JP2002540083A - ヒト腫瘍壊死因子レセプター様２ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、腫瘍壊死因子ファミリーのレセプターの新規なメンバーに関する。本発明は、ヒトＴＲ２レセプターをコードする単離された核酸分子およびその２つのスプライス改変体を提供する。ＴＲ２ポリペプチドもまた、ベクター、宿主細胞およびこれらを産生するための組換え方法と同様に提供される。本発明はさらに、ＴＲ２レセプター活性のアゴニストおよびアンタゴニストを同定するためのスクリーニング方法に関する。ＴＲ２レセプターの異常な発現に関連する疾患状態を検出するための診断方法もまた提供される。ＴＲ２レセプターを発現する細胞の異常な増殖および分化に関連する疾患状態を処置するための治療方法もまたさらに提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の背景） （発明の分野） 本発明は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプターファミリーの新規なメンバーに
関する。より詳細には、ヒトＴＮＦレセプター関連タンパク質をコードする単離
された核酸分子が提供され、このタンパク質は、マウスＣＤ４０に対する顕著な
相同性を有する、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプターとして本明細書中で引用さ
れる。２つの異なるＴＲ２スプライシング変異体（ＴＲ２−ＳＶ１およびＴＲ２
−ＳＶ２と呼ばれる）もまた、提供される。ヒト２型ＴＮＦレセプター（ＴＮＦ
−ＲＩＩ）に相同であるＴＲ２ポリペプチドもまた、提供される。ＴＲ２レセプ
ターポリペプチドを産生するための、ベクター、宿主細胞および組換え方法もま
た提供される。本発明はまた、ＴＲ２レセプターポリペプチドの機能的活性の阻
害および増強の両方、ならびにＴＲ２レセプター遺伝子発現を検出するための診
断方法に関する。

【０００２】 （関連技術） ヒト腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）およびβ（ＴＮＦ−βまたはリンホトキシ
ン）は、ポリぺプチド媒介物の広範なクラスの関連するメンバーである。ポリぺ
プチド媒介物には、インターフェロン、インターロイキン、および成長因子（集
合的にサイトカインと呼ばれる）が含まれる（Ｂｅｕｔｌｅｒ，Ｂ．およびＣｅ
ｒａｍｉ，Ａ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：６２５−６５５（
１９８９））。

【０００３】 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−β）は、元々、その抗腫瘍活性の結
果として発見されたが、現在は、生物学的なプロセスおよび病理学の宿主におけ
る重要な役割を演じる多面的なサイトカインとして認識される。現在までに、Ｔ
ＮＦ関連サイトカインファミリー、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β（リンホトキシン−
α）、ＬＴ−β、ＴＲＡＩＬ、ならびにＦａｓレセプター、ＣＤ３０、ＣＤ２７
、ＣＤ４０、ＯＸ４０、および４−１ＢＢレセプターのリガンドの１０個の公知
のメンバーが存在する。これらのタンパク質は、ＴＮＦ−βを除き、膜アンカー
としてしばしば使用される保存Ｃ末端配列および可変Ｎ末端配列を有する。ＴＮ
Ｆ−αおよびＴＮＦ−βの両方が、ＴＮＦレセプターに結合した場合、ホモトリ
マーとして機能する。

【０００４】 ＴＮＦは、多くの細胞型（単球、線維芽細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（Ｎ
Ｋ）細胞を含む）によって、そして主に、活性化されたマクロファージによって
産生される。ＴＮＦ−αは、腫瘍の迅速な壊死、免疫刺激、自己疾患、移植片拒
絶、抗ウイルス応答の生成、敗血症性ショック、大脳マラリア、細胞傷害性、化
学治療の間に生成される電離放射線の有害な効果（例えば、酵素の変性、脂質の
過酸化、およびＤＮＡ損傷）に対する防御（Ｎａｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１３６（７）：２４８３（１９８７））、成長調節、脈管内皮効果、および代謝
効果における役割を有することが報告されている。ＴＮＦ−αはまた、内皮細胞
による種々の因子（ＰＡＩ−１、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−６を含む）の
分泌を誘発して、細胞増殖を促進する。さらに、ＴＮＦ−αは、Ｅセレクチン、
ＩＣＡＭ−１、およびＶＣＡＭ−１のような種々の細胞接着分子をアップレギュ
レートする。ＴＮＦ−αおよびＦａｓリガンドはまた、プログラムされた細胞死
を誘導することが示されている。

【０００５】 ＴＮＦ−βは、抗ウイルス状態および腫瘍壊死の誘導、多形核白血球の活性化
、クラスＩ主要組織適合性複合体抗原の内皮細胞上への誘導、接着分子の内皮上
への誘導、ならびに成長ホルモン刺激を含む多くの活性を有する（Ｒｕｄｄｌｅ
，Ｎ．およびＨｏｍｅｒ，Ｒ．，Ｐｒｏｇ．Ａｌｌｅｒｇｙ，４０：１６２−１
８２（１９８８））。

【０００６】 ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βの両方は、成長調節に関与し、そして分化のいく
つかの段階で造血細胞と相互作用し、種々の型の前駆細胞の増殖を阻害し、そし
て未成熟の骨髄単球細胞の増殖を誘導する。Ｐｏｒｔｅｒ，Ａ．Ｔｉｂｔｅｃｈ
９：１５８−１６２（１９９１）。

【０００７】 「ノックアウト」マウスを用いた最近の研究は、ＴＮＦ−β産生に欠損がある
マウスが、末梢リンパ器官の異常な発達および脾臓の構造における形態学的な変
化を示すことを示した（Ａｇｇａｒｗａｌら、Ｅｕｒ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅ
ｔｗ，７（２）：９３−１２４（１９９６）で概説）。リンパ器官に関して、膝
窩の、鼠径部の、大動脈傍の、腸間膜の、腋窩の、および子宮頸部のリンパ節は
、ＴＮＦ−β−／−マウスにおいて発達しなかった。さらに、ＴＮＦ−β−／−
マウスからの末梢血は、正常マウスに比較して白血球が３倍減少していた。しか
し、ＴＮＦ−β−／−マウス由来の末梢血は、その正常の対応物に比較して４倍
多いＢ細胞を含んでいた。さらに、ＴＮＦ−βは、ＴＮＦ−αと比較して、ＥＢ
Ｖ感染Ｂ細胞の増殖を誘導することが示されている。これらの結果は、ＴＮＦ−
βが、リンパ球の発達に関与することを示す。

【０００８】 ＴＮＦ−αＴＮＦ−βまたはＴＮＦ−βによって媒介される種々の細胞性応答
の誘導における第一の工程は、特定の細胞表面または可溶性レセプターへの結合
である。約５５ｋＤａ（ＴＮＦ−ＲＩ）および７５ｋＤａ（ＴＮＦ−ＲＩＩ）の
２つの異なるＴＮＦレセプターが同定されており（Ｈｏｈｍａｎら、Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．，２６４：１４９２７−１４９３４（１９８９））、両方のレセ
プター型に対応するヒトおよびマウスｃＤＮＡが、単離され、そして特徴づけら
れている（Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒら、Ｃｅｌｌ，６１：３５１（１９９０））。両
方のＴＮＦ−Ｒは、細胞外領域、膜貫通領域、および細胞内領域を含む細胞表面
レセプターの典型的な構造を共有する。

【０００９】 これらの分子は、細胞に結合した形態においてだけでなく、インタクトなレセ
プターの切断された細胞外ドメインからなる可溶性形態（Ｎｏｐｈａｒら、ＥＭ
ＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，９（１０）：３２６９−７６（１９９０））、およびさ
もなくば膜貫通ドメインが欠失したインタクトなレセプターにおいても存在する
。ＴＮＦ−ＲＩおよびＴＮＦ−ＲＩＩの細胞外ドメインは、２８％の同一性を共
有し、そして有意なサブユニット間配列相同性を有する４つの反復システインリ
ッチモチーフによって特徴づけられる。大部分の細胞型および組織は、両方のＴ
ＮＦレセプターを発現するようであり、そして両方のレセプターが、シグナル伝
達において活性であるが、それらは異なる細胞性応答を媒介し得る。さらに、Ｔ
ＮＦ−ＲＩＩは、ＰＣＴ ＷＯ ９４／０９１３７に示されるように、ＴＮＦに
よるヒトＴ細胞増殖のみを媒介する。

【００１０】 ＴＮＦ−ＲＩ依存性応答には、Ｃ−ＦＯＳ、ＩＬ−６、およびマンガンスーパ
ーオキシドジスムターゼｍＲＮＡの蓄積、プロスタグランジンＥ２合成、ＩＬ−
２レセプターおよびＭＨＣクラスＩおよびＩＩ細胞表面抗原の発現、成長阻害、
ならびに細胞傷害性が含まれる。ＴＮＦ−ＲＩはまた、ホスホリパーゼＡ₂、プ
ロテインキナーゼＣ，ホスファチジルコリン特異的ホスホリパーゼＣ、およびス
フィンゴミエリナーゼのようなセカンドメッセンジャー系を誘発する（Ｐｆｅｆ
ｆｅｒｋら、Ｃｅｌｌ，７３：４５７−４６７（１９９３））。

【００１１】 いくつかのインターフェロンおよび他の因子が、ＴＮＦレセプターの発現を調
節することが示されている。例えば、レチノイン酸は、いくつかの細胞型におい
てＴＮＦレセプターの産生を誘導する一方、他の細胞において産生をダウンレギ
ュレートすることが示されている。さらに、ＴＮＦ−αは、両方の型のレセプタ
ーの局在化をもたらすことが示されている。ＴＮＦ−αは、ＴＮＦ−ＲＩの内部
移行およびＴＮＦ−ＲＩＩの分泌を誘導する（Ａｇｇａｒｗａｌら、前出におい
て総説される）。従って、両方のＴＮＦ−Ｒの産生および局在化は、種々の因子
によって調節される。

【００１２】 酵母ツーハイブリッド系は、両方の型のＴＮＦ−Ｒに会合するリガンドを同定
するために使用されてきた（Ａｇｇａｒｗａｌら、前出およびＶａｎｄｅｎａｂ
ｅｅｌｅら、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：３９２−３９９（
１９９５）において総説される）。いくつかのタンパク質が同定されており、そ
れらは、マウスＴＮＦ−Ｒの細胞質ドメインと相互作用する。これら２つのタン
パク質は、アポトーシスのバキュロウイルスインヒビターに関連するようであり
、これはプログラムされた細胞死の調節におけるＴＮＦ−Ｒの直接的役割を示唆
する。

【００１３】 （発明の要旨） 本発明は、配列番号２６、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）、図４Ａ〜図４Ｃ（
配列番号５）および図７Ａ〜図７Ｂ（配列番号８）に示されるアミノ酸配列、ま
たは１９９５年２月１３日にＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８、および
９７０５７として寄託されたＴＲ２レセプターをコードするｃＤＮＡによってコ
ードされるアミノ酸配列を有する、ＴＲ２レセプターおよびそのスプライス変異
体をコードするポリヌクレオチドを含むか、あるいはそのポリヌクレオチドから
なる単離された核酸分子を提供する。本発明はまた、本発明の単離された核酸分
子を含む組換えベクターおよびその組換えベクターを含む宿主細胞、ならびにそ
のようなベクターおよび宿主細胞の作製方法および組換え技術によるＴＲ２ポリ
ペプチドまたはペプチドの産生のためのそれらの使用のための方法に関する。

【００１４】 本発明はさらに、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドによってコードさ
れるアミノ酸配列を有する単離されたＴＲ２ポリペプチドを提供する。

【００１５】 本発明はまた、ＴＲ２レセプターによって誘導される細胞応答を増強または阻
害し得る化合物を同定するためのスクリーニング方法を提供し、この方法は、Ｔ
Ｒ２レセプターを発現する細胞を候補化合物と接触させる工程、細胞応答をアッ
セイする工程、およびその細胞応答を標準の細胞応答と比較する工程を包含し、
その標準は、接触が候補化合物の非存在下で行われた場合にアッセイされ、それ
によって、標準を超えて増加した細胞応答はその化合物がアゴニストであること
を示し、そして標準を超えて減少した細胞応答はその化合物がアンタゴニストで
あることを示す。

【００１６】 別の局面において、候補化合物がＴＲ２レセプターに対する細胞リガンドの結
合に対して効果を有するか否かを決定する工程を含む、アゴニストおよびアンタ
ゴニストについてのスクリーニングアッセイが提供される。特に、この方法は、
ＴＲ２レセプターをリガンドポリペプチドおよび候補化合物と接触させる工程、
ならびにＴＲ２レセプターへのリガンド結合が、候補化合物の存在に起因して、
増加または減少するか否かを決定する工程を含む。

【００１７】 本発明はさらに、ＴＲ２レセプター発現における変化に起因して異常な細胞増
殖から生じる疾患状態の診断または予後判定の間に有用である診断方法を提供す
る。

【００１８】 本発明のさらなる局面は、身体においてＴＲ２レセプター活性のレベルの増加
を必要とする個体を処置するための方法に関し、この方法は、本発明の単離され
たＴＲ２ポリペプチドまたはそのアゴニストの治療的有効量を含む、組成物を、
そのような個体に投与する工程を包含する。

【００１９】 本発明のなおさらなる局面は、身体においてＴＲ２レセプター活性のレベルの
減少を必要とする個体を処置するための方法に関し、この方法は、ＴＲ２レセプ
ターアンタゴニストの治療的有効量を含む、組成物を、そのような個体に投与す
る工程を包含する。

【００２０】 本発明はさらに、本発明のポリペプチドの可溶性形態を提供する。可溶性ペプ
チドは、アミノ酸配列によって規定され、ここでその配列は、膜貫通ドメインを
欠くポリペプチド配列を含むか、あるいはそのポリペプチド配列からなる。ＴＲ
２レセプターのそのような可溶性形態は、レセプターの膜結合型のアンタゴニス
トとして有用である。

【００２１】 （好ましい実施形態の詳細な説明） 本発明は、ＴＲ２ポリペプチド（図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２））およびその
スプライス変異体、ＴＲ２−ＳＶ１（図４Ａ〜図４Ｃ（配列番号５））ならびに
ＴＲ２−ＳＶ２（図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号８））をコードするポリヌクレオチ
ドを含むか、あるいはそのポリヌクレオチドからなる単離された核酸分子を提供
し、これらのアミノ酸配列は、ｃＤＮＡを配列決定することにより決定された。
図１Ａ〜図１Ｂに示されるＴＲ２タンパク質は、マウスＣＤ４０レセプター（図
２（配列番号３））と配列相同性を共有する。１９９５年２月１３日にＡｍｅｒ
ｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１ Ｕ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０
９，ＵＳＡに寄託がなされ、そしてＡＴＣＣ受託番号９７０５９が付与された。
図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号１）に示されるヌクレオチド配列は、ＡＴＣＣ受託番
号９７０５９を割り当てられた寄託プラスミド（クローンＩＤ ＨＬＨＡＢ４９
）に含まれるｃＤＮＡと同じアミノ酸コード配列を含むと考えられているｃＤＮ
Ａを配列決定することによって得られた。

【００２２】 本発明のＴＲ２レセプターは、少なくとも４つのヌクレオチドおよび２つのア
ミノ酸において変更を含むいくつかの対立遺伝子改変体を含む。同定されたヌク
レオチド配列改変体は、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号１）に示すように、ヌクレオ
チド３１４でのグアニンまたはアデニンのいずれか、およびヌクレオチド３８６
、６２４、および６２７でのチミンまたはシトシンのいずれかを含む。ヌクレオ
チド６２４および６２７での同定された変更はサイレントであるが、ヌクレオチ
ド３８６での変更は、セリンまたはフェニルアラニンのいずれかをコードするヌ
クレオチド３８５〜３８７でのコドンを生じ、ヌクレオチド３１４での変更は、
リジンまたはアルギニンのいずれかをコードするヌクレオチド３１３〜３１５で
のコドンを生じる。

【００２３】 図４Ａ〜図４Ｃ（配列番号４）および図７Ａ〜図７Ｂ（配列番号７）に示され
るヌクレオチド配列もまた、１９９５年２月１３日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐ
ｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、そしてそれぞれ、ＡＴ
ＣＣ受託番号９７０５８（ＴＲ２−ＳＶ１）および９７０５７（ＴＲ２−ＳＶ２
）が付与されたｃＤＮＡを配列決定することによって得られた。寄託されたｃＤ
ＮＡは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（−）プラスミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎ
ｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）中に含まれる。

【００２４】 本明細書中で使用される場合、句「スプライス変異体」とは、選択的ＲＮＡス
プライシングを受けた、最初に同じゲノムＤＮＡ配列から転写されたＲＮＡ分子
から産生されたｃＤＮＡ分子をいう。選択的ＲＮＡスプライシングは、最初のＲ
ＮＡ転写物がスプライシング（一般的にイントロンの除去）を受け、これがそれ
ぞれ異なるアミノ酸配列をコードし得る１より多くのｍＲＮＡ分子の産生を生じ
る場合に起こる。用語「スプライス変異体」はまた、上記のｃＤＮＡ分子によっ
てコードされるタンパク質をいう。

【００２５】 本明細書中で使用される場合、「ＴＲ２タンパク質」、「ＴＲ２レセプター」
、「ＴＲ２レセプタータンパク質」および「ＴＲ２ポリペプチド」とは、配列番
号２６、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）、図４Ａ〜図４Ｃ（配列番号５）、また
は図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号８）ならびにＴＲ２対立遺伝子変異体において示さ
れるタンパク質に対応するアミノ酸配列同一性およびレセプター活性の領域を有
するタンパク質をコードするゲノムＤＮＡ配列の選択的スプライシングから生じ
るすべてのタンパク質をいう。配列番号２６および図１Ａ〜図１Ｂに示されるＴ
Ｒ２タンパク質、図４Ａ〜図４Ｃに示されるＴＲ２−ＳＶ１タンパク質、ならび
に図７Ａ〜図７Ｃに示されるＴＲ２−ＳＶ２タンパク質は、このようなレセプタ
ータンパク質の例である。

【００２６】 （核酸分子） 他に示されない限り、本明細書中でＤＮＡ分子を配列決定することによって決
定されたすべてのヌクレオチド配列は、自動化ＤＮＡ配列決定機（例えば、Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．からのＭｏｄｅｌ ３７３）を用
いて決定され、そして本明細書中で決定されるＤＮＡ分子によってコードされる
ポリペプチドのすべてのアミノ酸配列は、上記のように決定されるＤＮＡ配列の
翻訳によって推定された。従って、この自動化アプローチによって決定された任
意のＤＮＡ配列について当該分野において公知のように、本明細書中で決定され
る任意のヌクレオチド配列はいくつかの誤りを含み得る。自動化によって決定さ
れるヌクレオチド配列は、配列決定されたＤＮＡ分子の実際のヌクレオチド配列
に対して、代表的には少なくとも約９０％の同一、より代表的には少なくとも約
９５％から少なくとも約９９．９％の同一である。実際の配列は、当該分野にお
いて周知の手動ＤＮＡ配列決定方法を含む他のアプローチによってより正確に決
定され得る。当該分野においてまた公知のように、実際の配列と比較した、決定
されたヌクレオチド配列における単一の挿入または欠失は、ヌクレオチド配列の
翻訳におけるフレームシフトを引き起こし、その結果、決定されたヌクレオチド
配列によってコードされる推定されるアミノ酸配列は、このような挿入または欠
失の点にて始まる配列決定されたＤＮＡ分子によって実際にコードされるアミノ
酸配列とは完全に異なる。

【００２７】 配列番号２６、図１Ａ〜図１Ｂ、図４Ａ〜図４Ｃ、または図７Ａ〜図７Ｃにお
けるヌクレオチド配列のような、本明細書中に提供される情報を使用して、ＴＲ
２ポリペプチドをコードする本発明の核酸分子は、標準的なクローニングおよび
スクリーニング手順（例えば、出発物質としてｍＲＮＡを使用してｃＤＮＡをク
ローニングするために使用されるようなもの）を使用して得られ得る。本発明の
例示として、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号１）に記載される核酸分子は、活性化ヒ
トＴリンパ球に由来するｃＤＮＡライブラリーにおいて見出された。図４Ａ〜図
４Ｃ（配列番号４）および図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号７）に記載される核酸分子
は、ヒト胎児心臓および刺激された（ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ）ヒト単球にそれぞ
れ由来するｃＤＮＡライブラリーにおいて見出された。

【００２８】 実施例６において記載されるように、ＴＲ２ ｍＲＮＡは、多くの組織（肺、
脾臓、および胸腺を含む）において検出され、そしてヒト細胞において遍在的に
発現され得る。ＴＲ２ ＲＮＡもまた、Ｂリンパ球（ＣＤ１９⁺）、ＣＤ４⁺（Ｔ _H1 クローンおよびＴ_H2クローン）およびＣＤ８⁺の両方のＴリンパ球、単球、お
よび内皮細胞において発現することが見出された。

【００２９】 実施例６においてもまた注目されるように、ＴＲ２ ｍＲＮＡの産生は、ＴＮ
ＦαによってＭＧ６３細胞中で誘導可能であった。さらに、ＴＲ２ ｍＲＮＡの
蓄積は、ＰＭＡまたはＤＭＳＯ処理の際に、ＨＬ６０細胞、Ｕ９３７細胞、およ
びＴＨＰ細胞において観察された。ＰＭＡおよびＤＭＳＯは、これらの３つの細
胞型の分化を誘導することが知られている薬剤である。

【００３０】 図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号１）のＴＲ２ ｃＤＮＡの決定されたヌクレオチド
配列は、約２８３アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディング
フレームを含み、約３６アミノ酸残基の推定リーダー配列および約３０，４１７
ｋＤａの推定分子量を有する。アミノ酸残基約３７〜残基約２８３（配列番号２
のアミノ酸残基１〜２４７）の推定成熟ＴＲ２レセプターのアミノ酸配列は、図
１Ａ〜図１Ｂに示される。この文脈において、「約」は、数個（５、４、３、２
、または１）アミノ酸だけより大きいかまたはより小さい、特に列挙される値を
含む。実施例６において注記されるように、リーダー配列切断部位の位置は、Ｔ
Ｒ２−Ｆｃ融合タンパク質について確認され、そして図１Ａ〜図１Ｂに示される
アミノ酸３６とアミノ酸３７との間（配列番号２のアミノ酸残基−１〜１）に見
出された。図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２タンパク質は、配列
番号３に示されるマウスＣＤ４０タンパク質に対して、約２９％同一であり、そ
して約４７％類似である（図２を参照のこと）。

【００３１】 同様に、決定されたＴＲ２のスプライス変異体ＴＲ２−ＳＶ１のｃＤＮＡヌク
レオチド配列（図４Ａ〜図４Ｃ（配列番号４））は、約１８５アミノ酸残基のタ
ンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含み、約３６アミノ酸残
基の推定リーダー配列および約１９．５ｋＤａの推定分子量を有する。アミノ酸
残基約３７〜残基約１８５（配列番号５のアミノ酸残基１〜１４９）の推定成熟
ＴＲ２−ＳＶ１レセプターのアミノ酸配列は、図４Ａ〜図４Ｃ（配列番号５）に
示される。この文脈において、「約」は、数個（５、４、３、２、または１）ア
ミノ酸だけより大きいかまたはより小さい、特に列挙される値を含む。図４Ａ〜
図４Ｃ（配列番号５）に示されるＴＲ２−ＳＶ１タンパク質は、配列番号６に示
されるヒト２型ＴＮＦレセプタータンパク質に対して、約２５％同一であり、そ
して約４８％類似である（図５を参照のこと）。

【００３２】 決定されたＴＲ２のスプライス変異体ＴＲ２−ＳＶ２のｃＤＮＡヌクレオチド
配列（図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号７））は、約１３６アミノ酸残基のタンパク質
をコードするオープンリーディングフレームを含み、推定リーダー配列を含まず
、そして１４ｋＤａの推定分子量を有する。アミノ酸残基約１〜残基約１３６の
推定成熟ＴＲ２−ＳＶ２レセプターのアミノ酸配列は、図７Ａ〜図７Ｃ（配列番
号８）に示される。この文脈において、「約」は、数個（５、４、３、２、また
は１）アミノ酸だけより大きいかまたはより小さい、特に列挙される値を含む。
図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号８）に示されるＴＲ２−ＳＶ２タンパク質は、配列番
号９に示されるヒト２型ＴＮＦレセプタータンパク質に対して、約２７％同一で
あり、そして約４５％類似である（図８を参照のこと）。

【００３３】 図１Ａ〜図１Ｂ、図４Ａ〜図４Ｃ、および図７Ａ〜図７Ｃに示されるＴＲ２、
ＴＲ２−ＳＶ１、およびＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質のヌクレオチド配
列およびアミノ酸配列の両方の比較は、ほぼ同一であるいくつかの領域を示す。
図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２レセプタータンパク質のアミノ
酸配列は、図４Ａ〜図４Ｃ（配列番号５）に示されるＴＲ２−ＳＶ１レセプター
タンパク質のアミノ酸配列に対して、約６０％同一であり、そして約７３％類似
であるが、それらのそれぞれの配列の最初の約１００アミノ酸においては、２つ
のタンパク質は１つの位置で異なる（図１０）。

【００３４】 同様に、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）のＴＲ２レセプタータンパク質のアミ
ノ酸配列は、図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号８）に示されるＴＲ２−ＳＶ２レセプタ
ータンパク質のアミノ酸配列に対して、約６０％同一であり、そして約７１％類
似であるが、しかし、２つのタンパク質は、ＴＲ２−ＳＶ２タンパク質び中心部
分の６０アミノ酸のストレッチにわたって、ほぼ同一である（図１１）。

【００３５】 対照的に、ＴＲ２−ＳＶ１タンパク質およびＴＲ２−ＳＶ２タンパク質は、互
いに対してアミノ酸レベルではわずか約２０％同一であり、そして約３８％類似
である。図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２タンパク質に対するこ
れらのタンパク質のいずれかの比較とは違って、これらのタンパク質は、ＴＲ２
−ＳＶ２タンパク質の全体の１３６アミノ酸配列にわたってそれらの相同性を共
有する（図１２）。

【００３６】 開示されたＴＲ２タンパク質をコードするｃＤＮＡのそれらのヌクレオチド配
列に関して、これらの配列の比較は、ＴＲ２ ｃＤＮＡは、核酸レベルでほぼ同
一な大きい領域を共有していることを示す（図１３Ａ〜図１３Ｄ、図１４Ａ〜図
１４Ｄ、および図１５Ａ〜図１５Ｆ）。ＴＲ２およびＴＲ２−ＳＶ１タンパク質
をコードするｃＤＮＡ配列は、例えば、それぞれのタンパク質のＮ末端とそれら
の５’および３’非コード領域の両方をコードするそれらのヌクレオチド配列に
おいてほぼ同一な大きな領域を共有する（図１３Ａ〜図１３Ｄ）。さらに、ＴＲ
２−ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２タンパク質をコードするｃＤＮＡのヌクレオチ
ド配列は、顕著な相同性を共有するが、しかしこの同一性は、それらのそれぞれ
のコード配列を十分に超えた３’領域に限定されている（図１５Ａ〜図１５Ｆ）
。

【００３７】 ２つの異なるｃＤＮＡ配列間のほぼ同一なこのような領域は、延長された配列
のストレッチにわたって維持される場合、当業者に、それぞれの分子は、もとも
と同じゲノムＤＮＡ配列から転写されたことを示す。当業者はさらに、１つより
多いコドンが同じアミノ酸をコードし得るので、２つのタンパク質間のアミノ酸
レベルでの同一性は、これらのタンパク質をコードするＤＮＡ配列が同じ同一性
の類似領域を共有することを必ずしも意味しないことを理解する。上記のデータ
は、本発明のＴＲ２レセプターは、単一のゲノムＤＮＡ配列から転写され、そし
て１つの最初のＲＮＡ転写物の複数のスプライス変異体を表すことを示す。

【００３８】 選択的にスプライシングされるＲＮＡから生成された関連するタンパク質は、
スプライス改変体と呼ばれ、当該分野で公知である。例えば、ｓｒｃ遺伝子の転
写物は、選択的ＲＮＡスプライシングを受けて、細胞型特異的産物を生成する。
大部分の細胞において、Ｓｒｃタンパク質は、５３３アミノ酸からなるが、一方
神経細胞においては、さらなる短いエキソンがｍＲＮＡに含まれ、５３９アミノ
酸のタンパク質を生じる。Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．ら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩ
ＯＬＯＧＹ ＯＦ ＴＨＥ ＣＥＬＬ（第３版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓ
ｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．１９９４）、４５５を参照のこと。同様に、性特異的ｍＲＮ
Ａ転写物が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａにおいて同定されており、ここでは、選択的
ｍＲＮＡスプライシングは、雄においては約５５０アミノ酸長であり、雌におい
ては約４３０アミノ酸長である、Ｄｓｘと名付けられたタンパク質を生じる。こ
れらの２つのスプライス改変体タンパク質は、約４００アミノ酸の共通のコア配
列を共有する。同書４５７を参照のこと。

【００３９】 本発明の例において、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２レセプ
タータンパク質は、ＲＮＡによってコードされる全長ポリペプチドであると考え
られ、そこからＴＲ２レセプタータンパク質が翻訳される。図４Ａ〜図４Ｃ（配
列番号５）に示されるＴＲ２−ＳＶ１スプライス改変体をコードするＲＮＡは、
図１Ａ〜図１Ｂに示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１０２をコードする領域
において挿入を含み、そして図１Ａ〜図１Ｂに示されるアミノ酸配列のアミノ酸
残基１８４をコードする領域において欠失を含むと考えられている。図７Ａ〜図
７Ｃに示されるＴＲ２−ＳＶ２スプライス改変体をコードするＲＮＡは、図１Ａ
〜図１Ｂに示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１０２をコードするヌクレオチ
ド配列から開始し、そして図１Ａ〜図１Ｂに示されるアミノ酸配列のアミノ酸残
基１８４および２３４をコードする領域において挿入を含むと考えられている。

【００４０】 示されるように、本発明はまた、本発明のＴＲ２レセプターの成熟形態を提供
する。シグナル仮説によれば、哺乳動物細胞により分泌されるタンパク質は、粗
面小胞体を越える成長タンパク質鎖の搬出が一旦開始されると成熟タンパク質か
ら切断されるシグナル配列または分泌リーダー配列を有する。ほとんどの哺乳動
物細胞および昆虫細胞でさえも、同じ特異性で分泌タンパク質を切断する。しか
し、いくつかの場合において、分泌タンパク質の切断は、全く一様であるという
わけではなく、それはそのタンパク質に関して２つ以上の成熟種を生じる。さら
に、分泌タンパク質の切断特異性は、完全タンパク質の一次構造によって最終的
に決定されるということが長く知られている。すなわち、それは、ポリペプチド
のアミノ酸配列に固有のものである。従って、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号９７
０５９および９７０５８として同定される寄託物中に含まれるｃＤＮＡによりコ
ードされるアミノ酸配列ならびに配列番号２６、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）お
よび図４Ａ−４Ｃ（配列番号５）において示されるようなアミノ酸配列を有する
成熟ＴＲ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を提供する。ＡＴＣＣ寄
託番号９７０５９および９７０５８として同定される寄託物内に含まれるｃＤＮ
Ａによってコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２ポリペプチドによって
、寄託されたプラスミドに含まれるｃＤＮＡのヒトＤＮＡ配列によってコードさ
れる完全オープンリーディングフレームの哺乳動物細胞（例えば、以下に記載さ
れるようなＣＯＳ細胞）における発現によって産生されるＴＲ２レセプターの成
熟形態が意図される。

【００４１】 本発明はまた、図７Ａ−７Ｃ（配列番号８）のＴＲ２−ＳＶ２レセプタータン
パク質（ＡＴＣＣ寄託番号９７０５７内に含まれるｃＤＮＡによりコードされる
アミノ酸配列を有し、分泌リーダー配列を含まない）をコードする核酸配列を提
供する。

【００４２】 タンパク質が分泌リーダーおよびそのリーダー配列のための切断部位を有する
か否かを予想するための方法が利用可能である。例えば、ＭｃＧｅｏｃｈの方法
（Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．３：２７１−２８６（１９８５））およびｖｏｎ Ｈｅ
ｉｎｊｅの方法（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６
９０（１９８６））が使用され得る。これらの各方法についての公知の哺乳動物
分泌タンパク質の切断点推定の正確さは、７５〜８０％の範囲である。ｖｏｎ
Ｈｅｉｎｊｅ、前出。しかし、この２つの方法は、必ずしも所定のタンパク質に
関して同じ推定切断点を作製しない。

【００４３】 この場合において、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）、図４Ａ−４Ｃ（配列番号５
）および図７Ａ−７Ｃ（配列番号８）に示される完全ＴＲ２ポリペプチドの推定
アミノ酸配列は、コンピュータープログラム（「ＰＳＯＲＴ」）（Ｋ．Ｎａｋａ
ｉおよびＭ．Ｋａｎｅｈｉｓａ、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４：８９７−９１１（１
９９２）、これはアミノ酸配列に基づくタンパク質の細胞位置を推定するための
熟練したシステムである）によって分析された。ＭｃＧｅｏｃｈおよびｖｏｎ
Ｈｅｉｎｊｅの方法を、局在化のこの計算推定の部分として援用する。ＰＳＯＲ
Ｔプログラムによる分析は、配列番号２および配列番号５において、アミノ酸−
１とアミノ酸１との間の切断部位を推定した。その後、完全アミノ酸配列を、ｖ
ｏｎ Ｈｅｉｎの（−１、−３）ルールの単純形態を適用して、目視検査によっ
てさらに分析した。ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、前出。従って、配列番号２に示され
るＴＲ２タンパク質およびＴＲ−２ＳＶ１タンパク質に対するリーダー配列が、
配列番号２および配列番号５の両方におけるアミノ酸残基−３６〜−１から構成
されることが推定されるが、その推定成熟ＴＲ２タンパク質は、配列番号２に示
されるＴＲ２タンパク質のアミノ酸残基１〜２４７および配列番号５に示される
ＴＲ−２−ＳＶ１のアミノ酸残基１〜１４９から構成される。

【００４４】 実施例６に記載されるように、ＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質のリーダー配列の
切断部位を、発現された融合タンパク質のアミノ酸分析を使用して、確認した。
この融合タンパク質は、アミノ酸３７にて始まることが見出されており、これは
、配列番号２および配列番号５におけるアミノ酸１に対応し、リーダー配列の切
断部位が、このタンパク質のアミノ酸３６と３７との間にあることを示す（配列
番号２および配列番号５におけるアミノ酸残基−１〜１に対応する）。

【００４５】 しかし、当業者が理解するように、配列決定誤差の可能性ならびに異なる公知
のタンパク質におけるリーダーについての切断部位の可変性に起因して、ＡＴＣ
Ｃ寄託番号９７０５９のｃＤＮＡによりコードされるＴＲ２レセプターポリペプ
チドは、およそ２８３個のアミノ酸を含むが、２５０〜３１６個のアミノ酸の範
囲のどこかに存在し得；そしてこのタンパク質のリーダー配列は、およそ３６個
のアミノ酸であるが、およそ３０〜およそ２個のアミノ酸の範囲のどこかに存在
し得る。同様に、ＡＴＣＣ寄託番号９７０５８のｃＤＮＡによりコードされるＴ
Ｒ２−ＳＶ１レセプターポリペプチドは、およそ１８５個のアミノ酸を含むが、
１６３〜２０７個のアミノ酸の範囲のどこかに存在し得；そしてこのタンパク質
のリーダー配列は、およそ３６個のアミノ酸であるが、およそ３０〜およそ４２
個のアミノ酸の範囲のどこかに存在し得る。さらに、ＡＴＣＣ寄託番号９７０５
７のｃＤＮＡによりコードされるＴＲ２−ＳＶ２レセプターポリペプチドは、お
よそ１３６個のアミノ酸を含むが、１２０〜１５２個のアミノ酸の範囲のどこか
に存在し得る。この文脈において、「およそ」とは、特に列挙された値およびい
くつか（５、４、３、２、または１）のアミノ酸だけ大きいかまたは小さい値を
含む。

【００４６】 配列番号２６に示されるＴＲ２タンパク質についてのリーダー配列は、配列番
号２６において、アミノ酸残基−３８〜−１から構成されることが推定されるが
、推定される成熟ＴＲ２タンパク質は、配列番号２６においてアミノ酸残基１〜
２４５から構成される。

【００４７】 示されるように、本発明の核酸分子は、ＲＮＡの形態（例えば、ｍＲＮＡ）で
、またはＤＮＡの形態（例えば、クローニングにより得られるか、もしくは合成
的に生成された、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを含む）であってもよい。このＤ
ＮＡは、二本鎖であってもまたは一本鎖であってもよい。一本鎖ＤＮＡまたは一
本鎖ＲＮＡは、コード鎖（センス鎖としてもまた公知である）であってもよいし
、または非コード鎖（アンチセンス鎖としてもいわれる）であってもよい。

【００４８】 「単離された」核酸分子とは、その天然の環境から取り出された核酸分子（Ｄ
ＮＡ、またはＲＮＡ）を意図する。例えば、ベクターに含まれる組換えＤＮＡ分
子は、本発明の目的のために単離されたと考えられる。単離されたＤＮＡ分子の
さらなる例は、異種宿主細胞中で維持される組換えＤＮＡ分子、または溶液中の
（部分的に、または実質に）精製されたＤＮＡ分子を含む。単離されたＲＮＡ分
子は、本発明のインビボまたはインビトロのＤＮＡ分子のＲＮＡ転写産物を含む
。本発明に従う単離された核酸分子は、合成的に生成されたそのよう分子をさら
に含む。

【００４９】 しかし、ライブラリー（例えば、ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラ
リー）のメンバーであり、かつライブラリーの他のクローンから単離されていな
いクローン中に含まれる核酸（例えば、ライブラリーのクローンおよび他のメン
バーを含む均質な溶液の形態で）、または細胞もしくは細胞溶解物から単離また
は取り出された染色体（例えば、核型における場合「染色体スプレッド（ｓｐｒ
ｅａｄ）」）は、本発明の目的に関して「単離されて」いない。さらに本明細書
中で議論するように、本発明に従う単離された核酸分子は、天然に、組換え的に
または合成的に産生され得る。

【００５０】 本発明の単離された核酸分子としては、配列番号２６または図１Ａ−１Ｂ（配
列番号１）にて示されるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むか、あ
るいはそれらから構成されるＤＮＡ分子；配列番号２６（最後の２４５個のアミ
ノ酸）または図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）（最後の２４７個のアミノ酸）にて示
される成熟ＴＲ２レセプターについてのコード配列を含むか、あるいはそれらか
ら構成されるＤＮＡ分子；および遺伝子コードの縮重に起因して、上記の配列と
は実質的に異なるが、配列番号２６または図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）にて示さ
れるＴＲ２レセプタータンパク質をなおもコードする配列を含むか、あるいはそ
れらから構成されるＤＮＡ分子が挙げられる。当然のことながら、遺伝コードは
当該分野で周知である。従って、当業者にとって、そのような縮重改変体を生成
することは慣用的である。

【００５１】 同様に、本発明の単離された核酸分子としては、図４Ａ−４Ｃ（配列番号４）
にて示されるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むか、あるいはそれ
らから構成されるＤＮＡ分子；図４Ａ−４Ｃ（配列番号５）（最後の１４９個の
アミノ酸）にて示される成熟ＴＲ２−ＳＶ１レセプターについてのコード配列を
含むか、あるいはそれらから構成されるＤＮＡ分子；および遺伝コードの縮重に
起因して、上記の配列とは実質的に異なるが、ＴＲ２−ＳＶ１レセプターをなお
もコードする配列を含むか、あるいはそれらから構成されるＤＮＡ分子が挙げら
れる。

【００５２】 さらに、本発明の単離された核酸分子としては、図７Ａ−７Ｃ（配列番号７）
にて示されるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むか、あるいはそれ
らから構成されるＤＮＡ分子および遺伝コードの縮重に起因して、上記の配列と
は実質的に異なるが、ＴＲ２−ＳＶ２レセプターをなおもコードする配列を含む
か、あるいはそれらから構成されるＤＮＡ分子が挙げられる。

【００５３】 別の局面において、本発明は、１９９５年２月１３日にＡＴＣＣ寄託番号９７
０５９、９７０５８および９７０５７としてそれぞれ寄託されたプラスミド中に
含まれるｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列を有するＴＲ２、ＴＲ２−
ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提
供する。さらなる実施形態において、これらの核酸分子は、Ｎ−末端メチオニン
を欠失する成熟ポリペプチドまたは全長ポリペプチドをコードする。本発明はさ
らに、配列番号２５、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）、図４Ａ−４Ｃ（配列番号４
）、および図７Ａ−７Ｃ（配列番号７）に示されるヌクレオチド配列を有する、
単離された核酸分子；上記の寄託されたｃＤＮＡに含まれるｃＤＮＡのヌクレオ
チド配列；または上記の配列の１つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する
。このような単離された分子、特に、ＤＮＡ分子は、例えば、染色体を用いたイ
ンサイチュハイブリダイゼーションによる遺伝子地図のためのプローブとして、
そして例えばノーザンブロット分析によるヒト組織における本発明のＴＮ２レセ
プター遺伝子の発現を検出するためのプローブとして有用である。

【００５４】 本発明のさらなる実施形態は、（ａ）配列番号２６、図１Ａ−１Ｂ（配列番号
２のアミノ酸残基−３６〜２４７）、図４Ａ−４Ｃ（配列番号５のアミノ酸残基
−３６〜１４９）または図７Ａ−７Ｃ（配列番号８のアミノ酸残基１〜１３６）
に示される完全アミノ酸配列を有するＴＲ２ポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列；（ｂ）配列番号２６、図１Ａ−１Ｂ（配列番号２のアミノ酸残基−３
５〜２４７）、図４Ａ−４Ｃ（配列番号５のアミノ酸残基−３５〜１４９）また
は図７Ａ−７Ｃ（配列番号８のアミノ酸残基２〜１３６）に示される完全アミノ
酸配列をコードするが、Ｎ末端メチオニンを欠失するヌクレオチド；（ｃ）配列
番号２６のおよそ１位〜およそ２４５位、図１Ａ〜１Ｂのおよそ３７位〜２８３
位（配列番号２のアミノ酸残基１〜２４７）、または図４Ａ〜４Ｃのおよそ３７
位〜およそ１８５位におけるアミノ酸配列（配列番号５のアミノ酸残基１〜１４
９）、あるいは図７Ａ−７Ｃ（配列番号８）のおよそ１位〜およそ１３６位にお
けるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２レセプター（任意の付随のリーダー配列が
除去された全長ポリペプチド）をコードするヌクレオチド配列；（ｄ）それぞれ
、ＡＴＣＣ寄託番号９７０５９、９７０５８、および９７０５７に含まれるｃＤ
ＮＡによりコードされるリーダーを含む、完全アミノ酸配列を有するＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１もしくはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配
列；（ｅ）それぞれ、ＡＴＣＣ寄託番号９７０５９および９７０５８に含まれる
ｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟ＴＲ２もしくはＴＲ２−
ＳＶ１レセプターをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＴＲ２もしくはＴＲ２
−ＳＶ１レセプター細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｇ）ＴＲ
２レセプター膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｈ）ＴＲ２レセ
プター細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列；（ｉ）欠失された膜貫通
ドメインの全てまたは部分を有するＴＲ２レセプター細胞外ドメインおよび細胞
内ドメインをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｊ）（ａ）、（ｂ）、（
ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）または（ｉ）のヌクレオチド配
列のいずれかと相補的なヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一、およびより
好ましくは少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８
％または９９％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含むか
、あるいはそれらからなる単離された核酸分子を含む。この文脈において、「お
よそ」とは、特に列挙された値およびいくつか（５、４、３、２、または１）の
アミノ酸だけ大きいかまたは小さい値を含む。

【００５５】 例えば、ＴＲ２レセプターポリペプチドをコードする参照ヌクレオチド配列に
少なくとも９５％「同一」のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドによっ
て、ポリヌクレオチオド配列がＴＲ２レセプターをコードする参照ヌクレオチド
配列のそれぞれ１００ヌクレオチチドあたり５つまでの不一致（ｍｉｓｍａｔｃ
ｈ）を含み得ることを除いて参照配列に同一である、ということが、意図される
。言いかえると、参照ヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一のヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列におけるヌクレオチドの
５％までが、欠失され得るかまたは別のヌクレオチドで置換され得るか、あるい
は参照配列における全ヌクレオチオドの５％までの多くのヌクレオチドが、参照
配列に挿入され得る。参照配列のこれらの不一致は、参照ヌクレオチド配列の５
’または３’末端位置または参照配列におけるヌクレオチドの中で個々にかまた
は参照配列内の１以上の隣接した群においてのいずれかで分散されて、これらの
末端部分の間のどこでも起こり得る。この参照（問い合わせ）配列は、本明細書
中で記載されるように、配列番号２５、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）、図４Ａ−
４Ｃ（配列番号４）、または図７Ａ−７Ｃ（配列番号７）に示されるヌクレオチ
ド配列をコードする全ＴＲ２レセプター、あるいは任意のＴＲ２レセプターポリ
ヌクレオチドフラグメント（例えば、本明細書中に記載される、任意のＴＲ２レ
セプターＮ末端欠失および／またはＣ末端欠失のアミノ酸配列をコードするポリ
ヌクレオチド）、改変体、誘導体もしくはアナログであり得る。

【００５６】 実際問題として、任意の特定の核酸分子が、例えば、配列番号２５、図１Ａ−
１Ｂ（配列番号１）、図４Ａ−４Ｃ（配列番号４）、または図７Ａ−７Ｃ（配列
番号７）に示されるコードヌクレオチド配列に対して、あるいは寄託されたｃＤ
ＮＡのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、
９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、公知のコ
ンピュータープログラム（例えば、Ｂｅｓｔｆｉｔ ｐｒｏｇｒａｍ（Ｗｉｓｃ
ｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓ
ｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ（登録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７
５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）を使用
して従来どおり決定され得る。Ｂｅｓｔｆｉｔは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒ
ｍａｎの局所的相同性アルゴリズムを用いて、２つの配列間の最も良好な相同性
セグメントを見出す（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍ
ａｔｉｃｓ ２：４８２〜４８９（１９８１））。Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の
他の配列整列プログラムを用いて、特定の配列が、本発明に従う参照配列に対し
て、例えば、９５％同一であるか否かを決定する場合は、当然のことながら、同
一性のパーセントが参照ヌクレオチド配列の全長にわたり計算され、そして参照
配列におけるヌクレオチド数全体の５％までの相同性におけるギャップが許容さ
れるように、パラメーターが設定される。

【００５７】 特定の実施形態では、参照（問い合わせ）配列（本発明の配列）と対象配列と
の間の同一性（全体的な配列整列ともいわれる）は、Ｂｒｕｔｌａｇらのアルゴ
リズム（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７〜２４５（１９９０））
に基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定される。％同一
性を計算するために、ＤＮＡ配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好まし
いパラメーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉ
ｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、
Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ
Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌ
ｔｙ＝０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列
の長さ（どちらかより短い方）である。この実施形態に従って、対象配列が、５
’または３’欠失に起因して（内部の欠失が理由ではなく）問い合わせ配列より
も短い場合、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、同一性パーセントを算定する場合に、
対象配列の５’短縮化および３’短縮化を考慮しないという事実を考慮して、手
動の補正が結果に対してなされる。問い合わせ配列と比較して５’末端または３
’末端が短縮化された対象配列については、同一性パーセントは、一致／整列し
ていない、対象配列の５’および３’である問い合わせ配列の塩基数を、問い合
わせ配列の総塩基のパーセントとして計算することにより補正される。ヌクレオ
チドが一致／整列しているか否かの決定は、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によっ
て決定される。次いで、このパーセントが、指定されたパラメーターを使用する
上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算された同一性パーセントから差し引
かれ、最終的な同一性パーセントスコアに到達する。この補正されたスコアが、
本実施形態の目的で使用されるものである。問い合わせ配列と一致／整列してい
ない対象配列の５’塩基および３’塩基の外側の塩基のみが、ＦＡＳＴＤＢ整列
に示されるように、同一性パーセントスコアを手動で調整する目的で計算される
。例えば、９０塩基の対象配列が、同一性パーセントを決定するために１００塩
基の問い合わせ配列と整列される。その欠失は、対象配列の５’末端で生じ、従
ってＦＡＳＴＤＢ整列は、５’末端の最初の１０塩基の一致／整列を示さない。
１０個の不対合塩基は、配列の１０％（整合していない５’末端および３’末端
での塩基の数／問い合わせ配列中の塩基の総数）を表し、そのため１０％が、Ｆ
ＡＳＴＤＢプログラムによって計算される同一性パーセントのスコアから差し引
かれる。残りの９０残基が完全に整合する場合、最終的な同一性パーセントは９
０％である。別の例において、９０残基の対象配列が、１００塩基の問い合わせ
配列と比較される。この場合、その欠失は内部欠失であり、そのため問い合わせ
配列と整合／整列しない対象配列の５’末端または３’末端の塩基は存在しない
。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは、手動で補正
されない。再度、問い合わせ配列と整合／整列しない対象配列の５’末端および
３’末端の塩基のみが手動で補正される。他の手動の補正は、本実施形態の目的
のためにはなされない。

【００５８】 本出願は、それらが、ＴＲ２レセプターの機能的活性を有するポリペプチドを
コードするか否かとは関係なく、本明細書中に開示される（例えば、本明細書中
に開示されるＮ末端欠失および／またはＣ末端欠失のアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドをコードする）核酸配列（例えば、配列番号２のアミノ酸５０〜２８３
をコードする核酸分子））に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％
、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸分子に関する
。これは、特定の核酸分子が、ＴＲ２レセプター活性を有するポリペプチドをコ
ードしない場合でさえ、当業者は、例えば、ハイブリダイゼーションプローブま
たはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとして、核酸分子を使用する方
法をなお理解しているという理由のためである。ＴＲ２レセプター活性を有する
ポリぺプチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、とりわけ、以下
が挙げられる：（１）ｃＤＮＡライブラリー中のＴＲ２レセプター遺伝子または
その対立遺伝子もしくはスプライス（ｓｐｌｉｃｅ）改変体の単離；（２）ＴＲ
２レセプター遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、分裂中期染色体スプ
レッドへのインサイチュハイブリダイゼーション（例えば、「ＦＩＳＨ」）（Ｖ
ｅｒｍａら，Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ（１９８８）に記載される）；および（３）特定の組織におけるＴＲ２
レセプターｍＲＮＡ発現を検出するためのノーザンブロット分析。

【００５９】 しかし、配列番号２５、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）、図４Ａ−４Ｃ（配列番
号４）または図７Ａ−７Ｃ（配列番号７）に示される核酸配列、または寄託され
たｃＤＮＡの核酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９
５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を有する核酸分子
であって、実際に、ＴＲ２レセプター活性を有するポリペプチドをコードする核
酸分子が好ましい。

【００６０】 好ましくは、本発明のポリヌクレオチドフラグメントは、ＴＲ２機能的活性を
実証するポリペプチドをコードする。「ＴＲ２レセプター活性を有するポリペプ
チド」によって、例えば、特定の免疫アッセイおよび生物学的アッセイにおいて
測定された場合、本発明のＴＲ２レセプター（例えば、完全（全長）ＴＲ２レセ
プターポリペプチド、成熟ＴＲ２レセプターポリペプチド、分泌ＴＲ２レセプタ
ーポリペプチド、および可溶性ＴＲ２レセプターポリペプチド（例えば、ＴＲ２
レセプターの細胞外ドメインに含まれる配列を有する））の活性と類似するが必
ずしも同一でない活性を示すポリペプチドが意図される。例えば、ＴＲ２レセプ
ター活性は、ＴＲ２レセプターリガンド（例えば、ＡＩＭ ＩＩ（国際公開第Ｗ
Ｏ９７／３４９１１号）、リンホトキシン−α、およびヘルペスウイルスタンパ
ク質ＨＳＶ１ｇＤ）と結合するＴＲ２レセプターポリペプチドの能力を決定する
ことによって慣用的に測定され得る。ＴＲ２レセプター活性は、以下の実施例６
に記載されるように、リンパ球増殖を阻害する、ポリペプチドＦｃ融合タンパク
質の能力を決定することによって測定され得る。ＴＲ２レセプター活性はまた、
ポリペプチドの能力（例えば、遊離しているか、または細胞表面上に発現される
同族リガンドが、そのレセプターを発現するインタクトな細胞における増殖活性
を与える能力）を決定することによって測定され得る。

【００６１】 他の方法が、当業者に公知であり、かつ本発明の範囲内である。

【００６２】 もちろん、遺伝子コードの縮重のために、当業者は、寄託されたｃＤＮＡの核
酸配列あるいは配列番号２５、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）、図４Ａ−４Ｃ（配
列番号４）または図７Ａ−７Ｃ（配列番号７）に示される核酸配列に少なくとも
８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９
９％同一である配列を有する多数の核酸分子が「ＴＲ２レセプター活性を有する
」ポリペプチドをコードすることを直ちに認識する。実際に、これらのヌクレオ
チド配列の縮重改変体の全てが同じポリペプチドをコードするので、このことは
、上記の比較アッセイを行うことすら必要なく、当業者に明らかである。縮重改
変体でないそのような核酸分子について、妥当な数がまたＴＲ２タンパク質活性
を有するポリペプチドをコードすることが、当該分野でさらに認識される。これ
は、当業者が、タンパク質の機能に有意に影響する可能性が低いか、またはその
可能性がないかのいずれかのアミノ酸置換（例えば、１つの脂肪族アミノ酸の第
二の脂肪族アミノ酸での置換）を十分に知っているからである。

【００６３】 例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置換を如何にして生じるかに関する
ガイダンスが、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ら、「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ
Ｍｅｓｓａｇｅ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：Ｔｏｌｅｒａｎ
ｃｅ ｔｏ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ」Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２４７：１３０６−１３１０（１９９０）に提供され、ここで筆者らは、
タンパク質が、アミノ酸置換に驚くほど寛容性であることを示す。

【００６４】 本発明はさらに、本明細書中に記載される単離された核酸分子のフラグメント
を含むか、またはそれらから構成されるポリヌクレオチドに関する。寄託された
ｃＤＮＡのヌクレオチド配列または配列番号２５、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）
、図４Ａ−４Ｃ（配列番号４）もしくは図７Ａ−７Ｃ（配列番号７）示されるヌ
クレオチド配列を有する単離された核酸分子のフラグメントによって、少なくと
もおよそ１５ｎｔ長、およびより好ましくは少なくともおよそ２０ｎｔ長、さら
により好ましくは少なくともおよそ３０ｎｔ長、およびなおより好ましくは、少
なくともおよそ４０ｎｔ長のフラグメントが意図され、これらは本明細書中で議
論されるような診断プローブおよびプライマーとして有用である。この文脈にお
いて、「およそ」とは、特に列挙された値およびいくつか（５、４、３、２、ま
たは１）のヌクレオチドだけ大きいかまたは小さい値を含む。

【００６５】 もちろん、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、
２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、
４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、
７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５または８４８ｎｔ長のより大
きなフラグメントもまた、本発明に従って有用であり、寄託されたｃＤＮＡのヌ
クレオチド配列または配列番号２５、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）、図４Ａ−４
Ｃ（配列番号４）もしくは図７Ａ−７Ｃ（配列番号７）に示されるほとんど（全
てではないとしても）のヌクレオチド配列に対応するフラグメントも同様に有用
である。例えば、少なくとも２０ｎｔ長のフラグメントによって、寄託されたｃ
ＤＮＡのヌクレオチド配列または配列番号２５、図１Ａ−１Ｂ（配列番号１）、
図４Ａ−４Ｃ（配列番号４）もしくは図７Ａ−７Ｃ（配列番号７）に示されるヌ
クレオチド配列に由来する２０個以上の連続する塩基を含むフラグメントが意図
される。

【００６６】 本発明の好ましい核酸フラグメントとしては、成熟ＴＲ２−ＳＶ１レセプター
（図４Ａ−４Ｃにおいて、およそ３７〜およそ１８５のアミノ酸残基（配列番号
５における、アミノ酸残基１〜１４９）を構成すると推定される）および完全Ｔ
Ｒ２−ＳＶ２レセプター（図７Ａ−７Ｃ（配列番号８）において、およそ１〜お
よそ１３６のアミノ酸残基を構成すると推定される）を含むか、あるいはそれら
から構成されるポリペプチドをコードする核酸分子が挙げられる。この文脈にお
いて、「およそ」とは、特に列挙された値およびいくつか（５、４、３、２、ま
たは１）のアミノ酸だけ大きいかまたは小さい値を含む。

【００６７】 上記のリーダー配列と同様に、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内
ドメインを構成するアミノ酸残基が、コンピュータ分析によって推定される。従
って、当業者が理解するように、各ドメインを定義するために使用される判定基
準に依存して、これらのドメインを構成するアミノ酸残基は、わずかに変動し得
る（例えば、およそ１〜およそ１５アミノ酸残基まで）。この文脈において、「
およそ」とは、特に列挙された値およびいくつか（５、４、３、２、または１）
のアミノ酸だけ大きいかまたは小さい値を含む。

【００６８】 本発明の好ましい核酸フラグメントとしてはまた、以下をコードする核酸分子
が挙げられる：図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）のＴＲ２レセプタータンパク質の細
胞外ドメイン（図１Ａ−１Ｂにおいて、およそ３７〜およそ２００アミノ酸残基
（配列番号２における、アミノ酸残基１〜１６４）を構成すると推定される）を
含むか、あるいはそれから構成されるポリペプチド；ＴＲ２レセプター膜貫通ド
メイン（図１Ａ−１Ｂにおいて、アミノ酸残基２０１〜２２５（配列番号２にお
ける、アミノ酸残基１６５〜１８９））を含むか、あるいはそれから構成される
ポリペプチド；ＴＲ２レセプター細胞内ドメイン（図１Ａ−１Ｂにおいて、およ
そ２２６〜およそ２８３アミノ酸残基（配列番号２における、アミノ酸残基１９
０〜２４７）を構成すると推定される）を含むか、あるいはそれから構成される
ポリペプチド；ならびに欠失された膜貫通ドメインの全てまたは部分を有する、
図１Ａ−１Ｂ（配列番号２）のＴＲ２レセプタータンパク質の細胞外ドメインお
よび細胞内ドメインを含むか、あるいはそれから構成されるポリペプチド。この
文脈において、「およそ」とは、特に列挙された値およびいくつか（５、４、３
、２、または１）のアミノ酸だけ大きいかまたは小さい値を含む。

【００６９】 本発明の好ましい核酸フラグメントとしてはまた、配列番号２６に示されるア
ミノ酸配列（付随するリーダー配列（それぞれ、配列番号２６のアミノ酸残基−
３８〜１６２および配列番号２６のアミノ酸残基１〜１６２）を有するアミノ酸
配列およびそれを有さないアミノ酸配列の両方）を有するＴＲ２タンパク質の細
胞外ドメインのアミノ酸残基をコードする核酸分子が挙げられる。

【００７０】 本発明の好ましい核酸フラグメントはまた、ＴＲ２レセプタータンパク質のエ
ピトープ保有部分をコードする核酸分子を含む。詳細には、本発明のそのような
核酸フラグメントとしては以下をコードする核酸分子が挙げられる：図１Ａ−１
Ｂにおけるおよそ３９〜およそ７０アミノ酸残基（配列番号２におけるアミノ酸
残基３〜３４）から選択される１、２、３、４、５個以上のアミノ酸配列を含む
か、あるいはそれらから構成されるポリペプチド；図１におけるおよそ１０６〜
およそ１２０のアミノ酸残基（配列番号２におけるアミノ酸残基７０〜８０）を
含むか、あるいはそれから構成されるポリペプチド；図１Ａ−１Ｂにおけるおよ
そ１４２〜およそ１８９アミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基１０６〜１５
３）を含むか、あるいはそれから構成されるポリペプチド；図１Ａ−１Ｂにおけ
るおよそ２７６〜およそ２８３アミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基２４０
〜２４７）を含むか、あるいはそれから構成されるポリペプチド；図４Ａ−４Ｃ
におけるおよそ３９〜およそ７０アミノ酸残基（配列番号５のアミノ酸残基３〜
３４）を含むか、あるいはそれから構成されるポリペプチド；図４Ａ−４Ｃにお
けるおよそ９９〜およそ１３６アミノ酸残基（配列番号５のアミノ酸残基６３〜
１００）；図４Ａ−４Ｃにおけるおよそ１７１〜およそ１８５アミノ酸残基（配
列番号５のアミノ酸残基１３５〜１４９）；図７Ａ−７Ｃにおけるおよそ５６〜
およそ６８アミノ酸残基（配列番号８）；図７Ａ−７Ｃにおけるおよそ９３〜お
よそ１３６アミノ酸残基（配列番号８）。この文脈において、「およそ」とは、
特に列挙された値およびいくつか（５、４、３、２、または１）のアミノ酸だけ
大きいかまたは小さい値を含む。本発明者らは、上記ポリペプチドフラグメント
がＴＲ２レセプターの抗原領域であることを決定した。ＴＲ２タンパク質の他の
そのようなエピトープ保有部分を決定するための方法が、以下に詳細に記載され
る。これらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドはまた、本発
明に含まれる。

【００７１】 ＴＲ２レセプターポリヌクレオチドフラグメントの代表的な例としては、例え
ば、配列番号１のおよそ１〜６４、６５〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２
００、２０１〜２５０、２２５〜２６５、２５１〜３００、３０１〜３５０、３
５１〜３７２、３７３〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６
００、６０１〜６５０、６５１〜７００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８
０１〜８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９５１〜１０００、１００１
〜１０５０、１０５１〜１１００、１０７０〜１１１３、１１０１〜１１５０、
１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１〜１
３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、１５
０１〜１５５０、１５５１〜１６００、もしくは１６０１〜１６７０ヌクレオチ
ドに由来する配列、ＡＴＣＣ寄託番号９７０５９として同定される寄託物に含ま
れるｃＤＮＡもしくはこれらのフラグメントのいずれかの相補鎖を含むか、また
はそれらから構成される、フラグメントが挙げられる。この文脈において、「お
よそ」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙された範囲（い
くつか（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ大きいかまたは小さい
）を含む。これらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドもまた
、本発明に含まれる。

【００７２】 本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチドフラグメントのさらなる代表的な
例としては、例えば、配列番号４のおよそ３７３〜４３３、３７３〜４５０、４
５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６０１〜６５０、６５１〜７
００、７０１〜７５０、７５１〜８００、８０１〜８５０、８５１〜９００、も
しくは９０１〜９２７のヌクレオチド、配列番号７のおよそ２４７〜３００、３
０１〜３５０、３５１〜３７２、３７３〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５
５０、５５１〜６００、もしくは６０１〜６５４ヌクレオチド、またはＡＴＣＣ
寄託番号９７０５８もしくは９７０５７として同定される寄託物に含まれるｃＤ
ＮＡあるいはこれらのポリヌクレオチドのいずれかの相補鎖に由来する配列を含
むか、あるいはそれらから構成される、フラグメントが挙げられる。この文脈に
おいて、「およそ」とは、いずれかの末端もしくは両末端において、特に列挙さ
れた範囲（いくつか（５、４、３、２、または１）のヌクレオチドだけ大きいか
または小さい）を含む。これらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペ
プチドもまた、本発明に含まれる。

【００７３】 図１Ａ−１Ｂに開示される、一つ以上のＴＲ２レセプターのシステイン反復領
域が、ＴＲ２レセプターとそのリガンド（例えば、ＡＩＭ ＩＩ（国際公開第Ｗ
Ｏ９７／３４９１１号）、リンホトキシン−α、およびヘルペスウイルスタンパ
ク質ＨＳＶ１糖タンパク質Ｄ（ｇＤ））との間の相互作用について重要であると
考えられる。従って、本発明の特定の実施形態は、図１６に開示され、かつ実施
例６に記載されるシステイン反復領域Ａ、Ｂ、ＣまたはＤのアミノ酸配列を含む
か、あるいはそれらから構成される、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドに関する。本発明のさらなる実施形態は、図１６に開示され、かつ実施例６に
記載されるシステイン反復領域Ａ〜Ｄの１、２、３、または４つ全ての任意の組
み合わせを含むか、あるいはそれらから構成される、ＴＲ２レセプターポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドに関する。本発明のさらなる好ましい実施形
態は、図１６に開示され、かつ実施例６に記載されるシステイン反復領域Ａ、Ｂ
、Ｃ、またはＤのＴＲ２レセプターアミノ酸配列を含むか、あるいはそれらから
構成される、ポリペプチドに関する。本発明のさらなる実施形態は、図１６に開
示され、かつ実施例６に記載されるシステイン反復領域Ａ−Ｄの１、２、３、ま
たは４つ全ての任意の組み合わせを含むか、あるいはそれらから構成される、Ｔ
Ｒ２レセプターポリペプチドに関する。

【００７４】 特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、１、２、または３つすべ
ての上記のシステインリッチモチーフをコードするポリヌクレオチド配列に対し
て、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９
８％、または９９％同一であるポリヌクレオチド配列を含むか、あるいはそれら
のポリヌクレオチド配列からなる。本発明はまた、異種ポリヌクレオチド配列に
融合された上記ポリヌクレオチド配列を含む。これらの核酸配列および／または
ポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドもまた、本発明に包含
される。

【００７５】 別の実施形態では、本発明は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条
件下で、１、２、または３つすべての上記のシステインリッチモチーフ、上記の
本発明のポリヌクレオチド、またはそれらの相補鎖に対してハイブリダイズする
ポリヌクレオチドを含むか、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる単離さ
れた核酸分子を提供する。本明細書中で使用される場合の句「ストリンジェント
な条件」の意味は、以下において記載される。

【００７６】 好ましくは、本発明のポリヌクレオチドフラグメントは、ＴＲ２レセプターの
１以上の機能的活性を示すポリペプチドをコードする。ＴＲ２レセプターの「機
能的活性」を示すポリペプチドとは、全長（完全な）ＴＲ２レセプタータンパク
質と関連した１以上の公知の機能的活性を示し得るポリペプチドを意味する。こ
のような機能的活性としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：生
物学的活性（例えば、Ｂ細胞増殖の阻害）、抗原性、免疫原性（ＴＲ２レセプタ
ーポリペプチドに結合する抗体を産生する能力）、抗ＴＲ２レセプター抗体に結
合する（または、結合について、ＴＲ２レセプターポリペプチドと競合する）能
力、本発明のＴＲ２レセプターポリペプチドとマルチマーを形成する能力、なら
びにＴＲ２レセプターポリペプチド（例えば、ＡＩＭ ＩＩ（国際公開番号ＷＯ
９７／３４９１１）、リンホトキシン−α、およびヘルペスウイルスタンパク質
ＨＳＶ１糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）についてのレセプターまたはリガンドに結合す
る能力。

【００７７】 ＴＲ２レセプターポリペプチド、ならびにそのフラグメント、改変体、誘導体
、およびアナログの機能的活性は、種々の方法によりアッセイされ得る。

【００７８】 例えば、ＴＲ２レセプター抗体と結合するか、またはＴＲ２レセプター抗体と
の結合に関して全長ＴＲ２レセプターポリペプチドと競合する能力をアッセイす
る、１つの実施形態において、当該分野において公知の種々のイムノアッセイが
使用され得る。このようなアッセイとしては、放射イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ
（酵素結合イムノソルベント検定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、イム
ノラジオメトリックアッセイ、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、インサイ
チュイムノアッセイ（例えば、金コロイド、酵素または放射性同位体標識を用い
る）、ウェスタンブロット、沈降反応、凝集アッセイ（例えば、ゲル凝集アッセ
イ、血球凝集アッセイ）、補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡ
アッセイ、および免疫電気泳動アッセイなどのような技術を用いる競合および非
競合アッセイ系が挙げられるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、
抗体結合が、一次抗体上の標識を検出することによって検出される。別の実施形
態では、この一次抗体は、この一次抗体に対する二次抗体または試薬の結合を検
出することによって検出される。さらなる実施形態では、この二次抗体が標識さ
れる。多くの手段が、イムノアッセイにおける結合の検出について当該分野で公
知であり、そして本発明の範囲内である。

【００７９】 別の実施形態において、ＴＲ２レセプターリガンドが同定される場合（例えば
、ＡＩＭ ＩＩ（国際公開番号ＷＯ９７／３４９１１）、リンホトキシン−α、
およびヘルペスウイルスタンパク質ＨＳＶ１ ｇＤ）、または本発明のポリペプ
チドフラグメント、改変体、または誘導体がマルチマー化する能力が評価される
場合、結合が、例えば、還元および非還元ゲルクロマトグラフィー、タンパク質
アフィニティークロマトグラフィー、ならびにアフィニティーブロッティングの
ような当該分野で周知の手段によって、アッセイされ得る。一般には、Ｐｈｉｚ
ｉｃｋｙ、Ｅ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：９４−１２３（１９９
５）を参照のこと。別の実施形態では、その基質へのＴＲ２レセプターの結合の
生理学的相関（シグナル伝達）がアッセイされ得る。

【００８０】 さらに、本明細書中で記載されるアッセイ（例えば、実施例６および８を参照
のこと）および当該分野において公知の他のアッセイは、ＴＲ２レセプターポリ
ペプチドならびにそのフラグメント、改変体、誘導体、およびアナログがＴＲ２
レセプター関連生物学的活性（例えば、インビトロまたはインビボでの、Ｂ細胞
増殖の阻害）を誘発する能力を測定するために慣用的に適用され得る。他の方法
は、当業者に公知であり、そして本発明の範囲内である。

【００８１】 別の局面では、本発明は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下
で、上記の本発明の核酸分子（例えば、上記のポリヌクレオチドフラグメントの
相補体またはＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８、および９７０５７に含
まれるｃＤＮＡ）の１つのポリヌクレオチドの部分にハイブリダイズするポリヌ
クレオチドを含むか、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる単離された核
酸分子を提供する。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、
５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三
ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液
、１０％硫酸デキストラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含
むかあるいはそれらからなる溶液中での４２℃での一晩インキュベーション、続
いて０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にてフィルターを洗浄することを意図される。

【００８２】 ポリヌクレオチドの「部分」にハイブリダイズするポリヌクレオチドとは、少
なくとも約１５ヌクレオチド（ｎｔ）、そしてより好ましくは少なくとも約２０
ｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ、そしてなおより好ましくは
約３０〜７０ｎｔの参照ポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチ
ド（ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか）を意図する。この文脈において、「約」は
、特に列挙された値、および数個（５、４、３、２、または１）のヌクレオチド
だけより大きいまたはより小さい値を含む。これらは、上記および以下により詳
細に議論される診断プローブおよびプライマーとして有用である。

【００８３】 「少なくとも２０ｎｔの長さ」のポリヌクレオチドの部分とは、例えば、参照
ポリヌクレオチド（例えば、寄託されたｃＤＮＡまたは、配列番号２５、図１Ａ
〜１Ｂ（配列番号１）、図４Ａ〜４Ｃ（配列番号４）、または図７Ａ〜７Ｃ（配
列番号７）に示されるようなヌクレオチド配列）のヌクレオチド配列からの、２
０以上連続したヌクレオチドを意図する。

【００８４】 当然のことながら、ポリＡ配列（例えば、配列番号２５、図１Ａ〜１Ｂ（配列
番号１）、図４Ａ〜４Ｃ（配列番号４）、または図７Ａ〜７Ｃ（配列番号７）に
示されるＴＲ２レセプターｃＤＮＡ配列の３’末端ポリ（Ａ）値域（ｔｒａｃｔ
））、あるいはＴ（またはＵ）残基の相補的ストレッチに対してのみハイブリダ
イズするポリヌクレオチドは、本発明の核酸の部分にハイブリダイズするために
使用される本発明のポリヌクレオチドには含まれない。なぜなら、このようなポ
リヌクレオチドは、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体を含む任意の核酸分
子（例えば、特に、オリゴｄＴプライムしたｃＤＮＡライブラリーから生成され
た任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）にハイブリダイズするからである。

【００８５】 示されるように、ＴＲ２ポリペプチドをコードする本発明の核酸分子は、それ
自体によって成熟ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子；および成
熟ポリペプチドおよび付加的な配列（例えば、約３６アミノ酸のリーダー配列ま
たは分泌配列（例えば、プレ−、またはプロ−、またはプレプロ−タンパク質配
列）をコードする配列）のコード配列；付加的な非コード配列（例えば、イント
ロンならびに非コード５’配列および３’配列（例えば、転写、ｍＲＮＡプロセ
シングにおいて役割（例えば、リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）を果た
す、転写された非翻訳配列（スプライシングおよびポリアデニル化シグナルを含
む）が挙げられるが、これらに限定されない）を伴う、成熟ポリペプチドのコー
ド配列（上記の付加的なコード配列を有しても有さなくともよい）；付加的なア
ミノ酸についてコードする付加的なコード配列（例えば、さらなる機能性を提供
するコード配列）を含み得るが、これらに限定されない。従って、このポリペプ
チドをコードする配列は、マーカー配列（例えば、融合ポリペプチドの精製を容
易にするペプチドをコードする配列）に融合され得る。本発明のこの局面の特定
の好ましい実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、とりわけヘキサヒスチ
ジンペプチド（例えば、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．）において提
供されるタグ）であり、その多くが市販されている。Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）にお
いて記載されるように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な
精製を提供する。「ＨＡ」タグは、インフルエンザ血球凝集素タンパク質由来の
エピトープに対応する、精製に有用な別のペプチドであり、これは、Ｗｉｌｓｏ
ｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９８４）によって記載される。以下に議論す
るように、他のこのような融合タンパク質は、そのＮまたはＣ末端でＦｃに融合
するＴＲ２レセプターを含む。

【００８６】 本発明は、本発明の核酸分子の改変体にさらに関し、この改変体はＴＲ２レセ
プターの部分、アナログまたは誘導体をコードする。改変体は、天然に存在し得
る（例えば、天然の対立改変体）。「対立改変体」は、生物体の染色体上の所定
の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替形態のうちの１つを意図する。Ｇ
ｅｎｅｓ ＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ（１９８５）。

【００８７】 天然に存在しない改変体は、当該分野で公知の変異誘発技術（オリゴヌクレオ
チド媒介変異誘発、アラニンスキャニング、ＰＣＲ変異誘発、部位特異的変異誘
発（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：４３３１
（１９８６）；およびＺｏｌｌｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：
６４８７（１９８２）を参照のこと）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓ
ら、Ｇｅｎｅ ３４：３１５（１９８５）を参照のこと）、限定選択変異誘発（
例えば、Ｗｅｌｌｓら、Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ
ＳｅｒＡ ３１７：４１５（１９８６）を参照のこと）が挙げられるが、これ
らに限定されない）を使用して産生され得る。

【００８８】 このような改変体としては、１以上のヌクレオチドを含み得るヌクレオチドの
置換、欠失、または付加によって生成される改変体が挙げられる。改変体は、コ
ード領域、非コード領域、または両方において変更され得る。コード領域におけ
る変更は、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、欠失または付加を生成し得
る。これらの中で特に好ましいのは、ＴＲ２レセプターの特性および活性または
それらの部分を変更しない、サイレントな置換、付加、および欠失である。これ
に関してまた特に好ましいのは、保存的置換である。

【００８９】 （ベクターおよび宿主細胞） 本発明はまた、本発明の単離されたＤＮＡ分子を含むベクター、この組換えベ
クターで遺伝子操作された宿主細胞、および組換え技術によるＴＲ２ポリペプチ
ドまたはそのフラグメントの産生に関する。

【００９０】 ポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために選択可能マーカーを含むベク
ターに連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈澱物
のような沈澱物中か、または荷電された脂質との複合体中で導入される。ベクタ
ーがウイルスである場合、ベクターは、適切なパッケージング細胞株を用いてイ
ンビトロでパッケージングされ得、次いで宿主細胞に形質導入され得る。

【００９１】 ＤＮＡ挿入物を、適切なプロモーター（いくつか挙げると、例えば、ファージ
λＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉのｌａｃ、ｔｒｐ、およびｔａｃプロモータ
ー、ＳＶ４０初期プロモーターおよび後期プロモーター、ならびにレトロウイル
スＬＴＲのプロモーター）に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロ
モーターは、当業者に公知である。発現構築物はさらに、転写開始、終結のため
の部位、および転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構
築物によって発現される成熟転写物のコード部分は、好ましくは、翻訳されるべ
きポリペプチドの末端に適切に位置付けられた開始および終結のコドン（ＵＡＡ
、ＵＧＡ、またはＵＡＧ）での翻訳開始を含む。

【００９２】 示されたように、発現ベクターは、好ましくは、少なくとも１つの選択マーカ
ーを含む。このようなマーカーとしては、真核生物細胞培養についてはジヒドロ
葉酸レダクターゼ、またはネオマイシン耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他の
細菌における培養についてはテトラサイクリン耐性遺伝子、およびアンピシリン
耐性遺伝子が挙げられる。適切な異種宿主の代表的な例としては、細菌細胞（例
えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ細胞、およびＳａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ細胞）；真菌細胞（例えば酵母細胞）；昆虫
細胞（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２細胞およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ
Ｓｆ９細胞）；動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、およびＢｏｗｅｓ
黒色腫細胞）；ならびに植物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。上記
の宿主細胞のための適切な培養培地および条件は当該分野で公知である。

【００９３】 細菌での使用のために好ましいベクターのなかでも、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０
およびｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮから入手可能）；ｐＢＳベクター、Ｐｈａｇｅ
ｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１
６ａ、ＰＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；お
よびｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐ
ＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）が挙げられる。好ましい真核生物
ベクターのなかには、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１お
よびｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢ
ＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）がある。他
の適切なベクターは、当業者に容易に明白である。

【００９４】 構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によっ
てもたらされる。このような方法は、多くの標準的な実験マニュアル（例えば、
Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ（１９８６））に記載される。

【００９５】 ポリペプチドは、改変形態（例えば、融合タンパク質）で発現され得、そして
分泌シグナルだけでなく、さらなる異種機能領域もまた含み得る。例えば、付加
的アミノ酸（特に、荷電アミノ酸）の領域は、宿主細胞における、精製の間の、
またはその後の取り扱いおよび保存の間の、安定性および持続性を改善するよう
に、ポリペプチドのＮ末端に付加され得る。ペプチド部分はまた、精製を容易に
するようにポリペプチドに付加され得る。このような領域は、このポリペプチド
の最終調製より前に、取り除かれ得る。とりわけ、分泌または排出を発生させ、
安定性を改善し、そして精製を容易にするための、ペプチド部分のポリペプチド
への付加は、よく知られており、当該分野で慣用的な技術である。好ましい融合
タンパク質は、タンパク質の可溶化に有用な免疫グロブリン由来の異種領域を含
む。例えば、ＥＰ−Ａ−０ ４６４ ５３３（カナダ対応出願第２０４５８６９
号）は、別のヒトタンパク質、またはその一部とともに免疫グロブリン分子の定
常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパ
ク質中のＦｃ部分は、治療および診断における使用に十分に有利であり、従って
、例えば改善された薬物動態学的特性を生じる（ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２）
。一方、いくつかの使用について、融合タンパク質が、記載される有利な様式で
、発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分が欠失され得ることが
望ましい。これは、Ｆｃ部分が、治療および診断における使用に対して障害とな
ると判明する場合（例えば、融合タンパク質が免疫のための抗原として使用され
る場合）である。薬物探索において、例えばｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質
は、ヒトｈＩＬ−５レセプターのアンタゴニストを同定するための高処理能力ス
クリーニングアッセイの目的でＦｃ部分と融合されている。Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔ
ら，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉ
ｏｎ Ｖｏｌ．８：５２−５８（１９９５）、およびＫ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら，
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
Ｖｏｌ．２７０ Ｎｏ．１６：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと
。

【００９６】 ＴＲ２レセプターは、硫酸アンモニウム沈澱またはエタノール沈澱、酸抽出、
陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグ
ラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフ
ィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラ
フィーを含むが、これらに限定されない周知の方法によって組換え細胞培養物か
ら回収され得、そして精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフ
ィー（「ＨＰＬＣ」）が精製のために使用される。本発明のポリペプチドは以下
を含む：天然の精製産物；化学合成手順の産物；および原核生物宿主または真核
生物宿主（例えば、細菌細胞、酵母細胞、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳
動物細胞を含む）から組換え技術によって産生された産物。組換え産生手順にお
いて用いられる宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリコシル化されて
いても、またはグリコシル化されていなくてもよい。さらに、本発明のポリペプ
チドはまた、いくつかの場合、宿主媒介プロセスの結果として、改変された開始
メチオニン残基を含み得る。

【００９７】 本明細書中に議論されるベクター構築物を含む宿主細胞を包含することに加え
て、本発明はまた、脊椎動物起源（特に哺乳動物起源）の初代の宿主細胞、二次
的な宿主細胞および不死化された宿主細胞を含む。これらの細胞は、内因性遺伝
物質（例えば、ＴＲ２レセプターコード配列）を欠失または置換するように、お
よび／または本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチドと作動可能に連結され
た遺伝物質（例えば、異種ポリヌクレオチド配列）を含むように操作されており
、そして内因性ＴＲ２レセプターポリヌクレオチドを活性化、変化、および／ま
たは増幅する。例えば、当該分野で公知の技術を使用して、異種制御領域配列（
例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）および相同組換えを介した
内因性ＴＲ２レセプターポリヌクレオチド配列を作動可能に連結し得る（例えば
、１９９７年６月２４日発行の米国特許第５，６４１，６７０号；１９９６年９
月２６日公開の国際公開ＷＯ９６／２９４１１；１９９４年８月４日公開の国際
公開ＷＯ９４／１２６５０；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌｓｔ
ｒａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８（１９８９）、これらの開示の
各々は、その全体が参考として参照される）。

【００９８】 （ＴＲ２ポリペプチドおよびフラグメント） 本発明はさらに、寄託されたｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列、ま
たは配列番号２６、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）、図４Ａ〜４Ｃ（配列番号５）
、または図７Ａ〜７Ｃ（配列番号８）に示されるアミノ酸配列を有する単離され
たＴＲ２ポリペプチド、あるいは、上記ポリペプチドの部分を含むペプチドもし
くはポリペプチド、あるいは上記ポリペプチドの部分からなるペプチドもしくは
ポリペプチドを提供する。

【００９９】 本発明のポリペプチドは、膜に結合され得るか、または可溶性の循環形態であ
り得る。可溶性ペプチドは、アミノ酸配列によって規定され、ここで膜貫通ドメ
インを欠くポリペプチド配列を含むか、あるいはそのポリペプチド配列からなる
。ＴＲ２レセプターのこのような可溶性形態の１例は、分泌リーダー配列（しか
し、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインの両方を欠く）を有するＴＲ２−ＳＶ
１スプライス改変体である。従って、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質は、
このタンパク質を発現する細胞から、分泌形態で分泌されているようである。

【０１００】 本発明のポリペプチドは、膜貫通領域ならびに細胞内領域および細胞外領域を
有するう膜結合レセプターとして存在し得るか、または本発明のポリペプチドは
、可溶性形態で存在し得、ここでは膜貫通ドメインが欠失している。ＴＲ２レセ
プターのこのような形態の１例が、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ
２レセプターであり、これは、リーダー配列に加えて、膜貫通ドメイン、細胞内
ドメイン、および細胞外ドメインを含む。従って、ＴＲ２レセプターのこの形態
は、このタンパク質を発現する細胞の細胞質膜に局在しているようである。

