JP2002218995A - 細胞増殖能評価方法、装置及びプログラム - Google Patents
細胞増殖能評価方法、装置及びプログラムInfo
- Publication number
- JP2002218995A JP2002218995A JP2001276909A JP2001276909A JP2002218995A JP 2002218995 A JP2002218995 A JP 2002218995A JP 2001276909 A JP2001276909 A JP 2001276909A JP 2001276909 A JP2001276909 A JP 2001276909A JP 2002218995 A JP2002218995 A JP 2002218995A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- cells
- culture
- proliferation ability
- culture vessel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/46—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of cellular or enzymatic activity or functionality, e.g. cell viability
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/60—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances involving radioactive labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING OR CALCULATING; COUNTING
- G06T—IMAGE DATA PROCESSING OR GENERATION, IN GENERAL
- G06T7/00—Image analysis
- G06T7/0002—Inspection of images, e.g. flaw detection
- G06T7/0012—Biomedical image inspection
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING OR CALCULATING; COUNTING
- G06T—IMAGE DATA PROCESSING OR GENERATION, IN GENERAL
- G06T7/00—Image analysis
- G06T7/60—Analysis of geometric attributes
- G06T7/62—Analysis of geometric attributes of area, perimeter, diameter or volume
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING OR CALCULATING; COUNTING
- G06T—IMAGE DATA PROCESSING OR GENERATION, IN GENERAL
- G06T2207/00—Indexing scheme for image analysis or image enhancement
- G06T2207/10—Image acquisition modality
- G06T2207/10056—Microscopic image
-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING OR CALCULATING; COUNTING
- G06T—IMAGE DATA PROCESSING OR GENERATION, IN GENERAL
- G06T2207/00—Indexing scheme for image analysis or image enhancement
- G06T2207/30—Subject of image; Context of image processing
- G06T2207/30004—Biomedical image processing
- G06T2207/30024—Cell structures in vitro; Tissue sections in vitro
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Computer Vision & Pattern Recognition (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Geometry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Quality & Reliability (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Management, Administration, Business Operations System, And Electronic Commerce (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 個々の接着依存性細胞を無襲撃、非破壊で形
態観察測定することによって、その細胞集団全体の増殖
能力を容易かつ的確に把握することができるように構成
された細胞増殖能評価方法、装置及びプログラムを提供
する。 【解決手段】 細胞増殖能評価方法、装置及びプログラ
ムは、接着依存性細胞を培養容器内で単層培養する際
に、その細胞集団の増殖能力を評価するものである。こ
の細胞増殖能評価方法、装置及びプログラムは、前記培
養容器内で培養されている個々の細胞像を観察測定した
個別細胞観察測定結果を用いて、その培養容器内の細胞
集団の増殖能力を評価するように構成されている。前記
個別細胞観察測定結果は、例えば、細胞接着期２１にお
ける個々の細胞の投影面積Ｓａの時間変化を表す伸展速
度、細胞増殖期２３における個々の細胞の接触細胞数、
細胞増殖期２３における個々の細胞の投影面積Ｓａ’で
あるのが好ましい。
態観察測定することによって、その細胞集団全体の増殖
能力を容易かつ的確に把握することができるように構成
された細胞増殖能評価方法、装置及びプログラムを提供
する。 【解決手段】 細胞増殖能評価方法、装置及びプログラ
ムは、接着依存性細胞を培養容器内で単層培養する際
に、その細胞集団の増殖能力を評価するものである。こ
の細胞増殖能評価方法、装置及びプログラムは、前記培
養容器内で培養されている個々の細胞像を観察測定した
個別細胞観察測定結果を用いて、その培養容器内の細胞
集団の増殖能力を評価するように構成されている。前記
個別細胞観察測定結果は、例えば、細胞接着期２１にお
ける個々の細胞の投影面積Ｓａの時間変化を表す伸展速
度、細胞増殖期２３における個々の細胞の接触細胞数、
細胞増殖期２３における個々の細胞の投影面積Ｓａ’で
あるのが好ましい。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、細胞の増殖能力を
評価する方法、装置及びプログラムに関し、詳しくは、
培養容器内での接着依存性細胞の単層培養時に、接着依
存性細胞の増殖能力を評価する方法、装置及びプログラ
ムに関するものである。
評価する方法、装置及びプログラムに関し、詳しくは、
培養容器内での接着依存性細胞の単層培養時に、接着依
存性細胞の増殖能力を評価する方法、装置及びプログラ
ムに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来より、この種の細胞増殖能評価方法
としては、例えば、培養容器内の接着依存性細胞の生存
細胞数を経時的にモニタリングした結果を用いて、その
細胞の標準的な増殖曲線を作製し、その増殖曲線に基づ
いて培養細胞の増殖能力が推定及び評価されていた。前
記生存細胞数としては、例えば、培養容器の底面に接着
している接着細胞の画像を取り込んで画像処理すること
によって求めたり、或いは前記接着細胞をトリプシン等
により剥離させた後、血球計算盤やコールターカウンタ
ー等を用いて計測したりして求められる。そして、所定
時間毎に前記生存細胞数を計測して記録することによっ
て、その細胞の標準的な増殖曲線が求められていた。
としては、例えば、培養容器内の接着依存性細胞の生存
細胞数を経時的にモニタリングした結果を用いて、その
細胞の標準的な増殖曲線を作製し、その増殖曲線に基づ
いて培養細胞の増殖能力が推定及び評価されていた。前
記生存細胞数としては、例えば、培養容器の底面に接着
している接着細胞の画像を取り込んで画像処理すること
によって求めたり、或いは前記接着細胞をトリプシン等
により剥離させた後、血球計算盤やコールターカウンタ
ー等を用いて計測したりして求められる。そして、所定
時間毎に前記生存細胞数を計測して記録することによっ
て、その細胞の標準的な増殖曲線が求められていた。
【０００３】一方、3Ｈ−チミジン等の標識化細胞増殖
マーカーの細胞内への取り込みを調べることによって増
殖曲線を作製することも行われていた。また、細胞内に
色素を取り込ませてその細胞集団を染色し、フローサイ
トメータ等で分析した結果を用いて、例えば細胞分裂や
細胞周期等の研究も行われており、得られた結果を用い
てその観察測定されている集団の細胞の増殖能力が推定
及び評価されていた。
マーカーの細胞内への取り込みを調べることによって増
殖曲線を作製することも行われていた。また、細胞内に
色素を取り込ませてその細胞集団を染色し、フローサイ
トメータ等で分析した結果を用いて、例えば細胞分裂や
細胞周期等の研究も行われており、得られた結果を用い
てその観察測定されている集団の細胞の増殖能力が推定
及び評価されていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】ところが、前記従来の
生存細胞数の計測結果を利用した細胞増殖能評価方法で
は、培養容器内の細胞の増殖能力が、生存細胞数を計測
することによる単なる統計学的解析処理のみによって評
価されていた。このため、この生存細胞数の計測時以降
に予想される生存細胞数の推移は、細胞の状態をリアル
タイムに反映させたものではなく、予め調査された標準
的な増殖曲線に従うものであるという仮定のもとにその
増殖能力の評価が行われていた。従って、この方法で
は、現実に起こりつつある現象を的確に予測することは
困難であった。
生存細胞数の計測結果を利用した細胞増殖能評価方法で
は、培養容器内の細胞の増殖能力が、生存細胞数を計測
することによる単なる統計学的解析処理のみによって評
価されていた。このため、この生存細胞数の計測時以降
に予想される生存細胞数の推移は、細胞の状態をリアル
タイムに反映させたものではなく、予め調査された標準
的な増殖曲線に従うものであるという仮定のもとにその
増殖能力の評価が行われていた。従って、この方法で
は、現実に起こりつつある現象を的確に予測することは
困難であった。
【０００５】一方、前記従来のマーカーや色素を利用し
た細胞増殖能評価方法では、細胞の状態を間接的に定量
化することができるように構成されたマーカーや色素が
利用されていることから、細胞の状態を一部反映させる
ことは可能である。しかしながら、この方法では、細胞
に対して直接又は間接的にダメージを与えたり破壊した
りしてしまうという問題点があった。
た細胞増殖能評価方法では、細胞の状態を間接的に定量
化することができるように構成されたマーカーや色素が
利用されていることから、細胞の状態を一部反映させる
ことは可能である。しかしながら、この方法では、細胞
に対して直接又は間接的にダメージを与えたり破壊した
りしてしまうという問題点があった。
【０００６】この発明は、上記のような従来技術に存在
する問題点に着目してなされたものである。その目的と
するところは、個々の接着依存性細胞を無襲撃、非破壊
で形態観察測定することによって、その細胞集団全体の
増殖能力を容易かつ的確に把握することができるように
構成された細胞増殖能評価方法、装置及びプログラムを
提供することにある。
する問題点に着目してなされたものである。その目的と
するところは、個々の接着依存性細胞を無襲撃、非破壊
で形態観察測定することによって、その細胞集団全体の
増殖能力を容易かつ的確に把握することができるように
構成された細胞増殖能評価方法、装置及びプログラムを
提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
めに、請求項１に記載の発明の細胞増殖能評価方法は、
接着依存性細胞を培養容器内で単層培養する際に、その
細胞集団の増殖能力を評価するための細胞増殖能評価方
法であって、前記培養容器内で培養されている個々の細
胞像を観察測定した個別細胞観察測定結果を用いて、そ
の培養容器内の細胞集団の増殖能力を評価するように構
成したことを特徴とするものである。
めに、請求項１に記載の発明の細胞増殖能評価方法は、
接着依存性細胞を培養容器内で単層培養する際に、その
細胞集団の増殖能力を評価するための細胞増殖能評価方
法であって、前記培養容器内で培養されている個々の細
胞像を観察測定した個別細胞観察測定結果を用いて、そ
の培養容器内の細胞集団の増殖能力を評価するように構
成したことを特徴とするものである。
【０００８】請求項２に記載の発明の細胞増殖能評価方
法は、請求項１に記載の発明において、前記細胞を培養
容器に接種する工程と、培養容器内の培養状態を撮影す
る工程と、その培養状態の画像から個々の細胞の画像を
抽出する工程と、その個々の細胞の画像から細胞の増殖
能力関連指標を演算する工程と、その指標を用いて前記
細胞集団の増殖能力を評価する工程とを備えたことを特
徴とするものである。
法は、請求項１に記載の発明において、前記細胞を培養
容器に接種する工程と、培養容器内の培養状態を撮影す
る工程と、その培養状態の画像から個々の細胞の画像を
抽出する工程と、その個々の細胞の画像から細胞の増殖
能力関連指標を演算する工程と、その指標を用いて前記
細胞集団の増殖能力を評価する工程とを備えたことを特
徴とするものである。
【０００９】請求項３に記載の発明の細胞増殖能評価方
法は、請求項１又は請求項２に記載の発明において、前
