【０００１】
【技術分野】
本発明は、アレルゲン中和用組成物に係り、特に、居住空間内に、例えば噴霧器を用いて、噴霧することにより、空気中に浮遊或いは各種日常生活品に付着しているアレルゲンを効果的に中和し得る、アレルゲン中和用組成物に関するものである。
【０００２】
【背景技術】
喘息やアトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患は、人体内における、アレルゲンと抗体との間のアレルギー反応に起因するものであることは、広く知られているところである。即ち、アレルゲンに対する抗体を有する人間が、アレルゲンを含む空気を吸入したり、或いは、その人体表面の湿った部位において、アレルゲンと直接接触すると、かかるアレルゲンは、人体内に吸収され、そして、そのような人体内に吸収されたアレルゲンと、抗体との間におけるアレルギー反応により、様々なアレルギー性疾患の症状が引き起こされることとなるのである。
【０００３】
ここにおいて、そのようなアレルギー性疾患を引き起こす原因物質たるアレルゲンとしては、従来より、屋内のハウスダスト中のダニや、犬、猫等の鱗屑、花粉等が広く知られているところ、アレルギー性疾患の患者が、それらアレルゲンとの接触を継続的に回避することにより、様々なアレルギー性疾患の症状が改善することも、認められているところである。
【０００４】
このような状況の下、従来より、特にアレルゲンが多数存在する屋内において、アレルギー性疾患の患者が、アレルゲンとの接触を継続的に回避せしめられ得る手法等が、各種提案されている。
【０００５】
そのような手法としては、例えば、屋内の空気中に浮遊するアレルゲンを、電気掃除機により吸引したり、空気清浄機のフィルターにて除去すること等により、人体とアレルゲンとの接触を回避せしめる手法が、提案されている。しかしながら、これらの手法にあっては、ある程度のアレルゲンが除去されることは認められるものの、アレルギー性疾患の症状の改善という観点からは未だ満足できるものではなかった。
【０００６】
また、屋内におけるアレルゲンの発生源としては、ハウスダスト中のダニが最も一般的なものであるところから、ダニに起因するアレルゲンを除去するために、各種殺ダニ剤を用いることも提案されているが、かかるダニに起因するアレルゲンは、ダニの死骸や残留した糞の中にも含まれているところから、殺ダニ剤を用いてダニを殺した場合にあっても、直ちに、人体とアレルゲンとの接触が有効に回避されることにはならないのである。加えて、殺ダニ剤の中には、人体に悪影響を及ぼすような薬品も存在するため、このような薬品を定期的に屋内、特に一般家庭において使用することは、余り好ましいものではない。
【０００７】
さらに、所定の物質を含む溶液を空気中に噴霧して、そこに浮遊するアレルゲンを含む粒子全体をかかる物質にて包み込み、その重量を増加せしめて、空気中に浮遊し得ない状態とすることにより、呼吸によるアレルゲンの吸入を防止する手法も、提案されている。しかしながら、そのようなアレルゲンを包み込むような物質は、通常、粘着性を有するものであるため、例えば、本手法を屋内にて実施すると、粘着性を有する物質に覆われたアレルゲンがベッドカバーや枕等の織物製品上に付着し、結果的に、それら織物製品等への汚れの付着を促進するという問題を、内在するものであった。
【０００８】
一方、アレルゲン中のアレルゲンタンパク質を、化学的に変性せしめたり、或いは、物理的に覆い包む成分を含む組成物を用いることにより、アレルゲンタンパク質を不活化（中和）し、以て、人体とアレルゲンとの接触を回避する手法等についても、種々提案されている。
【０００９】
例えば、特許文献１（特公平２−１６７３１号公報）においては、タンニン酸およびキャリヤーを含有することを特徴とするアレルゲンを除去するのに使用する組成物、及びかかる組成物を用いてアレルゲンを除去する方法が、提案されているのであり、また、特許文献２（特開平６−２７９２７３号公報）においては、茶抽出物等と炭素数１〜４までのアルコールとのエステル化合物から選ばれる１種以上の化合物を含有する抗アレルゲン組成物、及びかかる組成物を用いてアレルゲンを除去する方法が、提案されている。
【００１０】
しかしながら、そのような組成物に含まれるタンニン酸等は、何れも色を有しているため、例えば、それら組成物を家庭内にて用いた場合、特にベッドカバー、家具カバー、カーテン類等の家庭用織物製品に染みを付ける恐れがあるという問題を内在するものであった。
【００１１】
さらに、本願発明者は、特許文献３（国際公開第０２／２８１８７号パンフレット）において、非生物の物体に用いる、噴霧することが可能なアレルゲン中和用組成物であって、アレルゲンを中和する金属イオンの有効量と、溶媒とから構成されるものを提案しているが、かかるアレルゲン中和用組成物と同程度、或いはそれ以上のアレルゲン中和効果を発揮し得る組成物の開発が、望まれているのである。
【００１２】
【特許文献１】
特公平２−１６７３１号公報
【特許文献２】
特開平６−２７９２７３号公報
【特許文献３】
国際公開第０２／２８１８７号パンフレット
【００１３】
【解決課題】
ここにおいて、本発明は、かかる事情を背景にして為されたものであって、その解決課題とするところは、空気中に浮遊或いは各種日常生活品に付着しているアレルゲンを効果的に中和し得る、アレルゲン中和用組成物を提供することにある。
【００１４】
【解決手段】
そして、本発明は、かかる課題の解決のために、アレルゲンを中和するための組成物にして、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質の有効量と、溶媒とを含んで、構成されていることを特徴とするアレルゲン中和用組成物を、その要旨とするものである。
【００１５】
このように、本発明に従うアレルゲン中和用組成物にあっては、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質が含有せしめられているところから、かかる物質により、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合が還元乃至は開裂せしめられることとなり、以て、アレルゲンタンパク質が、効果的に中和（不活化）せしめられることとなるのである。
【００１６】
また、本発明のアレルゲン中和用組成物は、上述した物質と、溶媒とから構成されているところから、例えば、かかるアレルゲン中和用組成物を、噴霧器等を用いて噴霧することも可能であり、このように噴霧することにより、空気中に浮遊しているアレルゲンや、家具等に付着しているアレルゲン等を、効果的に中和することが出来るのである。
【００１７】
なお、本発明に従うアレルゲン中和用組成物における好ましい態様の一つによれば、そのようなアレルゲン中和用組成物は、酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ法）による測定において、少なくとも６０％以上のアレルゲンタンパク質を中和し得るものであり、また、本発明において、好ましくは、前記アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質は、０．００５〜２５重量％の濃度において、含有せしめられることとなる。
【００１８】
また、本発明における好ましい態様の他の一つによれば、前記アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質としては、チオグリコール酸又はその塩若しくはエステル、亜硫酸塩、２−メルカプトエタノール、１，４−ジチオエリスリトール、１，４−ジチオスレイトール、水素化硼素と金属の付加化合物、トリ−ｎ−ブチルホスフィン、トリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン及びその他の第３級ホスフィン、システィン、メチオニン、グルタチオン、チオレドキシン及びチオレドキシン様タンパク、ジスルフィドレダクターゼ及びジスルフィドレダクターゼ様タンパクからなる群より、少なくとも１種以上の物質が選ばれることとなる。これらの物質の中から１種以上の物質が選択されることにより、より効果的にアレルゲンを中和し得ることとなるのである。
【００１９】
さらに、本発明における望ましい態様の一つによれば、前記溶媒として、水を主成分とするものが用いられるのであり、更に望ましくは、アルコール水溶液が用いられることとなる。
