JP2005530778A

JP2005530778A - 神経障害の予防および／または治療のための方法

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Publication number: JP2005530778A
Application number: JP2004505023A
Authority: JP
Inventors: ヌヴィル，パスカル
Original assignee: フォースト・ファーマシューティカルス
Priority date: 2002-05-17
Filing date: 2003-05-16
Publication date: 2005-10-13
Also published as: AU2003236668A1; CA2486302A1; WO2003097024A1

Abstract

本発明は、神経障害を予防および／または治療するための、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の基質およびその塩類の使用に関する。好ましい態様において、本発明は、神経障害を予防および／または治療するための、脳に発現する少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の基質およびその塩類の使用に関する。本発明はさらに、グルタメートの細胞毒性、より具体的にはグルタメートにより誘発される神経障害を予防および／または治療するための、前記基質およびその塩類の使用に関する。本発明はさらに、グルタメートの放出に対する阻害作用を及ぼす薬物を製造するための、前記基質およびその塩類の使用に関する。

Description

興奮性アミノ酸を使う細胞連絡が細胞破壊の機序に変換される可能性のあることが、多数の研究により確立されている。
たとえばグルタメートは、哺乳動物の神経系、特に脳および脊髄における主要な興奮性神経伝達物質であり、その多様な興奮性シナプスにおいて作動している。

グルタミン酸受容体が神経系全体に広く分布していることは、グルタメートが広範囲の生理事象および病理事象において中心的な役割を果たしていることを証明する（ＷａｔｋｉｎｓＪ．Ｃ．，ＣｏｌｌｉｎｇｒｉｄｇｅＧ．Ｌ．，ＴｈｅＮＭＤＡｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＩＲＬＯｘｆｏｒｄ，１９８９）。たとえば、それは学習、パターン認識、および記憶などの機能において中心的な役割を果たしていることが強く示唆されている（ＢｌｉｓｓＴ．Ｖ．Ｐ．，ＣｏｌｌｉｎｇｒｉｄｇｅＧ．Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６１，３１−３９，１９９３）。

普通は、細胞外グルタメート濃度は、正常なシナプス伝達に伴って短期間だけ空間的に限局された状態で上昇する；しかし病的状況では、濃度が著しく上昇した状態のままでいる場合がある。

さらに、グルタメートがインビトロおよびインビボでニューロンに対して毒性であること、ならびにグルタミン酸受容体、特にグルタミン酸受容体のＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（”ＮＭＤＡ”）受容体サブタイプの機能が多数の神経損傷および神経傷害において決定的であることも、数十年前から知られている（ＡｐｐｅｌＳ．Ｈ．，ＴｒｅｎｄｓＮｅｕｒｏｓｃｉ．１６，３−５，１９９３）。てんかん性発作および慢性または急性の変性経過を伴う多くの神経障害、たとえばアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、多発硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄筋萎縮症（ＳＭＡ）、網膜障害、卒中、うつ病および外傷性脳障害が、グルタミン酸受容体の過剰刺激によるニューロンの細胞死を伴う。同様に、虚血脳においては、細胞外グルタメートが虚血発症後に急激に増加し、再潅流に伴って減少するので、脳動脈閉塞後の虚血により起きる神経傷害が少なくとも部分的にはグルタミン酸受容体の過剰活性化により仲介され得ることも示された（Ｄａｖａｌｏｓｅｔａｌ．，１９９７，Ｓｔｒｏｋｅ，２８，７０８−７１０）。細胞外グルタメート濃度の著しい上昇を伴う他の病的状況は、低酸素症または低血糖症である。さらに、ＳｔｅｐｈａｎｓａｎｄＹａｍａｍｏｔｏ（１９９４，Ｓｙｎａｐｓｅ，１７，２０３−２０９）は、薬物誘発性神経毒性、たとえばメタンフェタミン（ＭＥＴＨ）が線条ドーパミン作動性ニューロンに及ぼす神経毒作用は実際にグルタミン酸受容体の過剰刺激により仲介され得ることを示した。

これらのグルタミン酸受容体の過剰活性化（”グルタメートの細胞毒性”と呼ぶ）は、実際に細胞外グルタメート濃度の上昇に関連する。細胞外グルタメート増加の機序には、細胞によるグルタメート排出の増加および／またはグルタメート取込みの減少が含まれる。したがって、罹患細胞、特にニューロンを、グルタメートにより誘発される細胞毒性から保護する手段を提供すること、より具体的にはグルタメート産生細胞によるグルタメートの放出および／または取込みを調節する手段を提供することが望ましいであろう。

このために、標的細胞に存在するグルタミン酸受容体、大部分の場合Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（”ＮＭＤＡ”）受容体を、アゴニストまたはアンタゴニスト特異的分子を用いて阻害することにより標的とすることが、既に提唱されている。そのような分子の例は、アントラニル酸誘導体（ＵＳ５，７８９，４４４参照）、ベーシレンブルー（ＢａｓｉｌｅｎＢｌｕｅ）Ｄ−３Ｇ（リアクティブブルー（ＲｅａｃｔｉｖｅＢｌｕｅ）２）およびチバクロンブルー（ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ）３ＧＡ、ならびに５−アデニリルイミドジホスフェート（ＡＭＰＰＮＰ）（ＵＳ６，３２６，３７０参照）、ＮＭＤＡ特異的アンタゴニスト、たとえばケタミン（ｋｅｔａｍｉｎｅ）、グルコナート（Ｓａｋａｇｕｃｈｉｅｔａｌ．，１９９９，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，９２，６７７−６８４）、デキストロモファン、または３−（２−カルボキシピペラジン−４−イル）−プロピル−１−ホスホン酸（Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｔａｌ．，１９９２，Ｐａｉｎ，５１：２４９−２５３；Ｅｉｄｅｅｔａｌ．，１９９５，Ｐａｉｎ，６１，２２１−２２８）、または２−メチル−６−（フェニルエチニル）ピリジン（ＭＰＥＰ）、すなわち代謝調節型グルタミン酸受容体サブタイプ５（ｍＧｌｕＲ５）のアンタゴニスト（Ｏｓｓｏｗｓｋａｅｔａｌ．，２００１，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４１，４１３−４２０）である。

しかし、これらの化合物の不都合な副作用（たとえば精神異常作用、頭痛、幻覚、不快感、または認知機能および運動機能の障害）により、それらの広範な使用は妨げられている。したがって、現在利用できる処置方法は、それらの広範な実施に対する安全性または有効性の点で満足できない。

したがって、罹患細胞、より好ましくはニューロンを、グルタメートにより誘発される細胞毒性から保護するための改良された方法および手段を提供することがなお求められている。

多くの神経障害は、神経仲介物質（または神経伝達物質）、たとえばアセチルコリン（Ａｃｈ）、ブチリルコリン（Ｂｕｃｈ）、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、セロトニン、またはカテコールアミン、特にドーパミン、またはＡＴＰの放出レベル増大とも関連する。

