JP2003334065A - Nucleic acid complex for protecting lactic acid bacterium - Google Patents
Nucleic acid complex for protecting lactic acid bacteriumInfo
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、乳酸菌生菌を胃液
から保護してその多くを生存させたまま腸に送達するこ
とが可能な新規な乳酸菌生菌を保護するための核酸複合
体、該核酸複合体を含む混合物、ならびに該核酸複合体
混合物の製造方法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel nucleic acid complex for protecting live lactic acid bacteria, which is capable of protecting live lactic acid bacteria from gastric juice and delivering them to the intestine while keeping most of them alive, The present invention relates to a mixture containing a nucleic acid complex and a method for producing the nucleic acid complex mixture.
【0002】[0002]
【従来の技術】乳酸菌は人間や動物の腸に存在する健康
に有益な菌種としてよく知られている。この腸内におけ
る乳酸菌の有益な作用は、老化、抗生物質等の薬剤の使
用、ストレスや胃腸消化システムの不調などが要因とな
って、腸内に存在する各種の菌叢のバランスが崩れ、有
害細菌が優位となることにより、低減される。そこで、
このような有用乳酸菌を補充するための、ヨーグルトに
代表される様々な乳酸菌を含む食品が販売されている。
しかし、これらの腸内に有用な乳酸菌の多くは、酸性に
敏感であるので、経口摂取の場合、pHが低い胃液によ
り生菌数が大幅に減少する。したがって、多くの乳酸菌
を含む食品において、腸まで送達される乳酸菌生菌数は
このような食品に含まれる乳酸菌生菌数を考慮すれば非
常にわずかであり、送達効率はきわめて悪い。2. Description of the Related Art Lactic acid bacteria are well known as a health-beneficial bacterial species present in the intestines of humans and animals. This beneficial effect of lactic acid bacteria in the intestine is harmful due to aging, the use of drugs such as antibiotics, stress, and disorders of the gastrointestinal digestive system, etc. It is reduced by the predominance of bacteria. Therefore,
Foods containing various lactic acid bacteria represented by yogurt for supplementing such useful lactic acid bacteria are on the market.
However, since many of these useful lactic acid bacteria in the intestine are sensitive to acidity, when taken orally, the gastric juice having a low pH significantly reduces the viable cell count. Therefore, in foods containing many lactic acid bacteria, the number of viable lactic acid bacteria delivered to the intestine is very small in consideration of the number of viable lactic acid bacteria contained in such foods, and the delivery efficiency is extremely poor.
【0003】発酵乳等の乳酸菌生菌を含む食品を摂取す
るに際し、腸にできるだけ多くの乳酸菌生菌を到達させ
るため多くの研究が行われている。経口摂取において腸
にできるだけ多くの乳酸菌生菌を到達させるための方策
としては以下に示すアプローチが知られている。第一の
アプローチとしては、食品に添加する乳酸菌を増加させ
ることである。しかし、必要以上の乳酸菌の添加はコス
トを高め、また食品の味、風味等に影響を与える。第二
のアプローチとしては、酸に強い乳酸菌を利用すること
である。このため、例えば耐酸性の高い菌株または変異
株を利用する方法がある(例えば、特開昭58−224
685号公報、特開平5−236945号公報)。しか
しながら、このような特殊な乳酸菌は、食品の味、風味
や口当たりに影響を及ぼすこともありまた、特殊な培養
条件等を必要とすることもある。第三のアプローチとし
ては、食品に特殊な物質を添加することにより、胃酸分
泌を抑制して乳酸菌を保護しようとするものである。例
えば特開平5−207846号公報では、発酵乳または
乳酸菌飲料に乳から分離された胃酸分泌抑制作用のある
ペプチド画分を添加含有させることによって、胃におけ
る胃酸分泌作用を抑制して、乳酸菌を胃で死滅させるこ
となく活性を維持したまま腸に到達させる発酵乳または
乳酸菌飲料を開示している。しかし、このような特別な
物質を調製するには別の工程が必要となり、コストがか
かる。第四のアプローチとしては、乳酸菌菌体粉末を胃
液から保護するために胃液で溶解しない物質で被覆する
ことである。例えば特開平5−186336号公報は、
乾燥乳酸菌粉末を油脂、賦形剤及び含水アルコール可溶
性タンパク質を含有する層と含水アルコール可溶性タン
パク質を含有する層で被覆されてなることを特徴とする
腸溶性造粒物を開示するが、この造粒物は乳酸菌を乾燥
物(粉末)として摂取することが想定されるものであ
る。これに対し、本発明は、油脂と乳化剤とを乳酸菌生
菌を含む液体に加えて該液体を乳化させ、得られた乳化
物に胃中では消化されにくい核酸とゲル化剤と水とから
なる水不溶性の複合体を混合することにより乳酸菌生菌
を胃液から保護することができるという新しい知見に基
づくものである。[0003] When ingesting foods containing lactic acid bacterium viable bacteria such as fermented milk, many studies have been conducted to make as much lactic acid bacterium viable bacteria as possible reach the intestines. The following approach is known as a method for making as many live lactic acid bacteria as possible reach the intestine upon ingestion. The first approach is to increase the amount of lactic acid bacteria added to food. However, the addition of more lactic acid bacteria than necessary increases the cost and also affects the taste and flavor of foods. The second approach is to use acid-resistant lactic acid bacteria. Therefore, for example, there is a method of using a strain or a mutant strain having high acid resistance (for example, JP-A-58-224).
