JP2001264334A - 梅毒トレポネーマ抗体測定試薬及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 擬陽性または擬陰性の検体が発生することが
少ないと共に、高感度で、一定した品質の梅毒トレポネ
ーマ抗体測定試薬を提供する。 【解決手段】 梅毒トレポネーマ抗原活性を有するペプ
チドを使用した梅毒トレポネーマ抗体測定試薬であっ
て、該ペプチドのうちの少なくとも１種のペプチドが、
配列表の配列番号１〜３９（例えば、 配列番号 １：Ser
Ala Gly Ala Leu Gln Leu Leu Val Val Gly Cys Gly S
er Ser His His Glu Thr His Tyr Gly Tyr Ala ）に表
わされた３９種のペプチドより選ばれた少なくとも１種
のペプチド中の、 連続する少なくとも５個以上のアミノ
酸配列を含むペプチドであることを特徴とする梅毒トレ
ポネーマ抗体測定試薬。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、梅毒トレポネーマ
抗原活性を有するペプチドを利用した梅毒トレポネーマ
抗体測定試薬及びその製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】臨床検査の分野においては、血液を利用
した梅毒トレポネーマ抗体の検査が行なわれており、こ
れまで種々の測定法が開発され利用されている。これら
の測定法の代表的な方法としては、酵素反応を利用する
生化学測定法や、抗原抗体反応を利用する免疫測定法等
が挙げられる。

【０００３】近年においては、血液中の梅毒トレポネー
マ抗体を精度よく測定することが望まれており、遺伝子
組み換え抗原を利用した免疫測定法が盛んに用いられる
ようになってきている。

【０００４】例えば、特開平９−２２９９８８号公報に
は、遺伝子組み換えにより調製した梅毒トレポネーマ抗
原を用いて、梅毒トレポネーマ抗体を検出する方法が開
示されている。

【０００５】遺伝子組み換え抗原を用いた試薬は、天然
抗原を用いた試薬に比べて同等あるいはそれ以上の試薬
性能を発揮することが一般に知られている。しかしなが
ら、かかる遺伝子組み換え抗原を用いた試薬であって
も、梅毒トレポネーマ抗体の測定において擬陽性あるい
は擬陰性の検体が発生してしまうという問題を完全に解
消することはできなかった。

【０００６】また、遺伝子組み換えによって調製する梅
毒抗原は、大腸菌等の微生物等より精製するため、製造
工程が複雑で品質のバラツキを生じ易く、試薬の感度不
足等を引き起こす原因となっている問題もあった。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題を
解決するものであり、その目的は、擬陽性あるいは擬陰
性の検体が発生することが少ないと共に、感度が高く、
一定した品質の梅毒トレポネーマ抗体測定試薬を提供す
ることにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】請求項１記載の発明は、
梅毒トレポネーマ抗原活性を有するペプチドを使用した
梅毒トレポネーマ抗体測定試薬であって、該ペプチドの
うちの少なくとも１種のペプチドが、配列表の配列番号
１〜３９に表わされた３９種のペプチドより選ばれた少
なくとも１種のペプチド中の、連続する少なくとも５個
以上のアミノ酸配列を含むペプチドであることを特徴と
する梅毒トレポネーマ抗体測定試薬である。

【０００９】請求項２記載の発明は、梅毒トレポネーマ
抗原活性を有するペプチドを使用した梅毒トレポネーマ
抗体測定試薬であって、該ペプチドのうちの少なくとも
１種のペプチドが、配列表の配列番号１１〜５２に表わ
された４２種のペプチドより選ばれたペプチドであるこ
とを特徴とする梅毒トレポネーマ抗体測定試薬である。

【００１０】請求項３記載の発明は、上記ペプチドが不
溶性担体に担持されていることを特徴とする請求項１ま
たは２記載の梅毒トレポネーマ抗体測定試薬である。

【００１１】請求項４記載の発明は、上記ペプチドの少
なくとも一部が、 キャリアータンパク質を介して不溶性
担体に担持されていることを特徴とする請求項３記載の
梅毒トレポネーマ抗体測定試薬である。

【００１２】請求項５記載の発明は、請求項４記載の梅
毒トレポネーマ抗体測定試薬の製造方法であって、第１
の工程として、キャリアータンパク質を不溶性担体に担
持させる工程を行った後、第２の工程として、上記ペプ
チドを上記第１の工程が行われた不溶性担体に担持させ
る工程を行うことを特徴とする梅毒トレポネーマ抗体測
定試薬の製造方法である。

