JP2001522370A

JP2001522370A - ピリド［２，３，４−ｋ，ｌ］アクリジン環系の誘導体：細胞毒性化合物

Info

Publication number: JP2001522370A
Application number: JP54674598A
Authority: JP
Inventors: プエンテス，ホセルイスフェルナンデズ; グラバロス，ドロレスガルシア; ロペス，カルメンアベンダノ; カストロ，マリアデルマルブランコ; ラモス，ホセカルロスメネンデズ
Original assignee: ユニベルシダドコムプルテンセデマドリッド
Priority date: 1997-04-29
Filing date: 1998-04-29
Publication date: 2001-11-13
Also published as: CA2287862A1; AU7220898A; EP0980372A2; WO1998049165A1; GB9708751D0

Abstract

(57)【要約】式（Ｉ）：［式中、Ｘは、ＯおよびＮＲ³（ただし、Ｒ³は、低級アルキルを表す）から成る群から選ばれ；Ｙは、ＣＨおよびＮから成る群から選ばれ；Ｒ¹およびＲ²は、独立して、ＮＨ₂、ＮＨＲ⁴およびＮＲ⁵ ₂(ただし、Ｒ⁴およびＲ⁵は、それぞれ、低級アルキル基を表し)、またはＲ¹およびＲ²は、一緒になって、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）から選ばれた環を表し、Ｒ⁶、Ｒ⁷およびＲ⁸は、独立して、水素原子、低級アルキル基、ヒドロキシ基および低級アルコキシ基から成る群から選ばれ；そしてＺは、Ｏから成る群から選ばれる］の化合物。

Description

【発明の詳細な説明】ピリド［２，３，４−ｋ，ｌ］アクリジン環系の誘導体：細胞毒性化合物発明の背景本発明は、細胞毒性性質を有し、従って悪性腫瘍の処置に使用することができる、ピリド［２，３，４−ｋ，ｌ］アクリジン骨格を有する一連の新規多環状芳香族アルカロイド化合物に関する。本発明はまた、これら新規化合物を使用する方法および組成物、ならびにこれらの化合物の製造方法を提供する。ピリド［２，３，４−ｋ，ｌ］アクリジン骨格に基づく多環状芳香族アルカロイド化合物は、抗腫瘍活性を包含する種々の興味深い生物学的性質をしばしば示す成長群の嚢状葉代謝物（ascidian metabolites）である¹。この群の化合物は、天然産物に存在する基本構造と追加の環との縮合位置に依存して、３種の主要構造型を包含する。例えば、サイストジチン²（cystditines）は、上記基本骨格を有し、他方、アンフィメジン³（amphimedine）、メリジン（meridine）⁴およびサイストダミン⁵（cystodamine）は、ｈ結合に付加した追加のピリジン環を有する。アスシジデミン⁶（ascididemin）、その誘導体⁷、クアノニアミン⁸（kuan oniamines）およびシェルミラミンＡ⁹（shermilamine Ａ）は、この追加の環をそのｉ面に示し、そしてエイラチン¹⁰（eilatine）は、両面に示す。我我の標的化合物は、メリジンおよびアンフィメジンの両方のレギオ異性体であると見做すことができるが、これらの化合物は現在まで、天然源から分離されたことはなかった。これらの従来技術の化合物の大部分は、或る範囲の腫瘍細胞系に対して非常に興味深い細胞毒性性質を示す。これらの作用メカニズムは、明確に確立されていないが、３つの一般的見解が、公開された生物学的データ¹¹から明らかにされている：ａ）これらは挿入性薬剤（intercalating agents）である；ｂ）これらは、蛋白質合成に対する僅かな作用性をもって、ＤＮＡおよびＲＮＡ合成を崩壊させる；ｃ）これらは、トポイソメラーゼIIを阻害する。これらのメカニズムは、それらの抗腫瘍活性にかかわり通常、受け入れられている。ピリドアクリジン化合物に対する生物学的研究は、これらの天然源からの入手可能性が、非常に乏しいことから、格別に制限され、従ってこれらの作用メカニズムの研究および信頼できる構造−活性関係の確立には、効果的な合成経路の開発が必要である。発明の説明我々はここに、優れた抗腫瘍活性を示す、ピリド［２，３，４−ｋ，ｌ］アクリジン骨格を有する新規な一連の多環状芳香族アルカロイド化合物を見出した。