JP2002060341A

JP2002060341A - 止血剤

Info

Publication number: JP2002060341A
Application number: JP2000249624A
Authority: JP
Inventors: Akira Mochizuki; 明望月; Haruo Ishiyama; 晴生石山
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 2000-08-21
Filing date: 2000-08-21
Publication date: 2002-02-26

Abstract

(57)【要約】【課題】創傷面の治癒を妨げる事無く、又、動脈血を止
血できる素早い凝固反応、組織への粘着性、生分解性を
有する止血剤を提供すること。【解決手段】ＤＮＡ等の核酸のカルシウム塩を主成分と
した止血剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【従来の技術】医学の進歩に伴い外科手術伸展が著し
い。この中で、病変部の除去や構造の再構築、人工補綴
物の導入といった構造構築に係わる手技において格段の
進歩がある。一方、これらの手術は血管にメスを入れる
事が必須であるため、術後の止血を如何にするかが大き
な課題である。このためにフィブリン糊、コラーゲン系
止血剤、酸化セルロースといった各種止血剤が開発さ
れ、実際に使用されてはいるが、その止血力は弱く、動
脈系からの出血には殆ど無力であり、医師等による長時
間の圧迫止血が行われているのが現状である。又、外科
以外の分野においてもカテーテル技術の進歩により血管
内治療や血管造影が頻繁に行われるようになっている
が、カテーテル抜去後の血管、特に大口径の動脈からの
出血に対し有効な手法がなく圧迫止血が行われているの
が現状である。又、人工透析においては留置針を血管に
穿刺した後透析治療を行うわけであるが、透析が終了
し、留置針を抜去した後はやはり圧迫止血がなされてい
る。このように、現状では確実に止血できる有効な薬剤
がないため、圧迫止血と言う原始的な方法に頼っている
のが現実である。

【０００２】

【発明が解決しようとする課題】現在、最も多量に使用
されている止血剤としてはフィブリン糊があるが、これ
は血液由来のフィブリンを出血部でゲル化させ止血する
ものであり、高含水ゲル状態にあるため止血力は弱く、
また、動脈からの止血に対してはほとんど効果が認めら
れないのが現状である。又、人由来のフィブリンを用い
ているため未知ウィルスによる感染の危険性が常につき
まとうと言うリスクがある。コラーゲン或いはゼラチン
系止血剤においては、これらのタンパク質が血小板を活
性化する性質がある事を利用して止血効果を得ようと言
うものであるが、出血量の多い部所への適応は困難であ
り、抗原性の問題もある。合成系高分子を利用した止血
剤としてはシアノアクリレートやアクリル系のものが有
る。これらは短期的には出血を止めることが出来るもの
の、本質的な止血にはなっておらず、逆に血管に出来た
傷口の自然修復を阻害する。このためポリマーの剥離後
の再出血が起きるという問題を抱えている。従って、優
れた止血剤としては創傷面の治癒を妨げる事無く、又、
動脈血を止血できる素早い凝固反応、組織への粘着性、
生分解性などがあわせて求められる。

【０００３】

【課題を解決するための手段】上記課題を考慮し、鋭意
検討した結果、本発明者らは以下の発明に到達した。す
なわち、核酸を基材としたヒドロゲル素材を用いる事で
上記問題点を解決した止血剤を見出したのである。具体
的に、本発明は下記の１）−５）の内容により達成され
る。１）核酸のカルシウム塩を主成分とした止血剤。２）前記核酸がＤＮＡである１）に記載の止血剤。３）前記核酸のカルシウム塩が核酸のカウンターカチオ
ンの１０−１００当量％がカルシウムイオンである１）
または２）に記載の止血剤。４）前記止血剤が、更にタンパク質を含有する１）〜
３）のいずれかに記載の止血剤。５）前記タンパク質がプロタミン、コラーゲン、ゼラチ
ンからなる群より選ばれる少なくとも１種である４）に
記載の止血剤。

【０００４】

【発明の実施の形態】以下に本発明の好適な実施の形態
について詳細に説明する。本発明に使用される核酸はＤ
ＮＡ、ＲＮＡ何れでも良く、各種動物由来のものが利用
できる。分子量的には数万から数百万のものが利用可能
であるが止血剤の調製方法、操作性、の観点から10万か
ら200万程度の物が望ましい。核酸を得る動物主として
は鮭の精子或いは精巣から抽出されるＤＮＡがコスト面
で好ましいが、これに限定されるものではない。核酸は
生体成分で有り、抗原性等の問題もなく生体適合性に優
れた材料である。また、生体内で分解されるため、合成
高分子系の止血剤のように生体内に異物として残留して
しまうこともない。

【０００５】本発明において核酸の対陽イオン（カウン
ターカチオン）は１０−１００当量％の範囲でカルシウ
ムイオンであることが望ましい。すなわち、核酸の全ア
ニオンのうちの１０−１００当量％がカルシウムのカチ
オンによって中和されている。カルシウムイオンを用い
る理由はカルシウムイオンによる血液凝固の促進効果を
合わせて使用できるためである。医療現場において、患
者に対し手術時、或いはカテーテル施行時にはヘパリン
を抗凝固のために投与するが、手術終了後には、不要な
出血を減らすために抗ヘパリン薬が投与される。その具
体的例としてプロタミンがある。プロタミンは生理活性
タンパク質であり、すでに医薬品として使用されており
例えばヘパリン過量投与時の中和、血液透析・人工心肺
などの血液体外循環後のヘパリン作用の中和に使用され
ている。プロタミンはサケ科などの魚類の精巣より得ら
れる分子量2,000〜12,000の蛋白質で、塩基性アミノ酸
のアルギニンの含量が多く、強塩基性の蛋白質で、酸性
高分子化合物のヘパリンと結合して、ヘパリンの抗凝血
作用を阻止するといわれている。

【０００６】本発明において使用される核酸はその化学
構造から分かるように燐酸基を側鎖に多量に有した一種
のポリアニオンである。このため生理活性を有するタン
パク質、或いはポリペプチドのうち塩基性アミノ基を多
量に含有するプロタミンのようなタンパク質、或いはポ
リペプチドは、核酸塩基のリン酸基とイオン相互作用を
するため複合体を形成すると予想される。このため、本
発明の用途である止血剤、特にヘパリン加血液の止血に
対してはプロタミンとの複合化が好適である。又、止血
に当たっては血小板系も大きな働きをしており、この系
を利用することも重要である。すなわち血小板を活性化
するタンパク質、ポリペプチドを添加する事が重要であ
る。中でも、コラーゲン及び/或いはゼラチンを利用す
ることが望ましい。更にコラーゲンの中でも抗原性を軽
減したアテロコラーゲン又は低分子量ゼラチンが望まし
い。これらのタンパク質、及び/又はポリペプチドの添
加量は核酸に対し０−９0ｗｔ％の範囲であることが望
ましい。９０％を超えると核酸のメリットであるいわゆ
るDDS担体としての機能が減少する。

【０００７】本発明の止血剤の剤形及び使用方法として
は粉末として局所へ振り掛ける方法、フィルムとし出血
部位へ貼付する方法、液状とし出血部位へ散布或いは塗
布する方法が使用できる。

【０００８】

【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明を更に具体的
に説明する。実験例１(DNA-Caフィルム) 鮭DNA−Na塩粉末(精巣由来、和光純薬製)500mgを水、40m
lに溶解し、透明粘稠な溶液を得た。これをシャーレ上
に流延、室温風乾する事で、透明なDNA-Naフィルムを得
た。該フィルムのNaイオンの60mol％に相当する塩化カ
ルシウムを溶解したメタノール/水(25：75 wt/wt)混合
液40g中に該フィルムを24時間浸漬する事で、イオン交換
させDNA−Ca塩フィルムを調製した。

【０００９】実験例2(DNA-Na/プロタミン複合体フィル
ム) 鮭DNA−Na塩粉末(精巣由来、和光純薬製)500mgを水、40m
lに溶解し、透明粘稠な溶液を得た。この溶液にプロタミ
ン水溶液10ml(プロタミン10mg/ml含有)を加える事で一
部不溶性ゲルが析出した複合体懸濁液を形成した。この
懸濁液をシャーレ上に流延し、風乾する事でDNA−Na/プ
ロタミン複合体フィルムを調製した。

【００１０】実験例３(DNA-Ca/プロタミン複合体フィル
ム) 鮭DNA−Na塩粉末(精巣由来、和光純薬製)500mgを水、40m
lに溶解し、透明粘稠な溶液を得た。これをシャーレ上に
流延、室温風乾する事で、透明なDNA-Naフィルムを得
た。該フィルムのNaイオンの60mol％に相当する塩化カ
ルシウムを溶解したメタノール/水(25：75 wt/wt)混合
液40g中にプロタミン水溶液10ml(プロタミン10mg/ml含
有)を加え、該フィルムをこのカルシウム/プロタミン混
合溶液に24時間浸漬する事で、DNA−Ca/プロタミン複合
体フィルムを調製した。

【００１１】実施例１−３、比較例１上記実験例１−３で得られたサンプルを用い以下の血液
凝固性の評価を行った。ヘパリン化動脈血(ヘパリン
２．４U/mL)を、室温、無風状態で25mm dishに入れた
サンプル上に1mL滴下し、30秒ごとにサンプルを傾け、
血液の流動性を観察した。比較例のヘパリン化動脈血の
みでは25分経過後も変化は認められなかったが、各サン
プルとも５分経過後には血液塊が生じ、流動性が低下し
た。サンプルは半溶解状態になりながら血液塊を生じ、
実験例2で得られたフィルムでは５-10分で凝固が確認さ
れた。実験例１のフィルムでは15分後に凝固が確認され
た。これらの結果から、本発明品は凝固化能が確認され
た。

【００１２】実施例４−６、比較例２実験例１−３で得られたフィルムを用い、動物を用い以
下に示す方法で止血効果を評価した。露出したウサギ大
腿動脈(ヘパリン200U/B.W.iv)を23Gの注射針で穿刺し、
直ちに各サンプルにて出血部位に押し当て、止血性を観
察した。比較例２としてただ単なる圧迫止血のみでは止
血までにおよそ10分間を要したが、各サンプルを用いた
場合は３分で止血が完了した。本実施例より、本発明品
は拍動下動脈の出血孔への適用によって圧迫止血法を優
位に凌駕する止血性が示された。

【００１３】

【発明の効果】以上に詳述したように本発明は、核酸の
カルシウム塩を主成分とした止血剤であるため、人由来
の材料に起因する未知ウィルスによる感染の危険性がな
く、出血量の多い部所への適応が可能で、抗原性の問題
もない止血剤が提供できる。また本発明によれば、血管
に出来た傷口の自然修復を促進し、傷口からの再出血が
起き難い止血剤が提供できる。即ち、本発明によれば、
創傷面の治癒を妨げる事無く、又、動脈血を止血できる
素早い凝固反応、組織への粘着性、生分解性をあわせ持
つ止血剤を提供することができる。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 7/04 Ａ６１Ｋ 37/08 // Ｃ０７Ｈ 21/00 37/12

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】核酸のカルシウム塩を主成分とした止血
剤。
【請求項２】前記核酸がＤＮＡである請求項１記載の止
血剤。
【請求項３】前記核酸のカルシウム塩が核酸のカウンタ
ーカチオンの１０−１００当量％がカルシウムイオンで
ある請求項１または２に記載の止血剤。
【請求項４】前記止血剤が、更にタンパク質を含有する
請求項１〜３のいずれかに記載の止血剤。
【請求項５】前記タンパク質がプロタミン、コラーゲ
ン、ゼラチンからなる群より選ばれる少なくとも１種で
ある請求項４記載の止血剤。