JP2001151699A - 動物用ワクチンのオイルアジュバント - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 乳化安定性が良好で、注射された動物に対し
てショック、発熱、接種部位の壊死、硬結、疼痛等の接
種反応を生じない動物用ワクチンのオイルアジュバント
を提供する。 【解決手段】 油相成分が動物油及び／又は植物油で、
乳化剤として分子中にポリオキシアルキレン構造を持た
ない多価アルコール脂肪酸エステルを、免疫増強剤とし
て糖又は糖アルコールの脂肪酸エステルを含有し、分子
中にポリオキシアルキレン構造を持つ乳化剤を含有しな
い水中油型エマルジョンをオイルアジュバントとして用
いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、油中水型（以下Ｏ
／Ｗ型という）のオイルアジュバント及びそれらのアジ
ュバントを含む動物用のワクチンに関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来、
免疫を強化するためのオイルアジュバントとして、フロ
イントアジュバントに代表される水中油型（以下Ｗ／Ｏ
型という）アジュバントや、親水性界面活性剤を多く用
いたＯ／Ｗ型アジュバントが主として使用されてきた。
しかしこれらの内、Ｗ／Ｏ型オイルアジュバント製剤は
免疫効果が高い反面、ワクチン注射部位に硬結や腫脹、
疼痛、壊死などを引き起こす事例が少なからずあった。
一方、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバント製剤では接種部位の
硬結、腫脹、壊死などを引き起こす例は少ないものの、
乳化剤として、可溶化力が強く細胞障害性が高いポリオ
キシエチレン系の親水性乳化剤含むことから、ワクチン
を接種された動物に強い発熱が認められることが問題と
なっていた。

【０００３】具体的には、（１）特公平８−３２６３９
号公報には、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレ
ンブロックポリマー及びソルビタンモノオレートを乳化
剤に使用してスクアレンを乳化した、Ｏ／Ｗ型ワクチン
アジュバントが開示されている。また、（２）特開平５
−２５５１１７号公報には、少なくとも１種以上の疎水
性合成リポ多糖、界面活性剤及び水性溶質よりなるＯ／
Ｗ型ワクチンアジュバントが開示されている。また、
（３）特開平６−１７２２１６号公報には、油相成分に
植物油を、界面活性剤としてソルビタン脂肪酸エステル
とポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとを使
用したオイルアジュバントワクチンが開示されている。
更に、（４）特公平６−８１７３１号公報には、無水マ
ンニトール・オレイン酸エステルと流動パラフィンとか
らなるＷ／Ｏ型ワクチンアジュバントが開示されてい
る。しかし、（１）〜（３）は何れもポリオキシアルキ
レン構造を有する界面活性剤による効果を示すものであ
り、また、（４）はＷ／Ｏ型であり、何れも接種した動
物に対して発熱、接種部位の壊死、硬結、疼痛等の接種
反応を生じさせる。

【０００４】また、一般にＯ／Ｗ型乳化アジュバントを
調製する際には、乳化安定剤として、エタノール、イソ
プロパノール等の水溶性低級アルコール、セロソルブ
類、カービトール類等の水溶性グリコールエーテル（以
上、総称して、水溶性溶剤とする）、グリセリン、ジグ
リセリン、ポリグリセリン、エチレングリコール、プロ
ピレングリコール、１，３−ブタンジオール、低分子ポ
リエチレングリコール等の水溶性多価アルコールが使用
されるが、これらも、接種した動物に対して酩酊、発
熱、硬結、疼痛、等の接種反応を生じさせるので好まし
くないが、これらの水溶性多価アルコールを使用しない
でＯ／Ｗ乳化を行うと、生成した乳化粒子の径が小さく
ならず（１０００ｎｍ以上）、経時的に乳化粒子の合一
を生じ、安定性が低下する。