【００２０】
更にまた、本発明に従うアレルゲン中和用組成物における別の望ましい態様の一つにおいては、前記した、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質以外にも、更に、ポリフェノール化合物、過酸化水素、サリチル酸、クエン酸、乳酸、グリコール酸、アスコルビン酸、没食子酸及びグルコン酸から成る群より選ばれた少なくとも１種以上のアレルゲンタンパク質を変性せしめる物質が、含有せしめられることとなる。このような物質を併用することにより、より効果的にアレルゲンを中和せしめ得ることとなるのである。
【００２１】
加えて、上述の如き本発明に従うアレルゲン中和用組成物にあっては、必要に応じて、前記したアレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質に加えて、更に、湿潤剤、殺ダニ剤及び／又はダニ忌避剤が含有せしめられて、使用され、これにより、それらの成分に応じた更なる機能が有利に付加されることとなる。
【００２２】
そして、本発明に従うアレルゲン中和用組成物は、好ましくは、居住空間内における噴霧により、アレルゲンの中和が行なわれるのである。
【００２３】
【発明の実施の形態】
ここにおいて、かかる本発明に従うアレルゲン中和用組成物にあっては、アレルゲンタンパク質を変性せしめる物質として、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質が含有せしめられているところに、大きな特徴を有している。
【００２４】
すなわち、本発明に係るアレルゲン中和用組成物が、ハウスダスト中のダニや、犬、猫等の鱗屑、花粉等のアレルゲンに接触すると、それらアレルゲン中のアレルゲンタンパク質のジスルフィド結合が、かかる中和用組成物中に含有せしめた特定の物質によって還元乃至は開裂せしめられることとなるのであり、以て、アレルゲンタンパク質の立体構造が変化させられるところから、かかるアレルゲンタンパク質は、人体内の抗体との間にアレルギー反応を何等引き起こすことのないような物質に変性せしめられて、様々なアレルギー性疾患の症状が有利に改善されることとなるのである。
【００２５】
従って、本発明にあっては、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質としては、そのような作用を有する物質であれば、何れも使用することが出来るが、それらの中でも、特に、チオグリコール酸又はその塩若しくはエステル、亜硫酸塩、２−メルカプトエタノール、１，４−ジチオエリスリトール、１，４−ジチオスレイトール、水素化硼素と金属の付加化合物、トリ−ｎ−ブチルホスフィン、トリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン及びその他の第３級ホスフィン、システイン、メチオニン、グルタチオン、チオレドキシン及びチオレドキシン様タンパク、ジスルフィドレダクターゼ及びジスルフィドレダクターゼ様タンパクからなる群より選ばれた少なくとも１種以上の物質が、好適に用いられ、更に好ましくは、亜硫酸ナトリウム、ホウ化水素ナトリウム、システイン、グルタチオン等の強い臭気を伴わない物質が、用いられることとなる。
【００２６】
なお、ここで、上記に例示の化合物の塩としては、アルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩等の公知の各種の金属塩を含むものであり、また、水素化硼素に付加される金属としても、ナトリウムの他、カリウム、リチウム、アルミニウム等の公知のものを例示することが出来る。そして、「チオレドキシン様タンパク」とは、チオレドキシンとは構造が異なるが、同様の作用を示すタンパクを意味し、更に、「ジスルフィドレダクターゼ及びジスルフィドレダクターゼ様タンパク」とは、本願出願人が共同出願人の一人となっている先の出願（特願２００２−２１５１８９）に開示されている如きジスルフィド還元酵素、及びそれと同様の作用を示すタンパクを、それぞれ、意味するものである。
【００２７】
また、本発明に従うアレルゲン中和用組成物は、アレルゲン中和効果が有効に発揮されるように、酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ法）による測定において、少なくとも６０％以上、好ましくは７０％以上、更に好ましくは８０％以上、特に９０％以上のアレルゲンタンパク質を中和するものであることが望ましく、そのために上記した物質が適宜に選択され、そしてその使用量が決定されることとなる。一般には、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質は、本発明に従う組成物において、重量割合にて、０．００５〜２５重量％、好ましくは０．０１〜１０重量％、更に好ましくは０．１〜７重量％の割合において含有せしめられることが、望ましい。
【００２８】
ところで、本発明に従うアレルゲン中和用組成物においては、上述せる如き本発明では必須の成分である、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質と共に、所定の溶媒が用いられることとなる。かかる溶媒は、そのような本発明の必須成分を溶解して、少ない使用量において、その適用分野を有利に拡大するものであって、特に本発明組成物を噴霧する場合において有効となる。ここで、そのような溶媒としては、従来より公知の各種溶媒であれば、如何なるものであっても、使用可能であるが、それらの中でも、特に、水を主成分とするものが好適に用いられるのであり、更に好ましくは、アルコール水溶液が採用されることとなる。
【００２９】
ここにおいて、上述の如き水を主成分とする溶媒、及びアルコール水溶液における水は、アレルゲンタンパク質を溶解せしめ、そして、そのように水に溶解したアレルゲンタンパク質と、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質、又は、そのような物質と共に必要に応じて含有せしめられることとなる、他のアレルゲンタンパク質を変性せしめる物質との間において、アレルゲンタンパク質を変性せしめる反応を起こすものであると、考えられている。即ち、そのような溶媒に含まれる水は、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質や、必要に応じて含有せしめられるその他の物質の媒体として機能するだけではなく、かかるアレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質、必要に応じて含有せしめられるその他の物質、及びアレルゲンタンパク質との間における複雑な反応を促す機能をも、有しているのである。なお、本発明において用いられ得る水としては、例えば、蒸留水、イオン交換水（イオン交換樹脂等により、イオンとして溶解している物質を除去した水）、水道水等を、挙げることが出来る。
【００３０】
また、アルコール水溶液、特に、メタノール、エタノール、プロパノール及びブタノール等の低分子量アルコールの水溶液は、揮発性が高いものである。従って、このようなアルコール水溶液を溶媒とする本発明のアレルゲン中和用組成物を、例えば、室内の家具等の表面に対して噴霧することにより使用すると、かかるアレルゲン中和用組成物は、直ちに乾燥することとなり、必要以上に家具等の表面を濡らすことがないところから、本発明品を使用する消費者にとって、大変好都合である。なお、本発明において、溶媒としてアルコール水溶液を用いる場合にあっては、アルコール成分が、本発明の組成物に対して、重量割合にて、０．０１〜２０重量％となるように、好ましくは０．０５〜１０重量％となるように、更に好ましくは０．１〜５重量％となるように、調製されることとなる。尤も、本発明の濃縮品として、或いは工業用液剤等として製造するに際しては、アルコール成分を、上記した含有割合を超えて、具体的には、組成物に対して２０〜７０重量％程度の含有割合とすることも、可能である。
【００３１】