哺乳動物においてグルクロン酸抱合（glucuronidation）は、多くの親油性薬物、汚染物質、生体内異物および内因性化合物を、生体利用能の低い、したがって活性の低い、より高い極性および水溶性を示すグルクロン酸抱合物質に変換して、それらの排出器官への輸送とそれに続く尿または胆汁中への排出を促進することにより解毒および排除を促進するための、主要な代謝経路である（概説については、Ｒｉｔｔｅｒ，２０００，Ｃｈｅｍｉｃｏ−ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，１２９，１７１−１９３参照）。この反応はＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）により触媒される。この多重遺伝子族の酵素は、ＵＤＰ−グルクロン酸のグルクロン酸部分を、ヒドロキシル（アルコール性、フェノール性）、カルボキシル、スルフリル、カルボニルおよびアミノ（第一級、第二級または第三級）結合を介して構造的に無関係の化合物へ転移させる（概説については、ＴｕｒｋｅｙａｎｄＳｔｒａｓｓｂｕｒｇ，２０００，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４０，５８１−６１６参照）。最初は、グルクロン酸抱合は主に肝臓で行われる代謝経路であると考えられていた。しかし多数の研究で、さらにＵＧＴ活性がヒトの腸、腎臓、結腸組織および脳にも存在することが示され、これらにおいてこの酵素は臓器に到達し得る潜在反応性ヒドロキシル化分子に対する臓器の防御に能動的に関与すると考えられる（Ｓｕｌｅｍａｎｅｔａｌ．，１９９８，ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，３５８，１，６３−６７；Ｇｒａｄｉｎａｒｕｅｔａｌ．，１９９９，ＮｅｕｒｏｃｈｅｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，２４，９９５−１０００）。
ＵＳ５，７８９，４４４ＵＳ６，３２６，３７０ＷａｔｋｉｎｓＪ．Ｃ．，ＣｏｌｌｉｎｇｒｉｄｇｅＧ．Ｌ．，ＴｈｅＮＭＤＡｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＩＲＬＯｘｆｏｒｄ，１９８９ＢｌｉｓｓＴ．Ｖ．Ｐ．，ＣｏｌｌｉｎｇｒｉｄｇｅＧ．Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６１，３１−３９，１９９３ＡｐｐｅｌＳ．Ｈ．，ＴｒｅｎｄｓＮｅｕｒｏｓｃｉ．１６，３−５，１９９３Ｄａｖａｌｏｓｅｔａｌ．，１９９７，Ｓｔｒｏｋｅ，２８，７０８−７１０ＳｔｅｐｈａｎｓａｎｄＹａｍａｍｏｔｏ（１９９４，Ｓｙｎａｐｓｅ，１７，２０３−２０９Ｓａｋａｇｕｃｈｉｅｔａｌ．，１９９９，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，９２，６７７−６８４Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｔａｌ．，１９９２，Ｐａｉｎ，５１：２４９−２５３Ｅｉｄｅｅｔａｌ．，１９９５，Ｐａｉｎ，６１，２２１−２２８Ｏｓｓｏｗｓｋａｅｔａｌ．，２００１，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４１，４１３−４２０Ｒｉｔｔｅｒ，２０００，Ｃｈｅｍｉｃｏ−ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，１２９，１７１−１９３ＴｕｒｋｅｙａｎｄＳｔｒａｓｓｂｕｒｇ，２０００，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４０，５８１−６１６Ｓｕｌｅｍａｎｅｔａｌ．，１９９８，ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，３５８，１，６３−６７Ｇｒａｄｉｎａｒｕｅｔａｌ．，１９９９，ＮｅｕｒｏｃｈｅｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，２４，９９５−１０００

本発明者らは、インビボ、より具体的には脳におけるＵＧＴ活性を別の形で利用して、急性および慢性の神経仲介物質関連疾患または状態、特に神経疾患の治療および／または予防のための新規クラスの化合物を特定できることを今回証明した。本発明は、競合性および非競合性グルタメートアンタゴニストまたはアゴニスト、ガングリオシドおよび増殖因子などの化合物を用いる従来法に代わる薬理学的方法である。特定の態様において、本発明は、細胞による神経仲介物質の放出および細胞毒性、好ましくは神経毒性を調節するための薬理学的ツールとして使用でき、てんかん性発作を伴う多くの神経障害及び急性および慢性の神経変性性疾患、ならびに虚血または神経仲介物質関連の疾患または状態により起きる神経傷害の治療および／または予防を可能とする、新規クラスの化合物を提供する。これらの障害は、少なくとも部分的には神経仲介物質受容体の過剰活性化および／または過剰の細胞外神経仲介物質濃度に関連するものである。

第１に本発明は、医薬組成物であってその医薬組成物で処置した個体内への細胞外神経仲介物質放出に対する阻害作用を有する医薬組成物の調製のための、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類の基質およびその塩類の使用に関する。特定の１態様によれば、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）は脳に発現する。

特定の態様によれば、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）は下記よりなる群において選択される：ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ１（ＵＧＴ１Ａ１；ＨＵＧ−Ｂｒ１またはＵＧＴ１．１とも呼ばれる）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ３（ＵＧＴ１Ａ３；１ｃとも呼ばれる）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ４（ＵＧＴ１Ａ４；ＨＵＧ−Ｂｒ２とも呼ばれる）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ６（ＵＧＴ１Ａ６）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ９（ＵＧＴ１Ａ９；ＨＬＵＧＰ４とも呼ばれる）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ４（ＵＧＴ２Ｂ４；Ｈｌｕｇ−２５、Ｔｈ−１、ｈ−１またはｈ−２０とも呼ばれる）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ７（ＵＧＴ２Ｂ７）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ１０（ＵＧＴ２Ｂ１０；ｈ−４６とも呼ばれる）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ１５（ＵＧＴ２Ｂ１５；ＵＤＰＧＴｈ−３、ｈ−３、ＨＬＵＧ−４またはＨＥ８Ａとも呼ばれる）、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ１７（ＵＧＴ２Ｂ１７）、およびＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ２８（ＵＧＴ２Ｂ２８）。特定の態様によれば、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）は脳に発現し、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ６（ＵＧＴ１Ａ６）およびＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ７（ＵＧＴ２Ｂ７）よりなる群において選択される。

本発明によれば、用語”ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）”はグルクロン酸抱合反応を触媒する酵素を表わす。この反応は、グルクロニドの形成のためにＵＤＰ−グルクロン酸を補助基質として利用する。これらの用語はすべて文献中で広く用いられている；概説についてはＴｕｒｋｅｙａｎｄＳｔｒａｓｓｂｕｒｇ，２０００，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４０，５８１−６１６を参照されたい。特定のＵＧＴの活性を分析するための好ましい方法は、最少レベルの各タンパク質を発現する細胞系において対応するｃＤＮＡを発現させるものである。より詳細には、標準的な一過性トランスフェクション法により、またはｃＤＮＡをゲノムに安定導入することにより、細胞をトランスフェクションした後、適切な抗生物質で細胞を選択する。次いで、トリス−ＨＣｌおよびＭｇＣｌ₂を含有する緩衝液中で細胞をホモジナイズし、超音波処理する。次いで細胞ホモジェネートが一連の基質をグルクロン酸抱合する能力を検査する。ある基質に対するＵＧＴの活性および選択性を、既知の特異的基質があればそれと比較できる（ＲｅｍｍｅｌａｎｄＢｕｒｃｈｅｌｌ，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４６，５５９−５６６）。

現在、ヒトにおいて１５種類のＵＧＴｃＤＮＡ、ＵＧＴ１Ａ遺伝子座によりコードされる８種類のＵＧＴ１Ａタンパク質、およびＵＧＴ２Ｂ遺伝子によりコードされる７種類のタンパク質が同定されている。”ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）１Ａ６”は、ＵＧＴ１Ａ遺伝子座によりコードされるＵＧＴタンパク質の１つを表わす。ヒトＵＧＴ１Ａ６配列を配列番号１に示す（Ｈａｒｄｉｎｇｅｔａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５，８３８１−８３８５）。ＵＧＴ１Ａ６は、ＰＮＰ−ＵＧＴ、フェノールｐＩ６．２、ＵＧＴ１^*６、ＵＧＴ１Ａ０６またはＨＬＵＧＰ１とも呼ばれる。”ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）２Ｂ７”は、ＵＧＴ２Ｂ遺伝子座によりコードされるＵＧＴタンパク質の１つを表わす。ヒトＵＧＴ２Ｂ７配列を配列番号２に示す（Ｒｉｔｔｅｒｅｔａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５，７９００−７９０６。ＵＧＴ２Ｂ７は、Ｔｈ−２、ｈ−２、Ｈｌｕｇ−６、ＵＧＴ２^*７またはカテコールエストロゲンＵＤＰＧＴとも命名されている）。