【０１０１】 本発明のポリペプチドはまた、以下を含む：寄託されたｃＤＮＡ（リーダーを
含む）によってコードされるポリペプチド；寄託されたｃＤＮＡ（リーダーを含
まない）（すなわち、成熟タンパク質）によってコードされるポリペプチド；配
列番号２６、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）または図４Ａ〜４Ｃ（配列番号５）の
ポリペプチド（リーダーを含む）、配列番号２６、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）
または図４Ａ〜４Ｃ（配列番号５）のポリペプチド（リーダーを含むが、Ｎ末端
メチオニンを含まない）；配列番号２６、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）または図
４Ａ〜４Ｃ（配列番号５）のポリペプチド（リーダーを含まない）；図７Ａ〜７
Ｃ（配列番号８）のポリペプチド；配列番号２６または図１Ａ〜１Ｂ（配列番号
２）に示されるＴＲ２レセプターの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細
胞内ドメイン；上記のポリペプチドに対して、少なくとも８０％同一、より好ま
しくは、少なくとも８５％、９０％、９２％、または９５％同一、なおより好ま
しくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるポリペプチ
ド。そしてまた、少なくとも３０アミノ酸、およびより好ましくは少なくとも５
０アミノ酸を有する、このようなポリペプチドの部分も含まれる。

【０１０２】 ＴＲ２ポリペプチドの参照アミノ酸配列に対して、少なくとも例えば、９５％
「同一」なアミノ酸配列を有するポリペプチドによって、このポリペプチド配列
がＴＲ２レセプターの参照（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）アミノ酸配列の１００アミノ
酸につき５つまでのアミノ酸の変化を含み得ることを除いて、このポリペプチド
のアミノ酸配列が、この参照配列に同一であることが意図される。換言すれば、
参照アミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するポリヌ
クレオチドを得るために、参照配列のアミノ酸残基の５％までが、欠失、もしく
は別のヌクレオチドで置換され得るか、または参照配列の総アミノ酸残基の５％
までの多くのアミノ酸が、この参照配列内に挿入され得る。これらの参照配列の
変化は、参照アミノ酸配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端の位置、または
これらの末端の位置間の任意の場所で、参照配列内の残基の中で個々に、もしく
は参照配列内の１つ以上の連続した群のいずれかで分散して生じ得る。

【０１０３】 実際問題として、任意の特定のポリペプチドが、例えば、配列番号２６、図１
Ａ〜１Ｂ（配列番号２）、図４Ａ〜４Ｃ（配列番号５）、または図７Ａ〜７Ｃ（
配列番号８）に示されるアミノ酸配列に対して、あるいは寄託されたｃＤＮＡの
１つによってコードされたアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、８５％、
９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるか否
かが、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａ
ｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ（登
録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓ
ｉｔｙ Ｒｅｓｅａｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍ
ａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）のような公知のコンピュータプログラムを使
用して、習慣的に決定され得る。特定の配列が、例えば、本発明に従う参照配列
と９５％同一であるか否かを決定するためにＢｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配
列整列プログラムを使用する場合、当然ながら、パラメータは、同一性の割合が
、参照アミノ酸配列の全長にわたって計算され、そして参照配列のアミノ酸残基
の全数の５％までの相同性のギャップが容認されるように、設定される。

【０１０４】 特定の実施形態において、参照（問い合わせ）配列（本発明の配列）と対象配
列との間の同一性（全体的な配列整列とも言われる）は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃ
ｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））のアルゴリ
ズムに基づいたＦＡＳＴＤＢコンピュータプログラムを使用して決定される。Ｆ
ＡＳＴＤＢアミノ酸配列整列において使用される好ましいパラメータは：Ｍａｔ
ｒｉｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ
＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ
Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｗｉｎｄｏｗ
Ｓｉｚｅ＝配列長、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎ
ａｌｔｙ＝０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００、または対象アミノ酸配
列の長さ（どちらかより短い方）である。この実施形態に従って、対象配列が、
Ｎ−またはＣ−末端欠失に起因して（内部欠失のためではない）、問い合わせ配
列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされる。これは、ＦＡＳＴＤＢ
プログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する場合に、対象配列のＮ末端
切断およびＣ末端切断を考慮しないからである。Ｎ末端およびＣ末端で短縮され
ている対象配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは、問い
合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する対象残基と一致／整列しない
、対象配列のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配列の残基の数を計算するこ
とによって補正される。残基が一致／整列されているか否かの決定は、ＦＡＳＴ
ＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパーセントは、同一性パ
ーセントから差し引かれ、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって特定のパラメ
ーターを使用して計算され、最終的な同一性パーセントのスコアに到達する。こ
の最終的な同一性パーセントのスコアは、本発明の目的で使用されるものである
。問い合わせ配列と一致／整列していない対象配列のＮ末端およびＣ末端側の残
基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的のために考慮される
。すなわち、対象配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側に位置する問い
合わせ残基位置のみである。例えば、９０アミノ酸残基の対象配列は、同一性パ
ーセントを決定するために１００残基の問い合わせ配列と整列される。欠失が対
象配列のＮ末端で生じ、そしてそれゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の
１０残基の一致／整列を示さない。１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致
していないＮ末端およびＣ末端での残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）
を表し、その結果ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算される同一性パーセント
のスコアから１０％が差し引かれる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最
終的な同一性パーセントは９０％である。別の例において、９０残基の対象配列
が、１００残基の問い合わせ配列と比較される。この場合、欠失は、内部欠失で
あり、そのため問い合わせ配列と一致／整列しない対象配列のＮ末端またはＣ末
端の残基は存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パー
セントは、手動で補正されない。再び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示される、問
い合わせ配列と一致／整列しない対象配列のＮ末端およびＣ末端の外の残基位置
のみが手動で補正される。他の手動の補正は、この実施形態の目的のためにはな
されない。

【０１０５】 ＴＲ２レセプターのいくつかのアミノ酸配列は、タンパク質の構造または機能
に有意に影響することなく変更され得ることが理解される。配列におけるこのよ
うな差異が意図される場合、タンパク質において活性を決定する重要な領域が存
在することを記憶しておくべきである。従って、本発明はさらに、実質的にＴＲ
２レセプター活性を示すＴＲ２レセプターの改変体、またはＴＲ２タンパク質の
領域（例えば、以下に考察するタンパク質部分）を含むＴＲ２レセプターの改変
体を含む。このような変異体としては、欠失、挿入、逆位、反復、および型置換
（ｔｙｐｅ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）が挙げられる。どのアミノ酸の変換が
、表現型的にサイレントであるようであるかに関する指針は、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．
Ｕ．ら「Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｅｓｓａｇｅ ｉｎ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ
Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６−１３１
０（１９９０）に見出される。

【０１０６】 従って、配列番号２６、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）、図４Ａ〜４Ｃ（配列番
号５）、もしくは図７Ａ〜７Ｃ（配列番号８）のフラグメント、誘導体もしくは
アナログ、または寄託されたｃＤＮＡによってコードされるフラグメント、誘導
体もしくはアナログは、以下であり得る：（ｉ）１以上のアミノ酸残基が、保存
的または非保存的アミノ酸残基（好ましくは、保存的アミノ酸残基）で置換され
たものであり、そしてこのような置換されたアミノ酸残基は、遺伝コードによっ
てコードされるものであっても、そうでなくともよいもの、または（ｉｉ）１以
上のアミノ酸残基が、置換基を含むもの、または（ｉｉｉ）成熟ポリペプチドが
、別の化合物（例えば、ポリペプチドの半減期を増加させる化合物（例えば、ポ
リエチレングリコール））に融合されているもの、または（ｉｖ）さらなるアミ
ノ酸が、成熟ポリペプチド（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチド、またはリ
ーダー配列もしくは分泌配列、または成熟ポリペプチドまたはプロタンパク質配
列の精製のために使用される配列）に融合されているもの。このようなフラグメ
ント、誘導体およびアナログは、本明細書の教示から当業者の範囲内であるとみ
なされる。これらのフラグメント、誘導体、またはアナログをコードするポリヌ
クレオチドもまた、本発明によって包含される。

【０１０７】 特に興味がもたれるのは、別の荷電したアミノ酸および中性または負に荷電し
たアミノ酸を用いる荷電したアミノ酸の置換である。後者は、正電荷の減少した
ポリぺプチドを生じ、ＴＲ２タンパク質の特性を改善する。凝集の防止は、非常
に所望される。タンパク質の凝集は、活性の損失を生じるだけでなく、（それら
は免疫原性であり得るため）薬学的処方物を調製する際にも問題となり得る（Ｐ
ｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１−３４０（
１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−８４５（１
９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄ
ｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（１９９３）
）。

【０１０８】 アミノ酸の置換はまた、細胞表面のレセプターに対する結合の選択性を変化さ
せ得る。Ｏｓｔａｄｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３６１：２６６−２６８（１９９３）
は、ＴＮＦレセプターの２つの公知の型の１つのみに対するＴＮＦ−αの選択的
な結合を生じる特定の変異体を記載する。従って、本発明のＴＲ２レセプターは
、天然の変異または人為的操作のいずれかに由来して、１以上のアミノ酸の置換
、欠失、または付加を含み得る。

【０１０９】 示されるように、変化は、重要でない性質の変化（例えば、タンパク質の折り
畳みまたは活性に顕著には影響しない保存的アミノ酸置換）が好ましい（表Ｉを
参照のこと）。

【０１１０】

【表１】 機能に必須の本発明のＴＲ２タンパク質におけるアミノ酸は、当該分野で公知
の方法（例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（Ｃ
ｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１
０８５（１９８９）））により同定され得る。後者の手順は、分子中の各残基で
１つずつのアラニン変異を導入する。次いで、生じる変異体分子は、インビトロ
でのレセプター結合およびインビトロ増殖活性のような生物学的活性について試
験される。リガンド−レセプター結合のために重要な部位はまた、構造分析（例
えば、結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識化）によって決定され得る（Ｓｍ
ｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）および
ｄｅ Ｖｏｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９９２））。

【０１１１】 本発明のポリペプチドは、好ましくは単離された形態で提供される。「単離さ
れたポリペプチド」とは、そのネイティブな環境から取り出されたポリペプチド
を意図する。従って、組換え宿主細胞により産生され、そしてそれに含まれるポ
リペプチドは、本発明の目的について「単離されている（単離された）」と考え
られる。また、「単離されたポリペプチド」として意図されるのは組換え宿主か
ら部分的にまたは実質的に精製されたポリペプチドである。例えば、ＴＲ２レセ
プターの組換え産生されたバージョンは、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｇ
ｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８）に記載される一工程の方法により実質的
に精製され得る。

【０１１２】 本発明のポリペプチドは、本発明のポリペプチドに結合する抗体を産生するた
めの供給源として、そして当業者に周知の方法を使用するＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
の、または分子篩ゲル濾過カラムの分子量マーカーとしての用途を含むが、それ
に限定されない用途を有する。

【０１１３】 本発明のＴＲ２ポリペプチドはまた、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を阻害し得
る。以下の実施例６に考察されるように、ＴＲ２ポリペプチドは、三元の（ｔｈ
ｒｅｅ−ｗａｙ）ＭＬＲを阻害する。３元のＭＬＲを実施するためのさらなる方
法は、Ｈａｒｒｏｐら、Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：１７８６−１７９
４（１９９８）（参考として本明細書において援用される）において考察される
。

【０１１４】 本出願はまた、本明細書においてｎ¹−ｍ¹、ｎ²−ｍ²、ｎ³−ｍ³、ｎ⁴−ｍ⁴、
および／またはｎ⁵−ｍ⁵として列挙されるＴＲ２レセプターポリペプチド配列に
少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％
または９９％同一であるポリペプチドを含むタンパク質に関する。好ましい実施
形態において、本出願は、本明細書において列挙される特定のＴＲ２レセプター
Ｎ末端欠失およびＣ末端欠失のアミノ酸配列を有するポリペプチドに少なくとも
８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９
％同一である、ポリペプチドを含むタンパク質に関する。これらのポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドもまた本発明により包含される。

【０１１５】 特定の好ましい実施形態において、本発明のＴＲ２レセプタータンパク質は、
上記の融合タンパク質を含むかあるいはそれらの融合タンパク質から構成される
。ここで、このＴＲ２レセプターポリペプチドは、本明細書において、ｎ¹−ｍ¹ 、ｎ²−ｍ²、ｎ³−ｍ³、ｎ⁴−ｍ⁴、および／またはｎ⁵−ｍ⁵として記載されるポ
リペプチドである。好ましい実施形態において、本出願は、本明細書に列挙され
る特定のＮ末端欠失およびＣ末端欠失のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコ
ードするアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、
９６％、９７％、９８％または９９％同一である、核酸分子に関する。これらの
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明により包含される。

【０１１６】 上述のように、タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、タン
パク質の１つ以上の生物学的機能の喪失の改変をもたらすとしても、他の機能的
活性は依然として保持され得る。従って、ポリペプチドの完全な形態または成熟
形態を認識する抗体を誘導および／または結合する短縮化ＴＲ２ムテインの能力
は、一般的に完全なポリペプチドまたは成熟ポリペプチドの大部分よりも少ない
残基がＮ末端から除去される場合、保持される。完全なポリペプチドのＮ末端残
基を欠く特定のポリペプチドが、このような免疫学的活性を保持するか否かは、
本明細書中に記載の慣用的な方法および当該分野で公知の他の慣用的な方法によ
り容易に決定され得る。多数の欠失されたＮ末端アミノ酸残基を有するＴＲ２ム
テインがいくつかの生物学的活性または免疫学的活性を保持し得るということは
ありそうである。実際、６つ程度の少ないＴＲ２アミノ酸残基で構成されたペプ
チドはしばしば、免疫応答を誘発し得る。

【０１１７】 従って、本発明はさらに、図１Ａ〜１Ｂ（すなわち、配列番号２）に示される
ＴＲ２アミノ酸配列のアミノ末端から２７８位置のグリシン残基までの１個以上
の残基を欠失するポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドを提供する。特に、本発明は、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）の残
基ｎ¹〜２８３のアミノ酸配列を含むか、あるいはこのようなアミノ酸配列から
なるポリペプチドを提供し、ここで、ｎ¹は、２〜２７８の範囲の整数である。
これらのポリペプチドによってコードされるポリヌクレオチドはまた、本発明に
より包含される。

【０１１８】 より詳細には、本発明は、図１Ａ〜１Ｂに示されるＴＲ２配列の以下の残基の
アミノ酸を含むか、あるいはこれのアミノ酸配列からなるポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドを提供する：

【０１１９】

【数１】 本発明はまた、上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に少なく
とも、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％同一であるポリヌクレオチド配列を含むか、あるいはこのようなポリヌ
クレオチド配列からなる核酸分子に関する。本発明はまた、異種ポリヌクレオチ
ド配列に融合した上記のポリヌクレオチド配列を包含する。これらのポリヌクレ
オチド配列によりコードされるポリペプチドもまた本発明により包含される。

【０１２０】 また上述のように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、
タンパク質の１つ以上の生物学的機能の喪失を改変するとしても、他の生物学的
活性は依然として保持され得る。従って、短縮化ＴＲ２ムテインが、このポリペ
プチドの完全な形態または成熟形態を認識する抗体を誘導および／または結合す
る能力は、一般的にこの完全なポリペプチドまたは成熟ポリペプチドの大部分よ
りも少ない残基がＣ末端から除去される場合に保持される。完全なポリペプチド
のＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫学的活性を保持するか
否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の慣用
的な方法により容易に決定され得る。Ｃ末端アミノ酸残基の多数が欠失されたＴ
Ｒ２ムテインがいくつかの生物学的活性または免疫学的活性を保持し得るという
ことはありそうである。実際、６つ程度の少ないＴＲ２アミノ酸残基で構成され
たペプチドはしばしば、免疫応答を誘発し得る。

【０１２１】 従って、本発明はさらに、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）に示されるＴＲ２ポリ
ペプチドのアミノ酸配列のアカルボキシ末端から６位のアスパラギン酸残基まで
の１個以上の残基を欠失するポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドを提供する。特に、本発明は、図１Ａ〜１Ｂ（すなわ
ち、配列番号２）のアミノ酸配列の残基１−ｍ¹を含むか、あるいはこれからな
るポリペプチドを提供する。ここで、ｍ¹は、６〜２８２の範囲の整数である。
これらのポリペプチドによりコードされるポリヌクレオチドもまた本発明により
包含される。

【０１２２】 より詳細には、本発明は、図１Ａ〜１Ｂに示されるＴＲ２配列の配列の以下の
残基のアミノ酸配列を含むか、あるいはこれらのアミノ酸配列からなるポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドを提供する：

【０１２３】

【数２】 本発明はまた、上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に少なく
とも、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％同一であるポリヌクレオチド配列を含むか、あるいはこのようなポリヌ
クレオチド配列からなる核酸分子に関する。本発明はまた、異種ポリヌクレオチ
ド配列に融合した上記のポリヌクレオチド配列を包含する。これらのポリヌクレ
オチド配列によりコードされるポリペプチドはまた、本発明により包含される。

【０１２４】 本発明はまた、ＴＲ２ポリペプチドのアミノ末端およびカルボキシ末端の両方
から１つ以上のアミノ酸を欠失しているポリペプチドを提供する。これは、一般
に、図１Ａ〜１Ｂ（すなわち、配列番号２）の残基ｎ¹〜ｍ¹を有するとして記載
され得、ここでｎ¹およびｍ¹は上記のような整数である。これらのポリペプチド
によりコードされるポリヌクレオチドもまた本発明により包含される。

【０１２５】 また上述のように、タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、
このタンパク質の１つ以上の生物学的活性の喪失の改変をもたらすとしても、他
生物学的活性は依然として保持され得る。従って、短縮化ＴＲ２−ＳＶ１ムテイ
ンがこのポリペプチドの完全形態または成熟形態を認識する抗体を誘導および／
または結合する能力は、一般に、この完全ポリペプチドまたは成熟ポリペプチド
の大部分よりも少ない残基がＮ末端から除去される場合に保持される。完全なポ
リペプチドのＮ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫学的活性を
保持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知
の他の慣用的な方法により容易に決定され得る。多数のＮ末端アミノ酸残基欠失
を有するＴＲ２−ＳＶ１ムテインが、いくつかの生物学的活性または免疫学的活
性を保持し得るようである。実際、６つ程度の少ないＴＲ２−ＳＶ１アミノ酸残
基から構成されるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し得る。

【０１２６】 従って、本発明はさらに、図４Ａ〜４Ｃ（すなわち、配列番号５）に示される
ＴＲ２−ＳＶ１アミノ酸配列のアミノ末端からの１個以上の残基から、１８０位
のトレオニン残基までの１つ以上の残基を欠失するポリペプチド、およびこのよ
うなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明
は、図４Ａ〜４Ｃ（配列番号５）のアミノ酸配列の残基ｎ²−１８５を含むか、
あるいはこれらからなるポリペプチドを提供し、ここで、ｎ²は、２〜１８０の
範囲の整数であり、１８０は、ＴＲ２−ＳＶ１ポリペプチドの免疫原性活性に少
なくとも必要であると考えられる完全ＴＲ２−ＳＶ１ポリペプチドのＮ末端から
の最初の残基の位置である。これらのポリペプチドによりコードされるポリヌク
レオチドはまた本発明により包含される。

【０１２７】 より詳細には、本発明は、図４Ａ〜４Ｃに示されるＴＲ２−ＳＶ１配列の以下
の残基のアミノ酸配列を含むか、あるいはこのようなアミノ酸配列からなるポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：

【０１２８】

【数３】 。本発明はまた、上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に少な
くとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％同一であるポリヌクレオチド配列を含むか、あるいはこのようなポリヌ
クレオチド配列からなる核酸分子に関する。本発明はまた、異種ポリヌクレオチ
ド配列に融合された上記のポリヌクレオチド配列を包含する。これらのポリヌク
レオチド配列によりコードされるポリペプチドもまた本発明により包含される。

【０１２９】 また上記のように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、
このタンパク質の１つ以上の生物学的活性の喪失を改変するとしても、他の機能
的活性は依然として保持され得る。従って、短縮化ＴＲ２−ＳＶ１ムテインがこ
のポリペプチドの完全な形態もしくは成熟の形態を認識する抗体を誘導および／
または結合する能力は、一般に、この完全ポリペプチドまたは成熟ポリペプチド
の大部分よりも少ない残基がＣ末端から除去される場合に保持される。完全なポ
リペプチドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫学的活性を
保持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知
の他の慣用的な方法により容易に決定され得る。多数のＣ末端アミノ酸残基欠失
を有するＴＲ２−ＳＶ１ムテインが、いくつかの生物学的活性または免疫学的活
性を保持し得るようである。実際、６つ程度の少ないＴＲ２−ＳＶ１アミノ酸残
基から構成されるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し得る。

【０１３０】 従って、本発明はさらに、図４Ａ〜４Ｃ（配列番号５）に示されるＴＲ２−Ｓ
Ｖ１ポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ末端から６位のアスパラギン酸残
基まで１つ以上の残基を欠失するポリペプチド、およびこのようなポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、図４Ａ〜４Ｃ
（すなわち、配列番号５）の残基１〜ｍ²のアミノ酸配列を含むか、またはこの
ようなアミノ酸配列からなるポリペプチドを提供し、ここで、ｍ²は、６〜１８
４の範囲の整数である。これらのポリペプチドによりコードされるポリヌクレオ
チドもまた本発明により包含される。

【０１３１】 より詳細には、本発明は、図４Ａ〜４Ｃに示されるＴＲ２−ＳＶ１の配列の以
下の残基のアミノ酸配列を含むか、あるいはこのようなアミノ酸配列からなるポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：

【０１３２】

【数４】 。本発明はまた、上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に少な
くとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％同一であるポリヌクレオチド配列を含むか、あるいはこのようなポリヌ
クレオチド配列からなる核酸分子に関する。本発明はまた、異種ポリヌクレオチ
ド配列に融合された上記のポリヌクレオチド配列を包含する。これらのポリヌク
レオチド配列によりコードされるポリペプチドもまた、本発明により包含される
。

【０１３３】 本発明はまた、ＴＲ２−ＳＶ１ポリペプチドのアミノ末端およびカルボキシ末
端の両方から１個以上のアミノ酸欠失を有するポリペプチドを提供し、ここで、
一般に、図４Ａ〜４Ｃ（すなわち、配列番号５）の残基ｎ²〜ｍ²を有し得、ここ
でｎ²およびｍ²は上記のような整数であるとして記載され得る。これらのポリペ
プチドによりコードされるポリヌクレオチドもまた、本発明により包含される。

【０１３４】 前述のように、タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、この
タンパク質の１つ以上の生物学的活性の喪失を改変するとしても、他の生物学的
活性は依然として保持され得る。従って、短縮化ＴＲ２−ＳＶ２ムテインが、こ
のポリペプチドの完全形態または成熟形態を認識する抗体を誘導および／または
結合する能力は、一般に、この完全ポリペプチドまたは成熟ポリペプチドの大部
分よりも少ない残基がＮ末端から除去される場合に保持される。完全なポリペプ
チドのＮ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫学的活性を保持す
るか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知の他の
慣用的な方法により容易に決定され得る。多数のＮ末端アミノ酸残基欠失を有す
るＴＲ２−ＳＶ２ムテインが、ある程度の生物学的活性または免疫学的活性を保
持し得るようである。実際、６つ程度の少ないＴＲ２−ＳＶ２アミノ酸残基から
構成されるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し得る。

【０１３５】 従って、本発明はさらに、図７Ａ〜７Ｃ（すなわち、配列番号８）に示される
ＴＲ２−ＳＶ２のアミノ酸配列のアミノ末端から、１３１位のセリン残基までの
１個以上の残基を欠失するポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、図７Ａ〜７Ｃ（すな
わち、配列番号８）のアミノ酸配列の残基ｎ³−１３６を含むか、あるいはこれ
からなるポリペプチドを提供し、ここで、ｎ³は、２〜１３１の範囲の整数であ
る。これらのポリペプチドによりコードされるポリヌクレオチドもまた、本発明
により包含される。

【０１３６】 より詳細には、本発明は、図７Ａ〜７Ｃに示されるＴＲ２−ＳＶ２配列の以下
の残基のアミノ酸配列を含むか、あるいはこのようなアミノ酸配列からなるポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：

【０１３７】

【数５】 。本発明はまた、上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に少な
くとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％同一であるポリヌクレオチド配列を含むか、あるいはこのようなポリヌ
クレオチド配列からなる核酸分子に関する。本発明はまた、異種ポリヌクレオチ
ド配列に融合された上記のポリヌクレオチド配列を包含する。これらのポリヌク
レオチド配列によりコードされるポリペプチドもまた、本発明により包含される
。

【０１３８】 また上記のように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、
このタンパク質の１つ以上の生物学的機能の喪失を改変するとしても、他の生物
学的活性は依然として保持され得る。従って、短縮化ＴＲ２−ＳＶ２ムテインが
このポリペプチドの完全な形態、または成熟形態を認識する抗体を誘導および／
または結合する能力は、一般に、この完全ポリペプチドまたは成熟ポリペプチド
の大部分よりも少ない残基がＣ末端から除去される場合に保持される。完全なポ
リペプチドのＣ末端残基を欠く特定のポリペプチドがこのような免疫学的活性を
保持するか否かは、本明細書中に記載される慣用的な方法および当該分野で公知
の他の慣用的な方法により容易に決定され得る。多数のＣ末端アミノ酸残基の欠
失を有するＴＲ２−ＳＶ２ムテインが、いくつかの生物学的活性または免疫学的
活性を保持し得るようである。実際、６つ程度の少ないＴＲ２−ＳＶ２アミノ酸
残基から構成されるペプチドは、しばしば免疫応答を惹起し得る。

【０１３９】 従って、本発明はさらに、図７Ａ〜７Ｃ（すなわち、配列番号８）に示される
ＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ末端から６位のグリシ
ン残基までの１つ以上の残基を欠失するポリペプチド、およびこのようなポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、図７Ａ
〜７Ｃ（すなわち、配列番号８）の残基１〜ｍ³のアミノ酸配列を含むポリペプ
チドを提供し、ここで、ｍ³は、６〜１３５の範囲の整数である。これらのポリ
ペプチドによりコードされるポリヌクレオチドもまた、本発明により包含される
。

【０１４０】 より詳細には、本発明は、図７Ａ〜７Ｃに示すＴＲ２−ＳＶ２配列の配列のう
ちの以下の残基のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらのアミノ酸配列からなる
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：Ｍ−１〜Ｓ−１３５；
Ｍ−１〜Ｐ−１３４；Ｍ−１〜Ｒ−１３３；Ｍ−１〜Ｔ−１３２；Ｍ−１〜Ｓ−
１３１；Ｍ−１〜Ｖ−１３０；Ｍ−１〜Ｎ−１２９；Ｍ−１〜Ｒ−１２８；Ｍ−
１〜Ｗ−１２７；Ｍ−１〜Ｐ−１２６；Ｍ−１〜Ｇ−１２５；Ｍ−１〜Ｍ−１２
４；Ｍ−１〜Ｐ−１２３；Ｍ−１〜Ｌ−１２２；Ｍ−１〜Ｓ−１２１；Ｍ−１〜
Ｐ−１２０；Ｍ−１〜Ｇ−１１９；Ｍ−１〜Ｒ−１１８；Ｍ−１〜Ｐ−１１７；
Ｍ−１〜Ｃ−１１６；Ｍ−１〜Ｎ−１１５；Ｍ−１〜Ｑ−１１４；Ｍ−１〜Ｃ−
１１３；Ｍ−１〜Ｌ−１１２；Ｍ−１〜Ｔ−１１１；Ｍ−１〜Ｄ−１１０；Ｍ−
１〜Ｑ−１０９；Ｍ−１〜Ｓ−１０８；Ｍ−１〜Ｅ−１０７；Ｍ−１〜Ｔ−１０
６；Ｍ−１〜Ｇ−１０５；Ｍ−１〜Ｇ−１０４；Ｍ−１〜Ｋ−１０３；Ｍ−１〜
Ｑ−１０２；Ｍ−１〜Ｖ−１０１；Ｍ−１〜Ｒ−１００；Ｍ−１〜Ｑ−９９；Ｍ
−１〜Ｇ−９８；Ｍ−１〜Ｐ−９７；Ｍ−１〜Ｓ−９６；Ｍ−１〜Ｓ−９５、Ｍ
−１〜Ｔ−９４；Ｍ−１〜Ａ−９３；Ｍ−１〜Ｙ−９２；Ｍ−１〜Ａ−９１；Ｍ
−１〜Ｒ−９０；Ｍ−１〜Ｃ−８９；Ｍ−１〜Ａ−８８；Ｍ−１〜Ａ−８７；Ｍ
−１〜Ｃ−８６；Ｍ−１〜Ｈ−８５；Ｍ−１〜Ｄ−８４；Ｍ−１〜Ｇ−８３；Ｍ
−１〜Ｄ−８２；Ｍ−１〜Ｑ−８１；Ｍ−１〜Ｖ−８０；Ｍ−１〜Ｉ−７９；Ｍ
−１〜Ｃ−７８；Ｍ−１〜Ｆ−７７；Ｍ−１〜Ｈ−７６；Ｍ−１〜Ｇ−７５；Ｍ
−１〜Ｐ−７４；Ｍ−１〜Ｓ−７３；Ｍ−１〜Ｃ−７２；Ｍ−１〜Ｇ−７１；Ｍ
−１〜Ｃ−７０；Ｍ−１〜Ｖ−６９；Ｍ−１〜Ａ−６８；Ｍ−１〜Ｎ−６７；Ｍ
−１〜Ｅ−６６；Ｍ−１〜Ｔ−６５；Ｍ−１〜Ｒ−６４；Ｍ−１〜Ｓ−６３；Ｍ
−１〜Ｃ−６２；Ｍ−１〜Ｎ−６１；Ｍ−１〜Ｒ−６０；Ｍ−１〜Ｓ−５９；Ｍ
−１〜Ａ−５８；Ｍ−１〜Ｒ−５７；Ｍ−１〜Ｌ−５６；Ｍ−１〜Ｇ−５５；Ｍ
−１〜Ｍ−５４；Ｍ−１〜Ａ−５３；Ｍ−１〜Ｐ−５２；Ｍ−１〜Ｔ−５１；Ｍ
−１〜Ｗ−５０；Ｍ−１〜Ｓ−４９；Ｍ−１〜Ｓ−４８；Ｍ−１〜Ｐ−４７；Ｍ
−１〜Ｓ−４６；Ｍ−１〜Ｌ−４５；Ｍ−１〜Ｐ−４４；Ｍ−１〜Ｐ−４３；Ｍ
−１〜Ｖ−４２；Ｍ−１〜Ｈ−４１；Ｍ−１〜Ｌ−４０；Ｍ−１〜Ｇ−３９；Ｍ
−１〜Ｐ−３８；Ｍ−１〜Ｃ−３７；Ｍ−１〜Ｗ−３６；Ｍ−１〜Ｇ−３５；Ｍ
−１〜Ｃ−３４；Ｍ−１〜Ａ−３３；Ｍ−１〜Ｌ−３２；Ｍ−１〜Ｖ−３１；Ｍ
−１〜Ａ−３０；Ｍ−１〜Ｄ−２９；Ｍ−１〜Ｖ−２８；Ｍ−１〜Ｐ−２７；Ｍ
−１〜Ｗ−２６；Ｍ−１〜Ｐ−２５；Ｍ−１〜Ｓ−２４；Ｍ−１〜Ｓ−２３；Ｍ
−１〜Ｇ−２２；Ｍ−１〜Ｐ−２１；Ｍ−１〜Ｒ−２０；Ｍ−１〜Ｇ−１９；Ｍ
−１〜Ａ−１８；Ｍ−１〜Ｌ−１７；Ｍ−１〜Ｓ−１６；Ｍ−１〜Ｆ−１５；Ｍ
−１〜Ｇ−１４；Ｍ−１〜Ｑ−１３；Ｍ−１〜Ｓ−１２；Ｍ−１〜Ｌ−１１；Ｍ
−１〜Ｗ−１０；Ｍ−１〜Ｖ−９；Ｍ−１〜Ｌ−８；Ｍ−１〜Ｈ−７；およびＭ
−１〜Ｇ−６。本発明はまた、上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、
９７％、９８％または９９％同一なポリヌクレオチド配列を含むかまたはこのポ
リヌクレオチド配列からなる核酸分子に関する。本発明はまた、異種ポリヌクレ
オチド配列に融合された上記のポリヌクレオチド配列を包含する。これらのポリ
ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドもまた本発明によって包含
される。

【０１４１】 本発明はまた、１以上のアミノ酸がＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドのアミノ末端
およびカルボキシル末端の両方から欠失されたポリペプチドを提供し、これは一
般に、図７Ａ〜７Ｃ（すなわち、配列番号８）の残基ｎ³〜ｍ³を有するように記
載され得、ここで、ｎ³およびｍ³は、上記に記載される通りの整数である。これ
らのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明によって包含され
る。

【０１４２】 さらに、本発明はさらに、配列番号２（図１Ａ〜１Ｂ）に示される、１５９位
のグリシン残基までのＴＲ２アミノ酸配列の推定の細胞外ドメインのアミノ末端
から１以上の残基が欠失したポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、配列番号２の残基
ｎ⁴〜１６４のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらのアミノ酸配列からなるポ
リペプチドを提供し、ここで、ｎ⁴は、１〜１５９の範囲の整数である。これら
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明によって包含される
。

【０１４３】 より詳細には、本発明は、配列番号２（これは、図１Ａ〜１Ｂにおけるアミノ
酸残基が、Ｎ末端からＣ末端へと、１〜２８３まで連続して番号が付けられてい
るが、配列番号２におけるアミノ酸残基が推定シグナルペプチドの位置を反映し
て−３６〜２４７まで連続して番号が付けられていることを除いて、図１Ａ〜１
Ｂに示されるものと同一である）に示されるＴＲ２アミノ酸配列のうちの以下の
残基のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらのアミノ酸配列からなるポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドを提供する：Ｐ−１〜Ｈ−１６４；Ａ−２〜Ｈ
−１６４；Ｌ−３〜Ｈ−１６４；Ｐ−４〜Ｈ−１６４；Ｓ−５〜Ｈ−１６４；Ｃ
−６〜Ｈ−１６４；Ｋ−７〜Ｈ−１６４；Ｅ−８〜Ｈ−１６４；Ｄ−９〜Ｈ−１
６４；Ｅ−１０〜Ｈ−１６４；Ｙ−１１〜Ｈ−１６４；Ｐ−１２〜Ｈ−１６４；
Ｖ−１３〜Ｈ−１６４；Ｇ−１４〜Ｈ−１６４；Ｓ−１５〜Ｈ−１６４；Ｅ−１
６〜Ｈ−１６４；Ｃ−１７〜Ｈ−１６４；Ｃ−１８〜Ｈ−１６４；Ｐ−１９〜Ｈ
−１６４；Ｋ−２０〜Ｈ−１６４；Ｃ−２１〜Ｈ−１６４；Ｓ−２２〜Ｈ−１６
４；Ｐ−２３〜Ｈ−１６４；Ｇ−２４〜Ｈ−１６４；Ｙ−２５〜Ｈ−１６４；Ｒ
−２６〜Ｈ−１６４；Ｖ−２７〜Ｈ−１６４；Ｋ−２８〜Ｈ−１６４；Ｅ−２９
〜Ｈ−１６４；Ａ−３０〜Ｈ−１６４；Ｃ−３１〜Ｈ−１６４；Ｇ−３２〜Ｈ−
１６４；Ｅ−３３〜Ｈ−１６４；Ｌ−３４〜Ｈ−１６４；Ｔ−３５〜Ｈ−１６４
；Ｇ−３６〜Ｈ−１６４；Ｔ−３７〜Ｈ−１６４；Ｖ−３８〜Ｈ−１６４；Ｃ−
３９〜Ｈ−１６４；Ｅ−４０〜Ｈ−１６４；Ｐ−４１〜Ｈ−１６４；Ｃ−４２〜
Ｈ−１６４；Ｐ−４３〜Ｈ−１６４；Ｐ−４４〜Ｈ−１６４；Ｇ−４５〜Ｈ−１
６４；Ｔ−４６〜Ｈ−１６４；Ｙ−４７〜Ｈ−１６４；Ｉ−４８〜Ｈ−１６４；
Ａ−４９〜Ｈ−１６４；Ｈ−５０〜Ｈ−１６４；Ｌ−５１〜Ｈ−１６４；Ｎ−５
２〜Ｈ−１６４；Ｇ−５３〜Ｈ−１６４；Ｌ−５４〜Ｈ−１６４；Ｓ−５５〜Ｈ
−１６４；Ｋ−５６〜Ｈ−１６４；Ｃ−５７〜Ｈ−１６４；Ｌ−５８〜Ｈ−１６
４；Ｑ−５９〜Ｈ−１６４；Ｃ−６０〜Ｈ−１６４；Ｑ−６１〜Ｈ−１６４；Ｍ
−６２〜Ｈ−１６４；Ｃ−６３〜Ｈ−１６４；Ｄ−６４〜Ｈ−１６４；Ｐ−６５
〜Ｈ−１６４；Ａ−６６〜Ｈ−１６４；Ｍ−６７〜Ｈ−１６４；Ｇ−６８〜Ｈ−
１６４；Ｌ−６９〜Ｈ−１６４；Ｒ−７０〜Ｈ−１６４；Ａ−７１〜Ｈ−１６４
；Ｓ−７２〜Ｈ−１６４；Ｒ−７３〜Ｈ−１６４；Ｎ−７４〜Ｈ−１６４；Ｃ−
７５〜Ｈ−１６４；Ｓ−７６〜Ｈ−１６４；Ｒ−７７〜Ｈ−１６４；Ｔ−７８〜
Ｈ−１６４；Ｅ−７９〜Ｈ−１６４；Ｎ−８０〜Ｈ−１６４；Ａ−８１〜Ｈ−１
６４；Ｖ−８２〜Ｈ−１６４；Ｃ−８３〜Ｈ−１６４；Ｇ−８４〜Ｈ−１６４；
Ｃ−８５〜Ｈ−１６４；Ｓ−８６〜Ｈ−１６４；Ｐ−８７〜Ｈ−１６４；Ｇ−８
８〜Ｈ−１６４；Ｈ−８９〜Ｈ−１６４；Ｆ−９０〜Ｈ−１６４；Ｃ−９１〜Ｈ
−１６４；Ｉ−９２〜Ｈ−１６４；Ｖ−９３〜Ｈ−１６４；Ｑ−９４〜Ｈ−１６
４；Ｄ−９５〜Ｈ−１６４；Ｇ−９６〜Ｈ−１６４；Ｄ−９７〜Ｈ−１６４；Ｈ
−９８〜Ｈ−１６４；Ｃ−９９〜Ｈ−１６４；Ａ−１００〜Ｈ−１６４；Ａ−１
０１〜Ｈ−１６４；Ｃ−１０２〜Ｈ−１６４；Ｒ−１０３〜Ｈ−１６４；Ａ−１
０４〜Ｈ−１６４；Ｙ−１０５〜Ｈ−１６４；Ａ−１０６〜Ｈ−１６４；Ｔ−１
０７〜Ｈ−１６４；Ｓ−１０８〜Ｈ−１６４；Ｓ−１０９〜Ｈ−１６４；Ｐ−１
１０〜Ｈ−１６４；Ｇ−１１１〜Ｈ−１６４；Ｑ−１１２〜Ｈ−１６４；Ｒ−１
１３〜Ｈ−１６４；Ｖ−１１４〜Ｈ−１６４；Ｑ−１１５〜Ｈ−１６４；Ｋ−１
１６〜Ｈ−１６４；Ｇ−１１７〜Ｈ−１６４；Ｇ−１１８〜Ｈ−１６４；Ｔ−１
１９〜Ｈ−１６４；Ｅ−１２０〜Ｈ−１６４；Ｓ−１２１〜Ｈ−１６４；Ｑ−１
２２〜Ｈ−１６４；Ｄ−１２３〜Ｈ−１６４；Ｔ−１２４〜Ｈ−１６４；Ｌ−１
２５〜Ｈ−１６４；Ｃ−１２６〜Ｈ−１６４；Ｑ−１２７〜Ｈ−１６４；Ｎ−１
２８〜Ｈ−１６４；Ｃ−１２９〜Ｈ−１６４；Ｐ−１３０〜Ｈ−１６４；Ｐ−１
３１〜Ｈ−１６４；Ｇ−１３２〜Ｈ−１６４；Ｔ−１３３〜Ｈ−１６４；Ｆ−１
３４〜Ｈ−１６４；Ｓ−１３５〜Ｈ−１６４；Ｐ−１３６〜Ｈ−１６４；Ｎ−１
３７〜Ｈ−１６４；Ｇ−１３８〜Ｈ−１６４；Ｔ−１３９〜Ｈ−１６４；Ｌ−１
４０〜Ｈ−１６４；Ｅ−１４１〜Ｈ−１６４；Ｅ−１４２〜Ｈ−１６４；Ｃ−１
４３〜Ｈ−１６４；Ｑ−１４４〜Ｈ−１６４；Ｈ−１４５〜Ｈ−１６４；Ｑ−１
４６〜Ｈ−１６４；Ｔ−１４７〜Ｈ−１６４；Ｋ−１４８〜Ｈ−１６４；Ｃ−１
４９〜Ｈ−１６４；Ｓ−１５０〜Ｈ−１６４；Ｗ−１５１〜Ｈ−１６４；Ｌ−１
５２〜Ｈ−１６４；Ｖ−１５３〜Ｈ−１６４；Ｔ−１５４〜Ｈ−１６４；Ｋ−１
５５〜Ｈ−１６４；Ａ−１５６〜Ｈ−１６４；Ｇ−１５７〜Ｈ−１６４；Ａ−１
５８〜Ｈ−１６４；およびＧ−１５９〜Ｈ−１６４。本発明はまた、上記のポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％
、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なポリヌ
クレオチド配列を含むかまたはこのポリヌクレオチド配列からなる核酸分子に関
する。本発明はまた、異種ポリヌクレオチド配列に融合された上記のポリヌクレ
オチド配列を包含する。これらのポリヌクレオチド配列によってコードされるポ
リペプチドもまた本発明によって包含される。

【０１４４】 本発明はさらに、配列番号２における６位のシステイン残基までの、配列番号
２（図１Ａ〜１Ｂ）に示されるＴＲ２のアミノ酸配列の推定の細胞外ドメインの
カルボキシ末端から１以上の残基が欠失したポリペプチド、およびこのようなポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、配
列番号２（図１Ａ〜１Ｂ）の１〜ｍ⁴の残基のアミノ酸配列を含むかあるいはこ
れらのアミノ酸配列からなるポリペプチドを提供し、ここで、ｍ⁴は６〜１６４
の範囲の整数である。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもま
た本発明によって包含される。

【０１４５】 より詳細には、本発明は、配列番号２（図１Ａ〜１Ｂにおけるアミノ酸残基が
、Ｎ末端からＣ末端へと、１〜２８３まで連続して番号が付けられているが、配
列番号２におけるアミノ酸残基が推定シグナルペプチドの位置を反映して−３６
〜２４７まで連続して番号が付けられていることを除いて、図１Ａ〜１Ｂに示さ
れる配列と同一である）に示すＴＲ２配列の配列のうちの以下の残基のアミノ酸
配列を含むかあるいはこれらのアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドを提供する：Ｐ−１〜Ｈ−１６４；Ｐ−１〜Ｓ−１６３；Ｐ−
１〜Ｓ−１６２；Ｐ−１〜Ｓ−１６１；Ｐ−１〜Ｔ−１６０；Ｐ−１〜Ｇ−１５
９；Ｐ−１〜Ａ−１５８；Ｐ−１〜Ｇ−１５７；Ｐ−１〜Ａ−１５６；Ｐ−１〜
Ｋ−１５５；Ｐ−１〜Ｔ−１５４；Ｐ−１〜Ｖ−１５３；Ｐ−１〜Ｌ−１５２；
Ｐ−１〜Ｗ−１５１；Ｐ−１〜Ｓ−１５０；Ｐ−１〜Ｃ−１４９；Ｐ−１〜Ｋ−
１４８；Ｐ−１〜Ｔ−１４７；Ｐ−１〜Ｑ−１４６；Ｐ−１〜Ｈ−１４５；Ｐ−
１〜Ｑ−１４４；Ｐ−１〜Ｃ−１４３；Ｐ−１〜Ｅ−１４２；Ｐ−１〜Ｅ−１４
１；Ｐ−１〜Ｌ−１４０；Ｐ−１〜Ｔ−１３９；Ｐ−１〜Ｇ−１３８；Ｐ−１〜
Ｎ−１３７；Ｐ−１〜Ｐ−１３６；Ｐ−１〜Ｓ−１３５；Ｐ−１〜Ｆ−１３４；
Ｐ−１〜Ｔ−１３３；Ｐ−１〜Ｇ−１３２；Ｐ−１〜Ｐ−１３１；Ｐ−１〜Ｐ−
１３０；Ｐ−１〜Ｃ−１２９；Ｐ−１〜Ｎ−１２８；Ｐ−１〜Ｑ−１２７；Ｐ−
１〜Ｃ−１２６；Ｐ−１〜Ｌ−１２５；Ｐ−１〜Ｔ−１２４；Ｐ−１〜Ｄ−１２
３；Ｐ−１〜Ｑ−１２２；Ｐ−１〜Ｓ−１２１；Ｐ−１〜Ｅ−１２０；Ｐ−１〜
Ｔ−１１９；Ｐ−１〜Ｇ−１１８；Ｐ−１〜Ｇ−１１７；Ｐ−１〜Ｋ−１１６；
Ｐ−１〜Ｑ−１１５；Ｐ−１〜Ｖ−１１４；Ｐ−１〜Ｒ−１１３；Ｐ−１〜Ｑ−
１１２；Ｐ−１〜Ｇ−１１１；Ｐ−１〜Ｑ−１１５；Ｐ−１〜Ｐ−１１０；Ｐ−
１〜Ｓ−１０９；Ｐ−１〜Ｓ−１０８；Ｐ−１〜Ｔ−１０７；Ｐ−１〜Ａ−１０
６；Ｐ−１〜Ｙ−１０５；Ｐ−１〜Ａ−１０４；Ｐ−１〜Ｒ−１０３；Ｐ−１〜
Ｃ−１０２；Ｐ−１〜Ａ−１０１；Ｐ−１〜Ａ−１００；Ｐ−１〜Ｃ−９９；Ｐ
−１〜Ｈ−９８；Ｐ−１〜Ｄ−９７；Ｐ−１〜Ｇ−９６；Ｐ−１〜Ｄ−９５；Ｐ
−１〜Ｑ−９４；Ｐ−１〜Ｖ−９３；Ｐ−１〜Ｉ−９２；Ｐ−１〜Ｃ−９１；Ｐ
−１〜Ｆ−９０；Ｐ−１〜Ｈ−８９；Ｐ−１〜Ｇ−８８；Ｐ−１〜Ｐ−８７；Ｐ
−１〜Ｓ−８６；Ｐ−１〜Ｃ−８５；Ｐ−１〜Ｇ−８４；Ｐ−１〜Ｃ−８３；Ｐ
−１〜Ｖ−８２；Ｐ−１〜Ａ−８１；Ｐ−１〜Ｎ−８０；Ｐ−１〜Ｅ−７９；Ｐ
−１〜Ｔ−７８；Ｐ−１〜Ｒ−７７；Ｐ−１〜Ｓ−７６；Ｐ−１〜Ｃ−７５；Ｐ
−１〜Ｎ−７４；Ｐ−１〜Ｒ−７３；Ｐ−１〜Ｓ−７２；Ｐ−１〜Ａ−７１；Ｐ
−１〜Ｒ−７０；Ｐ−１〜Ｌ−６９；Ｐ−１〜Ｇ−６８；Ｐ−１〜Ｍ−６７；Ｐ
−１〜Ａ−６６；Ｐ−１〜Ｐ−６５；Ｐ−１〜Ｄ−６４；Ｐ−１〜Ｃ−６３；Ｐ
−１〜Ｍ−６２；Ｐ−１〜Ｑ−６１；Ｐ−１〜Ｃ−６０；Ｐ−１〜Ｑ−５９；Ｐ
−１〜Ｌ−５８；Ｐ−１〜Ｃ−５７；Ｐ−１〜Ｋ−５６；Ｐ−１〜Ｓ−５５；Ｐ
−１〜Ｌ−５４；Ｐ−１〜Ｇ−５３；Ｐ−１〜Ｎ−５２；Ｐ−１〜Ｌ−５１；Ｐ
−１〜Ｈ−５０；Ｐ−１〜Ａ−４９；Ｐ−１〜Ｉ−４８；Ｐ−１〜Ｙ−４７；Ｐ
−１〜Ｔ−４６；Ｐ−１〜Ｇ−４５；Ｐ−１〜Ｐ−４４；Ｐ−１〜Ｐ−４３；Ｐ
−１〜Ｃ−４２；Ｐ−１〜Ｐ−４１；Ｐ−１〜Ｅ−４０；Ｐ−１〜Ｃ−３９；Ｐ
−１〜Ｖ−３８；Ｐ−１〜Ｔ−３７；Ｐ−１〜Ｇ−３６；Ｐ−１〜Ｔ−３５；Ｐ
−１〜Ｌ−３４；Ｐ−１〜Ｅ−３３；Ｐ−１〜Ｇ−３２；Ｐ−１〜Ｃ−３１；Ｐ
−１〜Ａ−３０；Ｐ−１〜Ｅ−２９；Ｐ−１〜Ｋ−２８；Ｐ−１〜Ｖ−２７；Ｐ
−１〜Ｒ−２６；Ｐ−１〜Ｙ−２５；Ｐ−１〜Ｇ−２４；Ｐ−１〜Ｐ−２３；Ｐ
−１〜Ｓ−２２；Ｐ−１〜Ｃ−２１；Ｐ−１〜Ｋ−２０；Ｐ−１〜Ｐ−１９；Ｐ
−１〜Ｃ−１８；Ｐ−１〜Ｃ−１７；Ｐ−１〜Ｅ−１６；Ｐ−１〜Ｓ−１５；Ｐ
−１〜Ｇ−１４；Ｐ−１〜Ｖ−１３；Ｐ−１〜Ｐ−１２；Ｐ−１〜Ｙ−１１；Ｐ
−１〜Ｅ−１０；Ｐ−１〜Ｄ−９；Ｐ−１〜Ｅ−８；Ｐ−１〜Ｋ−７；およびＰ
−１〜Ｃ−６。本発明はまた、上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、
９７％、９８％または９９％同一であるポリヌクレオチド配列を含むかあるいは
このポリヌクレオチド配列からなる核酸分子に関する。本発明はまた、異種ポリ
ヌクレオチド配列に融合された上記のポリヌクレオチド配列を包含する。これら
のポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドもまた本発明によっ
て包含される。

【０１４６】 本発明はまた、配列番号２（図１Ａ〜１Ｂ）の残基ｎ⁴〜ｍ⁴を有すると一般に
記載され得る、可溶性ＴＲ２ポリペプチドのアミノ末端およびカルボキシル末端
の両方から１以上のアミノ酸が欠失されたポリペプチドを提供し、ここで、ｎ⁴
およびｍ⁴は、上記の通りの整数である。これらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドもまた本発明によって包含される。

【０１４７】 さらに、本発明はさらに、１４４位のトレオニン残基までの、配列番号５（図
４Ａ〜４Ｃ）に示されるＴＲ２−ＳＶ１アミノ酸配列の推定の細胞外ドメインの
アミノ末端からの１以上の残基が欠失したポリペプチド、ならびにこのようなポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、配
列番号５のｎ⁵〜１４９の残基のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらのアミノ
酸配列からなるポリペプチドを提供し、ここで、ｎ⁵は、１〜１４４の範囲の整
数である。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明に
よって包含される。

【０１４８】 より詳細には、本発明は、配列番号５（これは、図４Ａ〜４Ｃにおけるアミノ
酸残基が、Ｎ末端からＣ末端へと、１〜１８５まで連続して番号が付けられてい
るが、配列番号５におけるアミノ酸残基が推定シグナルペプチドの位置を反映し
て−３６〜１４９まで連続して番号が付けられていることを除いて、図４Ａ〜４
Ｃに示されるものと同一である）に示されるＴＲ２−ＳＶ１アミノ酸配列のうち
の以下の残基のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらのアミノ酸配列からなるポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：Ｐ−１〜Ａ−１４９；Ａ
−２〜Ａ−１４９；Ｌ−３〜Ａ−１４９；Ｐ−４〜Ａ−１４９；Ｓ−５〜Ａ−１
４９；Ｃ−６〜Ａ−１４９；Ｋ−７〜Ａ−１４９；Ｅ−８〜Ａ−１４９；Ｄ−９
〜Ａ−１４９；Ｅ−１０〜Ａ−１４９；Ｙ−１１〜Ａ−１４９；Ｐ−１２〜Ａ−
１４９；Ｖ−１３〜Ａ−１４９；Ｇ−１４〜Ａ−１４９；Ｓ−１５〜Ａ−１４９
；Ｅ−１６〜Ａ−１４９；Ｃ−１７〜Ａ−１４９；Ｃ−１８〜Ａ−１４９；Ｐ−
１９〜Ａ−１４９；Ｋ−２０〜Ａ−１４９；Ｃ−２１〜Ａ−１４９；Ｓ−２２〜
Ａ−１４９；Ｐ−２３〜Ａ−１４９；Ｇ−２４〜Ａ−１４９；Ｙ−２５〜Ａ−１
４９；Ｒ−２６〜Ａ−１４９；Ｖ−２７〜Ａ−１４９；Ｋ−２８〜Ａ−１４９；
Ｅ−２９〜Ａ−１４９；Ａ−３０〜Ａ−１４９；Ｃ−３１〜Ａ−１４９；Ｇ−３
２〜Ａ−１４９；Ｅ−３３〜Ａ−１４９；Ｌ−３４〜Ａ−１４９；Ｔ−３５〜Ａ
−１４９；Ｇ−３６〜Ａ−１４９；Ｔ−３７〜Ａ−１４９；Ｖ−３８〜Ａ−１４
９；Ｃ−３９〜Ａ−１４９；Ｅ−４０〜Ａ−１４９；Ｐ−４１〜Ａ−１４９；Ｃ
−４２〜Ａ−１４９；Ｐ−４３〜Ａ−１４９；Ｐ−４４〜Ａ−１４９；Ｇ−４５
〜Ａ−１４９；Ｔ−４６〜Ａ−１４９；Ｙ−４７〜Ａ−１４９；Ｉ−４８〜Ａ−
１４９；Ａ−４９〜Ａ−１４９；Ｈ−５０〜Ａ−１４９；Ｌ−５１〜Ａ−１４９
；Ｎ−５２〜Ａ−１４９；Ｇ−５３〜Ａ−１４９；Ｌ−５４〜Ａ−１４９；Ｓ−
５５〜Ａ−１４９；Ｋ−５６〜Ａ−１４９；Ｃ−５７〜Ａ−１４９；Ｌ−５８〜
Ａ−１４９；Ｑ−５９〜Ａ−１４９；Ｃ−６０〜Ａ−１４９；Ｑ−６１〜Ａ−１
４９；Ｍ−６２〜Ａ−１４９；Ｃ−６３〜Ａ−１４９；Ｄ−６４〜Ａ−１４９；
Ｐ−６５〜Ａ−１４９；Ｄ−６６〜Ａ−１４９；Ｉ−６７〜Ａ−１４９；Ｇ−６
８〜Ａ−１４９；Ｓ−６９〜Ａ−１４９；Ｐ−７０〜Ａ−１４９；Ｃ−７１〜Ａ
−１４９；Ｄ−７２〜Ａ−１４９；Ｌ−７３〜Ａ−１４９；Ｒ−７４〜Ａ−１４
９；Ｇ−７５〜Ａ−１４９；Ｒ−７６〜Ａ−１４９；Ｇ−７７〜Ａ−１４９；Ｈ
−７８〜Ａ−１４９；Ｌ−７９〜Ａ−１４９；Ｅ−８０〜Ａ−１４９；Ａ−８１
〜Ａ−１４９；Ｇ−８２〜Ａ−１４９；Ａ−８３〜Ａ−１４９；Ｈ−８４〜Ａ−
１４９；Ｌ−８５〜Ａ−１４９；Ｓ−８６〜Ａ−１４９；Ｐ−８７〜Ａ−１４９
；Ｇ−８８〜Ａ−１４９；Ｒ−８９〜Ａ−１４９；Ｑ−９０〜Ａ−１４９；Ｋ−
９１〜Ａ−１４９；Ｇ−９２〜Ａ−１４９；Ｅ−９３〜Ａ−１４９；Ｐ−９４〜
Ａ−１４９；Ｄ−９５〜Ａ−１４９；Ｐ−９６〜Ａ−１４９；Ｅ−９７〜Ａ−１
４９；Ｖ−９８〜Ａ−１４９；Ａ−９９〜Ａ−１４９：Ｆ−１００〜Ａ−１４９
；Ｅ−１０１〜Ａ−１４９；Ｓ−１０２〜Ａ−１４９；Ｌ−１０３〜Ａ−１４９
；Ｓ−１０４〜Ａ−１４９；Ａ−１０５〜Ａ−１４９；Ｅ−１０６〜Ａ−１４９
；Ｐ−１０７〜Ａ−１４９；Ｖ−１０８〜Ａ−１４９；Ｈ−１０９〜Ａ−１４９
；Ａ−１１０〜Ａ−１４９；Ａ−１１１〜Ａ−１４９：Ｎ−１１２〜Ａ−１４９
；Ｇ−１１３〜Ａ−１４９；Ｓ−１１４〜Ａ−１４９：Ｖ−１１５〜Ａ−１４９
；Ｐ−１１６〜Ａ−１４９；Ｌ−１１７〜Ａ−１４９；Ｅ−１１８〜Ａ−１４９
；Ｐ−１１９〜Ａ−１４９；Ｈ−１２０〜Ａ−１４９；Ａ−１２１〜Ａ−１４９
；Ｒ−１２２〜Ａ−１４９；Ｌ−１２３〜Ａ−１４９；Ｓ−１２４〜Ａ−１４９
；Ｍ−１２５〜Ａ−１４９；Ａ−１２６〜Ａ−１４９；Ｓ−１２７〜Ａ−１４９
；Ａ−１２８〜Ａ−１４９；Ｐ−１２９〜Ａ−１４９；Ｃ−１３０〜Ａ−１４９
；Ｇ−１３１〜Ａ−１４９；Ｑ−１３２〜Ａ−１４９；Ａ−１３３〜Ａ−１４９
；Ｇ−１３４〜Ａ−１４９；Ｌ−１３５〜Ａ−１４９；Ｈ−１３６〜Ａ−１４９
；Ｌ−１３７〜Ａ−１４９；Ｒ−１３８〜Ａ−１４９：Ｄ−１３９〜Ａ−１４９
：Ｒ−１４０〜Ａ−１４９；Ａ−１４１〜Ａ−１４９；Ｄ−１４２〜Ａ−１４９
；Ｇ−１４３〜Ａ−１４９；およびＴ−１４４〜Ａ−１４９。本発明はまた、上
記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％
、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一
なポリヌクレオチド配列を含むかまたはこのポリヌクレオチド配列からなる核酸
分子に関する。本発明はまた、異種ポリヌクレオチド配列に融合された上記のポ
リヌクレオチド配列を包含する。これらのポリヌクレオチド配列によってコード
されるポリペプチドもまた本発明によって包含される。

【０１４９】 本発明はさらに、配列番号５における６位のシステイン残基までの、配列番号
５（図４Ａ〜４Ｃ）に示されるＴＲ２−ＳＶ１のアミノ酸配列の推定の細胞外ド
メインのカルボキシ末端から１以上の残基が欠失されたポリペプチド、およびこ
のようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本
発明は、配列番号５（図４Ａ〜４Ｃ）の１−ｍ⁵残基のアミノ酸配列を含むかま
たはこのアミノ酸配列からなるポリペプチドを提供し、ここで、ｍ⁵は、６〜１
４９の範囲の整数である。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
もまた本発明によって包含される。

【０１５０】 より詳細には、本発明は、配列番号５（これは、図４Ａ〜４Ｃにおけるアミノ
酸残基が、Ｎ末端からＣ末端へと、１〜１８５まで連続して番号が付けられてい
るが、配列番号５におけるアミノ酸残基が推定シグナルペプチドの位置を反映し
て−３６〜１４９まで連続して番号が付けられていることを除いて、図４Ａ〜４
Ｃに示される配列と同一である）に示されるＴＲ２−ＳＶ１配列の配列のうちの
以下の残基のアミノ酸配列を含むかあるいはこれらのアミノ酸配列からなるポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：Ｐ−１〜Ａ−１４９；Ｐ−
１〜Ｒ−１４８；Ｐ−１〜Ｇ−１４７；Ｐ−１〜Ｇ−１４６；Ｐ−１〜Ｐ−１４
５；Ｐ−１〜Ｔ−１４４；Ｐ−１〜Ｇ−１４３；Ｐ−１〜Ｄ−１４２；Ｐ−１〜
Ａ−１４１；Ｐ−１〜Ｒ−１４０；Ｐ−１〜Ｄ−１３９；Ｐ−１〜Ｒ−１３８；
Ｐ−１〜Ｌ−１３７；Ｐ−１〜Ｈ−１３６；Ｐ−１〜Ｌ−１３５；Ｐ−１〜Ｇ−
１３４；Ｐ−１〜Ａ−１３３；Ｐ−１〜Ｑ−１３２；Ｐ−１〜Ｇ−１３１；Ｐ−
１〜Ｃ−１３０；Ｐ−１〜Ｐ−１２９；Ｐ−１〜Ａ−１２８；Ｐ−１〜Ｓ−１２
７；Ｐ−１〜Ａ−１２６；Ｐ−１〜Ｍ−１２５；Ｐ−１〜Ｓ−１２４；Ｐ−１〜
Ｌ−１２３；Ｐ−１〜Ｒ−１２２；Ｐ−１〜Ａ−１２１；Ｐ−１〜Ｈ−１２０；
Ｐ−１〜Ｐ−１１９；Ｐ−１〜Ｅ−１１８；Ｐ−１〜Ｌ−１１７；Ｐ−１〜Ｐ−
１１６；Ｐ−１〜Ｖ−１１５；Ｐ−１〜Ｓ−１１４；Ｐ−１〜Ｇ−１１３；Ｐ−
１〜Ｎ−１１２；Ｐ−１〜Ａ−１１１；Ｐ−１〜Ａ−１１０；Ｐ−１〜Ｈ−１０
９；Ｐ−１〜Ｖ−１０８；Ｐ−１〜Ｐ−１０７；Ｐ−１〜Ｅ−１０６；Ｐ−１〜
Ａ−１０５；Ｐ−１〜Ｓ−１０４；Ｐ−１〜Ｌ−１０３；Ｐ−１〜Ｓ−１０２；
Ｐ−１〜Ｅ−１０１；Ｐ−１〜Ｆ−１００；Ｐ−１〜Ａ−９９；Ｐ−１〜Ｖ−９
８；Ｐ−１〜Ｅ−９７；Ｐ−１〜Ｐ−９６；Ｐ−１〜Ｄ−９５；Ｐ−１〜Ｐ−９
４；Ｐ−１〜Ｅ−９３；Ｐ−１〜Ｇ−９２；Ｐ−１〜Ｋ−９１；Ｐ−１〜Ｑ−９
０；Ｐ−１〜Ｒ−８９；Ｐ−１〜Ｇ−８８；Ｐ−１〜Ｐ−８７；Ｐ−１〜Ｓ−８
６；Ｐ−１〜Ｌ−８５；Ｐ−１〜Ｈ−８４；Ｐ−１〜Ａ−８３；Ｐ−１〜Ｇ−８
２；Ｐ−１〜Ａ−８１；Ｐ−１〜Ｅ−８０；Ｐ−１〜Ｌ−７９；Ｐ−１〜Ｈ−７
８；Ｐ−１〜Ｇ−７７；Ｐ−１〜Ｒ−７６；Ｐ−１〜Ｇ−７５；Ｐ−１〜Ｒ−７
４；Ｐ−１〜Ｌ−７３；Ｐ−１〜Ｄ−７２；Ｂ−１〜Ｃ−７１；Ｐ−１〜Ｐ−７
０；Ｐ−１〜Ｓ−６９；Ｐ−１〜Ｇ−６８；Ｐ−１〜Ｉ−６７；Ｐ−１〜Ｄ−６
６；Ｐ−１〜Ｐ−６５；Ｐ−１〜Ｄ−６４；Ｐ−１〜Ｃ−６３；Ｐ−１〜Ｍ−６
２；Ｐ−１〜Ｑ−６１；Ｐ−１〜Ｃ−６０；Ｐ−１〜Ｑ−５９；Ｐ−１〜Ｌ−５
８；Ｐ−１〜Ｃ−５７；Ｐ−１〜Ｋ−５６；Ｐ−１〜Ｓ−５５；Ｐ−１〜Ｌ−５
４；Ｐ−１〜Ｇ−５３；Ｐ−１〜Ｎ−５２；Ｐ−１〜Ｌ−５１；Ｐ−１〜Ｈ−５
０；Ｐ−１〜Ａ−４９；Ｐ−１〜Ｉ−４８；Ｐ−１〜Ｙ−４７；Ｐ−１〜Ｔ−４
６；Ｐ−１〜Ｇ−４５；Ｐ−１〜Ｐ−４４；Ｐ−１〜Ｐ−４３；Ｐ−１〜Ｃ−４
２；Ｐ−１〜Ｐ−４１；Ｐ−１〜Ｅ−４０；Ｐ−１〜Ｃ−３９；Ｐ−１〜Ｖ−３
８；Ｐ−１〜Ｔ−３７；Ｐ−１〜Ｇ−３６；Ｐ−１〜Ｔ−３５；Ｐ−１〜Ｌ−３
４；Ｐ−１〜Ｅ−３３；Ｐ−１〜Ｇ−３２；Ｐ−１〜Ｃ−３１；Ｐ−１〜Ａ−３
０；Ｐ−１〜Ｅ−２９；Ｐ−１〜Ｋ−２８；Ｐ−１〜Ｖ−２７；Ｐ−１〜Ｒ−２
６；Ｐ−１〜Ｙ−２５；Ｐ−１〜Ｇ−２４；Ｐ−１〜Ｐ−２３；Ｐ−１〜Ｓ−２
２；Ｐ−１〜Ｃ−２１；Ｐ−１〜Ｋ−２０；Ｐ−１〜Ｐ−１９；Ｐ−１〜Ｃ−１
８；Ｐ−１〜Ｃ−１７；Ｐ−１〜Ｅ−１６；Ｐ−１〜Ｓ−１５；Ｐ−１〜Ｇ−１
４；Ｐ−１〜Ｖ−１３；Ｐ−１〜Ｐ−１２；Ｐ−１〜Ｙ−１１；Ｐ−１〜Ｅ−１
０；Ｐ−１〜Ｄ−９；Ｐ−１〜Ｅ−８；Ｐ−１〜Ｋ−７；およびＰ−１〜Ｃ−６
。本発明はまた、上記のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に対し
て少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８
％または９９％同一なポリヌクレオチド配列を含むかあるいはこのポリヌクレオ
チド配列からなる核酸分子に関する。本発明はまた、異種ポリヌクレオチド配列
に融合された上記のポリヌクレオチド配列を包含する。これらのポリヌクレオチ
ド配列によってコードされるポリペプチドもまた本発明によって包含される。

【０１５１】 本発明はまた、可溶性ＴＲ２−ＳＶ１ポリペプチドのアミノ末端およびカルボ
キシル末端の両方から１以上のアミノ酸が欠失したポリペプチドを提供し、これ
は一般に、配列番号５（図４Ａ〜４Ｃ）の残基ｎ⁵〜ｍ⁵を有すると記載され得、
ここでｎ⁵およびｎ⁵は、上記の通りの整数である。これらのポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドもまた本発明によって包含される。

【０１５２】 さらに、本発明のポリペプチドのうちの１以上のアミノ酸残基（例えば、アル
ギニン残基およびリジン残基）は、別の残基で欠失または置換されて、例えば、
フリンまたはケキシン（ｋｅｘｉｎ）のようなプロテアーゼによる所望でないプ
ロセシングを除去し得る。

【０１５３】 本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチ
ド配列を含むタンパク質を提供する。

【０１５４】 本発明の特に好ましいフラグメントの中には、本発明のＴＲ２レセプターの構
造特性または機能特性によって特徴付けられるフラグメントがある。このような
フラグメントとしては、完全（すなわち、全長）ＴＲ２レセプター（配列番号２
）のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォールトパラメータ）を用いる
同定されたときの、以下を含むかあるいは以下からなるアミノ酸残基が挙げられ
る：αヘリックスおよびαヘリックス形成領域（「α領域」）、βシートおよび
βシート形成領域（「β領域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域
」）、コイルおよびコイル形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領
域、α両親媒性領域、β両親媒性領域、表面形成領域および高抗原性指数領域（
すなわち、１．５以上の抗原性指数を有する４以上の連続したアミノ酸を含む）
。特定の好ましい領域は、図３に示す領域であり、そして図１Ａ〜１Ｂ（配列番
号２）に示すアミノ酸配列の分析によって同定される上記の型の領域を含むがこ
れらに限定されず、このような好ましい領域としては、これらのコンピュータプ
ログラムのデフォールトパラメーターを用いて推定した場合の、以下が挙げられ
る；Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ推定α領域、β領域、ターン領域およびコイ
ル領域；Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ推定α領域、β領域、ターン領域およびコイル
領域；Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ推定親水性領域および疎水性領域；Ｅｉｓ
ｅｎｂｅｒｇα両親媒性領域およびβ両親媒性領域；Ｅｍｉｎｉ表面形成領域；
ならびにＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ高抗原性指数領域。これらのポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドもまた本発明によって包含される。

【０１５５】 さらなる実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＴＲ２レセプターの機
能的特性をコードする。これに関する本発明の好ましい実施形態としては、１以
上の以下の機能的ドメインのうちの１、２、３、４以上を含むかあるいはこれら
からなるフラグメントが挙げられる：ＴＲ２レセプターのαヘリックスおよびα
ヘリックス形成領域（「α領域」）、βシートおよびβシート形成領域（「β領
域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域」）、コイルおよびコイル
形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両
親媒性領域、可撓性領域、表面形成領域および高抗原性指数領域。

【０１５６】 図３、６および９ならびに表ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＸに示すＴＲ２レセプター
の構造的または機能的特性を提示するデータを、デフォールトパラメーターでの
ＤＮＡ^*ＳＴＡＲセットの種々の同定されたモジュールおよびアルゴリズムを用
いて生成した。好ましい実施形態では、表ＩＩの第ＶＩＩＩ欄、第ＩＸ欄、第Ｘ
ＩＩＩ欄および第ＸＩＶ欄に提示するデータを用いて、抗原性についての高い程
度の可能性を示す、ＴＲ２レセプターの領域を決定し得る。高い抗原性の領域を
、免疫応答の開始プロセスにおいて抗原認識が生じ得る環境においてポリペプチ
ドの表面に曝露されるようである、ポリペプチドの領域を表す値を選択すること
によって、第ＶＩＩＩ欄、第ＩＸ欄、第ＸＩＩＩ欄および／または第ＩＶ欄に示
すデータから決定する。

【０１５７】 これらに関して特定の好ましい領域を、図３、６および９に示すが、これらの
領域は、それぞれ、表ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶに示すように、図３、６および９
に提示するデータの表形式の提示を用いることによって提示または同定され得る
。図３、６および９を生成するために用いられる（元々のデフォールトパラメー
ターに設定される）ＤＮＡ^*ＳＴＡＲコンピューターアルゴリズムを用いて、表
形式で図３、６および９におけるデータを提示した。（それぞれ、表ＩＩ、ＩＩ
ＩおよびＩＶを参照のこと）。

【０１５８】 図３、６および９ならびに表ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶに示す上記の好ましい領
域としては、図１、４および７に示すアミノ酸配列の分析によって同定される上
記の型の領域が挙げられるがこれらに限定されない。図３、６および９ならびに
表ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶに示すように、このような好ましい領域としては、以
下が挙げられる：Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎのα領域、β領域、ターン領域
およびコイル領域（表ＩＩ、表ＩＩＩおよび表ＩＶにおける第Ｉ欄、第ＩＩＩ欄
、第Ｖ欄および第ＶＩＩ欄）、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎのα領域、β領域および
ターン領域（表ＩＩ、表ＩＩＩおよび表ＩＶにおける第ＩＩ欄、第ＩＶ欄および
第ＶＩ欄）、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの親水性領域（表ＩＩ、表ＩＩＩお
よび表ＩＶにおける第ＶＩＩＩ欄）、Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓの疎水性領域（表Ｉ
Ｉ、表ＩＩＩおよび表ＩＶにおける第ＩＸ欄）、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇのα両親媒
性領域およびβ両親媒性領域（表ＩＩ、表ＩＩＩおよび表ＩＶにおける第Ｘ欄お
よび第ＸＩ欄）、Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚの可撓性領域（表ＩＩ、表ＩＩ
Ｉおよび表ＩＶにおける第ＸＩＩ欄）、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆの高抗原性指
数領域（表ＩＩ、表ＩＩＩおよび表ＩＶにおける第ＸＩＩＩ欄）、ならびにＥｍ
ｉｎｉの表面形成領域（表ＩＩ、表ＩＩＩおよび表ＩＶにおける第ＸＩＶ欄）。

【０１５９】

【表２】

【０１６０】

【表３】

【０１６１】

【表４】 この点において、非常に好ましいフラグメントのうちにあるのは、いくつかの
構造的特徴（例えば、上記に陳列された特徴のうちのいくつか）を組み合わせる
ＴＲ２レセプターの領域を、含むかまたはそのような領域からなる、フラグメン
トである。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明
により包含される。

【０１６２】 当業者が理解するように、本発明のＴＲ２ポリペプチドおよびそのエピトープ
保有フラグメントは、異種ポリペプチド配列と組み合わされ得る。例えば、本発
明のポリペプチドは、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定
常ドメインまたはその部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびそれらの任意の組
み合わせ（ドメイン全体およびその部分の両方を含む））と融合され得、その結
果、キメラポリペプチドを生じ得る。これらの融合タンパク質は、精製を容易に
し、そして半減期の増加を示す。

【０１６３】 本発明はさらに、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１、およびＴＲ２−ＳＶ２のフラグメ
ントを含むか、またはそれらからなる、単離されたポリペプチドに関する。特に
、本発明は、配列番号２のアミノ酸−３６〜２４、−２６〜３４、−１６〜４４
、−６〜５４、１〜６０、１１〜７０、２１〜８０、３１〜９０、４１〜１００
、５１〜１１０、６１〜１２０、７１〜１３０、８１〜１４０、９１〜１５０、
１０１〜１６０、１１１〜１７０、１２１〜１８０、１３１〜１９０、１４１〜
２００、１５１〜２１０、１６１〜２２０、１７１〜２３０、１８１〜２４０、
および１９１〜２４７からなる群より選択されるメンバーのアミノ酸配列を含む
か、またはそれらからなる、単離されたポリペプチド、ならびにこれらのポリペ
プチドをコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。本発明はさらに
、配列番号５のアミノ酸−３６〜２４、−２６〜３４、−１６〜４４、−６〜５
４、１〜６０、１１〜７０、２１〜８０、３１〜９０、４１〜１００、５１〜１
１０、６１〜１２０、７１〜１３０、８１〜１４０、および９１〜１４９からな
る群より選択されるメンバーのアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる、
単離されたポリペプチド、ならびにこれらのポリペプチドをコードする、単離さ
れたポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、配列番号８のアミノ酸１〜６
０、１１〜７０、２１〜８０、３１〜９０、４１〜１００、５１〜１１０、６１
〜１２０、７１〜１３０および８１〜１３６からなる群より選択されるメンバー
のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる、単離されたポリペプチド、な
らびにこれらのポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供
する。

【０１６４】 本発明はまた、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１、およびＴＲ２−ＳＶ２のドメインを
含むか、またはそれらからなる、単離されたポリペプチドに関する。特に、本発
明は、表ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶに示される、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１、および
ＴＲ２−ＳＶ２のβシート領域を含むか、またはそれらからなる、ポリペプチド
を提供する。これらのポリペプチドは、配列番号２の約−１９〜約５のアミノ酸
残基、約−１８〜約−６のアミノ酸残基、約−２〜約４のアミノ酸残基、約２５
〜約３１のアミノ酸残基、約４６〜約５１のアミノ酸残基、約５７〜約７１のア
ミノ酸残基、約９９〜約１０４のアミノ酸残基、約１５１〜約１５６のアミノ酸
残基、約１７５〜約１９１のアミノ酸残基、約１７４〜約１９０のアミノ酸残基
、約１９７〜約２０６のアミノ酸残基、約１９７〜約２０８のアミノ酸残基、約
２１５〜約２２０のアミノ酸残基、約２２８〜約２３８のアミノ酸残基、および
約２２９〜約２４１のアミノ酸残基；配列番号５の約−１９〜約５のアミノ酸残
基、約−１８〜約６のアミノ酸残基、約−２〜約３のアミノ酸残基、約２６〜約
３１のアミノ酸残基、約３４〜約４０のアミノ酸残基、約４６〜約５０のアミノ
酸残基、約５７〜約６４のアミノ酸残基、約６９〜約７４のアミノ酸残基、約１
２２〜約１２８のアミノ酸残基、および約１３２〜約１４０のアミノ酸残基；な
らびに配列番号８の約６〜約１３のアミノ酸残基、約２６〜約３３のアミノ酸残
基、約５０〜約５８のアミノ酸残基、および約８６〜約９３のアミノ酸残基から
なる群より選択されるメンバーのアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる
、ポリペプチドを含む。本発明はさらに、表ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶに示される
、βシート領域をコードする核酸分子を含むか、またはそれらからなる、単離さ
れたポリヌクレオチド、ならびにＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１、およびＴＲ２−ＳＶ
２タンパク質のβシート領域をコードする核酸分子に、少なくとも８０％同一、
およびより好ましくは少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９
７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはそれらから
なる、単離されたポリペプチドに関する。

【０１６５】 本発明のＴＲ２レセプタータンパク質は、単量体または多量体（すなわち、二
量体、三量体、四量体、およびより高次の多量体）であり得る。従って、本発明
は、本発明のＴＲ２レセプタータンパク質の単量体および多量体、それらの調製
、ならびにそれらを含む組成物（好ましくは薬学的組成物）に関する。特定の実
施形態において、本発明のポリペプチドは、単量体、二量体、三量体、または四
量体である。さらなる実施形態において、本発明の多量体は、少なくとも二量体
、少なくとも三量体、または少なくとも四量体である。

【０１６６】 本発明によって包含される多量体は、ホモマーまたはヘテロマーであり得る。
本明細書中で使用される場合、用語ホモマーは、本発明のＴＲ２レセプタータン
パク質のみを含む多量体をいう（本明細書中で記載されるような、ＴＲ２レセプ
ターのフラグメント、改変体、および融合タンパク質を含む）。これらのホモマ
ーは、同一または異なるポリペプチド配列を有するＴＲ２レセプタータンパク質
を含み得る。特定の実施形態において、本発明のホモマーは、同一のポリペプチ
ド配列を有するＴＲ２レセプタータンパク質のみを含む多量体である。別の特定
の実施形態において、本発明のホモマーは、異なるポリペプチド配列を有するＴ
Ｒ２レセプタータンパク質を含む多量体である。特定の実施形態において、本発
明の多量体は、ホモ二量体（例えば、同一または異なるポリペプチド配列を有す
るＴＲ２レセプタータンパク質を含む）であるか、またはホモ三量体（例えば、
同一または異なるポリペプチド配列を有するＴＲ２レセプタータンパク質を含む
）である。さらなる実施形態において、本発明のホモ多量体は、少なくともホモ
二量体、少なくともホモ三量体、または少なくともホモ四量体である。

【０１６７】 本明細書中で使用される場合、用語へテロマーは、本発明のＴＲ２レセプター
タンパク質に加えて、異種タンパク質（すなわち、ＴＲ２レセプター遺伝子によ
りコードされるポリペプチド配列に対応しないポリペプチド配列のみを含むタン
パク質）を含む多量体をいう。特定の実施形態において、本発明の多量体は、ヘ
テロ二量体、ヘテロ三量体、またはヘテロ四量体である。さらなる実施形態にお
いて、本発明のヘテロ多量体は、少なくともヘテロ二量体、少なくともヘテロ三
量体、または少なくともヘテロ四量体である。

【０１６８】 本発明の多量体は、疎水結合、親水結合、イオン結合、および／または共有結
合の結果であり得、そして／または例えば、リポソーム形成によって間接的に連
結され得る。従って、１つの実施形態において、例えば、ホモ二量体またはホモ
三量体のような本発明の多量体は、本発明のタンパク質が溶液中において互いに
接触した場合に形成される。別の実施形態において、例えば、ヘテロ三量体また
はヘテロ四量体のような本発明のヘテロ多量体は、本発明のタンパク質が溶液中
において本発明のポリペプチドに対する抗体（本発明の融合タンパク質における
異種ポリペプチド配列に対する抗体を含む）に接触した場合に形成される。他の
実施形態において、本発明の多量体は、本発明のＴＲ２レセプタータンパク質と
の共有結合、および／またはそれらの間の共有結合によって形成される。このよ
うな共有結合は、ＴＲ２レセプタータンパク質のポリペプチド配列（例えば、配
列番号２、配列番号５、配列番号８もしくは配列番号２６に列挙されるポリペプ
チド配列、またはＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８、もしくは９７０５
７に含まれるｃＤＮＡによってコードされるポリペプチド）に含まれる、１以上
のアミノ酸残基を含み得る。１つの例では、共有結合は、ネイティブな（すなわ
ち、天然に存在する）ポリペプチドにおいて相互作用するタンパク質のポリペプ
チド配列内に位置するシステイン残基間の架橋である。別の例では、共有結合は
、化学的操作または組換え操作の結果である。あるいは、このような共有結合は
、ＴＲ２レセプター融合タンパク質における異種ポリペプチド配列に含まれる、
１以上のアミノ酸残基を含み得る。１つの例では、共有結合は、本発明の融合タ
ンパク質に含まれる異種配列の間である（例えば、米国特許第５，４７８，９２
５号を参照のこと）。特定の例では、共有結合は、（本明細書中に記載されるよ
うに）本発明のＴＲ２レセプター−Ｆｃ融合タンパク質に含まれる異種配列の間
である。別の特定の例では、本発明の融合タンパク質の共有結合は、例えば、オ
ステオプロテゲリン（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）のような共有結合した
多量体を形成し得る別のＴＮＦファミリーリガンド／レセプターメンバー由来の
異種ポリペプチド配列の間である（例えば、国際公開番号ＷＯ９８／４９３０５
（この内容は、その全体において本明細書中に参考として援用される）を参照の
こと）。別の実施形態では、本発明の２以上のＴＲ２ポリペプチドは、合成リン
カー（例えば、ペプチドリンカー、糖質リンカーまたは可溶性ポリマーリンカー
）を通じて連結される。例としては、米国特許第５，０７３，６２７号（本明細
書によって参考として援用される）に記載されるペプチドリンカーが挙げられる
がこれに限定されない。ペプチドリンカーによって分離された複数のＴＲ２ポリ
ペプチドを含むタンパク質は、従来の組換えＤＮＡ技術を使用して産生され得る
。

