JP2001501211A - 転移細胞への抗癌薬の輸送用加水分解性プロドラッグ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、転移細胞の細胞膜に位置するプロテアーゼによって活性化されて、転移細胞が吸収しうる活性な抗癌薬を生成する加水分解性プロドラッグを提供する。本発明の加水分解性プロドラッグは一般に、立体障害の発生を防止するのに十分な長さの自己犠牲スペーサーを介して治療薬に共有結合した、転移細胞の表面に位置したペプチド加水分解酵素の基質である、末端アミノ基をキャップしたペプチドから成り、上記治療薬としては、たとえば抗癌薬（ドキソルビシン、タキソール、カンプトテシン、マイトマイシンC、エスペラマイシンなど）であって、また加水分解性プロドラッグの基質を加水分解するペプチド加水分解酵素は、たとえばカテプシンBである。

Description

【発明の詳細な説明】 転移細胞への抗癌薬の輸送用加水分解性プロドラッグ 発明の背景 本発明は、転移細胞への治療薬、特に抗癌薬の輸送（delivery、デリバリー） 用加水分解プロドラッグに関する。 転移は癌の特徴である。転移しない腫瘍は、“良性”と呼ばれるが、それは、 本当に転移する“悪性”腫瘍と比較して、短い生存の気配（a threat of surviv al）を装うからである〔マクガイアの「New Eng．J．Med.」(３２０：５２５、 １９８９年)参照〕。 転移は、ほとんどの細胞がうまく完結できないという一連の事象を必然的に伴 う〔サンチェスの「Am．J．Med．Sci.」(２９２：３７６、１９８６年)；ポステ の「Nature」(２８３：１３９、１９８０年)参照〕。転移細胞は、一次腫瘍から 離脱し、血液での通過中の免疫系による攻撃をまぬがれて生きのび、変動する血 流の剪断力に抵抗しながらどこかでとどまり、基底膜に透通して、それらが増殖 しうる安全な避難所に到達し、そして最後に、生長する転移腫瘍の食物の要求が 、拡散によって局部的に利用できるものを上回るとき、それら自体の血液供給を もたらさなければならない。転移細胞は、腫瘍（それ自体、異質性が高い）の代 表的なサンプルではなく〔ポステの「Ann．New York Acad．Sci.」(３９７：３ ４、１９８２年)；ヘプナーの「Cancer Res.」(４４：２２５９、１９８４年)； フィドラーの「Science」(２１７：９９８、１９８２年)参照〕、むしろ一次腫 瘍の年齢と共に増大する小さな亜母集団を構成する〔フィドラーの「Cancer Res .」(５０：６１３０、１９９０年)；「Science」(１９７：８７３、１９７７年) ；カーベルの「Int．J．Cancer」(４８７：１１８、１９９１年)参照〕。各転移 はクローンであるが、急速に多様化する〔フィドラーの「Cancer Treat．Rep.」 (６８：１９３、１９８４年)参照〕。 転移は非常に小さく、このため化学療法に比較的に影響されやすいが、現代の 薬物に対し大量の投薬にも拘らず抵抗性が高く、たとえば２および３期乳癌（広 がり（spread）のシグナルを送るリンパ節関与）の生存率は、１期（広がりなし ）と比較して非常に低い。広がりがないと、生存率は７０％またはそれ以上；広 がりがあると、生存率は１０％以下である〔マクガイアの「New Eng．J．Med.」 (３２０：５２５、１９８９年)参照〕。転移を殺すのに対する抑制は、単に生存 を少し延ばすことができるだけで、同時に、癌は概して時がたって診断されるの で、転移は既に起っている。従って、癌療法において一次腫瘍切除の前後のいず れかで、特別に病巣を除去する手段の必要が高まっている〔フィシャーの「Canc er Res.」(４８３：１４８８、１９８３年)；ジャクイラット編「Neo-Adjuvant Chemotherapy」(リベイ・アンド・カンパニー、ロンドン、１９８６年)；ボナド ンナの「J．Nat．Cancer Inst.」(８２：１５３９、１９９０年)；フィヒトナー の「Anti-Cancer Res.」(７：２２７、１９８７年)参照〕。 好ましくは、このような抗転移薬剤は、多種の転移に対して使用でき、かつそ の活性を転移によって分けられないという一次腫瘍細胞の特性に依存すべきでな い。また好ましくは、このような抗転移薬剤は、特に、多様薬物処置からなる養 生法を既に受けることがある患者において、容易に吸収されかつ無毒性であるべ きである。 発明の概要 本発明者は、上述のニーズに適合する、加水分解性プロドラッグ形態の抗転移 薬剤を開発した。一般に、本発明に係る加水分解性プロドラッグは、立体障害の 発生を防止するのに十分な長さの自己犠牲（self-immolating）スペーサー（spa cer）を介して治療薬に共有結合し、末端アミノ基をキャップしたペプチドから 成る。この末端アミノ基をキャップしたペプチドは、転移細胞の表面に位置する ペプチド加水分解酵素の基質である。 典型例として、ペプチド加水分解酵素はカテプシンBまたはコラーゲナーゼIV である。 典型例として、末端アミノ基をキャップしたペプチドは、ベンジルオキシカル ボニルフエニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボニルバリニルリシン、D- フェニルアラニルフェニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボニルバリニル シトルリン、t-ブチルオキシカルボニルフェニルアラニルリシン、ベンジルオキ シカルボニルアラニルアルギニルアルギニン、ベンジルオキシカルボニルフェニ ルアラニル-N-トシルアルギニン、２-アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピ オニルバリニルシトルリン、２-アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピオニ ルリシルフェニルアラニルリシン、アセチルフェニルアラニルリシン、またはベ ンジルオキシカルボニルフェニルアラニル-O-ベンゾイルトレオニンである。 典型例として、治療薬は抗癌薬である。抗癌薬はドキソルビシン、マイトマイ シンC、タキソール（taxol）、エスペラマイシン（esperamycin）、またはカン プトテシン（camptothecin）が好ましい。特に好ましい抗癌薬はドキソルビシン である。 典型例として、スペーサーはp-アミノベンジルカルボニル（“PABC”）または ビス（ヒドロキシメチル）スチレンもしくは“BHMS”のビス−カルバメートp−N H-Ph-CH＝(CH₂OCO-)₂である。 加水分解性プロドラッグはさらに、治療薬に共有結合したコロニーの設立にお いて転移細胞が付着するタンパク質から誘導されたペプチドを包含することがで きる。このペプチドの典型例は、RGD-誘導活性ペプチドまたはYIGSR-誘導活性ペ プチドである。好ましいペプチドは、YIGSR(SEQ ID NO:1)またはGRGDS(SEQ ID N O:2)である。 本発明に係る好ましい加水分解性プロドラッグとしては、ベンジルオキシカル ボニルフェニルアラニルリシル-p-アミノベンジルカルバモイルドキソルビシン アセチルフェニルアラニルリシル-p-アミノベンジルカルバモイルドキソルビシ ン、アセチルフェニルアラニルリシル-p-アミノベンジルカルバモイルマイトマ イシンC、ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニルリシル-p-アミノベンジル カルボニル-7-パクリタキセル（paclitaxel）、アセチルフェニルアラニルリシ ル-p-アミノベンジルカルボニルカンプトテシン、２-アミノエチルチオ-スクシ ンイミドプロピオニルバリニルシトルリニル-BHMS-ジドキソルビシン、２-アミ ノエチルチオ-スクシンイミドプロピオニル-リシルフェニルアラニルリシル-BHM S-ジドキソルビシン、ベンジルオキシカルボニルバリニルリシル-p-アミノベン ジルカルバモイルドキソルビシン、D-フェニルアラニルフェニルアラニルリシル -p-アミノベンジルカルバモイルドキソルビシン、およびベンジルオキシカ ルボニルバリニルシトルリニル-p-アミノベンジルカルバモイルドキソルビシン が挙げられる。 本発明の他の観点によれば、治療薬を転移細胞に輸送する方法に係り、該方法 は （１）本発明に係る加水分解性プロドラッグを転移細胞と接触させ； （２）転移細胞の表面に位置するペプチド加水分解酵素が加水分解性プロドラ ッグを加水分解するのを可能ならしめ、かつ該プロドラッグから治療薬を放出せ しめ；次いで （３）治療薬が転移細胞に入るのを可能ならしめる 工程から成る。 さらに本発明の他の観点からは、 （１）本発明に係る加水分解性プロドラッグ；および （２）医薬的に許容しうる担体 から成る医薬組成物に関連する。 図面の簡単な説明 本発明の上記および他の特徴、態様および利点については、以下に示す説明、 添付の請求の範囲および図面を参照することにより、より具体的に理解されるで あろう。 図１は、加水分解性プロドラッグAc-Phe-Lys-PABC-Doxの合成における、初期 段階の構造式や反応条件を示す図； 図２は、Ac-Phe-Lys-PABC-Doxの合成における、最終段階の同様な図； 図３は、ドキソルビシン残基のカップリング前のAc-Phe-Lys-PABC-Doxの合成 における中間体を用いて着手する、加水分解性プロドラッグAc-Phe-PABC-MMCの 合成の同様な図； 図４は、加水分解性プロドラッグZ-Phe-Lys-PABC-パクリタキセルの合成の初 期段階の同様な図； 図５は、加水分解性プロドラッグZ-Phe-Lys-PABC-パクリタキセルの合成の最 終段階の同様な図； 図６は、加水分解性プロドラッグCA-SP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂の合成の初期 段階の同様な図； 図７は、CA-SP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂の合成の中間段階の同様な図； 図８は、CA-SP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂の合成の最終段階の同様な図； 図９は、高いカテプシンB分泌細胞であるBT-２０腫瘍細胞、および低いカテプ シンB分泌細胞であるMCF-１０A腫瘍細胞をカテプシン抑制因子CA-０７４の存在 または非存在下、数種の加水分解性プロドラッグや対照化合物で殺すことを示す 表； 図１０は、数種の加水分解性プロドラッグや対照化合物を用い、BT-２０腫瘍 細胞を各種の時間およびプロドラッグ濃度で殺すことを示す表； 図１１は、加水分解性プロドラッグCA-SP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂を用い、BT- ２０およびMCF-１０Ａ腫瘍細胞を各種の時間およびプロドラッグ濃度で殺すこと を示す表；および 図１２は、カテプシンBの存在または非存在下、生理的条件における本発明に 係る加水分解性プロドラッグの安定性を示す表 である。 発明の説明 転移細胞に対し特異的な薬剤を開発する１つの新しいアプローチは、転移細胞 自体の特性、特に該薬剤が体内に広がり、かつ特定の組織に付着するのを可能な らしめる、転移細胞が持つ特性を利用するものである。 かかる特性の１つは、転移細胞の基底膜に透通しうる能力であって〔サンチェ スの「Am．J．Med．Sci.」(２９２：３７６、１９８６年)；ポステの「Nature」 (２８３：１３９、１９８０年)参照〕、一次腫瘍の末梢細胞〔プールの「Nature 」(２７３：５４５、１９７８年)；シャムバージャーの「Nature」(２１３：６ １７、１９６７年)；グラフの「Lab．Invest.」(４５：５８７、１９８１年)； バイシの「Inv．Metas.」(４：１３、１９８４年)；ダフィの「Eur．J．Cancer Clin．Oncol.」(２３：５８３、１９８７年)参照〕や実質的に正常でない体細胞 によってのみ割り当てられる（shared）． 転移細胞がこれを行うのは、それらが媒体（medium）に分泌する加水分解酵素 によるか〔ダフィの「Eur．J．Can．Clin．Oncol.」(２３：５８３、１９８７ 年)；マクカイの「Cancer Res.」(５０：５９９７、１９９０年)；ゴールドファ ーブの「Sem．Thromb．Hemostas.」(１２：２９４、１９８６年)；パイアトラス の「Gynec．Oncol.」(７：１、１９７９年)参照〕、あるいはそれらの形質膜に おいてである〔シルベンの「Virchows Arch．B.」(１７：９７、１９７４年)； スローンの「Biomed．Biochim．Acta.」(５０：５４９、１９９１年)；ケレンの 「Cancer Res.」(４８：１４１６、１９８９年)；パイアトラスの「J．Biol.Che m.」(２５６：８５３６、１９８１年)；ウェイスの「Proc．