JP2008179545A - Anti-inflammatory agent and method for producing the same - Google Patents
Anti-inflammatory agent and method for producing the same Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008179545A JP2008179545A JP2007012532A JP2007012532A JP2008179545A JP 2008179545 A JP2008179545 A JP 2008179545A JP 2007012532 A JP2007012532 A JP 2007012532A JP 2007012532 A JP2007012532 A JP 2007012532A JP 2008179545 A JP2008179545 A JP 2008179545A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- scientific name
- inflammatory agent
- alloxanthin
- agent according
- inflammatory
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 title claims abstract description 44
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 241000251555 Tunicata Species 0.000 claims abstract description 33
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 14
- DVICWXUADSCSLL-DDEWRDOISA-N Alloxanthin/Tetradehydrozeaxanthin/(Cynthiaxanthin)/(Pectenoxanthin) Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1C#CC(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)C#CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C DVICWXUADSCSLL-DDEWRDOISA-N 0.000 claims description 63
- DVICWXUADSCSLL-GUPSQEAKSA-N all-trans-Alloxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C#CC1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C#CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C DVICWXUADSCSLL-GUPSQEAKSA-N 0.000 claims description 62
- UFRRRMXNFIGHPC-CPZJCIGYSA-N alloxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C#CC1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC#CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C UFRRRMXNFIGHPC-CPZJCIGYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 20
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 19
- HNYJHQMUSVNWPV-DRCJTWAYSA-N Diatoxanthin Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1C#CC(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C HNYJHQMUSVNWPV-DRCJTWAYSA-N 0.000 claims description 16
- HNYJHQMUSVNWPV-QWJHPLASSA-N Diatoxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C#CC1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C HNYJHQMUSVNWPV-QWJHPLASSA-N 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 241000251557 Ascidiacea Species 0.000 claims description 11
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- -1 aliphatic hydrocarbon halogen compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 6
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 claims description 6
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- LEONUFNNVUYDNQ-UHFFFAOYSA-N vanadium atom Chemical compound [V] LEONUFNNVUYDNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229930194542 Keto Natural products 0.000 claims description 4
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 4
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 4
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 3
- 241001504639 Alcedo atthis Species 0.000 claims description 2
- 241000259934 Ascidia ahodori Species 0.000 claims description 2
- 241000042022 Ascidia gemmata Species 0.000 claims description 2
- 241001575353 Botrylloides violaceus Species 0.000 claims description 2
- 241000156984 Chelyosoma siboja Species 0.000 claims description 2
- 241000251571 Ciona intestinalis Species 0.000 claims description 2
- 241000251570 Cionidae Species 0.000 claims description 2
- 241000644035 Clava Species 0.000 claims description 2
- 241000056886 Clavelina Species 0.000 claims description 2
- 241001329872 Culeolus Species 0.000 claims description 2
- 241001631883 Didemnum molle Species 0.000 claims description 2
- 241001631913 Diplosoma mitsukurii Species 0.000 claims description 2
- 241001074396 Enterogona Species 0.000 claims description 2
- 241000826912 Eudistoma Species 0.000 claims description 2
- 241001426542 Glaucus Species 0.000 claims description 2
- 241000251591 Halocynthia roretzi Species 0.000 claims description 2
- 241000251517 Herdmania <sea squirt> Species 0.000 claims description 2
- 241001631886 Leptoclinides madara Species 0.000 claims description 2
- 241000721660 Lissoclinum Species 0.000 claims description 2
- 241000685663 Microcosmus Species 0.000 claims description 2
- 241000219470 Mirabilis Species 0.000 claims description 2
- 241001415716 Molgula manhattensis Species 0.000 claims description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 2
- 241001415765 Polycarpa Species 0.000 claims description 2
- 241001589238 Polycarpa aurata Species 0.000 claims description 2
- 241000034865 Polycitoridae Species 0.000 claims description 2
- 241001152975 Polyclinidae Species 0.000 claims description 2
- 241001152966 Polyclinum Species 0.000 claims description 2
- 241001575310 Polyzoa Species 0.000 claims description 2
- 241000251516 Pyura Species 0.000 claims description 2
- 241000555736 Sciurus vulgaris Species 0.000 claims description 2
- 241000837493 Synoicum Species 0.000 claims description 2
- 241001631882 Trididemnum Species 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 claims description 2
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 claims description 2
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 2
- BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(7-hydroxy-3,7-dimethyloctylidene)amino]benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1N=CCC(C)CCCC(C)(C)O BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 2
- DYLIWHYUXAJDOJ-OWOJBTEDSA-N (e)-4-(6-aminopurin-9-yl)but-2-en-1-ol Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2C\C=C\CO DYLIWHYUXAJDOJ-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims 4
- 241000251572 Styelidae Species 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 abstract description 54
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 abstract description 54
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 abstract description 4
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 abstract description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 32
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 24
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 22
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 21
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 16
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 16
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 12
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 description 9
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 description 9
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 description 9
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 description 9
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 description 9
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N trans-lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N 0.000 description 7
- JKQXZKUSFCKOGQ-JLGXGRJMSA-N (3R,3'R)-beta,beta-carotene-3,3'-diol Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-JLGXGRJMSA-N 0.000 description 6
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JKQXZKUSFCKOGQ-LQFQNGICSA-N Z-zeaxanthin Natural products C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1C=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-LQFQNGICSA-N 0.000 description 6
- QOPRSMDTRDMBNK-RNUUUQFGSA-N Zeaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCC(O)C1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C QOPRSMDTRDMBNK-RNUUUQFGSA-N 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 6
- JKQXZKUSFCKOGQ-LOFNIBRQSA-N all-trans-Zeaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 6
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 6
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 6
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 6
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 6
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000010930 zeaxanthin Nutrition 0.000 description 6
- 239000001775 zeaxanthin Substances 0.000 description 6
- 229940043269 zeaxanthin Drugs 0.000 description 6
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 6
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- NZEPSBGUXWWWSI-FWFPOGQTSA-N (3e,5e,7e,9e,11e,13e,15e)-18-[(2r,4s)-2,4-dihydroxy-2,6,6-trimethylcyclohexylidene]-1-[(1r,3s,6s)-3-hydroxy-1,5,5-trimethyl-7-oxabicyclo[4.1.0]heptan-6-yl]-3,7,12,16-tetramethyloctadeca-3,5,7,9,11,13,15,17-octaen-2-one Chemical compound C([C@]12[C@@](O1)(C)C[C@@H](O)CC2(C)C)C(=O)C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)C=C=C1C(C)(C)C[C@H](O)C[C@@]1(C)O NZEPSBGUXWWWSI-FWFPOGQTSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- SJWWTRQNNRNTPU-ABBNZJFMSA-N fucoxanthin Chemical compound C[C@@]1(O)C[C@@H](OC(=O)C)CC(C)(C)C1=C=C\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)C(=O)C[C@]1(C(C[C@H](O)C2)(C)C)[C@]2(C)O1 SJWWTRQNNRNTPU-ABBNZJFMSA-N 0.000 description 4
- LBCWAKKSVZUJKE-YGQWAKCJSA-N fucoxanthinol Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C(=O)CC12OC1(C)CC(O)CC2(C)C)C=CC=C(/C)C=C=C3C(O)CC(O)CC3(C)C LBCWAKKSVZUJKE-YGQWAKCJSA-N 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 241001464837 Viridiplantae Species 0.000 description 3
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 3
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 3
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 3
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 101150071146 COX2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150109636 Inos gene Proteins 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 2
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 2
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- ANVAOWXLWRTKGA-XHGAXZNDSA-N all-trans-alpha-carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1C(C)=CCCC1(C)C ANVAOWXLWRTKGA-XHGAXZNDSA-N 0.000 description 2
- KQVQATRFWGWNMA-UHFFFAOYSA-N all-trans-fucoxanthin Natural products COC(=O)C1CC(C)(C)C(=C=CC(=CC=CC(=CC=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C(=O)CC23OC2(C)CC(O)CC3(C)C)C)C)C(C)(O)C1 KQVQATRFWGWNMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- FDSDTBUPSURDBL-LOFNIBRQSA-N canthaxanthin Chemical compound CC=1C(=O)CCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)CCC1(C)C FDSDTBUPSURDBL-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- AQLRNQCFQNNMJA-UHFFFAOYSA-N fucoxanthin Natural products CC(=O)OC1CC(C)(C)C(=C=CC(=CC=CC(=CC=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C(=O)CC23OC2(C)CC(O)CC3(C)C)C)CO)C(C)(O)C1 AQLRNQCFQNNMJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- DMASLKHVQRHNES-UPOGUZCLSA-N (3R)-beta,beta-caroten-3-ol Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C DMASLKHVQRHNES-UPOGUZCLSA-N 0.000 description 1