【０１６９】 本発明の多量体ＴＲ２ポリペプチドを調製するための別の方法は、ロイシンジ
ッパーポリペプチド配列に融合されたＴＲ２ポリペプチドの使用を含む。ロイシ
ンジッパードメインは、それらが見出されるタンパク質の多量体化を促進するポ
リペプチドである。ロイシンジッパーは、いくつかのＤＮＡ結合タンパク質でも
ともと同定された（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１７５
９，（１９８８））。そしてそれ以来、種々の異なるタンパク質に見出されてい
る。既知のロイシンジッパーのなかには、二量体化または三量体化する、天然に
存在するペプチドおよびその誘導体がある。可溶性多量体ＴＲ２タンパク質を産
生するための適切なロイシンジッパードメインの例は、ＰＣＴ出願ＷＯ９４／１
０３０８（本明細書によって参考として援用される）に記載されるロイシンジッ
パードメインである。溶液中で二量体化または三量体化するペプチドに融合した
可溶性ＴＲ２ポリペプチドを含む組換え融合タンパク質が、適切な宿主細胞にお
いて発現され、そして得られた可溶性多量体ＴＲ２は、当該分野で公知の技術を
使用して、培養上清から回収される。

【０１７０】 タンパク質のＴＮＦファミリーの特定のメンバーは、三量体形態で存在すると
考えられている（ＢｅｕｔｌｅｒおよびＨｕｆｆｅｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４
：６６７，１９９４；Ｂａｎｎｅｒら，Ｃｅｌｌ ７３：４３１，１９９３）。
従って、三量体ＴＲ２は、生物学的活性の増強という利点を提供し得る。好まし
いロイシンジッパー部分は、三量体を優先的に形成する部分である。１つの例は
、Ｈｏｐｐｅら（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３４４：１９１，（１９９４））
および米国特許出願第０８／４４６，９２２号（本明細書によって参考として援
用される）に記載されるような、肺表面活性タンパク質Ｄ（ｌｕｎｇ ｓｕｒｆ
ａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄ）（ＳＰＤ）由来のロイシンジッパーである
。天然に存在する三量体タンパク質由来の他のペプチドが、三量体ＴＲ２の調製
に用いられ得る。

【０１７１】 別の例において、本発明のタンパク質は、本発明のＦｌａｇ（登録商標）−Ｔ
Ｒ２タンパク質またはＦｌａｇ（登録商標）−ＴＲ２融合タンパク質に含まれる
Ｆｌａｇ（登録商標）ポリペプチド配列間の相互作用によって結合される。さら
なる実施形態において、本発明の結合タンパク質は、本発明のＦｌａｇ（登録商
標）−ＴＲ２タンパク質またはＦｌａｇ（登録商標）−ＴＲ２融合タンパク質に
含まれる異種ポリペプチド配列と抗Ｆｌａｇ（登録商標）抗体との間の相互作用
によって結合される。

【０１７２】 本発明の多量体は、当該分野で公知の化学技術を使用して生成され得る。例え
ば、本発明の多量体に含まれることが所望されるタンパク質は、当該分野で公知
のリンカー分子およびリンカー分子長最適化技術（例えば、米国特許第５，４７
８，９２５号（これは、その全体において本明細書中に参考として援用される）
を参照のこと）を使用して化学的に架橋され得る。さらに、本発明の多量体は、
多量体に含まれることが所望されるタンパク質のポリペプチド配列内に位置する
システイン残基間で１以上の分子間架橋を形成するために、当該分野で公知の技
術を使用して生成され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは
、その全体において本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。さら
に、本発明のタンパク質は、タンパク質のポリペプチド配列のＣ末端またはＮ末
端へのシステインまたはビオチンの付加により慣用的に改変され得、そして当該
分野で公知の任意の技術が、１以上のこれらの改変タンパク質を含む多量体を生
成するために適用され得る（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（これは
、その全体において本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。さら
に、当該分野で公知の技術が、本発明の多量体に含まれることが所望されるタン
パク質成分を含むリポソームを生成するために適用され得る（例えば、米国特許
第５，４７８，９２５号（これは、その全体において本明細書中で参考として援
用される）を参照のこと）。

【０１７３】 あるいは、本発明の多量体は、当該分野で公知の遺伝子工学技術を使用して生
成され得る。１つの実施形態では、本発明の多量体に含まれるタンパク質は、本
明細書中に記載される融合タンパク質技術または当該分野で公知のそれ以外の技
術を使用して、組換え産生される（例えば、米国特許第５，４７８，９２５号（
これは、その全体において本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）
。特定の実施形態において、本発明のホモ二量体をコードするポリヌクレオチド
は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、リンカーポリ
ペプチドをコードする配列に連結して、次いでさらに、本来のＣ末端からＮ末端
の逆方向におけるポリペプチドの翻訳産物（リーダー配列を欠損する）をコード
する合成ポリヌクレオチドに連結することによって生成される（例えば、米国特
許第５，４７８，９２５号（これは、その全体において本明細書中で参考として
援用される）を参照のこと）。別の実施形態において、本明細書中に記載される
組換え技術または当該分野で公知のそれ以外の技術が、膜貫通ドメインを含み、
かつ膜再構成技術によってリポソーム中に取り込まれ得る、本発明の組換えポリ
ペプチドを生成するために適用される（例えば、米国特許第５，４７８，９２５
号（これは、その全体において本明細書中で参考として援用される）を参照のこ
と）。

【０１７４】 本発明は、配列番号２、配列番号５、配列番号８もしくは配列番号２６のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドのエピトープ、またはＡＴＣＣ受託番号９７０５
９、９７０５８もしくは９７０５７として同定される寄託されたｃＤＮＡに含ま
れるポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド配列のエピトープ
、あるいは本明細書中に規定されるような、ストリンジェントなハイブリダイゼ
ーション条件、またはより低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条
件の下で、配列番号１、配列番号４、配列番号７もしくは配列番号２５のポリヌ
クレオチド配列、またはＡＴＣＣ受託番号９７０５９、９７０５８もしくは９７
０５７として同定される寄託されたｃＤＮＡに含まれるポリヌクレオチド配列の
相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチ
ド配列のエピトープを含むか、あるいはそれらからなる、ポリペプチドを含む。
本発明はさらに、本発明のポリペプチド配列のエピトープをコードするポリヌク
レオチド配列（例えば、配列番号２、配列番号５、配列番号８、もしくは配列番
号２６に開示される配列など）、本発明のエピトープをコードするポリヌクレオ
チド配列の相補鎖のポリヌクレオチド配列、および本明細書中に規定される、ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件またはより低いストリンジェンシ
ーのハイブリダイゼーション条件の下で、相補鎖にハイブリダイズするポリヌク
レオチド配列を含む。

【０１７５】 本明細書中で使用される場合、用語「エピトープ」とは、動物、好ましくは哺
乳動物、そして最も好ましくはヒトにおいて抗原性活性または免疫原性活性を有
するポリペプチドの部分をいう。好ましい実施形態において、本発明は、エピト
ープを含むポリペプチドならびにこのポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドを含む。本明細書で使用される場合、「免疫原性エピトープ」は、当該分野で
公知の任意の方法によって（例えば、以下に記載された抗体作製の方法によって
）測定されるように、動物における抗体応答を誘発するタンパク質の一部として
定義される（例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８１：３９９８〜４００２（１９８３）を参照のこと）。本明細書中
で使用される場合、用語「抗原性エピトープ」とは、当該分野で周知の任意の方
法によって（例えば、本明細書中に記載されたイムノアッセイによって）測定さ
れるように、抗体がその抗原を免疫特異的に結合し得るタンパク質の一部として
定義される。免疫特異的な結合は、非特異的な結合を排除するが、必ずしも他の
抗原との交差反応性を排除する必要はない。抗原性エピトープは、必ずしも免疫
原性である必要はない。

【０１７６】 抗原性エピトープを保有する（すなわち、抗体が結合し得るタンパク質分子の
領域を含む）ペプチドまたはポリペプチドの選択に関して、タンパク質配列の一
部を模倣する比較的短い合成ペプチドが、部分的に模倣したタンパク質と反応す
る抗血清を慣用的に誘発し得るは、当該分野において周知である。例えば、Ｓｕ
ｔｃｌｉｆｆｅ，Ｊ．Ｇ．，Ｓｈｉｎｎｉｃｋ，Ｔ．Ｍ．，Ｇｒｅｅｎ，Ｎ．お
よびＬｅａｒｎｅｒ，Ｒ．Ａ．（１９８３）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ
ｒｅａｃｔ ｗｉｔｈ ｐｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｓｉｔｅｓ ｏｎ ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６０〜６６６を参照のこと。タンパ
ク質反応性血清を誘発し得るペプチドは、タンパク質の１次配列でしばしば示さ
れ、一連の単純な化学規則により特徴付けられ得、そしてインタクトなタンパク
質の免疫優勢（ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ）領域（すなわち、免疫原性エピ
トープ）にも、アミノ末端もしくはカルボキシル末端のいずれにも限局されない
。

【０１７７】 従って、本発明の抗原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、本発
明のポリペプチドに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起
するために有用である。例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７〜７
７８（１９８４）（７７７）を参照のこと。

【０１７８】 本発明の抗原性エピトープは、好ましくは、少なくとも４個、少なくとも５個
、少なくとも６個、少なくとも７個、より好ましくは少なくとも８個、少なくと
も９個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも
２５個、そして最も好ましくは約１５〜約３０個の間のアミノ酸の配列を含む。
この状況において、「約」は、特に示される値、およびいくつかの（５、４、３
、２、もしくは１）アミノ酸よりも大きいまたは小さい値を含む。免疫原性エピ
トープまたは抗原性エピトープを含む好ましいポリペプチドは、少なくとも１０
、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０
、７５、８０、８５、９０、９５、または１００アミノ酸残基長である。抗原性
エピトープは、例えば、このエピトープを特異的に結合する抗体（モノクローナ
ル抗体を含む）を惹起するために有用である。抗原性エピトープは、イムノアッ
セイにおける標的分子として使用され得る（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ
３７：７６７〜７７８（１９８４）；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２１９：６６０〜６６６（１９８３）を参照のこと）。

【０１７９】 ＴＲ２レセプター特異的抗体を生成するために使用され得る抗原性ポリペプチ
ドまたはペプチドの非限定的な例としては、以下が挙げられる：図１の約３９〜
約７０のアミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基３〜３４）を含むか、または
これからなる、ポリペプチド；図１Ａ〜１Ｂの約１０６〜約１２０のアミノ酸残
基（配列番号２のアミノ酸残基７０〜８４）を含むか、またはこれからなる、ポ
リペプチド；図１Ａ〜１Ｂの約１４２〜約１８９のアミノ酸残基（配列番号２の
アミノ酸残基１０６〜１５３）を含むか、またはこれからなる、ポリペプチド；
図１の約２７６〜約２８３のアミノ酸残基（配列番号２のアミノ酸残基２４０〜
２４７）を含むか、またはこれからなる、ポリペプチド；図４Ａ〜４Ｃの約３９
〜約７０のアミノ酸残基（配列番号５のアミノ酸残基３〜３４）を含むか、また
はこれからなる、ポリペプチド；図４Ａ〜４Ｃの約９９〜約１３６のアミノ酸残
基（配列番号５のアミノ酸残基６３〜１００）を含むか、またはこれからなる、
ポリペプチド；図４Ａ〜４Ｃの約１７１〜約１８５のアミノ酸残基（配列番号５
のアミノ酸残基１３５〜１４９）を含むか、またはこれからなる、ポリペプチド
；図７Ａ〜７Ｃ（配列番号８）の約５６〜約６８のアミノ酸残基を含むか、また
はこれからなる、ポリペプチド；および図７Ａ〜７Ｃ（配列番号８）の約９３〜
約１３６のアミノ酸残基を含むか、またはこれからなる、ポリペプチド。この状
況において、「約」は、特に示される値、およびいくつかの（５、４、３、２、
１）アミノ酸よりも大きいまたは小さい値を含む。示されるように、本発明者ら
は、上記のポリペプチドフラグメントがＴＲ２レセプタータンパク質の抗原性領
域であると決定した。

【０１８０】 本発明のエピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、任意の従来の手段（
Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．（１９８５）Ｇｅｎｅｒａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏ
ｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ
ｌａｒｇｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｓｐｅｃｉｆｉｃｉ
ｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｔｉｂｌｄｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ａ
ｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ
ｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１〜５１３
５）によって産生され得る。この「同時複数ペプチド合成（Ｓｉｍｕｌｔａｎｅ
ｏｕｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＳＭＰＳ）
」処理は、Ｈｏｕｇｈｔｅｎら（１９８６）に対する米国特許第４，６３１，２
１１号にさらに記載されている。

【０１８１】 同様に、免疫原性エピトープが、例えば、当該分野で周知の方法に従って抗体
を誘導するために使用され得る（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌ
ｓｏｎら、前出；Ｃｈｏｗら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８２：９１０〜９１４；およびＢｉｔｔｌｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６
６：２３４７〜２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原性エピト
ープとしては、分泌タンパク質が挙げられる。１以上の免疫原性エピトープを含
むポリペプチドが、動物系（例えば、ウサギまたはマウスなど）に対して、キャ
リアタンパク質（例えば、アルブミン）とともに抗体応答を誘発するために提示
され得るか、あるいはこのポリペプチドが十分に長い（少なくとも約２５アミノ
酸）場合には、このポリペプチドは、キャリアなしで提示され得る。しかし、わ
ずか８〜１０程度のアミノ酸を含む免疫原性エピトープは、（例えば、ウエスタ
ンブロッティングにおいて）少なくとも、変性したポリペプチドにおける線状エ
ピトープに結合し得る抗体を惹起するに十分であることが示されている。

【０１８２】 本発明のエピトープ保有ポリペプチドは、当該分野で周知の方法に従って、抗
体を誘導するために使用され得る。この方法としては、インビボ免疫、インビト
ロ免疫、およびファージディスプレイ法が挙げられるがこれらに限定されない。
例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら、前出およびＢｉｔｔｌ
ｅら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，６６：２３４７〜２３５４（１９８５）を参
照のこと。インビボ免疫が使用される場合、動物は、遊離ペプチドで免疫され得
る；しかし、抗ペプチド抗体力価は、ペプチドを高分子キャリア（例えば、キー
ホルリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）または破傷風毒素）に結合することによ
ってブーストされ得る。例えば、システイン残基を含むペプチドは、マレイミド
ベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）のようなリンカ
ーを使用してキャリアに結合され得、一方、他のペプチドは、より一般的な連結
剤（例えば、グルタルアルデヒド）を使用してキャリアに結合され得る。動物（
例えば、ウサギ、ラット、およびマウスなど）が、例えば、約１００μｇのペプ
チドまたはキャリアタンパク質およびフロイントアジュバントまたは免疫応答を
刺激するための公知の任意の他のアジュバントを含む乳剤の腹腔内注射および／
または皮内注射によって、遊離ペプチドまたはキャリア結合ペプチドのいずれか
で免疫される。数回のブースター注射が、例えば、個体表面に吸着された遊離ペ
プチドを使用するＥＬＩＳＡアッセイによって検出され得る抗ペプチド抗体の有
用な力価を提供するために、例えば、約２週間の間隔で必要とされ得る。免疫さ
れた動物由来の血清中の抗ペプチド抗体の力価は、抗ペプチド抗体の選択によっ
て（例えば、個体表面へのペプチドの吸着、および当該分野で周知の方法に従っ
て選択された抗体の溶出によって）増大され得る。

【０１８３】 当業者に理解されるように、そして上記で考察されるように、免疫原性エピト
ープまたは抗原性エピトープを含む本発明のポリペプチドは、他のポリペプチド
配列に融合され得る。例えば、本発明のポリペプチドは、免疫グロブリン（Ｉｇ
Ａ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）の定常ドメインまたはそれらの部分（ＣＨ１、Ｃ
Ｈ２、ＣＨ３、またはそれらの任意の組み合わせおよびそれらの部分）と融合さ
れ得、キメラポリペプチドを生じる。このような融合タンパク質は、精製を容易
にし得、そしてインビボでの半減期を増大させ得る。これは、ヒトＣＤ４−ポリ
ペプチドの最初の２つのドメインおよび哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖または
軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質について示されてい
る。例えば、ＥＰ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，
３３１：８４〜８６（１９８８）を参照のこと。ＩｇＧ部分のジスルフィド結合
に起因するジスルフィド結合二量体構造を有するＩｇＧ融合タンパク質はまた、
単量体ポリペプチドまたはそれらのフラグメント単独よりも、他の分子の結合お
よび中和においてより効果的であることが見出された。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕ
ｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５
）を参照のこと。上記のエピトープをコードする核酸はまた、エピトープタグ（
例えば、赤血球凝集素（「ＨＡ」）タグまたはフラッグ（ｆｌａｇ）タグ）とし
て目的の遺伝子と組換えられ、発現されたポリペプチドの検出および精製を補助
し得る。例えば、Ｊａｎｋｎｅｃｈｔらによって記載される系は、ヒト細胞株中
で発現される非変性融合タンパク質の容易な精製を可能にする（Ｊａｎｋｎｅｃ
ｈｔ ら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：
８９７２−８９７）。この系において、目的の遺伝子はワクシニア組換えプラス
ミドへサブクローン化され、その結果、この遺伝子のオープンリーディングフレ
ームが、６つのヒスチジン残基からなるアミノ末端タグへ翻訳時に融合される。
このタグは、融合タンパク質についての基質結合ドメインとしての機能を果たす
。組換えワクシニアウイルスを用いて感染された細胞からの抽出物は、Ｎｉ²⁺ニ
トリロ酢酸−アガロースカラム上へロードされ、そしてヒスチジンタグ化タンパ
ク質は、イミダゾール含有緩衝液を用いて選択的に溶出され得る。

【０１８４】 本発明のさらなる融合タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッ
フリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（総
称して「ＤＮＡシャッフリング」といわれる）の技術を通じて生成され得る。Ｄ
ＮＡシャッフリングを利用して、本発明のポリペプチドの活性を調節し得、この
方法を使用することにより、改変された活性を有するポリペプチド、ならびにこ
れらのポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを生成し得る。一般には
、米国特許第５，６０５，７９３号；同第５，８１１，２３８号；同第５，８３
０，７２１号；同第５，８３４，２５２号；および同第５，８３７，４５８号、
ならびにＰａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．
８：７２４−３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５−７６（１９９９）；ならびにＬｏｒｅｎｚｏ
およびＢｌａｓｃｏ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８−１３
（１９９８）（これらの特許および刊行物の各々が本明細書によってその全体に
おいて参考として援用される）を参照のこと。１つの実施形態において、配列番
号１に対応するポリヌクレオチドおよびこれらのポリヌクレオチドによってコー
ドされるポリペプチドの改変は、ＤＮＡシャッフリングにより達成され得る。Ｄ
ＮＡシャッフリングは、相同組換えまたは部位特異的組換えにより、ポリヌクレ
オチド配列において変化を生じるように２つ以上のＤＮＡセグメントをアセンブ
ルすることを含む。別の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドまたはそ
のコードされるポリペプチドは、組換え前に、誤りがちの（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏ
ｎｅ）ＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法による、ランダム変異
誘発に供されることによって改変され得る。別の実施形態において、本発明のポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドの１つ以上の成分、モチーフ、セクシ
ョン、部分、ドメイン、フラグメントなどは、１つ以上の異種分子の、１つ以上
の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、フラグメントなどと組換えら
れ得る。

【０１８５】 本発明のタンパク質は、当該分野で公知の技術を用いて化学合成され得る（例
えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍ
ａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，
３１０：１０５−１１１（１９８４）を参照のこと）。例えば、本発明のＴＲ２
レセプターポリペプチドのフラグメントに対応するペプチドは、ペプチド合成機
の使用により合成され得る。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化学
的アミノ酸アナログが、置換または付加としてＴＲ２レセプターポリペプチド配
列に導入され得る。非古典的アミノ酸としては、以下が挙げられるがこれらに限
定されない：通常のアミノ酸のＤ異性体、２，４−ジアミノ酪酸、ａ−アミノイ
ソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、
６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸
、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、
シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチル
アラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオ
ロアミノ酸、デザイナー（ｄｅｓｉｇｎｅｒ）アミノ酸（例えば、β−メチルア
ミノ酸）、Ｃａ−メチルアミノ酸、Ｎａ−メチルアミノ酸、および一般のアミノ
酸アナログ。さらに、アミノ酸はＤ（右旋性）またはＬ（左旋性）であり得る。

【０１８６】 天然に存在しない改変体は、当該分野で公知の変異誘発技術を使用して産生さ
れ得る。この技術としては、オリゴヌクレオチド媒介変異誘発、アラニンスキャ
ニング、ＰＣＲ変異誘発、部位指向性変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｎｕ
ｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：４３３１（１９８６）；およびＺｏｌｌｅｒ
ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７（１９８２）を参照のこと
）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓら、Ｇｅｎｅ ３４：３１５（１９
８５）を参照のこと）、制限選択変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓら、Ｐｈｉｌｏ
ｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ ＳｅｒＡ ３１７：４１５（１９
８６）を参照のこと）が挙げられるがこれらに限定されない。

【０１８７】 本発明はさらに、翻訳の間またはその後に示差的に改変される（例えば、グリ
コシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロック基による
誘導体化、タンパク質分解切断、抗体分子への連結、または他の細胞性リガンド
などによる）ＴＲ２レセプターポリペプチドを包含する。任意の多数の化学的な
改変が、公知の技術によって行われ得る。この技術としては、臭化シアン、トリ
プシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ₄による特異
的な化学切断；アセチル化、ホルミル化、酸化、還元；ツニカマイシン（ｔｕｎ
ｉｃａｍｙｃｉｎ）の存在下での代謝合成などが挙げられるがこれらに限定され
ない。

【０１８８】 本発明によって含まれるさらなる翻訳後改変としては、例えば、以下などが挙
げられる：Ｎ結合型もしくはＯ結合型の糖質鎖（Ｎ末端またはＣ末端のプロセシ
ング）、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ結合型もしくはＯ結合型の糖質鎖
の化学改変、および原核生物宿主細胞発現の結果としてのＮ末端メチオニン残基
の付加もしくは欠失。このポリペプチドはまた、検出可能な標識（例えば、酵素
標識、蛍光標識、同位体標識または親和性標識）を用いて改変され、このタンパ
ク質の検出および単離が可能にされ得る。

【０１８９】 本発明によってまた、さらなる利点（例えば、このポリペプチドの溶解度、安
定性および循環時間の増加、または免疫原性の減少）を提供し得る、ＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１およびＴＲ２−ＳＶ２レセプターポリペプチドの化学改変誘導体が
提供される（米国特許第４，１７９，３３７号を参照のこと）。誘導体化のため
の化学部分は、水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、エチレング
リコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デ
キストラン、ポリビニルアルコールなど）から選択され得る。このポリペプチド
は、この分子内のランダムな位置で、またはこの分子内の所定の位置で改変され
得、そして１、２、３以上の結合した化学部分を含み得る。

【０１９０】 このポリマーは、任意の分子量のポリマーであり得、そして分枝状であっても
非分枝状であってもよい。ポリエチレングリコールに関しては、好ましい分子量
は、取り扱いおよび製造の容易さのために、約１ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
（用語「約」は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつかの分子は示
した分子量よりも重く、いくつかは示した分子量よりも軽いことを示す）である
。所望の治療的プロフィール（例えば、所望される持続放出の持続時間、ある場
合には生物学的活性に対する効果、取り扱いの容易さ、抗原性の程度または抗原
性がないこと、および治療タンパク質またはアナログに対するポリエチレングリ
コールの他の公知の効果）に依存して、他のサイズが用いられ得る。例えば、ポ
リエチレングリコールは、約２００、５００、１０００、１５００、２０００、
２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６
０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５
００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，００
０、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００
、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、
１７５，００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、２０，０００、２
５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、５５
，０００、６０，０００、６５，０００、７０，０００、７５，０００、８０，
０００、９０，０００、９５，０００、または１００，０００ｋＤａの平均分子
量を有し得る。

【０１９１】 上記のように、ポリエチレングリコールは、分枝状構造を有し得る。分枝状ポ
リエチレングリコールは、例えば、米国特許第５，６４３，５７５号；Ｍｏｒｐ
ｕｒｇｏら、Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５６：５９〜
７２（１９９６）；Ｖｏｒｏｂｊｅｖら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ １８：２７４５〜２７５０（１９９９）；およびＣａｌｉｃｅｔ
ｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：６３８〜６４６（１９９９）（こ
れらの各々の開示は、本明細書中に参考として援用される）に記載される。

【０１９２】 ポリエチレングリコール分子（または他の化学的部分）は、このタンパク質の
機能的ドメインまたは抗原性ドメインに対する効果を考慮してタンパク質に結合
されるべきである。当業者に利用可能な多数の結合方法が存在する（例えば、本
明細書中に参考として援用される、ＥＰ ０ ４０１ ３８４（Ｇ−ＣＳＦにＰ
ＥＧを結合する）、Ｍａｌｉｋら，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８−
１０３５（１９９２）（塩化トレシルを用いたＧＭ−ＣＳＦのペグ化（ｐｅｇｙ
ｌａｔｉｏｎ）を報告する）もまた参照のこと）。例えば、ポリエチレングリコ
ールは、反応性基（例えば、遊離のアミノ基またはカルボキシル基）によってア
ミノ酸残基を介して共有結合され得る。反応性基は、活性化ポリエチレングリコ
ール分子が結合され得る基である。遊離のアミノ基を有するアミノ酸残基として
は、リジン残基およびＮ末端アミノ酸残基が挙げられ得る；遊離のカルボキシル
基を有するアミノ酸残基としては、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基およ
びＣ末端アミノ酸残基が挙げられ得る。スルフヒドリル残基もまた、ポリエチレ
ングリコール分子を結合するための反応性基として用いられ得る。治療目的のた
めに好ましいのは、アミノ基での結合、例えば、Ｎ末端またはリジン基での結合
である。

【０１９３】 上記で示唆されるように、ポリエチレングリコールは、任意の数のアミノ酸残
基への結合を介して、タンパク質に結合され得る。例えば、ポリエチレングリコ
ールは、リジン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステイ
ン残基に対する共有結合を介してタンパク質に結合され得る。１以上の反応化学
が、このタンパク質の特定のアミノ酸残基（例えば、リジン、ヒスチジン、アル
パラギン酸、グルタミン酸、またはシステイン）に、あるいはこのタンパク質の
１よりも多い型のアミノ酸残基（例えば、リジン、ヒスチジン、アルパラギン酸
、グルタミン酸、システインおよびそれらの組合せ）にポリエチレングリコール
を結合させるために使用され得る。

【０１９４】 特に、Ｎ末端で化学的に改変されたタンパク質を所望し得る。本組成物の例示
としてポリエチレングリコールを用いて、種々のポリエチレングリコール分子（
分子量、分岐などによる）、反応混合物中のタンパク質（またはペプチド）分子
に対するポリエチレングリコール分子の割合、実行されるべきペグ化反応の型、
および選択されたＮ末端ペグ化タンパク質を得る方法から選択し得る。Ｎ末端ペ
グ化調製物を得る（すなわち、必要な場合、この部分を他のモノペグ化部分から
分離する）方法は、ペグ化タンパク質分子の集団からのＮ末端ペグ化物質の精製
により得る。Ｎ末端改変で化学的に改変された選択的タンパク質は、還元的アル
キル化によって達成され得、この還元的アルキル化は、特定のタンパク質におけ
る誘導体化に利用可能な第１級アミノ基（リジン対Ｎ末端）の異なる型の異なる
反応性を利用する。適切な反応条件下で、カルボニル基含有ポリマーを用いた、
Ｎ末端でのタンパク質の実質的な選択的誘導体化が、達成される。

【０１９５】 上記のように、本発明のタンパク質のペグ化は、かなり多数の手段により達成
され得る。例えば、ポリエチレングリコールは、直接的か、または介入リンカー
によってかのいずれかで、タンパク質に連結され得る。タンパク質ヘポリエチレ
ングリコールを結合させるためのリンカーのない系は、Ｄｅｌｇａｄｏら、Ｃｒ
ｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓ．９：２４９−
３０４（１９９２）；Ｆｒａｎｃｉｓら、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ．ｏｆ Ｈｅｍａｔ
ｏｌ．６８：１−１８（１９９８）；米国特許第４，００２，５３１号；米国特
許第５，３４９，０５２号；ＷＯ９５／０６０５８；およびＷＯ９８／３２４６
６（これらの各々の開示は、本明細書中に参考として援用される）に記載される
。

【０１９６】 介入リンカーなしでタンパク質のアミノ酸残基に直接ポリエチレングリコール
を結合させるための１つの系は、トレシル化ＭＰＥＧを使用し、このトレシル化
ＭＰＥＧは、塩化トレシル（ＣｌＳＯ₂ＣＨ₂ＣＦ₃）を用いるモノメトキシ（ｍ
ｏｎｍｅｔｈｏｘｙ）ポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）の改変により生成さ
れる。トレシル化ＭＰＥＧとのタンパク質の反応の際に、ポリエチレングリコー
ルは、そのタンパク質のアミン基に直接結合される。従って、本発明は、本発明
のタンパク質と、２，２，２−トリフルオロエタン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｅｏｔｈ
ａｎｅ）スルホニル基を有するポエチレングリコール分子との反応により生成さ
れる、タンパク質−ポリエチレングリコール結合体を含む。

【０１９７】 ポリエチレングリコールはまた、多数の異なる介入リンカーを用いてタンパク
質に結合され得る。例えば、米国特許第５，６１２，４６０号（この全体の開示
は本明細書中に参考として援用される）は、ポリエチレングリコールをタンパク
質に結合させるためのウレタンリンカーを開示する。ポリエチレングリコールが
タンパク質にリンカーによって結合されている、タンパク質−ポリエチレングリ
コール結合体はまた、タンパク質と以下のような化合物との反応により生成され
得る：ＭＰＥＧ−スクシンイミジルスクシネート、１，１’−カルボニルジイミ
ダゾールで活性化されたＭＰＥＧ、ＭＰＥＧ−２，４，５−トリクロロフェニル
カーボネート（ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｐｅｎｙｌｃａｒｂｏｎａｔｅ）、ＭＰＥＧ
−ｐ−ニトロフェノールカーボネート、および種々のＭＰＥＧ−スクシネート誘
導体。多数のさらなるポリエチレングリコール誘導体、およびポリエチレングリ
コールをタンパク質に結合させるための反応化学は、ＷＯ９８／３２４６６（そ
の開示全体が本明細書中に参考として援用される）に記載される。本明細書中に
述べられる反応化学を使用して生成されるペグ化タンパク質生成物は、本発明の
範囲内に包含される。

【０１９８】 本発明の各タンパク質に結合されるポリエチレングリコール部分の数（すなわ
ち、置換の程度）はまた、変化し得る。例えば、本発明のペグ化タンパク質は、
平均で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０
個、またはそれより多くのポリエチレングリコール分子に連結され得る。同様に
、置換の平均の程度は、タンパク質分子１つ当たり、例えば１〜３、２〜４、３
〜５、４〜６、５〜７、６〜８、７〜９、８〜１０、９〜１１、１０〜１２、１
１〜１３、１２〜１４、１３〜１５、１４〜１６、１５〜１７、１６〜１８、１
７〜１９、または１８〜２０個のポリエチレングリコール部分の範囲内である。
置換の程度を決定するための方法は、例えば、Ｄｅｌｇａｄｏら、Ｃｒｉｔ．Ｒ
ｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓ．９：２４９−３０４（
１９９２）において考察される。

【０１９９】 （抗体） 本発明はさらに、本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体およびＴ細胞
抗原レセプター（ＴＣＲ）に関する。本発明の抗体は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、Ｉｇ
Ｇ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含
む）、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭおよびＩｇＹを含む。本明細書中で使用され
る場合、用語「抗体」（Ａｂ）は、単鎖の全抗体およびその抗原結合フラグメン
トを含む全抗体を含むことを意味する。最も好ましくは、この抗体は、本発明の
ヒト抗原結合抗体フラグメントであり、これには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（
ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ
ｓ（ｓｄＦｖ）およびＶ_LまたはＶ_Hドメインのいずれかを含むフラグメントが挙
げられるがこれらに限定されない。この抗体は、鳥類および哺乳動物を含む任意
の動物起源であり得る。好ましくは、この抗体は、ヒト、マウス、ウサギ、ヤギ
、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書中で使用される
場合、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み
、そしてヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１つ以上のヒト免疫グロ
ブリンに対するトランスジェニック動物でかつ内因性免疫グロブリンを発現しな
い動物（以下におよび、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第
５，９３９，５９８号に記載されるように）から単離された抗体を含む。

【０２００】 単鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を単独で、または以下
の全体もしくは部分と組み合わせて含み得る：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２およ
びＣＨ３ドメイン。本発明には、可変領域ならびにヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２
およびＣＨ３ドメインの任意の組み合わせもまた含まれる。本発明はさらに、本
発明のポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体、ポリクローナル抗
体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ならびにヒトモノクローナル抗体およびヒトポリ
クローナル抗体を含む。本発明はさらに、本発明の抗体に対して抗イディオタイ
プである抗体を含む。

【０２０１】 本発明の抗体は、単一抗原特異的、二抗原特異的、三抗原特異的であり得るか
、またはより多い複数特異性の抗体であり得る。複数特異的な抗体は、本発明の
ポリペプチドの異なるエピトープについて特異的であり得るか、または本発明の
ポリペプチドおよび異種の組成物（例えば、異種ポリペプチドもしくは固体支持
体物質）の両方に特異的であり得る。例えば、ＷＯ ９３／１７７１５；ＷＯ９
２／０８８０２；ＷＯ ９１／００３６０；ＷＯ ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔ
，Ａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０〜６９（１９９１）；米国特許第５
，５７３，９２０号、同第４，４７４，８９３号、同第５，６０１，８１９号、
同第４，７１４，６８１号、同第４，９２５，６４８号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ，Ｓ
．Ａ．ら、Ｊ．Ｉｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜１５５３（１９９２）を参照
のこと。

【０２０２】 本発明の抗体は、抗体により認識されるかまたは特異的に結合される本発明の
ポリペプチドのエピトープまたは部分に関して、記載されるかまたは特定され得
る。このエピトープまたはポリペプチド部分は、本明細書において記載されるよ
うに、例えば、Ｎ末端位置およびＣ末端位置によって、近接するアミノ酸残基の
サイズによって特定され得るか、または表および図に列挙され得る。本発明の任
意のエピトープまたはポリペプチドに特異的に結合する抗体はまた、除外され得
る。従って、本発明は、本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体を含み、
そしてこの抗体の除外を許容する。

【０２０３】 本発明の抗体はまた、その交差反応性について記載されるか、または特定され
得る。本発明のポリペプチドのいかなる他のアナログ、オルトログ（ｏｒｔｈｏ
ｌｏｇ）またはホモログにも結合しない抗体が含まれる。本発明には、本発明の
ポリペプチドに対して９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５
％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、および５０％未満
の同一性（当該分野で公知の方法および本明細書において記載された方法を用い
て計算される）を有するポリペプチドを結合しない抗体もまた含まれる。本発明
には、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下（本明細書において記
載される）で本発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチド
によりコードされるポリペプチドにのみ結合する抗体がさらに含まれる。本発明
の抗体はまた、その結合親和性について記載または特定され得る。好ましい結合
親和性としては、５×１０^-6Ｍ、１０^-6Ｍ、５×１０^-7Ｍ、１０^-7Ｍ、５×１０ ^-8 Ｍ、１０^-8Ｍ、５×１０^-9Ｍ、１０^-9Ｍ、５×１０^-10Ｍ、１０^-10Ｍ、５×１
０^-11Ｍ、１０^-11Ｍ、５×１０^-12Ｍ、１０^-12Ｍ、５×１０^-13Ｍ、１０^-13Ｍ、
５×１０^-14Ｍ、１０^-14Ｍ、５×１０^-15Ｍ、および１０^-15Ｍ未満の解離定数（
すなわちＫｄ）を有する親和性が挙げられる。

【０２０４】 本発明はまた、競合的な結合を決定するための当該分野で公知の任意の方法（
例えば、本明細書中に記載されるイムノアッセイ）によって決定される際の、本
発明のエピトープに対する抗体の結合を競合的に阻害する抗体を提供する。好ま
しい実施形態において、抗体は、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なく
とも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％、エピトープに対する
結合を競合的に阻害する。

【０２０５】 本発明の抗体は、本発明のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストと
して作用し得る。例えば、本発明は、レセプター／リガンドと本発明のポリペプ
チドとの部分的かまたは全体的かのいずれかの相互作用を途絶させる抗体を含む
。本発明は、レセプター特異的抗体およびリガンド特異的抗体の両方を特徴とす
る。本発明はまた、リガンド結合を妨げないがレセプターの活性化を妨げるレセ
プター特異的抗体の特徴を有する。レセプターの活性化（すなわち、シグナル伝
達）は、本明細書中に記載される技術、またはさもなくば当該分野で公知の技術
によって決定され得る。例えば、レセプターの活性化は、レセプターのリン酸化
（例えば、チロシンまたはセリン／スレオニン）あるいは（例えば、上記に記載
されたような）免疫沈降、続いてウエスタンブロット分析によるその基質を検出
することによって決定され得る。特定の実施形態において、抗体は、抗体が非存
在下の活性の少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なく
とも６０％、または少なくとも５０％阻害されたリガンド活性またはレセプター
活性を与える。

【０２０６】 本発明はまた、リガンド結合およびレセプター活性化の両方を妨げるレセプタ
ー特異的抗体、ならびにレセプター−リガンド複合体を認識し、そして、好まし
くは、結合していないレセプターまたは結合していないリガンドを特異的に認識
しない抗体を特徴とする。同様に、本発明には、リガンドに結合し、そしてリガ
ンドのレセプターへの結合を妨げる中和抗体、ならびにリガンドに結合し、それ
によってレセプター活性化を妨げるが、リガンドがレセプターに結合することは
妨げない抗体が含まれる。さらに本発明に含まれるのは、レセプターを活性化す
る抗体である。これらの抗体は、レセプターアゴニストのように作用し得、すな
わち、リガンド媒介のレセプター活性化の生物学的活性の全体またはサブセット
（ｓｕｂｓｅｔ）のいずれかを増強または活性化する。この抗体は、本明細書中
に開示される本発明のペプチドの特異的な生物学的活性を含む生物学的活性に対
するアゴニスト、アンタゴニストまたはインバース（ｉｎｖｅｒｓｅ）アゴニス
トとして特定化され得る。上記の抗体アゴニストは、当該分野で公知の方法を用
いて作製され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，
８１１，０９７号；Ｄｅｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ９２（６）：１９８１−１９８８
（１９９８）；Ｃｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６８−
３６７８（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）：
１７８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ：５８（１
５）：３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
６０（７）：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓ
ｃｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）
；Ｌｉａｕｔａｒｄら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９（４）：２３３−２４１（１９９
７）；Ｃａｒｌｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９
５−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら、Ｎｅｕｒｏｎ １４（４）：
７５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ６（９）
：１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ
８（１）：１４−２０（１９９６）（上記の文献は全て、本明細書中でその全体
が参考として援用される）を参照のこと。

【０２０７】 本発明の抗体は、インビトロおよびインビボの両方における診断方法ならびに
治療方法を含む、本発明のポリペプチドを精製、検出および標的化する、当該分
野において公知の方法が挙げられるが、これに限定されない用途を有する。例え
ば、この抗体は、生物学的サンプルにおいて本発明のポリペプチドのレベルを定
性的および定量的に測定するためのイムノアッセイにおいて用途を有する。例え
ば、Ｈａｒｌｏｗら，ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡ
ＮＵＡＬ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，第２版，１９８８）（その全体が参考として本明細書中に援用され
る）を参照のこと。

【０２０８】 本発明の抗体は、単独で、または他の組成物との組み合わせのいずれかで用い
られ得る。この抗体は、さらに、Ｎ末端もしくはＣ末端で異種ポリペプチドに組
換え的に融合され得るか、またはポリペプチドもしくは他の組成物に化学的に結
合（共有結合および非共有結合を含む）され得る。例えば、本発明の抗体は、検
出アッセイにおける標識として有用な分子およびエフェクター分子（例えば、異
種ポリペプチド、薬物、または毒素）に組換え的に融合または結合され得る。例
えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０８４９５；ＷＯ９１／１４４３８；ＷＯ８９／１
２６２４；米国特許第５，３１４，９９５号；および欧州特許第０ ３９６ ３
８７号を参照のこと。

【０２０９】 本発明の抗体は、改変された（すなわち、共有結合性付着（ｃｏｖａｌｅｎｔ
ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）が、抗体が抗イディオタイプ応答を産生するのを妨が
ないような抗体に対する任意の型の分子の共有結合性付着による）誘導体を含む
。例えば、制限されないが、抗体誘導体には、例えば、グリコシル化、アセチル
化、ぺグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブ
ロック基（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）による誘導体化、タンパク質分解性
切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質への連結などによって改変された抗
体が挙げられる。多数の任意の化学的改変が、特異的化学切断、アセチル化、ホ
ルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成などを含むが、これらに制限されない公
知の技術によって実行され得る。さらに、誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ
酸を含み得る。

【０２１０】 本発明の抗体は、当該分野で公知の任意の適切な方法によって産生され得る。
目的の抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で周知の種々の手順によっ
て産生され得る。例えば、本発明のポリペプチドが種々の宿主動物（ウサギ、マ
ウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）に投与され得、抗原に対して
特異的なポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導する。種々のアジュバント
が、宿主種に依存して、免疫学的応答を増加させるために使用され得、そしてフ
ロイント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル（ｍ
ｉｎｅｒａｌ ｇｅｌ）、リゾレシチンのような表面活性物質、プルロニック（
ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、キーホー
ルリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カルメット
−ゲラン杆菌）およびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのような
潜在的に有用なヒトアジュバントを含むが、これらに限定されない。このような
アジュバントはまた、当該分野で周知である。

【０２１１】 モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレ
イ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該分野で公知の広範な種々
の技術を用いて調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該分野で公知
の以下に挙げられるハイブリドーマ技術を使用して産生され得、例えば、Ｈａｒ
ｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，
（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６
８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９８１）（上記の参考文献は、その全体が
参考として援用される）に教示される。用語「モノクローナル抗体」とは、ハイ
ブリドーマ技術を通して生成された抗体に限定されない。用語「モノクローナル
抗体」とは、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一の
クローンに由来する抗体をいい、そしてモノクローナル抗体が生成される方法で
はない。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディ
スプレイ技術を含む、当該分野で公知の広範な種々の技術を用いて調製され得る
。

【０２１２】 ハイブリドーマ技術としては、当該分野で公知の方法、ならびにＨａｒｌｏｗ
ら、ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ（Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版
、１９８８）；およびＨａｍｍｅｒｌｉｎｇら、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴ
ＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ Ｔ−ＣＥＬＬ ＨＹＢＲＩＤＯＭＡＳ ５６３〜６８
１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）（これらの参考文献は、その全体
が参考として援用される）に教示される技術が挙げられる。

【０２１３】 ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメント
作製のため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメント作製のため）のよう
な酵素を用いて、タンパク質分解切断により作製され得る。

【０２１４】 あるいは、本発明の抗体は、当該分野で公知の方法を用いる組換えＤＮＡ技術
およびファージディスプレイ技術の適用、または合成化学により作製され得る。
例えば、本発明の抗体は、当該分野で公知の種々のファージディスプレイ方法を
用いて調製され得る。ファージディスプレイ方法において、機能的抗体ドメイン
は、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面に
提示される。所望の結合特性を有するファージは、抗原（代表的には、固体表面
またはビーズに結合または捕捉された抗原）を用いて直接的に選択することによ
り、レパートリー抗体ライブラリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（
例えば、ヒトまたはマウス）から選択される。これらの方法において用いられる
ファージは、代表的には、ファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質またはファージ遺伝
子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換え的に融合されたＦａｂ、Ｆｖまたはジ
スルフィド安定化Ｆｖの抗体ドメインを有するｆｄおよびＭ１３を含む糸状ファ
ージである。本発明の抗体を作製するために用いられ得るファージディスプレイ
方法の例としては、以下に開示される方法が挙げられる：Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ
．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１〜５０（１９９５）
；Ａｍｅｓ，Ｒ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７
７〜１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ら、Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２〜９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃ，Ｌ．
ら、Ｇｅｎｅ １８７ ９〜１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．ら、Ａ
ｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１〜２８０（１９９
４）；ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＷＯ ９０／０２８０９；ＷＯ ９１／
１０７３７；ＷＯ ９２／０１０４７；ＷＯ ９２／１８６１９；ＷＯ ９３／
１１２３６；ＷＯ ９５／１５９８２；ＷＯ ９５／２０４０１；ならびに米国
特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４
８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５
０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５
，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、
同第５，６５８，７２７号および同第５，７３３，７４３号（これらの参考文献
は、その全体が参考として援用される）。

【０２１５】 上記参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージ由来の領域
をコードする抗体は、ヒト抗体を含む全抗体または任意の他の所望の抗原結合フ
ラグメントを作製するために単離および使用され得、そして哺乳動物細胞、昆虫
細胞、植物細胞、酵母および細菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る
。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に作
製するための技術はまた、以下に開示される方法のような当該分野で公知の方法
を利用して用いられ得る：ＷＯ ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ，Ｒ．Ｌ
．ら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２：８６４〜８６９（１９９２）；およ
びＳａｗａｉ，Ｈ．ら、ＡＪＲＩ ３４：２６〜３４（１９９５）；およびＢｅ
ｔｔｅｒ，Ｍ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１〜１０４３（１９９８）
（これらの参考文献は、その全体が参考として援用される）。

【０２１６】 単鎖のＦｖおよび抗体を作製するために用いられ得る技術の例としては、米国
特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎら
、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６〜８８（１９９
１）；Ｓｈｕ，Ｌ．ら、ＰＮＡＳ ９０：７９９５〜７９９９（１９９３）；お
よびＳｋｅｒｒａ，Ａ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８〜１０４０（１
９８８）に記載される技術が挙げられる。ヒトにおける抗体のインビボ使用およ
びインビトロ検出アッセイを含むいくつかの用途のために、キメラ抗体、ヒト化
抗体またはヒト抗体の使用が好適であり得る。キメラ抗体を作製するための方法
は、当該分野において公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：
２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓ，Ｓ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ １２５：１９１〜２０２（１９８９）；および米国特許第５，８０
７，７１５号を参照のこと。抗体は、以下に挙げられる種々の技術を用いてヒト
化され得る：ＣＤＲ−移植術（欧州特許第０ ２３９ ４００号；ＷＯ ９１／
０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号
）、ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェイシング（ｒｅｓｕ
ｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第０ ５９２ １０６号；欧州特許第０ ５１９
５９６号；Ｐａｄｌａｎ Ｅ．Ａ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ ２８（４／５）：４８９〜４９８（１９９１）； Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ Ｇ
．Ｍ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５〜８１４（１
９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ Ｍ．Ａ．ら、ＰＮＡＳ ９１：９６９〜９７３）（
１９９４）、およびチェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ
）（米国特許第５，５６５，３３２号）。ヒト抗体は、上記のファージディスプ
レイ方法を含む当該分野で公知の種々の方法により作製され得る。米国特許第４
，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、同第５，５４５，８０６号お
よび同第５，８１４，３１８号；ならびにＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８
／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６
／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５、およびＷＯ ９１／１０７４１（これ
らの参考文献はその全体が参考として援用される）もまた参照のこと。

【０２１７】 さらに、本発明には、本発明のポリペプチドに組換え的に融合または化学結合
（共有結合および非共有結合の両方を含む）した抗体が含まれる。この抗体は、
本発明のポリペプチド以外の抗原に特異的であり得る。例えば、抗体は、本発明
のポリペプチドを特定の細胞表面レセプターに特異的な抗体に融合または結合す
ることにより、インビトロまたはインビボのいずれかで本発明のポリペプチドを
特定の細胞型へ標的化するために用いられ得る。本発明のポリペプチドに対して
融合または結合された抗体はまた、当該分野で公知の方法を用いてインビトロイ
ムノアッセイおよび精製方法において用いられ得る。例えば、Ｈａｒｂｏｒら、
前出、およびＷＯ ９３／２１２３２；欧州特許第０ ４３９ ０９５号；Ｎａ
ｒａｍｕｒａ，Ｍ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３９：９１〜９９（１９９
４）；米国特許第５，４７４，９８１号；Ｇｉｌｌｉｅｓ，Ｓ．Ｏ．ら、ＰＮＡ
Ｓ ８９：１４２８〜１４３２（１９９２）；Ｆｅｌｌ，Ｈ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１４６：２４４６〜２４５２（１９９１）（これらの参考文献は、
その全体が参考として援用される）を参照のこと。

【０２１８】 本発明は、可変領域以外の抗体ドメインと融合されたか、または結合体化され
た本発明のポリペプチドを含む組成物をさらに含む。例えば、本発明のポリペプ
チドは、抗体のＦｃ領域またはその部分と融合され得るか、またはそれに結合さ
れ得る。本発明のポリペプチドに融合した抗体部分は、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメ
イン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインまたは完全なドメインまたはその
部分の任意の組み合わせを含み得る。本発明のポリペプチドは、当該分野で公知
の方法を用いて、ポリペプチドのインビボでの半減期を増大するか、またはイム
ノアッセイにおける使用のために上記の抗体部分に融合または結合体化され得る
。このポリペプチドはまた、上記の抗体部分に融合されるか、または結合されて
、マルチマーを形成し得る。例えば、本発明のポリペプチドに融合されたＦｃ部
分は、Ｆｃ部分の間のジスルフィド結合によってダイマーを形成し得る。より高
度なマルチマー形態は、ＩｇＡおよびＩｇＭの部分にポリペプチドを融合するこ
とにより作製され得る。本発明のポリペプチドを抗体部分に融合または結合する
ための方法は、当該分野で公知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３
号、同第５，６２２，９２９号、同第５，３５９，０４６号、同第５，３４９，
０５３号、同第５，４４７，８５１号、同第５，１１２，９４６号；ＥＰ ０
３０７ ４３４号、ＥＰ ０ ３６７ １６６号；ＷＯ９６／０４３８８号、Ｗ
Ｏ９１／０６５７０号；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ，Ａ．ら、（１９９１）ＰＮＡＳ
８８：１０５３５−１０５３９；Ｚｈｅｎｇ，Ｘ．Ｘ．ら、（１９９５）Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００；ならびにＶｉｌ，Ｈ．ら、（１９
９２）ＰＮＡＳ ８９：１１３３７−１１３４１（上記の参考文献は、その全体
が参考として援用される）を参照のこと。

【０２１９】 本発明はさらに、本発明のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストと
して作用する抗体に関する。本発明のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴ
ニストとして作用する抗体としては、例えば、本発明のポリペプチドとの、部分
的にかまたは全体的にのいずれかでのレセプター／リガンド相互作用を破壊する
抗体が挙げられる。例えば、本発明は、本発明のタンパク質がマルチマー化する
能力を破壊する抗体を含む。別の例において、本発明は、本発明のタンパク質が
マルチマー化することを可能にするが、本発明のタンパク質が１つ以上のＴＲ２
レセプターまたはリガンド（例えば、ＡＩＭ−ＩＩ（国際出願公開番号ＷＯ９７
／３４９１１）、リンホトキシン−α、およびヘルペスウイルスタンパク質ＨＳ
Ｖ１ ｇＤ）を結合する能力を破壊する抗体を含む。なお別の例において、本発
明は、本発明のタンパク質がマルチマー化すること、およびＴＲ２レセプターま
たはリガンド（例えば、ＡＩＭ−ＩＩ（国際出願公開番号ＷＯ９７／３４９１１
）、リンホトキシン−α、およびヘルペスウイルスタンパク質ＨＳＶ１ ｇＤ）
を結合することを可能にするが、ＴＲ２レセプター／リガンド複合体に関連する
生物学的活性をブロックする抗体を含む。

【０２２０】 本発明のポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用する抗体
はまた、レセプター特異的抗体およびリガンド特異的抗体の両方を含む。リガン
ド結合を妨げないがレセプターの活性化を妨げるレセプター特異的抗体がまた含
まれる。レセプターの活性化（すなわち、シグナル伝達）は、本明細書中に記載
される技術、またはさもなくば当該分野で公知の技術によって決定され得る。リ
ガンド結合およびレセプター活性化の両方を妨げるレセプター特異的抗体もまた
含まれる。同様に、リガンドに結合し、そしてリガンドのレセプターへの結合を
妨げる中和抗体、ならびにリガンドに結合し、それによってレセプター活性化を
妨げるが、リガンドがレセプターに結合することは妨げない抗体が含まれる。さ
らに含まれるのは、レセプターを活性化する抗体である。これらの抗体は、リガ
ンド媒介のレセプター活性化により影響を受ける生物学的活性の全体または一部
のいずれかに対するアゴニストのように作用し得る。この抗体は、本明細書中に
開示される特異的な活性を含む生物学的活性に対するアゴニストまたはアンタゴ
ニストとして特定化され得る。上記の抗体アゴニストは、当該分野で公知の方法
を用いて作製され得る。例えば、ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１
，０９７号；Ｄｅｎｇ，Ｂ．ら、Ｂｌｏｏｄ ９２：１９８１−１９８８（１９
９８）；Ｃｈｅｎ，Ｚ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：３６６８−３６７８
（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐ，Ｊ．Ａ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：１７
８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕ，Ｚ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ：５８：
３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎ，Ｄ．Ｙ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１６０：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ
．Ｓｃｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄ，Ｖ
．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０５：１７７−１９０（１９９
７）；Ｌｉａｕｔａｒｄ，Ｊ．ら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９（４）：２３３−２４
１（１９９７）；Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｎ．Ｇ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７
２：１１２９５−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎ，Ｒ．Ｅ．ら、Ｎｅ
ｕｒｏｎ １４：７５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒ，Ｙ．Ａ．ら、Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅ ６：１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋ，
Ｐ．ら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８：１４−２０（１９９６）（上記の文献は、その
全体が参考として援用される）を参照のこと。

【０２２１】 ハイブリドーマ技術を用いて特定の抗体を産生およびスクリーニングする方法
は、慣用的であり、そして当該分野に周知であり、そして実施例１７に詳細に議
論される。簡単には、マウスは、本発明のポリペプチドまたはそのようなペプチ
ドを発現する細胞を用いて免疫され得る。一旦免疫応答が検出される（例えば、
抗原に特異的な抗体がマウスの血清中に検出される）と、マウスの脾臓を収集し
そして脾細胞を単離する。次に、脾細胞を周知の技術によって任意の適切なメラ
ノーマ細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞）に融
合させる。ハイブリドーマを限定希釈によって選択およびクローン化する。次に
、ハイブリドーマクローンを、本発明のポリペプチドに結合し得る抗体を分泌す
る細胞について当該分野で公知の方法によってアッセイする。一般的に高いレベ
ルの抗体を含む腹水（ａｓｃｉｔｅｓ ｆｌｕｉｄ）が、陽性ハイブリドーマク
ローンを用いてマウスを免疫させることによって、産生され得る。

【０２２２】 従って、本発明は、モノクローナル抗体および本発明の抗体を分泌するハイブ
リドーマ細胞を培養する工程を包含する方法によって産生される抗体を、産生す
る方法を提供し、ここで、好ましくは、このハイブリドーマは、骨髄腫細胞を用
いた本発明の抗原と免疫させたマウスから単離された脾細胞とを融合させること
によって、次いで本発明のポリペプチドと結合し得る抗体を分泌するハイブリド
ーマクローンについての融合物から生じるハイブリドーマをスクリーニングする
ことによって産生される。

【０２２３】 特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術によって産生さ
れ得る。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ）’２フラグメントは、（Ｆａ
ｂフラグメントを産生するための）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）２フラグメン
トを産生するための）ペプシンのような酵素を使用して、免疫グロブリン分子の
タンパク質分解切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、可
変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。

【０２２４】 例えば、本発明の抗体はまた、当該分野で公知の種々のファージディスプレイ
方法を用いて産生され得る。ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメ
インは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表
面に提示される。特に、そのようなファージは、レパートリーまたはコンビナト
リアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現される抗原結合
ドメインを提示するために利用され得る。目的の抗原に結合する抗原結合ドメイ
ンを発現するファージは、抗原を用いて選択または同定され得る（例えば、標識
した抗体あるいは固体表面またはビーズに結合または補足された抗原を使用する
）。これらの方法において用いられるファージは、代表的には、ファージ遺伝子
ＩＩＩタンパク質またはファージ遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換え
的に融合されたＦａｂ、Ｆｖまたはジスルフィド安定化されたＦｖの抗体ドメイ
ンを有するファージから発現されたｆｄおよびＭ１３結合ドメインを含む糸状フ
ァージ（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｐｈａｇｅ）である。本発明の抗体を作製す
るために用いられ得るファージディスプレイ方法の例としては、以下に開示され
る方法が挙げられる：Ｂｒｉｎｋｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ １８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ １８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇ
ｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８（１９９４）；Ｐｅ
ｒｓｉｃら、Ｇｅｎｅ １８７ ９−１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎら、Ａｄ
ｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１−２８０（１９９４
）；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開ＷＯ ９０／０
２８０９；ＷＯ ９１／１０７３７；ＷＯ ９２／０１０４７；ＷＯ ９２／１
８６１９；ＷＯ ９３／１１２３６；ＷＯ ９５／１５９８２；ＷＯ ９５／２
０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３，４０９
号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，４２７，
９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同第５，５
７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号；同第
５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３号
および同第５，９６９，１０８号（上記の参考文献の各々は、本明細書中でその
全体が参考として援用される）。

【０２２５】 上記参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体をコ
ードする領域は、ヒト抗体を含む抗体の全体または任意の他の所望の抗原結合フ
ラグメントを作製するために単離されそして用いられ得、そして（例えば、以下
に詳細が記載されるように）哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細
菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’お
よびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え的に作製するための技術はまた、当該
分野で公知の方法を用いて使用され得る。このような方法は、例えば、以下に開
示される：ＰＣＴ公開ＷＯ ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、ＢｉｏＴ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４−８６９（１９９２）；およびＳａｗ
ａｉら、ＡＪＲＩ ３４：２６−３４（１９９５）；およびＢｅｔｔｅｒら、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３（１９９８）（これらの参考文献は
、その全体が参考として援用される）。

【０２２６】 単鎖のＦｖｓおよび抗体を作製するために用いられ得る技術の例としては、米
国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８（１９
９１）；Ｓｈｕら、ＰＮＡＳ ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；および
Ｓｋｅｒｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に
記載される技術が挙げられる。ヒトにおける抗体のインビボにおける使用および
インビトロ検出アッセイを含むいくつかの用途のために、キメラ抗体、ヒト化抗
体またはヒト抗体の使用が好ましくあり得る。キメラ抗体とは、抗体の異なる部
分が、異なる動物種に由来する分子（例えば、マウスモノクローナル抗体由来の
可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体）である。キメラ抗体
を作製するための方法は、当該分野において公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓ
ｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら、（１９８９）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２；米国特許第５，
８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６，３９７
号を参照のこと（これらはそれらの全体が、参考として本明細書中に援用される
）。ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）および
ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望された抗原に結
合する非ヒト種抗体由来の抗体分子である。しばしば、ヒトフレームワーク領域
内のフレームワーク残基（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｓｉｄｕｅ）は、抗原結合
を変化させるため（好ましくは改善させるために）ＣＤＲドナー抗体由来の対応
残基と置換される。これらフレームワークの置換は、当該分野で周知の方法によ
って同定され、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するための
ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位置
における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較による。（例えば
、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ．ら、
Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）を参照のこと。これらはそれらの全
体が参考として本明細書中に援用される）。抗体は、以下を含む当該分野で公知
の種々の技術を用いてヒト化され得る：例えば、ＣＤＲ−移植（欧州特許第２３
９，４００号；ＰＣＴ公開ＷＯ ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５
３９号；同第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号）、ベニヤ
リング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉ
ｎｇ）（欧州特許第５９２，１０６号；同第５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ、
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８
（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ ９
１：９６９−９７３（１９９４））、およびチェーンシャッフリング（ｃｈａｉ
ｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）。

【０２２７】 完全なヒト抗体は、ヒト患者の治療的処置に対して特に所望される。ヒト抗体
は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いた上記のファー
ジディスプレイ法を含む当該分野で公知の種々の方法により作製され得る。米国
特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；ならびにＰＣＴ
公開ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９
３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３
５、およびＷＯ ９１／１０７４１；（これらの各々はその全体が参考として本
明細書中に援用される）もまた参照のこと。

【０２２８】 ヒト抗体はまた、機能的内因性免疫グロブリンの発現は出来ないが、ヒト免疫
グロブリン遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを用いて産生され得る
。例えば、ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子およびヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子
の複合体は、無作為にまたは相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入され得
る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｒｅｇｉｏｎ）は、ヒト重鎖遺伝子およびヒト軽鎖遺伝子に加えて、マウスの
胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖免疫グロブリン遺伝子およびマウス軽鎖
免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン座の導入と別々
にまたは同時に非機能的にされ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合性の欠失は、内
因性抗体の産生を妨げる。改変された胚性幹細胞を拡張させ、そしてキメラマウ
スを産生するために胚盤胞中に微量注入する。次いで、キメラマウスを、ヒト抗
体を発現するホモ接合性の子孫を産生するために繁殖させる。トランスジェニッ
クマウスを、選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全体または部分
）を用いて通常の様式で免疫する。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来の
ハイブリドーマ技術を用いた免疫したトランスジェニックマウスから得られ得る
。トランスジェニックマウスに保持されたヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ
細胞分化の間に再編成し、そしてその後、クラススイッチングおよび体細胞変異
を受ける。従って、そのような技術の使用によって、治療的に有用なＩｇＧ抗体
、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体の産生が可能である。ヒト抗体を産
生するためのこの技術の概要については、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（
１９９５、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３）を参照のこと
。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術のならびに
そのような抗体を産生するためのプロトコールの詳細な議論については、例えば
、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７
３５；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，
６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同
第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；および同第５，９３９，
５９８号を参照のこと（これらはその全体が本明細書中に参考として援用される
）。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＧｅ
ｎｐｈａｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のような企業は、上記の技術に類似し
た技術を用いて選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに従事し得る。

【０２２９】 選択されたエピトープを完全に認識するヒト抗体を、「ガイドされた（ｇｕｉ
ｄｅｄ）選択」といわれる技術を用いて産生し得る。このアプローチにおいて、
選択された非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）は、同じエピトー
プを完全に認識するヒト抗体の選択を導くために使用される。（Ｊｅｓｐｅｒｓ
ら、Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：８９９−９０３（１９８８））。

【０２３０】 上で議論したように、本発明のＴＲ２レセプタータンパク質に対する抗体は、
当業者に周知の技術を用いてＴＲ２レセプターを「模倣する」抗イディオタイプ
抗体を産生するために順々に利用され得る。（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎおよ
びＢｏｎａ、ＦＡＳＥＢ Ｊ．７（５）：４３７−４４４；（１９８９）および
Ｎｉｓｓｉｎｏｆｆ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９−２４３８
（１９９１）を参照のこと。）例えば、結合し、そしてＴＲ２レセプターの多量
体化（ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）および／またはリガンドに対する結合
を競合的に阻害する抗体が、ＴＲ２レセプターの多量体化ドメインおよび／また
は結合ドメインを「模倣する」抗イディオタイプを産生するために使用され得、
そして結果としてＴＲ２レセプターおよび／またはそのリガンドに結合し、そし
て中和する。このような抗イディオタイプまたはそのような抗イディオタイプの
Ｆａｂフラグメントの中和は、ＴＲ２レセプターリガンドを中和するための治療
的レジメンに使用され得る。例えば、そのような抗イディオタイプ抗体は、ＴＲ
２レセプターに結合するためあるいはＴＲ２レセプターまたはリガンドに結合す
るために使用され得、そしてそれによってＴＲ２レセプターによって媒介される
アポトーシスの阻害がブロックされる。

【０２３１】 （Ａ．抗体をコードするポリヌクレオチド） 本発明はさらに、本発明の抗体およびそのフラグメントをコードするヌクレオ
チド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、ストリンジェント
な、またはより低いストリジェンシーなハイブリダイゼーション条件下で（例え
ば、本明細書中に定義されるような）抗体（好ましくは、本発明のポリペプチド
と特異的に結合する、好ましくは、配列番号２；配列番号５配列番号８または配
列番号２６のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合する抗体）をコードする
ポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む。

【０２３２】 ポリヌクレオチドが、当該分野で公知の任意の方法によって得られ得、そして
そのポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定される。例えば、抗体のヌクレ
オチド配列が知られている場合、この抗体をコードするポリヌクレオチドは、化
学的に合成されたオリゴヌクレオチドから構築され得（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅ
ｒら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９４）に記載されるよ
うな）、これは、簡単にいうと、以下の工程を包含する：この抗体をコードする
配列の部分を含むオーバーラップするオリゴヌクレオチドの合成、これらのオリ
ゴヌクレオチドのアニーリングおよび連結、次いでＰＣＲによる連結されたオリ
ゴヌクレオチドの増幅。

【０２３３】 あるいは、抗体をコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源からの核酸か
ら生成され得る。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手不可能だが
、その抗体分子の配列が既知である場合、その免疫グロブリンをコードする核酸
は、適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または抗体を発現する
任意の組織もしくは細胞（例えば、本発明の抗体の発現のために選択されたハイ
ブリドーマ細胞）から生成されたｃＤＮＡライブラリー、またはそれから単離さ
れた核酸（好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ））から、例えば、その抗体をコードする
ｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定するために、配列の３’末
端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅
によって、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使
用するクローニングによって得られ得る。ＰＣＲによって生成された増幅された
核酸は、次いで、当該分野で周知の任意の方法を用いて、複製可能なクローニン
グベクターにクローニングされ得る。

【０２３４】 一旦、抗体のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列が決定されると、
抗体のヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で周知の
方法（例えば、組換えＤＮＡ技術、部位特異的変異誘発、ＰＣＲなど（例えば、
Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ
およびＡｕｓｕｂｅｌら編、１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ
，ＮＹに記載の技術を参照のこと。これらは両方がその全体において本明細書に
参考として援用される。））を用いて操作され、例えば、アミノ酸の置換、欠失
、および／または挿入を作製するように異なるアミノ酸配列を有する抗体を生成
し得る。

【０２３５】 特定の実施形態において、重鎖および／または軽鎖の可変ドメインのアミノ酸
配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列の同定のために、当該分野において周
知の方法によって（例えば、配列超可変性の領域を決定するために、他の重鎖、
および軽鎖の可変領域を既知のアミノ酸配列と比較することによって）調べられ
得る。慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて、１つ以上のＣＤＲが、前述のように
フレームワーク領域内に（例えば、非ヒト抗体をヒト化するために、ヒトフレー
ムワーク領域中に）挿入され得る。このフレームワーク領域は天然に存在し得る
か、またはコンセンサスフレームワーク領域であり得、そして好ましくはヒトフ
レームワーク領域であり得る（例えば、列挙したヒトフレームワーク領域につい
ては、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９（１
９９８）を参照のこと）。好ましくは、フレームワーク領域およびＣＤＲの組み
合わせによって生成されたポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドに特異的
に結合する抗体をコードする。好ましくは、上記に議論されるように、１つ以上
のアミノ酸置換は、フレームワーク領域内で作製され得、そして好ましくは、そ
のアミノ酸置換は、抗体のその抗原への結合を改善する。さらに、このような方
法は、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合が欠如した抗体分子を生成するように、
鎖内ジスルフィド結合に関与する１つ以上の可変領域のシステイン残基のアミノ
酸置換または欠失を作製するために使用され得る。ポリヌクレオチドへの他の変
更は、本発明によって、および当該分野の技術において包含される。

【０２３６】 さらに、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物学的
活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と共にスプライシングさせることによって、「
キメラ抗体」を産生するために開発された技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅ
ｒｇｅｒら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａ
ら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２−４５４）が使用され得る。上記
のように、キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種に由来する分子であり、こ
のような分子は、マウスｍＡｂおよびヒト免疫グロブリンの定常領域由来の可変
領域を有する（例えば、ヒト化抗体）。

【０２３７】 あるいは、単鎖抗体の産生に関する記載された技術（米国特許第４，６９４，
７７８号；Ｂｉｒｄ、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２；Ｈｕ
ｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５
：５８７９−５８８３；およびＷａｒｄら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３３４：
５４４−５４）が、単鎖抗体の産生に適応され得る。単鎖抗体は、Ｆｖ領域の重
鎖フラグメントおよび軽鎖フラグメントがアミノ酸架橋を介して連結されれるこ
とによって形成され、単鎖ポリペプチドを生じる。Ｅ．ｃｏｌｉにおける機能性
Ｆｖフラグメントのアセンブリのための技術もまた、使用され得る（Ｓｋｅｒｒ
ａら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８−１０４１）。

【０２３８】 （Ｂ．抗体を産生する方法） 本発明の抗体は、抗体を合成するための当該分野で公知の任意の方法によって
、特に、化学合成によって、または、好ましくは、組換え発現技術によって産生
され得る。

【０２３９】 本発明の抗体、またはそのフラグメント、誘導体もしくはアナログ（例えば、
本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖）の組換え発現は、その抗体をコードするポリ
ヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を必要とする。一旦、本発明の抗体
分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、あるいはそれらの部分（好ましくは、重鎖
または軽鎖の可変ドメインを含有する）をコードするポリヌクレオチドが得られ
ると、抗体分子の産生のためのベクターは、当該分野で周知の技術を用いる組換
えＤＮＡ技術によって生成され得る。従って、抗体をコードするヌクレオチド配
列を含有するポリヌクレオチドの発現によってタンパク質を調製するための方法
は、本明細書に記載される。当業者に周知の方法は、抗体をコードする配列なら
びに適切な転写制御シグナルおよび翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターの
構築のために使用され得る。これらの方法には、例えば、インビトロの組換えＤ
ＮＡ技術、合成技術、およびインビボの遺伝子組換えが挙げられる。従って、本
発明は、プロモーターに作動可能に連結された、本発明の抗体分子、あるいはそ
の重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインをコードするヌク
レオチド配列を含む、複製可能なベクターを提供する。このようなベクターは、
抗体分子の定常領域（例えば、ＰＣＴ公開 ＷＯ８６／０５８０７；ＰＣＴ公開
ＷＯ８９／０１０３６；および米国特許第５，１２２，４６４号を参照のこと
）をコードするヌクレオチド配列を含み得、そしてこの抗体の可変ドメインは、
重鎖または軽鎖の全体の発現のためにこのようなベクターにクローニングされ得
る。

【０２４０】 この発現ベクターは、従来技術によって宿主細胞へと移入され、そしてこのト
ランスフェクトされた細胞は、次いで、本発明の抗体を産生するために、従来技
術によって培養される。従って、本発明は、異種プロモーターに作動可能に連結
された、本発明の抗体、あるいはその重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオ
チドを含む宿主細胞を含む。二重鎖抗体の発現についての好ましい実施形態にお
いて、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、以下に詳述されるように
、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞中に同時発現され得る。

【０２４１】 種々の宿主発現ベクター系は、本発明の抗体分子を発現させるために利用され
得る。このような宿主発現系は、目的のコード配列が産生され、かつ続いて精製
され得るビヒクルを表わすが、また、適切なヌクレオチドをコードする配列で形
質転換またはトランスフェクトされる場合に、インサイチュで本発明の抗体分子
を発現し得る細胞を表わす。これらには、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：抗体をコードする配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラス
ミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターを用いて形質転換された細菌（例
えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のような微生物；抗体をコードす
る配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体をコードする配列を含む組換えウイ
ルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；組換え
ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タ
バコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染した植物細胞系または抗体をコードする
配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転
換された植物細胞系；あるいは哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（
例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物のウイルスに由来する
プロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス
７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例
えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、３Ｔ３細胞）。好ましくは、Ｅｓｃｈ
ｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのような細菌細胞、そしてより好ましくは、特に、組
換え抗体分子全体の発現のために真核生物細胞が、組換え抗体分子の発現のため
に使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要最初期遺伝子プロ
モーターエレメントのようなベクターと組み合わされた、チャイニーズハムスタ
ーの卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞が、抗体のための効果的な発現系
である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、１９８６、Ｇｅｎｅ ４５：１０１；Ｃｏｃｋｅ
ｔｔら、１９９０、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２）。

【０２４２】 細菌系において、多くの発現ベクターが、抗体分子の発現を意図する使用に依
存して有利に選択され得る。例えば、多量のこのようなタンパク質が産生される
べき場合、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、容易に精製される融合タン
パク質産物の高レベルの発現を指向するベクターが所望され得る。このようなベ
クターには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗体をコードする配
列がｌａｃＺをコードする領域と共にベクターにインフレーム（ｉｎ ｆｒａｍ
ｅ）で個別に連結され得、その結果、融合タンパク質が産生されるＥ．ｃｏｌｉ
発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、１９８３、ＥＭＢＯ Ｊ．２：１
７９１）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ、１９８５、Ｎｕｃｌ
ｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ
＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ、１９８９、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５
５０９）など。ｐＧＥＸベクターもまた、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ
（ＧＳＴ）との融合タンパク質として、外来性ポリペプチドを発現させるために
使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、そして溶解
した細胞から、マトリックスグルタチオン−アガロースビーズへの吸着および結
合、それに続く遊離グルタチオン存在化での溶出によって容易に精製され得る。
このｐＧＥＸベクターは、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含
むように設計され、その結果、このクローニングされた標的遺伝子産物は、ＧＳ
Ｔ部分から放出され得る。

【０２４３】 昆虫系においては、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体
病ウィルス（ＡｃＮＰＶ）は、異種遺伝子を発現するためのベクターとして使用
される。このウィルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞に
おいて増殖する。抗体をコードする配列は、このウィルスの非必須の領域（例え
ばポリヘドリン遺伝子）に個々にクローニングされ得、そしてＡｃＮＰＶプロモ
ーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に配置され得る。

【０２４４】 哺乳動物宿主細胞においては、多数のウィルスに基づく発現系が利用され得る
。アデノウィルスが発現ベクターとして使用される場合においては、目的の抗体
をコードする配列は、アデノウィルスの転写／翻訳制御複合体、例えば後期プロ
モーターおよび３つの部分に分かれるリーダー配列、に連結され得る。次いで、
このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボでの組換えによって、アデノウ
ィルスゲノムに挿入され得る。ウィルスのゲノムの非必須領域（例えば、Ｅ１ま
たはＥ３領域）における挿入は、生存可能で、感染した宿主において抗体分子を
発現する能力のある組換えウィルスを生じる（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ
、１９８４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３５５−
３５９を参照のこと）。特異的開始シグナルはまた、挿入された抗体をコードす
る配列の効率的な翻訳のために必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開
始コドンおよび隣接する配列を含む。さらに、この開始コドンは、挿入部分全体
の翻訳を確実にするために、所望されるコード配列のリーディングフレーム（ｒ
ｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）と相が同じでなければならない。これらの外因性翻
訳制御シグナルおよび開始コドンは、種々の起源、天然および合成の両方であり
得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーター
、などの含有によって高められ得る（Ｂｉｔｔｎｅｒら、１９８７、Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４を参照のこと）。

【０２４５】 さらに、挿入された配列の発現を調節するか、または遺伝子産物を所望の特定
の様式に改変およびプロセスする宿主細胞株が、選択され得る。タンパク質産物
のこのような改変（例えばグリコシル化）およびプロセシング（例えば切断）は
、タンパク質の機能のために重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質お
よび遺伝子産物の、翻訳後プロセシングおよび改変のための、特徴的で特異的な
機構を有する。適切な細胞株または宿主系は、発現された異種タンパク質の正確
な改変およびプロセシングを確実にするように選択され得る。この目的のために
、遺伝子産物の、第一の転写、グリコシル化、およびリン酸化の正確なプロセシ
ングのための細胞機構を有する、真核生物宿主細胞が、使用され得る。このよう
な哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣ
Ｋ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、そして特に、例えば、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８
Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄのような乳癌細胞株、ならびに、例えば
、ＣＲＬ７０３０およびＨｓ５７８Ｂｓｔのような正常な乳腺細胞株、を含むが
これらに限定されない。

【０２４６】 組換えタンパク質の長期の高収率の産生のために、安定した発現が好ましい。
例えば、抗体分子を安定して発現する細胞株が操作され得る。ウイルスの複製起
点を含む発現ベクターの使用よりも、むしろ宿主細胞は、適切な発現制御エレメ
ント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリ
アデニル化部位など）によって制御されるＤＮＡ、および選択可能なマーカーで
形質転換され得る。外来性ＤＮＡの導入に続いて、操作された細胞は、濃縮され
た培地中で１〜２日間増殖され得、次いで選択培地に切り換えられる。組換えプ
ラスミド中の選択マーカーは、選択への耐性を与え、そして細胞がプラスミドを
それらの染色体に安定に組み込み、そして増殖し、次いで細胞株にクローニング
および増殖され得る、増殖巣（ｆｏｃｉ）を形成することを可能にする。この方
法は、抗体分子を発現する細胞株を操作するために有利に使用され得る。このよ
うな操作された細胞株は、抗体分子と直接的または間接的に相互作用する化合物
のスクリーニングおよび評価において特に有用であり得る。

【０２４７】 多くの選択系が使用され得、それらには、それぞれｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−、ま
たはａｐｒｔ−細胞において使用され得る、単純ヘルペスウイルスチミジンキナ
ーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ １１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチ
ン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＳｚｙｂａｌｓｋａおよびＳ
ｚｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２
０２（１９９２））、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏ
ｗｙら、Ｃｅｌｌ ２２：８１７（１９８０））遺伝子が挙げられるが、これら
に限定されない。また、代謝拮抗物質耐性は、以下の遺伝子に関する選択の基礎
として使用され得る：メトトレキサートへの耐性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅ
ｒら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：３５７（１９８０））；Ｏ
’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２
７（１９８１）；ミコフェノール酸への耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ
およびＢｅｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０
７２（１９８１））；アミノグリコシドＧ−４１８への耐性を与えるｎｅｏ（Ｃ
ｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ、
Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、
Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６
（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２（
１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；１９９３年５月，ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５）；ならびにハイグロマイシンへの耐
性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ ３０：１４７（１９８
４））。使用され得る当該分野で一般に公知である組換えＤＮＡ技術の方法は、
Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９
９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐ
ｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉら（編）、Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の１２および１３章；Ｃｏｌｂｅｒ
ｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１（１９８１）に記
載され、これらはその全体が本明細書において参考として援用される。

【０２４８】 抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加され得る（総説について
は、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ
ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉ
ｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，第３巻
（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照のこと
）。抗体を発現するベクター系においてマーカーが増幅できる場合、宿主細胞の
培養液に存在するインヒビターのレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピーの数
を増加する。この増幅された領域が抗体遺伝子と結合しているために、この抗体
の産生もまた、増加する（Ｃｒｏｕｓｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：
２５７（１９８３））。

【０２４９】 その宿主細胞は、本発明の２つの発現ベクター（重鎖に由来するポリペプチド
をコードする第１のベクターおよび軽鎖に由来するポリペプチドをコードする第
２のベクター）で同時トランスフェクトされ得る。この２つのベクターは、重鎖
および軽鎖のポリペプチドの等しい発現を可能とする同一の選択マーカーを含み
得る。あるいは、重鎖および軽鎖のポリペプチドの両方をコードする単一のベク
ターが使用され得る。このような状況において、この軽鎖は、過剰の有毒な遊離
重鎖を避けるために、重鎖の前に配置されるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ、
Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２（１９８６）；Ｋｏｈｌｅｒ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７（１９８０））。重鎖および軽鎖
のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。

【０２５０】 一旦、本発明の抗体分子が、組換え的に発現されると、この抗体分子は、免疫
グロブリン分子の精製に関する当該分野で公知の任意の方法によって（例えば、
クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー
（特に、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａの後の特異的抗原へのアフィニティーによる）クロ
マトグラフィー、およびサイジング（ｓｉｚｉｎｇ）カラムクロマトグラフィー
）、遠心分離、差示的溶解度によって、またはタンパク質の精製に関する他の任
意の標準的な技術によって）精製され得る。

【０２５１】 （Ｃ．抗体結合体） 本発明は、融合タンパク質を生成するために、本発明のポリペプチド（または
それらの一部、好ましくは、ポリペプチドの少なくとも１０、２０または５０ア
ミノ酸）に組換え的に融合されたか、あるいは化学的に結合（共有結合および非
共有結合の両方を含む）された抗体を含む。この融合は、必ずしも直接的である
必要はないが、リンカー配列を通して起こり得る。この抗体は、本発明のポリペ
プチド（またはそれらの一部、好ましくは、ポリペプチドの少なくとも１０、２
０または５０アミノ酸）以外の抗原に特異的であり得る。例えば、本発明のポリ
ペプチドを、特定の細胞表面レセプターに特異的な抗体に融合させるかまたは結
合させることによって、抗体は、インビトロまたはインビボのいずれかで本発明
のポリペプチドを特定の細胞型に標的化するために使用され得る。本発明のポリ
ペプチドに融合されたかまたは結合された抗体はまた、当該分野で公知の方法を
使用してインビトロイムノアッセイおよび精製方法にて使用され得る。例えば、
Ｈａｒｂｏｒら、前出およびＰＣＴ公開ＷＯ ９３／２１２３２；ＥＰ ４３９
，０９５；Ｎａｒａｍｕｒａら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３９：９１−９９
（１９９４）；米国特許第５，４７４，９８１号；Ｇｉｌｌｉｅｓら、ＰＮＡＳ
８９：１４２８−１４３２（１９９２）；Ｆｅｌｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１４６：２４４６−２４５２（１９９１）（これらは、それらの全体において参
考として援用される）を参照のこと。