【００１３】以下、本発明の内容について詳述する。

【００１４】本発明で使用するペプチドのアミノ酸配列
の選択は、以下の様にして行った。

【００１５】梅毒トレポネーマ抗原のうち、４７ｋＤａ
抗原、１５ｋＤａ抗原及びＴｍｐＡ抗原に関しては、既
に公知になっている梅毒トレポネーマ抗原活性を有する
部位（エピトープ）のアミノ酸配列を利用した。４７ｋ
Ｄａ抗原のエピトープのアミノ酸配列は、配列番号１〜
１０に示したものであり（R. E. Baughnらの報告(Thejo
urnal of Immunology 157 (1996) 720-731))、１５ｋＤ
ａ抗原のエピトープのアミノ酸配列は、配列番号１１〜
２３に示したものであり（R. E. Baughnらの報告(Infec
tion and Immuity 64(7) (1996) 2457-2466))、またＴ
ｍｐＡ抗原のエピトープのアミノ酸配列は、配列番号３
０〜３３に示したものであることが知られている(G. An
toniらの報告(Journal of Immunological Methods 189
(1996)137-140))。また、４７ｋＤａ抗原のエピトープ
の中でも特に抗原活性が高い部位のアミノ酸配列は配列
番号４０〜４８に示したものであり、ＴｍｐＡ抗原のエ
ピトープの中でも特に抗原活性が高い部位のアミノ酸配
列は配列番号３０に示したものであることが知られてい
る（上記各文献参照)。

【００１６】一方、梅毒トレポネーマ抗原のうち、１７
ｋＤａ抗原、ＴｍｐＢ抗原及び４Ｄ抗原に関しては、そ
のアミノ酸配列が既に報告されている（１７ｋＤａ抗原
については、D. R. Akinsらの報告(Infection and Immu
ity 64(4) (1993) 1202-1210)を、ＴｍｐＢ抗原につい
ては、Hansen, E. B. らの報告(J. Bacteriol 162(3)(1
985) 1227-1237)を、４Ｄ抗原については、Walfield,
A. M.らの報告(Infection and Immuity 57(2) (1989)
633-635)を参照。）が、梅毒トレポネーマ抗原活性を有
する部位（エピトープ）のアミノ酸配列に関しては報告
されていない。

【００１７】また、梅毒トレポネーマ由来のグリセロフ
ォスフォジエステル フォスフォジエステラーゼ（Glyce
rophosphodiester phosphodiesterase（ＧｌｐＱ））
は、分泌シグナルであるＮ末端の２０アミノ酸により菌
の外膜に分泌されるといわれている分子量約３８ｋＤａ
の酵素である。Cameron, C. E.らは、組み換えＧｌｐＱ
がウサギに免疫するとワクチンとしての働きを示すこと
から、反応性の高い免疫原（梅毒トレポネーマ抗原）で
あると結論づけている。梅毒トレポネーマＧｌｐＱ抗原
のアミノ酸配列は、Stebeck, C. E. ら(FEMS Microbio
l. Lett. 154(2)(1997) 303-310)やShevchenko, D. V.
ら(Infection and Immuity 65(10) (1997) 4179-4189)
により報告されているが、梅毒トレポネーマ抗原活性を
有する部位（エピトープ）のアミノ酸配列に関しては報
告されていない。

【００１８】このため、本発明者らは、Hopp, T. P.、W
oods, K. R. らの方法(Proc. Natle. Acid. Sci. USA 1
78(6) (1981) 3824-3828)により、１７ｋＤａ抗原、Ｔ
ｍｐＢ抗原４Ｄ抗原及びＧｌｐＱ抗原のエピトープのア
ミノ酸配列を推定した。

【００１９】１７ｋＤａ抗原のエピトープのアミノ酸配
列は、配列番号２４〜２６に示したものであり、この中
でも特に抗原活性が高い部位のアミノ酸配列は、配列番
号４９〜５２に示したものであると推定した。また、Ｔ
ｍｐＢ抗原のエプトープのアミノ酸配列は、配列番号２
７〜２９に示したものであり、この中でも特に抗体活性
が高い部位のアミノ酸配列は、配列番号２７に示したも
のであると推定した。４Ｄ抗原のエピトープのアミノ酸
配列は、配列番号３４〜３６に示したものであり、この
中でも特に抗原活性が高い部位のアミノ酸配列は、配列
番号３４に示したものであると推定した。さらに、Ｇｌ
ｐＱ抗原のエピトープのアミノ酸配列は、配列番号３７
〜３９に示したものであり、この中でも特に抗原活性が
高い部位のアミノ酸配列は、配列番号３７に示したもの
であると推定した。

