JP2002536360A - インドール誘導体およびそのｍｃｐ−１受容体拮抗剤としての使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式： 【化１】 [式中、Ｘは、ＣＨ_２またはＳＯ_２であり、Ｒ^１は、置換されていてよいアリールまたはヘテロアリール環であり；Ｒ^４は、基Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１５Ｒ^１６または基（ＣＨ_２）_ｔＲ^１７であり；ここで、Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７は、特定の基であり、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は特定の有機基である]の化合物または式（Ｉ）の化合物の製薬学的に認容性の塩、ｉｎ ｖｉｖｏで加水分解可能なエステル、またはアミド。これらの化合物は特に炎症性疾患の治療に有効であり、本発明は記載しかつ請求した化合物の製法ならびに化合物を含有する医薬品組成物にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、化学的化合物、その製造ならびに該化合物を含有する医薬品組成物
およびその治療、特に炎症性疾患の治療への使用に関する。

【０００２】 ＭＣＰ−１は、白血球の走化性及び活性化を媒介する前炎症性サイトカイン（
pro-inflammatory cytokine）のケモカインファミリー（chemokine family）の
１つである。ＭＣＰ−１はＣ−Ｃケモカインであり、これは最も有効かつ選択的
なＴ細胞及び単球化学誘引物質及び公知の活性剤の１つである。ＭＣＰ−１はリ
ウマチ性関節炎、糸球体腎炎、肺線維症、再狭窄（国際特許出願ＷＯ９４／０９
１２８）、肺胞炎（Jone等、1992、J. Immunol.、149、2147）及び喘息を含めた
多数の炎症性疾患の病理学に関連している。病理学的にＭＣＰ−１が重要な役割
を果たす他の疾患分野は、アテローム性動脈硬化症（例えばKoch等、 1992、J.
Clin. Invest.、90、772〜779）、乾癬（Deleura等、1996、J. Dermatological
Science.、228〜236）、皮膚の遅延型過敏反応、炎症性腸疾患（Grimm等、1996
、J. Leukocyte Biol.、59、804〜812）、多発性硬化症及び脳損傷（Berman等、
1996、J. Immunol.、156、3017〜3023）である。ＭＣＰ−１阻害剤は卒中、再灌
流障害、虚血、心筋梗塞及び移植拒絶反応の治療にも有効である。

【０００３】 ＭＣＰ−１はＭＣＰ−１受容体（ＣＣＲ２受容体としても公知）を介して作用
する。ＭＣＰ−２及びＭＣＰ−３は、少なくとも部分的にＭＣＰ−１受容体を介
して作用することができる。従って、本願明細書において「ＭＣＰ−１の阻害又
は拮抗」又は「ＭＣＰ−１媒介作用」と言及した場合、これはＭＣＰ−２及び／
又はＭＣＰ−３がＭＣＰ−１受容体を介して作用する際のＭＣＰ−２及び／又は
ＭＣＰ−３の阻害又は拮抗又はＭＣＰ−２及び／又はＭＣＰ−３媒介作用をも含
んでいる。

【０００４】 同時係属国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９８／０２３４０およびＰＣＴ／ＧＢ９８
／０２３４１には、ＭＣＰ−１の阻害剤であり、治療に適用される、インドール
環構造を基礎とする化合物群が記載および請求されている。

【０００５】 ＮＭＤＡ拮抗剤としてのインドール誘導体の使用に関して、ＵＳＰ５０５１４
４２、ＷＯ９３１２７８０、ＥＰ４８３８８１に記載される。別のインドールお
よびそのロイコトリエン生合成阻害のための使用が、例えばＥＰ−Ａ−２７５６
６７に記載される。

【０００６】 ＭＣＰ−１阻害剤として治療に使用する際に、インドール上の特別な置換基が
有利な結果を導くことを見出した。

【０００７】 本発明において、式（Ｉ）：

【０００８】

【化５】

【０００９】 [式中、 Ｘは、ＣＨ_２またはＳＯ_２であり、 Ｒ^１は、置換されていてよいアリールまたはヘテロアリール環であり； Ｒ^２は、カルボキシ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＯＮＨＲ^８、−ＳＯ _２ ＮＨＲ_９、テトラゾール−５−イル、ＳＯ_３Ｈ、または式（ＶＩ）：

【００１０】

【化６】

【００１１】 の基であり、ここで Ｒ^８は、水素、アルキル、アリール、シアノ、ヒドロキシ、−ＳＯ_２Ｒ^１２から
選択され、この際、 Ｒ^１２はアルキル、アリール、ヘテロアリール、またはハロアルキルであるか、
または Ｒ^８は、基−（ＣＨＲ^１３）_ｒ−ＣＯＯＨであり、この際、 ｒは、１〜３の整数であり、 各Ｒ^１３基は、独立して水素またはアルキルから選択され； Ｒ^９は、水素、アルキル、置換されていてもよいアリール、例えば置換されてい
てよいフェノールまたは置換されていてよいヘテロアリール、例えば５または６
員のヘテロアリール基であるか、または基ＣＯＲ^１４であり、ここで、 Ｒ^１４は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはハロアルキルであり； Ｒ^１０およびＲ^１１は、独立して水素またはアルキル、特にＣ_１〜_４−アルキル
から選択され； Ｒ^３は、水素、官能基、置換されていてよいアルキル、置換されていてよいアル
ケニル、置換されていてよいアルキニル、置換されていてよいアリール、置換さ
れていてよいヘテロサイクリル、置換されていてよいアルコキシ、置換されてい
てよいアラルキル、置換されていてよいアラルキルオキシ、置換されていてよい
シクロアルキルであり； Ｒ^４は、基Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１５Ｒ^１６または基（ＣＨ_２）_ｔＲ^１７であり；ここで
、 Ｒ^１５およびＲ^１６は、独立して水素、置換されていてよいアルキル、置換され
ていてよいアルケニル、置換されていてよいアルキニル、置換されていてよいシ
クロアルキルまたは置換されていてよいヘテロサイクリルであり、ただし、Ｒ^{１ ５} およびＲ^１６は、双方が水素ではなく、またはＲ^１５およびＲ^１６は、これら
が結合している窒素といっしょになって、置換されていてもよいヘテロ環を形成
し、この環は別のヘテロ原子を含有してよく、 Ｒ^１７は、ＮＲ^１８Ｒ^１９、ＯＲ^２０またはＳ（Ｏ）_ｓＲ^２１であり、ここで、
Ｒ^１８およびＲ^１９は、独立して水素、置換されていてよいヒドロカルビルまた
は置換されていてよいヘテロサイクリルであり、またはＲ^１８およびＲ^１９は、
これらが結合している窒素原子といっしょになって置換されていてよいヘテロ環
を形成し、この環は別のヘテロ原子を含有しえよく； Ｒ^２０は、置換されたアルキル、置換されていてよいアルケニル、置換されてい
てよいアルキニル、置換されていてよいシクロアルキルまたは置換されていてよ
いヘテロサイクリルであり、 Ｒ^２１は、置換されていてよいヒドロカルビルまたは置換されていてよいヘテロ
サイクリルであり、 ｓは、０、１または２であり、 ｔは、１〜４の整数であり； Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は、独立して、水素、官能基または置換されていてよいヒ
ドロカルビル基または置換されていてよいヘテロサイクリル基である]の化合物
が提供される。

【００１２】 さらに本発明は、式（Ｉ）の化合物の製薬学的に認容性の塩、ｉｎ ｖｉｖｏ
で加水分解可能なエステル、またはアミドを提供する。

【００１３】 式（Ｉ）の化合物は、単球走化性タンパク質１の阻害剤である。さらに、これ
らはＲＡＮＴＥＳ誘導走化性を阻害する。ＲＡＮＴＥＳは、ＭＣＰ−１と同じフ
ァミリーの別のケモカインであり、同様の生理学的側面を有するがＣＣＲ１受容
体を介して作用する。従ってこれらの化合物は、このような仲介物に関連した疾
患、特に炎症性疾患の治療に使用できる。よって、本発明はさらに、式（Ｉ）の
化合物の炎症性疾患の治療への使用に関する。

【００１４】 本明細書中で、単独または添え字とともに使用される用語「アルキル」は、直
鎖、分枝構造および環系を含む。これらの基は、１０個までの、有利には６個ま
での、特に有利には４個までの炭素原子を含有する。同様に、用語「アルケニル
」および「アルキニル」も、例えば２〜１０個の、有利には２〜６個の炭素原子
を含有する不飽和直鎖または分枝構造を意味する。シクロアルキル、シクロアル
ケニルおよびシクロアルキニルのような環部分も同様の性質を有し、少なくとも
３個の炭素原子を含む。用語「アルコキシ」は、従来技術であるところのアルキ
ル基を含有する。

【００１５】 用語「ハロ」には、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードが含まれる。アリ
ール基には、フェニルおよびナフチルのような芳香族炭素環式化合物が含まれる
。用語「ヘテロサイクリル」または「ヘテロ環」には、芳香族または非−芳香族
環が含まれ、例えば４〜２０個の、有利には５〜８個の環原子を有し、そのうち
の少なくとも１つが、酸素、硫黄または窒素のようなヘテロ原子である。窒素へ
テロ原子は、例えば可能な結合により水素またはヒドロカルビルで置換できる。
硫黄原子はＳ、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）_２の形で存在できる。

【００１６】 このような基の例には、フリル、チエニル、ピロリル、ピロリジニル、イミダ
ゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾ
リル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリ
アジニル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、ベンゾチアゾリル、
ベンゾキサゾリル、ベンゾチエニルまたはベンゾフリルがある。

【００１７】 「ヘテロアリール」は、芳香族としての特徴を有する前記基を意味する。用語
「アラルキル」は、アリールで置換されたアルキル基、例えばベンジルである。

【００１８】 本明細書中で使用される別の用語には、炭素原子および水素原子を含有する任
意の構造を意味する「ヒドロカルビル」が含まれる。例えば、アルキル、アルケ
ニル、アルキニル、アリール、ヘテロサイクリル、アルコキシ、アラルキル、シ
クロアルキル、シクロアルケニルまたはシクロアルキニルである。

【００１９】 用語「官能基」は、反応性の置換基を意味する。これには、電子供与性または
電子吸引性のものが含まれる。このような基の例は、ハロ、シアノ、ニトロ、Ｃ
（Ｏ）_ｎＲ^２２、ＯＲ^２２、Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^２２、ＮＲ^２３Ｒ^２４、Ｃ（Ｏ）ＮＲ ^２３ Ｒ^２４、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^２３Ｒ^２４、−ＮＲ^２３Ｃ（Ｏ）_ｎＲ^２２、−ＮＲ ^２２ ＣＯＮＲ^２３Ｒ^２４、−Ｎ＝ＣＲ^２２Ｒ^２３、Ｓ（Ｏ）_ｍＮＲ^２３Ｒ^２４ま
たは−ＮＲ^２３Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^２２であり、ここで、Ｒ^２２，Ｒ^２３およびＲ^２４ は独立して水素または置換されていてよいヒドロカルビルから選択され、または
Ｒ^２３およびＲ^２４はいっしょになって、前記の置換されていてよいヘテロ環を
形成し、この環は硫黄、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ_２、酸素および窒素のようなヘテロ原子
でさらに置換されていてよく、ｎは１または２の整数であり、ｍは１〜２の整数
である。