【０２５２】 本発明はさらに、可変領域以外の抗体のドメインに融合されたかまたは結合さ
れた本発明のポリペプチドから構成される組成物を含む。例えば、本発明のポリ
ペプチドを、抗体のＦｃ領域、あるいはその一部に融合または結合され得る。本
発明のポリペプチドに融合された抗体部分は、定常領域、ヒンジ領域、ＣＨ１ド
メイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、あるいはそれらのドメイン全
体または部分の任意の組合せを含み得る。このポリペプチドはまた、上記の抗体
部分に融合または結合され、多量体を形成し得る。例えば、本発明のポリペプチ
ドに融合されたＦｃ部分は、Ｆｃ部分間のジスルフィド結合を介して二量体を形
成し得る。より高次な多量体形態は、このポリペプチドをＩｇＡおよびＩｇＭの
部分に融合することにより作製され得る。本発明のポリペプチドを抗体部分に融
合または結合するための方法は、当該分野において公知である。例えば、米国特
許第５，３３６，６０３号；同第５，６２２，９２９号；同第５，３５９，０４
６号；同第５，３４９，０５３号；同第５，４４７，８５１号；同第５，１１２
，９４６号；ＥＰ ３０７，４３４；ＥＰ ３６７，１６６；ＰＣＴ公開ＷＯ
９６／０４３８８；ＷＯ ９１／０６５７０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５−１０５３９（１９
９１）；Ｚｈｅｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００（１
９９５）；およびＶｉｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８９：１１３３７−１１３４１（１９９２）（上記の参考文献は、それらの全体
が参考として援用される）を参照のこと。

【０２５３】 上記で議論されたように、本発明のポリペプチドは、上記の抗体部分に融合ま
たは結合され得、このポリペプチドのインビボの半減期を増加するか、または当
該分野で公知の方法を使用するイムノアッセイにおいて使用される。さらに、本
発明のポリペプチドは、精製を容易にするために、上記の抗体部分に融合または
結合され得る。１つの報告された実施例は、ヒトＣＤ４ポリペプチドの第１の２
つのドメインおよび哺乳動物免疫グロブリンの重鎖もしくは軽鎖の定常領域の種
々のドメインからなるキメラタンパク質を記載する。（ＥＰ ３９４，８２７；
Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−８６（１９８８））。
ジスルフィド連結した二量体構造（ＩｇＧに起因する）を有する抗体に融合また
は結合された本発明のポリペプチドはまた、単量体分泌タンパク質またはタンパ
ク質フラグメント単独よりも、他の分子との結合および中和においてより効率的
であり得る。（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：３
９５８−３９６４（１９９５））。多くの場合において、融合タンパク質のＦｃ
部分は、治療および診断において有利であり、従って、例えば、改良された薬物
動態学的な特性を生じ得る。（ＥＰ Ａ ２３２，２６２）。あるいは、融合タ
ンパク質が発現、検出、および精製された後のＦｃ部分の欠損は、好ましい。例
えば、この融合タンパク質が免疫化のための抗原として使用される場合、このＦ
ｃ部分は、治療および診断を妨げ得る。薬物の発見において、例えば、ヒトタン
パク質（例えばｈＩＬ−５）は、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための
高スループットスクリーニングアッセイの目的のために、Ｆｃ部分と融合された
。（Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ８
：５２−５８（１９９５）；Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと。） さらに、本発明の抗体またはそれらのフラグメントは、精製を容易にするペプ
チドのような、マーカー配列と融合され得る。好ましい実施形態において、この
マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ、Ｉｎｃ．
，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１
１）において提供されるタグのようなヘキサ−ヒスチジンペプチドであり、それ
らの多くは市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９）に記載されるように
、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製に有用
な他のペプチドタグには、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピト
ープに対応する「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９
８４））および「ｆｌａｇ」タグが挙げられるが、これらに限定されない。

【０２５４】 本発明はさらに、診断剤または治療剤に結合される抗体またはそのフラグメン
トを含む。この抗体は、例えば、臨床試験の手順の一部（例えば、所定の治療レ
ジメンの有効性を決定するための）として、腫瘍の発生または進行をモニターす
るために診断的に使用され得る。検出は、抗体を検出可能な物質にカップリング
することによって容易にされ得る。検出可能な物質の例には、種々の酵素、補欠
分子群、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、種々の陽子射出断層
撮影法を使用する陽電子放射金属、および非放射性常磁性金属イオンが挙げられ
る。本発明に従う診断剤として使用するための抗体に結合され得る金属イオンに
ついては、例えば、米国特許第４，７４１，９００号を参照のこと。適切な酵素
の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラク
トシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適切な補欠分子群
複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙
げられ；適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオ
レセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオ
レセイン、ダンシルクロライドまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の
例には、ルミノールが挙げられ；生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシ
フェリン、およびエクオリンが挙げられ；そして適切な放射性物質の例には、^{12 5} Ｉ、¹³¹Ｉ、¹¹¹Ｉｎまたは⁹⁹Ｔｃが挙げられる。

【０２５５】 さらに、抗体またはそのフラグメントは、治療用部分（例えば細胞毒（例えば
細胞増殖抑制性もしくは細胞殺傷性の薬剤））、治療剤または放射性金属イオン
に結合され得る。細胞毒または細胞毒性薬剤は、細胞に対して有害な任意の薬剤
を含む。例としては、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｏｌ）、サイトカラシ
ンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシ
ド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、
コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオ
ン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロ
ン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ，１−デヒドロテストステロン、グル
ココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、
およびピューロマイシン、ならびにそのアナログまたはホモログ、が挙げられる
。治療剤は、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン
、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アル
キル化剤（例えば、クロルメチン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、チオテ
パ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ
）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐ
ｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、
マイトマイシンＣ、ならびにｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）
シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノ
マイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以
前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマ
イシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ））、ならびに有糸分裂阻害剤（例
えばビンクリスチンおよびビンブラスチン）、を含むが、それらに限定されない
。

【０２５６】 本発明の結合体は、所与の生物学的応答を改変するために使用され得、治療剤
または薬物部分は、慣用の化学的治療剤に限定されると解釈されない。例えば、
薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリぺプチドであり
得る。このようなタンパク質としては、例えば、毒素（例えばアブリン、リシン
Ａ、シュードモナス外毒素、またはジフテリアトキシン）；タンパク質（例えば
、腫瘍壊死因子、ａ−インターフェロン、β−インターフェロン、神経発育因子
、血小板由来増殖因子、組織プラスミノゲン賦活剤、血栓症薬もしくは抗脈管形
成薬（例えば、アンジオスタチンもしくはエンドスタチン）；または生物学的応
答改変剤（例えばリンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、イン
ターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー
刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または他の増殖因子）、が挙げられ得る。

【０２５７】 抗体はまた、固体支持体に付着させられ得、この固体支持体は、標的抗原のイ
ムノアッセイまたは精製に特に有用である。このような固体支持体としては、ガ
ラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビ
ニルまたはポリプロピレン、が挙げられるがそれらに限定されない。

【０２５８】 このような治療部分を抗体に結合する技術は、周知である、例えば、Ａｒｎｏ
ｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏ
ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ
」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ Ｒ
．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕ
ｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（第二版）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、ｐｐ．６２３−
５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａ
ｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ
Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｍｏｎｏｃｌｏ
ｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌ
ｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、ｐｐ．
４７５−５０６（１９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ
Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌ
ｄｗｉｎら（編）、ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９
８５）、およびＴｈｏｒｐｅら、「Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ
Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘ
ｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８
（１９８２）を参照のこと。

【０２５９】 あるいは、抗体は、Ｓｅｇａｌにより米国特許第４，６７６，９８０号（その
全体が参考として本明細書中で援用される）に記載されるように、第二の抗体に
結合され得、抗体ヘテロ結合体を形成する。

【０２６０】 単独または細胞傷害性因子および／もしくはサイトカインと共に投与される抗
体（それに結合した治療的部分を有するかまたは有しない）は、治療薬として使
用され得る。

【０２６１】 （Ｄ．抗体結合についてのアッセイ） 本発明の抗体は、当該分野において公知の任意の方法により、免疫特異的結合
のためにアッセイされ得る。用いられ得る免疫アッセイとしては、（いくつかの
ものについてだけ名称を挙げると、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ
、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、
免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッ
セイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、プロテイ
ンＡ免疫アッセイのような技術を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系
が挙げられるが、これらに限定されない。このようなアッセイは慣用的であり、
そして当該分野において周知である（例えば、その全体が本明細書中に参考とし
て援用される、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃ
ｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。例示的な
免疫アッセイが、以下に簡潔に記載される（が、これらは限定を目的とすること
が意図されない）。

【０２６２】 免疫沈降プロトコルは一般に、タンパク質ホスファターゼおよび／またはプロ
テアーゼインヒビター（例えば、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチニン、バナジン
酸ナトリウム）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（１％ ＮＰ−４０またはＴｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００、１％ デオキシコール酸ナトリウム、０．１％ ＳＤＳ、０．
１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２での０．０１Ｍ リン酸ナトリウム、１％ Ｔｒ
ａｓｙｌｏｌ）のような溶解緩衝液中で細胞の集団を溶解する工程、目的の抗体
を細胞溶解物に添加する工程、一定時間（例えば、１〜４時間）４℃でインキュ
ベートする工程、プロテインＡおよび／またはプロテインＧセファロースビーズ
を細胞溶解物に添加する工程、約１時間以上４℃でインキュベートする工程、溶
解緩衝液中でビーズを洗浄する工程、およびＳＤＳ／サンプル緩衝液中でビーズ
を再懸濁する工程を含む。目的の抗体の、特定の抗原を免疫沈降する能力は、例
えば、ウエスタンブロット分析により、アッセイされ得る。当業者は、抗体の抗
原への結合を増加するように、そしてバックグラウンドを減少させるように改変
され得るパラメータ（例えば、セファロースビーズを用いて細胞溶解物を事前に
きれいにする工程）に関して、よく知っている。免疫沈降プロトコルに関するさ
らなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４、Ｃｕｒｒｅｎ
ｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻
、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．
１６．１を参照のこと。

【０２６３】 ウエスタンブロット分析は、一般に、タンパク質サンプルを調製する工程、タ
ンパク質サンプルのポリアクリルアミドゲル（例えば、抗原の分子量に応じた８
％〜２０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）中での電気泳動の工程、タンパク質サンプルをそ
のポリアクリルアミドゲルからニトロセルロース、ＰＶＤＦまたはナイロンのよ
うな膜に移す工程、ブロッキング溶液（例えば、３％ ＢＳＡまたは脱脂粉乳を
有するＰＢＳ）中でその膜をブロックする工程、その膜を洗浄緩衝液（例えば、
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ ２０）中で洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈さ
れた一次抗体（目的の抗体）を有するその膜をブロックする工程、その膜を洗浄
緩衝液中で洗浄する工程、ブロッキング緩衝液中で希釈された酵素基質（例えば
、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）あるいは放射性
分子（例えば、³²Ｐまたは¹²⁵Ｉ）に結合した二次抗体（一次抗体を認識する、
例えば、抗ヒト抗体）を用いてその膜をブロックする工程、洗浄緩衝液中でその
膜を洗浄する工程、ならびにその抗原の存在を検出する工程を含む。当業者は、
検出されるシグナルを増加させるように、そしてバックグラウンドノイズを減少
させるように改変され得るパラメータに関して、よく知っている。ウエスタンブ
ロットプロトコルに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら
編，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．
，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１０．８．１を参照のこと。

【０２６４】 ＥＬＩＳＡは、抗原を調製する工程、９６ウェルマイクロタイタープレートの
ウェルをその抗原でコーティングする工程、酵素基質（例えば、西洋ワサビペル
オキシダーゼまたはアルカリホスフォターゼ）のような検出可能な化合物に結合
した目的の抗体をそのウェルに添加し、そして一定時間インキュベートする工程
、および抗原の存在を検出する工程を含む。ＥＬＩＳＡにおいて、目的の抗体は
、検出可能な化合物に結合している必要はない；その代わり、検出可能な化合物
に結合した第二の抗体（目的の抗体を認識する）がウェルに添加され得る。さら
に、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、抗体がウェルにコーティングさ
れ得る。この場合、検出可能な化合物に結合した第二の抗体が、コーティングさ
れたウェルへの目的の抗原の添加に続いて、添加され得る。当業者は、検出され
るシグナルを増加させるように改変され得るパラメータ、および当該分野におい
て公知のＥＬＩＳＡの他のバリエーションに関して、よく知っている。ＥＬＩＳ
Ａに関するさらなる考察については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９９４，
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ，第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，１１．２．１を参照のこと。

【０２６５】 抗体の抗原に対する結合親和性および抗体−抗原相互作用のオフレート（ｏｆ
ｆ−ｒａｔｅ）が、競合結合アッセイにより決定され得る。競合結合アッセイの
一つの例は、ラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、標識した
抗原（例えば、³Ｈまたは¹²⁵Ｉ）と、漸増量の非標識抗原の存在下での目的の抗
体とのインキュベーション、および標識した抗原に結合した抗体の検出を含む。
目的の抗体の、特定の抗原に対する親和性、および結合オフレートは、スキャッ
チャードプロット分析によるデータから決定され得る。第二の抗体との競合はま
た、ラジオイムノアッセイを用いて決定され得る。この場合、抗原は、漸増量の
非標識第二抗体の存在下で、標識した化合物（例えば、³Ｈまたは¹²⁵Ｉ）に結合
した目的の抗体とともにインキュベートされる。

【０２６６】 （Ｅ．治療用途） 本発明はさらに、抗体を基礎とした治療に関し、この治療は、本発明の抗体を
、１つ以上の開示された疾患、傷害または状態を処置するために、動物、好まし
くは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトの患者に投与する工程を含む。本発明
の治療化合物としては、本発明の抗体（本明細書中に記載するような、それらの
フラグメント、アナログおよび誘導体を含む）ならびに本発明の抗体をコードす
る核酸（本明細書中に記載するような、それらのフラグメント、アナログおよび
誘導体ならびに抗イディオタイプ抗体を含む）が挙げられるがこれらに限定され
ない。本発明の抗体は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性
に関連した疾患、障害または状態を、処置、阻害または予防するために使用され
得、そのような疾患、障害または状態としては、以下を含む（しかし、それらに
限定されない）このような疾患または障害に関連する自己免疫疾患、障害または
状態が挙げられるが、これらに限定されない：自己免疫溶血性貧血、自己免疫新
生児血小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫血球減少症、溶血性貧
血、抗リン脂質症候群、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、心筋炎、再発性多発性
軟骨炎、潰瘍性大腸炎、デンスデポジット病、リウマチ性心疾患、糸球体腎炎（
例えば、ＩｇＡ腎炎）、尋常性天疱瘡、円板状狼瘡、多発性硬化症、神経炎、ブ
ドウ膜眼炎、多発性内分泌腺症、紫斑病（例えば、ヘーノホ−シェーンライン紫
斑病）、ライター病、スティッフマン症候群、自己免疫肺炎、ギャン−バレー症
候群、インシュリン依存性真性糖尿病、および自己免疫炎症性眼、自己免疫甲状
腺炎、甲状腺機能低下症（すなわち、橋本甲状腺炎）、全身性エリテマトーデス
、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、レセプター自己免疫（例えば、（ａ）グレ
ーヴズ病、（ｂ）重症筋無力症、および（ｃ）インシュリン抵抗性）、自己免疫
溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、抗コラーゲン抗
体を伴う強皮症（ｓｃｈｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、混合結合組織病、多発性筋炎／
皮膚筋炎、悪性貧血、特発性アディソン病、不妊症、糸球体腎炎（例えば、一次
糸球体腎炎およびＩｇＡ腎症）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、真性糖
尿病、およびアドレナリン作動性薬剤耐性（喘息または嚢胞性線維症を伴うアド
レナリン作動性薬剤耐性を含む）、活動性慢性肝炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ａｃｔｉ
ｖｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、原発性胆汁性肝硬変、他の内分泌腺不全、白斑、
脈管炎、ＭＩ後、心臓切開症候群、じんま疹、アトピー性皮膚炎、喘息、炎症性
筋障害、対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）ならびに他の炎症性障害、肉芽種性障害
、および萎縮性障害。

【０２６７】 特定の実施形態においては、本発明の抗体は、慢性関節リウマチを処置、阻害
、予後の判定、診断または予防するために使用される。

【０２６８】 別の特定の実施形態においては、本発明の抗体は、全身性エリテマトーデスを
処置、阻害、予後の判定、診断または予防するために使用される。

【０２６９】 さらに、本発明の抗体は、免疫欠損に関連する疾患、障害または状態を、処置
、阻害または予防するために使用され得、これらの疾患、障害または状態として
は、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）−Ｘ結合、ＳＣＩＤ−常染色体、アデノシン
デアミナーゼ欠損（ＡＤＡ欠損）、Ｘ−結合無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）
、Ｂｒｕｔｏｎ病、先天性無ガンマグロブリン血症、Ｘ結合乳児無ガンマグロブ
リン血症、後天性無ガンマグロブリン血症、成人発症無ガンマグロブリン血症、
後期発症無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症、高ガンマグロブリ
ン血症、乳児の過渡性高ガンマグロブリン血症、不特定の高ガンマグロブリン血
症、無ガンマグロブリン血症、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）（後天性）、ヴ
ィスコット‐オールドリッチ症候群（ＷＡＳ）、過剰ＩｇＭを伴うＸ結合免疫不
全、過剰ＩｇＭを伴う非Ｘ結合免疫不全、選択的ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラス
欠損（ＩｇＡ欠損を伴うか、または伴わない）、正常または上昇したＩｇｓを伴
う抗体不全、胸腺腫を伴う免疫欠損、Ｉｇ重鎖欠損、カッパ鎖欠損、Ｂ細胞リン
パ増殖性障害（ＢＬＰＤ）、選択性ＩｇＭ免疫欠損、劣性無ガンマグロブリン血
症（スイス型）、網様発育不全、新生児好中球減少症、重症の先天性白血球減少
症、免疫欠損を有するリンパ形成不全−発育不全症または形成異常症、運動失調
−毛細血管拡張症、短肢小人症、Ｘ−結合リンパ増殖性症候群（ＸＬＰ）、Ｉｇ
ｓを伴うネゼロフ症候群−混合免疫欠損、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ欠
損（ＰＮＰ）、ＭＨＣクラスＩＩ欠損（不全リンパ球症候群）および重症複合型
免疫不全が挙げられるが、これらに限定はされない。

【０２７０】 本発明の抗体は、移植片拒絶および炎症を予防するため、ならびに関節炎の処
置のために使用される。

【０２７１】 本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連する疾患および
障害の処置および／または予防としては、これらの疾患および障害に関連する症
状の緩和が挙げられるが、これに限定されない。本発明の抗体は、当該分野で公
知であるか、または本明細書中に記載されるような薬学的に受容可能な組成物で
提供され得る。

【０２７２】 本発明の抗体が治療的に使用され得る方法の１つの要約は、身体内で局所的に
または全身的に、あるいは（例えば、補体（ＣＤＣ）により、またはエフェクタ
ー細胞（ＡＤＣＣ）により媒介されるような）抗体の直接的細胞傷害性により、
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを結合させることを含む。これら
のアプローチのいくつかは、より詳細に以下に記載される。本明細書中で提供さ
れる教示を与えられれば、当業者は、過度の実験なしに、診断上の目的、モニタ
リングの目的あるいは治療上の目的のために、本発明の抗体を使用する方法がわ
かる。

【０２７３】 本発明の抗体は、例えば、抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活
性を増加させるために役立つ、他のモノクローナル抗体またはキメラ抗体、ある
いはリンホカインまたは造血増殖因子（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３およびＩＬ
−７など）と組み合わせて有利に利用され得る。

【０２７４】 本発明の抗体は、単独で、または他の型の処置（例えば、放射線療法、化学療
法、ホルモン治療、免疫治療および抗腫瘍剤）との組み合わせで投与され得る。
一般的に、（抗体の場合には）患者の種と同じ種である種起源または種反応性の
生成物の投与が好ましい。従って、好ましい実施形態においては、ヒトの抗体、
フラグメント誘導体、アナログ、または核酸が、治療または予防のために、ヒト
の患者に投与される。

【０２７５】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（そのフラグメントを含む）に
関するイムノアッセイ、およびそれらに関連した障害の治療の両方のために、本
発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対する、高親和性および／または
強力な、インビボでの阻害抗体および／または中和抗体、そのフラグメント、ま
たはその領域を使用することが好ましい。このような抗体、フラグメント、また
は領域は、好ましくは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド（そのフ
ラグメントを含む）に対して親和性を有する。好ましい結合親和性としては、５
×１０^-6Ｍ、１０^-6Ｍ、５×１０^-7Ｍ、１０^-7Ｍ、５×１０^-8Ｍ、１０^-8Ｍ、５
×１０^-9Ｍ、１０^-9Ｍ、５×１０^-10Ｍ、１０^-10Ｍ、５×１０^-11Ｍ、１０^-11Ｍ
、５×１０^-12Ｍ、１０^-12Ｍ、５×１０^-13Ｍ、１０^-13Ｍ、５×１０^-14Ｍ、１
０^-14Ｍ、５×１０^-15Ｍ、および１０^-15Ｍより小さい解離定数すなわちＫｄを
有する結合親和性が挙げられる。

【０２７６】 （トランスジェニック非ヒト動物） 本発明のタンパク質はまた、トランスジェニック動物において発現され得る。
マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット、ブタ、ミニブタ（ｍｉｃｒ
ｏ−ｐｉｇ）、ヤギ、ヒツジ、ウシおよびヒト以外の霊長類（例えば、ヒヒ、サ
ルおよびチンパンジー）を含むがこれらに限定されない任意の種の動物は、トラ
ンスジェニック動物を作製するために用いられ得る。特定の実施形態において、
本明細書に記載されるか、またはさもなければ当該分野で公知の技術が、遺伝子
治療プロトコルの一部として、ヒトにおける本発明のポリペプチドの発現のため
に用いられる。

【０２７７】 当該分野で公知の任意の技術を、導入遺伝子（すなわち、本発明の核酸）の動
物への導入に用いて、トランスジェニック動物の創始系統（ｆｏｕｎｄｅｒ ｌ
ｉｎｅ）を生成し得る。このような技術は、前核マイクロインジェクション（Ｐ
ａｔｅｒｓｏｎら、Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４
０：６９１−６９８（１９９４）；Ｃａｒｖｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ（ＮＹ）１１：１２６３−１２７０（１９９３）；Ｗｒｉｇｈｔら、Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：８３０−８３４（１９９１）；およびＨｏｐｐ
ｅら、米国特許第４，８７３，１９１号（１９８９））；生殖細胞系へのレトロ
ウイルス媒介遺伝子移入（Ｖａｎ ｄｅｒ Ｐｕｔｔｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：６１４８−６１５２（１９８５））、胚
盤胞または胚；胚性幹細胞における遺伝子標的化（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｃｅｌ
ｌ ５６：３１３−３２１（１９８９））；細胞または胚のエレクトロポレーシ
ョン（Ｌｏ、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：１８０３−１８１４（１９８３
））；遺伝子銃を用いた本発明のポリヌクレオチドの導入（例えば、Ｕｌｍｅｒ
ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：１７４５（１９９３）を参照のこと）；胚性多能
性（ｐｌｅｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）幹細胞への核酸構築物の導入および胚盤胞への
この幹細胞の再移入；ならびに精子媒介遺伝子移入（Ｌａｖｉｔｒａｎｏら、Ｃ
ｅｌｌ ５７：７１７−７２３（１９８９））；などを含むがこれらに限定され
ない。このような技術の総説については、本明細書中にその全体が参考として援
用される、Ｇｏｒｄｏｎ、「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ」、Ｉｎｔ
ｌ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１１５：１７１−２２９（１９８９）を参照のこと。
米国特許第５，４６４，７６４号（Ｃａｐｅｃｃｈｉら、Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−Ｎ
ｅｇａｔｉｖｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｖｅｃｔｏｒ
ｓ）；米国特許第５，６３１，１５３号（Ｃａｐｅｃｃｈｉら、Ｃｅｌｌ ａｎ
ｄ Ｎｏｎ−Ｈｕｍａｎ Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ
Ｐｏｓｏｔｉｖｅ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ
ａｎｄ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｋｉｎｇ Ｓａｍｅ）；米国特許第４
，７３６，８６６号（Ｌｅｄｅｒら、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｎｏｎ−Ｈｕｍａ
ｎ Ａｎｉｍａｌｓ）；および米国特許第４，８７３，１９１号（Ｗａｇｎｅｒ
ら、Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｙｇｏｔｅｓ）
もまた、参照のこと；これらの各々は、本明細書中でその全体が参考として援用
される。この段落に列挙されるそれぞれの書類の内容が、本明細書中でその全体
が参考として援用される。

【０２７８】 当該分野で公知の任意の技術を用いて、本発明のポリヌクレオチドを含むトラ
ンスジェニッククローンを生成し得る（例えば、培養された、静止状態に誘導さ
れた胚細胞、胎児細胞または成体の細胞由来の除核した卵母細胞の核への核移入
（Ｃａｍｐｅｌｌら、Ｎａｔｕｒｅ ３８０：６４−６６（１９９６）；Ｗｉｌ
ｍｕｔら、Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３（１９９７）、これらのそれ
ぞれが、本明細書中でその全体が参考として援用される）。

【０２７９】 本発明は、その全ての細胞に導入遺伝子を有するトランスジェニック動物、な
らびにいくつかの細胞（しかしその全ての細胞ではない）に導入遺伝子を有する
動物（すなわち、モザイク動物またはキメラ動物）を提供する。導入遺伝子は、
１つの導入遺伝子としてまたはコンカテマー（例えば、頭−頭タンデム型または
頭−尾タンデム型）のような複数のコピーとして組み込まれ得る。この導入遺伝
子はまた、例えば、Ｌａｓｋｏらの教示（Ｌａｓｋｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２３２−６２３６（１９９２））に従って
特定の細胞型に選択的に導入され得、そして活性化され得る。このような細胞型
特異的活性化に必要とされる調節配列は、目的の特定の細胞型に依存し、そして
それらは当業者に明らかである。ポリヌクレオチド導入遺伝子が、内在性遺伝子
の染色体部位に組み込まれることが所望される場合、遺伝子の標的化が好ましい
。手短に言えば、このような技術が利用される場合、内在性遺伝子に対して相同
ないくつかのヌクレオチド配列を含むベクターが、染色体配列との相同な組換え
を介して内在性遺伝子のヌクレオチド配列に組み込まれ、そのヌクレオチド配列
の機能を破壊することを目的として設計される。導入遺伝子はまた、特定の細胞
型に選択的に導入され得、従って、例えば、Ｇｕら（Ｇｕら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２６５：１０３−１０６（１９９４））の教示に従って、導入された細胞型にお
いてのみ内在性遺伝子が不活化される。そのような細胞型特異的不活化に必要と
される調節配列は、目的の特定の細胞型に依存し、そしてそれらは当業者に明ら
かである。この段落に列挙されるそれぞれの書類の内容が、本明細書中で、参考
として援用される。

【０２８０】 一旦トランスジェニック動物が作製されると、その組換え遺伝子の発現は、標
準的な技術を利用してアッセイされ得る。最初のスクリーニングは、サザンブロ
ット分析またはＰＣＲ技術によって達成されて、導入遺伝子の組み込みが起きた
ことを動物組織の分析により確認し得る。トランスジェニック動物の組織におけ
る導入遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルはまた、動物から得た組織サンプルのノーザ
ンブロット分析、インサイチュハイブリダイゼーション分析および逆転写酵素Ｐ
ＣＲ（ｒｔ−ＰＣＲ）を含むがこれらに限定されない技術を用いて評価され得る
。トランスジェニック遺伝子発現組織のサンプルはまた、導入遺伝子産物に特異
的な抗体を用いて免疫細胞化学的または免疫組織化学的に評価され得る。

【０２８１】 一旦、創始動物が生成されると、それらは、交配され、同系交配され、異系交
配されるかまたは交雑されて、特定の動物のコロニーを生成し得る。そのような
交配戦略の例は、以下を含むがそれらに限定されない：別の系統を樹立するため
の１つより多くの組み込み部位を有する創始動物の異系交配；各導入遺伝子の相
加的発現効果によって、より高いレベルで導入遺伝子を発現する複合トランスジ
ェニックを生成するための別々の系統の同系交配；発現の増強およびＤＮＡ分析
による動物のスクリーニングの必要性の排除の両方のための、所定の組み込み部
位に対してホモ接合性の動物を生成するヘテロ接合性トランスジェニック動物の
交雑；複合ヘテロ接合性またはホモ接合性系統を生成するための別々のホモ接合
系統の交雑；ならびに目的の実験モデルに適切な異なるバックグラウンド上に導
入遺伝子を配置するための交配。

【０２８２】 本発明のトランスジェニック動物および「ノックアウト」動物は、ＴＲ２レセ
プターポリペプチドの生物学的機能の生成において有用である動物モデル系、異
常なＴＲ２レセプター発現に関係する状態および／または障害の研究、ならびに
そのような状態および／あるいは障害の改善において有効な化合物のスクリーニ
ングを含むが、これらに限定されない用途を有する。

【０２８３】 本発明のさらなる実施形態において、本発明のタンパク質を発現するために遺
伝子操作される細胞、あるいは本発明のタンパク質を発現しないように遺伝子操
作された細胞（例えば、ノックアウト）を、インビボで患者に投与する。このよ
うな細胞は、患者（すなわち、ヒトを含む動物）またはＭＨＣ適合性ドナーから
入手され得、そして線維芽細胞、骨髄細胞、血球（例えば、リンパ球）、脂肪細
胞、筋細胞、内皮細胞などを含み得るが、それらに限定されない。この細胞を、
例えば、形質導入（ウイルスベクターおよび好ましくは細胞ゲノム中に導入遺伝
子を組み込むベクターを使用する）、またはトランスフェクション手順（プラス
ミド、コスミド、ＹＡＣ、裸のＤＮＡ、エレクトロポレーション、リポソームな
どの使用を含むが、これらに限定されない）によって、細胞中に本発明のポリペ
プチドのコード配列を導入するために、あるいはこのコード配列および／または
本発明のポリペプチドに結合している内因性の調節配列を破壊するために、組換
えＤＮＡ技術を使用してインビトロで遺伝子操作する。本発明のポリペプチドの
コード配列を強力な構成的プロモーターもしくは誘導性プロモーターまたはプロ
モーター／エンハンサーの制御下に配置し、本発明のポリペプチドの発現および
好ましくは分泌を達成し得る。本発明のポリペプチドを発現および好ましくは分
泌する操作した細胞を、例えば、循環中において、または腹腔内で患者中へ全身
的に導入し得る。あるいは、この細胞をマトリックスに組み込み得、そして身体
に移植し得る（例えば、遺伝子操作した線維芽細胞を皮膚移植片の一部として移
植し得る；遺伝子操作した内皮細胞をリンパ移植片または脈管移植片の一部とし
て移植し得る）（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，３９９，３４９
号ならびにＭｕｌｌｉｇａｎおよびＷｉｌｓｏｎ、米国特許第５，４６０，９５
９号を参照のこと。これらの各々は、本明細書中でその全体が参考として援用さ
れる）。

【０２８４】 投与される細胞が非自己または非ＭＨＣ適合性細胞である場合、それらを、こ
の導入細胞に対する宿主免疫応答の発生を妨害する周知の技術を使用して投与し
得る。例えば、この細胞を被包性の形態で導入し得、構成成分と即時の細胞外環
境との交換が可能である間は、導入細胞が宿主免疫系によって認識され得ない。

【０２８５】 （疾患状態の検出） ＴＮＦファミリーリガンドは、ＴＮＦファミリーレセプター（本発明のＴＲ２
レセプターを含む）への結合によって種々の細胞応答を誘導する。ＴＮＦ−β（
ＴＮＦレセプタータンパク質の潜在的なリガンド）は、多くの生物学的プロセス
（リンパ球の発生、腫瘍壊死、抗ウイルス状態の誘導、多形核白血球の活性化、
内皮細胞へのクラスＩ主要組織適合性複合体の誘導、内皮への接着分子の誘導お
よび成長ホルモン刺激を含む）に関与することが知られている（Ｒｕｄｄｌｅお
よびＨｏｍｅｒ、Ｐｒｏｇ．Ａｌｌｅｒｇｙ，４０：１６２−１８２（１９８８
））。ＴＮＦ−α（これもＴＮＦレセプタータンパク質のリガンド）は、腫瘍の
迅速な壊死、免疫刺激、自己免疫疾患、移植片拒絶、抗ウイルス応答の発生、敗
血症性ショック、大脳マラリア、細胞傷害性、化学療法の過程の間に生じる電離
放射線の有害な効果（例えば、酵素の変性、脂質過酸化およびＤＮＡ損傷）に対
する保護（Ｎａｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６（７）：２４８３（１９８
７）；Ｐｏｒｔｅｒ、Ｔｉｂｔｅｃｈ ９：１５８−１６２（１９９１））、成
長調節、脈管内皮の効果および代謝性の効果における役割を有していることが報
告されている。ＴＮＦ−αもまた、内皮細胞が種々の因子（ＰＡＩ−１、ＩＬ−
１、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−６を含む）を分泌する誘因となり、細胞増殖を促
進する。さらに、ＴＮＦ−αは、種々の細胞接着分子（例えば、Ｅ−セレクチン
、ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１）を上方制御する。ＴＮＦ−αおよびＦａｓ
リガンドはまた、プログラムされた細胞死を誘導することが示されてきた。

【０２８６】 ＴＲ２ポリペプチドを発現し、ＴＲ２レセプターリガンドに対する強力な細胞
応答を有すると考えられている細胞としては、Ｂリンパ球（ＣＤ１９⁺）、ＣＤ
４^-Ｔリンパ球およびＣＤ８⁺Ｔリンパ球の両方、単球、内皮細胞ならびに表Ｖお
よびＶＩに示される他の細胞型が挙げられる。「ＴＮＦファミリーリガンドに対
する細胞性応答」は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導される、細胞、細
胞株、組織、組織培養物または患者に対する任意の遺伝子型変化、表現型変化お
よび／または形態学的変化を意図する。示されるように、このような細胞性応答
としては、ＴＮＦファミリーリガンドに対する正常な生理学的応答だけではなく
、増大した細胞増殖または増大した細胞増殖の阻害（例えば、アポトーシスの阻
害による）に関連する疾患もまた挙げられる。アポトーシスによってプログラム
された細胞死は、免疫系の末梢Ｔリンパ球の欠失に関与する生理学的機構であり
、そしてその制御不全（ｄｉｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）は、多くの異なる病原性
プロセスを導き得る（Ａｍｅｉｓｅｎ，Ｊ．Ｃ．，ＡＩＤＳ ８：１１９７−１
２１３（１９９４）；Ｋｒａｍｍｅｒ，Ｐ．Ｈ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．６：２７９−２８９（１９９４））。

【０２８７】 異常な細胞生存に関連する特定の疾患状態を有する哺乳動物において特定組織
が、対応する「標準」哺乳動物（すなわち、この疾患状態を有さない同種の哺乳
動物）と比較した場合、有意に変化したレベルのＴＲ２レセプタータンパク質、
およびＴＲ２レセプタータンパク質をコードするｍＲＮＡを発現すると考えられ
る。さらに、いくつかの形態のこのタンパク質が分泌されるので、増大したレベ
ルのＴＲ２レセプタータンパク質は、この疾患状態を有さない同種の哺乳動物由
来の血清と比較した場合、この疾患状態を有する哺乳動物由来の特定の体液（例
えば、血清、血漿、尿、および髄液）中で検出され得ると考えられる。従って、
本発明は、疾患状態の診断の間に有用である診断方法を提供する。この診断は、
哺乳動物細胞または体液における、ＴＲ２レセプタータンパク質をコードする遺
伝子の発現レベルを測定し、そして標準的なＴＲ２レセプター遺伝子発現レベル
と測定された遺伝子発現レベルとを比較し、それによって標準と比較された遺伝
子発現レベルにおける増加または低下が異常な細胞生存に関連する特定の疾患状
態を示すことを含む。

【０２８８】 本発明のＴＲ２レセプターに関与する疾患状態の診断が、従来の方法に従って
既になされている場合、本発明は、予後の指標として有用であり、それによって
異常なＴＲ２レセプター遺伝子発現を顕著に示す患者は、より低いレベルでこの
遺伝子を発現する患者に比べ、より悪い臨床結果を被る。

【０２８９】 「ＴＲ２レセプタータンパク質をコードする遺伝子の発現レベルをアッセイす
る」とは、第一の生物学的サンプル中のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／または
ＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質のレベルあるいはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１
および／またはＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするｍＲＮＡのレ
ベルを、直接的に（例えば、絶対的なタンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベルを
決定または概算することにより）または相対的に（例えば、第２の生物学的サン
プル中のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２レセプタータン
パク質レベルまたはｍＲＮＡレベルに対して比較することにより）、定性的また
は定量的に測定または概算することを意図する。

【０２９０】 好ましくは、第一の生物学的サンプル中のＴＲ２レセプタータンパク質レベル
またはｍＲＮＡレベルが測定または概算され、標準的なＴＲ２レセプタータンパ
ク質レベルまたはｍＲＮＡレベルに対して比較される。この標準は、疾患状態を
有しない個体から得られた第二の生物学的サンプルから採取される。当該分野で
理解されるように、標準的ＴＲ２レセプタータンパク質レベルまたはｍＲＮＡレ
ベルが一旦分かれば、それは、比較のための標準として繰り返し用いられ得る。

【０２９１】 「生物学的サンプル」とは、個体から得られる任意の生物学的サンプル、細胞
株、組織培養物、またはＴＲ２レセプタータンパク質もしくはｍＲＮＡを含む他
の供給源が意図される。生物学的サンプルは、分泌された成熟ＴＲ２レセプター
タンパク質を含む哺乳動物の体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液
）、ならびに胸腺、前立腺、心臓、胎盤、筋、肝臓、脾臓、肺、腎臓および他の
組織を包含する。哺乳動物から組織生検および体液を得るための方法は、当該分
野で周知である。生物学的サンプルがｍＲＮＡを含むことが意図される場合、組
織生検が好ましい供給源である。

【０２９２】 増加した細胞生存、またはアポトーシスの阻害に関連する疾患としては、癌（
例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異を伴う癌、およびホルモン依存性腫瘍（大
腸癌、心臓腫瘍、膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、グリア芽細胞腫、肺癌、腸癌
、精巣癌、胃癌、神経芽細胞腫、粘液種、筋腫、リンパ腫、内皮種、骨芽細胞腫
、骨巨細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、腺種、乳癌、前立腺癌、カポージ肉腫および
卵巣癌が挙げられるが、これらに限定されない））；自己免疫疾患（例えば、全
身性エリテマトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎慢性関節リウマチ）およびウイ
ルス感染（例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイルスおよびアデノウイルス
）、情報対宿主性移植片病、急性移植片拒絶および慢性移植片拒絶が挙げられる
。減少した細胞生存、または増加したアポトーシスに関連する疾患としては、Ａ
ＩＤＳ；神経変性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性
側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性）；脊髄形成異常症候群（例えば、再生不
良性貧血）、虚血性傷害（例えば、心筋梗塞、発作および再灌流障害によって引
き起こされる虚血性傷害）、毒素誘導性肝臓疾患（例えば、アルコールにより引
き起こされる肝臓疾患）、敗血症性ショック、悪液質ならびに食欲不振が挙げら
れる。

【０２９３】 好ましい実施形態においては、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／また
はＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、自己免疫疾患を処置
もしくは予防するため、ならびに／または癌（例えば、本明細書中で開示される
癌（例えば、リンパ性白血病（例えば、ＭＬＬおよび慢性リンパ性白血病（ＣＬ
Ｌ）が挙げられる））および濾胞性リンパ腫が挙げられるが、これらに限定され
ない）の増殖、進行、および／もしくは転移を阻害するために使用される。別の
実施形態においては、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−
ＳＶ２ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、癌性細胞または組織（例えば、
Ｂ細胞系関連癌（例えば、ＣＬＬおよびＭＬＬ）、リンパ性白血病、またはリン
パ腫）の活性化、分化または増殖させるために使用され、それによって、細胞を
癌治療（例えば、化学療法または放射線療法）に対してより脆弱にする。

【０２９４】 可溶性レセプターのレベルを検出するために利用可能なアッセイは、当業者に
周知であり、例えば、ラジオイムノアッセイ、結合競合アッセイ、ウエスタンブ
ロット分析、好ましくはＥＬＩＳＡアッセイが使用され得る。

【０２９５】 ＴＲ２レセプタータンパク質特異的抗体は、インタクトなＴＲ２レセプタータ
ンパク質またはその抗原性ポリペプチド部分（これらは、アルブミンのようなキ
ャリアタンパク質を、動物の系（例えば、ウサギまたはマウス）に対して一緒に
提示し得るか、または充分に長い（少なくとも約２５アミノ酸）場合、キャリア
なしで提示し得る）に対して惹起され得る。

【０２９６】 本明細書中で使用する場合、用語「抗体」（Ａｂ）または「モノクローナル抗
体」（ｍＡｂ）は、インタクトな分子ならびにＴＲ２レセプタータンパク質に特
異的に結合し得る抗体部分（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）₂フラグメント
）を含むことを意味する。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）₂フラグメントは、インタ
クトな抗体のＦｃフラグベントを欠き、循環からより迅速にクリアランスされ、
そしてインタクトな抗体のあまり非特異的でない組織結合を有し得る（Ｗａｈｌ
ら，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６−３２５（１９８３））。従って、こ
れらの部分が好ましい。

【０２９７】 本発明の抗体は、任意の種々の方法によって調製され得る。例えば、ＴＲ２、
ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質またはそ
の抗原性フラグメントを発現する細胞は、ポリクローナル抗体を含有する血清の
産生を誘導するために動物に投与され得る。好ましい方法では、ＴＲ２、ＴＲ２
−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質の調製物が、この
調製物が天然の夾雑物を実質的に含まないように調製され、そして精製される。
次いで、このような調製物は、より大きな比活性のポリクローナル抗血清を産生
するために動物に導入される。

【０２９８】 最も好ましい方法において、本発明の抗体はモノクロナール抗体（またはその
ＴＲ２レセプタータンパク質結合フラグメント）である。このようなモノクロナ
ール抗体は、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４
９５（１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１
（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９２（１
９７６）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．
Ｙ．，（１９８１）５６３−６８１頁）を使用して調製され得る。一般的には、
このような手順は、ＴＲ２レセプタータンパク質抗原またはより好ましくはＴＲ
２レセプタータンパク質発現細胞で動物（好ましくはマウス）を免疫することに
関する。適切な細胞は、抗ＴＲ２レセプタータンパク質抗体を結合する能力のあ
る抗原により認識され得る。このような細胞は、任意の適切な組織培養培地にお
いて培養され得る；しかし、１０％ウシ胎仔血清（約５６℃で非動化した）を補
充し、そして約１０ｇ／ｌの非必須アミノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリ
ン、および約１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変
イーグル培地において培養されることが好ましい。このようなマウスの脾細胞は
抽出され、そして適切な骨髄腫細胞株と融合される。任意の適切な骨髄腫細胞株
は、本発明に従って使用され得る；しかし、アメリカン タイプ カルチャー
コレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）から入手可能な親骨髄
腫細胞株（ＳＰ₂Ｏ）を使用することが好ましい。融合後、得られるハイブリド
ーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に維持し、次いでＷａｎｄｓら（Ｇａｓ
ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２（１９８１））により記載
されるように限界希釈によってクローニングする。次いで、このような選択によ
って得られるハイブリドーマ細胞は、ＴＲ２レセプタータンパク質抗原を結合し
得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセイされる。

【０２９９】 （ＴＲ２レセプター機能のアゴニストおよびアンタゴニスト） １つの局面において、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導され
るＴＲ２活性を阻害するための方法に関する（例えば、細胞増殖、造血の発生）
。この方法は、ＴＲ２ポリペプチドを発現する細胞にＴＲ２レセプター媒介シグ
ナル伝達を減少し得る有効量のＴＲ２レセプターリガンド、アナログまたはアン
タゴニストを投与する工程を包含する。好ましくは、ＴＲ２レセプター媒介シグ
ナル伝達を増加させ、疾患を処置する。ここで、増加した細胞増殖が示される。
アンタゴニストは、ＴＲ２レセプターの可溶化形態およびＴＲ２レセプター媒介
シグナル伝達をブロックするＴＲ２ポリペプチドに対する抗体を含み得る。好ま
しくは、ＴＲ２レセプター媒介シグナル伝達を減少させ、疾患を処置する。

【０３００】 さらなる局面において、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導さ
れる細胞増殖を増加させるための方法に関する。この方法は、ＴＲ２ポリペプチ
ドを発現する細胞にＴＲ２レセプター媒介シグナル伝達を上昇し得る有効量のア
ゴニストを投与する工程を包含する。好ましくは、ＴＲ２レセプター媒介シグナ
ル伝達を、増加させ、疾患を処置する。ここで、減少した細胞増殖が示される。
本発明のアゴニストとしては、ＴＲ２レセプター媒介シグナル伝達を刺激するＴ
Ｒ２ポリペプチドに対するモノクロナール抗体が挙げられる。好ましくは、ＴＲ
２レセプター媒介シグナル伝達を増加させ、疾患を処置する。

【０３０１】 「アゴニスト」によって、ＴＲ２ポリペプチドによって媒介される細胞増殖お
よび分化を促進し得る天然に存在する化合物および合成化合物が意図される。こ
のようなアゴニストとしては、ＴＲ２レセプターの発現を増加させるか、または
発現されたレセプターの感受性を増加させる因子が挙げられる。「アンタゴニス
ト」によって、ＴＲ２媒介細胞増殖および分化を阻害し得る天然に存在する化合
物および合成化合物が意図される。このようなアンタゴニストとしては、ＴＲ２
レセプターの発現を減少させるか、または発現されたレセプターの感受性を減少
させる因子が挙げられる。本発明のいくつかの候補「アゴニスト」または「アン
タゴニスト」が、細胞増殖および分化を促進または阻害し得るか否かを、当該分
野で公知のＴＮＦファミリーリガンド／レセプター細胞応答アッセイを使用して
決定し得る（より詳細な記載は、以下に挙げる）。

【０３０２】 １つのこのようなスクリーニング技術には、レセプター活性化によって引き起
こされる細胞外ｐＨ変化を測定する系においてレセプターを発現する細胞（例え
ば、トランスフェクトしたＣＨＯ細胞）の使用が含まれる（例えば、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２４６：１８１−２９６（１９８９年１０月）に記載されるように）。例
えば、化合物は、本発明のレセプターポリペプチドを発現する細胞と接触され得
、そしてセカンドメッセンジャー応答（例えば、シグナル伝達またはｐＨ変化）
が測定され得、潜在的な化合物がレセプターを活性化するかまたは阻害するかを
決定し得る。

【０３０３】 別のこのようなスクリーニング技術は、そのレセプターをコードするＲＮＡを
Ｘｅｎｏｐｕｓ卵母細胞に導入して、そのレセプターを一過性に発現する工程を
包含する。次いで、そのレセプター卵母細胞は、レセプターリガンドと接触され
得、そして化合物がスクリーニングされ得、続いてレセプターの活性化を阻害す
ると考えられている化合物についてのスクリーニングの場合、カルシウムシグナ
ルの阻害または活性化の検出が行われ得る。

【０３０４】 別の方法は、その表面上にレセプターを有する細胞に対する標識されたリガン
ドの結合の阻害を決定することによって、本発明のアンタゴニストのレセプター
ポリペプチドの活性化を阻害する化合物をスクリーニングする工程を包含する。
このような方法は、レセプターをコードするＤＮＡで真核生物細胞をトランスフ
ェクトして、その結果その細胞がその表面でそのレセプターを発現する工程、お
よび標識した形態の既知のリガンドの存在下で細胞を化合物と接触させる工程を
包含する。そのリガンドは、例えば、放射能によって標識され得る。レセプター
に結合した標識されたリガンドの量は、例えば、レセプターの放射能を測定する
ことによって測定される。その化合物が、レセプターに結合する標識されたリガ
ンドの減少によって決定されるようにレセプターに結合する場合、そのレセプタ
ーに対する標識されたリガンドの結合は阻害される。

【０３０５】 本発明のポリペプチドの可溶化形態は、上記のリガンド結合アッセイにおいて
利用され得る。ＴＲ２レセプターのこれらの形態は、このレセプターの分泌後に
、細胞外培地においてリガンドと接触される。次いで、分泌タンパク質がＴＲ２
レセプターリガンドに結合するか否かに関して、決定がなされる。

【０３０６】 本発明のアゴニストおよびアンタゴニストについてのさらなるスクリーニング
アッセイは、Ｔａｒｔａｇｌｉａ，Ｌ．Ａ．およびＧｏｅｄｄｅｌ，Ｄ．Ｖ．、
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（７）：４３０４−４３０７（１９９２）に記
載される。

【０３０７】 従って、さらなる局面において、候補アゴニストまたはアンタゴニストがＴＮ
Ｆファミリーリガンドに対する細胞応答を増強し得るかまたは阻害し得るかを決
定するためのスクリーニング方法が提供される。この方法は、ＴＲ２ポリペプチ
ドを発現する細胞を候補化合物およびＴＮＦファミリーリガンドと接触させる工
程、細胞応答をアッセイする工程、ならびにその細胞応答を標準的な細胞応答と
比較する工程を包含し、その標準は、候補化合物の非存在下でリガンドとの接触
がなされた場合にアッセイされ、それによって、標準を上回る細胞応答の増加は
、その候補化合物がリガンド／レセプターシグナル伝達経路のアゴニストである
ことを示し、そして標準と比較して減少した細胞応答は、その候補化合物がリガ
ンド／レセプターシグナル伝達経路のアンタゴニストであることを示す。「細胞
応答をアッセイする」によって、候補化合物および／またはＴＮＦファミリーリ
ガンドに対する細胞応答を定性的または定量的に測定すること（例えば、Ｔ細胞
増殖のまたはトリチウム化チミジン標識の増加または減少を決定または見積もる
こと）が意図される。本発明によって、ＴＲ２ポリペプチドを発現する細胞は、
内因性または外因性のいずれかで投与されたＴＮＦファミリーリガンドと接触さ
れ得る。

【０３０８】 さらなる局面において、胸腺細胞増殖アッセイを使用し、リガンドおよび可能
性のある薬物候補の両方が同定され得る。例えば、胸腺細胞は、組織から分離し
、そして培地において増殖される。ＤＮＡ前駆対の取り込み（例えば、³Ｈ−チ
ミジンまたは５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ））は、ＤＮＡ合
成および細胞増殖のパラメーターとしてモニタリングされる。ＤＮＡに取り込ま
れたＢｒｄＵを有する細胞は、ＢｒｄＵに対するモノクロナール抗体を使用して
検出され得、そして、酵素または蛍光色素を結合体化した二次抗体によって測定
され得る。この反応を、蛍光光度法（ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ）によってか、ま
たは分光測光法によって定量化する。２つのコントロールウェルおよび実験ウェ
ルは、上記のように準備され、そしてＴＮＦ−βまたは同族リガンドが全てのウ
ェルに添加され、一方で本発明の可溶化レセプターポリペプチドが、スクリーニ
ングされる化合物を含む実験ウェルとともに第２コントロールウェルに個別に添
加される。次いで、スクリーニングされる化合物の上記相互作用を刺激または阻
害する能力が定量化され得る。

【０３０９】 本発明に従うアゴニストとしては、化合物（例えば、ＴＮＦファミリーリガン
ドペプチドフラグメント、トランスホーミング増殖因子β、および神経伝達物質
（例えば、グルタメート、ドパミン、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルテート）が挙げ
られる。好ましいアゴニストとしては、ＴＲ２ポリペプチドまたはそのフラグメ
ントに対して惹起されるポリクロナール抗体およびモノクロナール抗体が挙げら
れる。ＴＮＦファミリーレセプターに対して惹起されたこのようなアゴニスト抗
体は、Ｔａｒｔａｇｌｉａ，Ｌ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８８：９２９２−９２９６（１９９１）；ならびにＴａｒｔａｇｌ
ｉａ，Ｌ．Ａ．およびＧｏｅｄｄｅｌ，Ｄ．Ｖ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
６７（７）：４３０４−４３０７（１９９２）に開示される。ＰＣＴ出願公開番
号ＷＯ ９４／０９１３７もまた参照のこと。さらに好ましいアゴニストとして
は、化学療法剤（例えば、シスプラチン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、シ
トシンアラビノシド、ナイトロジェンマスタード、メトトレキサート、およびビ
ンクリスチン）が挙げられる。他のアゴニストとしては、エタノールおよびβ−
アミロイドペプチドが挙げられる（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６７：１４５７−１４５
８（１９９５））。

【０３１０】 本発明に従うアンタゴニストとしては、ＴＲ２レセプターの可溶性形態（例え
ば、全長レセプターの細胞外領域由来のリガンド結合ドメインを含む図１Ａ〜１
Ｂにおいて示されたＴＲ２レセプターのフラグメント）が挙げられる。天然に存
在するか、または合成的であり得るレセプターのこのような可溶性形態は、ＴＮ
Ｆ−ファミリーリガンドに結合するためにレセプターの細胞表面結合形態で競合
することによってＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１またはＴＲ２−ＳＶ２媒介シグナル伝
達をアンタゴナイズする。本発明のアンタゴニストとしてはまた、ＴＮＦファミ
リーリガンドおよび実施例５および実施例６において以下に記載されたようなＴ
Ｒ２−Ｆｃ融合タンパク質に特異的な抗体が挙げられる。

【０３１１】 「ＴＮＦファミリーリガンド」によって、ＴＮＦレセプターファミリーのメン
バーに結合し得、そしてそのリガンド／レセプターシグナル伝達経路を誘導し得
る、天然に存在するリガンド、組換えリガンド、および合成リガンドが意図され
る。ＴＮＦリガンドファミリーのメンバーとしては、以下が挙げられるがこれら
に限定されない：ＴＮＦ−α、リンフォトキシン−α（ＬＴ−α、ＴＮＦ−βと
してもまた公知）、ＬＴ−β（複合体ヘテロマーＬＴ−α２−βとして見出され
た）、ＦａｓＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−ｌＢＢＬ、ＯＸ４
０Ｌ、および神経成長因子（ＮＧＦ）。

【０３１２】 実施例６に示された実験は、本発明のＴＲ２レセプターが、リンパ球の増殖を
誘導し得ることを実証する。さらに、このような増殖は、Ｆｃ抗体フラグメント
に融合したＴＲ２タンパク質フラグメントによって阻害され得る。従って、ＴＲ
２レセプター／Ｆｃ融合タンパク質、およびこのようなタンパク質をコードする
核酸分子は、本発明の範囲内に特に含まれる。これらの融合タンパク質としては
、本発明のＴＲ２タンパク質の細胞外ドメインのアミノ酸配列を有する融合タン
パク質が挙げられる。ＴＲ２レセプター／Ｆｃ融合タンパク質の調製において有
用であるＴＲ２細胞外ドメインの一部の例としては、配列番号２におけるアミノ
酸１〜１９２、３７〜１９２、５０〜１９２および１００〜１９２が挙げられる
。

【０３１３】 ＴＮＦαは、１型Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘウイルス（ＨＳＶ−１）での
感染からマウスを保護することを示した。Ｒｏｓｓｏｌ−Ｖｏｔｈ，Ｒ．ら、Ｊ
．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７２：１４３−１４７（１９９１）。ＴＮＦαの予防効
果の機構は未知であるが、インターフェロンもＮＫ細胞による殺害も関与しない
ようである。ＴＮＦＲファミリーの１つのメンバーは、ＨＳＶ−１の細胞への侵
入を媒介することを示した。Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｒ．ら、Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏ
ｋｉｎｅ Ｎｅｗｔ．７：１５９（１９９６）。さらに、このＴＮＦＲの細胞外
ドメインに特異的な抗体は、ＨＳＶ−１の細胞への侵入をブロックする。従って
、本発明のＴＲ２レセプターとしては、ＴＮＦＲが媒介するウイルスの細胞への
侵入を予防し得るＴＲ２アミノ酸配列および抗体の両方が挙げられる。このよう
な配列および抗体は、ウイルスへの結合のために細胞表面に位置するＴＮＦＲと
競合するか、またはウイルスの細胞表面レセプターへの結合を直接ブロックする
かのいずれかによって機能し得る。

【０３１４】 同様に、本発明のＴＲ２レセプターの細胞外ドメインに特異的な抗体、ならび
に他のＴＲ２アンタゴニストはまた、ＨＳＶ−１の細胞への侵入をブロックし得
る。従って、これらのアンタゴニストはＨｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ感染の処
置および予防において有効である。

【０３１５】 本発明に従う抗体は、本発明のＴＲ２レセプター免疫原を使用する種々の方法
のいずれかによって調製され得る。このようなＴＲ２レセプター免疫原としては
、ＴＲ２レセプターのリガンド結合ドメイン、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、細胞内ドメインまたはこれらの任意の組み合わせを含むか、あるいはこれらか
らなる配列番号２６、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）において示されるＴＲ２レセ
プタータンパク質ならびにＴＲ２−ＳＶ１（図４Ａ〜４Ｃ（配列番号５））ポリ
ペプチドおよびＴＲ２−ＳＶ２（図７Ａ〜７Ｃ（配列番号８））ポリペプチド（
これらのいずれかは、リーダー配列を含んでもよいし、含まなくてもよい）なら
びにレセプターのポリペプチドフラグメントが挙げられる。

【０３１６】 本発明に従うポリクロナール抗体アゴニストまたはアンタゴニストおよびモノ
クロナール抗体アゴニストまたはアンタゴニストは、Ｔａｒｔａｇｌｉａおよび
Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（７）：４３０４−４３０７
（１９９２）；Ｔａｒｔａｇｌｉａら、Ｃｅｌｌ ７３：２１３−２１６（１９
９３）およびＰＣＴ出願公開番号 ＷＯ９４／０９１３７において公開された方
法に従って惹起され得る。本明細書中で使用される場合、用語「抗体」（Ａｂ）
または「モノクロナール抗体」（ｍＡｂ）は、抗原を結合し得るインタクトな分
子ならびにそのフラグメント（例えば、ＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’） ₂ フラグメントのような）を含むことを意味する。ＦａｂフラグメントおよびＦ
（ａｂ’）₂フラグメントは、インタクトな抗体のＦｃフラグメントを欠失し、
循環からより迅速に消失し、そしてインタクトな抗体のより少ない組織非特異的
結合を有し得る（Ｗａｈｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６−３２５（
１９８３））。

【０３１７】 好ましい方法において、本発明に従う抗体は、ｍＡｂである。このようなｍＡ
ｂは、ハイブリドーマ技術を使用して調製され得る（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌ
ｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（１９７５）および米国
特許第４，３７６，１１０号；Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，
ＮＹ，１９８８；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｈｙ
ｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃ
ａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ
，１９８０；Ｃａｍｐｂｅｌｌ，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，
第１３巻（Ｂｕｒｄｏｎら、編），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ（１
９８４））。

【０３１８】 ＴＲ２レセプタードメインを結合するタンパク質および他の化合物はまた、本
発明に従う候補アゴニストおよびアンタゴニストである。このような結合化合物
は、酵母ツーハイブリッド系を使用して「捕獲」され得る（Ｆｉｅｌｄｓおよび
Ｓｏｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６（１９８９））。酵母ツーハ
イブリッド系の改変されたバージョンは、Ｒｏｇｅｒ Ｂｒｅｎｔおよび彼の共
同研究者（Ｇｙｕｒｉｓ，Ｊ．ら、Ｃｅｌｌ ７５：７９１−８０３（１９９３
）；Ｚｅｒｖｏｓ，Ａ．Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ ７２：２２３−２３２（１９９３）
）によって記載されている。好ましくは、この酵母ツーハイブリッド系を本発明
に従って使用し、ＴＲ２レセプターのリガンド結合ドメイン、細胞外ドメイン、
細胞内ドメイン、および膜貫通ドメインに結合する化合物を捕獲する。このよう
な化合物は、本発明の良好な候補アゴニストおよびアンタゴニストである。

【０３１９】 上記のツーハイブリッドアッセイを使用して、ＴＲ２レセプターの細胞内ドメ
インまたはその一部を使用し、インビボでレセプターと相互作用する細胞タンパ
ク質を同定し得る。このようなアッセイをまた使用し、ＴＲ２レセプター機能の
潜在的なアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を有するリガンドを同定し得
る。このスクリーニングアッセイは以前に使用され、マウスＴＮＦ−ＲＩＩの細
胞質ドメインと相互作用するタンパク質が同定され、そして２つのレセプター結
合タンパク質の同定をもたらした。Ｒｏｔｈｅ，Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ ７８：６８
１（１９９４）。ＴＲ２レセプターの細胞質ドメインに結合するこのようなタン
パク質およびアミノ酸配列は、本発明の良好な候補アゴニストおよびアンタゴニ
ストである。

【０３２０】 他のスクリーニング技術としては、レセプターの活性化によって引き起こされ
る細胞外のｐＨ変化を測定する系において本発明のポリペプチドを発現する細胞
（例えば、トランスフェクトしたＣＨＯ細胞）の使用が挙げられる（例えば、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２４６：１８１−２９６（１９８９）に記載されるように）。別
の例において、潜在的なアゴニストまたはアンタゴニストは、本発明のポリペプ
チドを発現する細胞と接触され得、そしてセカンドメッセンジャー応答（例えば
、シグナル伝達）が測定され、潜在的なアンタゴニストまたはアゴニストが効果
的であるか否かが決定され得る。

【０３２１】 ＴＲ２レセプターアゴニストが使用され、リガンド活性化を刺激し得る（例え
ば、腫瘍成長の阻害および特定の移植可能な腫瘍の壊死）。アゴニストがまた、
使用され、細胞の分化（例えば、Ｔ−細胞、線維芽細胞および造血細胞の分化）
を刺激され得る。ＴＲ２レセプターに対するアゴニストはまた、微生物に対する
宿主の防御ならびに関連疾患（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ
からの疾患のような感染）およびＣｈｌａｍｉｄｉａｅの予防におけるＴＲ２の
役割を増強し得る。このアゴニストがまた、使用され、放射線治療の経過の間に
産生されるイオン化放射の有害な影響（酵素の変性、脂質の過酸化、およびＤＮ
Ａ損傷）を保護し得る。

【０３２２】 本発明のレセプターポリペプチドに対するアゴニストは、微生物に対する宿主
の防御におけるＴＮＦの役割を増強するため、および関連疾患を予防するために
使用され得る。このアゴニストがまた使用され、放射線治療の経過の間に産生さ
れるイオン化放射の有害な影響（例えば、酵素の変性、脂質の過酸化、およびＤ
ＮＡ損傷）を保護し得る。

【０３２３】 このアゴニストをまた使用し、抗ウイルス応答を媒介、増殖を調節、免疫応答
を媒介、そしてリンパ球の増殖および分化の速度を上昇することによって疾患（
例えば、ＨＩＶ）に関連する免疫不全を処置し得る。

【０３２４】 本発明のポリペプチドに対するアンタゴニストを使用し、リガンド活性化を阻
害し得る（例えば、腫瘍の増殖の刺激および特定の移植可能な腫瘍の壊死）。こ
のアンタゴニストがまた使用され、細胞の分化（例えば、Ｔ細胞、線維芽細胞お
よび造血細胞の分化）を阻害し得る。アンタゴニストがまた使用され、自己免疫
疾患（例えば、対宿主性移植片反応および同種移植拒絶）、およびＴ細胞媒介自
己免疫疾患（例えば、ＡＩＤＳ）を処置し得る。Ｔ細胞の増殖は、２型ＴＮＦレ
セプターを介して刺激されることが示されてきた。従って、レセプターをアンタ
ゴナイズすることは、Ｔ細胞の増殖を阻止し、そしてＴ細胞媒介自己免疫疾患を
処置し得る。

【０３２５】 ＡＩＤＳを定義する免疫不全の状態は、ＣＤ４⁺Ｔリンパ球の数および機能の
減少のに対して二次的なものである。最近の報告は、毎日のＣＤ４⁺Ｔ細胞の損
失を３．５×１０⁷細胞と２×１０⁹細胞との間と見積もっている（Ｗｅｉ Ｘ．
ら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：１１７−１２２（１９９５））。ＨＩＶ感染の背景
にあるＣＤ４⁺Ｔ細胞球枯渇の１つの原因は、ＨＩＶ誘導アポトーシスであると
考えられる。実際には、ＨＩＶ誘導アポトーシス細胞死は、インビトロだけでな
く、感染した個体においてもまた、より重大であることが実証されている（Ａｍ
ｅｉｓｅｎ，Ｊ．Ｃ．，ＡＩＤＳ ８：１１９７−１２１３（１９９４）；Ｆｉ
ｎｋｅｌ，Ｔ．Ｈ．およびＢａｎｄａ，Ｎ．Ｋ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．６：６０５−６１５（１９９５）；Ｍｕｒｏ−Ｃａｃｈｏ，Ｃ．Ａ．
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５５５−５５６６（１９９５））。さらに
、アポトーシスおよびＣＤ４⁺Ｔリンパ球枯渇は、ＡＩＤＳの異なる動物モデル
（Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｔ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ３７３：４４１−４４４（１９９５
）；Ｇｏｕｇｅｏｎ，Ｍ．Ｌ．ら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉ
ｒｕｓｅｓ ９：５５３−５６３（１９９３））において密接に相関し、そして
アポトーシスは、ウイルスの複製がＡＩＤＳを生じない、それらの動物モデルに
おいて観察されない（Ｇｏｕｇｅｏｎ，Ｍ．Ｌ．ら、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ
．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ９：５５３−５６３（１９９３））。さらなるデ
ータは、ＨＩＶ感染した個体由来の、未感染であるがプライムしたかまたは活性
化したＴリンパ球が、ＴＮＦファミリーリガンドＦａｓＬと出会った後、アポト
ーシスを受けることを示す。ＨＩＶ感染の後に死を生じる単球細胞株を使用して
、ＨＩＶでのＵ９３７細胞の感染が、ＦａｓＬのデノボ発現およびＦａｓＬ媒介
ＨＩＶ誘導アポトーシスを生じることが実証された（Ｂａｄｌｅｙ，Ａ．Ｄ．ら
、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：１９９−２０６（１９９６））。さらに、ＴＮＦファ
ミリーリガンドは、未感染のマクロファージにおいて検出され、そしてＨＩＶ感
染の後、その発現が、アップレギュレートされ、未感染のＣＤ４⁺Ｔリンパ球の
選択的な殺滅を生じる（Ｂａｄｌｅｙ，Ａ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：１
９９−２０６（１９９６））。

【０３２６】 実施例６に示されるように、図１Ａ〜１Ｂにおいて示されるＴＲ２レセプター
は、ＣＤ４⁺Ｔリンパ球において発現され、そしてリンパ球の増殖を誘導し得る
。従って、本発明によって、ＨＩＶ⁺個体を処置するための方法が提供され、こ
れは、本発明のアゴニストを投与し、ＣＤ４⁺Ｔリンパ球の増殖および分化の速
度を上昇する工程を包含する。このようなアゴニストとしては、ＴＲ２レセプタ
ーの発現を誘導し得る因子（例えば、ＴＮＦα、ＰＭＡおよびＤＭＳＯ）または
リンパ球の増殖および分化を誘導する、このようなレセプターのシグナルを促進
し得る因子が挙げられる。投与および投薬の様式は、以下に詳細に議論される。

【０３２７】 同種移植片の拒絶において、レシピエント動物の免疫系は、応答のために先に
プライムされない。なぜなら、ほとんどの部分の免疫系は、周囲の抗原によって
のみプライムされるからである。同種の他のメンバー由来の組織は、例えば、ウ
イルスおよび細菌が存在しているという同じ状態で存在していない。同種移植片
拒絶の場合において、免疫抑制性レジメンが作製され、効果段階に達することか
ら免疫系を予防する。しかし、異種移植片拒絶の免疫プロフィールは、同種移植
片拒絶よりも疾患回帰に類似し得る。疾患回帰の場合において、免疫系は、ネイ
ティブな島細胞の破壊によって証明されるようにすでに活性化されている。従っ
て、疾患回帰において、免疫系は、すでにエフェクター段階である。本発明のア
ンタゴニストは、ＴＲ２媒介リンパ球増殖および分化の速度を減少することによ
って同種移植片および異種移植片の両方に対する免疫応答を抑制し得る。このよ
うなアンタゴニストとしては、実施例５および６に記載のＴＲ２−Ｆｃ融合タン
パク質が挙げられる。従って、本発明は、免疫応答の抑制のための方法をさらに
提供する。

【０３２８】 さらに、ＴＮＦ−αは、この苦痛が自己免疫に起因する傾向がある動物の種に
おける糖尿病を予防することを示す。Ｐｏｒｔｅｒ，Ａ．，Ｔｉｂｔｅｃｈ ９
：１５８−１６２（１９９１）を参照のこと。従って、本発明のアゴニストおよ
びアンタゴニストは、１型糖尿病のような自己免疫疾患の処置において有用であ
り得る。

【０３２９】 さらに、細胞増殖および分化におけるＴＲ２レセプターによって果たされる役
割は、本発明のアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、これらのレセプタ
ーの異常な細胞発現に関与する疾患状態を処置し得ることを示す。いくつかの状
況においてＴＲ２レセプターは、炎症応答を誘導し得、そしてアンタゴニストは
、この応答をブロックするための薬剤として有用であり得る。従って、ＴＲ２レ
セプターアンタゴニスト（例えば、ＴＲ２レセプターの可溶化形態；中和抗体）
は、炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、敗血症、お
よび炎症性腸疾患）を処置するために有用であり得る。

【０３３０】 ＴＲ２レセプターに対するアンタゴニストをまた使用して、重症の臨床状態の
ままである、敗血症性ショックを処置および／または予防し得る。敗血性ショッ
クは、直接的に病原体に起因するのではなく、タンパク質因子（例えば、ＴＮＦ
およびＩＬ−１）によって媒介される悪化された宿主応答に起因する。例えば、
リポ多糖類は、その血清濃度の強くそして一過性の上昇をもたらすＴＮＦの放出
を誘発することを示す。ＴＮＦは、過剰量で投与される場合、ショックおよび組
織傷害を引き起こす。従って、ＴＲ２レセプターに対するアンタゴニストは、Ｔ
ＮＦの作用をブロックし、そして敗血症性ショックを処置または予防すると考え
られる。これらのアンタゴニストをまた使用して、高血清レベルのＴＮＦと相関
がある小児における髄膜炎菌血症を処置し得る。

【０３３１】 ＴＲ２レセプターに対するアンタゴニストによって処置され得る障害の中でも
、ＴＮＦレセプターリガンド、ならびに細菌感染性悪液質および大脳マラリアに
よって媒介される炎症が挙げられる。ＴＲ２レセプターアンタゴニストをまた使
用して、ＴＮＦのようなレセプターに対するリガンドによって媒介される炎症を
処置し得る。

【０３３２】 特定の実施形態において、本発明に従うアンタゴニストは、配列番号２５、図
１Ａ〜１Ｂ（配列番号１）、図４Ａ〜４Ｃ（配列番号４）または図７Ａ〜７Ｃ（
配列番号７）において含まれる配列またはその相補鎖に対応する核酸、および／
あるいはＡＴＣＣ寄託番号９７０５９、９７０５８または９７０５７の寄託され
たヌクレオチド配列に対応する核酸である。１つの実施形態において、アンチセ
ンス配列は、生物によって内部で生成され、別の実施形態において、アンチセン
ス配列は、別々に投与される（例えば、Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈ
ｅｍ．５６：５６０（１９９１））、およびＯｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏ
ｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎ
ｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ
（１９８８）を参照のこと）。アンチセンス技術を使用して、アンチセンスＤＮ
ＡまたはＲＮＡを介してか、あるいは三重らせん形成を介して遺伝子発現を制御
し得る。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．
５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａ
ｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８）に
おいて議論される。三重らせん形成は、例えば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）；Ｄａｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５１：１３００（１９９１）において議論される。この方法は、相補的なＤ
ＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づく。

【０３３３】 例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’コー
ド部分を使用して、約１０〜４０塩基対の長さのアンチセンスＲＮＡオリゴヌク
レオチドを設計し得る。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の
領域に相補的であるように設計され、それによってこのレセプターの転写および
産生を妨げる。このアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡにイン
ビボでハイブリダイズし、そしてｍＲＮＡ分子のレセプターポリペプチドへの翻
訳をブロックする。

【０３３４】 １つの実施形態において、本発明のＴＲ２レセプターアンチセンス核酸は、外
因性配列からの転写によって細胞内に産生される。例えば、ベクターまたはその
一部は、転写され、本発明のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を産生する。このよう
なベクターは、ＴＲ２レセプターアンチセンス核酸をコードする配列を含む。こ
のようなベクターは、所望のアンチセンスＲＮＡを産生するために転写される限
りは、エピソームのままであり得るか、または染色体に組み込まれ得る。このよ
うなベクターは、当該分野において標準的な組換えＤＮＡ技術方法によって構築
され得る。ベクターは、プラスミド、ウイルスまたは当該分野において公知のそ
の他のものであり得、これは、脊椎動物細胞における複製および発現のために使
用される。ＴＲ２レセプターをコードする配列、またはそのフラグメントの発現
は、脊椎動物、好ましくはヒト細胞において作用するように当該分野において公
知の任意のプロモーターによってなされ得る。このようなプロモーターは、誘導
性または構成的であり得る。このようなプロモーターとしては、ＳＶ４０初期プ
ロモーター領域（ＢｅｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２９
：３０４−３１０（１９８１））、ラウス肉腫ウイルスの３’長い末端反復にお
いて含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｃｅｌｌ ２２：７８７−７
９７（１９８０））、ヘルペスチミジンプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４１−１４４５（１
９８１））、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、Ｎａｔ
ｕｒｅ ２９６：３９−４２（１９８２））などが挙げられるが、これらに限定
されない。

【０３３５】 本発明のアンチセンス核酸は、ＴＲ２レセプター遺伝子のＲＮＡ転写物の少な
くとも一部に相補的な配列を含む。しかし、好ましくは、完全な相補性であるが
、その必要性はない。本明細書中でいう「ＲＮＡの少なくとも一部に相補的な」
配列とは、ＲＮＡとハイブリダイズし、安定な二重鎖を形成し得る十分な相補性
を有する配列を意味し、二本鎖ＴＲ２レセプターアンチセンス核酸の場合、二重
鎖ＤＮＡの一本鎖は、このように試験され得るか、または三重鎖形成がアッセイ
され得る。ハイブリダイズする能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の
長さの両方に依存する。一般的には、ハイブリダイズする核酸が長ければ長いほ
ど、より多くの塩基がＴＲ２レセプターＲＮＡと不一致であり、そしてこれは、
安定な二重鎖（三重鎖の場合もあり得る）を含み得そしてなおそれを形成する。
当業者は、標準的な手順を使用して、ハイブリダイズした複合体の融点を決定す
ることによって不一致の耐え得る程度を確かめ得る。

【０３３６】 メッセンジャーの５’末端（例えば、５’非翻訳配列までであり、かつＡＵＧ
開始コドンを含む）に相補的であるオリゴヌクレオチドは、翻訳を阻害すること
に最も効率的に働くはずである。しかし、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的な
配列も同様に、ｍＲＮＡの翻訳を阻害することに効果的であることが示されてい
る。概して、Ｗａｇｎｅｒ，Ｒ．，Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３−３３５（１
９９４）を参照のこと。従って、配列番号２５、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号１）、
図４Ａ〜４Ｃ（配列番号４）または図７Ａ〜７Ｃ（配列番号７）において示され
るＴＲ２レセプターの５’非翻訳領域（非コード領域）または３’非翻訳領域（
非コード領域）のいずれかに相補的なオリゴヌクレオチドを、アンチセンス法に
おいて使用し、内因性ＴＲ２レセプターｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。ｍＲＮＡ
の５’非翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの相補鎖
を含むべきである。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオ
チドは、翻訳のあまり効果的でないインヒビターであるが、本発明に従い使用さ
れ得る。ＴＲ２レセプターｍＲＮＡの５’領域、３’領域またはコード領域にハ
イブリダイズするように設計されたか否かは、アンチセンス核酸が、少なくとも
６ヌクレオチドの長さであり、そしてより好ましくは６〜約５０ヌクレオチドの
長さの範囲であるべきである。特定の局面において、オリゴヌクレオチドは、少
なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオチド、少なくとも２５ヌク
レオチドまたは少なくとも５０ヌクレオチドである。

【０３３７】 本発明のポリヌクレオチドは、ＤＮＡもしくはＲＮＡまたはそのキメラ混合物
あるいはその誘導体またはその改変バージョン、一本鎖もしくは二本鎖であり得
る。このオリゴヌクレオチドは、塩基部分、糖部分、またはホスフェート骨格で
改変され、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーションなどを改善し得る。
このオリゴヌクレオチドは、他の付加した群（例えば、ペプチド（例えば、イン
ビボでの宿主細胞レセプターを標的化するため）、または細胞膜（例えば、Ｌｅ
ｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６：６５５３−
６５５６（１９８９）；Ｌａｍａｉｔｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２（１９８７）；１９８８年１２月１５日に公開さ
れたＰＣＴ公開番号 ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）もしくは血液脳関門
（例えば、１９８８年４月２５日に公開されたＰＣＴ公開番号 ＷＯ８９／１０
１３４を参照のこと）を横切る輸送を容易にする因子、ハイブリダイゼーション
誘発分裂因子（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｃｌｅａｖ
ａｇｅ ａｇｅｎｔ）（例えば、Ｋｒｏｌら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６
：９５８−９７６（１９８８）を参照のこと）またはインターカレート剤（例え
ば、Ｚｏｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９（１９８８）を参照のこ
と））を含み得る。この目的のために、このオリゴヌクレオチドの末端は、別の
分子（例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸送因子、ハイ
ブリダイゼーション誘発分裂因子など）が結合体化され得る。

【０３３８】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラ
シル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン
、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５
−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルア
ミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン、
イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイ
ノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン
、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグア
ニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオ
ウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン、５’−メトキシカルボキシメチル
ウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデ
ニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓ
ｉｎｅ）、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチル−
２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル
、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）
、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシ
プロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリンを含むが
、これらに限定されない群より選択される、少なくとも１つの改変した塩基部分
を含み得る。

【０３３９】 このアンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、アラビノース、２−フルオロア
ラビノース、キシルロース、およびヘキソースを含むが、これらに限定されない
群より選択される、少なくとも１つの改変した糖部分を含む。

【０３４０】 なお別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロチ
オエート、ホスホロジチオエート、ホスホルアミドチオエート、ホスホルアミデ
イト、ホスホルジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステ
ル、およびホルムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）またはそのアナログを含
むが、これらに限定されない群より選択される、少なくとも１つの改変したホス
フェート骨格を含む。

【０３４１】 なお別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、α−アノマ
ーオリゴヌクレオチドである。α−アノマーオリゴヌクレオチドは、通常のβ単
位とは反対に、鎖がお互いに平行である、相補的なＲＮＡと特異的な二重鎖ハイ
ブリッドを形成する（Ｇａｕｔｉｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５
：６６２５−６６４１（１９８７））。このオリゴヌクレオチドは、２’−Ｏ−
メチルリボヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５
：６１３１−６１４８（１９８７））、またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（
Ｉｎｏｕｅら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３０（１９８７））で
ある。

【０３４２】 本発明のポリヌクレオチドは当該分野で公知の標準的な方法（例えば、自動Ｄ
ＮＡ合成機（例えば、装置はＢｉｏｓｅａｒｃｈ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓなどから市販されている）の使用により）により合成され得る。例え
ば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎらの方法（Ｎｕｃｌ
．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １６：３２０９（１９８８））により合成され得、メ
チルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御された細孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏ
ｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）ポリマー支持体（Ｓａｒｉｎら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８５：７４４８−７４５１（１９
８８））などの使用により調製され得る。

【０３４３】 ＴＲ２レセプターのコード領域配列に相補的なアンチセンスヌクレオチドが使
用され得るが、転写された非翻訳領域に相補的なアンチセンスヌクレオチドが最
も好ましい。

【０３４４】 本発明に従う潜在的なアンタゴニストはまた、触媒ＲＮＡ、すなわちリボザイ
ムを含む（例えば、ＰＣＴ国際公開ＷＯ９０／１１３６４（１９９０年１０月４
日公開）；Ｓａｒｖｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４７：１２２２−１２２５（１
９９０）を参照のこと）。部位特異的認識配列でｍＲＮＡを切断するリボザイム
を使用して、ＴＲ２レセプターのｍＲＮＡを破壊し得るが、ハンマーヘッド型リ
ボザイムの使用が好ましい。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相
補的な塩基対を形成する隣接領域により決定される位置で、ｍＲＮＡを切断する
。たった１つの必要条件は、標的ｍＲＮＡが以下の２つの塩基配列を有すること
である：５’−ＵＧ−３’。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および生成は当
該分野で周知であり、そしてＨａｓｅｌｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ、Ｎａｔｕ
ｒｅ、３３４：５８５−５９１（１９８８）においてより十分に記載される。Ｔ
Ｒ２レセプター配列（配列番号２５、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号１）図４Ａ〜図
４Ｃ（配列番号４）および図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号７））内に多くの潜在的な
ハンマーヘッド型リボザイム切断部位が存在する。好ましくは、このリボザイム
は、切断認識部位が目的のＴＲ２レセプターｍＲＮＡの５’末端付近に位置する
ように；すなわち、効率を増大し、そして非機能的ｍＲＮＡ転写物の細胞内蓄積
を最小化するように、操作される。

【０３４５】 アンチセンスアプローチの場合、本発明のリボザイムは、改変されたオリゴヌ
クレオチド（例えば、安定性、標的化などについて改良された）から構成され得
、そしてインビボにおいてＴＲ２レセプターを発現する細胞に送達されるべきで
ある。リボザイムをコードするＤＮＡ構築物は、ＤＮＡをコードするアンチセン
スの導入のための上記と同じ様式で細胞中に導入され得る。送達の好ましい方法
は、強力な構成性プロモーター（例えば、ｐｏｌ ＩＩＩまたはｐｌ ＩＩプロ
モーターのような）の制御下で、リボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築物を使
用することを含み、その結果トランスフェクトした細胞が内因性ＴＲ２メッセー
ジを破壊し、そして翻訳を阻害するに十分な量のリボザイムを生成する。リボザ
イムはアンチセンス分子と異なり触媒性であるので、より低い細胞内濃度が効率
のために必要とされる。

【０３４６】 本発明の化合物および薬学的組成物は、好ましくは、人における使用の前に、
所望の治療活性および予防活性についてインビトロで試験され、次いでインビボ
で試験される。例えば、化合物または薬学的組成物の治療的有用性または予防的
有用性を実証するためのインビトロアッセイは、細胞株または患者の組織サンプ
ルに対する化合物の効果を含む。細胞株および／または組織サンプルに対する化
合物または組成物の効果は、当業者に公知の技術（増殖の阻害または刺激が挙げ
られるがこれらに限定されない）を使用して決定され得る。本発明に従って、特
定の化合物の投与が望ましいか否かを決定するために使用され得るインビトロア
ッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイが挙げられ、ここでは、患者の組
織サンプルは、培養物中で増殖され、そして化合物に曝されるか、またはそうで
なければ化合物を投与され、そしてこのような化合物の組織サンプルに対する効
果が観察される。