【０００５】このように、従来の動物ワクチン用オイル
アジュバント製剤は、安定性の良い乳化物を得るため
に、生体に対して刺激が強く、接種した動物に対して接
種反応を生じさせやすい成分を使用せざるを得なかっ
た。しかし、動物保護等の観点から、このような問題が
無く、且つ、経時的に安定で、免疫増強作用の良好な動
物用ワクチンのオイルアジュバンドが望まれている。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は、油相成分が動物油及び／又は植物油（以
下動・植物油という）であり、乳化剤として分子中にポ
リオキシアルキレン構造を持たない多価アルコール脂肪
酸エステルを、免疫増強剤として糖又は糖アルコールの
脂肪酸エステルを含有し、分子中にポリオキシアルキレ
ン構造を持つ乳化剤を含有しない油中水型エマルジョン
からなる動物用ワクチンのオイルアジュバントを提供す
るものである。更に本発明は、該オイルアジュバント
と、少なくとも一種の抗原とを含む、動物用ワクチンを
提供するものである。

【０００７】本発明のオイルアジュバント及びワクチン
は、ヒトを除く動物に適用されるが、具体的な対象動物
としては、家畜、家禽、愛玩用動物、魚類が挙げられ
る。

【０００８】

【発明の実施の形態】（１）動・植物油 油相成分の動物油としては、スクアレン及びスクアラン
等の炭化水素油、牛脂、馬油、ミンク油及び卵黄脂肪油
等のエステル油等が挙げられる。これらの中で、特に、
スクワレン、スクワランが、好適である。スクワレン
は、深海サメの肝油中に存在する炭化水素油であり、ス
クワランとはスクアレンの水素添加物ある。これらは動
物由来であるので、生体適合性及び安全性の面で、特に
好ましい。又、スクアランは、不飽和油であるスクアレ
ンの水素添加物であるので、酸化安定性に優れる。

【０００９】また油相成分の植物油としては、アボガド
油、オリーブ油、ゴマ油、コメヌカ油、トウモロコシ胚
芽油、小麦胚芽油、サフラワー油、ダイズ油、トウモロ
コシ油、ナタネ油、パーム油、ククイナッツ油、マカデ
ミアナッツ油、月見草油等のトリグリセライド、ホホバ
油等のロウエステルが挙げられる。同様に、オリーブオ
イルの不ケン化物中に存在する炭化水素油である、植物
起源のオリーブスクワレン及びオリーブスクワランも、
好適に使用できる。

【００１０】さらには、上記した動・植物油のうちエス
テル油を、低級アルコール又は高級アルコールとエステ
ル交換を行い、アルコール脂肪酸エステルとした油も好
適に使用できる。具体的には、オレイン酸エチル、オレ
イン酸オレイルなどのアルコール脂肪酸エステル等が挙
げられる。

【００１１】これらの動・植物油のうち構造中に不飽和
結合を多く含むもの、具体的には、動物油では、スクワ
レン、卵黄脂肪油等、植物油では、オリーブスクワレ
ン、ククイナッツ油、マカデミアナッツ油、月見草油、
ローズヒップ油等は、酸化に対して不安定であるので、
抗酸化剤を添加することで、本発明に、好適に使用でき
る。好ましい抗酸化剤としては、ビタミンＥ類、ビタミ
ンＡ類、ブチルヒドロキシアニソール、ｐ−ヒドロキシ
アニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プ
ロピル、パルミチン酸アスコルビル、ステアリン酸アス
コルビル等の油溶性抗酸化剤、アスコルビン酸、カテキ
ン類、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム等の
水溶性抗酸化剤が挙げられる。これらの抗酸化剤は、オ
イルアジュバント調製において、油相成分と混合して、
あるいは、使用する水に予め溶解しておいて、使用する
ことができる。

【００１２】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバント中の
好ましい動・植物油の配合量は、アジュバント製剤全体
に対して重量比で、好ましくは１０〜８０％、より好ま
しくは２０〜８０％、特に好ましくは２０〜５０％であ
る。この範囲において、アジュバント効果の持続性やエ
マルジョンの安定性が良好となる。

