JP2001507004A

JP2001507004A - クラミジアワクチン

Info

Publication number: JP2001507004A
Application number: JP52842398A
Authority: JP
Inventors: メゾンヌーヴ，ジャン−フランソワ・リュシアン; ヴェルラン，ヴァンサン・ジョルジュ・クリスティアン・ルイ
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム）
Priority date: 1996-12-24
Filing date: 1997-12-22
Publication date: 2001-05-29
Also published as: WO1998028005A1; CO4650187A1; GB9626864D0; AR011047A1; EP0948352A1; ZA9711565B; CA2275896A1; AU5763998A

Abstract

(57)【要約】ワクチンクラミジア由来の主要外層膜蛋白質およびコレラ毒素または熱に不安定な腸内毒素のごとき粘膜性アジュバントを含むワクチン製剤が提供される。かかる製剤はクラミジアにより誘発される稔性からの保護を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】クラミジアワクチン本発明は、クラミジア感染症の予防のためのワクチン製剤に関する。特に、Ｅ．ｃｏｌｉ由来の突然変異した熱に不安定な腸内毒素（ｍＬＴ）またはコレラ毒素（ＣＴ）と組み合わせたトラコーマクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）由来の組換え型または精製主要外層膜蛋白質（ＭＯＭＰ）を含む製剤に関する。グラム陰性菌トラコーマクラミジアはヒトの一般的な病原体であり；ヒトからヒトへ伝染し、長期にわたる後遺症を残す可能性のある眼および生殖器の感染症の原因となる。これらのワクチン製剤の標的である生殖器のクラミジア感染症は、米国において最も一般的な細菌性の性的伝達疾患（ＳＴＤ）である。該感染症の最も有害な結果は女性において発揮され、最も一般的な感染部位は子宮頸部であるが、上行性感染は、不妊および子宮外妊娠につながる子宮内膜炎、骨盤炎症性疾患（ＰＩＤ）および卵管炎のような重篤な合併症を生じ得る。１回のＰＩＤ発症が６．１％の不妊率を引き起こし得るのに対し、３回を超える発症は５４％の不妊率を引き起こしたということが示されている(２０)。トラコーマクラミジア種は血清型により１５の血液型亜型に分類され、ＳＴＤは３つの異なる血清群を包含する血液型亜型ＤないしＫによって引き起こされ( １９)、従ってクラミジア性ＳＴＤに対するワクチンは、抗原的に多少関連のある複数の血液型亜型に対する保護効果を有するはずである。ヒトおよびヒト以外の霊長類において、生物体全体を免疫原として用いて実施されたワクチン試験では、血液型亜型特異的な保護が得られたが、いくつかのワクチンは再感染の際により重篤な反応を発現させた(６)。いくつかの研究により、クラミジア感染症に関連した病状は免疫により媒介されるということが証明されており(７)；さらに、精製クラミジア５７ｋＤａ蛋白質（Ｈｓｐ６０）は、予め感染させた動物に見られるのと類似した病状を誘発することが示された(１３、１４)。これらの観察結果より、クラミジア感染症に対する保護はサブユニットワクチンを用いて達成し得るという結論が導き出される。サブユニットワクチン設計のために、多くの関心が４０ｋＤａ主要外層膜蛋白質（ＭＯＭＰ）に集まっている。Ｉｎｖｉｔｒｏではポーリンとして機能することが示されたこの蛋白質（４）は、該細菌の全ライフサイクルを通して存在し (８)、ヒトおよび動物において高い免疫原性を有する。ＭＯＭＰは血液型亜型間で高度に保存された５個の不変部に囲まれた４個の可変ドメイン（ＶＤ）を呈する(１５、２２)。Ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏの中和Ｂ細胞エピトープがこれらのＶＤ上にマッピングされている（２、２３）のに対し、Ｔ細胞エピトープは可変および不変ドメインの両方で確認されている(１、１６)。該蛋白質は、成熟蛋白質を産生するために切断されるシグナル配列により産生される。組換え型または精製ＭＯＭＰによる免疫感作に続くクラミジアによる同型または異型攻撃が、異なる動物モデルで実施され、感染パラメーターに対して様々な効果が認められた(３、１７、１８)。