JP2001501970A

JP2001501970A - 光化学治療用組成物

Info

Publication number: JP2001501970A
Application number: JP10530653A
Authority: JP
Inventors: ペング，キアン; ネスランド，ヤン，エム．; ギエルクスキー，カール，エリク; モアン，ヨハン; ヴァルロー，トロンド
Original assignee: フォトキュアエイエス
Priority date: 1997-01-10
Filing date: 1998-01-09
Publication date: 2001-02-13
Also published as: WO1998030242A2; NO993393D0; US20020061871A1; WO1998030242A3; CA2275659A1; NO993393L; KR20000070040A; AU5492698A; EP1015030A2; PL334565A1; AU731042B2; RU2194532C2; BR9807055A; US6750212B2; NZ336568A; HUP0000057A3; HUP0000057A2; CN1243445A; GB9700396D0

Abstract

(57)【要約】本発明は、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に含み、かつ一種以上のキレート化剤を任意に含むとともに、血管基質局在性光増感剤と一緒にプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤を含む製薬組成物、PDTに応答する障害または異常の処置へのその使用(好ましくは協同的増進治療を示す)、それを含むキット、および治療または診断方法。

Description

【発明の詳細な説明】光化学治療用組成物本発明は、光化学治療による皮膚または他の体表面における障害または異常の処置に使用する製薬組成物に関する。皮膚または他の上皮、例えば粘膜、器官の異常または障害、例えば新生物または乾せん斑は、従来より、手術、放射線療法、冷凍療法または化学療法によって処置されている。しかしながら、これらの処置は、しばしば重大かつ深刻な障害、例えば毒性、発癌性、または治療により生じる他の喜ばしくない副作用または全般的不快感をもたらす。光化学的療法または光力学的療法（PDT）そのものも知られており、これは、様々な皮膚または他の上皮器官の異常または障害、特に癌または前癌状態の病巣、ならびに乾せんなどの特定の非悪性病巣の処置のために近年公開された技術である。光化学治療は、身体の疾患領域に対する光増感剤（光化学治療剤）の適用または全身適用を含み、これに続いて、光増感剤を活性化して毒性形態に変換するための光学活性化光への暴露が行われ、これによって感染した細胞を殺傷し、またはこれらの増殖能力を消滅させる。ある範囲の光増感剤が知られており、これにはソラレン類、ポルフィリン類、クロリン類およびフタロシアニン類が含まれることが良く知られている。これら薬剤は、光に暴露されると毒となる。光増感剤は、様々な機構によって、直接または間接的にそれらの効果を発揮することができる。従って例えば、ある光増感剤は光によって活性化されたとき直接毒性となる一方、他の剤は毒性種、例えば一重項酸素または他の酸素由来のフリーラジカルなどの酸化剤などを発生するよう作用し、これらは細胞材料および生体分子、例えば脂質、タンパク質および核酸に対して非常に破壊的である。ソラレン類は直接作用する光増感剤の例であり、光への暴露に際してDNA分子の二本鎖間に付加物または架橋を形成し、これによってDNA合成を阻害する。残念にもこの治療での危険は、望ましくない突然変異副作用または発癌副作用が起こり得ることである。この不利益は、他の間接的作用モードを有する光増感剤を選択することで回避することができる。例えばポルフィリン類は、毒性酸素種の発生によって間接的に作用し、突然変異副作用を有さず、光化学治療のより望ましい候補に相当する。ポルフィリン類は、生来ヘムの合成における前駆体を生じる。特に、ヘムは、鉄（Fe³⁺）が酵素フェリケラターゼの作用によりプロトポルフィリンIx（Pp）内に組み込まれたときに製造される。Ppは非常に強い光増感剤である一方、ヘムは光増感効果を有さない。 Douqherty，Cancer Research，39，p146-151，1979;当初はPhotofrin IIと命名）は、近年特定の癌の治療における光増ゴマーからなり、局所的に塗布された場合には容易に皮膚に浸透することがなく、従って全身投与する必要がある。したがって、その主な不利益は、非経口、一般的には静脈内投与しなければならないため、生じた皮膚の光増感が、静脈内注射後数週間続く可能性があることである。同様な問題が、所謂「ヘマトポルフイリン誘導体」（Hpd）（Lipson et al.，J．Natl．Cancer Ins.，60，p1-10，196 1）などのポルフィリンベースの光増感剤にも存在しており、「ヘマトポルフィリン誘導体」は、癌光化学治療における使用についても報告されている（例えば、S．Doughety.，J．Natl．Cancer Ins.，52，p1333，1974;Kelly and Snell，J ．Urol.，115，p150，1976参照）。Hpdはヘマトポルフィリンを酢酸および硫酸で処理し、その後アセチル化物をアルカリで溶解して得られる錯体混合物である。明らかに、薬剤として不明な混合物を用いることにおける不利益が存在する。さらに、Hpdも注射によって投与する必欠陥を招く。これら問題を克服するために、Ppの前駆体は、その光化学治療での可能性について調査されてきた。特に、Pp前駆体5-アミノレブリン酸（ALA）が特定の皮膚癌の光化学治療剤として調査された。へム合成の最初の段階でスクシニルCoAおよびグリシンから形成されるALAは、限られた程度で皮膚に浸透することができ、Ppの局所的集中を導く。即ち、フェロケラターゼ（金属化酵素）の作用がヘム合成における律速段階であるため、過剰のALAはPp光増感剤の集積を導く。したがって、ALAを皮膚癌に局所的に供給し、次いで数時間後癌を光に暴露することで、有益な光化学治療上の効果を得ることができる（例えば、WO91/01727 参照）。基底細胞癌およびりん状細胞癌を覆う皮膚が、健康な皮膚よりもALAにより容易に浸透されるため、およびフェロケラターゼの濃度が皮膚癌においては低いため、ALAの局所的な適用は癌において選択的に増進されたPpの生成を導くことが見い出された。 ALAの使用は、この技術での重大な進歩を代表する一方、ALAを用いた光化学治療は常に全体として満足できるわけではない。ALAは全ての癌および他の組織に十分な効能をもって浸透して、広範囲の癌または他の病状を処置することができるわけでなく、かつALAは製薬的な処方に適さない傾向がある。これらの問題の幾つかは、ALA誘導体、例えば我々の継続中出願WO96/28412に記載されるようなA LA-エステル誘導体、例えばALA-メチルエステル、ALA-エチルエステル、ALA-プロピルエステル、ALA-ヘキシルエステル、ALA-ヘプチルエステルおよびALA-オクチルエステルおよびそれらの塩などを用いることによって克服できる。 ALAのように、このエステル誘導体は、Ppの生産を増進することによってそれらの効果を示す。即ち、望ましい作用部位への供給に際し、標的部位に存在するエステラーゼなどの加水分解酵素がエステルを親ALAに分解し、このALAがヘム合成経路に入ってPp の集積を導く。しかしながら、エステル誘導体はALAそのものを越える多くの利点を有している。最初に、これらはALAと比較してより親油性であり、皮膚および他の組織に、より十分に浸透することができる。この浸透はより深く、速い。これは、特に局所的投与に対して、重要な利点である。第二に、エステルは、AL AよりもPp生産のよりよい増進剤でる。即ち、ALAエステルの投与に続くPp生産レベルはALA単独よりも高い。第三に、ALAエステルは、処置されるべき標的組織に対する改善された選択性を示す。即ち、Pp生産増進効果は、望ましい標的病巣に局在し、周囲の組織に広がらない。これは特に癌について証明される。最後にエステルは、投与に際して標的組織により十分に局在化するように見える。これは全身投与に対して特に重要であろう。なぜならば、他のポルフィリンベース光増感剤についての文献で報告されるような望ましくない光増感効果が低減または回避できることを意味するからである。このようなALAエスエルは光化学治療の分野におけるかなりの進歩を代表する一方、全ての異常または障害が公知の方法を用いたPDTに応答して癌成長を防止するわけではない。したがって、癌成長を遅延または防止するよりよい他の光化学治療剤への要請がなおも残されている。したがって、本発明は従来技術で開示されたものを越える増強された光化学治療的効果を有する光化学治療組成物を提供することを目的としている。