【０３４７】 内因性遺伝子発現もまた、標的化された相同組換えを使用してＴＲ２レセプタ
ー遺伝子および／またはそのプロモーターを不活性化あるいは「ノックアウトす
る」ことによって減少し得る（例えば、Ｓｍｉｔｈｉｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３
１７：２３０−２３４（１９８５）；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ、Ｃ
ｅｌｌ ５１：５０３−５１２（１９８７）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｃｅｌｌ
５：３１３−３２１（１９８９）を参照のこと；これらの各々は、本明細書中で
その全体が参考として援用される）。例えば、内因性ポリヌクレオチド配列（こ
の遺伝子のコード領域または調節領域のいずれか）と相同性のＤＮＡに隣接され
る、本発明の変異体、非機能的なポリヌクレオチド（または完全に関連のないＤ
ＮＡ配列）を、選択マーカーおよび／またはネガティブ選択マーカーを用いてま
たは用いずに使用し、インビボで本発明のポリペプチドを発現する細胞をトラン
スフェクトし得る。別の実施形態において、当該分野で公知の技術を使用して、
目的の遺伝子を含むが、発現しない細胞中でノックアウトを作製する。標的化さ
れた相同性組換えを介した、このＤＮＡ構築物の挿入は、標的化された遺伝子の
不活性化を生じる。このようなアプローチは、胚性幹細胞への改変が不活性な標
的遺伝子を有する動物の子孫を作製するために使用され得る研究および農業分野
において特に研究される（例えば、ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ １９
８７ならびにＴｈｏｍｐｓｏｎ １９８９、前出を参照のこと）。しかし、この
アプローチは、当業者に明白な、適切なウイルスベクターを使用して、組換えＤ
ＮＡ構築物がインビボで要求された部位に直接投与されるか、または標的化され
る場合、ヒトにおける使用に慣用的に適合され得る。この段落で引用された各々
の文書の内容は、その全体が参考として本明細書中で援用される。

【０３４８】 他の実施形態では、本発明に従うアンタゴニストとしては、ＴＲ２レセプター
の可溶性形態（例えば、配列番号２６、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）、図４Ａ
〜図４Ｃ（配列番号５）または図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号８）に示される、ＴＲ
２レセプターのフラグメント）が挙げれ、これは、全長レセプターの細胞外領域
由来のリガンド結合ドメインを含む。このようなＴＲ２レセプターの可溶性形態
（天然に存在するか、または合成の）は、ＴＮＦファミリーリガンドへの結合に
ついて、レセプタ−の細胞表面結合形態と競合することによりＴＲ２レセプター
が媒介するシグナル伝達をアンタゴナイズする。本発明のアンタゴニストはまた
、ＴＮＦファミリーリガンドおよびＴＲ２レセプター−Ｆｃ融合タンパク質に特
異的な抗体が挙げられる。

【０３４９】 「ＴＮＦファミリーリガンド」により、ＴＮＦレセプターファミリーのメンバ
ーと結合し得る天然に存在するリガンド、組換えリガンドおよび合成リガンドが
意図され、そしてリガンド／レセプターシグナル伝達経路を誘導および／または
ブロッキングする。ＴＮＦリガンドファミリーのメンバーとしては、ＴＮＦ−α
、リンホトキシン−α（ＬＴ−α、ＴＮＦ−βとしても知られる）、ＬＴ−β（
のヘテロトリマー複合体ＬＴ−α ２−βにおいて見出される）、ＦａｓＬ、Ｖ
ＥＧＩ（国際公開第ＷＯ ９６／１４３２８号）、ＡＩＭ−Ｉ（国際公開第ＷＯ
９７／３３８９９号）、ＡＩＭ−ＩＩ（国際公開第ＷＯ ９７／３４９１１号
）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１９０）、
エンドカイン（ｅｎｄｏｋｉｎｅ）−α（国際公開第ＷＯ ９８／０７８８０号
）、ニュートロカイン（ｎｅｕｔｒｏｋｉｎｅ）−α（国際公開第ＷＯ ９８／
１８９２１号）、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４
０Ｌおよび神経成長因子（ＮＧＦ）が挙げられるが、こらに限定されない。

【０３５０】 ＴＮＦ−αは、単純ヘルペス１型（ＨＳＶ−１）での感染からマウスを保護す
ることが示された。Ｒｏｓｓｏｌ−Ｖｏｔｈら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７２
：１４３−１４７（１９９１）。ＴＮＦ−ａの予防効果の機構は知られてないが
、インターフェロンまたはＮＫ細胞死滅のいずれにも関与しないようである。こ
のファミリーの１つのメンバーは、細胞へのＨＳＶ−１侵入を媒介することが示
された。Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら、Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｗｔ．７：
１５９（１９９６）。さらに、ＴＮＦ−αの細胞外ドメインに特異的な抗体は、
細胞へのＨＳＶ−１の侵入をブロックする。従って、本発明のＴＲ２レセプター
アンタゴニストは、ＴＲ２レセプターアミノ酸配列、および媒介される細胞への
ウイルスの侵入を予防し得る抗体の両方を含む。このような配列および抗体は、
ウイルスへの結合について局在化された細胞表面と競合することによるか、また
は細胞表面レセプターへのウイルスの結合を直接ブロックすることにより機能し
得る。

【０３５１】 本発明に従う抗体は、本発明のＴＲ２レセプター免疫原性を使用する種々の標
準の方法のいずれかにより調製され得る。このようなＴＲ２レセプター免疫原と
しては、配列番号２６、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）、図４Ａ〜図４Ｃ（配列
番号５）および図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号８）（これらは、リーダー配列を含ん
でもよいし含まなくてもよい）に示されるＴＲ２レセプタータンパク質、ならび
にＴＲ２レセプターのリガンド結合ドメイン、細胞外（例えば、１つ以上のシス
テイン反復領域）ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内ドメイン、またはこれらの
組み合わせを含むレセプターのポリペプチドフラグメントが挙げられる。

【０３５２】 本発明に従うポリクローナルまたはモノクローナル抗体アゴニストまたはアン
タゴニストは、本明細書中で開示される方法および／または当該分野で公知の方
法（例えば、ＴａｒｔａｇｌｉｎａおよびＧｏｅｄｄｅｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２６７：４３０４−４３０７（１９９２）；Ｔａｒｔａｇｌｉａら、Ｃｅ
ｌｌ ７３：２１３−２１６（１９９３）、ならびにＰＣＴ出願ＷＯ ９４／０
９１３７（これらの３つの各々の内容は、それらの全体が参考として本明細書中
に援用される）に記載される方法）に従って、誘起され得、そしてこれらは、好
ましくは、配列番号２、配列番号５、配列番号８または配列番号２６のアミノ酸
配列を有する本発明のポリペプチドに特異的である。

【０３５３】 遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、
および／またはコドンシャッフリング（総称して「ＤＮＡシャッフリング」とい
われる）の技術は、ＴＲ２の活性を改変し、これにより、ＴＲ２のアゴニストお
よびアンタゴニストを効率的に生成するために使用され得る。一般には、米国特
許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５，８３０，７２
１号、同第５，８３４，２５２号および同第５，８３７，４５８号、ならびにＰ
ａｔｔｅｎ，Ｐ．Ａ．ら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．
８：７２４−３３（１９９７）；Ｈａｒａｙａｍａ，Ｓ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉ
ｏＴｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２（１９９８）；Ｈａｎｓｓｏｎ，Ｌ
．Ｏ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５−７６（１９９９）；ならび
にＬｏｒｅｎｚｏ，Ｍ．Ｍ．およびＢｌａｓｃｏ，Ｒ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ２４（２）：３０８−１３（１９９８）（これらの特許および刊行物の
各々が本明細書により参考として援用される）を参照のこと。１つの実施形態に
おいて、ＴＲ２ポリヌクレオチドおよび対応するポリペプチドの変化は、ＤＮＡ
シャッフリングにより達成され得る。ＤＮＡシャッフリングは、相同組換えまた
は部位特異的組換えにより、２つ以上のＤＮＡセグメントを、所望のＴＲ２分子
へ構築することを含む。別の実施形態において、ＴＲ２ポリヌクレオチドおよび
対応するポリペプチドは、組換え前に誤りがちの（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ）Ｐ
ＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法により、ランダムな変異誘発に
供されることによって変化され得る。別の実施形態において、ＴＲ２の１つ以上
の成分、モチーフ、区切り（ｓｅｃｔｉｏｎ）、部分、ドメイン、フラグメント
などは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、区切り（ｓｅｃｔｉ
ｏｎ）、部分、ドメイン、フラグメントなどと組み換えられ得る。好ましい実施
形態では、異種分子としては、例えば、ＴＮＦ−α リンホトキシン−α（ＬＴ
−α、ＴＮＦ−βとしても公知である）、ＬＴ−β（複合ヘテロトリマーＬＴ−
α２−β中に見出される）、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、Ｃ
Ｄ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ−γ（国際公開番号第
ＷＯ９６／１４３２８号）、ＡＩＭ−Ｉ（国際公開番号第ＷＯ９７／３３８９９
号）、ＡＩＭ−ＩＩ（国際公開番号第ＷＯ９７／３４９１１号）、ＡＰＲＩＬ（
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１９０）、エンドカイン（ｅ
ｎｄｏｋｉｎｅ）−α（国際公開第ＷＯ ９８／０７８８０号）、ニュートロカ
イン（ｎｅｕｔｒｏｋｉｎｅ）−α（国際公開第ＷＯ ９８／１８９２１号）、
ＯＰＧ、およびＯＸ４０Ｌおよびニュートロカイン（ｎｅｕｔｒｏｋｉｎｅ）−
α（国際公開第ＷＯ ９８／１８９２１号）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ならび
に、Ｆａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、および４−ＩＢＢの可溶性形態、
ＤＲ３（国際公開番号第ＷＯ９７／３３９０４号）、ＤＲ４（国際公開番号第Ｗ
Ｏ９８／３２８５６号）、ＴＲ５（国際公開番号第ＷＯ９８／３０６９３号）、
ＴＲ６（国際公開番号第ＷＯ９８／３０６９４号）、ＴＲ７（国際公開番号第Ｗ
Ｏ９８／４１６２９号）、ＴＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際公開番号第ＷＯ９８／５６
８９２号）、ＴＲ１０（国際公開番号第ＷＯ９８／５４２０２号）、３１２Ｃ２
（国際公開番号第ＷＯ９８／０６８４２号）、ＴＲ１２、ならびにＴＮＦ−Ｒ１
、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３／ＡＰＯ−３／ＷＳＬ／ＬＡＲＤ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１／Ｄ
Ｒ４／ＡＰＯ−２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２／ＤＲ５、ＤｃＲ１／ＴＲＡＩＬ−Ｒ３／
ＴＲＡＯＤ／ＬＩＴ、ＤｃＲ２／ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＣＡＤ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲ
ＡＭＰ、ｖ−ＦＬＩＰが挙げられる。

【０３５４】 さらに好ましい実施形態では、異種分子は、ＴＮＦファミリーの任意のメンバ
ーである。

【０３５５】 （治療的使用および他の使用） 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーリガンドは、なかでも最も多面的なサイト
カインであることが公知である。これは、細胞傷害性、抗ウイルス活性、免疫調
節活性、およびいくつかの遺伝子の転写調節を含む多数の細胞性応答を誘導する
（Ｇｏｅｄｄｅｌ Ｄ．Ｖ．ら、「Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏ
ｒ：Ｇｅｎｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉ
ｖｉｔｉｅｓ」Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５１：５９７〜６０９、Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（１９８６）；Ｂｅａｔｌｅｒ，Ｂ．および
Ｃｅｒａｍｉ，Ａ．、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７：５０５〜５１
８（１９８８）；Ｏｌｄ，Ｌ．Ｊ．，Ｓｃｉ．Ａｍ．２５８：５９〜７５（１９
８８）；Ｆｉｅｒｓ，Ｗ．、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２８５：１９９〜２２４（１
９９１））。ＴＮＦファミリーリガンドは、ＴＮＦ−ファミリーレセプターに結
合することによりこのような種々の細胞性応答を誘導する。

【０３５６】 ＴＲ２ポリヌクレオチドもしくはＴＲ２ポリペプチド、またはＴＲ２のアゴニ
ストは、感染因子の処置に用いられ得る。例えば、免疫応答を増加させることに
よって、特にＢ細胞の増殖および分化を増加させることによって、感染性疾患が
処置され得る。免疫応答は、既存の免疫応答を増強させるか、または新たな免疫
応答を開始させるかのいずれかにより増加され得る。あるいは、ＴＲ２ポリヌク
レオチドもしくはＴＲ２ポリペプチド、またはＴＲ２のアゴニストもしくはアン
タゴニストはまた、必ずしも免疫応答を誘発することなく、感染因子を直接阻害
し得る。

【０３５７】 上記のように、ＴＲ２ポリヌクレオチドおよびＴＲ２ポリペプチド、ならびに
抗ＴＲ２抗体は、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２の異
常に高いかもしくは低い発現、ならびに／またはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および
／もしくはＴＲ２−ＳＶ２活性に関連する状態の診断に有用である。ＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２が発現され、そしてＴＲ２、ＴＲ
２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２により活性が改変される細胞および
組織を考慮すると、標準もしくは「正常」なレベルと比較して、個体におけるＴ
Ｒ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２の発現の実質的に変化さ
れた（増加されたかまたは減少された）レベルが、身体系（ＴＲ２、ＴＲ２−Ｓ
Ｖ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２が発現され、そして／または活性化される
）に関連する病理学的状態を生じることは容易に明らかである。

【０３５８】 各々のタンパク質の細胞外ドメインが、タンパク質分解性切断により、ＴＲ２
、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２を発現する細胞から各々のタン
パク質の細胞外ドメインが可溶性形態で放出され、これにより、ＴＲ２、ＴＲ２
−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド（特に各々の細胞外ドメイ
ンの可溶性形態）が、外因性供給源から個体の細胞、組織または身体へ添加され
得る場合、このポリペプチドは、その個体のその標的細胞のいずれかに対する活
性を調節することはまた、当業者により理解される。なぜなら、本発明のＴＲ２
ポリペプチドは、ＴＮＦファミリーのメンバーだからである。また、このＩＩ型
膜貫通タンパク質を発現する細胞は、個体の細胞、組織または身体へ添加され得
、これにより、添加された細胞は、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ
２−ＳＶ２に関するレセプターを発現する細胞に結合し、これにより、ＴＲ２、
ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２を発現する細胞は、レセプター保
有標的細胞に対して作用（例えば、幻想した増殖または細胞障害性を）を引き起
こし得る。

【０３５９】 １つの実施形態では、本発明は、標的細胞（例えば、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１
および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２レセプターを発現するＢ細胞、またはＴＲ２、
ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２の細胞表面結合形態を発現する
単球）へ、本発明のポリペプチドを含む組成物（例えば、異種ポリペプチド、異
種核酸、毒素またはプロドラッグに関連する、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／
もしくはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド、または抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１
抗体および／もしくは抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体を含む組成物）を送達する方法を提
供する。本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２ポリ
ペプチド、または抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および／もしくは抗ＴＲ
２−ＳＶ２抗体は、疎水的相互作用、親水的相互作用、イオン結合および／また
は共有結合を介して、異種ポリペプチド、異種核酸、毒素またはプロドラッグに
関連し得る。

【０３６０】 １つの実施形態では、本発明は、異種ポリペプチドまたは核酸に関連する本発
明のポリペプチド（例えば、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−
ＳＶ２、または抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および／もしくは抗ＴＲ２
−ＳＶ２抗体）を投与することによる、本発明の組成物の細胞への特異的な送達
のための方法を提供する。１つの実施例において、本発明は、治療タンパク質を
標的化細胞中へ送達するための方法を提供する。別の実施例において、本発明は
、一本鎖核酸（例えば、アンチセンスまたはリボザイム）または二本鎖核酸（例
えば、細胞のゲノムに組み込み得るか、またはエピソームにて複製し得、そして
転写され得るＤＮＡ）を、標的化細胞に送達するための方法を提供する。

【０３６１】 別の実施形態では、本発明は、毒素または細胞傷害性プロドラッグに関連する
本発明のポリペプチド（例えば、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ
２−ＳＶ２、または抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および／もしくは抗Ｔ
Ｒ２−ＳＶ２抗体）を投与することによる細胞の特異的な破壊（例えば、腫瘍細
胞の破壊）のための方法を提供する。

【０３６２】 特定の実施形態では、本発明は、毒素または細胞障害性プロドラッグに関連す
る、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２または抗ＴＲ２抗
体を投与することによるＢ細胞系列の細胞（例えば、Ｂ細胞関連白血病またはリ
ンパ腫）の特異的破壊のための方法を提供する。

【０３６３】 「毒素」とは、内因性の細胞傷害性エフェクタ系、放射性同位体、ホロ毒素（
ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）、改変型毒素、毒素の触媒サブユニット、細胞毒（細胞障
害性薬剤）、または規定の条件下で細胞死を引き起こす細胞中もしくは細胞表面
には通常存在しない任意の分子もしくは酵素を結合および活性化する化合物を意
味する。本発明の方法に従って使用され得る毒素としては、以下が挙げられるが
、これらに限定されない：当該分野で公知の放射性同位体、固有のまたは誘導さ
れた内因性の細胞傷害性エフェクタ系に結合する化合物（例えば、抗体（または
その補体固定含有部分）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ
、α毒素、リシン、アブリン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、ジフテリア毒
素、サポリン、モモルジン（ｍｏｍｏｒｄｉｎ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）
、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、αサルシン（ｓａｒｃｉｎ）およびコレラ
毒素。「毒素」はまた、細胞分裂停止剤もしくは細胞破壊剤、治療薬または放射
活性金属イオン（例えば、α−放射体（例えば、²¹³Ｂｉ））もしくは他の放射
性同位体（例えば、¹⁰³Ｐｄ、¹³³Ｘｅ、¹³¹Ｉ、⁶⁸Ｇｅ、⁵⁷Ｃｏ、⁶⁵Ｚｎ、⁸⁵Ｓ
ｒ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、⁹⁰Ｙ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁵³Ｇｄ、¹⁶⁹Ｙｂ、⁵¹Ｃｒ、⁵⁴Ｍｎ、⁷⁵Ｓｅ
、¹¹³Ｓｎ、⁹⁰イットリウム、¹¹⁷スズ、¹⁸⁶レニウム、¹⁶⁶ホルミウム、および^{18 8} レニウム）；発光標識（例えば、ルミノール）；および蛍光標識（例えば、フ
ルオレセインおよびローダミン）、ならびにビオチンを含む。

【０３６４】 当該分野において公知の技術は、本発明の抗体を標識するために適用され得る
。このような技術としては、二官能性結合剤の使用（例えば、米国特許第５，７
５６，０６５号；同第５，７１４，６３１号；同第５，６９６，２３９号；同第
５，６５２，３６１号；同第５，５０５，９３１号；同第５，４８９，４２５号
；同第５，４３５，９９０号；同第５，４２８，１３９号；同第５，３４２，６
０４号；同第５，２７４，１１９号；同第４，９９４，５６０号；および５，８
０８，００３号を参照のこと；これら各々の内容は、本明細書中に参考としてそ
の全体を援用される）が挙げられるが、これに限定されない。細胞毒素または細
胞障害性薬剤としては、細胞に対して有害である任意の薬剤が挙げられる。例と
しては、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｏｌ）、サイトカラシンＢ、グラミ
シジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシ
ド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、
ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙ
ｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマ
イシン、アクチノマイシンＤ，１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイ
ド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピュー
ロマイシン、ならびにそれらのアナログまたはホモログ、が挙げられる。治療剤
は、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チ
オグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤
（例えば、クロルメチン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、チオエパ（ｔｈ
ｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）および
ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉ
ｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマ
イシンＣ、ならびにｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）、シスプ
ラチン、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン
）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアク
チノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（
ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ））、ならびに有糸分裂阻害剤（例えばビン
クリスチンおよびビンブラスチン）を含むが、それらに限定されない。

【０３６５】 「細胞傷害性プロドラッグ」とは、通常細胞内に存在する酵素によって、細胞
傷害性化合物へと変換される非毒性の化合物を意味する。本発明の方法に従って
使用され得る細胞傷害性プロドラッグとしては、安息香酸マスタードアルキル化
剤のグルタミル誘導体、エトポシドまたはマイトマイシンＣのリン酸誘導体、シ
トシンアラビノシド、ダウノルビシン、およびドキソルビシンのフェノキシアセ
トアミド誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【０３６６】 標準または正常なレベルの個体におけるＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／また
はＴＲ２−ＳＶ２活性のにおける減少により引き起こされる状態（特に免疫系の
障害）が、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド
（可溶性細胞外ドメインまたは細胞が発現する完全タンパク質の形態での）また
はアゴニストの投与により処置され得ることは、理解される。従って、本発明は
また、増加したＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２活性のレ
ベルを必要としている個体の処置の方法（この方法は、そのような個体において
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２活性レベルを増加するの
に有効な量の、単離したＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２
ポリペプチドまたはそれらのアゴニストを含む薬学的組成物を、そのような個体
に投与する工程を包含する）を提供する。

【０３６７】 標準または正常なレベルの個体におけるＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／また
はＴＲ２−ＳＶ２活性のにおける減少により引き起こされる状態（特に免疫系の
障害）が、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド
（可溶性細胞外ドメインまたは細胞が発現する完全タンパク質の形態での）また
はアゴニスト（例えば、抗ＴＲ２抗体）の投与により処置され得ることはまた、
理解される。従って、本発明はまた、減少したＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／
またはＴＲ２−ＳＶ２活性のレベルを必要としている個体の処置の方法（この方
法は、そのような個体においてＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−
ＳＶ２活性レベルを減少するのに有効な量の、単離したＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１
および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはそれらのアンタゴニストを
含む薬学的組成物を、そのような個体に投与する工程を包含する）を提供する。

【０３６８】 本発明のＴＲ２ポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、および／またはＴＲ
２のアゴニストもしくはアンタゴニストは、感染因子を処置するために用いられ
得る。例えば、免疫応答を増加させることによって、特にＢ細胞および／または
Ｔ細胞の増殖および分化を増加させることによって、感染性疾患が処置され得る
。免疫応答は、既存の免疫応答を増強させるか、または新たな免疫応答を開始さ
せるかのいずれかにより増加され得る。あるいは、ＴＲ２のポリヌクレオチド、
ポリペプチドまたはＴＲ２のアゴニストはまた、必ずしも免疫応答を誘発するこ
となく、感染因子を直接阻害し得る。

【０３６９】 ウイルスは、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリ
ヌクレオチドもしくはポリペプチド、またはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／も
しくはＴＲ２−ＳＶ２のアゴニストもしくはアンタゴニストにより処置され得る
疾患または症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイルスの例としては
、以下のＤＮＡおよびＲＮＡのウイルスおよびウイルス科が挙げられるがこれら
に限定されない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アル
テリウイルス、ビルナウイルス科、ブンヤウイルス科、カルシウイルス科、サル
コウイルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、デング熱、Ｅ
ＢＶ、ＨＩＶ、フラビウイルス科、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイ
ルス科（例えば、サイトメガロウイルス、単純ヘルペス、ヘルペス帯状疱疹）、
モノネガウイルス（Ｍｏｎｏｎｅｇａｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイル
ス科、麻疹ウイルス、ラブドウイルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、
インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、およびパラインフルエンザ）、パピロー
マウイルス、パポバウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポッ
クスウイルス科（例えば、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、
ロタウイルス）、レトロウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウ
イルス）、およびトガウイルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に
入るウイルスは、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引
き起こし得る：関節炎、細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、呼吸性
シンシチウムウイルス、脳炎、眼性感染症（例えば、結膜炎、角膜炎）、慢性疲
労症候群、肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、慢性活動性、デルタ）、日本脳炎Ｂ
型、アルゼンチン出血熱、チングニア、リフトバレー熱、黄熱病、髄膜炎、日和
見感染症（例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキットリンパ腫、水痘、出血熱、麻
疹、流行性耳下腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病、感冒、ポリオ、白血病、風
疹、性感染症、皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）、およびウイルス血症。ＴＲ
２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチドもしくはポ
リヌクレオチド、またはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ
２のアゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、これらの症状または疾患のい
ずれかが処置、予防、診断および／または検出され得る。特定の実施形態におい
て、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチ
ド、ポリペプチド、またはアゴニストは、以下の処置、予防および／または診断
に使用される：髄膜炎、デング熱、ＥＢＶ、および／または肝炎（例えば、Ｂ型
肝炎）。さらなる特定の実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／も
しくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストは
、１以上の他の市販の肝炎ワクチンに非応答性の患者を処置するために使用され
る。さらに特定の実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくは
ＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアゴニストは、ＡＩ
ＤＳを処置、予防および／または診断するために使用される。さらなる特定の実
施形態では、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２レセプター
のポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアンタゴニスト
は、クリプトスポリジウム症を有する患者を処置、予防および／または診断する
ために使用される。

【０３７０】 同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および
／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、および／
またはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のアゴニストも
しくはアンタゴニストによって処置または検出され得る細菌性因子あるいは真菌
性因子は、以下のグラム陰性およびグラム陽性細菌および細菌科ならびに真菌を
含むがこれらに限定されない：Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉ
ａ）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉ
ｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｂ
ｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇ
ｄｏｒｆｅｒｉ）、Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍ
ｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏ
ｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓｅｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、Ｅ
ｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉおよびＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒ
ｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙ
ｐｈｉ、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、Ｓｅｒｒａｔｉ
ａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃ
ｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏｓｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔ
ｅｒｉａ、（例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、Ｍｙ
ｃｏｐｌａｓｍａｔａｌｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｖ
ｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉ
ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｍ
ｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａ
の感染症（例えば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ（
例えば、ＨｅａｍｏｐｈｉｌｕｓインフルエンザＢ型）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙ
ｄｉａｃｅａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｔａｐｈ
ｙｌｏｃｏｃｃａｌ、Ｍｅｎｉｎｇｉｏｃｏｃｃａｌ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａ
ｌならびにＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＢ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）。これらの細
菌または真菌の科は、以下を含むがこれらに限定されない疾患または症状を引き
起こし得る：菌血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、結核、ブドウ膜炎）、歯肉
炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染症）、爪周囲炎、プロテー
ゼ関連感染症、ライター病、気道感染症（例えば、百日咳または蓄膿症）、敗血
症、ライム病、ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱、食中毒、腸チフス、肺炎
、淋病、髄膜炎（例えば、髄膜炎Ａ型およびＢ型）、クラミジア、梅毒、ジフテ
リア、ライ病、パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹
、リウマチ熱、猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅ
ｒｍａｔｏｃｙｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。ＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチドもしくはポリヌク
レオチド、またはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のア
ゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、これらの症状もしくは疾患のいずれ
かを処置、予防、診断および／または検出し得る。特定の実施形態において、Ｔ
Ｒ２のポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはそれらのアゴニストは、以下を
処置するために使用される：破傷風、ジフテリア、ボツリヅム、および／または
Ｂ型髄膜炎。

【０３７１】 さらに、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌク
レオチドもしくはポリペプチド、またはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしく
はＴＲ２−ＳＶ２のアゴニストにより処置または検出され得る、寄生生物性因子
が引き起こす疾患または症状としては以下のファミリーまたはクラスが挙げられ
るがこれらに限定されない：アメーバ症、バベシア症、コクシジウム症、クリプ
トスポリジウム症、二核アメーバ症（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、交疫
、外部寄生生物性、ジアルジア鞭毛虫症、蠕虫症、リーシュマニア症、タイレリ
ア症、トキソプラスマ症、トリパノソーマ症、およびトリコモナス（Ｔｒｉｃｈ
ｏｍｏｎａｓ）症、ならびに胞子虫症（Ｓｐｏｒｏｚｏａｎ）（例えば、Ｐｌａ
ｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｒａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ
、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅおよびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖ
ａｌｅ）。これらの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の疾患
または症状を引き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（例え
ば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例えば、
ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ症。ＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドもしくはポリ
ペプチド、またはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のア
ゴニストもしくはアンタゴニストを用いて、これらの症状または疾患のいずれか
を処置、予防、診断および／または検出するために使用され得る。特定の実施形
態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌ
クレオチド、ポリペプチド、またはそれらのアゴニストは、マラリアを処置、予
防および／または診断するために使用される。

【０３７２】 本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストまた
はアンタゴニストは、欠損したかまたは不十分な量のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１お
よび／またはＴＲ２−ＳＶ２レセプターポリペプチド、アゴニストまたはアンタ
ゴニストにより（直接的または間接的に）媒介される任意の障害の処置を開発す
る際に使用され得、これは、そのような障害に罹患している患者（例えば、哺乳
動物、好ましくはヒト）に投与され得る。あるいは、遺伝子治療アプローチは、
そのような障害を処置するために適用され得る。本明細書中のＴＲ２レセプター
ヌクレオチド配列の開示は、欠損ＴＲ２レセプター遺伝子の検出および正常なＴ
Ｒ２レセプターをコードする遺伝子でのそれらの置換を可能にする。欠損遺伝子
は、インビトロ診断アッセイにおいて、およびこの遺伝子における欠損を有する
恐れのある患者由来のＴＲ２レセプター遺伝子のヌクレオチド配列と本明細書中
に開示されるＴＲレセプターヌクレオチド配列と比較により検出され得る。

【０３７３】 別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、異なる細胞型に対するＡＩＭ
ＩＩ／ＴＲ２レセプターおよび／またはリンホトキシン−α／ＴＲ２レセプター
相互作用を阻害することから生じる生物学的効果を研究するためのリサーチツー
ルとして使用される。ＴＲ２レセプターポリペプチドはまた、ＡＩＭ ＩＩ、リ
ンホトキシン−αもしくはＴＲ２レセプター、またはそれらの相互作用を検出す
るためのインビトロアッセイにおいて使用され得る。

【０３７４】 別の実施形態では、精製したＴＲ２レセプターポリペプチドまたはアンタゴニ
ストは内因性細胞表面ＡＩＭ−ＩＩおよび／またはリンホトキシン−αレセプタ
ーへのＡＩＭ−ＩＩまたはリンホトキシン−αの結合を阻害するために使用され
る。ＴＮＦファミリー（ＡＩＭ ＩＩおよびリンホトキシン−αは、このメンバ
ーである）の特定のリガンドは、１を超える異なる細胞表面レセプタータンパク
質と結合することが報告されている。同様に、ＡＩＭ ＩＩおよびリンホトキシ
ン−αは、複数の細胞表面タンパク質と結合すると考えられる。ＡＩＭ ＩＩお
よび／またはリンホトキシン−αを結合することにより、本発明の可溶性ＴＲ２
レセプターポリペプチドは、細胞表面ＴＲ２レセプターのみではなく、ＴＲ２レ
セプターとは異なるＡＩＭ ＩＩおよび／またはリンホトキシン−αレセプター
タンパク質へのＡＩＭ ＩＩおよび／またはリンホトキシン−αの結合を阻害す
るために使用され得る。従って、別の実施形態では、ＴＲ２レセプターポリヌク
レオチド、ポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニストは、インビトロまた
はインビボ手順においてＡＩＭ ＩＩおよび／またはリンホトキシン−αの生物
学的活性を阻害するために使用される。細胞表面レセプターへのＡＩＭ ＩＩお
よびリンホトキシン−αの結合を阻害することにより、ＴＲ２レセプターポリヌ
クレオチド、ポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニストはまた、内因性レ
セプターへのＡＩＭ ＩＩおよび／またはリンホトキシン−αの結合から生じる
生物学的活性を阻害する。ＴＲ２レセプターの種々の形態は、使用され得、例え
ば、上記のＴＲ２レセプターフラグメント、誘導体、およびＡＩＭ ＩＩおよび
／またはリンホトキシン−αに結合し得る変異体を含む。１つの好ましい実施形
態では、可溶性のＴＲ２レセプターポリペプチドは、ＡＩＭ ＩＩの生物学的活
性を阻害するため（例えば、そのようなアポトーシスに対して感受性の細胞のＡ
ＩＭ ＩＩ媒介アポトーシスを阻害するため）に使用される。別の好ましい実施
形態では、可溶性ＴＲ２レセプターポリペプチドは、リンホトキシン−αの生物
学的活性を阻害する（例えば、炎症および免疫応答の誘発、リンパ組織の維持、
Ｂ細胞増殖の誘発）ために使用される。

【０３７５】 さらなる実施形態では、ＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、
アゴニストまたはアンタゴニストは、ＡＩＭ ＩＩ媒介障害および／またはリン
ホトキシン−α媒介障害を試験するために哺乳動物（例えば、ヒト）に投与され
る。このようなＡＩＭ ＩＩ媒介障害および／またはリンホトキシン−α媒介障
害としては、ＡＩＭ ＩＩおよび／またはリンホトキシン−αにより（直接的ま
たは間接的に）引き起こされるか、または悪化される状態が挙げられる。

【０３７６】 細胞生存の増大あるいはアポトーシスの阻害に関連する疾患には、癌（例えば
、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異を有する癌腫、およびホルモン依存性腫瘍、これ
らは以下：結腸癌、心臓腫瘍、膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、神経膠芽細胞腫
、肺癌、腸の癌、精巣癌、胃癌、神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫、内皮
腫、骨芽細胞腫、骨巨細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳癌、前立腺癌、カポ
ージ肉腫および卵巣癌を含むが、これらに限定されない）；自己免疫障害（例え
ば、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、自己免
疫性糖尿病、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓ
ｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデスおよび免疫関連糸球体
腎炎、自己免疫性胃炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病ならびに慢性関節リウマ
チ）およびウイルス感染（例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイルスおよび
アデノウイルス）、炎症、対宿主性移植片病（急性および／または慢性）、急性
移植片拒絶、ならびに慢性移植片拒絶、が挙げられる。好ましい実施形態におい
て、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはアンタ
ゴニストは、特に上記または以下の段落に列挙される、癌の増殖、進行、および
／または転移（ｍｅｔａｓｉｓ）を阻害するために使用される。

【０３７７】 細胞生存の増大に関連するさらなる疾患または状態には、悪性疾患ならびに以
下のような関連する障害の進行および／または転移が挙げられるが、これらに限
定されない：白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白
血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病を含む）を
含む）ならびに慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性
リンパ球性白血病））、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病およ
び非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症
、Ｈ鎖病、ならびに固形腫瘍（肉腫および癌腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、
脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈ
ｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、骨膜腫、中皮腫、
ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、
前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭
状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌腫、胆管癌、絨
毛癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細
胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭
腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄
膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫）
を含むが、これらに限定されない）。

【０３７８】 アポトーシスの増大に関連する疾患には、以下が挙げられるが、これらに限定
されない：ＡＩＤＳ；神経変性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン
病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳変性および脳腫瘍または以前に関
連した疾患）；自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グ
レーヴス病、橋本甲状腺炎、自己免疫糖尿病、胆汁性肝硬変、ベーチェット病（
Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、クローン病、多発性筋炎、全身性エリテ
マトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎、自己免疫胃炎、特発性血小板減少性紫斑
病ならびに慢性関節リウマチ）、脊髄形成異常症候群（例えば、再生不良性貧血
）、対宿主性移植片病（急性および／または慢性）、虚血性傷害（心筋梗塞、発
作および再灌流傷害によって生じるようなもの）、肝臓傷害または疾患（例えば
、肝炎関連肝臓傷害、肝硬変、虚血／再灌流傷害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｓｔ
ｏｓｉｓ）（胆管傷害）および肝臓癌）；毒物誘導性肝臓疾患（アルコール引き
起こされるようなもの）、敗血症性ショック、潰瘍性大腸（結腸）炎、悪液質な
らびに食欲不振。好ましい実施形態において、ＴＲ２レセプターポリヌクレオチ
ド、ポリペプチド、アゴニストおよび／またはアンタゴニストは、上記の疾患お
よび障害を処置するために使用される。

【０３７９】 ＨＩＶに関連する多くの病理は、アポトーシスによって媒介され、これらには
、ＨＩＶ誘導性腎症およびＨＩＶ脳炎が挙げられる。従って、さらに好ましい実
施形態において、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、
アゴニストまたはアンタゴニストは、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳに関連する病理を
処置するために使用される。

【０３８０】 本発明の別の実施形態は、ＨＩＶ感染患者におけるＴ細胞のＡＩＭ ＩＩ媒介
性の死を減少するための、ＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチドま
たはアンタゴニストの使用に関する。ＡＩＤＳの発症におけるＴ細胞アポトーシ
スの役割は、多くの研究の主題であった（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら、Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２５７：２１７−２１９（１９９２）；Ｇｒｏｕｘら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．，１７５：３３１（１９９２）；およびＣｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
ａｎｄ Ａｐｏｔｏｓｉｓ ｉｎ ＨＩＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ａｎｄｒｉ
ｅｕおよびＬｕ編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１０１−１
１４頁（１９９５）における、Ｏｙａｉｚｕら、を参照のこと）。Ｆａｓ媒介性
アポトーシスは、ＨＩＶ個体におけるＴ細胞の損失に関連していた（Ｋａｔｓｉ
ｋｉｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：２０２９−２０３６（１９９５））。
また、Ｔ細胞アポトーシスは、複数の機構を介して生じるようである。例えば、
ＨＩＶ患者に見出されているＴ細胞死の少なくともいくつかは、ＡＩＭ ＩＩに
よって媒介されるようである。

【０３８１】 活性化されたヒトＴ細胞は、ＣＤ３／Ｔ細胞レセプター複合体を介する誘発に
際して、プログラムされた細胞死（アポトーシス）（活性化誘導された細胞死（
ＡＩＣＤ）と呼ばれるプロセス）を受けるよう誘導される。ＨＩＶ感染した無症
候個体から単離されたＣＤ４ Ｔ細胞のＡＩＣＤが、報告されている（Ｇｒｏｕ
ｘら、前出）。従って、ＡＩＣＤは、ＣＤ４＋Ｔ細胞の枯渇およびＨＩＶ感染個
体におけるＡＩＤＳの進行において、役割を果たし得る。従って、本発明は、Ｈ
ＩＶ患者におけるＡＩＭ ＩＩ媒介Ｔ細胞死を阻害する方法を提供し、この方法
は、この患者に、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチドま
たはアンタゴニスト（好ましくは、可溶性ＴＲ２レセプターポリペプチド）を投
与する工程を包含する。１つの実施形態において、ＴＲ２レセプターポリヌクレ
オチド、ポリペプチドまたはアンタゴニストでの処置が開始されるとき、患者は
、無症候である。所望の場合、処置前に、末梢血Ｔ細胞が、ＨＩＶ患者から抽出
され得、そして当該分野で公知の手段によって、ＡＩＭ ＩＩ媒介細胞死に対す
る感受性について試験する。１つの実施形態において、患者の血液または血漿に
、本発明のＴＲ２レセプターポリペプチドを、エキソビボで接触させる。このＴ
Ｒ２レセプターポリペプチドは、当該分野で公知の手段によって、適切なクロマ
トグラフィーマトリクスに結合され得る。この患者の血液または血漿は、このマ
トリクスに結合されたＴＲ２レセプターポリペプチドを含むクロマトグラフィー
カラムを通って流れ、その後、患者に戻される。固定化されたＴＲ２レセプター
ポリペプチドは、ＡＩＭ ＩＩを結合し、従って、患者の血液からＡＩＭ ＩＩ
タンパク質を除去する。

【０３８２】 さらなる実施形態において、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポ
リペプチド、またはアンタゴニストは、Ｔ細胞アポトーシスの他のインヒビター
と組み合わせて投与される。例えば、上記のように、Ｆａｓ媒介アポトーシスは
また、ＨＩＶ個体におけるＴ細胞の損失に関連していた（Ｋａｔｓｉｋｉｓら、
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：２０２９−２０３６（１９９５））。従って、Ｆ
ａｓリガンド媒介Ｔ細胞死およびＡＩＭ ＩＩ媒介Ｔ細胞死の両方に感受性の患
者は、ＡＩＭ ＩＩ／ＡＩＭ ＩＩレセプター相互作用をブロックする薬剤、お
よびＦａｓリガンド／Ｆａｓ相互作用をブロックする薬剤の両方で処置され得る
。ＦａｓｉリガンドのＦａｓへの結合をブロックするための適切な薬剤としては
、可溶性Ｆａｓポリペプチド；可溶性Ｆａｓポリペプチドのマルチマー形態（例
えば、ｓＦａｓ／Ｆｃのダイマー）；アポトーシスを生じる生物学的シグナルの
伝達を伴わずにＦａｓを結合する、抗Ｆａｓ抗体；ＦａｓリガンドのＦａｓへの
結合をブロックする、抗Ｆａｓリガンド抗体；およびＦａｓを結合するが、アポ
トーシスを生じる生物学的シグナルを伝達しない、Ｆａｓリガンドのムテインが
挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、この方法に従って使用され
る抗体は、モノクローナル抗体である。Ｆａｓリガンド／Ｆａｓ相互作用をブロ
ック（抗Ｆａｓモノクローナル抗体のブロックを含む）するための適切な薬剤の
例は、ＷＯ９５／１０５４０（本明細書によって、参考として援用される）に記
載される。

【０３８３】 別の例において、ＴＲＡＩＬのＴＲＡＩＬレセプターへの結合をブロックする
薬剤が、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはア
ンタゴニストと共に投与される。このような薬剤としては、以下が挙げられるが
、これらに限定されない：可溶性ＴＲＡＩＬレセプターポリペプチド（例えば、
ＯＰＧの可溶化形態、ＤＲ４（ＷＯ９８／３２８５６）；ＴＲ５（ＷＯ９８／３
０６９３）；ＤＲ５（ＷＯ９８／４１６２９）；およびＴＲ１０（ＷＯ９８／５
４２０２））；可溶性ＴＲＡＩＬレセプターポリペプチドのマルチマー形態；な
らびにアポトーシスを生じる生物学的シグナルの伝達を伴わずにＴＲＡＩＬレセ
プターを結合する、ＴＲＡＩＬレセプター抗体、１以上のＴＲＡＩＬレセプター
へのＴＲＡＩＬの結合をブロックする、抗ＴＲＡＩＬ抗体、およびＴＲＡＩＬレ
セプターを結合するが、アポトーシスを生じる生物学的シグナルを伝達しない、
ＴＲＡＩＬのムテイン。好ましくは、この方法に使用される抗体は、モノクロー
ナル抗体である。

【０３８４】 本発明の別の実施形態は、Ｂ細胞の増殖および分化の調節因子としてのＴＲ２
の使用に配向する。本明細書中に記載されるアッセイおよび実験は、Ｂ細胞の増
殖および分化の調節因子としてのＴＲ２の使用の科学合理的さを明確に提供する
。可溶性または膜結合ＴＲ２、それらネイティブなリガンドおよび種々のリガン
ドアンタゴニストの可能な使用は多様であり、そして感染、抗新形成治療および
／または遺伝した障害から生じる自己免疫障害および免疫不全の処置を含む。さ
らに多くの前新形成モノクローナル高ガンマグロブリン血症および新形成Ｂ細胞
障害（例えば、多発性骨髄腫）は、誘導因子または進行因子のいずれかとしてＴ
Ｒ２またはそのリガンドを使用し得る。

【０３８５】 従って、ＴＲ２または誘導された機能的アゴニスト（抗ＴＲ２抗体、ＴＲ２お
よびＴＲ２リガンドの細胞外ドメインに含まれるアミノ酸配列（例えば、ＴＲ２
−Ｆｃ）を有する可溶性形態を含む）は、以下のような適用を見出し得る： ＴＨ１細胞応答に対するようなホルモン応答の発達に対する個々の免疫系に配
向する薬剤（すなわち、ＴＨ２）として。

【０３８６】 ＴＲ２媒介性応答を阻害または増強する抗体の産生のための抗原として。

【０３８７】 Ｔ細胞を活性化する手段として。

【０３８８】 ＴＲ２によって誘発される分泌されたサイトカインを調節する手段として。

【０３８９】 ＴＲ２のアンタゴニスト（結合抗体および／または抑制抗体を含む）、アンチ
センス核酸、リボザイム、可溶性形態のＴＲ２（例えば、ＴＲ２−ｆｃ）および
ＴＲリガンドとして。これらは、上記のレセプターの多くの活性を取り消し得る
と予想され、かつ以下のような臨床的または実用的な適用を見出し得ると予想さ
れる： ＴＲ２活性のアンタゴニストはまた、ヘルペスウイルスの感染を処置または予
防するために使用され得る。このようなアンタゴニストとしては、本発明の全長
ＴＲ２ポリペプチドおよび成熟ＴＲ２ポリペプチド、ＴＲ２フラグメント（例え
ば、可溶性フラグメント）、およびＴＲ２ポリペプチドに対する特異性を有する
抗体が挙げられる。特定のメカニズムに限定することを望まないが、ＴＲ２アン
タゴニストは、ヘルペスウイルスの細胞への侵入をブロックすることによってヘ
ルペスウイルスの感染の処置または予防において機能すると考えられる。

【０３９０】 ＴＲ２ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ＴＲ２のアゴニストによって処
置され得るさらなる状態、疾患、症状は、骨髄炎である。

【０３９１】 好ましくは、ＴＲ２ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、あるいはＴＲ２の
アゴニストを使用する処置は、患者への有効量のＴＲ２ポリペプチドの投与によ
るか、または患者からの細胞の除去するかのいずれかであり得、細胞にＴＲ２ポ
リヌクレオチドを供給し、そして操作された細胞を患者に戻し得る（エキソビボ
治療）。さらに、本明細書中にさらに記載されるように、ＴＲ２ポリペプチドま
たはポリヌクレオチドは、感染疾患に対する免疫応答を惹起するためのワクチン
におけるアジュバントとして使用され得る。

【０３９２】 別の実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／または本発明のＴＲ
２−ＳＶ２ポリヌクレオチドまたはポリペプチドおよび／またはそれらアゴニス
トおよび／またはアゴニストは、以下の処置、予防、および／または診断に使用
される：内耳感染（例えば、耳炎媒体）、ならびに他の感染（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ ｐｎｕｅｍｏｎｉａｅおよび他の病原性生物での感染によって特徴
付けられた）。

【０３９３】 特定の実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＶＳ１および／またはＴＲ２−Ｓ
Ｖ２ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、またはそれらアゴニストまたはアン
タゴニスト（例えば、抗ＴＲ２、抗ＴＲ２−ＳＶ１および／または抗ＴＲ２−Ｓ
Ｖ２抗体）は、障害（欠乏性の血清免疫グロブリンの産生、感染の反復、および
／または免疫系の機能不全によって特徴付けられる）の処置または予防に使用さ
れる。さらに、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリヌク
レオチドまたはポリペプチド、あるいはそれらアゴニストまたはアンタゴニスト
（例えば、抗ＴＲ２、抗ＴＲ２−ＳＶ１、および／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体
）は、関節、骨、皮膚の感染、および／または耳下腺、血液−骨感染（例えば、
敗血症、髄膜炎、敗血症関節炎、および／または骨髄炎）、自己免疫疾患（例え
ば、本発明中に記載される疾患）、炎症性障害、および悪性疾患、および／また
はこれらの感染、疾患、障害、および／または悪性疾患（ＣＶＩＤ、他の原発性
免疫欠損、ＨＩＶ疾患、ＣＬＬ、反復性気管支炎、静脈洞炎、耳炎媒体、結膜炎
、肺炎、肝炎、髄膜炎、帯状疱疹（例えば、重症な帯状疱疹）および／またはニ
ューモシスティスを含むがこれらに限定されない）に関連する任意の疾患または
状態の処置または予防に使用され得る。

【０３９４】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリヌクレオ
チドまたはポリペプチド、それらのアゴニストまたはアンタゴニストは、以下の
１以上の疾患、障害、またはそれらに関連する状態の診断、予知、処置、または
予防に使用され得る：原発性免疫不全、免疫媒介性血小板減少症、川崎病、骨髄
移植（例えば、成人または小児における最近の骨髄移植）、慢性Ｂ細胞リンパ性
白血病、ＨＩＶ感染（例えば、成人または小児ＨＩＶ感染）、慢性炎症性脱髄性
多発ニューロパシー、およびトランスフェクション後の紫斑。

【０３９５】 さらに、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチド、またはそれらのアゴニストまたはアンタゴニ
ストは、以下の１以上の疾患、障害、またはそれに関連する状態の診断、予知、
処置、または予防に使用され得る：ギヤン−バレー症候群、貧血（例えば、パル
ボウイルスＢ１９に関連した貧血）、感染の危険の高い安定な多発性骨髄腫を有
する患者の疾患（例えば、再発性感染）、自己免疫性溶血性貧血（例えば、温暖
型自己免疫性溶血性貧血）、血小板減少症（例えば、新生児血小板減少症）、お
よび免疫媒介性好中球減少症、移植術（例えば、ＣＭＶ−陽性器官のサイトメガ
ロウイルス（ＣＭＶ）−陰性受容者）、ｈｙｐｏｇａｍｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎ
ｅｍｉａ（例えば、低ガンマグロブリン（例えば、感染または病的状態の危険因
子を有するｈｙｐｏｇａｍｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉｃ）新生児）、てんか
ん、（例えば、難治性てんかん）、全身管脈症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｖａｓｃｕ
ｌｉｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、重症筋無力症（例えば、重症筋無力症にお
ける代償不全）、皮膚筋炎および多発性筋炎。

【０３９６】 本発明のさらに好ましい実施形態としては、以下の適用におけるＴＲ２、ＴＲ
２−ＳＶ１、および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド、ＴＲ２、ＴＲ２−Ｓ
Ｖ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリヌクレオチド、およびその機能的アゴニ
ストの使用が挙げられるが、これらに限定されない： 以下の投与。動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ブタ
、ミクロブタ（ｍｉｃｒｏ−ｐｉｇ）、ニワトリ、ラクダ、ヤギ、ウマ、ウシ、
ヒツジ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、およびヒト、最も好ましくはヒト）への、
免疫系をブーストするため投与。１以上の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、Ｉｇ
Ｍ、およびＩｇＥ）の増加された量を産生ため、より高い親和性の抗体産生（例
えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ）を誘導するため、そして／また
は免疫応答を増加するため。特定の非排他的な実施形態において、本発明のＴＲ
２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド、および／また
はそれらのアゴニストは、ＩｇＧの増加された量を産生するための免疫系をブー
ストするために投与され得る。別の特定の非排他的な実施形態において、本発明
のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１、および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド、およ
び／またはそれらのアゴニストは、増加された量のＩｇＡを産生するための免疫
系をブーストするために投与され得る。別の特定の非排他的な実施形態において
、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド
、および／またはそれらのアゴニストは、増加された量のＩｇＭを産生するため
の免疫系をブーストするために投与され得る。

【０３９７】 機能的内因性抗体分子の産生ができない動物（上記の列挙された動物が挙げら
れるが、これらに限定されず、そしてまたトランスジェニック動物を含む）、ま
たは他の易感染性内因性免疫系を有さない動物への投与。しかしこれらの動物は
、別の動物からの再構成された免疫系、または部分的に再構成された免疫系の手
段によって、ヒト免疫グロブリン分子を産生可能である（例えば、公開ＰＣＴ申
請番号ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ／９６３４０９６、ＷＯ／９６３３７３５、
およびＷＯ／９１１０７４１を参照のこと）。

【０３９８】 特定の抗原に対する免疫応答を増強するワクチンアジュバント。特定の実施形
態において、ワクチンアジュバントは、本明細書中に記載されるＴＲ２、ＴＲ２
−ＳＶ１、および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドである。別の特定の実施
形態において、ワクチンアジュバントは、本明細書中に記載されるＴＲ２、ＴＲ
２−ＳＶ１、および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリヌクレオチド（すなわち、ＴＲ
２、ＴＲ２−ＳＶ１、および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリヌクレオチドは、遺伝
的ワクチンアジュバント）である。本明細書中に記載されるように、ＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１、および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリヌクレオチドは、公知技術を
使用して投与され得る（リポソーム送達、組換えベクター送達、裸のＤＮＡの注
入、および遺伝子銃送達を含むが、これらに限定されない）。

【０３９９】 腫瘍特異的免疫応答を増強するためのアジュバント。

【０４００】 抗ウイルス免疫応答を増強するためのアジュバント。アジュバントとして本発
明の組成物を使用して増強され得る抗ウイルス免疫応答としては、本明細書中に
記載されるか、当該分野で他の公知のウイルスおよびウイルス関連疾患、または
症状が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本発明
の組成物は、アジュバントとして使用され、ウイルス、障害、または以下から成
る群より選択される症状に対する免疫応答を増強する：ＡＩＤＳ、髄膜炎、デン
グ熱、ＥＢＶ、および肝炎（例えば、Ｂ型肝炎）。別の特定の実施形態において
、本発明の組成物は、以下：ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ＲＳウイルス、デング熱、ロタ
ウイルス、日本脳炎、インフルエンザＡおよびＢ、パラインフルエンザ、麻疹、
サイトメガロウイルス、狂犬病、フニン、チクングニヤ、リフトバレー熱、単純
ヘルペス、および黄熱病からなる群より選択されるウイルス、疾患、または症状
に対する免疫応答を増強するためのアジュバントとして使用される。別の特定の
実施形態において、本発明の組成物は、ＨＩＶ ｇｐ１２０抗原に対する免疫応
答を増強するためのアジュバントとして使用される。

【０４０１】 抗細菌または抗真菌免疫応答を増強するためのアジュバント。本発明の組成物
をアジュバントとして使用して増強され得る抗細菌または抗真菌免疫応答として
は、細菌または真菌および本明細書中で記載されるか、または当該分野で公知の
他の疾患または症状に関連する細菌または真菌が挙げられる。特定の実施形態に
おいて、本発明の組成物は、以下：破傷風、ジフテリア、ボツリスム、および髄
膜炎Ｂ型からなる群より選択される細菌または真菌、疾患、または症状に対する
免疫応答を増強するためのアジュバントとして使用される。別の特定の実施形態
において、本発明の組成物は、以下：コレラ菌、らい菌、チフス菌、パラチフス
菌、Ｍｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ、肺炎連鎖球菌、Ｂ群連鎖球菌属
、赤痢菌属、腸毒性大腸菌、腸出血性大腸菌、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏ
ｒｆｅｒｉ、およびプラスモディウム属（マラリア）からなる群より選択される
細菌または真菌、疾患または症状に対する免疫応答を増強するためのアジュバン
トとして使用される。

【０４０２】 抗寄生生物免疫応答を増強するためのアジュバント。アジュバントとして本発
明の組成物を使用する増強され得る抗寄生生物免疫応答は、寄生生物および本明
細書中に記載されるか、または当該分野において公知の寄生生物に関連した疾患
または症状を含む。特定の実施形態において、本発明の組成物は、寄生生物に対
する免疫応答を増強するアジュバントとして使用される。別の特定の実施形態に
おいて、本発明の組成物は、プラスモディウム属（マラリア）に対する免疫応答
を増強するアジュバントとして使用される。

【０４０３】 病原体に対するＢ細胞の反応性としての刺激物質として。

【０４０４】 免疫抑制療法を受ける前に、個々の免疫状態を上昇させる薬剤としえて。

【０４０５】 高度な親和性抗体を誘導するための薬剤として 血清免疫グロブリン濃度を増加するための薬剤として 免疫無防備状態の個体の回復を促進するための薬剤として 老いた集団の中で免疫応答性をブーストするための薬剤として 骨髄移植および／または他の移植（例えば、同種異系または異種の器官移植）
前、または最中、または後の免疫系のエンハンサーとして。移植に関して、本発
明の組成物は、移植の前、同時および／または後に投与され得る。特定の実施形
態において、本発明の組成物は、Ｔ細胞集団の回復の開始の前に、移植後に投与
される。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｔ細胞集団の回復の
開始後の移植の後、初めに投与されが、Ｂ細胞の集団の完全な回復の前である。

【０４０６】 本発明の組成物は、Ｂ細胞免疫不全個体（例えば、部分的または完全な脾摘出
を受けた個体）間の免疫応答性をブーストするための薬剤として。ＴＲ２、ＴＲ
２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドまたは本発明のポリヌク
レオチド、あるいはそのアゴニストの投与によって回復され得るか、または処置
され得るＢ細胞免疫不全としては、Ｘ連鎖重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、ＳＣ
ＩＤ−常染色体、アデノシンデアミナーゼ欠損（ＡＤＡ欠損）、Ｘ−連鎖無ガン
マグロブリン血症（ＸＬＡ）、Ｂｒｕｔｏｎ病、先天性無ガンマグロブリン血症
、Ｘ連鎖乳児無ガンマグロブリン血症、後天性無ガンマグロブリン血症、成人発
症無ガンマグロブリン血症、後期発症無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブ
リン血症、高ガンマグロブリン血症、乳児の過渡性高ガンマグロブリン血症、不
特定の高ガンマグロブリン血症、無ガンマグロブリン血症、分類不能型免疫不全
（ＣＶＩＤ）（後天性）、ヴィスコット‐オールドリッチ症候群（ＷＡＳ）、過
剰ＩｇＭを伴うＸ連鎖免疫不全、過剰ＩｇＭを伴う非Ｘ連鎖免疫不全、選択的Ｉ
ｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラス欠損（ＩｇＡ欠損を伴うか、または伴わない）、正
常または上昇したＩｇｓを伴う抗体不全、胸腺腫を伴う免疫欠損、Ｉｇ重鎖欠損
、カッパ鎖欠損、Ｂ細胞リンパ増殖性障害（ＢＬＰＤ）、選択性ＩｇＭ免疫欠損
、劣性無ガンマグロブリン血症（スイス型）、網様発育不全、新生児好中球減少
症、重症の先天性白血球減少症、免疫欠損を有するリンパ形成不全−発育不全症
または形成異常症、運動失調−毛細血管拡張症、短肢小人症、Ｘ−連鎖リンパ増
殖性症候群（ＸＬＰ）、Ｉｇｓを伴うネゼロフ症候群−混合免疫欠損、プリンヌ
クレオシドホスホリラーゼ欠損（ＰＮＰ）、ＭＨＣクラスＩＩ欠損（不全リンパ
球症候群）および重症複合型免疫不全が挙げられるが、これらに限定はされない
。

【０４０７】 Ｂ細胞機能の後天性の欠損を有する個体間の免疫応答性をブーストするための
薬剤として。ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチ
ドまたは本発明のポリヌクレオチド、またはそのアゴニスト投与によって回復さ
れ得るか、または処置され得る後天性のＢ細胞機能の損失を生じる状態としては
、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳ、骨髄移植、およびＢ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ
）が挙げられるが、これらに限定されない。

【０４０８】 一時的な免疫欠損を有する個々の間の免疫反応性をブーストするための薬剤と
して。ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドまた
は本発明のポリヌクレオチド、あるいはそのアゴニストの投与によって回復され
得るか、または処置され得る一時的な免疫欠損を生じる状態としては、ウイルス
感染（例えば、インフルエンザ）からの回復、栄養不良に関連した状態、感染性
単核細胞症からの回復、またはストレスに関連した状態、麻疹からの回復、血液
輸血からの回復、手術からの回復が挙げられるが、これらに限定されない。

【０４０９】 単球、樹状細胞、および／またはＢ細胞による抗原提示の調節因子として。１
つの実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２
ポリペプチド（可溶性、膜結合または膜貫通形態）またはポリヌクレオチドは、
抗原提示を増強するか、またはインビトロまたはインビボでの抗原提示をアンタ
ゴナイズする。さらに、関連する実施形態において、この抗原提示の増強または
アンタゴナイゼーション（ａｎｔａｇｏｎｉｚａｔｉｏｎ）は、抗腫瘍処置にお
いて使用され得るか、または免疫応答を調節し得る。

【０４１０】 粘膜の免疫応答のメディエイタとして。単球によるＴＲ２の発現、およびこの
因子に対するＢ細胞の応答性は、以下のことを示す。Ｂ細胞と単球との間のシグ
ナルの交換に関与し得るか、またはそれらの分化された子孫に関与し得る。この
活性は、Ｂ細胞とＴ細胞との間のＣＤ４０−ＣＤ１５４シグナル伝達に対して多
くの方法で類似性である。従って、ＴＲ２は、環境の病原体に対するＴ細胞の独
立した免疫応答の重要な調節因子であり得る。特に、通常でないＢ細胞集団（Ｃ
Ｄ５＋）（粘膜部位に関連し、そしてヒトにおける生まれつきの免疫のほとんど
の原因である）は、ＴＲ２に応答し、それによって個々の防御免疫状態を増強す
る。

【０４１１】 腫瘍増殖を誘導するための手段として、ついでその手段を抗新形成薬剤により
感受性にするため。例えば、多発性骨髄腫は、ゆっくりと分裂する疾患であり、
従って実質的に全ての抗新形成療法に対して抵抗性である。これらの細胞がより
急に増殖されられる場合、それらの感受性プロフィールは変化しそうである。

【０４１２】 細胞増殖の特異的活性化因子または阻害因子が付着され得るＢ細胞特異的結合
タンパク質として。この結果は、正常な、疾患の、または新形成Ｂ細胞集団にす
るこのような活性化因子、または阻害因子の活性に焦点を当てる。

【０４１３】 特異性の利点によるＢ系統細胞の検出手段として。この適用は、検出手段を与
えるためにビオチンまたは他の薬剤（本明細書中に記載される）でタンパク質を
標識することを必要とし得る。

【０４１４】 病理（例えば、ＡＩＤＳ、慢性リンパ球障害および／またはＣｏｍｍｏｎ Ｖ
ａｒｉａｂｌｅ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）におけるＢ細胞の産生の
刺激物質として。

【０４１５】 Ｂ細胞選択装置の一部として。その機能は、細胞型の異種起源の混合物からＢ
細胞を単離することである。Ｔ２は、固体支持体に結合し得、次いでＢ細胞がそ
れに特異的に結合する。非結合細胞は洗浄され、そして結合した細胞は引き続い
て溶出される。この選択の非限定的な使用は、移植の前に腫瘍細胞の消去（例え
ば、骨髄または末梢血から）を可能にする。

【０４１６】 手術、外傷、遺伝的欠損の後のリンパ組織の産生および／または再生について
の治療として。

【０４１７】 免疫不全を生じる遺伝的に遺伝した障害（例えば、ＳＣＩＤ患者において観察
される）についての遺伝子に基づいた治療として。

【０４１８】 ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２媒介性応答を阻害また
は増強するための抗体を産生するための抗原として。

【０４１９】 単球に影響する寄生生物疾患（例えば、Ｌｅｓｈｍａｎｉａ）を防御するため
の単球／マクロファージを活性化する手段として。

【０４２０】 移植の前の骨髄サンプルの前処置として。このような処置は、Ｂ細胞の提示を
増強し、次いで回復を促進する。

【０４２１】 ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２によって誘発された分
泌されたサイトカインを調節する手段として。

【０４２２】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチド
またはポリヌクレオチド、またはアゴニストは、インビトロまたはインビボでＩ
ｇＥ濃度を調製するたに使用され得る。

【０４２３】 従って、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリ
ペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニストは、ＩｇＥ媒介性
アレルギー反応の処置、予防および／または診断に使用され得る。このようなア
レルギー反応としては、ぜん息、鼻炎および湿疹が挙げられるが、これらに限定
されない。

【０４２４】 特定の実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴ
Ｒ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニスト
は、選択的ＩｇＡ欠損の処置、予防、診断および／または改善のために投与され
る。

【０４２５】 別の局面の実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／また
はＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニ
ストは、毛細血管拡張性運動失調を処置、予防、診断および／または改善するた
めに投与される。

【０４２６】 別の特定の局面において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴ
Ｒ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニスト
は、分類不能型免疫不全を処置、予防、診断および／または改善するために投与
される。

【０４２７】 別の特定の局面において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴ
Ｒ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニスト
は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症を処置、予防、診断および／または改善する
ために投与される。

【０４２８】 別の特定の局面において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴ
Ｒ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニスト
は、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）を処置、予防、診断および／または改善する
ために投与される。

【０４２９】 別の特定の局面において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴ
Ｒ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニスト
は、ヴィスコット‐オールドリッチ症候群を処置、予防、診断および／または改
善するために投与される。

【０４３０】 別の特定の局面において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴ
Ｒ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニスト
は、過剰ＩｇＭを伴うＸ連鎖免疫不全を処置、予防、診断および／または改善す
るために投与される。

【０４３１】 別の特定の実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／また
はＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、またはそれらのアゴニ
ストまたはアンタゴニスト（例えば、抗ＴＲ２抗体）は、慢性骨髄性白血病、急
性骨髄性白血病、白血病、組織球性白血病、単球性白血病（例えば、急性単球性
白血病）、白血病性細網症、Ｓｈｉｌｌｉｎｇ型単球性白血病、ならびに／ある
いは単球および／または単球細胞および／または組織から誘導される他の白血病
を処置、予防、診断、および／または改善するために投与される。

【０４３２】 別の特定の実施形態においては、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／
またはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドもしくはポリヌクレオチあるいはそれらのア
ゴニストは、例えば、結核と共に見られるような単球性類白血病反応を処置、予
防、診断、および／または改善するために投与される。

【０４３３】 別の特定の実施形態においては、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／ま
たはＴＲ２−ＳＶ２ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、あるいはそれらの
アゴニストは、単球性白血球増加症、単球性白血球減少症、単球減少症、および
／または単球増加症を処置、予防、診断、および／または改善するために投与さ
れる。

【０４３４】 別の特定の実施形態においては、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／ま
たはＴＲ２−ＳＶ２ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびに／あるいは
抗ＴＲ２抗体、および／またそれらのアゴニストもしくはアンタゴニストを使用
して、原発性Ｂリンパ球障害および／もしくは疾患、ならびに／またはそれに付
随する状態を処置、予防、検出および／または診断する。１つの実施形態におい
ては、このような原発性Ｂリンパ球障害、疾患および／または状態は、体液性免
疫の完全な欠失または部分的な欠失によって特徴付けられる。体液性免疫の完全
な欠失または部分的な欠失によって特徴付けられ、そして本発明の組成物を用い
て予防、処置、検出および／または診断され得る、原発性Ｂリンパ球障害、疾患
、および／またはそれに付随する状態としては、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症
（ＸＬＡ）、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、および選択的ＩｇＡ欠損が挙げ
られるが、これらに限定されない。

【０４３５】 好ましい実施形態においては、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２
−ＳＶ２ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニ
ストを使用して、身体の任意の１以上の種々の粘膜に影響する疾患もしくは障害
または身体の任意の１以上の種々の粘膜に関連する状態を処置、予防、および／
または診断する。このような疾患または障害としては、例えば、以下が挙げられ
るが、これらに限定されない：粘膜炎（ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ）、粘膜破壊、粘膜
性結腸炎、粘膜性リーシュマニア症（例えば、アメリカリーシュマニア症、皮膚
フランベシア、鼻咽頭リーシュマニア症、および新世界リーシュマニア症）、粘
膜皮膚リンパ節症候群（例えば、川崎病）、小腸粘膜炎、粘膜性類表皮癌、粘膜
性類上皮腫、粘膜上皮形成異常、ムコイド腺癌、ムコイド変性、ミクソイド変性
；粘膜腫変性；粘膜腫症、ムコイド中膜変性（例えば、嚢胞性中膜壊死）、ムコ
リピドーシス（例えば、ムコリピドーシスＩ、ムコリピドーシスＩＩ、ムコリピ
ドーシスＩＩＩ、ムコリピドーシスＩＶを含む）、粘液溶解障害、粘液性膜性腸
炎、小腸粘膜炎、ムコ多糖体沈着症（例えば、Ｉ型ムコ多糖体沈着症（すなわち
、ハーラー症候群）、ＩＳ型ムコ多糖体沈着症（すなわち、シャイエ症候群また
はＶ型ムコ多糖体沈着症）、ＩＩ型ムコ多糖体沈着症（すなわち、ハンター症候
群）、ＩＩＩ型ムコ多糖体沈着症（すなわち、サンフィリポ症候群）、ＩＶ型ム
コ多糖体沈着症（すなわち、モルキオ症候群）、ＶＩ型ムコ多糖体沈着症（すな
わち、マロトー−ラミー症候群）、ＶＩＩ型ムコ多糖体沈着症（すなわち、βグ
ルクロニダーゼ欠損に起因するムコ多糖体沈着症）、およびムコスルファチドー
シス）、ムコ多糖尿、粘液膿性結膜炎、膿様粘液、ムコール症（すなわち、接合
真菌症、粘膜病（すなわち、ウシウイルス性下痢）、粘液性大腸炎（例えば、粘
液性結腸炎および粘膜性大腸炎）、ならびにムコビシドーシス（例えば、嚢胞性
線維症、膵嚢胞性線維症、クラーク−ハッドフィールド症候群、膵臓の線維嚢胞
病、ムコビシドーシス、および粘液過剰症）。非常に好ましい実施形態において
は、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２ポリヌクレオチド、
ポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストおよび／またはアンタゴ
ニストを使用して、粘膜炎（特に化学療法に関連するような）を処置、予防、お
よび／または診断する。

【０４３６】 好ましい実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−
ＳＶ２のポリヌクレオチド、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−Ｓ
Ｖ２のポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストおよび／またはア
ンタゴニストは、静脈洞炎に影響を与える疾患または障害あるいは静脈洞炎と関
連する状態を、処置、予防および／または診断するために使用される。

【０４３７】 ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチド、
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、あるい
はＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のアゴニストによって
、処置、予防および／または診断され得るさらなる状態、疾患あるいは症状は、
骨髄炎である。

【０４３８】 ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチド、
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、あるい
はＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のアゴニストによって
、処置、予防および／または診断され得るさらなる状態、疾患あるいは症状は、
心内膜炎である。

【０４３９】 ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のアンタゴニストとし
ては、結合および／または阻害抗体、アンチセンス核酸、リボザイム、ならびに
本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド
が挙げられる。これらは、上記のリガンドの多くの活性を逆転すること、ならび
に以下のような臨床適用または実用適用を見出すことが期待される： 外来因子または自己に対する免疫応答の種々の局面をブロックする方法。例と
しては、狼瘡および関節炎のような自己免疫疾患、ならびに皮膚アレルギー、炎
症、腸疾患、創傷および病原体に対する免疫応答性が挙げられる。本発明者らの
近年のデータは、Ｂ細胞および単球関連の病理学におけるＴＲ２の潜在的な役割
を直接言及してきたが、他の細胞型がＴＲ２に対する発現または応答性を獲得し
得ることは可能なままである。従って、ＣＤ４０およびそのリガンドのようにＴ
Ｒ２は、免疫系および細胞が位置する微小環境の状態によって調節される。

【０４４０】 特発性血小板減少性紫斑病、全身性エリテマトーデスおよびＭＳのような自己
免疫疾患と関連する、Ｂ細胞増殖および免疫グロブリン分泌を予防するための治
療。

【０４４１】 対宿主性移植片病または移植拒絶のインヒビター。

【０４４２】 Ｂ細胞悪性疾患（例えば、ＡＬＬ、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、慢性リ
ンパ球白血病、形質細胞腫、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、およびＥＢＶ
−形質転換疾患（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ））の治療。

【０４４３】 意義不明の単一クローン性高ガンマグロブリン血症（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｇ
ａｍｍｏｐａｔｈｙ ｏｆ ｕｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎ
ｃｅ）（ＭＧＵＳ）、ヴァルデンストレーム疾患、関連の特発性単一クローン性
高ガンマグロブリン血症、および形質細胞腫のような疾患における慢性高ガンマ
グロブリン血症事象の治療。

【０４４４】 大Ｂ細胞リンパ腫の細胞増殖を減少するための治療。

【０４４５】 慢性骨髄性白血病に関連したＢ細胞および免疫グロブリンの関与を低下させる
手段。

【０４４６】 免疫抑制剤。

【０４４７】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプ
チドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌク
レオチド、あるいはアンタゴニストは、インビトロまたはインビボにおけるＩｇ
Ｅ濃度を調節するために使用され得る。

【０４４８】 別の実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴ
Ｒ２−ＳＶ２のポリペプチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴ
Ｒ２−ＳＶ２のポリヌクレオチド、あるいはそれらのアンタゴニストは、ＩｇＥ
媒介アレルギー反応（喘息、鼻炎および湿疹を含むがこれらに限定されない）の
処置、予防および／または診断に使用され得る。

【０４４９】 ＴＲ２誘導Ｂ細胞活性化に関連しているＥＲＫ１、ＣＯＸ２およびＣｙｃｌｉ
ｎＤ２の関与するシグナル伝達経路のインヒビター。

【０４５０】 上記に引用される出願は、種々の宿主における使用を有する。そのような宿主
としては、ヒト、マウス（ｍｕｒｉｎｅ）、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ
、ウマ、マウス（ｍｏｕｓｅ）、ラット、ハムスター、ブタ、ミニブタ（ｍｉｃ
ｒｏ−ｐｉｇ）、ニワトリ、ヤギ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ヒト以外の霊長
類、およびヒトを含むがこれらに限定されない。特定の実施形態において、宿主
は、マウス、ウサギ、ヤギ、モルモット、ニワトリ、ラット、ハムスター、ブタ
、ヒツジ、イヌまたはネコである。好ましい実施形態において、宿主は哺乳動物
である。最も好ましい実施形態において、宿主はヒトである。

【０４５１】 アゴニストおよびアンタゴニストは、例えば、本明細書中に記載されるように
、薬学的に受容可能なキャリアを有する組成物において使用され得る。

【０４５２】 アンタゴニストは、例えば、特定の自己免疫疾患および慢性炎症性疾患および
感染性疾患において、ＴＲ２媒介、ＴＲ２−ＳＶ１媒介および／またはＴＲ２−
ＳＶ２媒介の走化性そしてマクロファージおよびそれらの前駆体の活性化、なら
びに好中球、好塩基球、Ｂリンパ球およびいくつかのＴ細胞サブセット（例えば
、活性化されたＴ細胞およびＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞）ならびにナチュラルキラ
ー細胞の活性化を阻害するために使用され得る。自己免疫疾患の例としては、多
発性硬化症およびインシュリン依存性糖尿病が挙げられる。アンタゴニストはま
た、単核食細胞の補充および活性化を予防することによって、感染性疾患（珪肺
症、類肉腫症、特発性肺線維症を含む）を処置、予防および／または診断するた
めに使用され得る。これらはまた、好酸球の産生および移動を予防することによ
って、特発性好酸球増加症候群を処置、予防、および／または診断するために使
用され得る。エンドトキシンショックはまた、マクロファージの移動および本発
明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチドのそ
の産生を阻止することによって、アンタゴニストにより処置され得る。アンタゴ
ニストはまた、動脈壁における単球の浸潤を予防することによって、アテローム
性動脈硬化症を処置するために使用され得る。アンタゴニストはまた、ケモカイ
ン誘導肥満細胞および好塩基球脱顆粒ならびにヒスタミンの放出を阻害すること
によって、ヒスタミン媒介アレルギー反応および免疫学的障害（晩期アレルギー
反応、慢性じんま疹、およびアトピー性皮膚炎を含む）を処置、予防、および／
または診断するために使用され得る。ＩｇＥ媒介アレルギー反応（例えば、アレ
ルギー性喘息、鼻炎、および湿疹）もまた処置され得る。アンタゴニストはまた
、創傷領域への単球の誘引を予防することによって、慢性および急性の炎症を処
置、予防および／または診断するために使用され得る。慢性および急性の炎症性
肺疾患は、肺における単核食細胞の壊死巣分離（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ）
に関連しているので、アンタゴニストはまた、正常な肺のマクロファージ集団を
調節するために使用され得る。アンタゴニストはまた、患者の関節における滑液
中に単球を誘引すること予防することによって、慢性関節リウマチを処置、予防
および／または診断するために使用され得る。単球の流入および活性化は、変性
関節症および炎症性関節症の両方の病因において重要な役割を果たす。アンタゴ
ニストは、主にＩＬ−１およびＴＮＦに帰する有害なカスケードを妨害するため
に使用され得、これは他の炎症性サイトカインの生合成を阻害する。このように
して、アンタゴニストは、炎症を阻害するために使用され得る。アンタゴニスト
はまた、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２によって誘導さ
れるプロスタグランジン非依存性発熱（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ−ｉｎｄｅ
ｐｅｎｄｅｎｔ ｆｅｖｅｒ）を阻害するために使用され得る。アンタゴニスト
はまた、骨髄欠陥の症例（例えば、再生不良性貧血および骨髄形成異常症候群）
を処置、予防および／または診断するために使用され得る。アンタゴニストはま
た、肺における好酸球の蓄積を阻止することによって喘息およびアレルギーを処
置、予防および／または診断するために使用され得る。アンタゴニストはまた、
喘息の肺の顕著な特徴である上皮下基底膜線維症を処置、予防および／または診
断するために使用され得る。アンタゴニストはまた、リンパ腫（例えば、本明細
書中に提供される１つ以上のリンパ腫の広い列挙（これに限定されない））を処
置、予防および／または診断するために使用され得る。

【０４５３】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌク
レオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリ
ペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストおよび／またはアンタゴニス
トは、哺乳動物（好ましくはヒト）において、これらの障害と関連する種々の免
疫系関連障害および／または状態を、処置、予防および／または診断するために
使用され得る。多くの自己免疫障害は、免疫細胞により自己を外来物質として不
適切に認識することから生じる。この不適切な認識は、宿主組織の破壊を導く免
疫応答を生じる。従って、免疫応答（特にＢ細胞増殖および／または免疫グロブ
リンの産生）を阻害し得る本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴ
Ｒ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしく
はＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストおよ
び／またはアンタゴニストの投与は、自己免疫障害の処置および／または予防に
おける治療に効果的であり得る。従って、好ましい実施形態において、本発明の
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のアンタゴニスト（例え
ば、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチドフラ
グメントならびに抗ＴＲ２抗体）は、自己免疫障害の処置、予防および／または
診断に使用される。

【０４５４】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌク
レオチド、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプ
チド、ならびに／あるいはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ
２のアンタゴニスト（例えば、抗ＴＲ２抗体）を用いて処置、予防および／また
は診断され得るこれらの障害と関連した、自己免疫障害および状態としては、以
下が挙げられるがこれらに限定されない：自己免疫溶血性貧血、自己免疫性新生
児血小板減少、特発性血小板減少症紫斑病（ｉｄｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂ
ｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ ｐｕｒｐｕｒａ）、自己免疫性血球減少症、溶血性貧血
、抗リン脂質症候群、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、心筋炎、再発性多発性軟
骨炎、リウマチ性心疾患、糸球体腎炎（例えば、ＩｇＡネフロパシー）、多発性
硬化症、神経炎、ブドウ膜結膜炎、多発性内分泌腺症、紫斑病（例えば、Ｈｅｎ
ｌｏｃｈ−Ｓｃｏｅｎｌｅｉｎ紫斑病）、ライター病、スティッフマン症候群、
自己免疫性肺炎、ギヤン−バレー症候群、インスリン依存性糖尿病、および自己
免疫炎症性眼疾患。

【０４５５】 本発明の組成物を用いて処置、予防および／または診断され得る（高度にあり
そうである）さらなる自己免疫障害としては、以下が挙げられるが、これらに限
定されない：自己免疫性甲状腺炎、甲状腺機能不全症（すなわち、橋本甲状腺炎
）、（しばしば、例えば、細胞媒介および体液性甲状腺細胞傷害性によって特徴
付けられる）、全身性エリテマトーデス（しばしば、例えば、循環している免疫
複合体および局所産生された免疫複合体によって特徴付けられる）、グッドパス
チャー症候群（しばしば、例えば、抗基底膜抗体によって特徴付けられる）、天
疱瘡（しばしば、例えば、表皮の棘融解抗体によって特徴付けられる）、例えば
、（ａ）グレーヴズ病（しばしば、例えば、ＴＳＨレセプター抗体によって特徴
付けられる）、（ｂ）重症筋無力症（しばしば、例えば、アセチルコリンレセプ
ター抗体によって特徴付けられる）、および（ｃ）インスリン抵抗性（しばしば
、例えば、インシュリンレセプター抗体によって特徴付けられる）のようなレセ
プター自己免疫、自己免疫性溶血性貧血（しばしば、例えば、抗体感作されたＲ
ＢＣの貪食作用によって特徴付けられる）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（し
ばしば、例えば、抗体感作された血小板の貪食細胞によって特徴付けられる）。

【０４５６】 本発明の組成物を用いて処置、予防および／または診断され得る（高度にあり
そうである）さらなる自己免疫障害としては、以下が挙げられるが、これらに限
定されない：慢性関節リウマチ（しばしば、例えば、関節における免疫複合体に
よって特徴付けられる）、抗コラーゲン抗体を有する強皮症（ｓｃｈｌｅｒｏｄ
ｅｒｍａ）（しばしば、例えば、核小体および他の核抗体によって特徴付けられ
る）、混合結合組織病（しばしば、例えば、抽出可能な核抗原に対する抗体（例
えば、リボ核タンパク質）によって特徴付けられる）、多発性筋炎／皮膚筋炎（
しばしば、例えば、非ヒストンＡＮＡによって特徴付けられる）、悪性貧血（し
ばしば、例えば、抗壁細胞、ミクロソームおよび内性因子抗体によって特徴付け
られる）、特発性アディソン病（しばしば、例えば、体液性および細胞媒介の副
腎細胞傷害性によって特徴付けられる）、不妊症（しばしば、例えば、抗精子抗
体によって特徴付けられる）、原発性糸球体腎炎およびＩｇＡネフロパシーのよ
うな糸球体腎炎（しばしば、例えば、糸球体基底膜抗体または免疫複合体によっ
て特徴付けられる）、水疱性類天疱瘡（しばしば、例えば、基底膜中のＩｇＧお
よび補体によって特徴付けられる）、シェーグレン症候群（しばしば、例えば、
多発性組織抗体、および／または特異的非ヒストンＡＮＡ（ＳＳ−Ｂ）によって
特徴付けられる）、真性糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｉｌｌｉｔｕｓ）（しば
しば、細胞媒介および体液性の島細胞抗体によって特徴付けられる）、および喘
息または嚢胞性線維症を伴うアドレナリン作用性薬物耐性を含むアドレナリン作
用性薬物耐性（しばしば、β−アドレナリン作用性レセプター抗体によって特徴
付けられる）。

【０４５７】 本発明の組成物を用いて処置、予防および／または診断され得る（可能性のあ
る）さらなる自己免疫障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：慢性活動性肝疾患（しばしば、例えば、平滑筋抗体によって特徴付けられる
）、原発性胆汁性肝硬変（しばしば、例えば、ミトコンドリア抗体によって特徴
付けられる）、他の内分泌腺不全（しばしば、例えば、いくつかの場合において
特定の組織抗体によって特徴付けられる）、白斑（しばしば、例えば、メラノサ
イト抗体によって特徴付けられる）、脈管炎（しばしば、例えば、脈管壁におけ
るＩｇおよび補体ならびに／または低血清補体によって特徴付けられる）、ｐｏ
ｓｔ−ＭＩ（しばしば、例えば、心筋層抗体によって特徴付けられる）、心臓切
開症候群（しばしば、例えば、心筋層抗体によって特徴付けられる）、じんま疹
（しばしば、例えば、ＩｇＥに対するＩｇＧおよびＩｇＭ抗体によって特徴付け
られる）、アトピー性皮膚炎（しばしば、例えば、ＩｇＥに対するＩｇＧおよび
ＩｇＭ抗体によって特徴付けられる）、喘息（しばしば、例えば、ＩｇＥに対す
るＩｇＧおよびＩｇＭによって特徴付けられる）、炎症性筋障害、および多くの
他の炎症性、肉芽腫性（ｇｒａｎｕｌａｍａｔｏｕｓ）、変性、および萎縮性の
障害。