【００２０】本発明は、上記エピトープのアミノ酸配列
の少なくとも一部を有するペプチドを利用した梅毒トレ
ポネーマ抗体測定試薬である。

【００２１】本発明で用いられるペプチドのうち少なく
とも１種のペプチドには、配列表の配列番号１〜３９に
表わされた３９種のペプチドより選ばれた少なくとも１
種のペプチド中の、連続する少なくとも５個以上、より
好ましくは７個以上のアミノ酸配列が含まれる必要があ
る。このようなペプチドとして、例えば、配列番号１に
表わされるペプチド（アミノ酸残基数２４個）に由来す
るものとしては、このペプチドから連続する５個以上、
２４個以下のアミノ酸を抜き出してなるペプチドそのも
のの他、これらのペプチドの一端または両端に任意のペ
プチドを結合させたペプチドであってもよい。また本発
明で用いられるペプチドは、配列表に示される３９種の
ペプチドから選んだ２種以上のペプチドのそれぞれから
抜き出した、連続する少なくとも５個以上のアミノ酸配
列を含むペプチドを、直接または別のペプチドを介して
結合させたペプチドであってもよい。

【００２２】本発明で用いられるペプチドのうちの少な
くとも１種のペプチドは、配列表の配列番号１１〜５２
に表わされた４２種のペプチドより選ばれたペプチドで
あるのがより好ましい。

【００２３】上記ペプチドの製法については、特に限定
されないが、一般には固相合成により得られたものを用
いることができる。

【００２４】本発明の梅毒トレポネーマ抗体測定試薬
は、好ましくは上記梅毒トレポネーマ抗原活性を有する
ペプチドが、不溶性担体に担持される。

【００２５】上記不溶性担体としては、例えば、有機高
分子粉末、微生物、血球または細胞膜片等が挙げられ
る。また、上記不溶性担体としては、ＥＬＩＳＡ等に用
いるプレート等であってもよい。

【００２６】上記有機高分子粉末としては、例えば、不
溶性アガロース、セルロース、不溶性デキストラン等の
天然高分子粉末；ポリスチレン、スチレン−スルホン酸
（塩）共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合体、ア
クリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体、塩化
ビニル−アクリル酸エステル共重合体、酢酸ビニル−ア
クリル酸エステル共重合体等の合成高分子粉末等が挙げ
られる。また、上記ＥＬＩＳＡ等に用いるプレート等に
ついても、ここに示したのと同様の有機高分子を材料と
して用いることができる。

【００２７】上記不溶性担体の中でも、特に合成高分子
粉末を均一に懸濁させたラテックスを用いるのが好まし
い。この場合、ラテックス粒子の粒径は、０．０５〜
１．５μｍが好ましく、０．１〜０．８μｍがより好ま
しい。

【００２８】また、上記不溶性担体として、その担体表
面にスルホン酸基、カルボキシル基、アミノ基あるいは
水酸基等を導入したものも適宜使用可能である。

【００２９】不溶性担体に上記ペプチドを担持させる場
合、物理吸着あるいは化学結合により直接担持させても
よいし、後述のようにキャリアータンパク質を介して担
持させても良い。

【００３０】物理吸着によりペプチドを担持させる場合
には、例えば、上記ペプチドを含む溶液に、上記不溶性
担体の懸濁液を添加し攪拌することにより担持させるこ
とができる。

【００３１】また、化学結合によりペプチドを担持させ
る場合には、表面にスルホン酸基、カルボキシル基、ア
ミノ基あるいは水酸基等が導入されている不溶性担体を
利用し、適当な架橋剤を添加することにより担持させる
ことができる。

【００３２】上記の担持工程を行う際の溶液のｐＨは３
〜１０、温度は２〜５０℃が好ましい。

【００３３】本発明においては、上記ペプチドの少なく
とも一部が、キャリアータンパク質を介して不溶性担体
に担持されるのがより好ましい。この場合、例えば、予
めペプチドをキャリアータンパク質に化学結合させた
後、このキャリアータンパク質を物理吸着で不溶性担体
に担持させることができる。また、キャリアータンパク
質を不溶性担体に担持させたものの懸濁液を、ペプチド
を含む溶液に添加し攪拌すると、物理的吸着によりペプ
チドがキャリアータンパク質に結合することによっても
得られる。あるいは、キャリアータンパク質表面のアミ
ノ基やカルボキシル基を利用し、適当な架橋剤を添加す
ることにより、ペプチドをキャリアータンパク質に化学
結合させることによっても得ることができる。