そして、本発明のアレルゲン中和用組成物は、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質を、選択された溶媒中に適量を添加、含有せしめることにより、調製されるものであるが、本発明では、かかる物質以外にも、更に必要に応じて、一般的なアレルゲン中和用組成物において用いられている各種の添加成分のうちの１種乃至は２種以上が、通常の範囲内において添加せしめられていても、何等差し支えないのである。このように、更なる成分を添加せしめることにより、その添加成分に応じた各種の機能を、本発明に係るアレルゲン中和用組成物に対して有利に付与することが出来るのである。
【００３２】
例えば、上述の如きアレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質に加えて、更に、アレルゲンタンパク質を変性せしめる物質を添加することも、有効である。このように、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質と共に、他のアレルゲンタンパク質を変性せしめる物質をも添加することにより、それらの物質を単独で用いた場合と比較して、より有効なアレルゲン中和効果が発揮されることとなる。
【００３３】
ここにおいて、そのようなアレルゲンタンパク質を変性せしめる物質であって、本発明において好適に用いられ得るものとしては、例えば、タンニン、タンニン酸、カテキン等を含むポリフェノール化合物、過酸化水素、サリチル酸、クエン酸、乳酸、グリコール酸、アスコルビン酸、没食子酸及びグルコン酸等を例示することが出来、それらから成る群より選ばれた少なくとも１種以上のものが、適宜選択され、添加せしめられることとなる。
【００３４】
なお、かかるアレルゲンタンパク質を変性せしめる物質の添加量は、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質の添加量に応じて、適宜決定されることとなるが、一般的には、本発明の組成物に対して、重量割合にて、０．０１〜２０重量％となるように、好ましくは０．１〜１０重量％となるように、更に好ましくは０．２〜８重量％となるように、添加されることとなる。また、このようなアレルゲンタンパク質を変性せしめる物質を用いる場合にあっては、組成物中における溶解性及び安定性を確保するために、溶媒として、アルコール水溶液、特に、低分子量アルコールの水溶液を用いることが、好ましい。更に、特にタンニン等の、織物製品に付着すると変色せしめる物質を用いた場合にあっては、そのような物質と共に、色彩安定化剤が用いられることが、望ましいのである。
【００３５】
また、本発明に係るアレルゲン中和用組成物の表面張力を減少させ、本発明の組成物を物体の表面上に噴霧して用いた場合に、その表面において、かかる組成物が均一に拡散せしめられ得ることを目的として、本発明において、界面活性剤等の湿潤剤を添加せしめることも、有効である。
【００３６】
そのような湿潤剤としては、上述のアレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質や、その他の添加成分の効果を阻害しないものであれば、如何なるものであっても使用することが出来、例えば、エトキシ高級アルコール、高級アルコールのエトキシ化−プロポキシ化体、アルコール硫酸塩、エトキシ高級アルコールの硫酸塩、ソルビタンモノエステル類、アミンオキシド類、エトキシ脂肪酸エステル類、アルキルエーテルリン酸塩、アルキルポリグリコサイド類、脂肪酸グルコスアミド類、エトキシアルキルフェノール類、エトキシアルキルフェノール硫酸塩、パラフィンスルホン酸塩、高級アルコールの硫酸塩、アルキルフェニルスルフォン酸塩、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルジメチルベタイン類、アルキルジメチルヒドロキシプロピルスルタイン類、アルキオキシレーテドポリジメチルシロキサン類、炭素数が６〜１８のアルキル鎖を有するアルキルジメチルアミンオキシド等を挙げることが出来る。また、その他のアニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、又は非イオン性界面活性剤であっても、好適に用いられ得るのであり、これらの中から、１種又は２種以上のものが適宜選択されて、用いられることとなる。なお、かかる湿潤剤にあっては、本発明の組成物に対して、重量割合にて、０．０１〜３重量％となるように、好ましくは０．０３〜２重量％となるように、更に好ましくは０．０５〜１重量％となるように、添加せしめられることとなる。
【００３７】
さらに、本発明においては、ダニを殺す殺ダニ剤や、ダニを近づけないようにするためのダニ忌避剤を添加することも、可能である。なお、前述したように、ダニの死骸にもアレルゲンは存在することから、このような薬剤を添加することは、直接的にアレルゲンを除去せしめることとはならないが、ダニを殺したり、ダニを近づけないようにすることで、間接的にアレルゲンを除去し得る点において、これらの薬剤を添加することは効果的である。
【００３８】
ここで、本発明において用いられ得る殺ダニ剤又はダニ忌避剤としては、例えば、レスエトリン、フェノトリン、ペルメトリン、アレスリン、テトラメトリン、フラメトリン、シペルメトリン、デカメトリン、フェンバルレート、フェンプロパトリン、テラレトリン、エンペトリン、ピレトリンといった一般的名称で知られる化合物を含有するものを、挙げることが出来る。それら以外にも、１−エチニル−２−メチル−２−ペンテニル−２，２−ジメチル−３−３−（２，２−ジクロロビニル）−シクロプロパン−１−カルボキシレート、１−エチニル−２−メチニル−２−ペンテニル−２，２，３，３−テトラメチルシクロプロパン−１−カルボキシレート、α−シアノ−３−フェノキシベンジル−２，２−ジメチル−３−（２，２，３−トリブロメチル）−シクロプロパン−１−カルボキシレート等のピレトロイド化合物や、スミチオン、フェンチオン、テトラクロルビンフォス、ダイアジノン及びＤＤＶＰといった有機リン化合物、更には、カルバミン酸塩等の化合物を含むものも、好適に用いられ得る。なお、このような殺ダニ剤及び／又はダニ忌避剤は、本発明の組成物に対して、重量割合にて０．０１〜２０重量％、好ましくは０．１〜１０重量％、更に好ましくは０．２〜８重量％の割合となるように添加されることが、望ましいのである。
【００３９】
さらにまた、本発明のアレルゲン中和用組成物においては、上記した成分以外にも、溶液の位相安定化剤、キレート化剤、帯電防止剤、着色料、酸化防止剤、保存剤等が、必要に応じて、適宜添加されることとなる。
【００４０】
そして、以上のようにして得られた本発明に従うアレルゲン中和用組成物は、例えば、屋内のハウスダスト中に多数生息するダニや、犬、猫等の鱗屑、花粉等のアレルゲンを効果的に中和せしめるために、好適に用いられることとなる。
【００４１】
例えば、本発明に従うアレルゲン中和用組成物を、噴霧器を用いて、居住空間や、屋内に設置された各種家具、特に、ダニが多く生息している織物製品に対して噴霧することにより、そこに存在するアレルゲンを中和せしめるのである。また、かかる手法以外にも、本発明の組成物が含浸せしめられたフィルターを、空気清浄機やエアーコンディショナー等に用いることによっても、屋内空気中に浮遊するアレルゲンを、効果的に中和せしめることが可能である。
【００４２】
【実施例】
以下に、本発明の代表的な実施例を含む幾つかの実験例を示し、本発明を更に具体的に明らかにすることとするが、本発明が、そのような実験例の記載によって、何等の制約をも受けるものでないことは、言うまでもないところである。また、本発明には、以下の実験例に含まれる実施例の他にも、更には上記の具体的記述以外にも、本発明の趣旨を逸脱しない限りにおいて、当業者の知識に基づいて種々なる変更、修正、改良等を加え得るものであることが、理解されるべきである。
【００４３】