異型攻撃実験において、タフリー（Ｔｕｆｆｒｅｙ）らは、アルヒドロゲル（ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）上に吸着されたｒＭＯＭＰによる非経口および粘膜性免疫感作が、卵管炎の重篤度および下部生殖路のコロニー化の持続期間をそれぞれ減少させることを示している。しかしながら、該調製物は感染に起因する不妊に対する保護は与えなかった。最近の研究において、同じマウスモデルを用い、本発明者らは血液型亜型Ｌ２由来の３Ｄ−ＭＰＬおよびＱＳ２１またはＤＱおよびＭＯＭＰを含むワクチンによる免疫感作が、異種クラミジア感染症に起因する不妊に対して保護を与える上で有用であることを示した(１２)。この特定の場合において、免疫感作されたマウス血清中のＭＯＭＰ特異的ＩｇＧ２ａ比が増加していること、並びに免疫牌臓細胞がｉｎｖｉｔｒｏでの再刺激の際にインターフェロン（ＩＦＮ）−ガンマを分泌することにより、保護が抗原特異的Ｔｈ１様免疫応答（Ｔｈ１−ｌｉｋｅｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅ）と関連していることが確認された。同様に、ＭｏＰｎ特異的Ｔｈ１クローンの養子移入が、生殖器がＭｏＰＮに感染したヌードマウスの感染を解明させ得ることが他の者により示されている。主にＴｈ１様のサブセットの活性化はまた、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）(９)およびマイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）(２１)のごとき他の細胞内病原に対する保護的な免疫応答とも矛盾しない。本発明は、粘膜レベルで、クラミジア感染症に起因する不妊に対して保護を与えるのに有効なワクチン組成物を提供する。有利には、ワクチンはクラミジア感染症が主に関連している粘膜中で有効である。ワクチンはいずれの公知の経路で投与されてもよいが、有利には経口または鼻腔内ワクチンとして有用である。従って、本発明は組換え型または精製主要外層蛋白質（ｒＭＯＭＰ）ならびに粘膜性アジュバントを含むワクチン製剤を提供する。特に、該ワクチンは、血液型異型Ｌ２，Ｆ、ＤまたはＥ由来のＭＯＭＰを含むが、さらに他の血液型異型由来のＭＯＭＰを含んでいてもよい。２個以上の血液型異型由来のＭＯＭＰを含む複合ワクチンを利用してもよい。好ましい組合せはＤおよびＥ血液型亜型由来のＭＯＭＰを含む。本発明の好ましい組成物では、粘膜性アジュバントはＥ．ｃｏｌｉ由来の変異ＬＴ（例えばＬＴＲ１９２Ｇ）またはコレラ毒素である。変異ＬＴＲ１９２ＧはＮｏ．９６／０６６２７下で公開されたＩＰＡＰＣＴ／ＵＳ９５／０９００５の記述に従って得ることができる。コレラ毒素は、スイス・シーラム(ＳｗｉｓｓＳｅｒｕｍ)、ベルン（Ｂｅｒｎ）より購入できる。それぞれのワクチン中の蛋白質量は、典型的なワクチン中で著しく有害な副作用なしに免疫保護応答を誘発する量として選択される。一般にそれぞれの１回投与量は１−１０００μｇ、好ましくは２−１００μｇ、典型的には４−４０μｇ間の蛋白質を含むと予想される。特定ワクチンの至適量は患者における適当な免疫応答の観察を含む標準試験によって確認できる。最初のワクチン投与に続いて、患者は適当な間隔を置いた１回または数回の追加免疫を受けてもよい。本発明の製剤は予防および治療の両方の目的に使用し得る。従って一つの態様において、本発明は患者に有効量の本発明のワクチンを投与することを含む治療方法を提供する。本発明のもう一つの態様において、ワクチンは鼻腔内投与されてもよい。材料および方法精製ｒＭＯＭＰの産生および製剤化抗原産生のためのＤＮＡ構築体ｐＥＴ１５−ＭＯＭＰの入手および使用はＰＣＴＮｏ．９６／３１２３６として公開された英国特許ＧＢ９５０６８６３に記載されている。蛋白質の精製は、同特許に開示されているごとく変性条件下でヒスチジン結合樹脂（Ｈｉｓ．Ｂｉｎｄ．ｒｅｓｉｎ）[ノバゲン(Ｎｏｖａｇｅｎ)]を用いて実施され；最終産物において、ＬＰＳおよび蛋白質濃度は、それぞれリムラス（Ｌｉｍｕｌｕｓ）アメーバ細胞溶解試験［コーテスト(Ｃｏａｔｅｓｔ)、クロモゲニックス(Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ)］およびＢＣＡ法［ＢＣＡキット、ピアス(Ｐｉｅｒｃｅ)］を用いて測定された。