【００３４】上記キャリアータンパク質としては、例え
ば、血清アルブミン（ヒト、ウシ、ウマ、ウサギ等）、
オブアルブミン、卵白アルブミン等のアルブミン類、フ
ェリチンのような生体由来タンパク、キンホール・リン
ペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）のようなヘモシアニン
類、ガラクトシターゼやアルカリフォスターゼのような
酵素等が挙げられ、特に限定されるものではないが、入
手の容易さからウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いる
のが好ましい。 また、糖と結合した糖タンパクや脂質と
結合したリポタンパクのように、タンパク質と他の物質
が結合したものでも良い。

【００３５】本発明の梅毒トレポネーマ抗体測定試薬の
製造方法としては、第１の工程として、キャリアータン
パク質を不溶性担体に担持させる工程を行った後、第２
の工程として、上記ペプチドを上記第１の工程が行われ
た不溶性担体に担持させる工程を行う製造方法がより好
ましい。

【００３６】上記第１の工程においてキャリアータンパ
ク質の不溶性担体への担持方法は、物理吸着、化学結合
のいずれでも良い。

【００３７】物理吸着を利用する場合には、キャリアー
タンパク質を含む溶液に、不溶性担体の懸濁液を添加し
攪拌することによって担持させることができる。

【００３８】また、化学結合を利用する場合には、表面
にスルホン酸基、カルボキシル基、アミノ基あるいは水
酸基等が導入されている不溶性担体表面を利用し、適当
な架橋剤を反応させることにより、キャリアータンパク
質を不溶性担体に担持させることができる。上記架橋剤
としては、特に限定されるものではないが、Ｎ−サクシ
イミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−１−カルボ
キシレート（ＳＭＣＣ）等を用いることができる。

【００３９】上記物理吸着または化学結合によりキャリ
アータンパク質を担持させる際、溶液のｐＨは、３〜１
０、温度は、２〜５０℃が好ましい。これは、ｐＨがこ
の範囲を外れるとキャリアータンパク質が変性してしま
う等の問題が生じるためである。また、温度について
は、２℃未満であると、反応速度が遅く、所望の感度を
有する試薬が得られにくくなり、また、５０℃を超える
とキャリアータンパク質が変性してしまう等の問題があ
るためである。

【００４０】また上記第２の工程において、ペプチドの
上記第１の工程が行われた不溶性担体への担持方法につ
いても、 物理吸着あるいは化学結合のいずれでも良い。

【００４１】上記物理吸着を利用する場合には、 ペプチ
ドを含む溶液に、上記第１の工程でキャリアータンパク
質を不溶性担体に担持させたものの懸濁液を添加し攪拌
することによって担持させることができる。また、化学
結合を利用する場合には、 キャリアータンパク質あるい
は不溶性担体表面のアミノ基、カルボキシル基、チオー
ル基、スルホン酸基あるいは水酸基等の官能基を利用
し、上述したような架橋剤を添加することにより、キャ
リアータンパク質にペプチドを担持させることができ
る。

【００４２】上記物理吸着または化学結合によりペプチ
ドを担持させる際、溶液のｐＨは、３〜１０、温度は、
２〜５０℃が好ましい。

【００４３】本発明の梅毒トレポネーマ抗体測定試薬を
使用する際には、 適当な緩衝液などで希釈して用いても
よい。

【００４４】上記緩衝液としては、例えば、 リン酸緩衝
液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液、Ｇｏｏｄ緩衝液な
どが挙げられるが、 特に限定されず、 使用する基質等の
特性を考慮し、 適宜選択して用いればよい。

【００４５】［作用］本発明の梅毒トレポネーマ抗体測
定試薬は、遺伝子組み換えによる梅毒トレポネーマ抗原
を用いる代わりに、上述の様な梅毒トレポネーマ抗原活
性を有するペプチドを用いるため、擬陽性あるいは擬陰
性の検体発生の問題がなく、測定感度が高いと同時に製
造再現性に優れたものである。