記個別細胞観察測定結果を、前記細胞が培養容器の底面
に付着した後からその容器底面上での細胞の伸展が停止
するまでの細胞接着期において、前記観察測定されてい
る個々の細胞の培養容器底面に対する投影面積の時間変
化を表す細胞の伸展速度としたことを特徴とするもので
ある。
法は、請求項１又は請求項２に記載の発明において、前
記個別細胞観察測定結果を、前記細胞が培養容器の底面
に付着した後からその容器底面上での細胞の伸展が停止
するまでの細胞接着期において、前記観察測定されてい
る個々の細胞の培養容器底面に対する投影面積の時間変
化を表す細胞の伸展速度としたことを特徴とするもので
ある。
【００１０】請求項４に記載の発明の細胞増殖能評価方
法は、請求項１から請求項３のいずれかに記載の発明に
おいて、前記個別細胞観察測定結果を、前記細胞が培養
容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増
殖期において、前記観察測定されている個々の細胞に接
触して存在する接触細胞数としたことを特徴とするもの
である。
法は、請求項１から請求項３のいずれかに記載の発明に
おいて、前記個別細胞観察測定結果を、前記細胞が培養
容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増
殖期において、前記観察測定されている個々の細胞に接
触して存在する接触細胞数としたことを特徴とするもの
である。
【００１１】請求項５に記載の発明の細胞増殖能評価方
法は、請求項１から請求項４のいずれかに記載の発明に
おいて、前記個別細胞観察測定結果を、前記細胞が培養
容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増
殖期において、前記観察測定されている個々の細胞の培
養容器底面に対する投影面積としたことを特徴とするも
のである。
法は、請求項１から請求項４のいずれかに記載の発明に
おいて、前記個別細胞観察測定結果を、前記細胞が培養
容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増
殖期において、前記観察測定されている個々の細胞の培
養容器底面に対する投影面積としたことを特徴とするも
のである。
【００１２】請求項６に記載の発明の細胞増殖能評価装
置は、接着依存性細胞を培養容器内で単層培養する際
に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細胞増殖
能評価装置であって、前記細胞が接種される培養容器を
収容するインキュベータと、前記培養容器内の培養状態
を撮影する撮影装置と、前記撮影装置に接続されたコン
ピュータとを備え、前記コンピュータは、培養状態の画
像を解析して個々の細胞の画像を抽出し、その個々の細
胞の画像から細胞の増殖能力関連指標を演算し、その指
標を用いて前記細胞集団の増殖能力を評価するように構
成したことを特徴とするものである。
置は、接着依存性細胞を培養容器内で単層培養する際
に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細胞増殖
能評価装置であって、前記細胞が接種される培養容器を
収容するインキュベータと、前記培養容器内の培養状態
を撮影する撮影装置と、前記撮影装置に接続されたコン
ピュータとを備え、前記コンピュータは、培養状態の画
像を解析して個々の細胞の画像を抽出し、その個々の細
胞の画像から細胞の増殖能力関連指標を演算し、その指
標を用いて前記細胞集団の増殖能力を評価するように構
成したことを特徴とするものである。
【００１３】請求項７に記載の発明の細胞増殖能評価プ
ログラムは、接着依存性細胞を培養容器内で単層培養す
る際に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細胞
増殖能評価プログラムであって、前記プログラムは、コ
ンピュータに、前記培養容器内の培養状態の画像を解析
して個々の細胞の画像を抽出する工程と、その個々の細
胞の画像から細胞の増殖能力関連指標を演算する工程
と、その指標を用いて前記細胞集団の増殖能力を評価す
る工程とを実行させることを特徴とするものである。
ログラムは、接着依存性細胞を培養容器内で単層培養す
る際に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細胞
増殖能評価プログラムであって、前記プログラムは、コ
ンピュータに、前記培養容器内の培養状態の画像を解析
して個々の細胞の画像を抽出する工程と、その個々の細
胞の画像から細胞の増殖能力関連指標を演算する工程
と、その指標を用いて前記細胞集団の増殖能力を評価す
る工程とを実行させることを特徴とするものである。
【００１４】
【発明の実施の形態】以下、この発明の実施形態を図面
に基づいて詳細に説明する。本実施形態の細胞増殖能評
価方法は、図２に模式的に示すように、接着依存性細胞
（以下、細胞と記載する）１１を培養液１２を満たした
培養容器１３内で単層培養する際に、その細胞集団全体
の増殖能力を評価して把握するためのものである。さら
に、この細胞増殖能評価方法は、培養容器１３内で培養
されている個々の細胞像を形態観察測定した個別細胞観
察測定結果を用いて、その培養容器１３内の細胞集団全
体の増殖能力を定量評価するものである。
に基づいて詳細に説明する。本実施形態の細胞増殖能評
価方法は、図２に模式的に示すように、接着依存性細胞
（以下、細胞と記載する）１１を培養液１２を満たした
培養容器１３内で単層培養する際に、その細胞集団全体
の増殖能力を評価して把握するためのものである。さら
に、この細胞増殖能評価方法は、培養容器１３内で培養
されている個々の細胞像を形態観察測定した個別細胞観
察測定結果を用いて、その培養容器１３内の細胞集団全
体の増殖能力を定量評価するものである。
【００１５】前記細胞１１は、培養容器１３の底面に直
接又は細胞外マトリックスを介して接着することができ
るとともに、その容器１３の底面上で単層培養すること
ができる性質を有する。この細胞１１の増殖能力は、図
１０に模式的に示される細胞増殖能評価装置１００によ
り評価される。評価装置１００は、培養容器１３を収容
するインキュベータ１０１、培養容器１３に所定の組成
を有するガスを供給するガス供給装置１０２、培養容器
１３内の培養状態を撮影する撮影装置１０３、及び撮影
装置１０３に接続されたパーソナルコンピュータ１０４
を含む。
接又は細胞外マトリックスを介して接着することができ
るとともに、その容器１３の底面上で単層培養すること
ができる性質を有する。この細胞１１の増殖能力は、図
１０に模式的に示される細胞増殖能評価装置１００によ
り評価される。評価装置１００は、培養容器１３を収容
するインキュベータ１０１、培養容器１３に所定の組成
を有するガスを供給するガス供給装置１０２、培養容器
１３内の培養状態を撮影する撮影装置１０３、及び撮影
装置１０３に接続されたパーソナルコンピュータ１０４
を含む。
【００１６】インキュベータ１０１は細胞１１の成長に
適した環境を提供する。撮影装置１０３は培養容器１３
の下方に配置され、培養容器１３の底に接着した細胞１
１の画像を含む原画像をパーソナルコンピュータ１０４
に供給する。撮影装置１０３は好ましくはＣＣＤカメラ
である。パーソナルコンピュータ１０４は、好ましく
は、ＣＰＵと、主記憶装置１０５ａと、補助記憶装置１
０５ｂと、ディスプレイ１０６とを有する画像処理装置
である。
適した環境を提供する。撮影装置１０３は培養容器１３
の下方に配置され、培養容器１３の底に接着した細胞１
１の画像を含む原画像をパーソナルコンピュータ１０４
に供給する。撮影装置１０３は好ましくはＣＣＤカメラ
である。パーソナルコンピュータ１０４は、好ましく
は、ＣＰＵと、主記憶装置１０５ａと、補助記憶装置１
０５ｂと、ディスプレイ１０６とを有する画像処理装置
である。
【００１７】図１１に示すように、コンピュータ１０４
は、撮影装置１０３から原画像を受け取り（Ｓ１０
０）、その原画像を解析して、個々の細胞１１の画像を
抽出する（Ｓ１１０）。コンピュータ１０４は、抽出さ
れた細胞像から、細胞１１の増殖能力に関連する指標
（増殖能力関連指標）を算出する（Ｓ１２０）。コンピ
ュータ１０４はその指標を用いて細胞集団の増殖能力を
評価する（Ｓ１３０）。コンピュータ１０４は、評価結
果をディスプレイ１０６に表示する（Ｓ１４０）。
は、撮影装置１０３から原画像を受け取り（Ｓ１０
０）、その原画像を解析して、個々の細胞１１の画像を
抽出する（Ｓ１１０）。コンピュータ１０４は、抽出さ
れた細胞像から、細胞１１の増殖能力に関連する指標
（増殖能力関連指標）を算出する（Ｓ１２０）。コンピ
ュータ１０４はその指標を用いて細胞集団の増殖能力を
評価する（Ｓ１３０）。コンピュータ１０４は、評価結
果をディスプレイ１０６に表示する（Ｓ１４０）。
【００１８】コンピュータ１０４は、図１１の処理方法
が記載されたコンピュータプログラムを実行する。コン
ピュータプログラムは、フロッピー（登録商標）ディス
クやＣＤ−ＲＯＭ等の可搬型記録媒体１０７やネットワ
ーク接続された他の計算機の主記憶装置や補助記憶装置
等に格納されて提供される。
が記載されたコンピュータプログラムを実行する。コン
ピュータプログラムは、フロッピー（登録商標）ディス
クやＣＤ−ＲＯＭ等の可搬型記録媒体１０７やネットワ
ーク接続された他の計算機の主記憶装置や補助記憶装置
等に格納されて提供される。
【００１９】コンピュータプログラムは、可搬型記録媒
体１０７から補助記憶装置１０５ｂにコピー又はインス
トールされ、その後、主記憶装置１０５ａにロードされ
る。或いは、コンピュータプログラムは可搬型記録媒体
１０７から主記憶装置１０５ａに直接ロードされ実行さ
れる。
体１０７から補助記憶装置１０５ｂにコピー又はインス
トールされ、その後、主記憶装置１０５ａにロードされ
る。或いは、コンピュータプログラムは可搬型記録媒体
１０７から主記憶装置１０５ａに直接ロードされ実行さ
れる。
【００２０】図１（ａ）に模式的に示すように、細胞１
１の単層培養過程は、細胞接着期２１、細胞誘導期２２
及び細胞増殖期２３からなる３種のステージに分類され
る。細胞接着期２１は、培養液１２とともに培養容器１
３内に接種された細胞１１が、その容器１３底面に接触
（付着）した後から、その容器１３底面上で平面的な細
胞伸展を終了するまでの期間ｔａである。このステージ
の細胞１１は、図２（ａ）に示すように接種直後には球
状のまま培養液１２中で浮遊していた状態から、図２
（ｂ）に示されるように細胞１１の下端面を培養容器１
３の底面上に接触させて付着した後、図２（ｃ）に示さ
れるようにその付着位置で徐々に接着面積及び投影面積
Ｓａを増大させて扁平形状（平板状）に形を変化させ
る。そして、前記培養容器１３底面上における投影面積
Ｓａの増大が停止された時点で細胞接着期２１は終了す
る。
１の単層培養過程は、細胞接着期２１、細胞誘導期２２
及び細胞増殖期２３からなる３種のステージに分類され
る。細胞接着期２１は、培養液１２とともに培養容器１
３内に接種された細胞１１が、その容器１３底面に接触
（付着）した後から、その容器１３底面上で平面的な細
胞伸展を終了するまでの期間ｔａである。このステージ
の細胞１１は、図２（ａ）に示すように接種直後には球
状のまま培養液１２中で浮遊していた状態から、図２
（ｂ）に示されるように細胞１１の下端面を培養容器１
３の底面上に接触させて付着した後、図２（ｃ）に示さ
れるようにその付着位置で徐々に接着面積及び投影面積
Ｓａを増大させて扁平形状（平板状）に形を変化させ
る。そして、前記培養容器１３底面上における投影面積
Ｓａの増大が停止された時点で細胞接着期２１は終了す
る。
【００２１】このステージの細胞１１は、接種するため
の細胞懸濁液を調製する際に加えられたダメージの程度
に応じてその機能回復に時間を要することから、通常の
細胞分裂とはやや異なる行動様式をとる。また、生存不
能となる細胞も見られる。前記ダメージとしては、例え
ば、採取された組織から細胞１１を単離するための単離
操作や、培養容器１３の底面から細胞１１を剥離させる
ための剥離操作を行うための酵素（プロテイナーゼ等）
処理によるダメージや、凍結保存された細胞１１を培養
温度に戻すための温度変化ダメージ等である。そして、
前記生存不能細胞１１は培養容器１３の底面に接着せず
に死滅し、生存細胞１１はダメージの程度にほぼ比例す
るように所定時間経過後に培養容器１３の底面に接着し
て生存する。
の細胞懸濁液を調製する際に加えられたダメージの程度
に応じてその機能回復に時間を要することから、通常の
細胞分裂とはやや異なる行動様式をとる。また、生存不
能となる細胞も見られる。前記ダメージとしては、例え
ば、採取された組織から細胞１１を単離するための単離
操作や、培養容器１３の底面から細胞１１を剥離させる
ための剥離操作を行うための酵素（プロテイナーゼ等）
処理によるダメージや、凍結保存された細胞１１を培養
温度に戻すための温度変化ダメージ等である。そして、
前記生存不能細胞１１は培養容器１３の底面に接着せず
に死滅し、生存細胞１１はダメージの程度にほぼ比例す
るように所定時間経過後に培養容器１３の底面に接着し
て生存する。
【００２２】細胞誘導期２２は、前記細胞接着期２１の
終了後から第１回目の細胞分裂を完了するまでの期間で
ある。このステージの細胞１１は、前記培養容器１３の
底面に接着した後の新しい環境に順応するための期間で
あり、図２（ｄ）及び（ｅ）に示される細胞分裂直前の
僅かな期間以外は、図２（ｃ）に示される状態（培養容
器１３底面上に扁平形状に接着した状態）のままで生存
し、投影面積Ｓａの増大はほとんど見られず、投影面積
Ｓａ＝Ｓａ1のままで推移する。一方、前記細胞分裂直
前の僅かな期間では、細胞１１はほぼ球状となり、投影
面積Ｓａは一時的に減少する。そして、この細胞誘導期
２２の細胞（親細胞）１１は、所定のラグタイムｔLの
後に、図２（ｆ）に示されるような正常な第１回目の細
胞分裂を完了して２個の娘細胞１１ａとなる。
終了後から第１回目の細胞分裂を完了するまでの期間で
ある。このステージの細胞１１は、前記培養容器１３の
底面に接着した後の新しい環境に順応するための期間で
あり、図２（ｄ）及び（ｅ）に示される細胞分裂直前の
僅かな期間以外は、図２（ｃ）に示される状態（培養容
器１３底面上に扁平形状に接着した状態）のままで生存
し、投影面積Ｓａの増大はほとんど見られず、投影面積