鼻腔内免疫感作に用いられるワクチンの１回投与分は、最終容量２０μｌのＰＢＳ中で、１０μｇｍＬＴ［スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ＳｍｉｔｈＫｌｅｉｎＢｅｅｃｈａｍＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）より入手］またはＣＴ［スイス・シーラム(ＳｗｉｓｓＳｅｒｕｍ)、ベルン(Ｂｒｅｎ)］を、１０μｇのｒＭＯＭＰ血液型亜型Ｆ（ｒＭＯＭＰＦ）またはＬ２（ｒＭＯＭＰＬ２）と混合することにより調製した。マウスモデルにおける卵管炎に対するワクチン投与、稔性、サンプリングおよび免疫学的フォローアップ１０匹の雌Ｃ３Ｈマウス（６週令、イファ・クレド(ＩｆｆａＣｒｅｄｏ)）群を、０週目および２週目に、ヒプノーム（Ｈｙｐｎｐｒｍ）[ジャンセン−シラグ(Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ)]およびドーミカム［ロシュ(Ｒｏｃｈｅ)］麻酔下で、ＣＴまたはｍＬＴを含む２０μｌのワクチン製剤を鼻腔内投与することにより免疫感作した。実験攻撃は以下の通りに実施された：５週目に、マウスに２．５ｍｇプロゲステロンを腹膜内投与し[デポ−プロベラ(Ｄｅｐｏ−Ｐｒｏｖｅｒａ)、アップジョン(Ｕｐｊｏｈｎ)]、６週目に１００μｌショ糖リン酸グルタミン酸緩衝液（ＳＰＧ）中の５ｘ１０⁵封入体形成単位（ＩＦＵ）トラコーマクラミジアＮＩ１（血液型亜型Ｆ）を、または稔性陽性対照群には１００μｌのマッコイ（ＭｃＣｏｙ）細胞抽出物を、両側子宮内接種することにより感染させた。１０週目に、処置されたマウスは稔性評価のため３ケ月間雄と共に檻に入れられ(１つの檻当たり雌２匹に対し雄１匹を入れ、各群の中で１週間毎に雄を交替させた)；群の稔性評価に用いられたパラメーターは：Ｆ(１回以上出産したマウスの数÷マウスの総数)、Ｍ（生まれたマウスの数（生死を問わず）÷出産回数）およびＮ（生まれたマウスの数（生死を問わず）÷マウスの総数）であった。ＭＯＭＰ特異的体液性応答の測定特許ＧＢ９５０６８６３.１前掲に開示された方法を幾分修正した方法で、個々のマウスに対するサンプリングおよびエリザ（ＥＬＩＳＡ）による抗体（Ａｂ）応答の定量が実施された。膣分泌物を５０μｌＰＢＳで繰り返し洗浄および吸引することにより３週目から７週目まで１週間隔で採取し、０．５％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ中で１：４に希釈し、ｒＭＯＭＰ特異的分泌型ＩｇＡまたはＩｇＧ抗体につき分析した。特異的抗体濃度は洗浄中の液体回収率の変動に影響される可能性があるため、総ＩｇＡも計量されたが、１回目の実験においてのみであった。本発明者らは、分析したマウス間で総抗体濃度の変動を僅かしか、あるいは全く検出しなかった（示さず）ため、その後の膣洗浄はＭＯＭＰ特異的ＩｇＡ分析のためにのみ行われた。鼻腔内免疫感作の有効性を評価するため、１回目の実験試料中のＣＴ−特異的ＩｇＡおよびＩｇＧも測定された。力価は４９２ｎｍでの光学密度１に対応する試料希釈倍数の逆数として任意に決定され、４に相当するかまたはそれよりも高い力価を少なくとも１回示したマウスは抗原特異的ＩｇＡ陽性とみなされた。血液試料を６週目（攻撃の週）に採取し、血清中のｒＭＯＭＰ特異的ＩｇＧの存在を分析した。１回目の実験では、鼻腔内免疫感作の有効性を確認するために血清中のＣＴ特異的ＩｇＧも測定し；従って、マイクロ力価（ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ）プレートは１ウェル当たり０．５μｇのＣＴ［スイス・シーラム(ＳｗｉｓｓＳｅｒｕｍ)、ベルン(Ｂｅｒｎ)］で予めコーティングされ、次いで特許ＧＢ９５０６８６３．１に記載されたごとく処理された。ＭＯＭＰ特異的細胞応答の測定５匹の雌Ｃ３Ｈマウス（６週令、イファ・クレド(ＩｆｆａＣｒｅｄｏ)）２群を、０週目および２週目に、ヒプノーム（Ｈｙｐｎｐｒｍ）[ジャンセン−シラグ(Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ)]およびドーミカム［ロシュ(Ｒｏｃｈｅ)］麻酔下で、ｍＬＴを含む２０μｌのワクチン製剤を鼻腔内投与することにより免疫感作し；陰性対照群は同じ方法に従って、ｍＬＴのみで偽免疫感作（ｓｈａｍ −ｉｍｍｕｎｉｓｅ）した。群１および２の動物、ならびに対応する対照群の動物を血清学的分析のために採血し、それぞれ２回目の追加免疫の９日後および１９日後に屠殺し；脾臓を無菌的に取り出し、プールし、１μｇ／ｍｌｒＭＯＭＰ血液型亜型Ｌ２、または陽性対照として４μｇ／ｍｌコンカナバリンＡ［ベーリンガー・マンハイム(ＢｏｅｒｈｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ)］で再刺激するために単一細胞懸濁液を調製し；再刺激されなかった培養物は細胞活性化の陰性対照として用いられた。