【００２０】 ヒドロカルビルまたは基Ｒ^２２、Ｒ^２３およびＲ^２４の好適な任意の置換基は
、ハロ、ペルハロアルキル、例えばトリフルオロメチル、メルカプト、ヒドロキ
シ、カルボキシ、アルコキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、アルケ
ニルオキシ、アルキニルオキシ、アルコキシアルコキシ、アリールオキシ（ここ
で、アリール基は、ハロ、ニトロまたはヒドロキシにより置換されていてよい）
、シアノ、ニトロ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、オキシミ
ノまたはＳ（Ｏ）_ｍ’Ｒ^２５であり、ここでｍ’は、１または２であり、Ｒ^２５ はアルキルである。

【００２１】 Ｒ^２３およびＲ^２４がヘテロ環を形成する場合、この環はアルキルのようなヒ
ドロカルビルならびにヒドロカルビル基で列記した前記置換基により置換されて
いてよい。

【００２２】 ヒドロカルビルまたはヘテロ環基Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７のための好適な置換基
は、Ｒ^２２、Ｒ^２３およびＲ^２４で列記した前記基である。

【００２３】 好適なＲ^１は、置換されていてよいフェニル、ピリジル、ナフチル、フリルま
たはチエニル環であり、特に置換されていてよいフェニルまたはピリジル環であ
る。

【００２４】 式（Ｉ）のＲ^１のための好適な置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル
、ハロ、ペルハロアルキルを含むハロアルキル、例えばトリフルオロメチル、メ
ルカプト、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ
、ヒドロキシアルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルカノイル、アルカノイル
オキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、オ
キシミノ、スルホンアミド、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアル
キルカルバモイルまたはＳ（Ｏ）_ｍＲ^２６であり、ここで、ｍは前記の通りであ
り、Ｒ^２６は、ヒドロカルビルである。

【００２５】 置換基Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７の特別な例は、水素、ヒドロキシ、ハロ、置換さ
れていてよいアルキル、例えば、アラルキル、カルボキシアルキルまたはそのア
ミド誘導体；アルコキシ；アリールオキシ；アラルキルオキシ；またはアルキル
、アリールまたはアラルキルで置換されていてよいアミノ基である。Ｒ^５、Ｒ^６ および／またはＲ^７に好適な特別の官能基は、式（ＩＶ）：

【００２６】

【化７】

【００２７】 の基である。

【００２８】 基Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７の特別な例は、水素、ヒドロキシ、ハロまたはアルコ
キシである。特にＲ^６およびＲ^７は、水素である。Ｒ^５は、水素であってよいが
、さらにヒドロキシ、ハロまたはメトキシのような小さな置換基が好適である。

【００２９】 Ｒ^１のための特別な置換基は、トリフルオロメチル、Ｃ_１〜_４−アルキル、ハ
ロ、トリフルオロメトキシ、Ｃ_１〜_４−アルコキシ、Ｃ_１〜_４−アルカノイル、
Ｃ_１〜_４−アルカノイルオキシ、ニトロ、カルバモイル、Ｃ_１〜_４−アルコキシ
カルボニル、Ｃ_１〜_４−アルキルスルファニル、Ｃ_１〜_４−アルキルスルフィニ
ル、Ｃ_１〜_４−アルキルスルホニル、スルホンアミド、カルバモイルＣ_１〜_４−
アルキル、Ｎ−（Ｃ_１〜_４−アルキル）カルバモイルＣ_１〜_４−アルキル、Ｎ−
（Ｃ_１〜_４−アルキル）_２カルバモイル−Ｃ_１〜_４−アルキル、ヒドロキシＣ_１ 〜_４−アルキルまたはＣ_１〜_４−アルコキシＣ_１〜_４−アルキルである。

【００３０】 付加的にまたは選択的に、このような置換基の２つがいっしょになって、Ｒ^１ 環状の隣接した炭素原子に結合した式−Ｏ（ＣＨ_２）_１〜_４Ｏ−の二価基を形成
する。

【００３１】 Ｒ^１のための有利な置換基は、１つ以上の非極性置換基、例えばハロである。

【００３２】 特に、Ｒ^１は、１つ以上のハロ基、特に塩素で置換される。Ｒ^１基の特別な例
は３,４−ジクロロフェニル、３−フルオロ−４−クロロフェニル、３−クロロ
−４−フルオロフェニルまたは２,３−ジクロロピリド−５−イルである。

【００３３】 基Ｒ^２の例には、カルボキシ；シアノ；テトラゾール−５−イル；ＳＯ_３Ｈ；
−ＣＯＮＨＲ^８が含まれ、ここでＲ^８は、シアノ、ヒドロキシ、−ＳＯ_２Ｒ^１２ から選択され、ここでＲ^１２は、Ｃ_１〜_４アルキルのようなアルキル、フェニル
のようなアリール、ヘテロアリールまたはトリフルオロメチルであり、またはＲ ^８ は、基−（ＣＨＲ^１０）_ｒ−ＣＯＯＨであり、ここでｒは、１〜３の整数であ
り、各Ｒ^１０基は、水素またはＣ_１〜_４−アルキルのようなアルキルから独立し
て選択され；またはＲ^２は基−ＳＯ_２ＮＨＲ^９であり、ここでＲ^９は、置換され
ていてよいフェニルまたは置換されていてよい５または６員のヘテロアリール基
であるかまたは基ＣＯＲ^１４であり、ここでＲ^１４は、Ｃ_１〜_４−アルキルのよ
うなアルキル、フェニルのようなアリール、ヘテロアリールまたはトリフルオロ
メチルであり、またはＲ^２は、式（ＶＩ）：

【００３４】

【化８】

【００３５】 の基であり、ここでＲ^１０およびＲ^１１は、水素またはアルキル、特にＣ_１〜_４ −アルキルから独立して選択される。

【００３６】 有利なＲ^２は、カルボキシまたはその製薬学的に認容性の塩またはエステルで
ある。

【００３７】 好適な基Ｒ^３は、水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、メチル、シアノ
、トリフルオロメチル、ヒドロキシメチル、アルコキシアルキル、例えばＣ_１〜 _４ −アルコキシメチル、メトキシ、ベンジルオキシ、カルボキシアルコキシ、例
えばカルボキシメトキシ、メチルスルファニル、メチルスルフィニル、メチルス
ルホニルまたはカルボキシＣ_３〜_６−シクロアルキル、−（ＣＨＲ^２７）_ｒ−Ｎ
Ｒ^２８Ｒ^２９であり、ここでｒは０〜２であり、各Ｒ^２７は独立して水素または
アルキル、特にＣ_１〜_４−アルキルであり、Ｒ^２８およびＲ^２９は独立してＨお
よびＣ_１〜_４−アルキルから選択されるかまたはＲ^２８およびＲ^２９はそれらが
結合している窒素といっしょになって、場合により更に１つのＯ、Ｎ、Ｓ、Ｓ（
Ｏ）またはＳＯ_２から選択されるヘテロ原子を含有する５または６員環である。
好適なＲ^２８およびＲ^２９はいっしょになって、例えばモルホリノまたはピペラ
ジニルのようなヘテロ環を形成する。

【００３８】 別のこのような基Ｒ^３には、置換されていてよいアリール基、例えば置換され
ていてよいフェニルまたはナフチル基が含まれる。フェニル基Ｒ^３の好適な置換
基は、塩素、フッ素、メチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ア
ミノ、ホルミル、フェニル、メトキシ、フェノキシまたはフェニルから選択され
る１つ以上の基である。

【００３９】 Ｒ^３は、前記のような置換基の範囲を含み、特に水素、またはＣ_１〜_４−アル
キルのような小さな置換基、特にメチル、またはトリフルオロメチルであり、有
利には水素である。

【００４０】 Ｒ^４の定義で記載されたヒドロカルビルおよびヘテロ環基Ｒ^１５、Ｒ^１６、Ｒ ^１８ 、Ｒ^１９、Ｒ^２０およびＲ^２１の好適な置換基は、Ｒ^２２、Ｒ^２３およびＲ ^２４ で前記されたものを含む。

【００４１】 Ｒ^４の例は、基Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、ここでＲ^１５またはＲ^１６の
一方が水素またはアルキル、例えばメチルであり、他方が置換されていてよいヘ
テロサイクリルまたは置換されていてよいアルキル、例えばＣ_１〜_２−アルキル
、特にメチルであり、またはＲ^１５とＲ^１６はそれらが結合している窒素原子と
いっしょになって置換されていてよいヘテロ環を形成し、これは別のヘテロ原子
をさらに含有していてよい。この場合、ヘテロ環基Ｒ^１５またはＲ^１６の好適な
任意の置換基は、メチルのようなアルキル基、またはオキソ基である。アルキル
基Ｒ^１５およびＲ^１６のための好適な任意の置換基は、アミノ；モノアルキルア
ミノまたはジアルキルアミノ；カルボキシ；例えばメチルのようなアルキル基ま
たはオキソ基で置換されていてよいヘテロ環；または基ＮＨＳＯ_２Ｒ^３０（ここ
でＲ^３０は、メチルのようなアルキルである）から選択される１つ以上の基であ
る。

【００４２】 好適な基Ｒ^４は、基Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、ここでＲ^１５またはＲ^{１ ６} の一方は水素であり、他方はヘテロサイクリルまたはアミノ、モノアルキルア
ミノまてゃあジアルキルアミノ、カルボキシまたは置換されていてよいヘテロサ
イクリルから選択される１つ以上の基で置換されたアルキルであるるかまたはＲ ^１５ およびＲ^１６はそれらが結合している窒素原子といっしょになって、場合に
より別のヘテロ原子を含有する置換されていてよいヘテロ環を形成する。

【００４３】 Ｒ^１５またはＲ^１６の１つが水素である場合、他方の好適なヘテロサイクリル
の例は、イミダゾール、イミダゾリノンまたはテトラヒドロチオフェン−１,１
−ジオキシドである。

【００４４】 有利にはＲ^１５またはＲ^１６の一方は水素であり、他方は置換されていてよい
アルキル、例えばＣ_１〜_２アルキルである。好適な置換基には、アミノ、モノア
ルキルアミノまたはジアルキルアミノ、基ＮＨＳＯ_２Ｒ^３０（ここでＲ^３０はメ
チル、カルボキシまたは置換されていてよいヘテロサイクリルであり、例えばメ
チルのようなアルキルでモノ置換またはジ置換により置換されていてよいイソキ
サゾールである。

【００４５】 Ｒ^１５およびＲ^１６が、それらが結合している窒素原子といっしょになって別
のヘテロ原子を含有する置換されていてよいヘテロ環を形成する場合、該環は、
例えばモルホリン環である。また、Ｒ^４は、前記の式（ＩＶ）の基である。

【００４６】 また、Ｒ^４は、有利には基（ＣＨ_２）_ｔＲ^１７であり、ここでｔは１でありＲ ^１７ は基ＮＲ^１８Ｒ^１９である。Ｒ^１８およびＲ^１９の特別な例は、水素および
置換されていてよいアルキルであるかまたはＲ^１８およびＲ^１９は、それらが結
合している窒素といっしょになって置換されていてよいヘテロ環を形成し、この
環は別のヘテロ原子を含有してよく、例えばピラゾールまたはテトラヒドロピラ
ニルである。特に、Ｒ^１８およびＲ^１９はいっしょになってモルホリン環を形成
する。