Ｓａ＝Ｓａ1のままで推移する。一方、前記細胞分裂直
前の僅かな期間では、細胞１１はほぼ球状となり、投影
面積Ｓａは一時的に減少する。そして、この細胞誘導期
２２の細胞（親細胞）１１は、所定のラグタイムｔLの
後に、図２（ｆ）に示されるような正常な第１回目の細
胞分裂を完了して２個の娘細胞１１ａとなる。
【００２３】細胞増殖期２３は、前記細胞誘導期２２の
終了後（第１回目の細胞分裂終了後）以降の期間であ
る。このステージの細胞１１は、図２（ｆ）に示される
ように、その細胞１１（１１ａ）の周囲に隣接する娘細
胞１１ａ等の接触細胞がほとんどない状況では、ほぼ一
定の世代時間ｔｇ毎に細胞分裂を繰り返しながら増殖す
るが、前記接触細胞数の増大に伴って世代時間ｔｇが徐
々に長くなる。そして、培養容器１３の底面がコンフル
エント状態（培養容器１３底面全体が細胞１１によって
単層に覆われている状態）になったところで、すなわち
前記細胞１１の周囲が接触細胞により完全に覆われたと
きに細胞分裂を停止する。図１（ａ）に示されるよう
に、この細胞増殖期２３における各細胞１１の投影面積
Ｓａは、細胞分裂の直後に急激に増大した後、所定時間
ほぼ一定の投影面積Ｓａ＝Ｓａ’を維持し、次の細胞分
裂の直前に急激に減少するという周期を繰り返す。
終了後（第１回目の細胞分裂終了後）以降の期間であ
る。このステージの細胞１１は、図２（ｆ）に示される
ように、その細胞１１（１１ａ）の周囲に隣接する娘細
胞１１ａ等の接触細胞がほとんどない状況では、ほぼ一
定の世代時間ｔｇ毎に細胞分裂を繰り返しながら増殖す
るが、前記接触細胞数の増大に伴って世代時間ｔｇが徐
々に長くなる。そして、培養容器１３の底面がコンフル
エント状態（培養容器１３底面全体が細胞１１によって
単層に覆われている状態）になったところで、すなわち
前記細胞１１の周囲が接触細胞により完全に覆われたと
きに細胞分裂を停止する。図１（ａ）に示されるよう
に、この細胞増殖期２３における各細胞１１の投影面積
Ｓａは、細胞分裂の直後に急激に増大した後、所定時間
ほぼ一定の投影面積Ｓａ＝Ｓａ’を維持し、次の細胞分
裂の直前に急激に減少するという周期を繰り返す。
【００２４】培養容器１３内の個々の細胞１１は、好ま
しくはＣＣＤカメラ１０３を用いて継続的に撮影されモ
ニタリングされる。撮影された原画像には、細胞１１以
外の像が含まれるので、培養容器１３の底面に接着した
個々の細胞１１の投影像やその投影像周縁の輪郭を明確
化させるための適切な画像処理が行われる。原画像の画
像処理により、細胞像が抽出される。好ましくは、抽出
された細胞像の画素数や輪郭等を用いて、モニタリング
されている個々の細胞１１の投影面積Ｓａが算出され
る。さらに、抽出された細胞像から、個々の細胞１１に
隣接する接触細胞数を計測するように構成するのが好ま
しい。算出結果すなわち投影面積Ｓａ及び／又は接触細
胞数が、細胞１１の増殖能力関連指標（個別細胞観察測
定結果）として、その細胞集団の増殖能力を評価するた
めに利用される。
しくはＣＣＤカメラ１０３を用いて継続的に撮影されモ
ニタリングされる。撮影された原画像には、細胞１１以
外の像が含まれるので、培養容器１３の底面に接着した
個々の細胞１１の投影像やその投影像周縁の輪郭を明確
化させるための適切な画像処理が行われる。原画像の画
像処理により、細胞像が抽出される。好ましくは、抽出
された細胞像の画素数や輪郭等を用いて、モニタリング
されている個々の細胞１１の投影面積Ｓａが算出され
る。さらに、抽出された細胞像から、個々の細胞１１に
隣接する接触細胞数を計測するように構成するのが好ま
しい。算出結果すなわち投影面積Ｓａ及び／又は接触細
胞数が、細胞１１の増殖能力関連指標（個別細胞観察測
定結果）として、その細胞集団の増殖能力を評価するた
めに利用される。
【００２５】前記個々の細胞１１の投影面積Ｓａをモニ
タリングする場合には、図１（ａ）に示されるように、
その投影面積Ｓａの経時変化から細胞分裂等の細胞１１
の状態を容易に把握することができる。すなわち、培養
容器１３内に接種された細胞１１は、細胞接着期２１の
極初期にはほぼ球状であることから投影面積Ｓａが極め
て小さいが、時間経過に伴って培養容器１３の底面上で
徐々に投影面積Ｓａを増大させながら扁平形状になる。
そして、細胞接着期２１の終了時には、細胞１１の変形
は停止し、前記投影面積Ｓａの増大は停止される。
タリングする場合には、図１（ａ）に示されるように、
その投影面積Ｓａの経時変化から細胞分裂等の細胞１１
の状態を容易に把握することができる。すなわち、培養
容器１３内に接種された細胞１１は、細胞接着期２１の
極初期にはほぼ球状であることから投影面積Ｓａが極め
て小さいが、時間経過に伴って培養容器１３の底面上で
徐々に投影面積Ｓａを増大させながら扁平形状になる。
そして、細胞接着期２１の終了時には、細胞１１の変形
は停止し、前記投影面積Ｓａの増大は停止される。
【００２６】次に、前記細胞１１は、細胞誘導期２２に
おいてほぼ一定の投影面積Ｓａ＝Ｓａ1のまま接着後第
１回目の細胞分裂のための準備（細胞周期におけるＤＮ
Ａ合成準備期（Ｇ1期）からＤＮＡ合成期（Ｓ期））を
行った後、分裂準備期（Ｇ2期）に至る段階で有糸分裂
を行うために再び球状に形を変える。このＧ2期は、図
１（ａ）に示される細胞誘導期２２の終了直前における
投影面積Ｓａが急激に低下する期間である。
おいてほぼ一定の投影面積Ｓａ＝Ｓａ1のまま接着後第
１回目の細胞分裂のための準備（細胞周期におけるＤＮ
Ａ合成準備期（Ｇ1期）からＤＮＡ合成期（Ｓ期））を
行った後、分裂準備期（Ｇ2期）に至る段階で有糸分裂
を行うために再び球状に形を変える。このＧ2期は、図
１（ａ）に示される細胞誘導期２２の終了直前における
投影面積Ｓａが急激に低下する期間である。
【００２７】続いて、前記細胞１１の投影面積Ｓａは、
分裂期（Ｍ期）において一旦極小値（図１（ａ）に示さ
れる細胞誘導期２２と細胞増殖期２３との境界部）をと
った後、細胞増殖期２３に進行して再び増大する。この
とき、前記細胞（親細胞）１１は、細胞分裂を行って複
数（通常は２個）の娘細胞１１ａとなった後、培養容器
１３底面上のほぼそのままの位置で側部を互いに接触さ
せながら前記底面上に接着し（図２（ｆ）参照）、上記
細胞接着期２１の場合と同様にその投影面積Ｓａを徐々
に増大させる。
分裂期（Ｍ期）において一旦極小値（図１（ａ）に示さ
れる細胞誘導期２２と細胞増殖期２３との境界部）をと
った後、細胞増殖期２３に進行して再び増大する。この
とき、前記細胞（親細胞）１１は、細胞分裂を行って複
数（通常は２個）の娘細胞１１ａとなった後、培養容器
１３底面上のほぼそのままの位置で側部を互いに接触さ
せながら前記底面上に接着し（図２（ｆ）参照）、上記
細胞接着期２１の場合と同様にその投影面積Ｓａを徐々
に増大させる。
【００２８】続いて、この細胞１１（１１ａ）は、上記
細胞誘導期２２の場合と同様に、ほぼ一定の投影面積Ｓ
ａ＝Ｓａ’のまま接着後第２回目の細胞分裂のための準
備を行った後、再び球状に変形して有糸分裂を行う。こ
の細胞１１（１１ａ）は細胞増殖期２３において、コン
フルエント状態になるまでほぼ同様な一連の細胞分裂過
程を複数回繰り返しながら増殖する。
細胞誘導期２２の場合と同様に、ほぼ一定の投影面積Ｓ
ａ＝Ｓａ’のまま接着後第２回目の細胞分裂のための準
備を行った後、再び球状に変形して有糸分裂を行う。こ
の細胞１１（１１ａ）は細胞増殖期２３において、コン
フルエント状態になるまでほぼ同様な一連の細胞分裂過
程を複数回繰り返しながら増殖する。
【００２９】そして、この培養容器１３内に接着してい
る細胞集団全体の増殖能力は、前記個別細胞観察測定結
果としての細胞接着期２１における個々の細胞１１の投
影面積Ｓａの変化（増加速度）を表す伸展速度ｒｓに大
きく依存しており、それをこの細胞集団全体の増殖能力
を評価するための増殖能力関連指標として利用すること
ができる。前記個々の細胞１１の伸展速度ｒｓは、細胞
接着期２１における投影面積Ｓａの最大値と最小値との
差を培養時間ｔａで割った値であり、図１（ａ）に示さ
れるグラフの細胞接着期２１における傾き（平均値）を
示している。
る細胞集団全体の増殖能力は、前記個別細胞観察測定結
果としての細胞接着期２１における個々の細胞１１の投
影面積Ｓａの変化（増加速度）を表す伸展速度ｒｓに大
きく依存しており、それをこの細胞集団全体の増殖能力
を評価するための増殖能力関連指標として利用すること
ができる。前記個々の細胞１１の伸展速度ｒｓは、細胞
接着期２１における投影面積Ｓａの最大値と最小値との
差を培養時間ｔａで割った値であり、図１（ａ）に示さ
れるグラフの細胞接着期２１における傾き（平均値）を
示している。
【００３０】さらに、この細胞集団全体の増殖能力は、
前記個別細胞観察測定結果としての細胞増殖期２３にお
ける個々の細胞１１の接触細胞数に大きく依存してお
り、これをこの細胞集団全体の増殖能力を評価するため
の増殖能力関連指標として利用することができる。すな
わち、この細胞１１は、単層培養を行う性質を有すると
ともに、細胞分裂後の娘細胞１１ａ同士が互いに接触し
ながら生存する性質を有していることから、細胞分裂後
の娘細胞１１ａが接着を許容するための余剰スペースが
なくなった時点で、接触阻害により細胞分裂を停止する
ようになっている。そして、前記接触阻害の程度は、個
々の細胞１１の接触細胞数とほぼ比例して高められる。
前記個別細胞観察測定結果としての細胞増殖期２３にお
ける個々の細胞１１の接触細胞数に大きく依存してお
り、これをこの細胞集団全体の増殖能力を評価するため
の増殖能力関連指標として利用することができる。すな
わち、この細胞１１は、単層培養を行う性質を有すると
ともに、細胞分裂後の娘細胞１１ａ同士が互いに接触し
ながら生存する性質を有していることから、細胞分裂後
の娘細胞１１ａが接着を許容するための余剰スペースが
なくなった時点で、接触阻害により細胞分裂を停止する
ようになっている。そして、前記接触阻害の程度は、個
々の細胞１１の接触細胞数とほぼ比例して高められる。
【００３１】また、この細胞集団全体の増殖能力は、前
記個別細胞観察測定結果としての細胞増殖期２３におけ
る個々の細胞１１の投影面積Ｓａ＝Ｓａ’に大きく依存
しており、この細胞集団全体の細胞寿命を考慮した増殖
能力を評価するための増殖能力関連指標として利用する
ことができる。すなわち、この細胞１１は、単層培養を
行う性質を有するとともに、分化後からの細胞分裂回数
と直接的にリンクした有限の細胞寿命を持つ性質を有し
ていることから、その細胞寿命の限界に達した細胞１１
は増殖能力がなくなる。前記細胞寿命の程度は、同種に
おいて細胞株にほとんど関係がなく、個々の細胞１１の
投影面積Ｓａ’に対してほぼ負に比例している。
記個別細胞観察測定結果としての細胞増殖期２３におけ
る個々の細胞１１の投影面積Ｓａ＝Ｓａ’に大きく依存
しており、この細胞集団全体の細胞寿命を考慮した増殖
能力を評価するための増殖能力関連指標として利用する
ことができる。すなわち、この細胞１１は、単層培養を
行う性質を有するとともに、分化後からの細胞分裂回数
と直接的にリンクした有限の細胞寿命を持つ性質を有し
ていることから、その細胞寿命の限界に達した細胞１１
は増殖能力がなくなる。前記細胞寿命の程度は、同種に
おいて細胞株にほとんど関係がなく、個々の細胞１１の
投影面積Ｓａ’に対してほぼ負に比例している。
【００３２】なお、前記投影面積Ｓａ’は、細胞増殖期
２３における個々の細胞１１の定常状態（投影面積Ｓａ
が一定の状態（Ｇ0、Ｇ1及びＳ期））における投影面積
を表し、通常は細胞１１の分裂回数の増加に伴って僅か
ずつ増大する傾向があるが、培養容器１３内に接種され
てからコンフルエント状態になるまでの間における増大
幅はあまり大きくはない。従って、前記投影面積Ｓａ’
としては、第１回目の細胞分裂以降の投影面積Ｓａ’の
平均値を利用するのが好ましいが、第２回目の細胞分裂
直前の投影面積Ｓａ’を利用しても構わない。この第２
回目の細胞分裂直前の投影面積Ｓａ’を利用した場合に
は、培養の早い段階でその細胞集団の増殖能力を評価す
ることができて大変便利である。
２３における個々の細胞１１の定常状態（投影面積Ｓａ
が一定の状態（Ｇ0、Ｇ1及びＳ期））における投影面積
を表し、通常は細胞１１の分裂回数の増加に伴って僅か
ずつ増大する傾向があるが、培養容器１３内に接種され
てからコンフルエント状態になるまでの間における増大
幅はあまり大きくはない。従って、前記投影面積Ｓａ’
としては、第１回目の細胞分裂以降の投影面積Ｓａ’の
平均値を利用するのが好ましいが、第２回目の細胞分裂
直前の投影面積Ｓａ’を利用しても構わない。この第２
回目の細胞分裂直前の投影面積Ｓａ’を利用した場合に
は、培養の早い段階でその細胞集団の増殖能力を評価す
ることができて大変便利である。
【００３３】これらの増殖能力の評価においては、予め
試験的に同種の細胞１１について同じ条件で個別細胞観
察測定結果をモニタリングしながら、その細胞集団全体
の増殖曲線を作製したり、世代時間ｔｇ、所定時間ｔま
での細胞分裂割合Ｎｔ／Ｎｏ、見かけの倍加時間ｔｄ、
平均の比増殖速度μ、増殖度Ｙ（ｔ）、平均の細胞分裂
回数Ｎｄ等の細胞集団全体の増殖能力について調べた予
備試験結果を求めた後、それら予備試験結果と比較する
形で実際の評価が行われるように構成される。さらに、
評価結果の誤差を低減させるために、任意に選ばれた複
数の細胞１１について個々に観察測定した個別細胞観察
測定結果を用いて平均化するのが最も好ましい。また、
上記複数の個別細胞観察測定結果（例えば伸展速度ｒ
ｓ、接触細胞数及び投影面積Ｓａ’）を組み合わせて評
価するとさらに的確な評価を行うことができる。
試験的に同種の細胞１１について同じ条件で個別細胞観
察測定結果をモニタリングしながら、その細胞集団全体
の増殖曲線を作製したり、世代時間ｔｇ、所定時間ｔま
での細胞分裂割合Ｎｔ／Ｎｏ、見かけの倍加時間ｔｄ、
平均の比増殖速度μ、増殖度Ｙ（ｔ）、平均の細胞分裂
回数Ｎｄ等の細胞集団全体の増殖能力について調べた予
備試験結果を求めた後、それら予備試験結果と比較する
形で実際の評価が行われるように構成される。さらに、
評価結果の誤差を低減させるために、任意に選ばれた複
数の細胞１１について個々に観察測定した個別細胞観察
測定結果を用いて平均化するのが最も好ましい。また、
上記複数の個別細胞観察測定結果（例えば伸展速度ｒ
ｓ、接触細胞数及び投影面積Ｓａ’）を組み合わせて評
価するとさらに的確な評価を行うことができる。
