JP2003088381A - 新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法 - Google Patents
新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法Info
- Publication number
- JP2003088381A JP2003088381A JP2001283583A JP2001283583A JP2003088381A JP 2003088381 A JP2003088381 A JP 2003088381A JP 2001283583 A JP2001283583 A JP 2001283583A JP 2001283583 A JP2001283583 A JP 2001283583A JP 2003088381 A JP2003088381 A JP 2003088381A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- thr
- peptide
- adsorbent
- immunoglobulin
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/16—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/06—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 体液(例えば血液、血漿など)に存在する免疫
グロブリンおよび／または免疫複合体を体液の前処理な
しで効率よく選択的に吸着できる吸着材、吸着装置、吸
着方法を提供する。 【解決手段】 水不溶性担体に免疫グロブリンおよび／
または免疫複合体に結合活性を有し、かつ、熱安定性に
優れたペプチド化合物を固定することにより、医療用と
して必須な滅菌操作に対する安定性を持ち、著しく優れ
た吸着能を持つ吸着材を得ることができる。また、この
吸着剤を充填した吸着器を提供する。
グロブリンおよび／または免疫複合体を体液の前処理な
しで効率よく選択的に吸着できる吸着材、吸着装置、吸
着方法を提供する。 【解決手段】 水不溶性担体に免疫グロブリンおよび／
または免疫複合体に結合活性を有し、かつ、熱安定性に
優れたペプチド化合物を固定することにより、医療用と
して必須な滅菌操作に対する安定性を持ち、著しく優れ
た吸着能を持つ吸着材を得ることができる。また、この
吸着剤を充填した吸着器を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体に親和性を持つ新規のペプチ
ド、該ペプチドをコードするヌクレオチド配列、組み換
えDNA、該DNA分子を含有する微生物、該ペプチドの生産
におけるその微生物または該DNA分子を使用することで
ある。さらに該ペプチドの免疫グロブリンおよび／また
は免疫複合体親和性を利用した例として、水溶液とりわ
け体液（例えば血液、血漿、血清など）に存在する免疫
グロブリンおよび／または免疫複合体を選択的に吸着す
る吸着材、この吸着材を用いた吸着器、ならびに免疫グ
ロブリンおよび／または免疫複合体の吸着方法に関する
ものである。
よび／または免疫複合体に親和性を持つ新規のペプチ
ド、該ペプチドをコードするヌクレオチド配列、組み換
えDNA、該DNA分子を含有する微生物、該ペプチドの生産
におけるその微生物または該DNA分子を使用することで
ある。さらに該ペプチドの免疫グロブリンおよび／また
は免疫複合体親和性を利用した例として、水溶液とりわ
け体液（例えば血液、血漿、血清など）に存在する免疫
グロブリンおよび／または免疫複合体を選択的に吸着す
る吸着材、この吸着材を用いた吸着器、ならびに免疫グ
ロブリンおよび／または免疫複合体の吸着方法に関する
ものである。
【０００２】
【従来の技術】免疫グロブリンおよび／または免疫複合
体に親和性を示すタンパク質は種々知られているが、中
でもプロテインA、プロテインGが良く研究されている。
プロテインA、プロテインG共に免疫グロブリンおよび／
または免疫複合体に強い親和性を持つが、プロテインA
はIgG3に対する親和性が低いのに対してプロテインGはI
gG3に対しても結合する（特許第02764021号公報）。ま
た、プロテインG遺伝子はC1，C2，C3と呼ばれる3種の免
疫グロブリンおよび／または免疫複合体結合ペプチドを
コードするヌクレオチド配列を有していることが明らか
にされており、対応するアミノ酸配列は配列表の配列番
号３，４，５に示した下記の通りである（特許第027640
21号公報）。 C1（配列番号３） Thr Tyr Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu C2（配列番号４） Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu C3（配列番号５） Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu さらにC2とIgG（Fc）の複合体のX線構造解析からC2のGl
u26，Lys27，Lys30，Gln31，Asn34，Asp39，Glu41，Trp
42がFcに結合することが明らかにされている（Sauer−E
riksson AE， KleyweGt GJ， Uhlen M， Jones
TA Crystal structure of the C2 fraGment of
streptococcal protein G in complex with th
e Fc domain of human IgG． Structure 1995
Mar 15；3（3）：265−78）。
体に親和性を示すタンパク質は種々知られているが、中
でもプロテインA、プロテインGが良く研究されている。
プロテインA、プロテインG共に免疫グロブリンおよび／
または免疫複合体に強い親和性を持つが、プロテインA
はIgG3に対する親和性が低いのに対してプロテインGはI
gG3に対しても結合する（特許第02764021号公報）。ま
た、プロテインG遺伝子はC1，C2，C3と呼ばれる3種の免
疫グロブリンおよび／または免疫複合体結合ペプチドを
コードするヌクレオチド配列を有していることが明らか
にされており、対応するアミノ酸配列は配列表の配列番
号３，４，５に示した下記の通りである（特許第027640
21号公報）。 C1（配列番号３） Thr Tyr Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu C2（配列番号４） Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu C3（配列番号５） Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu さらにC2とIgG（Fc）の複合体のX線構造解析からC2のGl
u26，Lys27，Lys30，Gln31，Asn34，Asp39，Glu41，Trp
42がFcに結合することが明らかにされている（Sauer−E
riksson AE， KleyweGt GJ， Uhlen M， Jones
TA Crystal structure of the C2 fraGment of
streptococcal protein G in complex with th
e Fc domain of human IgG． Structure 1995
Mar 15；3（3）：265−78）。
【０００３】免疫グロブリンおよび／または免疫複合体
に親和性を示すペプチド、タンパク質の重要な利用の一
つとして免疫グロブリンおよび／または免疫複合体の精
製、分離、除去を目的とする吸着体への適用が考えられ
る。しかし、我々は、上記C1，C2，C3ペプチドの熱安定
性が低く高圧蒸気滅菌に耐えられないこと、および放射
線滅菌を施すと結合活性が著しく低下することを見出し
ている。
に親和性を示すペプチド、タンパク質の重要な利用の一
つとして免疫グロブリンおよび／または免疫複合体の精
製、分離、除去を目的とする吸着体への適用が考えられ
る。しかし、我々は、上記C1，C2，C3ペプチドの熱安定
性が低く高圧蒸気滅菌に耐えられないこと、および放射
線滅菌を施すと結合活性が著しく低下することを見出し
ている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、かかる問題
に鑑み、プロテインG由来のペプチドのFc結合アミノ酸
（前述）をも含めてアミノ酸の最適化を行い、免疫グロ
ブリンおよび／または免疫複合体に対する親和性は元の
ペプチド（上述C3）並あるいはそれ以上であり、かつ、
滅菌操作に対する安定性を持つ新規なペプチド、該ペプ
チドをコードするヌクレオチド配列、組み換えDNA、該D
NA分子を含有する微生物、該ペプチドの生産におけるそ
の微生物または該DNA分子を使用すること、さらにその
利用例である、水溶液とりわけ体液（例えば血液、血
漿、血清など）に存在する免疫グロブリンおよび／また
は免疫複合体を選択的に吸着する吸着材を提供し、更
に、この吸着材を用いた吸着器、ならびに免疫グロブリ
ンおよび／または免疫複合体の吸着方法を提供せんとす
るものである。
に鑑み、プロテインG由来のペプチドのFc結合アミノ酸
（前述）をも含めてアミノ酸の最適化を行い、免疫グロ
ブリンおよび／または免疫複合体に対する親和性は元の
ペプチド（上述C3）並あるいはそれ以上であり、かつ、
滅菌操作に対する安定性を持つ新規なペプチド、該ペプ
チドをコードするヌクレオチド配列、組み換えDNA、該D
NA分子を含有する微生物、該ペプチドの生産におけるそ
の微生物または該DNA分子を使用すること、さらにその
利用例である、水溶液とりわけ体液（例えば血液、血
漿、血清など）に存在する免疫グロブリンおよび／また
は免疫複合体を選択的に吸着する吸着材を提供し、更
に、この吸着材を用いた吸着器、ならびに免疫グロブリ
ンおよび／または免疫複合体の吸着方法を提供せんとす
るものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を達成せんとして、化学的および遺伝子工学的手法を用
いて数多くのペプチドを取得し、得られたペプチドの特
徴を種々の科学的手法を駆使することにより本発明を完
成させるに至った。すなわち、本発明は、配列表の配列
番号１で示す次のアミノ酸配列をもつ免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体親和性ペプチド、配列表の配列
番号２で示す次の塩基配列の少なくとも一つからなるヌ
クレオチド配列、配列表の配列番号１で示す次のアミノ
酸配列をコードするヌクレオチド配列を一つ又はそれ以
上有する組み換えDNAを少なくとも一つ含有する微生
物、配列表の配列番号１で示すアミノ酸配列の少なくと
も１つを含有し、70個以下のアミノ酸残基から成るペプ
チドを水不溶性担体に固定化したことを特徴とする免疫
グロブリンおよび／または免疫複合体の吸着材、該吸着
材と免疫グロブリンおよび／または免疫複合体を含む体
液を接触させることを特徴とする体液中の免疫グロブリ
ンおよび／または免疫複合体の吸着方法、液の入口、出
口を有し、かつ少なくとも１つのフィルターを内蔵した
容器内に該吸着材を充填してなる吸着器に関する。
を達成せんとして、化学的および遺伝子工学的手法を用
いて数多くのペプチドを取得し、得られたペプチドの特
徴を種々の科学的手法を駆使することにより本発明を完
成させるに至った。すなわち、本発明は、配列表の配列
番号１で示す次のアミノ酸配列をもつ免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体親和性ペプチド、配列表の配列
番号２で示す次の塩基配列の少なくとも一つからなるヌ
クレオチド配列、配列表の配列番号１で示す次のアミノ
酸配列をコードするヌクレオチド配列を一つ又はそれ以
上有する組み換えDNAを少なくとも一つ含有する微生
物、配列表の配列番号１で示すアミノ酸配列の少なくと
も１つを含有し、70個以下のアミノ酸残基から成るペプ
チドを水不溶性担体に固定化したことを特徴とする免疫
グロブリンおよび／または免疫複合体の吸着材、該吸着
材と免疫グロブリンおよび／または免疫複合体を含む体
液を接触させることを特徴とする体液中の免疫グロブリ
ンおよび／または免疫複合体の吸着方法、液の入口、出
口を有し、かつ少なくとも１つのフィルターを内蔵した
容器内に該吸着材を充填してなる吸着器に関する。
【０００６】
【発明の実施の形態】先ず、特許第02764021号公報に記
載された比較対照となるペプチド、 に対応し、ベクターに挿入するための制限酵素サイトを
もつDNAとして配列表の配列番号７（塩基配列A）を調製
した。上記塩基配列の制限酵素サイト（NdeI，HindII
I）は、後述する実施例に用いたベクター（pUCNT：国際
公開WO94／03613公報）に合わせるためのものであり、
制限酵素サイト（およびベクター）が異なればその制限
酵素サイトに合わせる必要があるが、当分野の常識であ
るので詳細な説明は省略する。塩基配列AをベクターpUC
NTに挿入し、これを用いて大腸菌（HB101）を形質転換
し、菌体を培養、破砕、上清を精製してペプチドを得
た。このペプチドを担体に固定化して免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体吸着体を得たがγ線照射（25kG
