JP2001275657A - Culture medium for detecting staphylococcus aureus - Google Patents
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】卵黄液を添加しなくても、黄色ブドウ球菌を特
異的に発色して検出できる簡易培地を提供する。
【解決手段】亜テルル酸塩、塩化ナトリウムおよびバシ
トラシンを必須成分とし、ペプトン、酵母エキスおよび
肉エキスからなる群から選ばれる１種以上の栄養成分、
リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムお
よび炭酸カリウムからなる群から選ばれる１種以上の
塩、及び塩化リチウム、グリシンおよびマンニットから
なる群から選ばれる１種以上の成分を含む、ゲル化剤に
より固化した培地、多孔質マトリックス層と１〜７層の
水溶性高分子化合物層を含む積層物である培地積層物お
よびこの培地積層物を粘着シートと透明フィルムとの間
に挟み密閉できる構造としたシート状培地。(57) [Problem] To provide a simple medium capable of specifically detecting and detecting Staphylococcus aureus without adding yolk fluid. SOLUTION: One or more nutrients selected from the group consisting of peptone, yeast extract and meat extract, comprising tellurite, sodium chloride and bacitracin as essential components,
A gelling agent comprising one or more salts selected from the group consisting of potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate, and one or more components selected from the group consisting of lithium chloride, glycine and mannitol A solidified medium, a laminated medium comprising a porous matrix layer and 1 to 7 water-soluble polymer layers, and a structure capable of sealing the medium laminated between an adhesive sheet and a transparent film. Sheet medium.
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は微生物を培養検出す
るための微生物培地に関する。さらに詳しくは食品や環
境中の黄色ブドウ球菌を培養検出するための微生物培地
に関する。The present invention relates to a microorganism culture medium for culturing and detecting microorganisms. More specifically, the present invention relates to a microorganism medium for culturing and detecting Staphylococcus aureus in food and the environment.
【０００２】[0002]
【従来の技術】黄色ブドウ球菌の検査には、マンニット
食塩卵黄寒天培地や食塩卵黄寒天培地が広く使われてい
る。これらの培地は塩化リチウムと高濃度（７〜７．５
％）の塩化ナトリウムによって選択性を与えられてい
る。黄色ブドウ球菌が高濃度の塩化ナトリウムに耐性で
あることに基づいているが、黄色ブドウ球菌も菌株によ
っては、上記濃度の塩化ナトリウム存在下では生育しな
いことがしばしば認められるし、また熱や凍結により損
傷を受けた菌でも同様である。また、マンニットの分解
性と卵黄反応により黄色ブドウ球菌であることを推定す
るため、培地調製時に卵黄液の添加が必須となるが、こ
の従来から行われている黄色ブドウ球菌の検査法は次に
示すように非常に手間のかかる作業を必要とするもので
ある。2. Description of the Related Art Mannitol salt egg yolk agar medium and salt egg yolk agar medium are widely used for testing for Staphylococcus aureus. These mediums have a high concentration of lithium chloride (7-7.5).
%) Of sodium chloride. Although Staphylococcus aureus is based on its resistance to high concentrations of sodium chloride, it is often observed that some strains of Staphylococcus aureus do not grow in the presence of the above concentrations of sodium chloride, The same applies to damaged bacteria. In addition, the addition of egg yolk liquid is essential at the time of medium preparation in order to estimate the presence of Staphylococcus aureus by the degradability of mannitol and the yolk reaction. As shown in (1), it requires extremely troublesome work.
【０００３】即ち、マンニット食塩寒天培地、食塩寒天
培地などの粉末寒天培地を溶解、滅菌した後、約４５℃
程度まで冷却後、生卵を無菌的に卵黄と卵白に分離し、
卵黄に１０％滅菌食塩水を等量加えて調製した卵黄液を
加え撹拌して、滅菌ペトリ皿等に分注し固化し、寒天培
地の表面をある程度乾燥しておく。次いで食品等に滅菌
生理食塩水またはペプトン添加滅菌生理食塩水を加え、
ストマッカーなどを用いてホモジナイズした懸濁液、ま
たは適宜希釈した試料液を寒天培地上に塗布して、３５
〜３７℃で２４〜４８時間培養する。そして最後に、黄
色ブドウ球菌と疑われる集落を釣菌して、普通寒天培地
またはハートインヒュージョン培地で培養後、コアグラ
ーゼ試験、クランピングファクター試験等を行い同定す
るものである。このような従来の微生物培養方法では、
培地添加剤を無菌的に調製したり、滅菌した後培地添加
剤が変性しない温度まで冷やしてから添加剤を加えるな
ど、非常に時間と手間がかかっていた。That is, a powder agar medium such as a mannitol salt agar medium or a salt agar medium is dissolved and sterilized.
After cooling to a degree, the raw egg is aseptically separated into yolk and egg white,
An egg yolk solution prepared by adding an equal volume of 10% sterile saline to the yolk is added, stirred, dispensed into a sterilized petri dish or the like, solidified, and the surface of the agar medium is dried to some extent. Next, sterile saline or peptone-added sterile saline is added to the food, etc.
A suspension homogenized using a stomacher or the like or a sample solution appropriately diluted was applied on an agar medium, and the suspension was applied to the agar medium.
Incubate at ~ 37 ° C for 24-48 hours. Finally, colonies suspected to be Staphylococcus aureus are picked, cultured on a normal agar medium or a heart-infusion medium, and then identified by performing a coagulase test, a clamping factor test, or the like. In such a conventional microorganism culture method,
It took a lot of time and effort to prepare the medium additive aseptically, cool it to a temperature at which the medium additive did not denature after sterilization, and then add the additive.
【０００４】また、塩化リチウムと亜テルル酸の選択性
を利用し、黄色ブドウ球菌の亜テルル酸の還元による黒
色集落の形成と卵黄反応による集落の周囲の透明帯によ
り推定するベアードパーカー寒天培地も海外でよく用い
られている。この培地は比較的選択性がよいといわれて
いるが、推定に卵黄反応を利用しているため、卵黄液の
添加が必要となる。また、この培地により黄色ブドウ球
菌と推定された集落はコアグラーゼ試験などにより鑑別
同定する必要がある。[0004] Further, Baird Parker agar medium, which utilizes the selectivity of lithium chloride and tellurite to estimate the formation of black colonies by the reduction of tellurite of Staphylococcus aureus and the clear zone around the colonies by the yolk reaction, is also known. It is often used overseas. It is said that this medium has relatively good selectivity, but since the yolk reaction is used for estimation, it is necessary to add an egg yolk solution. In addition, a colony estimated to be Staphylococcus aureus by this medium needs to be differentially identified by a coagulase test or the like.
【０００５】より簡便、迅速に微生物培養検査を行うた
めには、上述のような、手間と時間のかかる培地の調製
が省けることが好ましい。また、滅菌ペトリ皿として、
ガラス製やプラスチック製のペトリ皿が使用されている
が、食品検査の場合には、多数の微生物培養検査を行う
必要があり、ガラス製ペトリ皿を培養に使用した場合に
は、再使用のためにペトリ皿の洗浄、滅菌等を行わなけ
ればならない。これは非常に手間がかかるため、近年
は、廃棄ができる滅菌済プラスチック製ペトリ皿が利用
されるようになってきた。しかし、この場合には、多量
のプラスチック廃棄物となることから処分等で問題とな
っていた。[0005] In order to carry out a microorganism culture test more simply and quickly, it is preferable to omit the time-consuming and time-consuming preparation of a culture medium as described above. Also, as a sterile Petri dish,
Glass and plastic petri dishes are used, but in the case of food inspection, a large number of microbial culture tests must be performed.If glass petri dishes are used for culture, they can be reused. The petri dishes must be washed and sterilized. This is very labor intensive, and in recent years, disposable sterile plastic Petri dishes have been used. However, in this case, since a large amount of plastic waste is generated, there is a problem in disposal and the like.
【０００６】また、環境及び手指の微生物検査で黄色ブ
ドウ球菌の測定を行う場合には、通常、検査対象の一定
面積をガーゼまたは綿棒でふき取り、この綿棒を滅菌生
理食塩水中またはペプトン添加滅菌生理食塩水で洗い、
綿棒に付着した菌体を滅菌生理食塩水またはペプトン添
加滅菌生理食塩水に懸濁させ、この懸濁液をあらかじめ
作製しておいた固形寒天培地に塗布して、３５〜３７℃
で２４〜４８時間培養した後、黄色ブドウ球菌と疑われ
る集落を釣菌して、普通寒天培地またはハートインヒュ
ージョン培地で培養後、コアグラーゼ試験、クランピン
グファクター試験等を行い同定する方法が行われてきて
おり、この場合も非常に手間と時間がかかっていた。[0006] When measuring Staphylococcus aureus by microbiological examination of the environment and fingers, usually, a predetermined area of the test object is wiped with a gauze or a cotton swab, and the cotton swab is sterilized in sterile saline or sterile saline with peptone. Wash with water,
The cells adhered to the swab are suspended in sterile physiological saline or sterile physiological saline with added peptone, and this suspension is applied to a solid agar medium prepared beforehand, and then heated to 35 to 37 ° C.
After culturing for 24 to 48 hours, a colony suspected to be Staphylococcus aureus is picked, cultured on a normal agar medium or a heart-infusion medium, and subjected to a coagulase test, a clamping factor test, and the like, and a method of identification is performed. And again this was very laborious and time consuming.
【０００７】本発明者等は再公表公報ＷＯ９７／２４４
３２号で、多孔質マトリックス層と水溶性高分子化合物
層からなるシートまたはフィルム状の培養容器または培
地を開示した。これは通常の食品検査に加え、拭き取り
による検査など様々な用途に使え、廃棄も容易で、定量
性のある微生物培養器および微生物培地を提案するもの
であったが、卵黄反応を利用する培地をこのような形態
に構成するにはかなりの困難を伴い、またそのような培
地を製造しても多孔質マトリックスを用いているため卵
黄反応が観察しにくい欠点があった。[0007] The present inventors have republished WO 97/244.
No. 32 discloses a sheet or film-shaped culture vessel or medium comprising a porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer. This proposed a microbial incubator and a microbial medium that can be used for various purposes such as wiping in addition to normal food inspection, and that can be easily disposed of. There is a considerable difficulty in constructing such a form, and even when such a medium is produced, there is a disadvantage that the egg yolk reaction is difficult to observe because a porous matrix is used.
【０００８】[0008]
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、卵黄
液を添加しなくとも容易に黄色ブドウ球菌を検出できる
培地を提供することにあり、また多孔質マトリックス層
と水溶性高分子化合物層とからなる培地積層物およびそ
れを用いたシート状培地とすることによって、黄色ブド
ウ球菌を特異的に発色して検出できる簡易微生物培地を
提供することにある。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide a medium in which Staphylococcus aureus can be easily detected without adding an egg yolk solution, and a porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer are provided. The present invention provides a simple microorganism culture medium capable of specifically developing and detecting Staphylococcus aureus by forming a culture medium laminate comprising the following and a sheet culture medium using the same.
【０００９】[0009]
【課題を解決するための手段】従来から臨床材料の黄色
ブドウ球菌検査に用いられているフォーゲルジョンソン
培地は、トリプトン、酵母菌エキス、マンニット、第二
リン酸カリウム、塩化リチウム、グリシン、フェノール
レッド、亜テルル酸塩および寒天を構成要素とする培地
であって卵黄添加の必要はない。しかしながら、本発明
者らの試験によれば、食品の黄色ブドウ球菌検出にこの
培地を用いた場合、黄色ブドウ球菌以外の多種の菌が生
育し黒色集落を形成しなかった。更に、塩化ナトリウム
および抗生物質バシトラシンが、それぞれ単独では黄色
ブドウ球菌の生育を阻害しない濃度では十分な選択性を
示さないことも分かった。本発明者らは、上記課題を解
決するべく更に研究を重ねた結果、フォーゲルジョンソ
ン培地またはその類似組成の培地に塩化ナトリウムとバ
シトラシンを組み合わせて添加すると、黄色ブドウ球菌
は黒色集落を形成し、黄色ブドウ球菌以外の微生物は生
育しないか生育しても黒色集落とならないことを見いだ
し所期の目的が達成されることを知った。また、卵黄を
添加する必要がないことにより、前記ＷＯ９７／２４４
３２号公報の発明を応用することが可能になった。即
ち、本発明は下記のような構成からなるものである。The Vogel-Johnson medium conventionally used for testing Staphylococcus aureus on clinical materials is composed of tryptone, yeast extract, mannitol, dibasic potassium phosphate, lithium chloride, glycine, phenol red. , Tellurite and agar as constituents and do not require the addition of yolk. However, according to the test of the present inventors, when this medium was used for detecting Staphylococcus aureus in foods, various bacteria other than Staphylococcus aureus grew and did not form black colonies. Furthermore, it was also found that sodium chloride and the antibiotic bacitracin alone did not show sufficient selectivity at concentrations that did not inhibit the growth of S. aureus. The present inventors have further studied to solve the above-mentioned problems, and as a result, when sodium chloride and bacitracin are added in combination to Vogel Johnson medium or a medium having a similar composition, Staphylococcus aureus forms a black colony, Microorganisms other than staphylococci did not grow or did not become black colonies even when they grew, and they knew that the intended purpose was achieved. Also, since there is no need to add egg yolk, the above-mentioned WO97 / 244 is not required.