【００３４】前記見かけの倍加時間ｔｄは、隣接する細
胞１１同士が接触しない細胞接種濃度Ｘｏ（cells／ｃ
ｍ2）で培養容器１３内に細胞１１を接種した後、対数
増殖を行っているときの細胞接着濃度Ｘａ（cells／ｃ
ｍ2）変化を経時的にモニタリングすることによって平
均の比増殖速度μを測定し、その測定結果から算出され
る。前記増殖度Ｙ（ｔ）は、ある細胞接種濃度Ｘｏで細
胞１１を接種して培養する際に、細胞増殖期２３の所定
の培養時間ｔにおける細胞接着濃度Ｘａtを計測し、そ
の細胞接着濃度Ｘａtに対する前記細胞接種濃度Ｘｏの
割合としての接着率（Ｘａt／Ｘｏ）を算出することに
よって決定される。
胞１１同士が接触しない細胞接種濃度Ｘｏ（cells／ｃ
ｍ2）で培養容器１３内に細胞１１を接種した後、対数
増殖を行っているときの細胞接着濃度Ｘａ（cells／ｃ
ｍ2）変化を経時的にモニタリングすることによって平
均の比増殖速度μを測定し、その測定結果から算出され
る。前記増殖度Ｙ（ｔ）は、ある細胞接種濃度Ｘｏで細
胞１１を接種して培養する際に、細胞増殖期２３の所定
の培養時間ｔにおける細胞接着濃度Ｘａtを計測し、そ
の細胞接着濃度Ｘａtに対する前記細胞接種濃度Ｘｏの
割合としての接着率（Ｘａt／Ｘｏ）を算出することに
よって決定される。
【００３５】前記平均の細胞分裂回数Ｎｄは、ある時点
での細胞接着濃度Ｘａが細胞接種濃度Ｘｏに対して下記
数式（１）に示される関係を有していることから、前記
ＸａとＸｏとを下記数式（２）に代入することによって
求められる。
での細胞接着濃度Ｘａが細胞接種濃度Ｘｏに対して下記
数式（１）に示される関係を有していることから、前記
ＸａとＸｏとを下記数式（２）に代入することによって
求められる。
【００３６】Ｘａ＝Ｘｏ×２Nd ……（１） Ｎｄ＝ｌｎ（Ｘａ／Ｘｏ）／ｌｎ２ ……（２） また、この細胞増殖能評価方法は予備試験結果のデータ
種類を増やすことによって、前記増殖能力の評価に加え
て、細胞集団全体の代謝活性、細胞寿命、ストレスに対
する修復能力、分化の程度、移植用組織に使用される場
合の品質（患部修復速度）等を評価することもできる。
種類を増やすことによって、前記増殖能力の評価に加え
て、細胞集団全体の代謝活性、細胞寿命、ストレスに対
する修復能力、分化の程度、移植用組織に使用される場
合の品質（患部修復速度）等を評価することもできる。
【００３７】上記実施形態によって発揮される効果につ
いて以下に記載する。 ・ 本実施形態の細胞増殖能評価方法は、培養容器１３
内で培養されている個々の細胞像を形態観察測定した個
別細胞観察測定結果を用いて、その培養容器１３内の細
胞集団全体の増殖能力を定量評価するように構成されて
いる。このため、個々の細胞１１を無襲撃（無染色）、
非破壊で形態観察測定することによって、その細胞集団
全体の増殖能力を容易かつ的確に把握することができ
る。
いて以下に記載する。 ・ 本実施形態の細胞増殖能評価方法は、培養容器１３
内で培養されている個々の細胞像を形態観察測定した個
別細胞観察測定結果を用いて、その培養容器１３内の細
胞集団全体の増殖能力を定量評価するように構成されて
いる。このため、個々の細胞１１を無襲撃（無染色）、
非破壊で形態観察測定することによって、その細胞集団
全体の増殖能力を容易かつ的確に把握することができ
る。
【００３８】・ この細胞増殖能評価方法は、細胞１１
を培養容器１３に接種する工程と、培養容器１３内の培
養状態を撮影する工程と、その培養状態の画像から個々
の細胞１１の画像を抽出する工程と、その個々の細胞１
１の画像から増殖能力関連指標を演算する工程と、その
指標を用いて細胞集団全体の増殖能力を評価する工程と
を備えている。このため、細胞１１を培養容器１３に接
種した時点からその培養状態をモニタリングすることに
よって、細胞接着期２１において観察測定された個々の
細胞１１の個別細胞観察測定結果を細胞集団全体の増殖
能力の評価に反映させることが容易である。従って、細
胞集団全体の増殖能力をより一層的確に把握することが
できるうえ、細胞誘導期２２や細胞増殖期２３における
個別細胞観察測定結果と組合わせることにより、細胞集
団全体の増殖能力を極めて的確に評価することが可能と
なる。
を培養容器１３に接種する工程と、培養容器１３内の培
養状態を撮影する工程と、その培養状態の画像から個々
の細胞１１の画像を抽出する工程と、その個々の細胞１
１の画像から増殖能力関連指標を演算する工程と、その
指標を用いて細胞集団全体の増殖能力を評価する工程と
を備えている。このため、細胞１１を培養容器１３に接
種した時点からその培養状態をモニタリングすることに
よって、細胞接着期２１において観察測定された個々の
細胞１１の個別細胞観察測定結果を細胞集団全体の増殖
能力の評価に反映させることが容易である。従って、細
胞集団全体の増殖能力をより一層的確に把握することが
できるうえ、細胞誘導期２２や細胞増殖期２３における
個別細胞観察測定結果と組合わせることにより、細胞集
団全体の増殖能力を極めて的確に評価することが可能と
なる。
【００３９】・ 細胞接着期２１における個々の細胞１
１の伸展速度ｒｓを個別細胞観察測定結果とすることに
よって、培養初期において細胞１１の増殖能力を容易に
把握することができる。細胞増殖期２３における個々の
細胞１１の接触細胞数を個別細胞観察測定結果とするこ
とによって、培養後期の細胞１１の増殖能力を容易に推
定することができる。細胞増殖期２３における個々の細
胞１１の投影面積Ｓａ’を個別細胞観察測定結果とする
ことによって、測定時以降の細胞１１の増殖能力（細胞
寿命）をさらに容易に推定することができる。
１の伸展速度ｒｓを個別細胞観察測定結果とすることに
よって、培養初期において細胞１１の増殖能力を容易に
把握することができる。細胞増殖期２３における個々の
細胞１１の接触細胞数を個別細胞観察測定結果とするこ
とによって、培養後期の細胞１１の増殖能力を容易に推
定することができる。細胞増殖期２３における個々の細
胞１１の投影面積Ｓａ’を個別細胞観察測定結果とする
ことによって、測定時以降の細胞１１の増殖能力（細胞
寿命）をさらに容易に推定することができる。
【００４０】・ 本実施形態の細胞増殖能評価装置１０
０及び細胞増殖能評価プログラムは、前記細胞増殖能評
価方法に従って培養容器１３内の細胞集団全体の増殖能
力を定量評価するように構成されている。このため、前
記細胞増殖能評価方法と同様に、個々の細胞１１を無襲
撃（無染色）、非破壊で形態観察測定することによっ
て、その細胞集団全体の増殖能力を容易かつ的確に把握
することができる。
０及び細胞増殖能評価プログラムは、前記細胞増殖能評
価方法に従って培養容器１３内の細胞集団全体の増殖能
力を定量評価するように構成されている。このため、前
記細胞増殖能評価方法と同様に、個々の細胞１１を無襲
撃（無染色）、非破壊で形態観察測定することによっ
て、その細胞集団全体の増殖能力を容易かつ的確に把握
することができる。
【００４１】
【実施例】以下、上記実施形態を具体化した実施例につ
いて説明する。 ＜試験条件＞ 細胞：マウス ＮＩＨ ３Ｔ３ p-7 cl-3 IFO 50019 細胞
株（（財）発酵研究所） 培養液：ＤＭＥＭ＋１０％ウシ新生児血清（シグマ社） 培養容器：２５ｃｍ2 Ｔ−フラスコ（ファルコン社） 培養液量：約１０ｍｌ（前記Ｔ−フラスコに４ｍｍ深
さ） 培養温度：３７℃（湿度１００％） 通気条件：エアー（５％ＣＯ2）、５ｍｌ／分（通気流
量） 細胞接種濃度ＸO：１．０×１０4 cells／ｃｍ2 撮影装置：ＣＣＤカメラ（東京電子工業社） 撮影範囲：９００μｍ×６８０μｍ（６．１×１０-3ｃ
ｍ2） 画像処理装置：パーソナルコンピュータ（ＩＢＭ社） 画像処理１：個々の細胞の投影面積Ｓａの定量化 原画像（１０分毎に取り込み）→背景分離処理→ルック
アップテーブル変換→平滑化処理→二値化抽出処理→孤
立点除去処理→クロージング処理→穴埋め処理→エリア
抽出処理→画素数計測 画像処理２：撮影範囲内の全細胞数を計測した後、その
計測値から培養容器内の細胞接着濃度Ｘａ（cells／ｃ
ｍ2）を算出 ＜試験１：培養初期における１細胞の観察測定＞前記細
胞を培養容器内に接種した後、容器底面に付着した１個
の細胞について、撮影装置１０３を用いて撮影し、画像
処理装置１０４を用いて画像処理１を行い、投影面積Ｓ
ａを経時的にモニタリング（測定）した。結果を図１
（ｂ）に示す。なお、図１（ｂ）に示される培養時間
は、前記細胞が培養容器の底面に付着した後からの経過
時間を示す。
いて説明する。 ＜試験条件＞ 細胞：マウス ＮＩＨ ３Ｔ３ p-7 cl-3 IFO 50019 細胞
株（（財）発酵研究所） 培養液：ＤＭＥＭ＋１０％ウシ新生児血清（シグマ社） 培養容器：２５ｃｍ2 Ｔ−フラスコ（ファルコン社） 培養液量：約１０ｍｌ（前記Ｔ−フラスコに４ｍｍ深
さ） 培養温度：３７℃（湿度１００％） 通気条件：エアー（５％ＣＯ2）、５ｍｌ／分（通気流
量） 細胞接種濃度ＸO：１．０×１０4 cells／ｃｍ2 撮影装置：ＣＣＤカメラ（東京電子工業社） 撮影範囲：９００μｍ×６８０μｍ（６．１×１０-3ｃ
ｍ2） 画像処理装置：パーソナルコンピュータ（ＩＢＭ社） 画像処理１：個々の細胞の投影面積Ｓａの定量化 原画像（１０分毎に取り込み）→背景分離処理→ルック
アップテーブル変換→平滑化処理→二値化抽出処理→孤
立点除去処理→クロージング処理→穴埋め処理→エリア
抽出処理→画素数計測 画像処理２：撮影範囲内の全細胞数を計測した後、その
計測値から培養容器内の細胞接着濃度Ｘａ（cells／ｃ
ｍ2）を算出 ＜試験１：培養初期における１細胞の観察測定＞前記細
胞を培養容器内に接種した後、容器底面に付着した１個
の細胞について、撮影装置１０３を用いて撮影し、画像
処理装置１０４を用いて画像処理１を行い、投影面積Ｓ
ａを経時的にモニタリング（測定）した。結果を図１
（ｂ）に示す。なお、図１（ｂ）に示される培養時間
は、前記細胞が培養容器の底面に付着した後からの経過
時間を示す。
【００４２】図１（ｂ）の結果及び原画像を目視した結
果より、培養初期には細胞は球状で比較的投影面積Ｓａ
が小さかったが、その後徐々に培養容器底面上で細胞が
伸展を開始したことが確認された。そして、培養時間が
約６時間後までは投影面積Ｓａはほぼ直線的に増加した
ことも確認された。さらに、培養時間が約６〜８時間に
おいて投影面積Ｓａはほぼ一定値をとり、培養時間が約
８〜９時間の間に急激に投影面積Ｓａが減少して細胞分
裂を行ったことも確認された。
果より、培養初期には細胞は球状で比較的投影面積Ｓａ
が小さかったが、その後徐々に培養容器底面上で細胞が
伸展を開始したことが確認された。そして、培養時間が
約６時間後までは投影面積Ｓａはほぼ直線的に増加した
ことも確認された。さらに、培養時間が約６〜８時間に
おいて投影面積Ｓａはほぼ一定値をとり、培養時間が約
８〜９時間の間に急激に投影面積Ｓａが減少して細胞分
裂を行ったことも確認された。
【００４３】従って、この細胞は、付着後約０〜６時間
までが細胞接着期２１であり、約６〜９時間までが細胞
誘導期２２であり、９時間後以降が細胞増殖期２３であ
ったことが確認された。以上より、細胞接着期２１の期
間ｔａは約６時間、ラグタイムｔLは約３時間、伸展速
度ｒｓは約６２μｍ2／ｈであった。
までが細胞接着期２１であり、約６〜９時間までが細胞
誘導期２２であり、９時間後以降が細胞増殖期２３であ
ったことが確認された。以上より、細胞接着期２１の期
間ｔａは約６時間、ラグタイムｔLは約３時間、伸展速
度ｒｓは約６２μｍ2／ｈであった。
【００４４】＜試験２：細胞集団の増殖曲線の作製＞前
記試験１の観察測定時及び観察測定後において、その培
養容器内に接種された細胞集団についてさらに継続して
追跡調査を行うことによってその増殖能力を評価した。
すなわち、前記培養容器内に接種された細胞集団全体を
上記画像処理２の処理方法により観察測定し、培養容器
の底面に接着している細胞についてその細胞接着濃度Ｘ
ａを経時的にモニタリング（測定）することによって、
その細胞集団の増殖曲線を作製した。結果を図３に示
す。
記試験１の観察測定時及び観察測定後において、その培
養容器内に接種された細胞集団についてさらに継続して
追跡調査を行うことによってその増殖能力を評価した。
すなわち、前記培養容器内に接種された細胞集団全体を
上記画像処理２の処理方法により観察測定し、培養容器
の底面に接着している細胞についてその細胞接着濃度Ｘ
ａを経時的にモニタリング（測定）することによって、
その細胞集団の増殖曲線を作製した。結果を図３に示
す。
【００４５】その結果、この細胞集団は、細胞接種後２
０〜６０時間の期間にほぼ対数増殖を行ったことが示さ
れた。さらに、その期間における増殖曲線（グラフ）の
傾きから、この細胞集団の見かけの倍加時間ｔｄは約１
１．２時間であったことも示された。このため、伸展速
度ｒｓが約６２μｍ2／ｈのときの細胞集団は、図３に
示される増殖曲線に従って増殖することが予想される。
さらに、この細胞集団が対数増殖を行うときの見かけの
倍加時間ｔｄは約１１．２時間となることも予想され
る。
０〜６０時間の期間にほぼ対数増殖を行ったことが示さ
れた。さらに、その期間における増殖曲線（グラフ）の
傾きから、この細胞集団の見かけの倍加時間ｔｄは約１
１．２時間であったことも示された。このため、伸展速
度ｒｓが約６２μｍ2／ｈのときの細胞集団は、図３に
示される増殖曲線に従って増殖することが予想される。
さらに、この細胞集団が対数増殖を行うときの見かけの
倍加時間ｔｄは約１１．２時間となることも予想され
る。
【００４６】＜試験３：培養中後期における個々の細胞
の観察測定＞前記試験１の観察測定後の培養中後期（２
０〜６０時間）において、その培養容器内の個々の細胞
（ｎ＝８０）について、画像処理１の処理方法により観
察測定することによって世代時間ｔｇを測定し、培養時
間に対してグラフ上にプロットした。結果を図４に示
す。図４の結果より、培養時間の進行に伴って個々の細
胞の世代時間ｔｇが徐々に長くなることが示された。
の観察測定＞前記試験１の観察測定後の培養中後期（２
０〜６０時間）において、その培養容器内の個々の細胞
（ｎ＝８０）について、画像処理１の処理方法により観
察測定することによって世代時間ｔｇを測定し、培養時
間に対してグラフ上にプロットした。結果を図４に示
す。図４の結果より、培養時間の進行に伴って個々の細
胞の世代時間ｔｇが徐々に長くなることが示された。
【００４７】さらに、前記各細胞の原画像を適時目視す