y）により免疫グロブリンおよび／または免疫複合体吸
着能は大きく低下した。
載された比較対照となるペプチド、 に対応し、ベクターに挿入するための制限酵素サイトを
もつDNAとして配列表の配列番号７（塩基配列A）を調製
した。上記塩基配列の制限酵素サイト（NdeI，HindII
I）は、後述する実施例に用いたベクター（pUCNT：国際
公開WO94／03613公報）に合わせるためのものであり、
制限酵素サイト（およびベクター）が異なればその制限
酵素サイトに合わせる必要があるが、当分野の常識であ
るので詳細な説明は省略する。塩基配列AをベクターpUC
NTに挿入し、これを用いて大腸菌（HB101）を形質転換
し、菌体を培養、破砕、上清を精製してペプチドを得
た。このペプチドを担体に固定化して免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体吸着体を得たがγ線照射（25kG
y）により免疫グロブリンおよび／または免疫複合体吸
着能は大きく低下した。
【０００７】次に、塩基配列Aを元に一部の塩基配列を
変えたDNAライブラリーを調製し、どの位置のアミノ酸
をどのアミノ酸に置換すると免疫グロブリンおよび／ま
たは免疫複合体に対する結合が強くなるかおよびγ線滅
菌安定性が高くなるかについて鋭意検討を行った。
変えたDNAライブラリーを調製し、どの位置のアミノ酸
をどのアミノ酸に置換すると免疫グロブリンおよび／ま
たは免疫複合体に対する結合が強くなるかおよびγ線滅
菌安定性が高くなるかについて鋭意検討を行った。
【０００８】その結果、下記の塩基配列B（配列表の配
列番号２）をベクターに挿入し、これを用いて大腸菌HB
101を形質転換した生産菌が産生する下記のアミノ酸配
列B（配列表の配列番号１）を含むペプチドが最適であ
ることを見出した。 但し、 X01： aac,aat,aaa,aag,caa,cagのいずれか X02： aca,acg,acc,act,aac,aatのいずれか X03： gaa,gag,gac,gatのいずれか X04： cta,ctg,ctc,ctt,tta,ttg,gta,gtg,gtc,gtt,at
a,atc,att,atgのいずれか（アミノ酸配列B:配列表の配
列番号１） 但し、 X01： Asn、Lys、Glnのいずれか X02： Thr、Asnのいずれか X03： Glu、Aspのいずれか X04： Leu、Val、Ile、Metのいずれか アミノ酸配列Bで表されるペプチドを担体に固定化して
免疫グロブリンおよび／または免疫複合体吸着体を得、
γ線照射（25kGy）を行っても免疫グロブリンおよび／
または免疫複合体吸着能は未照射吸着体と同等であっ
た。
列番号２）をベクターに挿入し、これを用いて大腸菌HB
101を形質転換した生産菌が産生する下記のアミノ酸配
列B（配列表の配列番号１）を含むペプチドが最適であ
ることを見出した。 但し、 X01： aac,aat,aaa,aag,caa,cagのいずれか X02： aca,acg,acc,act,aac,aatのいずれか X03： gaa,gag,gac,gatのいずれか X04： cta,ctg,ctc,ctt,tta,ttg,gta,gtg,gtc,gtt,at
a,atc,att,atgのいずれか（アミノ酸配列B:配列表の配
列番号１） 但し、 X01： Asn、Lys、Glnのいずれか X02： Thr、Asnのいずれか X03： Glu、Aspのいずれか X04： Leu、Val、Ile、Metのいずれか アミノ酸配列Bで表されるペプチドを担体に固定化して
免疫グロブリンおよび／または免疫複合体吸着体を得、
γ線照射（25kGy）を行っても免疫グロブリンおよび／
または免疫複合体吸着能は未照射吸着体と同等であっ
た。
【０００９】本発明の免疫グロブリンおよび／または免
疫複合体親和性ペプチドは以下のアミノ酸配列B（配列
表の配列番号１）で表される。
疫複合体親和性ペプチドは以下のアミノ酸配列B（配列
表の配列番号１）で表される。
【００１０】
但し、X01はAsn、Lys、Glnの３種のアミノ酸より１種、
X02はThr、Asnの２種のアミノ酸より１種、X03はGlu、A
spの２種のアミノ酸より１種、X04はLeu、Val、Ile、Me
tの４種のアミノ酸より１種選ばれる。
X02はThr、Asnの２種のアミノ酸より１種、X03はGlu、A
spの２種のアミノ酸より１種、X04はLeu、Val、Ile、Me
tの４種のアミノ酸より１種選ばれる。
【００１１】本発明で言うところの熱安定性に優れたペ
プチドとは、凍結乾燥した固体の状態又は水溶液の状態
で80℃以上に30分間加熱してもペプチド本来の性質を損
なわれない、またはペプチドを担体に固定化した後、高
圧蒸気滅菌（115℃30分間、121℃20分間、または、126
℃15分間）、放射線滅菌(25kGy)を施しても滅菌前の特
性を失わないことを意味する。
プチドとは、凍結乾燥した固体の状態又は水溶液の状態
で80℃以上に30分間加熱してもペプチド本来の性質を損
なわれない、またはペプチドを担体に固定化した後、高
圧蒸気滅菌（115℃30分間、121℃20分間、または、126
℃15分間）、放射線滅菌(25kGy)を施しても滅菌前の特
性を失わないことを意味する。
【００１２】例えば、配列表の配列番号８（Ｃ３６ペプ
チド）に示した、 を生理食塩液に溶解して500μg/mLとし、水酸化ナトリ
ウム水溶液でpH 7.0に調製したペプチド水溶液を80℃で
30分間加熱し、加熱処理していないペプチド水溶液とIg
G結合能を比較したところ、有意な差は見られなかっ
た。IgG結合能はIgGを担体に固定化したカラム（IgG Se
pharose Fast Flow：ファルマシア社製）にペプチド水
溶液を通液し、所定の方法で溶出して回収されたペプチ
ド量をHPLCにて分析した。
チド）に示した、 を生理食塩液に溶解して500μg/mLとし、水酸化ナトリ
ウム水溶液でpH 7.0に調製したペプチド水溶液を80℃で
30分間加熱し、加熱処理していないペプチド水溶液とIg
G結合能を比較したところ、有意な差は見られなかっ
た。IgG結合能はIgGを担体に固定化したカラム（IgG Se
pharose Fast Flow：ファルマシア社製）にペプチド水
溶液を通液し、所定の方法で溶出して回収されたペプチ
ド量をHPLCにて分析した。
【００１３】本発明に用いる水不溶性担体としては、ガ
ラスビーズ、シリカゲルなどの無機担体、架橋ポリビニ
ルアルコール、架橋ポリアクリレート、架橋ポリアクリ
ルアミド、架橋ポリスチレンなどの合成高分子や結晶性
セルロース、架橋セルロース、架橋アガロース、架橋デ
キストランなどの多糖類からなる有機担体、さらにはこ
れらの組み合わせによって得られる有機-有機、有機-無
機などの複合担体などが挙げられるが、中でも親水性担
体は非特異吸着が比較的少なく、免疫グロブリンおよび
／または免疫複合体の吸着選択性が良好であるため好ま
しい。ここでいう親水性担体とは、担体を構成する化合
物を平板状にしたときの水との接触角が60度以下の担体
を示す。この様な担体としてはセルロース、キトサン、
デキストラン等の多糖類、ポリビニルアルコール、エチ
レン-酢酸ビニル共重合体けん化物、ポリアクリルアミ
ド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリメタクリ
ル酸メチル、ポリアクリル酸グラフト化ポリエチレン、
ポリアクリルアミドグラフト化ポリエチレン、ガラスな
どからなる担体が代表例として挙げられる。
ラスビーズ、シリカゲルなどの無機担体、架橋ポリビニ
ルアルコール、架橋ポリアクリレート、架橋ポリアクリ
ルアミド、架橋ポリスチレンなどの合成高分子や結晶性
セルロース、架橋セルロース、架橋アガロース、架橋デ
キストランなどの多糖類からなる有機担体、さらにはこ
れらの組み合わせによって得られる有機-有機、有機-無
機などの複合担体などが挙げられるが、中でも親水性担
体は非特異吸着が比較的少なく、免疫グロブリンおよび
／または免疫複合体の吸着選択性が良好であるため好ま
しい。ここでいう親水性担体とは、担体を構成する化合
物を平板状にしたときの水との接触角が60度以下の担体
を示す。この様な担体としてはセルロース、キトサン、
デキストラン等の多糖類、ポリビニルアルコール、エチ
レン-酢酸ビニル共重合体けん化物、ポリアクリルアミ
ド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリメタクリ
ル酸メチル、ポリアクリル酸グラフト化ポリエチレン、
ポリアクリルアミドグラフト化ポリエチレン、ガラスな
どからなる担体が代表例として挙げられる。
【００１４】市販品としては多孔質セルロースゲルであ
るGCL2000、GC700、アリルデキストランとメチレンビス
アクリルアミドを共有結合で架橋したSephacryl S-100
0、アクリレート系の担体であるToyopearl、アガロース
系の架橋担体であるSepharoseCL4B、エポキシ基で活性
化されたポリメタクリルアミドであるオイパーギットC2
50L等を例示することができる。ただし、本発明におい
てはこれらの担体、活性化担体のみに限定されるもので
はないことは言うまでもない。上述の担体はそれぞれ単
独で用いてもよいし、任意の2種類以上を混合してもよ
い。又、本発明に用いる水不溶性担体としては、本吸着
材の使用目的および方法からみて、表面積が大きことが
望ましく、適当な大きさの細孔を多数有する、すなわ
ち、多孔質であることが好ましい。
るGCL2000、GC700、アリルデキストランとメチレンビス
アクリルアミドを共有結合で架橋したSephacryl S-100
0、アクリレート系の担体であるToyopearl、アガロース
系の架橋担体であるSepharoseCL4B、エポキシ基で活性
化されたポリメタクリルアミドであるオイパーギットC2
50L等を例示することができる。ただし、本発明におい
てはこれらの担体、活性化担体のみに限定されるもので
はないことは言うまでもない。上述の担体はそれぞれ単
独で用いてもよいし、任意の2種類以上を混合してもよ
い。又、本発明に用いる水不溶性担体としては、本吸着
材の使用目的および方法からみて、表面積が大きことが
望ましく、適当な大きさの細孔を多数有する、すなわ
ち、多孔質であることが好ましい。
【００１５】本発明で用いられる多孔質担体の排除限界
分子量は15万以上であるが、免疫グロブリンのクラスＧ
（IgG）の分子量は14万以上17万以下の分子であり、多
孔質性の担体でより効率良く吸着する為には排除限界分
子量が免疫グロブリンのクラスＧの直径よりも大きい25
万以上が好ましい。また免疫グロブリンをその構成要素
とする免疫複合体の分子量を特定することは困難である
が、免疫グロブリンのクラスＧが４分子と抗原が複合体
を作る場合、その分子量は計算上56万以上となる。した
がって、免疫グロブリンおよび／または免疫複合体が多
孔質担体の内部に入るためには、排除限界分子量が60万
以上であることが望ましく、容易に入れるようにするに
は300万以上の排除限界分子量が好ましい。
分子量は15万以上であるが、免疫グロブリンのクラスＧ
（IgG）の分子量は14万以上17万以下の分子であり、多
孔質性の担体でより効率良く吸着する為には排除限界分
子量が免疫グロブリンのクラスＧの直径よりも大きい25
万以上が好ましい。また免疫グロブリンをその構成要素
とする免疫複合体の分子量を特定することは困難である
が、免疫グロブリンのクラスＧが４分子と抗原が複合体
を作る場合、その分子量は計算上56万以上となる。した
がって、免疫グロブリンおよび／または免疫複合体が多
孔質担体の内部に入るためには、排除限界分子量が60万
以上であることが望ましく、容易に入れるようにするに
は300万以上の排除限界分子量が好ましい。
【００１６】次に、担体の多孔構造については、吸着材
の単位体積あたりの吸着能から考えて、表面多孔性（担
体外部が多孔性で内部が緻密になっている構造）よりも
全多孔性（担体全体が多孔質であり、分子は内部まで到
達可能な構造）が好ましい。さらに好ましくは水銀圧入
法による空孔容積が20%以上であり、また、水銀圧入法
による比表面積が1m2/g以上であることが好ましい。
の単位体積あたりの吸着能から考えて、表面多孔性（担
体外部が多孔性で内部が緻密になっている構造）よりも
全多孔性（担体全体が多孔質であり、分子は内部まで到
達可能な構造）が好ましい。さらに好ましくは水銀圧入
法による空孔容積が20%以上であり、また、水銀圧入法
による比表面積が1m2/g以上であることが好ましい。
【００１７】担体の形態としては、ビーズ状、線維状、
膜状(中空糸も含む)など何れも可能であり、任意の形態
を選ぶことができる。特定の排除限界分子量を持つ担体
作製の容易さからビーズ状が特に好ましく用いられる。
ビーズ状の平均粒径は10〜2500μmのものが使いやす
く、とりわけ、リガンド固定化反応のしやすさの点から
25μmから800μmの範囲が好ましい。
膜状(中空糸も含む)など何れも可能であり、任意の形態
を選ぶことができる。特定の排除限界分子量を持つ担体
作製の容易さからビーズ状が特に好ましく用いられる。
ビーズ状の平均粒径は10〜2500μmのものが使いやす
く、とりわけ、リガンド固定化反応のしやすさの点から
25μmから800μmの範囲が好ましい。
【００１８】さらに担体表面には、リガンドの固定化反
応に用いうる官能基が存在しているとリガンドの固定化
