JP2002125601A

JP2002125601A - 動物性プランクトン用餌料とその製造方法及び動物性プランクトンの培養方法

Info

Publication number: JP2002125601A
Application number: JP2000326239A
Authority: JP
Inventors: Masahiro Hayashi; 雅弘林; Isao Maruyama; 功丸山
Original assignee: KURORERA KOGYO KK; Chlorella Industry Co Ltd
Current assignee: KURORERA KOGYO KK; Chlorella Industry Co Ltd
Priority date: 2000-10-25
Filing date: 2000-10-25
Publication date: 2002-05-08

Abstract

(57)【要約】【課題】魚介類の種苗生産に用いられるワムシやアル
テミア等を効率良く、安定して増殖（生長）させること
ができる動物性プランクトン用餌料とその製造方法及び
動物性プランクトンの培養方法を提供する。【解決手段】炭素数１４〜１８の脂肪酸化合物の存在
下にクロレラを培養し、上記脂肪酸化合物を細胞内に有
効に蓄積したクロレラを得る。そして、このクロレラを
ワムシやアルテミア等の動物性プランクトンの飼料とし
て用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は動物性プランクトン
用餌料に関する。更に詳しくは、魚介類の種苗生産に用
いられるワムシやアルテミア等を効率良く、安定して増
殖（生長）させることができる動物性プランクトン用餌
料に関する。

【０００２】

【従来技術】水産分野の魚介類の種苗（稚仔）の初期餌
料として、ワムシは最も重要な餌料であり、淡水産濃縮
クロレラ等を用いたワムシの大量培養法の開発により、
種苗生産の飛躍的な増加が可能となった。

【０００３】一方、ワムシの餌料として有用なクロレラ
を、同じく、水産種苗の初期餌料として重要なアルテミ
アの餌料として使用する試みも行われている。ところ
が、アルテミアは、ワムシとは異なり、細胞壁が障害と
なって生細胞の状態のクロレラを消化することができな
い。

【０００４】上記した問題を改善するものとして、特開
昭６２−８７０６０号公報にクロレラの細胞壁を破壊処
理したアルテミア飼料が開示されている。細胞壁の破壊
法としては、例えば、スプレードライ処理、超音波処
理、摩砕処理、細胞壁溶解酵素処理等が挙げられてい
る。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】ワムシの培養に関して
は、上記したように大量培養が可能となったが、現在で
も時としてワムシの増殖不良が起こり、種苗生産に支障
をきたすことがある。また、アルテミアの培養に関して
は、上記したようにクロレラの細胞壁を破壊処理したク
ロレラを与える方法が提案されたが、この方法だけで
は、アルテミアを十分に生長させることはできず、実用
化までには至っていない。

【０００６】そこで、本発明者らは、ワムシやアルテミ
ア等を効率良く、安定して増殖（または生長）させるこ
とができるクロレラを得るべく、鋭意研究開発に努め
た。

【０００７】ところで、本発明者らは、上記課題解決の
ための研究とは別に、稚仔魚に対する餌料の栄養強化の
ため、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）やＥＰＡ（エイコ
サペンタエン酸）などのｎ−３系高度不飽和脂肪酸を強
化したクロレラの開発を行っていた。そして、その開発
の過程で、ＤＨＡ等を強化したクロレラがワムシの増殖
に対して促進効果があることを知見した。この理由は定
かではないが、ＤＨＡ等を強化することによって、クロ
レラの脂肪酸組成、脂質含量、その他の脂溶性物質など
の成分が変化し、その結果、ワムシの増殖が促進された
ものと思われる。

【０００８】そこで、本発明者らは、クロレラ細胞中の
脂肪酸組成等がワムシの増殖促進に影響を及ぼしている
のではないかという発想のもとに更に研究を進めた結
果、ワムシやアルテミアの増殖に優れた効果を有する脂
肪酸を見い出し、本発明を完成するに至った。