著者等が行った研究は、PDTによる癌の効果的な根治が、癌の細胞成分および血管基質の両方の破壊を要求することを示した(peng & Moan，Br． J．Cancer，72，p565-574，1995;Peng et al.，Cancer Res.，55，p2620-2626， 1995およびPeng et al.，Ultrastructural Pathology，20，ｐ 109-129，1996) 。ALAは、癌の処置における効用を立証し、かつALAから内因的に合成されたPpIX はガン細胞内に局在化する。さらに、局所的に供給されたALAは皮膚感作を生じず、かつ細胞のDNAへの突然変異原性効果を有さない。全身供給されたALAは投与後24時間感作を示さない。しかしながら、上述したように、ALAは全ての癌に浸透できるわけではなく、厚さ２〜３mm未満の皮膚の表面病巣の処置に十分な効力を有することが発見されたにすぎない。良好な診療結果は、より深い皮膚病巣、空気消化管または他の内部中空器官のより深い病巣に、局所投与または全身投与されたALA-PDTを用いては、良好布することが知られているが、上述したように、皮膚光増感の危険が長期間伴う。しかしながら、驚くべきことに、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤、例えばALAまたはそのメチルまたはブチルエステルと組ラ（メソ−ヒドロキシフェニル）クロリン(tetra（meso-hydroxyphenyl）chlori n;m-THPC)、クロリンe6(chlorin e6)、アルミニウムフタロシアニンジスルホネートまたはアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネートを使用することで、これら薬剤の一つを単独で使用する場合と比較して、PDTの有効性を増大することが発見された。血管基質局在性光増感剤とプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤との間に協同的効果が観察され、その結果、剤単独の予想される加算的効果と比較して改善された癌成長抑制をもたらした。この有利な協同的効果は、驚くべきことに、血管基質局在性剤を治療投与量未満（補助-治療（sub-therapeutic）投与量）で用いた場合でも観察され、この投与量は癌成長を低減するのに効果的でないが、皮膚光増感の危険を低減または回避する。例えば、このようにして処置した癌の成長は、治療投与量のALAおよび低いって低減されることが発見された。成長の低減は、治療投与量のALA 結果の加算的効果と比較して優位に大きかった。これは、非治療投与量であっても見られる、これまで認識されていなかった、異なるタイプの光化学治療剤間での協同的効果を示唆する。補助-治療レベルでも見られるこの協同的効果は、重大な臨床上の意味を有する。最初に、改善されたPDTが達成され、これは表面皮膚病巣に限定されず、深い皮膚病巣および中空器官の表面病巣の処置にも使用できる。第二に、補助-治療投与量の血管基質局在性光増感剤が用いられた場合、これら剤に伴う皮膚光毒性を回避できる。したがって、一つの観点において、本発明は、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に含み、かつ一種以上のキレート化剤を任意に含むとともに、血管基質局在性光増感剤と一緒にプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤を含む、光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常を処置する製薬組成物を提供する。特に、光化学治療剤の治療効力が増強、即ちPDTが薬剤の一つを単独で用いた場合と比較して増強される。さらに特に、治療効力が協同的作用により増強される。本発明の好ましい観点において、血管基質局在性光増感剤は、補助-治療投与量で提供される。他の観点から見ると、本発明は、光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常を処置する組成物の製造への、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に伴い、かつ一種以上のキレート化剤を任意に伴うとともに、血管基質局在性光増感剤を伴う、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤の使用を提供することがわかる。本発明はまた、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に含み、かつ一種以上のキレート化剤を任意に含む、プロトポルフイリン前駆体光化学治療剤および血管基質局在性光増感剤の新規組成物まで拡張される。に投与することができず、従って両光化学治療剤の本発明に係る組成物が非経口で投与されない場合には、投与は、同時に、または一方が他方に続いて交互に投与される別々の調製物の使用によることが理解されるであろう。したがって、更なる観点から、本発明は、光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の処置において、同時に、別々にまたは順次使用するための組み合わせ調製物として、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に含み、かつ一種以上のキレート化剤を任意に含むとともに、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤および血管基質局在性光増感剤を含む製造物を提供する。さらに、光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の処置において、同時に、別々にまたは順次使用するための製造物の調製への、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に伴い、かつ一種以上のキレート化剤を任意に伴う、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤および血管基質局在性光増感剤の使用は、本発明の更なる観点を形成する。ここで使用されるように、「プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤」は、光化学治療剤として機能するプロトポルフィリンの構造的前駆体およびその誘導体、例えばALA、ポルホビリノーゲンまたはその前駆体またはその誘導体などを意味し、これらは本発明の好ましい観点を形成する。一般的に、これら薬剤は病巣細胞、例えば癌または罹患細胞に局在化する。「血管基質局在性剤」は、一般的に、投与後血管基質に局在化する剤を意味する。好適な血管基質局在性剤としては： HpD； Canada)およびヘマトポルフィリンIX（HpIX）などのヘマトポルフィリン類； Photosan III（Seehof Laboratorium GmbH，Seehof，Wesselburenerkoog， Germany）；テトラ（m-ヒドロキシフェニル）クロリン類（m-THPC）およびそれらのバクテリオクロリン類(Scotia Pharmaceuticals Ltd，Surrey，UK)、モノ-L-アスパルチルクロリンe6（NPe6）（Nippon Petrochemical Co.，CA，USA）、クロリンe6 （Porphyrin Products Inc.）、ベンゾポルフィリン類(Quadra Logic Technolog ies Inc.，Vancouver，Canada）（例えば、ベンゾポルフィリン誘導体モノアシド環A、BPD-MA）およびプルプリン類（PDT Pharmaceuticals Inc.，CA，USA）（例えば、スズ-エチルエチオプルプリン、SnET2）などのクロリン類；フタロシアニン類（例えば亜鉛-(Quadra Logic Technologies Inc.，Vancouve r，Canada)フタロシアニン、あるアルミニウム-フタロシアニンまたはケイ素フタロシアニンなどであり、これらはスルホン化されていても良く、特にスルホン化フタロシアニン、例えばアルミニウムフタロシアニンジスルホネート（AlPcS₂ _a ）またはアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート（AlPcS₄）などである）；ポルフィセン類；ハイポクレリン類（hypocrellins）；プロトポルフィリンIX（PpIX）；ヘマトポルフィリンジエステル類；ウロポルフイリン類；コプロポルフィリン類；デューテロポルフィリン；およびポリヘマトポルフィリン（PHP）、およびその前駆体およびその誘導体を挙げることができる。これら別々の成分の各々またはそれらの組み合わせをして血管基質局在性剤を提供することができる。