先ず、溶媒としての蒸留水と共に、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質（活性物質）として、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン−塩酸、チオグリコール酸ナトリウム、１，４−ジチオスレイトール、又は２−メルカプトエタノールを用いて、これらを、下記表１に掲げる濃度にて含有せしめてなる４種類の試料（試料１〜４）を用意する一方、対照標準として、蒸留水のみよりなる試料（試料５）を、併せて用意した。次いで、得られた試料１〜５の各々０．８ｍｌに対して、コナヒョウヒダニ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ ｆａｒｉｎａｅ）の主要アレルゲンであるＤｅｒ ｆ ２ の抽出物（濃度：２０μｇ／ｍｌ（２０×１０−３ｇ／ｌ））を１．０ｍｌ添加し、撹拌した後、室温にて１時間放置した。かかる放置後、２０％のスキムミルクを加えたリン酸緩衝生理食塩水：２．２ｍｌを、各試料に対してさらに加え、各試料を充分撹拌した後、回転数：１２０００ｒｐｍにて、１時間、遠心処理を施した。そして、各試料において得られた上澄み液について、以下に示す酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ法）により、評価した。
【００４４】
酵素免疫抗体法（ＥＬＩＳＡ法）
その表面に複数のくぼみを有するマイクロプレートに対して、以下の処理を施した。先ず、Ｄｅｒ ｆ ２ のモノクローナル抗体（ｃｌｏｎｅ １５Ｅ １１，アサヒビール株式会社製，ＡＢ−Ａ−４）を、タンパク質濃度において２μｇ／ｍｌ含有するリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ：７．４，０．１％のアジ化ナトリウムを含有）を準備し、かかるリン酸緩衝生理食塩水：１００μｌを用いて、マイクロプレートの各くぼみを、４℃の温度の下、一晩かけて被覆した。次いで、モノクローナル抗体を含有するリン酸緩衝生理食塩水を除去し、マイクロプレートの各くぼみに、ＢＳＡ（ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ；ウシ血清アルブミン）濃度が１％のリン酸緩衝生理食塩水（０．１％のアジ化ナトリウムを含有）：１００μｌを添加し、１時間、定温放置した。かかる定温放置後、０．０５％のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ ２０）を含有するリン酸緩衝生理食塩水（以下、「ＰＢＳ−Ｔ」とする。）を用いて、マイクロプレートを３度洗浄した。
【００４５】
そして、上述の如き処理を施したマイクロプレートの異なるくぼみに、先に準備した試料１〜５の上澄み液、或いは、参照用のコナヒョウヒダニ原料抽出物を３倍に希釈したものを、各々１００μｌ加えて、３７℃にて、１時間定温放置した。
【００４６】
かかる定温放置後、マイクロプレートを、ＰＢＳ−Ｔを用いて３度洗浄した後、マイクロプレートに対して、濃度が４０ｎｇ／ｍｌの、抗Ｄｅｒ ｆ ２ 抗体（ｃｌｏｎｅ １３Ａ４）が結合したホースラディッシュペルオキシダーゼ：１００μｌを添加し、３７℃にて１時間、定温放置した。次いで、このプレートを、水にて３度洗浄した後、更に、ＰＢＳ−Ｔを用いて、３度洗浄した。そして、マイクロプレートの各くぼみに、２．０ｍｇ／ｍｌのｏ−フェニレンジアミンを含む０．１ｍｏｌ／ｌのリン酸緩衝溶液（ｐＨ：６．２、０．０３％のＨ２Ｏ２を含有）：１００μｌを添加し、定温放置した。なお、ここにおける酵素反応は、２ｍｏｌ／ｌの硫酸を５０μｌ添加することにより、停止した。
【００４７】
そして、マイクロプレートの各くぼみにおける吸光度を、分光光度計を用いて、測定した。
【００４８】
ここにおいて、吸光度は、セル長さ：１ｃｍで、波長：４９０ｎｍのときに、測定した。吸光度は、Ｄｅｒ ｆ ２ の結合量に直接比例しており、その濃度は、それぞれの標準曲線（光学濃度、又は吸光度の範囲が０．００１〜３．６）から計算した。なお、標準曲線は、１ｍｌ当たり６．９〜５ｎｇのダニ抽出物同等品を用いて、作成した。対照基準である水の吸光度は、アレルゲン中和率：０％（Ｄｅｒ ｆ ２ 残量が１００％）とみなし、一方、吸光度が０の場合とは、アレルゲン中和率：１００％（Ｄｅｒ ｆ ２ 残量が０％）とした。そして、それら２つの終点に基づいて、試料１〜４におけるアレルゲン中和率を算出した。それらの結果についても、下記表１に示す。
【００４９】
【表１】
【００５０】
かかる表１の結果から明らかなように、本発明に従うアレルゲン中和用組成物にあっては、６０％以上の高いアレルゲン中和率を達成することが、認められたのである。
【００５１】
また、上記で得られた試料１〜４に対して、タンニン酸又はサリチル酸を更に添加せしめて、上記と同様にして、アレルゲン中和作用を調べたところ、何れの試料においても、タンニン酸やサリチル酸の添加によって、アレルゲン中和率が更に高められ得ることを認めた。
【００５２】
【発明の効果】
以上の説明から明らかなように、本発明に従うアレルゲン中和用組成物にあっては、アレルゲンタンパク質を変性せしめる物質として、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質が採用されているところから、かかる物質が、アレルゲンタンパク質に効果的に作用して、アレルゲンタンパク質をより有効に中和せしめることが出来るのである。
【００５３】
また、本発明においては、アレルゲンタンパク質のジスルフィド結合を還元乃至は開裂し得る物質と共に、溶媒も、その構成要素とされているところから、例えば、本発明のアレルゲン中和用組成物を、屋内に存在するダニ等のアレルゲンに対して、噴霧器を用いて噴霧することにより、以て、容易に接触せしめ得るのであり、有効にアレルゲンを中和せしめることが出来るのである。[0001]
【Technical field】
The present invention relates to a composition for neutralizing an allergen, in particular, by spraying in a living space, for example, using a sprayer, to effectively allergen floating in the air or adhering to various daily necessities. The present invention relates to a neutralizable composition for neutralizing an allergen.
[0002]
[Background Art]
It is widely known that allergic diseases such as asthma and atopic dermatitis are caused by an allergic reaction between an allergen and an antibody in the human body. That is, when a human having an antibody against an allergen inhales air containing the allergen or makes direct contact with the allergen at a moist site on the human body surface, such allergen is absorbed into the human body and The allergic reaction between the antibody and the allergen absorbed into the human body causes various allergic disease symptoms.
[0003]
Here, as the allergen as a causative substance causing such an allergic disease, mites in indoor house dust, scales of dogs and cats, pollen, and the like have been widely known. It has also been recognized that the continued avoidance of these patients with these allergens improves the symptoms of various allergic diseases.
[0004]