Am．Assoc.Cancer R es.」(３１：７３、１９９０年)；スローンの「Bio．Chem．Hoppe-Seyler」(３ ７１Suppl.：１９３、１９９０年)；ロズインの「Cancer Res.」(４７：６６２ ０、１９８７年)；スローンの「Proc．Natl．Acad．Sci.」(８３：２４８３、１ ９８６年)参照〕。腫瘍はタンパク分解性であり〔フィッシャーの「Arch．Entw ．Mech．Arg.」(１０４：２１０、１９２５年)；ダフィの「Eur．J.Cancer Clin ．Oncol.」(２３：５８３、１９８７年）；シュトラウリら編「Proteinase and Tumor Invasion(プロテイナーゼおよび腫瘍浸潤)」(レイブン・プレス、ニュー ヨーク、１９８０年)参照〕、その強さは転移傾向と相関関係がある〔ダフィの 「Eur．J．Cancer Clin．Oncol.」(２３：５８３、１９８７年)；シルベンの「V irchows Arch．B.」(１７：９７、１９７４年)；スローンの「Biomed．Biochim ．Acta.」(５０：５４９、１９９１年)；ケレンの「Cancer Res.」(４８：１４ １６、１９８９年)；パイアトラスの「J．Biol．Chem.」(２５６：８５３６、１ ９８１年)；ウェイスの「Proc．Am．Assoc．Cancer Res.」(３１：７３、１９９ ０年)；スローンの「Bio．Chem．Hoppe-Seyler」(３７１Suppl.：１９３、１９ ９０年)；ロズインの「Cancer Res.」(４７：６６２０、１９８７年)；スローン の「Proc．Natl．Acad．Sci」(８３：２４８３、１９８６年)；シーハンの「Can cer Res.」(４９：３８０９、１９８９年)；コッペルの「Exp．Cell Biol.」(５ ２：２９３、１９８４年)；スローンの「Science」(２１２：１１５１、１９８ １年)；スローンの「Cancer Res.」(４５：３６３６、１９８５年)；ナカジマの 「Ce1l．Biochem.」(３６：１５７、１９８８年)；ナカジマの「Science」(２２ ０：６１１、１９８３年)；キアンの「Cancer Res.」(４９：４８７０、１９８ ９年)；ヘンドリクスの「Molec．Cell Probes」(６： ５９、１９９２年)参照〕。転移する細胞によって分泌されることが知られてい る酵素としては、カテプシンB〔スローンの「Biomed．Biochim．Acta.」(５０： ５４９、１９９１年)；ケレンの「Cancer Res.」(４８：１４１６、１９８９年) ；パイアトラスの「J．Biol．Chem.」(２５６：８５３６、１９８１年)；ウェイ スの「Proc．Am．Assoc．Cancer Res.」(３１：７３、１９９０年)；スローンの 「Bio．Chem．Hoppe-Seyler」(３７１Suppl.：１９３、１９９０年)；ロズイン の「Cancer Res.」(４７：６６２０、１９８７年)；スローンの「Proc.Natl．Ac ad．Sci.」(８３：２４８３、１９８６年)；シーハンの「Cancer Res.」(４９： ３８０９、１９８９年)；コッペルの「Exp．Cell Biol.」(５２：２９３、１９ ８４年)；スローンの「Science」(２１２：１１５１、１９８１年)；スローンの 「Cancer Res.」(４５：３６３６、１９８５年)；ナカジマの「Cell．Biochem」 (３６：１５７、１９８８年)；ナカジマの「Science」(２２０：６１１、１９８ ３年)；キアンの「Cancer Res」(４９：４８７０、１９８９年)参照〕、カテプ シンD〔モントクーリアの「Cancer Res.」(５０：６０４５、１９９０年)；バシ シュタの「Brit．J．Surg.」(７２：３８６、１９８５年)参照〕、カテプシンL 〔ロズインの「Biochem．Biophys．Res．Comm.」(１６４：５５６、１９８９年) ；バシシュタの「Brit．J．Surg.」(７２：３８６、１９８５年)参照〕、カテプ シンH〔バシシュタの「Brit．J．Surg.」(７２：３８６、１９８５年)参照〕、 コラーゲナーゼIV〔ゴールドファーブの「Sem．Thromb.Hemostas.」(１２：２９ ４、１９８６年)；ヘンドリクスの「Molec．Cell.Probes」(６：５９、１９９２ 年)参照〕、ウロキナーゼ型プラスミノゲン賦活物質〔ゴールドファーブの「Sem ．Throm．Hemostas.」(１２：２９４、１９８６年)；マルツカの「Inv．Metas. 」(１１：１８１、１９９１年)参照〕、β−グルクロニダーゼ（ヘパラナーゼ） 〔ロズインの「Cancer Res.」(４７：６６２０)１９８７年)；ナカジマの「Ce1l ．Biochem.」(３６：１５７、１９８８年)；ナカジマの「Science」(２２０：６ １１、１９８３年)参照〕、ゼラチナーゼ〔アオヤマの「Proc．Natl．Acad．Sci .」(８７：８９９６、１９９０年)参照〕、グアニジノベンゾターゼ〔スティー ブンの「Anti-Cancer Res.」(１１：１４３、１９９１年)参照〕、および不定の (undefined)トリプシン酵素〔ゴールドファ ーブの「Sem.Thromb．Hemostas.」(１２：２９４、１９８６年)参照〕が挙げら れる。多くの研究によれば、悪性細胞によって同じ患者の近くの正常細胞と比較 して、酵素分泌の非常な増加が報告されている〔プールの「Nature」(２７３： ５４５、１９７８年)；シーハンの「Cancer Res.」(４９：３８０９、１９８９ 年)；ロズインの「Biochem．Biophys．Res．Comm.」(１６４：５５６、１９８９ 年)；ワタナベの「Hepato-Gastro-Enterology」(３４：１２６、１９８７年)； マーナンの「Cancer Res.」(５１：１１３７、１９９１年)；チョーハンの「Can cer Res.」(５１：１４７８、１９９１年)；ダーディの「Brit．J．Surg.」(７ ２：３７８、１９８５年)；セドの「J．Cancer Res．Clin．Oncol.」(１１７： ２４９、１９９１年)；ラーの「Int．J．Cancer」(５０：３６、１９９２年)； デングラーの「Biomed．Biochim．Acta.」(５０：５５５、１９９１年)参照〕。 これら酵素の潜在的な用途は、転移病巣の部位の細胞毒性薬を非マスキングす る（unmask）ことである。好ましい薬物は、細胞によって容易に摂取されるもの 、たとえばドキソルビシン〔アドリアマイシン（ADM）としても公知〕、マイト マイシンC（MMC）、タキソール、カンプトテシン（CPT）およびエスペラマイシ ン、並びにこれらの薬物の誘導体である。このような抗癌薬はたとえば、かなり の疎水性成分を有するため、転移細胞の形質膜を通過することができる。他の抗 癌薬は、適当な疎水性成分で誘導化して（derivatize）、転移細胞の形質膜の脂 質二層（bilayer）に対するその透過性を改善することができる。 本発明に係るプロドラッグに関して特に有用な酵素はカテプシンBであるが、 主な理由は、そのための多数のペプチド基質が既に知られているエキソペプチダ ーゼ〔タカハシの「J．Biol．Chem.」(２６１：９３７５、１９８６年)；コガの 「J．Biochem.」(１１０：１７９、１９９１年)参照〕であるからである〔ジン グル編「Lysosomes」(ノース−オランダ、アムステルダム、１９７７年)；シュ トラウリら編「Proteinases and Tumor Invasion」(レイブン・プレス、ニュー ヨーク、１９８０年)；ニューベルジャー編「Hydro1ytic Enzymes(加水分解酵素 )」(エルセビア、アムステルダム、１９８７年)参照〕。カテプシンBは、細胞内 のいたるところに存在するリソソーム酵素であるが〔ジングル編 「Lysosomes」(ノース−オランダ、アムステルダム、１９９７年)；シュトラウ リら編「Proteinases and Tumor Invasion」（レイブン・プレス、ニューヨーク 、１９８０年)；ニューベルジャー編「Hydrolytic Enzymes」(エルセビア、アム ステルダム、１９８７年)参照〕、ほとんど正常に分泌しない。小量のカテプシ ンBが本当にエキソサイトーシスまたは非プログラム（unprogrammed）細胞死中 に飛散すれば、中性pHで１５分以内に全ての活性を失なう〔シーハンの「Cancer Res.」(４９：３８０９、１９８９年)；ジングル編「Lysosomes」（ノース−オ ランダ・パブリッシング・カンパニー、アムステルダム、１９７７年)；バック の「Biochem．J.」(２８２：２７３、１９９２年)参照〕。カテプシンBは、正常 細胞とは全く異なり癌と強い会合が存在し〔ダフィの「Eur．J．Cancer Clin．O ncol.」(２３：５８３、１９８７年)；ゴールドファーブの「Sem．Thromb．Hemo stas.」(１２：２９４、１９８６年)；パイアトラスの「Gynecol．Oncol.」(７ ：１、１９７９年)参照〕、これは同じ患者内で少なくなく〔プールの「Nature 」(２７３：５４５、１９７８年)；ワタナベの「Hepato-Gastro-Enterology」( ３４：１２６、１９８７年)；マーナンの「Cancer Res.」(５１：１１３７、１ ９９１年)；ダーディの「Brit．J．Surg.」(７２：３７８、１９８５年)；セド の「J．Cancer Res．Clin．Oncol.」(１１７：２４９、１９９１年)；ラーの「I nt．J．Cancer」(５０：３６、１９９２年)；デングラーの「Biomed．Biochim． Acta.」(５０：５５５、１９９１年)参照〕、そしてその分泌は、患者や動物の 細胞の転移傾向、および病気の悪性度と相関関係がある〔ダフィの「Eur．J．Ca ncer Clin．Oncol.」(２３：５８３、１９８７年)；ゴールドフアーブの「Sem． Thromb．Hemostas.」(１２：２９４、１９８６年)；パイアトラスの「Gynecol． Oncol.」(７：１、１９７９年)；スローンの「Biomed．Biochim．Acta.」(５０ ：５４９、１９９１年)；ケレンの「Cancer Res.」(４８：１４１６、１９８９ 年)；パイアトラスの「J．Biol．Chem.」(２５６：８５３６、１９８１年)；ウ ェイスの「Proc．Am．Assoc．Cancer Res.」(３１：７３、１９９０年)；スロー ンの「Bio．Chem．Hoppe-Seyler」(３７１ Suppl.：１９３、１９９０年)；ロズ インの「Cancer Res.」(４７：６６２０、１９８７年)；スローンの「Proc．Nat l．Acad．Sci.」(８３：２４８３、１９８６年)；シーハンの 「Cancer Res.」(４９：３８０９、１９８９年)：コッペルの「Exp．Cell Biol. 」(５２：２９３、１９８４年)；スローンの「Science」(２１２：１１５１、１ ９８１年)；スローンの「Cancer Res.」(４５：３６３６、１９８５年)；ナカジ マの「Cell．Biochem.」(３６：１５７、１９８８年)；ナカジマの「Science」( ２２０：６１１、１９８３年)；キアンの「Cancer Res.」(４９：４８７０(１９ ８９年)；ラーの「Int．J．Cancer」(５０：３６、１９９２年)参照)。カテプシ ンBはpH７で、多くの細胞外マトリックス（基質）成分を分解し、該成分として タイプIVコラーゲン〔バックの「Biochem．J.〕(２８２：２７３、１９９２年) ；マシイジェウィッツの「Biomed．Biochim．Acta.」(５０：５６１、１９９１ 年)；マシイジェウィッツの「Int．J．Cancer」(４３：４７８、１９８９年)参 照〕、ラミニン〔バックの「Biochem．J.」(２８２：２７３、１９９２年)参照 〕、およびフィブロネクチン〔バックの「Biochem．J.」(２８２：２７３、１９ ９２年)参照〕が包含される。一般に、pH５と異なりpH７で安定でないが、腫瘍 のカテプシンBはpH７で安定であり〔シーハンの「Cancer Res.」(４９：３８０ ９、１９８９年)；バックの「Biochem．J.」(２８２：２７３、１９９２年；ス ローンの「Cancer Metastas．Rev.」(３：２４９、１９８４年)参照〕、特に細 胞の形質膜内で保持されるときに安定である〔ロズインの「Cancer Res.」(４７ ：６６２０、１９８７年、参照〕。実際に、悪性細胞はカテプシンBをその形質 膜に分泌する。 形質膜は明らかに、輸送されるべき潜伏性細胞毒性薬を賦活するのに非常に望 ましい場所であり、該輸送は標的細胞へできるだけまっすぐにのみならず、転移 する細胞の遺伝学的に高い不安定性に基づき〔フィドラーの「Cancer Treat．Re p.」(６８：１９３、１９８４年)参照〕、大多数と同じくらいカテプシンBを示 さないと思われる近くの癌細胞にも向けられる。 Ｉ．