【００１３】（２）乳化剤 本発明のオイルアジュバントでは、乳化剤として分子中
に、ポリオキシエチレン（以下ＰＯＥという）構造、ポ
リオキシプロピレン（以下ＰＯＰという）構造等のポリ
オキシアルキレン構造を持たない多価アルコール脂肪酸
エステルが使用される。かかる多価アルコール脂肪酸エ
ステルは、多価アルコールと脂肪酸を、カセイソーダ等
のアルカリ触媒下、又は、パラトルエンスルホン酸等の
酸性触媒下、２００〜２５０℃で、公知の方法で脱水縮
合して製造されたエステルである。エステル反応後、ろ
過等の精製工程を経て触媒等を除去し、本発明に供せら
れる。好ましい多価アルコールとしては、ソルビタン、
ソルビトール、イソソルバイト等のソルビトール類及び
分子内脱水物、グリセリン、ジグリセリン、テトラグリ
セリン、ヘキサグリセリン、ペンタグリセリン、デカグ
リセリン等のグリセリン及びポリグリセリン類、ペンタ
エリスリトール、ショ糖、アルキルグルコシド及びポリ
アルキルグルコシド類等が挙げられる。好ましい脂肪酸
類としては、オクタン酸、デカン酸、ラウリン酸、ミリ
スチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリ
ン酸等の飽和脂肪酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、
リノール酸、リノレン酸等の不飽和脂肪酸、１２−ヒド
ロキシステアリン酸、リシノレイン酸等の水酸基を含む
脂肪酸及びそれらの脱水縮合物等が挙げられる。

【００１４】乳化剤としての多価アルコール脂肪酸エス
テルの好ましい極性は、ＨＬＢで９．０〜１８．０、好
ましくは、９．０〜１６．０、より好ましくは、１０．
０〜１６．０の範囲である。ＨＬＢが９．０未満である
と、乳化剤の親水性が小さすぎて、Ｏ／Ｗ型の乳化製剤
を調製できない。ＨＬＢが１８．０を超えると、乳化剤
の親水性が高すぎ、油/水の界面に乳化剤が集合するこ
となく、単独で水に分散してしまい、好ましい乳化性能
を発揮せず、結果的に、Ｏ／Ｗ型の乳化製剤を調製でき
ない。

【００１５】乳化剤として特に好ましい多価アルコール
脂肪酸エステルとしては、ジグリセリン、テトラグリセ
リン、ヘキサグリセリン、ペンタグリセリン、デカグリ
セリン等のポリグリセリン類と上記の飽和脂肪酸、不飽
和脂肪酸、水酸基を含む脂肪酸及びそれらの脱水縮合物
とのエステル（以下、ポリグリセリン脂肪酸エステ
ル）、及び、ショ糖と上記脂肪酸とのエステル（以下、
ショ糖脂肪酸エステル）である。これらは、上記の好ま
しいＨＬＢの範囲に調整され、本発明に供せられる。ま
た、これらポリグリセリン脂肪酸エステルとショ糖脂肪
酸エステルは、それぞれ単独で又は混合して使用され
る。両者の混合比は、特に制限がない。

【００１６】本発明の乳化剤の添加量は、動・植物油に
対して重量比で、好ましくは１．０〜５０．０％、より
好ましくは１．０〜３０．０％、特に好ましくは５．０
〜３０．０％である。この範囲内において、良好な乳化
安定性が得られる。

【００１７】（３）免疫増強剤 本発明では、免疫増強剤として糖又は糖アルコールの脂
肪酸エステルが用いられる。糖及び糖アルコールの脂肪
酸エステルとしては、グルコース、マンノース、ラクト
ース、フルクトース等の単糖類及びマンニトール、ソル
ビトール、キシリトール等の糖アルコール類（それらの
分子内脱水物を含む）と、脂肪酸とのエステルが挙げら
れる。好ましい脂肪酸としては、オクタン酸、デカン
酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステア
リン酸、イソステアリン酸等の飽和脂肪酸、パルミトレ
イン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等の不飽
和脂肪酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、リシノレイ
ン酸等の水酸基を含む脂肪酸及びそれらの脱水縮合物等
が挙げられる。

【００１８】免疫増強剤として用いられる糖及び糖アル
コールの脂肪酸エステルは、ＨＬＢが９以下、特に８〜
１のものが好ましい。

【００１９】これら免疫増強剤の配合量は、動・植物油
に対して重量比で、好ましくは０．５〜２０％、より好
ましくは、１．０〜２０．０％、特に好ましくは、１．
０〜１０．０％である。この範囲において良好な免疫賦
活性能が得られ、また乳化状態も良好となる。また、免
疫増強剤はこの範囲内で、全Ｏ／Ｗ型オイルアジュバン
ト中に１〜５ｗ／ｖ％となるように配合するのが好まし
い。