685, JP-A-5-236945). However, such a special lactic acid bacterium may affect the taste, flavor and mouthfeel of food, and may require special culture conditions. The third approach is to suppress gastric acid secretion and protect lactic acid bacteria by adding a special substance to food. For example, in JP-A-5-207846, by adding and containing a peptide fraction having a gastric acid secretion inhibitory effect separated from milk to fermented milk or a lactic acid bacterium beverage, the gastric acid secretory activity in the stomach is suppressed, and the lactic acid bacterium is treated in the stomach. Disclosed is a fermented milk or lactic acid bacterium beverage that reaches the intestine while maintaining its activity without being killed. However, the preparation of such special materials requires additional steps and is costly. A fourth approach is to coat the lactic acid bacterial cell powder with a substance that does not dissolve in gastric juice to protect it from gastric juice. For example, Japanese Patent Laid-Open No. 5-186336 discloses
Disclosed is an enteric-coated granulated product, which comprises coating a dry lactic acid bacterium powder with a layer containing fats and oils, an excipient and a hydrous alcohol-soluble protein and a layer containing a hydrous alcohol-soluble protein. The product is assumed to ingest lactic acid bacteria as a dry product (powder). On the other hand, in the present invention, an oil and fat and an emulsifier are added to a liquid containing live lactic acid bacteria to emulsify the liquid, and the obtained emulsion is composed of nucleic acid that is difficult to digest in the stomach, a gelling agent and water. It is based on the new finding that live lactic acid bacteria can be protected from gastric juice by mixing a water-insoluble complex.
【0004】[0004]
【発明が解決しようとする課題】すなわち、本発明の課
題はコストのかかる特別な工程または材料を必要とせず
に、有用な乳酸菌生菌の経口摂取による効率的な腸への
送達を可能とする食品を提供することを目的に、液体中
の乳酸菌生菌を胃液から保護する新しい方法を提供する
ことにある。具体的には、本発明の課題は乳酸菌生菌を
含む液体中の乳酸菌生菌を保護するための材料の提供、
該材料を使用した液状ないし半液状の食品として提供し
やすい乳酸菌生菌を保護した食品材料の提供、乳酸菌生
菌を含む液体中の乳酸菌生菌を保護するためのシステム
の提供、ならびに乳酸菌生菌を含む液体から、乳酸菌生
菌を保護した食品材料を製造する方法を提供することに
ある。That is, the object of the present invention is to enable efficient intestinal delivery by ingestion of useful live lactic acid bacteria without the need for costly special steps or materials. It is an object of the present invention to provide a new method for protecting live lactic acid bacteria in a liquid from gastric juice for the purpose of providing food. Specifically, the object of the present invention is to provide a material for protecting live lactic acid bacteria in a liquid containing live lactic acid bacteria,
Providing a food material that protects live lactic acid bacteria that is easy to provide as a liquid or semi-liquid food using the material, a system for protecting live lactic acid bacteria in a liquid containing live lactic acid bacteria, and live lactic acid bacteria Another object of the present invention is to provide a method for producing a food material in which live lactic acid bacteria are protected from a liquid containing.
【0005】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明者は、胃液中に核
酸分解酵素が存在しないので、核酸が胃中では分解され
にくいこと、また一本鎖DNAは多くのリン酸基を有
し、DNAがポリアニオン天然高分子であることが知ら
れているので、ポリカチオン高分子であるゼラチンのよ
うなゲル化剤と反応させることによって、水不溶性のゲ
ル状の複合体を形成することに着目し、乳酸菌生菌を胃
液から保護する材料として、核酸を見いだした。また、
この核酸とゲル化剤と水の混合物を油脂と乳化剤とによ
り乳化させた乳酸菌生菌を含む液体に加えて核酸複合体
として調製したところ、人工胃液に対して、該液体中の
乳酸菌生菌の数が未処理のものと比べ、格段に保護され
ることが分かり、本発明を完成した。Means for Solving the Problems The present inventors have found that nucleic acid is not easily decomposed in the stomach because no nucleolytic enzyme is present in the gastric juice, and the single-stranded DNA has many phosphate groups. Since DNA is known to be a polyanion natural polymer, attention has been paid to forming a water-insoluble gel-like complex by reacting with a gelling agent such as gelatin which is a polycation polymer. As a material for protecting live lactic acid bacteria from gastric juice, they have found nucleic acids. Also,
A mixture of this nucleic acid, a gelling agent and water was added to a liquid containing viable lactic acid bacteria emulsified with an oil and fat and an emulsifier to prepare a nucleic acid complex. The number was found to be much more protected than the untreated one, thus completing the present invention.
【0006】したがって、本発明は、核酸と1種または
それ以上のゲル化剤と水とを含む、乳酸菌生菌を胃液か
ら保護するための核酸複合体に関する。また、乳酸菌生
菌を含む液体を乳化剤と油脂により乳化した乳化物およ
び、請求項1記載の核酸複合体を含む乳酸菌生菌を保護
した核酸複合体混合物にも関する。上記の核酸複合体混
合物は、乳酸菌生菌の保護システムともいえるものであ
る。The invention therefore relates to a nucleic acid complex for protecting live lactic acid bacteria from gastric juice, which comprises a nucleic acid, one or more gelling agents and water. The present invention also relates to an emulsion obtained by emulsifying a liquid containing live lactic acid bacteria with an emulsifier and an oil and fat, and a nucleic acid complex mixture in which live lactic acid bacteria containing the nucleic acid complex according to claim 1 are protected. The above-mentioned nucleic acid complex mixture can be said to be a protection system for live lactic acid bacteria.
【0007】[0007]
【発明の実施の形態】本発明の第一の態様は、乳酸菌生
菌を保護するための、核酸および1種またはそれ以上の
ゲル化剤と水とを含む核酸複合体である。本発明の核酸
複合体に使用する核酸は種々の態様のものでよく、例え
ば、二本鎖、一本鎖または環状の、DNAまたはRNA
であってよい。DNAの供給源は、動物、植物、微生物
等の様々な生物である。とりわけ、水産加工上の廃棄物
である魚類特に、サケ、ニシン、タラの精巣(白子)は
核酸成分を多く含むので、廃棄物の資源化という観点か
らこれらの精巣由来の核酸を利用することは望ましい。
また、哺乳動物もしくは鳥類、例えばウシ、ブタ、ニワ
トリ等の胸腺から得られるものも使用できる。RNAの
例としては、酵母から得られるRNAを挙げることがで
きる。さらに、合成DNA、合成RNAもまた使用でき
る。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION A first aspect of the present invention is a nucleic acid complex containing a nucleic acid and one or more gelling agents and water for protecting live lactic acid bacteria. The nucleic acid used in the nucleic acid complex of the present invention may be of various embodiments, for example double-stranded, single-stranded or circular DNA or RNA.
May be Sources of DNA are various organisms such as animals, plants and microorganisms. In particular, fish, which is a waste product of fishery processing, in particular, salmon, herring, and cod testis (spores) contain a large amount of nucleic acid components, so it is not possible to use nucleic acids derived from these testes from the viewpoint of recycling waste. desirable.
Further, those obtained from thymus of mammals or birds, for example, cow, pig, chicken, etc. can be used. As an example of RNA, RNA obtained from yeast can be mentioned. Furthermore, synthetic DNA and synthetic RNA can also be used.
【0008】また、本発明の核酸複合体に使用するゲル
化剤は、核酸と反応して、水不溶性のゲル状の複合体を
形成し得るポリカチオン高分子である。例えばゼラチ
ン、カラギーナン、ペクチン、寒天、ジュランガム、キ
サンタンガム等から選択されるゲル化剤および、その混
合物である。2種以上のゲル化剤の混合物が好ましく、
特に好ましいものはゼラチンとカラギーナンの混合物で
ある。Further, the gelling agent used in the nucleic acid complex of the present invention is a polycationic polymer capable of reacting with a nucleic acid to form a water-insoluble gel-like complex. For example, a gelling agent selected from gelatin, carrageenan, pectin, agar, duran gum, xanthan gum and the like, and a mixture thereof. A mixture of two or more gelling agents is preferred,
Particularly preferred is a mixture of gelatin and carrageenan.
【0009】乳化剤と油脂とで乳化した乳酸菌生菌を保
護するのに、特に好ましい核酸複合体は、上記いずれか
のDNAと、カラギーナン及びゼラチンの混合水溶液に
混合して得られる核酸複合体である。また核酸複合体に
おける好ましい核酸の配合割合は核酸複合体成分の全量
に対して、約2.5重量%ないし約10重量%、好まし
くは3重量%ないし6重量%である。また核酸複合体に
おける好ましいゲル化剤の合計量の配合割合は核酸複合
体成分の全量に対して、約3重量%ないし約20重量
%、好ましくは6重量%ないし15重量%である。A particularly preferable nucleic acid complex for protecting live lactic acid bacteria emulsified with an emulsifier and oil is a nucleic acid complex obtained by mixing any of the above DNAs with a mixed aqueous solution of carrageenan and gelatin. . The preferable mixing ratio of the nucleic acid in the nucleic acid complex is about 2.5% by weight to about 10% by weight, preferably 3% by weight to 6% by weight, based on the total amount of the nucleic acid complex components. In addition, the blending ratio of the total amount of the gelling agent in the nucleic acid complex is about 3% by weight to about 20% by weight, preferably 6% by weight to 15% by weight, based on the total amount of the nucleic acid complex components.
【0010】本発明の第二の態様は、前記核酸と1種ま
たはそれ以上のゲル化剤と水とから調製した核酸複合体
を、乳化剤と油脂により乳化した乳酸菌生菌を含む液体
と混合することにより得られる乳酸菌生菌を保護した核
酸複合体混合物である。この核酸複合体混合物はゲル状
であり、ヨーグルト製品等の発酵乳製品として調製する
ことが容易である。In a second aspect of the present invention, a nucleic acid complex prepared from the nucleic acid, one or more gelling agents and water is mixed with a liquid containing lactic acid bacterium viable bacteria emulsified with an emulsifying agent and oil. This is a mixture of nucleic acid complexes obtained by protecting live lactic acid bacteria. This nucleic acid complex mixture is in the form of gel and can be easily prepared as a fermented dairy product such as a yogurt product.
【0011】本発明に利用する乳酸菌は、一般に腸内で
活性のある乳酸菌としてヨーグルト等の発酵乳や乳酸菌
飲料等の発酵乳製品に広く用いられている乳酸菌が好ま
しい。例えば、いわゆるビフィズス菌と称されるビフィ
ドバクテリウム (Bifidobacterium)属[例えばビフィ
ドバクテリウム ビフィダム(B. bifidum))、ビフィ
ドバクテリウム ブレー ベ(B. breve)、 ビフィドバク
テリウム インファンティス(B. infantis) 、ビフィド
バクテリウム アドレセンティス(B. adolesenti
s)、ビフィドバクテリウム ロンガム(B. longam)
等]、また、ラクトバチルス(Lactobacillius)属[例
えばラクトバチルス ブルガリカス(L. Bulgaricus)
ラクトバチルス アシドフィルス(L. acidophilus)、
ラクトバチルス カゼイ(L. casei.)、ラクトバチル
ス ブレビス(L. brevis) ラクトバチルスプランタ
ルム(L.plantarum)、ラクトバチルス サルバリス(L.
salivarius)、ラクトバチルス ファーメンタム(L.fe
rmentum)、ラクトバチルス ロイテリ(L.reuteri)
等]、 ストレプトコッカス(Streptococcus)属[例え
ばストレプトコッカス フェーカリス(S.faecalis)、
ストレプトコッカス サーモフィラス(S. thermophilu
s)、ストレプトコッカス ラクティス(S. lactis)
等]、エンテロコッカス(Enterococcus)属[例えばエ
ンテロコッカス フェーカリス(E.feacalis)等]のよ
うなものであるが、これらには限定されない。これらの
乳酸菌は生菌を含む液体、特に水性溶液にて使用でき
る。従って、菌体をあらかじめ、被覆等の処理する必要
はない。また、乳酸菌生菌を含む液体は、例えばゲル
状、液状のヨーグルト、乳酸菌飲料がそのまま利用でき
る。なお、本発明は乳酸菌生菌が利用できることを特徴
とするが、従来から知られている乳酸菌菌体粉末等も、
もちろん同様に使用できる。The lactic acid bacterium used in the present invention is generally preferably a lactic acid bacterium which is widely used in fermented milk such as yogurt and fermented dairy products such as lactic acid bacterium beverages as a lactic acid bacterium active in the intestine. For example, the so-called Bifidobacterium genus Bifidobacterium [eg Bifidobacterium B. bifidum), Bifidobacterium breve (B. breve), Bifidobacterium infantis (B. infantis), B. adolesenti
s), Bifidobacterium longum (B. longam)
Etc.], and also the genus Lactobacillius [eg Lactobacillus bulgaricus]
Lactobacillus acidophilus,
Lactobacillus casei (L. casei.), Lactobacillus brevis (L. brevis) Lactobacillus plantarum (L. plantarum), Lactobacillus salvarius (L.