ることによって接触細胞数を計測し、前記世代時間ｔｇ
に対してグラフ上にプロットした。結果を図５に示す。
図５の結果より、接触細胞数の増加に伴って世代時間ｔ
ｇが長くなることが確認された。従って、この世代時間
ｔｇの延長は、接触阻害を主な原因とするものであるこ
とが推定される。
ることによって接触細胞数を計測し、前記世代時間ｔｇ
に対してグラフ上にプロットした。結果を図５に示す。
図５の結果より、接触細胞数の増加に伴って世代時間ｔ
ｇが長くなることが確認された。従って、この世代時間
ｔｇの延長は、接触阻害を主な原因とするものであるこ
とが推定される。
【００４８】＜試験４：トリプシンを利用した増殖能力
の評価試験Ｉ＞培養容器内で培養されていた細胞を１分
間のトリプシン処理によってその底面から剥離させて継
代培養用の細胞懸濁液を調製した後、その細胞懸濁液を
別の新しい培養容器内に接種した（１分間トリプシン処
理細胞）。同様に１５分間のトリプシン処理を行った後
に継代培養した細胞を準備した（１５分間トリプシン処
理細胞）。
の評価試験Ｉ＞培養容器内で培養されていた細胞を１分
間のトリプシン処理によってその底面から剥離させて継
代培養用の細胞懸濁液を調製した後、その細胞懸濁液を
別の新しい培養容器内に接種した（１分間トリプシン処
理細胞）。同様に１５分間のトリプシン処理を行った後
に継代培養した細胞を準備した（１５分間トリプシン処
理細胞）。
【００４９】これら培養容器内の個々の細胞（それぞれ
ｎ＝９）について、撮影装置１０３と画像処理１を用い
て、各細胞の投影面積Ｓａを経時的にモニタリングして
伸展速度ｒｓの平均値を算出した。その結果、１分間ト
リプシン処理細胞の伸展速度ｒｓは約７２μｍ2／ｈで
あり、１５分間トリプシン処理細胞の伸展速度ｒｓは約
２４μｍ2／ｈであった。
ｎ＝９）について、撮影装置１０３と画像処理１を用い
て、各細胞の投影面積Ｓａを経時的にモニタリングして
伸展速度ｒｓの平均値を算出した。その結果、１分間ト
リプシン処理細胞の伸展速度ｒｓは約７２μｍ2／ｈで
あり、１５分間トリプシン処理細胞の伸展速度ｒｓは約
２４μｍ2／ｈであった。
【００５０】一方、前記１分間トリプシン処理細胞及び
１５分間トリプシン処理細胞について、前記伸展速度ｒ
ｓの算出と同時並行して、画像処理２の処理方法により
細胞接着濃度Ｘａを経時的にモニタリングした。そし
て、各細胞集団の増殖曲線を作製した。結果を図６に示
す。図６の結果より、個々の細胞を観察測定した個別細
胞観察測定結果としての伸展速度ｒｓが高い（１分間ト
リプシン処理細胞）ほど、その細胞集団全体の増殖能力
は高められることが確認された。従って、培養初期にお
ける個々の細胞の伸展速度ｒｓが、その細胞集団全体の
増殖能力に大きな影響を与えることが確認された。
１５分間トリプシン処理細胞について、前記伸展速度ｒ
ｓの算出と同時並行して、画像処理２の処理方法により
細胞接着濃度Ｘａを経時的にモニタリングした。そし
て、各細胞集団の増殖曲線を作製した。結果を図６に示
す。図６の結果より、個々の細胞を観察測定した個別細
胞観察測定結果としての伸展速度ｒｓが高い（１分間ト
リプシン処理細胞）ほど、その細胞集団全体の増殖能力
は高められることが確認された。従って、培養初期にお
ける個々の細胞の伸展速度ｒｓが、その細胞集団全体の
増殖能力に大きな影響を与えることが確認された。
【００５１】＜試験５：トリプシンを利用した増殖能力
の評価試験II＞培養容器内で培養されていた細胞を適宜
異なるトリプシン処理時間で処理した後、各培養容器底
面から細胞を剥離させて継代培養用の細胞懸濁液を調製
した後、各細胞懸濁液を別の新しい培養容器内に接種し
た。これら各培養容器内の個々の細胞（それぞれｎ＝
８）について、撮影装置１０３と画像処理１を用いて投
影面積Ｓａを経時的にモニタリングし、伸展速度ｒｓの
平均値を算出した。
の評価試験II＞培養容器内で培養されていた細胞を適宜
異なるトリプシン処理時間で処理した後、各培養容器底
面から細胞を剥離させて継代培養用の細胞懸濁液を調製
した後、各細胞懸濁液を別の新しい培養容器内に接種し
た。これら各培養容器内の個々の細胞（それぞれｎ＝
８）について、撮影装置１０３と画像処理１を用いて投
影面積Ｓａを経時的にモニタリングし、伸展速度ｒｓの
平均値を算出した。
【００５２】さらに、前記各培養容器内の個々の細胞に
ついて、細胞分裂回数（０回又は１回）を接種２４時間
後までモニタリングした。そして、各培養容器内の解析
細胞数Ｎｏに対する２４時間以内の分裂細胞数Ｎ24の割
合（細胞分裂割合；Ｎ24／Ｎｏ）を求めた。結果を図７
に示す。
ついて、細胞分裂回数（０回又は１回）を接種２４時間
後までモニタリングした。そして、各培養容器内の解析
細胞数Ｎｏに対する２４時間以内の分裂細胞数Ｎ24の割
合（細胞分裂割合；Ｎ24／Ｎｏ）を求めた。結果を図７
に示す。
【００５３】図７の結果より、伸展速度ｒｓの上昇に伴
って細胞分裂割合Ｎ24／Ｎｏが増大することが示され
た。従って、培養初期における個々の細胞の伸展速度ｒ
ｓを求めることにより、その細胞集団全体の増殖能力を
容易に評価することができることが確認された。
って細胞分裂割合Ｎ24／Ｎｏが増大することが示され
た。従って、培養初期における個々の細胞の伸展速度ｒ
ｓを求めることにより、その細胞集団全体の増殖能力を
容易に評価することができることが確認された。
【００５４】＜試験６：一連の継代培養中に対する細胞
増殖能の評価試験＞ ＜試験条件＞ 細胞：ヒト角化細胞（正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞
株、正常ヒト成人乳房表皮角化細胞成人細胞株）（クラ
ボウ社） 培養液：角化細胞用無血清培地（HuMedia-KG2，クラボ
ウ社） その他の条件は前記試験条件と同じ 培養容器内で培養されている個々の細胞（ｎ＝２０）に
ついて、撮影装置１０３と画像処理１を用いて、細胞増
殖期２３における各細胞の投影面積Ｓａを経時的にモニ
タリングして平均の投影面積Ｓａ’を算出した。この操
作を、ドナーの年齢の異なる上記２種類の細胞株を用い
て行うとともに、継代培養操作を数回行うことによって
長期的にモニタリングした。結果を図８に示す。なお、
図８において、▲、●、■、◆及び▼は連続して継代培
養された新生児由来の細胞株を示し、△、○、□、◇及
び▽は連続して継代培養された２０歳の成人由来の細胞
株を示しており、これらは継代培養する度毎にマークを
変更して示してある。
増殖能の評価試験＞ ＜試験条件＞ 細胞：ヒト角化細胞（正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞
株、正常ヒト成人乳房表皮角化細胞成人細胞株）（クラ
ボウ社） 培養液：角化細胞用無血清培地（HuMedia-KG2，クラボ
ウ社） その他の条件は前記試験条件と同じ 培養容器内で培養されている個々の細胞（ｎ＝２０）に
ついて、撮影装置１０３と画像処理１を用いて、細胞増
殖期２３における各細胞の投影面積Ｓａを経時的にモニ
タリングして平均の投影面積Ｓａ’を算出した。この操
作を、ドナーの年齢の異なる上記２種類の細胞株を用い
て行うとともに、継代培養操作を数回行うことによって
長期的にモニタリングした。結果を図８に示す。なお、
図８において、▲、●、■、◆及び▼は連続して継代培
養された新生児由来の細胞株を示し、△、○、□、◇及
び▽は連続して継代培養された２０歳の成人由来の細胞
株を示しており、これらは継代培養する度毎にマークを
変更して示してある。
【００５５】図８の結果より、平均の投影面積Ｓａ’
は、第１回目の継代培養時には徐々に減少していった
が、第２回目の継代培養以降は徐々に増加していくこと
がわかった。前記第１回目の継代培養時における投影面
積Ｓａ’の減少は、凍結保存されていた細胞を解凍する
際に加えられたダメージによるストレス状態から解放さ
れ、その細胞本来の投影面積Ｓａ’になったためである
と推定される。
は、第１回目の継代培養時には徐々に減少していった
が、第２回目の継代培養以降は徐々に増加していくこと
がわかった。前記第１回目の継代培養時における投影面
積Ｓａ’の減少は、凍結保存されていた細胞を解凍する
際に加えられたダメージによるストレス状態から解放さ
れ、その細胞本来の投影面積Ｓａ’になったためである
と推定される。
【００５６】一方、前記投影面積Ｓａ’の算出と同時並
行して、画像処理２の処理方法により細胞接着濃度Ｘａ
を経時的にモニタリングし、その細胞集団の平均の比増
殖速度μ及び平均の細胞分裂回数Ｎｄを算出した。結果
を図８に示す。図８の結果より、どちらの細胞株も同様
な結果を示し、培養時間の増大に伴って平均の細胞分裂
回数Ｎｄ及び細胞の投影面積Ｓａ’が増大し、細胞集団
の平均の比増殖速度μは減少した。
行して、画像処理２の処理方法により細胞接着濃度Ｘａ
を経時的にモニタリングし、その細胞集団の平均の比増
殖速度μ及び平均の細胞分裂回数Ｎｄを算出した。結果
を図８に示す。図８の結果より、どちらの細胞株も同様
な結果を示し、培養時間の増大に伴って平均の細胞分裂
回数Ｎｄ及び細胞の投影面積Ｓａ’が増大し、細胞集団
の平均の比増殖速度μは減少した。
【００５７】さらに、前記細胞の投影面積Ｓａ’と、細
胞集団の平均の比増殖速度μとの関係を整理したグラフ
を図９に示す。なお、図９において、●は前記新生児由
来の細胞株を示し、○は前記成人由来の細胞株を示す。
胞集団の平均の比増殖速度μとの関係を整理したグラフ
を図９に示す。なお、図９において、●は前記新生児由
来の細胞株を示し、○は前記成人由来の細胞株を示す。
【００５８】図９の結果より、細胞集団の平均の比増殖
速度μに対する細胞の投影面積Ｓａ’は負に比例し、か
つ細胞株によらずほぼ同一の履歴を追うことが確認され
た。従って、ある時点での細胞の投影面積Ｓａ’を測定
することにより、その細胞が将来どのように増殖してい
くかを予測することができることが確認された。さら
に、その結果は細胞株の差異にかかわらずほぼ同一の経
過をたどることから、細胞の投影面積Ｓａ’の測定によ
り細胞寿命の程度を容易に予測することができることも
確認された。
速度μに対する細胞の投影面積Ｓａ’は負に比例し、か
つ細胞株によらずほぼ同一の履歴を追うことが確認され
た。従って、ある時点での細胞の投影面積Ｓａ’を測定
することにより、その細胞が将来どのように増殖してい
くかを予測することができることが確認された。さら
に、その結果は細胞株の差異にかかわらずほぼ同一の経
過をたどることから、細胞の投影面積Ｓａ’の測定によ
り細胞寿命の程度を容易に予測することができることも
確認された。
【００５９】なお、上記実施形態は、次のように変更し
て具体化することも可能である。 ・ 上記実施形態では、投影面積Ｓａ’に基づいて細胞
増殖能の評価を行ったが、投影面積Ｓａ’の代わりに細
胞１１の接着面積を利用してもよい。この場合、接着面
積の測定には、細胞１１の接着面やその接着面周辺の輪
郭を明確に撮像することのできる走査型共焦点レーザ顕
微鏡をＣＣＤカメラの代わりに使用することが好まし
い。
て具体化することも可能である。 ・ 上記実施形態では、投影面積Ｓａ’に基づいて細胞
増殖能の評価を行ったが、投影面積Ｓａ’の代わりに細
胞１１の接着面積を利用してもよい。この場合、接着面
積の測定には、細胞１１の接着面やその接着面周辺の輪
郭を明確に撮像することのできる走査型共焦点レーザ顕
微鏡をＣＣＤカメラの代わりに使用することが好まし
い。
【００６０】・ 細胞接着期２１及び細胞誘導期２２を
モニタリングせずに、細胞増殖期２３のみをモニタリン
グすることにより、細胞集団の増殖能力を評価するよう
に構成してもよい。このように構成した場合でも、細胞
増殖期２３における接触細胞数により接触阻害の状況を
把握することができる。或いは、細胞増殖期２３におけ
る投影面積Ｓａ’により、世代時間ｔｇ、見かけの倍加
時間ｔｄ、平均の比増殖速度μ等を求めることが可能で
ある。
モニタリングせずに、細胞増殖期２３のみをモニタリン
グすることにより、細胞集団の増殖能力を評価するよう
に構成してもよい。このように構成した場合でも、細胞
増殖期２３における接触細胞数により接触阻害の状況を
把握することができる。或いは、細胞増殖期２３におけ
る投影面積Ｓａ’により、世代時間ｔｇ、見かけの倍加
時間ｔｄ、平均の比増殖速度μ等を求めることが可能で
ある。
【００６１】さらに、前記実施形態より把握できる技術
的思想について以下に記載する。 （あ） 前記細胞像は、ＣＣＤカメラを用いて前記細胞
を含む培養状態を撮影した画像を画像処理することによ
り、個々の細胞の画像を抽出したものであることを特徴
とする請求項１から請求項５のいずれかに記載の細胞増
殖能評価方法。このように構成した場合、個々の接着依
存性細胞を無襲撃、非破壊で極めて容易に形態観察測定
することができる。
的思想について以下に記載する。 （あ） 前記細胞像は、ＣＣＤカメラを用いて前記細胞
を含む培養状態を撮影した画像を画像処理することによ
り、個々の細胞の画像を抽出したものであることを特徴
とする請求項１から請求項５のいずれかに記載の細胞増
殖能評価方法。このように構成した場合、個々の接着依
存性細胞を無襲撃、非破壊で極めて容易に形態観察測定
することができる。
【００６２】（か） 前記演算工程は、前記観察測定さ
れている個々の細胞の培養容器底面に対する投影面積を
演算する工程を含み、前記指標は前記投影面積を含むこ
とを特徴とする請求項２に記載の細胞増殖能評価方法。
れている個々の細胞の培養容器底面に対する投影面積を
演算する工程を含み、前記指標は前記投影面積を含むこ
とを特徴とする請求項２に記載の細胞増殖能評価方法。
【００６３】（き） 前記投影面積は、前記細胞が培養
容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増
殖期における個々の細胞の投影面積を含むことを特徴と
する前記（か）に記載の細胞増殖能評価方法。
容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増
殖期における個々の細胞の投影面積を含むことを特徴と
する前記（か）に記載の細胞増殖能評価方法。
【００６４】（く） 前記演算工程は、前記観察測定さ
れている個々の細胞に接触して存在する接触細胞数を演
算する工程を含み、前記指標は前記接触細胞数を含むこ
とを特徴とする請求項２に記載の細胞増殖能評価方法。
れている個々の細胞に接触して存在する接触細胞数を演