【０００９】（発明の目的）本発明の目的は、魚介類の
種苗生産に用いられるワムシやアルテミア等を効率良
く、安定して増殖（生長）させることができる動物性プ
ランクトン用餌料とその製造方法及び動物性プランクト
ンの培養方法を提供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】第１の発明にあっては、
炭素数１４〜１８の脂肪酸化合物を吸収したクロレラを
含むことを特徴とする、動物性プランクトン用餌料であ
る。

【００１１】第２の発明にあっては、動物性プランクト
ンがワムシまたはアルテミアであることを特徴とする、
第１の発明に係る動物性プランクトン用飼料である。

【００１２】第３の発明にあっては、第１または第２の
発明に係る動物性プランクトン用飼料を用いることを特
徴とする、動物性プランクトンの培養方法である。

【００１３】第４の発明にあっては、炭素数１４〜１８
の脂肪酸化合物の存在下にクロレラを培養することを特
徴とする、動物性プランクトン用餌料の製造方法であ
る。

【００１４】

【発明の実施の形態】脂肪酸化合物には、遊離の脂肪
酸、脂肪酸の塩および脂肪酸のアルキルエステルが含ま
れる。

【００１５】遊離の脂肪酸とは、飽和または不飽和の直
鎖状または側鎖状の脂肪酸をいう。

【００１６】脂肪酸の塩とは、上記遊離の脂肪酸の塩を
いい、ナトリウム、カリウム等のようなアルカリ金属、
バリウム、カルシウム等のようなアルカリ土類金属の塩
が含まれる。

【００１７】脂肪酸のアルキルエステルとは、上記遊離
の脂肪酸とアルカノールとのエステルをいう。エステル
を形成することのできるアルカノールとしては、例えば
一価アルカノールのメタノール、エタノール等が挙げら
れる。

【００１８】本発明では、動物性プランクトンを効率良
く増殖（生長）させることができ、且つ、原料入手が容
易である等の観点から、炭素数１４〜１８の脂肪酸化合
物を用いる。脂肪酸化合物の由来に特に制限はなく、例
えば魚介類の油脂、牛脂、オリーブ油、米糠油等を用い
ることができる。脂肪酸化合物の具体例としては、例え
ばミリストレイン酸(Ｃ14:1）、パルミトレイン酸（Ｃ1
6:1）、オレイン酸（Ｃ18:1）、リノール酸(Ｃ18:2）、
リノレン酸(Ｃ18:3）等が挙げられるが、特にこれに限
定されるものではない。

【００１９】脂肪酸化合物をクロレラ培養液に添加する
時期は、脂肪酸化合物の存在下にクロレラを培養できれ
ば、特に制限はなく、予め培養液に添加しておきクロレ
ラを培養することもできるし、培養の途中で添加するこ
ともでき、また培養終了後の藻体に添加して再培養を行
うこともできる。しかしながら、脂肪酸化合物を効率的
に蓄積でき、培養に要する作業を低減し、培養時間を短
縮する観点から、培養後期、具体的には、対数増殖期後
半から対数増殖期終了の間に添加することが望ましい。

【００２０】脂肪酸化合物の添加量は、クロレラが取り
込み得る量であれば特に制限はないが、添加量が少なす
ぎると取り込む効果が低くなり、添加量が多すぎると添
加した脂肪酸化合物の利用率が低下するので好ましくな
い。具体的には、培養液中に存在するクロレラ藻体量に
応じて脂肪酸化合物の添加量を調整するのが好ましく、
実用的な範囲としては、培養液のクロレラ藻体濃度が10
g（乾燥重量）/Lの時、脂肪酸化合物が0.05〜5.5mL/Lで
ある。

【００２１】用いるクロレラは、クロレラ属に属するも
のであれば、特に制限はない。クロレラの一例として、
クロレラ・ブルガリス(Chlorella vulgaris)、クロレラ
・ビレノイドサ(Chlorella pyrenoidosa)、クロレラ・
サッカロフィラ(Chlorella saccharophila)、クロレラ
・レギュラリス(Chlorella regularis)、クロレラ・ソ
ロキニアーナ（Chlorella sorokiniana）等が挙げられ
る。これらクロレラは、当業者が容易に入手することが
できるものである。例えば、東京大学ＩＡＭカルチャー
コレクションから入手することができる。