It became possible to apply the invention of Japanese Patent No. 32. That is, the present invention has the following configuration.
【００１０】（１）亜テルル酸塩、塩化ナトリウムおよ
びバシトラシンを必須成分として含むことを特徴とする
黄色ブドウ球菌検出用培地。(1) A medium for detecting Staphylococcus aureus, characterized by containing tellurite, sodium chloride and bacitracin as essential components.
【００１１】（２）ペプトン、酵母エキスおよび肉エキ
スからなる群から選ばれる１種以上の栄養成分、リン酸
カリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび炭
酸カリウムからなる群から選ばれる１種以上の塩、及び
塩化リチウム、グリシンおよびマンニットからなる群か
ら選ばれる１種以上の成分を含むことを特徴とする、前
記（１）項に記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。(2) One or more nutrients selected from the group consisting of peptone, yeast extract and meat extract, and one or more salts selected from the group consisting of potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate , And at least one component selected from the group consisting of lithium chloride, glycine, and mannitol.
【００１２】（３）ゲル化剤を用いて固化した培地であ
って、該培地１０００ｍｌ当たり、０．０５〜０．５ｇ
の亜テルル酸塩、１０〜２０ｇの塩化ナトリウムおよび
０．１〜１０ｍｇのバシトラシンを含有することを特徴
とする、前記（１）または（２）項に記載の黄色ブドウ
球菌検出用培地。(3) A medium solidified using a gelling agent, wherein 0.05 to 0.5 g per 1000 ml of the medium.
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above (1) or (2), comprising: tellurite, 10 to 20 g of sodium chloride and 0.1 to 10 mg of bacitracin.
【００１３】（４）培地１０００ｍｌ当たり、５〜１５
ｇのペプトン、２〜１０ｇの酵母エキス、２．５〜７．
５ｇの塩化リチウム、５〜１５ｇのグリシン、２．５〜
７．５ｇのリン酸カリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナ
トリウムおよび炭酸カリウムからなる群から選ばれる１
種以上の塩、および任意の成分として５〜１５ｇのマン
ニットを含むことを特徴とする、前記（３）項に記載の
黄色ブドウ球菌検出用培地。(4) 5 to 15 cells per 1000 ml of medium
g peptone, 2-10 g yeast extract, 2.5-7.
5 g lithium chloride, 5-15 g glycine, 2.5-
1 selected from the group consisting of 7.5 g of potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate
(4) The medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above (3), which contains at least one or more kinds of salts and 5 to 15 g of mannitol as an optional component.
【００１４】（５）培地が、多孔質マトリックス層と１
〜７層の水溶性高分子化合物層を含み、多孔質マトリッ
クス層から最も離れた側の水溶性高分子化合物層に接し
て台紙を含んでもよい積層物であることを特徴とする、
前記（１）または（２）項に記載の黄色ブドウ球菌検出
用培地。(5) The medium comprises a porous matrix layer and one
A water-soluble polymer compound layer comprising up to 7 layers, and a laminate that may include a mount in contact with the water-soluble polymer compound layer on the side farthest from the porous matrix layer,
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above (1) or (2).
【００１５】（６）水溶性高分子化合物層が、積層物に
対する合計の目付で０．０２５〜０．５ｇ／ｍ2の亜テ
ルル酸塩、５〜１５ｇ／ｍ2の塩化ナトリウムおよび
０．０５〜１０ｍｇ／ｍ2のバシトラシンを含有するこ
とを特徴とする、前記（５）項に記載の黄色ブドウ球菌
検出用培地。[0015] (6) water-soluble polymer compound layer, tellurite of 0.025~0.5g / m 2 in basis weight of the sum for laminates, sodium chloride 5 to 15 g / m 2 and 0.05 The medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above (5), which comprises 10 to 10 mg / m 2 of bacitracin.
【００１６】（７）水溶性高分子化合物層が、積層物に
対する合計の目付で２．５〜１５ｇ／ｍ2のペプトン、
１〜１０ｇ／ｍ2の酵母エキス、１．２５〜５ｇ／ｍ2の
塩化リチウム、２．５〜１０ｇ／ｍ2のグリシン、２．
５〜１０ｇ／ｍ2のマンニット、１．２５〜５ｇ／ｍ2の
リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムお
よび炭酸カリウムからなる群から選ばれる１種以上の
塩、および任意成分としての１〜１０ｇ／ｍ2の肉エキ
スを含有することを特徴とする、前記（６）項に記載の
黄色ブドウ球菌検出用培地。(7) a water-soluble polymer compound layer having a total basis weight of 2.5 to 15 g / m 2 of peptone;
1 to 10 g / m 2 of yeast extract, lithium chloride 1.25~5g / m 2, the 2.5~10g / m 2 glycine, 2.
Mannit of 5 to 10 g / m 2 , 1.25 to 5 g / m 2 of potassium phosphate, sodium phosphate, one or more salts selected from the group consisting of sodium carbonate and potassium carbonate, and 1 as an optional component The medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above (6), which comprises a meat extract of 10 to 10 g / m 2 .
【００１７】（８）水溶性高分子化合物層が２〜６層で
あることを特徴とする、前記（５）〜（７）のいずれか
１項に記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。(8) The medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of (5) to (7), wherein the number of the water-soluble polymer compound layers is two to six.
【００１８】（９）水溶性高分子化合物層に含まれる水
溶性高分子化合物が、鹸化度７５〜９５％、分子量２５
０００〜２５００００のポリビニルアルコールであるこ
とを特徴とする、前記（５）〜（８）のいずれか１項に
記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。(9) The water-soluble polymer compound contained in the water-soluble polymer compound layer has a saponification degree of 75 to 95% and a molecular weight of 25.
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of (5) to (8), which is 2,000 to 250,000 polyvinyl alcohol.
【００１９】（１０）多孔質マトリックス層に接する水
溶性高分子化合物層が目付１〜２０ｇ／ｍ2の水溶性高
分子化合物を含むことを特徴とする、前記（５）〜
（９）のいずれか１項に記載の黄色ブドウ球菌検出用培
地。(10) The water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer contains a water-soluble polymer compound having a basis weight of 1 to 20 g / m 2.
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of (9).
【００２０】（１１）多孔質マトリックスとして目付４
０〜１００ｇ／ｍ2、通気度７０〜２４０Ｌ／（ｍ2・ｓ
ｅｃ）のナイロンメルトブロー不織布が用いられている
ことを特徴とする、前記（５）〜（１０）のいずれか１
項に記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。(11) The basis weight of the porous matrix is 4
0-100 g / m 2 , air permeability 70-240 L / (m 2 s
ec), wherein the nylon melt-blown nonwoven fabric is used.
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to Item.
【００２１】（１２）多孔質マトリックス層が塩化ナト
リウム、亜テルル酸塩、ペプトン、酵母エキス、塩化リ
チウム、グリシン、マンニット、リン酸カリウム、リン
酸ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウムから
なる群から選ばれる１種以上の成分を保持していること
を特徴とする、前記（５）〜（１１）のいずれか１項に
記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。(12) The porous matrix layer is selected from the group consisting of sodium chloride, tellurite, peptone, yeast extract, lithium chloride, glycine, mannitol, potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate. The medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of the above (5) to (11), characterized by holding one or more components.
【００２２】（１３）多孔質マトリックス層が保持して
いる塩化ナトリウム、亜テルル酸塩、ペプトン、酵母エ
キス、塩化リチウム、グリシン、マンニット、リン酸カ
リウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸
カリウムからなる群から選ばれる１種以上の成分の合計
量が、目付０．３〜３ｇ／ｍ2であることを特徴とす
る、前記（１２）項に記載の黄色ブドウ球菌検出用培
地。(13) From the sodium chloride, tellurite, peptone, yeast extract, lithium chloride, glycine, mannite, potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate held by the porous matrix layer The medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above (12), wherein the total amount of one or more components selected from the group consisting of the following is 0.3 to 3 g / m 2 .
【００２３】（１４）前記（５）〜（１３）のいずれか
１項に記載の培地が、該培地より大きな粘着シートの中
心部に多孔質マトリックス層が上になるように接着さ
れ、その上に該培地より大きな透明フィルムが多孔質マ
トリックス層に接しかつ該培地と中心部を合わせるよう
に被せられ、この透明フィルムの該培地からはみ出して
いる部分が粘着シートの該培地によって覆われていない
部分と接着されていることを特徴とする黄色ブドウ球菌
検出用シート状培地。(14) The medium according to any one of the above (5) to (13) is adhered to a central portion of a pressure-sensitive adhesive sheet larger than the medium so that a porous matrix layer faces upward. A transparent film larger than the culture medium is covered so as to be in contact with the porous matrix layer and to align the center with the culture medium, and a portion of the transparent film protruding from the culture medium is not covered with the culture medium of the adhesive sheet. A sheet medium for detecting Staphylococcus aureus, characterized by being adhered to the medium.
【００２４】（１５）粘着シートがアクリル系粘着剤ま
たはゴム系粘着剤を塗布した、ポリエステルフィルム、
白色ポリエステルフィルム、ポリオレフィン系合成紙ま
たはポリオレフィンラミネート紙であり、透明フィルム
がポリオレフィンフィルムまたは剥離処理ポリオレフィ
ンフィルムであることを特徴とする、前記（１４）項に
記載の黄色ブドウ球菌検出用シート状培地。(15) A polyester film, wherein the adhesive sheet is coated with an acrylic adhesive or a rubber adhesive.
(14) The sheet-shaped medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above (14), which is a white polyester film, a polyolefin-based synthetic paper or a polyolefin-laminated paper, and wherein the transparent film is a polyolefin film or a release-treated polyolefin film.
【００２５】（１６）粘着シートの厚さが０．０７〜
０．５ｍｍであり、透明フィルムの厚さが２０〜１００
μｍであることを特徴とする、前記（１４）または（１
５）項に記載の黄色ブドウ球菌検出用シート状培地。(16) The thickness of the pressure-sensitive adhesive sheet is 0.07-
0.5 mm, and the thickness of the transparent film is 20 to 100
(14) or (1)
5) The sheet medium for detecting Staphylococcus aureus according to item 5).
【００２６】（１７）粘着シートと透明フィルムとの接
着部分の一部がこの粘着シートの粘着力より強い粘着力
で接着されていることを特徴とする、前記（１４）〜
（１６）のいずれか１項に記載の黄色ブドウ球菌検出用
シート状培地。(17) The above (14) to (14), wherein a part of the adhesive portion between the adhesive sheet and the transparent film is adhered with an adhesive force stronger than the adhesive force of the adhesive sheet.
The sheet medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of (16).
【００２７】[0027]
【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明の黄色ブドウ球菌検出用培地は、亜テルル
酸塩、塩化ナトリウムおよびバシトラシンを必須成分と
して含有する培地であるが、まず寒天などのゲル化剤を
用いて固化する培地（以下、ゲル培地と称することがあ
る。）について説明する。これは、該培地１０００ｍｌ
当たり、０．０５〜０．５ｇの亜テルル酸塩、１０〜２
０ｇの塩化ナトリウムおよび０．１〜１０ｍｇのバシト
ラシンを含有し、その他の構成要素としてゲル化剤の
他、栄養成分、ｐＨ調節剤、および塩化リチウムおよび
／またはグリシンを含有する培地である。塩化ナトリウ
ムおよびバシトラシンの含有量が上記濃度以下では、黄
色ブドウ球菌以外の微生物の生育による黒色集落の形成
が認められることがあり、上記濃度以上では生育しない
黄色ブドウ球菌の菌株も認められる。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail. The medium for detecting Staphylococcus aureus of the present invention is a medium containing tellurite, sodium chloride and bacitracin as essential components, but first a medium that solidifies using a gelling agent such as agar (hereinafter, referred to as a gel medium). ) May be described. This is 1000 ml of the medium
0.05-0.5 g of tellurite, 10-2
A medium containing 0 g of sodium chloride and 0.1 to 10 mg of bacitracin, and containing, as other components, a gelling agent, a nutrient component, a pH regulator, and lithium chloride and / or glycine. When the contents of sodium chloride and bacitracin are below the above concentrations, formation of black colonies due to the growth of microorganisms other than Staphylococcus aureus may be observed, and strains of Staphylococcus aureus which do not grow above the above concentrations are also observed.
【００２８】亜テルル酸塩は選択剤であると同時に発色
剤としても機能するものであり、その種類としては亜テ
ルル酸カリウム、亜テルル酸ナトリウム等が好ましく、
またその添加量は培地１０００ｍｌ当たり０．０５〜
０．５ｇが好ましい。０．０５ｇ以下では集落の着色が
薄く確認できるまでに時間を要し、０．５ｇ以上では生
育しない黄色ブドウ球菌菌株も認められる。[0028] Tellurite is a selective agent and at the same time functions as a color forming agent. As its type, potassium tellurite, sodium tellurite and the like are preferable.