本発明によれば、用語”ＵＧＴ基質”は、一般にアグリコン基質（すなわち、上記に開示されたＵＧＴ酵素により酵素変換または代謝されうる化合物）およびグルクロン酸抱合された基質（すなわち、活性基を介した少なくとも１つのグルクロン酸部分の付加により変換された化合物）の両方を表わす。

本発明によれば、用語”神経仲介物質”は”神経伝達物質”の同義語であり、１つの神経細胞（ニューロン）を他の神経細胞または筋肉から分離している接合部（シナプス）を越えて情報を伝達する化学物質を表わすものとする。神経仲介物質の例は、アセチルコリン（Ａｃｈ）、ブチリルコリン（Ｂｕｃｈ）、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、セロトニン、ノルエピネフリン、エピネフリン、エンドルフィン、またはカテコールアミン、特にドーパミン、またはアデノシン三リン酸である。好ましい１態様によれば、神経仲介物質はグルタメートである。

１態様によれば、本発明のＵＧＴ基質は、平面状低分子フェノール類、多環式芳香族炭化水素、および構造的に関連する化合物よりなる群において選択される。より具体的には、ＵＧＴ基質は、ヒドロキシル（アルコール性、フェノール性など）、カルボキシル、スルフリル、カルボニルおよびアミノ（第一級、第二級または第三級）部分よりなる群において選択される少なくとも１つの部分を含む。

具体的態様によれば、基質は、少なくともＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ６（ＵＧＴ１Ａ６）により変換可能な、下記よりなる群において選択される化合物である：１−ナフトール、２−ナフトール、４−ニトロフェノール、サリチル酸メチル、ケトプロフェン（ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ）、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）、５−ＯＨトリプタミン／セロトニン、カルプロフェン（ｃａｒｐｒｏｆｅｎ）／リマディル（ｒｉｍａｄｙｌ）、アセトアミノフェン／パラセタモール（ｐａｒａｃｅｔａｍｏｌ）、ベンジジン、４−メチルウンベリフェロン（４−ＭＵ）、シリマリン（ｓｉｌｙｍａｒｉｎ）（Ｖｅｎｋｅｔａｒａｍａｎａｎｅｔａｌ．，２０００，ＤｒｕｇＭｅｔａｂＤｉｓｐｏｓ．，２８，１２７０−３；シリマリンはトキシフォリン（ｔｏｘｉｆｏｌｉｎ）、シリクリスチン（ｓｉｌｉｃｈｒｉｓｔｉｎ）、シリジアニン（ｓｉｌｉｄｉａｎｉｎ）、シリビン（ｓｉｌｙｂｉｎ）ＡおよびＢ、イソシリビン（ｉｓｏｓｉｌｙｂｉｎ）ＡおよびＢの混合物である）［図１Ａおよび１Ｂ参照］。

他の態様によれば、基質は少なくともＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ７（ＵＧＴ２Ｂ７）により変換可能な、下記よりなる群において選択される化合物である：トランスレチノイン酸、ＡＳＡ、ＡＺＴ、ベノキサプロフェン（ｂｅｎｏｘａｐｒｏｆｅｎ）、ベンジジン（ｂｅｎｚｉｄｉｎｅ）、（ベンゾ（ａ）ピレンｍｂｓ）、ブプレノルフィン（ｂｕｐｒｅｎｏｒｐｈｉｎｅ）、カルプロフェン、クロラムフェニコール、クロフィブリン酸、フラベノイド類クエルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、ケムフェノール（ｋａｅｍｐｆｅｎｏｌ）、サイクロスポリン、ＤＭＸＡＡ、ジクロフェナク、ジヒドロコデインＤＨＣ、ジヒドロモルホン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｏｒｐｈｏｎｅ）、メフェナム酸（ｍｅｆｅｎａｍｉｎａｃｉｄ）、フェネメート（ｆｅｎａｍａｔｅ）ＮＳＡＩＤ、ミコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄ）ＭＣＰＡモフェチル（ｍｏｆｅｔｉｌ）、フェノプロフェン（ｆｅｎｏｐｒｏｆｅｎ）、ヒドロモルホン（ｈｙｄｒｏｍｏｒｐｈｏｎｅ）、イブプロフェン、ケトプロフェン、リノール酸、ロラゼパム（ｌｏｒａｚｅｐａｍ）、ロサルタン、メントール、モルフィン３およびモルフィン６、ナルブフェン（ｎａｌｂｕｆｅｎｅ）、ナルメフェン（ｎａｌｍｅｆｅｎｅ）、ナルトリンドール（ｎａｌｔｒｉｎｄｏｌｅ）、ナロルフィン（ｎａｌｏｒｐｈｉｎｅ）、ナロキソン（ｎａｌｏｘｏｎｅ）、ナルトレキソン（ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）、Ｓ−ナプロキセン、ノルコデイン、ノルモルホン（ｎｏｒｍｏｒｐｈｏｎｅ）、オキシコドン（ｏｘｙｃｏｄｏｎｅ）、オキシモルホン（ｏｘｙｍｏｒｐｈｏｎｅ）、ピルプロフェン（ｐｉｒｐｒｏｆｅｎ）、プロパノロール（ｐｒｏｐａｎｏｌｏｌ）、Ｓ−オキサゼパム（Ｓ−ｏｘａｚｅｐａｍ）、タクロリムス、テマゼパム（ｔｅｍａｚｅｐａｍ）、トルカポン（ｔｏｌｃａｐｏｎｅ）、チアプロフェニク（ｔｉａｐｒｏｆｅｎａｃ）、バルプロエート（ｖａｌｐｒｏａｔｅ）、ゾメピラク（ｚｏｍｅｐｉｒａｃ）、５−ＯＨトリプタミン。

具体的態様によれば、基質はケトプロフェン、ナプロキセン、５−ＯＨトリプタミン／セロトニン、カルプロフェン／リマディル、およびベンジジンよりなる群において選択される。

特定の態様において、本発明のＵＧＴ基質は、さらに１〜４個の同一または異なるヘテロ原子および／またはヘテロ基で置換されている。それらのヘテロ原子および／またはヘテロ基の例は、Ｏ、Ｈ、アルキルもしくはアリール基Ｃ_nＨ_n+1（ｎ＝１〜５）、ＯＣＨ₃、Ｎ、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子）、Ｓ、または基質を視覚化しうるいずれかの標識元素である。これらの置換原子または基、およびその用途は当技術分野で広く知られている。

本発明の基質の付加塩には、無機または有機の酸または塩基、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、酢酸、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、エチレンジアミン；ギ酸、安息香酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、アスパラギン酸、およびアルカン−スルホン酸から形成される一般的な塩が含まれる。

本発明に従って用いられるＵＧＴ基質は、多数の商業カタログにおいて市販されている：たとえばＭｅｒｃｋ、”Ｐｒｏｄｕｉｔｓｃｈｉｍｉｑｕｅｅｔｒｅａｃｔｉｆｓ”２００２、およびＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓ”ＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ”２００２−２００３：

他の供給業者は下記のとおりである：
ナプロキセン：アプラナックス（Ａｐｒａｎａｘ）（フランス、Ｒｏｃｈｅ）またはナプロシン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ）（米国、Ｒｏｃｈｅ）；
カルプロフェン：リマディル（Ｐｆｅｉｚｅｒ）；
ケトプロフェン：トプレック（Ｔｏｐｒｅｃ）（フランス、Ａｖｅｎｔｉｓ）またはオルディス（Ｏｒｕｄｉｓ）（米国、Ｗｙｅｔｈ）。

これらのＵＧＴ基質の新たに同定された阻害特性により、それらは、放出される神経伝達物質の有害な作用に関連する疾患、状態および発作、好ましくは神経性のものを治療および／または予防するのに特に適切なものとなる。特定の１態様において、本発明のＵＧＴ基質は、放出されるグルタメートの有害な作用に関連する疾患、状態および発作、好ましくは神経性のものを治療および／または予防するのに適切である。