【０４５８】 好ましい実施形態において、自己免疫疾患ならびに上記の疾患および障害に関
連する障害および／または状態は、抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および
／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体を用いて、処置、予防および／または診断される
。

【０４５９】 特定の好ましい実施形態において、慢性関節リウマチは、本発明の抗ＴＲ２抗
体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体ならびに／ある
いは他のアンタゴニストを用いて、処置、予防およびまたは診断される。

【０４６０】 特定の好ましい実施形態において、狼瘡は、本発明の抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２
−ＳＶ１抗体および／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体ならびに／あるいは他のアン
タゴニストを用いて、処置、予防およびまたは診断される。

【０４６１】 特定の好ましい実施形態において、狼瘡と関連する腎炎は、本発明の抗ＴＲ２
抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体ならびに／あ
るいは他のアンタゴニストを用いて、処置、予防および／または診断される。

【０４６２】 特定の実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−
ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ
２−ＳＶ２のポリペプチド、あるいはそれらのアンタゴニスト（例えば、抗ＴＲ
２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体）は、全身
性エリテマトーデスを処置または予防するためおよび／あるいはそれと関連する
疾患、障害もしくは状態を処理または予防するために使用される。本発明のＴＲ
２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたは
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ある
いはそれらのアンタゴニストを用いて処置または予防され得る、狼瘡関連の疾患
、障害、または状態としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：血
液学的障害（例えば、溶血性貧血、白血球減少症、リンパ球減少症、および血小
板減少症）、免疫学的障害（例えば、抗ＤＮＡ抗体および抗Ｓｍ抗体）発疹、羞
明、口の潰瘍、関節炎、熱、疲労、体重減少、漿膜炎（例えば、胸膜炎（胸膜炎
（ｐｌｅｕｒｉｃｙ））、腎障害（例えば、腎炎）、神経性障害（例えば、発作
、末梢神経障害、ＣＮＳ関連障害）、胃腸障害、レーノー現象、および心膜炎）
。好ましい実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２
−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴ
Ｒ２−ＳＶ２のポリペプチド、あるいはそれらのアンタゴニスト（例えば、抗Ｔ
Ｒ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体）は、全
身性エリテマトーデス関連の腎障害を処置または予防するために使用され得る。
最も好ましい実施形態において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ
２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくは
ＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、あるいはそれらのアンタゴニスト（例えば、抗
ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体および／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体）は、
全身性エリテマトーデス関連の腎炎を処置または予防するために使用される。

【０４６３】 同様に、ぜん息（特にアレルギー性ぜん息）または他の呼吸の問題のような、
アレルギー反応およびアレルギー状態もまた、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１
および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−Ｓ
Ｖ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ならびに／あるいはそれ
らのアゴニストおよび／またはアンタゴニストにより処置され得る。さらに、こ
れらの分子を使用し、抗原性分子に対するアナフィラキシー、過敏症または血液
型不適合性を処置、予防および／または診断し得る。

【０４６４】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌク
レオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリ
ペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストおよび／またはアンタゴニス
トをまた使用し、器官拒絶または対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）および／または
それと関連する状態を、処置、予防および／または診断し得る。器官拒絶は、免
疫応答を介して移植組織の宿主免疫細胞破壊によって起こる。同様に、免疫応答
はまた、ＧＶＨＤに関与しているが、この場合、外来性の移植免疫細胞が宿主組
織を破壊する。免疫応答（特に、Ｔ細胞の増殖、分化または走化性）を阻害する
、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌク
レオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリ
ペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストおよび／またはアンタゴニス
トの投与は、器官拒絶またはＧＶＨＤの予防において効果的な治療であり得る。

【０４６５】 同様に、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２の
ポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ
２のポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニス
トをまた使用して、炎症を調節し得る。例えば、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ
１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−
ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ならびに／あるいはそ
れらのアゴニストまたはアンタゴニストは、炎症応答に関与する細胞の増殖およ
び分化を阻害し得る。これらの分子を使用して、慢性前立腺炎、肉芽腫性前立腺
炎、マラコプラキア、感染に関連する炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症
、または全身炎症応答症候群（ＳＩＲＳ））、虚血再灌流傷害に関連する炎症、
内毒素致死に関連する炎症、関節炎に関連する炎症、補体媒介性超急性拒絶に関
連する炎症、腎炎に関連する炎症、サイトカインまたはケモカインが誘導する肺
傷害に関連する炎症、炎症性腸疾患に関連する炎症、クローン病に関連する炎症
またはサイトカイン（例えば、ＴＮＦまたはＩＬ−１）の過剰生成から生じる炎
症を含む、慢性および急性の両方の状態の炎症状態を処置、予防および／または
診断し得る。

【０４６６】 特定の実施形態において、本発明の抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体およ
び／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体は、炎症を処置、予防、調節、検出および／ま
たは診断するために使用される。

【０４６７】 特定の実施形態において、本発明の抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体およ
び／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体は、炎症性障害を処置、予防、調節、検出およ
び／または診断するために使用される。

【０４６８】 別の特定の実施形態において、本発明の抗ＴＲ２抗体、抗ＴＲ２−ＳＶ１抗体
および／または抗ＴＲ２−ＳＶ２抗体は、アレルギーおよび過敏症を処置、予防
、調節、検出および／または診断するために使用される。

【０４６９】 ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２に対する抗体は、ＡＲ
ＤＳを処置、予防および／または診断するために、障害の後に好中球の肺への浸
潤を阻害することによって、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−Ｓ
Ｖ２の活性に結合し、そしてＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−Ｓ
Ｖ２を阻害するために使用され得る。本発明のアゴニストおよびアンタゴニスト
は、例えば、本明細書中以後に記載されるように薬学的に受容可能なキャリアと
共に組成物中に使用され得る。

【０４７０】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２および／も
しくはＴＲ２レセプターのポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１およ
び／もしくはＴＲ２−ＳＶ２および／もしくはＴＲ２レセプターのポリペプチド
、ならびに／あるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニストは、肺性システ
ムの疾患および障害（例えば、洞肺感染および気管支感染のような気管支）なら
びにそのような疾患および障害と関連する状態、ならびに他の気管支疾患および
障害を、処置、予防および／または診断するために使用される。特定の実施形態
において、そのような疾患および障害としては、以下が挙げられるが、これらに
限定されない：気管支腺腫、気管支ぜん息（例えば、気管支肺炎（ｂｒｏｎｃｈ
ｉａｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、ｂｒｏｎｃｈｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ）および結核
性気管支肺炎など）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支ポリープ、気管支
拡張症（例えば、乾性気管支拡張症、円柱状気管支拡張症および嚢胞状気管支拡
張症など）、細気管支腺癌、細気管支癌、細気管支炎（例えば、滲出性細気管支
炎、閉塞性線維性細気管支炎および増殖性細気管支炎など）、細気管支肺胞癌腫
（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｏ−ａｌｖｅｏｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支炎
性ぜん息、気管支炎（例えば、ぜん息性気管支炎、カステラーニ気管支炎、慢性
気管支炎、クループ性気管支炎、線維素性気管支炎、出血性気管支炎、鳥類の伝
染性気管支炎、閉塞性気管支炎、形成性気管支炎、偽膜性気管支炎、腐敗性気管
支炎および寄生虫性気管支炎など）、気管支中心性肉芽腫症、気管支浮腫、気管
食道瘻、気管支原生癌、気管支性嚢胞、気管支結石症、気管支軟化症、気管支真
菌症（例えば、気管支肺アスペルギルス症など）、気管支肺スピロヘータ症、出
血性気管支炎、気管支漏、気管支痙攣、気管支滴状出血、気管支狭窄、ビオー呼
吸、気管支呼吸、クスマウル呼吸、クスマウル−キーン（Ｋｉｅｎ）呼吸、呼吸
性アシドーシス、呼吸性アルカローシス、新生児呼吸窮迫症候群、呼吸機能不全
、上気道硬化症、ＲＳウイルスなど。

【０４７１】 特定の実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくは
ＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もし
くはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストお
よび／またはアンタゴニストは、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置、予防お
よび／または診断するために使用される。

【０４７２】 別の実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴ
Ｒ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしく
はＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストおよ
び／またはアンタゴニストは、例えば、嚢胞性線維症（例えば、膵臓の嚢胞性線
維症、クラーク−ハッドフィールド症候群、膵臓の線維性嚢胞疾患、ムコビシド
ーシスおよび粘液過剰症のような線維症（ｆｉｂｒｏｓｅｓ）を含む）、心内膜
心筋線維症、特発性腹膜後線維症、軟膜線維症、縦隔線維症、結節性表皮下線維
組織増殖症、中心静脈周囲線維化、筋周囲線維化、パイプ軸線維症、置換性線維
形成、外膜下線維症およびシンマーズ陶製パイプ柄状線維症のような線維症（ｆ
ｉｂｒｏｓｅｓ）（しかし、これらに限定されない）と関連する線維症および状
態を、処置、予防および／または診断するために使用される。

【０４７３】 ＴＮＦファミリーリガンドは、最も多面発現性のサイトカインであることが公
知であり、多数の細胞応答（細胞傷害性、抗ウイルス活性、免疫調節活性、およ
びいくつかの遺伝子の転写調節を含む）を誘導する（Ｄ．Ｖ．Ｇｏｅｄｄｅｌら
、「Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒｓ：Ｇｅｎｅ Ｓｔｒｕｃｔ
ｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ」、Ｓｙｍｐ．
Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５１：５９７−６０９（１９８６）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ；Ｂ．Ｂｅｕｔｌｅｒ，およびＡ．Ｃｅｒａｍｉ、Ａｎｎ
ｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７：５０５−５１８（１９８８）；Ｌ．Ｊ．Ｏ
ｌｄ、Ｓｃｉ．Ａｍ．２５８：５９−７５（１９８８）；Ｗ．Ｆｉｅｒｓ、ＦＥ
ＢＳ Ｌｅｔｔ．２８５：１９９−２２４（１９９１））。本発明のＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチドを含むＴＮＦ−ファ
ミリーリガンドは、ＴＮＦ−ファミリーレセプターに結合することによって、こ
のような種々の細胞応答を誘導する。ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴ
Ｒ２−ＳＶ２のポリペプチドは、細胞、細胞株、組織、組織培養または患者に対
する、任意の遺伝子型変化、表現型変化および／または形態学的変化を含む強力
な細胞応答を誘発すると考えられている。示したように、そのような細胞応答は
、ＴＮＦファミリーリガンドに対する正常な生理学的応答のみでなく、増加した
アポトーシスおよびアポトーシスの阻害に関連する疾患を含む。アポトーシス（
プログラムされた細胞死）は、免疫系の末梢Ｂリンパ球および／またはＴリンパ
球の欠失に関与する生理学的機構であり、そしてアポトーシスを調節できないこ
と、多くの異なる病原性プロセスを導き得る（Ｊ．Ｃ．Ａｍｅｉｓｅｎ，ＡＩＤ
Ｓ ８：１１９７−１２１３（１９９４）；Ｐ．Ｈ．Ｋｒａｍｍｅｒら、Ｃｕｒ
ｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２７９−２８９（１９９４））。

【０４７４】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌク
レオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリ
ペプチド、ならびにそれらのアゴニストおよびアンタゴニストを用いて、診断、
処置または予防され得る、増加した細胞生存またはアポトーシスの阻害と関連す
る疾患としては、癌（例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３変異を伴う癌腫およびホ
ルモン依存性腫瘍（結腸癌、心腫瘍、膵臓癌、黒色腫、網膜芽細胞腫、神経膠芽
細胞腫、肺癌、腸癌、精巣癌、胃癌、神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫、
内皮腫、骨芽細胞腫、骨巨細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、腺腫、乳癌、前立腺癌、
カポージ肉腫および卵巣癌を含むが、これらに限定されない））；自己免疫障害
（例えば、全身性エリテマトーデスおよび免疫関連糸球体腎炎慢性関節リウマチ
）；ウイルス感染（例えば、ヘルペスウイルス、ポックスウイルスおよびアデノ
ウイルス）；炎症；対宿主性移植片病；急性移植片拒絶および慢性移植片拒絶が
挙げられる。従って、好ましい実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−Ｓ
Ｖ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２
−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ならびに／あるいは
それらのアゴニストまたはアンタゴニストは、自己免疫疾患を処置、予防および
／または診断するため、そして／あるいは、本明細書中に開示のこれらの癌（例
えば、リンパ球白血病（例えば、ＭＬＬおよび慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）
）および濾胞性リンパ腫）を含むがこれらに限定されない癌の増殖、進行および
／転移を阻害するために使用される。別の実施形態において、本発明のＴＲ２、
ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ
２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチドは、癌性細
胞または組織（例えば、Ｂ細胞系列関連癌（例えば、ＣＬＬおよびＭＬＬ）、リ
ンパ球性白血病またはリンパ腫）を活性化、分化または増殖するために使用され
、それによって、それらの細胞を癌治療（例えば、化学療法または放射線療法）
に対してより脆弱にする。

【０４７５】 さらに、他の実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／も
しくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および
／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニ
ストまたはアンタゴニストは、悪性疾患の増殖、進行および／または転移を阻害
するために使用され、そして、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白
血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白
血病、単球性白血病および赤白血病を含む））および慢性白血病（例えば、慢性
骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ急性白血病））、真性赤血球増加症
、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァル
デンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患および固体腫瘍（線維肉腫、粘
液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リン
パ管肉腫、リンパ管内皮腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横
紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞
癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管
支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィル
ムス腫瘍、子宮頸管、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、
神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管
芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色
腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫のような肉腫および癌腫を含むが、これら
に限定されない）のような関連する障害を阻害するために使用される。

【０４７６】 本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌク
レオチドまたはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリ
ペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニストを用い
て診断、処置または予防され得る増加したアポトーシスと関連する疾患としては
、ＡＩＤＳ；神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎
縮性側索硬化症、色素性網膜炎、小脳性変性）；脊髄形成異常症症候群（例えば
、再生不良性貧血）、虚血性創傷（心筋梗塞、発作および再灌流障害によって生
じるような創傷）、毒素誘導肝疾患（例えば、アルコールによって生じるような
疾患）、敗血症性ショック、悪液質、食欲不振が挙げられる。従って、本発明の
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドま
たはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、
ならびに／あるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニストは、上記の疾患お
よび障害を処置、予防および／または診断するために使用される。

【０４７７】 好ましい実施形態において、本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしく
はＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、ならびに／あるいはそれらのアゴニストまた
はアンタゴニスト（例えば、抗ＴＲ２抗体）は、ヒト細網肉腫Ｕ９３７細胞の増
殖を用量依存的様式で阻害する。さらなる好ましい実施形態において、本発明の
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、なら
びに／あるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニスト（例えば、ＴＲ２抗体
）は、ＰＣ−３細胞、ＨＴ−２９細胞、ＨｅＬａ細胞、ＭＣＦ−７細胞およびＡ
２９３細胞の増殖を阻害する。高度に好ましい実施形態において、本発明のＴＲ
２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドまたは
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、なら
びに／あるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニスト（例えば、ＴＲ２抗体
）は、前立腺癌、結腸癌、頸部癌腫および乳癌の増殖、進行および／または転移
を阻害する。

【０４７８】 従って、さらなる好ましい実施形態において、本発明は、ＴＮＦファミリーリ
ガンドによって誘導されるアポトーシスを増強するための方法に関し、この方法
は、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のレセプターを発現
する細胞にＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２媒介シグナル
伝達を増加または減少し得る有効量のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴ
Ｒ２−ＳＶ２もしくはそれらのアゴニストまたはアンタゴニストを投与する工程
を包含する。好ましくは、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ
２媒介シグナル伝達は、疾患を処置、予防および／または診断するために増加あ
るいは減少され、ここで、減少したアポトーシスまたは減少したサイトカインお
よび付着分子の発現が示される。アゴニストまたはアンタゴニストは、ＴＲ２、
ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２の可溶性形態ならびにＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチドに対するモノクロー
ナル抗体を含み得る。

【０４７９】 さらなる局面において、本発明は、ＴＮＦファミリーリガンドによって誘導さ
れるアポトーシスを阻害するための方法に関し、この方法は、ＴＲ２、ＴＲ２−
ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のレセプターを発現する細胞にＴＲ２、Ｔ
Ｒ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２媒介シグナル伝達を増加または減少
し得る有効量のアゴニストまたはアンタゴニストを投与する工程を包含する。好
ましくは、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２媒介シグナル
伝達は、疾患を処置、予防および／または診断するために増加または減少され、
ここで、増加したアポトーシスまたはＮＦ−κＢ発現が示される。アゴニストま
たはアンタゴニストは、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２
の可溶性形態ならびにＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２の
ポリペプチドに対するモノクローナル抗体を含み得る。

【０４８０】 ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２がＴＮＦスーパーファ
ミリーに属するので、このポリペプチドはまた、新脈管形成を調節し得る。さら
に、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２は免疫細胞機能を阻
害するので、このポリペプチドは、広範な抗炎症性活性を有する。ＴＲ２、ＴＲ
２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２は、宿主防御細胞（例えば、細胞障害
性Ｔ細胞およびマクロファージ）の浸潤および活性化を刺激することによって、
そして腫瘍の新脈管形成を阻害することによって、固体腫瘍を処置、予防および
／または診断するために抗新生血管形成剤として使用され得る。当業者は、血管
増殖が所望されない他の非癌適用を認識する。これらはまた、耐性慢性感染およ
び急性感染（例えば、殺菌性白血球の誘因および活性を介したマイコバクテリア
感染）に対する宿主防御を増強するために使用され得る。ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ
１および／またはＴＲ２−ＳＶ２はまた、Ｔ細胞媒介自己免疫疾患およびリンパ
球性白血病（例えば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含む）の処置のために
、ＩＬ−２生合成の阻害によってＴ細胞増殖を阻害するために使用され得る。Ｔ
Ｒ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２はまた、細片除去および結
合組織促進炎症細胞の両方の漸増を介して、創傷治癒を刺激するために使用され
得る。これと同様の様式において、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ
２−ＳＶ２はまた、他の線維症性障害（肝硬変、変形性関節症および肺線維症を
含む）を処置、予防および／または診断するために使用され得る。ＴＲ２、ＴＲ
２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２はまた、組織に侵入する寄生虫の幼虫
（例えば、住血吸虫症、旋毛虫症および回虫症）を殺傷する特有の機能を有する
好酸球の存在を増加させる。これはまた、種々の造血前駆細胞の活性化および分
化を制御すること（例えば、化学療法に続いて成熟白血球を骨髄から放出する（
すなわち、幹細胞の可動化））によって、造血を調節するために使用され得る。
ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２はまた、敗血症を処置、
予防および／または診断するために使用され得る。

【０４８１】 本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド、ならびに／あるいは
それらのアゴニストまたはアンタゴニストは、新脈管形成、創傷治癒（例えば、
創傷、やけど、および骨折）の促進および造血の調節において有用である。本発
明のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド、ならびに／あるいはそれら
のアゴニストおよび／またはアンタゴニストはまた、特定の抗原、抗ウイルス免
疫応答に対する免疫応答性を増強するためのアジュバントとして有用である。

【０４８２】 より一般的には、本発明のポリヌクレオチドおよび／もしくはそのポリペプチ
ドならびに／あるいはそのアゴニストおよび／もしくはアンタゴニストは、免疫
応答を調節する（すなわち、上昇または減少させる）際に有用である。例えば、
本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドは、手術、外傷、放射線
治療、化学療法、および移植からの準備または回復において有用であり得るか、
あるいは、高齢および免疫無防備状態の個体において免疫応答および／または回
復をブーストするために使用され有る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドお
よび／もしくはポリペプチドならびに／またはそのアゴニストおよび／もしくは
アンタゴニストは、例えば、自己免疫障害の処置または予防における免疫抑制剤
として有用である。特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドおよび
／またはポリペプチドは、慢性的炎症、アレルギーまたは自己免疫状態（例えば
、本明細書中に記載されるか、またはさもなくば当該分野で公知の状態）を処置
または予防するために使用される。

【０４８３】 好ましくは、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチド、ならびに／またはＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１お
よび／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のアゴニストもしくはアンタゴニスト（例えば、
抗ＴＲ２抗体）を用いた処置は、有効量の本発明のＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１およ
び／もしくはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチド、またはそのアゴニストもしくはア
ンタゴニストの患者への投与によるか、あるいは患者から細胞を取り出し、ＴＲ
２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリヌクレオチドをこの細
胞に供給し、そしてこの患者へこの操作された細胞を戻すこと（エキソビボ治療
）によるかのいずれかであり得る。さらに、本明細書中でさらに議論されるよう
に、ＴＲ２、ＴＲ２−ＳＶ１および／またはＴＲ２−ＳＶ２のポリペプチドまた
はポリヌクレオチドは、感染性疾患に対する免疫応答を惹起するために、ワクチ
ンにおけるアジュバントとして使用され得る。

【０４８４】 このアゴニストおよびアンタゴニストは、（例えば、本明細書中に記載される
ような）薬学的に受容可能なキャリアを有する組成物において用いられ得る。

【０４８５】 上記の全ての適用は、獣医学的医療ならびにヒト処置レジメンにおいて使用さ
れ得る。

【０４８６】 上記に列挙した適用は、種々の広範な宿主において用途がある。このような宿
主としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ヒト、マウス、ウサギ
、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、マウス、ラット、ハムスター、ブタ、ミニ
ブタ（ｍｉｃｒｏ−ｐｉｇ）、ニワトリ、ヤギ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコ、非
ヒト霊長類およびヒト。特定の実施形態において、宿主はマウス、ウサギ、ヤギ
、モルモット、ニワトリ、ラット、ハムスター、ブタ、ヒツジ、イヌまたはネコ
である。好ましい実施形態において、宿主は哺乳動物である。最も好ましい実施
形態において、宿主はヒトである。

【０４８７】 （心臓血管傷害） 本発明のＴＲ２ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴ
ニストは、心臓血管障害（肢虚血のような末梢動脈疾患を含む）を処置するため
に使用され得る。

【０４８８】 心臓血管障害としては、動動脈瘻（ａｒｔｅｒｉｏ−ａｒｔｅｒｉａｌ ｆｉ
ｓｔｕｌａ）、動静脈瘻、大脳動静脈先天異常、先天性心欠陥（ｃｏｎｇｅｎｉ
ｔａｌ ｈｅａｒｔ ｄｅｆｅｃｔｓ）、肺動脈弁閉鎖症、およびシミター症候
群のような心臓血管異常が挙げられる。先天性心欠陥としては、大動脈縮窄、三
房心、冠状脈管奇形（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｖｅｓｓｅｌ ａｎｏｍａｌｉｅｓ）
、交差心、右胸心、開存性動脈管（ｐａｔｅｎｔ ｄｕｃｔｕｓ ａｒｔｅｒｉ
ｏｓｕｓ）、エブスタイン奇形、アイゼンメンガー複合体、左心室発育不全症候
群、左胸心、ファロー四徴症、大血管転位症、両大血管右室起始症、三尖弁閉鎖
症、動脈管遺残、および心中隔欠損症（ｈｅａｒｔ ｓｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃ
ｔｓ）（例えば、大動脈肺動脈中隔欠損症（ａｏｒｔｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓ
ｅｐｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ）、心内膜床欠損症、リュタンバッシェ症候群、ファ
ロー三徴症、心室心中隔欠損症（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｈｅａｒｔ ｓｅｐ
ｔａｌ ｄｅｆｅｃｔｓ））が挙げられる。

【０４８９】 心臓血管障害としてはまた、不整脈、カルチノイド心臓病、高心拍出量（ｈｉ
ｇｈ ｃａｒｄｉａｃ ｏｕｔｐｕｔ）、低心拍出量（ｌｏｗ ｃａｒｄｉａｃ
ｏｕｔｐｕｔ）、心タンポナーデ、心内膜炎（細菌性を含む）、心臓動脈瘤、
心停止、うっ血性心不全、うっ血性心筋症、発作性呼吸困難、心臓水腫、心肥大
、うっ血性心筋症、左心室肥大、右心室肥大、梗塞後心破裂（ｐｏｓｔ−ｉｎｆ
ａｒｃｔｉｏｎ ｈｅａｒｔ ｒｕｐｔｕｒｅ）、心室中隔破裂、心臓弁疾患、
心筋疾患、心筋虚血、心内膜液浸出、心外膜炎（梗塞性および結核性を含む）、
気心膜症、心膜切開後症候群、右心疾患、リウマチ性心疾患、心室機能不全、充
血、心臓血管妊娠合併症（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ
ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、シミター症候群、心血管梅毒、および心血管
結核（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のような心
臓病が挙げられる。

【０４９０】 不整脈としては、洞性不整脈、心房性細動、心房粗動、徐脈、期外収縮、アダ
ムズ−ストークス症候群、脚ブロック、洞房ブロック、長ＱＴ症候群（ｌｏｎｇ
ＱＴ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、副収縮、ローン−ギャノング−レヴァイン症候群
、マヘーム型早期興奮症候群（Ｍａｈａｉｍ−ｔｙｐｅ ｐｒｅ−ｅｘｃｉｔａ
ｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウルフ−パーキンソン−ホワイト症候群、洞不
全症候群、頻拍、および心室性細動が挙げられる。頻拍としては、発作性頻拍、
上室性頻拍、心室固有調律促進、房室結節性再入頻拍（ａｔｒｉｏｖｅｎｔｒｉ
ｃｕｌａｒ ｎｏｄａｌ ｒｅｅｎｔｒｙ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、異所心
房性頻拍、異所接合部頻拍、洞房結節性再入頻拍（ｓｉｎｏａｔｒｉａｌ ｎｏ
ｄａｌ ｒｅｅｎｔｒｙ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、洞性頻拍、トルサード・
ド・ポワント、および心室性頻拍が挙げられる。

【０４９１】 心臓弁疾患としては、大動脈弁機能不全症、大動脈弁狭窄症、心雑音（ｈｅａ
ｒ ｍｕｒｍｕｒｓ）、大動脈弁逸脱症、僧帽弁逸脱症、三尖弁逸脱症、僧帽弁
機能不全、僧帽弁狭窄症、肺動脈弁閉鎖症、肺動脈弁機能不全、肺動脈弁狭窄症
、三尖閉鎖症、三尖弁機能不全、および三尖弁狭窄症が挙げられる。

【０４９２】 心筋疾患としては、アルコール性心筋症、うっ血性心筋症、肥大型心筋症、弁
下部性大動脈狭搾症、弁下部性肺動脈狭搾症、拘束型心筋症、シャーガス心筋症
、心内膜線維弾性症、心内膜心筋線維症、キーンズ症候群、心筋再灌流障害、お
よび心筋炎が挙げられる。

【０４９３】 心筋性虚血としては、狭心症、冠動脈瘤、冠動脈硬化、冠動脈血栓症、冠動脈
血管痙攣、心筋梗塞、および心筋気絶（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｓｔｕｎｎｉｎ
ｇ）のような冠動脈疾患が挙げられる。

【０４９４】 心臓血管疾患としてはまた、動脈瘤、血管形成異常、血管腫症、細菌性血管腫
症状、ヒッペル−リンダラ疾患（Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ Ｄｉｓｅａｓｅ
）、クリペル−トルノネー−ウェーバー症候群、スタージ−ウェーバー症候群、
血管運動神経性水腫、大動脈疾患、高安動脈炎、大動脈炎、ルリーシュ症候群、
動脈閉塞疾患、動脈炎、動脈内膜炎（ｅｎａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、結節性多発性
動脈炎、脳血管障害、糖尿病性血管障害、糖尿病性網膜症、塞栓症、血栓症、先
端紅痛症、痔、肝静脈閉塞障害、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管障害、静脈炎
、肺静脈閉塞疾患、レーノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、網膜静脈閉塞、シミター症
候群、上大静脈症候群、毛細血管拡張症、毛細血管拡張性運動失調（ａｔａｃｉ
ａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、遺伝性出血性毛細管拡張症、精索静脈瘤
、拡張蛇行静脈、静脈瘤性潰瘍、脈管炎、および静脈機能不全のような血管疾患
が挙げられる。

【０４９５】 動脈瘤としては、解離性動脈瘤、偽動脈瘤、感染した動脈瘤、破裂した動脈瘤
、大動脈性動脈瘤、大脳性動脈瘤、冠動脈瘤、心動脈瘤、および腸骨性動脈瘤が
挙げられる。

【０４９６】 動脈閉塞疾患としては、動脈硬化症、間欠性跛行、頸動脈狭窄症、線維筋性形
成異常、腸間膜性血管閉塞、モヤモヤ病、腎動脈閉塞、網膜動脈閉塞、および閉
塞性血栓性血管炎が挙げられる。

【０４９７】 脳血管障害としては、頸動脈疾患、脳のアミロイド血管症、大脳動脈瘤、大脳
無酸素症、大脳動脈硬化、大脳動静脈先天異常、大脳動脈疾患、大脳の閉塞症お
よび血栓症、頸動脈血栓症、洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、大脳出血、硬膜
上血腫、硬膜下血腫、クモ膜下出血（ｓｕｂａｒａｘｈｎｏｉｄ ｈｅｍｏｒｒ
ｈａｇｅ）、大脳梗塞、大脳虚血（一過性を含む）、鎖骨下動脈盗血症候群、室
周白軟化症（ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｌｅｕｋｏｍａｌａｃｉａ）、
血管性頭痛、群発性頭痛、片頭痛、および椎骨基部（ｖｅｒｔｅｂｒｏｂａｓｉ
ｌａｒ）機能不全が挙げられる。

【０４９８】 塞栓症としては、空気塞栓症、羊水塞栓症、コレステロール塞栓症、爪先チア
ノーゼ症候群、脂肪塞栓症、肺動脈塞栓症、および血栓塞栓症が挙げられる。血
栓症としては、冠状動脈血栓症、肝静脈血栓症、網膜静脈閉塞、頸動脈血栓症、
洞血栓症、ヴァレンベルク症候群、および血栓性静脈炎が挙げられる。

【０４９９】 虚血としては、大脳虚血、虚血性大腸炎、区画症候群、前区画症候群、心筋虚
血、再灌流傷害、および末梢四肢虚血が挙げられる。脈管炎としては、大動脈炎
、動脈炎、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）症候群、チャーグ−ストラウス症候群
、皮膚粘膜リンパ節症候群、閉塞性血栓性血管炎、過敏性血管炎、シェーンライ
ン紫斑病（Ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎ−Ｈｅｎｏｃｈ ｐｕｒｐｕｒａ）、アレルギ
ー性皮膚血管炎およびヴェーゲナー肉芽腫症が挙げられる。

【０５００】 一つの実施形態において、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリ
ペプチド、アゴニストまたはアンタゴニストは、血栓性微小血管症の処置のため
に使用される。このような障害の一つは、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）
である（Ｋｗａａｎ，Ｈ．Ｃ．、Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２４：７１（１
９８７）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｂｌｏｏｄ ８０：１８９０（１９９２））。
漸増ＴＴＰ関連死亡率が、Ｕ．Ｓ．Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ
Ｃｏｎｔｒｏｌによって報告されている（Ｔｏｒｏｋら、Ａｍ．Ｊ．Ｈｅｍａｔ
ｏｌ．５０：８４（１９９５））。ＴＴＰで冒された患者（ＨＩＶ＋およびＨＩ
Ｖ−患者を含む）由来の血漿は、皮膚の微小血管起源のヒト内皮細胞のアポトー
シスを誘導するが、大血管起源のヒト内皮細胞のアポトーシスは誘導しない（Ｌ
ａｕｒｅｎｃｅら、Ｂｌｏｏｄ ８７：３２４５（１９９６））。従って、ＴＴ
Ｐ患者の血漿は、直接的または間接的にアポトーシスを誘導する１つ以上の因子
を含むと考えられる。別の血栓微小血管症は、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）で
ある（Ｍｏａｋｅ，Ｊ．Ｌ．、Ｌａｎｃｅｔ、３４３：３９３、（１９９４）；
Ｍｅｌｎｙｋら、Ａｒｃｈ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．、１５５：２０７７、（１
９９５）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、前出）。従って、一つの実施形態において、本
発明は、しばしば、「成人ＨＵＳ」（子供も同様に襲われ得るが）といわれる状
態を処置るためのＴＲ２レセプターの使用に関する。小児期／下痢に関連するＨ
ＵＳとして公知の障害は、成人ＨＵＳとは病因において異なる。別の実施形態に
おいて、小血管の凝固によって特徴付けられる状態は、ＴＲ２レセプターを使用
して処置され得る。このような状態としては、本明細書中に記載される状態が挙
げられるが、これらに限定されない。例えば、約５〜１０％の小児ＡＩＤＳ患者
において見られる心臓の問題は、小血管の凝固が関与すると考えられる。心臓に
おける微小血管の崩壊が、多発性硬化症患者において報告されている。さらなる
例としては、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）の処置が意図される。一つの実施形態
において、患者の血液または血漿は、エキソビボで、本発明のＴＲ２レセプター
ポリペプチドと接触される。本発明のＴＲ２レセプターポリペプチドは、当該分
野で公知の技術を使用して、適切なクロマトグラフィーマトリックスに結合され
得る。この実施形態に従って、患者の血液または血漿は、患者に戻される前に、
マトリックスに結合した本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチドおよび／ま
たはポリペプチドを含むクロマトグラフィーカラムを通って流れる。固定された
ＴＲ２レセプターは、ＡＩＭ ＩＩに結合し、従って、患者の血液からＡＩＭ
ＩＩタンパク質を取り除く。あるいは、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオ
チド、ポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニストは、血栓性微小血管症に
冒された患者にインビボで投与され得る。一つの実施形態において、本発明のＴ
Ｒ２レセプターポリペプチドの可溶性形態が、患者に投与される。従って、本発
明は、有効量のＴＲ２ポリペプチドレセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド
、アゴニストまたはアンタゴニストの使用を含む、血栓性微小血管症を処置する
ための方法を提供する。ＴＲ２レセプターポリペプチドは、インビボ手順または
エキソビボ手順で使用され、（例えば、アポトーシスの）微小血管内皮細胞に対
するＡＩＭ−ＩＩ媒介性損傷を阻害し得る。

【０５０１】 理論に束縛されることを意図しないが、ＴＲ２を発現する細胞は、ＡＩＭ Ｉ
Ｉを発現する細胞と相互作用すると考えられる。

【０５０２】 本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストまた
はアンタゴニストは、特定の障害を処置する際に有用な他の薬剤と組合わせて使
用され得る。例えば、Ｌａｕｒｅｎｃｅら、Ｂｌｏｏｄ ８７：３２４５（１９
９６）によって報告されたインビトロ研究において、微小血管内皮細胞のＴＴＰ
血漿媒介アポトーシスのいくぶんかの減少が、抗Ｆａｓブロッキング抗体、オー
リントリカルボン酸、または寒冷沈降物を枯渇した正常血漿を使用することによ
って達成された。従って、患者は、内皮細胞のＦａｓリガンド媒介アポトーシス
を阻害する薬剤（例えば、上記に記載した薬剤）と組み合わせて、本発明のポリ
ヌクレオチドおよび／またはポリペプチドで処置され得る。１つの実施形態にお
いて、ＴＲ２レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストまたはア
ンタゴニストおよび抗ＦＡＳブロッキング抗体の両方は、ＴＴＰまたはＨＵＳの
ような血栓性細小血管症によって特徴付けられる障害に罹患した患者に投与され
る。Ｆａｓ抗原（ＣＤ９５）を指向するブロッキングモノクローナル抗体の例は
、本明細書中に参考として援用される、ＷＯ９５／１０５４０において記載され
る。

【０５０３】 内因性刺激因子と新脈管形成のインヒビターとの間の天然に存在するバランス
は、阻害的な影響が優勢であるものである。Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄら、Ｃｅｌｌ
５６：３４５−３５５（１９８９）。新生血管形成が通常の生理学的条件下（
例えば、創傷治癒、組織再生、胚発生、および女性の生殖プロセス）で起こるま
れな例において、新脈管形成は、厳密に調節され、そして空間的かつ時間的に限
定される。固形腫瘍増殖を特徴付けるような病理学的な新脈管形成の条件下で、
これらの調節制御は失敗する。

【０５０４】 調節されない新脈管形成は、病理学的になり、そして多くの腫瘍性疾患および
非腫瘍性疾患の進行を持続する。多くの重篤な疾患は、異常な新生血管形成（固
形腫瘍増殖および転移、関節炎、いくつかの型の眼の障害、および乾癬を含む）
によって支配される。例えば、Ｍｏｓｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．９：６３０−６
３４（１９９１）による概説；Ｆｏｌｋｍａｎら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．
３３３：１７５７−１７６３（１９９５）；Ａｕｅｒｂａｃｈら、Ｊ．Ｍｉｃｒ
ｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．２９：４０１−４１１（１９８５）；Ｆｏｌｋｍａｎ、Ａ
ｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、ＫｌｅｉｎおよびＷ
ｅｉｎｈｏｕｓｅ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１７
５−２０３頁（１９８５）；Ｐａｔｚ、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．９４：
７１５−７４３（１９８２）；およびＦｏｌｋｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２
１：７１９−７２５（１９８３）を参照のこと。多くの病理学的な状態において
、新脈管形成のプロセスは、疾患状態に寄与する。例えば、固形腫瘍の増殖が新
脈管形成に依存していることを示唆する有意なデータが蓄積されている。Ｆｏｌ
ｋｍａｎおよびＫｌａｇｓｂｒｕｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：４４２−４４７
（１９８７）。

【０５０５】 本発明は、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチドおよび／またはポリペ
プチド（ＴＲ２レセプターアゴニストおよび／またはアンタゴニストを含む）の
投与による新生血管形成に関連する疾患または障害の処置を提供する。本発明の
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを用いて処置され得る悪性および転移性の
状態には、本明細書中に記載され、そしてさもなくば当該分野で公知の悪性疾患
、固形腫瘍、および癌が含まれるがこれらに限定されない（このような障害の概
説としては、Ｆｉｓｈｍａｎら、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐ
ｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８５）を参照のこと）
。

【０５０６】 さらに、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチドおよびポリペプチド（Ｔ
Ｒ２レセプターアゴニストおよびＴＲ２レセプターアンタゴニストを含む）で処
置され得る、新生血管形成と関連した眼の障害としては、血管新生緑内障、糖尿
病性網膜症、網膜芽細胞腫、水晶体後線維増殖症、ブドウ膜炎、未熟児黄斑変性
の網膜症、角膜移植新生血管形成、ならびに他の眼の炎症性疾患、眼の腫瘍、お
よび脈絡膜または虹彩の新生血管形成に関連する疾患が挙げられるがこれらに限
定されない。例えば、Ｗａｌｔｍａｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌ．８５：７
０４−７１０（１９７８）による概説、およびＧａｒｔｎｅｒら、Ｓｕｒｖ．Ｏ
ｐｈｔｈａｌ．２２：２９１−３１２（１９７８）を参照のこと。

【０５０７】 さらに、本発明のＴＲ２レセプターポリヌクレオチドおよびポリペプチド（Ｔ
Ｒ２レセプターアゴニストおよびＴＲ２レセプターアンタゴニストを含む）を用
いて処置され得る障害としては、血管腫、関節炎、乾癬、血管線維腫、アテロー
ム硬化性斑、創傷治癒の遅延、顆粒化、血友病性関節、過形成性瘢痕、偽関節破
損、オースラー−ウェーバー症候群、化膿性肉芽腫、強皮症、トラコーマ、およ
び脈管接着が挙げられるがこれらに限定されない。

【０５０８】 本発明のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド、ならびに／あるいは
そのアゴニストおよび／またはアンタゴニストは、広範な疾患および／または状
態の診断および処置または予防において有用である。このような疾患および状態
には、癌（例えば、免疫細胞関連癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、濾胞性リンパ腫
、ｐ５３の変異または変化に関連した癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部癌、大腸癌
、結腸直腸癌、肺の非小細胞癌、肺の小細胞癌、胃癌など）、リンパ増殖性障害
（例えば、リンパ節症）、微生物（例えば、ウイルス、細菌など）感染（例えば
、ＨＩＶ−１感染、ＨＩＶ−２感染、ヘルペスウイルス感染（ＨＳＶ−１、ＨＳ
Ｖ−２、ＣＭＶ、ＶＺＶ、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７、ＥＢＶを含むがこれらに限
定されない）、アデノウイルス感染、ポックスウイルス感染、ヒトパピローマウ
イルス感染、肝炎感染（例えば、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶなど）、Ｈｅｌｉｃｏ
ｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ感染、侵襲性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉａなど）
、寄生生物感染、腎炎、骨疾患（例えば、骨粗しょう症）および骨形成（例えば
、破骨細胞分化の調節）、アテローム性動脈硬化症、疼痛、心臓血管障害（例え
ば、新生血管形成、低血管形成または循環の減少（例えば、虚血性疾患（例えば
、心筋梗塞、発作など）））、ＡＩＤＳ、アレルギー、炎症、神経変性性疾患（
例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、色素性網膜
症、小脳変性など）、移植拒絶（急性および慢性）、対宿主性移植片病、骨髄形
成異常症に起因する疾患（例えば、再生不良性貧血など）、リウマチにおける関
節組織破壊、肝臓疾患（例えば、急性および慢性肝炎、肝臓損傷、および肝硬変
）、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、全身性エリテマ
トーデス、免疫複合体性糸球体腎炎、重症筋無力症、自己免疫性糖尿病、自己免
疫性血小板減少性紫斑病、グレーヴズ病、橋本甲状腺炎など）、心筋症（例えば
、拡張型心筋症）、糖尿病、糖尿病性合併症（例えば、糖尿病性腎症、糖尿病性
ニューロパシー、糖尿病性網膜症）、インフルエンザ、ぜん息、乾癬、糸球体腎
炎、敗血症性ショック、および潰瘍性大腸炎が挙げられるがこれらに限定されな
い。

【０５０９】 本発明のポリヌクレオチドおよび／もしくはポリペプチドならびに／またはそ
のアゴニストおよび／もしくはアンタゴニストはまた、特定の抗原に対する免疫
応答性および／または抗ウイルス免疫応答を増強するためのアジュバントとして
有用である。

【０５１０】 より一般的には、本発明のポリヌクレオチドおよび／もしくはポリペプチドな
らびに／あるいはそのアゴニストおよび／もしくはアンタゴニストは、免疫応答
を調節する（すなわち、上昇または減少させる）際に有用である。例えば、本発
明のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドは、手術、外傷、放射線治療
、化学療法、および移植からの準備または回復において有用であり得るか、ある
いは高齢のおよび免疫無防備状態の個体において免疫応答および／または回復を
ブーストするために使用され得る。あるいは、本発明のポリヌクレオチドおよび
／もしくはポリペプチドならびに／またはそのアゴニストおよび／もしくはアン
タゴニストは、例えば、自己免疫障害の処置または予防における免疫抑制剤とし
て有用である。特定の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドおよび／ま
たはポリペプチドは、慢性的炎症、アレルギーまたは自己免疫状態（例えば、本
明細書中に記載されるか、またはさもなくば当該分野で公知の状態）を処置また
は予防するために使用される。

【０５１１】 上記の全ての適用は、獣医学的医療、ならびにヒト処置レジメンにおいて使用
され得る。

【０５１２】 （遺伝子治療） 特定の実施形態において、抗体またはその機能的誘導体をコードする配列を含
む核酸は、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾
患または障害を処置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与され
る。遺伝子治療とは、発現したか、または発現可能な核酸の、被験体への投与に
より行われる治療をいう。本発明のこの実施形態において、核酸は、それらのコ
ードされたタンパク質を産生し、そのタンパク質は治療効果を媒介する。

【０５１３】 当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法は、本発明に従って使用
され得る。例示的な方法が以下に記載される。

【０５１４】 遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９
３、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；Ｗｕおよび
Ｗｕ、１９９１、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅ
ｖ、１９９３、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：
５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、１９９３、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２
６−９３２；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９３、Ａｎｎ
．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；Ｍａｙ、１９９３、ＴＩＢ
ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５を参照のこと。使用され得る、組換えＤ
ＮＡ技術分野において一般的に公知である方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、１
９９３、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ；およびＫｒｉｅｇ
ｌｅｒ、１９９０、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ
ｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ
，ＮＹに記載される。

【０５１５】 好ましい局面において、化合物は抗体をコードする核酸配列を含有し、上記核
酸配列は、適切な宿主において、抗体、またはそのフラグメントもしくはキメラ
タンパク質、あるいはその重鎖もしくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部であ
る。特に、このような核酸配列は、抗体コード領域に作動可能に連結したプロモ
ーターを有し、上記プロモーターは誘導性であるかまたは構成性であり、そして
必要に応じて組織特異的である。別の特定の実施形態においては、抗体をコード
する配列および任意の他の所望の配列がゲノム中の所望の部位での相同組換えを
促進する領域に隣接した核酸分子が使用され、従って抗体核酸の染色体内の発現
を提供する（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５；Ｚｉｊｌｓｔｒ
ａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８）。特定の実施形態に
おいて、発現した抗体分子は単鎖抗体であるか；あるいはこの核酸配列は、この
抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする配列またはそのフラグメントを含む。

【０５１６】 核酸の患者への送達は、直接的（この場合、患者は核酸または核酸保有ベクタ
ーに直接的に曝される）か、または間接的（この場合、細胞は最初にインビトロ
で核酸で形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得る。これ
らの２つのアプローチは、インビボ遺伝子治療として、またはエキソビボ遺伝子
治療としてそれぞれ公知である。

【０５１７】 特定の実施形態において、核酸配列はインビボで直接的に投与され、そこで核
酸配列は発現されて、コードされた生成物を産生する。これは、当該分野で公知
の任意の多数の方法（例えば、それらを適切な核酸発現ベクターの一部分として
構築し、そしてそれを細胞内になるように投与することにより（例えば、欠損性
または弱毒化したレトロウイルスまたは他のウイルスベクター（米国特許第４，
９８０，２８６号を参照のこと）を用いた感染により）、あるいは、裸のＤＮＡ
の直接注射により、あるいは、微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂ
ｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、あるいは脂質または細胞表面
のレセプターでコーティングするか、もしくは薬剤をトランスフェクトすること
により、あるいは、リポソーム、微粒子、またはマイクロカプセル中へのカプセ
ル化により、あるいは、それらを核に入ることが公知であるペプチドと結合させ
て投与することにより、レセプター媒介のエンドサイトーシスを受けるリガンド
と結合させて投与することにより（例えば、ＷｕおよびＷｕ、１９８７、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照のこと）（レセプターを
特異的に発現する細胞の型を標的にするために用いられ得る）などにより達成さ
れ得る。別の実施形態において、核酸−リガンド複合体が形成され得、ここで、
リガンドはエンドソームを破壊するフソジェニック（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ウイ
ルス性ペプチドを含み、核酸がリソソーム分解を回避するようにする。さらに別
の実施形態において、核酸は、特異的なレセプターを標的とすることにより、細
胞特異的な取り込みおよび発現についてインビボで標的とされ得る（例えば、Ｐ
ＣＴ公開第ＷＯ９２／０６１８０号（１９９２年４月１６日（Ｗｕら））；同第
ＷＯ９２／２２６３５号（１９９２年１２月２３日（Ｗｉｌｓｏｎら））；同第
ＷＯ９２／２０３１６号（１９９２年１１月２６日（Ｆｉｎｄｅｉｓら））；同
第ＷＯ９３／１４１８８号（１９９３年７月２２日（Ｃｌａｒｋｅら））、同第
ＷＯ９３／２０２２１号（１９９３年１０月１４日（Ｙｏｕｎｇ））を参照のこ
と）。あるいは、核酸は、細胞内部に導入され得、そして相同組換えにより、発
現のために宿主細胞ＤＮＡ中に組み込まれ得る（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈ
ｉｅｓ、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８
９３２−８９３５；Ｚｉｊｌｓｔｒａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４
３５−４３８）。

【０５１８】 具体的な実施形態において、本発明の抗体をコードする核酸配列を含むウイル
スベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが用いられ得る（Ｍ
ｉｌｌｅｒら、１９９３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９
を参照のこと）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルス性ゲノムのパッ
ケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの組込みのために必要ではないレトロウイル
ス配列を欠失する。遺伝子治療において使用される抗体をコードする核酸配列は
、一つ以上のベクター中にクローン化され、これは、患者内への遺伝子の送達を
容易にする。レトロウイルスベクターに関するさらなる詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら
、１９９４、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１−３０２（これは、幹細胞を化
学療法に対してより耐性にするために、ｍｄｒＩ遺伝子を造血性幹細胞に送達す
るための、レトロウイルスベクターの使用を記載する）に見出され得る。遺伝子
治療におけるレトロウイルスベクターの使用を説明する他の参考文献は、以下で
ある。：Ｃｌｏｗｅｓら、１９９４、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４
４−６５１；Ｋｉｅｍら、１９９４、Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７−１４７３；
ＳａｌｍｏｎｓおよびＧｕｎｚｂｅｒｇ、１９９３、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ ４：１２９−１４１；ならびにＧｒｏｓｓｍａｎおよびＷｉｌｓ
ｏｎ、１９９３、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅ
ｖｅｌ．３：１１０−１１４。

【０５１９】 アデノウイルスは、遺伝子治療において使用され得る他のウイルスベクターで
ある。アデノウイルスは、特に、気道上皮へ遺伝子を送達するための魅力的なビ
ヒクルである。アデノウイルスは、自然に気道上皮に感染し、そこで軽い疾患を
起こす。アデノウイルスベースの送達システムの他の標的は、肝臓、中枢神経系
、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスは、非分裂細胞を感染すること
ができるという利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ、１９９３
、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖ
ｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：４９９−５０３は、アデノウイルスベースの遺伝子治療
の概説を示す。Ｂｏｕｔら、１９９４、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ
５：３−１０は、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を移すためのアデノウイルス
ベクターの使用を示した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の例は
、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４
；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、１９９２、Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５；Ｍａｓ
ｔｒａｎｇｅｌｉら、１９９３、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５−
２３４；ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号；およびＷａｎｇら、１９９５、
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５−７８３に見出され得る。好ましい実施
形態において、アデノウイルスベクターが使用される。

【０５２０】 アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はまた、遺伝子治療における使用が提案されて
きた（Ｗａｌｓｈら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ
．２０４：２８９−３００；米国特許第５，４３６，１４６号）。

【０５２１】 遺伝子治療への別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクショ
ン、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、またはウイルス感染のような
方法により、組織培養中の細胞へ遺伝子を移入する工程を包含する。通常、移入
の方法は、選択可能なマーカーの細胞への移入を含む。次いで、細胞は、移入さ
れた遺伝子を取り込みそして発現する細胞を単離するために選択下に置かれる。
次いで、それらの細胞は患者に送達される。

【０５２２】 この実施形態においては、得られた組換え細胞のインビボ投与の前に、核酸が
細胞に導入される。このような導入は、当該分野において公知の任意の方法によ
り実施され得、それらの方法としては以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクショ
ン、核酸配列を含むウイルスベクターまたはバクテリオファージベクターでの感
染、細胞融合、染色体媒介の遺伝子移入、マイクロセル媒介の遺伝子移入、スフ
ェロプラスト融合など。外来遺伝子の細胞への導入については、当該分野におい
て多数の技術が公知であり（例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ、１９９
３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９−６１８；Ｃｏｈｅｎら、１９
９３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４；Ｃｌｉｎｅ、１９
８５、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９−９２を参照のこと）、そしてレ
シピエント細胞の必要な発生的および生理学的機能が破壊されないならば、本発
明に従って使用され得る。この技術は、細胞への核酸の安定した移入を提供する
べきであり、その結果、この核酸は、細胞により発現可能であり、好ましくは、
その細胞の子孫により遺伝性でかつ発現可能である。

【０５２３】 得られた組換え細胞は、当該分野において公知の様々な方法により、患者へ送
達され得る。組換え血球（例えば、造血幹細胞または造血前駆細胞）は、好まし
くは、静脈内に投与される。使用が考えられる細胞の量は、所望の効果、患者の
状態などに依存し、当業者により決定され得る。

【０５２４】 遺伝子治療の目的のために核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の入手可能
な細胞型を包含し、以下を含むがそれらに限定されない：上皮細胞、内皮細胞、
ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単
球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球のような血球；様々な幹
細胞または前駆細胞、特に、造血幹細胞または造血前駆細胞（例えば、骨髄、臍
帯血、末梢血、胎児の肝臓などから得られるような細胞）。

【０５２５】 好ましい実施形態において、遺伝子治療に使用される細胞は、患者に対して自
己である。

【０５２６】 遺伝子治療において組換え細胞が使用される実施形態において、抗体をコード
する核酸配列は、細胞またはそれらの子孫により核酸配列が発現可能であるよう
に細胞に導入され、そして次いで組み換え細胞は、治療的効果のためにインビボ
で投与される。具体的な実施形態において、幹細胞または前駆細胞が用いられる
。インビトロで単離され得、そしてインビトロで維持され得る任意の幹細胞およ
び／または前駆細胞は、本発明のこの実施形態に従って潜在的に使用され得る（
例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／０８５９８号（１９９４年４月２８日）：Ｓｔ
ｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９２、Ｃｅｌｌ ７１：９７３−９８
５；Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ、１９８０、Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１Ａ：２
２９；ならびにＰｉｔｔｅｌｋｏｗおよびＳｃｏｔｔ、１９８６、Ｍａｙｏ Ｃ
ｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７７１を参照のこと）。

【０５２７】 具体的な実施形態において、遺伝子治療の目的で導入されるべき核酸は、コー
ド領域に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含有し、その結果、核酸の
発現は、適切な転写誘導因子の存在または不在を制御することにより制御可能で
ある。

【０５２８】 （投与形態） 本明細書中に記載されるアゴニストまたはアンタゴニストは、本発明のレセプ
ターを発現する細胞に、インビトロ、エキソビボ、またはインビボで投与され得
る。「有効量」のアゴニストまたはアンタゴニストの投与によって、ＴＮＦファ
ミリーのリガンドへの細胞応答を増強または阻害するのに十分であり、そしてポ
リペプチドを含む化合物の量を意図する。特に、「有効量」のアゴニストまたは
アンタゴニストの投与によって、ＴＲ２レセプター媒介活性を増強または阻害す
るのに効果的な量を意図する。当然のことながら、細胞の増殖および／または分
化が増強される場合、本発明に従うアゴニストは、ＴＮＦファミリーのリガンド
と共に同時投与され得る。当業者は、アゴニストまたはアンタゴニストの有効量
が経験的に決定され得、そして純粋な形態でまたは薬学的に受容可能な塩、エス
テルまたはプロドラッグの形態で使用され得ることを理解する。このアゴニスト
またはアンタゴニストは、組成物において、１つ以上の薬学的に受容可能な賦形
剤と組合せて投与され得る。

【０５２９】 本発明の組成物は、単独でまたは他のアジュバントと組合わせて投与され得る
。本発明の組成物と共に投与され得るアジュバントとしては、以下が挙げられる
がこれらに限定されない：ミョウバン、ミョウバンおよびデオキシコレート（Ｉ
ｍｍｕｎｏＡｇ）、ＭＴＰ−ＰＥ（Ｂｉｏｃｉｎｅ Ｃｏｒｐ．）、ＱＳ２１（
Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）、ＢＣＧ、およびＭＰＬ。特定の実施形態にお
いて、本発明の組成物は、ミョウバンと組み合わせて投与される。別の特定の実
施形態において、本発明の組成物はＱＳ−２１と組み合わせて投与される。本発
明の組成物と共に投与され得るさらなるアジュバントとしては、以下が挙げられ
るがこれらに限定されない：モノホスホリル脂質免疫調節物質、ＡｄｊｕＶａｘ
１００ａ、ＱＳ−２１、ＱＳ−１８、ＣＲＬ１００５、アルミニウム塩、ＭＦ
−５９、およびビロソームアジュバント技術。本発明の組成物と共に投与され得
るワクチンとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＭＭＲ（麻疹
、流行性耳下腺炎、風疹）、ポリオ、水痘、破傷風／ジフテリア、Ａ型肝炎、Ｂ
型肝炎、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ、百日咳、肺炎、
インフルエンザ、ライム病、ロタウイルス、コレラ、黄熱病、日本脳炎、ポリオ
、狂犬病、腸チフス、および百日咳に対する保護に指向されたワクチン、ならび
にＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３^TM。同時（例えば、混合剤として）、別個であるが
一斉にまたは同時に；あるいは順次のいずれかで、組合わせが投与され得る。こ
れは、この組合わせた薬剤が、治療的混合物として一緒に投与されるという提示
を含み、そしてまたこの組合わせた薬剤が、別個であるが一斉に（例えば、別々
の静脈ラインを通して同じ個体に）投与される手順を含む。「組合わせ」での投
与は、最初に所定の化合物または薬剤のうちの１つが、続いて２番目が、別々に
投与されることをさらに含む。

【０５３０】 別の特定の実施形態において、本発明の化合物は、感染および／または任意の
疾患、障害、および／またはそれに関する状態を処置、予防および／または診断
するために、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３^TMと組み合わせて使用される。１つの実
施形態において、本発明の組成物は、任意のグラム陽性の細菌感染および／また
は任意の疾患、障害、および／またはそれに関する状態を処置、予防および／ま
たは診断するために、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３^TMと組み合わせて使用される。
別の実施形態において、本発明の化合物は、感染および／または任意の疾患、障
害、および／またはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓおよび／またはＳｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ属の１以上のメンバーに関する状態を処置、予防および／または診断
するために、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３^TMと組み合わせて使用される。別の実施
形態において、本発明の化合物は、感染および／または任意の疾患、障害、およ
び／またはグループＢ連鎖球菌属の１以上のメンバーに関する状態を処置、予防
および／または診断するために、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３^TMと組み合わせて使
用される。別の実施形態において、本発明の化合物は、感染および／または任意
の疾患、障害、および／またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉ
ａｅに関する状態を処置、予防および／または診断するために、ＰＮＥＵＭＯＶ
ＡＸ−２３^TMと組み合わせて使用される。

【０５３１】 本発明の組成物は、単独で、または他の治療剤と組み合わせて投与され得る。
これらの治療剤としては、ＴＮＦ、ＴＮＦブロック剤（例えば、ＴＮＦ（例えば
、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−βまたはＴＮＦ−γ）に特異的に結合する抗体）、化学
療法剤、抗日和見感染薬剤、抗ウイルス剤、抗生物質、ステロイド系および非ス
テロイド系抗炎症剤、免疫抑制剤、従来の免疫治療剤およびサイトカインが挙げ
られるが、これらに限定されない。組み合わせは、付随して（例えば、混合物と
して）、別々に（しかし、同時にまたは即時に）；または逐次的にかのいずれか
で投与され得る。これは、組み合わされた薬剤が治療的混合物として一緒に投与
される提示、およびまた組み合わされた薬剤が別々にしかし同時に（例えば、同
じ被験体の別々の静脈ラインを通じて）投与される手順を包含する。「組み合わ
せた」投与は、第１の投与、次いで第２の投与を与える、化合物または薬剤のう
ちの１つの別々の投与をさらに包含する。

【０５３２】 １つの実施形態において、本発明の組成物は、ＴＮＦファミリーの他のメンバ
ーと組み合わせて投与される。本発明の組成物とともに投与され得るＴＮＦ、Ｔ
ＮＦ関連分子またはＴＮＦ様分子としては、以下が挙げられるが、それらに限定
されない：ＴＮＦ−αの可溶性形態、リンホトキシン−α（ＬＴ−α、ＴＮＦ−
βとしてもまた公知）、ＬＴ−β（複合体ヘテロトリマーＬＴ−α２−βにおい
て見出される）、ＯＰＧＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢ
Ｌ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ−γ（国際出願公開番号ＷＯ９６／１４３２
８）、ＡＩＭ−Ｉ（国際出願公開番号ＷＯ９７／３３８９９）、ＡＩＭ−ＩＩ（
国際出願公開番号ＷＯ９７／３４９１１）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．
１８８（６）：１１８５−１１９０）、エンドカイン（国際出願公開番号ＷＯ９
８／０７８８０）、ＴＲ６（国際出願公開番号ＷＯ９８／３０６９４）、ＯＰＧ
（国際出願公開番号ＷＯ９８／１８９２１）、およびニュートロカイン−α（国
際出願公開番号ＷＯ９８／１８９２１）、ＴＷＥＡＫ、ＯＸ４０、および神経増
殖因子（ＮＧＦ）および可溶性形態のＦａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０お
よび４−ＩＢＢ、ＴＲ２（国際出願公開番号ＷＯ９６／３４０９５）、ＤＲ３（
国際出願公開番号ＷＯ９７／３３９０４）、ＤＲ４（国際出願公開番号ＷＯ９８
／３２８５６）、ＴＲ５（国際出願公開番号ＷＯ９８／３０６９３）、ＴＲ７（
国際出願公開番号ＷＯ９８／４１６２９）、ＴＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際出願公開
番号ＷＯ９８／５６８９２）、ＴＲ１０（国際出願公開番号ＷＯ９８／５４２０
２）、３１２Ｃ２（国際出願公開番号ＷＯ９８／０６８４２）、ＴＲ１２および
可溶性形態のＣＤ１５４、ＣＤ７０およびＣＤ１５３。

【０５３３】 別の実施形態において、本発明の組成物は、１以上のＴＮＦブロック剤と組み
合わせて投与される。ＴＮＦブロック剤は、関節炎（リウマチ様関節炎）の処置
の際に有用であると考えられる。

【０５３４】 好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０
Ｌ）、ＣＤ４０Ｌの可溶形態（例えば、ＡＶＲＥＮＤ^TM）、ＣＤ４０Ｌの生物学
的に活性なフラグメント、改変体、または誘導体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体（例えば、
アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体）、および／または抗ＣＤ４０抗体（
例えば、アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体）と組み合わせて投与される
。

【０５３５】 特定の実施形態において、本発明の組成物は、抗レトロウイルス薬剤、ヌクレ
オシド逆転写酵素インヒビター、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、およ
び／またはプロテアーゼインヒビターと組み合わせて投与される。本発明の組成
物と組み合わせて投与され得るヌクレオシド逆転写酵素インヒビターとしては、
以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＲＥＴＲＯＶＩＲ^TM（ジドブジン
／ＡＺＴ）、ＶＩＤＥＸ^TM（ジダノシン／ｄｄＩ）、ＨＩＶＩＤ^TM（ザルシタビ
ン／ｄｄＣ）、ＺＥＲＩＴ^TM（スタブジン／ｄ４Ｔ）、ＥＰＩＶＩＲ^TM（ラミブ
ジン／３ＴＣ）、およびＣＯＭＢＩＶＩＲ^TM（ジドブジン／ラミブジン）。本発
明の組成物と組み合わせて投与され得る非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター
としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＶＩＲＡＭＵＮＥ^TM（
ネビラピン），ＲＥＳＣＲＩＰＴＯＲ^TM（デラビルジン），およびＳＵＳＴＩＶ
Ａ^TM（エファビレンツ）。本発明の組成物と組み合わせて投与され得るプロテア
ーゼインヒビターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＣＲ
ＩＸＩＶＡＮ^TM（インディナビル），ＮＯＲＶＩＲ^TM（リトナビル），ＩＮＶＩ
ＲＡＳＥ^TM（サキナビル），およびＶＩＲＡＣＥＰＴ^TM（ネルフィナビル）。特
定の実施形態において、抗レトロウイルス薬剤、ヌクレオシド逆転写酵素インヒ
ビター、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、および／またはプロテアーゼ
インヒビターを本発明の組成物と任意の組み合わせで用いて、ＡＩＤＳを処置お
よび／またはＨＩＶ感染を予防または処置し得る。

【０５３６】 他の実施形態において、本発明の組成物は、抗日和見感染症薬剤と組み合わせ
て投与され得る。本発明の組成物と組み合わせて投与され得る抗日和見感染症薬
剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＴＲＩＭＥＴＨＯＰ
ＲＩＭ−ＳＵＬＦＡＭＥＴＨＯＸＡＺＯＬＥ^TM、ＤＡＰＳＯＮＥ^TM、ＰＥＮＴＡ
ＭＩＤＩＮＥ^TM、ＡＴＯＶＡＱＵＯＮＥ^TM、ＩＳＯＮＩＡＺＩＤ^TM、ＲＩＦＡＢ
ＵＴＩＮ^TM、ＰＹＲＡＺＩＮＡＭＩＤＥ^TM、ＥＴＨＡＭＢＵＴＯＬ^TM、ＲＩＦＡ
ＢＵＴＩＮ^TM、ＣＬＡＲＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮ^TM、ＡＺＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮ^TM 、ＧＡＮＣＩＣＬＯＶＩＲ^TM、ＦＯＳＣＡＲＮＥＴ^TM、ＣＩＤＯＦＯＶＩＲ^TM、
ＦＬＵＣＯＮＡＺＯＬＥ^TM、ＩＴＲＡＣＯＮＡＺＯＬＥ^TM、ＫＥＴＯＣＯＮＡＺ
ＯＬＥ^TM、ＡＣＹＣＬＯＶＩＲ^TM、ＦＡＭＣＩＣＯＬＶＩＲ^TM、ＰＹＲＩＭＥＴ
ＨＡＭＩＮＥ^TM、ＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮ^TM、ＮＥＵＰＯＧＥＮ^TM（フィルグラス
チム／Ｇ−ＣＳＦ）およびＬＥＵＫＩＮＥ^TM（サーグラモスチム（ｓａｒｇｒａ
ｍｏｓｔｉｍ）／ＧＭ−ＣＳＦ）。特定の実施形態において、本発明の組成物を
、ＴＲＩＭＥＴＨＯＰＲＩＭ−ＳＵＬＦＡＭＥＴＨＯＸＡＺＯＬＥ^TM、ＤＡＰＳ
ＯＮＥ^TM、ＰＥＮＴＡＭＩＤＩＮＥ^TM、および／またはＡＴＯＶＡＱＵＯＮＥ^TM との任意の組み合わせにおいて使用して、日和見Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃ
ａｒｉｎｉｉ肺炎感染を予防的に処置または予防し得る。別の特定の実施形態に
おいて、本発明の組成物をＩＳＯＮＩＡＺＩＤ^TM、ＲＩＦＡＭＰＩＮ^TM、ＰＹＲ
ＡＺＩＮＡＭＩＤＥ^TM、および／またはＥＴＨＡＭＢＵＴＯＬ^TMとの任意の組み
合わせにおいて用いて、日和見Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ複合感
染を予防的に処置または予防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組
成物は、ＲＩＦＡＢＵＴＩＮ^TM、ＣＬＡＲＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮ^TM、および／ま
たはＡＺＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮ^TMとの任意の組み合わせにおいて用いて、日和見
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を予防的に処置ま
たは予防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＮＣＩ
ＣＬＯＶＩＲ^TM、ＦＯＳＣＡＲＮＥＴ^TM、ＣＩＤＯＦＯＶＩＲ^TMとの任意の組み
合わせにおいて用いて、日和見サイトメガロウイルス感染を予防的に処置または
予防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物をＦＬＵＣＯＮＡＺ
ＯＬＥ^TM、ＩＴＲＡＣＯＮＡＺＯＬＥ^TM、および／またはＫＥＴＯＣＯＮＡＺＯ
ＬＥ^TMとの任意の組み合わせにおいて用いて、日和見真菌感染を予防的に処置ま
たは予防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物をＡＣＹＣＬＯ
ＶＩＲ^TMおよび／またはＦＡＭＣＩＣＯＬＶＩＲ^TMとの任意の組み合わせにおい
て用いて、日和見単純ヘルペスウイルスＩ型および／またはＩＩ型の感染を予防
的に処置または予防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物をＰ
ＹＲＩＭＥＴＨＡＭＩＮＥ^TMおよび／またはＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮ^TMとの任意の
組み合わせにおいて用いて、日和見Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ感染を
予防的に処置または予防し得る。別の特定の実施形態において、本発明の組成物
をＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮ^TM、および／またはＮＥＵＰＯＧＥＮ^TMとの任意の組み
合わせにおいて用いて、日和見細菌感染を予防的に処置または予防し得る。

【０５３７】 さらなる実施形態において、本発明の組成物を抗ウイルス剤と組み合わせて投
与する。本発明の組成物とともに投与され得る抗ウイルス剤としては、以下が挙
げられるが、これらに限定されない：アシクロビル、リバビリン、アマンタジン
、およびリマンタジン（ｒｅｍａｎｔｉｄｉｎｅ）。

【０５３８】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、抗生物質薬剤と組み合わせて
投与され得る。本発明の組成物とともに投与され得る抗生物質としては、以下が
挙げられるが、これらに限定されない：アモキシリン、アミノグリコシド、β−
ラクタム（糖ペプチド）、β−ラクタマーゼ、クリンダマイシン、クロラムフェ
ニコール、セファロスポリン、シプロフロキサシン、シプロフロキサシン、エリ
スロマイシン、フルオロキノロン、マクロライド、メトロニダゾール、ペニシリ
ン、キノロン、リファンピン、ストレプトマイシン、スルホナミド、テトラサイ
クリン、トリメトプリム、トリメトプリム−スルファントキサゾール（ｔｒｉｍ
ｅｔｈｏｐｒｉｍ−ｓｕｌｆａｍｔｈｏｘａｚｏｌｅ）、およびバンコマイシン
。

【０５３９】 本発明の組成物と組み合わせて投与され得る従来の非特異的免疫抑制剤として
は、以下が挙げられるが、それらに限定されない：ステロイド、シクロスポリン
、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミド、メチルプレドニゾン、プレド
ニゾン、アザチオプリン、ＦＫ−５０６、１５−デオキシスペルグアリン、およ
び応答するＴ細胞の機能を抑制することにより作用する他の免疫抑制剤。

【０５４０】 特定の実施形態において、本発明の組成物は、免疫抑制剤と組み合わせて投与
される。本発明の組成物とともに投与され得る免疫抑制剤調製物としては、以下
が挙げられるが、これらに限定されない：ＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥ^TM（ＯＫＴ３）
、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ^TM／ＮＥＯＲＡＬ^TM／ＳＡＮＧＤＹＡ^TM（シクロスポリ
ン），ＰＲＯＧＲＡＭ^TM（タクロリムス），ＣＥＬＬＣＥＰＴ^TM（ミコフェノラ
ート（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ）），アザチオプリン、グルココルチコステ
ロイド（ｇｌｕｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ）、およびＲＡＰＡＭＵＮＥ^TM （シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ））。特定の実施形態において、免疫抑制剤
を使用して、器官移植または骨髄移植の拒絶を予防し得る。

【０５４１】 好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ステロイド治療と組み合わせ
て投与される。本発明の組成物と組み合わせて投与され得るステロイドは、経口
コルチコステロイド、プレドニゾン、およびメチルプレゾニゾロン（例えば、Ｉ
Ｖメチルプレゾニドロン）を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態に
おいて、本発明の組成物は、プレドニゾンと組み合わせて投与される。さらに特
定の実施形態において、本発明の組成物は、プレゾニドンおよび免疫抑制剤と組
み合わせて投与される。本発明の組成物およびプレドニゾンと組み合わせて投与
され得る免疫抑制剤は、アザチオプリン、シクロフォスファミド、およびシクロ
フォスファミドＩＶを含むが、これらに限定されない。別の特定の実施形態にお
いて、本発明の組成物は、メチルプレゾニドンと組み合わせて投与される。さら
に特定の実施形態において、本発明の組成物は、メチルプレゾニドンおよび免疫
抑制剤と組み合わせて投与される。本発明の組成物およびメチルプレゾニドンと
組み合わせて投与され得る免疫抑制剤は、本明細書中に記載される免疫抑制剤で
あり、アザチオプリン、シクロホスファミド、およびシクロホスファミドＩＶを
含むが、これらに限定されない。

【０５４２】 好ましい実施形態において、本発明の組成物は、抗マラリア薬と組み合わせて
投与される。本発明の組成物と組み合わせて投与され得る抗マラリア薬は、ヒド
ロキシクロロキン、クロロキン、および／またはキナクリンを含むが、これらに
限定されない。

【０５４３】 好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＮＳＡＩＤと組み合わせて投
与される。

【０５４４】 非排他的な実施形態において、本発明の組成物は、１、２、３、４、５、１０
以上の以下の薬物と組み合わせて投与される：

【０５４５】

【数６】 。

【０５４６】 好ましい実施形態において、本発明の組成物は、１、２、３、４、５以上の以
下の薬物と組み合わせて投与される：メトトレキサート、スルファサラジン、金
チオリンゴ酸ナトリウム、オーラノフィン、シクロスポリン、ペニシラミン、ア
ザチオプリン、抗マラリア薬（例えば、本明細書中に記載されるような）、シク
ロホスファミド、クロラムブシル、金、ＥＮＢＲＥＬ^TM（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ
）、抗ＴＮＦ抗体、およびプレゾニドロン。

【０５４７】 より好ましい実施形態において、本発明の組成物は、抗マラリア薬、メトトレ
キセート、抗ＴＮＦ抗体、ＥＮＢＲＥＬＴＭ、および／またはサフラサラジン（
ｓｕｆｌａｓａｌａｚｉｎｅ）と組み合わせて投与される。１つの実施形態にお
いて、本発明の組成物は、メトトレキセートと組み合わせて投与される。別の実
施形態において、本発明の組成物は、抗ＴＮＦファミリーと組み合わせて投与さ
れる。別の実施形態において、本発明の組成物は、メトトレキセートおよび抗Ｔ
ＮＦ抗体と組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の組成物は
、サフラサラジンと組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の
組成物は、メトトレキセート、抗ＴＮＦ抗体、およびサフラサラジンと組み合わ
せて投与される。別の実施形態において、本発明の組成物は、ＥＮＢＲＥＬ^TMと
組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の組成物は、ＥＮＢＲ
ＥＬ^TMおよびメトトレキセートと組み合わせて投与される。別の実施形態におい
て、本発明の組成物は、ＥＮＢＲＥＬ^TM、メトトレキセート、おほびサフラサラ
ジンと組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発明の組成物は、Ｅ
ＮＢＲＥＬ^TM、メトトレキセート、おｙぼいサフラサラジンと組み合わせて投与
される。他の実施形態において、１以上の抗マラリア薬は、上記で列挙された組
み合わせの１つと組み合わされる。特定の実施形態において、本発明の組成物は
、抗マラリア薬（例えば、ヒドロキシクロロキン）、ＥＮＢＲＥＬ^TM、メトトレ
キセート、およびサフラサラジンと組み合わせて投与される。別の特定の実施形
態において、本発明の組成物は、抗マラリア薬（例えば、ヒドロキシクロロキン
）、サフラサラジン、抗ＴＮＦ抗体、およびメトトレキセートと組み合わせて投
与される。

【０５４８】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、１以上の静脈内の免疫グロブ
リン調製物単独またはこれと組み合わせて投与される。本発明の組成物と組み合
わせて投与され得る静脈内免疫グロブリン調製物は、ＧＡＭＭＡＲ^TM、ＩＶＥＥ
ＧＡＭ^TM、ＳＡＮＤＯＧＬＯＢＵＬＩＮ^TM、ＧＡＭＭＭＡＧＡＲＤ Ｓ／Ｄ^TM、
およびＧＡＭＩＭＵＮＥ^TMを含むが、これらに限定されない。特定の実施形態に
おいて、本発明の組成物は、移植治療（例えば、骨髄移植）における静脈内の免
疫グロブリン調製物と組み合わせて投与される。

【０５４９】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、抗炎症性剤単独またはこれと
組み合わせて投与される。本発明の組成物と組み合わせて投与され得る抗炎症性
剤は、以下を含むが、これらに限定されない：グルココルチコイドおよび非ステ
ロイド性抗炎症性剤、アミノアリールカルボン酸誘導体、アリール酢酸誘導体、
アリール酪酸誘導体、アリールカルボン酸誘導体、アリール酢酸誘導体、アリー
ル酪酸誘導体、アリールカルボン酸、アリールプロピオン酸誘導体、ピラゾール
、ピラゾロン、サリチル酸誘導体、チアジンカルボキサミド、ε−アセトアミド
カプロン酸、Ｓ−アデノシルメチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、ア
ミキセトリン（ａｍｉｘｅｔｒｉｎｅ）、ベンザダック、ベンジドアミン、ブコ
ローム、ジフェンピラミド、ジタゾール、エモルファゾン、グアイアズレン、ナ
ブメトン、ニメスリド（ｎｉｍｅｓｕｌｉｄｅ）、オルゴテイン、オキサセプロ
ール、パラニリン、ペリソキサール、ピフォキシム、プロクアゾン（ｐｒｏｑｕ
ａｚｏｎｅ）、プロキサゾール、およびテニダップ（ｔｅｎｉｄａｐ）。

【０５５０】 別の実施形態において、本発明の組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与さ
れる。本発明の組成物と組み合わせて投与され得る化学療法剤は、抗菌性誘導体
（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、およびダクチノ
マイシン）；抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）；アンチメタボライト
（例えば、フルオロフラシル、５−ＦＵ、メトトレキセート、フロクスウリジン
、インターフェロンα−２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙ
ｃｉｎ）、メルカプトプリン、および６−チオグアニン）；細胞毒性剤（例えば
、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シ
クロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、マ
イトマイシンＣ、ブスルファン、シス−プラチン、および硫酸ビンクリスチン）
；ホルモン（例えば、メドロキシプロゲストロン、エストラムスチンリン酸ナト
リウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、
メチルテストステロン、ジメチルスチルベストロール二リン酸、クロロトリアニ
セン、およびテストラクトン）；ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メ
ファレン、コラムブシル（ｃｈｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メクロレタミン（ナイト
ロジェンマスタード）およびチオテパ）；ステロイドおよび組み合わせ（例えば
、ベタメタゾン（ｂｅｔｈａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）リン酸ナトリウム）；ならび
にその他（例えば、ジカルバジン、アスパラギナーゼ、ミトーテン、硫酸ビンク
リスチン、硫酸ビンブラスチン、およびエトポシド）を含むが、これらに限定さ
れない。

【０５５１】 特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド
、ドキソルビシン、ビンクリシン、およびプレゾニドン）またはＣＨＯＰの組成
物の任意の組み合わせと組み合わせて投与される。別の実施形態において、本発
明の組成物は、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂと組み合されて投与される。さらなる実施形
態において、本発明の組成物は、ＲｉｔｕｘｍａｂおよびＣＨＯＰ、またはＲｉ
ｔｕｘｍａｂおよびＣＨＯＰの組成物の任意の組み合わせと共に投与される。

【０５５２】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、サイトカインと組み合わせて
投与され得る。本発明の組成物とともに投与され得るサイトカインとしては、以
下が挙げられるが、これらに限定されない：ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ２
、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、
ＩＬ１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｔ
ＮＦ−α、およびＴＮＦβ。別の実施形態において、本発明の組成物は、任意の
インターロイキンとともに投与され得る。これらのインターロイキンとしては、
以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＩＬ−１α、ＩＬ−ｌβ、ＩＬ−
２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９
、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、
ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１お
よびＩＬ−２２。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＬ−４およ
びＩＬ−１０と組み合わせて投与される。ＩＬ−４およびＩＬ−１０の両方は、
ＴＲ２媒介Ｂ細胞増殖を増強することを本発明者らによって観測されてきた。

【０５５３】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、ケモカインと共に投与される
。別の実施形態において、本発明の組成物は、ケモカインβ−８、ケモカインβ
−１、および／またはマクロファージ炎症プロテイン−４と共に投与される。好
ましい実施形態において、本発明の組成物は、ケモカインβ−８と共に投与され
る。

【０５５４】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、ＩＬ−４アンタゴニストと組
み合わせて投与される。本発明の組成物と共に投与され得るＩＬ−４アンタゴニ
ストとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：可溶性ＩＬ−４レ
セプターポリペプチド、可溶性ＩＬ−４レセプターポリペプチドのマルチマー形
態；ＩＬ−４に誘発される生物学的シグナルを形質転換しないでＩＬ−４レセプ
ターに結合する抗ＩＬ−４レセプター抗体、ＩＬ−４、ＩＬ−４の１以上のＩＬ
−４レセプターへの結合をブロックする抗ＩＬ−４抗体およびＩＬ−４レセプタ
ーに結合するがＩＬ−４によって誘発される生物学的シグナルを形質転換しない
ＩＬ−４の変異体。好ましくは、本方法に従って使用される抗体は、モノクロー
ナル抗体（抗体フラグメント（例えば、本明細書中で記載されるようなフラグメ
ント）を含む）である。

【０５５５】 さならる実施形態において、本発明の組成物は、造血性増殖因子と組み合わせ
て投与される。本発明の組成物と共に投与され得る造血性増殖因子は、ＬＥＵＫ
ＩＮＥ^TM（ＳＡＲＧＲＡＭＯＳＴＩＭ^TM）およびＮＥＵＰＯＧＥＮ^TM（ＦＩＬＧ
ＲＡＳＴＩＭ^TM）を含むが、これらに限定されない。

【０５５６】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、抗原性タンパク質と組み合わ
せて投与される。本発明の組成物とともに投与され得る抗原性タンパク質として
は、以下が挙げられるが、これらに限定されない：神経膠腫由来増殖因子（ＧＤ
ＧＦ）（欧州特許番号ＥＰ−３９９８１６に開示される）；血小板由来蔵相因子
Ａ（ＰＤＧＦ−Ａ）（欧州特許番号ＥＰ−６８２１１０に開示される）；血小板
由来増殖因子Ｂ（ＰＤＧＦ−Ｂ）（欧州特許番号ＥＰ−２８２３１７に開示され
る）；胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）（国際出願公開番号ＷＯ９２／０６１９４に開
示される）；胎盤増殖因子−２（ＰｌＧＦ−２）（Ｈａｕｓｅｒら，Ｇｏｒｗｔ
ｈ Ｆａｃｔｏｒｓ，４：２５９−２６８（１９９３）に開示される）；血管内
皮増殖因子（ＶＥＧＦ）（国際出願公開番号ＷＯ９０／１３６４９に開示される
）；血管内皮増殖因子−Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）（欧州特許番号ＥＰ−５０６４７７
に開示される）；血管内皮増殖因子−２（ＶＥＧＦ−２）（国際出願公開番号Ｗ
Ｏ９６／３９５１５に開示される）；血管内皮増殖因子−Ｂ１８６（ＶＥＧＦ−
Ｂ１８６）（国際出願公開番号ＷＯ９６／２６７３６に開示される）；血管内皮
増殖因子−Ｄ（ＶＥＧＦ−Ｄ）（国際出願公開番号ＷＯ９８／０２５４３に開示
される）；血管内皮増殖因子−Ｄ（ＶＥＧＦ−Ｄ）（国際出願公開番号ＷＯ９８
／０７８３２に開示される）；および血管内皮増殖因子−Ｅ（ＶＥＧＦ−Ｅ）（
ドイツ国特許番号ＤＥ１９６３９６０１に開示される）。上記の参考文献は、本
明細書中に参考として援用される。

【０５５７】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、線維芽細胞増殖因子と組み合
わせて投与される。本発明の組成物とともに投与され得る線維芽細胞増殖因子と
しては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２
、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８
、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１０、ＦＧＦ−１１、ＦＧＦ−１２、ＦＧＦ−１３、Ｆ
ＧＦ−１４、およびＦＧＦ−１５。