算する工程を含み、前記指標は前記接触細胞数を含むこ
とを特徴とする請求項２に記載の細胞増殖能評価方法。
【００６５】（け） 前記接触細胞数は、前記細胞が培
養容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞
増殖期における個々の細胞の接触細胞数を含むことを特
徴とする前記（く）に記載の細胞増殖能評価方法。
養容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞
増殖期における個々の細胞の接触細胞数を含むことを特
徴とする前記（く）に記載の細胞増殖能評価方法。
【００６６】（こ） 前記撮影工程は所定時間毎に前記
培養状態を撮影することを含むことを特徴とする請求項
２に記載の細胞増殖能評価方法。 （さ） 前記演算工程は、個々の細胞の培養容器底面に
対する投影面積を所定時間毎に演算する工程を含み、前
記評価工程は、前記投影面積の時間変化に基づいて前記
細胞集団の増殖能力を評価する工程を含むことを特徴と
する前記（こ）に記載の細胞増殖能評価方法。
培養状態を撮影することを含むことを特徴とする請求項
２に記載の細胞増殖能評価方法。 （さ） 前記演算工程は、個々の細胞の培養容器底面に
対する投影面積を所定時間毎に演算する工程を含み、前
記評価工程は、前記投影面積の時間変化に基づいて前記
細胞集団の増殖能力を評価する工程を含むことを特徴と
する前記（こ）に記載の細胞増殖能評価方法。
【００６７】（し） 前記投影面積の時間変化は、前記
細胞が培養容器の底面に付着した後からその容器底面上
での細胞の伸展が停止するまでの細胞接着期における個
々の細胞の投影面積の変化速度を含むことを特徴とする
前記（さ）に記載の細胞増殖能評価方法。
細胞が培養容器の底面に付着した後からその容器底面上
での細胞の伸展が停止するまでの細胞接着期における個
々の細胞の投影面積の変化速度を含むことを特徴とする
前記（さ）に記載の細胞増殖能評価方法。
【００６８】（す） 前記演算工程は、前記観察測定さ
れている個々の細胞に接触して存在する接触細胞数を所
定時間毎に演算し、前記評価工程は前記接触細胞数の時
間変化に基づいて評価する工程を含むことを特徴とする
前記（こ）に記載の細胞増殖能評価方法。
れている個々の細胞に接触して存在する接触細胞数を所
定時間毎に演算し、前記評価工程は前記接触細胞数の時
間変化に基づいて評価する工程を含むことを特徴とする
前記（こ）に記載の細胞増殖能評価方法。
【００６９】（た） 前記演算回路は、個々の細胞の培
養容器底面に対する投影面積を演算し、前記指標は前記
個々の細胞の投影面積を含むことを特徴とする請求項６
に記載の細胞増殖能評価装置。
養容器底面に対する投影面積を演算し、前記指標は前記
個々の細胞の投影面積を含むことを特徴とする請求項６
に記載の細胞増殖能評価装置。
【００７０】（ち） 前記指標は、前記細胞が培養容器
内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増殖期
における個々の細胞の投影面積を含むことを特徴とする
前記（た）に記載の細胞増殖能評価装置。
内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増殖期
における個々の細胞の投影面積を含むことを特徴とする
前記（た）に記載の細胞増殖能評価装置。
【００７１】（つ） 前記演算回路は、前記観察測定さ
れている個々の細胞に接触して存在する接触細胞数を演
算し、前記指標は前記接触細胞数を含むことを特徴とす
る請求項６に記載の細胞増殖能評価装置。
れている個々の細胞に接触して存在する接触細胞数を演
算し、前記指標は前記接触細胞数を含むことを特徴とす
る請求項６に記載の細胞増殖能評価装置。
【００７２】（て） 前記指標は、前記細胞が培養容器
内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増殖期
における個々の細胞の接触細胞数を含むことを特徴とす
る前記（つ）に記載の細胞増殖能評価装置。
内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の細胞増殖期
における個々の細胞の接触細胞数を含むことを特徴とす
る前記（つ）に記載の細胞増殖能評価装置。
【００７３】（と） 前記撮影装置は前記培養状態を所
定時間毎に撮影することを特徴とする請求項６に記載の
細胞増殖能評価装置。 （な） 前記演算回路は、前記観察測定されている個々
の細胞の培養容器底面に対する投影面積を所定時間毎に
演算し、前記評価回路は、前記投影面積の時間変化に基
づいて前記細胞集団の増殖能力を評価することを特徴と
する前記（と）に記載の細胞増殖能評価装置。
定時間毎に撮影することを特徴とする請求項６に記載の
細胞増殖能評価装置。 （な） 前記演算回路は、前記観察測定されている個々
の細胞の培養容器底面に対する投影面積を所定時間毎に
演算し、前記評価回路は、前記投影面積の時間変化に基
づいて前記細胞集団の増殖能力を評価することを特徴と
する前記（と）に記載の細胞増殖能評価装置。
【００７４】（に） 前記指標は、前記細胞が培養容器
の底面に付着した後からその容器底面上での細胞の伸展
が停止するまでの細胞接着期における個々の細胞の投影
面積の変化速度を含むことを特徴とする前記（な）に記
載の細胞増殖能評価装置。
の底面に付着した後からその容器底面上での細胞の伸展
が停止するまでの細胞接着期における個々の細胞の投影
面積の変化速度を含むことを特徴とする前記（な）に記
載の細胞増殖能評価装置。
【００７５】（ぬ） 前記演算回路は、前記観察測定さ
れている個々の細胞に接触して存在する接触細胞数を所
定時間毎に演算し、前記評価回路は、前記接触細胞数の
時間変化に基づいて評価することを特徴とする前記
（と）に記載の細胞増殖能評価装置。
れている個々の細胞に接触して存在する接触細胞数を所
定時間毎に演算し、前記評価回路は、前記接触細胞数の
時間変化に基づいて評価することを特徴とする前記
（と）に記載の細胞増殖能評価装置。
【００７６】（ね） 前記撮影装置は前記培養容器の下
方に配置され、前記培養容器の底に接着した細胞を撮影
するＣＣＤカメラであることを特徴とする請求項６に記
載の細胞増殖能評価装置。
方に配置され、前記培養容器の底に接着した細胞を撮影
するＣＣＤカメラであることを特徴とする請求項６に記
載の細胞増殖能評価装置。
【００７７】（の） 前記コンピュータは、さらに、評
価結果を表示するディスプレイを含むことを特徴とする
請求項６に記載の細胞増殖能評価装置。 （ま） 接着依存性細胞を培養容器内で単層培養する際
に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細胞増殖
能評価プログラムを記録したコンピュータ読み取り可能
な記録媒体であって、前記プログラムは、コンピュータ
に、前記培養容器内の培養状態の画像を解析して個々の
細胞の画像を抽出する工程と、その個々の細胞の画像か
ら細胞の増殖能力関連指標を演算する工程と、その指標
を用いて前記細胞集団の増殖能力を評価する工程とを実
行させることを特徴とする記録媒体。このように構成し
た場合、個々の接着依存性細胞を無襲撃、非破壊で形態
観察測定することによって、その細胞集団全体の増殖能
力を容易かつ的確に把握することができる。
価結果を表示するディスプレイを含むことを特徴とする
請求項６に記載の細胞増殖能評価装置。 （ま） 接着依存性細胞を培養容器内で単層培養する際
に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細胞増殖
能評価プログラムを記録したコンピュータ読み取り可能
な記録媒体であって、前記プログラムは、コンピュータ
に、前記培養容器内の培養状態の画像を解析して個々の
細胞の画像を抽出する工程と、その個々の細胞の画像か
ら細胞の増殖能力関連指標を演算する工程と、その指標
を用いて前記細胞集団の増殖能力を評価する工程とを実
行させることを特徴とする記録媒体。このように構成し
た場合、個々の接着依存性細胞を無襲撃、非破壊で形態
観察測定することによって、その細胞集団全体の増殖能
力を容易かつ的確に把握することができる。
【００７８】
【発明の効果】以上詳述したように、この発明によれ
ば、次のような効果を奏する。請求項１に記載の発明の
培養細胞評価方法によれば、個々の接着依存性細胞を無
襲撃、非破壊で形態観察測定することによって、その細
胞集団全体の増殖能力を容易かつ的確に把握することが
できる。
ば、次のような効果を奏する。請求項１に記載の発明の
培養細胞評価方法によれば、個々の接着依存性細胞を無
襲撃、非破壊で形態観察測定することによって、その細
胞集団全体の増殖能力を容易かつ的確に把握することが
できる。
【００７９】請求項２に記載の発明の細胞増殖能評価方
法によれば、請求項１に記載の発明の効果に加えて、細
胞集団全体の増殖能力をより一層的確に把握することが
できる。
法によれば、請求項１に記載の発明の効果に加えて、細
胞集団全体の増殖能力をより一層的確に把握することが
できる。
【００８０】請求項３に記載の発明の培養細胞評価方法
によれば、請求項１又は請求項２に記載の発明の効果に
加えて、培養初期において接着依存性細胞の増殖能力を
容易に把握することができる。
によれば、請求項１又は請求項２に記載の発明の効果に
加えて、培養初期において接着依存性細胞の増殖能力を
容易に把握することができる。
【００８１】請求項４に記載の発明の培養細胞評価方法
によれば、請求項１から請求項３のいずれかに記載の発
明の効果に加えて、培養後期の接着依存性細胞の増殖能
力を容易に推定することができる。
によれば、請求項１から請求項３のいずれかに記載の発
明の効果に加えて、培養後期の接着依存性細胞の増殖能
力を容易に推定することができる。
【００８２】請求項５に記載の発明の培養細胞評価方法
によれば、請求項１から請求項４のいずれかに記載の発
明の効果に加えて、細胞増殖期の接着依存性細胞の増殖
能力をさらに容易に推定することができる。
によれば、請求項１から請求項４のいずれかに記載の発
明の効果に加えて、細胞増殖期の接着依存性細胞の増殖
能力をさらに容易に推定することができる。
【００８３】請求項６に記載の発明の細胞増殖能評価装
置によれば、個々の接着依存性細胞を無襲撃、非破壊で
形態観察測定することによって、その細胞集団全体の増
殖能力を容易かつ的確に把握することができる。
置によれば、個々の接着依存性細胞を無襲撃、非破壊で
形態観察測定することによって、その細胞集団全体の増
殖能力を容易かつ的確に把握することができる。
【００８４】請求項７に記載の発明の細胞増殖能評価プ
ログラムによれば、個々の接着依存性細胞を無襲撃、非
破壊で形態観察測定することによって、その細胞集団全
体の増殖能力を容易かつ的確に把握することができる。
ログラムによれば、個々の接着依存性細胞を無襲撃、非
破壊で形態観察測定することによって、その細胞集団全
体の増殖能力を容易かつ的確に把握することができる。
【図１】 （ａ）は実施形態の個々の細胞の投影面積の
推移を模式的に示すグラフ、（ｂ）は実施例の試験１の
結果を示すグラフ。
推移を模式的に示すグラフ、（ｂ）は実施例の試験１の
結果を示すグラフ。
【図２】 （ａ）及び（ｂ）はいずれも、実施形態の培
養容器内の細胞の状態を模式的に示す断面図、（ｃ）か
ら（ｆ）は同じく部分拡大断面図。
養容器内の細胞の状態を模式的に示す断面図、（ｃ）か
ら（ｆ）は同じく部分拡大断面図。
【図３】 実施例の試験２の結果を示す片対数グラフ。
【図４】 実施例の試験３の結果を示すグラフ。
【図５】 実施例の試験３の結果を示すグラフ。
【図６】 実施例の試験４の結果を示す片対数グラフ。
【図７】 実施例の試験５の結果を示すグラフ。
【図８】 実施例の試験６の結果を示すグラフ。
【図９】 実施例の試験６の結果を示すグラフ。
【図１０】 実施形態の細胞増殖能評価装置を示す概略
図。
図。
【図１１】 実施形態の細胞増殖能評価方法の流れを示
すフローチャート。
すフローチャート。
１１…接着依存性細胞、１１ａ…接着依存性細胞として
の娘細胞、１３…培養容器、２１…細胞接着期、２３…
細胞増殖期、１００・・・細胞増殖能評価装置、１０１・・・
インキュベータ、１０３・・・撮影装置としてのＣＣＤカ
メラ、１０４・・・コンピュータとしてのパーソナルコン
ピュータ、Ｓａ…投影面積、Ｓａ’…投影面積としての
細胞増殖期における投影面積、ｒｓ…伸展速度。
の娘細胞、１３…培養容器、２１…細胞接着期、２３…
細胞増殖期、１００・・・細胞増殖能評価装置、１０１・・・
インキュベータ、１０３・・・撮影装置としてのＣＣＤカ
メラ、１０４・・・コンピュータとしてのパーソナルコン
ピュータ、Ｓａ…投影面積、Ｓａ’…投影面積としての
細胞増殖期における投影面積、ｒｓ…伸展速度。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 紀ノ岡 正博 大阪府豊中市待兼山町１−12−３−３ (72)発明者 田谷 正仁 大阪府豊中市宝山町10−５ Ｆターム(参考） 4B029 AA02 AA07 BB11 CC02 CC08 FA02 4B063 QA01 QA05 QQ08 QR69 QS24 QS39
Claims (7)
- 【請求項１】 接着依存性細胞を培養容器内で単層培養
する際に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細
胞増殖能評価方法であって、 前記培養容器内で培養されている個々の細胞像を観察測
定した個別細胞観察測定結果を用いて、その培養容器内
の細胞集団の増殖能力を評価するように構成したことを
特徴とする細胞増殖能評価方法。 - 【請求項２】 前記細胞を培養容器に接種する工程と、
培養容器内の培養状態を撮影する工程と、その培養状態
の画像から個々の細胞の画像を抽出する工程と、その個
々の細胞の画像から細胞の増殖能力関連指標を演算する
工程と、その指標を用いて前記細胞集団の増殖能力を評
価する工程とを備えたことを特徴とする請求項１に記載
の細胞増殖能評価方法。 - 【請求項３】 前記個別細胞観察測定結果を、前記細胞
が培養容器の底面に付着した後からその容器底面上での
細胞の伸展が停止するまでの細胞接着期において、前記
観察測定されている個々の細胞の培養容器底面に対する
投影面積の時間変化を表す細胞の伸展速度としたことを
特徴とする請求項１又は請求項２に記載の細胞増殖能評
