JP2003000290A

JP2003000290A - 光学活性（ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノールの製造法

Info

Publication number: JP2003000290A
Application number: JP2001191517A
Authority: JP
Inventors: Akira Shimizu; 昌清水; Michihiko Kataoka; 道彦片岡; Noriyuki Kizaki; 憲之木崎; Yoshihiko Yasohara; 良彦八十原
Original assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 2001-06-25
Filing date: 2001-06-25
Publication date: 2003-01-07
Also published as: WO2003000911A1; CZ2004119A3; EP1400594A1; US20040219658A1; EP1400594A4

Abstract

(57)【要約】【課題】医薬、農薬等の合成原料として有用な光学活
性（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）
エタノールを効率的にかつ工業的規模で製造す。【解決手段】２−クロロ−１−（３′−クロロフェニ
ル）エタノンに、該化合物を立体選択的に還元して
（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エ
タノールを生成する能力を有する微生物の菌体又はその
処理物を作用させ、（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−
クロロフェニル）エタノールを製造する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、光学活性（Ｒ）−
２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノール
の製造法に関する。光学活性（Ｒ）−２−クロロ−１−
（３′−クロロフェニル）エタノールは、医薬、農薬等
の合成原料として有用な化合物である。

【０００２】

【従来の技術】光学活性（Ｒ）−２−クロロ−１−
（３′−クロロフェニル）エタノールの製造方法として
は、２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノ
ンに、アシビア属やオガタエア属等に属する微生物また
はその処理物を作用させる方法が開示されている（特開
平４−２１８３８４、特開平１１−２１５９９５）。し
かし、これらの方法では反応時の基質の仕込み濃度が十
分に高いとは言えず、より効率的な方法の開発がのぞま
れていた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、光学活性
（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エ
タノールの効率的かつ工業的規模で実施可能な製造方法
を提供することを課題とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく検討を重ねた結果、２−クロロ−１−
（３′−クロロフェニル）エタノンを立体選択的に還元
し、光学活性（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロ
フェニル）エタノールに変換する能力を有する今までに
報告例のない酵素源を発見し、本発明を完成するに至っ
た。

【０００５】即ち、本発明は、２−クロロ−１−（３′
−クロロフェニル）エタノンに、２−クロロ−１−
（３′−クロロフェニル）エタノンを立体選択的に還元
して（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニ
ル）エタノールを生成する能力を有し、エシェリヒア
属、アエロバクター属、エンテロバクター属、クレブシ
エラ属、シトロバクター属、ラーネラ属、エルウィニア
属、セラチア属、プロテウス属、モーガネラ属、サルモ
ネラ属、アルカリゲネス属、コクリア属、アースロバク
ター属、ブレビバクテリウム属、セルロモナス属、アシ
ネトバクター属、アエロモナス属、バシラス属、アグロ
バクテリウム属、ノカルディオイデス属、ステノトロフ
ォモナス属、ジェンセニア属、マイコバクテリウム属、
ノカルディア属、ロドコッカス属、シュードノカルディ
ア属、ストレプトマイセス属、ストレプトスポランギウ
ム属、ロチア属、ウィリオプシス属、クライシア属、シ
テロマイセス属、サッカロマイコデス属、スポロボロマ
イセス属、ディポダスカス属、サッカロマイコプシス
属、スポリディオボルス属、ジゴサッカロマイセス属、
ハイフォピヒア属、ペニシリウム属、エクソフィアラ
属、スポロトリカム属、アクレモニウム属、パエシロマ
イセス属、バーティシリウム属、ティラクリディウム
属、ピトマイセス属、モノスポリウム属、イサリア属、
グロエオフィラム属、ストロビルルス属、又はクリニペ
リス属に属する微生物の培養液、菌体または菌体処理物
を作用させ、生成する（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′
−クロロフェニル）エタノールを採取することを特徴と
する（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニ
ル）エタノールの製造法である。

【０００６】

【発明の実施の形態】以下、本発明について詳述する。
本発明の２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エ
タノンおよび（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロ
フェニル）エタノールは、それぞれ以下の式（１）およ
び式（２）で示される化合物である。