【０５５８】 さらなる実施形態において、本発明の組成物は、例えば、放射線療法のような
他の治療レジメンまたは予防レジメンと組み合わせて投与される。このような治
療は、結果的におよび／または付随して投与され得る。

【０５５９】 ヒト患者に投与される場合、本発明の化合物および組成物のすべての日々の用
法は、音医学的判断の範囲内で主治医によって決定される。任意の特定の患者に
対する特定の治療有効用量レベルは、医学分野で周知の要因に依存する。

【０５６０】 一般的提案として、用量あたりの非経口的に投与されるＴＮＦＲポリペプチド
の全体の薬学的有効量は、患者の体重あたり約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋ
ｇ／日の範囲にあるが、上記のように、これは、治療的な裁量に従う。より好ま
しくは、この用量は、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好まし
くは、ヒトについて約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と１ｍｇ／ｋｇ／日の間（ホルモ
ンについて）である。連続して投与された場合、ＴＮＦＲポリペプチドは、代表
的には、約１μｇ／ｋｇ／時間〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の割合の用量で、１日
あたり１〜４回の注射によるか、または例えば、ミニポンプを使用する連続的な
皮下注入によってのいずれかで投与される。静脈内バッグ溶液もまた、使用され
得る。

【０５６１】 本発明は、被験体への有効量の本発明の化合物または薬学的組成物、好ましく
は本発明の抗体の投与による処置、阻害および予防の方法を提供する。好ましい
局面において、化合物は実質的に精製される（例えば、その効果を制限するかま
たは望ましくない副作用を生じる物質は実質的にない）。被験体は好ましくは、
ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げられるがそれらに限
定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動物であり、そして最も好ましく
はヒトである。

【０５６２】 化合物が核酸または免疫グロブリンを含む場合に使用され得る処方および投与
方法は、上記に記載され；さらなる適切な処方および投与経路は、本明細書中で
以下に記載されたものの中から選択され得る。

【０５６３】 本発明のＴＲ２レセプターポリペプチドを含む薬学的組成物は、経口的、直腸
的、非経口的、槽内、膣内、腹腔内、局所的（散剤、軟膏、ドロップ、または経
皮パッチによる場合）、頬的、または経口もしくは鼻スプレーとして投与され得
る。「薬学的に受容可能なキャリア」によって、非毒性の固体、半固体、または
液体充填剤、希釈剤、カプセル化物質または任意の型の処方補助剤を意味する。
用語「非経口の」は、本明細書中で使用される場合、静脈内、筋肉内、腹腔内、
胸骨内、皮下、および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。

【０５６４】 その組成物はまた、所望の場合、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩
衝剤もまた含み得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、
丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性処方物などの形態を取り得る。

【０５６５】 本発明のＴＲ２組成物はまた、徐放系によって適切に投与される。徐放組成物
の適切な例は、適切なポリマー物質（例えば、造形品の形態である半浸透性ポリ
マーマトリックス（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル））、適切な疎水
性物質（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）、またはイオン交換樹
脂、および乏しい可溶性誘導体（例えば、乏しい可溶性塩）を含む。

【０５６６】 様々な送達システムが公知であり、そして本発明の化合物を投与するために用
いられ得る（例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、この化合物の発
現が可能な組換え細胞中でのカプセル化、レセプター媒介エンドサイトーシス（
例えば、ＷｕおよびＷｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３
２（１９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部とし
ての核酸の構築など）。導入方法としては、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下
、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられるがそれらに限定されない。化合
物または組成物は、任意の好都合な経路により（例えば、注入またはボーラス注
射により、上皮または粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など
）を通しての吸収により）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒
に投与され得る。投与は、全身的または局所的であり得る。さらに、本発明の薬
学的化合物または組成物を、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射を
包含し；脳室内注射は、例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバのようなリザーバに取り
付けられた脳室内カテーテルにより容易にされ得る）により中枢神経系に導入す
ることが望まれ得る。例えば、吸入器または噴霧器の使用、およびエアゾール化
剤を用いた処方により、肺投与もまた使用され得る。

【０５６７】 特定の実施形態において、本発明の薬学的化合物または組成物を、処置の必要
な領域に局所的に投与することが望まれ得る；これは、制限する目的ではないが
、例えば、手術中の局部注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯との組み合
わせて）により、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプラ
ント（このインプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜のよう
な膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または膠様材料である）により達成
され得る。好ましくは、抗体を含む本発明のタンパク質を投与する際、タンパク
質が吸収されない材料を使用するために注意が払われなければならない。

【０５６８】 別の実施形態において、化合物または組成物は、小胞、特に、リポソーム中へ
送達され得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（
１９９０）；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌ
ｏｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，３５３〜３６５頁（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，
同書３１７〜３２７頁を参照のこと；広く同書を参照のこと）。

【０５６９】 さらに別の実施形態において、化合物または組成物は制御された放出システム
中で送達され得る。１つの実施形態において、ポンプが用いられ得る（Ｌａｎｇ
ｅｒ，（前出）；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅ
ｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８
：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：
５７４（１９８９）を参照のこと）。別の実施形態において、高分子材料が用い
られ得る（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編），ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌ
ｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ
Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌ
ｌ（編），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰ
ｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照のこと；Ｌｅｖｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
２８：１９０（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３
５１（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（
１９８９）もまた参照のこと）。さらに別の実施形態において、制御された放出
システムは、治療標的、即ち、脳の近くに置かれ得、従って、全身用量の一部の
みを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，（前出），第２巻，
１１５〜１３８頁（１９８４）を参照のこと）。

【０５７０】 徐放性マトリックスは、ポリアクチド（米国特許番号第３，７７３，９１９号
、ＥＰ５８，４８１号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタミン酸の
コポリマー（Ｓｉｄｍａｎ，Ｕ．ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−
５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチル メタクリレート）（Ｒ．
Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７
７（１９８１）、およびＲ．Ｌａｎｇｅｒ、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−
１０５（１９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、同書
）、またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ １３３，９８８）を
含む。

【０５７１】 徐放性組成物はまた、リポソームに捕捉された本発明の組成物を含む（一般に
は、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）
；Ｔｒｅａｔら，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−
ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
３１７−３２７頁および３５３−３６５頁（１９８９））。ＴＮＦＲポリペプチ
ド含有リポソームは、それ自体既知の方法によって調製される：ＤＥ３，２１８
，１２１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳ
Ａ）８２：３６８８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４０３０−４０３４（１９８０）；Ｅ
Ｐ ５２，３２２；ＥＰ ３６，６７６；ＥＰ ８８，０４６：ＥＰ １４３，
９４９；ＥＰ １４２，６４１；日本特許出願８３−１１８００８；米国特許第
４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号；および、ＥＰ １０２，
３２４。一般的に、リポソームは、脂質含有量が約３０モル％コレステロールよ
り多い、小さな（約２００〜８００オングストローム）単ラメラ型であり、選択
される割合は、最適なＴＮＦＲポリペプチド治療について調整される。

【０５７２】 なおさらなる実施形態において、本発明の組成物は、ポンプによって送達され
る（Ｌａｎｇｅｒ，前出；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍ
ｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒ
ｙ ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．
３２１：５７４（１９８９）を参照のこと）。

【０５７３】 他の制御放出（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）系は、Ｌａｎｇｅｒ
（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））による総説にお
いて議論される。

【０５７４】 本発明の化合物がタンパク質をコードする核酸である、特定の実施形態におい
て、その核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構成し、そしてそ
れが細胞内になるように投与することにより（例えば、レトロウイルスベクター
の使用により（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、または直接注
射により、または微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔ
ｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用により、または脂質もしくは細胞表面レセプターも
しくはトランスフェクト剤でコーティングすることにより、または核に入ること
が公知であるホメオボックス様ペプチドと結合させて投与すること（例えば、Ｊ
ｏｌｉｏｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６
４−１８６８（１９９１）を参照のこと）などにより、そのコードされたタンパ
ク質の発現を促進するようにインビボで投与され得る。あるいは、核酸は、細胞
内に導入され得、そして、発現のために相同組換えにより宿主細胞ＤＮＡ内に組
み込まれ得る。

【０５７５】 本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療有効量の
化合物、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。具体的な実施形態において
、用語「薬学的に受容可能な」とは、動物における、そしてさらに特にヒトにお
ける使用のために、連邦規制当局もしくは米国政府により認められたか、または
米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されたことを意味する。
用語「キャリア」とは、治療剤とともに投与される、希釈剤、アジュバンド、賦
形剤、またはビヒクルをいう。このような薬学的なキャリアは、水および油（石
油起源、動物起源、植物起源、または合成起源の油（例えば、ピーナッツ油、大
豆油、鉱油、ゴマ油など）を含む）のような滅菌した液体であり得る。水は、薬
学的組成物が静脈内に投与される場合に、好ましいキャリアである。生理食塩水
溶液、ならびにデキストロースおよびグリセロールの水溶液はまた、特に注射可
能な溶液のために、液体キャリアとして使用され得る。適切な薬学的賦形剤とし
ては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ
、フラワー、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン
酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン
グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物はまた、所望されるなら
ば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの組成
物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性処方物など
の形態を取り得る。この組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドのような
キャリアとともに、坐剤として処方され得る。経口処方物は、薬学的等級のマン
ニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナト
リウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準キャリアを含み得る。
適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される。こ
のような組成物は、患者への適切な投与のための形態を提供するように、治療有
効量の化合物を、好ましくは精製された形態で、適切な量のキャリアとともに含
む。処方物は、投与形態に適するべきである。

【０５７６】 好ましい実施形態において、組成物は、慣用手順に従って、ヒトへの静脈内投
与のために適合された薬学的組成物として、処方される。代表的には、静脈内投
与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要な場合、組成物は
また、可溶化剤および注射の部位での痛みを緩和するリグノカインのような局部
麻酔を含み得る。一般的には、成分は、別々にかまたは単一投薬形態で一緒に混
合してのどちらかで、例えば、一定量の活性薬剤を示すアンプルまたはサシェ（
ｓａｃｈｅｔｔｅ）のような密封された容器中の凍結乾燥粉末または水を含まな
い濃縮物として供給される。組成物が注入により投与されるべき場合には、組成
物は、滅菌した薬学的等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルに分配され得
る。組成物が注射により投与される場合、成分が投与の前に混合され得るように
、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。

【０５７７】 本発明の化合物は、中性のまたは塩の形態として処方され得る。薬学的に受容
可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するアニ
オンのようなアニオンとともに形成される塩、およびナトリウム、カリウム、ア
ンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミ
ン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するカチ
オンのようなカチオンとともに形成される塩が挙げられる。

【０５７８】 本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性と関連する疾患または
障害の、処置、抑制および予防において効果的である本発明の化合物の量は、標
準的な臨床技術により決定され得る。さらに、インビトロアッセイは、必要に応
じて、最適な投薬量の範囲の同定を補助するために使用され得る。処方において
使用されるべき正確な用量はまた、投与の経路、および疾患または障害の重篤さ
に依存し、そして開業医の判断および各患者の状況に従って決定されるべきであ
る。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量応答曲線
に基づいて推定され得る。

【０５７９】 抗体に関して、患者に投与される投薬量は、代表的に、患者の体重１ｋｇあた
り０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。好ましくは、患者に投与される投薬量は、患
者の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇと２０ｍｇとの間であり、より好ましくは、患
者の体重１ｋｇあたり１ｍｇ〜１０ｍｇである。一般に、ヒト抗体は、外来ポリ
ペプチドへの免疫応答に起因して、他種由来の抗体よりもヒト体内で長い半減期
を有する。従って、ヒト抗体の低い投薬量および低い頻度の投与は、しばしば可
能である。さらに、本発明の抗体の投与の用量および頻度は、改変（例えば、脂
溶化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）のような）による抗体の取り込みおよび組織浸透
（例えば、脳への）を増強することにより減少され得る。

【０５８０】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の一つ以上の成分を充填される一つ以上
の容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。薬学的製品または生物学
的製品の製造、使用または販売を規制している政府機関により規定される形式に
おける通告は、このような容器に、必要に応じて添付され得る。この通告は、ヒ
トの投与のための製造、使用または販売のこの機関による認可を表す。

【０５８１】 （診断および画像化） 目的のポリペプチドに特異的に結合する標識化抗体、ならびにその誘導体およ
びそのアナログは、診断目的のために使用されて、本発明のポリペプチドの異常
な発現および／または活性に関連する疾患および／または障害を検出、診断また
はモニターし得る。本発明は、目的のポリペプチドの異常な発現の検出を提供し
、これは、（ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用して、個
体の細胞または体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、および
（ｂ）この遺伝子発現レベルを標準的な遺伝子発現のレベルと比較する工程、を
包含し、これによって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイされたポ
リペプチド遺伝子発現レベルの増加または減少が、異常な発現を示す。

【０５８２】 本発明は、障害を診断するための診断アッセイを提供し、このアッセイは、（
ａ）目的のポリペプチドに特異的な１つ以上の抗体を使用して、個体の細胞また
は体液中の目的のポリペプチドの発現をアッセイする工程、および（ｂ）この遺
伝子発現レベルを標準的な遺伝子発現のレベルと比較する工程、を包含し、これ
によって、その標準的な発現レベルと比較されるアッセイされたポリペプチド遺
伝子発現レベルの増加または減少が、特定の障害を示す。癌に関して、個体由来
の生検組織における比較的高い量の転写物の存在は、疾患の発症についての疾病
素質を示し得るか、または実際の臨床症状の出現前に疾患を検出するための手段
を提供し得る。この型のより決定的な診断は、保健専門家に予防手段を使用させ
ること、または早期の積極的な処置を可能にし得、これにより、癌の発生または
さらなる進行を予防する。

【０５８３】 本発明の抗体を使用して、当業者に公知の古典的な免疫組織学的方法を使用し
て生物学的サンプル中のタンパク質レベルをアッセイし得る（例えば、Ｊａｌｋ
ａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８
５）；Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７
−３０９６（１９８７）を参照のこと）。タンパク質遺伝子発現を検出するため
に有用な、抗体に基づく他の方法としては、イムノアッセイ（例えば、酵素結合
免疫吸着アッセイ検定法（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）
）が挙げられる。適切な抗体アッセイ標識は、当該分野において公知であり、そ
して酵素標識（例えば、グルコースオキシダーゼ）；および放射性同位体（例え
ば、ヨウ素（¹²⁵Ｉ、¹²¹Ｉ）、炭素（¹⁴Ｃ）、硫黄（³⁵Ｓ）、トリチウム（³Ｈ
）、インジウム（¹¹²Ｉｎ）、およびテクネチウム（⁹⁹Ｔｃ）；発光標識（例え
ば、ルミノール）；ならびに蛍光標識（例えば、フルオレセインおよびローダミ
ン）、ならびにビオチンが挙げられる。

【０５８４】 本発明の１つの局面は、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒ
トにおける、目的のポリペプチドの異常な発現と関連する疾患または障害の検出
および診断である。１つの実施形態において、診断は、（ａ）目的のポリペプチ
ドに特異的に結合する有効量の標識化分子を被験体に（例えば、非経口的に、皮
下に、または腹腔内に）投与する工程；（ｂ）このポリペプチドが発現する被験
体内の部位でこの標識化分子が優先的に濃縮することを可能にするために（およ
び結合していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるために）
投与後、時間間隔を待つ工程；（ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程；
および（ｄ）この被験体中の標識化分子を検出する工程、を包含し、その結果、
このバックグラウンドレベルを越える標識化分子の検出は、この被験体が目的の
ポリペプチドの異常な発現と関連する特定の疾患または障害を有することを示す
。バックグラウンドレベルは、特定の系について以前に決定された標準的な値と
、検出された標識化分子の量を比較する工程を包含する種々の方法により決定さ
れ得る。

【０５８５】 被験体の大きさおよび使用される画像化システムが、診断の画像を作製するた
めに必要である画像化部分の量を決定するということは、当該分野において理解
される。放射性同位体部分の場合、ヒト被験体について、注入される放射能の量
は、通常、約５〜２０ｍキュリーの範囲の⁹⁹Ｔｃである。次いで、標識化抗体ま
たは標識化抗体フラグメントは、特定のタンパク質を含む細胞の位置で優先的に
蓄積する。インビボでの腫瘍の画像化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍ
ｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍ
ｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ、第１３章：Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅ
ｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ
．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２
）において、記載される。

【０５８６】 使用する標識の型および投与の様式を含む、いくつかの変数に依存して、標識
化分子が被験体中の部位に優先的に濃縮することを可能にするため、および結合
していない標識化分子がバックグラウンドレベルまで除去されるための投与後の
時間間隔は、６〜４８時間もしくは６〜２４時間または６〜１２時間である。別
の実施形態において、投与後の時間間隔は、５〜２０日間または５〜１０日間で
ある。

【０５８７】 １つの実施形態において、疾患および障害をモニターすることは、疾患または
障害（ｄｉｓｅａｓｅ）を診断するための方法を繰り返すことによって実施され
る（例えば、最初の診断から１ヶ月後、最初の診断から６ヶ月後、最初の診断か
ら１年後、など）。

【０５８８】 標識化分子の存在は、インビボスキャニングについての当該分野で公知の方法
を使用して患者中で検出され得る。これらの方法は、使用される標識の型に依存
する。当業者は、特定の標識を決定するための適切な方法を決定することができ
る。本発明の診断方法において使用され得る方法およびデバイスは、コンピュー
タ連動断層撮影法（ＣＴ）、体全体のスキャン（例えば、陽子（ｐｏｓｉｔｉｏ
ｎ）放射断層撮影法（ＰＥＴ））、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波診
断法を含むが、これらに限定されない。

【０５８９】 特定の実施形態において、分子を放射性同位体で標識し、そして放射応答外科
的機器（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｉｎ
ｓｔｒｕｍｅｎｔ）（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、米国特許第５，４４１，０５０号）
を使用して患者中で検出する。別の実施形態において、分子を蛍光化合物で標識
し、そして蛍光応答スキャニング機器を使用して患者中で検出する。別の実施形
態において、分子を陽電子放射金属で標識し、そして陽電子放射断層撮影法を使
用して患者中で検出する。さらに別の実施形態において、分子を常磁性標識で標
識し、そして磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して患者中で検出する。 （キット） 本発明は、上記の方法において使用され得るキットを提供する。１つの実施形
態において、キットは、１つ以上の容器に、本発明の抗体、好ましくは精製した
抗体を備える。特定の実施形態において、本発明のキットは、エピトープを含む
実質的に単離されたポリペプチドを備える。このエピトープは、キット中に含ま
れる抗体と特異的に免疫反応する。好ましくは、本発明のキットは、目的のポリ
ペプチドと反応しないコントロール抗体をさらに備える。別の特定の実施形態に
おいて、本発明のキットは、目的のポリペプチドへの抗体の結合を検出するため
の手段を備える（例えば、この抗体は、検出可能な基質（例えば、蛍光化合物、
酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物）に結合体化され得るか、または一
次抗体を認識する二次抗体が、検出可能な基質と結合体化され得る）。

【０５９０】 本発明の別の特定の実施形態において、キットは、増殖性および／または癌性
のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに対して特異的な抗体を含む血清のスク
リーニングに使用するための診断キットである。このようなキットは、目的のポ
リペプチドと反応しないコントロール抗体を備え得る。このようなキットは、エ
ピトープを含む実質的に単離されたポリペプチド抗原を備え得る。このエピトー
プは、少なくとも１つの抗ポリペプチド抗原抗体と特異的に免疫反応する。さら
に、このようなキットは、抗原に対する上記の抗体の結合を検出するための手段
を備える（例えば、抗体は、蛍光化合物（例えば、フローサイトメトリーにより
検出され得るフルオレセインまたはローダミン）と結合体化され得る）。特定の
実施形態において、キットは、組換え的に産生されたポリペプチド抗原または化
学的に合成されたポリペプチド抗原を備え得る。キットのポリペプチド抗原はま
た、固体支持体に付着され得る。

【０５９１】 より特定の実施形態において、上記のキットの検出手段は、上記のポリペプチ
ド抗原が付着する固体支持体を備える。このようなキットはまた、非付着レポー
ター標識化抗ヒト抗体を備え得る。この実施形態において、ポリペプチド抗原へ
の抗体の結合は、上記のレポーター標識化抗体の結合によって検出され得る。

【０５９２】 さらなる実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドの抗原を含む血
清のスクリーニングにおいて使用するための、診断キットを含む。この診断キッ
トは、ポリペプチド抗原またはポリヌクレオチド抗原と特異的に免疫反応する実
質的に単離された抗体、およびこの抗体へのこのポリヌクレオチド抗原またはポ
リペプチド抗原の結合を検出するための手段を備える。１つの実施形態において
、抗体は、固体支持体に付着される。特定の実施形態において、抗体は、モノク
ロナール抗体であり得る。キットのこの検出手段は、二次標識化モノクロナール
抗体を含み得る。あるいは、またはさらに、この検出手段は、標識化競合抗原を
含み得る。

【０５９３】 １つの診断構成において、試験血清を、本発明の方法により得られる表面結合
抗原を有する固相試薬と反応させる。特定の抗原抗体とこの試薬との結合、およ
び洗浄することによる結合していない血清成分の除去の後、この試薬をレポータ
ー標識化抗ヒト抗体と反応させて、固体支持体上の結合した抗抗原抗体の量に比
例して、この試薬にレポーターを結合させる。この試薬を再び洗浄して、結合し
ていない標識化抗体を除去し、そしてこの試薬と結合するレポーターの量を決定
する。代表的に、レポーターは、酵素であり、この酵素は、適切な蛍光分析用基
質、発光性基質または比色用基質（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の存
在下で固相をインキュベートすることにより検出される。

【０５９４】 上記アッセイにおける固体表面試薬は、固体支持体物質（例えば、ポリマービ
ーズ、ディップスティック、９６ウェルプレートまたは濾過材料）へタンパク質
物質を付着する公知の技術によって調製される。これらの付着法としては、一般
に、支持体へのタンパク質の非特異的吸着またはタンパク質の（代表的には、遊
離のアミン基による）固体支持体上の化学的反応基（例えば、活性化カルボキシ
ル基、ヒドロキシル基、もしくはアルデヒド基）に対する共有結合性の付着が挙
げられる。あるいは、ストレプトアビジンコートプレートが、ビオチン化抗原と
組み合わせて使用され得る。

【０５９５】 従って、本発明は、この診断方法を実施するためのアッセイ系またはキットを
提供する。このキットは、一般に、表面に結合した組換え抗原を有する支持体、
および表面に結合した抗抗原抗体を検出するためのレポーター標識化抗ヒト抗体
を含む。

【０５９６】 本発明に一般的に記載されるように、以下の実施例を参照することにより、本
発明は、より容易に理解されるが、以下の実施例は、例示の目的で提供され、限
定として意図されない。

【０５９７】 （実施例１：Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＴＲ２の発現および精製） 細菌性発現ベクターｐＱＥ６０を、本実施例の細菌性発現のために使用する（
ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏ
ｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）。ｐＱＥ６０はアンピシリン抗生物質耐性（「Ａｍ
ｐ^r」）をコードし、そして細菌の複製起点（「ｏｒｉ」）、ＩＰＴＧ誘導性プ
ロモーター、リボソーム結合部位（「ＲＢＳ」）、ＱＩＡＧＥＮ Ｉｎｃ．（前
出）から販売されているニッケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフ
ィニティー樹脂を用いてアフィニティー精製を可能にする、ヒスチジン残基をコ
ードする６つのコドン、および適切な単一の制限酵素切断部位を含む。これらの
エレメントは、ポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントが、このペプチド
のカルボキシル末端に共有結合した６つのＨｉｓ残基（すなわち、「６×Ｈｉｓ
タグ」）を有するポリペプチドを産生するような様式で挿入され得るように、配
置される。しかし、この実施例において、ポリペプチドをコードする配列は、６
Ｈｉｓコドンの翻訳が妨げられ、それゆえ、ポリペプチドは６×Ｈｉｓタグを伴
わずに産生されるように挿入される。

【０５９８】 疎水性リーダー配列を欠く、ＴＲ２タンパク質の所望の部分をコードするＤＮ
Ａ配列は、ＴＲ２タンパク質の所望の部分のアミノ末端配列にアニーリングし、
そしてｃＤＮＡコード配列の３’側の寄託された構築物中の配列にアニーリング
するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、寄託されたｃＤＮＡから増
幅される。ｐＱＥ６０ベクターにおけるクローニングを容易にする制限部位を含
むさらなるヌクレオチドは、それぞれ、５’および３’配列に加えられる。

【０５９９】 成熟タンパク質をクローニングするために、５’プライマーは、下線を付した
ＮｃｏＩ制限部位およびそれに続く図１Ａ〜１Ｂの成熟ＴＲ２配列のアミノ末端
コード配列に相補的な１８ヌクレオチドを含む、配列： ５’ＣＧＣＣＣＡＴＧＧＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＣＧＴＣＣＴ３’（配列番号
１４）を有する。当然のように、５’プライマーが開始するタンパク質コード配
列の位置は、成熟形態より短いかまたは長い完全なタンパク質の所望の部分を増
幅するために変動され得ることを、当業者は理解する。３’プライマーは、下線
を付したＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、およびＴＲ２レセプターの細胞外ドメインを
コードする、図１Ａ〜１Ｂに示されるヌクレオチド配列の３’末端に相補的な１
８ヌクレオチドを含む、配列： ５’ＣＧＣＡＡＧＣＴＴＡＴＴＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＣＣＣ３’（配
列番号１５）を有する。

【０６００】 増幅されたＴＲ２のＤＮＡフラグメントならびにｐＱＥ６０ベクターは、Ｎｃ
ｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化され、次いで消化されたＤＮＡは、ともに連結
される。制限されたｐＱＥ６０ベクターへＴＲ２のＤＮＡを挿入することによっ
て、ＩＰＴＧ誘導性プロモーターおよび開始ＡＵＧを有するインフレームから下
流の、その関連終止コドンを含むＴＲ２タンパク質コード領域を配置する。この
関連終止コドンは、挿入位置の下流の６ヒスチジンコドンの翻訳を妨げる。

【０６０１】 連結混合物を、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）に記載されるような標準的な手順を用いて
、コンピテントなＥ．ｃｏｌｉ細胞に形質転換する。複数のコピーのプラスミド
ｐＲＥＰ４（これは、ｌａｃリプレッサーを発現し、そしてカナマイシン耐性（
「Ｋａｎ^r」）を付与する）を含有するＥ．ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４を本明
細書中に記載の例示的実施例を実施する際に使用する。この株（これは、ＴＲ２
のタンパク質を発現するために適切である多くの株の内の唯一の株である）は、
ＱＩＡＧＥＮ Ｉｎｃ．，（前出）から市販される。形質転換体を、アンピシリ
ンおよびカナマイシンの存在下でＬＢプレート上で増殖するそれらの能力により
同定する。プラスミドＤＮＡを耐性コロニーから単離し、そしてクローニングさ
れたＤＮＡの同定を、制限分析、ＰＣＲおよびＤＮＡ配列決定により確認する。

【０６０２】 所望の構築物を含むクローンを、アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）とカナマ
イシン（２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（
「Ｏ／Ｎ」）増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を用いて約１：２５〜１：２５０の希釈
で大規模培地に接種する。細胞を、０．４と０．６との間の、６００ｎｍでの光
学密度（「ＯＤ６００」）にまで増殖させる。次いで、イソプロピル−ｂ−Ｄ−
チオガラクトピラノシド（「ＩＰＴＧ」）を１ｍＭの最終濃度で加えて、ｌａｃ
Ｉリプレッサーを不活化することにより、ｌａｃリプレッサー感受性プロモータ
ーからの転写を誘導する。細胞をさらに３〜４時間引き続きインキュベートする
。次いで、細胞を遠心分離により採集する。

【０６０３】 次いで、ＴＲ２タンパク質を精製するために、細胞を、６Ｍ グアニジン−Ｈ
Ｃｌ、ｐＨ ８中で４℃で３〜４時間撹拌する。細胞片を、遠心分離により除去
し、そしてＴＲ２を含む上清を、２００ｍＭ ＮａＣｌを補充した５０ｍＭ 酢
酸Ｎａ緩衝液（ｐＨ ６）に対して透析する。あるいは、このタンパク質を、プ
ロテアーゼインヒビターを含む５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０％グリセロール、２
５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．４に対して透析することにより、タンパク
質を首尾良く再び折り畳みさせ得る。復元の後、タンパク質をイオン交換クロマ
トグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、およびサイズ排除クロマト
グラフィーによって精製し得る。あるいは、抗体カラムのようなアフィニティー
クロマトグラフィー工程を用いて、純粋なＴＲ２タンパク質を得ることができる
。精製されたタンパク質を、４℃で保存するかまたは−８０℃で凍結する。

【０６０４】 （実施例２） （実施例２（ａ）：バキュロウイルス発現系におけるＴＲ２タンパク質の可溶
性フラグメントのクローニングおよび発現） この実施例において、プラスミドシャトルベクターｐＡ２ ＧＰを用いて、そ
の天然に付随する分泌シグナル（リーダー）配列を欠失した、図１Ａ〜１Ｂに示
されるＴＲ２レセプタータンパク質の成熟細胞外ドメインをコードするクローニ
ングされたＤＮＡを、バキュロウイルスに挿入する。このタンパク質を、バキュ
ロウイルスリーダー、およびＳｕｍｍｅｒｓら、Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎ
ｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ、Ｔｅｘａｓ Ａ
ｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌ
ｌｅｔｉｎ 第１５５５号（１９８７）に記載のような標準的な方法を用いて発
現させた。この発現ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃ
ａ核多角体病ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーターおよ
びそれに続くバキュロウイルスｇｐ６７タンパク質の分泌シグナルペプチド（リ
ーダー）を含み、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８のような簡便な制
限部位を含む。シミアンウイルス４０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を
、効率的なポリアデニル化のために用いる。組換えウイルスの平易な選択のため
に、プラスミドは、同じ配向で、弱Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下
で、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のβガラクトシダーゼ遺伝子を含み、続いて、ポリヘドリ
ン遺伝子のポリアデニル化シグナルを含む。挿入遺伝子は、野生型ウイルスのＤ
ＮＡとの細胞媒介性相同組換えのためにウイルス配列の両側に隣接し、クローニ
ングされたポリヌクレオチドを発現する生存ウイルスを産生する。

【０６０５】 当業者に容易に理解されるように、必要ならば、構築物がシグナルペプチドお
よびインフレームＡＵＧを含む、転写、翻訳、分泌などのための適切に配置され
たシグナルを提供する限り、多くの他のバキュロウイルスベクターを、上記のベ
クター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１、およびｐＡｃＩＭ１）の代わり
に用い得る。例えば、このようなベクターは、Ｌｕｃｋｏｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇ
ｙ １７０：３１〜３９に記載される。

【０６０６】 寄託されたプラスミド（ＡＴＣＣ寄託番号９７０５９）中のＴＲ２レセプター
タンパク質の成熟細胞外ドメイン（図１Ａ〜１Ｂに示されるアミノ酸３７〜２０
０）を本質的にコードするｃＤＮＡ配列を、遺伝子の関連する５’配列および３
’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅した。上記
の各々の５’プライマーは、配列： ５’ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＣＧＧＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣＴＡＣ３’（配列番号１６
）を有し、この配列は、下線を付したＢａｍＨＩ制限酵素部位、Ｋｏｚａｋ，Ｍ
．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７〜９５０（１９８７）に記載のよう
な、真核生物細胞の翻訳を開始するための効率的なシグナル、続いて図１Ａ〜１
Ｂに示されるＴＲ２タンパク質のコード配列の１５塩基（ヌクレオチド３５４で
始まる）を含む。３’プライマーは、配列： ５’ＣＧＣＧＧＴＡＣＣＡＴＴＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＣＣＣ３’（配
列番号１７）を有し、この配列は、下線を付したＡｓｐ７１８制限部位、続いて
図１Ａ〜１Ｂ中のコード配列に相補的な１７ヌクレオチドを含む。

【０６０７】 増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ
１０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を用いて１％アガロースゲルから
単離した。次いで、このフラグメントを、ＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化
し、そして１％アガロースゲル上で精製した。このフラグメントは、本明細書中
で「Ｆ１」と表す。

【０６０８】 プラスミドを、制限酵素ＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、仔ウシ腸ホ
スファターゼを用いて脱リン酸化した。次いで、このＤＮＡを市販のキット（「
Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を
用いて１％アガロースゲルから単離した。このベクターＤＮＡを、本明細書中で
「Ｖ１」と表す。

【０６０９】 このフラグメントＦ１および脱リン酸化プラスミドＶ１を、Ｔ４ ＤＮＡリガ
ーゼで連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１細胞を、連結混合物で形質転換し、
そして培養プレートに播種した。ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ
Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）のような他の適切
なＥ．ｃｏｌｉ宿主もまた使用され得る。ＰＣＲ法を使用して、ヒトＴＲ２レセ
プター遺伝子を有するプラスミドを含む細菌を同定した。ＰＣＲ法において、遺
伝子を増幅させるために使用されるプライマーの１つおよびベクターの充分中に
ある第２のプライマーにより、ＴＲ２遺伝子フラグメントを含む細菌コロニーの
みが、ＤＮＡの増幅を示す。クローニングされたフラグメントの配列を、ＤＮＡ
配列決定によって確認した。このプラスミドを、本明細書中で、ｐＢａｃＴＲ２
−Ｔと称した。

【０６１０】 ５μｇのプラスミドｐＢａｃＴＲ２−Ｔを、Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７（１９８７）に
よって記載されるリポフェクション法を用いて、１．０μｇの市販の線状化バキ
ュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ^TM ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｄ
ＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．）とともに同時ト
ランスフェクトした。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ^TMウイルスＤＮＡおよび５
μｇのプラスミドｐＢａｃＴＲ２−Ｔを、５０μｌの無血清グレース培地（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ
）を含むマイクロタイタープレートの無菌ウェル中で混合した。その後、１０μ
ｌのリポフェクチンおよび９０μｌのグレース培地を添加し、混合し、そして室
温にて１５分間インキュベートした。次いで、このトランスフェクション混合物
を、無血清グレース培地１ｍｌを有する３５ｍｍ組織培養プレート内に播種され
たＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下した。このプレートを
前後に揺らし、新しく添加された溶液を混合させた。次いでプレートを、２７℃
で５時間インキュベートする。５時間後、トランスフェクション溶液をプレート
から除去し、そして１０％ウシ胎児血清を補充した１ｍｌのグレース昆虫培地を
添加した。このプレートをインキュベーター内に戻し、２７℃で４日間培養を続
ける。

【０６１１】 ４日後、上清を回収し、そしてＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ（前出）に記
載されるようにプラークアッセイを行った。青く染色されたプラークを産生する
ｇａｌ発現クローンの容易な同定および単離を可能にするために、「Ｂｌｕｅ
Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓ
ｂｕｒｇ）を有するアガロースゲルを用いた。（このタイプの「プラークアッセ
イ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｇ
ａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、で配布される昆虫細胞培養およびバキュロウイルス学
の使用者ガイド（９〜１０頁）においても見い出され得る）。適切なインキュベ
ーションの後、青く染色されたプラークをマイクロピペッターの（例えば、エッ
ペンドルフ）チップで拾った。次いで、組換えウイルスを含む寒天を、２００μ
ｌのグレース培地を含む微小遠心管中に再懸濁した。そして、組換えバキュロウ
イルスを含む懸濁液を用いて、３５ｍｍディッシュに播種された昆虫Ｓｆ９細胞
に感染させた。４日後、これらの培養ディッシュの上清を回収し、次いでそれら
を４℃で保存する。この組換えウイルスをＶＴＲ２−Ｔと称する。

【０６１２】 使用された遺伝子の発現を確認するために、Ｓｆ９細胞を、１０％熱非働化Ｆ
ＢＳを補充したグレース培地中で増殖させる。細胞を、約２の感染多重度（「Ｍ
ＯＩ」）で組換えバキュロウイルスＶ−ＴＲ２−Ｔを感染させた。６時間後、そ
の培地を除去し、そしてメチオニンおよびシステインを除いたＳＦ９００ ＩＩ
培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，
ＭＤから入手可能）に置き換える。４２時間後、５μＣｉの³⁵Ｓ−メチオニンお
よび５μＣｉの³⁵Ｓ−システイン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を放射標識
タンパク質に添加する。細胞をさらに１６時間インキュベートし、次いで細胞を
遠心分離により収集する。上清中のタンパク質および細胞内タンパク質をＳＤＳ
−ＰＡＧＥ、続いてオートラジオグラフィーにより分析した。精製タンパク質の
アミノ末端のアミノ酸配列の微小配列決定を用いて、成熟タンパク質のアミノ末
端配列および分泌シグナルペプチドの切断点および長さを決定した。 （実施例２（ｂ）：バキュロウイルス発現系におけるＴＲ２タンパク質のクロー
ニングおよび発現） 実施例２（ａ）に記載されるＴＲ２レセプターの短縮化バージョンのクローニ
ングおよび発現と同様に、組換えバキュロウイルスを作製した。これは、図１Ａ
〜１Ｂ（配列番号２）に示される全長ＴＲ２レセプタータンパク質を発現する。

【０６１３】 本実施例において、プラスミドシャトルベクターｐＡ２を用いて、その天然に
付随する分泌シグナル（リーダー）配列を含む、完全なタンパク質をコードする
クローニングされたＤＮＡを、バキュロウイルスに挿入して、成熟ＴＲ２タンパ
ク質を発現させる。ｐＡ２ベクターの他の特性は、実施例２（ａ）で使用された
ｐＡ２ ＧＰベクターに記載される特性と同様である。

【０６１４】 寄託されたプラスミドにおいて、全長のＴＲ２タンパク質をコードするｃＤＮ
Ａ配列（図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）に示される、ＡＵＧ開始コドン、および天
然に付随するリーダー配列を含む）を、遺伝子の５’配列および３’配列に対応
するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅する。５’プライマーは
、配列： ５’ＧＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧ
３’（配列番号１８）を有し、この配列は、下線を付したＢａｍＨＩ制限酵素部
位、Ｋｏｚａｋ，Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７〜９５０（１９
８７）に記載のような、真核生物細胞において翻訳を開始するための効率的なシ
グナル、続いて図１Ａ〜１Ｂに示される完全ＴＲ２タンパク質の配列の２１ヌク
レオチド（ＡＵＧ開始コドンで始まる）を含む。３’プライマーは、配列： ５’ＧＣＧＣＧＧＴＡＣＣＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＡ３’（
配列番号１９）を有し、この配列は、下線を付したＡｓｐ７１８制限部位、それ
に続く図１Ａ〜１Ｂの３’非コード配列に相補的な２１ヌクレオチドを含む。

【０６１５】 増幅されたフラグメントを単離し、そして実施例２（ａ）に記載されるような
制限酵素で消化して、プラスミドｐＢａｃＴＲ２を生成した。

【０６１６】 ５μｇのｐＢａｃＴＲ２を、全容量２００μｌの無血清培地で、１μｇのＢａ
ｃｕｌｏＧｏｌｄ^TM（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）ウイルスＤＮＡおよび１０μｌの
Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ^TM（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ）とと
もに同時トランスフェクトした。１次ウイルスを、感染後（ｐｉ）４〜５日目に
採集し、そしてプラークアッセイで使用した。プラーク精製ウイルスを、実施例
２（ａ）に記載されるように、続けて増幅および凍結した。

【０６１７】 発現されたタンパク質の放射標識化のために、Ｓｆ９細胞を、０．５×１０⁶
細胞／ｍｌを含む２．０ｍｌの細胞懸濁液を有する１２ウェルディッシュに播種
し、そして４時間付着させた。組換えバキュロウイルスを使用して、細胞を１〜
２のＭＯＩで感染させた。４時間後、この培地を、メチオニンおよびシステイン
を枯渇させた無血清培地（−Ｍｅｔ／−Ｃｙｓ）１．０ｍｌと置き換えた。ｐｉ
３日目に、この培養培地を、各々２μＣｉの［³⁵Ｓ］−Ｍｅｔおよび［³⁵Ｓ］−
Ｃｙｓを含む０．５ｍｌの−Ｍｅｔ／−Ｃｙｓと置き換えた。細胞を１６時間標
識化し、その後、培養培地を除去して、そして遠心分離により清澄化した（上清
（Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ））。これらの細胞を、０．２ｍｌの溶解緩衝液（２
０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．９；１３０ｍＭ ＮａＣｌ；０．２ｍＭ ＥＤ
ＴＡ；０．５ｍＭ ＤＴＴおよび０．５％（容量／容量）ＮＰ−４０）の添加に
よりこのディッシュで溶解し、次いでｄＨ₂Ｏで１．０ｍｌまで希釈した（細胞
抽出物（Ｃｅｌｌ Ｅｘｔｒａｃｔ））。３０μｌの各上清および細胞抽出物を
、１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。タンパク質ゲルを染色し、脱染色
し、増幅し、乾燥し、そしてオートラジオグラフィーした。組換えタンパク質に
対応する標識化バンドは、１６から７２時間の露光の後に認識できた。

【０６１８】 （実施例３：哺乳動物細胞におけるＴＲ２のクローニングおよび発現） 代表的な哺乳動物発現ベクターは、プロモーターエレメント（ｍＲＮＡの転写
の開始を媒介する）、タンパク質コード配列、ならびに転写の終結および転写物
のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。さらなるエレメントとしては、エン
ハンサー、Ｋｏｚａｋ配列、ならびにＲＮＡスプライシングのためのドナー部位
およびアクセプター部位に隣接する介在配列が挙げられる。非常に効率的な転写
を、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、レトロウイルス由来の長末端
反復（ＬＴＲ）（例えば、ＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩ）ならびにサイトメガ
ロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成し得る。しかし、細胞性
エレメントもまた使用され得る（例えば、ヒトアクチンプロモーター）。本発明
の実施における使用に適切な発現ベクターとしては、例えば、ＰＳＶＬおよびＰ
ＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃａ
ｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６）、な
らびにｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）のようなベクターが挙げられる
。使用され得る哺乳動物宿主細胞としては、ヒトＨｅｌａ２９３細胞、Ｈ９細胞
およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ
１細胞、Ｃｏｓ７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞
、ならびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）−細胞が挙げられる。

【０６１９】 あるいは、遺伝子は、染色体に組み込まれるその遺伝子を含む安定な細胞株に
おいて発現され得る。選択マーカー（例えば、ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン
、またはハイグロマイシン）との同時トランスフェクションは、トランスフェク
トされた細胞の同定および単離を可能にする。

【０６２０】 トランスフェクトされた遺伝子はまた、増幅されて大量のコードされたタンパ
ク質を発現し得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）マーカーは、目的の
遺伝子の数百または数千ものコピーを有する細胞株を開発するのに有用である。
別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒ
ｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂ
ｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１
９９２））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地において増
殖させ、そして最も高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は染色体
に組み込まれた増幅された遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ
）細胞およびＮＳＯ細胞は、タンパク質の産生にしばしば使用される。

【０６２１】 発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力なプロモータ
ー（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４３８−４４７（１９８５年３月））およびＣＭＶ−エン
ハンサーのフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０
（１９８５））を含む。複数のクローニング部位（例えば、制限酵素切断部位Ｂ
ａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８を有する）は、目的の遺伝子のクロー
ニングを容易にする。ベクターはさらに、ラットプレプロインシュリン遺伝子の
３’イントロン、ポリアデニル化、および終結シグナルを含む。

【０６２２】 （実施例３（ａ）：ＣＯＳ細胞におけるクローニングおよび発現） 発現プラスミドｐＴＲ２ＨＡを、ＴＲ２をコードするｃＤＮＡを発現ベクター
ｐｃＤＮＡＩ／ＡｍｐまたはｐｃＤＮＡＩＩＩ（これは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
，Ｉｎｃ．から入手し得る）へクローニングすることによって作製する。

【０６２３】 発現ベクターｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐは以下を含む：（１）Ｅ．ｃｏｌｉおよび
他の原核生物細胞における増殖に有効なＥ．ｃｏｌｉ複製起点；（２）プラスミ
ド含有原核生物細胞の選択のためのアンピシリン耐性遺伝子；（３）真核生物細
胞における増殖のためのＳＶ４０複製起点；（４）ＣＭＶプロモーター、ポリリ
ンカー、ＳＶ４０イントロン；（５）ｃＤＮＡが都合良くＣＭＶプロモーターの
発現制御下におかれ、そしてポリリンカーにおける制限部位によってＳＶ４０イ
ントロンおよびポリアデニル化シグナルに作動可能に連結され得るように配置さ
れた、赤血球凝集素フラグメント（すなわち、精製を容易にするための「ＨＡ」
タグ）をコードするいくつかのコドン、続いて終止コドン、およびポリアデニル
化シグナル。ＨＡタグは、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９８４
）によって記載されたインフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由来するエピト
ープに対応する。標的タンパク質へのＨＡタグの融合は、ＨＡエピトープを認識
する抗体を用いる、組換えタンパク質の容易な検出および回収を可能にする。ｐ
ｃＤＮＡＩＩＩはさらに、ネオマイシン選択マーカーを含む。

【０６２４】 ＴＲ２をコードするＤＮＡフラグメントを、組換えタンパク質発現がＣＭＶプ
ロモーターによって導かれるように、ベクターのポリリンカー領域にクローン化
する。プラスミド構築ストラテジーは以下の通りである。寄託されたプラスミド
のＴＲ２ｃＤＮＡを、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＴＲ２の発現のためのベクターの構
築について先に記載されるのとほとんど同じように、都合の良い制限部位を含む
プライマーを用いて増幅する。この実施例において使用される適切なプライマー
としては、以下が挙げられる。下線を付したＢａｍＨＩ部位、コザック配列、Ａ
ＵＧ開始コドン、および完全なＴＲ２の５’コード領域の６つのさらなるコドン
を含む５’プライマーは、以下の配列を有する： ５’ＧＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧ
３’（配列番号２０）。 下線を付したＸｂａＩ部位、停止コドン、ＨＡタグ、および３’コード配列の１
９個の塩基対を含む３’プライマーは、（３’末端で）以下の配列を有する： ５’ＧＣＧＣＴＣＴＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＧＴＣＧＴＡ
ＴＧＧＧＴＡＧＴＧＧＴＴＴＧＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣ３’（配列番号２１）。

【０６２５】 ＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントおよびベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐを、Ｂａ
ｍＨＩおよびＸｂａＩで消化し、次いで連結する。連結混合物を、Ｅ．ｃｏｌｉ
株ＳＵＲＥ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１１０
９９ Ｎｏｒｔｈ Ｔｏｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，
ＣＡ ９２０３７より入手可能）へ形質転換し、そして形質転換培養物を、次い
でインキュベートしてアンピシリン耐性コロニーの増殖を可能にするアンピシリ
ン培地プレートへプレーティングする。プラスミドＤＮＡを耐性コロニーから単
離し、そしてＴＲ−２をコードするフラグメントの存在について制限分析または
他の手段によって試験する。

【０６２６】 組換えＴＲ２の発現のために、ＣＯＳ細胞を、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａ
ｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９）に記載のようにＤ
ＥＡＥ−ＤＥＸＴＲＡＮを用いて、上記のように発現ベクターでトランスフェク
トする。細胞を、ベクターによるＴＲ２の発現のための条件下でインキュベート
する。

【０６２７】 ＴＲ２−ＨＡ融合タンパク質の発現を、例えば、Ｈａｒｌｏｗら，Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版；Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）に記載の方法を用い
て放射標識化および免疫沈降法によって検出する。この目的のため、トランスフ
ェクションの２日後に、細胞を、³⁵Ｓ−システインを含む培地中で８時間インキ
ュベートすることによって標識する。細胞および培地を採取し、そして細胞を洗
浄し、そしてＷｉｌｓｏｎら（上記に引用される）に記載されるように界面活性
剤含有ＲＩＰＡ緩衝液：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４０、０．１％
ＳＤＳ、１％ ＮＰ−４０、０．５％ ＤＯＣ、５０ｍＭ ＴＲＩＳ、ｐＨ ７
．５で溶解する。タンパク質を、ＨＡ特異的モノクローナル抗体を用いて細胞溶
解物および培養培地から沈降する。次いで、沈降されたタンパク質を、ＳＤＳ−
ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーによって分析する。期待されるサイズの
発現産物は、細胞溶解物において観察され、これはネガティブコントロールにお
いては見られない。

【０６２８】 （実施例３（ｂ）：ＣＨＯ細胞におけるクローニングおよび発現） ベクターｐＣ４を、ＴＲ２タンパク質の発現のために使用する。プラスミドｐ
Ｃ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ寄託番号３７１４６）の誘導
体である。このプラスミドは、ＳＶ４０初期プロモーターの制御下で、マウスＤ
ＨＦＲ遺伝子を含む。これらのプラスミドでトランスフェクトされるジヒドロ葉
酸活性を欠如するチャイニーズハムスター卵巣細胞または他の細胞は、化学治療
剤メトトレキサートを補充した選択培地（αマイナスＭＥＭ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で細胞を増殖させることによって選択され得る。メトト
レキサート（ＭＴＸ）に耐性である細胞におけるＤＨＦＲ遺伝子の増幅は、よく
考証されている（例えば、Ａｌｔ，Ｆ．Ｗ．，Ｋｅｌｌｅｍｓ，Ｒ．Ｍ．，Ｂｅ
ｒｔｉｎｏ，Ｊ．Ｒ．およびＳｃｈｉｍｋｅ，Ｒ．Ｔ．，１９７８，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０、Ｈａｍｌｉｎ，Ｊ．Ｌ．およびＭ
ａ，Ｃ．１９９０，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１０９
７：１０７−１４３、Ｐａｇｅ，Ｍ．Ｊ．およびＳｙｄｅｎｈａｍ，Ｍ．Ａ．１
９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８を参照のこと）。漸増濃
度のＭＴＸにおける細胞増殖は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結果として、標的酵素
ＤＨＦＲを過剰産生することによって薬物への耐性を生じる。第２の遺伝子がＤ
ＨＦＲ遺伝子に連結される場合、通常、同時増幅され、そして過剰発現される。
増幅した遺伝子の１，０００を超えるコピーを有する細胞株を開発するためにこ
のアプローチを使用し得ることは、当該分野において公知である。続いて、メト
トレキサートが取り除かれる場合、宿主細胞の１つ以上の染色体に組み込まれた
増幅遺伝子を含む細胞株が得られる。

【０６２９】 プラスミドｐＣ４は、目的の遺伝子の発現のために、ラウス肉腫ウイルス（Ｃ
ｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，１９８５年３月：４３８−４４７）の長末端反復（ＬＴＲ）の強力なプロモ
ーター、およびヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅ
ｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））の前初期遺伝子のエンハンサーから
単離されたフラグメントを含む。プロモーターの下流には、遺伝子の組み込みを
可能にする以下の単一の制限酵素切断部位が存在する：ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩお
よびＡｓｐ７１８。プラスミドは、これらのクローニング部位の後ろに、ラット
プレプロインスリン遺伝子の３’イントロンおよびポリアデニル化部位を含む。
他の高効率プロモーターもまた、発現のために使用され得る（例えば、ヒトβア
クチンプロモーター、ＳＶ４０初期もしくは後期プロモーター、または他のレト
ロウイルス（例えば、ＨＩＶおよびＨＴＬＶＩ）由来の長末端反復）。Ｃｌｏｎ
ｔｅｃｈのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および同様の系は、
哺乳動物細胞において調節された方法でＴＲ２タンパク質を発現するために使用
され得る（Ｇｏｓｓｅｎ，Ｍ．，およびＢｕｊａｒｄ，Ｈ．１９９２，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５５４７−５５５１）。ｍＲＮ
Ａのポリアデニル化のために、他のシグナル（例えば、ヒト成長ホルモンまたは
グロビン遺伝子由来）は、同様に使用され得る。染色体に組み込まれた目的の遺
伝子を含む安定な細胞株もまた、選択マーカー（例えば、ｇｐｔ、Ｇ４１８、ま
たはハイグロマイシン）との同時トランスフェクションに際して選択され得る。
最初は、１つより多い選択マーカー（例えば、Ｇ４１８およびメトトレキサート
）を使用することは、有利である。

【０６３０】 プラスミドｐＣ４を、制限酵素ＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、次い
でウシ腸ホスファターゼを用いて、当該分野で公知の手順によって脱リン酸化す
る。次いで、ベクターを、１％アガロースゲルから単離する。

【０６３１】 リーダー配列を含むＴＲ２タンパク質をコードするＤＮＡ配列を、遺伝子の５
’および３’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅
する。下線を付したＢａｍＨＩ制限酵素部位、それに続くＫｏｚａｋ，Ｍ．，Ｊ
．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７−９５０（１９８７）によって記載される
ような真核生物における翻訳の開始のための有効なシグナル、および図１Ａ〜１
Ｂ（配列番号１）に示されるＴＲ２タンパク質のコード配列の２１個の塩基を含
む５’プライマーは、以下の配列を有する： ５’ＧＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧ
３’（配列番号２２）。 下線を付したＡｓｐ７１８制限部位、それに続く２１個のヌクレオチド（図１Ａ
〜１Ｂ（配列番号１）に示されるＴＲ２遺伝子の非翻訳領域に相補的である）を
含む３’プライマーは、以下の配列を有する： ５’ＧＣＧＣＧＧＴＡＣＣＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＡ３’（
配列番号１９）。

【０６３２】 増幅させたフラグメントを、エンドヌクレアーゼＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１
８で消化し、次いで１％アガロースゲルで再度精製する。次いで、単離したフラ
グメントおよび脱リン酸化ベクターをＴ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで
、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そし
て例えば制限酵素分析を用いてプラスミドｐＣ４に挿入されたフラグメントを含
む細菌を同定する。

【０６３３】 活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠如するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トラン
スフェクションのために使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ４を、リポフェ
クチン（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎ
ｅｏとともに同時トランスフェクトする。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性
選択マーカー（Ｇ４１８を含む一群の抗生物質に対する耐性を与える酵素をコー
ドするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子）を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を
補充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し、そし
て１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／ｍｌ
Ｇ４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプレート
（Ｇｒｅｉｎｅｒ， Ｇｅｒｍａｎｙ）に播種する。約１０〜１４日後、単一の
クローンをトリプシン処理し、次いで異なる濃度のメトトレキサート（５０ｎＭ
、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を用いて、６ウェルペト
リ皿または１０ｍｌフラスコに播種する。次いで、最高濃度のメトトレキサート
で増殖するクローンを、さらに高濃度のメトトレキサート（１μＭ、２μＭ、５
μＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含む新たな６ウェルプレートに移す。同じ手順を
、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで繰り返す。所望
の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットに
よって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。

【０６３４】 （実施例４：ＴＲ２ｍＲＮＡ発現の組織分布） ノーザンブロット分析を行って、とりわけＳａｍｂｒｏｏｋら（上記に引用さ
れる）によって記載される方法を用いて、ヒト組織におけるＴＲ２遺伝子の発現
を調べる。ＴＲ２タンパク質の全ヌクレオチド配列（配列番号１）を含むｃＤＮ
Ａプローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ^TM ＤＮＡ標識系（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉ
ｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を製造者の説明書に従って用いて³²Ｐで標識する。標識
後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００^TMカラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を製造者のプロトコル番号ＰＴ１２０
０−１に従って用いて精製する。次いで、精製した標識プローブを用いて、種々
のヒト組織をＴＲ２ｍＲＮＡについて調べる。

【０６３５】 種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含むＭｕｌｔｉｐｌｅ
Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ（ＭＴＮ）ブロットを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈか
ら入手し、そしてＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ^TMハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ）を製造者のプロトコル番号ＰＴ１１９０−１に従って使用して、標
識プローブを用いて調べる。ハイブリダイゼーションおよび洗浄後、ブロットを
マウントし、そして−７０℃にて一晩フィルムに曝し、そしてフィルムを標準的
な手順に従って現像する。

【０６３６】 （実施例５） （実施例５（ａ）：ＴＲ２−Ｆｃ（ＴＲ２−Ｉｇ 融合タンパク質）および分
割ＴＲ２の発現および精製） 翻訳されたＴＲ２レセプターの推定膜貫通ドメインを、非極性透過二重層らせ
んを同定するために、Ｇｏｌｄｍａｎら（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．ｏｆ Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１５：３２１−３５３（１９８６））の方法を
使用して疎水性によって決定した。推定リーダーペプチドおよび細胞外ドメイン
をコードする、この膜貫通ドメインの上流領域を、Ｆｃ融合タンパク質の産生の
ために選択した。３’末端に、ＢｇｌＩＩ部位（単一下線）、第Ｘａ因子プロテ
アーゼ部位、およびＡｓｐ７１８Ｉ部位（二重下線）を付与した、ＨＴＸＢＳ４
０由来の対応するコード領域をＰＣＲするように、プライマーを設計した。ＴＲ
２をコードする配列の１８個のヌクレオチドを含む、このプライマー対（正方向
３５マー：

【０６３７】

【化１】 （配列番号２３）および逆方向プライマー５３マー：

【０６３８】

【化２】 （配列番号２４）を用いたＰＣＲは、予期された大きさの１つのバンドを生じた
。これをＣＯＳＦｃｌｉｎｋにクローン化して、ＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋプラスミ
ドを得た。ＰＣＲ産物をＥｃｏＲＩおよびＡｓｐ７１８Ｉで消化し、そしてＣＯ
ＳＦｃｌｉｎｋプラスミドに連結して（Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５））ＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋを産
生した。

【０６３９】 ＣＯＳ細胞を、ＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋで一時的にトランスフェクトして、得ら
れた上清をプロテインＡアガロースで免疫沈降させた。ヤギ抗ヒトＦｃ抗体を用
いた免疫沈降物のウェスタンブロット分析は、グリコシル化ＴＲ２−Ｆｃについ
て予期された大きさ（４７．５ｋＤより大きい）に一致する強いバンドを示した
。１５Ｌの一時的なＣＯＳトランスフェクションを行い、そして得られた上清を
精製した（以下を参照のこと）。ｍＡｂの産生のためのＤＮＡ注入に続いて、精
製されたタンパク質を使用して、マウスを免疫化した。

【０６４０】 ＣＨＯ細胞をＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋでトランスフェクトして、安定な細胞株を
産生した。５つの株を、増殖のためにドットブロット分析によって選択し、そし
て撹拌用フラスコに適合させた。ＴＲ２−Ｆｃタンパク質発現レベルが最も高い
株を、ウェスタンブロット分析によって同定した。この株の上清から精製したＴ
Ｒ２−Ｆｃタンパク質を、フローサイトメトリーによる細胞結合研究のために、
完全なタンパク質としてかまたは第Ｘａ因子切断およびビオチン化の後のいずれ
かで、使用した（以下を参照のこと）。

【０６４１】 クローンＨＴＸＢＳ４０は、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号１）に見られる配列とは
以下の点において異なるＴＲ２の対立遺伝子改変体である：ＨＴＸＢＳ４０が、
ヌクレオチド３１４においてグアニン、ヌクレオチド３８６においてチミン、ヌ
クレオチド６２７においてシトシンを含む。

【０６４２】 ＴＲ２の細胞外ドメインの発現に適切なプラスミドを、以下のように構築して
、抗ＴＲ２ｍＡｂの産生のためにマウスを免疫化した。Ｆｃフラグメントを、Ｂ
ｇｌＩＩ／ＸｂａＩ消化によってＴＲ２−Ｆｃｌｉｎｋから除去し、Ｋｌｅｎｏ
ｗを使用してオーバーハングを充填し、そしてプラスミドの平滑末端を再連結し
た。得られたフレームシフトは、もともとＢｇｌＬＬ部位の付加によってＴＲ２
−Ｆｃｌｉｎｋに導入されたアミノ酸の直後に停止コドンを導入した。従って、
ＴＲ２の細胞外ドメインのＣ末端には、この構築された（ＴＲ２ｅｘｌｉｎｋ）
中のたった２つのアミノ酸（ＲＳ）が続く。

【０６４３】 （実施例５（ｂ）：ＣＨＯ Ｅ１Ａ馴化培地由来のＴＲ２−Ｆｃの精製、その
後のＴＲ２の切断およびビオチン化） （アッセイ） 精製を終えた産生物の純度を、還元性条件下および非還元性条件下で電気泳動
される１５％Ｌａｅｍｍｌｉ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上でモニターした。吸光係
数をレセプターについては０．７、そしてキメラについては１．２８（両方とも
配列から計算した）と仮定して、タンパク質濃度をＡ₂₈₀によってモニターした
。吸光係数をＡＡＡによって確認した。

【０６４４】 （ＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質のプロテインＧクロマトグラフィー） 以下に記載される全ての工程を４℃で行った。１５ＬのＣＨＯ馴化培地（ＣＭ
）（細胞培養での収集後に０．２μで濾過した）を、線形流速１９９ｃｍ／ｈで
、プロテインＧの５×１０ｃｍカラムに適用した。このカラムは、１００ｍＭ
グリシン（ｐＨ２．５）で洗浄し、そして２０ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０
ｍＭ 塩化ナトリウム（サンプル適用前はｐＨ７）で平衡化していた。ＣＭを装
填した後、カラムを、カラム容積の５倍の２０ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０
ｍＭ 塩化ナトリウム（ｐＨ７）で洗浄し、そして１００ｍＭ グリシン（ｐＨ
２．５）で溶出した。４３５ｍｌの溶出物を、速やかに３Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８
．５）で中和し、０．２μで濾過した。Ａ₂₈₀、吸光係数１．２８に基づいて、
６５ｍｇのタンパク質を０．１５ｍｇ／ｍｌで回収した。

【０６４５】 （濃縮／透析） ３８５ｍｌのプロテインＧ溶出物を、３０Ｋ膜に適合されたＡｍｉｃｏｎ撹拌
セル中で、最終濃度１．７で３４ｍｌになるまで濃縮した。この濃縮物を緩衝液
に対して透析した。

【０６４６】 （遊離レセプターを産生するための第Ｘａ因子切断および精製） ６ｍｌ（１０．２ｍｇ）のＴＲ２−Ｆｃを５０μｇの第Ｘａ因子に添加して、
１：２００のｅ：ｓ比を生じた。この混合物を４℃で一晩インキュベートした。

【０６４７】 （遊離ＴＲ２レセプターのプロテインＧクロマトグラフィー） １ｍｌカラムのプロテインＧを、重力流れを利用して、使い捨てカラム中の２
０ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０ｍＭ 塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）におい
て平衡化した。切断されたレセプターをカラムに３回通して、その後このカラム
を、Ａ₂₈₀吸光度が見られなくなるまで、２０ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０
ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）で洗浄した。このカラムを２．５ｍｌの１０
０ｍＭグリシン（ｐＨ２．５）で溶出し、８３μｌの３Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．
５）で中和した。ＴＲ２を非結合画分中で溶出した。

【０６４８】 （濃縮） プロテインＧカラム由来の非結合画分（約１２ｍｌ）を、Ａ₂₈₀、吸光係数０
．７によって推定して最終濃度３．５ｍｇ／ｍｌで約１ｍｌになるまで、Ｃｅｎ
ｔｒｉｃｏｎ １０Ｋセル（Ａｍｉｃｏｎ）中で濃縮した。

【０６４９】 （Ｍｏｎｏ Ｓクロマトグラフィー） 濃縮したサンプルを、２０ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ６）で５ｍｌに希釈
し、そして２０ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ６）中で平衡化した０．５×５ｃ
ｍのＭｏｎｏ Ｓカラムに、３００ｃｍ／ｈの線形流速で適用した。このカラム
を、２０ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ６）で洗浄し、そして２０ｍＭ リン酸
ナトリウム（ｐＨ６）から２０ｍＭ リン酸ナトリウム、１Ｍ 塩化ナトリウム
（ｐＨ６）の２０のカラム容積線形勾配で溶出した。ＴＲ２タンパク質は、非結
合画分に溶出した。

【０６５０】 （濃縮／透析） Ｍｏｎｏ Ｓカラム由来の３ｍｌの非結合画分を、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ １０
Ｋセルを使用して上記のように１ｍｌまで濃縮し、そして２０ｍＭ リン酸ナト
リウム、１５０ｍＭ 塩化ナトリウム（ｐＨ７）に対して透析した。透析後の濃
度は２．１ｍｇ／ｍｌであった。

【０６５１】 （ビオチン化） ２．１ｍｇ／ｍｌでの０．５ｍｇのＴＲ２を、１００ｍＭ ホウ酸塩（ｐＨ８
．５）に対して透析した。２０倍モル過剰のＮＨＳ−ＬＣ Ｂｉｏｔｉｎを添加
し、そしてこの混合物を４℃で一晩、回転板上に放置した。ビオチン化されたＴ
Ｒ２を、２０ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０ｍＭ 塩化ナトリウム（ｐＨ７）
に対して透析し、滅菌濾過し、そして−７０℃で保存した。ビオチン化を、スト
レプトアビジン（ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ）ＨＲＰで走査されたウェスタンブロ
ット上で実施し、続いてＥＣＬ試薬で展開した。

【０６５２】 （実施例６） （ＴＲ２レセプターの膜結合形成は、リンパ球の増殖および分化を誘導するＴ
ＮＦＲである） 腫瘍壊死因子（ＴＮＦＲ）／神経増殖因子レセプター（ＮＧＦＲ）スーパーフ
ァミリーのメンバーは、分子の細胞外部分に、約３０〜４０個のアミノ酸からな
るシステイン富化モチーフの３〜６回の繰り返しが存在することを特徴とする（
Ｍａｌｌｅｔｔ，Ｓ．およびＢａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏ
ｄａｙ １２：２２０（１９９１））。ＴＮＦＲ−Ｉの結晶構造は、システイン
富化モチーフ（ＴＮＦＲドメイン）が、ジスルフィド結合のねじれたはしごによ
って一緒に保持された残基の３つの伸張鎖からなることを示した（Ｂａｎｎｅｒ
，Ｄ．Ｗ．ら，Ｃｅｌｌ ７３：４３１（１９９３））。これらのレセプターは
、膜貫通ドメインに直接隣接したちょうつがい様領域を含み、この領域は、シス
テイン残基の欠如、およびＯで連結された糖を用いてグリコシル化される傾向に
あるセリン、スレオニン、およびプロリンの高い比率を特徴とする。これらの分
子の細胞質部分は、限られた配列類似性を示し、これは種々の細胞シグナリング
のための基礎であり得る発見である。現在、ヒト細胞から同定されたメンバーと
しては、以下が挙げられる：ＣＤ４０（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ，Ｉ．ら、ＥＭ
ＢＯ Ｊ．８：１４０３（１９８９））、４−１ＢＢ（Ｋｗｏｎ，Ｂ．Ｓ．およ
びＷｅｉｓｓｍａｎ，Ｓ．Ｍ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ８６：１９６３（１９８９））、ＯＸ−４０（Ｍａｌｌｅｔｔ，Ｓ．ら、Ｅ
ＭＢＯ Ｊ．９：１０６３（１９９０））、ＴＮＦＲ−Ｉ（Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ
，Ｈ．ら、Ｃｅｌｌ ６１：３５１（１９９０）；Ｓｃｈａｌｌ，Ｔ．Ｊ．ら、
Ｃｅｌｌ ６１：３６１（１９９０））、ＴＮＦＲ−ＩＩ（Ｓｍｉｔｈ，Ｃ．Ａ
．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４８：１０１９（１９９０））、ＣＤ２７（Ｖａｎ
Ｌｉｅｒ，Ｒ．Ａ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：１５８９（１９８７））
、Ｆａｓ（Ｉｔｏｈ，Ｎ．ら、Ｃｅｌｌ ６６：２３３（１９９１））、ＮＧＦ
Ｒ（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｄ．ら、Ｃｅｌｌ ４７：５４５（１９８６））、ＣＤ３
０（Ｄｕｒｋｏｐ，Ｈ．ら、Ｃｅｌｌ ６８：４２１（１９９２））およびＬＴ
ＢＲ（Ｂｅａｎｓ，Ｍ．ら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １６：２１４（１９９３））。
以下のような、溶解性ＴＮＦＲをコードするウイルス性オープンリーディングフ
レームもまた同定されている：ＳＦＶ−Ｔ２（Ｓｍｉｔｈ，Ｃ．Ａ．ら、Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２４８：１０１９（１９９０））、Ｖａ５３（Ｈｏｗａｒｄ，Ｓ．Ｔ
．ら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １８０：６３３（１９９１））、Ｇ４ＲＧ（Ｈｕ，Ｆ
．−Ｑ．ら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２０４：３４３（１９９４））およびｃｒｍＢ
（Ｓｍｉｔｈ，Ｇ．Ｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｏｌ．７４：１７２５（１９９３）
）。

【０６５３】 最近の徹底的な研究は、これらの分子が以下のような種々の生物学的活性に関
与することを示した：細胞増殖（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，Ｊ．ら、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２５１：７０（１９９１）；Ｐｏｌｌｏｋ，Ｋ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１５０：７７１（１９９３）；Ｂａｕｍ，Ｐ．Ｒ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．１３
：３９９２（１９９４））、細胞生存（Ｇｒａｓｓ，Ｈ．−Ｊら、Ｂｌｏｏｄ
８３：２０４５（１９９４）；Ｔｏｒｃｉａ，Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ ８５：３４５
−３５６（１９９６））、および細胞死（Ｔａｒｔａｇｌｉａ，Ｌ．Ａ．ら、Ｃ
ｅｌｌ ７４：８４５（１９９３）；Ｇｉｌｌｅｔｔｅ−Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ｉ
．およびＳｉｄｍａｎ，Ｃ．Ｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：１１８
１（１９９４）；Ｋｒａｍｍｅｒ，Ｐ．Ｈ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．６：２７９（１９９４））を調節することによる、免疫調節（Ａｒｍｉ
ｔａｇｅ，Ｒ．Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：４０７（１９
９４）；Ｓｍｉｔｈ，Ｃ．Ａ．ら，Ｃｅｌｌ ７５：９５９（１９９４））。

【０６５４】 これらの生物学的意味およびこのスーパーファミリーの多様なメンバーシップ
によって、本発明者らは、このスーパーファミリーのさらなるメンバーが存在す
ることを予言した。ＥＳＴデータベースを検索することによって、本発明者らは
、ＴＮＦＲファミリーの新しいメンバーを同定した。本発明者らは、本明細書中
に、ＴＲ２と呼ばれる分子の最初の特徴付けを報告する。

【０６５５】 （材料および方法） （ＴＮＦＲスーパーファミリーの新しいメンバーの同定およびクローニング） ５００を超える異なるｃＤＮＡライブラリー（Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｄ．ら、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２５２：１６５１（１９９１）；Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｄ．ら、Ｎａｔ
ｕｒｅ ３５５：６３２（１９９２））から得られた、発現された配列タグ（Ｅ
ＳＴ）ｃＤＮＡデータベースを、ｂｌａｓｔｎアルゴリズムおよびｔｂｌａｓｔ
ｎアルゴリズム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ，Ｆ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１
５：４０３（１９９０））を使用して、ＴＮＦＲスーパーファミリーのシステイ
ン富化モチーフとの配列類似性についてスクリーンした。アミノ酸レベルでのＴ
ＮＦＲ−ＩＩに対する有意な同一性を示す、１つのＥＳＴ（ＨＴ１ＳＢ５２と記
される）を、ヒトＴ細胞株ライブラリーから同定した。この配列を用い、ヒト白
血球（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，ＰＴ１１５５−１．Ｃａｔ．＃７３０１−１）の５’
−ＲＡＣＥ−用のｃＤＮＡを使用して、ＲＡＣＥ（ｃＤＮＡ末端の高速増幅）に
より欠失５’末端をクローン化した。この配列は、４つのさらなるＥＳＴ（ＨＴ
ＯＢＨ４２、ＨＴＯＡＵ６５、ＨＬＨＡ４９およびＨＴＸＢＳ４０）と一致した
。これらのおよび他のｃＤＮＡの完全な配列決定は、それらがＴＮＦＲスーパー
ファミリーに相同な同一のオープンリーディングフレームを含み、そしてＴＲ２
と呼ばれることを示した。いくつかの他のＥＳＴおよびｃＤＮＡの分析は、上記
で同定されたオープンリーディングフレームに挿入されたさらなる配列を有し、
そして種々の部分的にスプライスされたｍＲＮＡを示し得る、ｃＤＮＡもあるこ
とを示した。

【０６５６】 （細胞） 研究された骨髄性株およびＢ細胞株は、異なる段階の分化経路での細胞型を示
す。ＫＧｌａおよびＰＬＢ ９８５（Ｋｏｅｆｆｌｅｒ，Ｈ．ら、Ｂｌｏｏｄ
５６：２６５（１９８０）；Ｔｕｃｋｅｒ，Ｋ．ら，Ｂｌｏｏｄ ７０：３７２
（１９８７））をＰｈｉｌｌｉｐ Ｋｏｅｆｆｌｅｒ（ＵＣＬＡ Ｓｃｈｏｏｌ
ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）から入手し、ＢＪＡ−ＢをＺ．Ｊｏｎａｋ（Ｓｍｉ
ｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ）から入手し、そしてＴＦ ２７４（骨芽細胞
の特徴を示す間質細胞株）が、健常な成人男性ドナー（Ｔａｎ＆Ｊｏｎａｋ、未
刊行）の骨髄から生じた。他の全ての細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手
した。単球を、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の分画遠心および組織培養皿への接
着によって調製した。ＣＤ１９⁺、ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺を、免疫磁気ビーズ（
Ｄｙｎａｌ，Ｌａｋｅ Ｓｕｃｃｅｓｓ，ＮＹ）によってＰＢＭＣから単離した
。ヒト冠状動脈由来の内皮細胞を、ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，
ＣＡ）から購入した。

【０６５７】 （ＲＮＡおよびＤＮＡのブロットハイブリダイゼーション） 成人組織の全ＲＮＡは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から
購入するか、またはＴｒｉＲｅａｇｅｎｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）を用いて初期の
細胞および細胞株から抽出した。５〜７．５μｇの全ＲＮＡを、記載されるよう
に、ホルムアルデヒドを含有する１％アガロースゲル中で画分化し（Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ
Ｈａｒｂｏｒ（１９８９））、そして真空ブロッティングによって、Ｚｅｔａ−
プローブナイロン膜（Ｂｉｏｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）に定量的に移し
た。このブロットを、プレハイブリダイズし、ＴＲ２またはＯＸ−４０プローブ
の³²Ｐ標識したＸｈｏＩ／ＥｃｏＲＩフラグメントとハイブリダイズし、ストリ
ンジェントな条件下で洗浄し、そしてＸ線フィルムに曝露した。

【０６５８】 高分子量のヒトＤＮＡを、種々の制限酵素で消化し、そして０．８％アガロー
スゲル中で画分化した。ＤＮＡを、変性し、中和してナイロン膜に移し、そして ³² Ｐ標識したＴＲ−２またはその改変体ｃＤＮＡにハイブリダイズさせた。

【０６５９】 （インサイチュハイブリダイゼーションおよびＦＩＳＨ検出） インサイチュハイブリダイゼーションおよびヒト染色体中のＴＲ２位置のＦＩ
ＳＨ検出を、以前に記載されたように行った（Ｈｅｎｇ，Ｈ．Ｈ．Ｑ．ら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：９５０９（１９９２）；Ｈ
ｅｎｇ，Ｈ．Ｈ．Ｑ．ら、Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
３：６１（１９９４））。ＦＩＳＨシグナルおよびＤＡＰＩバンド形成パター
ンを、写真を撮ることによって別々に記録し、そして染色体バンドを有するＦＩ
ＳＨマッピングデータの割り当てを、ＦＩＳＨシグナルをＤＡＰＩバンド形成さ
れた染色体と重ね合わせることによって達成した（Ｈｅｎｇ，Ｈ．Ｈ．Ｑ．およ
びＴｓｕｉ，Ｌ．−Ｃ．，Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａ．１０２：３２５（１９９３）
）。

【０６６０】 （組換えＴＲ２−Ｆｃ融合タンパク質の産生） 細胞外ドメインの全体の推定オープンリーディングフレームを含むＴＲ２の５
’位置は、ポリメラーゼ連鎖反応によって増幅された（Ｓａｉｋｉ，Ｒ．Ｋ．ら
、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：４８７（１９８８））。正確に方向付けられたクロ
ーニングについて、正方向プライマーの５’末端のＨｉｎｄＩＩＩ部位よおび逆
方向プライマーの５’末端のＢｇｌＩＩ部位が生成された。ヒトＩｇＧ₁のＦｃ
部分は、ＡＲＨ−７７（ＡＴＣＣ）細胞ＲＮＡからＰＣＲ増幅され、ｐＧｅｍ７
ベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＳｍａＩ部位においてクローニングされた。ヒン
ジ、ＣＨ₂、およびＣＨ₃ドメイン配列を含むＦｃフラグメントは、その５’末端
にＢｇｌＩＩ部位およびその３’末端にＸｈｏＩ部位を含んだ。ＴＲ２ ｃＤＮ
ＡのＨｉｎｄＩＩＩ−ＢｇｌＩＩフラグメントは、ヒトＩｇＧ₁Ｆｃの上流に挿
入され、そしてインフレーム融合が、配列決定によって確認された。ＴＲ２−Ｆ
ｃフラグメントは、ＨｉｎｄＩＩＩ−ＸｈｏＩを用いてプラスミドを消化するこ
とによって放出され、そしてｐｃＤＮＡ３発現プラスミドにクローニングされた
。

【０６６１】 ＰｖｕＩで線状化されたＴＲ２−Ｆｃプラスミドは、リン酸カルシウム共沈澱
法によって、ＮＩＨ３Ｔ３に移入された。４００μｇ／ｍｌのＧ４１８における
選択の後、ネオマイシン耐性コロニーを選択し、そして拡張した。抗ヒトＩｇＧ ₁ を用いるＥＬＩＳＡおよび³²Ｐ標識ＴＲ２プローブを用いるノーザン分析を使
用して、上清中に高レベルのＴＲ２−Ｆｃを産生するクローンを選択した。いく
つかの実験において、処理されたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中
に生成したわずかに異なる操作されたＴＲ２−Ｆｃを使用した。ＴＲ２−Ｆｃを
、プロテインＧクロマトグラフィーによって精製し、そしてＴＲ２−Ｆｃ融合タ
ンパク質のＮ末端のアミノ酸配列を、自動ペプチド配列決定機（ＡＢＩ）によっ
て決定された。ＴＲ２−Ｆｃを使用して、ポリクローナルウサギ抗ＴＲ２抗体を
作製した。

【０６６２】 （ＭＬＲ媒介ＰＢＭＣ増幅のブロッキング） ＰＢＭＣを、４００×ｇで４０分間でのＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離によって３
体の健康な成人のボランティアから単離した。ＰＢＭＣを回収し、１０％ＦＢＳ
、３００μｇ／ｍｌのＬ−グルタミン、および５０μｇ／ｍｌのゲネトマイシン
（ｇｅｎｅｔｏｍｙｃｉｎ）を補充したＲＰＭＩ１６４０（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ
）中で洗浄し、そして２体のドナーに対し１×１０⁶細胞／ｍｌおよび３番目の
ドナーに対し２×１０⁵細胞／ｍｌに調整した。

【０６６３】 ５０μｌの各細胞懸濁物を、９６ウェル（丸底）プレート（Ｆａｌｃｏｎ，Ｆ
ｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＳ）に、５０μｌのＴＲ２−Ｆｃ、ＩＬ−５Ｒ
−Ｆｃ、抗ＣＤ４ｍＡｂまたはコントロールｍＡｂとともに添加した。プレート
を、５％ＣＯ₂中、３７℃で９６時間インキュベートした。次いで、１μＣｉの
［³Ｈ］−メチルチミジン（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｃｏｓｔａ Ｍ
ｅｓａ，ＣＡ）を、さらなる１６時間にわたって添加した。細胞を回収し、そし
て放射能をカウントした。

【０６６４】 （結果と考察） （ＴＲ２は、ＴＮＦＲスーパーファミリーの新規なメンバーである） 図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２）は、単離されたｃＤＮＡ（ＨＬＨＡＢ４９）の１
つの最も長いオープンリーディングフレームから推定されるＴＲ２のアミノ酸配
列を示す。データベース中の他の配列決定されたｃＤＮＡおよびＥＳＴとの比較
は、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号２におけるアミノ酸残基２０および５）に示される
タンパク質配列の位置１７（ＡｒｇまたはＬｙｓのいずれか）および４１（Ｓｅ
ｒまたはＰｈｅのいずれか）におけるアミノ酸変化を生じる潜在的な対立遺伝子
改変体を示した。

【０６６５】 オープンリーディングフレームは、３０，４１７の計算分子量を有する２８３
個のアミノ酸をコードする。ＴＲ２部分は、レセプターであることが期待された
。従って、潜在的なシグナル配列および膜貫通ドメインが探究された。Ｃ末端に
向かう２３個のアミノ酸の疎水性ストレッチ（アミノ酸２０１〜２２５）（図１
Ａ〜１Ｂ）が、膜貫通ドメインとして割り当てられた。なぜなら、潜在的に一本
鎖へリックススパンを作るが、シグナル配列は、あまり明らかではないからであ
る。潜在的な外部ドメインＴＲ２は、Ｆｃ融合タンパク質としてＮＩＨ３Ｔ３ま
たはＣＨＯ細胞において発現され、そして組換えＴＲ２−Ｆｃタンパク質のＮ末
端アミノ酸配列が両方の場合において決定された。プロセッシングされた成熟Ｔ
Ｒ２のＮ末端配列は、アミノ酸３７から始まり、最初の３６アミノ酸が、シグナ
ル配列を構成することを示した（図１Ａ〜１Ｂ）。

【０６６６】 ＴＲ２に対して惹起されたポリクローナルウサギ抗体を使用して、天然のＴＲ
２の分子サイズが、ウエスタン分析によって３８ｋＤであることが決定された。
プロセッシングされたＴＲ２のタンパク質骨格は、２６，０００のＭｒを有する
２４７個のアミノ酸からなるので、タンパク質は、翻訳後に改変されなくてはな
らない。２つの潜在的なアスパラギン様グリコシル化部位は、アミノ酸位置１１
０および１７３に位置する（図１Ａ〜１Ｂ）。ＴＮＦＲファミリーの他のメンバ
ーとともに、ＴＲ２は、Ｘ線結晶学（Ｂａｎｎｅｒら、Ｃｅｌｌ ７３：４３１
（１９９３））によって示される特徴的なシステイン富化モチーフを含み、繰返
し構造単位を表す（Ｂａｎｎｅｒ，Ｄ．Ｗら、Ｃｅｌｌ ７３：４３１（１９９
３））。図１６は、ＴＲ２（配列番号２）、ＴＨＦＲ−１（配列番号１０）、Ｔ
ＮＦＲ−ＩＩ（配列番号１１）、ＣＤ４０（配列番号１２）、および４−１ＢＢ
（配列番号１３）中に整列した潜在的なＴＮＦＲドメインを示した。ＴＲ２は、
２つの完全なＴＮＦＲドメインおよび２つの不完全なＴＮＦＲドメインを含んだ
。

