始的な細胞（髄芽細胞腫、神経芽細胞腫、脊索腫）から生じるのが代表的であるのに対して、成人の場合、星状細胞腫ならびに膠芽細胞腫が最も一般的である。しかし、最も一般的な中枢神経系の腫瘍は総じて転移性で、軟髄膜を浸潤する腫瘍は特にそうである。転移によって髄膜を浸潤するのが一般的である腫瘍としては、非ホジキンリンパ腫、白血病、黒色腫、ならび胸、肺、胃腸起源の腺癌がある。 The term “neurological disorder” refers to any disorder that occurs in the brain, spinal column, and related tissues, such as the meninges, that is susceptible to an appropriate therapeutic agent. Various neurological diseases for which the method of the present invention is effective include diseases associated with cell proliferative diseases. The term “cell proliferative disorder” encompasses malignant as well as non-malignant cell populations that often differ in morphological appearance from the surrounding tissue. Therefore, the cell proliferative disease may be a disease caused by a benign tumor or a malignant tumor. In the latter case, malignant tumors can be further characterized as primary tumors or metastatic tumors, ie tumors that have spread from different parts of the body. Primary tumors include glial cells (astrocytoma, deficient glioma, glioblastoma), ventricular ependymocytes (ventricular ependymoma), and supporting tissues (meningiomas, Schwann cell tumors, choroid plexus) May arise from papilloma). In children, tumors typically arise from primitive cells (medulloblastoma, neuroblastoma, chordoma), whereas in adults, astrocytomas and Glioblastoma is the most common. However, the most common central nervous system tumors are generally metastatic, especially those that invade the leptomeninges. Tumors that commonly infiltrate the meninges by metastasis include non-Hodgkin lymphoma, leukemia, melanoma, and adenocarcinoma of breast, lung, and gastrointestinal origin.

本発明の方法は、感染性疾患の結果として生じる神経学的疾患を軽減するうえでも有用である。無菌性髄膜炎ならびに脳炎は、ウイルスによって生じる中枢神経系の疾患である。本発明の方法が有している治療用薬剤の持続的存在を可能とする能力を最も享受しうるウイルス性感染症としては、遅発ウイルスあるいはレトロウイルスによってひきおこされるウイルス性疾患がある。レトロウイルスとして特に重要なのは、レンチウイルスで、そうしたレンチウイルスとしては、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２がある。 The methods of the present invention are also useful in reducing neurological diseases that occur as a result of infectious diseases. Aseptic meningitis as well as encephalitis are diseases of the central nervous system caused by viruses. Viral infections that can best enjoy the ability of the method of the present invention to enable the sustained presence of therapeutic agents include viral diseases caused by late or retroviruses. Of particular importance as retroviruses are lentiviruses, which include HTLV-I, HTLV-II, HIV-1 and HIV-2.

本発明の方法によれば、原核生物によって引き起こされた感染性疾患に起因する神経学的疾患を治療することもできる。一般的に、原核生物病因物質としては、細菌、たとえばヘモフィルス・インフルエンゼ、ナイセリア・メニンギティディス、ストレプトコッカス・ニューモニア、シュードモナス・エルギノーサ（緑膿菌）、エシェリキア・コリ（大腸菌）、クレブシエラ・エンテロバクター、プロテウス属の種、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（結核菌）、スタフィロコッカス・アウレウス、ならびにリステリア・モノサイトゲネスがある。また、感染性疾患は、真核生物、たとえば菌類によって引き起こされたものでもよい。本発明の方法で治療を行うことのできる重要な菌類としては、クリプトコッカス、コクシディオイデス・イミチス、ヒストプラズマ、カンジダ、ノカルジア、ならびにブラストミセスがある。 According to the method of the present invention, neurological diseases caused by infectious diseases caused by prokaryotes can also be treated. In general, prokaryotic pathogens include bacteria such as Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumonia, Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), Escherichia coli (E. coli), Klebsiella enterobacter , Proteus species, Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, and Listeria monocytogenes. Infectious diseases may also be caused by eukaryotic organisms such as fungi. Important fungi that can be treated with the method of the present invention include Cryptococcus, Coccidioides imimitis, Histoplasma, Candida, Nocardia, and Blast myces.

本発明の方法で使用する治療用薬剤は、デリバリーシステム、たとえばマクロ分子複合体、ナノカプセル、微小球、あるいはビーズの形状とした合成あるいは天然重合体、ならびに脂質含有系、たとえば水中油型乳液、ミセル、混合ミセル、合成膜小胞、および再封止赤血球に含有させて、脳脊髄液に投与される。これらのシステムは、まとめて、分散系として知られている。こうした系を構成する粒子は、通常、粒径が約２０ｎｍ−５０μｍである。粒径をこうした範囲とすると、粒子を製剤用緩衝液に懸濁させ、注射器を用いて脳脊髄液に注入することが可能となる。粒子は脳室から投与することもできるが、鞘内に投与する方が好ましい。特に好適なのは、腰椎穿刺による粒子の注入である。 The therapeutic agents used in the methods of the present invention include delivery systems such as macromolecular complexes, nanocapsules, microspheres, or synthetic or natural polymers in the form of beads, and lipid-containing systems such as oil-in-water emulsions, It is contained in micelles, mixed micelles, synthetic membrane vesicles, and resealed erythrocytes and administered to cerebrospinal fluid. These systems are collectively known as distributed systems. The particles constituting such a system usually have a particle size of about 20 nm-50 μm. When the particle size is within such a range, the particles can be suspended in the formulation buffer and injected into the cerebrospinal fluid using a syringe. The particles can be administered from the ventricle, but are preferably administered intrathecally. Particularly suitable is particle injection by lumbar puncture.

分散系の調製にあたって使用する材料は、通常、フィルター滅菌による滅菌が可能で、無毒で、生分解性であり、たとえば、アルブミン、エチルセルロース、カゼイン、ゼラチン、レシチン、リン脂質、ダイズ油をこの方法で使用することができる。重合体分散系は、マイクロカプセル化のコアセルベーションと似た方法で調製することができる。場合によっては、比重を変えることによって分散系の密度を変更して、分散液の密度を脳脊髄液より高くしたり、低くしたりすることができる。たとえば、イオヘキソール、イオジキサノール、メトリザミド、スクロース、トレハロース、グルコースをはじめとする比重の高い生体適合性の分子を加えることによって、分散物質の比重を高くすることができる。 The materials used in preparing the dispersion are usually sterilized by filter sterilization, non-toxic and biodegradable. For example, albumin, ethyl cellulose, casein, gelatin, lecithin, phospholipids and soybean oil are used in this way. Can be used. The polymer dispersion can be prepared in a manner similar to microencapsulation coacervation. In some cases, the density of the dispersion can be changed by changing the specific gravity, so that the density of the dispersion can be made higher or lower than the cerebrospinal fluid. For example, the specific gravity of the dispersed material can be increased by adding biocompatible molecules having a high specific gravity such as iohexol, iodixanol, metrizamide, sucrose, trehalose and glucose.

本発明で使用することのできる分散系の一種としては、治療用薬剤の重合体マトリクスへの分散液がある。治療用薬剤は、重合体マトリクスが分解あるいは生分解されるにつれて放出され、分解あるいは生分解された重合体マトリクスは、可溶性生成物となって、体外へと排出される。こうした目的では、いくつかの群の合成重合体、たとえば、ポリエステル（Pitt, et al., in Controlled Release of Bioactive Materials, R. Baker, Ed. Academic Press, New York, 1980）、ポリアミド（Sidman, et al., Journal of Membrane Science, 7:227, 1979）、ポリウレタン（Maser, et al., Journal of Polymer Science, Polymer Symposium, 66: 259, 1979）、ポリオルトエステル（Heller, et al., Polymer Engineering Science, 21: 727, 1981）、ポリ無水物（Leong, et al., Biomaterials, 7: 364, 1986）が研究されている。ＰＬＡならびにＰＬＡ／ＰＧＡのポリエステルについては、多数の研究がすでになされている。こうした研究がなされているのは、もちろん、利便性や安全性を配慮してのことである。これらの重合体は、生分解性の縫合糸としてすでに使用されているので入手が容易であり、分解して無毒の乳酸ならびにグリコール酸となる（U.S. 4,578,384、U.S. 4,765, 973を参照されたい。これらの文献は、本明細書に参考文献として包含される。）。 One type of dispersion that can be used in the present invention is a dispersion of a therapeutic agent in a polymer matrix. The therapeutic agent is released as the polymer matrix is degraded or biodegraded, and the degraded or biodegraded polymer matrix becomes a soluble product and is discharged outside the body. For these purposes, several groups of synthetic polymers such as polyesters (Pitt, et al., In Controlled Release of Bioactive Materials, R. Baker, Ed. Academic Press, New York, 1980), polyamides (Sidman, et al. al., Journal of Membrane Science, 7: 227, 1979), polyurethane (Maser, et al., Journal of Polymer Science, Polymer Symposium, 66: 259, 1979), polyorthoester (Heller, et al., Polymer Engineering) Science, 21: 727, 1981), polyanhydrides (Leong, et al., Biomaterials, 7: 364, 1986) have been studied. Numerous studies have already been made on PLA and PLA / PGA polyesters. Of course, this kind of research has been done in consideration of convenience and safety. These polymers are readily available as they are already used as biodegradable sutures and degrade to non-toxic lactic and glycolic acids (see US Pat. No. 4,578,384, US Pat. No. 4,765,973). Are incorporated herein by reference).