【００４６】

【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。

【００４７】［実施例１〜７］ （１）ペプチド感作ラテックス液の調製 ウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡという）を１％（ｗ
／ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）
２ｍＬを、平均粒径０．４μｍのポリスチレンラテック
ス（固形分１０％（ｗ／ｖ）、積水化学工業社製）１０
０μＬに添加し、４℃で１．５時間攪拌した。次に、上
記ラテックスを添加したリン酸緩衝液に、表１に示した
各種ペプチド（それぞれ固相合成により得たもの）をそ
れぞれ２μｇ／ｍＬ（例えば、実施例１の場合では、配
列表の配列番号４０〜４８に示した９種のペプチド、合
計１８μｇ／ｍＬ）の濃度で溶解したペプチド溶解液４
００μＬを添加し、１時間攪拌した。 この液を１０℃に
て３０分間、１８０００ｒｐｍで遠心した。得られた沈
殿物に、ＢＳＡを０．２５％（ｗ／ｖ）含有する１００
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５ｍＬを添加し、ラテ
ックスを懸濁させ、ペプチド感作ラテックス液を調製し
た。

【００４８】

【表１】

【００４９】（２）検体希釈液の調製 ＢＳＡを０．２５％（ｗ／ｖ）、ｐＧＥＭＡ（グリコシ
ルエチルメタクリレートのホモポリマー、平均分子量１
１４万、日本精化社製）を１％（ｗ／ｖ）含有する１０
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）にエチレンジアミン
四酢酸ナトリウムをその濃度が５ｍＭになるよう溶解さ
せ、検体希釈液とした。

【００５０】（３）梅毒トレポネーマ抗体測定試薬 本発明の梅毒トレポネーマ抗体測定試薬は、上記（１）
項のペプチド感作ラテックス液からなる第１試薬と、上
記（２）の検体希釈液からなる第２試薬とから構成され
る２液系の試薬である。

【００５１】（４）標準物質 梅毒トレポネーマ抗体を０・１７・６７・４７５Ｔ．
Ｕ．（タイターユニット）含むヒト血清を標準梅毒トレ
ポネーマ抗体液として使用した。

【００５２】（５）自動分析装置による梅毒トレポネー
マ抗体価測定 以下に生化学自動分析装置「日立７０５０型」（日立製
作所社製）により、検体中の抗梅毒トレポネーマ抗体を
測定した方法を示す。 測定モード ： Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ａｂｓ パラメータ ： 検体量 ２０μＬ ペプチド感作ラテックス液（第１試薬） ５０μＬ 検体希釈液（第２試薬） ３５０μＬ 測定波長 ： ５７０ｎｍ 測定時間 ： 検体分注後、直ちに検体希釈液が添加・混合され、その後、 ペプチド感作ラテックス液が添加・混合される。ペプチド感作ラテックス液の添 加後、８０秒から３２０秒までの吸光変化量を求め、これを反応量とした。なお 、反応系のｐＨは、７．４で行った。

【００５３】［実施例８〜１４］実施例１〜７の（１）
ペプチド感作ラテックス試薬の調製の項を以下のように
したことを除いては、実施例１〜７と同様に行った。 （１）ペプチド感作ラテックス液の調製 ＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．４）２ｍＬを、平均粒径０．４μｍのポリ
スチレンラテックス（固形分１０％（ｗ／ｖ）、積水化
学工業社製）１００μＬに添加し、４℃で１．５時間攪
拌した。これに、ＳＭＣＣ（Ｎ−サクシイミジル−４−
（Ｎ−マレイミドメチル）−１−カルボキシレート）８
ｍｇ／ｍＬジメチルホルムアミド溶液０．４ｍＬを加
え、３５℃で１時間攪拌し、ＢＳＡとＳＭＣＣを結合さ
せた。次いで、上記溶液を透析膜（ＵＣ−３２−１０
０：サイズ２０／３２、三光純薬社製）を用い、生理食
塩水（０．９％ ＮａＣｌ）３Ｌで一昼夜透析した。次
に上記透析を行った溶液に、１００ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．４）に表１記載の各種ペプチド（それぞれ固
相合成により得たもの）をそれぞれ２μｇ／ｍＬ（例え
ば、実施例８の場合では、配列表の配列番号４０〜４８
に示した９種のペプチド、合計１８μｇ／ｍＬ）の濃度
で溶解したペプチド溶解液４００μＬを添加し、４℃で
１時間攪拌した。この液を１０℃にて３０分間、１８０
００ｒｐｍで遠心した。得られた沈殿物に、ＢＳＡを
０．２５％（ｗ／ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．４）５ｍＬを添加し、ラテックスを懸濁さ
せ、ペプチド感作ラテックス液を調製した。