【０００７】

【化１】

【０００８】

【化２】なお、以下の記載において、「％」は特に断らない限り
％（Ｗ／Ｖ）を意味する。

【０００９】本発明に用いる、２−クロロ−１−（３′
−クロロフェニル）エタノンを立体選択的に還元して
（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エ
タノールを生成する能力を有する微生物は、以下に説明
する方法によって見い出すことができる。

【００１０】例えば、ポリペプトン１％、肉エキス１
％、イーストエキス０．５％、塩化ナトリウム０．３％
からなる培地（ｐＨ７．０）５０ｍｌを５００ｍｌ容坂
口フラスコに入れ殺菌後、微生物を植え、３０℃で１〜
３日間振とうする。その後、生育した菌体を遠心分離に
より集め２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エ
タノン０．１〜０．５％およびグルコース５％を含んだ
リン酸緩衝液（ｐＨ６．５）５ｍｌに懸濁し、綿栓をし
た試験管中で１〜３日間３０℃で振とうする。

【００１１】この際、遠心分離により得た菌体をデシケ
ーター中またはアセトンにより乾燥したものを用いるこ
ともできる。さらに、これら微生物もしくはその処理物
と２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノン
を反応させる際に、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（ＮＡＤ）および／または酸化型ニコチンア
ミドアデニンジヌクレオチドりん酸（ＮＡＤＰ）とグル
コース脱水素酵素を添加してもよい。

【００１２】反応後、反応液と同体積の酢酸エチルを加
え抽出を行ない、生成した２−クロロ−１−（３′−ク
ロロフェニル）エタノール分離し、以下の条件にて高速
液体クロマトクロマトグラフィーにより分析する。

【００１３】カラム：ダイセル化学工業社製Ｃｈｉｒａ
ｌｃｅｌＯＪ（４．６ｘ２５０ｍｍ）、溶離液：ヘキ
サン／イソプロパノール＝３９／１（Ｖ／Ｖ）、流速：
１ｍｌ／ｍｉｎ、検出：２１０ｎｍ、カラム温度：室
温、溶出時間２−クロロ−１−（３′−クロロフェニ
ル）エタノン：２８分、（Ｒ）−２−クロロ−１−
（３′−クロロフェニル）エタノール：３７分、（Ｓ）
−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノー
ル：４５分。

【００１４】本発明に使用しうる微生物としては、エシ
ェリヒア属、アエロバクター属、エンテロバクター属、
クレブシエラ属、シトロバクター属、ラーネラ属、エル
ウィニア属、セラチア属、プロテウス属、モーガネラ
属、サルモネラ属、アルカリゲネス属、コクリア属、ア
ースロバクター属、ブレビバクテリウム属、セルロモナ
ス属、アシネトバクター属、アエロモナス属、バシラス
属、アグロバクテリウム属、ノカルディオイデス属、ス
テノトロフォモナス属、ジェンセニア属、マイコバクテ
リウム属、ノカルディア属、ロドコッカス属、シュード
ノカルディア属、ストレプトマイセス属、ストレプトス
ポランギウム属、ロチア属、ウィリオプシス属、クライ
シア属、シテロマイセス属、サッカロマイコデス属、ス
ポロボロマイセス属、ディポダスカス属、サッカロマイ
コプシス属、スポリディオボルス属、ジゴサッカロマイ
セス属、ハイフォピヒア属、ペニシリウム属、エクソフ
ィアラ属、スポロトリカム属、アクレモニウム属、パエ
シロマイセス属、バーティシリウム属、ティラクリディ
ウム属、ピトマイセス属、モノスポリウム属、イサリア
属、グロエオフィラム属、ストロビルルス属、クリニペ
リス属に属する微生物が使用しうる。