細胞増殖を測定するために、丸底の９６ウェル培養プレートに、１ウェル当たり、１０％ウシ胎児血清［ＦＣＳ、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）−ＢＲＬ］を加えた２００μｌのＲＰＭＩ中の５ｘ１０⁴の応答細胞を用いて、三連培養を用意し;７％ＣＯ₂中で３７℃にて７２時間インキュベーションした後、上清をリコルト（ｒｅｃｏｌｔ）する一方、細胞には１ウェル当たり１μＣｉのトリチウム化チミジン[アマシャム(Ａｍｅｒｓｈａｍ)]を１８時間パルスし、グラスファイバー[スカトロン(Ｓｋａｔｒｏｎ)]上に採取し、風乾し、標準液体シンチレーションによりベータ線放射をカウントした。三連ウェル当たりの抗原またはコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）刺激したＴ細胞によるトリチウム化チミジンの取り込みの平均値を三連ウェル当たりの刺激されていないＴ細胞の取り込みの平均値で割った刺激指数（ＳＩ）が、各群について計算された。市販のＥＬＩＳＡキット［デュオセット(Ｄｕｏｓｅｔ)、ゲンザイム(Ｇｅｎｚｙｍｅ)］を用いて培養上清中のＩＦＮガンマが測定された。追加免疫後９日目に得られた細胞については、三連培養につきプールされたリンパ球増殖アッセイの７２時間培養上清が用いられたが、一方、１９日目に得られた細胞については、その目的のために特別に用意された２４ウェルプレート（１０％のＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０の１ｍｌ当たり５ｘ１０⁶細胞）由来の４８時間培養上清が用いられた。結果ＣＴまたはｍＬＴと組み合わせたｒＭＯＭＰによる粘膜性免疫感作が、クラミジア攻撃によってひき起こされる不妊に対する保護を提供し得るということの証拠は、以下に記載される最初の２つの実験により与えられる。これらの実験は主として全身性免疫感作の評価（示さず）のために設計されたため、陰性および陽性対照群はＣＴまたはｍＬＴ以外のアジュバントを皮下投与され；ｒＭＯＭＰ感受性の動物（陰性対照群）は稔性に対する攻撃の効果を確認するために感染させられ、一方ｒＭＯＭＰにより免疫感作された動物（陽性対照群）は子宮内接種中の動物の取扱いに起因し得る稔性の変動を考慮に入れるため偽感染させられた。第３の実験はｍＬＴをアジュバントとするｒＭＯＭＰにより誘発される細胞活性化を特徴付けるために用意され、該実験では陰性対照群はｍＬＴ単独により鼻腔内に偽免疫感作されたマウスで構成された。実験１第１の実験（表１）では、ｒＭＯＭＰ＋ＣＴによる鼻腔内免疫感作を、クラミジア感染症（同型攻撃）によってひき起こされる不妊に対する保護効果について評価した。攻撃直前の体液性免疫応答の分析の結果、全てのマウスが血清中にＣＴ特異的ＩｇＧを、ならびに膣分泌物中にＣＴ特異的ＩｇＧおよびＩｇＡを示すが、同じ採取物（ｐｒｅｌｅｖｅｍｅｎｔｓ）中に検出可能なｒＭＯＭＰ特異的ＩｇＧあるいはｒＭＯＭＰ特異的ＩｇＡ応答は示さないことが判明した。しかしながら、攻撃後、本群はそれぞれ陽性対照群の７７および６６％に達するＦおよびＮ稔性パラメーターを示し、一方陰性対照群はほぼ完全に不妊（陽性対照群で記録されたＦ値の１４％およびＮ値の１３％）であった。実験２第２の実験（表２および３）では、マウスの群はＣＴと組み合わせたｒＭＯＭＰＦ、またはＣＴあるいはｍＬＴと組み合わせたｒＭＯＭＰＦにより鼻腔内免疫感作され；前記の陰性および陽性対照群に加えて、ＣＴ単独を鼻腔内投与された偽免疫感作対照群が実験に含まれた。第１の実験で観察されたごとく、ｒＭＯＭＰＦ＋ＣＴの鼻腔内投与は、攻撃直前に採取された血清中（ＩｇＧ応答）にも、追加免疫から攻撃まで毎週採取された膣分泌物中（ＩｇＡ応答）にも、検出可能な体液性ｒＭＯＭＰＦ特異的応答を誘発しなかった。これに対してＣＴまたはｍＬＴと組み合わせたｒＭＯＭＰＦＬ２の鼻腔内投与はいくつかの動物において抗原特異的体液性応答を誘発し；１０匹のマウス中１匹および３匹はそれぞれ、攻撃直前に採取された血清を分析した際にＩｇＧ陽性であることが判明し、一方１０匹のマウス中５匹および７匹はそれぞれ追加免疫から攻撃まで毎週採取された膣洗浄液の少なくとも一つにおいてＩｇＡ陽性であることが判明した。攻撃１週間後に実施された分析が示すように、感染はＭＯＭＰ特異的ＩｇＡ応答を増強しなかった。