特定の１態様によれば、それらの疾患、状態および発作は、過剰に放出される神経伝達物質の有害な作用、より具体的には過剰に放出されるグルタメートの有害な作用に関連する。

したがって本発明はさらに、その必要がある患者において神経仲介物質により誘発される細胞毒性を治療および／または予防するための方法であって、上記のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類の基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する。特定の態様においてＵＧＴ基質は、少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）、好ましくは脳に発現する少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）により、変換可能な化合物である。

好ましくは本発明は、その必要がある患者においてグルタメートにより誘発される細胞毒性を治療および／または予防するための方法であって、上記のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類の基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する。特定の態様においてＵＧＴ基質は、少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）、好ましくは脳に発現する少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）により変換可能な化合物である。

他の態様によれば、ＵＧＴ基質は、平面状低分子フェノール類、多環式芳香族炭化水素、および構造的に関連した化合物よりなる群において選択される。より具体的には、ＵＧＴ基質は、ヒドロキシル（アルコール性、フェノール性など）、カルボキシル、スルフリル、カルボニルおよびアミノ（第一級、第二級または第三級）部分よりなる群において選択される少なくとも１つの部分を含む。

他の態様によれば、基質は、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ６（ＵＧＴ１Ａ６）により変換可能な、下記よりなる群において選択される化合物である：１−ナフトール、２−ナフトール、４−ニトロフェノール、サリチル酸メチル、ケトプロフェン、ナプロキセン、５−ＯＨトリプタミン／セロトニン、カルプロフェン／リマディル、アセトアミノフェン／パラセタモール、ベンジジン、４−メチルウンベリフェロン（４−ＭＵ）、シリマリン（Ｖｅｎｋｅｔａｒａｍａｎａｎｅｔａｌ．，２０００，ＤｒｕｇＭｅｔａｂＤｉｓｐｏｓ．，２８，１２７０−３；シリマリンはトキシフォリン、シリクリスチン、シリジアニン、シリビンＡおよびＢ、イソシリビンＡおよびＢの混合物である）［図１参照］。

他の態様によれば、基質はＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ７（ＵＧＴ２Ｂ７）により変換可能な、下記よりなる群において選択される化合物である：トランスレチノイン酸、ＡＳＡ、ＡＺＴ、ベノキサプロフェン、ベンジジン、（ベンゾ（ａ）ピレンｍｂｓ）、ブプレノルフィン、カルプロフェン、クロラムフェニコール、クロフィブリン酸、フラベノイド類クエルセチン、ケムフェノール、サイクロスポリン、ＤＭＸＡＡ、ジクロフェナク、ジヒドロコデインＤＨＣ、ジヒドロモルホン、メフェナム酸、フェネメートＮＳＡＩＤ、ミコフェノール酸ＭＣＰＡモフェチル、フェノプロフェン、ヒドロモルホン、イブプロフェン、ケトプロフェン、リノール酸、ロラゼパム、ロサルタン、メントール、モルフィン３およびモルフィン６、ナルブフェン、ナルメフェン、ナルトリンドール、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、Ｓ−ナプロキセン、ノルコデイン、ノルモルホン、オキシコドン、オキシモルホン、ピルプロフェン、プロパノロール、Ｓ−オキサゼパム、タクロリムス、テマゼパム、トルカポン、チアプロフェニク、バルプロエート、ゾメピラク、５−ＯＨトリプタミン。

特定の態様によれば、基質はケトプロフェン、ナプロキセン、５−ＯＨトリプタミン／セロトニン、カルプロフェン／リマディル、およびベンジジンよりなる群において選択される。

本発明において、用語”神経仲介物質により誘発される細胞毒性”または”神経伝達物質により誘発される細胞毒性”は、関与する神経仲介物質受容体の過剰活性化に関連する細胞毒性を表わすものとする。これらの用語は当業者に周知である。より具体的に、”グルタメートにより誘発される細胞毒性”は、グルタミン酸受容体を発現するすべての罹患細胞に関する。好ましい態様によれば、神経仲介物質により影響されやすいこれらの細胞は神経系細胞（ｎｅｒｖｏｕｓｃｅｌｌ、即ちｎｅｕｒｏ−ｃｅｌｌ）、好ましくはニューロンである。これらの罹患した神経系細胞は、たとえば脳、脊髄、網膜、神経−筋肉接合部などに存在する。”細胞毒性”とは、細胞の機能および／または特性が害されて、細胞の機能異常を生じ、最終的には細胞死に至ることを意味する。

特に好ましい態様において、本発明方法は、神経仲介物質により誘発される神経毒性の治療および／または予防、より好ましくは神経変性（すなわち神経系細胞の変性）の治療および／または予防のためのものである。

他の特に好ましい態様において、本発明方法は、グルタメートにより誘発される神経毒性の治療および／または予防、より好ましくは神経変性（すなわち神経系細胞の変性）の治療および／または予防のためのものである。

本発明はさらに、患者において少なくとも１種類の神経仲介物質の放出を調節するための方法であって、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類の基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する；その際、基質は上記に詳述したとおりである。特定の態様において、ＵＧＴ基質は、少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）、好ましくは脳に発現する少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）により変換可能な化合物である。

本発明はさらに、患者においてグルタメートの放出を調節するための方法であって、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類の基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する；その際、基質は上記に詳述したとおりである。特定の態様において、ＵＧＴ基質は、少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）、好ましくは脳に発現する少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）により変換可能な化合物である。

”神経仲介物質の放出を調節する”とは、処置していない患者における神経仲介物質の放出レベルがその患者を本発明の基質で処置した後にみられるものと異なることを意味する。１態様によれば、本発明の基質で患者を処置すると、神経仲介物質産生細胞による放出に負の調節、好ましくは阻害が生じ、したがって処置した患者における神経仲介物質濃度がその処置前にみられた同一神経仲介物質の濃度と比較して低下する。

本発明はさらに、患者において少なくとも１種類の神経仲介物質の過剰放出に関連する疾患および／または状態を治療および／または予防するための方法であって、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類の基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する；その際、基質は上記に詳述したとおりである。特定の態様において、ＵＧＴ基質は、少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）、好ましくは脳に発現する少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）により変換可能な化合物である。

本発明はさらに、患者においてグルタメートの過剰放出に関連する疾患および／または状態を治療および／または予防するための方法であって、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類の基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する；その際、基質は上記に詳述したとおりである。特定の態様において、ＵＧＴ基質は、少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）、好ましくは脳に発現する少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）により変換可能な化合物である。

本発明によれば、用語”治療および／または予防”は、哺乳動物、たとえばヒト（患者と呼ぶことがしばしばある）の状態に有益な変化を生じさせることを意図した行為を表わす。有益な変化には、たとえば下記のうち１以上を含めることができる：機能の回復、症状の軽減、疾患、障害もしくは状態の進行の制限もしくは遅滞、または患者の状態、疾患もしくは障害の悪化の予防、制限もしくは遅滞。そのような療法には、特にたとえば栄養改変、放射線の投与、薬物の投与、習性の改変、およびこれらの組合わせを含めることができる。

本発明によれば、”少なくとも１種類の神経仲介物質の過剰放出に関連する疾患および／または状態”は、多数の急性および慢性の神経仲介物質関連の疾患または状態、特に神経疾患を表わすものとする。より具体的には、それはてんかん性発作ならびに急性および慢性の神経変性性疾患、ならびに虚血または神経仲介物質関連の疾患または状態により起きる神経傷害を表わし、その際、それらの障害は少なくとも部分的には神経仲介物質受容体の過剰活性化および／または過剰の細胞外神経仲介物質濃度に関連するものである。その例には、慢性または急性の変性性疾患を伴うもの、たとえばアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、多発硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄筋萎縮症（ＳＭＡ）、網膜障害、卒中、臨床的うつ病、および外傷性脳障害が含まれ、これらは神経仲介物質受容体、特にグルタミン酸受容体の過剰刺激により起きるニューロンの細胞死を伴う。同様に、虚血または薬物誘発性神経毒性、たとえばメタンフェタミン（ＭＥＴＨ）が線条ドーパミン作動性ニューロンに及ぼす神経毒作用により起きる神経傷害も、本発明による方法の適応症である。他の適応症は、たとえば痛み、ホルモンバランス、血圧、体温調節、呼吸、学習、パターン認識もしくは記憶などの神経仲介物質関連状態、または低酸素もしくは低血糖に伴う障害、特にこれらの適応症がグルタメート関連状態の場合である。