- VYIRVAXUEZSDNC-TXDLOWMYSA-N (3R,3'S,5'R)-3,3'-dihydroxy-beta-kappa-caroten-6'-one Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC(=O)[C@]1(C)C[C@@H](O)CC1(C)C VYIRVAXUEZSDNC-TXDLOWMYSA-N 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 59096-14-9 Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1[14C](O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- HDLNSTQYXPTXMC-UHFFFAOYSA-N Astaxanthin-diacetat Natural products O=C1C(OC(=O)C)CC(C)(C)C(C=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC=2C(CC(C(=O)C=2C)OC(C)=O)(C)C)=C1C HDLNSTQYXPTXMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRQKOYFGHJYEFS-UHFFFAOYSA-N Beta psi-carotene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CC=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C HRQKOYFGHJYEFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYIRVAXUEZSDNC-LOFNIBRQSA-N Capsanthyn Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC(=O)C2(C)CC(O)CC2(C)C VYIRVAXUEZSDNC-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- PANKHBYNKQNAHN-JTBLXSOISA-N Crocetin Natural products OC(=O)C(\C)=C/C=C/C(/C)=C\C=C\C=C(\C)/C=C/C=C(/C)C(O)=O PANKHBYNKQNAHN-JTBLXSOISA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000251511 Holothuroidea Species 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N Lycopene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1C(=C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=C)CCCC2(C)C UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- JEVVKJMRZMXFBT-XWDZUXABSA-N Lycophyll Natural products OC/C(=C/CC/C(=C\C=C\C(=C/C=C/C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\C=C\C=C(/CC/C=C(/CO)\C)\C)/C)\C)/C)\C)/C)/C JEVVKJMRZMXFBT-XWDZUXABSA-N 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000204801 Muraenidae Species 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000237503 Pectinidae Species 0.000 description 1
- OOUTWVMJGMVRQF-DOYZGLONSA-N Phoenicoxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)CCC2(C)C OOUTWVMJGMVRQF-DOYZGLONSA-N 0.000 description 1
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108050003267 Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 241000405217 Viola <butterfly> Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- IUUXWKRRZDDNQG-UHFFFAOYSA-N all-trans-spheroidene Natural products COC(C)(C)CCCC(C)=CC=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C IUUXWKRRZDDNQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011795 alpha-carotene Substances 0.000 description 1
- 235000003903 alpha-carotene Nutrition 0.000 description 1
- ANVAOWXLWRTKGA-HLLMEWEMSA-N alpha-carotene Natural products C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\C=C\C=1C(C)(C)CCCC=1C)/C)\C)(\C=C\C=C(/C=C/[C@H]1C(C)=CCCC1(C)C)\C)/C ANVAOWXLWRTKGA-HLLMEWEMSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 description 1
- 239000000883 anti-obesity agent Substances 0.000 description 1
- 229940125710 antiobesity agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012682 canthaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001659 canthaxanthin Substances 0.000 description 1
- 229940008033 canthaxanthin Drugs 0.000 description 1
- WRANYHFEXGNSND-LOFNIBRQSA-N capsanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC(=O)C2(C)CCC(O)C2(C)C WRANYHFEXGNSND-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 1
- 235000018889 capsanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- PANKHBYNKQNAHN-JUMCEFIXSA-N carotenoid dicarboxylic acid Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C(=O)O)C=CC=C(/C)C(=O)O PANKHBYNKQNAHN-JUMCEFIXSA-N 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- PANKHBYNKQNAHN-MQQNZMFNSA-N crocetin Chemical compound OC(=O)C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(\C)/C=C/C=C(\C)C(O)=O PANKHBYNKQNAHN-MQQNZMFNSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 1
- SBNKFTQSBPKMBZ-UHFFFAOYSA-N ethenzamide Chemical compound CCOC1=CC=CC=C1C(N)=O SBNKFTQSBPKMBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011663 gamma-carotene Substances 0.000 description 1
- 235000000633 gamma-carotene Nutrition 0.000 description 1
- HRQKOYFGHJYEFS-RZWPOVEWSA-N gamma-carotene Natural products C(=C\C=C\C(=C/C=C/C=C(\C=C\C=C(/C=C/C=1C(C)(C)CCCC=1C)\C)/C)\C)(\C=C\C=C(/CC/C=C(\C)/C)\C)/C HRQKOYFGHJYEFS-RZWPOVEWSA-N 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 235000012680 lutein Nutrition 0.000 description 1
- 239000001656 lutein Substances 0.000 description 1
- 229960005375 lutein Drugs 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N lutein Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\[C@H]1C(C)=C[C@H](O)CC1(C)C KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N 0.000 description 1
- ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N 0.000 description 1
- 235000012661 lycopene Nutrition 0.000 description 1
- 239000001751 lycopene Substances 0.000 description 1
- OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N lycopene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)CCC=C(C)C OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N 0.000 description 1
- 229960004999 lycopene Drugs 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000001688 paprika extract Substances 0.000 description 1
- 235000012658 paprika extract Nutrition 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 1
- 229930185460 santinol Natural products 0.000 description 1
- 235000020637 scallop Nutrition 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 1
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 1
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- QCZWKLBJYRVKPW-LYWCOASQSA-N spheroidene Natural products COC(C)(C)CC=CC(=CC=CC(=CC=CC(=CC=CC=CC(C)C=C/C=C(C)/CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C QCZWKLBJYRVKPW-LYWCOASQSA-N 0.000 description 1
- FJOCMTHZSURUFA-AXYGSFPTSA-N spheroidene Chemical compound COC(C)(C)C\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C FJOCMTHZSURUFA-AXYGSFPTSA-N 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- ZCIHMQAPACOQHT-ZGMPDRQDSA-N trans-isorenieratene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/c1c(C)ccc(C)c1C)C=CC=C(/C)C=Cc2c(C)ccc(C)c2C ZCIHMQAPACOQHT-ZGMPDRQDSA-N 0.000 description 1
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 1
- 229940045605 vanadium Drugs 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
- FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N xanthophyll Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C=C(C)C(O)CC2(C)C FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【課題】副作用の危険のない抗炎症剤及びその製造方法を提供する。
【解決手段】本発明の抗炎症剤は、ホヤ由来脂溶性油を有効成分として含有するので極めて高い抗炎症作用を示し、しかも副作用の危険はない。また、本発明の抗炎症剤における極めて高い抗炎症作用を示す活性本体であるホヤ由来カロテノイドではホヤ特有の香りや風味が低減されるので、これらのホヤの特徴を嫌って、ホヤの摂取を避けてきた人々或いは動物に対して利用する事ができる。逆に、ホヤ由来脂溶性油にはホヤ特有の香りや風味が残っている為、ホヤを珍味として消費してきた人々に対しての利用が有効となる。
【選択図】図４An anti-inflammatory agent having no risk of side effects and a method for producing the same are provided.
The anti-inflammatory agent of the present invention contains a sea squirt-derived fat-soluble oil as an active ingredient, and thus exhibits an extremely high anti-inflammatory action and has no risk of side effects. In addition, squirts-derived carotenoids, which are active bodies that exhibit an extremely high anti-inflammatory activity in the anti-inflammatory agent of the present invention, reduce the scent and flavor unique to squirts. It can be used against people or animals who have come. On the contrary, since the scent and flavor unique to sea squirt remain in the sea squirt-derived fat-soluble oil, it is effective for people who have consumed sea squirt as a delicacy.
[Selection] Figure 4
Description
本発明は、脂溶性油を有効成分とした抗炎症剤及びその製造方法に関する。
The present invention relates to an anti-inflammatory agent comprising fat-soluble oil as an active ingredient and a method for producing the same.
生体に炎症性の刺激が加わると、まず局所的に発赤、腫腸、熱感、疼痛といった炎症症状が現れる。これに続いて発熱、血沈亢進、ＣＲＰ上昇、白血球数の増多または減少、食欲不振、倦怠感、疼痛、ストレス反応などの全身症状が現れる（非特許文献１）。更に、最近では肥満やそれに誘発されるメタボリークシンドロームの発症過程に炎症作用が関与していることが報告されている（非特許文献２，３）。
When an inflammatory stimulus is applied to a living body, first, inflammatory symptoms such as redness, enema, thermal sensation and pain appear locally. This is followed by systemic symptoms such as fever, increased blood sedimentation, increased CRP, increased or decreased white blood cell count, loss of appetite, malaise, pain, and stress response (Non-patent Document 1). Furthermore, recently, it has been reported that inflammatory action is involved in the onset process of obesity and metabolic syndrome induced thereby (Non-patent
通常、炎症性の刺激を受けると、シクロオキシナーゼ（ＣＯＸ）が酵素反応によりアラキドン酸から痛みを伝達する物質であるプロスタグランジン（ＰＧ）を産出する。炎症性の刺激に起因するこのような症状を抑える抗炎症剤として、非ステロイド系抗炎症剤（例えば、アセチルサリチル酸、イブプロフェン、エテンザミドなど）が開発され、市販薬として使用されている。この非ステロイド系抗炎症剤の存在下ではＣＯＸにこの非ステロイド系抗炎症剤が優先的に取り付くことにより炎症性の刺激を受けた際のＰＧ合成が阻害され、炎症性の刺激に起因する症状が抑制されると考えられている。 Normally, when subjected to an inflammatory stimulus, cyclooxynase (COX) produces prostaglandin (PG), a substance that transmits pain from arachidonic acid by an enzymatic reaction. Non-steroidal anti-inflammatory agents (for example, acetylsalicylic acid, ibuprofen, etenzamide, etc.) have been developed as anti-inflammatory agents that suppress such symptoms caused by inflammatory stimuli and are used as commercially available drugs. In the presence of this non-steroidal anti-inflammatory agent, PG synthesis upon inflammatory stimulation is inhibited by preferentially attaching this non-steroidal anti-inflammatory agent to COX, and symptoms caused by the inflammatory stimulus Is believed to be suppressed.
しかし、現在までに開発された多数の非ステロイド系抗炎症剤には副作用の生じるものもあり、そのような副作用が生じることのない天然物由来の抗炎症剤の開発が急がれている。また、核内転写因子ＮＦ−κＢの機能に作用することで炎症性サイトカインの発現を阻害する方法も提案されている。 However, many non-steroidal anti-inflammatory drugs that have been developed so far have side effects, and there is an urgent need to develop anti-inflammatory drugs derived from natural products that do not cause such side effects. A method of inhibiting the expression of inflammatory cytokines by acting on the function of the nuclear transcription factor NF-κB has also been proposed.