【００１５】具体的には例えば、エシェリヒア・コリ
（Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）ＩＦＯ３３０１、
エシェリヒア・コリ（Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌ
ｉ）ＩＦＯ１３９６５、アエロバクター・アエロゲネス
（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ）ＩＦＯ
３１６６、エンテロバクター・クロアカエ（Ｅｎｔｅｒ
ｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ）ＩＦＯ３３２０、ク
レブシエラ・ニューモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＩＦＯ３３１８、クレブシエラ
・ニューモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａｅ）ＩＦＯ１２０５９、シトロバクター・フロ
インディー（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｆｒｅｕｎｄｉ
ｉ）ＩＦＯ１３５４７、シトロバクター・フロインディ
ー（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｆｒｅｕｎｄｉｉ）ＩＦ
Ｏ１２６８１、ラーネラ・アクアティリス（Ｒａｈｎｅ
ｌｌａａｑｕａｔｉｌｉｓ）ＩＦＯ１３５４４、エル
ウィニア・カロトボラ・サブスピーシズ・カロトボラ
（Ｅｒｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａｓｕｂｓ
ｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）ＩＦＯ３３８０、セラチ
ア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓ
ｃｅｎｓ）ＩＦＯ３０５４、プロテウス・ミラビリス
（Ｐｒｏｔｅｕｓｍｉｒａｂｉｌｉｓ）ＩＦＯ３８４
９、モーガネラ・モーガニー・サブスピーシズ・モーガ
ニー（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａｍｏｒｇａｎｉｉｓｕ
ｂｓｐ．ｍｏｒｇａｎｉｉ）ＩＦＯ３８４８、サルモ
ネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙ
ｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ＩＦＯ１２５２９、サルモネラ・
ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍ）ＩＦＯ１３２４５、アルカリゲネス・ファ
エカリス（Ａｌｃａｒｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉ
ｓ）ＩＦＯ１３１１１、アルカリゲネス・キシロスオキ
シダンス・サブスピーシズ・デニトリフィカンス（Ａｌ
ｃａｒｉｇｅｎｅｓｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓｓｕ
ｂｓｐ．ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）ＩＦＯ１２６
６９、コクリア・ロセア（Ｋｏｃｕｒｉａｒｏｓｅ
ａ）ＩＦＯ３７６４、アースロバクター・パセンス（Ａ
ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｐａｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１２１
３９、アースロバクター・プロトフォーミアエ（Ａｒｔ
ｈｒｏｂａｃｔｅｒｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａｅ）Ｉ
ＦＯ１２１２８、ブレビバクテリウム・リーネンス（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｉｎｅｎｓ）ＩＦＯ１
２１４１、セルロモナス・フィミ（Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏ
ｎａｓｆｉｍｉ）ＩＡＭ１２１０７、アシネトバクター
・カルコアセティカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ
ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）ＩＦＯ１２５５２、アエ
ロモナス・ハイドロフィラ・サブスピーシズ・ハイドロ
フィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ
ｓｕｂｓｐ．ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）ＩＦＯ３８２
０、バシラス・サチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔ
ｉｌｉｓ）ＩＦＯ３００９、バシラス・チューリンゲン
シス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉ
ｓ）ＩＦＯ３９５１、アグロバクテリウム・ツメファシ
エンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃ
ｉｅｎｓ）ＩＦＯ１２６６７、ノカルディオイデス・シ
ンプレックス（Ｎｏｃａｒｄｉｏｉｄｅｓｓｉｍｐｌ
ｅｘ）ＩＦＯ１２６７９、ステノトロフォモナス・マル
トフィリア（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓｍａ
ｌｔｏｐｈｉｌｉａ）ＩＦＯ１２６９０、ジェンセニア
・カニクルリア（Ｊｅｎｓｅｎｉａｃａｎｉｃｒｕｒ
ｉａ）ＩＦＯ１３９１４、マイコバクテリウム・スメグ
マティス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｍｅｇｍａ
ｔｉｓ）ＩＦＯ３１５４、マイコバクテリウム・フレイ
（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｈｌｅｉ）ＩＦＯ３