加水分解性プロドラッグ 本発明に従って、治療薬を転移する細胞に輸送する好ましい薬剤は、立体障害 の発生を防止するのに十分な長さの自己犠牲スペーサーを介して治療薬に共有結 合し、末端アミノ基をキャップしたペプチドから成る加水分解性プロドラッグで ある。末端アミノ基をキャップしたペプチドは、転移細胞の表面に位置するペプ チド加水分解酵素の基質である。 典型例として、ペプチド加水分解酵素はカテプシンBまたはコラーゲナーゼIV であって、好ましいペプチド加水分解酵素はカテプシンBである。 ペプチド加水分解酵素がカテプシンBの場合、ペプチド加水分解酵素の基質と して作用する末端アミノ基をキャップしたペプチドはたとえば、ベンジルオキシ カルボニルフェニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボニルバリニルリシン 、D-フェニルアラニルフェニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボニルバリ ニルシトルリン、t-ブチルオキシカルボニルフェニルアラニルリシン、ベンジル オキシカルボニルアラニルアルギニルアルギニン、ベンジルオキシカルボニルフ ェニルアラニル-N-トシルアルギニン、２-アミノエチルチオ-スクシンイミドプ ロピオニルバリニルシトルリン、２-アミノエチルチオ-スクシンイミドプロピオ ニルリシルフェニルアラニルリシン、アセチルフェニルアラニルリシン、および ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニル-O-ベンゾイルトレオニンの１つで ある。また、これらのペプチドの、誘導化する基がカテプシンBによるペプチド の開裂を干渉しない誘導体も使用することができる。別法として、これらペプチ ドの末端アミノ基をキャップする基を、公知の他のもので置換することができる 。 好ましくは、末端アミノ基をキャップしたペプチドはベンジルオキシカルボニ ルフエニルアラニルリシンまたはアセチルフェニルアラニルリシンである。 カテプシンBの他の好適な基質は公知である。たとえば、対になつた塩基性残 基を含有する基質を、カテプシンBで加水分解することができる〔J．K.マクドナ ルド・アンド・S.エリスの「Life Sci.」(１７：１２６９−１２７６、１９７５ 年)参照〕。 本発明に係る加水分解性プロドラッグの場合、末端アミノ残基は“キャップド ”または保護基で保護されなければならない。かかる保護基はペプチド化学で周 知であり、たとえばベンジルオキシカルボニル（カルボベンゾキシとしても公知 で、一般にZと略す）、アセチル、２-アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピ オニル、t-ブチルオキシカルボニル、およびM.ボダンスキーの「Principles of Peptide Synthesis(ペプチド合成の原理)」(２版、スプリンガー-ベルラグ、ベ ルリン、１９９３年)に開示の如き他の末端アミノ保護基が挙 げられる。これらの基としては、トリフェニルメチル、p-メトキシベンジルオキ シカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、ビフェニルイルイソプロピルオ キシルカルボニル、ホルミル、イソニコチニルオキシカルボニル、O-ニトロフエ ニルスルフェニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル、ベンジル基の芳 香族環を置換したベンジルオキシカルボニルの誘導体、または場合により、ベン ジル基のフェニル部が別のフランもしくはピリジンなどの完全芳香性成分、フタ ロイル、ジチアスクシニル、p-トルエンスルホニル（トシル）、およびその他の 基で置換されたものが包含される。 別法として、末端アミノ保護基はD-フェニルアラニンなどのD-アミノ酸であっ てよい。末端アミノ保護基がD-アミノ酸のとき、D-アミノ酸のカルボキシル基は 、末端アミノ基保護ペプチドの末端アミノ残基と共にペプチド結合を形成する。 好ましくは、末端アミノ基保護ペプチドのペプチド部がフェニルアラニルリシ ンのとき、末端アミノ基保護ペプチドがベンジルオキシカルボニルフェニルアラ ニルリシンまたはアセチルフェニルアラニルシリンとなるように、保護基はベン ジルオキシカルボニルまたはアセチルである。 加水分解性プロドラッグは、末端アミノ基保護ペプチドと治療薬間の立体障害 の発生を防止するのに充分な長さのスペーサーを有する。スペーサーが余りに短 いと、治療薬は、ペプチド加水分解酵素の基質とペプチド加水分解酵素の活性部 位との結合を、立体障害によって妨害するかもしれない。特に好適なスペーサー は、p-アミノベンジルカルボニル（“PABC”）である。これは、約１０オングス トロームの長さを有する。 また、ベンジル基の芳香族成分が置換された化合物などの、p-アミノベンジル カルボニルの誘導体も使用可能である。 別法として、他のスペーサー基も使用しうる。スペーサーの長さは、約１０オ ングストローム以上であるべきであるが、かなり長い長さのスペーサーも使用で き、かつ該スペーサーはたとえば追加の脂肪族または芳香族成分を含むことがで きる。一般に、このようなスペーサーは、それ自体の立体障害をもたらさないよ うに、相対的に分枝すべきでない。スペーサーの末端の化学的官能基は変化しう るが、一端はペプチド加水分解酵素の基質の末端カルボキシル残基と反応可能で ある。典型例として、これはアミノ基である。スペーサーの末端の他の官能基は 、治療薬と反応することができる。１つの好ましい具体例において、この官能基 は薬物のアミノ基で反応して、スペーサーの一部としてカルバメートまたはウレ タン結合を形成する。 他の好ましいスペーサーは、ビス（ヒドロキシメチル）スチレン（“BHMS”） のビスカルバメートであって、構造式：p-NH-Ph-CH=(CH₂OCO-)₂を有する。また 、このスペーサーは薬物のアミノ基でも反応して、カルバメートまたはウレタン 結合を形成する．このスペーサーは二官能で、ドキソルビシンなどの２つの薬物 成分を結合することができる。 かかるスペーサーは、自己犠牲の性質を有することが好ましい。自己犠牲スペ ーサーは、ペプチド結合のペプチド加水分解酵素による加水分解のあとに、治療 薬に結合するスペーサーの残部（residual portion）がさらに、水性媒体中自然 の非酵素加水分解によつて開裂して、元の非共役薬物にもどるものである。PABC およびBHMSは共に自己犠牲である。たとえば、スペーサーがP-アミノベンジルカ ルボニル(“PABC”)で治療薬がドキソルビシンの場合、ペプチド結合のカテプシ ンBによる加水分解後に、薬物に結合したままでいるスペーサーの部分は続いて 、自然の加水分解を受けて、p-アミノベンジルアルコール、二酸化炭素、および ドキソルビシンとなる。 典型例として、治療薬は抗癌薬である。しかしながら、他の治療薬を本発明に 係る加水分解性プロドラッグに含ませることができ、また転移細胞に輸送するこ とができる。本発明に係る加水分解性プロドラッグに含ませる好ましい抗癌薬と しては、ドキソルビシン、タキソール、カンプトテシン、マイトマイシンCおよ びエスペラマイシン、並びにこれらの誘導体が挙げられる。疎水性成分を有し、 かつ転移細胞によって吸収されうるか、または疎水性成分で誘導化されうる他の 抗癌薬も使用することができる。 従って、本発明に係る特に好ましい加水分解性プロドラッグとしては、ベンジ ルオキシカルボニルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジルカルバモイル ドキソルビシン、アセチルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジルカルバ モイルドキソルビシン、アセチルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジル カルバモイルマイトマイシンC、ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニルリ シル−p−アミノベンジルカルボニル−７−パクリタキセル、アセチルフェニル アラニルリシル−p−アミノベンジルカルボニルカンプトテシン、２−アミノエ チルチオ−スクシンイミドプロピオニル−バリニルシトルリニル−ビス（ヒドロ キシメチル）スチリル−ビスドキソルビシン、２−アミノエチルチオ−スクシン イミドプロピオニル−リシルフェニルアラニルリシル−ビス（ヒドロキシメチル ）スチリル−ビスドキソルビシン、ベンジルオキシカルボニルバリニルリシル− p−アミノベンジルカルバモイルドキソルビシン、D-フェニルアラニルフェニル アラニルリシル−p−アミノベンジルカルバモイルドキソルビシン、およびベン ジルオキシカルボニルバリニルシトルリニル−p−アミノベンジルカルバモイル ドキソルビシンが包含される。 本発明に係る加水分解性プロドラッグの合成は、当該分野で周知の縮合反応に よって行うことができる。合成の具体例を実施例１〜６に示す。一般に、スペー サーPABCを用いる合成手順は、 （１）通常のペプチド合成法により、末端アミノを持つアミノ酸残基のα−ア ミノ基を保護しおよび該アミノ酸の反応性側鎖を適当に保護した、ペプチド加水 分解酵素の基質であるペプチドを合成し； （２）末端カルボキシルを持つアミノ酸のカルボキシル基にp−アミノベンジ ル成分を結合し、 （３）治療薬の共有結合のためp−アミノベンジル成分を賦活し； （４）一定の反応性側鎖を同様に保護して有しうる、治療薬を共有結合し；次 いで （５）ペプチドおよび治療薬の残った保護基を脱離する ことから成る。 一般に、スペーサーBHMSを用いる合成手順は、 （１）通常のペプチド合成法により、上記と同様な適当な保護基を用いて、ペ プチド加水分解酵素の基質であるペプチドを合成し； （２）ペプチドの末端カルボキシルを持つアミノ酸のカルボキシル基にBHMS成 分を結合し； （３）治療薬のカップリング反応のためBHMS成分を賦活し； （４）賦活したBHMS成分に治療薬をカップリング反応させ； （５）アミノ酸側鎖、たとえばリシンのε−アミノ基の保護基を脱離し；次い で （６）末端アミノブロック基を修飾（変性）して、所望のキャップ基を存在さ せる ことから成る。 別法として、ペプチド加水分解酵素による開裂の基質がトリペプチドまたは３ つ以上のアミノ酸を持つペプチドである場合、カルボキシル末端のスペーサーへ のカップリング反応後、ペプチドのアミノ末端を延長することができる。これに は、ペプチドの末端アミノ保護基を脱離し、付加するアミノ酸のカルボキシル基 を賦活（活性化）し、次いでそれを脱ブロックアミノ基にカップリング反応させ て、ペプチド結合を形成することが必要である。より長いペプチドが望まれる場 合、上記の処置を繰返すことができる。次いで、完成したペプチドに治療薬をカ ップリング反応させ、上述の如く、加水分解性プロドラッグの合成を完了する。 本発明による１つの具体例において、加水分解性プロドラッグはさらに、転移 細胞に付着するタンパク質から誘導されるペプチドを包含する。かかるペプチド としては、タンパク質フィブロネクチン（GRGDS）(SEQ ID NO:1)〔ハンフリーズ の「Science」(２３３：４６７、１９８６年)；オールデンの「Ann．New York A cad．Sci.」(４２１、１９８９年)；デドハーの「Bio Essays」(１２：５８３、 １９９０年)参照〕およびラミニン（YIGSR）(SEQ ID NO:2)〔イワモトの「Scien ce」(２３８：１１３２、１９８７年)；サイキの「Brit．J．Cancer」(５９：１ ９４、１９８９年)参照〕から誘導されるペプチドを包含する。 典型例として、ペプチドは、ペプチド加水分解酵素の基質である末端アミノ基 をキャップしたペプチドのアミノ側に対し、直接アミドとして、あるいはペプチ ドを受容するよう修飾された、キャップする基のベンジルオキシカルボニル、ア セチル、マレイミドプロピオニル等への結合を介して間接的に共有結合する。結 合は、ペプチドのアミノもしくはカルボキシル基、または場合によってはペプチ ドの官能基、たとえばアスパラギン酸のカルボキシル、セリンのヒドロキシルあ るいは他の残基の他の官能基を介してのものであってよい。選定ペプチドや治療 薬に応じて、種々の架橋試薬を使用することができる。たとえば、ジシクロヘキ シルカルボジイミドなどのカルボジイミドは、カルボキシル基とアミンのアミド 結合を形成しうる。他の反応性基は公知で、たとえばG.T.ハーマンソンの「Bioc onjugate Techniques」(アカデミック・プレス、サンディエゴ、１９９６年)；S .S．ウオングの「Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking」(CRC プレス、フロリダ州ボカ・レイトン、１９９１年）；およびT.E．