【００２０】（４）乳化安定剤 本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントには、その乳化安
定性を向上させる目的で、更に単糖類、２糖類及び糖ア
ルコールから選ばれる１種以上を、乳化安定剤として配
合できる。

【００２１】これらは、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバントを
調製する際に、乳化安定剤として一般的に使用される水
溶性多価アルコールに替えて配合されるものであり、こ
れら単糖類、２糖類、糖アルコール類は、接種した動物
に対して酩酊、発熱、接種部位の壊死、硬結、疼痛等の
接種反応を生じさせることがなく、Ｏ／Ｗ型オイルアジ
ュバントの乳化粒子径を好ましい範囲（後に記述）に調
整することで、安定なＯ／Ｗ型オイルアジュバントが調
製できる。

【００２２】好ましい単糖類としては、トリオース、テ
トロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オク
トース、ノノース、デコースのうち、いずれも好適に使
用できる。具体的には、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−フルクト
ース等が挙げられる。好ましい２糖類としては、ショ
糖、ラクトース、マルトース、トレハロース等が挙げら
れる。好ましい糖アルコールとしては、アルドース又は
ケトースのカルボニル基を還元して得られる鎖状の多価
アルコールと、環状アルコールであるイノシトールが挙
げられる。具体的には、ソルビトール、ソルビタン、イ
ソソルバイト、マンニトール、キシリトール、イノシト
ール等が挙げられる。

【００２３】これらの乳化安定剤の配合量は、本発明の
Ｏ／Ｗ型オイルアジュバント中に、少なくとも５．０
％、更に５．０〜５０％、特に１０．０〜５０．０％
（重量基準）であるのが好ましい。この範囲であると、
好ましい安定化効果を発揮でき、オイルアジュバントの
粘度も適正となり、注射等の際に、作業性も良好とな
る。

【００２４】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントは、
公知の乳化方法、乳化機械で調製できる。好ましい方法
は、動・植物油、免疫増強剤及び乳化剤の３成分、ある
いはこれらと更に必要に応じて配合される乳化安定剤の
４成分を、予め、室温で混合しておき、この混合物を、
水相へ、ホモミキサー又はパドルミキサー等で撹拌しな
がら、徐々に添加することで調製できる。又、上記混合
物と水を同時に仕込み、撹拌・混合しても調製できる。
乳化安定剤は、予め、水相へ溶解しておいても良い。そ
の際の温度は、室温〜８０℃、好ましくは、室温〜５０
℃である。又、動・植物油、免疫増強剤、乳化剤を同時
に水相へ添加し、超音波乳化機等の大きい機械力を利用
して調製してもよい。調製した乳化物の安定性を更に向
上させる目的で、乳化後、高圧ホモジナイザーで処理す
ることもできる。

【００２５】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントは、
乳化粒子径が、１０００ｎｍ以下、好ましくは、７００
ｎｍ以下、より好ましくは、５００ｎｍ以下である。こ
の範囲において乳化状態の経時安定性が良好で、特に、
抗原（ワクチン原体）と混合した際、乳化破壊の抑制に
優れる。

【００２６】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントに抗
原（ワクチン原体）を配合する場合、好ましい配合量は
５０〜８０ｖ／ｖ％である。好ましい抗原（ワクチン原
体）は、ウイルス粒子、細菌可溶化抗原、可溶性蛋白
質、蛋白質可溶化抗原などの粒子径の小さい、好ましく
は平均粒子径２００ｎｍ以下の抗原である。

【００２７】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントと抗
原（ワクチン原体）は、次の方法で混合され、ワクチン
製剤を得ることができる。例えば、油相成分５０ｖ／ｖ
％を含むアジュバント乳剤を使用する場合は、無菌的に
調製された本アジュバント乳剤とワクチン原液を等量混
合することにより、２５％の油相成分を含有するＯ／Ｗ
型アジュバントワクチンを簡単に製造できる。

【００２８】本発明により得られたワクチン製剤は、２
７ゲージの注射針でも注射可能であり、皮下、皮内、筋
肉内はもとより、アジュバントの安全性が高いため、使
用する油相成分、抗原の組み合わせを選ぶことで静脈内
注射によっても動物に接種することができる。