The amount of addition is 0.05 to 1000 ml of medium.
0.5 g is preferred. If the amount is less than 0.05 g, it takes time until the coloration of the colonies can be confirmed faintly.
【００２９】栄養成分としてはペプトンや酵母エキスが
好ましく、肉エキスを用いることもできる。ペプトンと
酵母エキスを同時に用いる場合には、ペプトンは培地１
０００ｍｌ当たり５〜１５ｇ、また酵母エキスは同じく
２〜１０ｇが好ましい。一般に栄養成分を少なく用いれ
ば黄色ブドウ球菌の生育が遅くなるが、必要より多く用
いる場合には、害はないものの増加した分の効果は認め
られない。As nutrients, peptone and yeast extract are preferable, and meat extract can also be used. When peptone and yeast extract are used at the same time, peptone is added to medium 1
Preferably, 5 to 15 g per 000 ml, and 2 to 10 g of yeast extract. In general, the use of less nutrients slows the growth of Staphylococcus aureus, but the use of more nutrients does not cause any harm, but does not provide the increased effect.
【００３０】塩化リチウムとグリシンを同時に用いると
きには、塩化リチウムは培地１０００ｍｌ当たり２．５
〜７．５ｇ、グリシンは同じく５〜１５ｇの範囲が好ま
しく、これらは上記濃度以下では黄色ブドウ球菌以外の
微生物の生育、黒色集落形成が認められることがあり、
上記濃度以上では生育しない黄色ブドウ球菌菌株も認め
られる。また、ｐＨ調節剤としてはリン酸カリウム、リ
ン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウムか
らなる群から選ばれる１種以上の塩を用いることができ
る。これらのｐＨ調節剤は、無水物として計算するとき
培地１０００ｍｌ当たり、合計で２．５〜７．５ｇの範
囲で添加することが好ましく、これによって培地のｐＨ
をほぼ中性にすることができる。ただ、上記濃度から大
きくはずれてもあまり影響は認められない。以上の構成
成分の他、培地１０００ｍｌ当たり５〜１５ｇのマンニ
ットを加えても良いし、更には抗生物質等の薬剤を１種
または２種以上組み合わせて添加することによって、Ｍ
ＲＳＡ等の薬剤耐性黄色ブドウ球菌の検出を可能にする
こともできる。When lithium chloride and glycine are used simultaneously, lithium chloride is added in an amount of 2.5 / 1000 ml of medium.
７7.5 g and glycine are also preferably in the range of 5ｇ15 g. When these concentrations are less than the above, growth of microorganisms other than Staphylococcus aureus and black colony formation may be observed.
Some Staphylococcus aureus strains that do not grow above the above concentration are also observed. Further, as the pH adjuster, one or more salts selected from the group consisting of potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate can be used. These pH adjusters are preferably added in a total range of 2.5 to 7.5 g per 1000 ml of the medium when calculated as an anhydride, whereby the pH of the medium is reduced.
Can be made almost neutral. However, even if the concentration deviates significantly from the above, little effect is recognized. In addition to the above-mentioned components, 5 to 15 g of mannitol may be added per 1000 ml of medium, and M or M may be added by adding one or more drugs such as antibiotics.
It can also enable detection of drug-resistant Staphylococcus aureus such as RSA.
【００３１】上述の黄色ブドウ球菌検出用培地は、亜テ
ルル酸塩およびバシトラシン以外の成分を水に加え加熱
溶解後、通常、高圧蒸気滅菌を行い、次いで５０℃以下
に冷却した後、ろ過滅菌した亜テルル酸塩およびバシト
ラシンの水溶液を無菌的に加えて撹拌後、ペトリ皿等に
分注して固化することによって製造する。表面が乾いた
後、食品等の懸濁液またはその希釈液を培地表面に塗布
して、約３５℃で２０〜４８時間培養すると、黄色ブド
ウ球菌は黒色集落を形成する。なお、この培地の場合
は、亜テルル酸塩およびバシトラシン以外の構成成分は
粉末状混合物で、また亜テルル酸塩およびバシトラシン
は水溶液の状態で用意しておき、必要に応じて粉末状混
合物に水を加えて溶解するようにすれば、長期保存が可
能でありまた手軽に培地を用意することができる。The medium for detecting Staphylococcus aureus described above was heated and dissolved by adding components other than tellurite and bacitracin to water, usually subjected to high-pressure steam sterilization, then cooled to 50 ° C. or lower, and then sterilized by filtration. It is manufactured by aseptically adding an aqueous solution of tellurite and bacitracin, stirring, dispensing into a Petri dish or the like, and solidifying. After the surface is dried, a suspension of a food or the like or a diluent thereof is applied to the surface of the medium, and cultured at about 35 ° C. for 20 to 48 hours. Staphylococcus aureus forms black colonies. In the case of this medium, the components other than tellurite and bacitracin are a powdery mixture, and tellurite and bacitracin are prepared in the form of an aqueous solution. , It can be stored for a long time and a medium can be easily prepared.
【００３２】次に多孔質マトリックス層と複数の水溶性
高分子化合物層を含む積層物である本発明の培地（以
下、培地積層物と称することがある。）について説明す
る。この培地は、複数の水溶性高分子化合物層からなる
積層物の上に、多孔質マトリックス層が更に積層された
形態をとるものであり、試料液を多孔質マトリックス層
表面に加えることによって微生物の生育しうる培地とな
るものである。多孔質マトリックス層に試料液を添加す
ると、試料液は一旦、多孔質マトリックス層に保持さ
れ、試料液中の水により多孔質マトリックス層に接して
いる水溶性高分子化合物層が溶解し、高分子化合物層か
ら栄養成分が溶け出し、黄色ブドウ球菌の成育しうる環
境となり、黄色ブドウ球菌の生育分裂が開始される。塩
化リチウムおよびグリシンから選ばれる選択剤の選択性
に加え、塩化ナトリウム及びバシトラシンの適度な濃度
の組み合わせによって、黄色ブドウ球菌以外の微生物の
生育が抑えられ、黄色ブドウ球菌が生育して、亜テルル
酸を還元して黒色コロニーを形成する。このとき、試料
液中に存在する微生物は、水溶性高分子化合物層が徐々
に溶解して高粘度溶液を形成するため水溶性高分子化合
物層内部までは入らず、溶解した水溶性高分子化合物層
と多孔質マトリックス層とが一体化する過程で、多孔質
マトリックス層の表面または表面近傍まで押し上げら
れ、そこに黄色ブドウ球菌の黒色コロニーが形成され
る。このように、多孔質マトリックス層表面にコロニー
が形成されるため、多孔質マトリックスを用いているに
もかかわらず微生物の計数が比較的良好に行われる。Next, the culture medium of the present invention (hereinafter sometimes referred to as a culture medium laminate), which is a laminate including a porous matrix layer and a plurality of water-soluble polymer compound layers, will be described. This medium takes a form in which a porous matrix layer is further laminated on a laminate composed of a plurality of water-soluble polymer compound layers, and a microorganism solution is obtained by adding a sample solution to the surface of the porous matrix layer. It is a medium that can grow. When the sample liquid is added to the porous matrix layer, the sample liquid is once held in the porous matrix layer, and the water in the sample liquid dissolves the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer, and the polymer is dissolved. The nutrients dissolve out of the compound layer, creating an environment in which Staphylococcus aureus can grow, and growth and division of Staphylococcus aureus begin. In addition to the selectivity of the selection agent selected from lithium chloride and glycine, the combination of appropriate concentrations of sodium chloride and bacitracin suppresses the growth of microorganisms other than Staphylococcus aureus, and grows Staphylococcus aureus, To form black colonies. At this time, the microorganisms present in the sample solution do not enter the water-soluble polymer compound layer because the water-soluble polymer compound layer gradually dissolves to form a high-viscosity solution. In the process where the layer and the porous matrix layer are integrated, the porous matrix layer is pushed up to or near the surface of the porous matrix layer, where a black colony of Staphylococcus aureus is formed. As described above, since colonies are formed on the surface of the porous matrix layer, microorganisms can be counted relatively well despite the use of the porous matrix.
【００３３】水溶性高分子化合物層の層数は、成分の添
加量の多少によって変動するが本発明の場合は１〜７層
であり、２〜６層であることが好ましい。多層にするこ
とに技術的な困難があるわけではないが、この範囲以上
に多くの層を重ねても、経済上の不利を容認できるほど
のメリットが得られない。そして、この水溶性高分子化
合物層には亜テルル酸塩、塩化ナトリウムおよびバシト
ラシンが含まれていなければならない。亜テルル酸塩は
選択剤であると同時に発色剤としても機能するものであ
り、亜テルル酸カリウム、亜テルル酸ナトリウム等が好
ましいことについては、前述のゲル化剤を用いて固化す
る培地の場合と同じであるが、その合計含有量は積層物
に対する目付で０．０２５〜０．５ｇ／ｍ2の範囲であ
ることが好ましい。０．０２５ｇ／ｍ2以下では集落の
着色が薄く確認できるまでに時間を要し、０．５ｇ／ｍ
2以上では生育しない黄色ブドウ球菌菌株も認められ
る。The number of the water-soluble polymer compound layers varies depending on the amount of the component added, but in the present invention it is 1 to 7 layers, preferably 2 to 6 layers. Although there are no technical difficulties with multi-layering, stacking more layers beyond this range does not provide the benefit of accepting economic disadvantages. This water-soluble polymer layer must contain tellurite, sodium chloride and bacitracin. Tellurite is a selective agent and at the same time, functions as a color former, and potassium tellurite, sodium tellurite and the like are preferable in the case of a medium which is solidified using the aforementioned gelling agent. However, the total content is preferably in the range of 0.025 to 0.5 g / m 2 based on the weight of the laminate. If the concentration is 0.025 g / m 2 or less, it takes time until the coloring of the settlement can be confirmed faintly.
Some Staphylococcus aureus strains that do not grow with 2 or more are also observed.
【００３４】これに積層物に対する合計の目付で５〜１
５ｇ／ｍ2の塩化ナトリウムと、同じく０．０５〜１０
ｍｇ／ｍ2のバシトラシンを組み合わせて含有させるこ
とによって、黄色ブドウ球菌の生育を阻害することな
く、黄色ブドウ球菌以外の微生物の生育が押さえられ
る。塩化ナトリウムおよびバシトラシンの含有量が上記
濃度以下では、黄色ブドウ球菌以外の微生物の生育によ
る黒色集落の形成が認められることがあり、上記濃度以
上では生育しない黄色ブドウ球菌の菌株も認められる。
なお、亜テルル酸塩は後述のように熱に弱いこともあっ
て多孔質マトリック層に接する水溶性高分子化合物層に
含まれていることが望ましいが、塩化ナトリウムおよび
バシトラシンはかならずしもそうではない。即ち、それ
ぞれ亜テルル酸塩と同じように多孔質マトリック層に接
する水溶性高分子化合物層に含まれていてもよいし、そ
の次の水溶性高分子化合物層に含まれていてもよいし、
または多孔質マトリック層に接する水溶性高分子化合物
層とその次の水溶性高分子化合物層とに含まれていても
よい。場合によっては更にその次の層にも分散されてい
てよい。In addition, the total weight of the laminate is 5 to 1
5 g / m 2 of sodium chloride and 0.05 to 10
By containing mg / m 2 of bacitracin in combination, the growth of microorganisms other than S. aureus can be suppressed without inhibiting the growth of S. aureus. When the contents of sodium chloride and bacitracin are below the above concentrations, formation of black colonies due to the growth of microorganisms other than Staphylococcus aureus may be observed, and strains of Staphylococcus aureus which do not grow above the above concentrations are also observed.
It is desirable that tellurite is contained in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer because it is weak to heat as described later, but sodium chloride and bacitracin are not always so. That is, each may be contained in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer like the tellurite, or may be contained in the next water-soluble polymer compound layer,
Alternatively, it may be contained in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer and the next water-soluble polymer compound layer. In some cases, it may be further dispersed in the next layer.
【００３５】また、水溶性高分子化合物層には、黄色ブ
ドウ球菌の生育のための栄養成分、黄色ブドウ球菌以外
の微生物の生育を抑える選択剤、ｐＨ調整剤等が含有さ
れていることが必要である。黄色ブドウ球菌の生育のた
めの栄養成分としてペプトン、酵母エキスおよび肉エキ
スからなる群から選ばれる１種以上の成分、黄色ブドウ
球菌以外の微生物の生育を抑える選択剤として塩化リチ
ウムおよび／またはグリシン、ｐＨ調整剤等としてリン
酸カリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび
炭酸カリウムからなる群から選ばれる１種以上の塩が用
いられ、マンニットが用いられても良い。抗生物質等の
薬剤を１種または２種以上組み合わせて添加するするこ
とによって、ＭＲＳＡ等の薬剤耐性黄色ブドウ球菌の検
出もできる。It is necessary that the water-soluble polymer compound layer contains nutrients for growing Staphylococcus aureus, a selective agent for suppressing the growth of microorganisms other than Staphylococcus aureus, a pH adjuster, and the like. It is. Peptone as a nutritional component for the growth of Staphylococcus aureus, one or more components selected from the group consisting of yeast extract and meat extract, lithium chloride and / or glycine as a selective agent for suppressing the growth of microorganisms other than Staphylococcus aureus, One or more salts selected from the group consisting of potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate are used as the pH adjuster and the like, and mannite may be used. By adding one or more drugs such as antibiotics, drug-resistant Staphylococcus aureus such as MRSA can also be detected.