クレイトン編 「Protein Function:A Practical Approach」(IRLプレス、オックスフォード、 １９８９年)に記載されている。ペプチドは、チオール基がマレイミド基に付加 するシステインを介してマレイミドプロピオニルキャップに、あるいはグリシン のアミノ基のアシル化を介してグリシンもしくは他のアミノ酸キャップ（アセチ ルキャップにとって代わる）に、またはペプチドをベンジルオキシカルボニルキ ャップのp位に結合させることにより、もしくは公知の他の方法で結合すること ができる。これらのペプチド、たとえばYIGSR(SEQ ID NO:2)のプロドラッグへの 結合は、他のアミノ酸から成るあるいはそうでないかもしれない結合の干渉を伴 なうあるいはそうでなくてもよい。 また他の共役結合または架橋法を用いて、ラミニンまたはフィブロネクチンか らのペプチドなどのペプチドを、加水分解性プロドラッグの他の部分に結合する ことができる。ほとんどの場合、ペプチドの自己犠牲スペーサーへの結合は、ペ プチド加水分解酵素による基質の加水分解を妨げるかあるいは立体障害をもたら すであろう。 フィブロネクチンおよびラミニンペプチドから誘導される多くのペプチドは、 加水分解性プロドラッグに結合することができる。 これらのペプチドは、その構造およびフィブロネクチンまたはラミニン配列へ の相同性の観点から、以下の通りに分類することができる。 フィブロネクチン誘導ペプチドとしては、 （１）フィブロネクチン配列から誘導されるGRDGS(SEQ ID NO:1)ペンタペプチ ド〔I.ハーダンらの「Int．J．Cancer」(５５：１０２３〜１０２８、１９９３ 年)，“非ペプチド系Arg-Gly-Asp擬態による、ネズミの肺および腫瘍誘発病的 状態における転移細胞の転移増殖の抑制”参照〕； （２）保存的アミノ酸置換を持つフイブロネクチンペンタペプチド配列の誘導 体、たとえばGRGES(SEQ ID NO：3)〔R．J．トレスラーらの「Cancer Commun.」( １：５５〜６３、１９８９年)，“RGD含有ペプチドポリマーによるラージ細胞リ ンパ腫および肝洞様毛細血管内皮細胞の付着抑制と転移潜在能の相関関係：イン テグリン（Integrin）依存および非依存付着メカニズムの役割”参照〕； （３）この配列から誘導される切断ペプチド、たとえばRGDおよびRGDS(SEQ ID NO:4)〔I.サイキらの「Japan J．Cancer Res.」(８１：６６０〜６６７、１９ ９０年)，“高分子量Arg-Gly-Asp(RGD)ペプチド、ポリ(RDG)およびその類縁体の 抗転移および抗侵襲効果”参照〕； （４）アミノ酸置換を持つ切断ペプチド、たとえばRGDT(SEQIDNO：5)〔I.サイ キらの上記文献（１９９０年）参照〕、並びにRGEおよびRGET(SEQIDNO:6)； （５）フィブロネクチン配列から誘導される延長ペプチド、たとえばGRGDSP(S EQ ID NO:7)〔M.D．Pierschbacher & E．Ruoslahtiの「J．Biol．Chem.」(２６ ２：１７２９４〜１７２９８、１９８７年)，“細胞付着における結合特異性に 関するArg-Gly-Asp-Xaa配列の立体化学の影響”参照〕およびGRGDSPA(SEQ ID NO :8)〔H.クマガイらの「Biochem．Biophys．Res．Commun.」(１７７：７４〜８２ 、１９９１年)，“細胞付着および腫瘍転移に関する環式RGDペプチドの効果”参 照〕； （５）アミノ酸置換を持つ延長ペプチド、たとえばGRGDXPC（ここで、XはM,C, H,Y,GまたはP以外の天然産出L-アミノ酸である）〔M．D．Pierschbacher & E．R uoslahtiの上記文献（１９８７年）参照〕、GRGDNPC(SEQ ID NO:9)〔A．ハウタ ネンらの「J．Biol．Chem.」(２６４：１４３７〜１４４２、１９８９年),“フ ィブロネクチン受容体による見分けに関するRGD配列およびそのコンテクストの 変性効果”参照〕、GRGDAPC(SEQ ID NO:１０)〔M．D．Pierschbacher & E．Ruos lahtiの「Proc．Nath．Acad．Sci．USA」(８１：５９８５〜５９８８、１９８４ 年)，“付着促進活性を保持するフィブロネクチンの細胞見分け部位の変化”参 照〕、GRGDXPA（ここで、XはM，C，H，Y，GまたはP以外の天然産出L −アミノ酸である)〔M．D．Pierschbacher & E．Ruoslahtiの上記文献（１９８ ７年）およびH．クマガイらの上記文献（１９９１年）に報告の結果に類似によ る〕、GRGDSG(SEQ ID NO:１１)〔M．ノミズらの「Cancer Res.」(５３：３４５ ９〜３４６１、１９９３年)，“Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg(YIGSR)ペプチドのマルチ マー形態は、腫瘍生長および転移の抑制を高める”参照〕、GRGDXG(ここで、Xは M,C,H,Y,GまたはP以外の天然産出L-アミノ酸である)〔M.D．Pierschbacher & E ．Ruoslahtiの上記文献(１９８７年)およびM．ノミズらの上記文献(１９９３年 ）に報告の結果に類似による〕、およびGRDGXPA(ここで、XはM,C,H,Y,GまたはP 以外の天然産出L-アミノ酸である〔M.D．Pierschbacher & E．Ruoslahtiの上記 文献（１９８７年）およびH．クマガイらの上記文献(１９９１年）に報告の結果 に類似による〕、並びに４位のD残基をEに代えた類似ペプチド〔R．J．トレスラ ーらの上記文献（１９８９年）の結果に類似による〕； （６）天然産出L-アミノ酸の１つに代えてD-アミノ酸をもつ延長置換ペプチド 、たとえばG(dR)GDSPおよびGRGD(dS)P〔M．D．Pierschbacher & E．Ruoslahtiの 上記文献（１９８７年）参照〕； （７）c(GRGDSPA)、c(GRGDSP)、c(GRGDS)、c(GRGD)およびc(RGDS)を包含する 環化（c）ペプチド〔H．クマガイらの上記文献（１９９１年）参照〕； （８）天然産出L-アミノ酸の１つに代えてD-アミノ酸を持つ環化ペプチド、た とえばc(RGD(dF)V)およびc(RGDF(dV))〔M．オウマイレイらの「FBES Lett.」(２ ９１：５０〜５４、１９９１年)，“環式ペンタペプチドの中に限られるArg-Gly -Asp”参照〕； （９）ペプチドのオリゴマー、たとえばオリゴ（RGD）(1.5kDa分子量)〔J．ム ラタらの「Int J．Peptide Protein Res.」(３８：２１２〜２１７、１９９１年 )，“ポリ（RGD）の分子特性およびその転移黒色腫細胞に対する結合能”参照〕 、(GRGDS)₄(SEQ ID NO:12)、(GRGES)₄(SEQ ID NO:13)および(GRGDS)(GRGES)₂(GR GDS)(SEQ ID NO:１４)〔R．J．トレスラーらの上記文献（１９８９年）参照〕； （１０）ペプチドのポリマー、たとえばポリ（RGD）(１０kDa分子量)〔J．ム ラタらの上記文献（１９９１年）参照〕、ポリ（RGDT）(１０kDa分子量)〔I．サ イキらの上記文献（１９９０年）参照〕、およびコポリ（RGD,YIGSR）(１０kDa 分子量)〔I．サイキらの上記文献（１９８９年）参照〕； （１１）分枝ペプチド、たとえば(AcGRGDSG)₁₆K₈K₄K₂ KG-OH〔M．ノミズらの 上記文献（１９９３年）参照〕；および （１２）ペニシラミンを組み入れる環式ペプチド、たとえばG(Pen)GRGDSPC〔M .D．Pierschbacher & E．Ruoslahtiの上記文献（１９８７年）参照〕 が挙げられる。上記種類（１）〜（１２）の誘導体を包含する、転移細胞の付着 ブロックに活性を有するRGD配列の誘導体は一般的に、本明細書では“RGD-誘導 活性ペプチド”と称せられ、また本発明の技術的範囲に属する。 ラミニン誘導ペプチドとしては、 （１）ラミニン配列から誘導されるYIGSR(SEQIDNO:2)ペンタペプチド〔J．ム ラタらの上記文献（１９８９年）参照〕； （２）保存的アミノ酸置換を持つラミニンペンタペプチド配列の誘導体、たと えばYCGSR(SEQ ID NO:１５)〔K．カワサキらの「Chem．Pharm．Bull.」(４２： ９１７〜９２１、１９９４年)，“アミノ酸およびペプチド XXI．ポリ（エチレ ングリコール）ハイブリッドを包含するラミニン関連ペプチド類縁体およびそれ らの実験転移に関する抑制効果”参照〕； （３）この配列から誘導される切断ペプチド、たとえばYIGS(SEQ ID NO:１６) 〔K．カワサキらの上記文献（１９９４年）参照〕； （４）延長配列、たとえばCDPGYIGSR(SEQ ID NO:１７）〔K.カワサキらの上記 文献（１９９４年）参照〕； （５）アミノ酸置換を持つ置換ペプチドおよび延長配列を包含するペプチド（ ここで、D−アミノ酸が天然産出L-アミノ酸の１つに代用）、たとえばCDPGYI(dA )SRおよびYIG(dA)SR〔G.J．オスセイマーらの「J．Biol．Chem．」(２６７：２ ５１２０〜２５１２５、１９９２年)，“NMRはラミニンペプチド１１の溶液構造 を限定した”参照〕； （６）分枝ペプチド、たとえば(Ac-YIGSRG)₁₆K₈K₄K₂ KG-OH、(YIGSRG)₁₆K₈K₄K₂ KG-OH、(Ac-YIGSRG)₈K₄K₂KG-OH、および(Ac-YIGSRG)₄K₂KG-OH〔M．ノミズらの 上記文献（１９９２年）参照〕；および （７）ペプチドのポリマー、たとえばポリ（YIGSR）(１０kDa分子量)〔I．サ イキらの上記文献（１９８９年）参照〕 が挙げられる。上記種類（１）〜（７）の誘導体を包含する、転移細胞の付着ブ ロックに活性に有するYIGSR配列の誘導体は一般的に、本明細書では“YIGSR-誘 導活性ペプチド”と称せられ、また本発明の技術的範囲に属する。 II．転移細胞に治療薬を輸送する方法 本発明の付加的観点は、転移細胞への治療薬の輸送方法に係る。かかる方法は 、典型例として、 （１）立体障害の発生を防止するのに十分な長さの自己犠牲スペーサーを介し て治療薬に共有結合し、末端アミノ基をキャップしたペプチドからなる加水分解 性プロドラッグを、転移細胞と接触させ（ここで、末端アミノ基をキャップした ペプチドは、転移細胞の表面に位置するペプチド加水分解酵素の基質である）； （２）転移細胞の表面に位置するペプチド加水分解酵素が加水分解性プロドラ ッグを加水分解するのを可能ならしめ、かつ該プロドラッグから治療薬を放出せ しめ；次いで （３）治療薬が転移細胞に入るのを可能ならしめる 工程からなる。 典型例として、治療薬は上述の如く抗癌薬である。 典型例として、加水分解性プロドラッグは、該プロドラッグが酵素加水分解の 非存在下で安定である条件の下で、転移細胞に輸送される。典型例として、かか るプロドラッグはカテプシンBなどのペプチド加水分解酵素の非存在下、pH７． ４、３７℃のプラスマにおいて少なくとも６日間安定である。場合によっては、 プロドラッグはカテプシンBの非存在下、１６日以上または２０日以上も安定で ある。このようにプロドラッグは、インビトロまたはインビボのいずれにおいて も、転移細胞に輸送することができる。典型例として、本発明の加水分解性プロ ドラッグは、転移細胞の少なくとも一部を殺すのに十分な量で投与される。 本発明の加水分解性プロドラッグは、通常の投与方法を用いてインビボ投与す ることができ、かかる投与方法としては、これらに限定されるものでないが、静 脈内、腹腔内、経口またはリンパ内の方法が挙げられる。別法として、他の注入 手段を使用することができる。一般に、経口または腹腔内投与が好ましい。組成 物は種々の投与形態で投与することができ、該形態としては、これらに限定され るものでないが、液体溶液もしくは懸濁液、錠剤、丸剤、粉剤、坐剤、ポリマー マイクロカプセルもしくはマイクロベシクル(micro vesicles)、リポソーム、お よび注射液もしくは注入液が挙げられる。好ましい投与形態は、投与方法および 投与量に依存する。 本発明に係る投与用医薬組成物は、当該分野で公知の通常の医薬的に許容しう る担体や佐剤、たとえばヒト血清アルブミン、イオン交換体、アルミナ、レシチ ン、緩衝物質（ホスフェートなど）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウ ム、および塩もしくは電解質（プロタミン・スルフェートなど）を含有すること ができる。本発明の方法で用いる加水分解性プロドラッグの最も有効な投与方法 および投薬生活規制は、病気のきびしさや経過、患者の健康、治療に対する応答 、個々の一次腫瘍の特定種の転移細胞形質、転移の場所、薬物動態学上の要因（ たとえば投与される加水分解性プロドラッグの代謝および／または排出に影響を 及ぼすことができる患者の肝臓および／または腎臓の状態）、および治療する医 者の判断に依存する。従って、投薬量は個々の患者に合せて規定すべきである。 