天然物由来の非ステロイド系抗炎症剤としてカロテノイド（特許文献１、特許文献２）、カロテノイドの一種であるアスタキサンチン（特許文献３）及びアスタキサンチンエステル体（特許文献４）などが挙げられる。
Examples of non-steroidal anti-inflammatory agents derived from natural products include carotenoids (
皮膚外用剤を開示する特許文献１で想定されているカロテノイドはα−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、リコペン、クリプトキサンチン、ルテイン、アスタキサンチン、カンタキサンチン、ゼアキサンチン、ロドキサンチン、カプサンチン、クロセチン、ビオラキサンチン、スピリロキサンチン、スフェロイデンなど、と記載している。これらのカロテノイドを産出する生物として緑色植物やある種のカビ、酵母、キノコ、細菌など、とも記載している。
The carotenoids envisaged in
また、カロテノイドは高い抗酸化能力又は／及びラジカル消去能力を示すため、炎症を含む様々な病気の発生の抑制に用いられている。この点については、例えば、病気の抑制と改善の為の構造上のカロチノイド類自体を開示する特許文献５などが挙げられる。この活性酸素、過酸化物によって引き起こされる炎症の改善或いは予防に対するカロテノイドの作用機構は、フリーラジカルや一重項酸素などの活性酸素種を直接的に消去することで生体への損傷を防ぐものである。したがって、炎症刺激に伴いＣＯＸから産出されるＰＧ生産の抑制や炎症性サイトカインの発現抑制が行われる非ステロイド系抗炎症剤の抗炎症作用機構とは本質的に異なる。
In addition, carotenoids have high antioxidant ability and / or radical scavenging ability, and are therefore used to suppress the occurrence of various diseases including inflammation. In this regard, for example,
一方、ホヤエキス及びホヤ抽出物を利用したものとして、ホヤエキスの抽出方法及び抽出成分を含有する健康食品を開示した（特許文献６）や美肌用組成物を開示した（特許文献７、特許文献８）などが挙げられる。
On the other hand, as a method using squirt extract and squirt extract, a method for extracting squirt extract and a health food containing extract components are disclosed (Patent Document 6) and a composition for beautifying skin (
特許文献６では、ホヤの筋膜体及び内臓の原材料を用いて摂氏５０〜７０度の温熱水中又は摂氏５０〜７０度の温度域でアルコールと反応させてホヤエキスを抽出する、と記載されている。また、このような工程を含んで抽出されたホヤエキスには、主成分としてバナジウム、タウリン、ビタミンＢ１２などが含まれている、とも記載されている。
さらにホヤエキスに含まれるバナジウムは、糖尿病の改善に有効で、タウリンは免疫力の増進に役立ち、ビタミンＢ１２は神経痛、関節痛、筋肉痛の改善に役立ち、葉酸は赤血球の造血作用を促進すると記載している。加えて、実施例において、粉末ホヤエキスの有効成分として、バナジウムは微量、タウリン２．９５ｍｇ／１００ｍｇ、ビタミンＢ１２は０．１８ｍｇ／１００ｍｇ、葉酸は０．８５ｇ／１００ｍｇ、ミネラルは鉄分が０．１５ｍｇ／１００ｍｇ、亜鉛が０．１４ｍｇ／１００ｍｇ、カルシュウムが０．８５ｍｇ／１００ｍｇであると記載されている。 In addition, vanadium contained in squirt extract is effective in improving diabetes, taurine is useful in enhancing immunity, vitamin B12 is useful in improving neuralgia, joint pain, and muscle pain, and folic acid is promoted to promote hematopoiesis of erythrocytes. ing. In addition, in Examples, as an active ingredient of powder squirt extract, a small amount of vanadium, 2.95 mg / 100 mg of taurine, 0.18 mg / 100 mg of vitamin B12, 0.85 g / 100 mg of folic acid, 0.15 mg / 100 mg of minerals of iron It is described that 100 mg, zinc is 0.14 mg / 100 mg, and calcium is 0.85 mg / 100 mg.
特許文献７では、ホヤ及び／又はその抽出物、特許文献８では、ホヤ及び／又はその抽出物、ウツボ及び／又はその抽出物、ナマコ及び／又はその抽出物から選択される２種以上を併用して、経口若しくは経皮で摂取することにより、高い美肌効果を発揮し、シワ、たるみ、肌荒れといった肌の老化状態を防止するとしている。また、特許文献７及び特許文献８では、これらの肌荒れや小じわ等を予防・改善するためには肌の潤いと張りを保持する事が重要であるとし、肌の保湿性や弾力性の維持効果を有する成分としてホヤ及び／又はその抽出物を利用しているものと考えられる。
従来、炎症性の疾患を予防する或いは改善する様々な薬剤が開発されていた。しかしこれらの薬剤には副作用の危険性がある為、その危険のない天然物由来の抗炎症剤が望まれていた。
本発明は以上の従来技術における問題に鑑み、副作用の危険のない抗炎症剤及びその製造方法を提供することを目的とする。
Conventionally, various drugs that prevent or ameliorate inflammatory diseases have been developed. However, since these drugs have a risk of side effects, anti-inflammatory agents derived from natural products without such risks have been desired.
In view of the above problems in the prior art, an object of the present invention is to provide an anti-inflammatory agent having no risk of side effects and a method for producing the same.
本発明者等は上記課題について鋭意検討を行った結果、ホヤ由来脂溶性油に含まれるカロテノイドであるアロキサンチン及びディアトキサンチンをマウス由来マクロファージ様細胞ＲＡＷ２６４．７に添加し、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）で炎症誘導したところ、有意に各種炎症性サイトカインの産生が抑制されることを見出し、抗炎症剤として報告されているアスタキサンチンと比較して、ホヤ由来脂溶性油に含まれるアロキサンチン及びディアトキサンチンがより高い抗炎症作用を示すことを見出した。 As a result of intensive studies on the above problems, the present inventors added alloxanthin and diatoxanthin, which are carotenoids contained in ascidian-derived fat-soluble oil, to mouse-derived macrophage-like cells RAW264.7, and lipopolysaccharide (LPS). ) Induced inflammation, significantly found production of various inflammatory cytokines, compared to astaxanthin reported as an anti-inflammatory agent, alloxanthin and diato contained in ascidian-derived fat-soluble oil It has been found that xanthine exhibits a higher anti-inflammatory effect.
すなわち本発明の抗炎症剤は、ホヤ由来脂溶性油を有効成分として含有することを特徴とする。 That is, the anti-inflammatory agent of the present invention is characterized by containing ascidian-derived fat-soluble oil as an active ingredient.
また一般式１（化１）で示され、抗炎症作用を示す活性本体であるアロキサンチン（Ａｌｌｏｘａｎｔｈｉｎ）及び／又は一般式２（化２）で示され、抗炎症作用を示す活性本体であるディアトキサンチン（Ｄｉａｔｏｘａｎｔｈｉｎ）が抗炎症剤の有効成分であることを特徴とする。 Further, alloxanthin, which is an active substance having an anti-inflammatory action and represented by general formula 1 (Chemical formula 1) and / or a deer which is an active substance having an anti-inflammatory action, which is represented by General formula 2 (Chemical formula 2). Toxanthin is an active ingredient of an anti-inflammatory agent.
（化１）
（化２）
前記ホヤ由来脂溶性油または一般式１（化１）で示されるアロキサンチン及び／又は一般式２（化２）で示されるディアトキサンチンを食品及び飲料及びサプリメント及びペットフード及び化粧品及びサニタリー製品及び薬剤のうちのいずれかに添加してなる抗炎症剤としてもよい。 The above-mentioned sea squirt-derived fat-soluble oil or alloxanthin represented by the general formula 1 (Chemical Formula 1) and / or diatoxanthin represented by the general formula 2 (Chemical Formula 2) are used as foods, beverages, supplements, pet foods, cosmetics, sanitary products, and It may be an anti-inflammatory agent added to any of the drugs.
また前記アロキサンチン及びディアトキサンチンは、ホヤ等の天然物から抽出し精製された成分及び有機合成によって得られた成分及び微生物を介して合成された成分の中から選ばれた一種又は二種以上の組み合わせによって得られたものであってもよい。また前記アロキサンチン及びディアトキサンチンは全トランス体又はシス体又はその混合物であってもよい。 The alloxanthin and diatoxanthin are one or more selected from components extracted from natural products such as sea squirts, components obtained by organic synthesis and components synthesized through microorganisms. It may be obtained by a combination of The alloxanthin and diatoxanthin may be all-trans isomer, cis isomer, or a mixture thereof.
さらに本発明の抗炎症剤の製造方法は、ホヤから有機溶媒を用いて脂溶性油を抽出する第一工程と、第一工程で得られた抽出液から有機溶媒を除去する第二工程とからなる様にすることができる。 Furthermore, the method for producing an anti-inflammatory agent of the present invention includes a first step of extracting fat-soluble oil from sea squirt using an organic solvent, and a second step of removing the organic solvent from the extract obtained in the first step. Can be.
加えて本発明のホヤ由来カロテノイドの製造方法はホヤから有機溶媒を用いて脂溶性油を抽出する第一工程と、第一工程で得られた抽出液から有機溶媒を除去する第二工程と、第二工程後の抽出液をクロマトグラフィを用いて精製する第三工程とからなる様にしても良い。 In addition, the method for producing the carpoidoid derived from sea squirts of the present invention includes a first process of extracting fat-soluble oil from sea squirts using an organic solvent, a second process of removing the organic solvent from the extract obtained in the first process, You may make it consist of the 3rd process which refine | purifies the extract after a 2nd process using a chromatography.
前記有機溶媒は有機溶媒と水との混合溶媒として用いることができる。 The organic solvent can be used as a mixed solvent of an organic solvent and water.
前記有機溶媒はアルコール類及びエーテル類及びケト類及び脂肪族炭化水素のハロゲン化合物及び脂肪族炭化水素及び芳芳香族炭化水素の中から選ばれた一種又は二種以上の組み合わせによって得られた有機溶媒であっても良い。 The organic solvent is an organic solvent obtained by one or a combination of two or more selected from alcohols, ethers, ketos, aliphatic hydrocarbon halogen compounds, aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons. It may be.
前記前記第一工程における抽出操作は、ホヤ由来カロテノイドの分解を最小限にする為に、１０℃以上５０℃以下の温度で行われる様にすることが望まれる。 It is desirable that the extraction operation in the first step be performed at a temperature of 10 ° C. or higher and 50 ° C. or lower in order to minimize decomposition of ascidian-derived carotenoids.
また前記第一工程における抽出操作時間は、ホヤ由来カロテノイドの分解を最小限にする為に、３０分以上４８時間以下とするのが良い。 The extraction operation time in the first step is preferably 30 minutes or more and 48 hours or less in order to minimize the decomposition of ascidian-derived carotenoids.
第三工程のクロマトグラフィで使用する充填剤は、順相系のシリカゲル及びセライト及びアルミナ及び水酸化カルシウム及び逆相系の直鎖アルキル基及び芳香族官能基及び親水性官能基及び極性内包型官能基がシルカゲルに化学結合したものの中から選ばれた一種又は二種以上の組み合わせによって得られた充填剤であっても良い。 The filler used in the third step chromatography is normal phase silica gel, celite, alumina, calcium hydroxide, reverse phase linear alkyl group, aromatic functional group, hydrophilic functional group and polar inclusion type functional group. May be a filler obtained by one or a combination of two or more selected from those chemically bonded to silk gel.
また第三工程のクロマトグラフィで使用する展開溶媒が、水及びアルコール類及びエーテル類及びケト類及び脂肪族炭化水素のハロゲン化合物及び脂肪族炭化水素及び芳香族炭化水素の中から選ばれた一種又は二種以上の組み合わせによって得られた展開溶媒であっても良い。 Further, the developing solvent used in the chromatography in the third step is one or two selected from water, alcohols, ethers, ketos, halogenated aliphatic hydrocarbons, aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons. A developing solvent obtained by a combination of two or more species may be used.