【００２９】

【発明の効果】本発明によれば、免疫強化力に優れ、乳
化安定性が良好でかつ動物に注射するのに十分低粘度で
あり、しかも、接種した動物に対して接種時のショック
症状、発熱、接種部位の壊死、硬結、疼痛等の接種反応
が生じない動物用ワクチンのオイルアジュバント及び動
物用ワクチンが得られる。

【００３０】

【実施例】実施例１ Ｏ／Ｗ型オイルアジュバントの
調製 容量２リッターのガラス製真空乳化機（ホモミキサー及
びパドル式攪拌装置、温度計、温度調節器、真空ポン
プ、滴下装置が付属した）に、表１、２の処方に示す組
成比で、全量が１ｋｇになるように原料を仕込み、５０
ミリＨｇの減圧下、５０℃、８０００回転／分で３０分
間攪拌を行い、それぞれの乳化物（Ｏ／Ｗ型オイルアジ
ュバント）を得た。

【００３１】得られたＯ／Ｗ型オイルアジュバントの安
定性は、５０℃±０．２℃の恒温槽中に、１ヶ月間保管
して、外観を観察し、下記の基準で評価した。 〇：水相の分離が確認されず、均一 △：水相の分離容積が、全体の１０％未満 ×：水相の分離容積が、全体の１０％以上

【００３２】

【表１】

【００３３】

【表２】

【００３４】実施例２（猫免疫試験） 実施例１で調製されたＯ／Ｗ型オイルアジュバントの効
果と安全性を確認する目的で、アジュバントなしでは通
常殆ど抗体価が上昇しない猫ヘルペスウイルスを抗原と
して、猫を免疫し、中和抗体の測定を行うとともに、注
射後の発熱と注射部位の剖検を行った。

【００３５】ウイルス原液（１０^8.2ＰＦＵ／ｍＬ）を
実施例１記載の各処方で調製したアジュバントと等量混
合して試作ワクチンを調製した。３ヶ月齢の猫の頸部皮
下にこれらの試作ワクチンを３週間間隔で２回１ｍＬ宛
注射し、ウイルスに対する中和抗体の推移を測定すると
ともに、継時的に剖検してワクチン注射部位の組織反応
を確認した。

【００３６】（１）中和抗体価の推移 表３に中和抗体価の推移を示すが、中和抗体価は処方１
で最も高く、処方２、３、４でもほぼ同様な価が得られ
た。一方比較例では処方８で良好な抗体上昇が確認され
たが、処方５〜７では乳剤の安定性が悪く、且つ抗体上
昇も不良であった。

【００３７】

【表３】

【００３８】（２）発熱性に関する試験 図１は各種アジュバントで調製した試作ワクチンを注射
した猫の発熱の状況を示したものである。ポリオキシエ
チレン系の親水性界面活性剤を全く使用していない処方
１〜４では発熱は軽微あるいは全く認められない〔図１
（Ａ）〕のに対して、ポリオキシエチレン系界面活性剤
を含む処方５〜８では注射後数時間から、３、４日にか
けて強い発熱が連続し、臨床的にも重篤な症状を示す例
がみられた〔図１（Ｂ）〕。

【００３９】（３）ワクチン注射時の猫の反応 ポリオキシエチレン系界面活性剤を含まない処方１〜４
ではワクチン注射時に疼痛を訴える個体はなかった。一
方ポリオキシエチレン系界面活性剤を含有する処方５か
ら８では全ての猫が、注射時に跳ねる、噛みつく、引っ
掻くなどの疼痛を訴える行動を示した。また、処方８で
はワクチン注射直後に猫が酩酊状態を示す場合がみら
れ、後に、処方８に乳化安定剤として含有されるグリセ
リンの影響によるものであることが確認された。しかし
糖類を安定剤とした場合にはこのような酩酊反応は全く
みられず、安全性が高いことが確認された。

【００４０】（４）注射部位の接種局所反応に関する試
験 表４はワクチン注射部位の剖検所見を比較した結果であ
る。処方１から４では注射後短時間での膠様浸潤が認め
られるがその程度は軽く、７日後の剖検では処方１，２
でわずかにみられるのみで、一ヶ月後においては注射部
位には殆ど痕跡を認めず、接種反応は極めて軽いことが
確認された。これに対して、処方５〜８では全般に接種
反応が強く、特にポリオキシエチレン系界面活性剤を含
む処方５〜７で強度の膠様浸潤と出血が認められた。ま
た７日後においてもこの傾向は続き、膠様浸潤、出血は
やや収まる方向にあるが接種部位の筋肉を中心として細
胞浸潤による白色化がみられ、接種反応の強いことが確
認された。