次に実施例を挙げて、本発明をより具体的に説明する。これらの実施例は、単 に例示のためのもので、本発明の技術的範囲を制限するものではない。 実施例１ Ac-Phe-Lys-PABC-CPTの合成 本発明に係る加水分解性プロドラッグの一例は、アセチルフェニルアラニルリ シル−p−アミノベンジルカルボニルカンプトテシン（Ac-Phe-Lys-PABC-CPT）で ある。 Fmoc-Phe-Lys-Boc-PABC-CPT の合成 カンプトテシン（５３４mg、１．５３ミリモル）を１４mlの塩化メチレンに懸 濁する。これに３．０９mlの１．９３M-Cl₂CO(トルエン中)およびピリジン（０ ．１４ml、１．６８ミリモル）を加える。生成するスラリーを一夜攪拌した後、 溶媒と試薬を減圧除去する。生成する固体を塩化メチレンに再懸濁し、溶媒を減 圧除去して、過剰Cl₂COの完全な除去を確実にする。このステップをもう２回繰 返 す。最後に物質を３．０mlの塩化メチレンに懸濁し、次いでピペットで、Fmoc-P he-Lys(Boc)-PABOH(１．６１g、２．２７ミリモル）の５．０ml懸濁液を加える 。（この中間生成物において、Fmocとは９−フルオレニルメチルオキシカルボニ ル保護基を、およびBOCとはt-ブチルオキシカルボニル基を指称する。）反応液 を４時間攪拌し、次いで分液漏斗に移し、別途塩化メチレンで希釈する。有機層 を飽和水性重炭酸ナトリウムおよび飽和塩化ナトリウムで洗い、次いで硫酸ナト リウム上で乾燥する。溶液を濾過し、溶媒を減圧除去する。生成物をカラムクロ マトグラフィー（シリカ２×１２インチ、塩化メチレン／エタノール＝９８：２ ）で単離し、固体で単離する。 Ac-Phe-Lys(Boc)-PABC-CPT の合成 第１段階の反応液から単離した化合物のFmoc-Phe-Lys(Boc)-PABC-CPTは、アセ チル基の代わりに９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（“Fmoc”）基を有 し、かつブチルオキシカルボニル（“Boc”）ブロック基（blocking group）で 保護したリシンのε−アミノ基を有する。最初のステップは、末端アミノ基の９ −フルオレニルメチルオキシカルボニルブロック基のアセチルブロック基への変 換である。この変換を行うため、Fmoc-Phe-Lys−(Boc)-PABC-CPT(２００mg、０ ．１８ミリモル)を６．０mlの塩化メチレンに懸濁し、１．０mlのジエチルアミ ンを加える。懸濁液は徐々に溶解して溶液となり、これを３ｈ（時間）攪拌する 。溶媒とジエチルアミンを減圧除去する。生成する泡状固体を塩化メチレンに再 溶解し、次いで無水酢酸（０．０６８ml、０．７２ミリモル）およびジイソプロ ピルエチルアミン（０．１３モル）を加える。反応混合物を一夜攪拌し、分液漏 斗に移し、pH７緩衝剤で洗う。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、溶 媒を減圧除去する。生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ２×３インチ、 塩化メチレン／エタノール＝７：３〜９５：５の勾配）で精製して、１１０mg（ 収率６７％）の物質を黄色固体で得る。 Ac-Phe-Lys-PABC-CPT の合成 合成の最終ステップは、加水分解性基質のリシンのε−アミノ基上のブチルオ キシカルボニル保護基の脱離である。Ac-Phe-Lys−(Boc)-PABC-CPT(２０mg、０ ．０２ミリモル)を０．５mlのジクロロメタンに懸濁し、これに０．５mlのジク ロ ロ酢酸を加える。生成する明黄色溶液を３h攪拌した後、これを５０ｍｌのジエ チルエーテルに加えて、生成物を沈殿せしめる。固体を濾別して、１５mg（収率 ８３％）の淡黄色固体を得る。マススペクトロスコピィーエレクトロスプレー・ イオン化法（MS-ESI）で算出したMH⁺（C₄₅H₄₆N₆O₉）の分子量は８１５．３であ った。実測値は８１５．５。 実施例２ CA-SP-Val-Cit-BHMS-Dox₂の合成 本発明に係る加水分解性プロドラッグの他の例は、二官能の自己犠牲スペーサ ーBHMS(p-NH-Ph-CH=(CH₂OCO-)₂)を使用する。この二官能スペーサーは、２つの ドキソルビシン分子と結合することができる。またこの化合物は、スクシンイミ ドプロピオニル（SP）基を介してバリン残基に結合する２−アミノエチルチオの キャップ基（CA）を有する。 MP-Val-Cit-BHMS(OTES)₂ の合成 この化合物合成の最初のステップは、MP-Val-Cit-BHMS-(OTES)₂（ここで、MP はマレイミドプロピオニルおよびTESはトリエチルシリルである）の合成である 。出発物質のVal-Cit-BHMS-(OTES)₂（５００mg、０．７６ミリモル）を２．０ml のジメチルホルムアミドに溶解した後、ジイソプロピルエチルアミン（０．２０ ml、１．１４ミリモル）およびN-スクシンイミジル−３−マレイミドプロピオネ ート（３０３mg、１．１４ミリモル）を加える。２h攪拌後、反応混合物を分液 漏斗に移し、塩化メチレン（２００ml）で希釈し、水（２００ml×２）で洗う。 有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、同時にメタノールを加えて生成物を可溶化 せしめ、濾過し、溶媒を減圧除去する。生成物をカラムクロマトグラフィー（１ ．５×１０cmのシリカカラム、塩化メチレン／メタノール＝９５：５）で精製し て、２５０mg（収率４１％）の生成物を固体で得る。M-H(C₄₀H₆₆N₆O₈SI₂)のESI- MS計画値は８１３．４であった。実測値は８１３．４。 MP-Val-Cit-BHMS-(OPNP)₂ の合成 合成の次のステップは、トリエチルシリル（TES）基のp−ニトロフェニル（PN P）基への変換である。このステップの場合、MP-Val-Cit-BHMS-(OTES)₂（５００ mg、０．６１ミリモル）とジ（p-ニトロフェニル）カーボネートを１０mlフ ラスコに入れ、２．０mlのジメチルホルムアミドに溶解する。フッ化セシウム（ ２２０mg、１．４ミリモル）を加え、反応混合物を１h攪拌する。次いで溶液を 分液漏斗に移し、１００mlの塩化メチレンで希釈し、水（２００ml×３）で洗う 。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を除去して、４２０mg（収 率７５％）の生成物を固体で得る。 MP-Val-Cit-BHMS-(Dox)₂ の合成 次のステップは、ドキソルビシン分子のカップリングである。このステップの 場合、MP-Val-Cit-BHMS-(OPNP)₂（４２０mg、０．４６ミリモル）を４．０mlの ジメチルホルムアミドに溶解し、これにジイソプロピルエチルアミン（０．４０ ml、２．３ミリモル）およびドキソルビシン塩酸塩（６６５mg、１．１５ミリモ ル）を加える。反応液を１h攪拌した後、メタノールより沈殿せしめる。生成す る固体を濾別し、４．８×１０cmのシリカカラムにて、トリクロロメタン／メタ ノール＝９０：１０〜８５：１５の勾配を用いるカラムクロマトグラフィーで精 製して、３１５mg（収率３２％）の生成物を赤色固体で単離する。M-H(C₈₄H₉₂N₈ O₃₂)のESI-MS計算値は１７２３．６で、実測値は１７２３．６であった。CA-SP-Val-Cat-BHMS-(Dox)₂ の合成 合成の最終ステップは、システアミンをマレイミドプロピオニル成分と反応さ せて、ペプチドのアミノ末端に２−アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピル キャプ基を生成することである。MP-Val-BHMS-(Dox)₂（７４mg、０．０４３ミリ モル）を１．０mlのメタノールに懸濁する。ジメチルホルムアミド（１５滴）を 加えた後、システアミン塩酸塩（８mg、０．０７ミリモル）を加える。０．５h 攪拌後、約１０mlのジエチルエーテルの添加で生成物を沈殿させて、８０mgの赤 色固体を得る。この物質をジメチルホルムアミドに再溶解し、ジクロロメタンよ り沈殿せしめ、５６mg（収率７３％）の生成物を赤色固体で得る。MH⁺(C₈₆H₁₀₀N₉ O₃₂S)のESI-MS計算値は１８０２．８であった。実測値１８０２．７。 実施例３ Ac-Phe-Lys-PABC-Doxの合成 Fmoc-Lys(MMT) の合成 加水分解性プロドラッグAc-Phe-Lys-PABC-Doxの合成の最初のステップは、 Fmoc-Lys(MMT)の合成である。このリシンは、そのα−アミノ基を保護基９−フ ルオレニルメトキシカルボニルで保護し、そのε−アミノ基をブロック基モノメ トキシトリチルで保護している。アルゴン下室温のFmoc-Lys塩酸塩（２３．７８ g、５６．４２ミリモル）および乾燥塩化メチレン（２５０ml）の攪拌懸濁液を 、トリメチルシリルクロリド（１５ml、２．１当量）およびジイソプロピルエチ ルアミン（１０．３ml、１．０５当量）で処理する。混合物を１h加熱還流し、 その間に均質となり、次いで０℃に冷却する。ジイソプロピルエチルアミン（３ １ml、３．１当量）を加えた後、p−アニシルジフェニルメチルクロリド（１８ ．２９ｇ、１．０５当量）を加える。反応液を室温で１４h攪拌する。溶媒を蒸 発し、残渣を酢酸エチルとpH５緩衝剤（０．０５Mビフタレート）間に分配する 。有機相を、さらにpH５緩衝剤、水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥 し、蒸発して淡黄色泡状物（３４．７１ｇ、収率９６％）を得る。プロトン核磁 気共鳴（NMR）をCDCl₃中で行ったところ、δ１．２６および１．６８（m，２Hお よび４H)、２．４５（m，２H）、３．７１（s，３H）、４．０５−４．４０（m ，４H）、６．８１（d，２H）、および７．１５−７．７７（m，２０H）であっ た。MS-FABのピークは、６４１(MH)⁺、６６３(M+Na)⁺、および６７９(M+K)⁺であ った。HRMS計算値６４１．３０１５、実測値６４１．３００１であった。構造を 図１に示す。 Lys(MMT) の合成 次のステップは、リシンのε−アミノ残基の９−フルオレニルメトキシカルボ ニル基を脱離して、この基を縮合に利用することである。Fmoc-Lys(MMT)（５． ２５ｇ、８．１９ミリモル）を塩化メチレン／アセトニトリル（１：１、８０ml ）中、室温にてジエチルアミンで処理する。１．５h後、溶媒を蒸発する。残渣 を６０℃にてアセトニトリル（５０ml×２）でフラッシし、次いでジエチルエー テル（８０ml）と共にトリチュレートする。生成する固体を濾取し、ジエチルエ ーテルで洗い、次いで塩化メチレン／メタノール（１：１）にできる限り溶解す る。幾らかの副生固体を濾去し、濾液を減圧濃縮する。生成する淡黄褐色固体を ４h減圧乾燥する（３．２２１g、収率９４％）。 生成構造を図１に示す。 Ac-Phe-Lys(MMT) の合成 合成の次のステップは、フェニルアラニル残基とリシンのα−アミノ末端との 縮合である。フェニルアラニル残基は、それ自体のα−アミノ末端をアセチル基 で保護している。水（２５ml）およびジメトキシエタン（７０ml）中のLys(MMT) (４．０９４０g、９．７８１ミリモル)および水酸化リチウム・モノ水和物（４ １０．４mg、１当量）の攪拌溶液を室温にて、Ac-Phe-0Su(２．９７６３g、１当 量)／ジメトキシエタン（７０ml）の溶液で処理する（ここで、Acとはα−アミ ノ基をブロックするアセチル基を、Suとはスクシンイミジル基を指称する）。攪 拌混合物は、数時間内で徐々に均質となる。１６h後、回転エバポレーターにて 、できるだけ多くのジメトキシエタンを除去する。残渣を酢酸エチルとpH4緩衝 剤間に分配する。有機相を、さらにpH４緩衝剤、水および塩水で洗い、硫酸ナト リウム上で乾燥し、蒸発して淡黄色固体（５．３４７g、収率９０％）を得る。 この構造を図１に示す。 Ac-Phe-Lys(MMT)-PABOH の合成 合成の次のステップは、p−アミノベンジル成分を付加して、自己犠牲リンカ ーを導入することである。塩化メチレン（１２０ml）中のAc-Phe-Lys(MMT)(５． ３０９６g、８．７３６ミリモル)およびジ−t−ブチルピロカーボネート(２．８ ６０１g、１．５当量）の攪拌混合物を室温にて、ピリジン（０．７４１ml、１ ．０５当量）で処理する。１５分後、p-アミノベンジルアルコール（１．６１ ４０g、１．５当量）を加える。攪拌を１６h続け、次いで溶媒を蒸発する。残渣 を１h減圧乾燥し、次いでジエチルエーテルと共にトリチュレートする。生成す る固体を濾取し、ジエチルエーテルで繰返して洗い、風乾する（５．２４１６ｇ 、収率８４％）。 この化合物を図１に示す。 Ac-Phe-Lys(MMT)-PABC-PNP の合成 次のステップは、PABOHのベンジルアルコール成分のヒドロキシルの活性化で あって、PABOHをp−ニトロフェニルエステルに変換することによる。