に好都合である。これらの官能基の代表例としては、水
酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオ
ール基、シラノール基、アミド基、エポキシ基、サクシ
ニルイミド基、酸無水物基などが挙げられる。
応に用いうる官能基が存在しているとリガンドの固定化
に好都合である。これらの官能基の代表例としては、水
酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオ
ール基、シラノール基、アミド基、エポキシ基、サクシ
ニルイミド基、酸無水物基などが挙げられる。
【００１９】次に本発明に用いる担体としては硬質担
体、軟質担体のいずれも用いることができるが、体外循
環治療用の吸着材として使用するためには、カラムに充
填し、通液する際などに目詰まりを生じないことが重要
である。そのために充分な機械的強度が要求される。従
って、本発明に用いる担体は硬質担体であることがより
好ましい。本明細書中では、硬質担体とは、例えば粒状
ゲルの場合、以下の条件でゲルをガラスを円筒状カラム
(内径9mm、カラム長150mm)に均一に充填し、水性流体を
流した際の圧力損失△Pと流量の関係が0.3kg/cm2まで直
線関係にあるものをいう。
体、軟質担体のいずれも用いることができるが、体外循
環治療用の吸着材として使用するためには、カラムに充
填し、通液する際などに目詰まりを生じないことが重要
である。そのために充分な機械的強度が要求される。従
って、本発明に用いる担体は硬質担体であることがより
好ましい。本明細書中では、硬質担体とは、例えば粒状
ゲルの場合、以下の条件でゲルをガラスを円筒状カラム
(内径9mm、カラム長150mm)に均一に充填し、水性流体を
流した際の圧力損失△Pと流量の関係が0.3kg/cm2まで直
線関係にあるものをいう。
【００２０】例えば、両端に孔径15μmのフィルターを
装着したガラス製円筒状カラム(内径9mm、カラム長150m
m)にアガロースゲル(Bio-Rad社製のBiogel-A5m、粒径50
〜100メッシュ)、ビニル系ポリマーゲル(東洋曹達工業
(株)製のトヨパールHW-65、粒径50〜100μm)およびセル
ロースゲル(チッソ(株)製のセルロファインGC-700m、粒
径45〜105μm)をそれぞれ均一に充填し、ペリスタティ
ックポンプにより水を流し、流量と圧力損失△Pとの関
係を求めた(図1)。縦軸に流速(cm/分)を横軸に圧力損失
(kg/cm2)をプロットした。この図において、○はトヨパ
ールHW-65、△はセルロファインGC-700m、●はBiogel-A
5mを示す。この結果、トヨパールHW-65およびセルロフ
ァインGC-700mが圧力増加にほぼ比例して流量が増加す
るのに対し、Biogel-A5m用は圧密化を引き起こし、圧力
を増加させても流量が増加しないことがわかる。
装着したガラス製円筒状カラム(内径9mm、カラム長150m
m)にアガロースゲル(Bio-Rad社製のBiogel-A5m、粒径50
〜100メッシュ)、ビニル系ポリマーゲル(東洋曹達工業
(株)製のトヨパールHW-65、粒径50〜100μm)およびセル
ロースゲル(チッソ(株)製のセルロファインGC-700m、粒
径45〜105μm)をそれぞれ均一に充填し、ペリスタティ
ックポンプにより水を流し、流量と圧力損失△Pとの関
係を求めた(図1)。縦軸に流速(cm/分)を横軸に圧力損失
(kg/cm2)をプロットした。この図において、○はトヨパ
ールHW-65、△はセルロファインGC-700m、●はBiogel-A
5mを示す。この結果、トヨパールHW-65およびセルロフ
ァインGC-700mが圧力増加にほぼ比例して流量が増加す
るのに対し、Biogel-A5m用は圧密化を引き起こし、圧力
を増加させても流量が増加しないことがわかる。
【００２１】上記担体への免疫グロブリン結合蛋白また
はペプチドの固定化においては、蛋白質またはペプチド
の立体障害を小さくすることにより吸着効率を向上さ
せ、さらに非特異的吸着を抑えるために、親水性スペー
サーを介して固定化することが、より好ましい。親水性
スペーサーとしては、例えば、両末端をカルボキシル
基、アミノ基、アルデヒド基、エポキシ基などで置換し
たポリアルキレンオキサイドの誘導体を用いるのが好ま
しい。
はペプチドの固定化においては、蛋白質またはペプチド
の立体障害を小さくすることにより吸着効率を向上さ
せ、さらに非特異的吸着を抑えるために、親水性スペー
サーを介して固定化することが、より好ましい。親水性
スペーサーとしては、例えば、両末端をカルボキシル
基、アミノ基、アルデヒド基、エポキシ基などで置換し
たポリアルキレンオキサイドの誘導体を用いるのが好ま
しい。
【００２２】上記の担体へ導入される免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体親和性ペプチド、およびスペー
サーとして用いられる有機化合物の固定化方法は特に限
定されるものではないが、一般に蛋白質やペプチドを担
体に固定化する場合に採用される方法を例示する。担体
を臭化シアン、エピクロロヒドリン、ジグリシジルエー
テル、トシルクロライド、トレシルクロライド、ヒドラ
ジンなどと反応させて担体を活性化し（担体が元々持っ
ている官能基よりリガンドとして固定化する化合物が反
応しやすい官能基に変え）、リガンドとして固定化する
化合物と反応、固定化する方法、また、担体とリガンド
として固定化する化合物が存在する系にカルボジイミド
のような縮合試薬、または、グルタルアルデヒドのよう
に分子中に複数の官能基を持つ試薬を加えて縮合、架橋
することによる固定化方法が挙げられるが、体外循環治
療および血液浄化に用いられ得る吸着材であることを考
慮して、吸着材の滅菌時または治療時に蛋白類が担体よ
り容易に脱離しない固定化方法を適用することがより好
ましい。
よび／または免疫複合体親和性ペプチド、およびスペー
サーとして用いられる有機化合物の固定化方法は特に限
定されるものではないが、一般に蛋白質やペプチドを担
体に固定化する場合に採用される方法を例示する。担体
を臭化シアン、エピクロロヒドリン、ジグリシジルエー
テル、トシルクロライド、トレシルクロライド、ヒドラ
ジンなどと反応させて担体を活性化し（担体が元々持っ
ている官能基よりリガンドとして固定化する化合物が反
応しやすい官能基に変え）、リガンドとして固定化する
化合物と反応、固定化する方法、また、担体とリガンド
として固定化する化合物が存在する系にカルボジイミド
のような縮合試薬、または、グルタルアルデヒドのよう
に分子中に複数の官能基を持つ試薬を加えて縮合、架橋
することによる固定化方法が挙げられるが、体外循環治
療および血液浄化に用いられ得る吸着材であることを考
慮して、吸着材の滅菌時または治療時に蛋白類が担体よ
り容易に脱離しない固定化方法を適用することがより好
ましい。
【００２３】免疫グロブリンおよび／または免疫複合体
親和性ペプチドを固定化した担体を、血液、血漿、血清
などの体液と接触させて、体液中の免疫グロブリンおよ
び／または免疫複合体を吸着する方法には種々の方法が
ある。代表的な方法としては、(1)体液を取り出してバ
ックなどに貯留し、これを吸着材に混合して免疫グロブ
リンおよび／または免疫複合体を吸着した後、吸着材を
濾別して免疫グロブリンおよび／または免疫複合体の除
去された体液を得る方法、(2)体液の入口と出口を有
し、出口に体液は通過するが吸着剤は通過しないフィル
ターを装着した容器に吸着材を充填し、これに体液を流
す方法等がある。いずれの方法を用いてもよいが、後者
の方法は操作も簡単であり、また体外循環回路に組み込
むことにより患者の体液から効率よくオンラインで免疫
グロブリンおよび／または免疫複合体を除去することが
可能であり、本発明の吸着材はこの方法に適している。
親和性ペプチドを固定化した担体を、血液、血漿、血清
などの体液と接触させて、体液中の免疫グロブリンおよ
び／または免疫複合体を吸着する方法には種々の方法が
ある。代表的な方法としては、(1)体液を取り出してバ
ックなどに貯留し、これを吸着材に混合して免疫グロブ
リンおよび／または免疫複合体を吸着した後、吸着材を
濾別して免疫グロブリンおよび／または免疫複合体の除
去された体液を得る方法、(2)体液の入口と出口を有
し、出口に体液は通過するが吸着剤は通過しないフィル
ターを装着した容器に吸着材を充填し、これに体液を流
す方法等がある。いずれの方法を用いてもよいが、後者
の方法は操作も簡単であり、また体外循環回路に組み込
むことにより患者の体液から効率よくオンラインで免疫
グロブリンおよび／または免疫複合体を除去することが
可能であり、本発明の吸着材はこの方法に適している。
【００２４】次に、免疫グロブリンおよび／または免疫
複合体を吸着する吸着材を用いた本発明の免疫グロブリ
ンおよび／または免疫複合体の吸着装置を、その概略断
面図に基づき説明する。
複合体を吸着する吸着材を用いた本発明の免疫グロブリ
ンおよび／または免疫複合体の吸着装置を、その概略断
面図に基づき説明する。
【００２５】図2中に示す容器7は、液体の流入口または
流出口1、液体の流出口または流入口2、本発明の免疫グ
ロブリンおよび／または免疫複合体吸着材3、液体およ
び液体に含まれる成分は通過できるが免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体吸着材は通過できない吸着材流
出防止手段4および5、ならびにカラム6を有する。この
容器の形状および材質に特に限定はないが、好ましく
は、例えば、容量20〜400ml程度、直径2〜10cm程度の筒
状容器が用いられる。
流出口1、液体の流出口または流入口2、本発明の免疫グ
ロブリンおよび／または免疫複合体吸着材3、液体およ
び液体に含まれる成分は通過できるが免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体吸着材は通過できない吸着材流
出防止手段4および5、ならびにカラム6を有する。この
容器の形状および材質に特に限定はないが、好ましく
は、例えば、容量20〜400ml程度、直径2〜10cm程度の筒
状容器が用いられる。
【００２６】以下実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明は以下の実施例のみに限定されるもの
ではない。なお、本明細書においては、各種アミノ酸残
基を次の略号で記載する。Ala;L-アラニン残基、Arg;L-
アルギニン残基、Asp;L-アスパラギン酸残基、Asn;L-ア
スパラギン残基、Cys;L-システイン残基、Gln;L-グルタ
ミン残基、Glu;L-グルタミン酸残基、Gly;L-グリシン残
基、His;L-ヒスチジン残基、Ile;L-イソロイシン残基、
Leu;L-ロイシン残基、Lys;L-リジン残基、Met;L-メチオ
ニン残基、Phe;L-フェニルアラニン残基、Pro;L-プロリ
ン残基、Ser;L-セリン残基、Thr;L-スレオニン残基、Tr
p;L-トリプトファン残基、Tyr;L-チロシン残基、Val;L-
バリン残基。また本明細書においては、ペプチドのアミ
ノ酸配列を、そのアミノ末端(以下N末端という)が左側
に位置し、カルボキシル末端(以下C末端という)が右側
に位置するように、常法に従って記述する。
明するが、本発明は以下の実施例のみに限定されるもの
ではない。なお、本明細書においては、各種アミノ酸残
基を次の略号で記載する。Ala;L-アラニン残基、Arg;L-
アルギニン残基、Asp;L-アスパラギン酸残基、Asn;L-ア
スパラギン残基、Cys;L-システイン残基、Gln;L-グルタ
ミン残基、Glu;L-グルタミン酸残基、Gly;L-グリシン残
基、His;L-ヒスチジン残基、Ile;L-イソロイシン残基、
Leu;L-ロイシン残基、Lys;L-リジン残基、Met;L-メチオ
ニン残基、Phe;L-フェニルアラニン残基、Pro;L-プロリ
ン残基、Ser;L-セリン残基、Thr;L-スレオニン残基、Tr
p;L-トリプトファン残基、Tyr;L-チロシン残基、Val;L-
バリン残基。また本明細書においては、ペプチドのアミ
ノ酸配列を、そのアミノ末端(以下N末端という)が左側
に位置し、カルボキシル末端(以下C末端という)が右側
に位置するように、常法に従って記述する。
【００２７】
【実施例】（実施例１）多孔質担体（Kac）へのIgG結合
タンパク質（Ｃ３６）の固定化 ・Ｃ３６ペプチドの生産 配列表の配列番号８のＣ３６ペプチドをコードするDNA
を、pUCNTベクター(特開平4-212692号公報)に5'側をNde
I、3'側をHind IIIのそれぞれ制限酵素サイトを利用
して連結できるように 配列表の配列番号９として設
計、合成した。
タンパク質（Ｃ３６）の固定化 ・Ｃ３６ペプチドの生産 配列表の配列番号８のＣ３６ペプチドをコードするDNA
を、pUCNTベクター(特開平4-212692号公報)に5'側をNde
I、3'側をHind IIIのそれぞれ制限酵素サイトを利用
して連結できるように 配列表の配列番号９として設
計、合成した。
【００２８】配列番号９を有するDNAを、制限酵素Nde
IおよびHind III(宝酒造社製)消化によって開裂したpU
CNTベクターと、宝酒造社製DNA Ligation Kit Ver.2を
用いて手順書に従って連結し、pUCNT-C36ベクターを作
製した。公知の方法で、このpUCNT-C36ベクターDNAを大
腸菌HB101株(フナコシ販)に導入し、抗生物質アンピシ