【００４１】

【表４】

【００４２】上記の事例より、一般にＯ／Ｗ型乳剤を調
製する際に最も良く用いられているポリオキシエチレン
系界面活性剤は、アジュバント製剤に用いた場合、その
組織障害性により強い発熱と接種部位の障害をもたらす
ことから、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバントを調製する際に
は、ポリオキシエチレン系界面活性剤を使用せずに安定
な乳剤を得ることが重要であることが確認された。ま
た、Ｏ／Ｗ乳剤の乳化安定剤として知られているプロピ
レングリコール、グリセリンは猫などに一時的な酩酊状
態を誘発する事から、動物用オイルアジュバント製剤の
乳化安定剤としてはグルコースなどの糖類が適用できる
ことが確認された。このことから、本発明は安全な動物
用オイルアジュバントを作成する上で欠くべからざる技
術を提供するものである。

【００４３】実施例３（豚免疫試験） 上記実施例で得られた知見を元に、豚用ワクチンに適合
するオイルアジュバント処方を確立すべく、下記表５の
処方にて調製されたＯ／Ｗ型オイルアジュバントの効果
と安全性を確認する目的で、豚丹毒及びアクチノバシラ
ス・プルロニューモニエ１型、２型、及び５型を抗原と
した混合ワクチンをマウス、モルモット、及び豚に接種
して、各抗原に対する抗体価の測定を行うと共に、注射
後の発熱と注射部位の剖検観察を行った。

【００４４】

【表５】

【００４５】使用抗原：豚丹毒菌抽出抗原、アクチノバ
シラス・プルロニューモニエ１型、２型、及び５型培養
上清由来抗原液。

【００４６】（１）マウス毒性限度確認試験 マウス腹腔内０．３ｍＬ注射後、３日目の体重を有意差
検定（1％ｔ検定）した。なお1週間を通して、一般臨床
観察を行った。

【００４７】その結果を表６に示すが、豚用処方１及び
３の２群では、境界値以下のｔ値を示した。また臨床症
状においても終始異常を認めず、良好な経過であった。
一方、豚用処方２注射群においては、ｔ値は境界値を越
した。また注射後１日目及び２日目に全個体で目やにを
認め、一部の個体ではふるえ、うずくまりが観察され
た。

【００４８】

【表６】

【００４９】（２）モルモット力価試験 体重約３５０ｇのモルモット１０頭（免疫群８頭、対照
群２頭）を用い、筋肉内に０．２ｍＬ、３週間隔２回注
射後、２週目に採血した。得られた血清のアクチノバシ
ラス・プルロニューモニエ１型、２型、及び５型に対す
るＣＦ抗体価を測定した。

【００５０】その結果を表７に示すが、豚用処方１及び
３の２群では、１型、２型、及び５型のいずれに対する
ＣＦ抗体価も上昇していた。一方、豚用処方２注射群に
おいては、２型のＣＦ抗体価の上昇が不十分であった。

【００５１】

【表７】

【００５２】（３）豚の安全試験 約３０日齢の豚を用い、筋肉内に１．０ｍＬ、１か月間
隔で２回注射し、体温測定と臨床観察を行った。２回目
注射後２か月目に剖検して、注射後６０日目と９０日目
としての注射部位の注射痕の有無を肉眼的に観察した。

【００５３】注射後の体温の変化 注射後の体温の変化を表８（第１回目注射）、９（第２
回目注射）に示すが、１回目注射時において豚用処方１
及び２では発熱は殆ど認められず、臨床的な異常も何ら
認められなかったが、乳化剤にポリオキシエチレン系界
面活性剤を含む豚用処方２では個体によって４２度に近
い発熱が観察された。

【００５４】

【表８】

【００５５】

【表９】

【００５６】一般臨床症状 豚用処方１及び２では注射後６時間でやや食欲、元気が
減退する傾向を認めたが注射翌日では、全頭が元気と食
欲を回復した。一方豚用処方２では注射後６時間後に於
いて犬座姿勢をとり、食欲不振体のふるえ等の好ましく
ない症状が観察され、これらの症状は前後２回の注射に
おいて同様な傾向をみせた。