【００３６】なお、これらの成分は、多孔質マトリック
ス層に接する層から多孔質マトリックス層から最も離れ
た層までのどの水溶性高分子化合物層に含まれていても
よい。しかしながら、水溶性高分子化合物層が３層以上
であるときには、多孔質マトリックス層から遠い層は水
溶性高分子化合物のみからなる層であってもよい。その
層と多孔質マトリックス層との間に積層されている水溶
性高分子化合物層の合計の厚みにもよるが、その層に栄
養成分などがふくまれていても、それらが多孔質マトリ
ックス層まで拡散して微生物に利用されることは少ない
からである。また、水溶性高分子化合物のみからなる層
を途中に挟むことは、栄養成分などが多孔質マトリック
ス層まで拡散するのを妨げるので好ましくない。These components may be contained in any of the water-soluble polymer compound layers from the layer in contact with the porous matrix layer to the layer farthest from the porous matrix layer. However, when the number of the water-soluble polymer compound layers is three or more, the layer far from the porous matrix layer may be a layer composed of only the water-soluble polymer compound. Depending on the total thickness of the water-soluble polymer compound layer laminated between that layer and the porous matrix layer, even if the layer contains nutrients, etc. This is because they are rarely diffused and used by microorganisms. Further, it is not preferable to sandwich a layer made of only a water-soluble polymer compound in the middle, because it prevents diffusion of nutrient components and the like to the porous matrix layer.
【００３７】そして、上記成分の水溶性高分子化合物層
中の合計含有量は、積層物に対する目付でペプトンは
２．５〜１５ｇ／ｍ2、酵母エキスは１〜１０ｇ／ｍ2、
塩化リチウムは１．２５〜５ｇ／ｍ2、グリシンは２．
５〜１０ｇ／ｍ2、マンニットは２．５〜１０ｇ／ｍ2、
ｐＨ調節剤は１．２５〜５ｇ／ｍ2、任意成分としての
肉エキスは１〜１０ｇ／ｍ2の範囲であることが好まし
い。ペプトン、酵母エキス、肉エキスは上記濃度以下で
は黄色ブドウ球菌の生育が遅くなり、上記濃度以上加え
てかまわないが、増加量に見合う効果は認められない。
塩化リチウムおよびグリシンは、塩化ナトリウムおよび
バシトラシンの場合と同じように、上記濃度以下では黄
色ブドウ球菌以外の微生物の生育による黒色集落形成が
認められることがあり、上記濃度以上では生育しない黄
色ブドウ球菌菌株も認められる。ｐＨ調節剤は上記濃度
が好ましいが、上記濃度から大きくはずれてもあまり影
響は認められない。[0037] Then, the total content of the water-soluble polymer layer in the component, peptone in basis weight for the laminate 2.5~15g / m 2, yeast extract 1 to 10 g / m 2,
Lithium chloride is 1.25 to 5 g / m 2 , and glycine is 2.
5 to 10 g / m 2 , mannit 2.5 to 10 g / m 2 ,
It is preferable that the pH adjuster is in the range of 1.25 to 5 g / m 2 and the optional meat extract is in the range of 1 to 10 g / m 2 . When the concentration of peptone, yeast extract or meat extract is lower than the above concentration, the growth of Staphylococcus aureus is slowed, and may be added at the concentration higher than the above concentration, but the effect corresponding to the increased amount is not recognized.
Lithium chloride and glycine, as in the case of sodium chloride and bacitracin, may form black colonies due to the growth of microorganisms other than S. aureus below the above concentration, and S. aureus strains that do not grow above the above concentration Is also allowed. The above-mentioned concentration is preferable for the pH adjuster, but even if it deviates greatly from the above-mentioned concentration, little effect is recognized.
【００３８】なお、ペプトンにはカゼインペプトン、ダ
イズペプトン、肉ペプトンが含まれ、肉エキスには、肉
エキスに加え、牛脳エキス、牛心臓エキス、粉末肉エキ
ス、魚肉エキスも含まれ、またリン酸カリウムにはリン
酸二カリウムまたはリン酸二カリウムとリン酸一カリウ
ムの混合物、リン酸ナトリウムにはリン酸二ナトリウム
またはリン酸二ナトリウムとリン酸一ナトリウムの混合
物、炭酸ナトリウムには炭酸ナトリウム、炭酸水素ナト
リウムまたは炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムの混
合物、炭酸カリウムには炭酸カリウム、炭酸水素カリウ
ムまたは炭酸カリウムと炭酸水素カリウムの混合物がそ
れぞれ含まれるが、これらのことは前述のゲル化剤を用
いて固化する培地の場合においても同様である。[0038] Peptone includes casein peptone, soy peptone, and meat peptone. Meat extract includes beef brain extract, beef heart extract, powdered meat extract, fish meat extract in addition to meat extract. For potassium acid, dipotassium phosphate or a mixture of dipotassium phosphate and monopotassium phosphate, for sodium phosphate, disodium phosphate or a mixture of disodium phosphate and monosodium phosphate, for sodium carbonate, sodium carbonate, Sodium bicarbonate or a mixture of sodium carbonate and sodium bicarbonate, potassium carbonate includes potassium carbonate, potassium bicarbonate or a mixture of potassium carbonate and potassium bicarbonate, respectively. The same applies to a solidifying medium.
【００３９】本発明の水溶性高分子化合物層を形成する
ための材料としては、試料液を加えたときに、水に溶解
して１０ｃｐｓ（４０℃で測定した粘度）以上の高粘度
を示し、微生物の生育を阻害しないものが好ましく用い
られる。例えば、ポリビニルアルコール、セルロース誘
導体、ポリアクリル酸誘導体、でんぷん誘導体、蛋白
質、蛋白質誘導体、及び多糖類等が使用できる。この中
でもポリビニルアルコールがより好ましく、鹸化度が７
５〜９５％、分子量が２５０００〜２５００００のポリ
ビニルアルコールが特に好ましい。As a material for forming the water-soluble polymer compound layer of the present invention, when a sample solution is added, it is dissolved in water and exhibits a high viscosity of 10 cps (viscosity measured at 40 ° C.), Those that do not inhibit the growth of microorganisms are preferably used. For example, polyvinyl alcohol, cellulose derivatives, polyacrylic acid derivatives, starch derivatives, proteins, protein derivatives, polysaccharides and the like can be used. Among them, polyvinyl alcohol is more preferable, and the saponification degree is 7
Polyvinyl alcohol having a molecular weight of 25,000 to 250,000 and a molecular weight of 5 to 95% is particularly preferred.
【００４０】本発明に使用される多孔質マトリックス層
を形成するための材料としては、ナイロン繊維、ポリア
クリロニトリル繊維、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）
繊維、エチレン酢酸ビニル共重合体繊維、ポリエステル
繊維（親水化処理したポリエステル繊維がより好まし
い）、ポリオレフィン繊維（親水化処理したポリオレフ
ィン繊維がより好ましい）、及びポリウレタン繊維等の
合成繊維、レーヨン繊維等の半合成繊維、羊毛（獣
毛）、絹、コットン繊維、セルロース繊維、及びパルプ
繊維等の天然繊維、ガラス繊維等の無機繊維等が例示で
き、これらの繊維を用いて作られた編織布及び不織布等
の布帛や、上記繊維の構成素材で作られた多孔質フィル
ムやスポンジなどが使用でき、多孔質セラミックスも使
用できる。これらの中でも目付、通気度の調整が容易な
編織布、不織布等の布帛を用いることが好ましく、不織
布の中でも、さらに比較的容易に細繊維が得られるメル
トブロー製法で作製した不織布や、分割繊維から製造し
た極細繊維不織布が特に好ましく用いられる。The materials for forming the porous matrix layer used in the present invention include nylon fibers, polyacrylonitrile fibers, and polyvinyl alcohol (PVA).
Fiber, ethylene-vinyl acetate copolymer fiber, polyester fiber (hydrophilized polyester fiber is more preferable), polyolefin fiber (hydrophilic polyolefin fiber is more preferable), and synthetic fiber such as polyurethane fiber, rayon fiber and the like. Examples include natural fibers such as semi-synthetic fibers, wool (animal hair), silk, cotton fibers, cellulose fibers, and pulp fibers, and inorganic fibers such as glass fibers, and woven and nonwoven fabrics made using these fibers. Or a porous film or sponge made of the above fiber constituent material, and porous ceramics can also be used. Among them, it is preferable to use a fabric such as a knitted fabric, a nonwoven fabric or the like whose weight permeation and air permeability can be easily adjusted, and among the nonwoven fabrics, a nonwoven fabric or a split fiber prepared by a melt blow method in which fine fibers can be obtained relatively easily. The produced ultrafine fiber nonwoven fabric is particularly preferably used.
【００４１】上記繊維のうち特に好ましくは、ナイロン
繊維、コットン繊維、セルロース繊維、及びレーヨン繊
維であり、その中でも特にナイロン繊維が好ましく、さ
らに細繊度の繊維径となるメルトブロー製法で作製した
不織布が好ましい。そして、多孔質マトリックス層は、
目付４０〜１００ｇ／ｍ2、通気度７０〜２４０Ｌ／
（ｍ2・ｓｅｃ）であることが好ましい。Among the above-mentioned fibers, nylon fibers, cotton fibers, cellulose fibers and rayon fibers are particularly preferable, and among them, nylon fibers are particularly preferable, and nonwoven fabrics produced by a melt-blowing method having a finer fiber diameter are more preferable. . And the porous matrix layer is
Weight 40-100 g / m 2 , air permeability 70-240 L /
(M 2 · sec).
【００４２】多孔質マトリックスは必ずしも親水性であ
る必要はないが、親水性の多孔質マトリックスまたは親
水化処理した多孔質マトリックスを用いれば吸水速度が
速くなり、作業の能率が上がる。親水性または親水化処
理した多孔質マトリックスであっても、水溶性物質を保
持させることにより添加した試料液及び微生物の分散性
を更に向上させることができる。多孔質マトリックスに
水溶性物質を保持させる方法としては、その表面に水溶
性物質を塗布して乾燥後または未乾燥のまま用いる方
法、多孔質マトリックスを水溶性物質を含む溶液に浸し
て水溶性物質を含浸させ乾燥後または未乾燥のまま用い
る方法、多孔質マトリックスを水溶性高分子化合物層に
貼り合わせてから乾燥後または未乾燥のままその表面に
水溶性物質を塗布する方法、多孔質マトリックスを水溶
性高分子化合物層に貼り合わせてから乾燥後、水溶性高
分子化合物を溶解しない溶媒による水溶性物質の溶液ま
たは懸濁液を用いて多孔質マトリックス層に水溶性物質
を含浸させ乾燥するなどの方法があり、これらの方法を
適当に組み合わせてもよい。The porous matrix is not necessarily required to be hydrophilic. However, the use of a hydrophilic porous matrix or a hydrophilized porous matrix increases the water absorption rate and increases work efficiency. Even in the case of a porous matrix that has been subjected to a hydrophilic or hydrophilic treatment, dispersibility of the added sample liquid and microorganisms can be further improved by retaining a water-soluble substance. As a method of retaining the water-soluble substance in the porous matrix, a method of applying the water-soluble substance to the surface thereof and using it after drying or undried, or immersing the porous matrix in a solution containing the water-soluble substance, Impregnated and dried or undried, using a porous matrix bonded to the water-soluble polymer compound layer, and then drying or undried and applying a water-soluble substance to the surface of the porous matrix. After bonding to the water-soluble polymer compound layer and drying, the porous matrix layer is impregnated with the water-soluble material using a solution or suspension of a water-soluble material in a solvent that does not dissolve the water-soluble polymer compound, and dried. And these methods may be appropriately combined.