【００４７】 Ｘは、ＣＨ_２またはＳＯ_２であり、有利にはＣＨ_２である。

【００４８】 好適な式（Ｉ）の化合物の製薬学的に認容性の塩は、酸付加塩であり、例えば
メタンスルホネート、フマレート、ヒドロクロライド、ヒドロブロマイド、シト
レート、マレートおよびリン酸および硫酸により形成される塩である。別の好適
な態様において、塩は塩基性塩、例えばナトリウムのようなアルカリ金属塩、カ
ルシウムまたはマグネシウムのようなアルカリ土類金属塩、トリエチルアミン、
モルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、プロカイン、ジベ
ンジルアミン、Ｎ,Ｎ−ジベンジルエチルアミンのような有機アミン塩またはリ
ジンのようなアミノ酸である。荷電部の数およびカチオンまたアニオンの価数に
応じて、１つ以上のカチオンまたはアニオンが存在してよい。製薬学的に認容性
の塩の有利なものは、ナトリウム塩である。

【００４９】 カルボキシまたはヒドロキシ基を含有する式（Ｉ）の化合物のｉｎ ｖｉｖｏ
加水分解性エステルは、例えばヒトまたは動物の体内で加水分解されて親酸また
は親アルコールを生じる製薬学的に認容性のエステルである。

【００５０】 カルボキシの好適な製薬学的に認容性のエステルは、アルキルエステルであり
、例えばエチルエステルのようなＣ_１〜_６−アルキルエステル、メトキシメチル
のようなＣ_１〜_６−アルコキシメチルエステル、ピバロイルオキシメチルのよう
なＣ_１〜_６−アルカノイルオキシメチルエステル、フタリジルエステル、１−シ
クロヘキシカルボニルオキシエチルのようなＣ_３〜_８−シクロアルコキシ−カル
ボニルオキシＣ_１〜_６−アルキルエステル；５−メチル−１,３−ジオキソレン
−２−オニルメチルのような１,３−ジオキソレン−２−オニルメチルエステル
；１−メトキシカルボニルオキシエチルのようなＣ_１〜_６−アルコキシカルボニ
ルオキシエチルエステルであり、本発明の化合物中の任意のカルボキシ基におい
て形成される。

【００５１】 式（Ｉ）の化合物の好適な製薬学的に認容性のエステルは、ヒドロキシ基を含
有する式（Ｉ）の化合物のｉｎ ｖｉｖｏ加水分解性エステルであり、リン酸エ
ステルのような無機エステルおよびα−アシルオキシアルキルエーテルおよびエ
ステルのｉｎ ｖｉｖｏ加水分解により分解されて親ヒドロキシ基を生じる関連
化合物が含まれる。α−アシルオキシアルキルエーテルの例には、アセトキシメ
トキシおよび２,２−ジメチルプロピオニルオキシメトキシが含まれる。ヒドロ
キシを生じる基を有するｉｎ ｖｉｖｏ加水分解製エステルの選択には、アルカ
ノイル、ベンゾイル、フェニルアセチルおよび置換ベンゾイルおよびフェニルア
セチル、アルコキシカルボニル（アルキルカルボネートエステルを生じる）、ジ
アルキルカルバモイルおよびＮ−（ジアルキルアミノエチル）−Ｎ−アルキルカ
ルバモイル（カルバメートを生じる）、ジアルキルアミノアセチルおよびカルボ
キシアセチルが含まれる。

【００５２】 ｉｎ ｖｉｖｏで加水分解されないエステルは、式（Ｉ）の化合物製造におけ
る中間生成物として有用であり、従ってこれらは本発明の別の態様である。

【００５３】 式（Ｉ）の化合物の例には、以下のものが含まれる：

【００５４】

【表１】

【００５５】

【表２】

【００５６】 ＊は、基のインドール環への結合部である。

【００５７】 本発明の別の態様において、前記式（Ｉ）の化合物を含む製薬学的な組成物も
提供される。

【００５８】 式（Ｉ）の化合物は、国際特許明細書ＰＣＴ／ＧＢ９８／０２３４０およびＰ
ＣＴ／ＧＢ９８／０２３４１に記載される方法により好適に製造される。

【００５９】 特に式（Ｉ）の化合物は、式（ＶＩＩ）：

【００６０】

【化９】

【００６１】 [式中、 Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は式（Ｉ）で定義された通りであり、 Ｒ^２’は、式（Ｉ）で定義したＲ^２であるかまたはその保護形であり、 Ｒ^４０は、基Ｃ（Ｏ）または基（ＣＨ_２）_ｔであり、 ｔは、式（Ｉ）で定義された通りであり、 Ｚは、脱離基である]の化合物を、 （ａ）Ｒ^４０がＣ（Ｏ）である場合には、式（ＶＩＩＩ）： ＨＮＲ^１５Ｒ^１６ （ＶＩＩＩ） [式中、Ｒ^１５およびＲ^１６は、式（Ｉ）で定義された通りである]の化合物と反
応させ、 （ｂ）Ｒ^４０が（ＣＨ_２）_ｔである場合には、式（ＩＸ）： ＨＲ^１７ （ＩＸ） [式中、Ｒ^１７は式（Ｉ）で定義された通りである]の化合物と反応させ、その後
、必要または所望されれば、基Ｒ^２’を基Ｒ^２へ脱保護するか、または基Ｒ^２を
別の類似の基に変化させる。

【００６２】 好適な脱離基Ｚは、クロロのようなハロを含む。反応は、ジクロロメタンまた
はテトラヒドロフランのような有機溶剤中で、トリエチルアミンのような塩基の
存在下に実施される。中程度の温度、例えば０℃〜５０℃、有利には周囲温度が
利用される。

【００６３】 式（ＶＩＩ）の化合物は、基Ｒ^２’として有利にエステルを有する。このよう
な化合物を次いで、例えばメタノールとテトラヒドロフランとの混合物中の水酸
化ナトリウムを使用して、脱エステル化により相当の酸に変換する。

【００６４】 式（ＶＩＩ）の化合物（式中、Ｒ^４０は、Ｃ（Ｏ）である）は、その場で相当
のカルボン酸とハロゲン化剤、例えば塩化オキサリルとを反応させることにより
有利に製造される。酸は、有利には式（Ｘ）：

【００６５】

【化１０】

【００６６】 [式中、 Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は、前記定義の通りである]の化
合物から獲得され、例えば２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノベンゾキノンと反
応させて、ヒドロキシメチル基を最初にカルボキシアルデヒドに変換し、これを
慣用の方法で相当の酸に酸化するという、連続反応により獲得される。

【００６７】 式（Ｘ）の化合物は有利に、式（ＸＩ）：

【００６８】

【化１１】

【００６９】 [式中、 Ｘ、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は前記定義の通りであり、 Ｒ^４１は、保護基である]の化合物を、式（ＸＩＩ）： Ｒ^１−Ｘ−Ｚ^１ （ＸＩＩ） [式中、 Ｒ^１およびＸは、式（Ｉ）で定義された通りであり、 Ｚ^１は、脱離基である]の化合物と反応させ；その後、保護基Ｒ^４１を除くこと
により、製造される。

【００７０】 好適な脱離基Ｚ^１は、塩化物、臭化物またはヨウ化物のようなハライドならび
にメシレートまたはトシレートである。反応は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはＤＣＭのような有機溶剤中で、水素化
ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸カリウムのような塩基の存在下に、有利に
実施される。場合により、反応を好適な相間移動触媒の存在下に実施する。塩基
および溶剤の選択は、従来技術で理解されるように、ある溶剤がいくつかの塩基
とのみ混和性であるという程度に相互依存する。例えば、水素化ナトリウムは有
利にジメチルホルムアミドまたはテトラヒドロフランと共に使用され、水酸化ナ
トリウムは有利に、ジクロロメタンおよび相間移動触媒と共に使用される。

【００７１】 反応は、中程度の温度、例えば０〜５０℃で、有利には約周囲温度で実施され
る。

【００７２】 有利には、Ｒ^２’は、式ＩＸの化合物中のエステル基であり、これを下記の慣
用の方法でさらに酸または別のエステルまたは塩に変換してもよい。

【００７３】 好適な保護基Ｒ^４１は、アセチル、ベンジルまたはテトラヒドロピラニルであ
る。利用される反応条件は保護基Ｒ^４０の性質に応じて変化させるが、当業者に
は明かである。アセチル基はナトリウムメトキシドのような強塩基との反応で離
脱させてよく、また、ベンジル基はパラジウム触媒のような触媒の存在下に水素
添加して脱離させてよい。テトラヒドロピラニル保護基の脱離は、ｐ−トルエン
スルホン酸を使用し、以下に図解するように実施する。

【００７４】 式（Ｘ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ）：

【００７５】

【化１２】

【００７６】 [式中、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^４１は、前記に定義した通りであり、Ｒ^４２
およびＲ^４３はいっしょになって環化し、適当に置換したピロール環を形成する
部分となる]の化合物の環化により製造される。例えば、Ｒ^４３は、式−ＣＨ＝
Ｃ（Ｒ^４４）Ｎ_３（ここでＲ^４４は前記に定義した基Ｒ^２であるか、またはその
保護形である）であってよく、Ｒ^４３は水素でもよい。次いで、式（ＸＩＩ）の
化合物を製造するために、有機溶剤、特に高沸点の非プロトン性溶剤、例えばキ
シレンまたはトルエン中で、例えば還流下に加熱して環化を行う。

【００７７】 また、Ｒ^４３はニトロであってよく、Ｒ^４２は式−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ^{２ ’}であ
ってよく、ここでＲ2’は式（ＶＩＩ）で定義した通りである。これらの化合物
は、水素の存在下に炭素上のパラジウムのような触媒の下で環化される。この反
応は、中程度の温度、例えば０〜８０℃の温度で、有利には周囲温度で実施され
る。

【００７８】 式（ＶＩＩＩ）の化合物の例は、式（ＸＩＶ）および（ＸＶ）

【００７９】

【化１３】

【００８０】

【化１４】

【００８１】 である。

【００８２】 式（ＸＩＩＩ）の化合物（Ｒ^３は水素である）は、式（ＸＶＩ）：

【００８３】

【化１５】

【００８４】 の化合物を式（ＸＶＩＩ）： Ｎ_３ＣＨ_２Ｒ^２’ （ＸＶＩＩ） の化合物と反応させて製造でき、ここで、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^４１およびＲ^{２ ’} は、前記定義の通りである。反応は、有機溶剤、例えばエタノール中で、−２
０〜０℃、有利には約０℃の低温で実施される。反応は、有利に、アルコキシド
、特にエトキシド、例えばカリウムエトキシドのような塩基の存在下に実施され
る。