【００２２】クロレラの培養方法としては、例えば、光
独立栄養培養、従属栄養培養、混合栄養培養等が知られ
ているが、培養方法に特に制限はない。

【００２３】クロレラの培養に用いる基本培地として
は、例えば、ブリストール培地やソロキン・クラウス培
地などの他、多数の培地が知られているが、クロレラが
培養可能な培地であれば、特に種類を問わない。

【００２４】クロレラを培養する温度、時間、クロレラ
の濃度、光照射の時間、光強度、撹拌強度等は、クロレ
ラを培養し得るものであれば、特に制限はなく、クロレ
ラの増殖特性、接種濃度等に応じて適宜設定することが
できる。

【００２５】培養を終了したクロレラは、例えば遠心分
離などによって濃縮・水洗される。この濃縮液を冷蔵保
管して、そのまま動物性プランクトン用餌料として利用
することができる。また、濃縮したクロレラを凍結乾燥
や噴霧乾燥した後、粉末として動物性プランクトン用餌
料として利用することもできる。更に、乾燥酵母やその
他の成分を配合して、動物性プランクトン餌料とするこ
ともできる。

【００２６】

【実施例】以下、本発明を実施例により説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。

【００２７】[実施例１] オレイン酸(Ｃ18:1)を強化し
たクロレラのワムシ培養に対する効果（クロレラの培養）容量が10Lのジャーファメンターを
用いて、クロレラ（Chlorella vulgaris C-30,東大IAM
より入手）の培養を行った。培地は、グルコース20g/
L、尿素1.5g/L、リン酸一カリウム1.2g/L、硫酸マグネ
シウム0.6g/L、EDTA-Na-Fe 0.015g/L、微量金属 A₅溶液
2mL/L、ビタミンＢ₁₂30μg/Lを添加したものを用いた。
培養は、上記培養液5L中にクロレラ15×10⁷細胞を加
え、温度30℃において通気攪拌培養を行った。更に、対
数増殖期後期に、遊離のオレイン酸（和光純薬工業製）
を培養液1L当たり1〜5mL添加した。培養を終了したクロ
レラは、遠心分離によって濃縮洗浄した後、冷蔵保存し
た。また、培養液にオレイン酸を添加しない以外は、上
記方法と同じ条件で培養したクロレラを対照区とした。

【００２８】更に、上記培養の結果、オレイン酸（和光
純薬工業製）を培養液1L当たり5mL添加して培養したク
ロレラは、細胞が変色して障害を受けていることが分か
った。この結果から、5mL/L以上のオレイン酸の添加は
困難であることが判明した。なお、オレイン酸添加時の
培養液のクロレラ藻体濃度は、約８〜９ｇ（乾燥重量）
/Lであった。

【００２９】（ワムシの培養試験）上記方法で培養した
クロレラを用いて、ワムシの培養を行った。ワムシはＳ
型ワムシを用いた。海水を用い、ポリ容器中で、培養温
度25℃、5Ｌの培養液量で通気培養を4日間行った。ワム
シ個体数50個体/mLで培養を開始した。１日当たり、ワ
ムシ1×10⁵個体に対し、１mLのクロレラ濃縮液（100g乾
燥重量/L）を朝夕に分けて給餌し、ワムシの個体数の変
化を調べた。得られた結果を表１に示す。また、給餌し
たクロレラ細胞中に含まれる脂質の分析も行い、同じ
く、表１に示した。

【００３０】

【表１】

【００３１】表１の結果から明らかなように、オレイン
酸（Ｃ18:1）を添加した培養液中でクロレラを培養する
と、クロレラ細胞内にオレイン酸が有効に蓄積されるこ
とが確認された。クロレラのオレイン酸含量は、培養液
に添加したオレイン酸の量にほぼ比例して増加すること
が明らかとなった。なお、オレイン酸含量の増加に伴
い、クロレラの総脂質量も増加していることが分かっ
た。ワムシ密度から、オレイン酸（Ｃ18:1）の添加量１
〜４mLの範囲内でオレイン酸をより強化したものの方
が、ワムシの飼料として優れた効果を有していることが
明らかとなった。