本発明によれば、極めて高い抗炎症作用を示し、副作用の危険のない天然物由来の抗炎症剤を提供することができる。しかも、本発明の抗炎症剤における極めて高い抗炎症作用を示す活性本体であるホヤ由来カロテノイドではホヤ特有の香りや風味が低減されるので、これらのホヤの特徴を嫌って、ホヤの摂取を避けてきた人々或いは動物に対して利用する事ができる。逆に、ホヤ由来脂溶性油にはホヤ特有の香りや風味が残っている為、ホヤを珍味として消費してきた人々に対しての利用が有効となる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the anti-inflammatory agent derived from the natural product which shows a very high anti-inflammatory action and has no danger of a side effect can be provided. In addition, the squirt-derived carotenoid, which is an active substance exhibiting an extremely high anti-inflammatory action in the anti-inflammatory agent of the present invention, reduces the scent and flavor unique to squirts. It can be used against people or animals who have come. On the contrary, since the scent and flavor unique to sea squirt remain in the sea squirt-derived fat-soluble oil, it is effective for people who have consumed sea squirt as a delicacy.
ホヤ脂溶性油の中にはアロキサンチン及びディアトキサンチン以外にもフコキサンチン及びフコキサンチノール及びハロシンチアキサンチンなどのカロテノイドが存在する。これらのカロテノイドは抗肥満作用、ガン細胞増殖抑制作用を示すことが分かっており、ホヤ由来脂溶性油は抗炎症剤としての有効成分のみに留まらず、抗肥満剤やガン細胞増殖抑制剤などの効果も備える。 In addition to alloxanthin and diatoxanthin, carotenoids such as fucoxanthin, fucoxanthinol and halocinthiaxanthin exist in squirt fat-soluble oil. These carotenoids are known to exhibit anti-obesity and cancer cell growth-inhibiting effects, and sea squirt-derived fat-soluble oils are not limited to active ingredients as anti-inflammatory agents, such as anti-obesity agents and cancer cell growth inhibitors. It also has an effect.
以下、本発明を実施するための最良の形態について具体的に説明するが、本発明がこの実施の形態のみに限定されるものではない。 The best mode for carrying out the present invention will be specifically described below, but the present invention is not limited to this embodiment.
本発明の抗炎症剤の有効成分であり抗炎症作用を示す活性本体であるアロキサンチン及びディアトキサンチンは、ホヤに含まれるものに限られず、例えばホタテ等の生物に含まれるものであっても良い。 Alloxanthin and diatoxanthin, which are active ingredients of the anti-inflammatory agent of the present invention and exhibit an anti-inflammatory action, are not limited to those contained in sea squirts, for example, those contained in organisms such as scallops. good.
前記ホヤは、海鞘綱（学名：Ａｓｃｉｄｉａｃｅａ）、第一目腸性類（学名：Ｅｎｔｅｒｏｇｏｎａ）、第一亜目無官類（学名：Ａｐｌｏｕｓｏｂｒａｎｃｈｉａ）、ポリクリニ科（学名：Ｐｏｌｙｃｌｉｎｉｄａｅ）、亜科Ｐｏｌｙｃｌｉｎｉｎａｅに属するマンジュウボヤ（学名：Ａｐｌｉｄｉｕｍ ｐｌｉｃｉｆｅｒｕｍ）、コンボウボヤ（学名：Ｓｙｎｏｉｃｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ）、モヨウボヤ（学名：Ｐｏｌｙｃｌｉｎｕｍ ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｍ）、スナモチボヤ（学名：Ｓｉｄｎｅｉｏｉｄｅｓ ｓｎａｍｏｔｉ）、亜科Ｅｕｈｅｒｄｍａｎｉｉｎａｅに属するイチゴボヤ（学名：Ｐｓｅｕｄｏｄｉｓｔｏｍａ ｋａｎｏｋｏ）、ジデムニ科（学名：Ｄｉｄｅｍｎｉｄａｅ）に属するミナミウスボヤ（学名：Ｄｉｄｅｍｎｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ）、チャツボボヤ（学名：Ｄｉｄｅｍｎｕｍ ｍｏｌｌｅ）、ミスジジデムニ（学名：Ｔｒｉｄｉｄｅｍｎｕｍ ｓａｖｉｇｎｙｉｉ）、マダラボヤ（学名：Ｌｅｐｔｏｃｌｉｎｉｄｅｓ ｍａｄａｒａ）、ネンエキボヤ（学名：Ｄｉｐｌｏｓｏｍａ ｍｉｔｓｕｋｕｒｉｉ）、シトネボヤ（学名：Ｌｉｓｓｏｃｌｉｎｕｍ ｐｕｌｖｉｎｕｍ）、ポリキトリ科（学名：Ｐｏｌｙｃｉｔｏｒｉｄａｅ）に属するコバルトクラベラ（学名：Ｃｌａｖｅｌｉｎａ ｃｏｅｒｕｌｅａ）、ミドリカイメンボヤ（Ｅｕｄｉｓｔｏｍａ ｇｌａｕｃｕｓ）、ヘンゲボヤ（学名：Ｐｌｏｙｃｉｔｏｒ ｐｒｏｌｉｆｅｒｕｓ）、チラシボヤ（学名：Ｄｉｓｔａｐｌｉａ ｄｕｂｉａ）、カンザシボヤ（学名：Ｓｙｃｏｚｏａ ｋａｎｚａｓｉ）、コップボヤ（学名：Ｃｙａｔｈｏｃｏｒｍｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、第二亜目管鰓類（学名：Ｐｈｌｅｂｏｂｒａｎｃｈｉａ）、キオナ科（学名：Ｃｉｏｎｉｄａｅ）、亜科Ｄｉａｚｏｎｉｎａｅに属するボウズボヤ（学名：Ｓｙｎｄｉａｚｏｎａ ｇｒａｎｄｉｓ）、亜科Ｃｉｏｎｉｎａｅに属するカタユウレイボヤ（学名：Ｃｉｏｎａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ）、ユウレイボヤ（学名：Ｃｉｏｎａ ｓａｖｉｇｎｙｉ）、ペロフォラ科（学名：Ｐｅｒｏｐｈｏｒｉｄａｅ）に属するタイワンマメボヤ（学名：Ｐｅｒｏｐｈｏｒａ ｍｕｌｔｉｃｌａｔｈｒａｔａ）、アスキジア科（学名：Ａｓｃｉｄｉｉｄａｅ）に属するザラボヤ（学名：Ａｓｃｉｄｉａ ｚａｒａ）、ナツメボヤ（学名：Ａｓｃｉｄｉａ ａｈｏｄｏｒｉ）、バナジウムボヤ（学名：Ａｓｃｉｄｉａ ｇｅｍｍａｔａ）、アグネシア科（学名：Ａｇｎｅｓｉｉｄａｅ）に属するヒメボヤ（学名：Ａｇｎｅｓｉａ ｈｉｍｅｂｏｊａ）、コレラ科（学名：Ｃｏｒｅｌｌｉｄａｅ）に属するガマグチボヤ（学名：Ｒｈｏｄｏｓｏｍａ ｔｕｒｃｉｃｕｍ）、ドロボヤ（学名：Ｃｏｒｅｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ）、スボヤ（学名：Ｃｈｅｌｙｏｓｏｍａ ｓｉｂｏｊａ）、オクタクネミ科（学名：Ｏｃｔａｃｎｅｍｉｄａｅ）に属するオオグチボヤ（学名：Ｍｅｇａｌｏｄｉｃｏｐｉａ ｈｉａｎｓ）、第二目壁性類（学名：Ｐｌｅｕｒｏｇｏｎａ）、第一亜目褶鰓類（学名：Ｓｔｏｌｉｄｏｂｒａｎｃｈｉａ）、ボトリルス科（学名：Ｂｏｔｒｙｌｌｉｄａｅ）に属するキクイタボヤ（学名：Ｂｏｔｒｙｌｌｕｓ ｔｕｂｅｒａｔｕｓ）、イタボヤ（学名：Ｂｏｔｒｙｌｌｏｉｄｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｕｓ）、スチエラ科（学名：Ｓｔｙｅｌｉｄａｅ）、亜科Ｐｏｌｙｚｏｉｎａｅに属するアラレボヤ（学名：Ｐｏｌｙｚｏａ ｖｅｓｉｃｕｌｉｐｈｏｒａ）、コバンイタボヤ（学名：Ｓｙｍｐｌｅｇｍａ ｒｅｐｔａｎｓ）、亜科Ｓｔｙｅｌｉｎａｅに属するクロボヤ（学名：Ｐｏｌｙｃａｒｐａ ｃｒｙｐｔｏｃａｒｐａ ｋｒｏｂｏｊａ）、ニシキボヤ（学名：Ｐｏｌｙｃａｒｐａ ａｕｒａｔａ）、シロボヤ（学名：Ｓｔｙｅｌａ ｐｌｉｃａｔａ）、エボヤ（学名：Ｓｔｙｅｌａ ｃｌａｖａ）、シロボヤモドキ（学名：Ｃｎｅｍｉｄｏｃａｒｐａ ａｒｅｏｌａｔａ）、ムラボヤ（学名：Ｄｅｎｄｒｏｄｏａ ａｇｇｒｅｇａｔａ）、ピウラ科（学名：Ｐｙｕｒｉｄａｅ）に属するミハエルボヤ（学名：Ｐｙｕｒａ ｓａｃｃｉｆｏｒｍｉｓ）、ハルトボヤ（学名：Ｍｉｃｒｏｃｏｓｍｕｓ ｈａｒｔｍｅｙｅｒｉ）、ツリガネボヤ（学名：Ｃｕｌｅｏｌｕｓ ｈｅｒｄｍａｎｉ）、イブリクシエラボヤ（学名：Ｂｏｌｔｅｎｉａ ｅｃｈｉｎａｔａ ｆ． ｉｂｕｒｉ）、マボヤ（学名：Ｈａｌｏｃｙｎｔｈｉａ ｒｏｒｅｔｚｉ）、アカボヤ（学名：Ｈａｌｏｃｙｎｔｈｉａ ａｕｒａｎｔｉｕｍ）、ネズミボヤ（学名：Ｈａｒｔｍｅｙｅｒｉａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、ベニボヤ（学名：Ｈｅｒｄｍａｎｉａ ｍｏｍｕｓ）、モルグラ科（学名：Ｍｏｌｇｕｌｉｄａｅ）に属するカンテンボヤ（学名：Ｅｕｇｙｒａ ｇｌｕｔｉｎａｎｓ）、マンハッタンボヤ（学名：Ｍｏｌｇｕｌａ ｍａｎｈａｔｔｅｎｓｉｓ）から選択された一種又は二種以上とすることができ、ホヤ由来カロテノイドを含むものが望ましい。 The sea squirt belongs to the sea scabbard (scientific name: Ascidiacea), the first order intestine (scientific name: Enterogona), the first subspecies insignia (scientific name: Aplosobranchia), polyclinicaceae (scientific name: Polyclinidae), subfamily Polyclininae Manjuboya (scientific name: Apridium pliciferum), Konboboya (scientific name: Synoicum clavatum), Moyoboya (scientific name: Polyclinum constellatum), Subsidium boys (scientific name: Sidomoidena) : Minemius Boya (scientific name: Didemn) um candidum), Chatsuboboya (scientific name: Didemnum molle), Misujijidemuni (scientific name: Trididemnum savignyii), Madaraboya (scientific name: Leptoclinides madara), Nen'ekiboya (scientific name: Diplosoma mitsukurii), Shitoneboya (scientific name: Lissoclinum pulvinum), Porikitori family (scientific name: Polycitoridae ) Cobalt clavela (scientific name: Clavelina coerulea), Eudistoma glaucus, Hengeboya (scientific name: Ploycitor proliferus), flyer boya (scientific name: Dispastria dubia) z i), Kopboya (scientific name: Cyathocormus mirabilis), second suborder moths (scientific name: Phleobranchia), Chionodaceae (scientific name: Cionidae), Bozuboya (scientific name: Syndiazona, belonging to the subfamily Diazoinidae) The kingfisher (scientific name: Ciona intestinalis); ), Date Boya (Scientific name: Ascidia ahodori) Vanadium Boya (scientific name: Ascidia gemmata), Himeboya (scientific name: Agnesia himeboja) belonging to the department of Agnesia (scientific name: Agnesia himeboja), Gammachiboya (scientific name: Cordodia) , Suboya (scientific name: Chelyosoma siboja), Ochiboboya (scientific name: Megaloidopia hians) belonging to the Octacneidae (scientific name: Octacnemididae), Second-class wall sex class (scientific name: Pleurogona), First sub-class of the first subclass , Kikuita Boya (scientific name: Botryl) lus tuberatus), Itaboya (scientific name: Botrylloides violaceus), Stiera family (scientific name: Stylidae), Araleboya (scientific name: Polyzoa vesiculiphor) belonging to the subfamily Polyzoinae Polycarpa cryptocarpa kuroboja), Nishikiboya (scientific name: Polycarpa aurata), Shiroboya (scientific name: Styla privatea), Eboya (scientific name: Styla clava), Shiroboyamo Michael Boya (scientific name: Pyura sacciformis), Hartboya (scientific name: Microcosmus hartmeieri), Tsuruganeboya (scientific name: Culeolus herdmani) iburi), maboya (scientific name: Halocynthia roretzi), red squirrel (scientific name: Halocythia aurantium), murine boya (scientific name: Hartmeeria orientalis), beniboya (scientific name: Herdmania mormorius) ), One or more selected from Manhattan Boya (scientific name: Molgula manhattensis), and preferably contains a carotenoid derived from ascidian.