【００５４】［比較例１〜７］実施例１〜７における
（１）項を以下の様に行ったこと以外は、実施例１〜７
と同様に行った。 （１）梅毒トレポネーマ抗原感作ラテックス液の調製 １００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）２ｍＬに１５μ
ｇ／ｍＬのタンパク濃度で溶解させた、表１記載の遺伝
子組み換え梅毒トレポネーマ抗原液４００μＬを添加
し、さらにこの液を、平均粒径０．４μｍのポリスチレ
ンラテックス（固形分１０％（ｗ／ｖ）、積水化学工業
社製）１００μＬに添加し、４℃にて１．５時間攪拌し
た。ついでＢＳＡを１％（ｗ／ｖ）含有する１００ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）２ｍＬを添加し、１．５時
間攪拌した。この液を１０℃で、３０分間、１８０００
ｒｐｍで遠心した。得られた沈殿物にＢＳＡを０．２５
％（ｗ／ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．４）５ｍＬを添加し、ラテックスを懸濁させ、梅毒
トレポネーマ抗原感作ラテックス液を調製した。

【００５５】［性能試験１］上記実施例１〜１４及び比
較例１〜７の梅毒トレポネーマ抗体測定試薬を、それぞ
れ５回づつ（５ロット）調製し、６７Ｔ．Ｕ．の標準梅
毒トレポネーマ抗体液を検体として抗体の測定を行っ
た。測定値から変動係数（ＣＶ値：標準偏差÷平均値×
１００）を求め、この値を表２に示した。

【００５６】

【表２】

【００５７】表２から明らかなように、実施例１〜１４
の本発明では、比較例１〜７に比べて、ロット間のばら
つきが小さく、製造再現性に優れている。

【００５８】［性能試験２］上記実施例１〜１４及び比
較例１〜７の梅毒トレポネーマ抗体測定試薬を用いて予
め陰性・陽性が解っている５０検体を測定し、その判定
の一致率を試験した、結果を、表３〜９に示した。な
お、１０Ｔ．Ｕ．以上を陽性と判断した。

【００５９】

【表３】

【００６０】

【表４】

【００６１】

【表５】

【００６２】

【表６】

【００６３】

【表７】

【００６４】

【表８】

【００６５】

【表９】

【００６６】表３〜９から明らかなように、実施例１〜
１４の本発明では陰性・陽性の判定結果が確実に一致し
ており、比較例１〜７のように、擬陰性・擬陽性の問題
の発生は起こらなかった。

【００６７】

【発明の効果】本発明は、上記の構成からなるので、遺
伝子組み換えによる梅毒トレポネーマ抗原を利用した測
定試薬と比較して、製造再現性に優れ、擬陰性・擬陽性
の発生が少ない梅毒トレポネーマ抗体測定試薬を提供す
ることができる。