【００３２】[実施例２] 脂肪酸として、ミリストレイ
ン酸(Ｃ14:1）、パルミトレイン酸(Ｃ16:1)、オレイン
酸(Ｃ18:1）、リノレン酸(Ｃ18:3）、エイコサペンタエ
ン酸（Ｃ20:5）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ22:6）の６種
を用い、各脂肪酸をそれぞれ強化したクロレラのワムシ
培養に対する効果

【００３３】（クロレラの培養）坂口フラスコを用い
て、クロレラ（Chlorella vulgaris C-30,東大IAMより
入手）の培養を行った。培地は、グルコース20g/L、尿
素1.5g/L、リン酸一カリウム1.2g/L、硫酸マグネシウム
0.6g/L、EDTA-Na-Fe0.015g/L、微量金属A₅溶液2mL/L、
ビタミンＢ₁₂ 30μg/Lを添加したものを用いた。培養
は、上記培養液100mL中にクロレラ 0.3×10⁷細胞を加
え、温度30℃において通気攪拌培養を行った。

【００３４】更に、脂肪酸として、遊離のミリストレイ
ン酸（シグマ製）、パルミトレイン酸（和光純薬工業
製）、オレイン酸（和光純薬工業製）、リノレン酸（和
光純薬工業製）、エイコサペンタエン酸（純度90%、魚
油から精製）、ドコサヘキサエン酸（純度90%、魚油か
ら精製）の６種を用い、クロレラの対数増殖期後期に、
培養液1L当たりそれぞれ3mLずつを坂口フラスコに添加
した。培養を終了したクロレラは、遠心分離によって濃
縮洗浄した後、冷蔵保存した。なお、培養液に脂肪酸を
添加しない以外は、上記方法と同じ条件で培養したクロ
レラを対照区とした。培養されたクロレラ細胞中に含ま
れる脂質の分析を行った。その結果を表２に示す。な
お、表２中で、脂肪酸組成の欄に記載した符号（Ｃ14:1
等）は、脂肪酸の種類（例えば、Ｃ14:1はミリストレイ
ン酸）を表している。

【００３５】

【表２】

【００３６】表２の結果から明らかなように、脂肪酸を
添加した培養液中でクロレラを培養すると、添加した脂
肪酸がクロレラ内に有効に蓄積されることが確認され
た。

【００３７】（ワムシの培養試験）上記方法で培養した
クロレラを用いて、ワムシの培養を行った。ワムシはＳ
型ワムシを用いた。海水を用い、容量が100mLの三角フ
ラスコ中で、培養温度25℃、20mLの培養液量で振とう培
養を６日間行った。ワムシ個体数1個体/mLで培養を開始
した。１日当たり、ワムシ100個体に対し、1μLのクロ
レラ濃縮液（クロレラ乾燥重量100g/L）を朝夕に分けて
給餌し、ワムシの個体数の変化を調べた。得られた結果
を表３に示す。

【００３８】

【表３】

【００３９】表３の結果から明らかなように、脂肪酸を
強化したクロレラの方がワムシ増殖の効果が優れている
ことが明らかとなった。また、エイコサペンタエン酸
（Ｃ20:5）やドコサヘキサエン酸（Ｃ22:6）を強化した
クロレラよりも、ミリストレイン酸(Ｃ14:1）、パルミ
トレイン酸(Ｃ16:1)、オレイン酸(Ｃ18:1）、リノレン
酸(Ｃ18:3）を強化したクロレラの方が、ワムシの飼料
として優れた効果を有していることが明らかとなった。

【００４０】[実施例３] 脂肪酸として、パルミトレイ
ン酸（Ｃ16:1）、オレイン酸（Ｃ18:1）の２種を用い、
各脂肪酸をそれぞれ強化したクロレラのアルテミア培養
に対する効果