salivarius), Lactobacillus fermentum (L.fe)
rmentum), Lactobacillus reuteri (L. reuteri)
Etc.], Streptococcus genus [eg Streptococcus faecalis,
Streptococcus thermophilu
s), Streptococcus lactis
Etc.], and the genus Enterococcus [eg, Enterococcus faecalis, etc.], but is not limited thereto. These lactic acid bacteria can be used in liquids containing viable bacteria, especially aqueous solutions. Therefore, it is not necessary to previously treat the cells with a coating or the like. As the liquid containing live lactic acid bacteria, for example, gel-like or liquid yogurt and lactic acid bacterium beverage can be used as they are. Although the present invention is characterized in that lactic acid bacteria viable bacteria can be used, conventionally known lactic acid bacterium cell powder and the like,
Of course you can use it as well.
【0012】乳酸菌生菌を含む液体を乳化するための乳
化剤は、例えば、レシチン、グリセリン脂肪酸エステ
ル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステ
ル、プロピレングリコール脂肪酸エステル等である。な
かでも、レシチンが好ましい。また乳化剤とともに使用
される油脂は、カカオ脂、パーム油、ヤシ油、大豆油、
菜種油などの植物性油脂またはそれらを硬化させた硬化
油等の固体脂や食用ワックス、さらには鯨油、豚脂、牛
脂等の動物性油脂である。なかでもカカオ脂はもっとも
好ましい。乳液中の乳化剤と油脂と乳酸菌生菌を含む液
体の好ましい配合割合は、全量を100重量%として、
油脂20ないし60重量%、乳化剤0.01ないし10
重量%および乳酸菌生菌を含む液体20ないし60重量
%である。Examples of emulsifiers for emulsifying a liquid containing viable lactic acid bacteria include lecithin, glycerin fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester and the like. Of these, lecithin is preferred. Oils and fats used with emulsifiers include cocoa butter, palm oil, coconut oil, soybean oil,
Solid fats and edible waxes such as vegetable oils and fats such as rapeseed oil or hardened oils obtained by hardening them, and animal fats and oils such as whale oil, lard and beef tallow. Cocoa butter is most preferred. The preferable mixing ratio of the liquid containing the emulsifier, the oil and fat, and the viable lactic acid bacteria in the emulsion is 100% by weight,
Oil and fat 20 to 60% by weight, emulsifier 0.01 to 10
20 to 60% by weight of a liquid containing the same by weight and viable lactic acid bacteria.
【0013】上述した成分を適宜組み合わせて得られる
本発明の核酸複合体混合物のうち、もっとも好ましいも
のは、乳酸菌生菌を含むヨーグルトを、レシチンを乳化
剤として、油脂であるカカオ脂中に乳化し、そのヨーグ
ルト乳液を上記いずれかのDNAと、カラギーナン及び
ゼラチンの混合水溶液に混合して得られるものである。Of the nucleic acid complex mixture of the present invention obtained by appropriately combining the above-mentioned components, the most preferable one is emulsified yogurt containing live lactic acid bacteria in cocoa butter which is an oil and fat, using lecithin as an emulsifier. The yogurt emulsion is obtained by mixing any of the above DNAs with a mixed aqueous solution of carrageenan and gelatin.
【0014】本発明の第三の態様は乳酸菌生菌を含む液
体を乳化剤と油脂により乳化し、得られた乳化物を、核
酸と1種またはそれ以上のゲル化剤と水とを含む核酸複
合体と混合することによる、乳酸菌生菌を保護した核酸
複合体混合物の製造方法に関するものである。この製造
方法に使用される好ましい乳酸菌や、乳化剤、油脂、核
酸およびゲル化剤の例は上述に示すものと同様である。
好ましい製造方法では、油脂としてココア脂と乳化剤と
してレシチンとを約30℃ないし約40℃、好ましくは
35℃で混合し、この温度のまま攪拌している該混合液
に乳酸菌生菌を含む液体としてのヨーグルトを徐々に滴
下して、このヨーグルトのW/Oの乳液を調製し、この
乳液を約2℃ないし約10℃、好ましくは4℃付近まで
冷却して固化する。得られた固体を好ましくは澱粉のよ
うな増粘剤と一緒にすり鉢で粉砕し、得られた粉末を、
DNA、カラギーナン、ゼラチン及び蒸留水により調製
した複合体混合液に攪拌しながら添加して核酸複合体混
合物とするものである。乳化した乳酸菌生菌混合物(固
形分ベース)と核酸複合体混合液の配合割合は好ましく
は1:10ないし1:50である。A third aspect of the present invention is to emulsify a liquid containing viable lactic acid bacteria with an emulsifier and oil and fat, and to obtain an emulsion, which is a nucleic acid complex containing nucleic acid, one or more gelling agents and water. The present invention relates to a method for producing a nucleic acid complex mixture in which live lactic acid bacteria are protected by mixing with a body. Examples of preferable lactic acid bacteria, emulsifiers, oils and fats, nucleic acids and gelling agents used in this production method are the same as those described above.
In a preferred production method, cocoa butter as an oil and fat and lecithin as an emulsifier are mixed at about 30 ° C. to about 40 ° C., preferably 35 ° C., and the liquid mixture containing viable lactic acid bacteria is added to the mixed liquid stirred at this temperature. Is gradually added dropwise to prepare a W / O emulsion of this yogurt, and this emulsion is cooled to about 2 ° C. to about 10 ° C., preferably about 4 ° C. and solidified. The resulting solid is ground in a mortar, preferably with a thickening agent such as starch, and the resulting powder is
A nucleic acid complex mixture is prepared by adding to a complex mixture solution prepared from DNA, carrageenan, gelatin and distilled water while stirring. The mixing ratio of the emulsified live lactic acid bacterium mixture (solid content basis) and the nucleic acid complex mixture is preferably 1:10 to 1:50.