「血管基質」は、血管システム内に存在する、血管結合組織、マトリックスおよびその成分および細胞、例えばマクロファージおよび繊維芽細胞などおよび基質に侵入した他の細胞に加えて、神経などを意味することを意図している。局在化領域は、局在化が決定された投与後の時間に依存することが理解されるであろう。したがって、最初細胞に局在していた光増感剤は基質に再局在化するかもしれないし、かつその逆かもしれない。例えば、アルミニウムフタロシアニンジスルホネートは、最初基質に局在化し、注射後24-72時間で剤の殆どが細胞内で発見される。しかしながら、一般的に血管基質局在性剤は、投与後24時間で基質に存在する剤と考えられている。しかしながら、これは、剤が光照射時に血管基質または病巣局在性剤として適切に振る舞うように剤の投与後異なる時間でPDTを行うことで操作される。好ましくは、プロトポルフィリン前駆体は、ALAまたはその前駆体または誘導体であり、血管基質局在性光増感剤は、ヘマトポルフン e6）またはスルホン化フタロシアニン（特に、アルミニウムフタロシアニンジスルホネートまたはアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート）である。ここで用いられる用語「前駆体」は、代謝でその剤に変換され、したがってその剤、例えばALAと基本的に等価である剤の前駆体に当てはまる。したがって、用語「前駆体」は、ヘム生体合成のための代謝経路におけるプロトポルフィリンの生物学的前駆体を包含する。「誘導体」は、製薬上許容される塩および化学的改質剤、例えば前述したALAエステルなどのエステルなどを含む。表面浸透補助剤を用いることができ、これは光化学治療効果の増進において有利な効果を有している。このような剤は、光化学治療剤が局在的に投与されない場合でさも使用することができる。ジアルキルスルホキサイド、例えばジメチルスルホキサイド（DMSO）が特に好ましい。これは、WO 95/07077において詳細に説明されいる。表面浸透補助剤は、製薬文献に説明される何れの皮膚浸透補助剤であってよく、例えばHPE-101(Hisamitsuから入手可能）、DMSOおよび他のジアルキルスルホキサイド、特にn-デシルメチル−スルホキサイド(NDMS)、ジメチルスルフアセトアミド、ジメチルホルムアミド(DMFA)、ジメチルアセトアミド、グリコール、種々のピロリドン誘導体(Woodford et al.，J．Toxicol．Cut．& Ocular et al．，Drug Dpv．Ind．Pharm.，9，p725-744，1983)、またはその混合物であってもよい。しかしながら、DMSOは、多くの有利な効果を有しており、特に好ましい。即ち、表面浸透補助効果(DMSOは、活性化剤の組織内への浸透深さを増進するのに特に有効である)に加えて、DMSOは、抗ヒスタミン活性および抗炎症活性を有し、これは光暴露過程での痛みの低減につながる。加えて、DMSOは、ALA-シンターゼおよびALA-デヒドロゲナーゼ(これら酵素は、各々ALAを形成し、縮合してポルホビリノーゲンとする)の活性を増加させることが見出されており、これによって活性形態Ppの形成を増進する。しかしながら、特定の条件、例えば乾せんなどでは、病巣は比較的簡単に浸透され、浸透剤はあまり有用ではない。ある状況、例えば病巣が浸透され難い皮膚癌の場合などでは、表面浸透補助剤は、前段階において、一般的にはより高い濃度で使用することができる。したがって、同一の組成物内において、様々な活性成分が同時に供給される必要がなく、臨床上の必要に応じて、別々におよび順次投与してもよい。確かに、多くの場合、光化学治療剤の投与に先立ち、別段階における表面浸透補助剤での予備処理によって、特に有益な光化学治療効果を得られることが観察された。さらに、ある状況において、表面浸透補助剤による予備処置に続く、表面浸透補助剤と結合した光化学治療剤の投与が有利であることが発見された。表面浸透補助剤が予備処置に使用された場合、これは高濃度、例えば100%(w/w)以下で用いるかもしれない。もしこのような予備処置段階が用いられた場合、光化学治療剤は、次いで、予備処置後数時間までに、例えば予備処置に続いて5〜60分間のインターバルで投与することができる。 Proceedings of Photodynamic Therapy of Cancer，2078，p355-362，1993において、Malik等は、分化誘導剤としてのDMSOおよび／またはポルフィリン化剤としてのアリル-イソプロピル-アセトアミドとともに予めインキュベートし、AL Aとのインキュべートに先立って内因性ポルフィリンレベルを増加させた培養B16 メラノーマ細胞での、プロトポルフィリン生体合成の誘導および続く光分解による殺傷に際するALAの効果のインビボにおける研究を説明している。 Biochemical Parmacology，42(6)，p1307-1303,1991において、Doodstar等は、培養肝細胞の培養条件における効果、および特に培養肝細胞で細胞内ヘム濃度を増加させることによる、シトクロームP450-依存混合機能オキシダーゼおよびU DP−グルクロノシルトランスフェラーゼの活性増加についての、ALAおよびDMSO の単独または組合わせ効果における調査を説明している。キレート化剤は、任意に本発明の製薬組成物または製造物に含まれる。このような剤は、二つの効果、最初はプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤、例えば ALAの安定性を増進させ、第二にPp蓄積の増進に有用であろう。後者の効果は、鉄のキレート化によって達成され、これによって金属のPpへの組み込みにおける酵素フェロキレターゼの不活性化作用を防止し、これはPpの集積につながる。光増感効果がこのようにして増進される。 Cancer Letters，65，p127-131，1992において、Hanania等は、局部的に処置された癌の光化学治療におけるキレート化剤と組み合わせたALAの使用を提案している。この点に関し、アミノポリカルボン酸を用いるのが特に適しており、その例としては、金属解毒について、または磁気共鳴造影コントラスト剤中の常磁性金属イオンのキレート化について文献に記載された全てのキレート化剤が挙げられる。特に、EDTA、CDTA(シクロヘキサンジアミン四酢酸)、DTPA、DOTAおよび1,10- フェナントロリンを挙げることができる。EDTAは、特にALAを安定化するのに好ましい。鉄キレート化効果を達成するために、デスフェリオキサミン(desferrioxamine )および他の担鉄細胞も、例えばEDTAのようなアミノポリカルボン酸キレート化剤と組み合わせて使用することができる。本発明の組成物または本発明により用いられる組成物は、PDTの効力を向上させるために、さらに他の剤と共に処方および／または投与できる。従って、例えば腫瘍の処置のために有用であることが認められている血管形成阻害剤（抗血管形成剤）（O'Reilly et al.，Nature Medicine，2，p689-692，1996;Yamamoto e t al.，Anticancer Research，14，p1-4，1994;およびBrookset al.，J．Clin． Invest.，96，p1815-1822，1995）を、PDTにおいて、本発明の組成物と一緒に、腫瘍の血管系をさらに損傷させるために使用することができる。使用可能な血管形成阻害剤としては、TNP-470（AGM-1470、フマジリン（fumagillin）と呼ばれる真菌分泌産物の合成類似体；Takeda Chemical Industries Ltd.，Osaka，Japa n）、アンギオスタチン（angiostatin）（Harvard Medical Schoolの小児病院メディカルセンターにおけるSurgical Research Lab.）およびインテグリン(integ rin)α_Vβ₃拮抗剤（例えばインテフリン(intefrin)α_Vβ₃に対するモノクローナル抗体、The Scripps Research Institute，LaJolla，CA）が挙げられる。その代わりに、またはそれに追加して、免疫療法剤(例えば、マクロファージ活性化因子のような抗体またはエフェクター)、あるいは化学療法剤を用いて、本発明に従ってPDTを改善することができる。これらの追加剤の投与は、経路、濃度および処方に関しこれら剤の公知の使用法に従って行われる。これらの追加剤は、その機能に応じて、PDTの前、その後またはその間に投与することができる。例えば、血管形成阻害剤は、腫瘍の再成長を防止するためにPDT後の5〜10日目に添加することができる。ブドウ糖は、局所的または全身的の何れかでに適用する場合にPDTを補助することが見出された。理論に拘束されることを望まないが、ブドウ糖の投与はpHの低下を招き、これは、プロトポルフィリンが、より容易に細胞に浸透できるようにその疎水性を増大させるようである。局所的に投与が意図される場合、処方、例えばクリームは、好都合には0.01〜10％のブドウ糖(w/w)を含有することができる。