リンに対する抵抗性を指標として形質転換体を選択し
た。また、この形質転換体から常法にてプラスミドDNA
を抽出、遺伝子配列を解析することによってpUCNT-C36
ベクターが設計通りのDNA配列を有していることを確認
した。
IおよびHind III(宝酒造社製)消化によって開裂したpU
CNTベクターと、宝酒造社製DNA Ligation Kit Ver.2を
用いて手順書に従って連結し、pUCNT-C36ベクターを作
製した。公知の方法で、このpUCNT-C36ベクターDNAを大
腸菌HB101株(フナコシ販)に導入し、抗生物質アンピシ
リンに対する抵抗性を指標として形質転換体を選択し
た。また、この形質転換体から常法にてプラスミドDNA
を抽出、遺伝子配列を解析することによってpUCNT-C36
ベクターが設計通りのDNA配列を有していることを確認
した。
【００２９】次に、この形質転換体を6LのL-ブロス(5g/
L NaCl、10g/L バクトトリプシン、5g/L イーストエキ
ストラクト)中で37℃にて20時間振盪培養し、菌体を遠
心分離(日立RPR9-2ローターを用い4℃で6000rpm、20分
間)にて回収した。ここで得られた沈殿を300mlのTE緩衝
液(20mM Tris-HCl 、1mM EDTA :pH7.5)に懸濁した上
で、超音波破砕処理(BRANSON250を用い氷中にて6分間3
回)を施し、遠心分離(日立RPR16ローターを用い4℃で15
000rpm、20分間)にて上清を回収した。ここで得られた
上清を70℃、10分間の熱処理を行った後、さらに遠心分
離(日立RPR16ローターを用い4℃で15000rpm、20分間)に
てその上清300mlを回収した。本上清から高速液体クロ
マトグラフィー(カラム：日本ウォーターズ社製μBonda
sphere C18)を用いて40mlのアセトニトリル溶液を流速5
ml/minにて流してカラムを活性化した後300mlのサンプ
ルを同流速にて流し、0.1%TFA+64%アセトニトリル溶液2
00mlにてカラムを洗浄、続いて0.1%TFA（トリフルオロ
酢酸）+40%アセトニトリル溶液200mlにて目的のＣ３６
ペプチドを溶出、分取した。これをエバポレーターにて
100mlに濃縮した上で凍結乾燥し、高純度精製標品を取
得した。 ・セルロースゲルのエポキシ化 セルロース系多孔質硬質ゲルで球状タンパク質の排除限
界分子量500万以上の当社試作品Kac 90mlに水を加え全
量を180mlとした後、2N水酸化ナトリウム60mlを加え40
℃とした。これにエピクロロヒドリン21mlを加え、40℃
で撹拌下２時間反応させた。反応終了後、充分に水洗
し、エポキシ活性化Kacゲルを得た。 ・Ｃ３６ペプチドの固定化 Ｃ３６ペプチド10mgを0.05Mホウ酸緩衝液(pH10)0.5mlに
溶解し、0.01N水酸化ナトリウム水溶液を加えてpH10に
再調整、全量を1.0mlとした（Ｃ３６ペプチド溶液）。
上記エポキシ活性化Kacゲル1mlにペプチド溶液（全量）
を加えて37℃で16時間振盪した後、充分量のPBS（150mM
塩化ナトリウムを含む10mMリン酸緩衝液）で洗浄し、Ka
c-Ｃ３６を得た。
L NaCl、10g/L バクトトリプシン、5g/L イーストエキ
ストラクト)中で37℃にて20時間振盪培養し、菌体を遠
心分離(日立RPR9-2ローターを用い4℃で6000rpm、20分
間)にて回収した。ここで得られた沈殿を300mlのTE緩衝
液(20mM Tris-HCl 、1mM EDTA :pH7.5)に懸濁した上
で、超音波破砕処理(BRANSON250を用い氷中にて6分間3
回)を施し、遠心分離(日立RPR16ローターを用い4℃で15
000rpm、20分間)にて上清を回収した。ここで得られた
上清を70℃、10分間の熱処理を行った後、さらに遠心分
離(日立RPR16ローターを用い4℃で15000rpm、20分間)に
てその上清300mlを回収した。本上清から高速液体クロ
マトグラフィー(カラム：日本ウォーターズ社製μBonda
sphere C18)を用いて40mlのアセトニトリル溶液を流速5
ml/minにて流してカラムを活性化した後300mlのサンプ
ルを同流速にて流し、0.1%TFA+64%アセトニトリル溶液2
00mlにてカラムを洗浄、続いて0.1%TFA（トリフルオロ
酢酸）+40%アセトニトリル溶液200mlにて目的のＣ３６
ペプチドを溶出、分取した。これをエバポレーターにて
100mlに濃縮した上で凍結乾燥し、高純度精製標品を取
得した。 ・セルロースゲルのエポキシ化 セルロース系多孔質硬質ゲルで球状タンパク質の排除限
界分子量500万以上の当社試作品Kac 90mlに水を加え全
量を180mlとした後、2N水酸化ナトリウム60mlを加え40
℃とした。これにエピクロロヒドリン21mlを加え、40℃
で撹拌下２時間反応させた。反応終了後、充分に水洗
し、エポキシ活性化Kacゲルを得た。 ・Ｃ３６ペプチドの固定化 Ｃ３６ペプチド10mgを0.05Mホウ酸緩衝液(pH10)0.5mlに
溶解し、0.01N水酸化ナトリウム水溶液を加えてpH10に
再調整、全量を1.0mlとした（Ｃ３６ペプチド溶液）。
上記エポキシ活性化Kacゲル1mlにペプチド溶液（全量）
を加えて37℃で16時間振盪した後、充分量のPBS（150mM
塩化ナトリウムを含む10mMリン酸緩衝液）で洗浄し、Ka
c-Ｃ３６を得た。
【００３０】（実施例２）多孔質担体（Sephacryl S100
0）へのIgG結合タンパク質（Ｂ０４）の固定化 ・Ｂ０４ペプチドの生産 配列表の配列番号１０に示すペプチドの合成を、ペプチ
ドシンセサイザーModel 4170型(ファルマシアLKB社製)
を用いて固相合成法により以下のように行った。C末端
のグルタミンを結合した支持体であるFmoc-グルタミンN
ovaSyn KA 0.1mmol(ファルマシアLKB社製)を用いて、上
記ペプチドシンセサイザーに入力されている合成プログ
ラムにより、N末端の方向に向かって順に、脱保護基反
応および縮合反応を繰り返してペプチド鎖を延長した。
すなわち、ピペリジンにより該アミノ酸が有するα-ア
ミノ基の保護基である9-フロオレニルメチルオキシカル
ボニル基(以下Fmocという)の除去を行ない、N’N-ジメ
チルホルムアミド(以下DMFという)で洗浄し、2-(1H-ベ
ンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3,-テトラメチルウロ
ニウムテトラフルオロボレトとN’N-ジイソプロピルエ
チルアミンで縮合反応を行ない、DMFで洗浄する操作を
繰り返した。アミノ酸は、Fmoc-L-Ala、Fmoc-L-Asn(Tr
t)、Fmoc-L-Asp(OtBu)、Fmoc-L-Cys(Trt)、Fmoc-L-Gln
(Trt)、Fmoc-L-Glu(OtBu)、Fmoc-L-Gly、Fmoc-L-Ile、F
moc-L-Leu、Fmoc-L-Lys(Boc)、Fmoc-L-Phe、Fmoc-L-Thr
(tBu)、Fmoc-L-Trp、Fmoc-L-Tyr(tBu)、Fmoc-L-Val、と
して用い、それらの使用量は基質に対して約5倍モル(0.
5mmol)量を、バイアル中で用いた。(ここで、Trt、OtB
u、Boc、およびtBuは、それぞれトリチル基、第3ブチル
エステル、第3ブチルオキシカルボニル基、およびo-第3
ブチル基を表す。) ・脱保護基反応およびペプチド鎖の切断 全てのアミノ酸についての反応操作が終了したのち、得
られた支持体を3G-3孔のグラスフィルター上でtert-ア
ミルアルコール、酢酸、およびジエチルエーテルを用い
て順次洗浄し、次いで真空乾燥することによって乾燥支
持体を得た。バイアル中で、得られた支持体1gに、トリ
フルオロ酢酸(以下TFAという)20ml、1,2-エタンジチオ
ール260μl、およびアニソール780μlを加えて室温で1.
5時間撹拌した。その後、この混合物を3G-3孔のグラス
フイルターで支持体と濾別し、この濾液を35℃下で減圧
濃縮した。これに予め冷却しておいた無水ジエチルエー
テルを沈殿が現れなくなるまで加えて撹拌し、次いで遠
心分離し、沈殿した粗ペプチドを収集した。さらに、こ
の粗ペプチドを無水ジエチルエーテルで数回洗浄した
後、減圧下で乾燥し、目的とする粗精製ペプチドを得
た。 ・ペプチドの精製 上記、粗精製ペプチドを0.1%TFAに溶解して3000rpmで高
速遠心分離した上澄液を、0.45μmのメンブレンフィル
ターで濾過し、得られた濾液を高速液体クロマトグラフ
ィーに供した。HPLCは、ModelLC-10Aシステム(島津製作
所製)を用い、カラムは逆相系のμBondasphere C18(日
本ウォーターズ社製)を用いた。移動相にはA液として0.
1%TFA水溶液を、B液として0.1%TFA含む80%(v/v)アセト
ニトリル/水を用い、A液からB液への濃度直線勾配によ
り溶出した。得られたクロマトピークの相当画分を分取
した。分取を数回繰り返し、これを凍結乾燥し精製ペプ
チドを得た。得られたペプチドは、気相プロティンシー
クエンサー477A型(アプライドバイオシステムズ社製)お
よび日立カスタムイオン交換樹脂を用いたアミノ酸分析
により解析して、後述に記載する配列表の配列番号１０
に示すアミノ酸配列のペプチドが得られていることを確
認した。 ・Sephacryl S1000のエポキシ活性化 多孔質硬質ゲルで細孔径が400nmであるSephacryl S1000
（アマシャム ファルマシアバイオテク社製：球状タン
パク質の排除限界分子量約800万）90mlに水を加え全量
を180mlとした後、2Ｎ水酸化ナトリウム60mlを加え40℃
とした。これにエピクロロヒドリン21mlを加え、40℃で
撹拌下２時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、
エポキシ活性化Sephacryl S1000を得た。 ・Ｂ０４ペプチドの固定化 実施例１のＣ３６ペプチド10mgをＢ０４ペプチド30mgに
変え、エポキシ活性化Kacゲルをエポキシ活性化Sephacr
yl S1000ゲルに変えたほかは全く同様にＢ０４ペプチド
を固定化したSephacryl S1000-Ｂ０４を得た。
0）へのIgG結合タンパク質（Ｂ０４）の固定化 ・Ｂ０４ペプチドの生産 配列表の配列番号１０に示すペプチドの合成を、ペプチ
ドシンセサイザーModel 4170型(ファルマシアLKB社製)
を用いて固相合成法により以下のように行った。C末端
のグルタミンを結合した支持体であるFmoc-グルタミンN
ovaSyn KA 0.1mmol(ファルマシアLKB社製)を用いて、上
記ペプチドシンセサイザーに入力されている合成プログ
ラムにより、N末端の方向に向かって順に、脱保護基反
応および縮合反応を繰り返してペプチド鎖を延長した。
すなわち、ピペリジンにより該アミノ酸が有するα-ア
ミノ基の保護基である9-フロオレニルメチルオキシカル
ボニル基(以下Fmocという)の除去を行ない、N’N-ジメ
チルホルムアミド(以下DMFという)で洗浄し、2-(1H-ベ
ンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3,-テトラメチルウロ
ニウムテトラフルオロボレトとN’N-ジイソプロピルエ
チルアミンで縮合反応を行ない、DMFで洗浄する操作を
繰り返した。アミノ酸は、Fmoc-L-Ala、Fmoc-L-Asn(Tr
t)、Fmoc-L-Asp(OtBu)、Fmoc-L-Cys(Trt)、Fmoc-L-Gln
(Trt)、Fmoc-L-Glu(OtBu)、Fmoc-L-Gly、Fmoc-L-Ile、F
moc-L-Leu、Fmoc-L-Lys(Boc)、Fmoc-L-Phe、Fmoc-L-Thr
(tBu)、Fmoc-L-Trp、Fmoc-L-Tyr(tBu)、Fmoc-L-Val、と
して用い、それらの使用量は基質に対して約5倍モル(0.
5mmol)量を、バイアル中で用いた。(ここで、Trt、OtB
u、Boc、およびtBuは、それぞれトリチル基、第3ブチル
エステル、第3ブチルオキシカルボニル基、およびo-第3
ブチル基を表す。) ・脱保護基反応およびペプチド鎖の切断 全てのアミノ酸についての反応操作が終了したのち、得
られた支持体を3G-3孔のグラスフィルター上でtert-ア
ミルアルコール、酢酸、およびジエチルエーテルを用い
て順次洗浄し、次いで真空乾燥することによって乾燥支
持体を得た。バイアル中で、得られた支持体1gに、トリ
フルオロ酢酸(以下TFAという)20ml、1,2-エタンジチオ
ール260μl、およびアニソール780μlを加えて室温で1.
5時間撹拌した。その後、この混合物を3G-3孔のグラス
フイルターで支持体と濾別し、この濾液を35℃下で減圧
濃縮した。これに予め冷却しておいた無水ジエチルエー
テルを沈殿が現れなくなるまで加えて撹拌し、次いで遠
心分離し、沈殿した粗ペプチドを収集した。さらに、こ
の粗ペプチドを無水ジエチルエーテルで数回洗浄した
後、減圧下で乾燥し、目的とする粗精製ペプチドを得
た。 ・ペプチドの精製 上記、粗精製ペプチドを0.1%TFAに溶解して3000rpmで高
速遠心分離した上澄液を、0.45μmのメンブレンフィル
ターで濾過し、得られた濾液を高速液体クロマトグラフ
ィーに供した。HPLCは、ModelLC-10Aシステム(島津製作
所製)を用い、カラムは逆相系のμBondasphere C18(日
本ウォーターズ社製)を用いた。移動相にはA液として0.