価方法。 - 【請求項４】 前記個別細胞観察測定結果を、前記細胞
が培養容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の
細胞増殖期において、前記観察測定されている個々の細
胞に接触して存在する接触細胞数としたことを特徴とす
る請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞増殖能
評価方法。 - 【請求項５】 前記個別細胞観察測定結果を、前記細胞
が培養容器内で第１回目の細胞分裂を終了してから後の
細胞増殖期において、前記観察測定されている個々の細
胞の培養容器底面に対する投影面積としたことを特徴と
する請求項１から請求項４のいずれかに記載の細胞増殖
能評価方法。 - 【請求項６】 接着依存性細胞を培養容器内で単層培養
する際に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細
胞増殖能評価装置であって、 前記細胞が接種される培養容器を収容するインキュベー
タと、前記培養容器内の培養状態を撮影する撮影装置
と、前記撮影装置に接続されたコンピュータとを備え、 前記コンピュータは、培養状態の画像を解析して個々の
細胞の画像を抽出し、その個々の細胞の画像から細胞の
増殖能力関連指標を演算し、その指標を用いて前記細胞
集団の増殖能力を評価するように構成したことを特徴と
する細胞増殖能評価装置。 - 【請求項７】 接着依存性細胞を培養容器内で単層培養
する際に、その細胞集団の増殖能力を評価するための細
胞増殖能評価プログラムであって、 前記プログラムは、コンピュータに、前記培養容器内の
培養状態の画像を解析して個々の細胞の画像を抽出する
工程と、その個々の細胞の画像から細胞の増殖能力関連
指標を演算する工程と、その指標を用いて前記細胞集団
の増殖能力を評価する工程とを実行させることを特徴と
する細胞増殖能評価プログラム。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001276909A JP4841770B2 (ja) | 2000-11-22 | 2001-09-12 | 細胞増殖能評価方法、装置及びプログラム |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000356344 | 2000-11-22 | ||
| JP2000-356344 | 2000-11-22 | ||
| JP2000356344 | 2000-11-22 | ||
| JP2001276909A JP4841770B2 (ja) | 2000-11-22 | 2001-09-12 | 細胞増殖能評価方法、装置及びプログラム |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002218995A true JP2002218995A (ja) | 2002-08-06 |
| JP4841770B2 JP4841770B2 (ja) | 2011-12-21 |
Family
ID=18828608
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001276909A Expired - Fee Related JP4841770B2 (ja) | 2000-11-22 | 2001-09-12 | 細胞増殖能評価方法、装置及びプログラム |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20030134269A1 (ja) |
| JP (1) | JP4841770B2 (ja) |
Cited By (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003021628A (ja) * | 2001-07-06 | 2003-01-24 | Japan Tissue Engineering:Kk | 接着細胞選別装置、細胞増殖能評価装置、それらのプログラム及びそれらの方法 |
| JP2004141064A (ja) * | 2002-10-24 | 2004-05-20 | Masahito Taya | 細胞保存方法及びその装置 |
| JP2004344049A (ja) * | 2003-05-21 | 2004-12-09 | Masahito Taya | 細胞増殖能評価装置及びその方法 |
| WO2005030986A1 (ja) * | 2003-09-29 | 2005-04-07 | Nikon Corporation | 細胞観察装置および細胞観察方法 |
| JP2005182401A (ja) * | 2003-12-18 | 2005-07-07 | Nec Fielding Ltd | 院内感染防止システム，院内感染管理端末，院内感染防止方法およびプログラム |
| JP2005224106A (ja) * | 2004-02-10 | 2005-08-25 | Hitachi Medical Corp | 細胞培養装置 |
| WO2006095896A1 (ja) * | 2005-03-08 | 2006-09-14 | Nihon University | 培養細胞監視システム |
| WO2007052716A1 (ja) | 2005-11-01 | 2007-05-10 | Medinet Co., Ltd. | 細胞培養装置、細胞培養方法、細胞培養プログラム、及び細胞培養システム |
| JP2008523820A (ja) * | 2004-12-16 | 2008-07-10 | アクセラー８ テクノロジー コーポレイション | 高速の微生物検出および抗菌剤感受性試験 |
| JP2009515533A (ja) * | 2005-11-12 | 2009-04-16 | ゼネラル・エレクトリック・カンパニイ | 非染色核の微速度細胞周期解析 |
| WO2013114816A1 (ja) * | 2012-01-31 | 2013-08-08 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞計数方法、細胞計数装置、及び細胞計数プログラム |
| JP2016013102A (ja) * | 2014-07-02 | 2016-01-28 | チトセ バイオ エボリューション ピーティーイー リミテッド | 細胞を安定させる条件を定量評価する方法 |
| US9741110B2 (en) | 2005-03-22 | 2017-08-22 | Medinet Co., Ltd. | Cell culture evaluation system for measuring suspension cells, cell culture evaluation method for measuring suspension cells, and cell culture evaluation program for measuring suspension cells |
| JP2018108064A (ja) * | 2017-01-06 | 2018-07-12 | オリンパス株式会社 | 細胞観察システム |
| WO2018128080A1 (ja) | 2017-01-06 | 2018-07-12 | オリンパス株式会社 | 細胞観察システム |
| JP2019000026A (ja) * | 2017-06-14 | 2019-01-10 | オリンパス株式会社 | 細胞培養モニタリングシステム |
| JP2019004795A (ja) * | 2017-06-26 | 2019-01-17 | 大日本印刷株式会社 | 細胞培養状態評価装置 |
| JP2019058143A (ja) * | 2017-09-28 | 2019-04-18 | チトセ バイオ エボリューション ピーティーイー リミテッド | 細胞の培養安定性を予測する方法 |
| US10762327B2 (en) | 2017-09-28 | 2020-09-01 | Olympus Corporation | Image-processing device and cell observation system |
| WO2020218393A1 (ja) * | 2019-04-26 | 2020-10-29 | 株式会社ニコン | 細胞トラッキング方法、画像処理装置、及びプログラム |
| JP2020182411A (ja) * | 2019-05-08 | 2020-11-12 | Ｓｔｅｍｃｅｌｌ株式会社 | 細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法、並びに、細胞計数方法および細胞培養方法のプログラム及びそれらのプログラムを記録した記録媒体 |
| JP2021185898A (ja) * | 2020-05-27 | 2021-12-13 | 株式会社リコー | 細胞含有容器提供システム |
| JPWO2022071458A1 (ja) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | ||
| CN117153251A (zh) * | 2023-08-26 | 2023-12-01 | 浙江深华生物科技有限公司 | 一种淋巴瘤微小残留病灶监控位点筛选方法及系统 |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2956645A1 (en) | 2003-07-12 | 2005-03-31 | David A. Goldberg | Sensitive and rapid biodetection |
| US20120077206A1 (en) | 2003-07-12 | 2012-03-29 | Accelr8 Technology Corporation | Rapid Microbial Detection and Antimicrobial Susceptibility Testing |
| WO2005009126A1 (en) * | 2003-07-23 | 2005-02-03 | Essen Instruments, Inc. | Examination systems for biological samples |
| FI116946B (fi) * | 2004-07-09 | 2006-04-13 | Chip Man Technologies Oy | Laitteisto solujen kuvaamiseksi |
| US20110131028A1 (en) * | 2006-12-01 | 2011-06-02 | Philip Desmond Hodgkin | Cell population system and process |
| US10254204B2 (en) | 2011-03-07 | 2019-04-09 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Membrane-assisted purification |
| US9434937B2 (en) | 2011-03-07 | 2016-09-06 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Rapid cell purification systems |
| US9677109B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-06-13 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Rapid determination of microbial growth and antimicrobial susceptibility |
| US10253355B2 (en) | 2015-03-30 | 2019-04-09 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Instrument and system for rapid microorganism identification and antimicrobial agent susceptibility testing |
| KR20170132856A (ko) | 2015-03-30 | 2017-12-04 | 액셀러레이트 다이어그노스틱스, 아이엔씨. | 신속한 미생물 동정 및 항균제 감수성 시험을 위한 기기 및 시스템 |
| JPWO2021005801A1 (ja) * | 2019-07-11 | 2021-01-14 | ||
| CN115471539B (zh) * | 2022-01-20 | 2025-09-12 | 沈阳建筑大学 | 基于面积变化算法的细胞自转速度免标记自动获取方法 |
| JP2024027673A (ja) * | 2022-08-18 | 2024-03-01 | キヤノンメディカルシステムズ株式会社 | 画像処理装置、画像処理システム、画像処理方法及び画像処理プログラム |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5486457A (en) * | 1993-08-25 | 1996-01-23 | Children's Medical Center Corporation | Method and system for measurement of mechanical properties of molecules and cells |
-
2001
- 2001-07-06 US US10/312,409 patent/US20030134269A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-12 JP JP2001276909A patent/JP4841770B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003021628A (ja) * | 2001-07-06 | 2003-01-24 | Japan Tissue Engineering:Kk | 接着細胞選別装置、細胞増殖能評価装置、それらのプログラム及びそれらの方法 |