本発明に係る好ましい組成物または生成物は、ALA、またはそのリオキサミンを含んでいる。前記のように、プロトポルフィリン前駆体と血管基質−局在性光化学療法剤との間で協同的効果が観察され、これによりPDTの効力が高められる。従って、これは、治療投与量以下（sub- therapeutic dose）の光化学療法剤、すなわち、個々の光化学療法剤を単独で投与した場合に有利な光化学療法効果を達成するためには充分でない投与量の使用を可能にする。特に、プロトポルフィリン前駆体剤、好ましくはALAまたはその誘導体を、このような光化学療法剤を単独で用いるPDTのために標準的な治療投与量範囲で、治療投与量以下の血管基質−局在性剤、られることが見出された。組成物中のプロトポルフィリン前駆体光化学療法剤、例えばALAの濃度は、好都合には1〜40％、例えば2〜25％、好ましくは5〜は、好都合には0.1〜1％の範囲であり、またはm-THPCは、好都合には0.01〜10％の範囲であり、キレート化剤の濃度は、好ましくは1〜20％、例えば約2〜10％の範囲、例えば2.5％であり；表面浸透助剤、例えばDMSOの濃度は、好ましくは2〜 50％の範囲、例えば約10％である。上記の全てのパーセントは重量による。必要とされる剤の濃度は使用される個々の剤に依存し、当該技術分野において知られた情報および技術に応じて適切であるように変更すべきことは明らかである。さらに、用いられる濃度は、適用方法および組成物が適用される時間に依存することが認められる。しかしながら、上記のように、表面浸透助剤が、予備段階において別個に投与される場合、これはより高い濃度で、100％まで適用することができる。本発明の組成物は、もっぱら局所的に（例えばクリームを用いる内部または外部表面への適用、点滴注入、局所的内部投与／注射または吸入により）、または全身的に（例えば経口的に、または静脈注射により）、あるいは組成物の一つ以上の成分を局所的に投与し、他の成分を全身的に投与する上記方法の組み合わせにより投与することができる。例えば静脈内投与される血管基質−局在性光増感剤の全投与量は、好ましくは0.01〜1mg/kg体重(治療投与量以下)、またはm-THPCの場合は好ましくは0.01〜0.2mg/kg体重、プロトポルフィリン前駆体光化学療法剤の場合は1〜500 mg/kg、例えば1〜250mg/kg、例えばALAの場合は1〜250mg/kg、好ましくは20〜70 mg/kg体重の範囲である。要求される投与量は、投与の方法および経路、用いられる剤および処置すべき病巣に依存することが認められる。血管基質−局在性光化学療法剤の治療投与量以下が好ましいが、例えば大きな厚い病巣または困難なタイプの病巣（例えば黒色腫）を処置しようとする場合には、上記投与量を増加させてもよい。観察された協同的効果によって、血管基質−局在性剤およびプロトポルフィリン前駆体剤の両方のレベルを通常の治療レベル以下に低下させることが可能となる。別様にみると、本発明のこの観点はまた、 a)プロトポルフィリン前駆体光化学療法剤、例えばALA、またはその前駆体または誘導体を含有する第一の容器；を含有する第二の容器；場合により c)前記第一または第二の容器、または第三の容器に含有された少なくとも一つの表面浸透剤；および／または d)前記第一、第二または第三の容器、または第四の容器に含有された一つ以上のキレート化剤；を含むキットであって、ここで、前記第一または第二容器が存在していなくてもよく、前記a)またはb) の剤または光増感剤が、キットに存在する別の容器の一つに存在している、身体の外部または内部表面の障害または異常の光化学療法に使用されるキットを提供する。キットの追加成分、例えば上記で述べたような血管形成阻害剤またはブドウ糖を供給することもできる。本発明により処置できる異常および障害としては、光化学療法に起因する全ての悪性、前−悪性および非−悪性の異常または障害、例えば腫瘍、形成異常性または他の成長、非−悪性の婦人科疾患、例えば月経過多、子宮内膜症および子宮外妊娠、皮膚障害、例えば乾せん、光化学線角化症およびざ瘡、皮膚剥離、および他の疾患または感染、例えば細菌、ウイルスまたは真菌感染、例えばヘルペスウイルス感染が挙げられる。本発明は特に、別個の病巣が形成される場合の疾患、障害または異常の処置に適している(ここで、病巣は、腫瘍などを含む広い意味で用いられる)。しかしながら、本発明の方法は、病巣で特徴づけられないが、その疾患、例えば血液または骨髄中の異常、または該血液または骨髄の疾患の兆候、あるいは身体中の他の場所に位置する疾患または障害であって、血液または骨髄中に異常が存在する結果をさらに来すことのある疾患または障害の兆候、例えば流動変形細胞を特徴づける別個の分離可能な実体を示す異常および障害を処置するためにも使用することができる。本発明により治療しうる内部および外部の身体表面としては、皮膚および他の全ての上皮表面および漿膜表面、例えば、粘膜、器官、例えば気道、胃腸管および尿生殖路、このような表面上に通じる管を有する腺（例えば肝臓、皮脂腺、乳腺、唾液腺および精嚢腺）のライニングが挙げられる。皮膚に加えて、このような表面としては、例えば膣、子宮内膜および尿路乳頭のライニングが挙げられる。このような表面としては、罹患または癌性組織の切除後に体内に形成される空洞、例えば神経膠腫のような腫瘍の切除後の脳空洞も挙げることができる。従って、代表的な表面としては、以下のものが挙げられる： (i)皮膚および関節；(ii)口腔、咽頭、食道、胃、腸および腸の付属体、直腸、および肛門管のライニング；(iii)鼻道、鼻腔、鼻咽頭、気管、気管支および細気管支のライニング；(iv)尿管、膀胱および尿道のライニング；(v)膣、子宮頸および子宮のライニング；(vi)壁側胸膜および臓側胸膜；(vii)腹膜腔および骨盤腔のライニング、およびこれらの腔内に入っている器官の表面；(viii)硬膜および髄膜；(ix)例えば直接に、外科の時に、または針を通して挿入された光ファイバーにより、光活性化光線に接近可能にすることのできる中実組織中の腫瘍。本発明の組成物は、この技術分野でよく知られた技術に従って、所望により一つ以上の生理的に許容される担体または賦形剤を用いて従来の方法により処方することができる。本発明に係る一つの組所用組成物が適当でなく、少なくともその剤を全身的に投与する必要がある場合以外には、局所用組成物が好ましい。局所用組成物としては、ゲル、クリーム、軟膏、スプレー、ローション、膏薬、スティック、石けん、粉末、ペッサリー、エアゾール、滴剤、およびこの技術分野における他の普通の製剤形態が挙げられる。軟膏およびクリームは、例えば水性または油性基剤を用い、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加して処方することができる。ローションは、水性または油性基剤を用いて処方することができ、一般的に一つ以上の乳化剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤または着色剤を含有するであろう。粉末は、全ての好適な粉末基剤を用いて形成できる。滴剤は、水性または非水性基剤を用いて処方することができ、一つ以上の分散剤、可溶化剤または懸濁剤を含む。エアゾールスプレーは、好都合には、加圧パックから好適な噴射剤により送出される。あるいは、表面浸透補助剤を別の工程で局所的に適用し、血管基リン前駆体光化学療法剤、例えばALAを、所望により一つ以上のキレート化剤と一緒にまたは別個に、他の経路で、例えば経口的または非経口的に、例えば皮内、皮下、腹腔内または静脈注射により投与することができる。従って、その他の製剤形態としては、所望により一つ以上の不活性な従来の担体および／または希釈剤、例えばコーンスターチ、乳糖、蔗糖、微結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、水／エタノール、水／グリセロール、水／ソルビトール、水／ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ステアリルアルコール、カルボキシメチルセルロースまたは脂肪性物質、例えば硬質脂肪、またはこれらの好適な混合物と一緒に、活性成分を含有する、プレーン錠剤、被覆錠剤、カプセル、懸濁液および溶液が挙げられる。表面への投与または全身的投与、あるいは両方に続いて、光−化学療法的効果を達成するために、処置した領域に光照射する。これは、一般的に数分間〜96時間のオーダー、好ましくは15分間〜3時間であってよい。光線投与前の時間の長さは、用いられる投与の様式、また投与量および個々の剤にも依存する。照射は、一般的に、レーザーを用いる場合は20〜200mW/cm²の強度で10〜250Jo ules/cm²の用量レベル、あるいはランプを用いる場合は50〜300mW/cm²の強度で1 0〜540J/cm²の用量において投与される。100Joules/cm²において、輻射線の浸透が比較的に深いことが見出された。照射は5〜50分間、好ましくは15分間行うことが好ましい。