【００４３】多孔質マトリックスに保持させる水溶性物
質としては、微生物の生育を妨げないものならばどのよ
うなものでも用いることができるが、水溶性高分子化合
物層に添加する培地成分、例えばペプトン、酵母エキ
ス、塩化リチウム、グリシン、マンニット、リン酸カリ
ウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウ
ム、亜テルル酸塩、塩化ナトリウム等、またはこれらの
２種以上の混合物が好ましく用いられる。なお、多孔質
マトリックスを水溶性高分子化合物層に貼り合わせてか
らその表面に水溶性物質を塗布する場合には、上記水溶
性物質を粉末状で塗布しても良いが、溶液または懸濁液
として用いて塗布し乾燥する方が均一性が得られ好まし
い。水溶性物質を溶液または懸濁液として用いるときの
溶媒は、水溶性物質を溶解または部分溶解し、揮発また
は蒸発するものであればどのようなものでもよいが、
水、エタノール、メタノールまたはこれらの混合溶媒が
好ましい。As the water-soluble substance retained in the porous matrix, any substance can be used as long as it does not hinder the growth of microorganisms, and a medium component added to the water-soluble polymer compound layer, for example, peptone, Yeast extract, lithium chloride, glycine, mannitol, potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate, potassium carbonate, tellurite, sodium chloride and the like, or a mixture of two or more thereof are preferably used. When the water-soluble substance is applied to the surface after the porous matrix is attached to the water-soluble polymer compound layer, the water-soluble substance may be applied in a powder form, but may be applied as a solution or a suspension. It is more preferable to apply and dry by using the above as uniformity can be obtained. When the water-soluble substance is used as a solution or a suspension, the solvent may be any substance that dissolves or partially dissolves the water-soluble substance and volatilizes or evaporates.
Water, ethanol, methanol or a mixed solvent thereof is preferred.
【００４４】本発明の培地積層物に含ませられる亜テル
ル酸塩は、多孔質マトリックス層に近い水溶性高分子化
合物層に加えることが好ましいが、これは熱分解しやす
い物質である。そのため、水溶性高分子化合物溶液から
水を蒸発させて水溶性高分子化合物層とするとき、この
乾燥工程中に亜テルル酸塩が分解し、水溶性高分子化合
物層が黒色化することがある。一方、多孔質マトリック
ス層とそれに接する水溶性高分子化合物層との接着を図
るために、水溶性高分子化合物層が未乾燥又は半乾燥の
状態で多孔質マトリックス層を重ね合わせるので、水溶
性高分子化合物の含有量が多いと乾燥条件を厳しくしな
ければならなくなる。これらの問題点を解決するために
は、多孔質マトリックス層に接する水溶性高分子化合物
層中の水溶性高分子化合物の乾燥目付が２〜２０ｇ／ｍ
2となるようにすることが好ましく、このようにすれば
亜テルル酸塩が分解して水溶性高分子化合物層が黒色化
することなしに、多孔質マトリックス層とそれに接する
水溶性高分子化合物層を接着させながら乾燥することが
できる。The tellurite contained in the culture medium laminate of the present invention is preferably added to a water-soluble polymer compound layer close to the porous matrix layer, but this is a substance which is easily thermally decomposed. Therefore, when water is evaporated from the water-soluble polymer compound solution to form a water-soluble polymer compound layer, tellurite is decomposed during this drying step, and the water-soluble polymer compound layer may be blackened. . On the other hand, in order to achieve adhesion between the porous matrix layer and the water-soluble polymer compound layer that is in contact with the porous matrix layer, the water-soluble polymer compound layer is superimposed on the porous matrix layer in an undried or semi-dried state. When the content of the molecular compound is large, the drying conditions must be strict. In order to solve these problems, the dry basis weight of the water-soluble polymer compound in the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer is 2 to 20 g / m2.
Preferably to be 2, without this manner by tellurite salt decomposition if water-soluble polymer layer is blackened, the porous matrix layer and a water-soluble polymer compound layer in contact therewith While drying.
【００４５】多孔質マトリックス層と複数の水溶性高分
子化合物層を含む積層物である本発明の培地積層物は、
より使いやすくするために、粘着シートに接着し透明フ
ィルムを被せてシート状培地とすることが好ましい。こ
のシート状培地は、培地積層物を該培地積層物より大き
な粘着シートの中心部に多孔質マトリックス層が上にな
るように接着し、その上に該培地積層物より大きな透明
フィルムを多孔質マトリックス層に接しかつ該培地積層
物と中心部を合わせるように被せて、この透明フィルム
の該培地積層物からはみ出している部分を粘着シートの
該培地積層物によって覆われていない部分と接着させて
構成するものである。なお、ここでいう中心部は厳密で
ある必要はないし、場合によっては後述のように目的に
応じて意図的にずらすこともあり得る。The culture medium laminate of the present invention, which is a laminate including a porous matrix layer and a plurality of water-soluble polymer compound layers,
In order to make it easier to use, it is preferable to adhere to a pressure-sensitive adhesive sheet and cover with a transparent film to form a sheet-shaped medium. This sheet-form culture medium adheres the culture medium laminate to the center of the adhesive sheet larger than the culture medium laminate so that the porous matrix layer is on top, and a transparent film larger than the culture medium laminate is formed on the porous matrix. The transparent film is covered so as to be in contact with the layer and the center of the medium laminate, and a portion of the transparent film protruding from the medium laminate is adhered to a portion of the adhesive sheet not covered by the medium laminate. Is what you do. Note that the center here does not need to be strict, and in some cases, it may be intentionally shifted according to the purpose as described later.
【００４６】そして、粘着シートのシートの材質は黄色
ブドウ球菌の生育を阻害しないものであればどのような
もので良いが、透明フィルムを剥がしやすくするために
はある程度の腰が必要であり、曲面などをふき取るため
には柔軟であることが好ましい。ポリエステルフィル
ム、白色ポリエステルフィルム、ポリオレフィン系合成
紙またはポリオレフィンラミネート紙であって、厚さが
０．０７〜０．５ｍｍであればこの条件を満たしてい
る。粘着シートに使用する粘着剤も黄色ブドウ球菌の生
育を阻害しないものであればどのようなものでも良い
が、作業性を考えると粘着シートと透明フィルムとを再
接着できさえすれば、粘着力は弱いほど好ましい。ゴム
系およびアクリル系粘着剤が好ましく、再剥離タイプお
よび微粘着タイプアクリル系粘着剤が特に好ましい。The material of the pressure-sensitive adhesive sheet may be any as long as it does not inhibit the growth of Staphylococcus aureus, but a certain amount of stiffness is required in order to easily peel off the transparent film. In order to wipe off the like, it is preferable to be flexible. A polyester film, a white polyester film, a polyolefin-based synthetic paper or a polyolefin-laminated paper having a thickness of 0.07 to 0.5 mm satisfies this condition. The adhesive used for the adhesive sheet may be any adhesive as long as it does not inhibit the growth of Staphylococcus aureus.However, considering workability, the adhesive strength will be as long as the adhesive sheet and the transparent film can be re-adhered. The weaker the better. Rubber-based and acrylic-based pressure-sensitive adhesives are preferable, and re-peelable and slightly-adhesive-type acrylic pressure-sensitive adhesives are particularly preferable.
【００４７】透明フィルムも生育を阻害しないものであ
ればどのようなものでも良いが、厚みをもった培地が粘
着シートとの間にはいるため、柔軟性が必要である。ポ
リオレフィンフィルム、ポリエステルフィルム、ナイロ
ンフィルムなどが使用でき、剥がしやすくするために剥
離剤処理を施したものでも良い。透明フィルムは蓋とし
ての機能を担うものであり、開け閉めなどの作業性を考
慮するとポリオレフィンフィルムが好ましく、厚さ２０
〜１００μｍのポリプロピレンフィルムが特に好まし
い。The transparent film may be of any type as long as it does not inhibit the growth. However, since a thick medium is inserted between the medium and the adhesive sheet, flexibility is required. A polyolefin film, a polyester film, a nylon film, or the like can be used, and a film subjected to a release agent treatment to facilitate peeling may be used. The transparent film has a function as a lid, and is preferably a polyolefin film in consideration of workability such as opening and closing.
Polypropylene films of １００100 μm are particularly preferred.
【００４８】透明フィルムを開けるとき、透明フィルム
は剥がれてもかまわないが、再接着するためには一部が
剥がれずに残っていることが好ましい。ただし、直接ス
タンプまたはふき取りを行うときは、透明フィルムが付
いていると邪魔となることがあるので、完全に剥がせる
ようにしておく必要もある。このような要件を満たすた
めには、粘着シートと透明フィルムとの接着部分の一部
における粘着力を残りの部分より強くすることが好まし
い。このようにすることで、透明フィルムを開けるとき
粘着力を強くした部分で止めることができ、透明フィル
ムを外さないで作業ができる。また、粘着力を増しただ
けであるため、必要に応じて完全に剥がすこともでき
る。粘着力を増した部分は再接着性はなくても良い。な
お、粘着力を強くした部分以外の少なくとも一部は、透
明フィルムが粘着シートより大きく外側にでていること
が、透明フィルムを開けやすく好ましい。When the transparent film is opened, the transparent film may be peeled off, but it is preferable that a part of the transparent film remains without peeling for re-adhesion. However, when performing direct stamping or wiping, it may be an obstacle if a transparent film is attached, so it is necessary to be able to completely remove the stamp. In order to satisfy such requirements, it is preferable to make the adhesive strength in a part of the adhesive part between the adhesive sheet and the transparent film stronger than the remaining part. By doing so, when the transparent film is opened, it can be stopped at a portion where the adhesive strength is increased, and work can be performed without removing the transparent film. Further, since the adhesive force is merely increased, it can be completely removed as necessary. The part having increased adhesive strength may not have re-adhesiveness. In addition, it is preferable that at least a part other than the part where the adhesive strength is increased, the transparent film is larger than the adhesive sheet and protrudes outside, so that the transparent film can be easily opened.
【００４９】粘着力の強い部分を作る方法として、粘着
シートと透明フィルムを粘着シートより強い粘着力の別
の粘着テープなどにより接着する方法、粘着シートと透
明フィルムとを一部において両面テープで接着する方
法、粘着シートの一部に粘着シートより粘着力の強い粘
着剤を塗布する方法、透明シートの一部に粘着シートよ
り粘着力の強い粘着剤を塗布する方法などがある。別の
粘着テープで接着するときには、粘着シートと透明シー
トをずらして重ね、粘着シートの粘着剤塗布面と透明フ
ィルムの培地積層物に接していない面に、または粘着シ
ートの裏面と透明フィルムの培地積層物に接した面に別
の粘着シートを接着する方法、または粘着シートと透明
シートをほとんどずらさずに重ね、別の粘着テープを折
り曲げて粘着シートの裏面と透明フィルムの培地積層物
に接していない面に接着する方法などがある。別の粘着
テープを折り曲げて粘着シートの裏面と透明フィルムの
培地積層物に接していない面に接着したときには、透明
フィルムを開けたとき、粘着シートの裏面と透明フィル
ムを接着したまま完全に開くことができ便利である。強
い粘着力の部分は残りの部分より粘着力が強ければよい
が、粘着力は２倍以上であることが好ましい。As a method of forming a portion having a strong adhesive force, a method of bonding the adhesive sheet and the transparent film with another adhesive tape having a stronger adhesive force than the adhesive sheet, and a method of partially bonding the adhesive sheet and the transparent film with a double-sided tape And a method of applying a pressure-sensitive adhesive having a higher adhesive strength than a pressure-sensitive adhesive sheet to a part of the pressure-sensitive adhesive sheet, and a method of applying a pressure-sensitive adhesive having a higher pressure-sensitive adhesive strength than the pressure-sensitive adhesive sheet to a part of the transparent sheet. When bonding with another adhesive tape, the adhesive sheet and the transparent sheet are staggered and overlapped, and the adhesive-coated side of the adhesive sheet and the surface of the transparent film that are not in contact with the laminate, or the back surface of the adhesive sheet and the transparent film medium A method of bonding another adhesive sheet to the surface in contact with the laminate, or stacking the adhesive sheet and the transparent sheet almost without shifting, folding another adhesive tape and touching the backside of the adhesive sheet and the medium laminate of the transparent film There is a method of bonding to a non-existing surface. When another adhesive tape is bent and adhered to the back side of the adhesive sheet and the surface of the transparent film that is not in contact with the culture medium laminate, when the transparent film is opened, open completely with the adhesive sheet back and the transparent film adhered. It is convenient. It is sufficient that the portion having a strong adhesive strength has a stronger adhesive force than the remaining portion, but it is preferable that the adhesive force is twice or more.
【００５０】本発明の培地積層物の作製方法について以
下に説明する。ポリエステル等のフィルムを台紙とし
て、水溶性高分子化合物層を２層とする場合には、その
上に黄色ブドウ球菌の生育のための栄養成分、黄色ブド
ウ球菌以外の微生物の生育を抑える選択剤、および任意
の添加剤であるｐＨ調整剤等の培地成分を含む水溶性高
分子化合物水溶液を塗布し乾燥して、最初の水溶性高分
子化合物層とする。水溶性高分子化合物層を３層以上と
するときには、この最初の層は、前述のように培地成分
を含まない水溶性高分子化合物のみからなる層とするこ
とが好ましい。場合によっては、その次の層も水溶性高
分子化合物のみからなる層であってよい。この最初の層
に、培地成分を含む水溶性高分子化合物の水溶液を塗布
し乾燥して２番目の水溶性高分子化合物層とする。この
作業を繰り返して多層構造とし、最後の水溶性高分子化
合物層上に多孔質マトリックスを積層して乾燥する。な
お、水溶性高分子化合物水溶液に加える培地成分につい
ては、用いる成分の機能や物性に応じて、各層ごとにそ
の組成を調整することが好ましい。The method for producing the culture medium laminate of the present invention will be described below. When a film of polyester or the like is used as a mount and the water-soluble polymer compound layer is composed of two layers, nutrients for the growth of Staphylococcus aureus, a selective agent for suppressing the growth of microorganisms other than Staphylococcus aureus, A water-soluble polymer compound aqueous solution containing a medium component such as a pH adjuster, which is an optional additive, is applied and dried to form a first water-soluble polymer compound layer. When the number of the water-soluble polymer compound layers is three or more, the first layer is preferably a layer composed of only the water-soluble polymer compound containing no medium component as described above. In some cases, the next layer may be a layer composed of only the water-soluble polymer compound. An aqueous solution of a water-soluble polymer compound containing a medium component is applied to the first layer and dried to form a second water-soluble polymer compound layer. This operation is repeated to form a multilayer structure, and a porous matrix is laminated on the last water-soluble polymer compound layer and dried. The composition of the medium component added to the aqueous solution of the water-soluble polymer compound is preferably adjusted for each layer according to the functions and physical properties of the components used.