陽性対照偽感染群と比べると、陰性対照群の稔性はほぼ完全に消失しており、クラミジア感染症の特異的効果が示唆された。粘膜投与された群の稔性より、ＣＴと組み合わせたｒＭＯＭＰＦまたはｒＭＯＭＰＦＬ２による免疫感作は同等レベルの保護を与えることが明らかとなった(陽性対照群で記録されたＦ値のそれぞれ６３および７５％、ならびにＮ値の８１および５８％)。ｍＬＴと組み合わせたｒＭＯＭＰＬ２による免疫感作が最高レベルの保護を与え、陽性対照群で記録された値と比べ、Ｆ値は同等で、Ｎ値はより高かった(１５０％)。ＣＴ単独の投与もまた不妊レベルを下げるよう見えたが、その下げ幅はｒＭＯＭＰ＋ＣＴ製剤よりも少なく、Ｆ値は陽性対照群で記録された値の４０％、およびＮ値は３５％であった。実験３ｍＬＴと共に製剤化された抗原により誘発される細胞の活性化を抗原特異的再刺激の際の細胞増殖およびＩＦＮガンマ分泌を通して分析した。追加免疫後９および１９日目に調査したところ、抗原により免疫感作された群由来の脾臓細胞は強い特異的増殖的免疫応答を発現し(それぞれ陽性対照の３８％および１０８％)、一方ｍＬＴ単独により偽免疫感作された対照動物由来のものはｉｎｖｉｔｒｏでの再刺激に応答しなかった(表４および５）。両方の時点で採取され抗原で再刺激された脾臓細胞は、同時期に４μｇ／ｍｌのＣｏｎＡで再刺激されたものの範囲内の濃度のＩＦＮガンマを培養上清中に示した。他方、偽ワクチン投与された動物から単離され、抗原と共に培養された細胞は、ＣｏｎＡと共に培養された細胞カウンターパートと比べて比較的低濃度のＩＮＦガンマを産生した(表４および５)。体液性応答を見た場合、本発明者らはプールおよび個々の血清中のｒＭＯＭＰ特異的ＩｇＧも、プールおよび個々の膣洗浄液ならびに両時点での採取物中のｒＭＯＭＰ特異的ＩｇＡも検出できなかった。これらのデータはｒＭＯＭＰの粘膜投与は、ＣＴまたはｍＬＴと組み合わせた場合、クラミジア攻撃によってひき起こされた不妊に対する保護（同型および異型の）をもたらすことを示す。保護が局所のｒＭＯＭＰ特異的ＩｇＡと関連づけられないという事実は、特異的分泌型抗原応答とは異なる免疫保護機構の存在を立証する。後の実験の結果、マウスでは、ｍＬＴと組み合わせたｒＭＯＭＰの鼻腔内投与は、観察された保護の原因であるかもしれない特異的Ｔｈ１Ｔ細胞免疫応答を誘導することを示唆する。参考文献１．アレン・ジェイ・イー(Ａｌｌｅｎ，Ｊ．Ｅ.)、アール・エム・ロクスリー(Ｒ．Ｍ．Ｌｏｋｓｌｅｙ)およびアール・エス・ステフェンス(Ｒ．Ｓ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓ)．１９９１．トラコーマクラミジアの主要外層膜蛋白質由来の単一ペプチドは保護決定基に対する抗体産生のためのＴ細胞の補助を誘導する。ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ.）１４７：６７４−６７９．２．ベアー・ダブリュー(Ｂａｅｈｒ，Ｗ.)、ワイ・エックス・ツァング(Ｙ．Ｘ．Ｚｈａｎｇ)、ティー・ジョセフ(Ｔ．Ｊｏｓｅｐｈ)、エイチ・スー(Ｈ．Ｓｕ)、エフ・イー・ナノ(Ｆ．Ｅ．Ｎａｎｏ)、イー・ケー・エベレット（Ｅ．Ｋ．Ｅｖｅｒｅｔｔ）およびエイチ・ディー・カルウェル(Ｈ．Ｄ．Ｃａｌｗｅｌｌ)．１９８８．トラコーマクラミジアの主要外層膜蛋白質遺伝子により発現される抗原ドメインのマッピング。プロシーディングス・イン・ナショナル・アカデミック・サイエンス(Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ.）．ユー・エス・エイ(ＵＳＡ)．８５：４０００−４００４。３．バッテイガー・ビー・イー(Ｂａｔｔｅｉｇｅｒ，Ｂ．Ｅ.)、アール・ジー・ランク(Ｒ．Ｇ．Ｒａｎｋ)、ピー・エム・バボイル（Ｐ．Ｍ．Ｂａｖｏｉｌ）およびエル・エス・エフ・ソダーべルグ(Ｌ．Ｓ．Ｆ．Ｓｏｄｅｒｂｅｒｇ)．１９９３．モルモットの封入体結膜炎のクラミジア性病原体の単離された外層膜蛋白質を用いた、モルモットの免疫感作による生殖器の再感染に対する部分保護。ザ・ジャーナル・オブ・ジェネラル・マイクロバイオロジー(Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.)．１３９：２９６５−２９７２．４．バボイル・ピー(Ｂａｖｏｉｌ，Ｐ)、エイ・オーリン（Ａ.，Ｏｈｌｉｎ）およびジェイ・シャクター(Ｊ．Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ)．