１５８、ノカルディア・グロベルーラ（Ｎｏｃａｒｄｉ
ａｇｌｏｂｅｒｕｌａ）ＩＦＯ１３５１０、ノカルデ
ィア・カーネア（Ｎｏｃａｒｄｉａｃａｒｎｅａ）Ｉ
ＦＯ１４４０３、ロドコッカス・ロドクロウス（Ｒｈｏ
ｄｏｃｏｃｃｕｓｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ）ＩＦＯ３
３３８、ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃ
ｏｃｃｕｓｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＩＦＯ１２３
２０、シュードノカルディア・オートトロフィカ（Ｐｓ
ｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃ
ａ）ＩＦＯ１２７４３、ストレプトマイセス・グリセオ
ルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｌｕ
ｓ）ＩＦＯ３４０２、ストレプトマイセス・スカビエス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｃａｂｉｅｓ）ＩＦＯ
３１１１、ストレプトマイセス・ラクタムデュランス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌａｃｔａｍｄｕｒａｎ
ｓ）ＩＦＯ１３３０５、ストレプトスポランギウム・ロ
セウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍｒｏｓ
ｅｕｍ）ＩＦＯ３７７６、ロチア・デントカリオサ（Ｒ
ｏｔｈｉａｄｅｎｔｏｃａｒｉｏｓａ）ＩＦＯ１２５３
１、ウィリオプシス・サターナス・バー・サターナス
（Ｗｉｌｌｉｏｐｓｉｓｓａｔｕｒｎｕｓｖａｒ．
ｓａｔｕｒｎｕｓ）ＩＦＯ０１２５、クライシア・カプ
スラータ（Ｋｕｒａｉｓｈｉａｃａｐｓｕｌａｔａ）
ＩＦＯ０９７４、シテロマイセス・マトリテンシス（Ｃ
ｉｔｅｒｏｍｙｃｅｓｍａｔｒｉｔｅｎｓｉｓ）ＩＦ
Ｏ０９５４、サッカロマイコデス・ルドウィギー（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｄｅｓｌｕｄｗｉｇｉｉ）ＩＦ
Ｏ１０４３、スポロボロマイセス・サルモニカラー（Ｓ
ｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓｓａｌｍｏｎｉｃｏｌｏ
ｒ）ＩＦＯ１０３８、スポロボロマイセス・ロセウス
（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓｒｏｓｅｕｓ）ＩＦ
Ｏ１１０６、ディポダスカス・アーミラリエ（Ｄｉｐｏ
ｄａｓｃｕｓａｒｍｉｌｌａｒｉａｅ）ＩＦＯ０１０
２、ディポダスカス・テトラスペルマ（Ｄｉｐｏｄａｓ
ｃｕｓｔｅｔｒａｓｕｐｅｒｍａ）ＣＢＳ７６５．７
０、サッカロマイコプシス・カプスラリス（Ｓａｃｃｈ
ａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓｃａｐｓｕｌａｒｉｓ）ＩＦ
Ｏ０６７２、スポリディオボルス・ジョンソニー（Ｓｐ
ｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＩＦＯ
６９０３、ジゴサッカロマイセス・ロキシー（Ｚｙｇｏ
ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｒｏｕｘｉｉ）ＩＦＯ０
４９３、ハイフォピヒア・バートニー（Ｈｙｐｈｏｐｉ
ｃｈｉａｂｕｒｔｏｎｉｉ）ＩＦＯ０８４４、ペニシ
リウム・クリソゲヌス（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃｈ
ｒｙｓｏｇｅｎｕｓ）ＩＦＯ４６２６、ペニシリウム・
オキサリカム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｏｘａｌｉｃ
ｕｍ）ＩＦＯ５７４８、ペニシリウム・ルブラム（Ｐｅ
ｎｉｃｉｌｌｉｕｍｒｕｂｒｕｍ）ＩＦＯ６５８０、
ペニシリウム・リラシナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｌｉｌａｃｉｎｕｍ）ＩＦＯ５７５２、エクソフィアラ
・マンソニー（Ｅｘｏｐｈｉａｌａｍａｎｓｏｎｉ
ｉ）ＩＦＯ６８８０、スポロトリカム・オーランティア
カム（Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｕｍａｕｒａｎｔｉａｃ
ｕｍ）ＩＦＯ９３８１、アクレモニウム・ブチリ（Ａｃ
ｒｅｍｏｎｉｕｍｂｕｔｙｒｉ）ＩＦＯ８５８０、パ
エシロマイセス・カーネウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅ
ｓｃａｒｎｅｕｓ）ＩＦＯ８２９２、パエシロマイセ
ス・カーネウス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｃａｒｎ
ｅｕｓ）ＩＦＯ８２９３、バーティシリウム・アルボ−
アトラム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍａｌｂｏ−ａｔ
ｒｕｍ）ＩＦＯ９４７０、バーティシリウム・ダーリア
エ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ）ＩＦ
Ｏ９７６５、バーティシリウム・プサリオタエ（Ｖｅｒ
ｔｉｃｉｌｌｉｕｍｐｓａｌｌｉｏｔａｅ）ＩＦＯ３
０６１９、ティラクリディウム・フミコーラ（Ｔｉｌａ
ｃｈｌｉｄｉｕｍｈｕｍｉｃｏｌａ）ＩＦＯ５６９
６、ピトマイセス・チャータラム（Ｐｉｔｏｍｙｃｅｓ
ｃｈａｒｔａｒｕｍ）ＡＴＣＣ２６９５３、モノスポ
リウム・バーラテンシス（Ｍｏｎｏｓｐｏｒｉｕｍｂ
ｈａｒａｔｅｎｓｉｓ）ＡＴＣＣ１８９６７、イサリア
・ジャポニカ（Ｉｓａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａ）ＩＦ
Ｏ３０３６７、グロエオフィラム・トラベウム（Ｇｌｏ
ｅｏｐｈｙｌｌｕｍｔｒａｂｅｕｍ）ＩＦＯ６５０
９、ストロビルルス・ステファノシスティス（Ｓｔｒｏ
ｂｉｌｕｒｕｓｓｔｅｐｈａｎｏｃｙｓｔｉｓ）ＩＦ
Ｏ３０１９４、クリニペリス・スチピタリア（Ｃｒｉｎ
ｉｐｅｌｌｉｓｓｔｉｐｉｔａｒｉａ）ＩＦＯ３０２
５９などを用いることができる。

【００１６】これら微生物は一般に、入手または購入が
容易な保存株から得ることができる。また、自然界から
分離することもできる。なお、これらの微生物に変異を
生じさせてより本反応に有利な性質を有する菌株を得る
こともできる。

【００１７】これらの微生物の培養には、通常これらの
微生物が資化しうる栄養源であれば、特に制限なく使用
しうる。例えば、グルコース、シュークロース、マルト
ース等の糖類、乳酸、酢酸、クエン酸、プロピオン酸等
の有機酸類、エタノール、グリセリン等のアルコール
類、パラフィン等の炭化水素類、大豆油、菜種油等の油
脂類、またはこれらの混合物等の炭素源や、硫酸アンモ
ニウム、リン酸アンモニウム、尿素、酵母エキス、肉エ
キス、ペプトン、コーンスチープリカー等の窒素源を混
合することもできる。更に、その他の無機塩、ビタミン
類等の栄養源を適宜混合することもできる。

【００１８】微生物の培養は通常一般の条件により行な
うことができ、例えば、ｐＨ４．０〜９．５、温度範囲
２０℃〜４５℃の範囲で、好気的に１０〜９６時間培養
する。

【００１９】２−クロロ−１−（３′−クロロフェニ
ル）エタノンに微生物を反応させる場合においては、通
常、上記微生物の培養液をそのまま反応に使用すること
もできるが、培養液の濃縮物も用いることができる。ま
た、培養液中の成分が反応に悪影響を与える場合には、
培養液を遠心分離等により処理して得られる菌体または
菌体処理物を使用することが好ましい。

【００２０】上記微生物の菌体処理物としては特に限定
されず、例えば、アセトンや五酸化二リンによる脱水処
理またはデシケーターや扇風機を利用した乾燥によって
得られる乾燥菌体、界面活性剤処理物、溶菌酵素処理
物、固定化菌体または菌体を破砕した無細胞抽出標品、
さらにそれらを加熱処理したものなどをあげることがで
きる。更に、培養物より不斉還元反応を触媒する酵素を
精製し、これを使用してもよい。

【００２１】還元反応の際には、基質である２−クロロ
−１−（３′−クロロフェニル）エタノンを反応の初期
に一括して添加してもよく、反応の進行にあわせて分割
して添加してもよい。

【００２２】また、反応時の温度は通常１０〜６０℃、
好ましくは、２０〜４０℃であり。反応時のｐＨは２．
５〜９、好ましくは、５〜９である。

【００２３】反応液中の酵素源の量はこれらの基質を還
元する能力に応じ適宜決定すればよい。また、反応液中
の基質濃度は０．０１〜５０％が好ましく、より好まし
くは、０．１〜３０％である。

【００２４】反応は通常、振とうまたは通気攪拌しなが
ら行なう。反応時間は基質濃度、酵素源の量およびその
他の反応条件により適宜決定される。通常、２〜１６８
時間で反応が終了するように各条件を設定することが好
ましい。

【００２５】還元反応を促進させるために、反応液にグ
ルコース、エタノールなどのエネルギー源を１〜３０％
の割合で加えると優れた結果が得られるので好ましい。
また、一般に生物学的方法による還元反応に必要とされ
ている還元型ニコチンアミド・アデニンジヌクレオチド
（ＮＡＤＨ）、還元型ニコチンアミド・アデニンジヌク
レオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）等の補酵素を添加するこ
とにより、反応を促進させることもできる。具体的に
は、反応液に直接これらを添加してもよく、ＮＡＤＨ、
ＮＡＤＰＨを生成する反応系を酸化型の補酵素とともに
反応液に添加してもよい。例えば、ギ酸脱水素酵素がギ
酸から二酸化炭素と水とを生成する際にＮＡＤをＮＡＤ
Ｈに還元する反応系や、グルコース脱水素酵素がグルコ
ースからグルコノラクトンを生成する際にＮＡＤまたは
ＮＡＤＰをＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨにそれぞれ還元す
る反応系を利用することができる。

【００２６】また、トリトン（ナカライテスク社製）、
スパン（関東化学社製）、ツイーン（ナカライテスク社
製）などの界面活性剤を反応液に添加することも効果的
である。

【００２７】さらに、基質および／または還元反応の生
成物であるアルコール体による反応の阻害を回避する目
的で、酢酸エチル、酢酸ｎ−ブチル、イソプロピルエー
テル、トルエンなどの水に不溶な有機溶媒を反応液に添
加してもよい。さらに、基質の溶解度を高める目的で、
メタノール、エタノール、アセトン、テトラヒドロフラ
ン、ジメチルスルホキシドなどの水に可溶な有機溶媒を
添加することもできる。

【００２８】還元反応後、反応液を直接、あるいは菌体
等を分離した後、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン等の溶剤で
抽出し、その抽出物を脱溶剤することにより（Ｒ）−２
−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノールを
得ることができる。さらに、これを蒸留あるいはシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー等により精製して、より
高純度の同化合物を得ることもできる。

【００２９】

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定され
るものではない。なお、以下の記載において、「％」は
特に断らない限り％（Ｗ／Ｖ）を意味する。

【００３０】（実施例１）ポリペプトン１％、肉エキス
１％、イーストエキス０．５％、塩化ナトリウム０．３
％からなる培地（ｐＨ７．０）５０ｍｌを５００ｍｌ容
坂口フラスコに入れ殺菌後、表１に示す微生物をそれぞ
れ植菌した。そして３０℃で２日間好気的に振とう培養
を行なった。この培養液から遠心分離によって菌体を集
め、２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノ
ン１％、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（ＮＡＤ）０．０６％、酸化型ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドりん酸（ＮＡＤＰ）０．０６％、グルコ
ース５％、グルコース脱水素酵素（商品名：”Ａｍａｎ
ｏ２”、天野エンザイム社製）１４．３Ｕ／ｍｌを含
有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）５ｍｌに懸
濁し、試験管に移した後綿栓をして３０℃、２４時間振
とうした。反応後、反応液を反応液の２倍の体積の酢酸
エチルで抽出し、酢酸エチル層を高速液体クロマトグラ
フィーで分析して、反応率および光学純度を測定した。
その結果を表１に示す。

【００３１】

【表１】

【００３２】（実施例２）表２に示す微生物について、
グルコース０．４％、モルトエキス１．０％、イースト
エキス０．４％の組成からなる培地（ｐＨ７．２）を用
いたほかは実施例１と同様の操作を行ない、反応率およ
び光学純度を測定した。その結果を表２に示す。

【００３３】

【表２】

【００３４】（実施例３）表３に示す微生物について、
モルトエキス２％、グルコース２％、ペプトン０．３
％、酵母エキス０．３％の組成からなる培地（ｐＨ６．
５）を用いたほかは実施例１と同様の操作を行ない、反
応率および光学純度を測定した。その結果を表３に示
す。

【００３５】

【表３】

【００３６】（実施例４）ポリペプトン１％、肉エキス
１％、イーストエキス０．５％、塩化ナトリウム０．３
％からなる培地（ｐＨ７．０）５０ｍｌを５００ｍｌ容
坂口フラスコに入れ殺菌後、ノカルディア・グロベルー
ラ（Ｎｏｃａｒｄｉａｇｌｏｂｅｒｕｌａ）ＩＦＯ１
３５１０を植菌した。これを３０℃で２日間好気的に振
とうし、前培養を行なった。同培地３６００ｍｌを４０
０ｍｌずつ２０００ｍｌ容坂口フラスコ９本に分注し殺
菌後、上記前培養液を５ｍｌずつ植菌し、３０℃で２日
間好気的に振とう培養を行なった。この培養液から遠心
分離によって菌体を集め、１００ｍＭりん酸緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）５０ｍｌに懸濁し、ＳＯＮＩＦＩＲＥ２５０
型超音波ホモゲナイザー（ＢＲＡＮＳＯＮ社製）を用い
て破砕した。この菌体破砕液を６５℃の湯浴中で２０分
間攪拌した後、沈殿物を遠心除去し、粗酵素液を得た。
本粗酵素液１８ｍｌに２−クロロ−１−（３′−クロロ
フェニル）エタノン１ｇ、酸化型ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチド（ＮＡＤ）４ｍｇ、グルコース２ｇ、
グルコース脱水素酵素（商品名：商品名：”Ａｍａｎｏ
２”、天野エンザイム社製）６００Ｕ、酢酸ｎ−ブチ
ル２ｍｌを添加し、５Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を用
いてｐＨ６．５に維持しながら３０℃で２４時間攪拌し
た。反応終了後反応液を酢酸エチルで抽出し、脱溶剤
後、抽出物を高速液体クロマトグラフィーで分析して、
反応率および光学純度を測定した。その結果、収率４
６．９％で、光学純度９９．５％ｅｅの（Ｒ）−２−ク
ロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノールが得ら
れた。

【００３７】

【発明の効果】本発明によれば、光学活性（Ｒ）−２−
クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノールを効
率的にかつ工業的規模で生産することが可能となる。得
られる光学活性（Ｒ）−２−クロロ−１−（３′−クロ
ロフェニル）エタノールは医薬品等の合成原料として有
用である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｐ 7/02 Ｃ１２Ｒ 1:05） (Ｃ１２Ｐ 7/02 Ｃ１２Ｒ 1:34） (72)発明者八十原良彦兵庫県高砂市高砂町宮前町１−８鐘淵化学工業株式会社高砂工業所内Ｆターム(参考） 4B064 AC17 CA02 CA03 CA21 CB18 CC01 CC06 CC12 CD05 CD09 CD12 DA01 DA16