Under such circumstances, conventionally, various methods have been proposed, in particular, indoors where a large number of allergens are present, in which patients with an allergic disease can continuously avoid contact with the allergen.
[0005]
As such a method, for example, a method of avoiding contact between the human body and the allergen by suctioning the allergen floating in the indoor air with a vacuum cleaner or removing it with a filter of an air purifier, etc. Has been proposed. However, these techniques have been found to remove some allergens, but have not been satisfactory from the viewpoint of improving the symptoms of allergic diseases.
[0006]
As a source of allergens indoors, mites in house dust are the most common, and it has been proposed to use various acaricides to remove allergens caused by mites. However, since allergens caused by such mites are also contained in dead mites and remaining feces, even if mites are killed using acaricides, the human body and allergens are immediately Is not effectively avoided. In addition, there are some acaricides that may adversely affect the human body, so that it is not very preferable to use such drugs regularly indoors, especially in ordinary households.
[0007]
Further, spraying a solution containing a predetermined substance into the air, wrapping all the particles including the allergen floating therein with such a substance, increasing the weight of the substance so that the substance cannot float in the air. Therefore, a technique for preventing allergen inhalation by respiration has also been proposed. However, such a substance that wraps the allergen is usually sticky, so that, for example, when this method is performed indoors, the allergen covered with the sticky substance becomes a bed cover or a pillow. And the like, and there is an inherent problem of adhering to the woven fabric products and the like, and consequently promoting adhesion of dirt to the woven fabric products and the like.
[0008]
On the other hand, allergen proteins in the allergens are chemically denatured, or by using a composition containing a component that physically covers the allergens, inactivates (neutralizes) the allergen proteins, and thereby the human body and the allergens are inactivated. Various methods have been proposed for avoiding contact with the device.
[0009]
For example, in Patent Document 1 (Japanese Patent Publication No. 2-16731), a composition used for removing an allergen characterized by containing tannic acid and a carrier, and an allergen is removed using such a composition Patent Document 2 (Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 6-279273) discloses a method of selecting one of ester compounds of a tea extract or the like and an alcohol having 1 to 4 carbon atoms. Anti-allergen compositions containing the above compounds and methods for removing allergens using such compositions have been proposed.
[0010]
However, since tannic acid and the like contained in such a composition each have a color, for example, when these compositions are used at home, especially bed covers, furniture covers, curtains, etc. There is an inherent problem that household textile products may stain.
[0011]
Furthermore, the inventor of the present application discloses, in Patent Document 3 (WO 02/28187), a sprayable allergen neutralizing composition used for non-living objects, which neutralizes allergens. An effective amount of metal ions and a composition comprising a solvent have been proposed, but the development of a composition capable of exhibiting an allergen neutralizing effect at the same level or higher than such an allergen neutralizing composition, It is desired.