トラコーマクラミジア中の外層膜の構造および透過性におけるジスルフィド結合の役割。インフェクション・アンド・イミュニティー(Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ.)．４４：４７９− ４８５．５．ディキンソン・ビー・エル（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｂ．Ｌ.）およびジェイ・ディー・クレメンツ(Ｊ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ)．エシャリキア・コリ（Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）の熱に不安定な腸内毒素のアジュバント性のＡＤＰリボシルトランスフェラーゼ活性からの解離。インフェクション・アンド・イミュニティー(Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ.)．６３：１６１７−１６２３．６．グレイストン・ジェイ・ティー（Ｇｒａｙｓｔｏｎ，Ｊ．Ｔ.）およびエス・ピー・ワング(Ｓ．Ｐ．Ｗａｎｇ)．クラミジアおよびそれらによってひき起こされた疾患の新しい知識。ジャーナル・オブ・インフェクショス・ディジーズ (Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ.)．１３２：８７−１０５．７．グレイストン・ジェイ・ティー(ＧｒａｙｓｔｏｎＪ．Ｔ.)、エス・ピー・ワング(Ｓ．Ｐ．Ｗａｎｇ)、エル・ジェイ・イェー（Ｌ．Ｊ．Ｙｅｈ）およびシー・シー・クオ(Ｃ．Ｃ．Ｋｕｏ)．１９８５．トラコーマの病因における再感染の重要性。レビューズ・オブ・インフェクショス・ディジーズ（Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ.）７：７１７−７２５．８．ハッチ・ティー・ピー(Ｈａｔｃｈ，Ｔ．Ｐ.)、エム・ミセリ(Ｍ．Ｍｉｃｅｌｉ)、ジェイ・イー・サブレット(Ｊ．Ｅ．Ｓｕｂｌｅｔｔ)．１９８６．クラミジア・シタッチおよびトラコーマクラミジアの発生サイクル中のジスルフィド結合を有する外層膜蛋白質の合成。ジャーナル・オブ・バクテリオロジー(Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ.)．１６５：３７９−３８５．９．ハインツェル・エフ・ピー(Ｈｅｉｎｚｅｌ，Ｆ．Ｐ.)、エム・ディー・サディック(Ｍ．Ｄ．Ｓａｄｉｃｋ)、ビー・ジェイ・ホラディ(Ｂ．Ｊ．Ｈｏｌａｄａｙ)、アール・エル・コフマン（Ｒ．Ｌ．Ｃｏｆｆｍａｎ）およびアール・エム・ロクスリー(Ｒ．Ｍ．Ｌｏｋｓｌｅｙ)．ネズミのリーシュマニアの消散および進行の際のインターフェロンガンマおよびインターロイキン４の相互発現。ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ. ）１６９：５９−７２６．１０．ホルムグレン・ジェイ(Ｈｏｌｍｇｒｅｎ，Ｊ.)、エヌ・ライキ（Ｎ．ＬＹｃｋｅ）およびシー・ツェルキンスキー(Ｃ．Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ). １９９３．経口粘膜性アジュバントおよび抗原ベクターシステムとしてのコレラ毒素およびコレラ毒素Ｂサブユニット。ワクチン１１：１１７９−１１８４１１．イギーツェム・ジェイ・ユー(Ｉｇｉｅｔｓｅｍｅ，Ｊ．Ｕ.)、ケイ・エイチ・ラムゼイ(Ｋ．Ｈ．Ｒａｍｓｅｙ)、ディー・エム・マギー(Ｄ．Ｍ．Ｍａｇｅｅ)、ディー・エム・ウィリアムズ(Ｄ．Ｍ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ)、ティー・ジェイ・キンシー（Ｔ．Ｊ．Ｋｉｎｃｙ）およびアール・ジー・ランク(Ｒ．Ｇ．Ｒａｎｋ)．１９９３．次亜種特異的、ＴＨ１リンパ球クローンの養子移入によるネズミのクラミジア性生殖器感染症の消散。リージョナル・イミュノロジー（Ｒｅｇ．Ｉｍｍｕｎｏｌ.）５：３１７−３２４．１２．メゾヌーブ・ジェイ・エフ(Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ，Ｊ．Ｆ.)、シー・シャーリアー(Ｃ．Ｃｈａｒｌｉｅｒ)、ピー・モミン(Ｐ．Ｍｏｍｉｎ)、エヌ・ガルソン（Ｎ，Ｇａｒｓｏｎ）およびヴィー・バーラント(Ｖ．Ｖｅｒｌａｎｔ)．１９９５．ＭＰＬ＋ＱＳ２１と組み合わせたトラコーマクラミジアの組換え主要外層膜蛋白質（ｒＭＯＭＰ）は、マウスにおける異型攻撃に起因する不妊に対する部分保護を誘導する。ＳＴＤ研究国際学会第１１回会合の抄録モノグラフ．１９９５，ニューオーリンズ、ルイジアナ．１３．モリソン・アール・ピー(Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｒ．Ｐ.)、アール・ジェイ・ベランド(Ｒ．Ｊ．Ｂｅｌｌａｎｄ)、ケー・リング（Ｋ．Ｌｙｎｇ）およびエイチ・ディー・コールドウェル(Ｈ．Ｄ．Ｃａｌｄｗｅｌｌ)．クラミジア性疾患の病因論。５７−ｋＤクラミジア性過敏症抗原はストレス応答蛋白質である。ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ.）１７０：１２７１−１２８３．１４．パットン・ディー・エル(Ｐａｔｔｏｎ，Ｄ．Ｌ.)、ワイ・ティー・コスグローブ・スウィーニー（Ｙ．Ｔ．ＣｏｓｇｒｏｖｅＳｗｅｅｎｅｙ）およびシー・シー・クオ(Ｃ．Ｃ．Ｋｕｏ)．１９９４．サルのトラコーマクラミジア卵管炎における遅延型過敏症の証明:卵管損傷の病因機構ジャーナル・オブ・インフェクショス・ディジーズ（Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ.）１６９：６８０−６８３.。１５．ステフェンス・アール・エス(Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，Ｒ．Ｓ.)、アール・サンチェス・ペスカドール(Ｒ．Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｓｃａｄｏｒ)、イー・エイ・ワガー(Ｅ．Ａ．Ｗａｇｅｒ)、シー・イノウエ（Ｃ．Ｉｎｏｕｙｅ）およびエム・エス・アーディー(Ｍ．Ｓ．Ｕｒｄｅａ)．トラコーマクラミジアの主要外層膜蛋白質の多様性。ジャーナル・オブ・バクテリオロジー（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ.）１６９：３８７９−３８８５．１６．ス・エイチ(Ｓｕ，Ｈ.)、アール・ピー・モリソン(Ｒ．Ｐ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ)、エヌ・ジー・ワトキンズ（Ｎ．Ｇ．Ｗａｔｋｉｎｓ）およびエイチ・ディー・コールドウェル(Ｈ．Ｄ．Ｃａｌｄｗｅｌｌ)．トラコーマクラミジアの主要外層膜蛋白質のＴヘルパー細胞エピトープの確認および特徴付け。ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．）１７２：２０３−２１２１７．テイラー・エイチ・アール(Ｔａｙｌｏｒ，Ｈ．Ｒ.)、ジェイ・ウィットムーハドソン(Ｊ．Ｗｈｉｔｔｕｍ−Ｈｕｄｓｏｎ)、ジェイ・シャクター(Ｊ．Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ)、エイチ・ディー・コールドウェル（Ｈ．Ｄ．Ｃａｌｄｗｅｌｌ）およびアール・エイ・プレンダーガスト(Ｒ．Ａ．Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ)．１９８８．クラミジアの主要外層膜蛋白質（ＭＯＭＰ）による経口免疫感作。インベスティゲーション・オフタルモロジー・アンド・ビジュアル・サイエンス(Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．Ｖｉｓｕａｌ．Ｓｃｉ.)２９：１８４７−１８５３．１８．タフリー・エム(Ｔｕｆｆｒｅｙ，Ｍ.)、エフ・アレキサンダー(Ｆ．Ａｌｅｘａｎｄｅｒ)、ダブリュー・コンラン(Ｗ．Ｃｏｎｌａｎ)、シー・ウッズ（Ｃ．Ｗｏｏｄｓ）およびエム・ワード(Ｍ．Ｗａｒｄ)．１９９２．組換えＬ１主要外層膜蛋白質により予め免疫感作することによる、マウスのクラミジア性卵管炎および下部生殖路のコロニー化に対する、トラコーマクラミジアのヒト血清異型Ｆ単離物による異型保護。ジャーナル・オブ・ジェエラル・マイクロバイオロジー（Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.）１３８：１７０７ −１７１５．１９．ワング・エス・ピー(Ｗａｎｇ，Ｓ．Ｐ.)、シー・シー・クオ(Ｃ．Ｃ．Ｋｕｏ)、アール・シー・バーンズ(Ｒ．Ｃ．Ｂａｒｎｅｓ)、アール・エス・ステフェンズ（Ｒ．Ｓ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓ）およびジェイ・ティー・グレイストン (Ｊ．Ｔ．Ｇｒａｙｓｔｏｎ)．