前記ホヤ由来脂溶性油及びアロキサンチン及びディアトキサンチンの形態は、粉末状態のもの、固体状態のもの、有機溶媒に溶解したもの、又は界面活性剤を用いて水溶性にしたものとすることができる。 The form of the sea squirt-derived fat-soluble oil and alloxanthin and diatoxanthin may be powdered, solid, dissolved in an organic solvent, or water-soluble using a surfactant. it can.
ここで使用するホヤはフリーズドライ又はスプレードライ等を使用して乾燥した状態のものであっても良いし、生の状態であっても良い。さらに、粉砕機又は超臨界装置を使用して、抽出前のホヤが粉末状であっても良いし、切り分けられたものであっても良いし、小さくする何らかの処理をしない状態のものであっても良い。つまり、ホヤの物理、化学的状態がどのようなものであっても良い。 The sea squirt used here may be in a dry state using freeze drying or spray drying, or may be in a raw state. Furthermore, using a pulverizer or a supercritical device, the squirts before extraction may be in the form of a powder, may be cut out, or may not be processed in any way. Also good. In other words, squirts may be in any physical or chemical state.
また使用するホヤの部位はホヤ由来カロテノイドが含まれていれば何れの部位でも良く、好ましくは、ホヤ由来カロテノイドが蓄積されている部位、例えば被嚢（外皮）が望まれる。 In addition, the part of the sea squirt to be used may be any part as long as the sea squirt-derived carotenoid is contained, and a part where the sea squirt-derived carotenoid is accumulated, for example, a capsule (outer skin) is desired.
前記前記第一工程における抽出操作における温度が１０℃未満である場合には、抽出効率が悪く、５０℃を超える場合にはカロテノイドの分解がおこり、好ましくない。 When the temperature in the extraction operation in the first step is less than 10 ° C., the extraction efficiency is poor, and when it exceeds 50 ° C., carotenoids are decomposed, which is not preferable.
また前記第一工程における抽出操作時間が３０分未満である場合には抽出効率が悪く、４８時間を超える場合にはカロテノイドの分解がおこり、好ましくない。 Further, when the extraction operation time in the first step is less than 30 minutes, the extraction efficiency is poor, and when it exceeds 48 hours, carotenoids are decomposed, which is not preferable.
第二工程の有機溶媒又は有機溶媒及び水から成る混合溶媒の除去は、ホヤ由来カロテノイドの分解を最小限にする為に、エバポレータ等の減圧蒸留装置を使用して行うことができる。 The removal of the organic solvent or the mixed solvent composed of the organic solvent and water in the second step can be performed using a vacuum distillation apparatus such as an evaporator in order to minimize decomposition of the sea squirt carotenoid.
以下に本発明の実施例につき説明する。一連の本実施例では、炎症性サイトカインの産生評価モデルとして一般的に使用されているマウス由来マクロファージ様細胞ＲＡＷ２６４．７について各試験を行った。 Examples of the present invention will be described below. In this series of Examples, each test was conducted on mouse-derived macrophage-like cells RAW264.7, which are generally used as models for evaluating the production of inflammatory cytokines.
（実施例１）ホヤ脂溶性油の調製及びホヤ脂溶性油に含まれるカロテノイドの単離及び分析
ホヤ脂溶性油はエタノール抽出によって生のホヤより得た。このホヤ脂溶性油をシリカゲルの薄層クロマトグラフィ（展開溶媒はアセトン：ヘキサン＝２：３（ｖ／ｖ）を使用）に展開させることにより、４つの画分（フラクション１〜４）を得た。これを図１に示す。
Example 1 Preparation of Squirt Fat-soluble Oil and Isolation and Analysis of Carotenoids Contained in Squirt Fat-soluble Oil Squirt fat-soluble oil was obtained from raw sea squirt by ethanol extraction. This fraction oil-soluble oil was developed on silica gel thin layer chromatography (using developing solvent: acetone: hexane = 2: 3 (v / v)) to obtain four fractions (
図１において、（ａ）〜（ｄ）はそれぞれ、フラクション１〜４として分離し、フラクション３及び４はＮＭＲ測定により、それぞれハロシンチアキサンチン（Ｈａｌｏｃｙｎｔｈｉａｘａｎｔｈｉｎ）及びフコキサンチノール（Ｆｕｃｏｘａｎｔｈｉｎｏｌ）に同定され、これらのカロテノイドは前記操作により単離及び精製されることが分かった。
In FIG. 1, (a) to (d) are separated as
図２は薄層クロマトグラフィで分離された図１に（ｂ）で示すフラクション２画分のＨＰＬＣ分析結果を示す。図２に示す様に、フラクション２は高速液体クロマトグラフィ（充填剤はＯＤＳ、展開溶媒はアセトニトリル：メタノール＝３０：７０（ｖ／ｖ）、流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ）測定から、少なくとも５つのカロテノイド（フラクション２−１〜２−５）から構成される混合物であることが分かった。ＮＭＲ測定によりフラクション２−１は全トランスアロキサンチン（ａｌｌ−ｔｒａｎｓ ａｌｌｏｘａｎｔｈｉｎ）、フラクション２−２は全トランスディアトキサンチン（ａｌｌ−ｔｒａｎｓ ｄｉａｔｏｘｎａｈｉｎ）、フラクション２−３は９，９’シスアロキサンチン（９，９’−ｃｉｓ ａｌｌｏｘａｎｔｈｉｎ）、フラクション２−４は９シスアロキサンチン（９−ｃｉｓ ａｌｌｏｘａｎｔｈｉｎ）、フラクション２−５は９シスディアトキサンチン（９−ｃｉｓ ｄｉａｔｏｘｎａｈｉｎ）に同定され、前記操作によりこれらのカロテノイドが単離及び精製されることが分かった。図３に本実施例で得られたカロテノイドの化学構造式を示した。
FIG. 2 shows the HPLC analysis results of two fractions shown in FIG. 1 (b) separated by thin layer chromatography. As shown in FIG. 2, the
ホヤ脂溶性油の収率は、ホヤ（外殻を含む）乾燥重量４０６．３３ｇ（試料１）及び３２５．７８ｇ（試料２）からそれぞれ１４．１５９ｇ（３．４８重量％）及び１６．５０８ｇ（５．０７重量％）を得た。平均すると乾燥したホヤに対して４．２８重量％のホヤ脂溶性油が得られた。得られたホヤ脂溶性油をカラムクロマトグラフィ（充填剤はシリカゲル、展開溶媒はアセトン：ヘキサン＝２：３（ｖ／ｖ））に展開させることにより、試料１及び試料２から粗カロテノイド分画をそれぞれ８．３３６ｇ（２．０５重量％）及び１０．５０３ｇ（３．２２重量％）を得た。
The yield of squirt fat-soluble oil was 14.159 g (3.48% by weight) and 16.508 g (dry weight of squirt (including outer shell) dry weight of 406.33 g (Sample 1) and 325.78 g (Sample 2), respectively. 5.07% by weight). On average, 4.28% by weight of squirt oil-soluble oil was obtained based on the dried squirts. Crude carotenoid fractions were obtained from
さらに前記のＨＰＬＣ操作を行うことにより、試料１及び試料２から全トランスアロキサンチン０．３５２１ｇ（０．０８６重量％）及び０．３３０４ｇ（０．１０１重量％）、ハロシンチアキサンチン０．０４３０ｇ（０．０１１重量％）及び０．０４３２ｇ（０．０１３重量％）、フコキサンチノール０．０３１１ｇ（０．００８重量％）及び０．０３２１ｇ（０．００９重量％）を得た。
Further, by performing the above-described HPLC operation, 0.3521 g (0.086 wt%) and 0.3304 g (0.101 wt%) of all-trans alloxanthin from
（実施例２）炎症性サイトカイン及び炎症関連酵素のｍＲＮＡ量
１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに濃度を調製したＲＡＷ２６４．７細胞は、ＲＰＭＩ培地中で各ウェルに５ｍＬづつ６穴マイクロプレート中に分注した。これらの細胞を３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養した（前培養）。
(Example 2) Amount of mRNA of inflammatory cytokines and inflammation-related enzymes RAW264.7 cells prepared at a concentration of 1 × 10 5 cells / mL were dispensed into 6-well microplates in 5 mL per well in RPMI medium. did. These cells were cultured for 24 hours at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 (preculture).