【００４１】（クロレラの培養）10Lジャーファメンタ
ーを用いて、クロレラ（Chlorella vulgaris C-30,東大
IAMより入手）の培養を行った。培地は、グルコース20g
/L、尿素1.5g/L、リン酸一カリウム1.2g/L、硫酸マグネ
シウム0.6g/L、EDTA-Na-Fe0.015g/L、微量金属A₅溶液2m
L/Lを添加したものを用いた。培養は、上記培養液5L中
にクロレラ15×10⁷細胞を加え、温度30℃において通気
攪拌培養を行った。

【００４２】更に、脂肪酸として、遊離のパルミトレイ
ン酸、オレイン酸（和光純薬工業製）の２種を用い、ク
ロレラの対数増殖期後期に、培養液1L当たりそれぞれ3m
Lずつをジャーファメンターに添加した。培養を終了し
たクロレラは、遠心分離によって濃縮洗浄した後、凍結
乾燥した。なお、培養液に脂肪酸を添加しない以外は、
上記方法と同じ条件で培養後、凍結乾燥したクロレラを
対照区とした。培養されたクロレラ細胞中に含まれる脂
質の分析を行った。その結果を表４に示す。なお、表４
中で、脂肪酸組成の欄に記載した符号（Ｃ16:1等）は、
脂肪酸の種類（例えば、Ｃ16:1はパルミトレイン酸）を
表している。

【００４３】

【表４】

【００４４】表４の結果から明らかなように、パルミト
レイン酸（Ｃ16:1）またはオレイン酸（Ｃ18:1）を添加
した培養液中でクロレラを培養すると、クロレラ内に添
加した脂肪酸が有効に蓄積されることが確認された。

【００４５】（アルテミアの培養試験）上記方法で培養
したクロレラを用いて、アルテミアの培養を行った。ア
ルテミアはふ化した幼生を用いた。海水を用い、ポリ容
器中で、培養温度25℃、5Ｌの培養液量で通気培養を20
日間行った。アルテミア個体数100個体/mLで培養を開始
した。１日当たり、アルテミア100個体に対し、0.2ｇの
クロレラ粉末を朝夕に分けて給餌し、アルテミアの平均
全長と個体数の変化を調べた。得られた結果を表５に示
す。

【００４６】

【表５】

【００４７】表５の結果から明らかなように、脂肪酸を
強化していない対照区では、アルテミアの個体数が激減
し、生長も悪かった。これに対し、パルミトレイン酸
（Ｃ16:1）やオレイン酸（Ｃ18:1）を強化した試験区で
は生残数がやや減少したが、対照区に比べて生長、生残
数ともに優れ、アルテミアの飼料として優れた効果を有
していることが明らかとなった。

【００４８】なお、本明細書で使用している用語と表現
はあくまで説明上のものであって、限定的なものではな
く、上記用語、表現と等価の用語、表現を除外するもの
ではない。

【００４９】

【発明の効果】本発明によれば、炭素数１４〜１８の脂
肪酸化合物の存在下にクロレラを培養することにより、
上記脂肪酸化合物を細胞内に有効に蓄積したクロレラを
得ることができる。そして、このクロレラをワムシやア
ルテミア等の動物性プランクトンの飼料として用いれ
ば、動物性プランクトンを効率良く、安定して増殖（生
長）させることができる。

フロントページの続きＦターム(参考） 2B005 GA01 GA02 GA03 GA04 GA07 LA06 LA07 LB06 LB07 MB05 2B104 AA34 CF02 2B150 AA08 AB02 CD26 DA56 DA58 DD49 4B065 AA84X AC20 BB03 BB15 BB20 BC03 BC05 BC08 BC26 BC50 BD15 CA43

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】炭素数１４〜１８の脂肪酸化合物を吸収
したクロレラを含むことを特徴とする、動物性プランクトン用餌料。
【請求項２】動物性プランクトンがワムシまたはアル
テミアであることを特徴とする、請求項１記載の動物性プランクトン用飼料。
【請求項３】請求項１または２記載の動物性プランク
トン用飼料を用いることを特徴とする、動物性プランク
トンの培養方法。
【請求項４】炭素数１４〜１８の脂肪酸化合物の存在
下にクロレラを培養することを特徴とする、動物性プランクトン用餌料の製造方法。