【０６６７】 ＴＲ２細胞質テール（ＴＲ２ ｃｙ）は、ＣＤ４０ｃｙおよび４−１ＢＢｃｙ
のそれにより密接に関連しているようであり、そしてＦａｓおよびＴＮＦＲ−１
細胞内ドメインに見られる死のドメインを含まない。相同性は中程度であるが、
ＴＲ２のＴｈｒ²⁶⁶は、４−１ＢＢのＴｈｒ²³³およびＣＤ４０のＴｈｒ²⁵⁴と整
列している。このことは重要であり得る。なぜなら、Ｉｎｕｉら（Ｉｎｕｉ，Ｓ
ら、Ｅｕｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：１７４７（１９９０））は、Ｔｈｒ^{25 4} は、ＣＤ４０シグナル伝達に必須であることを見出し、そしてＣＤ４０のＴｈ
ｒ２５４が変異される場合、ＣＤ４０ｂｄは、ＣＤ４０ｃｙに結合しなかった（
Ｈｕ，Ｈ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３００６９（１９９４）
）。４−１ＢＢおよびＣＤ４０を介するシグナルは、Ｔ細胞およびＢ細胞のそれ
ぞれに対して同時刺激であることが示されている（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，ｊ．
およびＲｏｕｓｓｅｔ，Ｆ．、Ｎａｔｕｒｅ ３５３：６７８（１９９１）；Ｈ
ｕｒｔａｌｄｏ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：３３６０（１９９５）
）。

【０６６８】

【表５】 （ＴＲ２ ＲＮＡ発現） ヒト組織ＲＮＡブロットを使用して、ＴＲ２ ＲＮＡ発現の組織分布を決定し
た。ＴＲ２ ＲＮＡは、肺、脾臓および胸腺において、いくつかの組織中で比較
的高レベルで検出された（表Ｖ）が、脳、肝臓または骨格筋においては、この方
法によって検出されなかった（表Ｖ）。ＴＲ２はまた、単球、ＣＤ１９⁺Ｂ細胞
、ならびに静止またはＰＭＡおよびＰＨＡ処理ＣＤ４⁺またはＣＤ８⁺Ｔ細胞にお
いて発現された。それは、骨髄および内皮細胞において弱く発現されたのみであ
る（表ＶおよびＶＩ）が、発現は、造血細胞株ＫＧｌａにおいて観測された（表
Ｖ）。比較のために、ＯＸ−４０（ＴＮＦＲスーパーファミリーの別のメンバー
）の組織分布を試験した（表Ｖ）。ＴＲ２とは異なり、ＯＸ−４０は、試験され
たいずれの組織においても検出されず、そして活性化されたＴ細胞よおびＫＧｌ
ａにおいて検出されたのみである。いくつかの細胞株は、ＴＲ２発現に対してネ
ガティブであり、その細胞株には、ＴＦ２７４（骨髄間質）、ＭＧ６３およびＴ
Ｅ８５（骨肉腫）、ＲＬ９５−２（子宮内膜肉腫）、ＭＣＦ−７およびＴ−４７
Ｄ（乳癌細胞）、ＢＥ，ＨＴ ２９（結腸癌細胞）、ＨＴＢ−１１およびＩＭＲ
−３２（神経芽腫）が挙げられるが、ＴＲ２は、横紋筋肉腫ＨＴＢ−８２に見出
された（データは示さない）。

【０６６９】 いくつかの細胞株を誘導性ＴＲ２発現のために試験した。ＨＬ６０、Ｕ９３７
およびＴＨＰ１（これらは、骨髄単球性連結に属する）はすべて、分化薬剤ＰＭ
ＡまたはＤＭＳＯに応答してＴＲ２発現を増加した。これらの薬剤に対する応答
における発現の増加は、ＫＧｌａおよびジャーカット細胞において観測された。
対照的に、ＰＭＡは、ＭＧ６３におけるＴＲ２発現を誘導しなかったが、予想外
に、ＴＨＦ−αは発現した。

【０６７０】 ほとんど全ての場合において、主なｍＲＮＡは、そのサイズが約１．７ｋｂで
あるが、いくつかのより高い分子量種がいくつかの組織において検出され得る。
配列決定された多くのｃＤＮＡおよびＥＳＴは、部分的なスプライシングを示す
コード領域中に挿入物を含むが、本発明者らは、ウェスタンブロットによって１
つの主要なタンパク質を検出したのみであり、このことは、これらが代替タンパ
ク質をコードするならば、それらは、本発明者が試験した細胞において明確では
ないことを示唆した。多数のより高いＭＷｍＲＮＡは、ＴＲ２が、部分的に、ｍ
ＲＮＡ成熟のレベルで調節され得る可能性を生じる。

【０６７１】

【表６】 （１Ｐ３６．２−Ｐ３６．３でのＴＲ２マップ） ＦＩＳＨマッピング手順を適用して、ＴＲ２遺伝子を特定のヒト染色体領域に
局在化させた。ハイブリダイゼイションシグナルの第１の染色体の短腕に対する
割り当ては、ＤＡＰＩバンディングの助けをかりて得られた。ＴＲ２遺伝子が第
１の染色体領域ｐ３６．２−ｐ３６．３に配置することを示す合計１０のメタテ
ィク（ｍｅｔａｔｉｃ）図を写真に撮った。ＴＲ２位置は、ＣＤ３０（Ｓｍｉｔ
ｈ，Ｃ．Ａ．ら、Ｃｅｌｌ ７３：１３４９−１３６０（１９９３））、４−１
ＢＢ（Ｋｗｏｎ，Ｂ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２２５６−２２６
２（１９９４）；Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｒ．Ｇ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
２３：２６３１−２６４１（１９９３））、ＯＸ−４０（Ｂｉｒｋｅｌａｎｄ，
Ｍ．Ｌ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：９５６−９３０（１９９５）
）、およびＴＮＦＲ−ＩＩ（Ｂａｋｅｒ，Ｅ．ら、Ｃｙｔｏｇｅｎｔ．＆ Ｃｅ
ｌｌ Ｇｅｎｅｔ．５７：１１７−１１８（１９９１））に近接しており、この
ことは、それが局在化した遺伝子重複現象を介して進化することを示唆する。興
味深いことに、全てのこれらのレセプターは、アポトーシスを刺激するＦａｓお
よびＴＮＦＲ−Ｉとは対照的に、同族リガンド結合に応答して、Ｔ細胞中に刺激
表現型を有する。このことは、ＴＲ２が、リンパ球刺激において関連するか否か
試験することを、本発明者らに促す。

【０６７２】 （ＴＲ２−Ｆｃは、ＰＢＭＣのＭＬＲ媒介増殖と調和する） リンパ球増殖における、細胞表面ＴＲ２とそのリガンドとの可能な関与を決定
するために、本発明者らは、同種異系ＭＬＲ増殖性応答を試験した。ＴＲ２−Ｆ
ｃを培養に添加した場合、最大応答の有意な減少を観測した（ｐ＜０．０５）。
１００μｇ／ｍｌでのＴＲ２−Ｆｃの添加は、５３％まで増殖を阻害した。コン
トロールＩＬ−５Ｒ−Ｆｃでは、増殖の有意な阻害は観測されなかった。驚きべ
きことに、高濃度（１０〜１００μｇ／ｍｌ）において、ＩＬ−Ｒ５−Ｆｃは、
増殖を増強することを示した。同時にアッセイされた抗ＣＤ４ｍＡｂは、６０％
までＭＬＲ媒介増殖を阻害したが、コントロールである抗ＩＬ−５ｍＡｂは、増
殖を阻害することができなかった。ＭＬＲ増殖性応答の主要な成分は、Ｔ細胞依
存性であることは、周知である；従って、ＴＲ２とそのリガンドとの相互作用を
阻害することは、最適なＴリンパ球活性化および増殖を防ぐようである。１〜１
００μｇ／ｍｌの濃度でのＴＲ２−ＦｃによるＭＬＲ増殖の阻害は、ＣＤ４０−
Ｆｃのような他のＴＮＦＲ−Ｆｃスーパーファミリーのメンバーで見られる生物
学的効果に、好ましいは、匹敵する（未公開の結果、Ｊｅｒｅｍｙ Ｈａｒｒｏ
ｐ）。

【０６７３】 従って、本発明者らは、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーのさらなるメン
バーを同定した。そのメンバーは、Ｔ細胞刺激において直接的な役割を果たすか
、またはＴＲ２を含み得る１つ以上のレセプターを介してＴ細胞増殖を刺激し得
るリガンドに結合するかのいずれかである。ＴＲ２についての直接的な役割と一
貫しているのは、細胞質ドメインとＣＤ４０および４−１ＢＢとの類似性である
。本発明者らは、現在、その役割を明確にするために、どのＴＲ２がこのリガン
ドに結合するのかを同定することを試みている。

【０６７４】 （実施例７） （内因性ＴＲ２レセプター遺伝子を使用する遺伝子治療） 本発明に従う遺伝子治療の別の方法は、例えば、１９９７年６月２４日に発行
された米国特許第５，６４１，６７０号；１９９６年９月２６日に公開された国
際出願公開第ＷＯ９６／２９４１１号，１９９４年８月４日に公開された国際出
願公開第ＷＯ９４／１２６５０号；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌ
ｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：４３５−４３８（１９８９）に記載されるよ
うに、内在性ＴＲ２レセプター配列を、相同組換えによってプロモーターに作動
可能に連結する工程を含む。この方法は、標的細胞内に存在するが、その細胞に
おいて発現されないか、または所望されるレベルよりも低いレベルで発現される
遺伝子の活性化を含む。ポリヌクレオチド構築物を作製し、このポリヌクレオチ
ド構築物は、プロモーターおよび標的配列を含み、この標的配列は、内在性ＴＲ
２レセプターの５’非コード配列と相同であり、プロモーターに隣接する。標的
配列は、ＴＲ２レセプター遺伝子の５’末端の十分近くに存在しているので、プ
ロモーターは、相同組換えの際に内在性配列と作動可能に連結される。このプロ
モーターおよび標的配列を、ＰＣＲを使用して増幅し得る。好ましくは、増幅さ
れたプロモーターは、５’末端および３’末端に異なる制限酵素部位を含む。好
ましくは、第１の標的配列の３’末端は、増幅されたプロモーターの５’末端と
同じ制限酵素部位を含み、そして、第２標的配列の５’末端は、増幅されたプロ
モーターの３’末端と同じ制限酵素部位を含む。

【０６７５】 増幅されたプロモーターおよび増幅された標的配列を、適切な制限酵素を用い
て消化し、引き続いて仔ウシ腸ホスファターゼを用いて処理する。消化したプロ
モーター配列および消化した標的配列を、Ｔ４ＤＮＡリガーゼの存在下に一緒に
添加する。得られた混合物を、２つのフラグメントの連結のために適切な条件下
に維持する。この構築物をアガロースゲル上でサイズ分別し、次いでフェノール
抽出およびエタノール沈殿によって、精製する。

【０６７６】 この実施例において、このポリヌクレオチド構築物を、エレクトロポレーショ
ンによって裸のポリヌクレオチドとして投与する。しかしまた、このポリヌクレ
オチド構築物をトランスフェクション促進剤（例えば、リポソーム、ウイルス配
列、ウイルス粒子、沈殿化剤など）と共に投与する。そのような送達方法は、当
該分野において公知である。

【０６７７】 一旦、細胞がトランスフェクトされると、内在性ＴＲ２レセプター遺伝子配列
と作動可能に連結されるプロモーターを生じる相同組換えが生じる。これは、細
胞内にＴＲ２レセプターの発現を生じる。発現は、免疫学的染色または当該分野
において公知の任意の他の方法によって検出され得る。

【０６７８】 線維芽細胞を、皮膚生検により被験体から得る。得られた組織をＤＭＥＭおよ
び１０％ウシ胎児血清中に置く。対数増殖期または静止期初期の線維芽細胞をト
リプシン処理し、そして、栄養培地を用いてプラスチック表面からすすぎ落とす
。細胞懸濁物のアリコートを、計数するために取り出して、残りの細胞を遠心分
離に供する。上清を吸い出し、ペレットを５ｍｌのエレクトロポレーション緩衝
液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．３、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣ
ｌ、０．７ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、６ｍＭ デキストロース）中に再懸濁する。
細胞を再遠心分離し、上清を吸い出し、そして細胞を、１ｍｇ／ｍｌアセチル化
ウシ血清アルブミンを含むエレクトロポレーション緩衝液中に再懸濁する。最終
的な細胞懸濁物は、およそ３×１０⁶細胞／ｍｌを含む。エレクトロポレーショ
ンを、再懸濁後すぐに実施すべきである。

【０６７９】 プラスミドＤＮＡを、標準的技術に従って調製する。例えば、ＴＲ２レセプタ
ー遺伝子座をターゲティングするためのプラスミドを構築するために、プラスミ
ドｐＵＣ１８（ＭＢＩ Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ａｍｈｅｒｓｔ、ＮＹ）をＨｉｎ
ｄＩＩＩで消化する。ＣＭＶプロモーターを、５’末端のＸｂａＩ部位および３
’末端のＢａｍＨＩ部位を用いてＰＣＲによって増幅する。２つのＴＲ２レセプ
ター遺伝子非コード配列をＰＣＲによって増幅する：１つのＴＲ２非コード配列
（ＴＲ２遺伝子フラグメント１）を５’末端のＨｉｎｄＩＩＩ部位および３’末
端のＸｂａ部位を用いて増幅する；もう一方のＴＲ２レセプター遺伝子非コード
配列（ＴＲ２遺伝子フラグメント２）を５’末端のＢａｍＨＩ部位および３’末
端のＨｉｎｄＩＩＩ部位を用いて増幅する。ＣＭＶプロモーターおよびＴＲ２遺
伝子フラグメントを、適切な酵素（ＣＭＶプロモーター−ＸｂａＩおよびＢａｍ
ＨＩ；ＴＲ２遺伝子フラグメント１−ＸｂａＩ；ＴＲ２遺伝子フラグメント２−
ＢａｍＨＩ）で消化し、そして共に連結させる。生じた連結産物を、ＨｉｎｄＩ
ＩＩで消化し、そしてＨｉｎｄＩＩＩで消化したｐＵＣ１８プラスミドと連結さ
せる。

【０６８０】 プラスミドＤＮＡを、０．４ｃｍ電極ギャップ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を備える滅
菌キュベットに添加する。最終ＤＮＡ濃度は、一般的に少なくとも１２０μｇ／
ｍｌである。次いで、０．５ｍｌの細胞懸濁物（およそ１．５×１０⁶個の細胞
を含む）をキュベットに添加し、そして細胞懸濁物およびＤＮＡ溶液を穏やかに
混合する。エレクトロポレーションを、Ｇｅｎｅ−Ｐｕｌｓｅｒ装置（Ｂｉｏ−
Ｒａｄ）を用いて実施する。電気容量および電圧をそれぞれ、９６０μＦおよび
２５０−３００Ｖに設定する。電圧が増加するにつれて、生存細胞は減少するが
、そのゲノムに導入ＤＮＡを安定に組み込む生存細胞の割合は、劇的に増加する
。これらのパラメーターを想定すると、およそ１４〜２０ｍ秒のパルス時間が観
察されるはずである。

【０６８１】 エレクトロポレーションされた細胞を、およそ５分間室温で維持し、次いでキ
ュベットの内容物を、滅菌転移ピペットを用いて穏やかに取り出す。細胞を、１
０ｃｍ皿内の１０ｍｌの予め暖められた栄養培地（１５％ウシ血清を有するＤＭ
ＥＭ）に直接添加して、そして３７℃でインキュベートする。次の日、培地を吸
い出して、そして１０ｍｌの新鮮な培地と交換し、さらに１６〜２４時間インキ
ュベートする。

【０６８２】 次いで、操作された線維芽細胞を、単独でか、またはサイトデックス（ｃｙｔ
ｏｄｅｘ）３マイクロキャリアビーズ上でコンフルエントになるまで増殖させた
後かのいずれかで、宿主に注入する。ここで、この線維芽細胞は、タンパク質産
物を産生する。次いで、線維芽細胞は、上記のように患者に導入され得る。

【０６８３】 （実施例８） （Ｂ細胞増殖および分化の刺激または阻害を検出するためのアッセイ） （背景：） 機能性体液性免疫応答の生成は、溶解性およびＢ直系細胞とそれらのミクロ環
境との間の同族のシグナル伝達の両方を必要とする。シグナルは、Ｂ直系細胞を
、そのプログラムされた発達を継続することを可能にするポジティブ刺激、また
はその現在の発達経路を阻止するように細胞に指示するネガティブ刺激を付与し
得る。現在までに、多数の刺激シグナルおよび阻害シグナル（ＩＬ−２、ＩＬ−
４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０，ＩＬ−１３、ＩＬ−１４およ
びＩＬ−１５）は、Ｂ細胞応答性に影響することが見出されている。興味深こと
に、これらのシグナルは、それ自体によって、弱いエフェクターであるが、種々
の共刺激タンパク質と組み合わせて、Ｂ細胞集団で、活性化、増殖、分化、ホー
ミング、耐性、および死を誘起する。Ｂ細胞共刺激タンパク質の最もよく研究さ
れたクラスの１つは、ＴＮＦスーパーファミリーである。このファミリーにおい
て、ＣＤ４０、ＣＤ２７およびＣＤ３０は、それらの各々のリガンドＣＤ１５４
、ＣＤ７０およびＣＤ１５３とともに、種々の免疫応答を調節することが見出さ
れている。Ｂ細胞集団およびそれらの前駆体の増殖および分化の検出および／ま
たは観測を可能にするアッセイは、増殖および分化の観点からこれらのＢ細胞集
団に対する、種々のタンパク質が有し得る効果を決定する際に役立つ道具である
。以下に列挙されるのは、Ｂ細胞集団およびそれらの前駆体の分化、増殖、また
は阻害の検出を可能にするように設計された２つのアッセイである。

【０６８４】 （実験手順：） インビトロアッセイ−精製したＴＲ２レセプタータンパク質、またはその短縮
形態は、Ｂ細胞集団およびそれらの前駆体における活性化、増殖、分化、あるい
は阻害および／または死を誘導する（または阻害する）、それらの能力について
アッセイされる。０．１〜１０，０００ｎｇ／ｍｌの用量範囲にわたって定性的
に測定された、ＴＲ２レセプタータンパク質の、精製されたヒト扁桃Ｂ細胞に対
する活性を、標準的なＢリンパ球共刺激アッセイにおいてアッセイし、このアッ
セイにおいて、精製された扁桃Ｂ細胞は、ホルマリン固定Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ Ｃｏｗａｎ Ｉ（ＳＡＣ）またはプライミング薬剤と
して固定化された抗ヒトＩｇＭ抗体のいずれかの存在下で培養される。ＩＬ−２
よおびＩＬ−１５のような第２のシグナルは、トリチウム化チミジン組込みによ
って測定されるように、Ｂ細胞増殖を誘発するために架橋されたＳＡＣおよびＩ
ｇＭと共働（ｓｙｎｅｒｇｉｚｅ）する。新規な共働薬剤は、このアッセイを使
用して容易に同定され得る。このアッセイは、ＣＤ３ポジティブ細胞の磁気ビー
ズ（ＭＡＣＳ）除去によってヒト扁桃Ｂ細胞を単離する工程を包含する。得られ
た細胞集団は、ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）の発現によって評価される、９５％より
多いＢ細胞である。各サンプルの種々の希釈物を、９６ウェルプレートの個々の
ウェルに配置し、そのウェルに、培養培地（１０％ＦＢＳ、５×１０^-5Ｍ ２Ｍ
Ｅ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、およ
び１０^-5希釈のＳＡＣを含むＲＰＭＩ１６４０）に懸濁された１０⁵個のＢ細胞
を全量１５０μｌで添加する。増殖または阻害を、因子添加後７２時間で開始す
る３Ｈ−チミジン（６．７Ｃｉ／ｍＭ）を用いる２０時間パルス（１μＣｉ／ウ
ェル）によって定量化する。ポジティブおよびネガティブコントロールは、それ
ぞれＩＬ−２および培地である。

【０６８５】 ヒトＩｇＧｌ免疫グロブリン分子のＦｃ部分に連結した、ＴＲ２の細胞外ドメ
インからなるＴＲ２の溶解形態が調製された。このタンパク質のヒトＢ細胞の増
殖性応答を変更する能力を、標準的な共刺激アッセイにおいて評価した。簡潔に
は、ヒト扁桃Ｂ細胞を、ＣＤ３ポジティブ細胞の磁気ビーズ（ＭＡＣＳ）除去に
よって精製した。得られた細胞集団は、ＣＤ１９およびＣＤ２０染色の発現によ
って評価されるように、慣用的に９５％より多いＢ細胞であった。種々の希釈の
ｒＨｕＮｅｕｔｒｏｋｉｎｅ−α（ＷＯ ９８／１８９２１）またはコントロー
ルタンパク質ｒＨｕＩＬ−２を９６ウェルプレートの個々のウェルに配置し、こ
のウェルに、培養培地（１０％ＦＢＳ、５×１０^-5Ｍ ２ＭＥ、１００Ｕ／ｍｌ
のペニシリン、１０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および１０^-5希釈のホル
マリン固定Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ Ｃｏｗａｎ Ｉ（Ｓ
ＡＣ）（Ｐａｎｓｏｒｂｉｎ（Ｐａｎ）としても知られる）を含むＲＰＭＩ１６
４０）に懸濁された１０⁵個のＢ細胞を全量１５０μｌで添加した。次いで、Ｔ
Ｒ２−Ｆｃを種々の濃度で添加した。次いで、プレートをインキュベータ（３７
℃５％ＣＯ₂、９５％湿度）に３日間置いた。増殖を、因子添加後７２時間で開
始する³Ｈ−チミジン（６．７Ｃｉ／ｍＭ）を用いる２０時間パルス（１μＣｉ
／ウェル）によって定量化した。ポジティブおよびネガティブコントロールは、
それぞれＩＬ−２および培地である。

【０６８６】 ３つのこのような実験の結果は、ＴＲ２−Ｆｃが、プライミング薬剤としてＳ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ Ｃｏｗａｎ Ｉ（ＳＡＣ）および
第２のシグナルとしてＮｅｕｔｒｏｋｉｎｅ−αを使用する共刺激アッセイにお
けるＢ細胞増殖の用量依存性阻害を引き起こすことを確認した。両方の実験にお
いて観測された阻害は、ＴＲ２−Ｆｃの２０ｎｇ／ｍＬほどに低い濃度で５０％
よりも大きかった。他の腫瘍壊死因子レセプター（ＴＨＦＲ）融合タンパク質（
例えば、ＤＲ４−Ｆｃ（ＷＯ ９８／３２８５６）、ＴＲ６−Ｆｃ（ＷＯ ９８
／３１７９９）、およびＴＲ９−Ｆｃ（ＷＯ ９８／５６８９２））は、増殖を
阻害しなかったことを注意することは重要である。

【０６８７】 ＴＲ２−Ｆｃの阻害活性は、Ｎｅｕｔｒｏｋｉｎｅ−αおよびＳＡＣ刺激細胞
に対して特異的であるかどうか、またはそれがＢ細胞増殖のより一般的なネガテ
ィブレギュレータであるかどうかを決定するために、扁桃Ｂ細胞がＩＬ−２およ
びＳＡＣで刺激される同様の実験を行った。その結果は、ＴＲ２−Ｆｃはまた、
ＩＬ−２駆動Ｂ細胞増殖の用量依存性阻害を誘起したことを示す（図１７を参照
のこと）。先の実験と一貫して、５０％阻害が、約２０ｎｇ／ｍＬのＴＲ２−Ｆ
ｃを用いて達成された。従って、ＴＲ２−Ｆｃは、Ｎｅｕｔｒｏｋｉｎｅ−αを
用いるＢ細胞の刺激とは関係なく、Ｂ細胞増殖をネガティブに調節するようであ
る。

【０６８８】 インビボアッセイ−ＢＡＬＢ／ｃマウスを、緩衝液のみ、または２ｍｇ／Ｋｇ
のＴＲ２レセプタータンパク質、またはその短縮形態で１日に２回注射する（腹
腔内）。マウスは、４日間連続してこの処置を受け、それらが、死亡させられた
ときに、種々の組織および血清を分析のために回収する。正常およびＴＲ２レセ
プタータンパク質処置脾臓からのＨ＆Ｅ部分の比較は、ＴＲ２レセプタータンパ
ク質の脾臓細胞に対する活性（例えば、動脈周囲のリンパ鞘の拡散、および／ま
たは赤脾髄領域の有核細胞性の有意な増加）の結果と一致する。このことは、Ｂ
細胞集団の分化および増殖の活性化を示し得る。Ｂ細胞マーカーである抗ＣＤ４
５Ｒ（Ｂ２２０）を使用する免疫組織化学的研究を使用して、脾細胞に対する任
意の生理学的な変化（例えば、脾組織崩壊）は、確立されたＴ細胞領域に浸透す
る大まかに規定されたＢ細胞ゾーン内でのＢ細胞提示の増加に起因するか否かを
決定する。

【０６８９】 ＴＲ２レセプタータンパク質処置マウスからの脾臓のフローサイトメトリー分
析を使用して、ＴＲ２レセプタータンパク質は、コントロールマウスにおいて観
測される、ＴｈＢ＋、ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）ｄｕｌｌＢ細胞の割合を特異的に
増加させるか否かを示す。

【０６９０】 同様に、インビボでの成熟Ｂ細胞提示増加の予測された結果は、血清Ｉｇ力価
の相対的な増加である。従って、血清ＩｇＭおよびＩｇＡレベルは、緩衝液とＴ
Ｒ２レセプタータンパク質処置マウスとの間で比較される。

【０６９１】 （実施例９） （ｓｃＦｖｓのライブラリからの本発明のポリペプチドに対して指向された抗
体フラグメントの単離） ヒトＰＢＬから単離した天然に存在するＶ遺伝子を、本発明のポリペプチド（
ドナーは、これらに対して曝露されていても曝露されていなくともよい）に対す
る反応性を含む抗体フラグメントのライブラリーに構築する（例えば、米国特許
第５，８８５，７９３号（その全体が参考として本明細書に援用される）を参照
のこと）。

【０６９２】 （実験手順：） （ライブラリーのレスキュー（ｒｅｓｃｕｅ）） ＷＯ ９２／０１０４７に
記載のように、ヒトＰＢＬのＲＮＡからｓｃＦｖのライブラリーを構築する。抗
体フラグメントを提示するファージをレスキューするため、ファージミドを保有
する約１０⁹個のＥ．ｃｏｌｉを用いて、５０ｍｌの２×ＴＹ（１％グルコース
および１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含有する）（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＧＬ
Ｕ）を接種し、そして振盪しながら０．８のＯ．Ｄ．まで増殖させる。この培養
物の５ｍｌを用いて５０ｍｌの２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＧＬＵに接種し、２×１０⁸
ＴＵのΔ遺伝子３ヘルパー（Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩ、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１
０４７を参照のこと）を添加し、そして培養物を振盪なしで３７℃で４５分間イ
ンキュベートし、次いで振盪しながら３７℃で４５分間インキュベートする。こ
の培養物を１０分間４０００ｒ．ｐ．ｍ．で遠心分離し、そしてペレットを２リ
ットルの２×ＴＹ（１００μｇ／ｍｌアンピシリンおよび５０μｇ／ｍｌカナマ
イシンを含有する）中に再懸濁し、そして一晩増殖させる。ファージをＷＯ９２
／０１０４７に記載のように調製する。

【０６９３】 Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩを以下のように調製する：Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩヘルパ
ーファージは、遺伝子ＩＩＩタンパク質をコードしない。それゆえ、抗体フラグ
メントを提示するファージ（ファージミド）は、抗原に対するより大きい結合ア
ビディティーを有する。ファージ形態形成の間、野生型遺伝子ＩＩＩタンパク質
を供給するｐＵＣ１９誘導体を保有する細胞においてヘルパーファージを増殖さ
せることにより、感染性Ｍ１３Δ遺伝子ＩＩＩ粒子を作製する。培養物を振盪な
しで３７℃で１時間インキュベートし、次いで振盪しながら３７℃でさらに１時
間インキュベートする。細胞を遠心沈殿（ＩＥＣ−Ｃｅｎｔｒａ ８，４００ｒ
．ｐ．ｍ．で１０分間）し、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２５μｇ／
ｍｌのカナマイシンを含有する２×ＴＹブロス（２×ＴＹ−ＡＭＰ−ＫＡＮ）３
００ｍｌ中で再懸濁し、そして３７℃で振盪しながら一晩増殖させた。ファージ
粒子を、２回のＰＥＧ沈殿（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９０）により培養培地か
ら精製および濃縮し、２ｍｌ ＰＢＳに再懸濁し、そして０．４５μｍのフィル
ター（Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＮＭＬ；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を通過させ、約１０¹³ 形質導入単位／ｍｌ（アンピシリン耐性クローン）の最終濃度を得る。

【０６９４】 （ライブラリーのパニング） Ｉｍｍｕｎｏｔｕｂｅｓ（Ｎｕｎｃ）を、本発
明のポリペプチドの１００ｍｇ／ｍｌまたは１０ｍｇ／ｍｌのいずれかの４ｍｌ
を用いてＰＢＳ中で一晩コーティングする。チューブを２％Ｍａｒｖｅｌ−ＰＢ
Ｓを用いて３７℃で２時間ブロックし、次いでＰＢＳ中で３回洗浄する。約１０ ¹³ ＴＵのファージをチューブに適用し、そして、回転盤上で上下にタンブリング
しながら室温で３０分間インキュベートし、次いでさらに１．５時間静置してお
く。チューブをＰＢＳ ０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で１０回、そしてＰＢＳで１
０回洗浄する。１ｍｌの１００ｍＭトリエチルアミンを添加し、そして回転盤上
で１５分間上下に回転させることによりファージを溶出し、その後この溶液を０
．５ｍｌの１．０Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４で直ちに中和する。次いで
、溶出したファージを細菌とともに３７℃で３０分間インキュベートすることに
より、ファージを用いて、１０ｍｌの対数増殖中期のＥ．ｃｏｌｉ ＴＧ１に感
染させる。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉを１％グルコースおよび１００μｇ／ｍｌアン
ピシリンを含有するＴＹＥプレート上にプレーティングする。次いで、得られる
細菌ライブラリーを、上記のようにΔ遺伝子３ヘルパーファージでレスキューし
、次の回の選択のためのファージを調製する。次いで、このプロセスを、アフィ
ニティー精製の全４回について反復し、３回目および４回目にはチューブ洗浄を
ＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で２０回、そしてＰＢＳで２０回に増加する
。

【０６９５】 （バインダーの特徴付け） 第３回目および４回目の選択から溶出したファー
ジを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ ２１５１を感染させ、そして可溶性ｓｃＦｖ
をアッセイのために単一コロニーから生成する（Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１））。５０ｍＭ炭酸水素塩、ｐＨ９
．６中の本発明のポリペプチドの１０ｐｇ／ｍｌのいずれかでコーティングした
マイクロタイタープレートを用いてＥＬＩＳＡを実施する。ＥＬＩＳＡにおける
陽性クローンをＰＣＲフィンガープリンティング（例えば、ＷＯ９２／０１０４
７を参照のこと）、次に配列決定することによりさらに特徴付ける。

【０６９６】 （実施例１０：ＴＲ２レセプター遺伝子における変化の決定方法） 目的の表現型（例えば、疾患）を提示する家族全員または個々の患者からＲＮ
Ａを単離する。次に、ｃＤＮＡをこれらのＲＮＡサンプルから当該分野で公知の
プロトコルを使用して生成する（Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと）。次に、この
ｃＤＮＡを、配列番号１における目的の領域を取り囲むプライマーを用いる、Ｐ
ＣＲのテンプレートとして使用する。示唆されるＰＣＲ条件は、Ｓｉｄｒａｎｓ
ｋｙ，Ｄ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：７０６（１９９１）に記載の緩衝溶液
を使用し、９５℃で３０秒間；５２〜５８℃で６０〜１２０秒間；および７０℃
で６０〜１２０秒間の３５サイクルからなる。

【０６９７】 次に、ＰＣＲ産物を、ＳｅｑｕｉＴｈｅｒｍ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｅｐｉ
ｃｅｎｔｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、その５’末端にＴ４ポリヌ
クレオチドキナーゼを用いて標識したプライマーを使用して配列決定する。ＴＲ
２レセプターの選択したエキソンのイントロン−エキソン境界もまた決定し、ゲ
ノムＰＣＲ産物を分析してその結果を確認する。次に、ＴＲ２レセプターにおけ
る疑わしい変異を有するＰＣＲ産物のクローン化および配列決定を行い、直接配
列決定（ｄｉｒｅｃｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）の結果を確認する。

【０６９８】 ＴＲ２レセプターのＰＣＲ産物を、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｔ．Ａ．およびＧｒａｈａ
ｍ Ｍ．Ｗ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：１１５６（１９９１）
に記載のようにＴテールベクターにクローン化し、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｕｎｉｔ
ｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を用いて配列決定する。罹患個
体を、非罹患個体には存在しないＴＲ２レセプターにおける変異により同定する
。

【０６９９】 ゲノム再配列もまた、ＴＲ２レセプター遺伝子における変化を決定する方法と
して観察される。当該分野において公知の技術を用いて単離したゲノムクローン
を、ジゴキシゲニンデオキシ−ウリジン５’−三リン酸（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｈｅｉｍ）を用いてニックトランスレーションし、そしてＪｏｈｎｓｏ
ｎ．Ｃら、Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． ３５： ７３−９９（１９９１）
に記載のようにＦＩＳＨを行う。ＴＲ２レセプターのゲノム遺伝子座への特異的
ハイブリダイゼーションのために、大過剰のヒトｃｏｔ−１ ＤＮＡを用いて標
識プローブとのハイブリダイゼーションを行う。

【０７００】 染色体を、４，６−ジアミノ−２−フェニリドールおよびヨウ化プロピジウム
で対比染色し、ＣバンドおよびＲバンドの組み合わせを生成する。正確なマッピ
ングのための整列画像を、三重バンドフィルターセット（Ｃｈｒｏｍａ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ，ＶＴ）と冷却電荷結合素子カメラ（
Ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）および可変励起波長フィルタ
ー（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｃら、Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．８：
７５（１９９１））とを組み合わせて用いて得る。ＩＳｅｅ Ｇｒａｐｈｉｃａ
ｌ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｓｙｓｔｅｍ （Ｉｎｏｖｉｓｉｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）を使用して、画像収集、分析および染色体画分（
ｆｒａｇｍｅｎｔａｌ）長測定を行う。（プローブがハイブリダイズした）ＴＲ
２レセプターのゲノム領域の染色体変化を、挿入、欠失および転座として同定す
る。これらのＴＲ２レセプター変化を関連疾患の診断マーカーとして使用する。

【０７０１】 （実施例１１：生物学的サンプル中のＴＲ２レセプターの異常レベルを検出す
る方法） ＴＲ２のポリペプチドは生物学的サンプル中で検出され得、そしてＴＲ２の上
昇または低下が検出される場合には、このポリペプチドは、特定表現型のマーカ
ーである。検出方法は数多くあり、従って、当業者は以下のアッセイをそれらの
特定の必要性に適合するように改変し得ることが理解される。

【０７０２】 例えば、抗体サンドイッチＥＬＩＳＡを使用し、サンプル中（好ましくは、生
物学的サンプル中）のＴＲ２レセプターを検出する。マイクロタイタープレート
のウェルを、最終濃度０．２〜１０μｇ／ｍｌのＴＲ２に特異的な抗体でコーテ
ィングする。この抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであ
って、当該分野において公知の技術により産生される。ウェルへのＴＲ２レセプ
ターの非特異的結合が減少するように、このウェルをブロックする。

【０７０３】 次に、コーティングしたウェルを、ＴＲ２レセプターを含有するサンプルと共
に室温で２時間より長くインキュベートする。好ましくは、サンプルの系列希釈
を使用して結果を確認すべきである。次に、このプレートを脱イオン水または蒸
留水で三回洗浄し、未結合のＴＲ２レセプターを除去する。

【０７０４】 次に、特異的抗体−アルカリホスファターゼ結合体５０μｌを２５〜４００ｎ
ｇの濃度で加え、室温で２時間インキュベートする。このプレートを再び脱イオ
ン水または蒸留水で三回洗浄し、未結合の結合体を除去する。

【０７０５】 次いで、４−メチルウンベリフェリルリン酸（ＭＵＰ）またはｐ−ニトロフェ
ニルリン酸（ＮＰＰ）基質溶液７５μｌを各ウェルに添加し、そして室温で１時
間インキュベートして基質と蛍光の切断を可能にする。この蛍光をマイクロタイ
タープレートリーダーにより測定する。コントロールサンプルの系列希釈からの
実験結果を使用してＸ軸（対数目盛）にサンプル濃度を、そしてＹ軸（一様目盛
）に蛍光または吸光度をプロットして、検量線を作成する。標準曲線を用いてサ
ンプル中のポリペプチド濃度を補間する。次いで、サンプル中のＴＲ２レセプタ
ーポリペプチドの濃度を、このサンプルに関して測定された蛍光に基づく検量線
を使用して補間する。

【０７０６】 （実施例１２：ＴＲ２レセプターのレベル低下を処置する方法） 本発明は、身体内におけるＴＲ２レセプター生物学的活性のレベルを減少させ
る必要のある個体を処置するための方法に関する。この方法は、治療有効量のＴ
Ｒ２レセプターアンタゴニストを含む組成物をそのような個体に投与する工程を
包含する。本発明における使用に好ましいアンタゴニストは、ＴＲ２レセプター
特異的抗体である。

【０７０７】 さらに、個体におけるＴＲ２レセプターの標準または正常な発現レベルの低下
により引き起こされる状態は、ＴＲ２レセプターを、好ましくは可溶性形態およ
び／または分泌形態で投与することにより処置され得ることが理解される。従っ
て、本発明はまた、ＴＲ２レセプターポリペプチドのレベルの増加が必要な個体
の処置方法を提供する。この方法は、このような個体におけるＴＲ２レセプター
の生物学的活性レベルを増加させる量のＴＲ２レセプターを含む薬学的組成物を
このような個体に投与する工程を包含する。

【０７０８】 例えば、減少したレベルのＴＲ２レセプターポリペプチドを有する患者は、６
日間連続して１日用量０．１〜１００μｇ／ｋｇのポリペプチドを受ける。好ま
しくは、このポリペプチドは、可溶性形態および／または分泌形態である。

【０７０９】 （実施例１３：ＴＲ２レセプターのレベル上昇を処置する方法） 本発明はまた、身体内におけるＴＲ２レセプター生物学的活性のレベルの増加
の必要のある個体を処置するための方法に関し、その方法は、治療有効量のＴＲ
２レセプターまたはそのアゴニストを含む組成物をそのような個体に投与する工
程を包含する。

【０７１０】 アンチセンス技術を使用してＴＲ２レセプターの産生を阻害する。この技術は
、癌のような様々な病因に起因するＴＲ２レセプターポリペプチド（好ましくは
可溶性形態および／または分泌形態）のレベルを低下させる方法の１つの例であ
る。

【０７１１】 例えば、ＴＲ２レセプターのレベルが異常に上昇したと診断された患者に、ア
ンチセンスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０
ｍｇ／ｋｇ／日で静脈内に２１日間投与する。この処置に対して十分な耐性と決
定された場合に、７日間の休薬期間後に、この処置を繰り返す。アンチセンスポ
リヌクレオチドの処方は、実施例１０に提供されている。

【０７１２】 （実施例１４：遺伝子治療を使用する処置方法−エキソビボ） 遺伝子治療の１つの方法は、可溶性型および／または成熟型ＴＲ２レセプター
ポリペプチドを発現し得る線維芽細胞を患者に移植する。一般に、線維芽細胞は
、皮膚生検により被験体から得られる。得られた組織を組織培養培地中に配置し
、小片に分割する。組織の小塊を組織培養フラスコの湿潤表面に置き、約１０片
を各フラスコ中に置く。このフラスコを倒置し、しっかりと閉め、そして室温で
一晩放置する。室温で２４時間後、フラスコを反転させ、組織塊をフラスコの底
に固定させたままにし、そして新鮮培地（例えば、１０％ＦＢＳ、ペニシリンお
よびストレプトマイシンを含有するＨａｍ’ｓ Ｆ１２培地）を添加する。次に
、フラスコを３７℃で約１週間インキュベートする。

【０７１３】 この時点で、新鮮培地を添加し、次いで数日ごとに取り換える。さらに二週間
培養した後に単層の線維芽細胞が出現する。単層をトリプシン処理し、さらに大
きなフラスコにスケールアップする。

【０７１４】 モロニーマウス肉腫ウイルスの長末端反復が隣接するｐＭＶ−７（Ｋｉｒｓｃ
ｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））をＥｃｏ
ＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、仔ウシ腸ホスファターゼで処理する。
線状ベクターをアガロースゲルで分画し、そしてガラスビーズを使用して精製す
る。

【０７１５】 ＴＲ２レセプターをコードするｃＤＮＡを、５’および３’末端コード配列に
それぞれ対応するＰＣＲプライマーを使用して増幅し得る。好ましくは、５’プ
ライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そして３’プライマーはＨｉｎｄＩＩＩ部位
を含む。等量の、モロニーマウス肉腫ウイルス線状骨格および増幅したＥｃｏＲ
ＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの存在下で一緒
に添加する。得られた混合物を二つのフラグメントを連結するに適切な条件下で
維持する。次に、連結混合物を使用し、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１を形質転換す
る。次に、それを、カナマイシンを含む寒天上にプレーティングし、ベクターが
、適切に挿入されたＴＲ２レセプターを含むことを確認する。

【０７１６】 アンホトロピックｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、１
０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むＤｕｌｂ
ｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ）中、組織培養でコンフルエントな密度
まで増殖させる。次に、ＴＲ２レセプター遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に
加え、そしてパッケージング細胞にベクターを形質導入する。このとき、パッケ
ージング細胞はＴＲ２レセプター遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（
ここで、パッケージング細胞をプロデューサー細胞という）。

【０７１７】 形質導入されたプロデューサー細胞に新鮮培地を添加し、次いで培地をコンフ
ルエントなプロデューサー細胞の１０ｃｍプレートから採取する。感染性ウイル
ス粒子を含む使用済み培地を、ミリポアー（ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）フィルターを
通して濾過し、はがれたプロデューサー細胞を除去し、次いで、この培地を使用
して、線維芽細胞を感染させる。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートか
ら培地を除去し、そしてプロデューサー細胞からの培地と速やかに置き換える。
この培地を除去し、そして新鮮培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、
実質的にすべての線維芽細胞が感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低
い場合、ｎｅｏまたはｈｉｓのような選択マーカーを有するレトロウイルスベク
ターを使用することが必要である。一旦、線維芽細胞が効率的に感染すると、線
維芽細胞を分析し、ＴＲ２レセプタータンパク質が産生されているか否かを決定
する。

【０７１８】 次に、操作された線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス３（ｃｙｔｏ
ｄｅｘ ３）マイクロキャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいず
れかで宿主に移植する。

【０７１９】 （実施例１５：遺伝子治療を使用する処置方法−インビボ） 本発明の別の局面は、障害、疾患、および状態を処置するためにインビボ遺伝
子治療方法を使用することである。この遺伝子治療法は、ＴＲ２レセプターポリ
ペプチドの発現を増大または減少させるための、動物への裸の核酸（ＤＮＡ、Ｒ
ＮＡ、およびアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）ＴＲ２レセプター配列の導入に
関する。ＴＲ２レセプターポリヌクレオチドは、プロモーター、または標的組織
によるＴＲ２レセプターポリペプチドの発現に必要な任意の他の遺伝的エレメン
トに、作動可能に連結され得る。このような遺伝子治療および送達の技術および
方法は、当該分野で公知であり、例えば、国際出願公開番号ＷＯ９０／１１０９
２、国際出願公開番号ＷＯ９８／１１７７９；米国特許第５，６９３，６２２号
、同第５，７０５，１５１号、同第５，５８０，８５９号；Ｔａｂａｔａ Ｈ．
ら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．３５：４７０−４７９（１９９７）；Ｃｈ
ａｏ Ｊ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．３５：５１７−５２２（１９９７
）；Ｗｏｌｆｆ Ｊ．Ａ．、Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．７：３１
４−３１８（１９９７）、Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｂ．ら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．３
：４０５−４１１（１９９６）；Ｔｓｕｒｕｍｉ Ｙ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉ
ｏｎ ９４：３２８１−３２９０（１９９６）（本明細書中に参考として援用さ
れる）を参照のこと。

【０７２０】 ＴＲ２レセプターポリヌクレオチド構築物は、注射可能な物質を動物の細胞に
送達する任意の方法（例えば、組織（心臓、筋肉、皮膚、肺、肝臓、腸など）の
間隙空間への注射）によって送達され得る。ＴＲ２レセプターポリヌクレオチド
構築物は、薬学的に受容可能な液体または水性キャリア中で送達され得る。

【０７２１】 用語「裸の」ポリヌクレオチド、ＤＮＡまたはＲＮＡは、細胞への進入を補助
、促進、または容易にするように作用するいかなる送達ビヒクル（ウイルス配列
、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチン、または沈澱剤などを含む
）も含まない配列をいう。しかし、ＴＲ２レセプターポリヌクレオチドはまた、
当業者に周知の方法によって調製され得るリポソーム処方物（例えば、Ｆｅｌｇ
ｎｅｒ Ｐ．Ｌ．ら（１９９５）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７２：１
２６−１３９およびＡｂｄａｌｌａｈ Ｂ．ら（１９９５）Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ
８５：１−７で教示されたもの）中で送達され得る。

【０７２２】 この遺伝子治療方法において使用されるＴＲ２レセプターポリヌクレオチドベ
クター構築物は、好ましくは、宿主ゲノムに組み込まれず、複製を可能にする配
列も含まない構築物である。当業者に公知の任意の強力なプロモーターが、ＤＮ
Ａの発現を駆動するために用いられ得る。他の遺伝子治療技術とは異なり、裸の
核酸配列を標的細胞に導入する１つの主要な利点は、その細胞におけるポリヌク
レオチド合成の一過性の性質である。研究によって、非複製ＤＮＡ配列が細胞に
導入されて、６ヶ月までの間の期間、所望のポリペプチドの産生を提供し得るこ
とが示されている。

【０７２３】 ＴＲ２レセプターポリヌクレオチド構築物は、動物内の組織（筋肉、皮膚、脳
、肺、肝臓、脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、
胆嚢、胃、腸、精巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、および結合組織を包
含する）の間隙空間に送達され得る。この組織の間隙空間は、細胞間液、ムコ多
糖基質（器官組織の細網線維、血管または室（ｃｈａｍｂｅｒ）の壁における弾
性線維、線維性組織におけるコラーゲン線維の間にある）、あるいは筋肉細胞を
覆う結合組織内または骨の裂孔中の同じ基質を包含する。これは、同様に、循環
の血漿およびリンパチャンネルのリンパ液により占められた空間である。筋肉組
織の間隙空間への送達は、以下に考察する理由のために好ましい。それらは、こ
れらの細胞を含む組織への注射によって、好都合に送達され得る。それらは、好
ましくは、分化した持続性の非分裂細胞に送達され、そしてその細胞において発
現されるが、送達および発現は、非分化細胞または完全には分化していない細胞
（例えば、血液の幹細胞または皮膚線維芽細胞）において達成され得る。インビ
ボで、筋肉細胞は、ポリヌクレオチドを取り込みそして発現する能力において、
特に適格である。

【０７２４】 裸のＴＲ２レセプターポリヌクレオチド注射のために、ＤＮＡまたはＲＮＡの
有効投薬量は、約０．０５ｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である
。好ましくは、この投薬量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇで
あり、そしてより好ましくは、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇである
。もちろん、当業者が認識するように、この投薬量は、注射の組織部位に従って
変化する。核酸配列の適切かつ有効な投薬量は、当業者によって容易に決定され
得、そして処置される状態および投与経路に依存し得る。好ましい投与経路は、
組織の間隙空間への非経口注射経路によってである。しかし、他の非経口経路も
また用いられ得、これには、例えば、特に肺または気管支組織、咽喉、または鼻
の粘膜への送達のためのエアロゾル処方物の吸入が挙げられる。さらに、裸のＴ
Ｒ２レセプターポリヌクレオチド構築物が、血管形成術の間にこの手順において
用いられるカテーテルによって動脈に送達され得る。

【０７２５】 インビボでの筋肉における注射されたＴＲ２レセプターポリヌクレオチドの用
量応答効果を、以下のようにして決定する。ＴＲ２レセプターポリペプチドをコ
ードするｍＲＮＡの生成のための適切なＴＲ２レセプター鋳型ＤＮＡを、標準的
な組換えＤＮＡ方法論に従って調製する。鋳型ＤＮＡ（これは環状または線状の
いずれかであり得る）は裸のＤＮＡとして使用されるか、またはリポソームと複
合体化されるかのいずれかである。次いで、マウスの四頭筋に、種々の量の鋳型
ＤＮＡを注射する。

【０７２６】 ５〜６週齢の雌性および雄性のＢａｌｂ／Ｃマウスに、０．３ｍｌの２．５％
Ａｖｅｒｔｉｎを腹腔内注射することにより麻酔する。１．５ｃｍの切開を大腿
前部で行い、そして四頭筋を直接可視化する。ＴＲ２レセプター鋳型ＤＮＡを、
０．１ｍｌのキャリアに入れて、１ｃｃ注射器で２７ゲージ針を通して１分間に
わたって、筋肉の遠位挿入部位から約０．５ｃｍのところで膝に、約０．２ｃｍ
の深さで注射する。縫合を、将来の位置決定のために注射部位の上で行い、そし
てその皮膚をステンレス鋼クリップで閉じる。

【０７２７】 適切なインキュベーション時間（例えば、７日間）後、筋肉抽出物を、四頭筋
全体を切り出すことによって調製する。個々の四頭筋の５枚目毎の１５μｍ切片
を、ＴＲ２レセプタータンパク質発現について組織化学的に染色する。ＴＲ２レ
セプタータンパク質発現についての時間経過は、異なるマウスからの四頭筋を異
なる時間で採取すること以外は、同様な様式で行い得る。注射後の筋肉中のＴＲ
２レセプターのＤＮＡの持続性を、注射したマウスおよびコントロールマウスか
らの全細胞性ＤＮＡおよびＨＩＲＴ上清を調製した後、サザンブロット分析によ
って決定し得る。マウスにおける上記実験の結果は、ＴＲ２レセプターの裸のＤ
ＮＡを用いて、ヒトおよび他の動物において適切な投薬量および他の処置パラメ
ーターを外挿し得る。

【０７２８】 （実施例１６：内在性ＴＲ２レセプター遺伝子を使用する遺伝子治療） 本発明に従う遺伝子治療の別の方法は、例えば、１９９７年６月２４日に発行
された米国特許第５，６４１，６７０号；１９９６年９月２６日に公開された国
際出願公開第ＷＯ９６／２９４１１号，１９９４年８月４日に公開された国際出
願公開第ＷＯ９４／１２６５０号；Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：８９３２−８９３５（１９８９）；およびＺｉｊｌ
ｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒｅ３４２：４３５−４３８（１９８９）に記載されるよ
うに、内在性ＴＲ２レセプター配列を、相同組換えによってプロモーターに作動
可能に連結する工程を含む。この方法は、標的細胞内に存在するが、その細胞に
おいて発現されないか、または所望されるレベルよりも低いレベルで発現される
遺伝子の活性化を含む。プロモーター配列およびプロモーター配列に隣接してお
り、内在性ＴＲ２レセプターの５’非コード配列と相同である標的配列を含むポ
リヌクレオチド構築物を作製する。標的配列は、ＴＲ２レセプターの５’末端の
十分近くに存在しているので、プロモーターは、相同組換えの際に内在性配列と
作動可能に連結される。このプロモーター配列および標的配列を、ＰＣＲを使用
して増幅し得る。好ましくは、増幅されたプロモーターは、５’末端および３’
末端に異なる制限酵素部位を含む。好ましくは、第１の標的配列の３’末端は、
増幅されたプロモーターの５’末端と同じ制限酵素部位を含み、そして、第２標
的配列の５’末端は、増幅されたプロモーターの３’末端と同じ制限酵素部位を
含む。

【０７２９】 増幅されたプロモーターおよび増幅された標的配列を、適切な制限酵素を用い
て消化し、引き続いて仔ウシ腸ホスファターゼを用いて処理する。消化したプロ
モーター配列および消化した標的配列を、Ｔ４ＤＮＡリガーゼの存在下に一緒に
添加する。得られた混合物を、２つのフラグメントの連結のために適切な条件下
に維持する。この構築物をアガロースゲル上でサイズ分別し、次いでフェノール
抽出およびエタノール沈殿によって、精製する。

【０７３０】 この実施例において、このポリヌクレオチド構築物を、エレクトロポレーショ
ンによって裸のポリヌクレオチドとして投与する。しかしまた、このポリヌクレ
オチド構築物をトランスフェクション促進剤（例えば、リポソーム、ウイルス配
列、ウイルス粒子、沈殿化剤など）と共に投与する。そのような送達方法は、当
該分野において公知である。

【０７３１】 一旦、細胞がトランスフェクトされると、内在性ＴＲ２レセプター配列と作動
可能に連結されるプロモーターを生じる相同組換えが生じる。これは、細胞内に
ＴＲ２レセプターの発現を生じる。発現は、免疫学的染色または当該分野におい
て公知の任意の他の方法によって検出され得る。

【０７３２】 線維芽細胞を、皮膚生検により被験体から得る。生じた組織をＤＭＥＭおよび
１０％ウシ胎児血清中に置く。対数増殖期または静止期初期の線維芽細胞をトリ
プシン処理し、そして、栄養培地を用いてプラスチック表面からすすぎ落とす。
細胞懸濁物のアリコートを、計数するために取り出して、残りの細胞を遠心分離
に供する。上清を吸い出し、ペレットを５ｍｌのエレクトロポレーション緩衝液
（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．３、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ
、０．７ｍＭ Ｎａ₂ＨＰＯ₄、６ｍＭ デキストロース）中に再懸濁する。細胞
を再遠心分離し、上清を吸い出し、そして細胞を、１ｍｇ／ｍｌアセチル化ウシ
血清アルブミンを含むエレクトロポレーション緩衝液中に再懸濁する。最終的な
細懸濁物は、およそ３×１０⁶細胞／ｍｌを含む。エレクトロポレーションを、
再懸濁後すぐに実施すべきである。

【０７３３】 プラスミドＤＮＡを、標準的技術に従って調製する。例えば、ＴＲ２レセプタ
ー遺伝子座をターゲティングするためのプラスミドを構築するために、プラスミ
ドｐＵＣ１８（ＭＢＩ Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ａｍｈｅｒｓｔ、ＮＹ）をＨｉｎ
ｄＩＩＩで消化する。ＣＭＶプロモーターを、５’末端のＸｂａＩ部位および３
’末端のＢａｍＨＩ部位を含むようにＰＣＲによって増幅する。２つのＴＲ２レ
セプター非コード配列をＰＣＲによって増幅する：１つのＴＲ２レセプター非コ
ード配列（ＴＲ２レセプターフラグメント１）を５’末端のＨｉｎｄＩＩＩ部位
および３’末端のＸｂａ部位を含むように増幅する；もう一方のＴＲ２レセプタ
ー非コード配列（ＴＲ２レセプターフラグメント２）を５’末端のＢａｍＨＩ部
位および３’末端のＨｉｎｄＩＩＩ部位を含むように増幅する。ＣＭＶプロモー
ターおよびＴＲ２レセプターフラグメントを、適切な酵素（ＣＭＶプロモーター
−ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩ；ＴＲ２レセプターフラグメント１−ＸｂａＩ；Ｔ
Ｒ２レセプターフラグメント２−ＢａｍＨＩ）で消化し、そして共に連結させる
。生じた連結産物を、ＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そしてＨｉｎｄＩＩＩで消化し
たｐＵＣ１８プラスミドと連結させる。

【０７３４】 プラスミドＤＮＡを、０．４ｃｍ電極ギャップ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を備える滅
菌キュベットに添加する。最終ＤＮＡ濃度は、一般的に少なくとも１２０μｇ／
ｍｌである。次いで、０．５ｍｌの細胞懸濁物（およそ１．５×１０⁶個の細胞
を含む）をキュベットに添加し、そして細胞懸濁物およびＤＮＡ溶液を穏やかに
混合する。エレクトロポレーションを、Ｇｅｎｅ−Ｐｕｌｓｅｒ装置（Ｂｉｏ−
Ｒａｄ）を用いて実施する。電気容量および電圧をそれぞれ、９６０μＦおよび
２５０−３００Ｖに設定する。電圧が増加するにつれて、生存細胞は減少するが
、そのゲノムに導入ＤＮＡを安定に組み込む生存細胞の割合は、劇的に増加する
。これらのパラメーターを想定すると、およそ１４〜２０ｍ秒のパルス時間が観
察されるはずである。

【０７３５】 エレクトロポレーションされた細胞を、およそ５分間室温で維持し、次いでキ
ュベットの内容物を、滅菌転移ピペットを用いて穏やかに取り出す。細胞を、１
０ｃｍ皿内の１０ｍｌの予め暖められた栄養培地（１５％ウシ血清を有するＤＭ
ＥＭ）に直接添加して、そして３７℃でインキュベートする。次の日、培地を吸
い出して、そして１０ｍｌの新鮮な培地と交換し、さらに１６〜２４時間インキ
ュベートする。

【０７３６】 次いで、操作された線維芽細胞を、単独でか、またはサイトデックス（ｃｙｔ
ｏｄｅｘ）３マイクロキャリアビーズ上でコンフルエントになるまで増殖させた
後かのいずれかで、宿主に注入する。ここで、この線維芽細胞は、タンパク質産
物を産生する。次いで、この線維芽細胞を、上記の患者に導入し得る。

【０７３７】 （実施例１７：ハイブリドーマ技術を使用する抗体の産生） 本発明の抗体は、種々の方法によって調製され得る。（Ａｕｓｕｂｅｌら編、
１９９８、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｕｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，第２章を参照の
こと）。このような方法の１つの例として、ＴＲ２を発現する細胞は、ポリクロ
ーナル抗体を含む血清の産生を誘導するために動物に投与される。好ましい方法
において、ＴＲ２タンパク質の調製物が調製され、そして精製されて、天然の夾
雑物を実質的に含まないようにされる。次いで、より大きな比活性のポリクロー
ナル抗血清を生成するために、このような調製物は、動物に導入される。

【０７３８】 ＴＲ２ポリペプチドに対して特異的なモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ
技術を使用して調製される（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（
１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１（１９
７６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９２（１９７６
）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．、
５６３−６８１頁（１９８１））。一般に、動物（好ましくはマウス）は、ＴＲ
２ポリペプチドで、またはより好ましくは分泌ＴＲ２ポリペプチド発現細胞で免
疫される。このようなポリペプチド発現細胞は、任意の適切な組織培養培地にお
いて、好ましくは１０％ウシ胎仔血清（約５６℃で非働化した）を補充し、そし
て約１０ｇ／ｌの非必須アミノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および
約１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変イーグル培
地において培養される。

【０７３９】 このようなマウスの脾細胞は抽出され、そして適切な骨髄腫細胞株と融合され
る。任意の適切な骨髄腫細胞株は、本発明に従って用いられ得る；しかし、ＡＴ
ＣＣから入手可能な親骨髄腫細胞株（ＳＰ２Ｏ）を用いることが好ましい。融合
後、得られるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に維持し、次い
でＷａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２（
１９８１））により記載されるように限界希釈によってクローニングする。次い
で、このような選択によって得られるハイブリドーマ細胞は、ＴＲ２ポリペプチ
ドを結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセイされる。

【０７４０】 あるいは、ＴＲ２ポリペプチドに結合し得るさらなる抗体を、抗イディオタイ
プ抗体を使用して２段階工程の手順において生成し得る。このような方法は、抗
体それ自体が抗原であり、それゆえ第二の抗体に結合する抗体を得ることが可能
であるという事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特異的抗体を使用
して、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このような動物の脾細
胞を使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。そして、このハイブリドーマ細
胞は、ＴＲ２タンパク質特異的抗体に結合する能力がＴＲ２ポリペプチドによっ
てブロックされ得る抗体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングさ
れる。このような抗体は、ＴＲ２タンパク質特異的抗体に対する抗イディオタイ
プ抗体を含み、そして動物を免疫してさらなるＴＲ２タンパク質特異的抗体の形
成を誘導するために使用される。

【０７４１】 ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、抗体は、「ヒト化」される。この
ような抗体は、上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来
する遺伝的構築物を使用することによって産生され得る。キメラ抗体およびヒト
化抗体を産生するための方法は当該分野で公知であり、そして下記に議論される
（総説については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１
９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｃ
ａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、Ｅ
Ｐ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇ
ｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０２６７１；
Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３（１９８４）；Ｎｅｕｂ
ｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）を参照のこと）。

【０７４２】 （実施例１８：ヒト組織中のＴＮＦレセプター発現の発現パターン） ノーザンブロット分析を行って、ヒト組織中のＴＮＦレセプターの発現のレベ
ルを調べる。全ての細胞ＲＮＡサンプルを、ＲＮＡｚｏｌ^TMＢシステム（Ｂｉｏ
ｔｅｃｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘ．）
を用いて単離する。特定の各ヒト組織から単離される、約１０μｇの総ＲＮＡを
、１％のアガロースゲルで分離し、そしてナイロンフィルター上にブロットする
（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ，およびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ
，（１９８９））。標識化反応を、５０ｎｇのＤＮＡ画分を用いて、Ｓｔｒａｎ
ｔａｇｅｎｅ Ｐｒｉｍｅ−Ｉｔキットに従って実施する。標識化ＤＮＡを、Ｓ
ｅｌｅｃｔ−Ｇ−５０カラム（５ Ｐｒｉｍｅ−３ Ｐｒｉｍｅ，Ｉｎｃ．Ｂｏ
ｕｌｄｅｒ，ＣＯ）を用いて精製する。次いで、このフィルターを、０．５Ｍ
ＮａＰＯ₄（ｐＨ ７．４）および７％ ＳＤＳ中の放射能標識化全長ＴＮＦレ
セプター遺伝子（１，０００，０００ｃｐｍ／ｍｌ）を用いて、６５℃で一晩か
けてハイブリダイズした。０．５×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳを用いて、室温で
２回洗浄、そして６０℃で２回洗浄後、次いで−７０℃で一晩かけて、このフィ
ルターを増感紙に曝露する。

【０７４３】 本発明が、前述の説明および実施例に詳細に記載される以外の方法で実施され
得ることは明白である。

【０７４４】 本発明の多くの改変および変更は、上記の教示を考慮すれば可能であり、従っ
て添付の請求の範囲の範囲内である。

【０７４５】 本明細書において引用されたすべての刊行物（特許、特許出願、文献記事、実
験マニュアル、書物、または他の書類）全体としての開示は、本明細書によって
参考として援用される。

【０７４６】

【表７】

【０７４７】

【表８】

【０７４８】

【表９】

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】 図１Ａ〜図１Ｂは、ＴＲ２レセプターのヌクレオチド配列（配列番号１）およ
び推定アミノ酸配列（配列番号２）を示す。このタンパク質は、約３６アミノ酸
残基の推定リーダー配列（下線部）（配列番号２のアミノ酸残基−３６〜−１）
および約３０，４１７ｋＤａの推定分子量を有する。アミノ酸残基約３７〜約２
００（配列番号２のアミノ酸残基１〜１６４）は、細胞外ドメインを構成し；約
２０１〜約２２５（配列番号２のアミノ酸残基１６５〜１８９）は膜貫通ドメイ
ン（下線部）を構成し；そして約２２６〜約２８３（配列番号２のアミノ酸残基
１９０〜２４７）は細胞内ドメインを構成する。２つの潜在的なアスパラギン結
合グリコシル化部位は、アミノ酸１１０位と１７３位（配列番号２のアミノ酸７
４位〜１３７位）に位置する。

【図１Ｂ】 図１Ａ〜図１Ｂは、ＴＲ２レセプターのヌクレオチド配列（配列番号１）およ
び推定アミノ酸配列（配列番号２）を示す。このタンパク質は、約３６アミノ酸
残基の推定リーダー配列（下線部）（配列番号２の−３５〜−１）および約３０
，４１７の推定分子量を有する。アミノ酸残基約３７〜約２００（配列番号２の
アミノ酸残基１〜１６４）は、細胞外ドメインを構成し；約２０１〜約２２５（
配列番号２のアミノ酸残基１６５〜１８９）は膜貫通ドメイン（下線部）を構成
し；そして約２２６〜約２８３（配列番号２のアミノ酸残基１９０〜２４７）は
細胞内ドメインを構成する。２つの潜在的なアスパラギン結合グリコシル化部位
は、アミノ酸１１０位と１７３位（配列番号２のアミノ酸７４位〜１３７位）に
位置する。

【図２】 図２は、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列および
マウスＣＤ４０タンパク質（配列番号３）のアミノ酸配列の間の類似性の領域を
示す。

【図３】 図３は、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプターのアミノ酸配列の分析を示す。α
領域、β領域、ターン領域、およびコイル領域；親水性および疎水性；両親媒性
領域；可撓性領域；抗原性指標および表面確率を示す。「抗原性指標−Ｊａｍｅ
ｓｏｎ−Ｗｏｌｆ」グラフにおいて、図１Ａ〜図１Ｂのアミノ酸残基３９〜７０
、１０６〜１２０、１４２〜１８９、および２７６〜２８３（配列番号２のアミ
ノ酸残基３〜３４、７０〜８４、１０６〜１５３、および２４０〜２４７）は、
ＴＲ２レセプタータンパク質の示される高抗原性領域に一致する。

【図４Ａ】 図４Ａ〜図４Ｃは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプターのヌクレオチド配列（配列番号
４）および推定アミノ酸配列（配列番号５）を示す。このタンパク質は、約３６
アミノ酸残基の推定リーダー配列（下線部）（配列番号５のアミノ酸残基−３６
〜−１）および約１９．５ｋＤａの推定分子量を有する。

【図４Ｂ】 図４Ａ〜図４Ｃは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプターのヌクレオチド配列（配列番号
４）および推定アミノ酸配列（配列番号５）を示す。このタンパク質は、約３６
アミノ酸残基の推定リーダー配列（下線部）（配列番号５のアミノ酸残基−３６
〜−１）および約１９．５ｋＤａの推定分子量を有する。

【図４Ｃ】 図４Ａ〜図４Ｃは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプターのヌクレオチド配列（配列番号
４）および推定アミノ酸配列（配列番号５）を示す。このタンパク質は、約３６
アミノ酸残基の推定リーダー配列（下線部）（配列番号５のアミノ酸残基−３６
〜−１）および約１９．５ｋＤａの推定分子量を有する。

【図５】 図５は、全長ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質のアミノ酸配列とヒト２型
ＴＮＦレセプターのアミノ酸配列（配列番号６）との間の類似性領域を示す。

【図６】 図６は、ＴＲ２−ＳＶ１レセプターのアミノ酸配列の分析を示す。α領域、β
領域、ターン領域、およびコイル領域；親水性および疎水性；両親媒性領域；可
撓性領域；抗原性指標および表面確率を示す。「抗原性指標−Ｊａｍｅｓｏｎ−
Ｗｏｌｆ」グラフにおいて、図４Ａ〜図４Ｃのアミノ酸残基３９〜７０、９９〜
１３６、および１７１〜１８５（配列番号５のアミノ酸残基３〜３４、６３〜１
００、および１３５〜１４９）は、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質の示さ
れる高抗原性領域に一致する。

【図７Ａ】 図７Ａ〜図７Ｃは、ＴＲ２−ＳＶ２レセプターのヌクレオチド配列（配列番号
７）および推定アミノ酸配列（配列番号８）を示す。このタンパク質は、推定リ
ーダー配列を欠き、そして約１４ｋＤａの推定分子量を有する。

【図７Ｂ】 図７Ａ〜図７Ｃは、ＴＲ２−ＳＶ２レセプターのヌクレオチド配列（配列番号
７）および推定アミノ酸配列（配列番号８）を示す。このタンパク質は、推定リ
ーダー配列を欠き、そして約１４ｋＤａの推定分子量を有する。

【図７Ｃ】 図７Ａ〜図７Ｃは、ＴＲ２−ＳＶ２レセプターのヌクレオチド配列（配列番号
７）および推定アミノ酸配列（配列番号８）を示す。このタンパク質は、推定リ
ーダー配列を欠き、そして約１４ｋＤａの推定分子量を有する。

【図８】 図８は、ＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列とヒト２型ＴＮ
Ｆレセプターのアミノ酸配列（配列番号９）との間の類似性領域を示す。

【図９】 図９は、ＴＲ２−ＳＶ２レセプターのアミノ酸配列の分析を示す。α領域、β
領域、ターン領域、およびコイル領域；親水性および疎水性；両親媒性領域；可
撓性領域；抗原性指標および表面確率を示す。「抗原性指標−Ｊａｍｅｓｏｎ−
Ｗｏｌｆ」グラフにおいて、図７Ａ〜図７Ｃ（配列番号８）のアミノ酸残基５６
〜６８および９３〜１３６は、ＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質の示される
高抗原性領域に一致する。

【図１０】 図１０は、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列と図
４Ａ〜図４ＣのＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質のアミノ酸配列との間の類
似性領域を示す。

【図１１】 図１１は、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列と図
７Ａ〜図７ＣのＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列との間の類
似性領域を示す。

【図１２】 図１２は、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質のアミノ酸配列とＴＲ２−Ｓ
Ｖ２レセプタータンパク質のアミノ酸配列との間の類似性領域を示す。

【図１３Ａ】 図１３Ａ〜図１３Ｄは、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列と図４Ａ〜図４ＣのＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク
質をコードするヌクレオチド配列との間の類似性領域を示す。

【図１３Ｂ】 図１３Ａ〜図１３Ｄは、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列と図４Ａ〜図４ＣのＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク
質をコードするヌクレオチド配列との間の類似性領域を示す。

【図１３Ｃ】 図１３Ａ〜図１３Ｄは、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列と図４Ａ〜図４ＣのＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク
質をコードするヌクレオチド配列との間の類似性領域を示す。

【図１３Ｄ】 図１３Ａ〜図１３Ｄは、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列と図４Ａ〜図４ＣのＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク
質をコードするヌクレオチド配列との間の類似性領域を示す。

【図１４Ａ】 図１４Ａ〜図１４Ｄは、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列と図７Ａ〜図７ＣのＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク
質をコードするヌクレオチド配列との間の類似性領域を示す。

【図１４Ｂ】 図１４Ａ〜図１４Ｄは、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列と図７Ａ〜図７ＣのＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク
質をコードするヌクレオチド配列との間の類似性領域を示す。

【図１４Ｃ】 図１４Ａ〜図１４Ｄは、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列と図７Ａ〜図７ＣのＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク
質をコードするヌクレオチド配列との間の類似性領域を示す。

【図１４Ｄ】 図１４Ａ〜図１４Ｄは、図１Ａ〜図１ＢのＴＲ２レセプタータンパク質をコー
ドするヌクレオチド配列と図７Ａ〜図７ＣのＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク
質をコードするヌクレオチド配列との間の類似性領域を示す。

【図１５Ａ】 図１５Ａ〜図１５Ｆは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質をコードするヌ
クレオチド配列とＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするヌクレオチ
ド配列との間の類似性領域を示す。

【図１５Ｂ】 図１５Ａ〜図１５Ｆは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質をコードするヌ
クレオチド配列とＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするヌクレオチ
ド配列との間の類似性領域を示す。

【図１５Ｃ】 図１５Ａ〜図１５Ｆは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質をコードするヌ
クレオチド配列とＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするヌクレオチ
ド配列との間の類似性領域を示す。

【図１５Ｄ】 図１５Ａ〜図１５Ｆは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質をコードするヌ
クレオチド配列とＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするヌクレオチ
ド配列との間の類似性領域を示す。

【図１５Ｅ】 図１５Ａ〜図１５Ｆは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質をコードするヌ
クレオチド配列とＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするヌクレオチ
ド配列との間の類似性領域を示す。

【図１５Ｆ】 図１５Ａ〜図１５Ｆは、ＴＲ２−ＳＶ１レセプタータンパク質をコードするヌ
クレオチド配列とＴＲ２−ＳＶ２レセプタータンパク質をコードするヌクレオチ
ド配列との間の類似性領域を示す。

【図１６】 図１６は、図１Ａ〜図１Ｂ（配列番号２）のＴＲ２レセプターのアミノ酸配列
の、他のＴＮＦＲファミリーメンバーとのアラインメントを示す。ＴＲ２のアミ
ノ酸配列は、ＴＮＦＲ−Ｉ（配列番号１０）、ＴＮＦＲ−ＩＩ（配列番号１１）
、ＣＤ４０（配列番号１２）、および４−１ＢＢ（配列番号１３）のアミノ酸配
列と、配列相同性および保存性システイン残基に基づいて整列された。システイ
ン反復領域は、配列番号２のアミノ酸残基５〜４０、４１〜８４、８５〜１２７
、および１２８〜１６６によって規定され、それぞれシステイン反復領域Ａ〜Ｄ
と呼ばれる。

【図１７】 図１７は、ＴＲ２のＢ細胞インビトロ増殖に対する効果を示す。Ｂリンパ球を
、免疫磁気選択によってヒト扁桃から精製した。細胞を７２時間培養し、続いて
、１０％ＦＢＳ、４ｍＭ １−グルタミン、５×１０^-5Ｍ ２ＭＥ、１００Ｕ／
ｍｌ ペニシリン、１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシン、および示された因
子を添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で２４時間、³Ｈチミジンパルスした。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｋ 45/00 ４Ｃ０８６ 45/00 48/00 ４Ｃ０８７ 48/00 Ａ６１Ｐ 19/02 ４Ｈ０４５ Ａ６１Ｐ 19/02 29/00 29/00 35/00 35/00 37/04 37/04 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ 33/50 33/53 Ｄ 33/53 33/566 33/566 33/577 Ｂ 33/577 Ｃ０７Ｋ 14/715 // Ｃ０７Ｋ 14/715 16/18 16/18 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (31)優先権主張番号 ６０／１３５，１６９ (32)優先日 平成11年５月20日(1999．5．20) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／１４７，３８３ (32)優先日 平成11年８月６日(1999．8．6) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｇ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ニ， ジアン アメリカ合衆国 メリーランド 20853， ロックビル， マナーフィールド ロー ド 5502 (72)発明者 ローゼン， クレイグ エイ． アメリカ合衆国 メリーランド 20882， レイトンズビル， ローリング ヒル ロード 22400 (72)発明者 ジェンツ， レイナー エル． アメリカ合衆国 メリーランド 20850， ロックビル， マウント プロスペクト ドライブ 13608 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 CB01 DA12 DA13 DA36 DA77 DA78 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 DA02 DA06 EA04 EA06 GA11 GA18 GA19 HA12 HA15 4B064 AG27 CA10 DA05 DA08 DA14 4C084 AA01 AA02 AA13 AA16 BA01 BA02 BA08 BA22 BA41 CA18 CA53 CA59 DA53 MA02 MA22 MA28 MA32 MA35 MA37 MA43 MA52 MA55 MA56 MA59 MA60 MA63 MA66 NA14 ZA962 ZB092 ZB112 ZB262 4C085 AA13 AA14 AA16 BA99 BB42 CC22 CC23 GG01 GG08 4C086 AA01 AA02 EA16 MA02 MA22 MA23 MA28 MA32 MA35 MA37 MA41 MA43 MA52 MA55 MA59 MA60 MA63 MA66 NA14 ZA96 ZB09 ZB11 ZB26 4C087 AA01 AA02 BB48 CA04 MA02 MA17 MA22 MA23 MA28 MA32 MA52 MA55 MA59 MA60 MA63 MA66 NA14 ZA96 ZB09 ZB11 ZB26 4H045 AA10 AA11 AA30 CA41 DA50 DA76 DA86 EA22 EA28 FA74

Claims (40)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 関節炎または炎症を処置するための方法であって、該方法は
   、治療有効量の以下： （ａ）配列番号２のアミノ酸−３６〜２４７からなるポリペプチドに結合する
   抗体を含む第１の治療剤；ならびに （ｂ）以下からなる群より選択される第２の治療剤： （ｉ）腫瘍壊死因子ブロッキング剤； （ｉｉ）免疫抑制剤； （ｉｉｉ）抗炎症剤； （ｉｖ）抗マラリア剤；および （ｖ）抗代謝産物剤、 を個体に投与する工程を包含する、方法。
2. 【請求項２】 前記第１の治療剤が、配列番号２のアミノ酸１〜１６４から
   なるポリペプチドに結合する抗体を含む、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の
   方法。
4. 【請求項４】 前記抗体が、ポリクローナル抗体である、請求項１に記載の
   方法。
5. 【請求項５】 前記抗体が、キメラ抗体である、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項１に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記抗体が、単鎖Ｆｖ抗体である、請求項１に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記抗体が、Ｆａｂ抗体フラグメントである、請求項１に記
   載の方法。
9. 【請求項９】 前記第１の治療剤および前記第２の治療剤が、同時に前記個
   体に投与される、請求項１に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記第１の治療剤および前記第２の治療剤が、異なった時
    点で前記個体に投与される、請求項１に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記腫瘍壊死因子ブロッキング剤が、以下： （ａ）ＴＮＦ−α； （ｂ）ＴＮＦ−β；および （ｃ）ＴＮＦ−γ、 からなる群より選択されるタンパク質に結合する抗体を含む、請求項１に記載の
    方法。
12. 【請求項１２】 前記免疫抑制剤が、以下： （ａ）シクロスポリン； （ｂ）シクロホスファミド； （ｃ）メチルプレドニゾン； （ｄ）プレドニゾン； （ｅ）アザチオプリン； （ｆ）ＦＫ−５０６；および （ｇ）１５−デオキシスパガリン、 からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記抗マラリア剤が、以下： （ａ）ヒドロキシクロロキン； （ｂ）クロロキン；および （ｃ）キナクリン、 からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記抗代謝産物が、メトトレキサートである、請求項１に
    記載の方法。
15. 【請求項１５】 組成物であって、以下： （ａ）配列番号２のアミノ酸−３６〜２４７からなるポリペプチドに結合する
    抗体を含む第１の治療剤；ならびに （ｂ）以下からなる群より選択される第２の治療剤： （ｉ）腫瘍壊死因子ブロッキング剤； （ｉｉ）免疫抑制剤； （ｉｉｉ）抗炎症剤； （ｉｖ）抗マラリア剤；および （ｖ）抗代謝産物剤、 を含む、組成物。
16. 【請求項１６】 関節炎または炎症の処置のための方法であって、治療有効
    量の請求項１５に記載の組成物を、個体に投与する工程を包含する、方法。
17. 【請求項１７】 薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤をさらに含む、
    請求項１５に記載の組成物。
18. 【請求項１８】 関節炎の治療のための方法であって、治療有効量の請求項
    １７に記載の組成物を個体に投与する工程を包含する、方法。
19. 【請求項１９】 癌を処置するための方法であって、該方法は、治療有効量
    の以下： （ａ）配列番号２のアミノ酸−３６〜２４７からなるポリペプチドに結合する
    抗体を含む第１の治療剤；ならびに （ｂ）以下からなる群より選択される第２の治療剤： （ｉ）化学療法剤； （ｉｉ）抗生物質； （ｉｉｉ）抗代謝産物剤；および （ｉｖ）免疫抑制剤、 を個体に投与する工程を包含する、方法。
20. 【請求項２０】 前記癌が、Ｂ細胞系列関連癌である、請求項１９に記載の
    方法。
21. 【請求項２１】 前記Ｂ細胞系列関連癌が、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項
    ２０に記載の方法。
22. 【請求項２２】 前記第１の治療剤が、配列番号２のアミノ酸１〜１６４か
    らなるポリペプチドに結合する抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
23. 【請求項２３】 前記第１の治療剤および第２の治療剤が、同時に前記個体
    に投与される、請求項１９に記載の方法。
24. 【請求項２４】 前記第１の治療剤および前記第２の治療剤が、異なった時
    点で前記個体に投与される、請求項１９に記載の方法。
25. 【請求項２５】 前記化学治療剤が、以下： （ａ）ドキソルビシン； （ｂ）ブレオマイシン； （ｃ）ダウノルビシン； （ｄ）ダクチノマイシン；および （ｅ）マイトマイシンＣ、 からなる群より選択される、請求項１９に記載の方法。
26. 【請求項２６】 組成物であって、以下： （ａ）配列番号２のアミノ酸−３６〜２４７からなるポリペプチドに結合する
    抗体を含む第１の治療剤；ならびに （ｂ）以下からなる群より選択される第２の治療剤： （ｉ）化学療法剤； （ｉｉ）抗生物質； （ｉｉｉ）抗代謝産物剤；および （ｉｖ）免疫抑制剤、 を含む、組成物。
27. 【請求項２７】 癌の処置のための方法であって、治療有効量の請求項２６
    に記載の組成物を、個体に投与する工程を包含する、方法。
28. 【請求項２８】 薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤をさらに含む、
    請求項２６に記載の組成物。
29. 【請求項２９】 癌の処置のための方法であって、治療有効量の請求項２８
    に記載の組成物を、個体に投与する工程を包含する、方法。
30. 【請求項３０】 癌の処置のための方法であって、該方法は、治療有効量の
    以下： （ａ）免疫グロブリンのＦｃ領域に共有結合した、配列番号２のアミノ酸１〜
    １６４を含む第１の治療剤；ならびに （ｂ）以下からなる群より選択される第２の治療剤： （ｉ）化学療法剤； （ｉｉ）抗生物質； （ｉｉｉ）抗代謝産物剤； および （ｉｖ）免疫抑制剤、 を個体に投与する工程を包含する、方法。
31. 【請求項３１】 前記癌が、Ｂ細胞系列関連癌である、請求項３０に記載の
    方法。
32. 【請求項３２】 前記Ｂ細胞系列関連癌が、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項
    ３１に記載の方法。
33. 【請求項３３】 前記第１の治療剤および第２の治療剤が、同時に前記個体
    に投与される、請求項３０に記載の方法。
34. 【請求項３４】 前記第１の治療剤および前記第２の治療剤が、異なった時
    点で前記個体に投与される、請求項３０に記載の方法。
35. 【請求項３５】 免疫不全を処置するためまたは抗原に対するインビボでの
    白血球応答を増強するための方法であって、該方法は、治療有効量の以下： （ａ）配列番号２のアミノ酸−３６〜２４７からなるポリペプチドに結合する
    抗体を含む第１の治療剤；ならびに （ｂ）以下からなる群より選択される第２の治療剤： （ｉ）サイトカイン； （ｉｉ）脈管形成因子；および （ｉｉｉ）線維芽細胞増殖因子、 を個体に投与する工程を包含する、方法。
36. 【請求項３６】 前記免疫不全が、Ｂ細胞免疫不全である、請求項３５に記
    載の方法。
37. 【請求項３７】 前記白血球が、Ｂ細胞である、請求項３５に記載の方法。
38. 【請求項３８】 前記第１の治療剤が、配列番号２のアミノ酸１〜１６４か
    らなるポリペプチドに結合する抗体を含む、請求項３５に記載の方法。
39. 【請求項３９】 前記第１の治療剤および前記第２の治療剤が、同時に前記
    個体に投与される、請求項３５に記載の方法。
40. 【請求項４０】 前記第１の治療剤および前記第２の治療剤が、異なった時
    点で前記個体に投与される、請求項３５に記載の方法。