1%TFA水溶液を、B液として0.1%TFA含む80%(v/v)アセト
ニトリル/水を用い、A液からB液への濃度直線勾配によ
り溶出した。得られたクロマトピークの相当画分を分取
した。分取を数回繰り返し、これを凍結乾燥し精製ペプ
チドを得た。得られたペプチドは、気相プロティンシー
クエンサー477A型(アプライドバイオシステムズ社製)お
よび日立カスタムイオン交換樹脂を用いたアミノ酸分析
により解析して、後述に記載する配列表の配列番号１０
に示すアミノ酸配列のペプチドが得られていることを確
認した。 ・Sephacryl S1000のエポキシ活性化 多孔質硬質ゲルで細孔径が400nmであるSephacryl S1000
（アマシャム ファルマシアバイオテク社製：球状タン
パク質の排除限界分子量約800万）90mlに水を加え全量
を180mlとした後、2Ｎ水酸化ナトリウム60mlを加え40℃
とした。これにエピクロロヒドリン21mlを加え、40℃で
撹拌下２時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、
エポキシ活性化Sephacryl S1000を得た。 ・Ｂ０４ペプチドの固定化 実施例１のＣ３６ペプチド10mgをＢ０４ペプチド30mgに
変え、エポキシ活性化Kacゲルをエポキシ活性化Sephacr
yl S1000ゲルに変えたほかは全く同様にＢ０４ペプチド
を固定化したSephacryl S1000-Ｂ０４を得た。
【００３１】（実施例３）多孔質担体（GCL2000m）への
IgG結合タンパク質（Ｃ０４）の固定化 ・Ｃ０４ペプチドの生産 配列表の配列番号１１のＣ０４ペプチドをコードするDN
AをpUCNTベクターに実施例１と同様の方法にて連結でき
るように 配列表の配列番号１２を設計して、合成し
た。配列番号１２の配列を有するDNAを実施例１と同様
の方法でpUCNTベクターに導入し、pUCNT-C04ベクターを
作製した。さらに実施例１と同様の方法で、大腸菌の形
質転換体を作製、その6L培養を経て目的のＣ０４ペプチ
ドの高純度精製標品を取得し、各種検討に使用した。 ・GCL2000mのエポキシ化 セルロース系多孔質硬質ゲルであるGCL2000m（チッソ
（株）製：球状タンパク質の排除限界分子量300万）90m
lに水を加え全量を180mlとした後、2Ｎ水酸化ナトリウ
ム60mlを加え40℃とした。これにエピクロロヒドリン21
mlを加え、40℃で撹拌下２時間反応させた。反応終了
後、充分に水洗し、エポキシ活性化GCL2000mを得た。 ・Ｃ０４ペプチドの固定化 実施例１のＣ３６ペプチドをＣ０４に変え、エポキシ活
性化Kacゲルをエポキシ活性化GCL2000mゲルに変えたほ
かは全く同様にＣ０４を固定化したGCL2000m-Ｃ０４を
得た。
IgG結合タンパク質（Ｃ０４）の固定化 ・Ｃ０４ペプチドの生産 配列表の配列番号１１のＣ０４ペプチドをコードするDN
AをpUCNTベクターに実施例１と同様の方法にて連結でき
るように 配列表の配列番号１２を設計して、合成し
た。配列番号１２の配列を有するDNAを実施例１と同様
の方法でpUCNTベクターに導入し、pUCNT-C04ベクターを
作製した。さらに実施例１と同様の方法で、大腸菌の形
質転換体を作製、その6L培養を経て目的のＣ０４ペプチ
ドの高純度精製標品を取得し、各種検討に使用した。 ・GCL2000mのエポキシ化 セルロース系多孔質硬質ゲルであるGCL2000m（チッソ
（株）製：球状タンパク質の排除限界分子量300万）90m
lに水を加え全量を180mlとした後、2Ｎ水酸化ナトリウ
ム60mlを加え40℃とした。これにエピクロロヒドリン21
mlを加え、40℃で撹拌下２時間反応させた。反応終了
後、充分に水洗し、エポキシ活性化GCL2000mを得た。 ・Ｃ０４ペプチドの固定化 実施例１のＣ３６ペプチドをＣ０４に変え、エポキシ活
性化Kacゲルをエポキシ活性化GCL2000mゲルに変えたほ
かは全く同様にＣ０４を固定化したGCL2000m-Ｃ０４を
得た。
【００３２】（実施例４）多孔質担体（CNBr活性化Seph
arose 4B）へのIgG結合タンパク質（Ｃ１５）の固定化 配列表の配列番号１３のペプチドＣ１５をコードするDN
AをpUCNTベクターに実施例１と同様の方法にて連結でき
るように 配列表の配列番号１４を設計して、合成し
た。配列番号１４の配列を有するDNAを実施例１と同様
の方法でpUCNTベクターに導入し、pUCNT-C15ベクターを
作製した。さらに実施例１と同様の方法で、大腸菌の形
質転換体を作製、その6L培養を経て目的のＣ１５ペプチ
ドの高純度精製標品を取得し、各種検討に使用した。 ・Ｃ１５ペプチドの固定化 CNBr活性化Sepharose 4B（アマシャム ファルマシアバ
イオテク社製：球状タンパク質の排除限界分子量約2000
万）１gを1mM塩酸水溶液少量で15分間膨張させ、1mM塩
酸水溶液で洗浄し、更にカップリングバッファー（pH8.
3 0.5M 塩化ナトリウム, 0.1M 炭酸水素ナトリウム）で
洗浄した。カップリングバッファー1mlにＣ１５ペプチ
ド10mgを溶解し、上記洗浄ゲルを添加して４℃で16時間
反応させた。カップリングバッファーで洗浄後、ブロッ
クバッファー（pH8.3 0.2Mグリシン, 0.5M塩化ナトリ
ウム, 0.1M 炭酸水素ナトリウム）を添加し室温で2時間
反応した。２種類の後処理バッファー（pH4.0 0.5M 塩
化ナトリウム, 0.1M酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、pH8.
0 0.5M 塩化ナトリウム, 0.1Mトリス−塩酸緩衝液）で
交互に３回ずつ洗浄し、Sepharose 4B-Ｃ１５を得た。
arose 4B）へのIgG結合タンパク質（Ｃ１５）の固定化 配列表の配列番号１３のペプチドＣ１５をコードするDN
AをpUCNTベクターに実施例１と同様の方法にて連結でき
るように 配列表の配列番号１４を設計して、合成し
た。配列番号１４の配列を有するDNAを実施例１と同様
の方法でpUCNTベクターに導入し、pUCNT-C15ベクターを
作製した。さらに実施例１と同様の方法で、大腸菌の形
質転換体を作製、その6L培養を経て目的のＣ１５ペプチ
ドの高純度精製標品を取得し、各種検討に使用した。 ・Ｃ１５ペプチドの固定化 CNBr活性化Sepharose 4B（アマシャム ファルマシアバ
イオテク社製：球状タンパク質の排除限界分子量約2000
万）１gを1mM塩酸水溶液少量で15分間膨張させ、1mM塩
酸水溶液で洗浄し、更にカップリングバッファー（pH8.
3 0.5M 塩化ナトリウム, 0.1M 炭酸水素ナトリウム）で
洗浄した。カップリングバッファー1mlにＣ１５ペプチ
ド10mgを溶解し、上記洗浄ゲルを添加して４℃で16時間
反応させた。カップリングバッファーで洗浄後、ブロッ
クバッファー（pH8.3 0.2Mグリシン, 0.5M塩化ナトリ
ウム, 0.1M 炭酸水素ナトリウム）を添加し室温で2時間
反応した。２種類の後処理バッファー（pH4.0 0.5M 塩
化ナトリウム, 0.1M酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、pH8.
0 0.5M 塩化ナトリウム, 0.1Mトリス−塩酸緩衝液）で
交互に３回ずつ洗浄し、Sepharose 4B-Ｃ１５を得た。
【００３３】（実施例５）多孔質担体（トレシルトヨパ
ール（東ソー株式会社製：球状タンパク質の排除限界分
子量約500万））へのIgG結合タンパク質（Ｃ２４）の固
定化 ・Ｃ２４ペプチドの生産 配列表の配列番号１５のＣ２４ペプチドをコードするDN
AをpUCNTベクターに実施例１と同様の方法にて連結でき
るように 配列番号１６を設計して、合成した。配列番
号１６の配列を有するDNAを実施例１と同様の方法でpUC
NTベクターに導入し、pUCNT-C24ベクターを作製した。
さらに実施例１と同様の方法で、大腸菌の形質転換体を
作製、その6L培養を経て目的Ｃ２４ペプチドの高純度精
製標品を取得し、各種検討に使用した。 ・Ｃ２４ペプチドの固定化 Ｃ２４ペプチド5mgをカップリングバッファー（0.5M 塩
化ナトリウム, 0.1M炭酸緩衝液）1mlに溶解し、AF-トレ
シルトヨパール650を乾燥状態で200mg添加して４℃で終
夜反応させた。0.5M塩化ナトリウム水溶液にて洗浄後、
ブロックバッファー（pH8.0 0.5M 塩化ナトリウム, 0.
1Mトリス−塩酸緩衝液）を添加し室温で2時間反応し
た。さらに0.5M 塩化ナトリウム水溶液にて洗浄し、ト
ヨパール-Ｃ２４を得た。
ール（東ソー株式会社製：球状タンパク質の排除限界分
子量約500万））へのIgG結合タンパク質（Ｃ２４）の固
定化 ・Ｃ２４ペプチドの生産 配列表の配列番号１５のＣ２４ペプチドをコードするDN
AをpUCNTベクターに実施例１と同様の方法にて連結でき
るように 配列番号１６を設計して、合成した。配列番
号１６の配列を有するDNAを実施例１と同様の方法でpUC
NTベクターに導入し、pUCNT-C24ベクターを作製した。
さらに実施例１と同様の方法で、大腸菌の形質転換体を
作製、その6L培養を経て目的Ｃ２４ペプチドの高純度精
製標品を取得し、各種検討に使用した。 ・Ｃ２４ペプチドの固定化 Ｃ２４ペプチド5mgをカップリングバッファー（0.5M 塩
化ナトリウム, 0.1M炭酸緩衝液）1mlに溶解し、AF-トレ
シルトヨパール650を乾燥状態で200mg添加して４℃で終
夜反応させた。0.5M塩化ナトリウム水溶液にて洗浄後、
ブロックバッファー（pH8.0 0.5M 塩化ナトリウム, 0.
1Mトリス−塩酸緩衝液）を添加し室温で2時間反応し
た。さらに0.5M 塩化ナトリウム水溶液にて洗浄し、ト
ヨパール-Ｃ２４を得た。
【００３４】（実施例６）多孔質担体（Sepharose 6B）
へのIgG結合タンパク質（Ｃ３６）の固定化 ・Sepharose 6Bのエポキシ化 アガロース系ビーズ状ゲルであるSepharose 6B（アマシ
ャム ファルマシアバイオテク社製：球状タンパク質の
排除限界分子量約400万）90mlに水を加え全量を180mlと
した後、2Ｎ水酸化ナトリウム60mlを加え40℃とした。
これにエピクロロヒドリン21mlを加え、40℃で撹拌下２
時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、エポキシ
活性化Sepharose 6Bゲルを得た。 ・Ｃ３６ペプチドの固定化 実施例１のエポキシ活性化Kacゲルをエポキシ活性化Sep
harose 6Bに変えたほかは全く同様にＣ３６ペプチドを
固定化したSepharose 6B-Ｃ３６を得た。
へのIgG結合タンパク質（Ｃ３６）の固定化 ・Sepharose 6Bのエポキシ化 アガロース系ビーズ状ゲルであるSepharose 6B（アマシ
ャム ファルマシアバイオテク社製：球状タンパク質の
排除限界分子量約400万）90mlに水を加え全量を180mlと
した後、2Ｎ水酸化ナトリウム60mlを加え40℃とした。
これにエピクロロヒドリン21mlを加え、40℃で撹拌下２
時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、エポキシ
活性化Sepharose 6Bゲルを得た。 ・Ｃ３６ペプチドの固定化 実施例１のエポキシ活性化Kacゲルをエポキシ活性化Sep
harose 6Bに変えたほかは全く同様にＣ３６ペプチドを
固定化したSepharose 6B-Ｃ３６を得た。
【００３５】（比較例１）多孔質担体（GCL2000m）への
IgG結合タンパク質（プロテインG）の固定化 ・プロテインGの固定化 実施例１のＣ３６ペプチド10mgをプロテインG（シグマ
社製）4mgに変え、エポキシ活性化Kacゲルを実施例３に
おいて作製したエポキシ活性化GCL2000mゲルに変えたほ
かは全く同様にプロテインGを固定化したGCL2000m-プロ
テインGを得た。
IgG結合タンパク質（プロテインG）の固定化 ・プロテインGの固定化 実施例１のＣ３６ペプチド10mgをプロテインG（シグマ
社製）4mgに変え、エポキシ活性化Kacゲルを実施例３に
おいて作製したエポキシ活性化GCL2000mゲルに変えたほ
かは全く同様にプロテインGを固定化したGCL2000m-プロ
テインGを得た。
【００３６】（比較例２）多孔質担体（Kac）へのIgG結
合タンパク質（プロテインＡ）の固定化 ・プロテインＡの固定化 実施例１のＣ３６ペプチド10mgをプロテインＡ（シグマ
社製）4mgに変えたほかは全く同様にプロテインＡを固
定化したKac-プロテインＡを得た。
合タンパク質（プロテインＡ）の固定化 ・プロテインＡの固定化 実施例１のＣ３６ペプチド10mgをプロテインＡ（シグマ
社製）4mgに変えたほかは全く同様にプロテインＡを固
定化したKac-プロテインＡを得た。
【００３７】（比較例３）多孔質担体（Sepharose 6B）
へのIgG結合性ペプチド（ＭG５６）の固定化 ・ＭG５６ペプチドの生産 N末端側にメチオニンを付加したプロテインG C3ドメイ
ンの57残基よりなる配列を有するペプチド（配列表の配
列番号１７）をコードするDNAを、pUCNTベクターに実施
例１と同様の方法にて連結できるように 配列番号１８
を設計して、合成した。配列番号１８の配列を有するDN
Aを実施例１と同様の方法でpUCNTベクターに導入し、pU
CNT-MG56ベクターを作製した。さらに実施例１と同様の
方法で、大腸菌の形質転換体を作製、その6L培養を経て
目的ＭG５６ペプチドの高純度精製標品を取得し、各種
検討に使用した。 ・ペプチドの固定化 上記ペプチドを、多孔質セファロース上に固定化するこ
とにより以下のようにして吸着剤を製造した。セファロ
ースには、チオプロピルセファロース６Ｂ（アマシャム
ファルマシアバイオテク社製）を用いた。チオプロピ
ルセファロース６Ｂ50mgに蒸留水50mlを加え、室温で15
分間放置して樹脂を膨潤させた。次いで、蒸留水を除去
し0.5M NaClを含む0.1Mトリス塩酸（pH7.5）カップリン
グ緩衝液に置換した。一方、上記精製ペプチド4mgを0.5
M NaClを含む0.1Mトリス塩酸（pH7.5）カップリング緩
衝液400ulに溶解し、膨潤させた上記チオプロピルセフ
ァロース６Ｂ150ulを加えて４℃で12時間攪拌した後、
充分量のPBS（150mM塩化ナトリウムを含む10mMリン酸緩
衝液）で洗浄することによって、Sepharose 6B-MG５６
を得た。
へのIgG結合性ペプチド（ＭG５６）の固定化 ・ＭG５６ペプチドの生産 N末端側にメチオニンを付加したプロテインG C3ドメイ
ンの57残基よりなる配列を有するペプチド（配列表の配
列番号１７）をコードするDNAを、pUCNTベクターに実施
例１と同様の方法にて連結できるように 配列番号１８
を設計して、合成した。配列番号１８の配列を有するDN
Aを実施例１と同様の方法でpUCNTベクターに導入し、pU
CNT-MG56ベクターを作製した。さらに実施例１と同様の
方法で、大腸菌の形質転換体を作製、その6L培養を経て
目的ＭG５６ペプチドの高純度精製標品を取得し、各種
検討に使用した。 ・ペプチドの固定化 上記ペプチドを、多孔質セファロース上に固定化するこ
とにより以下のようにして吸着剤を製造した。セファロ
ースには、チオプロピルセファロース６Ｂ（アマシャム
ファルマシアバイオテク社製）を用いた。チオプロピ
ルセファロース６Ｂ50mgに蒸留水50mlを加え、室温で15
分間放置して樹脂を膨潤させた。次いで、蒸留水を除去
し0.5M NaClを含む0.1Mトリス塩酸（pH7.5）カップリン
グ緩衝液に置換した。一方、上記精製ペプチド4mgを0.5
M NaClを含む0.1Mトリス塩酸（pH7.5）カップリング緩
衝液400ulに溶解し、膨潤させた上記チオプロピルセフ
ァロース６Ｂ150ulを加えて４℃で12時間攪拌した後、
充分量のPBS（150mM塩化ナトリウムを含む10mMリン酸緩
衝液）で洗浄することによって、Sepharose 6B-MG５６
を得た。
【００３８】（実施例７）合成した吸着体のIgG吸着能
評価 実施例３において合成した吸着体GCL2000m−Ｃ０４と比
較例１において合成した吸着体GCL2000m−プロテインＧ
各0.5mlにコバルト６０ガンマ線照射（２５ＫＧｙ、３
時間）をコーガアイソトープ株式会社に依頼し滅菌を行
った。吸着実験は、各吸着体100μlをバイアル中に採取
し、ヒト健常人血清300μlを加え37℃で2時間振盪し
た。この懸濁液を5,000rpmで１分間遠心分離を行い、上
清中のIgG濃度をシオノギ バイオメディカル ラボラト
リーズに検査依頼し求めた。対照実験として、吸着体の
代わりに生理食塩水100μlをバイアル中に採取し、上記
と同様な処理をした後、溶液中のIgG濃度を求めた。IgG
の吸着率(%)は、以下の式により算出した。結果を表１
に示す。 吸着率(%)＝｛（V1r−V1t／V1r）｝×100 V1r：対照実験溶液中のIgG濃度 V1t：吸着実験上清中のIgG濃度
評価 実施例３において合成した吸着体GCL2000m−Ｃ０４と比
較例１において合成した吸着体GCL2000m−プロテインＧ
各0.5mlにコバルト６０ガンマ線照射（２５ＫＧｙ、３
時間）をコーガアイソトープ株式会社に依頼し滅菌を行
った。吸着実験は、各吸着体100μlをバイアル中に採取
し、ヒト健常人血清300μlを加え37℃で2時間振盪し
た。この懸濁液を5,000rpmで１分間遠心分離を行い、上
清中のIgG濃度をシオノギ バイオメディカル ラボラト
リーズに検査依頼し求めた。対照実験として、吸着体の
代わりに生理食塩水100μlをバイアル中に採取し、上記
と同様な処理をした後、溶液中のIgG濃度を求めた。IgG
の吸着率(%)は、以下の式により算出した。結果を表１
に示す。 吸着率(%)＝｛（V1r−V1t／V1r）｝×100 V1r：対照実験溶液中のIgG濃度 V1t：吸着実験上清中のIgG濃度
【００３９】（実施例８）合成した吸着体のβ１アドレ
ノセプター抗体吸着能評価 実施例１において合成した吸着体Kac−Ｃ３６と比較例
２において合成した吸着体Kac−プロテインＡ各0.5mlに
コバルト６０ガンマ線照射（２５ＫＧｙ、３時間）をコ
ーガアイソトープ株式会社に依頼し滅菌を行った。吸着
実験は、各吸着体100μlをバイアル中に採取し、β１ア
ドレノセプターに対する抗体が陽性である拡張型心筋症
患者血清300μlを加え37℃で2時間振盪した。この懸濁
液を5,000rpmで１分間遠心分離を行い、上清中のβ１ア
ドレノセプター抗体価をELISA法により測定した。以下
にELISA法の詳細を示す。倉敷紡績株式会社により委託
合成されたβ１アドレノセプターの２番目ループ部分ペ
プチド（配列番号１９）溶液50μg/mlをELISAプレート
に50μl添加し、４℃で一晩放置した。プレート洗浄
後、スキムミルク（ディフコ社製）溶液を100μl添加
し、室温で１時間静置した。プレート洗浄後、検体（前
述の上清を10倍希釈したもの）を50μl添加し、４℃で
一晩放置した。プレート洗浄後、ビオチン標識抗ヒトIg
G抗体（サザン バイオテクノロジー社製）溶液を100μ
l添加し、室温で１時間静置した。プレート洗浄後基質
溶液を100μl添加し、室温で30分静置後405nmにおける
吸光度を測定した。前述の検体の代わりに拡張型心筋症
患者血清を用いた吸光度（吸着能０％相当）と健常人血
清を用いた吸光度（吸着能100％相当）から吸着能を算
出した。結果を表２に示す。
ノセプター抗体吸着能評価 実施例１において合成した吸着体Kac−Ｃ３６と比較例
２において合成した吸着体Kac−プロテインＡ各0.5mlに
コバルト６０ガンマ線照射（２５ＫＧｙ、３時間）をコ
ーガアイソトープ株式会社に依頼し滅菌を行った。吸着
実験は、各吸着体100μlをバイアル中に採取し、β１ア
ドレノセプターに対する抗体が陽性である拡張型心筋症
患者血清300μlを加え37℃で2時間振盪した。この懸濁
液を5,000rpmで１分間遠心分離を行い、上清中のβ１ア
ドレノセプター抗体価をELISA法により測定した。以下
にELISA法の詳細を示す。倉敷紡績株式会社により委託
合成されたβ１アドレノセプターの２番目ループ部分ペ
プチド（配列番号１９）溶液50μg/mlをELISAプレート
に50μl添加し、４℃で一晩放置した。プレート洗浄
後、スキムミルク（ディフコ社製）溶液を100μl添加
し、室温で１時間静置した。プレート洗浄後、検体（前
述の上清を10倍希釈したもの）を50μl添加し、４℃で
一晩放置した。プレート洗浄後、ビオチン標識抗ヒトIg
G抗体（サザン バイオテクノロジー社製）溶液を100μ
l添加し、室温で１時間静置した。プレート洗浄後基質
溶液を100μl添加し、室温で30分静置後405nmにおける
吸光度を測定した。前述の検体の代わりに拡張型心筋症
患者血清を用いた吸光度（吸着能０％相当）と健常人血