Ac-Phe-Lys (MMT)-PABOH(５．８６１g、７．１３４ミリモル)、ビス−p−ニトロフェニルカ ーボネート（６．５１１g、３当量）および新たに活性化した粉末シーブ（１０g ）の混合物をアルゴン下室温にて、乾燥塩化メチレン（１２０ml）、次いでジイ ソプロピルエチルアミン（３．７１ml、３当量）で処理する。混合物を室温で１ ６h攪拌し、次いで濾過する。濾液を蒸発し、残渣を数時間減圧乾燥し、次いで 塩化メチレン（２０ml）に溶解する。これに穏やかな攪拌下、ジエチルエーテル （４０ml）を加える。生成する固体を濾取し、エーテル／塩化メチレン（２：１ ）で繰返して洗い、風乾する（４．１９６６g、収率６７％）。 この化合物を図１に 示す。 Ac-Phe-Lys(MMT)-PABC-Dox の合成 合成の次のステップは、抗癌薬であるドキソルビシン成分のカップリングであ る。ジメチルホルムアミド（６０ml）中のAc-Phe-Lys(MMT)-PABC-PNP(１．１０ ０６g、１．２５３ミリモル)およびドキソルビシン塩酸塩（７．６３４mg、１． ０５当量）の攪拌混合物を室温にて、ジイソプロピルエチルアミン（０．２３ml 、１．０５当量）で処理する。２h後、混合物を酢酸エチル（４００ml）に注ぐ 。この溶液を水で４回洗い、次いで蒸発して、オレンジ色固体を得、シリカにて 塩化メチレン／メタノール〔（１）２０：１および（２）１５：１〕で溶離する クロマトグラフィーに付して、生成物をオレンジ色固体で得る。（９５９．８mg 、収率６０％）。 この化合物を図２に示す。 Ac-Phe-Lys-PABC-Dox・HCl の合成 最終ステップは、リシン残基のε−アミノ基を保護するモノメトキシトリチル 基を脱離して、本発明に係る最終の加水分解性プロドラッグを生成することであ る。塩化メチレン（５０ml）中のAc-Phe-Lys(MMT)-PABC-Dox(１．８９３２g、１ ．４７６ミリモル)およびアニソール（１６ml、１００当量）の攪拌懸濁液を室 温にて、ジクロロ酢酸（１．２２ml、１０当量）で処理する。１．５h後、混合 物を酢酸エチル（４００ml）に注ぎ、生成する懸濁液を１h攪拌する。オレンジ 色固体を濾取し、酢酸エチルで繰返し洗い、次いでメタノール（８０ml）に溶解 す る。溶液をAG２−X８イオン交換樹脂のカラム（５０g、塩素型）に通してゆっく りと溶離する。オレンジ色画分を集め、溶媒を蒸発する。残渣を塩化メチレンと 共にトリチュレートし、生成する固体を濾取し、塩化メチレンで洗い、減圧乾燥 する（１．５１３８g、収率９８％）。 この化合物の構造を図２に示す。 実施例４ Ac-Phe-Lys-PABC-MMC の合成 アセチルキャップ基および抗癌薬としてマイトマイシンC(MMC)を持つ本発明に 係る加水分解性プロドラッグを類似の方法で合成した。カテプシンBのペプチド 基質は、Phe-Lysである。 Ac-Phe-Lys(MMT)-PABC-MMC の合成 前に製造した活性化中間体Ac-Phe-Lys(MMT)-PABC-PNP(６１４．１mg、０．６ ９９４ミリモル)、マイトマイシンｃ（２４５．５mg、１．０５当量）、ヒドロ キシベンゾトリアゾール（９４５．１mg、１０当量）および新たに活性化した粉 末シーブ（４g）の混合物をアルゴン下室温にて、ジメチルホルムアミド（１５m l）およびジイソプロピルエチルアミン（１．２２ml、１０当量）で処理する。 ２h後、混合物を酢酸エチル（１５０ml）で希釈し、溶液を水（４回）および塩 水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリカにて、塩化メチ レン／メタノール（１５：１）で溶離するクロマトグラフィーに付して、生成物 をパープル色固体で得る（５０１．０mg、収率６７％）。 この化合物を図３に示す。 Ac-Phe-Lys-PABC-MMC ・ClCH₂CO₂Hの合成 加水分解性プロドラッグの合成の最終ステップは、リシン残基のε−アミノ基 をブロックするモノメトキシトリチル基の脱離である。塩化メチレン（１８ml） 中のAc-Phe-Lys(MMT)-PABC-MMC(２６９．５mg、０．２５１１ミリモル)およびア ニソール（２．７３ml、１００当量）の撹拌懸濁液を室温にて、１Mクロロ酢酸 ／塩化メチレン（２．５ml、１０当量）で処理する。３．５h後、ジエチルエー テル（３０ml）を加える。生成する懸濁液を１h攪拌し、次いでパープル色固体 を濾取し、ジエチルエーテルで洗い、減圧乾燥する（２１８．３mg、収率９７％ ）。 この構造を図３に示す。 実施例５ Z-Phe-Lys-PABC-7-パクリタキセルの合成Z-Phe-Lys(MMT) の合成 合成の最初のステップは、フェニルアラニル成分と、そのε−アミノ基がモノ メトキシトリチル(MMT)残基で保護された、リシン成分とのカップリングである 。カップリングは、フェニルアラニンのスクシンイミジル誘導体を用いて行い、 これによって、カルボキシル基を活性化する。ジメチルホルムアミド（８０ml） 中のLys(MMT)(７．４００１g、１７．６８ミリモル)およびZ-Phe-0Su（７．００ ８４g、１当量）(“Su”とはスクシンイミジル基を指称する)の攪拌混合物を室 温にて、ジイソプロピルエチルアミン（９．２ml、３当量）で処理する。３h後 、反応液を酢酸エチル（４００ml）で希釈し、溶液をpH４緩衝剤（２回）、水（ ２回）、塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発して黄色泡状物を得る。 この泡状物がスパチュラで十分に砕くことができる固体になるまで、核泡状物を 塩化メチレンで数回フラッシする（１１．２５９７ｇ、収率９１％）。 この合成ステップから生じた化合物を図４に示す。 Z-Phe-Lys(MMT)-PABOH の合成 次のステップは、パクリタキセルへの結合のためリシン残基のカルボキシル基 のp-アミノベンジル成分の付加である。塩化メチレン（４００ml）中のZ-Phe-Ly s(MMT)(７．８７０３g、１１．２４ミリモル)およびジ−t−ブチルピロカーボネ ート（３．６８１６g、１．５当量）の攪拌混合物を室温にて、ピリジン（０． ９５５ml、１．０５当量）で処理する。２０分後、p-アミノベンジルアルコール （２．０７７５g、１．５当量）を加える。混合物を室温で一夜攪拌し、次いで 溶媒を蒸発する。残渣を減圧乾燥し、次いでジエチルエーテルと共にトリチュレ ートする。生成する固体を濾取し、ジエチルエーテルで繰返し洗う（６．２６７ ４g、収率６９％）。 得られる構造を図４に示す。 ２’−モノメトキシトリチルーパクリタキセルの合成 次のステップは、保護されたパクリタキセル誘導体２'−モノメトキシトリチ ル−パクリタキセルの合成である。塩化メチレン（１４ml）中のパクリタキセル （０．５１g、０．５９７ミリモル）およびp-アニシルジフェニルメチルクロリ ド（４．６３g、２５当量）の攪拌溶液を窒素下室温にて、ピリジン（１．２３m l、２５当量）で処理する。室温で、１６h後、溶媒を蒸発し、残渣を酢酸エチル に溶解する。溶液を冷pH５緩衝剤（１００ml×２）、水および塩水で洗い、乾燥 し、蒸発する。残渣をシリカにて、３％メタノール／塩化メチレンで溶離するク ロマトグラフィーに付して、生成物を白色固体で得る（４８２mg、収率７２％） 。生成物を図５に示す。 Z-Phe-Lys(MMT)-PABC- ７-パクリタキセル-２'-OMMTの合成 次のステップは、パクリタキセル成分の保護されたペプチドの結合である。塩 化メチレン（１０ml）中の２’−モノメトキシトリチル−パクリタキセル（１． ５２５１ｇ、１．３５４ミリモル）の攪拌溶液をアルゴン下０℃にて、ジイソプ ロピエチルアミン（０．２３６ml、１当量）、ピリジンおよびジホスゲン（０． ０９ml、０．５５当量）で処理する。１０分後、氷浴を取除き、混合物を室温で ４h攪拌する。次いで粗クロロホルメート溶液を、塩化メチレン（２０ml）中のZ -Phe-Lys(MMT)-PABOH(１．１５６０g、１．０６当量)およびジイソプロピルエチ ルアミン（０．２３６ml、１当量）の攪拌溶液に加える。混合物を室温で２h攪 拌し、次いで溶媒を蒸発する。残渣を酢酸エチルとpH５緩衝剤間に分配する。有 機相を水および塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発する。残渣をシリ カにてクロマトグラフィーに付し(カラムは０．１％トリエチルアミン含有の溶 剤中に準備し、塩化メチレン／酢酸エチル＝４：１で溶離)、生成物を無色ガラ ス状物で得る（１．９３０７g、収率73％）。生成物を図５に示す。 Z-Phe-Lys-PABC- ７-パクリタキセル・Cl₂CHCO₂Hの合成 最終ステップは、リシンおよびパクリタキセル成分のε−アミノ基上の保護モ ノメトキシトリチル残基の脱離である。塩化メチレン（５０ml）中のZ-Phe-]Lys (MMT)-PABC-７-パクリタキセル-２'-OWT（１．１９２g、０．６０８６ミリモル ）およびアニソール（１３．２ml、１００当量）の攪拌溶液を室温にて、ジクロ ロ酢酸（１００ml、２０当量）で処理する。１．７５h後、ジエチルエーテル（ ８０ml）を加え、生成する懸濁液を２h攪拌し、４℃で一夜貯蔵する。次いで白 色固体を濾取し、ジエチルエーテルで繰返し洗い、風乾する（８９４．１mg、収 率９５％）。 生成物を図５に示す。 実施例６ CA-SP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂ ビス(ヒドロキシメチル)p-アミノスチレン（BHMS）の合成 二官能加水分解性プロドラッグCA-SP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂の合成の最初の ステップは、二官能スペーサー：ビス(ヒドロキシメチル)p-アミノスチレン（BH MS）の合成である。テトラヒドロフラン(９５０ml)およびメタノール（９５０ml ）の混合物中の２−(p-ニトロベンジリデン)-プロパン-１，３-ジオール(６０． ２９g、０．２８８５モル)〔P.バネールらの「Eur．J．Med．Chem.」(２６：７ ０９、１９９１年)参照〕の攪拌溶液に、N₂雰囲気下３０℃にてレーニーニッケ ル（５．２８ml、H₂O中５０％スラリー）およびヒドラジン・モノ水和物（２１m l、１．５当量）を加える。激しいガス発生が見られ、反応温度が４７℃に上昇 する。３０分と１．５h後に追加のヒドラジン・モノ水和物（２１ml、１．５当 量）を加え、その間反応温度を４５〜５０℃に維持する。次いで反応液を室温ま で冷却せしめ、触媒をセライト（celite）パッドで濾去する。濾液から溶媒を除 去し、生成物を黄色固体で得る（５１．４３ｇ、収率９９．６％）。酢酸エチル より結晶化したサンプルの融点１１９℃。赤外分光（KBr）ピーク：３３６８、 １６２８、１５１０および１０２２cm^-1。 この構造を図６に示す。 Fmoc-Phe-Lys(MMT)BHMS の合成 合成の次のステップは、リンカー成分の一部であるBHMSと、そのα−アミノ末 端を９−フルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）基でブロックし、かつリシル 残基のε−アミノ基をモノメトキシトリチル（MMT）基でブロックしたペプチドP he-Lysのカップリングである。塩化メチレン（４００ml）とメタノール（１００ ml）の混合物中のFmoc-Phe-Lys(MMT)-OH(６２．０g、７８．３ミリモル)、ビス( ヒドロキシメチル)p-アミノスチレン(１４．４g、１．１当量)および１−エトキ シカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン(EEDQ)(２８．９g、１ ．５当量)の攪拌溶液を、室温で一夜攪拌させる。溶媒を除去し、残渣をジエチ ルエーテルと共にトリチュレートして、生成物を淡色固体で得る（４７．３g、 収率５０％）。IR(KBr)：３２８４、１６９２、１６４４および１５１０cm^-1。この構造を図６に示す。 H-Phe-Lys(MMT)-BHMS の合成 合成の次のステップは、ペプチドのアミノ末端のFmocブロック基の脱離により 、さらなるカップリングに利用できるアミノ基を生成することである。ジメチル ホルムアミド（１５ml）中のFmoc-Phe-Lys(MMT)-BHMS(２．６６g、２．８１ミリ モ ル)およびジエチルアミン（７ml）の攪拌溶液を、室温で５分間攪拌した後、溶 媒を除去する。残渣をシリカゲルにてクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタ ノール＝９８：２〜９２：８の溶離勾配）に付して、生成物を黄褐色固体で得る （０．７７g、収率３８％）。 この構造を図６に示す。 H-Lys(MMT)-Phe-Lys(MMT)-BHMS の合成 次のステップは、アミノ末端リシル残基の付加である。この付加は、そのα− アミノ末端をFmocでブロックし、ε−アミノ基をモノメトキシトリチル基でブロ ックし、およびカルボキシル基を活性化したリシンを、スクシンイミジル（Su） 成分と反応させることによって行う。乾燥ジメチルホルムアミド（５ml）中のH- Phe-Lys(MMT)-BHMS(０．７７０g、１．０６ミリモル)およびFmoc-Lys(MMT)-OSu( ０．８６０g、１．１当量)の溶液を、室温で２h攪拌させる。次いでこれを酢酸 エチルで希釈し、水洗する。有機相をセライトで濾過し、塩水で洗い、硫酸ナト リウム上で乾燥する。溶媒の除去によって固体を得、これを塩化メチレン（１０ ml）とジエチルアミン（１０ml）の混合物に溶解する。室温で３h後、溶媒を除 去し、残渣をシリカゲルにて、塩化メチレン／メタノール＝９９：１〜９１：９ の溶離勾配を用いるクロマトグラフィーに付して、生成物を黄褐色固体で得る( ０．６６１g、収率５６％）。 この構造を図６に示す。 MP-Lys(MMT)-Phe-Lys(MMT)-BHMS のPNPカーボネート誘導体の合成 次のステップは，ドキソルビシン成分のリンカーへのカップリングのための、 p-ニトロフェニル(PNP)カーボネート誘導体の合成である。同時に、ペプチドの アミノ末端を、N-スクシンイミジル−３−マレイミドプロピオネートとの反応で 活性化する。乾燥ジメチルホルムアミド(５ml)中のH-Lys(MMT)-Phe-Lys(MMT)-BH MS(０．６６１g、０．５９ミリモル)およびN-スクシンイミジル−３−マレイミ ドプロピオネート(０．１７２g、１．１当量)の攪拌混合物を、室温で２h攪拌さ せる。これを酢酸エチルで希釈し、水、塩水で洗い、次いで硫酸ナトリウム上で 乾燥する。溶媒を除去し、残渣を乾燥テトラヒドロフラン（１０ml）に溶解する 。これを氷浴で冷却し、ジイソプロピルエチルアミン（０．８２ml）８当量）、 p-ニトロフェニルクロロホルメート(０．７１３g、６当量)およびピリジン(０． ０２４ml、０．５当量)を加える。反応液を１h攪拌させた後、水を加えて反応を 抑え、塩化メチレンで抽出する。有機抽出物をコンバインし、水、飽和重炭酸ナ トリウム水溶液、水で洗い、次いで硫酸ナトリウム上で乾燥する。溶媒を除去し 、残渣を塩化メチレン（８ml）に溶解する。ジエチルエーテルを加えて沈殿させ 、生成物を黄褐色固体で得る（０．４７２g、収率５０％）。 この構造を図７に示す。 MP-Lys(MMT)-Phe-Lys(MMT)-BHMS-Dox₂ の合成 合成の次のステップは、２つのドキソルビシン成分の活性化リンカーへのカッ プリングである。乾燥ジメチルホルムアミド（９ml）中のMP-Lys(MMT)-Phe-Lys( MMT)-BHMSのp-ニトロフェニルカーボネート誘導体（０．４７２g、０．２９４ミ リモル）およびドキソルビシン塩酸塩（０．３４０g、２当量）の攪拌混合物を 、ジイソプロピルエチルアミン（０．１５３ml、３当量）で処理する。７h後、 溶液を約３mlに濃縮する。次いでこれを、メタノール（２０ml）の攪拌溶液に滴 下する。生成する沈殿物を集め、メタノールおよびジエチルエーテルで洗い、粗 生成物を赤色固体（５２７mg）で得る。これを、メタノール／塩化エチレンの２ ％溶液５mlに溶解し、シリカゲルカラムにてクロマトグラフィー（塩化メチレン ／メチルアルコール＝９９：１〜９３：７の溶離勾配）に付して、純粋物質を赤 色固体で得る（０．３０８g、収率４３％）。 生成構造を図７に示す。 MP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂ の合成 合成の次のステップは、リシン残基のε−アミノ成分上のモノメトキシトリチ ルブロック基の脱離である。塩化メチレン（２０ml）中のMP-Lys(MMT)-Phe-Lys( MMT)-BHMS(Dox)₂(０．３００g、０．１２４ミリモル)およびアニソール(２．７m l、２００当量)の攪拌懸濁液を室温にて、ジクロロ酢酸（０．２０５ml、２０当 量）で処理する。１．５h後、混合物を酢酸エチル（２０ml）に注ぐ。生成物が 微細赤色固体で分離する。これを遠心分離で集め、酢酸エチルで洗い、乾燥する （０．２５２g、収率９５％）。 この生成構造を図８に示す。 CA-SP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂ の合成 合成の最終ステップは、システアミンをマレイミドプロピオニル基と反応させ て、アミノ末端キャップを生成することである。メタノール（１ml）中のシステ アミン塩酸塩（０．０１２g、３．３当量）の溶液に、MP-Lys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂ (０．０６８g、０．０３２ミリモル)を加える。１h後、混合物を濾過し、約０ ．５mlに濃縮する。ジエチルエーテルを加え、沈殿物を遠心分離で集める。これ をジエチルエーテルで洗い、乾燥して生成物を赤色固体で得る(０．０６３g、収 率８８％）。 この構造を図８に示す。 実施例７ 加水分解性プロドラッグの細胞毒性アッセイ 材料と方法 細胞培養： １０％ウシ胎児血清、ペニシリン（１００U/ml）およびストレプトマイシン（ １００μｇ/ml）／５％ CO₂を補充した、３７℃のE-MEM-１０（最小必須培地、 アール塩）に、BT−２０細胞株を維持する。５％ウマ血清、EGF（２０ng/ml）、 インスリン（０．５μｇ/ml）、ヒドロコルチゾン（０．５μｇ/ml）、ペニシリ ン（１００U/ml）およびストレプトマイシン（１００μｇ/ml）／５％CO₂を補充 した、３７℃のDMEM/ハムのF１２に、MCF１０A細胞株を維持する。コーニング（ corning）組織培養のマルチウェル平板（multiwell plates）(２４ウェル／平板 )に、２mlの維持培地中１０⁵細胞／１６mmウェルを播種し、播種の４８h後に再 度栄養補給し、４８h後の細胞毒性アッセイの使用に供え、この場合細胞は丁度 コンフルエンシィ（confluency）に到達する。 水性培地における加水分解性プロドラッグおよび抗癌薬の可溶化 加水分解性プロドラッグ並びに抗癌薬ドキソルビシン、タキソール、マイトマ イシンCおよびカンプトテシンの濃厚ストック（２００mM）を、１００％ジメチ ルスルホキシド中で調製する。ジメチルスルホキシドで３３．３３mMに希釈した 後、E-MEM−０％（血清なしのE-MEM）の添加で部分水和を行って、７５％ジメチ ルスルホキシド／２５％EMEM−０％の溶媒に25mMの薬物またはプロドラッグを生 成する。EMEM−０％中１：１０００の希釈により、DMSOビヒクル濃度０．０７５ ％の２５μＭ濃度を得る。E-MEM−０を用い、２５μＭプレパラートの遂次１： １０希釈を行う。この薬物およびプロドラッグの段階水和は、水性不溶性化合物 の培養中細胞への輸送を容易にする。 細胞毒性アッセイおよびＥ−６４またはCA−０７４による抑制 MCF１０A（低カテプシンB分泌体）およびBT-２０（高カテプシンB分泌体）を 用いる細胞毒性アッセイ・プロトコルおよびL-トランス−エポキシスクシニル− ロイシルアミド（４−グアニド）ブタン（システイン・プロテアーゼ抑制因子） またはCA−０７４〔N-(L−３−トランス−プロピルカルバモイルオキシラン−２ −カルボニル)−L−イソロイシル−L−プロリン〕(特殊なカテプシンB抑制因子) による細胞毒性の抑制を、化合物、モル濃度、暴露時間、および抑制因子の存在 もしくは非存在に関して生じるバリエーションのみで標準化する。栄養補給後に 細胞壁から維持培地を吸引し、細胞を２ml／ウェルのHanks平衡塩溶液 （HBSS）で２回洗う。２回目の洗浄後、１．０mlのE-MEM−０（フェノール赤色 指示薬を持たない培地）は、化学療法作用物質、加水分解性プロドラッグ誘導体 、培養基単独または可溶化ビヒクル対照（０．１％ジメチルスルホキシド）を含 有する。抑制因子を用いるアッセイの場合、抗癌薬または加水分解性プロドラッ グの添加の３０〜６０分前に、E６４、CA-０７４を含有または抑制因子を含有し ないE-MEM-０を加える。細胞壁から培地を吸引し、表示のモル濃度および組合せ において抗癌薬、加水分解性プロドラッグ、抑制因子、培養基単独またはビヒク ル対照を含有する新しいE-MEM-０と交換する。薬物／プロドラッグの添加後表示 の時間にわたって、５％CO₂中３７℃にて培養を継続する。各１．０ml含有のウ ェルに対し、５０μｌの０．５％トリパンブルー／HBSSを加え、平板を穏やかに 渦運動させて、染料を混ぜ、平板を５分間そのままにしておき、次いで死細胞（ ブルーに染まる）の百分率を読む。この例において、以下に示す化合物を用いた ：化合物（１）はAc-Phe-Lys-PABC-Dox；化合物（２）はAc-Phe-Lys-PABC-MMC； 化合物（３）はAc-Phe-Lys-PABC-CPT；化合物（４）はZ-Phe-Lys-PABC-７-パク リタキセル；化合物（５）はCA-SP-Val-Cit-BHMS-Dox₂；化合物（６）はCA-SP-L ys-Phe-Lys-BHMS-Dox₂；化合物（７）はZ-Phe-Lys-Dox；および化合物（８）は ２−ヒドロキシエチルチオ-SP-D-Phe-Lys-PABC-Doxである。これらの化合物にお いて、MMCはマイトマイシンC、CPTはカンプトテシン、Zはベンジルオキシカルボ ニル、CAは２−アミノエチルチオ、SPはスクシンイミドプロピオニル、PABCはp −アミノベンジルカルボニル、およびBHMSはp-NH-Ph-CH=C(CH₂OCO-)₂である。 図９に示す結果において、プロドラッグを１００μＭで用い、CA-０７４（カ テプシンB-特異的抑制因子）を４０μＭで用い、BT−２０（高カテプシンB分泌 細胞）およひびMCF−１０（低カテプシンB分泌細胞）を用い、化合物（１），（ ２），（７）および（８）に対して２４時間の細胞死（cell kill）％を示す。 ２５μＭ薬物の各実験において、化合物（１）および（２）の４μＭ−CA−０７ ４による抑制率はそれぞれ、６０％および７５％であった。これらの結果から、 高カテプシンB分泌細胞は、低カテプシンB分泌細胞と比べてより容易に殺される ことが認められる。高カテプシンB分泌細胞の細胞殺は、CA-０７４によって抑制 される。 低カテプシンB分泌細胞の細胞殺は、CA-０７４によって抑制されない。このこと は、たとえ効果がなくても、低分泌体の細胞殺に帰すると考えられるか、これは 外部に分泌したカテプシンBの活性の結果としてでなく、むしろ全ての細胞がカ テプシンBを持つリソソーム内での薬物の非特異的なエンドサイトーシスによる ものである。CA−０７４はこの細胞殺を抑制しないが、その理由は、それがリソ ソームに入らないからである。化合物（７）および（８）は、化合物（１）およ び（２）より細胞毒性の弱い作用物質である対照化合物である。何故なら、それ らはその個々の構造のため、活性薬物に対するカテプシンB仲介加水分解の影響 を受ける可能性が少ないからである。化合物（７）は、酵素開裂を容易にするPA BC-自己犠牲リンカーがなく、かさばるドキソルビシン成分をカテプシンBの活性 部位に置く可能性のある立体障害をもたらす。化合物（８）は、自然なL-配置の 代わりに不自然なDにアミノ酸を有する。 図１０には、BT−２０細胞について各種の時間およびプロドラッグ濃度におけ る細胞殺％が示されている。４０μＭで存在するCA-０７４の結果を（ ）内に 記す。結果から、全ての試験化合物は、用量および時間に依存するBT−２０（＋ カテプシンB）の細胞殺を示すことが認められる。カテプシンB抑制因子CA−０７ ４は、細胞毒性を強く抑制する。化合物（８）はD配置にアミノ酸を含有する化 合物であるが、これは活性が極めて低い。 図１１に示す結果は、BT-２０（高カテプシンB分泌）細胞およびMCF−１０A（ 低カテプシンB分泌）細胞の両方に関して、化合物（６）を用いた各種時間およ びプロドラッグ濃度の細胞殺％である。（ ）内の結果は、E-６４（１０μＭ） ，広域スペクトルシステイン・プロテアーゼ抑制因子を加えた場合である。（他 の実験により、E−６４および培養基単独は、２４時間後にBT-２０の１０％細胞 殺を起すことが認められる。） これらの結果から、２つのドキソルビシン成分がプロドラッグに結合した化合 物（６）は、用量および時間に依存するBT-２０（高カテプシンB分泌）の細胞殺 を起すことが認められる。MCF−１０A（低カテプシンB分泌）の細胞殺の効果は 、非常に少ない。システイン・プロテアーゼ抑制因子E-６４は、細胞毒性を強く 抑制する。 最後に、腫瘍細胞は実際に、十分なカテプシンBを分泌して十分な細胞毒性薬 を放出し、細胞を有効に殺す。カテプシンBの分泌が少ない腫瘍細胞は、加水分 解性プロドラッグに対して抵抗する。これらの細胞は、カテプシンBを全く分泌 しない正常な細胞の代理である。カテプシンB抑制因子は、プロドラッグの細胞 毒性を強く減少させ、このことは、カテプシンBがプロドラッグの非マスキング （unmasking）の主な手段であることを示す。自己犠牲リンカーPABCまたはBHMS がないプロドラッグは、細胞毒性が非常に低く、このことは、それが活性薬物を 放出する酵素、思うにカテプシンBであることを示す。その理由は、自己犠牲リ ンカーが無いと立体障害をもたらすからである。加えて、不自然なD配置にアミ ノ酸を持つプロドラッグは細胞毒性が非常に低く、これもカテプシンBの役割を 示す。 実施例８ 加水分解性プロドラッグの安定性 図１２に、PABC−自己犠牲リンカーを用いてドキソルビシンに結合した、本発 明に係る幾つかの加水分解性プロドラッグの安定性を示す。こられの加水分解性 プロドラッグは、カテプシンB触媒作用下３７℃、pH７．４にて、抗癌薬を妥当 な速度で放出し、かつ同条件下新たに引抜いたヒトプラスマ中に何日もあるいは 何週間も安定である。 発明の利点 本発明は、ペプチド加水分解酵素を表面に分泌する癌細胞、特に転移細胞を処 置する有効な方法を提供する。本発明の加水分解性プロドラッグは、多種の転移 に対して使用でき、かつその活性は、転移によって分けられない一次腫瘍細胞の 特性に依存しない。本発明の加水分解性プロドラッグは、容易に吸収されかつ毒 性がない。 本発明の特定の好ましいバージョンに関してかなり詳しく説明したが、他のバ ージョンも可能である。すなわち、添付の請求の範囲の精神および技術的範囲は 、本明細書にある好ましいバージョンの記載に限定されるべきではない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 5/09 Ｃ０７Ｋ 5/09 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ， ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｇ Ｅ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．立体障害の発生を防止するのに十分な長さの自己犠牲スペーサーを介して 治療薬に共有結合し、末端アミノ基をキャップしたペプチドから成り、該末端ア ミノ基をキャップしたペプチドは、転移細胞の表面に位置するペプチド加水分解 酵素の基質であることを特徴とする加水分解性プロドラッグ。 ２．ペプチド加水分解酵素が、カテプシンBおよびコラーゲナーゼIVの群から 選ばれる請求の範囲１に記載の加水分解性プロドラッグ。 ３．ペプチド加水分解酵素がカテプシンBである請求の範囲２に記載の加水分 解性プロドラッグ。 ４．末端アミノ基をキャップしたペプチドが、ベンジルオキシカルボニルフェ ニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボニルバリニルリシン、D-フェニルア ラニルフェニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボニルバリニルシトルリン 、t-ブチルオキシルカルボニルフェニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボ ニルアラニルアルギニルアルギニン、ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニ ル-N−トシルアルギニン、２-アミノエチルチオ-スクシンイミドプロピオニルバ リニルシトルリン、２-アミノエチルチオ-スクシンイミドプロピオニルリシルフ ェニルアラニルリシン、アセチルフェニルアラニルリシン、またはベンジルオキ シカルボニルフェニルアラニル−O-ベンゾイルトレオニンである請求の範囲３に 記載の加水分解性プロドラッグ。 ５．末端アミノ基をキャップしたペプチドが、ベンジルオキシカルボニルフェ ニルアラニルリシンである請求の範囲４に記載の加水分解性プロドラッグ。 ６．末端アミノ基をキャップしたペプチドが、アセチルフェニルアラニルリシ ンである請求の範囲４に記載の加水分解性プロドラッグ。 ７．末端アミノ基をキャップしたペプチドが、２−アミノエチルチオ−スクシ ンイミドプロピオニルバリニルシトルリンである請求の範囲４に記載の加水分解 性プロドラッグ。 ８．末端アミノ基をキャップしたペプチドが、２−アミノエチルチオ−スクシ ンイミドプロピオニルリシルフェニルアラニルリシンである請求の範囲４に記載 の加水分解性プロドラッグ。 ９．治療薬が抗癌薬である請求の範囲１に記載の加水分解性プロドラッグ。 １０．抗癌薬が、ドキソルビシン、マイトマイシンC、タキソール、エスペラ マイシンまたはカンプトテシンである請求の範囲９に記載の加水分解性プロドラ ッグ。 １１．抗癌薬がドキソルビシンである請求の範囲１０に記載の加水分解性プロ ドラッグ。 １２．自己犠牲スペーサーが、p−アミノベンジルカルボニルおよびp−NH-Ph −CH=(CH₂OCO-)₂の群から選ばれる請求の範囲１に記載の加水分解性プロドラッ グ。 １３．スペーサーがp−アミノベンジルカルボニルである請求の範囲１１に記 載の加水分解性プロドラッグ。 １４．治療薬に共有結合したコロニーの設立において転移細胞が付着するタン パク質から誘導されたペプチドをさらに包含する請求の範囲１に記載の加水分解 性プロドラッグ。 １５．ペプチドが、RGD−誘導活性ペプチドまたはYIGSR−誘導活性ペプチドで ある請求の範囲１４に記載の加水分解性プロドラッグ。 １６．ペプチドが、YIGSR(SEQ ID NO:1)またはGRGDS(SEQ ID NO:2)である請求 の範囲１４に記載の加水分解性プロドラッグ。 １７．ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジ ルカルバモイルドキソルビシン。 １８．アセチルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジルカルバモイルド キソルビシン。 １９．アセチルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジルカルバモイルマ イトマイシンC。 ２０．ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジ ルカルボニル−７−パクリタキセル。 ２１．アセチルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジルカルボニルカン プトテシン。 ２２．２−アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピオニル−バリニルシトル リニル−ビス（ヒドロキシメチル）スチリル−ビス−ドキソルビシン。 ２３．２−アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピオニル−リシルフェニル アラニルリシル−ビス（ヒドロキシメチル）スチリル−ビス−ドキソルビシン。 ２４．ベンジルオキシカルボニルバリニルリシル−p−アミノベンジルカルバ モイルドキソルビシン。 ２５．D−フェニルアラニルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジルカル バモイルドキソルビシン。 ２６．ベンジルオキシカルボニルバリニルシトルリニル−p−アミノベンジル カルバモイルドキソルビシン。 ２７．治療薬を転移細胞に輸送する方法であって、 （a）立体障害の発生を防止するのに十分な長さの自己犠牲スペーサーを介し て治療薬に共有結合し、末端アミノ基をキャップしたペプチドからなる加水分解 性プロドラッグを、転移細胞と接触させ（ここで、末端アミノ基をキャップした ペプチドは、転移細胞の表面に位置するペプチド加水分解酵素の基質である）； （b）転移細胞の表面に位置するペプチド加水分解酵素が加水分解性プロドラ ッグを加水分解するのを可能ならしめ、かつ該プロドラッグから治療薬を放出せ しめ；次いで （c）治療薬が転移細胞に入るのを可能ならしめる 工程からなる方法。 ２８．ペプチド加水分解酵素が、カテプシンBおよびコラーゲナーゼIVの群か ら選ばれる請求の範囲２７に記載の方法。 ２９．ペプチド加水分解酵素がカテプシンBである請求の範囲２８に記載の方 法。 ３０．末端アミノ基をキャップしたペプチドが、ベンジルオキシカルボニルフ ェニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボニルバリニルリシン、D-フェニル アラニルフェニルアラニルリシン、ベンジルオキシカルボニルバリニルシトルリ ン、t−ブチルオキシカルボニルフェニルアラニルリシン、ベンジルオキシカル ボニルアラニルアルギニルアルギニン、ベンジルオキシカルボニルフェニルアラ ニル−N−トシルアルギニン、２−アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピオ ニルバリニルシトルリン、２−アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピオニル リシルフェニルアラニルリシン、アセチルフェニルアラニルリシン、またはベン ジルオキシカルボニルフェニルアラニル−O−ベンゾイルトレオニンである請求 の範囲２９に記載の方法。 31．末端アミノ基をキャップしたペプチドがベンジルオキシカルボニルフェニ ルアラニルリシンである請求の範囲30に記載の方法。 ３２．末端アミノ基をキャップしたペプチドがアセチルフェニルアラニルリシ ンである請求の範囲３０に記載の方法。 ３３末端アミノ基をキャップしたペプチドが２−アミノエチルチオ−スクシン イミドプロピオニルバリニルシトルリンである請求の範囲３０に記載の方法。 ３４．末端アミノ基をキャップしたペプチドが２−アミノエチルチオ−スクシ ンイミドプロピオニルリシルフェニルアラニルリシンである請求の範囲３０に記 載の方法。 ３５．治療薬が抗癌薬である請求の範囲２７に記載の方法。 ３６．抗癌薬が、ドキソルビシン、マイトマイシンC、タキソール、エスペラ マイシン、またはカンプトテシンである請求の範囲３５に記載の方法。 ３７．抗癌薬がドキソルビシンである請求の範囲３６に記載の方法。 ３８．スペーサーが、p−アミノベンジルカルボニルおよびp−NH−Ph−CH＝(C H₂OCO-)₂の群から選ばれる請求の範囲２７に記載の方法。 ３９．スペーサーがp−アミノベンジルカルボニルである請求の範囲３８に記 載の方法。 ４０．加水分解性プロドラッグがさらに、治療薬に共有結合したコロニーの設 立において転移細胞が付着するタンパク質から誘導されたペプチドを包含する請 求の範囲２７に記載の方法。 ４１．ペプチドが、RGD−誘導活性ペプチドまたはYIGSR−誘導活性ペプチドで ある請求の範囲４０に記載の方法。 ４２．ペプチドが、YIGSR(SEQ ID NO:1)またはGRGDS(SEQ ID NO:2)である請 求の範囲４１に記載の方法。 ４３．加水分解性プロドラッグが、ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニ ルリシル−p−アミノベンジルカルバモイルドキソルビシン、アセチルフェニル アラニルリシル−p−アミノベンジルカルバモイルドキソルビシン、アセチルフ ェニルアラニルリシル−p−アミノベンジルカルバモイルマイトマイシンC、ベン ジルオキシカルボニルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジルカルボニル −７−パクリタキセル、アセチルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジル カルボニルカンプトテシン、２−アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピオニ ル−バリニルシトルリニル−ビス(ヒドロキシメチル)スチリル−ビス−ドキソル ビシン、２−アミノエチルチオ−スクシンイミドプロピオニル−リシルフェニル アラニルリシル−ビス(ヒドロキシメチル)スチリル−ビス−ドキソルビシン、ベ ンジルオキシカルボニルバリニルリシル−p−アミノベンジルカルバモイルドキ ソルビシン、D-フェニルアラニルフェニルアラニルリシル−p−アミノベンジル カルバモイルドキソルビシン、またはベンジルオキシカルボニルバリニルシトル リニル−p−アミノベンジルカルバモイルドキソルビシンである請求の範囲２７ に記載の方法。 ４４．(a)請求の範囲１に記載の加水分解性プロドラッグ；および (b)医薬的に許容しうる担体 から成る医薬組成物。 ４５．加水分解性プロドラッグがさらに、治療薬に共有結合したコロニーの設 立において転移細胞が付着するタンパク質から誘導されたペプチドを包含する請 求の範囲４４に記載の医薬組成物。 ４６．ペプチドが、RGD−誘導活性ペプチドまたはYIGSR−誘導活性ペプチドで ある請求の範囲４５に記載の医薬組成物。 ４７．ペプチドが、YIGSR(SEQ ID NO:1)またはGRGDS(SEQ ID NO:2)である請求 の範囲４６に記載の医薬組成物。