従って、本発明は第一の態様において、下記一般式（Ｉ）で表わされる化合物およびその医薬として許容される塩を提供する：式中、Ｘは、ＯおよびＮＲ³からなる群から選択され（ここで、Ｒ³は低級アルキル基を表わす）；Ｙは、ＣＨおよびＮからなる群から選択され；Ｒ¹およびＲ²は、ＮＨ₂、ＮＨＲ⁴およびＮＲ⁵ ₂からなる群から独立して選択され（ここで、Ｒ⁴およびＲ⁵はそれぞれ、低級アルキル基を表わす）、あるいはＲ¹およびＲ²は一緒になって、下記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）から選択される環を表わし：（ここで、Ｒ⁶、Ｒ⁷およびＲ⁸は、水素原子、低級アルキル基、ヒドロキシ基および低級アルコキシ基からなる群から独立して選択される）；そしてＺは、ＯおよびＮＨからなる群から選択される。式（Ｉ）に存在する基の定義において、低級アルキル基および低級アルコキシ基の低級アルキル部分は、炭素原子１〜６個を有する直鎖状または分枝鎖状アルキル基であり、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチルおよびヘキシル基である。Ｒ¹およびＲ²が一緒になって、式（ａ）で表わされる環を表わす本発明の化合物において、Ｒ⁶およびＲ⁷は好ましくは、水素原子、炭素原子１〜４個を有するアルキル基、ヒドロキシ基および炭素原子１〜４個を有するアルコキシ基からなる群から独立して選択され、さらに好ましくは、Ｒ⁶およびＲ⁷は、水素原子、メチル基およびエチル基からなる群から独立して選択され、そして最も好ましくは、Ｒ⁶はメチル基を表わし、そしてＲ⁷は水素原子を表わす。さらにまた、Ｒ¹およびＲ²が一緒になって、式（ａ）で表わされる環を表わす場合、Ｚが式ＮＨの基を表わすと好ましい。Ｒ¹およびＲ²が一緒になって、式（ｂ）または（ｃ）で表わされる環を表わす本発明の化合物において、Ｒ⁶、Ｒ⁷およびＲ⁸は好ましくは、水素原子、炭素原子１〜４個を有するアルキル基、ヒドロキシ基および炭素原子１〜４個を有するアルコキシ基からなる群から独立して選択され、さらに好ましくは、Ｒ⁶、Ｒ⁷およびＲ⁸は、水素原子、メチル基、エチル基およびヒドロキシ基からなる群から独立して選択され、そして最も好ましくは、Ｒ⁶はヒドロキシ基を表わし、そしてＲ⁷およびＲ⁸はそれぞれ、水素原子を表わす。好適態様において、本発明は、一般構造式（II）または（III）で表わされる新規合成化合物に関する：各式中、Ｒ⁶、Ｒ⁷およびＲ⁸は、上記定義のとおりである。一般式（II）で表わされる化合物の中で、Ｒ⁶がメチル基を表わし、そしてＲ⁷ が水素原子を表わす化合物は、特に好ましい（化合物番号：ＩＢ−９６２１３）。一般式（III）で表わされる化合物の中で、Ｒ⁷およびＲ⁸が両方ともに、水素原子を表わす化合物は、特に好ましい（化合物番号：ＩＢ−９８２０５）。本発明はまた、一般式（Ｉ）を有する化合物に対して感受性を有する悪性腫瘍に冒されている哺乳動物の処置方法を提供し、この方法は、治療有効量の一般式（Ｉ）を有する化合物またはその医薬として許容される塩を、冒されている各個体に投与することを包含する。本発明はまた、医薬組成物、特に悪性腫瘍の処置に有用な医薬組成物およびこの組成物の調製方法を提供し、この組成物は、活性成分として、一般式（Ｉ）を有する化合物を含有する。もう一つの態様において、本発明は、一般式（Ｉ）で表わされる化合物、特に化合物番号：ＩＢ−９６２１３およびＩＢ−９８２０５の製造方法を提供する。標的化合物を合成するための我々の戦略には、ｏ−窒化４−アリール−１−ジメチルアミノ−１，４−アザジエンと適当なヘテロ環状キノンとの間のヘテロディールス−アルダー（hetero Diels-Alder)反応、引続くキノンカルボニルの１つに対する求核性環化を包含する（スキーム１）。スキーム１評価された数種の４−アリール−１−アザジエン化合物の中で、ｏ−ニトロおよびｏ−（トリフルオロアセトアミド）誘導体によって、最良の結果が得られた。これらの誘導体の中の第一の誘導体（化合物１ａ）は、公知方法¹²を用いて、市販のｏ−ニトロシンナムアルデヒドから製造した。第二のアザジエン誘導体（化合物１ｂ）は、２種の合成方法から誘導した（スキーム２）。これらの方法の第一の方法は、化合物１ａの還元によって製造される対応するｏ−アミノ誘導体２のトリフルオロアセチル化を包含する¹²。