【００５１】多孔質マトリックスを積層して乾燥する工
程においては、水溶性高分子化合物層が何層であって
も、前述のように多孔質マトリックス層と接する水溶性
高分子化合物層となる水溶性高分子化合物水溶液が未乾
燥または半乾燥状態のときに多孔質マトリックスを積層
し乾燥するが、多孔質マトリックス層の表面に水溶性物
質を塗布し乾燥する作業を更に追加する必要がある場合
には、多孔質マトリックス層に接する水溶性高分子化合
物層をまず乾燥してから、栄養成分等の溶性物質を含ん
だ水を加えて湿らせた多孔質マトリックスを積層し乾燥
してもよい。または、水のみで湿らせた多孔質マトリッ
クス層を積層し乾燥した後、多孔質マトリックス層上に
水溶性物質を塗布し乾燥してもよい。どの方法を採用す
るにしても、亜テルル酸塩の分解が起こらないような条
件とすることが肝要であり、多孔質マトリックス層と水
溶性高分子化合物層とが少なくとも部分的には接着して
いることが好ましい。In the step of laminating and drying the porous matrix, regardless of the number of the water-soluble polymer compound layers, the water-soluble polymer compound layer which is in contact with the porous matrix layer is formed as described above. When the aqueous polymer compound solution is in an undried or semi-dried state, the porous matrix is laminated and dried, but if it is necessary to further add a work of applying a water-soluble substance to the surface of the porous matrix layer and drying it, Alternatively, the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer may be dried first, and then a porous matrix moistened with water containing a soluble substance such as a nutrient component may be laminated and dried. Alternatively, after laminating and drying a porous matrix layer moistened only with water, a water-soluble substance may be applied on the porous matrix layer and dried. Regardless of which method is employed, it is important that the conditions be such that decomposition of tellurite does not occur, and the porous matrix layer and the water-soluble polymer compound layer are at least partially adhered to each other. Is preferred.
【００５２】このようにして得られた積層物は、台紙と
して用いたポリエステル等のフィルムを剥がし、または
剥がさずに必要に応じて適当な大きさに切断し、袋やシ
ャーレに入れるなどの措置を施し、エチレンオキサイド
ガス等により滅菌を施せば微生物培地として用いること
ができるし、切断した積層物を前述のような方法で粘着
シートに接着して透明フィルムを被せ、エチレンオキサ
イドガス等により滅菌を施してシート状培地として用い
ることもできる。The laminate thus obtained is subjected to measures such as peeling off a film of polyester or the like used as a backing sheet, cutting the film into an appropriate size as needed without peeling off, and putting the film in a bag or a petri dish. It can be used as a microbial medium if it is sterilized with ethylene oxide gas or the like, or the cut laminate is adhered to an adhesive sheet as described above, covered with a transparent film, and sterilized with ethylene oxide gas or the like. Can be used as a sheet medium.
【００５３】本発明の微生物培地の使用例を以下に示
す。食品等の検査を行う場合は、ストマッカーに食品と
滅菌生理食塩水またはペプトン添加滅菌生理食塩水を加
えホモジナイズし、得られた懸濁液またはこれを適宜希
釈したものを試料として用いる。また、食品製造環境や
手指等の検査を行う場合には、製造現場、手指等を滅菌
ガーゼまたは綿棒で拭き取り、滅菌生理食塩水またはペ
プトン添加滅菌生理食塩水に懸濁して懸濁液を作製し、
さらに適宜希釈して試料として用いる。これらの試料を
本発明のゲル培地に加えて蓋をし、３５〜３７℃で２４
〜４８時間微生物培地を保温して、黄色ブドウ球菌生育
の有無及びコロニー数等の測定を行う。またシート状培
地を使用するときは、シート状培地の透明フィルムを開
き、培地積層物表面の多孔質マトリックス層に試料液を
加えて再び透明フィルムを被せ、３５〜３７℃で２４〜
４８時間このシート状培地を保温して、黄色ブドウ球菌
生育の有無及びコロニー数等の測定を行う。Examples of use of the microorganism medium of the present invention are shown below. When testing foods and the like, the food and sterilized physiological saline or sterilized physiological saline with peptone are added to a stomacher, homogenized, and the obtained suspension or an appropriately diluted suspension is used as a sample. When testing the food manufacturing environment or fingers, wipe the manufacturing site, fingers, etc. with sterile gauze or a cotton swab and suspend them in sterile saline or sterile saline with peptone to prepare a suspension. ,
It is further diluted appropriately and used as a sample. These samples were added to the gel medium of the present invention, covered, and incubated at 35-37 ° C for 24 hours.
The microorganism medium is kept warm for up to 48 hours, and the presence or absence of Staphylococcus aureus growth and the number of colonies are measured. When a sheet-shaped medium is used, the transparent film of the sheet-shaped medium is opened, the sample liquid is added to the porous matrix layer on the surface of the medium laminate, and the transparent film is covered again.
The sheet-shaped medium is kept warm for 48 hours, and the presence or absence of Staphylococcus aureus growth and the number of colonies are measured.
【００５４】またシート状培地を使用するときは、シー
ト状培地の透明フィルムを開き、培地積層物部分に滅菌
生理食塩水またはペプトン添加滅菌生理食塩水を加え、
培地積層物表面で検査対象を直接スタンプするかまたは
検査対象面を直接ふき取り、必要に応じて滅菌生理食塩
水もしくはペプトン添加滅菌生理食塩水を加えた後、再
び透明フィルムを被せて培養する。When a sheet-shaped medium is used, the transparent film of the sheet-shaped medium is opened, and a sterilized physiological saline or a sterilized physiological saline with peptone is added to the medium laminate portion.
The test object is directly stamped on the surface of the culture medium laminate, or the test object surface is wiped directly, and if necessary, sterilized physiological saline or sterile physiological saline with peptone is added thereto.
【００５５】湿った面を検査する場合は培地表面をあら
かじめ湿らせる必要はなく、シート状培地の培地積層物
表面で検査対象をそのままふき取るかまたは検査対象を
直接スタンプし、必要に応じて滅菌生理食塩水またはペ
プトン添加滅菌生理食塩水を加えた後、ゲル培地の場合
は水分の蒸発を防ぐ処置を施し、シート状培地の培地の
場合は再び透明フィルムを被せて培養し、黄色ブドウ球
菌生育の有無及びコロニー数等の測定を行う。このよう
にシート状培地は、通常の食品や環境、手指の黄色ブド
ウ球菌検査に加え、検査対象に直接接触させる方法や検
査対象を直接ふき取る方法により黄色ブドウ球菌検査が
できることが大きな特徴である。直接接触または直接ふ
き取って検査するときは検査対象が曲面や多少の凹凸が
あるものでも検査できる。When inspecting a wet surface, it is not necessary to wet the surface of the medium in advance, and the object to be inspected can be wiped as it is or directly stamped on the surface of the laminated medium of the sheet-shaped medium, and if necessary, sterilized physiological medium can be used. After adding saline or sterile physiological saline with added peptone, in the case of a gel medium, take measures to prevent the evaporation of water, and in the case of a sheet-shaped medium, cover with a transparent film again, and incubate to grow Staphylococcus aureus. The presence or absence and the number of colonies are measured. As described above, the sheet-shaped medium has a great feature in that a Staphylococcus aureus test can be performed by a method of directly contacting the test object or a method of directly wiping the test object, in addition to the usual food, environment, and S. aureus test of a finger. When performing inspection by direct contact or direct wiping, inspection can be performed even on an inspection object having a curved surface or some unevenness.
【００５６】[0056]
【実施例】次に実施例をあげて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
なお、各例において用いた測定方法を以下に示す。 （１）生育菌数 本発明のゲル培地またはシート状培地に生成した黒色集
落数、または寒天培地上の黄色ブドウ球菌と推定される
集落数を目視によりカウントした。 （２）通気度 多孔質マトリックスをＪＩＳ Ｌ１９１２医療用不織布
試験方法フラジール形法に準じて測定した値（単位：Ｌ
／（ｍ2・ｓｅｃ））。Next, the present invention will be described in detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
The measurement method used in each example is shown below. (1) Number of Growing Bacteria The number of black colonies formed on the gel medium or sheet medium of the present invention or the number of colonies estimated to be Staphylococcus aureus on the agar medium was visually counted. (2) Air permeability A value (unit: L) obtained by measuring the porous matrix according to JIS L1912 Medical Nonwoven Fabric Test Method Frazier Form Method
/ (M 2 · sec)).
【００５７】実施例１ 水にトリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、マンニット１
０ｇ、塩化リチウム５ｇ、グリシン１０ｇ、リン酸二カ
リウム５ｇ、塩化ナトリウム１５ｇ、フェノールレッド
０．０２５ｇ、および寒天１５ｇを加え、水の使用量を
調整して全体の容量を１０００ｍｌにした後加熱溶解し
た。次いで１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌を行い、約
５０℃に冷却後、ろ過滅菌した濃度２重量％の亜テルル
酸カリウム水溶液および濃度０．０２重量％のバシトラ
シン水溶液１０ｍｌずつを無菌的に加えて撹拌後、直径
９０ｍｍの滅菌済シャーレに分注し固化した。Example 1 Tryptone 10 g, yeast extract 5 g, mannitol 1 in water
0 g, 5 g of lithium chloride, 10 g of glycine, 5 g of dipotassium phosphate, 15 g of sodium chloride, 0.025 g of phenol red, and 15 g of agar were added, and the amount of water was adjusted to make the total volume 1000 ml, followed by heating and melting. . Then, high-pressure steam sterilization was performed at 121 ° C. for 15 minutes, and after cooling to about 50 ° C., 10 ml each of a 2 wt% aqueous solution of potassium tellurite and a 0.02 wt% aqueous solution of bacitracin which had been sterilized by filtration were added aseptically. After stirring, the mixture was dispensed into a sterilized petri dish having a diameter of 90 mm and solidified.
【００５８】スタフィロコッカス・アウレウス（Staphy
lococcus aureus）７株、スタフィロコッカス・エピデ
ルミディス（Staphylococcus epidermidis）２株、スタ
フィロコッカス・ホミニス亜種（Staphylococcus homin
is subsp hominis）、スタフィロコッカス・ヒイカス亜
種（Staphylococcus hyicus subsp hyicus）各1株、バ
シルス（Bacillus）属７株、シトロバクター（Citrobac
ter）属４株、コリネバクテリウム（Corynebacterium）
属２株、エンテロバクター（Enterobacter）属７株、大
腸菌２株、クレブシエラ（Klebsiella）属６株、リステ
リア（Listeria）属３株、ミクロコッカス（Micrococcu
s）属２株、プロテウス（Proteus）属３株、シュードモ
ナス（Pseudomonas）属５株、サルモネラ（Salmonell
a）属６株、セラチア（Serratia）属２株、及びエロモ
ナス（Aeromonas）属、セダシア（Cedacea）属、ハフニ
ア（Hafnia）属、ジョネシア（Jonesia）属、クライベ
ラ（Kluyvera）属、モルガネラ（Morganella）属、プロ
ビデンシア（Providencia）属、ラーネラ（Rahnella）
属、ロドコッカス（Rhodococcus）属各1株、及び食品分
離グラム陽性球菌２５株、食品分離酵母１０株を普通ブ
イヨンまたはＢＨＩブイヨンで培養後、滅菌生理食塩水
で数百ｃｆｕ／ｍｌとなるように希釈して、０．２ｍｌ
を上記培地に加え、コーンラージ棒で塗布後、３５℃で
培養した。スタフィロコッカス・アウレウスは７株すべ
てが約１８時間後には黒色集落を形成したが、スタフィ
ロコッカス・アウレウス以外のブドウ球菌は４８時間ま
で生育が認められず、ブドウ球菌以外の菌株も生育が認
められないか、生育しても黒色集落とはならなかった。Staphylococcus aureus (Staphy
lococcus aureus), 2 strains of Staphylococcus epidermidis, 2 strains of Staphylococcus hominis (Staphylococcus homin)
is subsp hominis), 1 strain each of Staphylococcus hyicus subsp hyicus, 7 strains of the genus Bacillus, and Citrobac
ter) 4 strains, Corynebacterium
2 strains, 7 strains of Enterobacter, 2 strains of Escherichia coli, 6 strains of Klebsiella, 3 strains of Listeria, Micrococcu
s) Two strains of the genus, three strains of the genus Proteus, five strains of the genus Pseudomonas, and Salmonell
a) Six strains, two strains of Serratia, two strains of the genus Aeromonas, the genus Aeromonas, the genus Cedacea, the genus Hafnia, the genus Johnesia, the genus Kluyvera, the genus Morganella , The genus Providencia, Rahnella
Genus, one strain of Rhodococcus, 25 strains of food-isolated gram-positive cocci, and 10 strains of food-isolated yeast, cultured in ordinary broth or BHI broth, and diluted with sterile physiological saline to a concentration of several hundred cfu / ml. And 0.2ml
Was added to the above medium, and the mixture was applied with a corn large bar, and then cultured at 35 ° C. All seven strains of Staphylococcus aureus formed black colonies after about 18 hours, but staphylococci other than Staphylococcus aureus did not grow until 48 hours, and strains other than staphylococci also grew. They did not grow or grew and did not become black colonies.