清を用いた吸光度（吸着能100％相当）から吸着能を算
出した。結果を表２に示す。
【００４０】（実施例９）合成した吸着体のリウマチ因
子吸着能評価 実施例６において合成した吸着体Sepharose6B−Ｃ３６
と比較例３において合成した吸着体Sepharose6B−ＭＧ
５６各0.5mlにコバルト６０ガンマ線照射（２５ＫＧ
ｙ、３時間）をコーガアイソトープ株式会社に依頼し滅
菌を行った。吸着実験は、各吸着体100μlをバイアル中
に採取し、リウマチ患者血清600μlを加え37℃で2時間
振盪した。この懸濁液を5,000rpmで１分間遠心分離を行
い、上清中のリウマチ因子濃度をシオノギ バイオメデ
ィカル ラボラトリーズに検査依頼し求めた。対照実験
として、吸着体の代わりに生理食塩水100μlをバイアル
中に採取し、上記と同様な処理をした後、溶液中のリウ
マチ因子濃度を求めた。リウマチ因子の吸着率(%)は、
以下の式により算出した。結果を表３に示す。 吸着率(%)＝｛（V2r−V2t／V2r）｝×100 V2r：対照実験溶液中のリウマチ因子濃度 V2t：吸着実験上清中のリウマチ因子濃度
子吸着能評価 実施例６において合成した吸着体Sepharose6B−Ｃ３６
と比較例３において合成した吸着体Sepharose6B−ＭＧ
５６各0.5mlにコバルト６０ガンマ線照射（２５ＫＧ
ｙ、３時間）をコーガアイソトープ株式会社に依頼し滅
菌を行った。吸着実験は、各吸着体100μlをバイアル中
に採取し、リウマチ患者血清600μlを加え37℃で2時間
振盪した。この懸濁液を5,000rpmで１分間遠心分離を行
い、上清中のリウマチ因子濃度をシオノギ バイオメデ
ィカル ラボラトリーズに検査依頼し求めた。対照実験
として、吸着体の代わりに生理食塩水100μlをバイアル
中に採取し、上記と同様な処理をした後、溶液中のリウ
マチ因子濃度を求めた。リウマチ因子の吸着率(%)は、
以下の式により算出した。結果を表３に示す。 吸着率(%)＝｛（V2r−V2t／V2r）｝×100 V2r：対照実験溶液中のリウマチ因子濃度 V2t：吸着実験上清中のリウマチ因子濃度
【００４１】（実施例１０）合成した吸着体の免疫複合
体吸着能評価 実施例２、４、５において合成した吸着体Sephacryl S1
000−Ｂ０４、Sepharose4B−Ｃ１５、トヨパール−Ｃ２
４それぞれ0.5mlにコバルト６０ガンマ線照射（２５Ｋ
Ｇｙ、３時間）をコーガアイソトープ株式会社に依頼し
滅菌を行った。免疫複合体は、ヒトIgG溶液（10mg/ml）
を63℃で15分間加熱することにより調製した。吸着実験
は、各吸着体100μlをバイアル中に採取し、20μg/mlと
なるように先の免疫複合体溶液を添加したヒト健常人血
清300μlを加え37℃で2時間振盪した。この懸濁液を5,0
00rpmで１分間遠心分離を行い、上清中の免疫複合体濃
度を富士レビオ株式会社製フレライザーＣ１ｑ−ＣＩＣ
キットを用いて測定した。対照実験として、吸着体の代
わりに生理食塩水100μlをバイアル中に採取し、上記と
同様な処理をした後、溶液中の免疫複合体濃度を求め
た。免疫複合体の吸着率(%)は、以下の式により算出し
た。結果を表４に示す。 吸着率(%)＝｛（V3r−V3t／V3r）｝×100 V3r：対照実験溶液中の免疫複合体濃度 V3t：吸着実験上清中の免疫複合体濃度
体吸着能評価 実施例２、４、５において合成した吸着体Sephacryl S1
000−Ｂ０４、Sepharose4B−Ｃ１５、トヨパール−Ｃ２
４それぞれ0.5mlにコバルト６０ガンマ線照射（２５Ｋ
Ｇｙ、３時間）をコーガアイソトープ株式会社に依頼し
滅菌を行った。免疫複合体は、ヒトIgG溶液（10mg/ml）
を63℃で15分間加熱することにより調製した。吸着実験
は、各吸着体100μlをバイアル中に採取し、20μg/mlと
なるように先の免疫複合体溶液を添加したヒト健常人血
清300μlを加え37℃で2時間振盪した。この懸濁液を5,0
00rpmで１分間遠心分離を行い、上清中の免疫複合体濃
度を富士レビオ株式会社製フレライザーＣ１ｑ−ＣＩＣ
キットを用いて測定した。対照実験として、吸着体の代
わりに生理食塩水100μlをバイアル中に採取し、上記と
同様な処理をした後、溶液中の免疫複合体濃度を求め
た。免疫複合体の吸着率(%)は、以下の式により算出し
た。結果を表４に示す。 吸着率(%)＝｛（V3r−V3t／V3r）｝×100 V3r：対照実験溶液中の免疫複合体濃度 V3t：吸着実験上清中の免疫複合体濃度
【００４２】（実施例１１）合成した吸着体のIgG吸着
能評価 実施例１と同様の方法で、デキストラン系のビーズ状ゲ
ルであるSephadex G-150（アマシャム ファルマシアバ
イオテク社製：球状タンパク質の排除限界分子量約30
万）のエポキシ化を実施し、Ｃ３６ペプチドを固定化す
ることによって吸着体Sephadex G-150−Ｃ３６を合成し
た。吸着体Sephadex G-150−Ｃ３６とペプチドを固定し
ていないSephadex G-150各0.5mlにコバルト６０ガンマ
線照射（２５ＫＧｙ、３時間）をコーガアイソトープ株
式会社に依頼し滅菌を行った。吸着実験は、実施例７と
同様の方法で実施した。結果を表５に示す。
能評価 実施例１と同様の方法で、デキストラン系のビーズ状ゲ
ルであるSephadex G-150（アマシャム ファルマシアバ
イオテク社製：球状タンパク質の排除限界分子量約30
万）のエポキシ化を実施し、Ｃ３６ペプチドを固定化す
ることによって吸着体Sephadex G-150−Ｃ３６を合成し
た。吸着体Sephadex G-150−Ｃ３６とペプチドを固定し
ていないSephadex G-150各0.5mlにコバルト６０ガンマ
線照射（２５ＫＧｙ、３時間）をコーガアイソトープ株
式会社に依頼し滅菌を行った。吸着実験は、実施例７と
同様の方法で実施した。結果を表５に示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】
【表２】
【００４５】
【表３】
【００４６】
【表４】
【００４７】
【表５】
【００４８】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> 鐘淵化学工業株式会社 KANEKA CORPORATION
<120>新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法
<160> 19
<210> 1
<211> 57
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:claim peptide
<400> 1
Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr
1 5 10 15
Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg X01
20 25 30
Tyr Ala X02 Asp Asn Gly Val X03 Gly X04 Trp Thr Tyr Asp Pro Ala
35 40 45
Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys
50 55
X01: Asn or Lys or Gln
X02: Thr or Asn
X03: Glu or Asp
X04: Leu or Val or Ile or Met
<210> 2
<211> 171
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:claim DNA
<400> 2
acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa acc 48
Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr
1 5 10 15
acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gag cgc gca ttt cgg X01 96
Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg X01
20 25 30
tat gct X02 gac aac ggt gtc X03 ggt X04 tgg acc tat gac ccc gct 144
Tyr Ala X02 Asp Asn Gly Val X03 Gly X04 Trp Thr Tyr Asp Pro Ala
35 40 45
acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa tgc 171
Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys
50 55
X01: aac or aat or aaa or aag or caa or cag
X02: aca or acg or acc or act or aac or aat
X03: gaa or gag or gac or gat
X04: cta or ctg or ctc or ctt or tta or ttg or gta or gtg or gtc or gtt
or ata or atc or att or atg
<210> 3
<211> 55
<212> PRT
<213> Streptococcus sp. G148
<400> 3
Thr Tyr Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr
1 5 10 15
Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr
20 25 30
Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr
35 40 45
Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu
50 55
<210> 4
<211> 55
<212> PRT
<213> Streptococcus sp. G148
<400> 4
Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr
1 5 10 15
Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr
20 25 30
Ala Asp Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr
35 40 45
Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu
50 55
<210> 5
<211> 55
<212> PRT
<213> Streptococcus sp. G148
<400> 5
Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr
1 5 10 15
Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr
20 25 30
Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr
35 40 45
Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu
50 55
<210> 6
<211> 56
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:C3 domain
<400> 6
Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr
1 5 10 15
Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln
20 25 30
Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala
35 40 45
Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu
50 ５５
<210> 7
<211> 181
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:C3 domain DNA
<400> 7
catatg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa acc54
Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr
1 5 10 15
acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gaa aaa gca ttt aaa cag 102
Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln
20 25 30
tat gct aac gac aac ggt gtc gac ggt gtt tgg acc tat gac gac gct 150
Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala
35 40 45
acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa taagctt 181
Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu
50 55
<210> 8
<211> 58
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:C36
<400> 8
Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu
1 5 10 15
Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg
20 25 30
Gln Tyr Ala Thr Asp Asn Gly Val Glu Gly Met Trp Thr Tyr Asp Pro
35 40 45
Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys
50 55
<210> 9
<211> 184
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:C36-DNA
<400> 9
cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa 51
Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu
1 5 10 15
acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gag cgc gca ttt cgg 99
Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg
20 25 30
cag tat gct acg gac aac ggt gtc gaa ggt atg tgg acc tat gac ccc 147
Gln Tyr Ala Thr Asp Asn Gly Val Glu Gly Met Trp Thr Tyr Asp Pro
35 40 45
gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa tgc taagctt 184
Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys
50 55
<210> 10
<211> 58
<212> PRT
<210> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:B04
<400> 10
Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu
1 5 10 15
Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg
20 25 ３０
Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ａｓｐ
Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｐｒｏ ３５ ４０
４５ 50 55 <210> 11 <211> 58 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C04 <400> 11 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 Lys Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Glu Gly Ile Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 12 <211> 184 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C04-DNA <400> 12 cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa gga gaa 51 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gaa aga gca ttt agg 99 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 aag tat gct aac gac aac ggt gtc gaa ggt atc tgg acc tat gac ccc 147 Lys Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Glu Gly Ile Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa tgc taagctt 184 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 13 <211> 58 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C15 <400> 13 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 14 <211> 184 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C15-DNA <400> 14 cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa 51 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gag cgc gca ttt cga 99 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 cag tat gct aac gac aac ggt gtc gag ggt ctg tgg acc tat gac ccc 147 Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa tgc taagctt 184 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 15 <211> 58 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C24 <400> 15 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 Lys Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Met Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 16 <211> 184 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C24-DNA <400> 16 cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa 51 