第二の合成方法では、ｏ−アミノベンズアルデヒド（３）を、Ｎ−トリフルオロアセチル化し、このアミドを化合物５とのワズワース−エモンズ（Wadsworth-Emmons）カプリングの相手として使用した¹³。スキーム２式（II）で表わされる化合物を製造するための、化合物１ｂとキノン化合物６との反応は¹⁴、還流クロロホルム中で行ない、ディールス−アルダー付加化合物７と第二の生成物８との混合物を得た。化合物７を、メタノール溶液中でＰｄ− Ｃの存在下に還流させることによって、化合物９に芳香族化させ、この化合物９を先ず、加水分解的環化により所望の五環状誘導体１０［一般構造（II）］に変換した（スキーム３）。スキーム３ジエノフィルとして６−ブロモ−４−クロロキノリンキノン化合物１１を使用すると、ヘテロディールス−アルダー反応のレギオ選択性の逆転が達成された。すなわち、アザジエン１ａを、超音波照射下に、化合物１１で処理すると、化合物１２が得られた。化合物１２を、Ｐｄ−Ｃの存在下に水素添加し、次いでトリフルオロ酢酸により仕上げ、ピリドアクリジン化合物１３［一般構造（III）］を得た（スキーム４）。スキーム４例として、１２−メチル−９Ｈ−ベンゾ［ｂ］ピリド［４，３，２−ｄ，ｅ］（１，７）フェナントロリン−８，１０−ジオン、ＩＢ−９６２１３（一般構造１０、ここでＲ⁶＝ＣＨ₃、Ｒ⁷＝Ｈである）および９−ヒドロキシベンゾ［ｂ］ピリド［４，３，２−ｄ，ｅ］（１，１０）フェナントロリン−８−オン、ＩＢ −９８２０５（一般構造１３、ここでＲ⁷＝Ｒ⁸＝Ｈである）の合成にかかわる詳細な方法を、実施例として示す。本発明の化合物は、細胞毒性であり、ＩＢ−９６２１３およびＩＢ−９８２０５などの化合物は、抗腫瘍活性を示し、特にヒト肺癌腫、ヒト結腸癌腫およびヒトメラノーマなどのヒト固形腫瘍に由来する細胞系に対して抗腫瘍活性を示す。これらの化合物はまた、白血病およびリンパ腫などの別種の腫瘍細胞系に対しても活性である。式（Ｉ）で表わされる化合物、例えばＩＢ−９６２１３およびＩＢ−９８２０５は、固形腫瘍に対してインビトロ抗腫瘍選択性を有する。医薬組成物の例には、経口、局所または非経口用に適当に調剤されている全ての固形剤型（錠剤、ピル、カプセル剤、顆粒など）あるいは液体剤型（溶液、懸濁液またはエマルジョン）を包含し、これらは純粋化合物を含有することができ、またはいずれかの担体または別種の医薬活性化合物と組合わせて含有することができる。非経口投与する場合、これらの組成物は殺菌する必要があることがある。式（Ｉ）で表わされる化合物を含有する医薬組成物の正確な薬用量は、調剤組成、施用方式、および特に処置される位置、対象および腫瘍に従い変化する。年令、体重、性別、食餌、投与の時機、排泄速度、対象の状態、医薬の組合わせ、反応選択性および病気の重篤度などのその他の因子を考慮する。投与は、最高寛容薬用量内で、連続的にまたは定期的に行うことができる。実施例本発明を、下記実施例によりさらに説明する。これらの例は、本発明による種種の化合物の製造を例示するものである。使用された反応剤は市販品（Aldrich 、Fluka）であり、さらに精製することなく使用した。溶媒（ＳＤＳ、Scharlau ）は、標準的方法により精製し、乾燥させた。反応は、蛍光指示剤を用いて、Sc harlauおよびMacherey-Nagelプレートを用いる薄層クロマトグラフィにより監視した。フラッシュ液体クロマトグラフィによる分離は、シリカゲルＳＤＳ６０ＡＣＣ（２３０〜４００メッシュ）を用いて行った。融点は、未補正であり、Buchi浸漬装置またはHofflerホットステージ顕微鏡を用いて、開放毛細管で測定した。燃焼元素分析は、Perkin Elmer２４００ＣＨＮ分析計を用いて、Servicio de Microanalisis Elemental，Universidad Complut enseにより得た。分光光度データは、次の装置を用いて得た；ＩＲ：Perkin Elm er ５７７およびPerki Elmer Paragon １０００ＦＴ−ＩＲ；ＮＭＲ：Varian ＶＸＲ−３００（¹Ｈの場合、３００MHzおよび¹³Ｃの場合、７５MHz）およびBru ker ＡＣ−２５０（¹Ｈの場合、２５０MHzおよび¹³Ｃの場合、６３MHz）。例１１２−メチル−９Ｈ−ベンゾ［ｂ］ピリド［４，３，２−ｄ，ｅ］（１，７）フェナントロリン−８，１０−ジオン（ＩＢ−９６２１３；式１０において、Ｒ⁶＝ＣＨ₃であり、そしてＲ⁷＝Ｈである化合物）工程１−（ａ）：４（ｏ−トリフルオロアセトアミドフェニル）−１−ジメチルアミノ−１−アザジエン（式１ｂ）方法Ａ無水トリフルオロ酢酸（１．