【００５９】実施例２ 食肉、総菜などの各種食品１０ｇを滅菌済袋に入れ、１
００ｍｌの滅菌生理食塩水を加えてストマッカーでホモ
ジナイズし、滅菌生理食塩水で１０倍希釈列を作製し、
試料液を作製した。試料液０．２ｍｌを実施例１で作製
した培地およびマンニット食塩卵黄寒天培地、スタフィ
ロコッカス１１０番培地に加え、コーンラージ棒で塗布
後、３５℃で２４〜４８時間培養した。図１、２に推定
黄色ブドウ菌数の結果を示す。一部の集落を釣菌し、コ
アグラーゼ試験を行った結果、実施例１の培地で黒色集
落が認められず、マンニット食塩卵黄寒天培地、スタフ
ィロコッカス１１０番培地で黄色ブドウ球菌と推定され
る集落が認められたときはすべてコアグラーゼ陰性であ
った。実施例１の培地での黒色集落のほとんどはコアグ
ラーゼ陽性であったが、マンニット食塩卵黄寒天培地、
スタフィロコッカス１１０番培地で黄色ブドウ球菌と推
定される集落ではコアグラーゼ陰性の集落も認められ
た。Example 2 10 g of various foods such as meat and prepared dishes are put in a sterilized bag, and
Add 00 ml of sterile physiological saline, homogenize with a stomacher, make a 10-fold dilution series with sterile physiological saline,
A sample liquid was prepared. 0.2 ml of the sample solution was added to the medium prepared in Example 1, the mannitol salt egg yolk agar medium, and Staphylococcus No. 110 medium, applied with a corn large stick, and cultured at 35 ° C for 24 to 48 hours. 1 and 2 show the results of the estimated number of Staphylococcus aureus. Some colonies were picked and subjected to a coagulase test. As a result, no black colonies were found in the medium of Example 1, and it was estimated that Staphylococcus aureus was present in the mannitol salt egg yolk agar medium and Staphylococcus # 110 medium. All colonies were negative for coagulase. Most of the black colonies in the medium of Example 1 were positive for coagulase, but mannitol salt egg yolk agar medium,
In the colonies presumed to be Staphylococcus aureus in Staphylococcus No. 110 medium, a coagulase-negative colony was also observed.
【００６０】実施例３ 水４００ｍｌに鹸化度８９％、分子量８３０００のポリ
ビニルアルコール３０ｇを加えて加熱溶解後、厚さ２０
μｍでサイズが０．５ｍ×１ｍのポリエステルフィルム
上に塗布し、１２０℃で６分間乾燥した。水７５０ｍｌ
に前記のポリビニルアルコール１６ｇ、ペプトン２．５
ｇ、酵母エキス１．２５ｇ、マンニット２．５ｇ、塩化
リチウム１．２５ｇ、グリシン２．５ｇ、リン酸二カリ
ウム１．２５ｇ、塩化ナトリウム３．４ｇを加え加熱溶
解した。得られた溶液の半分を前記のポリビニルアルコ
ールのみからなる層に塗布して１１０℃で５分間乾燥
し、得られた層に残りの溶液を塗布して同じ条件で乾燥
した。得られた層の上に、前記のポリビニルアルコール
４ｇ、ペプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．１２５ｇ、
マンニット０．２５ｇ、塩化リチウム０．１２５ｇ、グ
リシン０．２５ｇ、リン酸二カリウム０．１２５ｇ、亜
テルル酸カリウム０．０５ｇ、塩化ナトリウム０．３５
ｇ、バシトラシン０．２５ｍｇを水６０ｍｌに溶解して
塗布し、更にその上に、目付６５ｇ／ｍ2、通気度１２
０Ｌ／（ｍ2・ｓｅｃ）のナイロンメルトブロー不織布
を張り合わせて、１００℃で３０秒間乾燥した。得られ
た培地積層物を、台紙として用いたポリエステルフィル
ムを剥がさないまま、直径５０ｍｍの円形に切断し、厚
さ０．１ｍｍ、サイズ８０ｍｍ×９０ｍｍのポリエステ
ル粘着フィルムのほぼ中央部分に台紙側を接着した。更
にその上に、培地積層物を覆う形で厚さ６０μｍ、サイ
ズ８０ｍｍ×９５ｍｍのポリプロピレンフィルムを被
せ、エチレンオキサイドガス滅菌を行い、ポリエステル
粘着フィルムの培地積層物に覆われていない部分にポリ
プロピレンフィルムを接着させて、黄色ブドウ球菌用シ
ート状培地を作製した。Example 3 30 g of polyvinyl alcohol having a degree of saponification of 89% and a molecular weight of 83,000 was added to 400 ml of water and dissolved by heating.
It was applied on a 0.5 μm × 1 m polyester film of μm and dried at 120 ° C. for 6 minutes. 750 ml of water
16 g of the polyvinyl alcohol and 2.5 of peptone
g, yeast extract 1.25 g, mannitol 2.5 g, lithium chloride 1.25 g, glycine 2.5 g, dipotassium phosphate 1.25 g, and sodium chloride 3.4 g were added and dissolved by heating. Half of the obtained solution was applied to the above-mentioned layer composed of only polyvinyl alcohol and dried at 110 ° C. for 5 minutes. The remaining solution was applied to the obtained layer and dried under the same conditions. On the obtained layer, 4 g of the polyvinyl alcohol, 0.25 g of peptone, 0.125 g of yeast extract,
Mannit 0.25 g, lithium chloride 0.125 g, glycine 0.25 g, dipotassium phosphate 0.125 g, potassium tellurite 0.05 g, sodium chloride 0.35
g, bacitracin (0.25 mg) dissolved in 60 ml of water and applied, and further, a basis weight of 65 g / m 2 and an air permeability of 12
A nylon melt-blown nonwoven fabric of 0 L / (m 2 · sec) was laminated and dried at 100 ° C. for 30 seconds. The obtained culture medium laminate is cut into a circle having a diameter of 50 mm without peeling off the polyester film used as the backing sheet, and the backing side is adhered to a substantially central portion of a polyester adhesive film having a thickness of 0.1 mm and a size of 80 mm × 90 mm. did. Furthermore, a polypropylene film having a thickness of 60 μm and a size of 80 mm × 95 mm is put thereon so as to cover the culture medium laminate, and ethylene oxide gas sterilization is performed.The polypropylene film is coated on a portion of the polyester adhesive film which is not covered with the culture medium laminate. A sheet medium for Staphylococcus aureus was prepared by adhesion.
【００６１】スタフィロコッカス・アウレウス（Staphy
lococcus aureus）７株、スタフィロコッカス・エピデ
ルミディス（Staphylococcus epidermidis）２株、スタ
フィロコッカス・ホミニス亜種（Staphylococcus homin
is subsp hominis）およびスタフィロコッカス・ヒイカ
ス亜種（Staphylococcus hyicus subsp hyicus）各1
株、バシルス（Bacillus）属７株、シトロバクター（Ci
trobacter）属４株、コリネバクテリウム（Corynebacte
rium）属２株、エンテロバクター（Enterobacter）属７
株、大腸菌２株、クレブシエラ（Klebsiella）属６株、
リステリア（Listeria）属３株、ミクロコッカス（Micr
ococcus）属２株、プロテウス（Proteus）属３株、シュ
ードモナス（Pseudomonas）属５株、サルモネラ（Salmo
nella）属６株、セラチア（Serratia）属２株、エロモ
ナス（Aeromonas）属、セダシア（Cedacea）属、ハフニ
ア（Hafnia）属、ジョネシア（Jonesia）属、クライベ
ラ（Kluyvera）属、モルガネラ（Morganella）属、プロ
ビデンシア（Providencia）属、ラーネラ（Rahnella）
属およびロドコッカス（Rhodococcus）属各１株、及び
食品分離グラム陽性球菌２５株、食品分離酵母１０株を
普通ブイヨンまたはＢＨＩブイヨンで培養後、滅菌生理
食塩水で数十ｃｆｕ／ｍｌとなるように希釈して、１ｍ
ｌを上記ブドウ球菌用シート状培地に加えて、３５℃で
培養した。スタフィロコッカス・アウレウスは７株すべ
てが約２０時間後には黒色集落を形成したが、スタフィ
ロコッカス・アウレウス以外のブドウ球菌及びブドウ球
菌以外の菌株は４８時間まで生育は観察されなかった。[0061] Staphylococcus aureus
lococcus aureus), 2 strains of Staphylococcus epidermidis, 2 strains of Staphylococcus hominis (Staphylococcus homin)
is subsp hominis) and 1 each of Staphylococcus hyicus subsp hyicus
Strain, 7 strains of the genus Bacillus, Citrobacter (Ci
4 strains of the genus trobacter, Corynebacte
rium), 2 strains of Enterobacter
Strains, 2 strains of Escherichia coli, 6 strains of the genus Klebsiella,
Three strains of the genus Listeria, Micrococcus (Micr)
ococcus), 3 strains of Proteus, 5 strains of Pseudomonas, and Salmonella
nella), two strains of the genus Serratia, two strains of the genus Serratia, the genus Aeromonas, the genus Cedacea, the genus Hafnia, the genus Johnesia, the genus Kluyvera, the genus Morganella, Providencia, Rahnella
Genus and one strain of Rhodococcus, 25 strains of food-isolated gram-positive cocci, and 10 strains of food-isolated yeast are cultured in ordinary broth or BHI broth, and then diluted with sterile physiological saline to several tens of cfu / ml. Then 1m
was added to the staphylococcal sheet medium and cultured at 35 ° C. All seven strains of Staphylococcus aureus formed black colonies after about 20 hours, but staphylococci other than Staphylococcus aureus and strains other than staphylococci did not grow until 48 hours.
【００６２】実施例４ 食肉、総菜などの各種食品１０ｇを滅菌済袋に入れ、１
００ｍｌの滅菌生理食塩水を加えてストマッカーでホモ
ジナイズし、滅菌生理食塩水で１０倍希釈列を作製し、
試料液を作製した。試料液１ｍｌを実施例３で作製した
シート状培地に加え、０．２ｍｌをマンニット食塩卵黄
寒天培地、スタフィロコッカス１１０番培地に加え、コ
ーンラージ棒で塗布後、３５℃で２４〜４８時間培養し
た。図３、４に推定黄色ブドウ球菌数の結果を示す。一
部の集落を釣菌し、コアグラーゼ試験を行った結果、実
施例３のシート状培地での黒色集落のほとんどはコアグ
ラーゼ陽性であったが、マンニット食塩卵黄寒天培地、
スタフィロコッカス１１０番培地で黄色ブドウ球菌と推
定される集落ではコアグラーゼ陰性の集落も認められ
た。Example 4 10 g of various foods such as meat and prepared dishes are put in a sterilized bag, and
Add 00 ml of sterile physiological saline, homogenize with a stomacher, make a 10-fold dilution series with sterile physiological saline,
A sample liquid was prepared. 1 ml of the sample solution was added to the sheet medium prepared in Example 3, and 0.2 ml was added to the mannitol salt egg yolk agar medium and Staphylococcus No. 110 medium. After application with a cone large rod, the mixture was applied at 35 ° C. for 24 to 48 hours. Cultured. 3 and 4 show the results of the estimated Staphylococcus aureus count. Some colonies were fished and subjected to a coagulase test. As a result, most of the black colonies in the sheet-shaped medium of Example 3 were positive for coagulase, but mannitol salt egg yolk agar medium,
In the colonies presumed to be Staphylococcus aureus in Staphylococcus No. 110 medium, a coagulase-negative colony was also observed.