[0012]
[Patent Document 1]
Japanese Patent Publication No. 2-16731
[Patent Document 2]
JP-A-6-279273
[Patent Document 3]
WO 02/28187 pamphlet
[0013]
[Solution]
Here, the present invention has been made in view of such circumstances, and a problem to be solved is to effectively neutralize allergens floating in the air or adhering to various daily necessities. To provide a composition for neutralizing allergens.
[0014]
[Solution]
Then, the present invention, in order to solve the problem, a composition for neutralizing the allergen, the effective amount of a substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein, and a solvent, It is an object of the present invention to provide a composition for neutralizing an allergen, which is characterized by being constituted.
[0015]
Thus, in the composition for neutralizing an allergen according to the present invention, since a substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein is contained, the disulfide bond of the allergen protein is reduced by such a substance. It will be reduced or cleaved and the allergen protein will be effectively neutralized (inactivated).
[0016]
Further, since the allergen neutralizing composition of the present invention is composed of the above-described substances and a solvent, for example, such an allergen neutralizing composition can be sprayed using a sprayer or the like. In addition, by spraying in this manner, allergens floating in the air and allergens adhering to furniture and the like can be effectively neutralized.
[0017]
According to one preferred embodiment of the composition for neutralizing an allergen according to the present invention, such a composition for neutralizing an allergen contains at least 60% or more of an allergen as measured by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In the present invention, the substance capable of neutralizing the protein and preferably capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein is contained at a concentration of 0.005 to 25% by weight. It becomes.
[0018]
According to another preferred embodiment of the present invention, the substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein includes thioglycolic acid or a salt or ester thereof, a sulfite, 2-mercaptoethanol, 1,4-dithioerythritol, 1,4-dithiothreitol, an addition compound of borohydride and metal, tri-n-butylphosphine, tris- (2-carboxyethyl) phosphine and other tertiary phosphines, cysteine, At least one substance is selected from the group consisting of methionine, glutathione, thioredoxin and thioredoxin-like protein, disulfide reductase and disulfide reductase-like protein. By selecting one or more of these substances, allergens can be more effectively neutralized.
[0019]
Further, according to a preferred embodiment of the present invention, a solvent containing water as a main component is used as the solvent, and more preferably, an aqueous alcohol solution is used.
[0020]
Furthermore, in another desirable embodiment of the composition for neutralizing an allergen according to the present invention, in addition to the substance capable of reducing or cleaving a disulfide bond of an allergen protein, a polyphenol compound, a peroxide A substance that denatures at least one or more allergen proteins selected from the group consisting of hydrogen, salicylic acid, citric acid, lactic acid, glycolic acid, ascorbic acid, gallic acid, and gluconic acid is included. By using such substances in combination, allergens can be more effectively neutralized.
[0021]
In addition, in the allergen neutralizing composition according to the present invention as described above, if necessary, in addition to the substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein, a humectant, Acaricides and / or mite repellents are included and used, which advantageously adds further functions depending on their components.
[0022]
The allergen neutralizing composition according to the present invention preferably neutralizes the allergen by spraying in a living space.
[0023]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Here, the composition for neutralizing an allergen according to the present invention is characterized in that a substance capable of reducing or cleaving a disulfide bond of the allergen protein is contained as a substance that denatures the allergen protein. have.
[0024]
That is, when the allergen neutralizing composition according to the present invention comes into contact with allergens such as mites in house dust, scales of dogs and cats, pollen, and the like, disulfide bonds of allergen proteins in those allergens cause such neutralization. Is reduced or cleaved by a specific substance contained in the composition for use.Thus, since the three-dimensional structure of the allergen protein is changed, such an allergen protein can be reacted with antibodies in the human body. In the meantime, the substance is denatured to a substance that does not cause any allergic reaction, and the symptoms of various allergic diseases are advantageously improved.
[0025]
Therefore, in the present invention, as the substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein, any substance having such an action can be used. Thioglycolic acid or a salt or ester thereof, sulfite, 2-mercaptoethanol, 1,4-dithioerythritol, 1,4-dithiothreitol, an addition compound of boron hydride and a metal, tri-n-butylphosphine, tris At least one substance selected from the group consisting of-(2-carboxyethyl) phosphine and other tertiary phosphines, cysteine, methionine, glutathione, thioredoxin and thioredoxin-like protein, disulfide reductase and disulfide reductase-like protein; Preferably used, Preferably, sodium sulfite, sodium borohydride, cysteine, substances without strong odor of glutathione, and be used for.
[0026]
Here, the salt of the compound exemplified above includes various known metal salts such as an alkali metal salt and an alkaline earth metal salt, and also includes a metal added to boron hydride. And sodium, as well as known ones such as potassium, lithium and aluminum. The term "thioredoxin-like protein" refers to a protein having a structure different from that of thioredoxin, but exhibiting the same action.Furthermore, "disulfide reductase and disulfide reductase-like protein" are the applicants of the present applicant. A disulfide reductase as disclosed in the earlier application (Japanese Patent Application No. 2002-215189), and a protein having the same action, respectively, are meant.
[0027]
Further, the composition for neutralizing an allergen according to the present invention has at least 60% or more, preferably 70% or more, and more preferably 70% or more, as measured by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) so that the allergen neutralizing effect is effectively exerted. Preferably, it neutralizes 80% or more, particularly 90% or more of the allergen protein. For this purpose, the above-mentioned substances are appropriately selected, and the amount used is determined. Generally, the substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein is present in the composition according to the present invention in a proportion of 0.005 to 25% by weight, preferably 0.01 to 10% by weight, more preferably 0.01 to 10% by weight. Is desirably contained at a ratio of 0.1 to 7% by weight.
[0028]
Meanwhile, in the allergen neutralizing composition according to the present invention, a predetermined solvent is used together with a substance capable of reducing or cleaving a disulfide bond of an allergen protein, which is an essential component in the present invention as described above. . Such a solvent dissolves such essential components of the present invention and, in a small amount, advantageously expands its field of application, and is particularly effective when spraying the composition of the present invention. Here, as such a solvent, any of various conventionally known solvents can be used, and among them, among them, particularly, those containing water as a main component are preferably used. More preferably, an aqueous alcohol solution is employed.