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gag cgc gca ttt cgg 99 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 aag tat gct aac gac aac ggt gtc gac ggt atg tgg acc tat gac ccc 147 Lys Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Met Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa tgc taagctt 184 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 17 <211> 57 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:MG56 <400> 17 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys 20 25 30 Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp 35 40 45 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu 50 55 <210> 18 <211> 181 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:MG56-DNA <400> 18 cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa 51 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gaa aaa gca ttt aaa 99 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys 20 25 30 cag tat gct aac gac aac ggt gtc gac ggt gtt tgg acc tat gac gac 147 Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp 35 40 45 gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa taagctt 181 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu 50 55 <210> 19 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:β1adrenoceptor Position197-22 2 <400> 19 His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp 1 5 10 15 Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Cys 20 25
Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｐｒｏ ３５ ４０
４５ 50 55 <210> 11 <211> 58 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C04 <400> 11 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 Lys Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Glu Gly Ile Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 12 <211> 184 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C04-DNA <400> 12 cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa gga gaa 51 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gaa aga gca ttt agg 99 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 aag tat gct aac gac aac ggt gtc gaa ggt atc tgg acc tat gac ccc 147 Lys Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Glu Gly Ile Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa tgc taagctt 184 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 13 <211> 58 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C15 <400> 13 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 14 <211> 184 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C15-DNA <400> 14 cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa 51 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gag cgc gca ttt cga 99 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 cag tat gct aac gac aac ggt gtc gag ggt ctg tgg acc tat gac ccc 147 Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa tgc taagctt 184 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 15 <211> 58 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C24 <400> 15 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 Lys Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Met Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 16 <211> 184 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:C24-DNA <400> 16 cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa 51 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gag cgc gca ttt cgg 99 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Phe Arg 20 25 30 aag tat gct aac gac aac ggt gtc gac ggt atg tgg acc tat gac ccc 147 Lys Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Met Trp Thr Tyr Asp Pro 35 40 45 gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa tgc taagctt 184 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Cys 50 55 <210> 17 <211> 57 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:MG56 <400> 17 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys 20 25 30 Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp 35 40 45 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu 50 55 <210> 18 <211> 181 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:MG56-DNA <400> 18 cat atg acc acc tat aaa ctg gtt atc aac ggt aaa acc ctg aaa ggt gaa 51 Met Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu 1 5 10 15 acc acc acc aag gct gtt gac gct gaa acc gct gaa aaa gca ttt aaa 99 Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys 20 25 30 cag tat gct aac gac aac ggt gtc gac ggt gtt tgg acc tat gac gac 147 Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp 35 40 45 gct acc aaa acc ttt acc gtt acc gaa taagctt 181 Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu 50 55 <210> 19 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:β1adrenoceptor Position197-22 2 <400> 19 His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp 1 5 10 15 Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Cys 20 25
【００４９】
【発明の効果】本発明によれば、上記実施例から明らか
なとおり、体液中に存在する免疫グロブリンおよび／ま
たは免疫複合体を選択的に吸着する能力を有する新規な
吸着材が提供される。また、該吸着材を充填してなる体
液処理装置を用いることによって、血液、血漿、血清な
どの被処理液中の免疫グロブリンおよび／または免疫複
合体を選択的に除去することが可能である。
なとおり、体液中に存在する免疫グロブリンおよび／ま
たは免疫複合体を選択的に吸着する能力を有する新規な
吸着材が提供される。また、該吸着材を充填してなる体
液処理装置を用いることによって、血液、血漿、血清な
どの被処理液中の免疫グロブリンおよび／または免疫複
合体を選択的に除去することが可能である。
【００５０】
【図１】図1は、3種類のゲルを用いて流速と圧力損失と
の関係を調べた結果を示すグラフである。
の関係を調べた結果を示すグラフである。
【図２】図2は、本発明の免疫グロブリンおよび／また
は免疫複合体の吸着装置一例の概略断面図である。
は免疫複合体の吸着装置一例の概略断面図である。
1:体液の流入口
2:体液の流出口
3: 免疫グロブリンおよび／または免疫複合体の吸着材
4、5:体液および体液に含まれる成分は通過できるが前
記免疫グロブリンおよび／または免疫複合体の吸着材は
通過できないフィルター 6:カラム 7:吸着器
記免疫グロブリンおよび／または免疫複合体の吸着材は
通過できないフィルター 6:カラム 7:吸着器
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
5/10 5/00 Ａ
(72)発明者 古吉 重雄
大阪府摂津市鳥飼西５−１−１ 鐘淵化学
工業株式会社大阪工場内
Ｆターム(参考） 4B024 AA03 AA11 AA20 BA61 CA01
DA06 EA03 EA04 GA11
4B065 AA26X AB01 AC14 BD14
CA24 CA25 CA44 CA46
4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA20
DA76 EA20 EA50 FA34 FA74
FA83
Claims (15)
- 【請求項１】配列表の配列番号１で示す次のアミノ酸配
列をもつ免疫グロブリンおよび／または免疫複合体親和
性ペプチド。 但し X01： Asn、Lys、Glnのいずれか X02： Thr、Asnのいずれか X03： Glu、Aspのいずれか X04： Leu、Val、Ile、Metのいずれか - 【請求項２】配列表の配列番号１で示すアミノ酸配列の
少なくとも一つをコードするヌクレオチド配列。 - 【請求項３】配列表の配列番号２で示す塩基配列の少な
くとも一つからなる請求項２に記載のヌクレオチド配
列。 - 【請求項４】配列表の配列番号１で示すアミノ酸配列を
コードするヌクレオチド配列を一つ又はそれ以上を有す
る組み換えDNA。 - 【請求項５】ヌクレオチド配列が配列表の配列番号２で
示す塩基配列の少なくとも一つからなる請求項４に記載
の組み換えDNA。 - 【請求項６】組み換えDNAがプラスミド又はファージで
ある請求項４又は５に記載の組み換えDNA。 - 【請求項７】配列表の配列番号１で示すアミノ酸配列を
コードするヌクレオチド配列を一つ又はそれ以上有する
組み換えDNAを少なくとも一つ含有する微生物。 - 【請求項８】ヌクレオチド配列が配列表の配列番号２で
示す塩基配列の少なくとも一つからなる請求項７に記載
の微生物。 - 【請求項９】配列表の配列番号１で示すアミノ酸配列の
少なくとも１つを含有し、70個以下のアミノ酸残基から
成るペプチドを水不溶性担体に固定化したことを特徴と
する免疫グロブリンおよび／または免疫複合体の吸着
材。 - 【請求項１０】ペプチドが熱安定性に優れたペプチドで
あることを特徴とする請求項９記載の免疫グロブリンお
よび／または免疫複合体の吸着材。 - 【請求項１１】水不溶性担体が多孔質であることを特徴
とする請求項９記載の免疫グロブリンおよび／または免
疫複合体の吸着材。 - 【請求項１２】水不溶性担体が親水性であることを特徴
とする請求項９記載の免疫グロブリンおよび／または免
疫複合体の吸着材。 - 【請求項１３】水不溶性担体の排除限界分子量が15万以
上である請求項９記載の免疫グロブリンおよび／または
免疫複合体の吸着材。 - 【請求項１４】請求項９記載の吸着材と免疫グロブリン
および／または免疫複合体を含む体液を接触させること
を特徴とする体液中の免疫グロブリンおよび／または免
疫複合体の吸着方法。 - 【請求項１５】液の入口、出口を有し、かつ少なくとも
１つのフィルターを内蔵した容器内に請求項９記載の吸
着材を充填してなる吸着器。
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001283583A JP4685294B2 (ja) | 2001-09-18 | 2001-09-18 | 新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法 |
| DE60233419T DE60233419D1 (de) | 2001-09-18 | 2002-09-18 | Neues peptid, neues adsorbens, adsorptionseinheit und adsorptionsverfahren |
| EP02765585A EP1435360B1 (en) | 2001-09-18 | 2002-09-18 | Novel peptide, novel adsorbent, adsorption unit and adsorption method |
| PCT/JP2002/009572 WO2003025011A1 (fr) | 2001-09-18 | 2002-09-18 | Peptide, adsorbant, unite et methode d'adsorption |
| KR1020047003892A KR100960743B1 (ko) | 2001-09-18 | 2002-09-18 | 신규 펩티드, 신규 흡착재, 흡착기 및 흡착방법 |
| US10/489,202 US7153945B2 (en) | 2001-09-18 | 2002-09-18 | Peptide, novel adsorbent, adsorption unit and adsorption method |
| CA002460048A CA2460048A1 (en) | 2001-09-18 | 2002-09-18 | Novel peptide, novel adsorbent, adsorption unit and adsorption method |
| CNB02818307XA CN1282658C (zh) | 2001-09-18 | 2002-09-18 | 新型肽、新型吸附材料、吸附器和吸附方法 |
| US11/599,281 US20070059800A1 (en) | 2001-09-18 | 2006-11-15 | Novel peptide, novel adsorbent, adsorption unit and adsorption method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001283583A JP4685294B2 (ja) | 2001-09-18 | 2001-09-18 | 新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003088381A true JP2003088381A (ja) | 2003-03-25 |
| JP4685294B2 JP4685294B2 (ja) | 2011-05-18 |
Family
ID=19107047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001283583A Expired - Fee Related JP4685294B2 (ja) | 2001-09-18 | 2001-09-18 | 新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7153945B2 (ja) |
| EP (1) | EP1435360B1 (ja) |
| JP (1) | JP4685294B2 (ja) |
| KR (1) | KR100960743B1 (ja) |
| CN (1) | CN1282658C (ja) |
| CA (1) | CA2460048A1 (ja) |
| DE (1) | DE60233419D1 (ja) |
| WO (1) | WO2003025011A1 (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009118749A (ja) * | 2007-11-12 | 2009-06-04 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 安定な抗体結合性タンパク質 |
| JP2009195184A (ja) * | 2008-02-22 | 2009-09-03 | Kaneka Corp | ＩｇＧ−Ｆａｂ断片抗体結合性ペプチド |
| JPWO2009044650A1 (ja) * | 2007-10-05 | 2011-02-03 | 株式会社カネカ | 免疫グロブリンおよび／または免疫グロブリン複合体に結合活性を有する、標識されたペプチド、および上記ペプチドを用いた免疫グロブリンの検出方法または測定方法 |
| WO2013018880A1 (ja) | 2011-08-04 | 2013-02-07 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | プロテインgの細胞膜外ドメイン変異体のタンデム型多量体から成る新規な改変型タンパク質 |