各カロテノイド添加用の高濃度カロテノイドのエタノール溶液（全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチン５０μＭの１０００倍濃度（５０ｍＭ）の全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチンのエタノール溶液）を調製した。
Ethanol solution of high-concentration carotenoid for each carotenoid addition (all trans alloxanthin, all transdiaxanthin, 9 cis alloxanthin, 9
これらのカロテノイドのエタノール溶液を前培養したＲＡＷ２６４．７細胞培養液に添加した。その際、培地中のエタノールの濃度は細胞毒性を示さない０．１％以下になるように添加した（ネガティブコントロール（ＬＰＳ−）及びポジティブコントロール（ＬＰＳ＋）としたＲＡＷ２６４．７細胞培養液にはエタノールのみを添加した）。 These carotenoid ethanol solutions were added to the pre-cultured RAW264.7 cell culture. At that time, ethanol was added so that the concentration of ethanol in the culture medium was 0.1% or less which does not show cytotoxicity (negative control (LPS−) and positive control (LPS +)). Only).
マイクロプレートシェイカーを攪拌した後、３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養し、更にＬＰＳを終濃度０．１ ｍｇ／ｍＬとなるように添加し（ネガティブコントロール（ＬＰＳ−）としたＲＡＷ２６４．７細胞培養液には水のみを添加した）、所定の時間培養した。 After stirring the microplate shaker, the cells were cultured for 24 hours at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 , and LPS was added to a final concentration of 0.1 mg / mL (RAW264 as negative control (LPS−)). .7 cell culture solution was added with water alone) and cultured for a predetermined time.
その後、ＲＡＷ２６４．７細胞培養液を除去し、更に生理的リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いてＲＡＷ２６４．７細胞を洗浄した。この操作を３回行った。その後、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ （ＱＩＡＧＥＮ Ｉｎｃ）を用いてＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、定量ＲＴ−ＰＣＲ法により炎症性サイトカインであるＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６のｍＲＮＡ産生量および炎症関連酵素であるＣＯＸ−２、ｉＮＯＳのｍＲＮＡ発現量をＰＲＩＳＭ７０００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社）にて測定した。 Thereafter, the RAW264.7 cell culture medium was removed, and the RAW264.7 cells were washed with a physiological phosphate buffer (PBS). This operation was performed three times. Thereafter, total RNA was extracted using RNeasy Mini Kit (QIAGEN Inc), and mRNA production amounts of inflammatory cytokines TNFα, IL-1β, IL-6 and COX-, an inflammation-related enzyme, were measured by quantitative RT-PCR. 2. The mRNA expression level of iNOS was measured with PRISM7000 (Applied Biosystem).
その結果、全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチンのいずれのカロテノイドにおいても、ＬＰＳによって惹起されたＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦαのｍＲＮＡ発現量（ＬＰＳのみを添加したポジティブコントロール）を顕著に抑制することが明らかとなった（図４、図５、図６）。 As a result, in all carotenoids of all-trans alloxanthin, all-transdiaxanthin, 9-cis alloxanthin, and 9-cis-diatoxanthin, mRNA expression levels of IL-1β, IL-6, and TNFα induced by LPS ( It was revealed that the positive control to which only LPS was added) was remarkably suppressed (FIGS. 4, 5, and 6).
図４は全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）、全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）、９，９’シスアロキサンチン（Ｆ２−３）、９シスアロキサンチン（Ｆ２−４）、９シスディアトキサンチン（Ｆ２−５）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のＩＬ−１β遺伝子発現量の添加試料濃度依存性を示す。 FIG. 4 shows all-trans alloxanthin (F2-1), all-transdiaxanthine (F2-2), 9,9 ′ cis-alloxanthin (F2-3), 9-cis alloxanthin (F2-4), 9-cisdia The dependence of the expression level of IL-1β gene upon addition of toxanthin (F2-5) to RAW264.7 cells depends on the added sample concentration.
図５は全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）、全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）、９，９’シスアロキサンチン（Ｆ２−３）、９シスアロキサンチン（Ｆ２−４）、９シスディアトキサンチン（Ｆ２−５）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のＩＬ−６遺伝子発現量の添加試料濃度依存性を示す。 FIG. 5 shows all-trans alloxanthin (F2-1), all-transdiaxanthine (F2-2), 9,9 ′ cis-alloxanthin (F2-3), 9-cis alloxanthin (F2-4), 9-cisdia The dependence of IL-6 gene expression level on added sample concentration when toxanthin (F2-5) was added to RAW264.7 cells is shown.
図６は全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）、全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）、９，９’シスアロキサンチン（Ｆ２−３）、９シスアロキサンチン（Ｆ２−４）、９シスディアトキサンチン（Ｆ２−５）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のＴＮＦ−α遺伝子発現量の添加試料濃度依存性を示す。 FIG. 6 shows all-trans alloxanthin (F2-1), all-transdiaxanthin (F2-2), 9,9 ′ cis-alloxanthin (F2-3), 9-cis alloxanthin (F2-4), 9-cisdia The dependence of the expression level of TNF-α gene upon addition of toxanthin (F2-5) to RAW264.7 cells depends on the added sample concentration.
また、全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチンのいずれのカロテノイドもＣＯＸ−２ ｍＲＮＡ発現量を抑制した（図７）。ｉＮＯＳ ｍＲＮＡに対しては全トランスアロキサンチン、９シスアロキサンチンがＬＰＳによって惹起されたｍＲＮＡ発現量を有意に抑制した（図８）。 In addition, all carotenoids of all-trans alloxanthin, all-transdiaxanthin, 9-cis alloxanthin, and 9-cis allitoxanthin suppressed the expression level of COX-2 mRNA (FIG. 7). For iNOS mRNA, all trans alloxanthin and 9 cis alloxanthin significantly suppressed the mRNA expression level induced by LPS (FIG. 8).
図７は全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）、全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）、９，９’シスアロキサンチン（Ｆ２−３）、９シスアロキサンチン（Ｆ２−４）、９シスディアトキサンチン（Ｆ２−５）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のＣＯＸ−２遺伝子発現量の添加試料濃度依存性を示す。 FIG. 7 shows all-trans alloxanthin (F2-1), all-transdiaxanthine (F2-2), 9,9 ′ cis-alloxanthin (F2-3), 9-cis alloxanthin (F2-4), 9-cisdia The dependence of the COX-2 gene expression level upon addition of toxanthin (F2-5) to RAW264.7 cells is shown in FIG.
図８は全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）、全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）、９，９’シスアロキサンチン（Ｆ２−３）、９シスアロキサンチン（Ｆ２−４）、９シスディアトキサンチン（Ｆ２−５）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のｉＮＯＳ遺伝子発現量の添加試料濃度依存性を示す。 FIG. 8 shows all-trans alloxanthin (F2-1), all-transdiaxanthine (F2-2), 9,9 ′ cis-alloxanthin (F2-3), 9-cis alloxanthin (F2-4), 9-cisdia The dependence of the expression level of iNOS gene upon addition of toxanthin (F2-5) to RAW264.7 cells depends on the sample concentration.
これらの結果は、全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチンが、炎症誘発物質によって惹起される炎症性サイトカイン及び炎症関連酵素をｍＲＮＡの発現レベルで抑制できることを示しており、それらの抗炎症作用が期待される結果である。 These results indicate that all-trans alloxanthin, all-transdiaxanthin, 9-cis alloxanthin, and 9-cis diatoxanthin can suppress inflammatory cytokines and inflammation-related enzymes caused by pro-inflammatory substances at the mRNA expression level. These results are expected to have an anti-inflammatory effect.
（実施例３）炎症性サイトカイン産生量
１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに濃度を調製したＲＡＷ２６４．７細胞は、ＲＰＭＩ培地中で各ウェルに５ｍＬづつ６穴マイクロプレート中に分注した。これらの細胞を３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養した（前培養）。全トランスアロキサンチン添加用の高濃度カロテノイドのエタノール溶液（５０μＭの１０００倍濃度（５０ｍＭ）の全トランスアロキサンチンのエタノール溶液）を調製した。
(Example 3) Producing amount of inflammatory cytokines RAW264.7 cells adjusted to a concentration of 1 × 10 5 cells / mL were dispensed into 6-well microplates in 5 mL per well in RPMI medium. These cells were cultured for 24 hours at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 (preculture). A high-concentration carotenoid ethanol solution for adding all-trans alloxanthin (ethanol solution of all-trans alloxanthin in 50 μM 1000-fold concentration (50 mM)) was prepared.
この全トランスアロキサンチンのエタノール溶液を前培養したＲＡＷ２６４．７細胞培養液に添加した。その際、培地中のエタノールの濃度は細胞毒性を示さない０．１％以下になるように添加した（ネガティブコントロール（ＬＰＳ−）及びポジティブコントロール（ＬＰＳ＋）としたＲＡＷ２６４．７細胞培養液にはエタノールのみを添加した）。 This ethanolic solution of all trans alloxanthin was added to the precultured RAW264.7 cell culture. At that time, ethanol was added so that the concentration of ethanol in the culture medium was 0.1% or less which does not show cytotoxicity (negative control (LPS−) and positive control (LPS +)). Only).
マイクロプレートシェイカーを攪拌した後、３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養し、更にＬＰＳを終濃度０．１ ｍｇ／ｍＬまたは１ ｍｇ／ｍＬとなるように添加し（ネガティブコントロール（ＬＰＳ−）としたＲＡＷ２６４．７細胞培養液には水のみを添加した）、更に２４時間培養した。その後、市販のＩＬ−１β、ＩＬ−６量測定ＥＬＩＳＡキット（ＰＩＥＲＣＥ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）を用いて培養液中に分泌されたサイトカイン量を測定した。 After stirring the microplate shaker, it was incubated for 24 hours at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 , and LPS was further added to a final concentration of 0.1 mg / mL or 1 mg / mL (negative control (LPS Only water was added to the RAW264.7 cell culture medium defined as-)), and further cultured for 24 hours. Thereafter, the amount of cytokine secreted into the culture solution was measured using a commercially available ELISA kit for measuring IL-1β and IL-6 (PIERCE Chemical Co.).