固体重合体分散系は、塊状重合、界面重合、溶液重合、ならびに開環重合といった重合法を使用することによって合成することができる（Odian, G., Principles of Polymerization, 2nd ed., John Wiley & Sons, New York, 1981）。これらの方法のうちの任意のものを用いることによって、機械的特性、化学的特性、生分解特性が多岐にわたる各種の異なった合成重合体が得られ、各種の特性や性質のこうした違いは、反応温度、反応物質の濃度、溶媒の種類、反応時間といったパラメータを変化させることによって制御することができる。場合によっては、固体重合体分散系を、まず大きめの塊として生成してから、粉砕などの処理を行って、適当な生理緩衝液への分散状態を維持するうえで十分に小さい粒子とすることもできる（U.S. 4,452,025、U.S. 4, 389, 330、U.S. 4,696,258を参照されたい。これらの文献は、本明細書に参考文献として包含される。）。 Solid polymer dispersions can be synthesized by using polymerization methods such as bulk polymerization, interfacial polymerization, solution polymerization, and ring opening polymerization (Odian, G., Principles of Polymerization, 2nd ed., John Wiley & Sons, New York, 1981). By using any of these methods, various different synthetic polymers with a wide range of mechanical, chemical and biodegradable properties can be obtained. It can be controlled by changing parameters such as temperature, concentration of reactants, type of solvent, and reaction time. In some cases, the solid polymer dispersion is first formed as a large lump, and then subjected to treatment such as pulverization to make the particles sufficiently small to maintain dispersion in an appropriate physiological buffer. (See US 4,452,025, US 4,389,330, US 4,696,258, which are hereby incorporated by reference).

生分解性の板、円柱、球から治療用薬剤が放出されるメカニズムは、 Hopfenberg（in Controlled Release Polymeric Formulations, pp. 26-32, Paul, D.R. and Harris, F.W., Eds., American Chemical Society, Washington, D.C., 1976）によって記載されている。放出量がマトリクスの崩壊によって主に調節されるようなこうしたデバイスからの添加剤の放出は、下記の単純な式によって表される。 The mechanism by which therapeutic drugs are released from biodegradable plates, cylinders, and spheres is described in Hopfenberg (in Controlled Release Polymeric Formulations, pp. 26-32, Paul, DR and Harris, FW, Eds., American Chemical Society, Washington , DC, 1976). The release of additives from such devices whose release is primarily controlled by matrix collapse is represented by the following simple equation:

Ｍ_t／Ｍ_∞＝１−［１−ｋ₀ｔ／Ｃ₀ａ］ⁿ
式中のｎは、球では３、円柱では２、板では１である。記号ａは、球あるいは円柱の半径、または板の半分の厚さを表す。Ｍ_tとＭ_∞は、それぞれ、時間ｔならびに無限時間の経過後の放出薬剤質量である。 M _t / M _∞ = 1− [1-k ₀ t / C ₀ a] ⁿ
N in the formula is 3 for a sphere, 2 for a cylinder, and 1 for a plate. The symbol a represents the radius of a sphere or cylinder, or the half thickness of a plate. M _t and M _∞ are the released drug masses after time t and infinite time, respectively.

本発明の分散系としては、合成膜小胞が最も好適である。「合成膜小胞」という用語は、通常リポソームとして知られている、同心円状の空間を１つ以上有する構造、ならびに単一の二重層膜によって画された複数の非同心円状の空間を有する構造のことを称するものである。 Synthetic membrane vesicles are most suitable as the dispersion system of the present invention. The term “synthetic membrane vesicle” refers to a structure commonly known as a liposome having one or more concentric spaces, as well as a plurality of non-concentric spaces defined by a single bilayer membrane. It is called.

リン脂質を水性溶媒に分散すると、リン脂質は膨潤して水和し、水性媒体が脂質二重層を隔てている多重ラメラの同心円状の二重層小胞を自発的に形成する。こうした系は、通常、多重ラメラリポソームあるいは多重ラメラ小胞（ＭＬＶ）と称され、直径が、約１００ｎｍ−約４μｍの範囲である。ＭＬＶを超音波処理すると、直径が約２０ｎｍ−約５０ｎｍの範囲の小型の単ラメラ小胞（ＳＵＶ）が生じ、このＳＵＶは、その中心部分に水性溶液を含有している。 When phospholipids are dispersed in an aqueous solvent, the phospholipids swell and hydrate, and the aqueous medium spontaneously forms multilamellar concentric bilayer vesicles separating the lipid bilayers. Such systems are commonly referred to as multilamellar liposomes or multilamellar vesicles (MLV) and have a diameter in the range of about 100 nm to about 4 μm. Sonication of the MLV produces small unilamellar vesicles (SUVs) with a diameter in the range of about 20 nm to about 50 nm, which contains an aqueous solution in its central part.

合成膜小胞の組成は、通常、リン脂質、特に相転移温度の高いリン脂質と、ステロイド、特にコレステロールとの組み合わせである。他のリン脂質あるいは脂質を使用することも可能である。 The composition of synthetic membrane vesicles is usually a combination of phospholipids, especially phospholipids with a high phase transition temperature, and steroids, especially cholesterol. Other phospholipids or lipids can also be used.

合成膜小胞を製造するうえで有用な脂質の例としては、ホスファチジル化合物、たとえばホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質、セレブロシド、ならびにガングリオシドがある。特に有用なのは、脂質部分が１４−１８個の炭素原子、特に、１６−１８個の炭素原子を含んでおり、飽和しているジアシルホスファチジルグリセロールである。リン脂質の具体例としては、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ならびにジステアロイルホスファチジルコリンがある。 Examples of lipids useful in producing synthetic membrane vesicles include phosphatidyl compounds such as phosphatidylglycerol, phosphatidylcholine, phosphatidylserine, phosphatidylethanolamine, sphingolipids, cerebrosides, and gangliosides. Particularly useful are diacylphosphatidylglycerols in which the lipid moiety contains 14-18 carbon atoms, in particular 16-18 carbon atoms and is saturated. Specific examples of phospholipids include egg phosphatidylcholine, dipalmitoyl phosphatidylcholine, and distearoyl phosphatidylcholine.

治療用薬剤を含有する小胞を調製するにあたっては、薬剤の封入効率、薬剤の不安定性、得られる小胞群の均一性ならびに粒径、薬剤対脂質の比、製剤の透過性の不安定性、ならびに処方剤の製剤学的許容性といった変化するものについて考慮する必要がある（Szoka, et al., Annual Reviews of Biophysics and Bioengineering, 9:467, 1980; Deamer, et al., in Liposomes, Marcel Dekker, New York, 1983, 27; Hope, et al., Chem. Phys. Lipids, 40: 89, 1986 ）。 In preparing vesicles containing therapeutic agents, drug encapsulation efficiency, drug instability, homogeneity and particle size of the resulting vesicles, drug to lipid ratio, formulation permeability instability, As well as pharmacological tolerance of the formulation should be considered (Szoka, et al., Annual Reviews of Biophysics and Bioengineering, 9: 467, 1980; Deamer, et al., In Liposomes, Marcel Dekker , New York, 1983, 27; Hope, et al., Chem. Phys. Lipids, 40: 89, 1986).

場合によっては、各種の程度の標的特異性を有する合成膜小胞を製造することも可能である。小胞のターゲティングは、解剖学的要因とメカニズム的要因とに基づいて分類されている。解剖学的分類は、選択性のレベル、たとえば器官特異性であるのか、細胞特異性であるのか、小器官特異性であるのかに基づいている。メカニズム的ターゲティングは、さらに、ターゲティングが受動的であるか能動的であるかにもとづいて区別することができる。受動的ターゲティングでは、洞様毛細血管を含む器官の細網内皮系（RES）の細胞に運ばれるという小胞の天然の傾向を利用する。一方、能動的ターゲティングでは、小胞を特異的なリガンド、たとえばモノクローナル抗体、糖、糖脂質、あるいはタンパク質とカップリングしたり、小胞の組成あるいは粒径を変えたりすることにより、小胞の改変を行って、天然に局在化が生じる部位以外の器官や細胞の種類にターゲテイングされるようにする。また、小胞が、毛細血管床に物理的に局在化してもよい。 In some cases, it is also possible to produce synthetic membrane vesicles having various degrees of target specificity. Vesicle targeting is classified based on anatomical and mechanistic factors. Anatomical classification is based on the level of selectivity, eg, organ-specific, cell-specific, or organelle-specific. Mechanistic targeting can be further distinguished based on whether the targeting is passive or active. Passive targeting takes advantage of the natural tendency of vesicles to be transported to cells of the reticuloendothelial system (RES) of organs that contain sinusoidal capillaries. Active targeting, on the other hand, modifies vesicles by coupling vesicles with specific ligands, such as monoclonal antibodies, sugars, glycolipids, or proteins, or by changing the vesicle composition or particle size. To target organs and cell types other than those where natural localization occurs. Vesicles may also be physically localized in the capillary bed.