１９８５．モノクローナル抗体によるトラコーマクラミジアの免疫型分類。ジャーナル・オブ・インフェクショス・ディジーズ（Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ）１５２：７９１−８００．２０．ウェストロム・エル（Ｗｅｓｔｒｏｍ，Ｌ.）およびマード・ピー・エー(ＭａｒｄｈＰ．Ａ.)．１９８３．クラミジア性卵管炎。ブリティッシュ・メディカル・ブレティン（ＢｒｉｔｉｓｈＭｅｄｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ）３９：１４５−１５０．２１．ヤマフラ・エム(Ｙａｍａｈｕｒａ，Ｍ.)、ケイ・ウエムラ(Ｋ．Ｕｙｅｍｕｒａ)、アール．ジェイ．ディーンズ(Ｒ．Ｊ．Ｄｅａｎｓ)、ケイ・ワインバーグ(Ｋ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇ)、ティー・エイチ・リー(Ｔ．Ｈ．Ｒｅａ)、ビー・アール・ブルーム（Ｂ．Ｒ．Ｂｌｏｏｍ）およびアール・エル・モドリン(Ｒ．Ｌ．Ｍｏｄｌｉｎ)．１９９１．病原に対する保護応答の定義：ハンセン病の病変におけるサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の性質。サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２５４：２７７−２７９．２２．ユアン・ワイ(Ｙｕａｎ，Ｙ.)、ワイ・エックス・ツァング(Ｙ．Ｘ．Ｚｈａｎｇ)、ワトキン・エヌ・ジー（ＷａｔｋｉｎＮ．Ｇ.）およびエイチ・ディー・コールドウェル(Ｈ．Ｄ．Ｃａｌｄｗｅｌｌ)．１９８９．ヌクレオチドおよび１５個のトラコーマクラミジア血液型亜型の主要外層膜蛋白質の４個の可変ドメインから推論したアミノ酸配列。インフェクション・アンド・イミュニティー（Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ.）５７：１０４０−１０４９．２３．ツァング・ワイ・エックス(Ｚｈａｎｇ，Ｙ．Ｘ.)、エス・スチュワート(Ｓ．Ｓｔｅｗａｒｔ)、ティー・ジョセフ(Ｔ．Ｊｏｓｅｐｈ)、エイチ・アール・テイラー（Ｈ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ）およびエイチ・ディー・コールドウェル (Ｈ．Ｄ．Ｃａｌｄｗｅｌｌ)．保護モノクローナル抗体はトラコーマクラミジアの主要外層膜蛋白質上に位置するエピトープを認識する。ジャーナル・オブ・イミュノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ.)１３８：５７５−５８１．

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ヴェルラン，ヴァンサン・ジョルジュ・クリスティアン・ルイベルギー、ベー―1330リクセンザルト、リュ・デュ・ランスティテュート89番、スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス・ソシエテ・アノニム

Claims

【特許請求の範囲】１．トラコーマクラミジアの主要外層膜蛋白質（ＭＯＭＰ）および粘膜性アジュバントを含むワクチン２．アジュバントがｍＬＴまたはＣＴから選択される請求項１記載のワクチン。３．外層膜蛋白質が血液型異型ＤないしＫまたはＬから選択される請求項１記載のワクチン。４．外層膜がＦ、Ｌ２、ＤまたはＥから選択される請求項３記載のワクチン。５．２個以上の血液型異型由来のＭＯＭＰを含む前記請求項に記載のワクチン。６．外層膜蛋白質が組換えＤＮＡ技術によりＥ．ｃｏｌｉ内で産生される前記請求項に記載のワクチン。７．粘膜性アジュバントが、１９２の位置にあるアルギニンがグリシンに置換されたＬＴホロ毒素である前記請求項に記載の本明細書中に請求されるワクチン。８．ＭＯＭＰがシグナル配列の欠けた完全な長さの成熟蛋白質である前記請求項に記載のワクチン。９．経口または鼻腔内投与に適合させた前記請求項に記載の本明細書中に請求されるワクチン。１０．トラコーマクラミジア由来のＭＯＭＰを粘膜性アジュバントと混合することを含むワクチンの製法。１１．安全かつ有効な量の前記請求項に記載のワクチンを投与することを特徴とする、トラコーマクラミジア感染症に罹患しているまたは罹患しやすい患者の治療方法。１２．トラコーマクラミジア感染症の治療または予防用のワクチン製造のための、粘膜性アジュバントおよびトラコーマクラミジア由来のＭＯＭＰの使用。