全トランスアロキサンチンは炎症性サイトカインであるＩＬ−１β、ＩＬ−６の産生量をタンパク質レベルで抑制していた（図９、図１０）。このことより、ホヤ由来のカロテノイドが炎症物質により惹起された炎症性サイトカインの発現量を遺伝子のみならずタンパク質レベルで抑制しており、その有効性が確認された。 All-trans alloxanthin suppressed the production amount of IL-1β and IL-6, which are inflammatory cytokines, at the protein level (FIGS. 9 and 10). From this, the carotenoid derived from sea squirt suppressed the expression level of the inflammatory cytokine induced by the inflammatory substance at the protein level as well as the gene, and its effectiveness was confirmed.
図９は全トランスアロキサンチンをＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時の、ＩＬ−１β蛋白質発現量の添加試料濃度依存性を示す。
図１０は全トランスアロキサンチンをＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時の、ＩＬ−６蛋白質発現量の添加試料濃度依存性を測定した結果を示す。
FIG. 9 shows the dependence of IL-1β protein expression level on the added sample concentration when all-trans alloxanthin was added to RAW264.7 cells.
FIG. 10 shows the results of measuring the dependence of the expression level of IL-6 protein on the added sample concentration when all-trans alloxanthin was added to RAW264.7 cells.
（実施例４）カロテノイドによる炎症性サイトカインのｍＲＮＡ量の比較
実施例４として、本発明の抗炎症剤の有効成分であるホヤ由来脂溶性油が含有する５０μＭの全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）及び全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のＩＬ−１β遺伝子発現量を測定した。またこれに対する比較例として特許文献１で緑色植物やある種のカビ、酵母、キノコ、細菌から産出されると指摘されたゼアキサンチン（Ｚｅａ）、βカロテン（β−ｃａｒ）、アスタキサンチン（Ａｓｔ）についても同様にＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のＩＬ−１β遺伝子発現量を測定した。
測定にあたって、１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに濃度を調製したＲＡＷ２６４．７細胞をＲＰＭＩ培地中で各ウェルに５ｍＬづつ６穴マイクロプレート中に分注した。これらの細胞を３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養した（前培養）。
(Example 4) Comparison of mRNA amount of inflammatory cytokine by carotenoid As Example 4, 50 μM all-trans alloxanthin (F2-1) contained in sea squirt-derived fat-soluble oil which is an active ingredient of the anti-inflammatory agent of the present invention. And IL-1β gene expression level when total transdiaxanthin (F2-2) was added to RAW264.7 cells was measured. In addition, as a comparative example for this, zeaxanthin (Zea), β-carotene (β-car), and astaxanthin (Ast), which are pointed out to be produced from green plants, certain molds, yeasts, mushrooms and bacteria in
In the measurement, RAW264.7 cells adjusted to a concentration of 1 × 10 5 cells / mL were dispensed into 6-well microplates in an amount of 5 mL per well in RPMI medium. These cells were cultured for 24 hours at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 (preculture).
一方、各カロテノイド添加用の高濃度カロテノイドのエタノール溶液またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液（全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチンはエタノール溶液、ゼアキサンチン、β−カロテン、アスタキサンチンはＤＭＳＯ溶液とした）を調製した。 On the other hand, high-concentration carotenoid ethanol solution or dimethyl sulfoxide (DMSO) solution for all carotenoid additions (all trans alloxanthin, all transdiaxanthin is ethanol solution, zeaxanthin, β-carotene, astaxanthin is DMSO solution) is prepared did.
これらのカロテノイド溶液を前培養したＲＡＷ２６４．７細胞培養液に添加した。その際、培地中のエタノールおよびＤＭＳＯの濃度は細胞毒性を示さない０．１％以下になるように添加した（ネガティブコントロール（ＬＰＳ−）及びポジティブコントロール（ＬＰＳ＋）としたＲＡＷ２６４．７細胞培養液にはエタノールまたはＤＭＳＯのみを添加した）。マイクロプレートシェイカーを攪拌した後、３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養し、更にＬＰＳを終濃度０．１ｍｇ／ｍＬとなるように添加し（ネガティブコントロール（ＬＰＳ−）としたＲＡＷ２６４．７細胞培養液には水のみを添加した）、所定の時間培養した。 These carotenoid solutions were added to the precultured RAW264.7 cell culture. At that time, ethanol and DMSO in the medium were added so that the concentrations of ethanol and DMSO were 0.1% or less, which did not show cytotoxicity (negative control (LPS−) and positive control (LPS +)). Only added ethanol or DMSO). After stirring the microplate shaker, the cells were cultured at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 for 24 hours, and LPS was added to a final concentration of 0.1 mg / mL (RAW264. Used as negative control (LPS−)). 7 cell culture solution was added with water alone) and cultured for a predetermined time.
その後、ＲＡＷ２６４．７細胞培養液を除去し、更に生理的リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いてＲＡＷ２６４．７細胞を洗浄した。この操作を３回行った。その後、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ （ＱＩＡＧＥＮ Ｉｎｃ）を用いてＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、定量ＲＴ−ＰＣＲ法により炎症性サイトカインであるＩＬ−１β、ＩＬ−６のｍＲＮＡ産生量をＰＲＩＳＭ７０００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社）にて測定した。その測定結果を図１１及び図１２に示す。 Thereafter, the RAW264.7 cell culture medium was removed, and the RAW264.7 cells were washed with a physiological phosphate buffer (PBS). This operation was performed three times. Thereafter, total RNA was extracted using RNeasy Mini Kit (QIAGEN Inc), and mRNA production amounts of inflammatory cytokines IL-1β and IL-6 were measured by PRISM7000 (Applied Biosystem) by quantitative RT-PCR method. did. The measurement results are shown in FIGS.
図１１は５０μＭの全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）、全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）、ゼアキサンチン（Ｚｅａ）、βカロテン（β−ｃａｒ）、アスタキサンチン（Ａｓｔ）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のＩＬ−１β遺伝子発現量を測定した結果を示す。
図１２は５０μＭの全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）、全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）、ゼアキサンチン（Ｚｅａ）、βカロテン（β−ｃａｒ）、アスタキサンチン（Ａｓｔ）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時のＩＬ−６遺伝子発現量を測定した結果を示す。
FIG. 11 shows the addition of 50 μM all-trans alloxanthin (F2-1), all-transdiaxanthine (F2-2), zeaxanthin (Zea), β-carotene (β-car), and astaxanthin (Ast) to RAW264.7 cells. The result of having measured the expression level of IL-1β gene is shown.
FIG. 12 shows the addition of 50 μM all-trans alloxanthin (F2-1), all-transdiaxanthine (F2-2), zeaxanthin (Zea), β-carotene (β-car), and astaxanthin (Ast) to RAW264.7 cells. The result of having measured the expression level of IL-6 gene at the time of doing is shown.
図１１及び図１２に示される様に、本発明の抗炎症剤の有効成分であるホヤ由来脂溶性油が含有する全トランスアロキサンチンおよび全トランスディアトキサンチンによる、ＩＬ−１β、ＩＬ−６のｍＲＮＡ発現抑制効果は、特許文献１で緑色植物やある種のカビ、酵母、キノコ、細菌から産出されると指摘されたゼアキサンチン、β−カロテン、アスタキサンチンに比べて顕著な抑制効果であった。特に、これまで抗炎症作用が報告されているアスタキサンチンの効果より顕著であったことは、抗炎症剤としてホヤ由来のカロテノイドが有用であることを示すものである（図１１、図１２）。
As shown in FIG. 11 and FIG. 12, IL-1β and IL-6 by all-trans alloxanthin and all-transdiaxanthin contained in ascidian-derived fat-soluble oil which is an active ingredient of the anti-inflammatory agent of the present invention. The mRNA expression inhibitory effect was a remarkable inhibitory effect compared with zeaxanthin, β-carotene, and astaxanthin, which were pointed out to be produced from green plants, certain molds, yeasts, mushrooms, and bacteria in
（実施例５）ホヤ由来カロテノイドの添加による細胞に対する毒性試験
ＲＡＷ２６４．７細胞に対して細胞の生存に深刻な影響を及ぼさない、言い換えると細胞がアポトーシス或いはネクローシスを起こさないようなホヤ由来カロテノイドの添加量を調べた。
１０×１０３ｃｅｌｌｓ／ｍＬに濃度を調製したＲＡＷ２６４．７細胞は、ＲＰＭＩ培地中で各ウェルに１００μＬづつ９６穴マイクロプレート中に分注した。これらの細胞を３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養した（前培養）。
(Example 5) Toxicity test for cells by addition of sea squirt carotenoids Addition of sea squirt carotenoids that do not seriously affect cell survival of RAW264.7 cells, in other words, cells do not undergo apoptosis or necrosis The amount was examined.
RAW264.7 cells adjusted to a concentration of 10 × 10 3 cells / mL were dispensed into a 96-well microplate, 100 μL per well in RPMI medium. These cells were cultured for 24 hours at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 (preculture).
各カロテノイド添加用の高濃度カロテノイドのエタノール溶液（全トランスハロシンチアキサンチン、全トランスフコキサンチン、全トランスフコキサンチノール、全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチン、これらのカロテノイドには炎症誘導剤としてリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を終濃度が０．１ ｍｇ／ｍＬになるように調製して添加している、ネガティブコントロールとしてエタノールのみ（ＬＰＳ−）、ポジティブコントロールとしてＬＰＳのエタノール溶液（ＬＰＳ＋））を以下のように調製し、前培養後のＲＡＷ２６４．７細胞に添加した。 High-concentration carotenoid ethanol solution for each carotenoid addition (all transhalothin thiaxanthine, all transfucoxanthin, all transfucoxanthinol, all trans alloxanthin, all transdiaxanthin, 9 cis alloxanthin, 9 cisdiato Xanthine and these carotenoids are prepared by adding lipopolysaccharide (LPS) as an inflammation inducer to a final concentration of 0.1 mg / mL, ethanol only (LPS-) as a negative control, positive As a control, an ethanol solution of LPS (LPS +) was prepared as follows and added to RAW264.7 cells after preculture.