| WO2014021240A1 (ja) | 2012-08-03 | 2014-02-06 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | プロテインgの細胞膜外ドメイン変異体のタンデム型多量体から成るタンパク質を含む捕捉剤 |
| JP2014136688A (ja) * | 2013-01-16 | 2014-07-28 | Japan Health Sciences Foundation | 抗ＴＮＦα抗体親和性ペプチド、ペプチドカラム、及び抗ＴＮＦα抗体親和性ペプチドのスクリーニング方法 |
| WO2015050153A1 (ja) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部分を有するタンパク質に対するアフィニティを有する複数のドメイン間をリンカーで結合させて成るタンパク質 |
| WO2018180204A1 (ja) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | 株式会社カネカ | 安定性改良型免疫グロブリン結合性ペプチド |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2288760T3 (es) | 1996-04-25 | 2008-01-16 | Bioarray Solutions Ltd. | Ensamblaje electrocinetico controlado por luz de particulas proximas a superficies. |
| US9709559B2 (en) | 2000-06-21 | 2017-07-18 | Bioarray Solutions, Ltd. | Multianalyte molecular analysis using application-specific random particle arrays |
| US7262063B2 (en) | 2001-06-21 | 2007-08-28 | Bio Array Solutions, Ltd. | Directed assembly of functional heterostructures |
| JP4685294B2 (ja) | 2001-09-18 | 2011-05-18 | 株式会社カネカ | 新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法 |
| IL161391A0 (en) | 2001-10-15 | 2004-09-27 | Bioarray Solutions Ltd | Multiplexed analysis of polymorphic loci by concurrent interrogation and enzyme-mediated detection |
| US7526114B2 (en) | 2002-11-15 | 2009-04-28 | Bioarray Solutions Ltd. | Analysis, secure access to, and transmission of array images |
| ES2375962T3 (es) * | 2003-09-22 | 2012-03-07 | Bioarray Solutions Ltd | Polielectrolito inmovilizado en superficie con múltiples grupos funcionales capaces de unirse covalentemente a biomoléculas. |
| JP2007521017A (ja) | 2003-10-28 | 2007-08-02 | バイオアレイ ソリューションズ リミテッド | 固定化捕捉プローブを用いる遺伝子発現分析法の最適化 |
| KR100562050B1 (ko) * | 2004-03-30 | 2006-03-17 | 한국화학연구원 | 가교된 폴리비닐알콜계 신규 고분자막 및 이의 제조방법 |
| US7848889B2 (en) | 2004-08-02 | 2010-12-07 | Bioarray Solutions, Ltd. | Automated analysis of multiplexed probe-target interaction patterns: pattern matching and allele identification |
| EP1859826A4 (en) * | 2005-02-22 | 2013-05-29 | Kaneka Corp | CONTRAST REMOVAL SYSTEM AND METHOD FOR ACTIVATING THE CONTRAST REMOVAL SYSTEM |
| KR100931027B1 (ko) * | 2006-06-27 | 2009-12-10 | 한국생명공학연구원 | Ｎ-말단에 시스테인 태그된 단백질 ｇ 변형체 |
| JP2014529997A (ja) * | 2011-09-23 | 2014-11-17 | ウニヴェルズィテート シュトゥットガルト | 免疫グロブリン結合ドメインを使った血清中半減期延長 |
| CN103626873A (zh) * | 2013-12-16 | 2014-03-12 | 首都医科大学 | 一种诱导心肌细胞凋亡的β1肾上腺素受体单克隆抗体 |
| WO2018047929A1 (ja) * | 2016-09-09 | 2018-03-15 | 東レ株式会社 | 血液浄化用の材料 |
| CN112574979A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-03-30 | 北京华创精科生物技术有限公司 | 一种血浆的凝胶处理设备及方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997026930A1 (en) * | 1996-01-25 | 1997-07-31 | Kaneka Corporation | Adsorbent for immunoglobulins and complexes thereof, adsorption method, and adsorption device |
| WO1998001560A1 (en) * | 1996-07-04 | 1998-01-15 | The University Of Manchester Institute Of Science & Technology | Modified protein g and fragments thereof |
| WO1998042392A1 (en) * | 1997-03-25 | 1998-10-01 | Kaneka Corporation | Adsorbent for eliminating hepatitis c virus, adsorber, and adsorption method |
| EP1013669A2 (en) * | 1998-11-20 | 2000-06-28 | Kaneka Corporation | Method for immobilization of compounds |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4956296A (en) * | 1987-06-19 | 1990-09-11 | Genex Corporation | Cloned streptococcal genes encoding protein G and their use to construct recombinant microorganisms to produce protein G |
| US5312901A (en) * | 1986-02-14 | 1994-05-17 | Pharmacia Lkb Biotechnology Ab | Cloned streptococcal genes encoding protein G and their use to construct recombinant microorganisms to produce protein G |
| US4977247A (en) * | 1986-02-14 | 1990-12-11 | Genex Corporation | Immobilized protein G variants and the use thereof |
| SE459662B (sv) | 1986-03-21 | 1989-07-24 | Pharmacia Ab | Hybrid-dna-molekyl som kodar foer ett protein med samma igg specificitet som protein g, plasmid innehaallande densamma samt foerfarande foer framstaellning av proteinet |
| US5290690A (en) * | 1988-07-15 | 1994-03-01 | Plant Genetic Systems | Methods and means for controlling the stability of proteins |
| EP0707640A4 (en) * | 1993-07-07 | 2000-10-11 | Biomolecular Res Inst Ltd | (1 $m(7) 3, 1 $m(7) 4)-$g(b)-GLUCANASE OF ENHANCED STABILITY |
| US6677432B1 (en) * | 1998-10-07 | 2004-01-13 | Stryker Corporation | Mutations of the C-terminal portion of TGF-β superfamily proteins |
| JP4685294B2 (ja) | 2001-09-18 | 2011-05-18 | 株式会社カネカ | 新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法 |
-
2001
- 2001-09-18 JP JP2001283583A patent/JP4685294B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-09-18 KR KR1020047003892A patent/KR100960743B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-18 DE DE60233419T patent/DE60233419D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-18 WO PCT/JP2002/009572 patent/WO2003025011A1/ja not_active Ceased
- 2002-09-18 EP EP02765585A patent/EP1435360B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-18 CN CNB02818307XA patent/CN1282658C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-18 US US10/489,202 patent/US7153945B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-18 CA CA002460048A patent/CA2460048A1/en not_active Abandoned
-
2006
- 2006-11-15 US US11/599,281 patent/US20070059800A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997026930A1 (en) * | 1996-01-25 | 1997-07-31 | Kaneka Corporation | Adsorbent for immunoglobulins and complexes thereof, adsorption method, and adsorption device |
| WO1998001560A1 (en) * | 1996-07-04 | 1998-01-15 | The University Of Manchester Institute Of Science & Technology | Modified protein g and fragments thereof |
| WO1998042392A1 (en) * | 1997-03-25 | 1998-10-01 | Kaneka Corporation | Adsorbent for eliminating hepatitis c virus, adsorber, and adsorption method |
| EP1013669A2 (en) * | 1998-11-20 | 2000-06-28 | Kaneka Corporation | Method for immobilization of compounds |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2009044650A1 (ja) * | 2007-10-05 | 2011-02-03 | 株式会社カネカ | 免疫グロブリンおよび／または免疫グロブリン複合体に結合活性を有する、標識されたペプチド、および上記ペプチドを用いた免疫グロブリンの検出方法または測定方法 |
| JP2009118749A (ja) * | 2007-11-12 | 2009-06-04 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 安定な抗体結合性タンパク質 |
| JP2009195184A (ja) * | 2008-02-22 | 2009-09-03 | Kaneka Corp | ＩｇＧ−Ｆａｂ断片抗体結合性ペプチド |
| WO2013018880A1 (ja) | 2011-08-04 | 2013-02-07 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | プロテインgの細胞膜外ドメイン変異体のタンデム型多量体から成る新規な改変型タンパク質 |
| WO2014021240A1 (ja) | 2012-08-03 | 2014-02-06 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | プロテインgの細胞膜外ドメイン変異体のタンデム型多量体から成るタンパク質を含む捕捉剤 |
| JP2014136688A (ja) * | 2013-01-16 | 2014-07-28 | Japan Health Sciences Foundation | 抗ＴＮＦα抗体親和性ペプチド、ペプチドカラム、及び抗ＴＮＦα抗体親和性ペプチドのスクリーニング方法 |
| WO2015050153A1 (ja) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部分を有するタンパク質に対するアフィニティを有する複数のドメイン間をリンカーで結合させて成るタンパク質 |
| WO2018180204A1 (ja) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | 株式会社カネカ | 安定性改良型免疫グロブリン結合性ペプチド |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2003025011A1 (fr) | 2003-03-27 |
| US7153945B2 (en) | 2006-12-26 |
| US20050038228A1 (en) | 2005-02-17 |
| CN1555383A (zh) | 2004-12-15 |
| CN1282658C (zh) | 2006-11-01 |
| EP1435360A4 (en) | 2006-09-27 |
| US20070059800A1 (en) | 2007-03-15 |
| KR100960743B1 (ko) | 2010-06-01 |
| EP1435360B1 (en) | 2009-08-19 |
| CA2460048A1 (en) | 2003-03-27 |
| JP4685294B2 (ja) | 2011-05-18 |
| DE60233419D1 (de) | 2009-10-01 |
| KR20040039367A (ko) | 2004-05-10 |
| EP1435360A1 (en) | 2004-07-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4685294B2 (ja) | 新規ペプチド、生産方法、新規吸着体、吸着器および吸着方法 | |
| JP3908278B2 (ja) | 免疫グロブリンおよびその複合体の吸着材、吸着方法、および吸着装置 | |
| US6600014B2 (en) | Adsorbent for eliminating hepatitis C virus, adsorber, and adsorption method | |
| JPWO1997026930A1 (ja) | 免疫グロブリンおよびその複合体の吸着材、吸着方法、および吸着装置 | |
| CN103933947B (zh) | 用于清除类风湿因子的血液净化材料及其制备方法 | |
| JP4541490B2 (ja) | 拡張型心筋症用吸着体 | |
| JP3955379B2 (ja) | Ｃ型肝炎ウイルス除去用吸着材、吸着装置及び吸着方法 | |
| JP3329868B2 (ja) | ペプチドおよびこれを担体上に固定化してなる吸着剤 | |
| JP3357139B2 (ja) | 抗デオキシリボ核酸抗体の吸着剤 | |
| HK1066016A (en) | Novel peptide, novel adsorbent, adsorption unit and adsorption method | |
| EP1816137A1 (en) | Adsorbent adsorbing antibody against 1 adrenoreceptor | |
| JPH06263795A (ja) | ペプチドおよびこれを担体上に固定化してなる吸着剤 | |
| JP2020125280A (ja) | Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した抗体吸着剤、およびそれを用いた抗体分離法 | |
| WO2006019015A1 (ja) | インスリン結合たんぱく質と結合能力のあるペプチドおよび吸着材 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20071220 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100810 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20101007 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101102 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101227 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110118 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110210 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140218 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4685294 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140218 Year of fee payment: 3 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |