JP2008133287A - Ｐｓｃａ：前立腺幹細胞抗原 - Google Patents

Abstract

【課題】血清PSAレベルは、更に病期判定の目的で利用することもできるが、PSA単独では、前立腺腫瘍を信頼性をもって病期を判定することはできないことなどに鑑みて、前立腺癌の管理において、より信頼でき、かつ情報の多い病期判定および予後判定の方法などを提供すること。
【解決手段】前立腺幹細胞抗原(PSCA)と称する、新規の前立腺に特異的な細胞表面抗原であって、高度の前立腺上皮内新生腫瘍(PIN)、アンドロゲン依存型およびアンドロゲン非依存型前立腺腫瘍を含む、前立腺癌の全ての病期を通じて広く過剰発現する抗原など。
【選択図】なし

Description

図１Ａは、ヒトＰＳＣＡ（ＡＴＣＣ寄託番号２０９６１２）をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列（Ａ）および翻訳されたアミノ酸配列（Ｂ）である。 図１Ｂは、ヒトＰＳＣＡ（ＡＴＣＣ寄託番号２０９６１２）をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列（Ａ）および翻訳されたアミノ酸配列（Ｂ）である。 図２は、マウスのＰＳＣＡ相同体をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。 図３は、ヒトＰＳＣＡ、マウスＰＳＣＡおよびヒト幹細胞抗原−２（ｈＳＣＡ−２）のアミノ酸配列を並べたものである。斜線の領域は、保存されたアミノ酸を 強調している。保存されたシステインは、太字で示した。ＰＳＣＡ中の４個の予想されたＮ−グリコシル化部位は、アスタリクスで示した。このタンパク質の最 初および最後の下線を付けたアミノ酸は各々、Ｎ−末端の疎水性シグナル配列およびＣ−末端のＧＰＩ−アンカー配列を表わしている。 図４は、ヒトＰＳＣＡの疎水性のプロットである。 図５は、ヒトＰＳＣＡのＣｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ分析である。 図６は、様々な前立腺癌細胞株および異種移植片におけるＰＳＣＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ分析である。 図７は、正常および癌性の組織におけるＰＳＣＡ ｍＲＮＡの制限された発現である。Ａ：正常ヒト組織におけるＰＳＣＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ分析は、前立腺、胎盤および扁桃腺において高い発現を示している。 示された組織由来の逆転写された第一のｃＤＮＡ鎖（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）１ｎｇを、ＰＳＣＡ遺伝子に特異的なプライマーで増幅した。データは、３０サイクルの増幅を示している。Ｂ：ＰＳＣＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ分析は、前立腺癌異種移植片および正常組織において高レベルを示している。示された組織由来の逆 転写ｃＤＮＡ５ｎｇは、ＰＳＣＡ遺伝子に特異的なプライマーで増幅した。β−アクチン遺伝子に特異的なプライマーによる増幅は、様々な試料のｃＤＮＡ第一 鎖が正常であることを示している。データは、２５サイクルの増幅を示している。ＡＤ、アンドロゲン依存型；ＡＩ、アンドロゲン非依存型；ＩＴ、脛骨内異種 移植片；Ｃ．Ｌ．、細胞株。 図８は、ヒトＰＳＣＡ、マウスのＰＳＣＡおよびヒトＴｈｙ−１／Ｌｙ−６遺伝子構造の概略図である。 図９は、ＰＳＣＡ発現のノーザンブロット分析である。Ａ：正常な前立腺およびＬＡＰＣ−４アンドロゲン依存型（ＡＤ）および非依存型（ＡＩ）の前立腺癌異 種移植片由来のＲＮＡ全体は、ＰＳＣＡまたはＰＳＡに特異的なプローブを用いて分析した。同等のＲＮＡの負荷およびＲＮＡの完全性を、１８Ｓおよび２８Ｓ ＲＮＡのエチジウム染色により個別に示した。Ｂ：ヒトの複数の組織のＰＳＣＡノーザンブロット分析。フィルターは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から入手し、各列はポリＡ ＲＮＡを２μｇ含有する。 図１０は、前立腺癌異種移植片および腫瘍細胞株におけるＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、およびＰＳＡの発現のノーザンブロットでの比較である。ＰＳＣＡおよび ＰＳＭＡは高レベルの前立腺癌に特異的な遺伝子発現を示した。示された組織由来の総ＲＮＡ １０μｇを、アガロース／ホルムアルデヒドゲル上でサイズ分画してニトロセルロースに転写し、かつ３２Ｐで標識したプローブと順次ハイブリダイゼーションし、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、およびＰＳＡのｃＤＮＡ断片を示した。４時間および７２時間後の膜のオートラジオグラフィー暴露を示し、かつ臭化エチジウムゲルは、試料が等量負荷されたことを示している。ＢＰＨ、良性前立腺肥大症；ＡＤ、アンドロゲン依存型；ＡＩ、アンドロゲン非依存型；ＩＴ、脛骨内異種移植片；Ｃ．Ｌ．、細胞株。 図１１は、正常および悪性前立腺標本上のヒトＰＳＣＡのアンチセンスリボプローブによるインサイチューハイブリダイゼーションである。Ａ：ＰＳＣＡは、基 底細胞上皮内の基底細胞サブセットによって発現される（黒色矢印）が、前立腺管の内壁（ｌｉｎｉｎｇ）の最終分化した分泌細胞によっては発現されない（× ４００倍）。Ｂ：倍率×４０で、ＰＳＣＡは、高度の前立腺上皮内新生腫瘍（ＰＩＮ）（黒色矢印）および侵襲性前立腺癌腺（黄色矢印）によって強力に発現さ れるが、正常な上皮においては検出されない（緑色矢印）。Ｃ：高度の癌腫におけるＰＳＣＡの強力な発現（×２００倍）。 図１２は、ＰＳＣＡの生化学的分析である。Ａ：ＰＳＣＡは、「材料および方法」に示したよ うに、ＰＳＣＡ構築物で一過性にトランスフェクションした２９３Ｔ細胞から免疫沈降し、その後Ｎ−グリコシダーゼＦまたはＯ−グリコシダーゼのいずれかに より消化した。Ｂ：ＰＳＣＡは、トランスフェクションした２９３Ｔ細胞から、更にこれらの細胞の馴化培地（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉａ）から免疫沈降した。１５％ポリアクリルアミドゲル上で、細胞に結合したＰＳＣＡは、分泌されたＰＳＣＡよりも大きく移動した。Ｃ：親和性精製 したポリクローナル抗ＰＳＣＡ抗体を用いる、模擬（ｍｏｃｋ）トランスフェクションした２９３Ｔ細胞、ＰＳＣＡトランスフェクションした２９３Ｔ細胞およ びＬＡＰＣ−４前立腺癌異種移植片細胞のＦＡＣＳ分析である。細胞は、表面の発現のみを検出するために透過させ（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚｅ）なかった。ｙ 軸は、相対的細胞数を表わし、Ｘ軸は対数スケールでの蛍光染色強度を表わしている。 図１３は、ビオチン標識したＰＳＣＡプローブの、フィトヘムアグルチニン（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）で刺激した末梢血リンパ球由来のヒト中 期細胞への、インサイチューハイブリダイゼーションである。第８相同染色体を矢印で示し；特異的標識が８ｑ２４．２に認められた。挿入図は、８ｑ２４．２ に（矢印の先）に特異的標識を示す２個の第８相同染色体の部分的核型を示している。画像は、冷却した電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラを装着したＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｐｏｔ顕微鏡を用いて得た。ＤＡＰＩで染色された染色体およびハイブリダイゼーションシグナルの個別の画像は、画像解析ソフト（ＮＵ２００およびＩｍａｇｅ １．５７）を用いて合体した。 図１４は、抗−ＰＳＣＡモノクローナル抗体１Ｇ８（緑）および３Ｅ６（赤）、マウスの抗−ＰＳＣＡポリクローナル血清（青）、または対照の第二抗体（黒） を用いる、前立腺癌異種移植片（ＬＡＰＣ−９）、前立腺癌細胞株（ＬＡＰＣ−４）および正常な前立腺上皮細胞（ＰＲＥＣ）上の、細胞表面ＰＳＣＡ発現のフ ローサイトメトリー分析である。詳細は実施例５を参照のこと。 図１５は、抗−ＰＳＣＡモノクローナル抗体１Ｇ８および３Ｅ６のエピトープマッピングである。詳細は実施例５を参照のこと。

Claims (1)

1. 本願明細書等に記載されるような、抗原。

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