【００６３】[0063]
【発明の効果】本発明の黄色ブドウ球菌検出用培地によ
り、卵黄を加えなくとも黄色ブドウ球菌を容易に判別す
ることができるようになった。即ち、塩化ナトリウムと
バシトラシンを組み合わせて添加することによって、黄
色ブドウ球菌の生育は阻害されず、黄色ブドウ球菌以外
の微生物の生育は押さえられるため、黄色ブドウ球菌の
集落が黒色集落として観察され、黄色ブドウ球菌の有無
及び黄色ブドウ球菌数を容易に判定できる。黄色ブドウ
球菌以外はほとんど黒色集落を形成しないので、鑑別試
験の手間も削減できる。また、本発明のシート状培地を
使用すれば、培養前の培地の準備が要らず、食品や環境
中の黄色ブドウ球菌検査が簡便に行えるし、通常の食品
や環境検査に加え、曲面や多少の凹凸のある面でも直接
検査対象にスタンプまたはふき取って検査することもで
きる。また、薄い形状であるため、保存や培養に場所を
とらず、廃棄物の体積も通常の微生物培地に比べ大幅に
減少できる。According to the medium for detecting Staphylococcus aureus of the present invention, Staphylococcus aureus can be easily identified without adding yolk. That is, by adding sodium chloride and bacitracin in combination, the growth of Staphylococcus aureus is not inhibited, and the growth of microorganisms other than Staphylococcus aureus is suppressed, so that the colonies of Staphylococcus aureus are observed as black colonies and yellow. The presence or absence of Staphylococcus and the number of Staphylococcus aureus can be easily determined. Other than Staphylococcus aureus, hardly any black colonies are formed, so that the time required for a differential test can be reduced. Further, if the sheet-form medium of the present invention is used, it is not necessary to prepare a culture medium before culturing, and it is possible to easily carry out an inspection of Staphylococcus aureus in foods and the environment. Inspection can also be performed by stamping or wiping the object to be inspected directly on the surface having irregularities. In addition, because of its thin shape, it takes up little space for storage and culturing, and the volume of waste can be greatly reduced as compared with ordinary microorganism culture media.
【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]
【図１】実施例１の培地とスタフィロコッカス１１０番
培地との比較FIG. 1: Comparison of the medium of Example 1 with Staphylococcus No. 110 medium
【図２】実施例１の培地とマンニット食塩卵黄寒天培地
との比較FIG. 2 shows a comparison between the medium of Example 1 and mannitol salt egg yolk agar medium.
【図３】実施例３のシート状培地とスタフィロコッカス
１１０番培地との比較FIG. 3 shows a comparison between the sheet-shaped medium of Example 3 and Staphylococcus No. 110 medium.
【図４】実施例３のシート状培地とマンニット食塩卵黄
寒天培地との比較FIG. 4 shows a comparison between the sheet-shaped medium of Example 3 and the mannitol salt egg yolk agar medium.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:445） Ｃ１２Ｒ 1:445） Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QA18 QQ06 QQ15 QQ16 QQ17 QQ18 QR44 QR49 QR50 QR69 QR85 QS24 QX02 4B065 AA53X BB02 BB12 BB14 BB23 BB27 BB29 BC42 BC50 CA46 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) C12R 1: 445) C12R 1: 445) F-term (Reference) 4B063 QA01 QA18 QQ06 QQ15 QQ16 QQ17 QQ18 QR44 QR49 QR50 QR69 QR85 QS24 QX02 4B065 AA53X BB02 BB12 BB14 BB23 BB27 BB29 BC42 BC50 CA46
Claims (17)
トラシンを必須成分として含むことを特徴とする黄色ブ
ドウ球菌検出用培地。1. A medium for detecting Staphylococcus aureus, characterized by containing tellurite, sodium chloride and bacitracin as essential components.
なる群から選ばれる１種以上の栄養成分、リン酸カリウ
ム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリ
ウムからなる群から選ばれる１種以上の塩、及び塩化リ
チウム、グリシンおよびマンニットからなる群から選ば
れる１種以上の成分を含むことを特徴とする、請求項１
に記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。2. One or more nutrients selected from the group consisting of peptone, yeast extract and meat extract, one or more salts selected from the group consisting of potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate, And at least one component selected from the group consisting of lithium chloride, glycine, and mannitol.
2. The medium for detecting Staphylococcus aureus according to item 1.
該培地１０００ｍｌ当たり、０．０５〜０．５ｇの亜テ
ルル酸塩、１０〜２０ｇの塩化ナトリウムおよび０．１
〜１０ｍｇのバシトラシンを含有することを特徴とす
る、請求項１または２に記載の黄色ブドウ球菌検出用培
地。3. A medium solidified using a gelling agent,
For every 1000 ml of the medium, 0.05-0.5 g of tellurite, 10-20 g of sodium chloride and 0.1
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to claim 1 or 2, comprising 10 to 10 mg of bacitracin.
プトン、２〜１０ｇの酵母エキス、２．５〜７．５ｇの
塩化リチウム、５〜１５ｇのグリシン、２．５〜７．５
ｇのリン酸カリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウ
ムおよび炭酸カリウムからなる群から選ばれる１種以上
の塩、および任意の成分として５〜１５ｇのマンニット
を含むことを特徴とする、請求項３に記載の黄色ブドウ
球菌検出用培地。4. 1000 ml of medium, 5 to 15 g of peptone, 2 to 10 g of yeast extract, 2.5 to 7.5 g of lithium chloride, 5 to 15 g of glycine, 2.5 to 7.5.
g of potassium phosphate, sodium phosphate, one or more salts selected from the group consisting of sodium carbonate and potassium carbonate, and 5 to 15 g of mannitol as an optional component. The medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above.
の水溶性高分子化合物層を含み、多孔質マトリックス層
から最も離れた側の水溶性高分子化合物層に接して台紙
を含んでもよい積層物であることを特徴とする、請求項
１または２に記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。5. A culture medium comprising a porous matrix layer and 1 to 7 water-soluble polymer compound layers, and a mount in contact with the water-soluble polymer compound layer furthest away from the porous matrix layer. The medium for detecting Staphylococcus aureus according to claim 1 or 2, which is a good laminate.
合計の目付で０．０２５〜０．５ｇ／ｍ2の亜テルル酸
塩、５〜１５ｇ／ｍ2の塩化ナトリウムおよび０．０５
〜１０ｍｇ／ｍ2のバシトラシンを含有することを特徴
とする、請求項５に記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。6. The water-soluble polymer compound layer, tellurite of 0.025~0.5g / m 2 in basis weight of the sum for laminates, sodium chloride and 0.05 of 5 to 15 g / m 2
Characterized in that it contains a bacitracin to 10 mg / m 2, Staphylococcus aureus detection medium according to claim 5.
合計の目付で２．５〜１５ｇ／ｍ2のペプトン、１〜１
０ｇ／ｍ2の酵母エキス、１．２５〜５ｇ／ｍ 2の塩化リ
チウム、２．５〜１０ｇ／ｍ2のグリシン、２．５〜１
０ｇ／ｍ2のマンニット、１．２５〜５ｇ／ｍ2のリン酸
カリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび炭
酸カリウムからなる群から選ばれる１種以上の塩、およ
び任意成分としての１〜１０ｇ／ｍ2の肉エキスを含有
することを特徴とする、請求項６に記載の黄色ブドウ球
菌検出用培地。7. The method according to claim 1, wherein the water-soluble polymer compound layer is
2.5 to 15 g / m in total basis weightTwoPeptone, 1-1
0 g / mTwoYeast extract, 1.25 to 5 g / m TwoOf chloride
Titanium, 2.5 to 10 g / mTwoGlycine, 2.5-1
0 g / mTwoMannit, 1.25 to 5 g / mTwoPhosphoric acid
Potassium, sodium phosphate, sodium carbonate and charcoal
At least one salt selected from the group consisting of potassium acid
And 1 to 10 g / m as optional componentsTwoContains meat extract
The yellow grape sphere according to claim 6, characterized in that:
Medium for bacterial detection.
とを特徴とする、請求項５〜７のいずれか１項に記載の
黄色ブドウ球菌検出用培地。8. The medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of claims 5 to 7, wherein the number of the water-soluble polymer compound layers is two to six.
分子化合物が、鹸化度７５〜９５％、分子量２５０００
〜２５００００のポリビニルアルコールであることを特
徴とする、請求項５〜８のいずれか１項に記載の黄色ブ
ドウ球菌検出用培地。9. The water-soluble polymer compound contained in the water-soluble polymer compound layer has a saponification degree of 75 to 95% and a molecular weight of 25,000.
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of claims 5 to 8, wherein the medium is polyvinyl alcohol of up to 250,000.
分子化合物層が目付１〜２０ｇ／ｍ2の水溶性高分子化
合物を含むことを特徴とする、請求項５〜９のいずれか
１項に記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。10. The method according to claim 5, wherein the water-soluble polymer compound layer in contact with the porous matrix layer contains a water-soluble polymer compound having a basis weight of 1 to 20 g / m 2. The medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above.
００ｇ／ｍ2、通気度７０〜２４０Ｌ／（ｍ2・ｓｅｃ）
のナイロンメルトブロー不織布が用いられていることを
特徴とする、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の黄
色ブドウ球菌検出用培地。11. A porous matrix having a basis weight of 40 to 1
00 g / m 2 , air permeability 70 to 240 L / (m 2 · sec)
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of claims 5 to 10, wherein a nylon meltblown nonwoven fabric is used.
ム、亜テルル酸塩、ペプトン、酵母エキス、塩化リチウ
ム、グリシン、マンニット、リン酸カリウム、リン酸ナ
トリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウムからなる
群から選ばれる１種以上の成分を保持していることを特
徴とする、請求項５〜１１のいずれか１項に記載の黄色
ブドウ球菌検出用培地。12. The porous matrix layer is selected from the group consisting of sodium chloride, tellurite, peptone, yeast extract, lithium chloride, glycine, mannitol, potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate and potassium carbonate. The medium for detecting Staphylococcus aureus according to any one of claims 5 to 11, which retains at least one component.
化ナトリウム、亜テルル酸塩、ペプトン、酵母エキス、
塩化リチウム、グリシン、マンニット、リン酸カリウ
ム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリ
ウムからなる群から選ばれる１種以上の成分の合計量
が、目付０．３〜３ｇ／ｍ2であることを特徴とする、
請求項１２に記載の黄色ブドウ球菌検出用培地。13. A sodium matrix, a tellurite, a peptone, a yeast extract, which is held by a porous matrix layer.
The total amount of one or more components selected from the group consisting of lithium chloride, glycine, mannitol, potassium phosphate, sodium phosphate, sodium carbonate, and potassium carbonate has a basis weight of 0.3 to 3 g / m 2. Features,
The medium for detecting Staphylococcus aureus according to claim 12.
培地が、該培地より大きな粘着シートの中心部に多孔質
マトリックス層が上になるように接着され、その上に該
培地より大きな透明フィルムが多孔質マトリックス層に
接しかつ該培地と中心部を合わせるように被せられ、こ
の透明フィルムの該培地からはみ出している部分が粘着
シートの該培地によって覆われていない部分と接着され
ていることを特徴とする黄色ブドウ球菌検出用シート状
培地。14. The medium according to any one of claims 5 to 13, wherein the medium is adhered to the center of a pressure-sensitive adhesive sheet larger than the medium so that the porous matrix layer faces upward. A large transparent film is placed so as to be in contact with the porous matrix layer and align the center with the medium, and a portion of the transparent film that protrudes from the medium is adhered to a part of the adhesive sheet that is not covered by the medium. A sheet-shaped medium for detecting Staphylococcus aureus, characterized in that:
ム系粘着剤を塗布した、ポリエステルフィルム、白色ポ
リエステルフィルム、ポリオレフィン系合成紙またはポ
リオレフィンラミネート紙であり、透明フィルムがポリ
オレフィンフィルムまたは剥離処理ポリオレフィンフィ
ルムであることを特徴とする、請求項１４に記載の黄色
ブドウ球菌検出用シート状培地。15. The adhesive sheet is a polyester film, a white polyester film, a polyolefin synthetic paper or a polyolefin laminate paper coated with an acrylic adhesive or a rubber adhesive, and the transparent film is a polyolefin film or a release-treated polyolefin film. The sheet medium for detecting Staphylococcus aureus according to claim 14, characterized in that it is present.
ｍであり、透明フィルムの厚さが２０〜１００μｍであ
ることを特徴とする、請求項１４または１５に記載の黄
色ブドウ球菌検出用シート状培地。16. The pressure-sensitive adhesive sheet has a thickness of 0.07 to 0.5 m.
m, and the thickness of the transparent film is 20 to 100 μm, wherein the sheet-shaped medium for detecting Staphylococcus aureus according to claim 14 or 15, characterized in that:
の一部がこの粘着シートの粘着力より強い粘着力で接着
されていることを特徴とする、請求項１４〜１６のいず
れか１項に記載の黄色ブドウ球菌検出用シート状培地。17. The method according to claim 14, wherein a part of an adhesive portion between the adhesive sheet and the transparent film is adhered with an adhesive force stronger than the adhesive force of the adhesive sheet. The sheet medium for detecting Staphylococcus aureus according to the above.
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- 2000-06-28 JP JP2000193818A patent/JP2001275657A/en active Pending
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