ハロシンチアキサンチン、フコキサンチン、フコキサンチノールは終濃度０．７５、１．５、３μＭの１０００倍濃度（０．７５、１．５、３ｍＭ）のハロシンチアキサンチン、フコキサンチン、フコキサンチノールのエタノール溶液を、全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチン５０μＭの１０００倍濃度（５０ｍＭ）の全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチンのエタノール溶液を調製した。
Halocinthiaxanthine, fucoxanthin and fucoxanthinol are 1000 times the final concentrations of 0.75, 1.5 and 3 μM (0.75, 1.5 and 3 mM). The ethanol solution of santinol was mixed with all-trans alloxanthin, all-transdiaxanthin, 9-cis alloxanthin, 9-
これらに９１倍量（ｖ）のＲＰＭＩ培地で希釈し、得られた溶液の１０μＬを前培養したＲＡＷ２６４．７細胞に添加した。このように添加したカロテノイドを調製する事により、培地中のエタノールの濃度は０．１％以下になる。９６穴マイクロプレートに取り分けた試料をプレートシェイカーで攪拌し、その後３７℃、５％ＣＯ２存在下で、所定の時間培養した。 These were diluted with 91-fold volume (v) of RPMI medium, and 10 μL of the resulting solution was added to the pre-cultured RAW264.7 cells. By preparing the carotenoid added in this way, the concentration of ethanol in the medium becomes 0.1% or less. The sample separated into the 96-well microplate was stirred with a plate shaker, and then cultured at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 for a predetermined time.
測定の３時間前にＷＳＴ−１試薬を各ウェルに１０μＬずつ添加し、プレートシェーカーで均一に分散させた。さらに３時間培養後、マイクロプレートリーダーで、４５０ｎｍの吸光度（対照波長は６５０ｎｍ）を測定した。得られた吸光度の値を用いて、細胞生残率＝（（カロテノイドのエタノール溶液を添加した細胞溶液の吸光度）−（培地とカロテノイドのエタノール溶液の吸光度））／（（エタノールを添加した細胞溶液の吸光度）−（培地＋エタノール溶液の吸光度））の式から細胞生残率を見積もった。 Three hours before the measurement, 10 μL of WST-1 reagent was added to each well and dispersed uniformly with a plate shaker. After further incubation for 3 hours, absorbance at 450 nm (control wavelength was 650 nm) was measured with a microplate reader. Using the obtained absorbance value, cell survival rate = ((absorbance of cell solution with addition of carotenoid ethanol solution) − (absorbance of medium and carotenoid ethanol solution)) / ((cell solution with addition of ethanol) The cell survival rate was estimated from the equation: (absorbance of) − (absorbance of medium + ethanol solution)).
その結果を図１３に示す。図１３は 全トランスアロキサンチン（Ｆ２−１）、全トランスディアトキサンチン（Ｆ２−２）、９，９’シスアロキサンチン（Ｆ２−３）、９シスアロキサンチン（Ｆ２−４）、９シスディアトキサンチン（Ｆ２−５）をＲＡＷ２６４．７細胞に添加した時の細胞生残率の添加試料濃度依存性を見積もった結果を示す。 The result is shown in FIG. FIG. 13 shows all-trans alloxanthin (F2-1), all-transdiaxanthin (F2-2), 9,9 ′ cis-alloxanthin (F2-3), 9-cis alloxanthin (F2-4), 9-cisdia The result of estimating the added sample density | concentration dependence of the cell survival rate when adding toxanthin (F2-5) to RAW264.7 cell is shown.
図１３に示される様に、炎症性サイトカインおよび炎症酵素の発現抑制効果を示したホヤ由来のカロテノイドである全トランスハロシンチアキサンチン、全トランスフコキサンチン、全トランスフコキサンチノール、全トランスアロキサンチン、全トランスディアトキサンチン、９シスアロキサンチン、９シスディアトキサンチンはＲＡＷ２６４．７細胞に対して５０ｐｐｍ以上まで細胞毒性を示さなかった。これらの結果はホヤ由来のカロテノイドが生体に対して適合性を有した抗炎症剤であることを示している。 As shown in FIG. 13, all-transhalocinthiaxanthine, all-transfucoxanthin, all-transfucoxanthinol, all-transaloxanthin, carotenoids from sea squirts that showed an inhibitory effect on the expression of inflammatory cytokines and inflammatory enzymes, All transdiaxanthin, 9 cis alloxanthin, and 9 cis alloxanthin did not show cytotoxicity to RAW264.7 cells up to 50 ppm or more. These results indicate that sea squirt-derived carotenoids are anti-inflammatory agents compatible with living organisms.
本発明の抗炎症剤は、ホヤ由来脂溶性油を食品素材等に添加することで機能性食品素材として用いることができ、農業の分野での活用も可能である。 The anti-inflammatory agent of the present invention can be used as a functional food material by adding ascidian-derived fat-soluble oil to a food material or the like, and can also be used in the field of agriculture.
Claims (20)
（化１）
(Chemical formula 1)
（化１）
(Chemical formula 1)
（化２）
（化２）
(Chemical formula 2)
The developing solvent used in the chromatography in the third step is one selected from water, alcohols, ethers, ketos, aliphatic hydrocarbon halogen compounds, aliphatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons or The method for producing an anti-inflammatory agent according to claim 14, which is a developing solvent obtained by a combination of two or more kinds.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2007012532A JP2008179545A (en) | 2007-01-23 | 2007-01-23 | Anti-inflammatory agent and method for producing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2007012532A JP2008179545A (en) | 2007-01-23 | 2007-01-23 | Anti-inflammatory agent and method for producing the same |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2008179545A true JP2008179545A (en) | 2008-08-07 |
Family
ID=39723738
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007012532A Pending JP2008179545A (en) | 2007-01-23 | 2007-01-23 | Anti-inflammatory agent and method for producing the same |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2008179545A (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013088177A1 (en) * | 2011-12-16 | 2013-06-20 | Bergen Teknologioverføring As | Tunicate extract for use in animal feeds |
| KR20200078201A (en) * | 2018-12-21 | 2020-07-01 | 강릉원주대학교산학협력단 | An anti-inflammatory or immunological enhancing composition comprising a Halocynthia aurantium body wall fatty acid as an active ingredient |
| JP2023146877A (en) * | 2022-03-29 | 2023-10-12 | 株式会社ファンケル | Composition for promoting lipolysis |
-
2007
- 2007-01-23 JP JP2007012532A patent/JP2008179545A/en active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JPN6012036519; 小西いずみ他: 'ホヤ由来カロテノイドによる炎症性サイトカインの産生制御機能' 日本油化学会年会講演要旨集 Ｖｏｌ．４５ｔｈ, 20060908, ｐ．１７７ * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013088177A1 (en) * | 2011-12-16 | 2013-06-20 | Bergen Teknologioverføring As | Tunicate extract for use in animal feeds |
| CN104185425A (en) * | 2011-12-16 | 2014-12-03 | 卑尔根技术交易股份公司 | Tunicate extract for use in animal feeds |
| US10159264B2 (en) | 2011-12-16 | 2018-12-25 | Bergen Teknologioverforing As | Tunicate extract for use in animal feeds |
| KR20200078201A (en) * | 2018-12-21 | 2020-07-01 | 강릉원주대학교산학협력단 | An anti-inflammatory or immunological enhancing composition comprising a Halocynthia aurantium body wall fatty acid as an active ingredient |
| KR102162263B1 (en) | 2018-12-21 | 2020-10-06 | 강릉원주대학교산학협력단 | An anti-inflammatory or immunological enhancing composition comprising a Halocynthia aurantium body wall fatty acid as an active ingredient |
| JP2023146877A (en) * | 2022-03-29 | 2023-10-12 | 株式会社ファンケル | Composition for promoting lipolysis |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Choe et al. | The science behind microgreens as an exciting new food for the 21st century | |
| Ohgami et al. | Effects of astaxanthin on lipopolysaccharide-induced inflammation in vitro and in vivo | |
| Soontornchaiboon et al. | Anti-inflammatory effects of violaxanthin isolated from microalga Chlorella ellipsoidea in RAW 264.7 macrophages | |
| Ranga Rao et al. | Characterization of microalgal carotenoids by mass spectrometry and their bioavailability and antioxidant properties elucidated in rat model | |
| Li et al. | A comparative study: in vitro effects of EPA and DHA on immune functions of head-kidney macrophages isolated from large yellow croaker (Larmichthys crocea) | |
| Tanaka et al. | Cancer chemoprevention by caroteno | |
| Yang et al. | Suppressive effect of carotenoid extract of Dunaliella salina alga on production of LPS-stimulated pro-inflammatory mediators in RAW264. 7 cells via NF-κB and JNK inactivation | |
| Higuera-Ciapara et al. | Astaxanthin: a review of its chemistry and applications | |
| JP5721740B2 (en) | Combination of carotenoids and epilutein | |
| JP5676881B2 (en) | Cognitive impairment improving agent | |
| JP2008179545A (en) | Anti-inflammatory agent and method for producing the same | |
| JP2015174850A (en) | anti-inflammatory compound | |
| Takatani et al. | Preparation of apoastaxanthinals and evaluation of their anti-inflammatory action against lipopolysaccharide-stimulated macrophages and adipocytes | |
| JP7553896B2 (en) | New compound derived from watermelon and composition using same | |
| Takahashi et al. | Effect of dietary supplementation of astaxanthin from Phaffia rhodozyma on lipopolysaccharide‐induced early inflammatory responses in male broiler chickens (Gallus gallus) fed a corn‐enriched diet | |
| CN102811992B (en) | Anti-leishmania compounds and anti-leishmania drugs | |
| Young et al. | Carotenoids and prostate cancer risk | |
| Barros et al. | Putative benefits of microalgal astaxanthin on exercise and human health | |
| JP2006008716A (en) | Lipoxygenase inhibitor | |
| KR20230170698A (en) | Sirtuin or Klotho activation or expression enhancer, NAD+ increaser, and senescent cell inhibitor | |
| Dore | Astaxanthin and cancer chemoprevention | |
| Kim et al. | Evaluation of anti-inflammatory activities and mechanisms of microalga Phaeodactylum tricornutum | |
| JP2019011314A (en) | Regulatory T cell inducer, adjuvant and food composition | |
| JP2011241195A (en) | Ucp-1 production promoter, ucp-2 production promoter, fat combustion promoter, and fat accumulation inhibitor | |
| Azzahra et al. | Wisdom of nature: Cardiovascular, anti-obesity, and immunomodulator nutraceuticals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100115 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120712 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20121108 |