【００６８】

【配列表】 <110> 積水化学工業株式会社 SEKISUI CHEMICAL CO., LTD. <120> 梅毒トレポネーマ抗体測定試薬及びその製造方法 <130> 00P02223 <160> 52 <210> 1 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 1 Ser Ala Gly Ala Leu Gln Leu Leu Val Val Gly Cys Gly Ser Ser His 1 5 10 15 His Glu Thr His Tyr Gly Tyr Ala 20 <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 2 Ala Gly Glu Leu Gly Gln Ser Arg Asp Val Leu Leu Ala Gly Asn Ala 1 5 10 15 Glu Ala Asp Arg 20 <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 3 Arg Lys Lys Trp Glu Tyr Glu Thr Asp Pro Ser Val Thr Lys Met Val 1 5 10 15 Arg Ala Ser Ala 20 <210> 4 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 4 Gly Glu Ile Lys Phe Glu Ala Val Glu Gly Ala Val Ala Leu Ala Asp 1 5 10 15 Arg Ala Ser Ser Phe Met Val Asp Ser Glu Glu Tyr Lys Ile Thr Asn 20 25 30 <210> 5 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 5 Glu Asp Ser Arg Val Thr Glu Asn Thr Asn Gly Leu Lys Thr Met Leu 1 5 10 15 Thr Glu Asp Ser 20 <210> 6 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 6 Met Glu Ser Pro His Asp Leu Val Val Asp Thr Val Gly Thr Val Tyr 1 5 10 15 His Ser Arg Phe Gly Ser Asp Ala 20 <210> 7 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 7 Asn Phe Asn Thr Val Arg Tyr Asp Tyr Tyr Gly Asp Asp Ala Ser Tyr 1 5 10 15 Thr Asn Leu Met 20 <210> 8 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 8 Phe Asp Arg Phe Lys Gly Ser Gly Pro Gly Tyr Tyr Arg Leu Thr Leu 1 5 10 15 Ile Ala Asn Gly Tyr Arg Asp Val Val Ala Asp Val Arg Phe Leu Pro 20 25 30 Lys Tyr Glu Gly Asn Ile Asp Ile 35 40 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 9 Ile Gly Gly Ala Asp Ala Glu Thr Leu Met Asp Ala Ala Val Asp Val 1 5 10 15 Phe Ala Asp Gly 20 <210> 10 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 10 Val Ser Asp Gln Ala Val Ser Leu Gly Gln Asn Val Leu Ser Ala Asp 1 5 10 15 Phe Thr Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Glu Val Arg Phe Lys Glu Phe 20 25 30 Gly Ser Val Arg Ala Lys Val Val 35 40 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 11 Val Met Tyr Ala Ser Ser Gly 1 5 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 12 Asp Tyr His Arg Val Met Tyr 1 5 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 13 Lys Met Val Gln Val Val Tyr Asp 1 5 <210> 14 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 14 Met Val Gln Val Val Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 15 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 15 Val Gln Val Val Tyr Asp Tyr Gln 1 5 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 16 Asp Tyr His Arg Val Met Tyr Ala 1 5 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 17 Met Tyr Ala Ser Ser Gly Ile Gly 1 5 <210> 18 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 18 Pro Glu Lys Ala Phe Arg Glu Leu 1 5 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 19 Glu Lys Ala Phe Arg Glu Leu Ala 1 5 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 20 Lys Ala Phe Arg Glu Leu Ala Asp 1 5 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 21 Phe Arg Glu Leu Ala Asp Ala Leu 1 5 <210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 22 Arg Glu Leu Ala Asp Ala Leu Leu 1 5 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 23 Val Thr Gly Ala Thr Val Ser Ser 1 5 <210> 24 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 24 Thr Thr Val Cys Pro His Ala Gly Lys Ala Lys Ala Glu Lys Val Glu 1 5 10 15 Cys Ala Leu Lys Gly Gly Ile Phe Arg 20 25 <210> 25 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 25 Val Glu Leu Ala Leu Glu Lys Lys Ser Ala Pro Ser Pro Leu Thr Tyr 1 5 10 15 Arg Gly Thr Trp 20 <210> 26 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 26 Arg Tyr Met Gly Ala Pro Gly Ala Gly Lys Pro Ser Lys Glu Met Ala 1 5 10 15 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 27 Gln Glu Glu Arg Lys Arg Ala Glu Glu Glu 1 5 10 <210> 28 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 28 Leu Val Ile Pro Ser Leu Lys Gly Glu Glu Arg Glu Gly Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 29 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 29 Lys Lys Leu Tyr Glu Ala Asn Lys Asp Lys Ile Pro Gln Ser Lys 1 5 10 15 <210> 30 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 30 Ala Ser Gly Ala Lys Glu Glu Ala Glu Lys Lys Ala Ala Glu Gln Arg 1 5 10 15 Ala Leu Leu <210> 31 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 31 Glu Ala Glu Lys Ala Leu Gln Ser Ala Lys Thr Lys Gln Lys Ala Ser 1 5 10 15 Ser Asp Leu Ala Arg Ser Ala Asp Lys Ser Ala Pro Leu Pro Glu Asn 20 25 30 Ala Gln Gly 35 <210> 32 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 32 Pro Leu Pro Glu Asn Ala Gln Gly Phe Ser Lys Glu Pro Ile Glu Val 1 5 10 15 Glu Pro Leu Pro Asn Asp Arg Leu Asn Thr Thr Gln Ala Asp Glu Ser 20 25 30 Ala Pro Ile Pro Ile 35 <210> 33 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 33 Asp Glu Ser Ala Pro Ile Pro Ile Ser Asp Thr Ser Ser Pro Ser Arg 1 5 10 15 Val Gln Ser Arg Gly Val Glu Asp Gly Gly Arg Ser Pro Lys Ser Ser 20 25 30 Met Asn Glu Glu Gly Ala Ser Arg 35 40 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 34 Ala Glu Glu Thr Glu Lys Glu Ile Thr Ile 1 5 10 <210> 35 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 35 Val Ser Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Asp Phe Glu Tyr Leu Ser 1 5 10 15 <210> 36 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 36 Glu Ala Phe Asp Thr Ile Ala Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Ala Gln 1 5 10 15 Ala Pro Ala Ser 20 <210> 37 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 37 Val Gln Thr Tyr Asp Phe Asn Glu Leu Lys Arg Ile Lys Arg Glu Leu 1 5 10 15 Leu Pro Lys Tyr Glu Met Asn Val Lys Leu Ile Gln Arg Val 20 25 30 <210> 38 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 38 Ala Tyr Thr Asp Gln Arg Glu Thr Gln Glu Lys Asp Ser Arg Gly Lys 1 5 10 15 Trp Ile Asn Tyr Asn Tyr Asn Trp Met Phe Glu Pro Gly Gly 20 25 30 <210> 39 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 39 Asp Val Ala Glu Lys Phe Pro Arg Arg Gln Arg Ala Asp Gly His Phe 1 5 10 15 Tyr Val Ile Asp Phe Thr Val Glu Glu Leu Ser Leu Leu Arg 20 25 30 <210> 40 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 40 Gly Gln Ser Arg Asp Val Leu Leu Ala Gly Asn Ala 1 5 10 <210> 41 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 41 Glu Tyr Glu Thr Asp Pro Ser Val Thr Lys Met Val 1 5 10 <210> 42 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 42 Gly Glu Ile Lys Phe Glu Ala Val Glu Gly Ala Val 1 5 10 <210> 43 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 43 Glu Asp Ser Arg Val Thr Glu Asn Thr Asn Gly Leu 1 5 10 <210> 44 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 44 Met Glu Ser Pro His Asp Leu Val Val Asp Thr Val 1 5 10 <210> 45 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 45 Asn Phe Asn Thr Val Arg Tyr Asp Tyr Tyr Gly Asp 1 5 10 <210> 46 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 46 Lys Gly Ser Gly Pro Gly Tyr Tyr Arg Leu Thr Leu 1 5 10 <210> 47 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 47 Ile Gly Gly Ala Asp Ala Glu Thr Leu Met Asp Ala 1 5 10 <210> 48 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 48 Phe Thr Pro Gly Thr Glu Tyr Thr Val Glu Val Arg 1 5 10 <210> 49 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 49 Lys Ala Lys Ala Glu Lys 1 5 <210> 50 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 50 Lys Ala Glu Lys Val Glu 1 5 <210> 51 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 51 Glu Lys Lys Ser Ala Pro 1 5 <210> 52 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Peptide <400> 52 Gly Lys Pro Ser Lys Glu 1 5