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】２−クロロ−１−（３′−クロロフェニ
ル）エタノンに、２−クロロ−１−（３′−クロロフェ
ニル）エタノンを立体選択的に還元して（Ｒ）−２−ク
ロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノールを生成
する能力を有し、エシェリヒア属、アエロバクター属、
エンテロバクター属、クレブシエラ属、シトロバクター
属、ラーネラ属、エルウィニア属、セラチア属、プロテ
ウス属、モーガネラ属、サルモネラ属、アルカリゲネス
属、コクリア属、アースロバクター属、ブレビバクテリ
ウム属、セルロモナス属、アシネトバクター属、アエロ
モナス属、バシラス属、アグロバクテリウム属、ノカル
ディオイデス属、ステノトロフォモナス属、ジェンセニ
ア属、マイコバクテリウム属、ノカルディア属、ロドコ
ッカス属、シュードノカルディア属、ストレプトマイセ
ス属、ストレプトスポランギウム属、ロチア属、ウィリ
オプシス属、クライシア属、シテロマイセス属、サッカ
ロマイコデス属、スポロボロマイセス属、ディポダスカ
ス属、サッカロマイコプシス属、スポリディオボルス
属、ジゴサッカロマイセス属、ハイフォピヒア属、ペニ
シリウム属、エクソフィアラ属、スポロトリカム属、ア
クレモニウム属、パエシロマイセス属、バーティシリウ
ム属、ティラクリディウム属、ピトマイセス属、モノス
ポリウム属、イサリア属、グロエオフィラム属、ストロ
ビルルス属、又はクリニペリス属に属する微生物の培養
液、菌体、又は菌体処理物を作用させ、生成する（Ｒ）
−２−クロロ−１−（３′−クロロフェニル）エタノー
ルを採取することを特徴とする（Ｒ）−２−クロロ−１
−（３′−クロロフェニル）エタノールの製造法。
【請求項２】微生物が、エシェリヒア・コリ、アエロ
バクター・アエロゲネス、エンテロバクター・クロアカ
エ、クレブシエラ・ニューモニアエ、シトロバクター・
フロインディー、ラーネラ・アクアティリス、エルウィ
ニア・カロトボラ、セラチア・マルセッセンス、プロテ
ウス・ミラビリス、モーガネラ・モーガニー、サルモネ
ラ・ティフィムリウム、アルカリゲネス・ファエカリ
ス、アルカリゲネス・キシロスオキシダンス、コクリア
・ロセア、アースロバクター・パセンス、アースロバク
ター・プロトフォーミアエ、ブレビバクテリウム・リー
ネンス、セルロモナス・フィミ、アシネトバクター・カ
ルコアセティカス、アエロモナス・ハイドロフィラ、バ
シラス・サチリス、バシラス・チューリンゲンシス、ア
グロバクテリウム・ツメファシエンス、ノカルディオイ
デス・シンプレックス、ステノトロフォモナス・マルト
フィリア、ジェンセニア・カニクルリア、マイコバクテ
リウム・スメグマティス、マイコバクテリウム・フレ
イ、ノカルディア・グロベルーラ、ノカルディア・カー
ネア、ロドコッカス・ロドクロウス、ロドコッカス・エ
リスロポリス、シュードノカルディア・オートトロフィ
カ、ストレプトマイセス・グリセオルス、ストレプトマ
イセス・スカビエス、ストレプトマイセス・ラクタムデ
ュランス、ストレプトスポランギウム・ロセウム、ロチ
ア・デントカリオサ、ウィリオプシス・サターナス、ク
ライシア・カプスラータ、シテロマイセス・マトリテン
シス、サッカロマイコデス・ルドウィギー、スポロボロ
マイセス・サルモニカラー、スポロボロマイセス・ロセ
ウス、ディポダスカス・アーミラリエ、ディポダスカス
・テトラスペルマ、サッカロマイコプシス・カプスラリ
ス、スポリディオボルス・ジョンソニー、ジゴサッカロ
マイセス・ロキシー、ハイフォピヒア・バートニー、ペ
ニシリウム・クリソゲヌス、ペニシリウム・オキサリカ
ム、ペニシリウム・ルブラム、ペニシリウム・リラシナ
ム、エクソフィアラ・マンソニー、スポロトリカム・オ
ーランティアカム、アクレモニウム・ブチリ、パエシロ
マイセス・カーネウス、バーティシリウム・アルボ−ア
トラム、バーティシリウム・ダーリアエ、バーティシリ
ウム・プサリオタエ、ティラクリディウム・フミコー
ラ、ピトマイセス・チャータラム、モノスポリウム・バ
ーラテンシス、イサリア・ジャポニカ、グロエオフィラ
ム・トラベウム、ストロビルルス・ステファノシスティ
ス、又はクリニペリス・スチピタリアである請求項１記
載の製造法。