たとえば、てんかん、臨床的うつ病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄筋萎縮症（ＳＭＡ）、ハンチントン病、外傷その他の血管原性の脳事故の結果起きるグルタメート放出過剰による有害作用の処置が挙げられる。

上記に開示した本発明の態様において、大部分の組成物および方法はアグリコン形態の前記基質に関する。あるいは本発明はさらに、その医薬組成物で処置した個体内への細胞外神経仲介物質放出に対する阻害作用をもつ医薬組成物を調製するための、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類のグルクロン酸抱合された基質およびその塩類の使用に関する。この態様によれば、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の基質は、その必要がある患者に投与する前にグルクロン酸抱合されると理解される。そのグルクロン酸抱合は、アグリコン基質を化学的方法または酵素法で修飾することにより達成できる。化学的グルクロン酸抱合は、たとえば使用する予定のアグリコン基質にグルクロニド基を付加することよりなる、当技術分野で周知の標準的化学法を用いて達成できる（ＬａｃｙａｎｄＳａｉｎｓｂｕｒｙ，１９９５，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，３６，３９４９−５０）。あるいは、グルクロン酸抱合された基質は、アグリコン基質をグルクロン酸抱合することができる少なくとも１種類のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）を用いた酵素によるグルクロン酸抱合により得ることができる。好ましい態様において、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）は脳で天然に発現するもの、たとえばＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）１Ａ６またはＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）２Ｂ７である。

１態様によれば、グルクロン酸抱合されたＵＧＴ基質は、平面状低分子のグルクロン酸抱合されたフェノール類、グルクロン酸抱合された多環式芳香族炭化水素、および構造的に関連した化合物よりなる群において選択される。より具体的には、グルクロン酸抱合されたＵＧＴ基質は、グルクロン酸部分に結合したヒドロキシル（アルコール性、フェノール性など）、カルボキシル、スルフリル、カルボニルおよびアミノ（第一級、第二級または第三級）部分よりなる群において選択される少なくとも１つの部分を含む。

具体的態様によれば、グルクロン酸抱合された基質は、１−ナフトール、２−ナフトール、４−ニトロフェノール、サリチル酸メチル、ケトプロフェン、ナプロキセン、５−ＯＨトリプタミン／セロトニン、カルプロフェン／リマディル、アセトアミノフェン／パラセタモール、ベンジジン、４−メチルウンベリフェロン（４−ＭＵ）、シリマリン（Ｖｅｎｋｅｔａｒａｍａｎａｎｅｔａｌ．，２０００，ＤｒｕｇＭｅｔａｂＤｉｓｐｏｓ．，２８，１２７０−３；シリマリンはトキシフォリン、シリクリスチン、シリジアニン、シリビンＡおよびＢ、イソシリビンＡおよびＢの混合物である）よりなる群において選択され、さらにグルクロン酸抱合されている。

他の態様によれば、グルクロン酸抱合された基質は、トランスレチノイン酸、ＡＳＡ、ＡＺＴ、ベノキサプロフェン、ベンジジン、（ベンゾ（ａ）ピレンｍｂｓ）、ブプレノルフィン、カルプロフェン、クロラムフェニコール、クロフィブリン酸、フラベノイド類クエルセチン、ケムフェノール、サイクロスポリン、ＤＭＸＡＡ、ジクロフェナク、ジヒドロコデインＤＨＣ、ジヒドロモルホン、メフェナム酸、フェネメートＮＳＡＩＤ、ミコフェノール酸ＭＣＰＡモフェチル、フェノプロフェン、ヒドロモルホン、イブプロフェン、ケトプロフェン、リノール酸、ロラゼパム、ロサルタン、メントール、モルフィン３およびモルフィン６、ナルブフェン、ナルメフェン、ナルトリンドール、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、Ｓ−ナプロキセン、ノルコデイン、ノルモルホン、オキシコドン、オキシモルホン、ピルプロフェン、プロパノロール、Ｓ−オキサゼパム、タクロリムス、テマゼパム、トルカポン、チアプロフェニク、バルプロエート、ゾメピラク、５−ＯＨトリプタミンよりなる群において選択され、さらにグルクロン酸抱合されている。

本発明のグルクロン酸抱合された基質の付加塩には、無機または有機の酸または塩基、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、酢酸、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、エチレンジアミン；ギ酸、安息香酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、アスパラギン酸、およびアルカン−スルホン酸から形成される一般的な塩が含まれる。

本発明はさらに、その必要がある患者において神経仲介物質により誘発される細胞毒性を治療および／または予防するための方法であって、上記のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類のグルクロン酸抱合された基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する。

本発明はさらに、その必要がある患者においてグルタメートにより誘発される細胞毒性を治療および／または予防するための方法であって、上記のＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類のグルクロン酸抱合された基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する。

特に好ましい態様において、”神経仲介物質により誘発される細胞毒性”は、神経仲介物質により誘発される神経毒性、より好ましくは神経変性（すなわち神経系細胞の変性）である。

他の特に好ましい態様において、”グルタメートにより誘発される細胞毒性”は、グルタメートにより誘発される神経毒性、より好ましくは神経変性（すなわち神経系細胞の変性）である。

本発明はさらに、患者において少なくとも１種類の神経仲介物質の放出を調節するための方法であって、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類のグルクロン酸抱合された基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する；その際、基質は上記に詳述したとおりである。

本発明はさらに、患者においてグルタメートの放出を調節するための方法であって、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類のグルクロン酸抱合された基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する；その際、基質は上記に詳述したとおりである。

本発明はさらに、患者において少なくとも１種類の神経仲介物質の過剰放出に関連する疾患および／または状態を治療および／または予防するための方法であって、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類のグルクロン酸抱合された基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する；その際、基質は上記に詳述したとおりである。

本発明はさらに、患者においてグルタメートの過剰放出に関連する疾患および／または状態を治療および／または予防するための方法であって、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類のグルクロン酸抱合された基質（療法有効量）および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物を患者に投与することを含む方法に関する；その際、基質は上記に詳述したとおりである。

本発明に記載するＵＧＴ基質（アグリコンまたはグルクロン酸抱合形態を含む）は、少なくとも１種類の活性化合物および医薬的に許容できるキャリヤーを含有する組成物として投与される。そのような組成物の調製には、一般的な医薬的に許容できるいかなるキャリヤーも使用できる。キャリヤー材料は、選択した投与経路に適する有機または無機の不活性キャリヤー材料であってよい。適切なキャリヤーには、水、ゼラチン、アラビアゴム、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物油、ポリアルキレングリコール、ワセリンなどが含まれる。さらに、医薬組成物は他の薬効物質を含有してもよい。追加の添加剤、たとえば着香剤、保存剤、安定剤、乳化剤、浸透圧を変更する塩類、緩衝剤などを、許容されている医薬配合法のプラクティスに従って添加してもよい。錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤など、いかなる一般的な剤形も使用できる。有利には、それらは経口投与用の錠剤、糖衣錠、硬ゼラチンカプセル剤、カプセル剤、顆粒剤、または注射用経路による投与のための液剤もしくは懸濁剤の剤形である。

本発明方法は、本発明の基質（アグリコンまたはグルクロン酸抱合形態を含む）を含有する組成物を、薬物が一般的に投与されるいずれかの経路で投与することにより実施できる。そのような経路には、全身経路および局所経路が含まれる。その例は、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内、心室内、吸入（Ｇｒａｄｉｎａｒｕｅｔａｌ．，１９９９，前掲）、腹腔内、および経口経路である。好ましくは、本発明方法は経口または静脈内投与経路により実施される。

本発明によれば、本明細書に記載する基質（アグリコンまたはグルクロン酸抱合形態を含む）は、医薬的に許容できる経口方式に有用である。好ましい経口剤形には、消化管内で容易に溶解する硬もしくは軟ゼラチン、メチルセルロースまたは他の適切な材料の錠剤、カプセル剤が含まれる。本発明に従って企図される経口剤形は個々の患者の要件に応じて異なり、処方医による判定に従う。好ましい経口剤形は、５０〜５００ｍｇの本発明基質を含有するカプセル剤または錠剤である。

静脈内投与のための代表的な製剤は、水／緩衝溶液を含有する無菌水性液剤である。静脈内ビヒクルには、補充用の液体、栄養素および電解質が含まれる。保存剤その他の添加剤は、たとえば抗生物質および酸化防止剤として存在してもよい。静脈内ボーラス投与用の組成物は、本明細書に記載する基質を１０ｍｇ／ｍｌ（１０，０００ｍｇ／リットル）まで含有することができる。静脈内投与用の組成物は、好ましくは本明細書に記載する少なくとも１種類の基質を約５０ｍｇ／リットル〜約５００ｍｇ／リットル含有する。

本発明方法を実施する際には、本発明の基質（アグリコンまたはグルクロン酸抱合形態を含む）を一般に成人に毎日、１日当たり約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの量で、１回量または分割量として、好ましくは１日当たり約１３ｍｇ／ｋｇ〜約１７ｍｇ／ｋｇの量で、好ましくは経口または静脈内投与する。ただし、厳密な用量は患者の要件に応じて異なる。用量は処置すべき患者および病理状態に従って適用され、たとえば１〜１００ｍｇ／日である。一般にこの療法は約３カ月間実施される。あるいは、急性神経毒性事象、たとえば卒中発症のリスクが高い患者においては、本発明方法を予防的に不定期間実施できる。急性神経毒性事象の治療のためには、急性神経毒性事象の診断後、可能な限り早期に、好ましくは急性神経毒性事象の発症後１２時間以内、最も好ましくは６時間以内に、本発明方法に従って患者を処置すべきである。薬物を経口投与する場合、一般に規則的な間隔で投与する。

これらの薬物は、特に経口または注射経路で投与される。
特定の１態様によれば、本発明において記載するＵＧＴ基質（アグリコンまたはグルクロン酸抱合形態を含む）を、そのＵＧＴ基質の血液脳関門（ＢＢＢ）通過を促進する特定の基で修飾する。１方式は脂質化（lipidization）であり、これは基質構造の親水性部分の修飾により脂質様の基を付加することを含む。得られた脂質可溶性基質は、脂質二重層内に一過性に形成される細孔を利用することによりＢＢＢを通過して輸送される。他の方式は、受動拡散によるＢＢＢ輸送を高めるための疎水基の付加である。たとえばメチル基の付加またはアミン基のアセチル化は、親油性および脳透過性を高める。さらに他の方法は、化合物が栄養素に似た構造をもつように基質を修飾し、アミノ酸、ヘキソース、ビタミンおよび神経ペプチドのように、ＢＢＢ内の特定のキャリヤー仲介輸送系の１つを利用させるものである。他の方法は、細胞膜を効率的に通過する低分子合成ペプチドベクター、たとえばペゲリン（Ｐｅｇｅｌｉｎ）またはペネトラチン（Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎ）に、化学的リンカーを介して基質を結合させるものである（全般的概説についてはＴｅｍｓａｍａｎｉｅｔａｌ．，２０００，Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，３，１５５−１６２参照）。

他の態様によれば、本発明の基質または製剤（アグリコンまたはグルクロン酸抱合形態を含む）を、ＢＢＢを通じた輸送の促進を目的とする第２の化合物または配合物と組み合わせて、必要のある患者に投与する。たとえば本発明の基質または製剤を、高張液、生物活性薬剤、たとえばブラジキニンおよびアンギオテンシンペプチド、ヒスタミンのような血管作用物質、ＢＢＢを一過性に分断する能力をもつロイコトリエンと組み合わせる。本発明によれば、”組合わせ”または”と組み合わせる”とは、本発明の基質または製剤と、ＢＢＢを通じた輸送の促進を目的とする第２の化合物または配合物を、同時もしくは逐次、または時間をずらして使用できることを意味する。同時とは一緒に投与することを表わす。この場合、これら２種類の必須成分を投与前に混合して組成物を調製するか、あるいはそれを必要とする患者に同時に投与することができる。それらを逐次投与すること、すなわちどちらの成分を最初に投与するかに関係なく次々に投与することもできる。さらに、時間をずらした、または間欠的な投与様式を採用することもでき、これは規則的または不規則な間隔で停止および再開始できる。２成分の投与経路および投与部位が異なってもよいことを指摘する。投与時間の間隔ならびに投与の経路および部位は、当業者が決定できる。１０分〜７２時間、有利には３０分〜４８時間、好ましくは１〜２４時間、きわめて好ましくは１〜６時間の間隔を推奨できる。

ファーマコゲノミック分析（たとえばＣｉｏｔｔｉｅｔａｌ．，１９９７，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，７，４８５−４９５参照）により、ＵＧＴ遺伝子の多型性のため酵素活性が害され、ＵＧＴ基質に対する患者の反応性が低下または増大する可能性のあることが示された。たとえば、ＵＧＴ１Ａ６活性を変異させ、したがってそれらの基質代謝速度を変異させる、ＵＧＴ１Ａ６のミスセンス変異（Ａ５４１→Ｇ５４１、およびＡ５５２→Ｃ５５２）が同定された（より詳細についてはＣｉｏｔｔｉｅｔａｌ．，１９９７，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，７，４８５−４９５参照）。したがって他の特定の態様によれば、本発明の治療および／または予防方法はさらに、処置される患者がＵＧＴ活性の低下または増強を生じる遺伝子多型性を示すかどうかを確定することよりなる予備工程を含む。より具体的には、この予備工程は、患者のゲノムＤＮＡのヌクレオチド配列分析により、処置すべき患者のＵＧＴ１Ａ６遺伝子が変異Ａ５４１→Ｇ５４１（Ｔ１８１Ａ変異）または変異Ａ５５２→Ｃ５５２（Ｒ１８４Ｓ変異）のうち少なくとも１つを含むかどうかを判定することにある。この方法の詳細は、たとえばＣｉｏｔｔｉｅｔａｌ．，１９９７，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，７，４８５−４９５に示されており、その内容全体を本明細書に援用する。

各刊行物および特許出願について具体的かつ個別に援用する旨を記載した場合と同様に、本明細書に引用した刊行物および特許出願のすべてを本明細書に援用する。以上に本発明を明確に理解するために説明および具体例によって詳細に記載したが、本発明の教示からみて、特許請求の範囲の精神および範囲から逸脱することなくそれに特定の変更および修正をなしうることは当業者に自明であろう。

本発明を具体的に記載したが、用いた用語は限定ではなく説明のためのものであると理解すべきである。上記の教示からみて、本発明の多数の修正および変更が可能なことは明らかである。したがって、特許請求の範囲内において、具体的に記載したものと異なる様式で本発明を実施できることを理解すべきである。したがって当業者は、ルーティン実験程度を用いて本明細書に具体的に記載した特定の態様に対する多数の均等物を認識または確認できるであろう。そのような均等物は特許請求の範囲に含まれるものとする。

これらおよび他の態様は、本明最初の記載および実施例に開示され、あるいはそれから明らかであり、それらに含まれる。本発明に従って用いられる方法、使用および化合物のいずれかに関する他の文献は、たとえば電子デバイスを用いて公開ライブラリーから取り出すことができる。たとえばインターネット上で http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed/medline.html のもとで利用可能な公開データベース”Ｍｅｄｌｉｎｅ”を活用できる。他のデータベースおよびアドレス、たとえばhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/、http://www.infobiogen.fr/、http://www.fmi.ch/biology/research_tools.html、http://www.tigr.org/は当業者に既知であり、たとえばhttp://www.lycos.comを利用して入手することもできる。遡及的調査および現在の認識に有用なバイオテクノロジーの特許情報の通覧および関連の特許情報源の調査がＢｅｒｋｓ，ＴＩＢＴＥＣＨ１２（１９９４），３５２−３６４に示されている。
［実施例］
皮質ニューロン初代培養物ウィスター（Ｗｉｓｔｅｒ）ラット胎仔（Ｅ１６）から皮質を剥離し、カルシウムおよびマグネシウムを含有しないＰＢＳ中に保持した。次いで、それらを０．２５％トリプシン含有ＰＢＳ中、３７℃で１５分間処理し、トリプシン活性阻害のためにウマ血清を含有する完全培地に入れた。次いで皮質を完全培地（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ、２％のウマ血清、２ｍＭのグルタミン、補充用Ｂ２７（１×）、１００μｇ／ｍｌのゲンタマイシン、１０μＭのβ−メルカプトエタノール）中で解離させた。予め９μｇ／ｍｌでポリオルニチン（Ｐｏｌｙ−Ｏｒｎｉｔｉｎｅ）をコーティングした９６ウェルプレートに、１０⁵個／ウェルで細胞を接種した。５％ＣＯ₂を有する湿インキュベーター内で、培養物を３７℃に保持した。グリア細胞の増殖を阻止するために、２日目に５μＭのシトシンアラビノフラノシドを細胞培養物に添加した。７日目に、後続実験に用いるニューロンの初代培養物が得られた。

ニューロン細胞死の評価細胞培養物の培地中への細胞質ゾル酵素、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出を測定することにより、ニューロン細胞死を推定した。ＬＤＨ放出の定量は、比色分析ＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて行われた。要約すると、１００μＬの細胞培地を取り出し、細胞屑を除去するために１５００ｒｐｍで４分間遠心した。次いで５０μＬを５０μＬのアッセイ緩衝液に添加し、室温で暗所に３０分間置いた。５０μＬの停止液で反応を停止し、４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。対照との比較により細胞死％を計算した。

グルタメート放出の評価アリコートの上清において、化学発光酵素アッセイ法により培養ニューロンによるグルタメート放出を評価した（Ｉｓｒａｅｌｅｔａｌ．，ＮｅｕｒｏｃｈｅｍＩｎｔ．１９９３年１月；２２（１）：５３−８）。

神経保護アッセイ
ジアゼパム（Ｓｉｇｍａ）、および、ジアゼパムのグルクロニド誘導体であって、テマゼパム（Ａｌｌｔｅｃｈ）と呼ばれ、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ７（ＵＧＴ２Ｂ７）基質である誘導体を用いて、ＵＧＴ２Ｂ７基質がグルタメートにより誘発される神経障害に及ぼす予防および／または治療効果を立証した。

ジアゼパムおよびテマゼパムを用いて、ラット大脳皮質から単離したニューロンの初代培養物を神経毒により誘発される細胞死から保護した。
４００μＭの３−ニトロプロピオン酸（３−ＮＰ、Ｓｉｇｍａ）、すなわち動物モデルにおいててんかん性発作を誘発する毒素で、０．１、１および５μＭのジアゼパムおよびテマゼパムの不存在下または存在下にニューロンをインビトロで処理した。２４時間後、毒素により誘発される細胞培養物の細胞死のレベルを、乳酸デヒドロゲナーゼ放出定量により分析した。

結果（図２）は、ジアゼパムがすべての試験濃度で３−ＮＰからニューロンを保護するが、テマゼパムは１および５μＭでこの細胞保護を著しく約５０％強めることを示す。これらのデータは、ジアゼパムのグルクロニド修飾が、毒性化合物に暴露された場合の細胞生存率に影響を及ぼすことを示す。

他の神経毒、すなわち動物モデルにおいてグルタメート誘発性てんかん発作を模倣するカイニン酸１００μＭ（ＦｉｓｈｅｒＢｉｏｂｌｏｃｋ）についても、同様な結果が得られた。１および５μＭのテマゼパムについて、同一濃度のジアゼパムより良好な神経保護がみられた（図３）。

神経保護アッセイ
１−ナフトール（Ｍｅｒｃｋ）、すなわちＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ６（ＵＧＴ１Ａ６）の基質を用いて、ＵＧＴ１Ａ６基質がグルタメートにより誘発される神経障害に与える効果を立証した。

１−ナフトールを用いて、ラット大脳皮質から単離したニューロンの初代培養物を神経毒により誘発される細胞死から保護した。
５μＭのイオノマイシン（Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、Ｓｉｇｍａ）、すなわちカルシウムイオノフォアにより、１０μＭの１−ナフトールの存在下で、５または１０μＭの３−メチルコラントレン（３−ｍｅｔｈｙｌｃｈｏｌａｎｔｈｒｅｎｅ、３−ＭＣ、Ａｉｄｒｉｃｈ）、すなわち１−ナフトールのｉｎｓｉｔｕグルクロン酸抱合を可能とするＵＧＴ誘発物質の不存在下または存在下に、ニューロンをインビトロで処理した。

結果（図４）は、ナフトールがイオノマイシンにより誘発される細胞死からニューロンを保護すること、および３−ＭＣによる１−ナフトールのグルクロン酸抱合が、用量依存的に１−ナフトールがもつ保護作用を強化することを示す。

これらのデータは、ＵＧＴ１Ａ６基質のグルクロニド誘導体が親分子より良好な神経保護効果を与えることを示す。
グルタメート濃度の測定
ニューロンが放出するグルタメートを、化学発光反応と共役させた酵素アッセイにより追跡した。この実験では、ラット大脳皮質から単離したニューロンの初代培養物を１０μＭの１−ナフトールで、１または５μＭの３−ＭＣの存在下または不存在下に処理した。結果（図５）は、１−ナフトールがグルタメート放出を低下させること、および３−ＭＣによる１−ナフトールのグルクロン酸抱合は、用量依存的にグルタメートの減少を強化することを示す。

この実験は、ＵＧＴ１Ａ６基質に対するグルクロン酸抱合による保護効果に伴ってグルタメート放出の減少が改善されることを示す。

本明細書を通じて引用され、示された化合物の化学構造を示す。本明細書を通じて引用され、示された化合物の化学構造を示す。ジアゼパムおよびテマゼパムがニューロンの細胞死に与える効果を示す。培養物におけるニューロンの細胞死を任意にゼロに設定した。細胞をビヒクル（列１）、および４００μＭの３−ＮＰ単独（列２）、または同時に、３種類のうちいずれか１つの試験濃度のジアゼパム（列３〜５）およびテマゼパム（列６〜８）で処理した。結果は、０．１μＭ（列６）を除いて１μＭ（列７）および５μＭ（列８）のテマゼパムが、ジアゼパムのすべての濃度（列３〜５）でみられた神経保護効果を改善することを示す。ジアゼパムおよびテマゼパムがニューロンの細胞死に与える効果を示す。培養物におけるニューロンの細胞死を任意にゼロに設定した。細胞をビヒクル（列１）、および１００μＭのカイニン酸単独（列２）、または同時に、３種類のうちいずれか１つの試験濃度のジアゼパム（列３〜５）およびテマゼパム（列６〜８）で処理した。結果は、０．１μＭ（列６）を除いて１μＭ（列７）および５μＭ（列８）のテマゼパムが、ジアゼパムのすべての濃度（列３〜５）でみられた神経保護効果を改善することを示す。１−ナフトールおよび１−ナフトールグルクロニドがニューロンの細胞死に与える効果を示す。培養物におけるニューロンの細胞死を任意にゼロに設定した。細胞をビヒクル（列１）、および５μＭのイオノマイシン単独（列４）、または同時に、１０μＭの１−ナフトール（列７）、および３−メチルコラントレン５μＭ（列８）または１０μＭ（列９）で処理した。これら２種類の試験用量の３−メチルコラントレンを、イオノマイシンの不存在下（列２、３）または存在下（列５、６）で評価し、対照とみなした。結果は、３−メチルコラントレン単独では、ニューロンの自然死に影響を与えないこと（列２、３）、およびイオノマイシンにより誘発される毒性に対する保護効果をもたないこと（列５、６）を示す。結果は、１０μＭの１−ナフトールにより得られる保護（列７）が、３−メチルコラントレン５μＭ（列８）および１０μＭ（列９）により誘発されるグルクロン酸抱合によって改善されることも示す。１−ナフトールおよび１−ナフトールグルクロニドが培養物におけるニューロンにより放出されるグルタメートに及ぼす効果を示す。グルタメート放出を化学発光酵素アッセイにより評価した。グルタメート放出の基礎レベルを、非処理細胞（列１）、ビヒクルで処理した細胞（列２）、およびこの実験で試験した最高濃度５μＭの３−メチルコラントレンで処理した細胞（列３）において定量した。１−ナフトール１μＭ（列４）および１０μＭの効果（列７）を、３−メチルコラントレン１μＭ（列５、８）および５μＭ（列６、９）の存在下で評価した。結果は、ビヒクルおよびグルクロン酸抱合誘発物質３−メチルコラントレンがグルタメート放出に影響を及ぼさない（列２、３）のに対し、１−ナフトールは両濃度ともグルタメート放出を減少させる（列４、７）ことを示す。さらに、２種類の試験用量の３−メチルコラントレンについて、両用量の１−ナフトールのグルクロン酸抱合によりグルタメート減少が改善される（列５、６、８、９）。この改善は、いずれの１−ナフトール用量でも、最高濃度の３−メチルコラントレン（列６、９）において統計的に有意になる。

【配列表】

Claims

その医薬組成物で処置した個体内への細胞外グルタメート放出に対する阻害作用を有する医薬組成物の調製のための、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類の基質およびその塩類の使用。
ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）が脳に発現し、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ６（ＵＧＴ１Ａ６）およびＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ７（ＵＧＴ２Ｂ７）よりなる群において選択される、請求項１に記載の使用。
ＵＧＴ基質が、平面状低分子のフェノール類、多環式芳香族炭化水素、および構造的に関連した化合物よりなる群において選択される、請求項１または２に記載の使用。
基質がＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ６（ＵＧＴ１Ａ６）の基質であり、１−ナフトール、２−ナフトール、４−ニトロフェノール、サリチル酸メチル、ケトプロフェン、ナプロキセン、５−ＯＨトリプタミン／セロトニン、カルプロフェン／リマディル、アセトアミノフェン／パラセタモール、ベンジジン、４−メチルウンベリフェロン（４−ＭＵ）、シリマリンよりなる群において選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
基質がＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ２Ｂ７（ＵＧＴ２Ｂ７）の基質であり、トランスレチノイン酸、ＡＳＡ、ＡＺＴ、ベノキサプロフェン、ベンジジン、（ベンゾ（ａ）ピレンｍｂｓ）、ブプレノルフィン、カルプロフェン、クロラムフェニコール、クロフィブリン酸、フラベノイド類クエルセチン、ケムフェノール、サイクロスポリン、ＤＭＸＡＡ、ジクロフェナク、ジヒドロコデインＤＨＣ、ジヒドロモルホン、メフェナム酸、フェネメートＮＳＡＩＤ、ミコフェノール酸ＭＣＰＡモフェチル、フェノプロフェン、ヒドロモルホン、イブプロフェン、ケトプロフェン、リノール酸、ロラゼパム、ロサルタン、メントール、モルフィン３およびモルフィン６、ナルブフェン、ナルメフェン、ナルトリンドール、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、Ｓ−ナプロキセン、ノルコデイン、ノルモルホン、オキシコドン、オキシモルホン、ピルプロフェン、プロパノロール、Ｓ−オキサゼパム、タクロリムス、テマゼパム、トルカポン、チアプロフェニク、バルプロエート、ゾメピラク、５−ＯＨトリプタミンよりなる群において選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
医薬組成物が、必要のある患者においてグルタメートにより誘発される細胞毒性を治療および／または予防するためのものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
医薬組成物が、グルタメートにより誘発される神経毒性を治療および／または予防するためのものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
医薬組成物が、神経変性を治療および／または予防するためのものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
医薬組成物が、患者においてグルタメートの放出を調節するためのものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
医薬組成物が、患者においてグルタメートの過剰放出に関連する疾患および／または状態を治療および／または予防するためのものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
グルタメートの過剰放出に関連する疾患および／または状態が、てんかん性発作、急性および慢性の神経変性性疾患、虚血、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、多発硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄筋萎縮症（ＳＭＡ）、網膜障害、卒中および外傷性脳障害、薬物誘発性神経毒性、痛み、ホルモンバランス、血圧、体温調節、呼吸、学習、パターン認識、記憶、ならびに低酸素または低血糖に伴う障害よりなる群において選択される、請求項１０に記載の使用。
その医薬組成物で処置した個体内への細胞外グルタメート放出に対する阻害作用を有する医薬組成物の調製のための、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）の少なくとも１種類のグルクロン酸抱合された基質およびその塩類の使用。
グルクロン酸抱合されたＵＧＴ基質が、平面状低分子のグルクロン酸抱合されたフェノール類、グルクロン酸抱合された多環式芳香族炭化水素、および構造的に関連した化合物よりなる群において選択される、請求項１２に記載の使用。
グルクロン酸抱合された基質が、１−ナフトール、２−ナフトール、４−ニトロフェノール、サリチル酸メチル、ケトプロフェン、ナプロキセン、５−ＯＨトリプタミン／セロトニン、カルプロフェン／リマディル、アセトアミノフェン／パラセタモール、ベンジジン、４−メチルウンベリフェロン（４−ＭＵ）、シリマリンよりなる群において選択され、さらにグルクロン酸抱合されている、請求項１２〜１３のいずれか１項に記載の使用。
グルクロン酸抱合された基質が、トランスレチノイン酸、ＡＳＡ、ＡＺＴ、ベノキサプロフェン、ベンジジン、（ベンゾ（ａ）ピレンｍｂｓ）、ブプレノルフィン、カルプロフェン、クロラムフェニコール、クロフィブリン酸、フラベノイド類クエルセチン、ケムフェノール、サイクロスポリン、ＤＭＸＡＡ、ジクロフェナク、ジヒドロコデインＤＨＣ、ジヒドロモルホン、メフェナム酸、フェネメートＮＳＡＩＤ、ミコフェノール酸ＭＣＰＡモフェチル、フェノプロフェン、ヒドロモルホン、イブプロフェン、ケトプロフェン、リノール酸、ロラゼパム、ロサルタン、メントール、モルフィン３およびモルフィン６、ナルブフェン、ナルメフェン、ナルトリンドール、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、Ｓ−ナプロキセン、ノルコデイン、ノルモルホン、オキシコドン、オキシモルホン、ピルプロフェン、プロパノロール、Ｓ−オキサゼパム、タクロリムス、テマゼパム、トルカポン、チアプロフェニク、バルプロエート、ゾメピラク、５−ＯＨトリプタミンよりなる群において選択され、さらにグルクロン酸抱合されている、請求項１２〜１３のいずれか１項に記載の使用。