【0015】また、本発明は、乳酸菌生菌を含む液体を
乳化剤と油脂により乳化し、得られた乳化物を核酸と1
種またはそれ以上のゲル化剤と水とを含む核酸複合体と
混合し、乳酸菌生菌を保護した核酸複合体混合物とする
ことによる、乳酸菌生菌を胃液から保護する方法にも関
する。好ましいのは、乳酸菌生菌を含む液体を、レシチ
ンを乳化剤としてカカオ脂中に乳化し、得られた乳化物
を、上記いずれかのDNAと、1種以上のゲル化剤、好
ましくはカラギーナン及びゼラチンと水とを含む核酸複
合体混合液と混合することにより、乳酸菌生菌を保護す
る方法である。Further, the present invention emulsifies a liquid containing viable lactic acid bacteria with an emulsifier and fats and oils, and the resulting emulsion contains nucleic acid and 1
It also relates to a method for protecting live lactic acid bacteria from gastric juice by mixing with a nucleic acid complex containing a gelling agent of one or more kinds and water to form a nucleic acid complex mixture in which live lactic acid bacteria are protected. Preferably, a liquid containing live lactic acid bacteria is emulsified in cocoa butter using lecithin as an emulsifier, and the obtained emulsion is combined with any of the above DNAs and one or more gelling agents, preferably carrageenan and gelatin. It is a method for protecting live lactic acid bacteria by mixing with a nucleic acid complex mixture containing water and water.
【0016】本発明の核酸複合体混合物は、ゲル状の物
質であるので、そのまま、またはほかの慣用の調味剤、
風味剤、甘味剤、果物等の混合物を添加することにより
または他の発酵乳等で加工することにより、発酵乳製
品、特に飲用または食用のヨーグルト製品として利用す
ることができる。また、口当たりや流動性を変更・調整
することにより、さらに乳酸菌生菌を利用する発酵食品
用材料として、例えば、種々な乳酸菌発酵飲料やフロー
ズンヨーグルト、アイスクリーム、ゼリー、キャンディ
ー、グミ等を含む食品や健康食品、医薬等にも適用する
ことができる。Since the nucleic acid complex mixture of the present invention is a gel-like substance, it may be used as it is, or another conventional seasoning,
By adding a mixture of flavors, sweeteners, fruits and the like or by processing with other fermented milk or the like, it can be used as a fermented dairy product, particularly a drinkable or edible yogurt product. Further, by changing or adjusting the mouthfeel and fluidity, as a material for fermented foods that further utilize live lactic acid bacteria, for example, various lactic acid bacterium fermented drinks and frozen yogurt, ice cream, jelly, candy, gummi, etc. It can also be applied to health foods, medicines, and the like.
【0017】[0017]
【実施例】以下に示す実施例において、本発明を限定す
ることなくより詳細に説明する。 I.核酸複合体調製条件の検討
本発明の核酸複合体として、使用するのに適当な核酸複
合体の調製条件を検討するため、以下の実験を行った。
DNAはサルデ社(Salde)のDNA−Na塩を使用
し、その他の試薬は和光純薬株式会社のものを使用し
た。1.DNA−ゼラチン複合体形成に対するpHの影響
DNA水溶液(5%w/w)とゼラチン(5%w/w)
を様々なpHのリン酸水素ナトリウム緩衝液に混合しそ
れぞれ570nmにて吸光度を測定した。透明な水溶液
中に水不溶物が生じると、570nmにおける吸光度が
光の散乱により高くなることから、測定された吸光度に
より複合体が形成されたかどうかが推定される。実験の
結果、混合液の吸光度はpH4以下の区域で明らかにD
NA水溶液とゼラチン水溶液自体の吸光度より高くなっ
た。これによりDNAとゼラチンがpH4以下で反応す
ることが示唆された。The present invention is limited to the following examples.
Without further explanation. I. Examination of nucleic acid complex preparation conditions
A nucleic acid complex suitable for use as the nucleic acid complex of the present invention
The following experiment was conducted in order to examine the preparation conditions for coalescence.
DNA uses DNA-Na salt of Salde
However, use other reagents from Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
It was1. Effect of pH on DNA-gelatin complex formation
Aqueous DNA solution (5% w / w) and gelatin (5% w / w)
And mix with various pH sodium phosphate buffers.
Absorbance was measured at 570 nm in each case. Clear aqueous solution
When water-insoluble matter is generated in it, the absorbance at 570 nm becomes
Since it increases due to light scattering, the measured absorbance
It is presumed whether more complex was formed. Experimental
As a result, the absorbance of the mixed solution is clearly D in the area below pH 4.
It is higher than the absorbance of NA aqueous solution and gelatin aqueous solution itself.
It was This causes DNA and gelatin to react at pH 4 or below.
It was suggested that
【0018】2.DNA、ゼラチンおよびカラギーナン
よりなる核酸複合体の安定性(耐酸性)における相乗効
果
水にDNA、ゼラチンおよびカラギーナンを、配合成分
を変えて配合した核酸複合体に、メチルオレンジを包含
させ、下記に記載された人工胃液中における各複合体か
らのメチルオレンジの放出量を測定し、耐酸性の相乗効
果を推測する模擬消化試験を行った。核酸複合体は以下
の組合せである:
(1)DNA(5g)+ゼラチン(10g)、(2)ゼ
ラチン(10g)+カラギーナン(0.3g)、(3)
DNA(5g)+ゼラチン(10g)+カラギーナン
(0.3g)。それぞれ蒸留水各100gを含む。各複
合体にメチルオレンジ0.015gを混合することによ
り包含させた複合体のそれぞれ1.0gを人工胃液に加
え、それを緩やかに回転させて、一定時間(30分)ご
とに人工胃液を採取して、509nmにおける吸光度を
測定する。この吸光度はメチルオレンジの濃度と正比例
する。測定の結果、DNA+ゼラチン+カラギーナンの
複合体の場合、メチルオレンジの放出は2時間以上維持
できた。しかしながらDNA+ゼラチン複合体、および
ゼラチン+カラギーナン複合体ではともにメチルオレン
ジの放出は30分以内で終了した。従って、DNAと2
種のゲル化剤(ゼラチン+カラギーナン)よりなる複合
体がより安定であり、機能性物質をより長時間保持でき
ることがわかった。 2. DNA, gelatin and carrageenan
Effect of stability (acid resistance) of a nucleic acid complex consisting of
DNA, gelatin, and carrageenan were mixed with fruit water in a mixed nucleic acid complex containing different amounts of methyl orange, and the amount of methyl orange released from each complex in the artificial gastric juice described below was measured. A simulated digestion test was conducted to estimate the synergistic effect of acid resistance. The nucleic acid complex is the following combination: (1) DNA (5 g) + gelatin (10 g), (2) Gelatin (10 g) + carrageenan (0.3 g), (3)
DNA (5 g) + gelatin (10 g) + carrageenan (0.3 g). Each contains 100 g of distilled water. By adding 0.015 g of methyl orange to each complex, add 1.0 g of each of the complex contained in the complex to the artificial gastric fluid, gently rotate it, and collect the synthetic gastric fluid at regular intervals (30 minutes). Then, the absorbance at 509 nm is measured. This absorbance is directly proportional to the concentration of methyl orange. As a result of the measurement, in the case of the complex of DNA + gelatin + carrageenan, the release of methyl orange could be maintained for 2 hours or more. However, in both the DNA + gelatin complex and the gelatin + carrageenan complex, the release of methyl orange was completed within 30 minutes. Therefore, DNA and 2
It has been found that the complex consisting of the seed gelling agent (gelatin + carrageenan) is more stable and can retain the functional substance for a longer time.
【0019】3.複合体の安定性に対するDNA含量の
影響
カラギーナン(0.1g)、ゼラチン(3.5g)、蒸
留水(30g)及び複合体成分の全量に対して、所定の
DNA含量(0%、2.5%、5%、7%および10
%)の複合体を調製した。得られた複合体は下記の人工
胃液中で2時間模擬消化試験を行った後、残存した不溶
物の質量をそれぞれ測定した。測定の結果、DNA含量
の増加に伴い、複合体の安定性は高められること、DN
A含量が10%に増加されたとき、複合体は100%残
存し、ほとんど人工胃液に消化されないことがわかっ
た。これらの実験結果から、DNAと、ゲル化剤からな
る核酸複合体は、pH4以下で形成され、耐酸性のため
に2種以上のゲル化剤を使用することが好ましく、この
DNAと2種以上のゲル化剤と形成する核酸複合体成分
の全量に対して、DNAの量は約2.5%ないし約10
%、好ましくは5%ないし8%において適当であること
がわかった。 3. Of DNA content on the stability of the complex
Effect Carrageenan (0.1 g), gelatin (3.5 g), distilled water (30 g) and the total amount of the complex components, given DNA content (0%, 2.5%, 5%, 7% and 10%).
%) Complex was prepared. The obtained complex was subjected to a simulated digestion test in the following artificial gastric juice for 2 hours, and then the mass of the remaining insoluble matter was measured. As a result of the measurement, the stability of the complex was increased as the DNA content was increased.
It was found that when the A content was increased to 10%, the complex remained 100% and was hardly digested by artificial gastric juice. From these experimental results, a nucleic acid complex composed of DNA and a gelling agent is formed at pH 4 or lower, and it is preferable to use two or more gelling agents for acid resistance. The amount of DNA is about 2.5% to about 10% based on the total amount of the nucleic acid complex component formed with the gelling agent.
%, Preferably 5% to 8% has been found to be suitable.
【0020】II.DNA複合体による乳酸菌生菌の保護
効果
以下に、DNA複合体による乳酸菌生菌の保護効果を示
す。乳酸菌生菌を提供する液体として、市販品ブルガリ
アヨーグルトLB81R(明治乳業(株)製)を使用し
た。このヨーグルトはLactobacillus bulgaricus 2038
株とStreptococcus thermophilus 1131株の生菌を含
む。DNAはサルデ社のDNA−Na塩を使用した。カ
カオ脂はMerck Hoei社の製品を使用した。そ
の他の試薬は和光純薬株式会社のものを使用した。1.DNA複合体混合物の調製
Hatschek法に従い、ココア脂(50% w/w)とレシチ
ン(5% w/w)とを35℃で混合し、この温度のまま
攪拌している該混合液にヨーグルト(45%w/w)を徐
々に滴下して、ヨーグルトのW/Oの乳液を調製した。
この乳液を4℃に冷却して固化した。得られた固体(1
g)をポテト澱粉(2g)と一緒にすり鉢で粉砕した。
得られた粉末を、DNA(5g)、カラギーナン(0.
8g)、ゼラチン(11.5g)及び蒸留水(100m
l)により調製した混合液に攪拌しながら添加した。得
られたゲル状のDNA複合体混合物は、多層式システム
を形成する。 II. Protection of live lactic acid bacteria by DNA complex
Effect Below, the effect of protecting the viable lactic acid bacteria by the DNA complex is shown. As a liquid providing live lactic acid bacteria, a commercially available Bulgarian yogurt LB81 R (manufactured by Meiji Dairy Co., Ltd.) was used. This yogurt is Lactobacillus bulgaricus 2038
Strains and live strains of Streptococcus thermophilus 1131. As the DNA, DNA-Na salt of Sarde Co. was used. Cocoa butter used a product of Merck Hoei. Other reagents used were those of Wako Pure Chemical Industries, Ltd. 1. Preparation of DNA complex mixture According to Hatschek method, cocoa butter (50% w / w) and lecithin (5% w / w) were mixed at 35 ° C, and yogurt ( 45% w / w) was gradually added dropwise to prepare a W / O emulsion of yogurt.
This emulsion was cooled to 4 ° C. and solidified. Obtained solid (1
g) was ground in a mortar with potato starch (2 g).
The powder obtained was treated with DNA (5 g), carrageenan (0.
8g), gelatin (11.5g) and distilled water (100m)
The mixture prepared in 1) was added with stirring. The resulting gel-like DNA complex mixture forms a multi-layered system.
【0021】2.人工胃液と人工腸液の調製
ペプシン(3.2g)、NaCl(2.0g)と濃塩酸
(7ml)を蒸留水で最終的に1000mlになるまで
希釈し、pH約1.2の人工胃液を調製した。また、K
H2PO4(6.9g)、パンクレアチン(10g)と
0.2M NaOH液(190ml)を蒸留水で最終的
に1000mlになるまで希釈し、pH約7.5の人工
腸液を調製した。 2. Preparation of artificial gastric juice and artificial intestinal fluid Pepsin (3.2 g), NaCl (2.0 g) and concentrated hydrochloric acid (7 ml) were diluted with distilled water to a final volume of 1000 ml to prepare an artificial gastric juice with a pH of about 1.2. did. Also, K
H 2 PO 4 (6.9 g), pancreatin (10 g) and 0.2 M NaOH solution (190 ml) were diluted with distilled water to a final volume of 1000 ml to prepare an artificial intestinal fluid having a pH of about 7.5.
【0022】3.模擬消化試験におけるDNA複合体混
合物中の乳酸菌の生存数の測定
1.にて製造した乳酸菌生菌を含有するDNA複合体混
合物を37±2℃の人工胃液で2時間、人工腸液で6時
間培養した後、模擬消化試験前後のゲル混合物を採取
し、それぞれ、0.85%のNaCl溶液に分散した。
残存菌数は、寒天培養基で37℃、48時間の培養後、
可視菌落法(CFU)にて測定した。試験結果を以下の
表1に示す。乳酸菌生菌の数は模擬消化試験前には乳酸
菌はDNA複合体混合物中に5.20×107CFU/
g存在したが、人工胃液中で2時間培養したところ1.
00×103CFU/gとなった。しかし、さらに、人
工腸液中で6時間培養したところ乳酸菌生菌数は1.7
5×103CFU/gに増加した。この結果は酸性の胃
液によりゲル混合物中の乳酸菌生菌数は減少するが、そ
の後、アルカリ性の腸液中で乳酸菌生菌数が増加してい
ることから、腸に送達した生存乳酸菌は腸内において再
び成長できることを示唆するものである。一方、本発明
のDNA複合体により保護されない対照ヨーグルトで
は、人工胃液中でほとんどの乳酸菌が死滅した。 3. DNA complex mixing in simulated digestion test
Measurement of survival number of lactic acid bacteria in compound 1. After culturing the DNA complex mixture containing live lactic acid bacteria produced in 1. in artificial gastric juice at 37 ± 2 ° C. for 2 hours and artificial intestinal fluid for 6 hours, the gel mixture before and after the simulated digestion test was collected, and each of them was adjusted to 0. Dispersed in 85% NaCl solution.
The number of remaining bacteria was 37 ° C for 48 hours in agar culture medium,
The measurement was carried out by the visible bacterial drop method (CFU). The test results are shown in Table 1 below. The number of viable lactic acid bacteria was 5.20 × 10 7 CFU / DNA complex mixture before the simulated digestion test.
Although it was present, when cultured for 2 hours in artificial gastric juice, 1.
It was 00 × 10 3 CFU / g. However, when further cultured in artificial intestinal fluid for 6 hours, the number of viable lactic acid bacteria was 1.7.
It increased to 5 × 10 3 CFU / g. This result shows that the number of viable lactic acid bacteria in the gel mixture is decreased by the acidic gastric juice, but thereafter, the viable number of lactic acid bacteria is increased in the alkaline intestinal fluid. It suggests that you can grow. On the other hand, in the control yogurt not protected by the DNA complex of the present invention, most lactic acid bacteria were killed in the artificial gastric juice.
【表1】 [Table 1]
【0023】[0023]
【発明の効果】本発明の新規な核酸複合体は材料に核酸
を使用しているため胃を通過する際に、胃では消化され
にくい。従って、この核酸複合体は乳酸菌生菌を胃液か
ら保護するための材料として使用できる。さらにいえ
ば、保護材料としての核酸複合体は核酸供給源として魚
類の精巣等の生体廃棄物を利用することも可能であるの
で、資源リサイクルの面でも好ましい。この核酸複合体
と、油脂と乳化剤により乳化した乳酸菌生菌を含む液体
からなる核酸複合体混合物は、乳酸菌生菌を保護したシ
ステムとして提供できる。従って、これらの核酸複合体
混合物を含む食品、または乳酸菌生菌を保護したシステ
ムを利用した食品を経口摂取すれば、該核酸複合体混合
物中の核酸複合体が乳酸菌生菌を胃液から保護し、より
多くの乳酸菌が生存したまま腸に送達できるので乳酸菌
生菌の摂取効率がよい。その結果、このような核酸複合
体混合物を利用した食品を経口摂取した場合には、これ
らが含む乳酸菌生菌のもつ感染防御効果、腸内腐敗防止
効果、腸管運動促進効果、免疫賦活効果が十分期待でき
る。また、本発明の核酸複合体混合物はゲル状であり、
そのまま、液状またはゲル状の食品に加工しやすく、特
に飲用または食用のヨーグルト製品等の発酵乳製品とし
て利用することができ、また、他の乳酸菌生菌を利用す
る食品の材料としても使用することができる。さらに、
本発明の乳酸菌生菌を保護した核酸複合体混合物は、耐
酸性の乳酸菌を利用したり、胃酸分泌抑制物質等の特殊
成分を利用することなく、また、複雑な工程を使用する
ことなく製造でき、また乳酸菌生菌を含む液体、特に通
常のヨーグルトや乳酸発酵品をそのまま利用しても製造
できる。従って、上記生体廃棄物を利用可能であること
を含めてコスト面においても有利である。INDUSTRIAL APPLICABILITY Since the novel nucleic acid complex of the present invention uses nucleic acid as a material, it is difficult for the stomach to digest when passing through the stomach. Therefore, this nucleic acid complex can be used as a material for protecting live lactic acid bacteria from gastric juice. Furthermore, since the nucleic acid complex as a protective material can utilize biological waste such as fish testis as a nucleic acid source, it is preferable in terms of resource recycling. The nucleic acid complex mixture comprising this nucleic acid complex and a liquid containing lactic acid bacterium viable bacteria emulsified with an oil and fat and an emulsifier can be provided as a system in which lactic acid bacterium viable bacteria are protected. Therefore, if orally ingested a food containing these nucleic acid complex mixture, or a food utilizing a system that protects lactic acid bacterium viable bacteria, the nucleic acid complex in the nucleic acid complex mixture protects lactic acid bacterium viable bacteria from gastric juice, Since more lactic acid bacteria can be delivered to the intestine while remaining alive, the intake efficiency of live lactic acid bacteria is good. As a result, when foods using such a nucleic acid complex mixture are orally ingested, the infection-preventing effect, intestinal rot-preventing effect, intestinal motility promoting effect, and immunostimulating effect of live lactic acid bacteria contained in these are sufficient. Can be expected. Further, the nucleic acid complex mixture of the present invention is in the form of gel,
As it is, it can be easily processed into liquid or gel foods and can be used as fermented dairy products such as drinkable or edible yogurt products, and it can also be used as a material for foods using other live lactic acid bacteria. You can further,
The nucleic acid complex mixture in which the viable lactic acid bacteria of the present invention is protected can be produced without using acid-resistant lactic acid bacteria or special components such as gastric acid secretion inhibiting substances, and without using complicated steps. Also, it can be produced by directly using a liquid containing live lactic acid bacteria, particularly a normal yogurt or lactic acid fermented product. Therefore, it is advantageous in terms of cost, including that the above-mentioned biological waste can be used.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考) A61P 37/04 A61P 37/04 // A61K 35/74 A61K 35/74 A 47/24 47/24 47/26 47/26 47/36 47/36 47/42 47/42 47/44 47/44 (C12N 1/20 C12R 1:225 C12R 1:225) 1:44 (C12N 1/20 C12R 1:44) (72)発明者 劉 向東 北海道札幌市東区北12条東9丁目1−2− 1120 (72)発明者 松永 政司 東京都墨田区大平4−11−7 Fターム(参考) 4B018 LB07 MD86 MF02 MF14 4B065 AA30X AA49X BD06 BD35 CA41 CA44 4C076 BB01 CC07 CC16 CC31 CC40 DD63F DD66Q EE30P EE42P EE53F FF63 4C087 BC56 CA09 MA05 MA52 NA05 ZA69 ZB09 ZB32 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. 7 Identification code FI theme code (reference) A61P 37/04 A61P 37/04 // A61K 35/74 A61K 35/74 A 47/24 47/24 47 / 26 47/26 47/36 47/36 47/42 47/42 47/44 47/44 (C12N 1/20 C12R 1: 225 C12R 1: 225) 1:44 (C12N 1/20 C12R 1:44) ( 72) Inventor Liu Mudong 1-2-12, Kita, Higashi-ku, Sapporo-shi, Hokkaido 1-21-1120 (72) Inventor Masashi Matsunaga 4-11-7 F-term Odaira, Sumida-ku, Tokyo (reference) 4B018 LB07 MD86 MF02 MF14 4B065 AA30X AA49X BD06 BD35 CA41 CA44 4C076 BB01 CC07 CC16 CC31 CC40 DD63F DD66Q EE30P EE42P EE53F FF63 4C087 BC56 CA09 MA05 MA52 NA05 ZA69 ZB09 ZB32
Claims (12)
水とを含む、乳酸菌生菌を保護するための核酸複合体。1. A nucleic acid complex for protecting live lactic acid bacteria, which comprises a nucleic acid, one or more gelling agents, and water.
より乳化した乳化物、および請求項1記載の核酸複合体
を含む、乳酸菌生菌を保護した核酸複合体混合物。2. A nucleic acid complex mixture protected with viable lactic acid bacteria, which comprises an emulsion obtained by emulsifying a liquid containing viable lactic acid bacteria with an emulsifier and oil and fat, and the nucleic acid complex according to claim 1.
より乳化し、さらに該乳化物と、核酸と1種またはそれ
以上のゲル化剤と水とからなる核酸複合体とを混合する
ことより得られる、乳酸菌生菌の保護システム。3. A method comprising emulsifying a liquid containing live lactic acid bacteria with an emulsifier and fats and oils, and further mixing the emulsion with a nucleic acid complex consisting of nucleic acid, one or more gelling agents and water. The resulting protection system for live lactic acid bacteria.
複合体。4. The nucleic acid complex according to claim 1, wherein the nucleic acid is DNA.
求項4記載の核酸複合体。5. The nucleic acid complex according to claim 4, wherein the DNA is derived from fish testis.
の混合物である請求項1記載の核酸複合体。6. The nucleic acid complex according to claim 1, wherein the gelling agent is a mixture of carrageenan and gelatin.
る請求項2記載の核酸複合体混合物。7. The nucleic acid complex mixture according to claim 2, wherein the liquid containing live lactic acid bacteria is yogurt.
核酸複合体混合物。8. The nucleic acid complex mixture according to claim 2, wherein the emulsifier is lecithin.
酸複合体混合物。9. The nucleic acid complex mixture according to claim 2, wherein the oil or fat is cocoa butter.
む食品。10. A food containing the nucleic acid complex mixture according to claim 2.
により乳化し、得られた乳化物を、核酸と1種またはそ
れ以上のゲル化剤と水とを含む核酸複合体と混合するこ
とによる、乳酸菌生菌を保護した核酸複合体混合物の製
造方法。11. A method comprising emulsifying a liquid containing live lactic acid bacteria with an emulsifier and an oil and fat, and mixing the resulting emulsion with a nucleic acid complex containing nucleic acid, one or more gelling agents and water. , A method for producing a nucleic acid complex mixture in which live lactic acid bacteria are protected.
により乳化し、得られた乳化物を、核酸と1種またはそ
れ以上のゲル化剤と水とを含む核酸複合体と混合し、乳
酸菌生菌を保護した核酸複合体混合物とすることによ
る、乳酸菌生菌を胃液から保護する方法。12. A lactic acid bacterium is prepared by emulsifying a liquid containing live lactic acid bacteria with an emulsifier and fats and oils, and mixing the obtained emulsion with a nucleic acid complex containing nucleic acid, one or more gelling agents and water. A method for protecting live lactic acid bacteria from gastric juice by using a nucleic acid complex mixture in which live bacteria are protected.
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