１回の照射を用いてもよく、あるいは例えば各照射間を数分〜数時間として２回に分けて、光線量を与える分割光線量(a light split dose)を用いることもできる。照射に用いる光の波長を選択して、より効果的な光化学療法効果を達成することができる。従来は、ポルフィリン類を光化学療法に用いる場合、これらは、そのポルフィリンのほぼ吸収極大の光で照射される。従って、例えば皮膚癌の光化学療法にALAを公知使用する場合、350〜640nm、好ましくは610〜635nmの範囲の波長が採用された。しかしながら、ポルフィリンの吸収極大を越える広い波長範囲を照射のために選択することにより、光増感効果を向上することができる。理論に拘束されることを望まないが、これは、Ppおよび他のポルフィリンを、その吸収スペクトル内の波長を有する光で照射する場合、特に光プロトポルフィリン（PPp）を含む種々の光生成物に分解するという事実のためであると考えられる。PPpは１種のクロリンであり、相当の光増感効果を有し；その吸収スペクトルは、Ppが吸収する波長を越えて、より長い波長まで、すなわち殆ど700nmまで広がる(Ppは650nm以上の光を殆ど吸収しない)。他の剤は、さらに長い波長の光をも吸収するPDTに用いられることが確かめられた。すなわち、従来の光化学療法では、用いられる波長がPPpを励起せず、従ってその追加的な光増感効果の利益が得られない。350〜 900nmの波長範囲の光での照射は、採用される剤に依存するが、特に効果的であることが見出された。600〜700nm、特に630〜690nm、とりわけ630〜670nmの範囲の波長を含むことが特に重要である。従って、本発明のもう一つの観点は、身体の攻撃された外部または内部表面に、前記で定義した組成物または生成物を投与し、前記表面を光に、好ましくは波長範囲350〜900nmの光で照射することを含む、身体の外部または内部表面の障害または異常を光化学療法的に処置する方法を提供する。しかしながら、その代わりに、狭い波長の光を用いることができ、例えばレーザーを用いる場合には、約 630nmの波長の光を用いることかできる。例えばランプまたはレーザーにより身体の異なる範囲を照射する方法は、この技術分野でよく知られている(例えばVan den Bergh，Chemistry in Britain，Ma y 1986 ｐ．430-439参照)。本発明の化合物を用いる治療方法は、処置すべき障害または異常の蛍光を必然的に伴うことが認められるであろう。この蛍光の強度は異常細胞を除去するのに使用できるが、蛍光の局在化は、異常または障害の大きさ、程度および場所を可視化するのに使用できる。これは、本発明により用いられる剤が非−正常組織に優先的に局在化する能力によって可能にされる。調査部位においてこうして同定または確認された異常または障害は、次いで、他の治療技術、例えば外科または化学的処置によって、あるいは本発明の治療方法によって引き続き蛍光を蓄積させるか、または適切な部位に本発明の化合物をさらに適用することにより処置することができる。診断技術は、治療処置に用いられるよりも低レベルの蛍光を必要とする場合があることが認識されるであろう。従って、一般的に1〜50%、例えば1〜５%（w/w）の範囲の濃度が好ましい。投与の部位、方法および様式は、以前は治療的使用に関して考慮されてきたが、本明細書に記載した診断的使用にも適用できる。本発明の化合物は、インビトロおよびインビボ診断技術に、例えば体液に含有される細胞の調査にも使用できる。非−正常組織に関連する高い蛍光は、好都合なことに異常または障害の兆候でありうる。この方法は感度が高く、異常または障害の早期検出、例えば尿または痰サンプル中の上皮細胞の調査により、それぞれ膀胱または肺の癌腫の早期検出に使用できる。尿および痰に加えて、診断に使用可能な他の有用な体液としては、血液、精液、涙、便、脊髄液などが挙げられる。組織のサンプルおよび調製物は、例えば組織または骨髄サンプルの生検により評価するこもができる。従って、本発明は、前記の光化学療法のための方法による診断への、本発明の化合物またはその塩の使用、およびこの診断を実施するための生成物またはキットにまで拡大する。本発明のもう一つの観点は、少なくとも下記の工程： i）患者の体液または組織を前記の化合物と混合する工程、 ii）該混合物に光線を照射する工程、 iii）蛍光のレベルを確認する工程、および iv）蛍光のレベルをコントロールレベルと比較する工程を含む、患者の体液または組織のサンプルをアッセイすることによる、異常または障害をインビトロ診断する方法に関する。本発明を、添付の図面を参照し、以下の非限定的実施例において、より詳細に説明する。内投与を与えたヌードマウスにWiDrヒト結腸癌腫を皮下移植し、次いで３時間後にレーザー光線照射(632nm,150mW/cm²、15分間)した場合の、該癌腫の成長曲線に関する平均結果を示すグラフである。●コントロール(薬剤なし、光線なし); ▲コントロール(光１mg/kg、３時間後に照射；横軸は処置後の日を示し；縦軸は相対的腫瘍容積を示す。平均標準誤差(SEM)を示すバーは、各グループおいて少なくとも３匹の動物に基づく。図２は、m-THPCの静脈内注射および／またはALAの腹腔内投与を与えたヌードマウスにWiDrヒト結腸癌腫を皮下移植し、次いで３時間後にレーザー光線照射(632nm,150mW/cm²、15分間)した場合の、該癌腫の成長曲線に関する平均結果を示すグラフである。●コントロール(薬剤なし、光線なし);▲コントロール(光線のみ);◆ALA 250mg/kg、３時間後に照射；▼m-THP C 75μｇ/kg、３時間後に照射；■ALA 250mg/kgおよびm-THPC 75μｇ/kg、３時間後に照射；横軸は処置後の日を示し；縦軸は相対的腫瘍容積を示す。平均標準誤差(SEM)を示すバーは、各グループおいて少なくとも３匹の動物に基づく。図３は、75才の男性(A)および87才の女性(B)から、2mg/kg のALAを経口投与した後4.5時間目(B)に採取したのヒト直腸乳頭様絨毛性アデノーマの蛍光写真である。図４は、図１と同様であり、この場合、クロリンe6の静脈内注射および／またはALAの腹腔内投与を行い、次いで１時間後にランプで照射した。Xコントロール；▲ALA 250mg/kg；■クロリンe6 １mg/kg；◆ALA 250mg/kgおよびクロリンe6 1 mg/kg。横軸は処置後の日を示し；縦軸は相対的腫瘍容積を示す。図５は、図１と同様であり、この場合、AlPcS_2aの静脈内注射および／または5 -ALAメチルエステルの腹腔内投与を行い、次いで１時間後にランプで照射した。 ◆コントロール；■AlPcS_2a１mg/kg；▲5-ALAメチルエステル273mg/kg；X 5-ALA メチルエステル273mg/kgおよびAlPcS_2a１mg/kg。横軸は処置後の日を示し；縦軸は相対的腫瘍容積を示す。図６は、図１と同様であり、この場合、AlPcS₄の静脈内注射および／または5- ALAブチルエステルの腹腔内投与を行い、次いで１時間後にランプで照射した。 ◆コントロール；■AlPcS₄５mg/kg；X AlPcS₄１mg/kg；＊5-ALAブチルエステル3 38mg/kg；△5-ALAブチルエステル338mg/kgおよびAlPcS₄１mg/kg。横軸は処置後の日を示し；縦軸は相対的腫瘍容積を示す。図７は、図１と同様であり、この場合、AlPcS_2aの静脈内注射および／または5 -ALAブチルエステルの腹腔内投与を行い、次いで１時間後にランプで照射した。 ▲コントロール；■AlPcS_2a１mg/kg；X 5-ALAブチルエステル338mg/kg；◆5-ALA ブチルエステル338mg/kgおよびAlPcS_2a１mg/kg。横軸は処置後の日を示し；縦軸は相対的腫瘍容積を示す。図８は、図１と同様であり、この場合、AlPcS₄の静脈内注射および／または5- ALAメチルエステルの腹腔内投与を行い、次いで１時間後にランプで照射した。 ■コントロール；▲AlPcS₄１mg/kg；X 5-ALAメチルエステル273mg/kg；◆5-ALA メチルエステル273mg／kgおよびAlPcS₄１mg/kg。横軸は処置後の日を示し；縦軸は相対的腫瘍容積を示す。実施例１処方 1.1 局所投与のためのALA含有クリーム 5-30%のALAを含有するALA含有クリームは、ALAを市場で入手可能なクリーム基剤と混合することで調製される。 20%ALAクリームを、二酸化ケイ素からなる“Urguentum Merck”クリーム基剤( Merckより入手可能)、流動パラフィン、ワセリン、アルブミン(album)、セトステアロール(cetostearol)、ポリソルベート(polysorbat．40)、グリセロールモノステアレーコール、および精製水を混合することで調製した。1.2 全身投与のためのALA 経口投与のためには、ALAを酸性のソフトドリンクに溶解する。静脈内投与のためには、ALAを等張性食塩水に溶解する。実施例２材料および方法化学物質 5-アミノレブリン酸(ALA)塩酸塩を、Sigma Chemical Company(St．