[0029]
Here, the solvent containing water as a main component as described above and water in an alcohol aqueous solution dissolve the allergen protein, and reduce or cleave the disulfide bond between the allergen protein and the allergen protein so dissolved in water. Or a substance that denatures the allergen protein, which is to be included as necessary with such a substance, or a substance that denatures the allergen protein. ing. That is, the water contained in such a solvent not only functions as a medium for a substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein, but also as a medium for other substances that may be contained as necessary, and also serves as a medium for such an allergen protein. It also has a function of promoting a complex reaction between a substance capable of reducing or cleaving a disulfide bond, other substances contained as necessary, and an allergen protein. The water that can be used in the present invention includes, for example, distilled water, ion-exchanged water (water from which a substance dissolved as ions has been removed by an ion-exchange resin or the like), tap water, and the like.
[0030]
In addition, aqueous alcohol solutions, particularly aqueous solutions of low molecular weight alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol, have high volatility. Therefore, when the composition for neutralizing an allergen of the present invention using such an alcohol aqueous solution as a solvent is used by spraying it onto a surface of indoor furniture or the like, such a composition for neutralizing an allergen can be used immediately. This is very convenient for the consumer using the product of the present invention because the product is dried and does not wet the surface of furniture or the like more than necessary. In the present invention, when an alcohol aqueous solution is used as the solvent, the alcohol component is preferably 0.01 to 20% by weight based on the composition of the present invention, and is preferably used. It will be adjusted to be 0.05 to 10% by weight, more preferably 0.1 to 5% by weight. However, when the alcohol component is produced as the concentrated product of the present invention or as an industrial liquid preparation, the content of the alcohol component exceeds the above-mentioned content, specifically, about 20 to 70% by weight of the composition. A ratio can also be used.
[0031]
The allergen neutralizing composition of the present invention is prepared by adding a substance capable of reducing or cleaving a disulfide bond of an allergen protein to a selected solvent in an appropriate amount, and causing the substance to contain the substance. In the present invention, in addition to such substances, one or more of various additives used in general allergen neutralizing compositions, if necessary, may be in the normal range. Even if it is added inside, there is no problem. As described above, by adding further components, various functions corresponding to the added components can be advantageously imparted to the allergen neutralizing composition according to the present invention.
[0032]
For example, it is effective to add a substance capable of denaturing the allergen protein in addition to the substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein as described above. As described above, by adding a substance that can reduce or cleave a disulfide bond of an allergen protein and also a substance that denatures other allergen proteins, it is more effective than when these substances are used alone. Therefore, an effective allergen neutralizing effect is exhibited.
[0033]
Here, substances that denature such allergen proteins and that can be suitably used in the present invention include, for example, tannin, tannic acid, polyphenol compounds including catechin, hydrogen peroxide, salicylic acid, and citric acid. , Lactic acid, glycolic acid, ascorbic acid, gallic acid, gluconic acid, and the like. At least one selected from the group consisting of these is appropriately selected and added.
[0034]
The amount of the substance that denatures the allergen protein is appropriately determined according to the amount of the substance that can reduce or cleave the disulfide bond of the allergen protein. With respect to the composition, the weight ratio is 0.01 to 20% by weight, preferably 0.1 to 10% by weight, more preferably 0.2 to 8% by weight. Thus, it will be added. In addition, when a substance that denatures such an allergen protein is used, in order to ensure solubility and stability in the composition, an alcohol aqueous solution, particularly, an aqueous solution of a low molecular weight alcohol is used as a solvent. Is preferred. Further, when a substance such as tannin, which changes color when attached to a textile product, is used, it is desirable to use a color stabilizer together with such a substance.
[0035]
Further, the surface tension of the composition for neutralizing an allergen according to the present invention is reduced, and when the composition of the present invention is used by spraying it on the surface of an object, the composition is uniformly diffused on the surface. In the present invention, it is also effective to add a wetting agent such as a surfactant for the purpose of being able to perform this.
[0036]
As such a wetting agent, any substance can be used as long as it can reduce or cleave the above-described disulfide bond of the allergen protein or does not inhibit the effect of other added components. For example, ethoxy higher alcohols, ethoxylated-propoxylated higher alcohols, alcohol sulfates, sulfates of ethoxy higher alcohols, sorbitan monoesters, amine oxides, ethoxy fatty acid esters, alkyl ether phosphates, alkyl poly Glycosides, fatty acid glucosamides, ethoxyalkylphenols, ethoxyalkylphenol sulfates, paraffin sulfonates, sulfates of higher alcohols, alkyl phenyl sulfonates, linear alkyl benzene sulfonates, alkyl dimethyl betaines Alkyl dimethyl hydroxypropyl sultaine compounds, alkylene-oxy Lethe de polydimethylsiloxanes, carbon atoms can be mentioned an alkyl dimethyl amine oxide having from 6 to 18 alkyl chains. Further, other anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants, or nonionic surfactants can also be suitably used, and among these, one or two kinds can be used. More than one kind is appropriately selected and used. In addition, in such a wetting agent, the weight ratio of the composition of the present invention is 0.01 to 3% by weight, preferably 0.03 to 2% by weight. More preferably, it is added in an amount of 0.05 to 1% by weight.
[0037]
Further, in the present invention, it is also possible to add an acaricide for killing mites and a mitic repellent for keeping mites from approaching. As described above, since allergens are also present in dead mites, adding such a drug does not directly remove allergens, but kills mites or closes mites. It is effective to add these agents in that the allergen can be removed indirectly by eliminating the allergen.
[0038]
Here, as the acaricide or acaricide that can be used in the present invention, for example, resettrine, phenothrin, permethrin, arethrin, tetramethrin, framethrin, cypermethrin, decamethrin, fenvallate, fenpropatrin, terraretrin, empetrin, Those containing a compound known by a general name such as pyrethrin can be mentioned. Besides these, 1-ethynyl-2-methyl-2-pentenyl-2,2-dimethyl-3--3- (2,2-dichlorovinyl) -cyclopropane-1-carboxylate, 1-ethynyl-2- Methynyl-2-pentenyl-2,2,3,3-tetramethylcyclopropane-1-carboxylate, α-cyano-3-phenoxybenzyl-2,2-dimethyl-3- (2,2,3-tribromethyl) Pyrethroid compounds such as -cyclopropane-1-carboxylate, and organic phosphorus compounds such as sumithion, fenthion, tetrachlorovinphos, diazinon and DDVP, and further, those containing compounds such as carbamates can also be suitably used. . In addition, such an acaricide and / or an acaricide is 0.01 to 20% by weight, preferably 0.1 to 10% by weight, more preferably 0.1 to 20% by weight based on the composition of the present invention. It is desirable that it be added in a ratio of 0.2 to 8% by weight.