【００８５】 必要または所望されるのであれば、反応スキームで連続的に、Ｒ^３を慣用の方
法で水素から別の基に変換してよい。

【００８６】 式（ＸＶＩＩ）の化合物は、式（ＸＶＩＩＩ）： Ｒ^４７ＣＨ_２Ｒ^２’ （ＸＶＩＩＩ） [式中、^Ｒ２’は前記定義の通りであり、Ｒ^４７はハライド、特に臭素のような
脱離基である]の化合物と、アルカリ金属アジド、特にナトリウムアジドのよう
なアジド塩とを反応させて製造できる。

【００８７】 式（ＸＶ）の化合物は、式（ＸＩＸ）：

【００８８】

【化１６】

【００８９】 [Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^３、Ｒ^４０およびＲ^２’は、前記定義の通りである]の化
合物と、式（ＸＸ）：

【００９０】

【化１７】

【００９１】 [式中、Ｒ^２’は前記定義の通りであり、Ｒ^４８は、ヒドロキシのような脱離基
である]の化合物とを反応させて製造できる。式（ＸＸ）の化合物例は、ジエチ
ルオキザレートのようなオキザレートである。反応は、ＴＨＦのような有機溶剤
中の水素化ナトリウムのような塩基の存在下に実施される。０℃〜４０℃の中程
度の温度および有利には周囲温度を適用する。

【００９２】 式（ＶＩＩ）の化合物（Ｒ^４０は（ＣＨ_２）_ｔである）は、式（ＸＸＩ）：

【００９３】

【化１８】

【００９４】 [式中、ｔ、Ｒ^１、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は前記定義の通りであ
る]の化合物のハロゲン化により製造できる。前記化合物（Ｘ）は、特に式（Ｘ
ＸＩ）の化合物の例であり、他も式（Ｘ）で記載したものと類似した方法で製造
できる。

【００９５】 式（ＸＩ）、（ＸＶＩ）、（ＸＶＩＩ）、（ＸＶＩＩＩ）、（ＸＩＸ）および
（ＸＸ）の化合物は、いずれも公知の化合物であるかまたは慣用の方法により公
知の化合物から製造できる。

【００９６】 本発明の別の態様は、治療によりヒトまたは動物の体を処理する方法に使用さ
れる、前記式（Ｉ）の化合物またはその製薬学的に認容性の塩またはｉｎ ｖｉ
ｖｏで加水分解可能なエステルに関する。特に、化合物は、炎症性疾患の治療法
に使用される。

【００９７】 本発明の別の態様は、このような治療を要する温血動物、例えばヒト内でＭＣ
Ｐ−１媒介作用を拮抗する方法を提供し、この際、有効量の式（Ｉ）の化合物、
その製薬学的に認容性の塩またはｉｎ ｖｉｖｏ加水分解性エステルを該動物に
投与する。

【００９８】 本発明は、前記式（Ｉ）の化合物、またはその製薬学的に認容性の塩、または
ｉｎ ｖｉｖｏ加水分解性エステルの、医薬品としての使用にも関する。

【００９９】 本発明の組成物は、経口適用のため（例えば錠剤、トローチ剤、硬カプセルま
たは軟カプセル、水性または油性懸濁剤、乳剤、分散性散剤または顆粒剤、シロ
ップ剤またはエリキシル剤として）、局所適用のため（例えばクリーム剤、軟膏
、ゲル剤または水性または油性液剤または懸濁剤として）、吸入投与のため（例
えば微細な散剤または液体エアロゾルとして）、吹送投与のため（例えば微細な
散剤として）または非経口投与のため（例えば静脈内、皮下、筋肉内または筋肉
内投与のための無菌の水性または油性液剤または直腸投与のための座薬）に好適
な形であってもよい。

【０１００】 本発明の組成物は、当該技術分野では良く知られている常用の製薬学的添加剤を
用いる常用の手順により製造されてよい。従って、経口使用を目的とする組成物
は、例えば１種またはそれ以上の着色、甘味、調味および／または保存剤を含ん
でいてもよい。

【０１０１】 製薬学的に認容性の錠剤調合のための好適な賦形剤は、例えば不活性希釈剤、
例えばラクトース、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウム、
造粒および崩壊剤、例えばトウモロコシデンプンまたはアルギン酸；結合剤、例
えばデンプン；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸または
タルク；保存剤、例えばプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート、および酸化防止
剤、例えばアスコルビン酸を含む。錠剤の剤型は、非被覆であるか、または胃腸
管内での活性成分の崩壊および引き続く吸収を調節するため、またはそれらの安
定性および／または外観を改善するために、いずれの場合にも当該技術分野では
良く知られている公知の常用の被覆剤および方法を用いて被覆してあってもよい
。

【０１０２】 経口適用の組成物は、その中で活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カル
シウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセル
の形、またはその中で活性成分が水または油、例えばピーナツ油、流動パラフィ
ン、またはオリーブ油と混合されている軟ゼラチンカプセルとしてであってもよ
い。

【０１０３】 水性懸濁液は、一般に活性成分を微細な粉末状で、１種またはそれ以上の懸濁剤
、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキ
シプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン
、トラガントガムおよびアラビアゴム；分散または湿潤剤、例えばレシチンまた
はアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えばステアリン酸ポリオキシ
エチレン）、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、
例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸
およびヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物、例えばポリオ
キシエチレンソルビトールモノオレアート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪
アルコールとの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、また
はエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導された部分エステルと
の縮合生成物、例えばポリオキエシチレンソルビトールモノオレアート、または
エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導した部分エステル
との縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレアートを含む。水性懸
濁液は、１種またはそれ以上の保存剤（例えばエチルまたはプロピルｐ−ヒドロ
キシベンゾエート）、酸化防止剤（例えばアスコルビン酸）、着色料、調味料、
および／または甘味料（例えばスクロース、サッカリンまたはアスパルテーム）
を含んでいてもよい。

【０１０４】 油性懸濁液は、活性成分を植物油（例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油
またはココヤシ油）中または鉱油（例えば流動パラフィン）中に懸濁して調合し
てもよい。油性懸濁液は、また濃稠化剤、例えば蜜蝋、硬質パラフィンまたはセ
チルアルコールを含んでいてもよい。上記のような甘味料、および調味料は、調
味した経口製剤とするために加えてもよい。これらの組成物は、酸化防止剤、例
えばアスコルビン酸の添加により保存されてよい。

【０１０５】 水を加えて水性懸濁液の調製に好適な分散性粉末および顆粒は、一般に活性成
分と分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１種またはそれ以上の保存剤とを含有す
る。好適な分散または湿潤剤および懸濁剤は、すでに以上の記載に例示してある
。別の賦形剤、例えば甘味、調味および着色料が存在していてもよい。

【０１０６】 本発明の薬剤組成物は、水中油型エマルションであってもよい。油相は、植物
油、例えばオリーブ油またはラッカセイ油、または鉱油、例えば流動パラフィン
またはこれらはいずれかの混合物であってもよい。好適な乳化剤は、例えば天然
のゴム、例えばアラビアゴムまたはトラガントガム、天然産出ホスファチド、例
えば大豆、レシチン、脂肪酸とヘキシトール無水物とに由来するエステルまたは
部分エステル（例えばソルビタンモノオレアート）および上記の部分エステルと
エチレンオキシドとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオ
レアートであってもよい。エマルションは、また甘味料、調味料および保存剤を
含んでいてもよい。

【０１０７】 シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味料、例えばグリセリン、プロピレング
リコール、ソルビトール、アスパルテームまたはスクロースと一緒に調合しても
よく、また粘滑剤、保存剤、調味料および／または着色料を含んでいてもよい。

【０１０８】 薬剤組成物は、無菌注射用の水性または油性懸濁液の形であってもよく、これ
らは以上に記載した１種またはそれ以上の適切な分散または湿潤剤および懸濁剤
を用いて公知の方法に従って調合してあってもよい。無菌注射用製剤は、また無
毒性非経口認容性希釈剤または溶剤、例えば１，３−ブタンジオール中の無菌注
射用液剤または懸濁液であってもよい。

【０１０９】 座薬調合は、活性成分を常温で固体であるが直腸温度では液体であり従って直
腸内で溶融して薬剤を放出する好適な非刺激性賦形剤と混合して調製してもよい
。好適な賦形剤は、例えば、ココアバターおよびポリエチレングリコールを含む
。

【０１１０】 局所調合剤、例えばクリーム剤、軟膏、ゲル剤および水性または油性液剤また
は懸濁剤は、一般に活性成分を常用の局所用に認容性の賦形剤または希釈剤と一
緒に当該技術分野では公知の常用の方法を用いて調合して得てもよい。

【０１１１】 吹送による投与のための組成物は、平均直径が例えば３０μまたはこれよりは
るかに細かい粒子を含む微細な粉末の形で、散剤自体は活性成分単独かまたは１
種またはそれ以上の生理学的に認容性のキャリヤー、例えばラクトースで希釈さ
れていてよい。次いで、吹送のための散剤は、活性成分、例えば公知の吸送薬剤
であるクロモグリク酸ナトリウム１〜５０ｍｇをターボ吸入器で使用するために
カプセル内に収容する。

【０１１２】 吸入により投与するための組成物は、微細な固体を含むエーロゾルまたは液体
小滴のいずれかの活性成分を噴射することのできる常用の加圧エアロゾル剤の形
であってもよい。常用のエーロゾル噴射剤、例えば揮発性フッ化炭化水素または
炭化水素を用いてもよく、またエアロゾル装置は、定量の活性成分を噴射し易い
ように設計されている。

【０１１３】 調合のこれ以上の情報は、薬剤化学総覧（Comprehensive Medicinal Chemistr
y (Corwin Hansch； Chairman of Editorial Board）， Pergamon Press １９９
０）、第５巻、２５．２章を参照のこと。

【０１１４】 一回投与形を調製するために１種またはそれ以上の賦形剤と組み合わせる活性
成分の量は、処置する対象および投与経路に応じて必然的に変化する。例えば、
ヒトへの経口投与のための調合は、一般に例えば活性成分０．５〜２ｇを適当で
好都合な賦形剤約５〜約９８質量％（全組成物に対して）内の可変的な量と一緒
に配合して含んでいてもよい。投与単位の形は、一般に活性成分約１ｍｇ〜約５
００ｍｇを含む。投与経路および投与計画のこれ以上の情報に関しては、薬剤化
学総覧（Comprehensive Medicinal Chemistry （Corwin Hansch; Chairman of E
ditorial Board）， Pergamon Press １９９０）、第５巻、２５．３章を参照の
こと。

【０１１５】 式Ｉの化合物の治療および予防目的のための投与量は、動物または患者の性質
および容態、年齢、性別および投与経路に依存して、公知の薬剤原理に従って必
然的に変化する。上記のように、式Ｉの化合物は、ラットのファルネシル化の作
用が単独でまたは部分的に関連する疾患または病状を処置するために有用である
。

【０１１６】 治療および予防目的のために式Ｉの化合物を使用する際には通常のように投与
し、例えば体重ｋｇあたり０.５ｍｇ〜７５ｍｇの範囲内の一日量を必要ならば
分割して投与する。一般に、非経口投与を利用する場合には、低容量で投与する
。従って、静脈内投与では、例えば体重ｋｇあたり０.５ｍｇ〜３０ｍｇの範囲
内の投与が一般に用いられる。同様に、吸入投与に対しては、例えば体重ｋｇあ
たり０.５ｍｇ〜２５ｍｇの範囲内の投与が一般に用いられる。しかし、経口投
与が有利である。