Louis，MO) から購入した。ALAを等張性食塩水に新たに溶溶液を、5%デキストロース等張溶液にて作成し、マウスに尾静脈から静脈内投与した。動物および腫瘍ライン雌Balb/c nu/nuヌードマウスを、The Animal Department，The Norwegian Rad ium Hospitalから得て、各ケージに10匹ずつ収容し、特定病原体のない条件下で保持した。マウスは、実験開始時に生後６週令であり、20〜22gの体重であった。本研究で用いたWiDrヒト結腸癌腫は、ヌードマウスに連続移植することで増殖させた。接種のための非壊死性腫瘍材料を、同系のマウスから大翼状腫瘍の無菌解剖により得た。肉眼で生育可能な腫瘍組織を、はさみをで優しく切り刻み、19 ゲージから25ゲージまでサイズが縮小する無菌針を繰り返し通過させて、腫瘍組織懸濁液を作成し、その0.02mlを各マウスの後足の背側に注射した。本実験においては、移植成功率が殆ど100%であった。１日おきにカリパスで測定して、処置日に横方向半径５〜７mm（接種後約14日）に達した成長腫瘍において、自発的な壊死は観測されなかった。腫瘍容積を、下記の式： V=π/６(D₁xD₂xD₃) （式中、D₁、D₂およびD₃は、カリパスで毎日測定した腫瘍の三つの直行する半径である）を用いて計算した。照射麻酔されていないマウスを、照射用に特別に設計されたLucite治具に固定した。腫瘍領域を5Wアルゴンイオンレーザー(Spectra Physics，164)で発生させたジシアノメチレン-2-メチル-6-(p-ジメチルアミノスチリル)-4H-ピラン（DCM）染料レーザーからの赤色光で照射した。チューニング範囲は610〜690nmであった。に632nmでチューニングし、モノクロメーターを用いてチューニングを制御した。レーザービームは、顕微鏡接眼レンズを用いてデフォーカスさせた。この光を、効果率150mW/cm²で15分間照射して送出した。腫瘍領域に対する光効果率を、光照明の前および直後にデジタルマルチメーター(Keithley Instruments，Germa ny)に結合されたフォトダイオードを用いた校正積分球により、定期的に制御した。組み合わせを用いたPDT効果適切なサイズの腫瘍を持つマウスを、五つのグループ（各グループ当たり少なくとも３匹の動物）に分けた：グループ１(コントロ食塩水0.1mlを腹腔内投与しただけであった；グループ２(コントロール−光のみ )、PDT処置を受けたグループと同じ用量で腫瘍に照射した；グループ３(ALA単独 )、マウスに250mg/kg体重のALAを腹腔内注射し、続いて３時間後に、上記のように光照処置された腫瘍の応答を、腫瘍退行／再成長時間として評価した。腫瘍のサイズを毎日測定し、処置された腫瘍が光照射直前の日における容量の５倍容量に達成したときにマウスを殺した。各グループからの腫瘍容量の測定に基づくデータを蓄積し、平均腫瘍成長曲線を表した。結果した腫瘍の成長を、図１に示す。コントロール腫瘍（薬剤も光もなし）は、約５日の倍増時間で指数的に成長した。ALA投与マウスの腫瘍に与えたレーザー光は、腫瘍成長に対して効果を有した。 mg/kgの投与量で用いたPDTの後には、如何なる効果も見られなか mg/kg)との組み合わせを用いたPDTは、ALA(250mg/kg)単独を用いたPDTよりも、腫瘍成長を効果的に抑制した。実施例３ ALA ＋m-THPCを用いたPDT 各グループ当たり少なくとも３匹の動物での下記の動物グループを用いて、実施例２で説明したのと、本質的に同様にしてPDTを行った：グループ１(コントロール)、マウスにALA(m-THPC)も光も与えず、食塩水0.1mlを腹腔内投与しただけであった；グループ２(光のみ)、腫瘍に、PDT処置グループと同じ用量で光照射した；グループ３(ALA単独)、マウスに250mg/kg体重のALAを腹腔内注射し、続いて３時間後に前述のように光照射した(632nm)；グループ４(m-THPC単独)、マウスに75μｇ/kg体重のm-THPC（如何なる皮膚光毒性を誘発しない投与量）を静脈内注射し、続いて３時間後に光照射した(652nm)；グループ５（ALAおよびm-THPC ）)、マウスに250mg/kg ALAの腹腔内注射および75μｇ/kg m-THPCの静脈内注射を与え、腫瘍を、ALAおよびm-THPCの両方のために３時間光照射（それぞれの波長で）した。処置された腫瘍の応答を、前述のように評価した。結果図２は、コントロール腫瘍（薬剤も光もなし）が約５日の倍増時間で指数的に成長したことを示す。ALAのみを与えたマウスの腫瘍に照射したレーザー光は腫瘍成長に対して効果を有したが、m-THPCを75μｇ/kgの投与量で用いたPDTの後には、如何なる効果も見られなかった。ALA(250mg/kg)とm-THPC(75μｇ/kg)との組み合わせを用いたPDTは、腫瘍成長の阻害に対する効果を相同的に向上させた。実施例４方法診断前の数ヶ月間、重い形成異常および下痢歴を有する二人の患者からのヒト直腸乳頭様絨毛性アデノーマを、２mg/kg体重の経口投与後4.5時間でサンプル採取した。これらのサンプルを直ちに液体窒素中に浸漬し、次いで媒体(Tissue Tek II包埋化合物：BDH，Poole，UK)にマウントした。凍結組織断片をクリオスタットで厚さ８μｍに切断し、清潔なスライドガラスにマウントした。ALA誘発PpIXおよびPhotofrinの蛍光局在化パターンを、蛍光顕微鏡検査法で調べた。蛍光顕微鏡検査法はAxioplan顕微鏡(Zeiss、Germany) を用いて行った。フィルタの組み合わせは、390〜440nm励起フィルタ、460nmビームスプリッタおよび>600nm放射フィルタから構成された。CCDカメラ（Astrome d CCD 3200， Cambridge，UK）およびイメージ処理ユニット（Astromed/Visilog，PC 486DX2 6 6 MHz VL）により、蛍光イメージを記録した。結果に示す。(A)のアデノーマは75才の男性患者から、(B)のアデノー主に腫瘍組織の基質に分布しているが、ALA誘発プロフィリンの蛍光は、殆ど完全に腫瘍細胞内に局在化している。実施例５材料および方法化学物質 5-ALA、5-ALAメチルエステルおよび5-ALAブチルエステルは、Norsk Hydro Res earch Center，Porsgrunn，Norwayによって製造された。 5-ALA（ALA）およびALA-メチルエステル(ME)を等張性食塩水に溶解し、最終濃度を0.375mMにした。 ALA-ブチルエステル（BU）を少量のエタノールに溶解し、さらに等張性食塩水中に希釈し、最終濃度を0.375mMにした(最終エタノール濃度は2%v/vであった)。アルミニウムフタロシアニンジスルホネート（AlPcS_2a）（Porphyrin Product s Inc.）を数滴の１M NaOHに溶解し、リン酸緩衝食塩水（PBS）10mMリン酸Na、p H 7.4/150mM NaCl）中にに希釈し、最終濃度を0.25mg/mlにした。アルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート(AlPcS₄)（Porphyrin Produc ts Inc.）をPBSに溶解し、最終濃度を0.25g/ml、または実施例5.3における高用量実験のために1.25mg/mlにした。 Photofrin（PII）(Quadra Logic Technologies)をH₂O中の5%グルコースに溶解し、最終濃度を0.25mg/mlにした。クロリンe6（e6）(Porphyrin Products Inc.)をPBSに溶解し、最終濃度を0.25 mg/mlにした。 ALA、ALAメチルエステルまたはALAブチルエステルを腹腔内(i.p.)に投与したのに対し、増感剤は静脈内(i.v.)に注射した。動物使用した動物は、実施例２に記載したとおりであった。全ての動物に、同量のALA(1.5mmol)を遊離酸としてまたはエステルの形態で与えた。ALAとエステルとでは分子量に差があるため、250mg/kgのALA、278mg/kgの ALAメチルエステルおよび338mg/kgのALAブチルエステルを動物に与えた。実験ヒト腫瘍（結腸癌腫WiDr−連続移植することで増殖）の懸濁液を、それぞれの腫瘍の非壊死領域から調製し、各マウスの右後足に注射した(20μｌ)。腫瘍が５〜７mmの直径に達したとき、実施例5.1〜5.5に詳述するように薬剤およびコントロールを各マウスに注射した。注射容量：マウス１匹（体重約25g）当たり１００μｌ。照射は、前記の実施例で用いた３時間後の代わりに、薬剤の注射後１時間に行った。前記実施例とは対照的に、レーザーの代わりに、600〜700nmの範囲をカバーする広帯域ランプ（Curelight、PhotoCure AG出願の特許）を用いた。これは、それぞれALAまたはALA-エステルに誘発されるフタロシアニン（吸収極大670nm ）とプロトポルフイリンIX（吸収極大630nm）との組み合わせを、光がカバーすべきためであった。しかしながら、ランプはレーザーよりも低強度の光を発生する。従って、前記実施例においてレーザーを用いた場合に効果的であったALAとPhoto frinとの組み合わせは、ランプを用いる場合にはもはや効果的でないだろう。この照射時間は、殆どの増感剤に対して血管効果を得るのに最適であり、ALAのエステルに対しても最適であるが、A LAに対しては最適以下である。各グループの平均腫瘍容積（平均±SD）を計算し、時間に対してプロットした。腫瘍容積が最初の容積の４〜５倍に達したとき、実験を終了した。実施例5.1：ALAとクロリンe6 適切なサイズの腫瘍を有するマウスを、マウス４〜５匹の三つのグループに分けた。薬剤の注射の１時間後に、マウスにCurelight広帯域ランプを用いて照射した( 161mW/cm²で15分間−144.9J/cm²)。腫瘍の応答を退行／再成長時間として評価した。腫瘍のサイズを１日おきに測定し、腫瘍容積を実施例２の式に従って計算した。腫瘍容積が最初の容積の５倍に達したとき、マウスを殺した。各時点で、平均（および平均の標準偏差）腫瘍容積(n=4〜5)を計算した。次いで、データを統計解析し(Q-試験/90%の信頼区間) 、極端な値を除いた。標準偏差は大多数の場合に=1であった。結果結果を図４に示す。標準偏差バーは、明確にするために省略されている。この図から、コントロール腫瘍が10日以内に最初の容積の４倍に達したこと、およびコントロール腫瘍が指数的成長を示したことが分かる。さらに、ALAおよびクロリンe6は、単独で用いた場合には、使用した投与量で効果がなかった。しかしながら、ALAとクロリンe6との組み合わせは、腫瘍成長を有意に遅延させた。事実、この組み合わせで処置された腫瘍が最初の容積の４倍に達するのに39日を要した。実施例5.2：ALAメチルエステルとAlPCS_2a 適切なサイズの腫瘍を有するマウスを、マウス４〜５匹の三つのグループに分けた。マウスに、注射後１時間に照射し、腫瘍の応答を、実施例5.1に従って退行／再成長時間として評価した。結果結果を図５に示す。この図から、コントロール腫瘍が10日以内に最初の容積の４倍に達したこと、およびコントロール腫瘍が指数的成長を示したことが分かる。さらに、ALA-メチルエステルは、使用した投与量で抗腫瘍効果がなかったが、AlPcS_2aは僅かな効果を示した。驚くべきことに、この組み合わせ（ALAメチルエステル＋AlPcS_2a）は、大きな効果をもたらした。事実、腫瘍容積は、処置後40日ほどに長い間、有意に増加しなかった。実施例5.3：ALAブチルエステルとAlPcS₄ 適切なサイズの腫瘍を有するマウスを、マウス４〜５匹の五つのグループに分けた。 ALAブチルエステル処方が約2%のエタノールを含有していたので、エタノールをコントロールとして用いた。マウスに、注射後１時間に照射し、腫瘍の応答を、実施例5.1に従って退行／再成長時間として評価した。結果結果を図６に示す。この図から、コントロール腫瘍（2%エタノール）およびAL Aブチルエステルで処置された腫瘍が、それぞれ９日および11日以内に最初の容積の４倍に達したことが分かる。また、コントロール腫瘍は指数的に成長したことも分かる。AlPcS₄(1mg/kg)は、腫瘍成長に対し中程度の効果を有したことが分かる。しかしながら、ALAブチルエステルとAlPcS₄との組み合わせで処置された腫瘍は、強く遅延された成長を示し、高い投与量のAlPcS₄(5mg/kg)で得られたのと殆ど同一であった。しかしながら、高い投与量のAlPcS₄の使用は、大きな浮腫の発達をもたらした。この組み合わせの使用により、抗腫瘍効果は高投与量のAlPcS₄での場合と同じであったが、初期の浮腫は強く低減された。実施例5.4：ALAブチルエステルとAlPcS_2a 適切なサイズの腫瘍を有するマウスを、マウス４〜５匹の三つのグループに分けた。マウスに、注射後１時間に照射し、腫瘍の応答を、実施例5.1に従って退行／再成長時間として評価した。結果結果を図７に示す。この図から、コントロール腫瘍が10日以内に最初の容積の４倍に達したこと、および腫瘍が指数的に成長したことが分かる。上記で分かったように、ブチルエステルは腫瘍に対して殆ど効果を有しなかったが、AlPcS_2a は、腫瘍成長に対し迅速な効果を有した(14日以内に４倍)。ここでもまた、この組み合わせは腫瘍成長を有意に遅延させ、遅い再成長を生じさせた。（外挿の後）約30日で最初の容積の４倍に達するであろうことが分かる。実施例5.5：ALAメチルエステルとAlPcS₄ 適切なサイズの腫瘍を有するマウスを、マウス４〜５匹の三つのグループに分けた。マウスに、注射後１時間に照射し、腫瘍の応答を、実施例5.1に従って退行／再成長時間として評価した。結果結果を図８に示す。この図から、コントロール腫瘍が10日以内に最初の容積の４倍に達したこと、およびコントロール腫瘍の成長が指数的様式で起こったことが分かる。上記で分かったように、メチルエステルは腫瘍に対して効果を有しなかったが、AlPcS₄は、腫瘍成長に対し中間的効果を有した。顕著には、ALAメチルエステル＋AlPcS₄の組み合わせは、最初は腫瘍容積の実質的減少、次いで遅い再成長を引き起こした。事実、これは、最初に腫瘍のサイズの初期損失を実際に引き起こした唯一の組あわせである。腫瘍は約35日で最初の容積の４倍に達した。

【手続補正書】【提出日】平成１２年８月２４日（２０００．８．２４）【補正内容】特許請求の範囲１．少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に含み、かつ一種以上のキレート化剤を任意に含むとともに、血管基質局在性光増感剤と一緒にプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤を含むことを特徴とする製薬組成物。２．光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常を処置するための請求項１記載の薬剤組成物。３．治療効果が、光化学治療剤または光増感剤を単独で用いた場合と比較して増強されることを特徴とする請求項２記載の薬剤組成物。４．治療効力が、協同的に増進されることを特徴とする請求項２または３記載の薬剤組成物。５．血管基質局在性光増感剤が、治療投与量以下で供給されることを特徴とする請求項１〜４の何れか１項記載の製薬組成物。６．血管基質局在性光増感剤が、ヘマトポルフィリン、またはクロリン、またはスルホン化フタロシアニン、またはその前駆体または誘導体であることを特徴とする請求項１〜５の何れか１項記載の製薬組成物。 e6、アルミニウムフタロシアニンジスルホネート、またはアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート、またはその前駆体または誘導体であることを特徴とする請求項６記載の製薬組成物。８．プロトポルフィリン前駆体が、5- アミノレブリン酸またはその前駆体または誘導体であることを特徴とする請求項１〜７の何れか１項に記載の製薬組成物。９．5- アミノレブリン酸誘導体が、5- アミノレブリン酸エステルであることを特徴とする請求項８記載の製薬組成物。１０．表面浸透補助剤が、DMSOであることを特徴とする請求項１〜９の何れか１項記載の製薬組成物。１１．5- アミノレブリン酸またはその前駆体または誘導体、求項１〜１０の何れか１項に記載の製薬組成物。１２．光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常を処置する組成物の製造において、請求項１〜１１の何れか１項に記載される、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に伴い、かつ一種以上のキレート化剤を任意に伴うとともに、血管基質局在性光増感剤を伴うプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤を使用する方法。１３．光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の処置において、同時に、別々にまたは順次使用するための組み合わせ調製物として、請求項１〜１１の何れか１項に記載される、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に含み、かつ一種以上のキレート化剤を任意に含むとともに、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤および血管基質局在性光増感剤を含む製造物。１４．光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の処置において、同時に、別々にまたは順次使用するための製造物の調製への、請求項１〜１１の何れか１項に記載される、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に伴い、かつ一種以上のキレート化剤を任意に伴う、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤および血管基質局在性光増感剤の使用方法。