[0039]
Furthermore, in the allergen neutralizing composition of the present invention, in addition to the above-mentioned components, a solution phase stabilizer, a chelating agent, an antistatic agent, a coloring agent, an antioxidant, a preservative, and the like are required. Will be added as appropriate.
[0040]
And the composition for neutralizing allergens according to the present invention obtained as described above, for example, mites that inhabit a large number of indoor house dust, dogs, scales of cats and the like, allergens such as pollen effectively In order to neutralize, it will be suitably used.
[0041]
For example, the composition for neutralizing an allergen according to the present invention is sprayed on a living space or various kinds of furniture installed indoors, particularly a textile product in which many mites live, using a sprayer. It neutralizes the allergens present in the plant. Further, in addition to such a method, by using a filter impregnated with the composition of the present invention in an air purifier or an air conditioner, etc., it is possible to effectively neutralize allergens floating in indoor air. Is possible.
[0042]
【Example】
Hereinafter, some experimental examples including typical examples of the present invention will be shown to clarify the present invention more specifically. It is needless to say that it is not subject to the above restrictions. In addition, in addition to the examples included in the following experimental examples, the present invention may be variously modified based on the knowledge of those skilled in the art without departing from the spirit of the present invention, in addition to the above specific description. It is to be understood that certain changes, modifications, improvements and the like can be made.
[0043]
First, tris (2-carboxyethyl) phosphine-hydrochloric acid, sodium thioglycolate, and 1,4-dithiothreyl are used as substances (active substances) that can reduce or cleave disulfide bonds of an allergen protein together with distilled water as a solvent. Tol or 2-mercaptoethanol was used to prepare four types of samples (samples 1 to 4) containing these at the concentrations listed in Table 1 below, while using only distilled water as a control. A sample (Sample 5) was also prepared. Next, with respect to 0.8 ml of each of the obtained samples 1 to 5, an extract of Der f 2 which is a major allergen of Dermatophagoides farinae (concentration: 20 μg / ml (20 × 10-3g / l)), and the mixture was stirred and left at room temperature for 1 hour. After the standing, 2.2 ml of phosphate buffered saline containing 20% skim milk was further added to each sample, and each sample was sufficiently stirred, and then centrifuged at 12,000 rpm for 1 hour. Processing was performed. Then, the supernatant obtained in each sample was evaluated by the following enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
[0044]
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
The following treatment was applied to a microplate having a plurality of depressions on its surface. First, a phosphate buffered saline (pH: 7.4, 0. 1) containing a Der f 2 monoclonal antibody (clone 15E 11, manufactured by Asahi Breweries, Ltd., AB-A-4) at a protein concentration of 2 μg / ml. (Containing 1% sodium azide) and each well of the microplate was coated with 100 μl of such phosphate buffered saline at a temperature of 4 ° C. overnight. Next, the phosphate buffered saline containing the monoclonal antibody was removed, and in each well of the microplate, phosphate buffered saline (BSA) (bovine serum albumin) concentration of 1% (0.1%) was added. Of sodium azide): 100 μl was added and left to stand at room temperature for 1 hour. After the incubation at a constant temperature, a phosphate-buffered saline solution containing 0.05% of polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate (Tween 20) (hereinafter, referred to as “PBS-T”) is used for microscopy. Plates were washed three times.
[0045]
Then, 100 μl of each of the supernatant liquids of Samples 1 to 5 previously prepared or the three-fold diluted Dermatophagoides farinae raw material extract for reference was added to the different depressions of the microplate treated as described above. At 37 ° C. for 1 hour.
[0046]
After the incubation, the microplate is washed three times with PBS-T. Then, the horseradish peroxidase having a concentration of 40 ng / ml bound to an anti-Der f2 antibody (clone 13A4) is added to the microplate: 100 μl was added, and the mixture was allowed to stand at 37 ° C. for 1 hour. Next, the plate was washed three times with water, and further washed three times with PBS-T. Then, a 0.1 mol / l phosphate buffer solution (pH: 6.2, 0.03% H) containing 2.0 mg / ml of o-phenylenediamine was placed in each recess of the microplate.2O2): 100 μl was added and left to stand at a constant temperature. The enzymatic reaction was stopped by adding 50 μl of 2 mol / l sulfuric acid.
[0047]
And the light absorbency in each hollow of a microplate was measured using the spectrophotometer.
[0048]
Here, the absorbance was measured when the cell length was 1 cm and the wavelength was 490 nm. The absorbance was directly proportional to the amount of Der f 2 bound, and the concentration was calculated from each standard curve (the optical density or absorbance range was 0.001-3.6). The standard curve was prepared using 6.9 to 5 ng of mite extract equivalents per ml. The absorbance of water, which is a control standard, is assumed to be allergen neutralization ratio: 0% (Der f 2 residual amount is 100%), while the case where the absorbance is 0 is allergen neutralization ratio: 100% (Der f 2). The remaining amount is 0%). And the allergen neutralization rate in Samples 1-4 was calculated based on those two end points. The results are also shown in Table 1 below.
[0049]
[Table 1]
[0050]
As is clear from the results of Table 1, it was recognized that the composition for neutralizing allergens according to the present invention achieved a high allergen neutralization rate of 60% or more.
[0051]
In addition, tannic acid or salicylic acid was further added to the samples 1 to 4 obtained above, and the allergen neutralizing action was examined in the same manner as described above. Was found to be able to further increase the allergen neutralization rate.
[0052]
【The invention's effect】
As is clear from the above description, in the composition for neutralizing an allergen according to the present invention, a substance capable of reducing or cleaving a disulfide bond of the allergen protein is employed as a substance that denatures the allergen protein. Therefore, such a substance can effectively act on the allergen protein and more effectively neutralize the allergen protein.
[0053]
Further, in the present invention, since the solvent is also a constituent element together with the substance capable of reducing or cleaving the disulfide bond of the allergen protein, for example, the composition for neutralizing the allergen of the present invention can be used indoors. By spraying the existing allergens such as mites using a sprayer, the allergens can be easily brought into contact with each other, and the allergens can be effectively neutralized.