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 特願平11−299790 (32)優先日 平成11年10月21日(1999．10．21) (33)優先権主張国 日本（ＪＰ） (31)優先権主張番号 特願平11−290969 (32)優先日 平成11年10月13日(1999．10．13) (33)優先権主張国 日本（ＪＰ） (31)優先権主張番号 特願平11−287233 (32)優先日 平成11年10月７日(1999．10．7) (33)優先権主張国 日本（ＪＰ） Ｆターム(参考） 4H045 AA30 BA14 BA15 BA16 BA17 BA18 BA19 BA60 CA11 DA86 EA52

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 梅毒トレポネーマ抗原活性を有するペプ
   チドを使用した梅毒トレポネーマ抗体測定試薬であっ
   て、 該ペプチドのうちの少なくとも１種のペプチドが、配列
   表の配列番号１〜３９に表わされた３９種のペプチドよ
   り選ばれた少なくとも１種のペプチド中の、連続する少
   なくとも５個以上のアミノ酸配列を含むペプチドである
   ことを特徴とする梅毒トレポネーマ抗体測定試薬。
2. 【請求項２】 梅毒トレポネーマ抗原活性を有するペプ
   チドを使用した梅毒トレポネーマ抗体測定試薬であっ
   て、 該ペプチドのうちの少なくとも１種のペプチドが、配列
   表の配列番号１１〜５２に表わされた４２種のペプチド
   より選ばれたペプチドであることを特徴とする梅毒トレ
   ポネーマ抗体測定試薬。
3. 【請求項３】 上記ペプチドが不溶性担体に担持されて
   いることを特徴とする請求項１または２記載の梅毒トレ
   ポネーマ抗体測定試薬。
4. 【請求項４】 上記ペプチドの少なくとも一部が、キャ
   リアータンパク質を介して不溶性担体に担持されている
   ことを特徴とする請求項３記載の梅毒トレポネーマ抗体
   測定試薬。
5. 【請求項５】 請求項４記載の梅毒トレポネーマ抗体測
   定試薬の製造方法であって、 第１の工程として、キャリアータンパク質を不溶性担体
   に担持させる工程を行った後、 第２の工程として、上記ペプチドを上記第１の工程が行
   われた不溶性担体に担持させる工程を行うことを特徴と
   する梅毒トレポネーマ抗体測定試薬の製造方法。