１５．投与される前記血管基質局在性光増感剤の全投与量が、0.01〜10mg/kg体重の範囲であり、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤の全投与量が、1〜500 mg/kg体重の範囲である請求項１２または１４の何れか１項に記載の使用方法。１６．光化学治療が、350〜900nmの範囲内の光の波長での照射によって行われることを特徴とする請求項１２、１４または１５の何れか１項に記載の使用方法。１７．a)請求項２〜４、８または９の何れか１項に記載のプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤を含有する第一の容器； b)請求項２〜７の何れか１項に記載の血管基質局在性光増感剤を含有する第二の容器；および任意に c)前記第一または第二の容器、または第三の容器に含有された請求項２または１０の何れか１項に記載の少なくとも一つの表面浸透剤；および／または d)前記第一、第二または第三の容器、または第四の容器に含有された一つ以上のキレート化剤を含むキットであって、前記第一または第二の容器が存在していなくてもよく、前記a)またはb)の剤または光増感剤が、キット内に存在する別の容器の一つに存在していてもよい、光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の処置で使用するためのキット。１８．身体の疾患表面に対して、請求項１〜１１、１３または１５の何れか１項に記載の製薬組成物または製造物を投与し、前記表面を光に、好ましくは波長範囲が350〜900nmの光で照射することを含む、身体の外部または内部表面の障害または異常の光化学治療処置方法。１９．少なくとも以下の工程： i)患者の体液または組織を請求項１〜１１の何れか１項に記載の製薬組成物と混合し、 ii)前記混合物に光線を照射し、 iii)蛍光レベルを確認し、かつ iv)前記蛍光レベルをコントロールレベルと比較すること、を含む、患者の体液または組織のサンプルをアッセイすることによって、異常または障害をインビトロで診断する方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） // Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｔ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ネスランド，ヤン，エム. ノールウェーエヌ―0310 オスロ，モンテベロ，ザノルウェジアンラジウムホスピタル，インスティチュートオブカンサーリサーチ (72)発明者ギエルクスキー，カール，エリクノールウェーエヌ―0310 オスロ，モンテベロ，ザノルウェジアンラジウムホスピタル，インスティチュートオブカンサーリサーチ (72)発明者モアン，ヨハンノールウェーエヌ―0310 オスロ，モンテベロ，ザノルウェジアンラジウムホスピタル，インスティチュートオブカンサーリサーチ (72)発明者ヴァルロー，トロンドノールウェーエヌ―0310 オスロ，モンテベロ，ザノルウェジアンラジウムホスピタル，インスティチュートオブカンサーリサーチ

Claims

【特許請求の範囲】１．少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に含み、かつ一種以上のキレート化剤を任意に含むとともに、血管基質局在性光増感剤と一緒にプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤を含むことを特徴とする製薬組成物。２．光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常を処置するための請求項１記載の薬剤組成物。３．治療効果が、光化学治療剤または光増感剤を単独で用いた場合と比較して増強されることを特徴とする請求項２記載の薬剤組成物。４．治療効力が、協同的に増進されることを特徴とする請求項２または３記載の薬剤組成物。５．血管基質局在性光増感剤が、治療投与量以下で供給されることを特徴とする請求項１〜４の何れか１項記載の製薬組成物。６．血管局在性光増感剤が、ヘマトポルフィリン、またはクロリン、またはスルホン化フタロシアニン、またはその前駆体または誘導体であることを特徴とする請求項１〜５の何れか１項記載の製薬組成物。アルミニウムフタロシアニンジスルホネート、またはアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート、またはその前駆体または誘導体であることを特徴とする請求項６記載の製薬組成物。８．プロトポルフィリン前駆体が、ALAまたはその前駆体または誘導体であることを特徴とする請求項１〜７の何れか１項に記載の製薬組成物。９．ALA誘導体が、ALAエステルであることを特徴とする請求項８記載の製薬組成物。１０．表面浸透補助剤が、DMSOであることを特徴とする請求項１〜９の何れか１項記載の製薬組成物。 EDTAおよびデスフェリオキサミンを含む請求項１〜１０の何れか１項に記載の製薬組成物。１２．光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常を処置する組成物の製造への、請求項１〜１１の何れか１項に記載される、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に伴い、かつ一種以上のキレート化剤を任意に伴うとともに、血管基質局在性光増感剤を伴うプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤の使用。１３．光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の処置において、同時に、別々にまたは順次使用するための組み合わせ調製物として、請求項１〜１１の何れか１項に記載される、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に含み、かつ一種以上のキレート化剤を任意に含むとともに、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤および血管基質局在性光増感剤を含む製造物。１４．光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の処置において、同時に、別々にまたは順次使用するための製造物の調製への、請求項１〜１１の何れか１項に記載される、少なくとも一種の表面浸透補助剤を任意に伴い、かつ一種以上のキレート化剤を任意に伴う、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤および血管基質局在性光増感剤の使用。１５．投与される前記血管基質局在性光増感剤の全投与量が、O.01〜10mg/kg体重の範囲であり、プロトポルフィリン前駆体光化学治療剤のためには、1〜500mg /kg体重の範囲である請求項２〜１４の何れか１項に記載の製薬組成物、製造物または使用。１６．光治療が、350〜900nmの範囲内の光の波長での照射によって行われることを特徴とする請求項２〜１５の何れか１項に記載の製薬組成物、製造物または使用。１７．a)請求項２〜４、８または９の何れか１項に記載のプロトポルフィリン前駆体光化学治療剤を含有する第一の容器； b)請求項２〜７の何れか１項に記載の血管基質局在性光増感剤を含有する第二の容器；および任意に c)前記第一または第二の容器、または第三の容器に含有された請求項２または１０の何れか１項に記載の少なくとも一つの表面浸透剤；および／または d)前記第一、第二または第三の容器、または第四の容器に含有された一つ以上のキレート化剤を含むキットであって、前記第一または第二の容器が存在していなくてもよく、前記a)またはb)の剤または光増感剤が、キット内に存在する別の容器の一つに存在していてもよい、光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の処置で使用するためのキット。１８．身体の疾患表面に対して、請求項１〜１１、１３または１５の何れか１項に記載の製薬組成物または製造物を投与し、前記表面を光に、好ましくは波長範囲が350〜900nmの光で照射することを含む、光化学治療に応答する身体の外部または内部表面の障害または異常の光化学治療処置方法。１９．少なくとも以下の工程： i)患者の体液または組織を請求項１〜１１の何れか１項に記載の製薬組成物と混合し、 ii)前記混合物に光線を照射し、 iii)蛍光レベルを確認し、かつ iv)前記蛍光レベルをコントロールレベルと比較すること、を含む、患者の体液または組織のサンプルをアッセイすることによって、異常または障害をインビトロで診断する方法。