【０１１７】 本発明を以下の実施例により詳細に説明するが、これに限定するものではなく
、記載のない限り実施例は一般的方法で実施される。

【０１１８】 調製１ エチルＮ−（３,４−ジクロロベンジル）−４−（２−テトラヒドロピラニルオ
キシ）メチルインドール−２−カルボキシレート エチル−４−（２−テトラヒドロピラニルオキシ）メチルインドール−２−カ
ルボキシレート（５.１ｇ）（Chung-gi Shen等、Heterocycles, 43, 1996, 891
〜898）および水素化ナトリウム（７４１ｍｇ、鉱物油中６０％）をＤＭＦ（１
００ｍｌ）中で、アルゴン下に周囲温度で２０分攪拌した。３,４−ジクロロベ
ンジルクロライド（２.７９ｍｌ）を添加し、混合物を一晩攪拌し、次いで酢酸
エチル（１５０ｍｌ）と水（１５０ｍｌ）とに分配した。有機相を水（２×１５
０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、真空中で濃縮し、イソヘキサン、次
に酢酸エチル：イソヘキサン（５／９５）を溶離液として使用するカラムクロマ
トグラフィーにより残留物を精製し、生成物として黄色の油分を得た（４.３９
ｇ、５６％）；

【０１１９】

【外１】

【０１２０】 調製２ エチルＮ−（３,４−ジクロロベンジル）−４−ヒドロキシメチルインドール−
２−カルボキシレート エタノール（１００ｍｌ）中のエチルＮ−（３,４−ジクロロベンジル）−４
−（２−テトラヒドロピラニルオキシ）メチルインドール−２−カルボキシレー
ト（４.３８ｇ）およびｐ−トルエンスルホン酸（１００ｍｇ）を周囲温度で３
時間攪拌し、次いで、真空中で濃縮し、残留物を酢酸エチル（１００ｍｌ）中に
溶解し、水（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、濃縮し、生成物を
オフホワイトの固体として得た（３.２２ｇ、９０％）。

【０１２１】

【外２】

【０１２２】 調製３ エチル４−ホルミル−Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）−４−ヒドロキシメ
チルインドール−２−カルボキシレート エチルＮ−（３,４−ジクロロベンジル）インドール−２−カルボキシレート
（５.１７ｇ）および２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノベンゾキノン（３.１０
ｇ）をジオキサン（１００ｍｌ）中で、周囲温度で、一晩攪拌した。反応混合物
を真空中で濃縮し、残留物を１０％酢酸エチル：イソヘキサンを溶離液とするカ
ラムクロマトグラフィーにより精製し、生成物を黄色の固体として得た（４.８
８ｇ、９５％）。

【０１２３】

【外３】

【０１２４】 調製４ Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）−２−エトキシカルボニルインドール−４
−カルボン酸 水（５０ｍｌ）中の亜塩素酸ナトリウム（９.７０ｇ）およびオルトリン酸二
水素ナトリウム（１３.０２ｇ）の溶液を、tert−ブチルアルコール（１００ｍ
ｌ）中のエチル４−ホルミル−Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）インドール−
２−カルボキシレート（４.４７ｇ）および２−メチルブト−２−エン（５０ｍ
ｌ）溶液へ滴加し、混合物を周囲温度で７２時間攪拌し、次いで真空中で濃縮し
、得られた沈殿物を濾過し、乾燥し、生成物をオフホワイトの固体として得た（
４.１６ｇ、８９％）。

【０１２５】

【外４】

【０１２６】 調製５ エチル４−クロロメチル−Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）インドール−２
−カルボキシレート ジクロロメタン（４０ｍｌ）中のエチルＮ−（３,４−ジクロロベンジル）−
４−ヒドロキシメチルインドール−２−カルボキシレート（０.８９ｇ）、ジメ
チルホルムアミド（０.５ｍｌ）および塩化チオニル（１８９μｌ）を周囲温度
で一晩攪拌し、得られた沈殿物を濾過し、真空中で乾燥し、生成物を白色固体と
して得た（０.６２ｇ、６７％）。

【０１２７】

【外５】

【０１２８】 調製６ エチル５−ヒドロキシインドール−２−カルボキシレート 三臭化ホウ素（６４.５８ｇ）を、攪拌した無水ジクロロメタン（１０００ｍ
ｌ）中のエチル５−メトキシインドール−２−カルボキシレート（２０ｇ）溶液
へ、−７８℃で、アルゴンの雰囲気下に滴加した。反応物を室温まで温め、さら
に２時間攪拌した。反応物を氷／炭酸水素ナトリウム飽和溶液へ攪拌しながら注
ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。合した有機抽出物を炭酸水素ナトリウム飽和溶
液、水、塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ_４）。溶液を
真空中で濃縮し、残留物を０〜６０％のジエチルエーテル；イソヘキサンを溶離
液として使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し、生成物を白色固体と
して得た（９.０２ｇ、４８％）。

【０１２９】

【外６】

【０１３０】 調製７ エチル５−アセトキシインドール−２−カルボキシレート 攪拌した無水酢酸（８０ｍｌ）中のエチル５−ヒドロキシインドール−２−カ
ルボキシレート（７.７９ｇ）およびＤＭＡＰ（２０ｍｇ）の溶液を８０℃で４
時間加熱した。反応物を真空中で濃縮し、残留物を酢酸エチル中に溶解した。合
した有機抽出物を塩酸（２.０Ｍ）、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、水、塩化
ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ_４）。溶液を真空中で濃縮
し、生成物を黄色の固体として得た（９.３９ｇ、１００％）。

【０１３１】

【外７】

【０１３２】 調製８ エチル５−アセトキシ−Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）インドール−２−
カルボキシレート ３,４−ジクロロベンジルブロミド（５.９６ｇ）をアセトニトリル（５００ｍ
ｌ）中の攪拌したエチル５−アセトキシインドール−２−カルボキシレート（５
.４ｇ）および炭酸カリウム（６.９４ｇ）溶液へ、アルゴンの雰囲気下に添加し
た。反応物を８０℃で１６時間加熱し、次いで真空中で濃縮し、残留物を酢酸エ
チルと水とに分配した。合した有機抽出物を水、塩化ナトリウム飽和水溶液で洗
浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ_４）。溶液を真空中で除去し、残留物をイソヘキサン
で微細化し、生成物をクリーム状固体として得た（５.５５ｇ、６３％）。

【０１３３】

【外８】

【０１３４】 調製９ エチルＮ−（３,４−ジクロロベンジル）−５−ヒドロキシインドール−２−
カルボキシレート ナトリウムエトキシド（１.８６ｇ）をエタノール（５０ｍｌ）中の攪拌した
エチル５−アセトキシ−Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）インドール−２−カ
ルボキシレート（５.５５ｇ）溶液へ、アルゴンの雰囲気下に添加した。反応物
を室温で２時間攪拌し、次いで真空中で濃縮し、残留物を塩酸（２.０Ｍ）で酸
性化し、ジクロロメタンで抽出した。合した有機抽出物を水、塩化ナトリウム飽
和水溶液で洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ_４）。溶剤を真空中で除去し、残留物を
ヘキサン／ジエチルエーテルで微細化し、生成物を白色固体として得た（３.１
７ｇ、９２％）。

【０１３５】

【外９】

【０１３６】 例１ 化合物１ エチルエステル Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）−２−エトキシカルボニルインドール−４
−カルボン酸（１００ｍｇ）、ＤＭＦ（１滴）およびジクロロメタン中の塩化オ
キザリル溶液（２Ｍ、１４０μｌ）をジクロロメタン（４ｍｌ）中で、アルゴン
下に、周囲温度で７時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、ジクロロメタ
ン（４ｍｌ）中に溶解した。３−アミノテトラヒドロチオフェン−１,１−ジオ
キシド（６９ｍｇ）およびトリエチルアミン（７１μｌ）を添加し、反応物をア
ルゴン下に一晩攪拌した。反応混合物をジクロロメタン（２０ｍｌ）で希釈し、
２Ｍ ＨＣｌ溶液（３０ｍｌ）および水（３０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳ
Ｏ_４）、真空中で濃縮し、残留物を酢酸エチル：イソヘキサン（勾配２５／７５
〜１００／０）を溶離液として使用したカラムクロマトグラフィーにより精製し
、生成物をオフホワイトの固体として得た（７３ｍｇ、５６％）。Ｍ／ｚ（+）
５０９.３（ＭＨ^＋）。

【０１３７】 例２ 前記例１記載の方法を適当なアミンを使用して繰り返した。このようにして得
られた化合物を以下に示す。

【０１３８】 化合物４ エチルエステル 収率４８％；Ｍ／ｚ（+）４６１.５（ＭＨ^＋）。

【０１３９】 化合物２ エチルエステル 収率９６％；Ｍ／ｚ（+）５００.４（ＭＨ^＋）。

【０１４０】 化合物３ エチルエステル 収率６０％；Ｍ／ｚ（+）５０９.３（ＭＨ^＋）。

【０１４１】 化合物６ エチルエステル 収率６３％；Ｍ／ｚ（+）４６２.２（ＭＨ^＋）。

【０１４２】 化合物７ エチルエステル 収率７２％；Ｍ／ｚ（+）５０３.２（ＭＨ^＋）。

【０１４３】 化合物８ エチルエステル 収率５１％；Ｍ／ｚ（+）５００.２（ＭＨ^＋）。

【０１４４】 化合物９ エチルエステル 収率１３％；Ｍ／ｚ（+）５１２.１（ＭＨ^＋）。

【０１４５】 例３ 化合物１０ エチルメチルジエステル Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）−２−エトキシカルボニルインドール−４
−カルボン酸（１５０ｍｇ）、Ｌ−ヒスチジンメチルエステルジヒドロクロライ
ド（９３ｍｇ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１,２−ジヒドロキ
ノリン（１２３ｍｇ）およびトリエチルアミン（１０７μｌ）をジクロロメタン
（１５０ｍｌ）中で、周囲温度で一晩攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、
残留物を酢酸エチル：イソヘキサン（勾配１０／９０〜１００／０）次いで１０
％メタノール：酢酸エチルを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーに
より精製し、生成物を白色ゴムとして得た（３５ｍｇ、１７％）；Ｍ／ｚ（+）
５４３.２（ＭＨ^-）。

【０１４６】 例４ 化合物４ 化合物４ エチルエステル（５０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（２ｍｌ）中に
溶解した。水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、２ｍｌ）およびメタノール（１ｍｌ
）を添加し、混合物を周囲温度で２時間攪拌し、次いで真空中で濃縮し、残留物
を水（４ｍｌ）中に溶解し、酢酸で酸性化し、得られた沈殿物を濾過し、水で洗
浄し、真空中で乾燥し、生成物を白色固体として得た（１９ｍｇ、４０％）。

【０１４７】

【外１０】

【０１４８】 例５ 前記例４記載の方法を適当なエステルを使用して繰り返した。このようにして
得られた化合物を以下に示す。

【０１４９】

【外１１】

【０１５０】

【外１２】

【０１５１】 化合物３ 収率５３％；Ｍ／ｚ（-）４７９.１（Ｍ-Ｈ^-）。

【０１５２】

【外１３】

【０１５３】

【外１４】

【０１５４】 化合物８ 収率１００％；Ｍ／ｚ（-）４７０.２（Ｍ-Ｈ^-）。

【０１５５】

【外１５】

【０１５６】 化合物１０ 収率５１％；Ｍ／ｚ（-）４９９.１（Ｍ-Ｈ^-）。

【０１５７】

【外１６】

【０１５８】 例６ 化合物１１ エチルエステル テトラヒドロフラン（５ｍｌ）中のエチル４−クロロメチル−Ｎ−（３,４−
ジクロロベンジル）インドール−２−カルボキシレート（１５０ｍｇ）、モルホ
リン（５０μｌ）およびトリエチルアミン（１０６μｌ）を周囲温度で４日間攪
拌し、ついで真空中で濃縮した。残留物を酢酸エチル（３０ｍｌ）に溶解し、水
（３０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、真空中で濃縮した。粗残留物を
トルエンで微細化し、得られた白色固体を濾過し、乾燥した（７９ｍｇ、４７％
）。

【０１５９】

【外１７】

【０１６０】 例７ エチルＮ−（３,４−ジクロロベンジル）−４−ジメチルアミノメチル−５−ヒ
ドロキシインドール−２−カルボキシレート（化合物５のエチルエステル） エタノール（５０ｍｌ）中の攪拌したエチルＮ−（３,４−ジクロロベンジル
）−５−ヒドロキシインドール−２−カルボキシレート（２.１ｇ）溶液へ、ジ
メチルアミン水溶液（４０％、０.５ｍｌ）およびホルムアルデヒド水溶液（０.
５ｍｌ）を連続して添加した。溶液を一晩放置し、得られた結晶を濾過し、真空
中で乾燥し、生成物を淡黄色の結晶として得た（１.７ｇ、７０％）。

【０１６１】

【外１８】

【０１６２】 例８ Ｎ−（３,４−ジクロロベンジル）−４−ジメチルアミノメチル−５−ヒドロキ
シインドール−２−カルボン酸（化合物５） 例５の方法を利用して、例７のエステルを表題の化合物に変換した。

【０１６３】

【外１９】

【０１６４】 例９ ｈＭＣＰ−１拮抗剤のための生物学的アッセイ 生物学的試験 以下の生物学的試験方法、データおよび例により本発明を詳細に説明する。

【０１６５】 略号： ＡＴＣＣ アメリカン タイプ カルチャー コレクション、Rockville、ＵＳ
Ａ ＢＣＡ ビシンクロニン酸（bicinchroninic acid）（硫酸銅と共に使用してタ
ンパク質をアッセイする） ＢＳＡ ウシ血清アルブミン ＤＭＥＭ ダルベッコの修飾イーグル培地 ＥＧＴＡ エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸 ＦＣＳ ウシ胎児血清 ＨＥＰＥＳ （Ｎ−[２−ヒドロキシエチル]ピペラジン−Ｎ’−[２−エタンス
ルホン酸]） ＨＢＳＳ ハンクの平衡塩溶液 ｈＭＣＰ−１ ヒト単球走化タンパク質１ ＰＢＳ 食塩加リン酸緩衝液 ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応 Perkin-Elmer Cetusより購買可能なＡＭＰＬＩＴＡＱ^ＴＭを熱安定ＤＮＡポリ
メラーゼの原料として使用する。

【０１６６】 結合バッファーは、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＣａＣｌ_２、５ｍＭ Ｍ
ｇＣｌ_２、０.５％ウシ胎児血清、１Ｍ ＮａＯＨでｐＨ７.２に調整。

【０１６７】 非−必須アミノ酸（１００×濃縮）：Ｌ−アラニン、８９０ｍｇ／ｌ；Ｌ−ア
スパラギン、１３２０ｍｇ／ｌ；Ｌ−アスパラギン酸、１３３０ｍｇ／ｌ；Ｌ−
グルタミン酸、１４７０ｍｇ／ｌ；グリシン、７５０ｍｇ／ｌ；Ｌ−プロリン、
１１５０ｍｇ／ｌおよび；Ｌ−セリン、１０５０ｍｇ／ｌ。

【０１６８】 ヒポキサンチンおよびチミジン補足（５０×濃縮）：ヒポキサンチン、６８０
ｍｇ／ｌおよび；チミジン、１９４ｍｇ／ｌ。

【０１６９】 ペニシリン−ストレプトマイシン：ペニシリンＧ（ナトリウム塩）；５０００
単位／ｍｌ；硫酸ストレプトマイシン、５０００μｇ／ｍｌ。

【０１７０】 ヒト単球細胞系ＴＨＰ−１細胞はＡＴＣＣより、寄託番号ＡＴＣＣ ＴＩＢ−
２０２として入手。

【０１７１】 ハンクの平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）はGibcoより入手（Proc. Soc. Exp. Biol. M
ed. 1949, 71, 196参照）。

【０１７２】 合成細胞培養培地、ＲＰＭＩ１６４０をGibcoから入手；無機塩[Ｃａ（ＮＯ_３ ）_２４Ｈ_２Ｏ １００ｍｇ／ｌ；ＫＣｌ ４００ｍｇ／ｌ；ＭｇＳＯ_４７Ｈ_２Ｏ
１００ｍｇ／ｌ；ＮａＣｌ ６０００ｍｇ／ｌ；ＮａＨＣＯ_３ ２０００ｍｇ
／ｌ＆Ｎａ_２ＨＰＯ_４（無水物）８００ｍｇ／ｌ]、Ｄ−グルコース２０００ｍ
ｇ／ｌ、還元グルタチオン１ｍｇ／ｌ、アミノ酸およびビタミンを含有する。

【０１７３】 ＦＵＲＡ−２／ＡＭは１−[２−（５−カルボキシオキサゾール−２−イル）
−６−アミノベンゾフラン−５−オキシ]−２−（２’−アミノ−５’−メチル
フェノキシ）−エタン−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−四酢酸ペンタアセトキシメチルエス
テルであり、Molecular Probes, Eugene, Oregon USAから入手した。

【０１７４】 血沈バッファーは、８.５ｇ／ｌ ＮａＣｌおよび１０ｇ／ｌ ヒドロキシエ
チルセルロースを含有する。

【０１７５】 溶解バッファーは、０.１５Ｍ ＮＨ_４Ｃｌ^-、１０ｍＭ ＫＨＣＯ_３、１ｍＭ
ＥＤＴＡを含有する。

【０１７６】 全細胞結合バッファーは、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＣａＣｌ_２、５ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ_２、０.５％ＢＳＡ、０.０１％ＮａＮ_３を含有し、１Ｍ ＮａＯＨ
でｐＨ７.２に調節する。

【０１７７】 洗浄バッファーは、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＣａＣｌ_２、５ｍＭ Ｍ
ｇＣｌ_２、０.５％加熱不活化ＦＣＳ、０.５Ｍ ＮａＣｌを含有し、１Ｍ Ｎａ
ＯＨでｐＨ７.２に調節する。

【０１７８】 一般的な分子生物学法は、“Molecular Cloning - A Laboratory Manual”第
２版、Sambrook, Fritsch and Mniatis（Cold Spring Harbor laboratory, 1989
）に記載される任意の方法に従う。

【０１７９】 ｉ）ｈＭＣＰ−１受容体のクローニングおよび発現 公開されているＭＣＰ−１受容体配列（Charo等、1994、Proc. Natl. Acad. S
ci. USA、91、2752）に従い、ＭＣＰ−１受容体Ｂ（ＣＣＲ２Ｂ）ｃＤＮＡをＴ
ＨＰ−１細胞ＲＮＡより好適なオリゴヌクレオチドプライマーを用いてＰＣＲを
行った。得られたＰＣＲ産物をベクターＰＣＲ−ＩＩTM（InVitrogen, San Dieg
o, CA）にクローン化した。エラーフリーＣＣＲ２ＢｃＤＮＡを、ＨｉｎｄＩＩ
Ｉ−ＮｏｔＩ断片として、真核発現ベクターｐＣＤＮＡ３（InVitrogen）へサブ
クローン化し、ｐＣＤＮＡ３／ＣＣ−ＣＫＲ２ＡおよびｐＣＤＮＡ３／ＣＣＲ２
Ｂをそれぞれ製造した。

【０１８０】 直鎖化したｐＣＤＮＡ３／ＣＣＲ２ＢＤＮＡをＣＨＯ−Ｋ１細胞へリン酸カル
シウム沈殿（Wigler等、1979、Cell、16、777）により形質移入した。形質移入
細胞を、細胞形質移入後２４時間で、１ｍｇ／ｍｌのリン酸ゲネチシン（Geneti
cin Sulphate, G418, Gibco BRL）の添加により選択した。ＲＮＡの調製とノー
ザンブロッティングを記載（Needham等、1995、Prot. Express. Purific.、6、1
34）のようにして実施した。ＣＨＯ−Ｋ１クローン７（ＣＨＯ−ＣＣＲ２Ｂ）を
最も高いＭＣＰ−１受容体Ｂ発現体として同定した。

【０１８１】 ｉｉ）膜断片の調製 ＣＨＯ−ＣＣＲ２Ｂ細胞を、１０％のウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、１×
非−必須アミノ酸、１×ヒポキサンチンおよびチミジン補足およびペニシリン−
ストレプトマイシン（５０μｇストレプトマイシン／ｍｌ、Gibco BRL）を補足
したＤＭＥＭ中で増殖させた。膜断片を、記載（Siciliano等、1990、J. Biol.
Chem.、265、19658）に従って細胞溶解／差動遠心法により製造した。タンパク
質濃度をＢＣＡタンパク質アッセイ（Pierece, Rockford, Illinois）により、
説明書に従って概算した。

【０１８２】 ｉｉｉ）アッセイ ^１２５ＩＭＣＰ−１をボルトンとハンターの結合（Bolton等、1973、Biochem.
J.、133、529、Amersham International plc）を利用して製造した。平衡結合
アッセイを、Ernst等、1994、J. Immunol、152、3541の方法を利用して実施した
。簡潔には、^１２５Ｉ−標識ＭＣＰ−１の量を変化させて、結合バッファー１０
０μｌ中の精製したＣＨＯ−ＣＣＲ２Ｂ細胞膜７μｇへ添加した。室温で１時間
インキュベートした後、結合反応混合物を濾過し、氷冷結合バッファーを用いて
プレート洗浄器（Brandel MLR-96T Cell Harvester）に５回通した。フィルター
マット（Brandel GF/B）を、使用前に、０.３％ポリエチレンイミン中に６０分
予め浸漬する。以下の濾過によるそれぞれの濾過物を３.５ｍｌのチューブ（Sar
stedt No. 55484）に分別し、結合^１２５Ｉ−標識ＭＣＰ−１を測定した（ＬＫ
Ｂ１２７７Gammamaster）。コールドの競合試験を、種々の濃度の非標識ＭＣＰ
−１の存在下に、^１２５Ｉ−標識ＭＣＰ−１ １００ｐＭを用いて、前記のよう
に実施した。反応に２０倍モル過剰の非標識ＭＣＰ−１を使用することにより、
非特異的結合を測定した。

【０１８３】 ＣＨＯ−ＣＣＲ２Ｂ細胞から製造した膜断片によるリガンド結合試験により、
ＣＣＲ２Ｂ受容体が膜タンパク質１ｍｇあたり０.２ｐｍｏｌの濃度で存在し、
高い親和性でＭＣＰ−１と選択的に結合する（ＩＣ_５０＝１１０ｐＭ、Ｋd＝１
２０ｐＭ）ことが分かった。これらへの膜の結合は完全に可逆的であり、室温で
４５分後に平衡に達し、ＭＣＰ−１結合とＣＨＯ−ＣＣＲ２Ｂ細胞膜濃度との関
係は、ＭＣＰ−１を１００ｐＭ〜５００ｐＭの濃度で使用した場合に直線関係で
あった。

【０１８４】 ＤＭＳＯ（５μｌ）に溶解した化合物を、０.０１〜５０μＭ濃度範囲の標識
ＭＣＰ−１ １００ｐＭと、８ポイント用量−応答曲線を使用して、２回競合試
験し、ＩＣ_５０濃度を算出した。

【０１８５】 本発明で試験した化合物は、ここに記載するｈＭＣＰ−１受容体結合アッセイ
において、５０μＭまたはそれ以下のＩＣ_５０値を示した。

【０１８６】 ｂ）ＴＨＰ−１細胞中のＭＣＰ−１変性カルシウムフラックス ヒト単球細胞系ＴＨＰ−１を、１０％ウシ胎児血清、６ｍＭグルタミン酸およ
びペニシリン−ストレプトマイシン（５０μｇストレプトマイシン／ｍｌ、Gibc
o BRL）を補足した合成細胞培養培地ＲＰＭＩ１６４０中で増殖させた。ＴＨＰ
−１細胞をＨＢＳＳ（Ｃａ^２＋およびＭｇ^２＋欠損）＋１ｍｇ／ｍｌＢＳＡ中で
洗浄し、同一のバッファーに濃度３×１０^６細胞／ｍｌで再懸濁した。次いで、
細胞へ１ｍＭＦＵＲＡ−２／ＡＭを３７℃で３０分かけて添加し、ＨＢＳＳで２
回洗浄し、１×１０^６細胞／ｍｌに再懸濁した。ＴＨＰ−１細胞再懸濁液（０.
９ｍｌ）を磁石攪拌子を有する５ｍｌのディスポーザブルキュベットへ注入し、
１ｍｇ／ｍｌＢＳＡ、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２および２ｍＭ ＣａＣｌ_２を含む予め
加温した（３７℃）ＨＢＳＳ２.１ｍｌを添加した。キュベットを蛍光分光光度
計（Perkin Elmer, Norwalk, CT）中に設置し、攪拌しながら３７℃で４分プレ
インキュベートした。蛍光を７０ｓｅｃで記録し、１０ｓｅｃ後にキュベットへ
ｈＭＣＰ−１を添加することにより細胞を刺激した。３４０ｎｍと３８０ｎｍと
で交互に励起して[Ｃａ^２＋]iを測定し、次いで、５１０ｎｍにおける蛍光発光
強度を測定した。３４０ｎｍと３８０ｎｍで励起した際の放射蛍光光線強度の割
合、（Ｒ）を算出表示して、以下の式により細胞質[Ｃａ^２＋]を概算した。

【０１８７】

【数１】

【０１８８】 ここで、３７℃におけるＦＵＲＡ−２Ｃａ^２＋複合体を示すＫｄは、２２４ｎｍ
で測定された。Ｒmaxは、１０ｍＭイオノマイシンを添加後に測定した最大蛍光
比であり、Ｒminは、次いで５ｍＭ ＥＧＴＡを含有するＣａ^２＋不含溶液の添
加後の最低比であり、Ｓｆ２／Ｓｂ２は、それぞれ、ＲｍｉｎおよびＲｍａｘで
測定した３８０ｎｍ励起での蛍光値の比である。

【０１８９】 ＴＨＰ−１細胞のｈＭＣＰ−１による刺激は、特異的かつ用量依存的に、迅速
で一過性の[Ｃａ^２＋]i上昇を誘起した。用量応答曲線は、約２ｎｍのＥＣ_５０
を示した。ＤＭＳＯ（１０μｌ）に溶解した試験化合物を、細胞懸濁液へ添加し
、１０ｓｅｃ後にリガンドを添加し、一時的な[Ｃａ^２＋]iの上昇の減少を測定
することにより、放出カルシウムの阻害をアッセイした。ｈＭＣＰ−１に代えて
添加することにより、試験化合物は、作用活性の欠如についても試験された。

【０１９０】 ｃ）ｈＭＣＰ−１およびＲＡＮＴＥＳ媒介走化性 ヒト単球細胞系ＴＨＰ−１を用い、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、走化性アッセイを実
施した。ポリカーボネート膜を介した細胞の遊走は、クールター計数器での直接
的計数、またはミトコンドリア呼吸鎖によるテトラゾリウム塩の分解を測定する
着色生存アッセイ（colourimetric viability assay、Scudiero D. A.等、1998
、Cancer Res.、48、4827〜4833））による間接的な計数のいずれかにより、通
過する細胞を計数することによって測定した。

【０１９１】 化学誘引物質を９６穴マイクロタイタープレートに注入し、これは説明書に記
載のＰＶＰ−不含５μｍ孔サイズポリカーボネート固着組立フィルター膜（PVP
free 5μｍporesize polycarbonate adhesive framed filter、NeuroProbe MB s
eries、Cabin John、MD20818、USA）を備えた走化性チャンバーの下側のウェル
であった。化学誘引物質を適当な合成細胞培養培地、ＲＰＭＩ１６４０（Gibco
）または２ｍＭグルタミンおよび０.５％ＢＳＡを補足した培地、またはＨＢＳ
ＳならびにＣａ^２＋およびＭｇ^２＋を含有しかつフェノールレッド（Gibco）を
含有しないプラス０.１％ＢＳＡの培地で希釈した。各希釈を３０分間の吸引に
より脱気し、チャンバーの下側のウェルに注入し（４００μｌ）、ＴＨＰ−１細
胞（１００μｌ ＲＰＭＩ １６４０＋０.５％ＢＳＡ中の５×１０^５）を上側
のチャンバーの各ウェルでインキュベートした。走化性の阻害には、化学誘引物
質を予め決定した一定の最大下濃度に維持し（１ｎＭ ＭＣＰ−１）、ＤＭＳＯ
に溶解した試験化合物（ＤＭＳＯ終濃度＜０.０５ｖ／ｖ％）といっしょに種々
の濃度で下側のウェルに添加した。チャンバーを５％のＣＯ_２下に３７℃で２時
間インキュベートした。培地を上側のウェルから除去し、次いで２００μｌの生
理食塩水で洗浄し、チャンバーを開口し、膜表面を拭き取り乾燥し、６００ｇで
５分９６穴プレートを遠心して、細胞を回収した。上清（１５０μｌ）を吸引し
、細胞増殖剤、すなわちＷＳＴ−１、｛４−[３−（４−ヨードフェニル）−２
−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリオ]−１,３−フェニルジスル
ホネート｝＋電子結合剤（Boehringer Mannheim、Cat. no. 1644807）１０μｌ
をウェルに添加した。プレートを３７℃で３時間インキュベートし、溶解性のホ
ルマザン生成物の吸収をマイクロタイタープレートリーダーを使用して、４５０
ｎｍで読みとった。データをスプレッドシートに入力し、化学誘引物質の不在下
での任意のランダムな遊走により補正し、平均吸収値、標準誤差、および有意性
試験を予想した。ｈＭＣＰ−１は特徴的な二相性応答、最大０.５〜１.０ｎｍの
濃度依存性細胞遊走を誘導した。

【０１９２】 前記アッセイの代わりに、蛍光標識した細胞を終点検出のために使用できる。
この場合、使用するＴＨＰ−１細胞を、５ｍＭのカルセインＡＭ（グリシン、Ｎ
,Ｎ−[[３−’,６’−ビス（アセチルオキシ）−３−オキソスピロ[イソベンゾ
フラン−１（３Ｈ）,９’−[９Ｈ]キサンテン]−２’,７’−ジイル]ビス（メチ
レン）]ビス[Ｎ−[２−[（アセトキシ）メトキシ]−２−オキソエチル]]−ビス[
（アセチルオキシ）メチル]エステル；Molecular Probes）の存在下に、暗所で
４５分間インキュベートすることにより蛍光標識する。細胞を遠心により回収し
、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋および０.１％ＢＳＡを含有するＨＢＳＳ（フェノールレ
ッド不含）に再懸濁した。５０μｌ（２×１０^５細胞）の細胞懸濁液を前記のよ
うに各ウェル上部のフィルター上に載せ、単位を５％ＣＯ_２の存在下に３７℃で
２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をフィルターの上表面
からリン酸バッファー食塩水で洗い落とし、フィルターをプレートから外し、フ
ィルターの裏または下側のウェルから回収した細胞の数を、４８５ｎｍの励起波
長、５３８ｎｍの放射波長（fmax、Molecular Devices）を用いて蛍光を読みと
ることにより予測した。データをスプレッドシートに入力し、化学誘引物質の不
在下の任意のランダムな遊走により補正し、平均蛍光値、標準誤差、阻害率、試
験化合物のＩＣ_５０、および有意性試験を予測した。ＭＣＰ−１の誘導する走化
性に加え、このアッセイの変法はＲＡＮＴＥＳ（２ｎＭ）の誘導する走化性の阻
害についても試験できる。

【０１９３】 ｄ）ヒト末梢血液単球細胞（ＰＢＭＣ）への結合 ｉ）ヒトＰＢＭＣの製造 ヒトの新鮮血（２００ｍｌ）をボランティアの提供者から得、クエン酸ナトリ
ウム抗凝血剤中に回収し、終濃度０.３８％とした。血液を沈殿バッファーと混
合し、３７℃で２０分インキュベートした。懸濁液を回収し、１７００ｒｐｍで
５分遠心した（Sorvall RT6000D）。得られたペレットをＲＰＭＩ／ＢＳＡ（１
ｍｇ／ｍｌ）２０ｍｌ中に再懸濁し、４×５０ｍｌの細胞を１５ｍｌの遠心管の
４×５ｍｌのＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐａｅ（Nycomed）の上に注意深く積層した。
チューブを１７００ｒｐｍで３０分スパンし（Sorvall RT6000D）、得られた細
胞層を取り出して５０ｍｌのファルコンチューブに移動させた。細胞を溶解バッ
ファーで２回、次いでＲＰＭＩ／ＢＳＡで２回洗浄して、残留している赤血球を
除去した。細胞を５ｍｌの結合バッファーに再懸濁した。細胞数をクールター計
数器で測定し、新たな結合バッファーを添加して終濃度１.２５×１０^７ＰＢＭ
Ｃ／ｍｌに調製した。