本発明では、分散系として、再封止した赤血球を使用することもできる。赤血球を低張溶媒に懸濁すると、膨潤が生じて細胞膜が破断する。その結果、直径約２００−５００オングストロームの孔が形成され、細胞内環境と細胞外環境の平衡化が生じることとなる。次にこの周囲溶媒のイオン強度を等張条件に調整し、細胞を３７゜Ｃでインキュベートすると、孔が閉じ、赤血球が再封止される。この技術を使用すると、再封止した赤血球の内部に治療用薬剤を封入することができる。 In the present invention, resealed red blood cells can also be used as the dispersion system. When erythrocytes are suspended in a hypotonic solvent, swelling occurs and the cell membrane breaks. As a result, pores with a diameter of about 200-500 angstroms are formed, resulting in an equilibrium between the intracellular environment and the extracellular environment. The ionic strength of the surrounding solvent is then adjusted to isotonic conditions and the cells are incubated at 37 ° C., closing the pores and resealing the red blood cells. Using this technique, the therapeutic agent can be encapsulated inside the resealed red blood cells.

分散系の表面は、各種の方法で改変することができる。非脂質物質を、連結基を介して、一種以上の疎水基、たとえば約１２−２０個の炭素原子からなるアルキル鎖に結合させることもできる。合成膜小胞デリバリーシステムの場合、脂質基を脂質二重層に組み込んで、その化合物と膜二重層の安定的な結合状態(association)を保つことができる。その場合、脂質の鎖をその化合物と結合させるにあたって、各種の連結基を使用することができる。 The surface of the dispersion can be modified by various methods. Non-lipid substances can also be attached via a linking group to one or more hydrophobic groups, for example alkyl chains consisting of about 12-20 carbon atoms. In the case of a synthetic membrane vesicle delivery system, lipid groups can be incorporated into the lipid bilayer to maintain a stable association between the compound and the membrane bilayer. In that case, various linking groups can be used in binding the lipid chain to the compound.

リガンドの場合にしてもレセプターの場合にしても、合成膜小胞と結合する分子の数は、小胞のサイズならびに結合分子のサイズ、標的細胞のレセプターあるいはリガンドに対するその分子の結合親和性などに応じて、場合によって変わってくる。大抵の場合、結合分子は、小胞の外側膜の二重層中の分子の総数に対する結合分子のパーセントにもとづいて、約０．０５−約２モル％、好ましくは約０．１−約１モル％が、小胞上に存在する。 Whether in the case of a ligand or a receptor, the number of molecules that bind to a synthetic membrane vesicle depends on the size of the vesicle, the size of the binding molecule, the binding affinity of the molecule for the receptor or ligand of the target cell, etc. Depending on the situation. In most cases, the binding molecules will be from about 0.05 to about 2 mole percent, preferably from about 0.1 to about 1 mole, based on the percentage of binding molecules relative to the total number of molecules in the bilayer of the outer membrane of the vesicle. % Are present on the vesicles.

一般に、ターゲティングされたデリバリーシステムの表面に結合させる各種の化合物は、分散系が所望の組織に能動的に「ホームイン」することを可能とするリガンドならびにレセプターとする。リガンドは、レセプターと称されるまた別の化合物と特異的に結合し、リガンドとレセプタで相同なペアを形成するような任意の所望の化合物とすることができる。分散系の表面に結合させる化合物は、分子量が約１２５−２００であるような小型のハプテンから、これよりはるかに大型の、分子量が約６０００以上である、但し一般には１００万以下であるような抗体まで、多岐にわたるものとすることができる。タンパク質性のリガンドとレセプターが特に重要である。一般に、特定のエフェクタ分子と結合する表面膜タンパク質は、レセプターと称される。しかし、本発明で使用するレセプターの大半は抗体である。これらの抗体は、モノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよく、エピトープ決定基と結合することのできる断片、たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂、ならびにＦｖでもよい。タンパク質、たとえば抗体の合成膜小胞との結合技術は周知のものである（U.S. 4,806,466、U.S. 4,857, 735を参照されたい。これらの文献は、本明細書に参考文献として包含される。）。 In general, the various compounds that bind to the surface of the targeted delivery system are ligands and receptors that allow the dispersion to actively “home in” to the desired tissue. The ligand can be any desired compound that specifically binds to another compound, referred to as a receptor, to form a homologous pair of ligand and receptor. Compounds bound to the surface of the dispersion system can be from small haptens with a molecular weight of about 125-200 to much larger, with molecular weights of about 6000 or more, but generally less than 1 million. It can be as diverse as antibodies. Of particular importance are proteinaceous ligands and receptors. In general, surface membrane proteins that bind to specific effector molecules are called receptors. However, most of the receptors used in the present invention are antibodies. These antibodies may be monoclonal antibodies or polyclonal antibodies, and may be fragments capable of binding to epitope determinants, such as Fab, F (ab ′) ₂ , and Fv. Techniques for conjugating proteins such as antibodies to synthetic membrane vesicles are well known (see US Pat. No. 4,806,466, US Pat. No. 4,857,735, which are hereby incorporated by reference).

「治療用薬剤」という用語は、本明細書で本発明の組成物について使用する場合には、薬剤、放射性同位元素、ならびに免疫調整剤を包含するものであって、制限はない。当業者であれば、他の同様の物質についても、承知しているか、あるいはすぐに確認できるはずである。治療用薬剤と、所定の種類の分散系との組み合わせで、その組み合わせが他の組み合わせより適合性が高いというような組み合わせは当然ありうる。たとえば、固体重合体分散系の製造方法は、タンパク質性の治療用物質が有する持続性の生物活性とは適合しない可能性がある。しかし、特定の治療用物質と特定の分散系との非適合性の組み合わせを生ずるような諸条件は周知であったり、容易に確認できたりするので、こうした問題が生じる可能性を回避するのも日常的な作業である。 The term “therapeutic agent” as used herein with respect to the compositions of the invention includes, but is not limited to, drugs, radioisotopes, and immunomodulators. One of ordinary skill in the art will be aware of or can readily identify other similar materials. Of course, there can be a combination of a therapeutic agent and a predetermined type of dispersion, such that the combination is more compatible than the other combinations. For example, a method for producing a solid polymer dispersion may not be compatible with the sustained biological activity of proteinaceous therapeutics. However, conditions that result in an incompatible combination of a specific therapeutic substance and a specific dispersion are well known and can be easily identified, thus avoiding the possibility of such problems. It is a daily work.

分散系に含有させることのできる薬剤としては、非タンパク質性の薬剤ならびにタンパク質性の薬剤がある。「非タンパク質性の薬剤」という用語は、古典的に薬剤と称されていた化合物、たとえば、マイトマイシンＣ、ダウノルビシン、ビンブラスチン、ＡＺＴ、ならびに各種ホルモンを包含するものである。特に重要なのは、抗腫瘍性の細胞周期特異的な薬剤、たとえばシタラビン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロキシウリジン（ＦＵＤＲ）、ブレオマイシン、６−メルカプト−プリン、６−チオグアニン、フルダラビンリン酸塩、ビンクリスチン、ならびにビンブラスチンである。本発明で使用できる他の同様の物質についても、当業者には周知のはずである。 Examples of drugs that can be contained in the dispersion include non-protein drugs and protein drugs. The term “non-proteinaceous drug” encompasses compounds that have been classically called drugs, such as mitomycin C, daunorubicin, vinblastine, AZT, and various hormones. Of particular importance are anti-tumor cell cycle specific drugs such as cytarabine, methotrexate, 5-fluorouracil (5-FU), furoxyuridine (FUDR), bleomycin, 6-mercapto-purine, 6-thioguanine, fludarabine phosphate , Vincristine, and vinblastine. Other similar materials that can be used in the present invention should be well known to those skilled in the art.

分散系に含有させることのできるタンパク質性の薬剤としては、免疫調整剤をはじめとする生体応答調整剤、ならびに抗生物質がある。「生体応答調整剤」という用語は、特定の所望の治療効果、たとえば、腫瘍細胞の破壊を増強するようなかたちで免疫応答の調整に関与する物質を包含するものである。免疫応答調整剤の例としては、リンホカインのような化合物がある。リンホカインの例としては、腫瘍壊死因子、インターロイキン、リンホトキシン、マクロファージ活性化因子、遊走阻止因子、コロニー刺激因子、ならびにインターフェロンがある。分散系に含有させることのできるインターフェロンとしては、α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロン、ならびにそのサブタイプがある。また、こうしたタンパク質性の薬剤から誘導したり、それとは独立に誘導したりしたペプチドあるいは多糖の断片を含有させることもできる。当業者であれば、タンパク質性の薬剤として作用しうる他の物質についても、承知しているか、あるいはすぐに確認できるはずである。 Examples of proteinaceous drugs that can be contained in the dispersion system include biological response modifiers including immunomodulators and antibiotics. The term “biological response modifier” is intended to encompass substances that are involved in modulating the immune response in a way that enhances certain desired therapeutic effects, eg, destruction of tumor cells. Examples of immune response modifiers include compounds such as lymphokines. Examples of lymphokines include tumor necrosis factor, interleukin, lymphotoxin, macrophage activating factor, migration inhibitory factor, colony stimulating factor, and interferon. Examples of interferons that can be contained in the dispersion include α-interferon, β-interferon, γ-interferon, and subtypes thereof. It is also possible to contain a peptide or polysaccharide fragment derived from such a proteinaceous drug or derived independently from it. One skilled in the art will also be aware of or can readily identify other substances that can act as proteinaceous drugs.

細胞増殖性疾患、たとえば腫瘍を治療するにあたって放射性同位元素を使用する際には、腫瘍の分布および大きさ、そして同位元素の安定性および放射性といった要因によっては、ある種の放射性同位元素の方が、別の放射性同位元素より好適な場合もある。存在している悪性腫瘍の種類によっても、ある種の放射体の方が、別の放射体より好ましい場合がある。一般に、免疫療法では、αおよびβ粒子を放射する放射性同位元素が好適である。たとえば、患者が固形腫瘍の病巣を有している場合であれば、数ミリの組織を貫通しうる高エネルギーのβ放射体、たとえば⁹⁰Ｙが好適であろう。一方、白血病のように悪性疾患が単一の標的細胞から構成されている場合であれば、短い距離で高エネルギーのα放射体、たとえば²¹²Ｂｉが好適であろう。治療目的で分散系に含有させることのできる放射性同位元素の例としては、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、⁹⁰Ｙ、⁶⁷Ｃｕ、²¹²Ｂｉ、²¹¹Ａｔ、²¹²Ｐｂ、⁴⁷Ｓｃ、¹⁰⁹Ｐｄ、ならびに¹⁸⁸Ｒｅがある。分散系に含有させることのできる他の放射性同位元素についても、当業者には周知のはずである。分散系に抗体を含有させる場合には、抗体は、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であっても、治療用薬剤で標識しても、しなくてもよい。「抗体」あるいは「イムノグロブリン」という用語は、本明細書で使用する場合には、完全な分子ばかりでなく、細胞増殖性あるいは感染性の神経学的疾患の病因物質上に存在しているエピトープ決定基と結合することのできる断片、たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）₂、ならびにＦｖも包含するものである。抗体に結合する場合には、治療用薬剤は、直接結合することも、間接的に結合することもできる。間接的な結合の例としては、スペーサ部分を使用する例がある。こうしたスペーサ部分は、可溶性とすることも、不溶性とすることも可能で（Diener, et al., Science, 231: 148, 1986）、薬剤が標的部位で抗体分子から放出されるよう選択することができる。免疫療法に際して抗体と結合させることのできる治療用薬剤の例としては、上述の薬剤および放射性同位元素、ならびにレクチンおよびトキシンがある。 When using radioisotopes in the treatment of cell proliferative disorders, such as tumors, certain radioisotopes may be more dependent on factors such as tumor distribution and size and isotope stability and radioactivity. In some cases, it may be preferred over another radioisotope. Depending on the type of malignant tumor that is present, one type of emitter may be preferred over another. In general, radioisotopes that emit alpha and beta particles are preferred for immunotherapy. For example, if the patient has a solid tumor focus, a high energy beta emitter, such as ⁹⁰ Y, that can penetrate several millimeters of tissue would be suitable. On the other hand, if the malignant disease is composed of a single target cell such as leukemia, a high energy α emitter, such as ²¹² Bi, over a short distance would be suitable. Examples of radioisotopes that can be included in the dispersion for therapeutic purposes include ¹²⁵ I, ¹³¹ I, ⁹⁰ Y, ⁶⁷ Cu, ²¹² Bi, ²¹¹ At, ²¹² Pb, ⁴⁷ Sc, ¹⁰⁹ Pd, and ¹⁸⁸ Re. is there. Other radioisotopes that can be included in the dispersion should also be well known to those skilled in the art. When an antibody is contained in the dispersion, the antibody may be a monoclonal antibody, a polyclonal antibody, or may be labeled with a therapeutic agent. The term “antibody” or “immunoglobulin” as used herein refers to an epitope present on the pathogen of a cell proliferative or infectious neurological disease as well as a complete molecule. Also encompassed are fragments capable of binding determinants such as Fab, F (ab) ₂ , and Fv. When bound to the antibody, the therapeutic agent can be bound directly or indirectly. An example of indirect coupling is the use of a spacer portion. Such spacer moieties can be soluble or insoluble (Diener, et al., Science, 231: 148, 1986) and can be selected such that the drug is released from the antibody molecule at the target site. it can. Examples of therapeutic agents that can be conjugated to antibodies during immunotherapy include the aforementioned agents and radioisotopes, as well as lectins and toxins.

レクチンは、通常は植物性物質から単離されるタンパク質で、特定の糖部分と結合する。多くのレクチンは、細胞を凝集させたり、リンパ球を刺激したりすることも可能である。しかし、リシンは毒性のレクチンで、免疫治療に際して使用されてきた。その際には、リシンのαペプチド鎖（リシンの毒性を生じている部分）を抗体分子と結合させ、毒性効果の部位特異的デリバリーを実現するのが好適である。 Lectins are proteins that are normally isolated from plant material and bind to specific sugar moieties. Many lectins can also aggregate cells and stimulate lymphocytes. However, ricin is a toxic lectin and has been used in immunotherapy. In that case, it is preferable to realize the site-specific delivery of the toxic effect by binding the α peptide chain of lysine (the part causing the toxicity of ricin) to the antibody molecule.

トキシンは、植物、動物、あるいは微生物によって産生される有毒物質で、用量が十分多いと往々にして致死性ともなりうる物質である。ジフテリアトキシンは、コリネバクテリウム・ジフテリア（Corynebacterium diphtheria）によって産生される物質で、治療に使用することができる。このトキシンは、αならびにβサブユニットから構成されており、適切な条件下では、これらのサブユニットを分離することができる。毒性のα成分を抗体と結合して、抗体が特異性を有している標的細胞への部位特異的デリバリーに使用することができる。モノクローナル抗体と組み合わせることのできる他の治療用薬剤も公知であり、当業者であれば、容易に確認することができる。 Toxins are toxic substances produced by plants, animals, or microorganisms that can often be lethal when doses are high enough. Diphtheria toxin is a substance produced by Corynebacterium diphtheria and can be used for therapy. This toxin is composed of α and β subunits, which can be separated under appropriate conditions. Toxic alpha components can be conjugated to antibodies and used for site-specific delivery to target cells for which the antibody has specificity. Other therapeutic agents that can be combined with monoclonal antibodies are also known and can be readily ascertained by those skilled in the art.

標識あるいは未標識抗体も、各種の治療用薬剤、たとえば本明細書に記載した治療用薬剤と組み合わせて使用することができる。特に好ましいのは、モノクローナル抗体と、免疫調整剤あるいは他の生体応答調整剤との併用療法である。一例を挙げると、モノクローナル抗体は、α−インターフェロンと組み合わせて使用することができる。この治療法は、腫瘍細胞によるモノクローナル抗体に対して反応性の抗原の発現を増大させることによって、モノクローナル抗体の腫瘍へのターゲティングを増強するものである（Greiner, et al., Science, 235: 895, 1987）。複数の非同心円状の空間を有する合成膜小胞を使用した分散系は、非同心円状の空間のそれぞれに各種の治療用薬剤を封入することができるので、併用療法で特に有用である。当業者であれば、各種の生体応答調整剤から適当なものを選び出して、併用するモノクローナル抗体あるいは他の治療用薬剤の薬効を増強する所望のエフェクタ機能を創出することができるはずである。 Labeled or unlabeled antibodies can also be used in combination with various therapeutic agents such as those described herein. Particularly preferred is a combination therapy of a monoclonal antibody and an immunomodulator or other biological response modifier. As an example, monoclonal antibodies can be used in combination with α-interferon. This therapy enhances the targeting of monoclonal antibodies to tumors by increasing the expression of antigens reactive to monoclonal antibodies by tumor cells (Greiner, et al., Science, 235: 895). , 1987). A dispersion system using synthetic membrane vesicles having a plurality of non-concentric spaces is particularly useful in combination therapy because various therapeutic agents can be enclosed in each of the non-concentric spaces. A person skilled in the art should be able to select an appropriate one from various biological response modifiers and create a desired effector function that enhances the efficacy of the monoclonal antibody or other therapeutic agent used in combination.

本発明のモノクローナル抗体を、各種の治療用薬剤、たとえば本明細書に記載した治療用薬剤と組み合わせて使用する場合には、モノクローナル抗体と治療用薬剤の投与は、通常、実質的に同時期に行うこととなる。「実質的に同時期」という用語は、モノクローナル抗体と治療用薬剤が、時間的に相当近接して同時に投与されることを意味する。通常、治療用薬剤を投与してから、モノクローナル抗体を投与するのが好適である。たとえば、治療用薬剤を、モノクローナル抗体を投与する１−６日前に投与することができる。治療用薬剤の投与は、たとえば、神経学的疾患の性状、患者の状態、薬剤の半減期といった要因に応じて、毎日行うことも、あるいは任意の間隔をおいて行うこともできる。 When the monoclonal antibody of the present invention is used in combination with various therapeutic agents, for example, the therapeutic agents described herein, the administration of the monoclonal antibody and the therapeutic agent is usually substantially simultaneously. Will be done. The term “substantially contemporaneous” means that the monoclonal antibody and the therapeutic agent are administered simultaneously in close proximity in time. In general, it is preferred to administer the therapeutic agent followed by the monoclonal antibody. For example, the therapeutic agent can be administered 1-6 days before the monoclonal antibody is administered. Administration of the therapeutic agent can be performed daily or at any interval, depending on factors such as the nature of the neurological disease, the condition of the patient, and the half-life of the agent.

本発明の組成物に関して使用する場合、「治療上有効な」という用語は、治療用薬剤が、その治療用薬剤が目的としている特定の医学上の効果を達成するのに十分な濃度で存在することを意味する。達成しうる所望の医療効果としては、化学療法、抗生物質療法、ならびに代謝の調節があるが、これらに限定されるものではない。正確な用量は、その特定の治療用薬剤の種類および所望の効果といった要因、ならびに年齢、性別、一般的状態などの患者側の要因に左右される。当業者であれば、こうした各種の要因を考慮し、使用して、過度の実験を行わなくても、治療上有効な濃度を容易に設定することができるはずである。 As used in reference to the compositions of the present invention, the term “therapeutically effective” means that the therapeutic agent is present at a concentration sufficient to achieve the particular medical effect for which the therapeutic agent is intended. Means that. Desired medical effects that can be achieved include, but are not limited to, chemotherapy, antibiotic therapy, and metabolic regulation. The exact dose depends on factors such as the type of the particular therapeutic agent and the desired effect, as well as patient factors such as age, gender and general condition. One of ordinary skill in the art should be able to easily set a therapeutically effective concentration in view of and using these various factors without undue experimentation.

以上の記載は、本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲は、これらの記載によって限定されるものではない。実際、当業者であれば、過度の実験を行わなくても、本明細書の教示内容にもとづいて、さらなる実施態様を容易に考案し、製造することができるはずである。 The above description is for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited by these descriptions. Indeed, one of ordinary skill in the art would be able to easily devise and manufacture additional embodiments based on the teachings herein without undue experimentation.

実施例１
デポ／ＡＲＡ−Ｃ（ＤＴＣ１０１）の製造
この実施例では、単一の二重層膜で画され、ａｒａ−Ｃの入った複数の非同心円状の空間を有する合成膜小胞の製造について説明する。 Example 1
Production of Depot / ARA-C (DTC101) This example describes the production of synthetic membrane vesicles defined by a single bilayer membrane and having a plurality of non-concentric spaces containing ara-C.

２インチの撹拌用ブレードを装着した１３リットル入りのガラス製ホモジナイザー容器中で、ジオレイルレシチン（８．３ｇ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（１．６６ｇ）、コレステロール（６．１５ｇ）、およびトリオレイン（１．７３ｇ）を、８００ｍｌのクロロホルムと混合した（脂質相）。次に、シトシンアラビノシド（３３ｍｇ／ｍｌ）を０．１５１ＮＨＣｌ（最終容量、１．２リットル）に溶解し、ホモジナイザー容器に加えた。油中水型のエマルジョンを形成するために、混合用ブレードを、８００ｒｐｍで１０分間回転させた。 Dioleyl lecithin (8.3 g), dipalmitoylphosphatidylglycerol (1.66 g), cholesterol (6.15 g), and triolein (13 g) in a 13 liter glass homogenizer vessel equipped with a 2 inch stirring blade. 1.73 g) was mixed with 800 ml of chloroform (lipid phase). Next, cytosine arabinoside (33 mg / ml) was dissolved in 0.151 N HCl (final volume, 1.2 liters) and added to the homogenizer vessel. The mixing blade was rotated at 800 rpm for 10 minutes to form a water-in-oil emulsion.

遊離塩基リシン（４０ｍＭ）ならびにグルコース（３．２％）を含む低イオン強度の水性成分をホモジナイザーに加えてクロロホルム小球を形成し、混合用ブレードを３５００ｒｐｍで９０秒間回転させた。クロロホルムを除去するべく、窒素ガスを６２リットル／分で混合物の中に３０分間吹き込み、その間容器を３５゜Ｃに加熱した。得られた生成物を精製し、ポリスルホン中空糸（孔径０．１μ、表面積８平方フィート）を使用したダイアフィルトレーションによって濃縮した。 Low ionic strength aqueous components including free base lysine (40 mM) and glucose (3.2%) were added to the homogenizer to form chloroform globules and the mixing blade was rotated at 3500 rpm for 90 seconds. To remove the chloroform, nitrogen gas was blown into the mixture at 62 liters / minute for 30 minutes, while the vessel was heated to 35 ° C. The resulting product was purified and concentrated by diafiltration using polysulfone hollow fibers (pore size 0.1 μ, surface area 8 square feet).

実施例２
デポ／ＡＲＡ−Ｃ封入物を用いた鞘内ならびに脳室内投与による治療 Example 2
Treatment by intrathecal and intraventricular administration using depot / ARA-C inclusions

Ａ．患者ならびに方法
癌という組織学的診断結果と、新生物性髄膜炎という放射線学的あるいは細胞学的検査結果とを有している１２名の患者を治療した。このヒトで研究は、ＵＣＳＤのヒューマン・サブジェクツ・コミッティーによる承認を得てから実施されたものである。実施状況に要件はなく、研究以前に脳脊髄液内投与による化学療法を行っていてもよいとされた。患者には、合計４７用量のＤＴＣ１０１が与えられた。４名の患者が血液学的悪性疾患に罹患しており、８名の患者が固形腫瘍に罹患していた（表１）。５名の患者に、全身的化学療法による並行的な治療を行った。

芽球クリーゼ状態の慢性髄膜炎性白血病の患者１名以外の全患者の右側脳室に、オマヤレザバーを載置した。治療としては、２−３週に１回、保存剤を含有しない０．９％ＮａＣｌ溶液へ懸濁させたＤＴＣ１０１を、脳室あるいは腰椎鞘経由で、一回の注射で投与した。レザバーは、ＤＴＣ１０１の投与後ならびに脳脊髄液をサンプリングするごとに、自己由来の脳脊髄液で洗浄した。 A. Patients and Methods Twelve patients with histological diagnosis of cancer and radiological or cytological results of neoplastic meningitis were treated. This human study was conducted with the approval of the UCSD Human Subjects Committee. There was no requirement for the implementation status, and it was said that chemotherapy by intracerebral spinal fluid administration may be performed before the study. Patients were given a total of 47 doses of DTC101. Four patients suffered from hematological malignancies and eight patients suffered from solid tumors (Table 1). Five patients received concurrent treatment with systemic chemotherapy.

Omaya reservoir was placed in the right ventricle of all patients except one patient with chronic meningitis leukemia with blast crisis. As a treatment, once every 2-3 weeks, DTC101 suspended in a 0.9% NaCl solution containing no preservative was administered as a single injection via the ventricle or lumbar sheath. The reservoir was washed with autologous cerebrospinal fluid after administration of DTC101 and every time cerebrospinal fluid was sampled.

Ｂ．処置
評価が可能であった２名の患者では、３回以上のサイクルを行ってから、初回量の１２．５ｍｇを増量した（２５、３７．５、５０、１２５ｍｇ）。病状が進行するか、最大量の７用量となるまで治療を継続した。最初の一連の検査では、病歴および理学検査ならびに一通りの神経学的検査、全血球数（ＣＢＣ）および血小板数、細胞学的検査用の脳脊髄液試料、血清の化学的性質、適当な造影剤を用いたまたは用いないＣＴあるいはＭＲスキャン、インジウム−DTPA脳脊髄液流動研究を行った（Chamberlain, et al., Neurol., 40:435-438, 1990; Chamberlain, et al., Neurol., 41: 1765-1769, 1991）。ＤＴＣ１０１の各サイクルの前に、神経学的履歴を一通り調べ、検査を行い、血球数と化学的性質を調べ、細胞学的検査用の脳脊髄液の試料を採取した。一週間以上の間隔をおいて２回続けて行った脳脊髄液の細胞学的検査が陰性であった場合に、完全な細胞学的応答が生じたと定義し、完全な応答を示さないものは、無応答と判定した。細胞学的所見が陰性から陽性に変わった場合に、進行性の疾患であると判定した。実質の中枢神経系の病変、あるいは中枢神経系の外側の病変の変化は、ＣＳＲ内の治療によって影響を受けるとは考えられないので、応答の判定に際して使用しなかった。処置によって生じた各種の中毒症状は、米国国立癌研究所（National Cancer Institute）の「共通中毒症状スケール（Common Toxicity Scale）」で評価した。 B. Treatment The two patients who were able to evaluate were given 32.5 cycles or more before increasing the initial dose of 12.5 mg (25, 37.5, 50, 125 mg). Treatment continued until the disease progressed or the maximum dose of 7 was reached. The first series of tests included a history and physical examination and a complete neurological examination, complete blood count (CBC) and platelet count, cerebrospinal fluid samples for cytological examination, serum chemistry, appropriate imaging CT or MR scans with or without agents, indium-DTPA cerebrospinal fluid flow studies were performed (Chamberlain, et al., Neurol., 40: 435-438, 1990; Chamberlain, et al., Neurol., 41: 1765-1769, 1991). Prior to each cycle of DTC101, a neurological history was examined and examined, blood counts and chemical properties were examined, and cerebrospinal fluid samples for cytological examination were collected. If a cerebrospinal fluid cytological test performed twice consecutively at intervals of 1 week or more is negative, it is defined that a complete cytological response has occurred and does not show a complete response. It was determined that there was no response. A progressive disease was determined when the cytological findings changed from negative to positive. Changes in parenchymal central nervous system lesions or lesions outside the central nervous system are not considered to be affected by treatment within the CSR and were not used in response determination. The various toxic symptoms resulting from the treatment were evaluated on the "Common Toxicity Scale" of the National Cancer Institute.

図１は、１２．５−１２５ｍｇの範囲の各種用量のＤＴＣ１０１を脳室内に投与した後の、脳脊髄液でのシタラビンの薬物動態を示すものであり、その際、脳脊髄液の試料は、ＤＴＣ１０１を投与したのと同じ脳室から採取した。図Ａ：シタラビンの合計濃度。図Ｂ：遊離シタラビンの濃度。データの各点は、３回以上のコースから得られた平均値であり、誤差バーは、平均の標準誤差を示す。最大許容量（７５ｍｇ）を脳室内に投与した後、脳室の遊離シタラビン（デポフォーム（DepoFoam）粒子から脳脊髄液に放出されるシタラビン）の濃度は、平均初期（α）半減期が９．４±１．６時間（SEM)、末期（β）半減期が１４．１±２３時間（SEM）で指数的に低減した。合計脳室濃度は（遊離シタラビン＋封入シタラビン）も、同様に指数的に低減した。 FIG. 1 shows the pharmacokinetics of cytarabine in cerebrospinal fluid after administration of various doses of DTC101 ranging from 12.5 to 125 mg into the ventricle. It was collected from the same ventricle where DTC101 was administered. Figure A: Total concentration of cytarabine. Figure B: Free cytarabine concentration. Each point of the data is an average value obtained from three or more courses, and an error bar indicates the standard error of the average. After administration of the maximum tolerated dose (75 mg) into the ventricle, the concentration of free cytarabine in the ventricle (cytarabine released from the DepoFoam particles into the cerebrospinal fluid) has an average initial (α) half-life of 9. 4 ± 1.6 hours (SEM) and terminal (β) half-life decreased exponentially at 14.1 ± 23 hours (SEM). The total ventricular concentration (free cytarabine + encapsulated cytarabine) decreased exponentially as well.

薬物動態学的研究
脳室の脳脊髄液と血液の試料を、投与直前と、投与後１時間、そして１、２、４、７、１４、２１日後に採取した。何人かの患者では、腰椎の脳脊髄液の試料を、腰椎の脳脊髄液の細胞学的性質の評価の一部として、上記採取時点の１時点で採取した。腰椎内投与に関しては、１時間後の試料のかわりに、腰椎嚢の試料を投与の３分後に採取した。採取した脳脊髄液ならびに血液の試料は、いずれも、最終濃度で４０μＭのテトラヒドロウリジンの入った試験管に採取し、シタラビンがシチジンデアミナーゼによってインビトロで異化作用を生じてウラシルアラビノシド（ara-U）となるのを防止した。ヘパリンを加えた血液試料をただち氷上に載置し、遠心分離によって血液細胞から血漿を単離した。脳脊髄液の試料を６００×ｇで５分間遠心分離して、デポフォームの粒子を遊離シタラビン分画から分離した（上清）。２００μｌのメタノールと蒸留水中で順次撹拌することによって、デポフォームのペレットを溶解した。脳脊髄液の遊離シタラビン分画は、それ以上の処理を行なわずに分析した。血漿を、限外濾過した（ＹＭＴ膜、No. 4104；米国マサチューセッツ州ダンバース（Danvers, MA)、アミコン社(Amicon Corp.)）。脳脊髄液と血漿の試料を−２０゜Ｃで凍結保存しておいてから、すでに記載されている方法（Kaplan, JG, et al., J. Neuro-Onc., 9: 225-229, 1990）を改変した方法で分析した。試料の分析は、高速液体クロマトグラフィー装置（米国マサチューセッツ州ミルフォード（Milford, MA）、ウォーターズアソシエーツ（Waters Associates））を、２５４ｍｍと２８０ｍｍ紫外線検出装置、２つの直列につないだペコスフィア（Pecosphere）Ｃ−１８逆相カラム（３Ｘ３Ｃカートリッジ、米国コネティカット州ノーウォーク（Norwalk, CT）、パーキン−エルマー（Perkin-Elmer））、ならびに流速１．０ｍｌ／分の無勾配流動相である６．７ｍＭリン酸カリウム／３．３ｍＭリン酸混合物（ｐＨ２．８）とともに使用することによって行った。シタラビンの保持時間は６分間、主要な代謝産物であるara-Ｕの保持時間は７分間であった。互いに干渉するピークはなかった。 Pharmacokinetic study Cerebrospinal fluid and blood samples from the ventricle were collected immediately before administration, 1 hour after administration, and 1, 2, 4, 7, 14, 21 days after administration. In some patients, a sample of lumbar cerebrospinal fluid was collected at one of the above collection points as part of the assessment of the cytological properties of lumbar cerebrospinal fluid. For intralumbar administration, a lumbar sac sample was taken 3 minutes after administration instead of the 1 hour sample. The collected cerebrospinal fluid and blood samples were collected in a test tube containing 40 μM tetrahydrouridine at a final concentration, and cytarabine was catalyzed in vitro by cytidine deaminase to produce uracil arabinoside (ara-U). ). Blood samples with heparin added were immediately placed on ice and plasma was isolated from blood cells by centrifugation. Cerebrospinal fluid samples were centrifuged at 600 × g for 5 minutes to separate the depoform particles from the free cytarabine fraction (supernatant). Depot foam pellets were dissolved by sequentially stirring in 200 μl methanol and distilled water. The free cytarabine fraction of cerebrospinal fluid was analyzed without further processing. Plasma was ultrafiltered (YMT membrane, No. 4104; Danvers, Mass., USA, Amicon Corp.). Cerebrospinal fluid and plasma samples are cryopreserved at −20 ° C. prior to the previously described method (Kaplan, JG, et al., J. Neuro-Onc., 9: 225-229, 1990). ) Was analyzed by a modified method. Sample analysis was performed using a high performance liquid chromatography apparatus (Milford, Mass., USA, Waters Associates), a 254 mm and 280 mm UV detector, two Pecosphere C-series connected in series. 18 reverse phase column (3 × 3C cartridge, Norwalk, Conn., USA, Perkin-Elmer) and 6.7 mM potassium phosphate / By using with 3.3 mM phosphoric acid mixture (pH 2.8). The retention time of cytarabine was 6 minutes, and the retention time of ara-U, which is the main metabolite, was 7 minutes. There were no peaks that interfered with each other.

薬物動態学的曲線は、指数関数Ｃ（ｔ）＝Ａｅ^-αt＋ＢＥ^βtにあてはまり、ここで、Ｃ（ｔ）は時間５の時点での濃度、ＡおよびＢは定数、そしてαおよびβは初期速度定数および末期速度定数である。ＲＳＴＲＩＰプログラム（マイクロマッツ・サイエンティフィック・ソフトウェア（MicroMath Scientific Software）、米国ユタ州ソルトレークシティ（Salt Lake City, UT））を使用して、反復非線形回帰によって曲線をあてはめた。濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、線形台形公式によって最後に測定した濃度まで決定し、無限大まで外挿法によって推定した。シタラビンのＣＳＲからのクリアランスを、シタラビンの投与量をＡＵＣで割ることによって決定した。脳脊髄液中のシタラビンの初期分布容積（Ｖ_d）を、シタラビンの用量を１時間の時点で測定した濃度で割ることによって、計算した。 The pharmacokinetic curve ^fits the exponential function C (t) = Ae ^−αt + BE ^βt , where C (t) is the concentration at time 5, A and B are constants, and α and β are initial The rate constant and the terminal rate constant. Curves were fitted by iterative nonlinear regression using the RSTRIP program (MicroMath Scientific Software, Salt Lake City, UT, USA). The area under the concentration-time curve (AUC) was determined to the last measured concentration by the linear trapezoidal formula and extrapolated to infinity. The clearance of cytarabine from the CSR was determined by dividing the cytarabine dose by the AUC. The initial distribution volume (V _d ) of cytarabine in the cerebrospinal fluid was calculated by dividing the dose of cytarabine by the concentration measured at the 1 hour time point.

表２には、薬物動態学的パラメータの詳細を、用量の関数として示す。用量を１２．５ｍｇから１２５ｍｇに増大させても、半減期（Ｔ_1/2）、分布容積（Ｖ_d）、ならびにクリアランス（Ｃｌ）が有意に変動することはなかった。

Table 2 gives details of the pharmacokinetic parameters as a function of dose. Increasing the dose from 12.5 mg to 125 mg did not significantly alter half-life (T _1/2 ), volume of distribution (V _d ), and clearance (Cl).

図２は、ＤＴＣ１０１を投与してから１時間後に測定した最大脳室シタラビン濃度（図Ａ）、及び脳脊髄液の薬剤被爆量（ＡＵＣ、図Ｂ）を、脳室に投与した用量の関数として示す。白丸及び黒丸は、それぞれ、合計シタラビン濃度及び遊離シタラビン濃度を示す。データの各点は、３回以上のコースから得られた平均値であり、誤差バーは、平均の標準誤差を示す。これらの薬物動態学上のパラメータと用量との間には線形の関係があり、調べた範囲の用量では、クリアランスの過程が飽和することはないことが示唆された。ａｒａ−Ｕの合計ＡＵＣは、脳脊髄液中のシタラビンの合計ＡＵＣの、平均で３．７±０．９％（ＳＥＭ）であった。血漿では、どの時点でもシタラビンもａｒａ−Ｕも検出されなかった（シタラビン及びａｒａ−Ｕの検出限界＝０．２５μｇ／ｍｌ）。 FIG. 2 shows the maximum ventricular cytarabine concentration (Figure A) measured 1 hour after administration of DTC101, and cerebrospinal fluid drug exposure (AUC, Figure B) as a function of the dose administered to the ventricle. Show. White circles and black circles indicate total cytarabine concentration and free cytarabine concentration, respectively. Each point of the data is an average value obtained from three or more courses, and an error bar indicates the standard error of the average. There was a linear relationship between these pharmacokinetic parameters and the dose, suggesting that the clearance process would not saturate at the dose range studied. The total AUC of ara-U averaged 3.7 ± 0.9% (SEM) of the total AUC of cytarabine in cerebrospinal fluid. In plasma, neither cytarabine nor ara-U was detected at any time point (detection limit for cytarabine and ara-U = 0.25 μg / ml).

腰椎の脳脊髄液試料は、最大許容量（７５ｍｇ）のＤＴＣ１０１を脳室に投与した後に、２名の患者での５回のコースの間に採取を行った。図３では、脳室の薬剤濃度及びＤＴＣ１０１の粒子数を、腰椎のクモ膜下腔の値と比較している。図には、脳室（黒丸）及び腰椎（白丸）のシタラビン濃度の比較（図Ａ及びＢは、それぞれ合計シタラビン濃度と遊離シタラビン濃度）と、ならびにＤＴＣ１０１の粒子数との比較（図Ｃ）を、ＤＴＣ１０１を脳室内に投与してから経過した時間の関数として行っている。初期脳室内遊離シタラビン濃度は、半減期６．８時間で指数的に減少し、腰椎脳脊髄液ではシタラビンが１．２５時間後に検出可能となり、倍加時間０．５３時間で急激に上昇した。その後、腰椎及び脳室の遊離及び合計のシタラビン濃度は並行して減少し、腰椎の薬剤濃度は、減衰曲線の末期相を通じて、脳室内の薬剤濃度と同程度のままであった。 Cerebrospinal fluid samples of the lumbar spine were collected during 5 courses in 2 patients after the maximum tolerated dose (75 mg) of DTC101 was administered to the ventricle. In FIG. 3, the drug concentration in the ventricle and the number of DTC101 particles are compared with the values of the lumbar subarachnoid space. The figure shows a comparison of cytarabine concentrations in the ventricles (black circles) and lumbar vertebrae (white circles) (Figs. A and B are the total cytarabine concentration and free cytarabine concentration, respectively) and the number of particles of DTC101 (Fig. C). , As a function of the time elapsed since the administration of DTC101 into the ventricle. The initial intracerebroventricular free cytarabine concentration decreased exponentially with a half-life of 6.8 hours, and cytarabine was detectable in lumbar cerebrospinal fluid after 1.25 hours, and increased rapidly with a doubling time of 0.53 hours. Subsequently, the lumbar and ventricular free and total cytarabine concentrations decreased in parallel, and the lumbar drug concentration remained similar to the ventricular drug concentration throughout the late phase of the decay curve.

脳室及び腰椎内の脳脊髄液試料は、ＤＴＣ１０１を腰椎穿刺によって鞘内に投与した４名の患者から採取した。図４には、脳室の脳脊髄液で遊離シタラビンの治療有効濃度（＞０．１μｇ／ｍｌ）が腰椎穿刺による鞘内投与の後３−６日間にわたって保持され、腰椎内投与後１４日間にわたって、脳室の脳脊髄液で有意な合計シタラビン濃度が検出されたことが示されている。ＤＴＣ１０１を腰椎に投与してから経過した時間の関数としての脳室の脳脊髄液のシタラビン濃度（実線）、３分及び１４日経過後の腰椎の脳脊髄液のシタラビン濃度（破線）。白四角及び白丸は合計シタラビン濃度を示し、黒四角及び黒丸は遊離シタラビン濃度を示す。腰椎内への投与の後、腰椎のクモ膜下腔では、１４日以上にわたって遊離シタラビンの治療有効濃度が保持された。 Cerebrospinal fluid samples in the ventricle and lumbar spine were collected from 4 patients who received DTC101 intrathecally by lumbar puncture. FIG. 4 shows that the therapeutically effective concentration of free cytarabine (> 0.1 μg / ml) in the cerebrospinal fluid of the ventricles was maintained for 3-6 days after intrathecal administration by lumbar puncture and for 14 days after intralumbar administration It has been shown that significant total cytarabine concentrations were detected in the cerebrospinal fluid of the ventricles. Ventricular cerebrospinal fluid cytarabine concentration (solid line) as a function of time elapsed since DTC101 was administered to the lumbar spine (3) and cytarabine concentration (dashed line) of lumbar cerebrospinal fluid after 3 days and 14 days White squares and white circles indicate the total cytarabine concentration, and black squares and black circles indicate the free cytarabine concentration. After administration into the lumbar spine, a therapeutically effective concentration of free cytarabine was maintained in the lumbar subarachnoid space for over 14 days.

表３には、ＤＴＣ１０１による毒性を用量の関数として示す。毒性は一過性であり、ＤＴＣ１０１を下記の量投与しても薬剤に関連した毒性によって治療に遅延が生じることはなかった。１２５ｍｇのＤＴＣ１０１を脳室内に投与してから３６時間経過後に発症した毒性脳障害に起因する死亡例が１例あった。この患者は、脳の基底部での脳脊髄液の流れを部分的に遮断するための脳全体への照射（５回に分けて２０Ｇｙ）も同時に受けていた。ＤＴＣ１０１を投与する２カ月前に自己骨髄移植を受けていた患者１名を除き、ＤＴＣ１０１によると思われる血液学的毒性は認められなかった。ＤＴＣ１０１の最大許容量は７５ｍｇであり、用量制限的毒性は用量を１２５ｍｇとした際に生じ、この用量では、過度の嘔吐及び脳障害が認められた。

Table 3 shows the toxicity due to DTC101 as a function of dose. Toxicity was transient and treatment with DTC101 given below did not delay treatment due to drug-related toxicity. There was one death due to toxic brain injury that developed 36 hours after the administration of 125 mg of DTC101 into the ventricle. This patient also received irradiation of the entire brain (20 Gy divided into 5 times) to partially block the flow of cerebrospinal fluid at the base of the brain. Except for one patient who had undergone autologous bone marrow transplant 2 months prior to the administration of DTC101, no hematological toxicity was observed due to DTC101. The maximum tolerated dose for DTC101 was 75 mg, and dose limiting toxicity occurred at a dose of 125 mg, at which excessive vomiting and brain damage were observed.

表４には、２−４ｍｇの用量のデキサメタゾンの１日２回の経口投与が、ＤＴＣ１０１に関連する毒性を緩和する上で大きな効果を有していたことが示されている。発熱、頭痛、吐き気／嘔吐はいずれも抑制された。３名の患者にデキサメタゾンを経口投与しつつＤＴＣ１０１を投与し、またデキサメタゾンの経口投与を行わずに同量のＤＴＣ１０１を投与した。３名の患者は、いずれもデキサメタゾンの投与を行わない場合には毒性を呈し、デキサメタゾンの投与を同時に行った場合には毒性がほぼ完全に抑制された。

Table 4 shows that oral administration of dexamethasone at a dose of 2-4 mg twice daily had a significant effect in alleviating the toxicity associated with DTC101. Fever, headache, nausea / vomiting were all suppressed. Three patients received DTC101 while orally administering dexamethasone, and the same amount of DTC101 was administered without oral administration of dexamethasone. All three patients were toxic when dexamethasone was not administered, and toxicity was almost completely suppressed when dexamethasone was administered simultaneously.

４名の患者を、ＤＴＣ１０１を腰椎の鞘内に投与して治療した。毒性は、９サイクル中の４サイクルでグレード１−２の軽い背中の痛みが認められた以外は、ＤＴＣ１０１を脳室内に投与した後に観察されるものと類似していた。 Four patients were treated with DTC101 administered into the lumbar sheath. Toxicity was similar to that observed after DTC101 was administered intraventricularly, except grade 1-2 light back pain was observed in 4 out of 9 cycles.

１２名の患者のうち９名は、治療直前の脳脊髄液の細胞学的所見が陽性であった。細胞学的評価を行うことが可能なこれらの９名の患者のうちの７名では、ＤＴＣ１０１での治療によって脳脊髄液の悪性細胞がなくなった（表５）。応答の持続期間は２−２６週にわたっており、中央値は１６週であった。応答を示さない患者のうちの１名はエイズ関連非ホジキンリンパ腫に罹患しており、もう１名の患者は原発性の脳腫瘍に罹患していた。検討を行った全患者の生存期間は、３−６４週の範囲であった（中央値：２１週）。

Nine of the 12 patients were positive for cerebrospinal fluid cytology immediately prior to treatment. In 7 of these 9 patients capable of performing cytological evaluation, treatment with DTC101 eliminated malignant cells in the cerebrospinal fluid (Table 5). The duration of response ranged from 2-26 weeks with a median of 16 weeks. One of the patients who did not respond was afflicted with AIDS-related non-Hodgkin lymphoma and the other was afflicted with a primary brain tumor. Survival for all patients studied ranged from 3 to 64 weeks (median: 21 weeks).

１２名の患者のうち３名は、ＣＴ又はＭＲＩスキャンで調べると新生物性髄膜炎の兆候を示していたものの、治療前の脳脊髄液の細胞学的所見が陰性であったので、細胞学的応答について評価することはできなかった。しかし、これらの３名の患者のいずれも、治療中に脳脊髄液が陽性の細胞学的所見を示すことはなかった。 Three of the 12 patients showed signs of neoplastic meningitis when examined by CT or MRI scans, but had negative cerebrospinal fluid cytological findings prior to treatment. The pharmacological response could not be evaluated. However, none of these three patients showed a positive cytological finding of cerebrospinal fluid during treatment.

驚くべきことに、細胞学的応答は全ての用量レベルで認められ、用量が多い場合に限定されてはいなかった。多発性骨髄腫の患者１名は、ＤＴＣ１０１の２５ｍｇの用量レベルで最初に細胞学的に応答した後に再発し、ＤＴＣ１０１の用量を増やすと（３７．５ｍｇ）再度応答した。頭痛を示す５名の患者のうち３名は、ＤＴＣ１０１の治療に対して応答した。治療の開始時に病巣性の神経性欠陥（眼筋麻痺若しくは不全対麻痺）又は散在性の神経性欠陥（急性錯乱状態）を有していた患者では、臨床上の改善点は認められなかった。 Surprisingly, a cytological response was observed at all dose levels and was not limited to higher doses. One patient with multiple myeloma relapsed after first cytological response at the 25 mg dose level of DTC101, and responded again with increasing doses of DTC101 (37.5 mg). Of the 5 patients with headache, 3 responded to treatment with DTC101. There were no clinical improvements in patients who had focal neurological deficits (eye muscle palsy or paraparesis) or diffuse neurological deficits (acute confusion) at the start of treatment.

本発明のいくつかの実施態様について記載した。しかし、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく各種の改変を行うことも、また可能であると理解されるであろう。したがって、本発明は特定の具体的に示した実施態様によって限定されるのではなく、添付した請求の範囲によってのみ限定されると理解すべきである。 Several embodiments of the invention have been described. However, it will be understood that various modifications may be made without departing from the spirit and scope of the invention. Accordingly, it is to be understood that the invention is not limited by the specific embodiments shown but only by the appended claims.

図１Ａは、脳室内に投与したＤＴＣ１０１の脳室の脳脊髄液での薬物動態を、１２．５−１２５ｍｇの範囲の用量の関数として示すものである。FIG. 1A shows the pharmacokinetics in the ventricular cerebrospinal fluid of DTC101 administered intraventricularly as a function of dose in the range of 12.5-125 mg. 図１Ｂは、脳室内に投与したＤＴＣ１０１の脳室の脳脊髄液での薬物動態を、１２．５−１２５ｍｇの範囲の用量の関数として示すものである。FIG. 1B shows the pharmacokinetics in the ventricular cerebrospinal fluid of DTC101 administered intraventricularly as a function of dose in the range of 12.5-125 mg. 図２は、最大脳脊髄液シタラビン濃度（図２ａ）ならびにＡＵＣ（図２Ｂ）を、用量の関数として示す。FIG. 2 shows the maximum cerebrospinal fluid cytarabine concentration (FIG. 2a) as well as AUC (FIG. 2B) as a function of dose. 図３は、脳室のシタラビン濃度（黒丸）と腰椎のシタラビン濃度（白丸）の比較［図ＡならびにＢは、それぞれ、シタラビン合計濃度と遊離シタラビン濃度］と、ＤＴＣ１０１の粒子数（図Ｃ）とを、ＤＴＣ１０１の脳室内投与後の経過時間の関数として示す。FIG. 3 shows a comparison of the cytarabine concentration in the ventricle (black circle) and the lumbar cytarabine concentration (white circle) [FIGS. A and B are the total cytarabine concentration and free cytarabine concentration, respectively] Is shown as a function of elapsed time after intraventricular administration of DTC101. 図４は、ＤＴＣ１０１を腰椎に投与した後の、経過時間の関数としての脳室の脳脊髄液のシタラビン濃度（実線）、そして、３分ならびに１４日経過後の腰椎の脳脊髄液のシタラビン濃度（破線）を示す。FIG. 4 shows cerebral spinal fluid cytarabine concentration as a function of elapsed time after administration of DTC101 (solid line) and cytarabine concentration in lumbar cerebrospinal fluid after 3 minutes and 14 days ( (Broken line).

Claims

Contains therapeutic agents contained in biodegradable lipid-containing synthetic membrane vesicle dispersions and is sufficient to reduce disease when administered to human cerebrospinal fluid (CSF) with disease A pharmaceutical composition for alleviating neurological disease, characterized in that the drug can continue to be present in the ventricular cavity over time.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the neurological disease is a cell proliferative disease.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the neurological disease is neoplastic meningitis.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the neurological disease is an infectious disease.

The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein the infectious disease is caused by a lentivirus.

The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein the infectious disease is caused by a prokaryotic organism.

The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein the infectious disease is caused by a eukaryote.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the neurological disease is caused by metabolic failure.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the therapeutic agent is selected from the group consisting of an antitumor agent, an antibacterial agent, and an antiviral agent.

The pharmaceutical composition according to claim 9, wherein the antitumor drug is cytarabine.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the synthetic membrane vesicle is a liposome.

The pharmaceutical composition according to claim 11, wherein the liposome has a plurality of concentric spaces.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the synthetic membrane vesicle has a plurality of non-concentric spaces.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the dispersion system has a higher specific gravity than cerebrospinal fluid.

15. The pharmaceutical composition according to claim 14, wherein the dispersion system is one in which the specific gravity of the dispersion liquid is made higher than that of the cerebrospinal fluid by enclosing molecules having a higher specific gravity than cerebrospinal fluid.

The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the molecule having a higher specific gravity than cerebrospinal fluid is a carbohydrate.

The pharmaceutical composition according to claim 16, wherein the carbohydrate is selected from the group consisting of sucrose, trehalose, and glucose.

The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the dispersion system has a specific gravity lower than that of cerebrospinal fluid.

2. A pharmaceutical composition according to claim 1 wherein the dispersion is target specific.

The pharmaceutical composition according to claim 19, wherein the dispersion system is actively targeted by coupling with a moiety selected from the group consisting of sugar, glycolipid and protein.