３９ｇ、６．６３ミリモル）を乾燥エチルエーテル（１０mL）中の４−（ｏ−アミノフェニル）−１−ジメチルアミノ−１−アザジィエン（２）¹²（８３７mg、４．４２ミリモル）の攪拌溶液に滴下しながら加えた。この溶液を室温において１５分間攪拌し、減圧下室温において蒸発した。残留物をシリカゲル上ジクロロメタンで溶離するクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物１ｂを得た。収量、１．０２３ｇ（８８％）。１ｂのためのデータ：Ｍ_p．１１０℃ Ｃ₁₃Ｈ₁₄Ｆ₃Ｎ₃として分析：計算値：Ｃ，５４．７３；Ｈ，４．９１；Ｎ，１４．７３実測値：Ｃ，５４．１０；Ｈ，４．１９；Ｎ，１４．１１方法Ｂａ）ｏ−（トリフルオロアセトアミド）ベンズアルデヒド（４）３５％塩酸水溶液（３５mL）中のｏ−ニトロベンズアルデヒド（３ｇ、１９．８６ミリモル）の懸濁液に、塩化スズ（II）２１ｇ（９３．１ミリモル）を小部分に分けて加えた。この懸濁液を室温において７２時間攪拌し、６Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和し、クロロホルム（４×５０mL）で抽出した。クロロホルム層を一緒にして硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発してｏ−アミノベンズアルデヒド３の１．８７ｇ（７８％）を得た。この残留物の一部（１．２６ｇ、１０．４ミリモル）を乾燥エチルエーテル（５mL）に溶解した。この溶液を０℃に冷却し、磁気式攪拌をしながら無水トリフルオロ酢酸（２mL、１４．１５ミリモル）を滴下して処理した。この溶液を室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をシリカゲル上で石油エーテル−ジクロロメタン７：３混合物を用いて溶離するクロマトグラフィーにかけた。化合物４の収量、１．６５ｇ（７７％）。４のためのデータ：Ｍ_p．７１〜７２℃ Ｃ₉Ｈ₆Ｆ₃ＮＯ₂として分析：計算値：Ｃ，４９．７８；Ｈ，２．７９；Ｎ，６．４５実測値：Ｃ，４９．７０；Ｈ，２．５９；Ｎ，６．１１ｂ）化合物４および５の間のワズワース−エモンズ反応（Wadsworth-Emmonsre action） −７８℃の浴中に置かれた乾燥テトラヒドロフラン中のヒドラゾン５¹³（経路図（スキーム）２参照）の攪拌溶液中に、ヘキサン中のブチルリチウムの溶液（０．１mL、１．１ミリモル）を加えた。着色した溶液を同温度において４０分間攪拌し、次いで乾燥テトラヒドロフラン（１mL）中のアルデヒド４（２１７mg、１ミリモル）の溶液を加えた。反応混合物を０℃において４時間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液（１０mL）を加えてクエンチし、クロロホルム（４×１５ mL）で抽出した。抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発し、残留物を１：１エチルエーテル−石油エーテルで溶離するシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけた。表題化合物１ｂの収量１０３mg（３６％）。工程（１ｂ）５−（ｏ−トリフルオロアセトアミド）−４−メチル−５，８ −ジヒドロ−１，８−ジアザアンスラセン−２，９，１０−トリオン(Ｒ⁶＝ＣＨ ₃およびＲ⁷＝Ｈにおける式７の化合物）クロロホルム(５０mL)中のキノン６(スキーム３：Ｒ⁶＝ＣＨ₃、Ｒ⁷＝Ｈ)^14aおよび前述の工程１（ａ）により造られたアザジエン１ｂ（３２ｍｇ、０．１７ミリモル）の溶液を、アルゴン流を溶液を通して流しながら、６０℃の浴中で２２時間還流した。反応混合物を乾燥するまで蒸発し、残留物を３：２ジクロロメタン−酢酸エチルから生の酢酸エチルまでの勾配で溶離するシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけ、表題の５，８−ジヒドロ誘導体７（Ｒ⁶＝ＣＨ₃，Ｒ⁷＝Ｈ）を２５mg（３４％）、芳香族化合物９(スキーム３を参照；Ｒ⁶＝ＣＨ₃、Ｒ⁷＝Ｈ)を２０mg（２８％）、および化合物８（スキーム３を参照；Ｒ⁶＝ＣＨ₃，Ｒ⁷＝Ｈ）^14aの１１mg（２８％）を得た。７のためのデータ：Ｍ_p １９２℃（ＡｃＯＥｔ）Ｃ₂₁Ｈ₁₄Ｆ₃Ｎ₃Ｏ₄として分析：計算値：Ｃ，５８．７７；Ｈ，３．３６；Ｎ，９．７８実測値：Ｃ，５８．４９；Ｈ，３．６２；Ｎ，９．５７９のためのデータ：Ｍ_p ２８５℃ Ｃ₂₁Ｈ₁₂Ｆ₃Ｎ₃Ｏ₄として分析：計算値：Ｃ，５９．０４；Ｈ，２．８０；９．８３実測値：Ｃ，５９．２２；Ｈ，２．９４；９．５９工程１（Ｃ）７〜９の酸化前述の工程１(ｂ)によって造られた化合物７（Ｒ⁶＝ＣＨ₃、Ｒ⁷＝Ｈ）の懸濁液［メタノール（５０mL）中の２００mg、０．４６ミリモル］に、木炭上の固体１０％パラジウム（１００mg、９ミリモル）を加えた。この懸濁液を激しく攪拌しながら４８時間還流し、セライト（celite）を通して濾過した。溶媒を蒸発し、表題化合物９（Ｒ⁶＝ＣＨ₃、Ｒ⁷＝Ｈ）の１３６mg（６９％）を得た。工程１（ｄ）１２−メチル−９Ｈ−ベンゾ［ｂ］ピリド［４，３，２−ｄｅ］（１，７）フェナントロリン−８，１０−ジオン（ＩＢ−９６２１３；式１０、Ｒ⁶＝ＣＨ₃およびＲ⁷＝Ｈ、の化合物）メタノール（１５mL）中の前述の工程１（ｄ）により造られた化合物９（Ｒ⁶ ＝ＣＨ₃、Ｒ⁷＝Ｈ）に、２Ｎ塩酸溶液（２mL）を加えた。この溶液を４時間還流し、８％重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を蒸発し、表題化合物１０（Ｒ⁶＝ＣＨ₃、Ｒ⁷＝Ｈ）の５７mg（７８％）を得た。１０のためのデータ：Ｍ_p＞３００℃（ＣＨＣｌ₃）Ｃ₁₉Ｈ₁₁Ｎ₃Ｏ₂として分析：計算値：Ｃ，７２．８６；Ｈ，３．５１；Ｎ，１３．４１実測値：Ｃ，７２．８７；Ｈ，２．８２；Ｎ，１３．５７実施例２９−ヒドロキシベンゾ［ｂ］ピリド［４，３，２−ｄ，ｅ］（１，１０）フェナントロリン−８−オン（ＩＢ−９８２０５，Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝Ｈにおける式１２の化合物）工程２（ａ）４−クロロ−８−（ｏ−ニトロフェニル）−１，５−ジアザアントラキノン（Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝Ｈにおける式１２の化合物）クロロホルム（１mL）中のキノン１１（スキーム４；Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝Ｈ参照）¹⁵（１８５mg、０．６８ミリモル）およびｏ−ニトロシンナムアルデヒドジメチルヒドラゾン１ａ¹²（４３８mg、２ミリモル）の溶液に、５０℃で１２５時間超音波を照射した。溶剤を蒸発し、残留物をシリカゲル上で酢酸エチルを用いて溶離するクロマトグラフィーにかけ表題化合物１１を得た。収量５２mg（２０％）であった。１２のためのデータ：Ｍ_p．１４６℃ Ｃ₁₈Ｈ₈ＣｌＮ₃Ｏ₄として分析：計算値：Ｃ，５９．１３；Ｈ，２．１８；Ｎ，１１．４８実測値：Ｃ，５９．８９；Ｈ，１．９９；Ｎ，１１．１７工程２（ｂ）９−ヒドロキシベンゾ［ｂ］ピリド［４，３，２−ｄ，ｅ］（１，１０）フェナントロリン−８−オン（１３，Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝Ｈ）メタノール（２５mL）中の前述の工程２（a）によって造られた化合物１２（１００mg、０．２７ミリモル）およびトリエチルアミン（３７mg）の溶液に、木炭（２２mg）上の１０％パラジウムを加えた。この懸濁液を１気圧において１時間水素添加し、セライトを通して濾過した。セライト層をトリフルオロ酢酸およびクロロホルム（２５mL）の２：１混合液で洗った。これらの洗った液を蒸発し、シリカゲル上で９：１酢酸エチル：メタノールを用いて溶離するクロマトグラフィーにかけ、２種の還元中間体の混合物の４５mgを得た。該中間体の構造は決定しなかった。メタノール（２０mL）中のこの混合物の３５mgの溶液に、木炭（８mg）上の１０％パラジウムを加え、その懸濁液を１気圧において１時間水素添加し、セライトを通して濾過した。その溶液を蒸発し、残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけ、表題化合物１３の６mg（１０％）を得た。本発明者は、次の特定化合物を前述の合成経路により造った：ＩＢ−９６２１３（一般構造式１０、Ｒ⁶＝ＣＨ₃およびＲ⁷＝Ｈである）およびＩＢ−９８２０５（一般構造式１３、Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝Ｈである。本明細書においてこれらは好ましい化合物である。生物学的活性本発明の式（Ｉ）の化合物は良好な抗腫瘍活性（antitumor activity）を示す。特に、ＩＢ−９６２１３およびＩＢ−９８２０５は、いくつかの哺乳類の癌細胞系に対して良好な抗腫瘍活性を示した。その抗腫瘍活性は、Bergeron et al¹⁶ およびSchroeder et al¹⁶によって記載されている方法論に従って腫瘍細胞を培養することによって生体外で（in vitro）検出された。マウスリンパ腫、ヒトＮＳＣ肺癌腫、ヒト黒色腫およびヒト結腸癌腫のような異なった腫瘍に対する活性も観察された。ある種の腫瘍は他の腫瘍よりもさらに感受性がある。例えば、ＮＳＣ肺癌腫および黒色腫の細胞は、マウスリンパ腫より１００倍も多く感受性があり、またヒト結腸癌腫より１０００倍も多く感受性がある。実施例生物学的活性：細胞は、アールの平衡塩類、２．０mM Ｌ−グルタミン、非必須のアミノ酸類を有し、重炭酸ナトリウム（ＥＭＥＭ／neaa）を有しない、かつ１０％野生子牛血清（Feral calf Serum）（ＦＣＳ）、１０^-2Ｍ重炭酸ナトリウムおよび０．１ｇ／ｌペニシリン−Ｇ＋ストレプトマイシン硫酸塩を補った、イーグルの最少必須倍地中で対数増殖期に維持した。使用した腫瘍系は、Ｐ−３８８（ＡＴＣＣＣＣＬ−４６、ＤＢＡ／２マウスからのリンパ性の新生物（lymphoid neoplasm）の懸濁培養物）、Ａ−５４９（ＡＴＣＣＣＣＬ−１８５、ヒト肺癌腫の単層培養物）、ＨＴ−２９（ＡＴＣＣＨＴＢ−３８、ヒト結腸癌腫の単層培養物）、およびＭＥＬ−２８（ＡＴＣＣＨＴＢ−３８、ヒト黒色腫の単層培養物）であった。Ｐ−３８８細胞を、薬物の指示濃度を含有するＭＥＭ５ＦＣＳの１mLアリコートにおいて、ウェル（well）につき１×１０⁴個の細胞において、１６mmウェルの中に接種した。薬物のない培養物の別の組に細胞が指数増殖期（exponentia l phase of growth）にとどまるのを確保するために、対照の成長として接種した。全ての決定は重複して行なった。９８％の湿った雰囲気中で３７℃、１０％ＣＯ₂において３日間インキュベーションした後、近似のＩＣ₅₀を、薬物を有するウェル中の成長を対照のウェル中の成長と比較することにより決定した。Ａ−５４９，ＨＴ−２９およびＭＥＬ−２８を、薬物の指示濃度を含有するＭＥＭ１０ＦＣＳの１mLアリコートにおいてウェルにつき２×１０⁴個の細胞において、１６mmウェルの中に接種した。薬物のない培養物の別の組に細胞が指数増殖期にとどまるのを確保するために、対照の成長として接種した。全ての決定は重複して行った。９８％の湿った雰囲気中で３７℃、１０％ＣＯ₂において３日間インキュベーションした後、ウェルを０．１％クリスタルバイオレットで着色した。近似のＩＣ₅₀は、薬物を有するウェル中の成長を対照のウェル中の成長と比較することにより決定した。表Ｉにおいて、μg／mLおよびμMにおいてＩＣとして表された細胞毒性が提示されている。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１１年７月２日（１９９９．７．２）【補正内容】請求の範囲 1. 式（Ｉ）：［式中Ｘは、ＯおよびＮＲ³（ただし、Ｒ³は低級アルキル基を表す）から成る群から選ばれ；Ｙは、ＣＨおよびＮから成る群から選ばれ；Ｒ¹およびＲ²は、一緒になって、（ａ）および（ｂ）：（式中、Ｒ⁶、Ｒ⁷およびはＲ⁸は、独立して、水素原子、低級アルキル基、ヒドロキシ基および低級アルコキシ基から成る群から選ばれ；そしてＺは、ＯおよびＮＨから成る群から選ばれる）から選ばれた環を表す］の化合物および薬学的に許容できるそれらの塩であって、かつ式（Ｉ）［式中、ＸはＯであり、ＹはＮであり、そしてＲ¹およびＲ²は、環（ｂ）（ただし、Ｒ⁶ 、Ｒ⁷およびはＲ⁸のそれぞれは水素である）を形成する］の化合物を除外している、前記化合物および薬学的に許容できるそれらの塩。 2. Ｘは酸素原子を表す、請求項１の化合物。 3. Ｙは窒素原子を表す、請求項１または２の化合物。 4. Ｒ¹およびＲ²は、一緒になって、式（ａ）の環を表す、請求項１〜３のいずれか１項の化合物。 5. Ｒ¹およびＲ²は、一緒になって、式（ｂ）の環を表す、請求項１〜３のいずれか１項の化合物。 6. Ｒ⁶およびはＲ⁷は、独立して、水素原子、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、ヒドロキシ基、および１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基から成る群から選ばれる、請求項４の化合物。 7. Ｒ⁶およびはＲ⁷は、独立して、水素、メチル基、およびエチル基から成る群から選ばれる、請求項６の化合物。 8. Ｒ⁶は、メチル基を表し、そしてＲ⁷は、水素原子を表す、請求項７の化合物。 9. Ｚは、式ＮＨの基を表す、請求項４および６〜８のいずれか１項の化合物。 10. Ｒ⁶、Ｒ⁷およびはＲ⁸は、水素原子、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、ヒドロキシ基、および１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基から成る群から選ばれる、請求項５の化合物。 11. Ｒ⁶、Ｒ⁷およびはＲ⁸は、独立して、水素原子、メチル基、エチル基、およびヒドロキシ基から成る群から選ばれる、請求項１０の化合物。 12. Ｒ⁶はヒドロキシ基を表し、そしてＲ⁷およびはＲ⁸は、それぞれ、水素原子を表す、請求項１１の化合物。 13. 次式（II）：（式中、Ｒ⁶およびＲ⁷は、請求項１の定義と同じである）を有する、請求項１の化合物。 14. Ｒ⁶はメチル基を表し、そしてＲ⁷は水素原子を表す、請求項１３の化合物。 15. 次式（III）：（式中、Ｒ⁷およびＲ⁸は、請求項１の定義と同じである）を有する、請求項１の化合物。 16. Ｒ⁷およびＲ⁸は、それぞれ、水素原子を表す、請求項１５の化合物。 17. 薬学的に許容できる担体または希釈剤と混合して請求項１〜１６のいずれか１項に定義された式（Ｉ）の化合物を含む、医薬組成物。 18. 抗腫瘍活性を有する、請求項１７の医薬組成物。 19. 悪性腫瘍治療用の請求項１８の医薬組成物。 20. 治療に使用するための請求項１〜１６のいずれか１項の式（Ｉ）の化合物。 21. 悪性腫瘍治療用薬物の製造への請求項１〜１６のいずれか１項の式（Ｉ）の化合物の使用。 22. 請求項１〜１６のいずれか１項の式（Ｉ）の化合物の有効量を病気に冒された個人に投与することを含む、悪性腫瘍に冒された哺乳類の治療方法。 23. （ａ）式１ｂ：の化合物を、式６：（式中、Ｒ⁶およびＲ⁷は、請求項１の定義と同じである）の化合物と反応させて、式７：（式中、Ｒ⁶およびＲ⁷は、請求項１の定義と同じである）の化合物を造り；（ｂ）式７の化合物を、Ｐｄ−Ｃ触媒の存在において芳香族化して、式９：（式中、Ｒ⁶およびＲ⁷は、請求項１の定義と同じである）の化合物を造り：そして（iii）式９の化合物を加水分解的に環化して式（II）の化合物を造ることを含む、請求項１３に定義された式（II）の化合物の製造方法。 24. （ａ）式１ａ：の化合物を、式１１：（式中、Ｒ⁷およびＲ⁸は、請求項１の定義と同じである）の化合物と反応させて、式１２：（式中、Ｒ⁷およびＲ⁸は、請求項１の定義と同じである）の化合物を造り；そして（ｂ）式１２の化合物をＰｄ−Ｃ触媒の存在において水素添加し、次いで酸性加水分解を行って式（III）の化合物を造ることを含む、請求項１５に定義された式（III）の化合物の製造方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｄ 491/16 Ｃ０７Ｄ 491/16 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者アベンダノロペス，カルメンスペイン国，マドリッド，カルレサンチアゴベルナベン，５ (72)発明者ブランコカストロ，マリアデルマルスペイン国，マドリッド，トルレロドネスコロニア，カルレビセンテテルズ, 40 (72)発明者メネンデズラモス，ホセカルロススペイン国，マドリッド，カルレサンライムンド，７

Claims

【特許請求の範囲】 1. 式（Ｉ）：［式中Ｘは、ＯおよびＮＲ³（ただし、Ｒ³は低級アルキル基を表す）から成る群から選ばれ；Ｙは、ＣＨおよびＮから成る群から選ばれ；Ｒ¹およびＲ²は、ＮＨ₂、ＮＨＲ⁴およびＮＲ⁵ ₂(ただし、Ｒ⁴およびＲ⁵は、それぞれ低級アルキル基を表す)から成る群から選ばれ、またはＲ¹およびＲ²は、一緒になって、（ａ）および（ｂ）：（式中、Ｒ⁶、Ｒ⁷およびはＲ⁸は、独立して、水素原子、低級アルキル基、ヒドロキシ基および低級アルコキシ基から成る群から選ばれ；そしてＺは、ＯおよびＮＨから成る群から選ばれる）から選ばれた環を表す］の化合物および薬学的に許容できるそれらの塩であって、かつ式（Ｉ）［式中、ＸはＯであり、ＹはＮであり、そしてＲ¹およびＲ²は、環（ｂ）（ただし、Ｒ⁶ 、Ｒ⁷およびはＲ⁸のそれぞれは水素である）を形成する］の化合物を除外している、前記化合物および薬学的に許容できるそれらの塩。 2. Ｘは酸素原子を表す、請求項１の化合物。 3. Ｙは窒素原子を表す、請求項１または２の化合物。 4. Ｒ¹およびＲ²は、一緒になって、式（ａ）の環を表す、請求項１〜３のいずれか１項の化合物。 5. Ｒ¹およびＲ²は、一緒になって、式（ｂ）の環を表す、請求項１〜３のいずれか１項の化合物。 6. Ｒ⁶およびはＲ⁷は、独立して、水素原子、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、ヒドロキシ基、および１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基から成る群から選ばれる、請求項４の化合物。 7. Ｒ⁶およびはＲ⁷は、独立して、水素、メチル基、およびエチル基から成る群から選ばれる、請求項６の化合物。 8. Ｒ⁶は、メチル基を表し、そしてＲ⁷は、水素原子を表す、請求項７の化合物。 9. Ｚは、式ＮＨの基を表す、請求項４および６〜８のいずれか１項の化合物。 10. Ｒ⁶、Ｒ⁷およびはＲ⁸は、水素原子、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、ヒドロキシ基、および１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基から成る群から選ばれる、請求項５の化合物。 11. Ｒ⁶、Ｒ⁷およびはＲ⁸は、独立して、水素原子、メチル基、エチル基、およびヒドロキシ基から成る群から選ばれる、請求項１０の化合物。 12. Ｒ⁶はヒドロキシ基を表し、そしてＲ⁷およびはＲ⁸は、それぞれ、水素原子を表す、請求項１１の化合物。 13. 次式（II）：（式中、Ｒ⁶およびＲ⁷は、請求項１の定義と同じである）を有する、請求項１の化合物。 14. Ｒ⁶はメチル基を表し、そしてＲ⁷は水素原子を表す、請求項１３の化合物。 15. 次式（III）：（式中、Ｒ⁷およびＲ⁸は、請求項１の定義と同じである）を有する、請求項１の化合物。 16. Ｒ⁷およびＲ⁸は、それぞれ、水素原子を表す、請求項１５の化合物。 17. 薬学的に許容できる担体または希釈剤と混合して請求項１〜１６のいずれか１項に定義された式（Ｉ）の化合物を含む、医薬組成物。 18. 抗腫瘍活性を有する、請求項１７の医薬組成物。 19. 悪性腫瘍治療用の請求項１８の医薬組成物。 20. 治療に使用するための請求項１〜１６のいずれか１項の式（Ｉ）の化合物。 21. 悪性腫瘍治療用薬物の製造への請求項１〜１６のいずれか１項の式（Ｉ）の化合物の使用。 22. 請求項１〜１６のいずれか１項の式（Ｉ）の化合物の有効量を病気に冒された個人に投与することを含む、悪性腫瘍に冒された呻乳類の治療方法。 23. （ａ）式１ｂ：の化合物を、式６：（式中、Ｒ⁶およびＲ⁷は、請求項１の定義と同じである）の化合物と反応させて、式７：（式中、Ｒ⁶およびＲ⁷は、請求項１の定義と同じである）の化合物を造り；（ｂ）式７の化合物を、Ｐｄ−Ｃ触媒の存在において芳香族化して、式９：（式中、Ｒ⁶およびＲ⁷は、請求項１の定義と同じである）の化合物を造り：そして（iii）式９の化合物を加水分解的に環化して式（II）の化合物を造ることを含む、請求項１３に定義された式（II）の化合物の製造方法。 24. （ａ）式１ａ：の化合物を、式１１：（式中、Ｒ⁷およびＲ⁸は、請求項１の定義と同じである）の化合物と反応させて、式１２：（式中、Ｒ⁷およびＲ⁸は、請求項１の定義と同じである）の化合物を造り；そして（ｂ）式１２の化合物をＰｄ−Ｃ触媒の存在において水素添加し、次いで酸性加水分解を行って式（III）の化合物を造ることを含む、請求項１５に定義された式（III）の化合物の製造方法。