【０１９４】 ｉｉ）アッセイ [^１２５Ｉ]ＭＣＰ−１をボルトンとハンターの結合（Bolton等、1973、Bioche
m. J. 133、529；Amersham International plc）に従って製造した。平衡結合ア
ッセイをEarnest等、1994、J. Immunol.、152、3541の方法により実施した。簡
略化して述べると、^１２５Ｉ−標識ＭＣＰ−１ ５０μｌ（終濃度１００ｐＭ）
を９６穴プレートの細胞懸濁液４０μｌ（５×１０^５細胞）へ添加した。全細胞
結合バッファーで希釈してＤＭＳＯ中の１０ｍＭストック溶液とした化合物を最
終体積が５μｌとなるように添加して、アッセイ中のＤＭＳＯ濃度を一定の５％
に維持した。全体の結合を、化合物の不在下に測定した。非−特異的な結合を５
μのコールドなＭＣＰ−１を添加することにより測定し、最終アッセイ濃度を１
００ｎＭとした。アッセイするウェルを、全細胞結合バッファーにより最終体積
１００μｌに調節し、プレートをシールした。次いで３７℃で６０分インキュベ
ートし、結合反応混合物を濾過し、氷冷洗浄バッファーによりプレートワッシャ
ー（Brandel MLR-96 T cell Harvester）を用いて１０秒間洗浄した。フィルタ
ーマット（Brandel GF/B）を、使用前に、０.３％ポリエチレンイミン＋０.２％
ＢＳＡへ予め浸漬した。濾過後、個々の濾液を３.５ｍｌのチューブ（Sarstedt
No.55484）に分注し、結合した^１２５Ｉ標識ＭＣＰ−１を測定した（LKB 1277 G
ammamaster）。

【０１９５】 試験化合物の力価を、６ポイント用量応答曲線を利用した２回のアッセイによ
り決定し、ＩＣ_５０濃度を測定した。

【０１９６】 本発明で試験した化合物は、記載のｈＭＣＰ−１受容体結合アッセイにおいて
、５μＭを下回るＩＣ_５０値を示した。例えば化合物９は０.６４μＭのＩＣ_５
０であった。

【０１９７】 本発明の試験化合物は、その有効量において、生理学的に認容できない毒性を
示さなかった。

【０１９８】 例１０ 医薬品組成物 以下に実施例において、ヒトの治療または予防のために使用する本発明の製薬
学的剤形（化合物Ｘと記載される活性成分）を詳細するが、これに限定するもの
ではない。

【０１９９】

【表３】

【０２００】

【表４】

【０２０１】

【表５】

【０２０２】

【表６】

【０２０３】 注記： 前記配合中の化合物Ｘは、例１〜６に記載される化合物を含有する。前記配合
は、製薬学的技術において常用される方法により取得できる。錠剤（ａ）〜（ｃ
）は、慣用の方法、例えば酢酸フタル酸セルロースの被覆により腸溶性になって
いてよい。エアロゾル配合（ｈ）〜（ｋ）は、標準的な定量エアロゾールディス
ペンサーといっしょに使用してよく、懸濁剤であるソルビタントリオレアートお
よび大豆レシチンの代わりに別の懸濁剤、例えばソルビタンモノオレアート、ソ
ルビタンセスキオレアート、ポリソルベート８０、ポリグリセロールオレアート
またはオレイン酸を使用してもよい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/5377 Ａ６１Ｋ 31/5377 31/541 31/541 Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 1/04 9/00 9/00 9/10 9/10 １０１ １０１ 11/00 11/00 13/12 13/12 17/06 17/06 19/02 19/02 25/00 25/00 29/00 29/00 １０１ １０１ 37/06 37/06 Ｃ０７Ｄ 403/12 Ｃ０７Ｄ 403/12 409/12 409/12 413/12 413/12 487/04 １３７ 487/04 １３７ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C050 AA01 BB04 CC04 EE02 FF01 GG01 HH04 4C063 AA01 BB09 CC25 CC51 CC64 CC92 DD06 EE01 4C086 AA01 AA02 AA03 BB02 BC13 BC38 BC67 BC73 BC88 CB03 MA01 MA04 MA10 NA14 ZA01 ZA36 ZA45 ZA59 ZA68 ZA89 ZB11 4C204 CB03 DB25 EB03 FB14 GB16

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 [式中、 Ｘは、ＣＨ_２またはＳＯ_２であり、 Ｒ^１は、置換されていてよいアリールまたはヘテロアリール環であり； Ｒ^２は、カルボキシ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＯＮＨＲ^８、−ＳＯ _２ ＮＨＲ^９、テトラゾール−５−イル、ＳＯ_３Ｈ、または式（ＶＩ）： 【化２】 の基であり、ここで Ｒ^８は、水素、アルキル、アリール、シアノ、ヒドロキシ、−ＳＯ_２Ｒ^１２から
   選択され、この際、 Ｒ^１２はアルキル、アリール、ヘテロアリール、またはハロアルキルであるか、
   または Ｒ^８は、基−（ＣＨＲ^１３）_ｒ−ＣＯＯＨであり、この際、 ｒは、１〜３の整数であり、 各Ｒ^１３基は、独立して水素またはアルキルから選択され； Ｒ^９は、水素、アルキル、置換されていてもよいアリール、例えば置換されてい
   てよいフェノールまたは置換されていてよいヘテロアリール、例えば５または６
   員のヘテロアリール基であるか、または基ＣＯＲ^１４であり、ここで、 Ｒ^１４は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたはハロアルキルであり； Ｒ^１０およびＲ^１１は、独立して水素またはアルキル、特にＣ_１〜_４−アルキル
   から選択され； Ｒ^３は、水素、官能基、置換されていてよいアルキル、置換されていてよいアル
   ケニル、置換されていてよいアルキニル、置換されていてよいアリール、置換さ
   れていてよいヘテロサイクリル、置換されていてよいアルコキシ、置換されてい
   てよいアラルキル、置換されていてよいアラルキルオキシ、置換されていてよい
   シクロアルキルであり； Ｒ^４は、基Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１５Ｒ^１６または基（ＣＨ_２）_ｔＲ^１７であり；ここで
   、 Ｒ^１５およびＲ^１６は、独立して水素、置換されていてよいアルキル、置換され
   ていてよいアルケニル、置換されていてよいアルキニル、置換されていてよいシ
   クロアルキルまたは置換されていてよいヘテロサイクリルであり、ただし、Ｒ^{１ ５} およびＲ^１６は、双方が水素ではなく、またはＲ^１５およびＲ^１６は、これら
   が結合している窒素原子といっしょになって、置換されていてもよいヘテロ環を
   形成し、この環は別のヘテロ原子を含有してよく、 Ｒ^１７は、ＮＲ^１８Ｒ^１９、ＯＲ^２０またはＳ（Ｏ）_ｓＲ^２１であり、ここで、
   Ｒ^１８およびＲ^１９は、独立して水素、置換されていてよいヒドロカルビルまた
   は置換されていてよいヘテロサイクリルであり、またはＲ^１８およびＲ^１９は、
   これらが結合している窒素原子といっしょになって置換されていてよいヘテロ環
   を形成し、この環は別のヘテロ原子を含有してよく； Ｒ^２０は、置換されたアルキル、置換されていてよいアルケニル、置換されてい
   てよいアルキニル、置換されていてよいシクロアルキルまたは置換されていてよ
   いヘテロサイクリルであり、 Ｒ^２１は、置換されていてよいヒドロカルビルまたは置換されていてよいヘテロ
   サイクリルであり、 ｓは、０、１または２であり、 ｔは、１〜４の整数であり； Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は、独立して、水素、官能基または置換されていてよいヒ
   ドロカルビル基または置換されていてよいヘテロサイクリル基である]の化合物
   または式（Ｉ）の化合物の製薬学的に認容性の塩、ｉｎ ｖｉｖｏで加水分解可
   能なエステル、またはアミド。
2. 【請求項２】 Ｒ^４が、基Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、ここで、Ｒ^１５ またはＲ^１６の一方が水素またはアルキルであり、他方が置換されていてよいヘ
   テロサイクリルまたは置換されていてよいアルキルであり、またはＲ^１５および
   Ｒ^１６は、これらが結合している窒素原子といっしょになって、置換されててよ
   いヘテロ環を形成し、この環は別のヘテロ原子を含有していてよい、請求項１記
   載の化合物。
3. 【請求項３】 Ｒ^４が、基Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、ここで、Ｒ^１５ またはＲ^１６の一方が水素であり、他方がアミノ、モノアルキルアミノまたはジ
   アルキルアミノ、カルボキシまたは置換されていてよいヘテロサイクリルから選
   択される１つ以上の基で置換されたヘテロサイクリルまたはアルキルである、請
   求項２記載の化合物。
4. 【請求項４】 Ｒ^４が、基Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１５Ｒ^１６であり、かつＲ^１５およ
   びＲ^１６が、これらが結合している窒素原子といっしょになってモルホリン環を
   形成するか、またはＲ^４は、式（ＩＶ）： 【化３】 の基である、請求項２記載の化合物。
5. 【請求項５】 Ｒ^４が、有利に基（ＣＨ_２）_ｔＲ^１７であり、ここで、ｔは
   １であり、Ｒ^１７は、基ＮＲ^１８Ｒ^１９であり、Ｒ^１８およびＲ^１９は、請求項
   １に定義した通りである、請求項１記載の化合物。
6. 【請求項６】 Ｒ^１が、３,４−ジクロロフェニル、３−フルオロ−４−ク
   ロロフェニル、３−クロロ−４−フルオロフェニルまたは２,３−ジクロロピリ
   ド−５−イルである、請求項１から５までのいずれか１項記載の化合物。
7. 【請求項７】 Ｘが、ＣＨ_２である、請求項１から６までのいずれか１項記
   載の化合物。
8. 【請求項８】 請求項１から７までのいずれか１項記載の化合物と製薬学的
   に認容性の担体とを組み合わせることを特徴とする、製薬学的組成物。
9. 【請求項９】 炎症性疾患の治療に使用する医薬品の製造のために使用する
   、請求項１から７までのいずれか１項記載の化合物。
10. 【請求項１０】 請求項１記載の式（Ｉ）の化合物を製造する方法において
    、式（ＶＩＩ）： 【化４】 [式中、 Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は、式（Ｉ）で定義した通りであり、 Ｒ^２’は、式（Ｉ）で定義したＲ^２であるか、またはその保護形であり、 Ｒ^４０は、基Ｃ（Ｏ）または基（ＣＨ_２）_ｔであり、 ｔは、式（Ｉ）で定義した通りであり、 Ｚは、脱離基である]の化合物を、 （ａ）Ｒ^４０がＣ（Ｏ）である場合には、式（ＶＩＩＩ）： ＨＮＲ^１５Ｒ^１６ （ＶＩＩＩ） [式中、Ｒ^１５およびＲ^１６は、式（Ｉ）で定義した通りである]の化合物と反応
    させるか、または （ｂ）Ｒ^４０が基（ＣＨ_２）_ｔである場合には、式（ＩＸ）： ＨＲ^１７ （ＩＸ） [式中、Ｒ^１７は、式（Ｉ）で定義した通りである]の化合物と反応させ； その後、必要であるかまたは所望される場合に、基Ｒ^２’を基Ｒ^２に脱保護する
    かまたは基Ｒ^２を異なる類似の基に変化させることを特徴とする、式（Ｉ）の化
    合物の製法。