【００５７】注射痕の消長 豚用処方２の注射後９０日目の部位で、筋間脂肪層にお
よそ３ｃｍ×３ｃｍの範囲において、淡黄褐色の大豆大
硬結病変を認めた。表１０に結果をまとめた。

【００５８】

【表１０】

【００５９】（４）まとめ 以上の結果より、スクワランをベースオイルとし、親水
性乳化剤としてポリオキシエチレン系を含まず、さらに
乳化安定剤としてグルコースを含有するＯ／Ｗ型オイル
アジュバントである豚用処方1が高い力価を試験動物に
保有させる一方、安全性をも有するＯ／Ｗ型オイルアジ
ュバントであることが明らかとなった。この豚用処方1
は、請求項1を満たすＯ／Ｗ型オイルアジュバントであ
る。猫や鶏での場合と同様に、豚においても十分なワク
チン効果と安全性を付加することが証明された。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例２における猫の発熱状況を示すグラフ。

【手続補正書】

【提出日】平成１２年７月１３日（２０００．７．１
３）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項１

【補正方法】変更

【補正内容】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００１

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、水中油型（以下Ｏ
／Ｗ型という）のオイルアジュバント及びそれらのアジ
ュバントを含む動物用のワクチンに関する。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００２

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来、
免疫を強化するためのオイルアジュバントとして、フロ
イントアジュバントに代表される油中水型（以下Ｗ／Ｏ
型という）アジュバントや、親水性界面活性剤を多く用
いたＯ／Ｗ型アジュバントが主として使用されてきた。
しかしこれらの内、Ｗ／Ｏ型オイルアジュバント製剤は
免疫効果が高い反面、ワクチン注射部位に硬結や腫脹、
疼痛、壊死などを引き起こす事例が少なからずあった。
一方、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバント製剤では接種部位の
硬結、腫脹、壊死などを引き起こす例は少ないものの、
乳化剤として、可溶化力が強く細胞障害性が高いポリオ
キシエチレン系の親水性乳化剤含むことから、ワクチン
を接種された動物に強い発熱が認められることが問題と
なっていた。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００６

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は、油相成分が動物油及び／又は植物油（以
下動・植物油という）であり、乳化剤として分子中にポ
リオキシアルキレン構造を持たない多価アルコール脂肪
酸エステルを、免疫増強剤として糖又は糖アルコールの
脂肪酸エステルを含有し、分子中にポリオキシアルキレ
ン構造を持つ乳化剤を含有しない水中油型エマルジョン
からなる動物用ワクチンのオイルアジュバントを提供す
るものである。更に本発明は、該オイルアジュバント
と、少なくとも一種の抗原とを含む、動物用ワクチンを
提供するものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 橋本 悟 東京都板橋区蓮根３−24−３ 日本サーフ ァクタント工業株式会社内 (72)発明者 扇谷 年昭 京都府京都市伏見区桃山町大島38−251 (72)発明者 片山 茂二 京都府宇治市池森44−11 (72)発明者 小田 健司 京都府城陽市寺田市の久保２−７ Ｆターム(参考） 4C085 AA03 AA38 FF11 FF14

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 油相成分が動物油及び／又は植物油であ
   り、乳化剤として分子中にポリオキシアルキレン構造を
   持たない多価アルコール脂肪酸エステルを、免疫増強剤
   として糖又は糖アルコールの脂肪酸エステルを含有し、
   分子中にポリオキシアルキレン構造を持つ乳化剤を含有
   しない油中水型エマルジョンからなる動物用ワクチンの
   オイルアジュバント。
2. 【請求項２】 多価アルコール脂肪酸エステルが、ポリ
   グリセリン脂肪酸エステル及びショ糖脂肪酸エステルか
   ら選ばれた１種以上である請求項１記載のオイルアジュ
   バント。
3. 【請求項３】 乳化安定剤として、単糖類、２糖類及び
   糖アルコールから選ばれた１種以上を含有する請求項１
   又は２記載のオイルアジュバント。
4. 【請求項４】 請求項１〜３の何れか１項記載のオイル
   アジュバントと、少なくとも一種の抗原とを含む、動物
   用ワクチン。