| JP2004141064A (ja) * | 2002-10-24 | 2004-05-20 | Masahito Taya | 細胞保存方法及びその装置 |
| JP2004344049A (ja) * | 2003-05-21 | 2004-12-09 | Masahito Taya | 細胞増殖能評価装置及びその方法 |
| WO2005030986A1 (ja) * | 2003-09-29 | 2005-04-07 | Nikon Corporation | 細胞観察装置および細胞観察方法 |
| JP2005102538A (ja) * | 2003-09-29 | 2005-04-21 | Nikon Corp | 細胞観察装置および細胞観察方法 |
| US7415144B2 (en) | 2003-09-29 | 2008-08-19 | Nikon Corporation | Cell observation device and cell observation method |
| JP2005182401A (ja) * | 2003-12-18 | 2005-07-07 | Nec Fielding Ltd | 院内感染防止システム，院内感染管理端末，院内感染防止方法およびプログラム |
| JP2005224106A (ja) * | 2004-02-10 | 2005-08-25 | Hitachi Medical Corp | 細胞培養装置 |
| JP2008523820A (ja) * | 2004-12-16 | 2008-07-10 | アクセラー８ テクノロジー コーポレイション | 高速の微生物検出および抗菌剤感受性試験 |
| JPWO2006095896A1 (ja) * | 2005-03-08 | 2008-08-21 | 学校法人日本大学 | 培養細胞監視システム |
| WO2006095896A1 (ja) * | 2005-03-08 | 2006-09-14 | Nihon University | 培養細胞監視システム |
| US9741110B2 (en) | 2005-03-22 | 2017-08-22 | Medinet Co., Ltd. | Cell culture evaluation system for measuring suspension cells, cell culture evaluation method for measuring suspension cells, and cell culture evaluation program for measuring suspension cells |
| WO2007052716A1 (ja) | 2005-11-01 | 2007-05-10 | Medinet Co., Ltd. | 細胞培養装置、細胞培養方法、細胞培養プログラム、及び細胞培養システム |
| US8383395B2 (en) | 2005-11-01 | 2013-02-26 | Medinet Co., Ltd. | Cell culture apparatus, cell culture method, cell culture program and cell culture system |
| JP2009515533A (ja) * | 2005-11-12 | 2009-04-16 | ゼネラル・エレクトリック・カンパニイ | 非染色核の微速度細胞周期解析 |
| JP2013153714A (ja) * | 2012-01-31 | 2013-08-15 | Toyo Seikan Group Holdings Ltd | 細胞計数方法、細胞計数装置、及び細胞計数プログラム |
| US9535001B2 (en) | 2012-01-31 | 2017-01-03 | Toyo Seikan Group Holdings, Ltd. | Cell counting method, cell counting device, and computer-readable medium storing cell counting program |
| WO2013114816A1 (ja) * | 2012-01-31 | 2013-08-08 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞計数方法、細胞計数装置、及び細胞計数プログラム |
| JP2016013102A (ja) * | 2014-07-02 | 2016-01-28 | チトセ バイオ エボリューション ピーティーイー リミテッド | 細胞を安定させる条件を定量評価する方法 |
| US11037293B2 (en) | 2017-01-06 | 2021-06-15 | Olympus Corporation | Cell observation system |
| JP2018108064A (ja) * | 2017-01-06 | 2018-07-12 | オリンパス株式会社 | 細胞観察システム |
| WO2018128080A1 (ja) | 2017-01-06 | 2018-07-12 | オリンパス株式会社 | 細胞観察システム |
| JP7196238B2 (ja) | 2017-01-06 | 2022-12-26 | 株式会社エビデント | 細胞観察システムおよび細胞観察方法 |
| JP2021151257A (ja) * | 2017-01-06 | 2021-09-30 | オリンパス株式会社 | 細胞観察システムおよび細胞観察方法 |
| JP2019000026A (ja) * | 2017-06-14 | 2019-01-10 | オリンパス株式会社 | 細胞培養モニタリングシステム |
| JP7011770B2 (ja) | 2017-06-26 | 2022-01-27 | 大日本印刷株式会社 | 細胞培養状態評価装置 |
| JP2019004795A (ja) * | 2017-06-26 | 2019-01-17 | 大日本印刷株式会社 | 細胞培養状態評価装置 |
| US10762327B2 (en) | 2017-09-28 | 2020-09-01 | Olympus Corporation | Image-processing device and cell observation system |
| JP2019058143A (ja) * | 2017-09-28 | 2019-04-18 | チトセ バイオ エボリューション ピーティーイー リミテッド | 細胞の培養安定性を予測する方法 |
| WO2020218393A1 (ja) * | 2019-04-26 | 2020-10-29 | 株式会社ニコン | 細胞トラッキング方法、画像処理装置、及びプログラム |
| JP2020182411A (ja) * | 2019-05-08 | 2020-11-12 | Ｓｔｅｍｃｅｌｌ株式会社 | 細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法、並びに、細胞計数方法および細胞培養方法のプログラム及びそれらのプログラムを記録した記録媒体 |
| JP2021185898A (ja) * | 2020-05-27 | 2021-12-13 | 株式会社リコー | 細胞含有容器提供システム |
| JPWO2022071458A1 (ja) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | ||
| WO2022071458A1 (ja) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | テルモ株式会社 | 老化細胞判定システム |
| CN116157532A (zh) * | 2020-09-30 | 2023-05-23 | 泰尔茂株式会社 | 衰老细胞判定系统 |
| CN117153251A (zh) * | 2023-08-26 | 2023-12-01 | 浙江深华生物科技有限公司 | 一种淋巴瘤微小残留病灶监控位点筛选方法及系统 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20030134269A1 (en) | 2003-07-17 |
| JP4841770B2 (ja) | 2011-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2002218995A (ja) | 細胞増殖能評価方法、装置及びプログラム | |
| Martin et al. | Computer‐based technique for cell aggregation analysis and cell aggregation in in vitro chondrogenesis | |
| Surdo et al. | Automated microscopy as a quantitative method to measure differences in adipogenic differentiation in preparations of human mesenchymal stromal cells | |
| Ashihara et al. | A comparison of cell cycle-related changes in postmitotic and quiescent AF8 cells as measured by cytofluorometry after acridine orange staining | |
| Schneider | Aging and cultured human skin in fibroblasts | |
| JP6563409B2 (ja) | 培養培地分析による多能性幹細胞の未分化状態の判定方法 | |
| WO2011041761A1 (en) | Fibroblast growth patterns for diagnosis of alzheimer's disease | |
| JP2013039113A (ja) | 細胞品質管理方法及び細胞の生産方法 | |
| CN112501263A (zh) | 人源间充质干细胞在动物体内定向分布的检测方法 | |
| Elicha Gussin et al. | Endothelial precursor cells in the peripheral blood of pregnant women | |
| CN114875108A (zh) | 一种基于葡萄糖与谷氨酰胺水平测试的体外胚胎发育潜力预测评估技术 | |
| Hay et al. | Cultured cell lines for research on pulmonary physiology available through the American type culture collection | |
| US20180171376A1 (en) | Method for evaluation of grafts | |
| JP5917000B2 (ja) | シート形成評価方法 | |
| Ikeda et al. | Cellular physiology of rat cardiac myocytes in cardiac fibrosis: in vitro simulation using the cardiac myocyte/cardiac non-myocyte co-culture system | |
| JP5196522B2 (ja) | 移植用膵島の評価方法 | |
| Veznik et al. | Functional evaluation of dog ejaculates with priority given to the aspect of acrosome integrity | |
| Hoffman | Counting cells | |
| CN119574541B (zh) | 一种单颗脂滴水平与单细胞水平解析的脂滴降解检测和定量分析方法 | |
| CN110441273A (zh) | 一种评价肌浆网钙泄漏的方法 | |
| US20250371891A1 (en) | Information processing device, cell processing apparatus, seeding cell quantity determination method, and cell processing method | |
| JP2001224366A (ja) | 培養細胞評価方法、培養細胞増殖予測方法及び培養細胞増殖制御方法 | |
| Chen et al. | Platform for Quantitative Detection of Endometrial Immune Cells Based on Immunohistochemistry and Digital Image Analysis | |
| WO2020261455A1 (ja) | 細胞機能の評価方法及び細胞解析装置 | |
| Mottram et al. | A sensor based automatic ovulation prediction system for dairy cows |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080910 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110510 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110711 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110913 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20111005 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4841770 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20141014 Year of fee payment: 3 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |