JP2000515115A

JP2000515115A - ウイルス感染及び細菌感染症治療用および臓器冷凍保存用組成物

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Publication number: JP2000515115A
Application number: JP09522896A
Authority: JP
Inventors: ヴィセル、ミッシェル、オルガ、パトリシア、ジーステイラ
Original assignee: クライオプリザベーションテクノロジーズシーシー
Priority date: 1995-12-15
Filing date: 1996-12-13
Publication date: 2000-11-14
Also published as: US5935597A; AP9801258A0; MX9804826A; KR20000064396A; WO1997022248A1; AU1684897A; SI9620126A; NO982653L; LV12172A; SK79998A3; EA001957B1; NZ501172A; IL124733A0; CA2240131A1; NO982653D0; EA199800558A1; BR9612004A; EP0966196A1; OA10695A; EE9800176A

Abstract

(57)【要約】本発明は、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドで構成された群から選択された活性成分から成る物質又は組成物、ウイルス感染症および／または細菌感染症治療法、臓器の冷凍保存法を提供する。この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。

Description

【発明の詳細な説明】ウイルス感染及び細菌感染症治療用および臓器冷凍保存用組成物本発明は、特に、臓器の冷凍保存及びウイルス感染症及び／又は細菌感染症の治療用の物質又は組成物、臓器の冷凍保存のための物質又は組成物の作製法、ウイルス感染症および／または細菌感染症治療のための物質又は組成物の作製法、臓器の冷凍保存における冷凍保護剤の使用法、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療における薬剤又は製剤の使用法、冷凍保存剤の生産における冷凍保護剤の使用法、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療のための薬剤又は製剤の生産における物質又は組成物の使用法、臓器の低温保存の方法、臓器の解凍の方法、上記物質と成分を使用したウイルス感染症および／または細菌感染症の治療法、投与形態およびワクチンに関する。本発明の１態様によれば、本発明は、臓器の冷凍保存、および、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療のための物質又は組成物を提供するものであり、これは、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドで構成された群から選択された活性成分を含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つをメチル基としてもよい。Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つをフッ素化（Fluorinated）Ｃ₁−Ｃ₃アルキル基としてもよい。この活性成分は、ホルムアミド、メチルホルムアミド、ジメチルホルムアミド、アセトアミド、メチルアセトアミド、ジメチルアセトアミド、ジエチルアセトアミド、イソプロピルアセトアミド、ジイソプロピルアセトアミド、Ｎ−アセチルピペリジン、Ｎ−（β−ヒドロキシルエチル）アセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジ（β − ヒドロキシルエチル）アセトアミド、Ｎ−アセチルモルホリン、アクリルアミド、プロピオンアミド、Ｎ−フルオロメチル−Ｎ−メチル−ホルムアミド、および、これらの２つ以上の混合物から成る群から選択してもよい。実施例の一つでは、この活性成分がジメチルホルムアミド[Ｃ₃Ｈ₇ＮＯ（ＤＭＦ）]であり、別の実施例では、この活性成分は、Ｎ−フルオロメチル−Ｎ−メチル−ホルムアミド[ＨＣＯＮ（ＣＨ₃）（ＣＨ₂Ｆ）]である。ＤＭＦは、一般的には、極性溶剤として使用されており、皮膚、肺を通して、あるいは、経口経由で容易に吸収される。液体ＤＭＦの皮膚からの吸収率は、９．４mg/cm²/hである。ＤＭＦは迅速に代謝され、主要生物変換部位は肝臓であり、大部分は尿中に排出される。ラット、マウス、ハムスター、ヒトにおける主要代謝物は、Ｎ−（ヒドロキシメチル）−Ｎ−メチルホルムアミド（ＨＭＭＦ）、Ｎ−（ヒドロキメチル）−ホルムアミド（ＨＭＦ）及びＮ−アセチル−Ｓ−（Ｎ −メチル−カルバモイル）システイン（ＡＭＣＣ）である。無変化のＤＭＦは、その投与量の一部が尿中に排出される。限定的なデータから判明したことではあるが、投与した量の大部分は排出されずに残るか、あるいは、非同定の成分として排出される。ＤＭＦには、弱い急性皮膚毒性、経口毒性、吸入毒性がある。皮膚と目に軽い刺激性があり、皮膚に容易に浸透する。皮膚感作性はない。２〜３回の９０日単位の試験では、ＮＯＡＥＬ（有害が認められない状態での効果レベル）の確定はできなかった。イヌにおける２８日間の吸引試験では、６３mg/m³の投与でも影響は認められなかった。同じくイヌを使った別の試験では、６０mg/m³の投与レベルで、可逆的な心臓血管への影響が認められた。ＤＭＦには催奇形性があり、胚致死性の可能性がある。ウサギを使った試験において、発生への影響に関するＮＯＡＥＬは、経口試験では４４mg/kg体重となり、吸入試験では１５０mg/m³であった。本発明の特徴は、臓器をＤＭＦに曝露する前に冷やすことにより、低温処置の実施中におけるＤＭＦの毒性をかなり減少させるか又は削減することが可能であることである。タンパク質は、室温において、３０％ＤＭＦ水溶液又は３０％ＤＭＦ生理食塩溶液中で変性する。しかし、本発明の方法によれば、温度が８℃で、ＤＭＦ濃度が３０％でも臓器への影響はないし、０℃以下の温度で、ＤＭＦ濃度が４０％でも臓器は影響を受けることがない。下記の例で記載されているように、一般的には、ＤＭＦの１０％溶液を温度８〜４℃で導入した場合には、低温措置中に臓器が影響を受けることはない。ＤＭＦの２５％〜３０％溶液を導入する場合には、臓器と溶液の温度を４℃以下にする必要がある。凍結保存措置中において、本発明の物質又は組成物は凍結保存剤として、抗ウイルス剤および／または抗細菌剤として同時に機能する。このように、臓器にウイルスや細菌が感染しても、臓器の凍結保存が同時にウイルスおよび／または細菌感染を阻止することになる。この明細書で「臓器」という場合には、心臓、肝臓、皮膚、組織、角膜、骨、腺、心臓弁を含む広い意味に解釈すべきである。本発明は臓器を低温で凍結し、必要な時に解凍して使用できるようにする凍結保護剤（ＣＰＡ）および、このＣＰＡを使用して、例えば、哺乳類等の組織、臓器、又は身体全体を治療できる手段を提供する。一般的には、凍結をしていないドナー臓器の保管寿命は約４時間であり、それを経過すると細胞が損壊されてしまうので、ドナー臓器を大陸横断で輸送するようなことは不可能である。下記の説明で明らかなように、本発明の手順は簡単であり、臓器を本発明にかかるＣｐＡで処理した後、液体窒素に浸せば、−１０℃／秒の冷却速度に耐えることができるようになる。そうなれば、ドナー臓器の大陸横断輸送、ドナー臓器銀行の設立、死体や四肢、医療用の臓器の保存が可能となる。このように、本発明の別の態様によれば、本発明は、臓器の凍結保存用の物質又は組成物を提供するものであり、その物質又は組成物は一般式がＲ₃−ＣＯ− ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択した低温処理用成分を含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つをメチル基としてもよい。Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つをフッ素化Ｃ₁−Ｃ₃アルキル基としてもよい。下記にアミドについて説明する。本発明の１実施形態によれば、低温処理用成分としてジメチルホルムアミドを使用できる。別の実施例によれば、この低温処理用成分としてＮ−フルオロメチル−Ｎ−メチルホルムアミドを使用してもかまわない。この低温処理用成分を、塩化ナトリウム、二ナトリウム−ＥＤＴＡ、重炭酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、グルコース、Hespes−水酸化ナトリウム、および、これらの２つ以上の混合物で構成される群から選択された成分を含む生理溶液と組み合わせて使用できる。特に、生理溶液としてTyrodo溶液(ここではTyrodeと呼ぶ)、Wisconson大学が開発した溶液であるViaSpan、クレブス・ヘンゼライト（ｋｒｅｂｓｈｅｎｓｌｅｉｔ）又はその他の適当な生理溶液を使用してもかまわない。本発明はウイルス感染症および／または細菌感染症の治療のための物質又は組成物にも及び、その物質又は組成物は、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された活性治療成分を含み、この一般式において、Ｒ₁ およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂− Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂ が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂ ）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては以下に述べる。本発明の１実施例によれば、このアミドはジメチルホルムアミドである。別の実施例では、このアミドは、Ｎ−フルオロメチル−Ｎ−メチル−ホルムアミドである。ウイルス感染症として、例えば、後天性ヒト免疫不全症候群（ＨＩＶ−１）のような逆行性ウイルス感染症がある。本発明の物質又は組成物は、ＨＩＶ−１のような免疫系の疾病と関連のある風疹、皮膚アクネ、日和見感染などのウイルスおよび／または細菌感染症の治療に使用される。特に、本発明の物質と成分は、ウイルスがキャプシド（ｃａｐｓｉｄ）保護コートを有するウイルス感染の治療にも使用できる。このように、ここで治療の対象になるウイルス感染症には、後天性ヒト免疫不全症候群ウイルス感染症（ＨＩＶ−１）から選択された疾病も含まれる。物質又は組成物には少なくとも１種類の生理学的に受け入れ可能な医薬品添加物又は担体が含まれる。この添加物又は担体としてコロイド二酸化ケイ素がある。本発明の別の形態によれば、本発明は、臓器の凍結保存に使用する凍結保護剤の作製法を提供するものであり、その方法は、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された凍結保護成分を、生理溶液と組み合わせるステップを含むものであり、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。生理溶液については以下で述べる。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては上記のとおりである。本発明の別の態様によれば、本発明は、ウイルス感染症および／または細菌感染症を治療するための薬剤又は製剤を作製する方法を提供するものであり、その方法は、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された活性治療成分と、少なくとも１種類の生理的に受け入れ可能な医薬品添加物又は担体を組み合わせるステップを含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂ ）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては上記のとおりである。本発明は、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された凍結保護成分を含む凍結保護剤の、臓器の凍結保存における使用法にも及び、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂− Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。凍結保護剤は、凍結保護成分と生理溶液から成る。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては上記のとおりである。本発明は、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された活性治療成分から成る薬剤又は製剤の、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療における使用法にも及び、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロケン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂ ）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択されろ。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。この薬剤又は製剤には、少なくとも１種類の生理的に受け入れ可能な医薬品添加物又は担体を含む。生理的に受け入れ可能な医薬品添加物又は担体としてコロイド二酸化ケイ素を使用してもよい。アミドについては上記のとおりである。本発明は、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された成分である凍結保護成分を含む凍結保護剤の製造における使用法にも及び、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃ アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂− Ｃ₃アルキル基から選択される。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては上記のとおりである。本発明は、さらに、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療用の薬剤又は製剤の製造における、本発明による物質又は組成物の使用法にも及び、この物質又は組成物は、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された活性治療成分を含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては上記のとおりである。さらに、本発明は、臓器を低温下で保存する方法にも及び、その方法には、臓器を、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された凍結保護成分（この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される）で潅流するステップと、潅流した臓器の温度を、臓器が少なくとも一時的に保存される保存温度まで下げるステップが含まれる。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては上記のとおりである。その方法には、代表的な例として、最初に臓器をTyrode（商品名）のような生理溶液で潅流し、その後、少しづつ又は連続的に、漸進的に濃度を上昇させた凍結保護剤を含む生理溶液で臓器を潅流させながら臓器の温度を下げるステップを含む。温度を下げる際には、最初に臓器を冷却し、その後、臓器を液体窒素中にて急速に凍結させ、その臓器を液体窒素温度で保存する方法、液体窒素中で臓器を凍結し、凍結器内で臓器を保管する方法、プラナー（planner）凍結を行い、液体窒素中で保存する方法、又は、プラナー凍結の後、凍結器で保存する方法がある。このように、その方法には、臓器を生理溶液で事前に潅流して、臓器を温度８〜５℃にまで冷却し、その後に臓器を凍結保護剤で潅流するステップと、一方で、その凍結保護剤中の凍結保護成分の濃度を上昇させながら臓器を保存温度まで冷却するステップを含む。凍結保護成分の濃度を、漸進的に１０％から４０％に上昇させてもよい。保存温度は、通常の場合では、氷点下−５０〜−１９６℃である(液体窒素温度)。特に、この保存温度を約−８０〜−１９６℃にしてもよい。液体ＣＦＣ（クロロフルオロカーボン）又は液体窒素冷却剤を使用すれば、この温度が得られる。本発明は、凍結保護剤により潅流され、保存温度にまで冷却されている臓器を解凍する方法にも及び、この方法には、臓器を、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂ であるアミドから成る群から選択された凍結保護剤（この一般式において、Ｒ₁ およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂− Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂ が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂ ）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される）に、臓器が事前に設定されている保存温度以上の温度になるまで曝露するステップと、臓器を、凍結保護成分を含む凍結保護剤で潅流しながら、漸進的に凍結保護剤中の保護成分の濃度を低下させるステップおよび臓器の温度を上げ、その後、生理溶液で臓器を潅流するステップを含む。事前に設定している温度を約−４〜４℃にしてもよい。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては上記のとおりである。本発明は、さらに、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療法にも及び、その方法には、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された活性治療成分の生理学的な有効量を含む薬剤又は製剤をウイルス感染症患者および／または細菌感染症に投与するステップを含む。この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される。この薬剤又は製剤には、少なくとも、上記で述べたような、１種類の生理的に受け入れ可能な添加剤又は担体が含まれる。Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃については上記のとおりである。アミドについては上記のとおりである。投与量は、活性治療成分の血液中濃度、つまり、治療を受ける患者の血中濃度が約２〜２００ppm、好ましくは、５０〜１００ppmになるように選択する。ＤＭＦ血漿ピーク濃度が５０〜１００ppmの場合に、ＨＩＶ−１患者におけるＣＤ４・Ｔ−細胞数を、治療開始から３週間以内に、３１２/mlから１０００/ml以上に増加させることが判明している。投与する場合、経皮的に、つまり、局所的な活性治療成分の皮膚内転移による方法、例えば、活性治療薬又は活性治療薬に含まれる成分を含浸させた皮膚パッチ又は綿パッドを皮膚に貼る方法でもよい。皮膚パッチ又は綿パッドに含浸させる活性治療薬の濃度を１０〜１００％にしてもよい。投与の方法は、経口投与、吸入投与から選択してもよいし、座薬を使用したり、静脈投与やこれらの２つ以上を組み合わせてもよい。静脈投与にすれば、時間的に制御した量を投与できる。本発明は、活性治療薬を吸着させて使う皮膚パッチや皮膚パッドのような局所的治療を含む、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療に適用する投与形態にまで及ぶ。局所的に使用する場合には、TEFLON（製品名）のような合成高分子材料に、活性治療成分を吸収させたり吸着させたりして使用してもよい。さらに、代表的な投与形態として、パッチに含浸されるゲルを作製するためのコロイド二酸化ケイ素をＤＭＦに混合して使用してもよい。このパッチとして、Virodene Ｐ０５８パッチを使ってもよい。本発明は、ウイルスに感染した後、本発明の方法に従って治療を受けたヒトから採取した抗体により調製されたワクチンにも及ぶ。ウイルスには、ＨＩＶ−１のような逆行性ウイルスがある。図面の説明以下、本発明について、添付図面を参照して、例を挙げながら説明する。図１は、ラット心臓を液体窒素に浸している間の、大動脈カニューレにおける温度変化を示したものである。図２は、カニューレ挿入手順と心臓内の熱電対の位置を示した図面である。図３は、VirodeneＰ０５８(DMF)パッチにより治療をしたエイズ患者における、時間の関数としてのＨＩＶ−１ウイルス負荷（ＰＣＲ）を示したものである。図４は、本発明の方法により、全ラット心臓を潅流、凍結保存、凍結、解凍、再潅流した場合の、時間の関数としての温度を示したものである。図５は、熱電対キャリブレーションおよび過渡応答における、時間の関数としての温度を示したものである。図６は、第１回目ヒト毒性試験における時間の関数としての血漿ＤＭＦ濃度を示したものである。図７は、第２回目ヒト毒性試験における時間の関数としての血漿ＤＭＦ濃度を示したものである。図８は、本発明の方法により凍結保存プロセスを実施した後のラットにおける凍結／解凍心臓の心内膜下組織の顕微鏡写真（２２５００倍拡大）である。図９は、本発明の方法により凍結保存プロセスを実施した後のラットにおける凍結／解凍心臓の心内膜下組織の顕微鏡写真（３６２５０倍拡大）である。図１０は、本発明の方法により凍結保存プロセスを実施した後のラットにおける凍結／解凍心臓の心内膜下組織の顕微鏡写真（２８５００倍拡大）である。例１凍結保存材料と方法モデル：分離した潅流済みラット心臓それぞれの体重が２５０〜３５０ｇである１２匹のＤＤ９ラットを使用した。ラットに対して、確立しているプロトコルに従って、ペントバービトン・ナトリウムで麻酔を行った。ランゲルドルフ装置２個の標準ランゲルドルフ・システムを、２個のウオータバスに接続して使用した。そのうちの１個は、低温用のもので、臓器を約４〜５℃に冷やし、他方は、温度を３７℃に保って使用した。心臓のTyrode-DMF溶液での潅流には、低温ランゲルドルフシステム（以下ＬＤ２と呼ぶ）を使用し、ＤＭＦを含んでいない純粋なTyrodeだけで潅流する場合には、温暖ランゲルドルフシステム（以下ＬＤ１と呼ぶ）を使用した。溶液（Tyrode）１リットル当たりの潅流液 NaCl 137.6mM KCL 5.4mM MgCl₂ 1.0mM CaCl₂ 1.8mM グルコース 5.0mM Hespes-NaOH 11.6mM 溶液のｐＨ 7.45 DMF の特性（ＢＡＳＶ・Industrial Chemicals。ジメチルホルムアミド・技術リーフレット、Ｍ５３５１ｅ、１９８９，１０月）Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）は、下記の性質を有する細胞分化物質である。分子量：Ｃ₃Ｈ₇ＯＮ相対質量：７３，０９５g/mol 凍結温度：−６１℃ ＤＭＦは無色、高沸点、移動性、極性、吸湿性の液体で、かすかに特有の臭気がある。ＤＭＦは、高い誘電率を有する優れた中性溶媒であり、水と脂質の両方が可溶、温度が２３℃の状態で低い蒸気圧がある。ＤＭＦは、強酸、アルキルアルミニウム、ハロゲン化化学物質に接触すると発火又は爆発する。ＤＭＦを−５℃以下で密閉容器に保管した。潅流液／ＣＰＡ（ＯＶ）溶液を必要に応じて混合して使用し、一度混合したものは廃棄した。温度測定温度を、図２で示したように、大動脈カニューレの内側に配置した小型のＴ− 型熱電対（直径０．５mm）により連続的に測定した。この測定位置は、心臓までの距離的な近さと、心臓の動きに最も影響の少ない位置という２つの観点から決定されたものである。熱電対は、４５℃／ｓ以上の率で、温度変化に正確に動きを合わすことができた。温度を、冷点温度補償を取り入れながら、増幅器付きのＰＣ−３０・１２ビットＡ／Ｄカード（Eagle、Electronics社）を使用した実験により１秒ごとにサンプリングを行った。温度測定装置を市販品のFluke 52 K型熱電対温度計を基準としてキャリブレーションを行った。−１００℃から＋１００℃の範囲を越える測定における精度については、その誤差が真の温度の２％以内であることを確認した。液体窒素の中で急速な冷却を行っている間、心臓を大動脈の上部に液体窒素が届く位置まで沈めた。凍結保存の実験を行っている間、上記で説明した大動脈カニューレと左心室内での温度測定を行った。心臓を液体窒素に浸してから２０秒以内に心臓内での温度は−１９６℃に達し、大動脈カニューレの先端は−７５℃になった。左心室の急速冷却フェーズにおける冷却率は約１０℃／ｓ、大動脈の先端では７．５℃／ｓであった。使用した潅流液／ＣＰＡ（ＯＶ）混合物 Tyrode ９０％およびＤＭＦ１０％：（ＯＶ１）溶液と呼ぶ。 Tyrode ８０％およびＤＭＦ２０％：（ＯＶ２）溶液と呼ぶ。 Tyrode ７５％およびＤＭＦ２５％：（ＯＶ２５）溶液と呼ぶ。 Tyrode ７０％およびＤＭＦ３０％：（ＯＶ３）溶液と呼ぶ。ここでの％値はすべて、量／量（ｖ／ｖ）により算出した百分率。技術上記で説明した温暖／冷却（３７℃／５℃）・ランゲルドルフ・システム・ＬＤ１および低温（５℃）・ランゲルドルフ・システム・ＬＤ２を調製した。ＬＤ１では、純粋なTyrode溶液だけを使用し、全部の潅流したラット心臓を冷却するのに使用した。ＬＤ２では、低温（５℃）の時にだけ、純粋なTyrodeと凍結保護剤のＯＶ混合物の両方を使用した。ＤＭＦを−５℃の低温の保管場所で密閉容器に入れて保管した。１０％、２０％、２５％、３０％ＤＭＦ・Tyrode溶液を使用の直前に作製した。第１の実験においては、ラットを麻酔した後、その心臓を切除し、低温Tyrode 溶液に浸した後、心臓の大動脈にカニューレ挿入を行い、３７℃で純粋なTyrode 溶液を含む温暖／低温ランゲンドルフシステム（ＬＤ１）に繋いだ(図４，記号ａ)。収縮を安定させるために８分間潅流した。その後、システム温度は５℃まで下がり、この温度で１０分間放置した(図４，記号ｂ−ｃ)。切除は以下の方法で行った。メーヨ（Mayo）鋏で、胸郭のすぐ下の腹部を横断方向に切断して、内部の横隔膜が見えるようにし、さらに、心臓と肺が見えるように、その横隔膜を腹側と側位端部から切り取った。この時点で、肺はもはや機能しなくなり、虚血状態が始まった。心臓と胸郭との間の縦隔を切断して心臓を静かに持ち上げ、アイリス（iris）鋏で切り取り、低温のTyrode溶液の入ったビーカに浸した。動脈の切断端部により心臓を上におこし、動脈を綿糸でカニューレにつなぎ、その縫合先端を切り取った。心臓をＬＤ１システムから分離して、ＬＤ２システムに繋いだ(図４−記号ｃ −ｄ)。５℃の純粋なTyrode溶液で、ＬＤ２システムに繋いだ心臓の潅流を開始し、その後、この潅流溶液を５０mlのＯＶ１溶液（ＬＤ２）に変更した(図４− 記号ｄ)。ＯＶ１溶液が無くなるまで心臓の潅流を１０分間行った。システムＬＤ２を３０mlのＯＶ２溶液で満たし、潅流を８分続行した。その後、システムＬＤ２を３０mlのＯＶ３溶液で満たし、８分後、ＯＶ３が無くなる寸前に、潅流を停止した。その後、心臓を、０℃のＯＶ３溶液で浸した綿毛の薄層で覆った。その後、心臓をその左心室が−１９６℃になるまで液体窒素に完全に浸した。この温度になるまで、−１０℃／秒の冷却速度で約２０秒かかった。心臓を再度暖める前の１０秒から４５分までの時間、−１９６℃の温度に維持した。心臓を温度が０℃である７０mlのＯＶ３を含む１００mlガラスビーカに入れ、解凍するために１２分間放置した（図４−記号ｇ−ｉ）。この後、左心室温度は、＋４℃と−４℃との間になった。２９mlのＯＶ３を使用して低温（５℃）ランゲンドルフシステム（ＬＤ２）上の潅流を２分間再度行った。ＬＤ２システムを２０mlのＯＶ２溶液で満たし、その後、３０mlのＯＶ１で２分間潅流をおこなった。さらに、その後、１００mlの純粋なTyrodeで、１２分間潅流を行った。潅流の総合計時間は２０分であった。それから心臓を取り出し、再度低温／温暖ランゲンドルフシステムＬＤ１（図４・記号ｊ−ｋ）に繋ぎ、開始温度が５℃として、純粋なTyrodeで潅流を行った(図４・記号ｋ)。その後、システムの温度が３７℃になるまで（左心室温度が３７℃になるまで）再加熱を行った。温度が１４〜３０℃になるとすぐに、心臓が３分から６分以内で収縮を始めた。温暖ランゲンドルフシステム上で３０分間心臓の鼓動が保たれたことを確認して実験を完了した。第２の実験では、ＯＶ１とＯＶ２５溶液を使用した。この実験では、ＯＶ２とＯＶ３の代わりにＯＶ２５を使用した。液体窒素での冷却を８℃以上で開始する場合には、一般的に心臓の割れが起る。綿ラップをすることで、心臓の周囲に隔離カプセルが形成されるので、温度低下を緩慢にすることができる。全部の溶液を、９５％酸素／５％ガス混合物を使用して、事前に泡立てを行うことにより酸化させた。ＤＭＦの細胞への拡散速度が速いために浸透膨潤は観察されなかった。潅流液に残る泡が心臓に入ることは避ける必要がある。これが心臓に入ると虚血の原因となり、ＣＰＡを添加したり除去することが困難となる。泡の量が多いと致死に至る。潅流の圧力頭は約９０〜１００ｃｍであることが望ましい。圧力頭が３７．５ｃｍでは潅流が不十分となる。実験の完了時点で、全部の心臓について心内膜下層および心外膜下層の透過電子顕微鏡観察を行った( 図８〜１０)。上記の実験をラットの１００個の心臓について実施した。結果図１・記号ｂから明らかなように、温度冷却率を−７５℃／ｓにすれば、急速な冷却が可能になる。液体窒素に浸した心臓の大動脈カニューレ先端での温度は −７５℃で安定した。この温度は心臓内の温度の−１９６℃に相当する。心臓を液体窒素から取り出した後に、再度暖める場合には、その速度は−７℃までは急激である（図１・記号ｃ）。この一連の実験においては、心臓は、その心筋の温度範囲が１４〜３０℃である場合に、ランゲンドルフシステムの温暖潅流を再開始した後３分〜６分以内で収縮を始めた。活発で律動的な鼓動が少なくとも３０分間観察できた。冠状動脈の血流が凍結する前のラットの状態に復帰し、心拍数も凍結以前の水準に戻った。顕微鏡観察では損傷は認められなかった。倍率を２２５００倍、２８５００倍、３６２５０倍にした電子顕微鏡検査においても、細胞内構造に明確な損傷が認められなかった。肝臓の凍結保存の場合、肝臓機能がＤＭＦを毒性物質（ＡＭＣＣ）に分解するので、ＣＡＰを導入する前に肝臓機能を停止させていることが重要である。ＤＭＦは肝毒性がある。肝臓機能は約８℃で停止するので、ＤＭＦを導入する前に肝臓を少なくとも４℃まで冷やす必要がある。体全体をＤＭＦの導入の前に４℃以下に保つ必要がある。体全体を冷却する場合、全体を心臓肺マシンの上に載せて、血液を純粋な生理溶液で入れ替えて４℃に冷やす。ＣＰＡ（ＯＶ溶液）を、全部の細胞がこれで充満するまで、導入して体全体を循環させる。体を、ＣＰＡ溶液を含浸させた填綿で覆い、液体窒素で凍結する。再度温度を上げる場合には、全部のＣＰＡ溶液が体細胞から除去されるまで、温度は少なくとも４℃に保つ必要がある。純粋な生理溶液で体の温度を１１℃まで上昇させ、その後、血液を再度体内に注入する。考察個体臓器を−１９６℃に近い温度で保存し、その保存後に臓器機能を復帰させようとする試みは、今までのところまだ成功していない(Wang t，Banker MC，Cl ayden N，Hicks GL Jr，Layne JR Jr，「哺乳類心臓外植片の凍結保存II」、「解凍速度の機能復帰への影響」,Cryobiology 29，[470-477]，1992;Wang T．Conne ry CP，Batty PR，「氷点下における成熟哺乳類臓器の凍結保存」、Cryobiology， 29[171-176]，1991，Wicomb WN，Hill DJ，Collins GM，「ウサギ心臓の氷点下における２４時間保存」、Journal of Heart and Lung Trallsplantation，13:5[89 1-894]，1994)。本発明者の知る限り、−８０℃以下の温度で、臓器を凍結させる実験において成功した例はなく、従って、肉眼的にも顕微鏡的にも凍結による臓器の明確な損傷という例もない。細胞内損市の原因としては、結晶化、毒性、浸透圧がある。これらの問題については、凍結保存関連の文献に詳しく説明されている。今までのところ、凍結保存の成功例は、単一の細胞と精子についてだけである。一般的に使用されている凍結血プロセスは、速度の遅い凍結又はプラナー凍結であり、臓器の構造体の絶対量も小さい(Rall WF，Fahy GM，「−１９６℃におけるガラス化によるマウス胚の氷を使用しない凍結保存」、Nature，313，(573-575)，1985)。単一細胞においては、体積変化が単一細胞の損傷に与える影響は臓器に較べて小さいので、早い速度で冷却・凍結しても影響は少ないのでないかと考えられる。２５％ＤＭＦおよびTyrode溶液は、電解液と同様に、液体窒素に液浸させた場合にも体積の拡張は見られなかった。そのために、本発明者は、この濃度をラット実験の一部に使用した。ラットの心臓実験では、採用した冷却速度において、有害な影響が出たり、細胞内損傷も発生するようなことはなかった。臓器全体の凍結保存を成功させるには、下記のような特徴と有する媒質とプロセスが要求される。１．媒質が急速に細胞内水分と入れ代わること。２．媒質が臓器内の全細胞に到達すること。(Burrow FA，Bissonett B．「新生児および幼児における、体温低下法を使用した血流心肺バイパス又は循環停止の心臓外科手術中における大脳血流濃度パターン」、Can Anaesth．40:4(299-307) ，1993)。 3.媒質が、凍結時の臓器の体積変化を起こらないように、水と媒質との混合物の特性を変化させることができること。４．媒質が細胞と組織に対して無毒性であること。５．媒質特性が広い温度範囲で維持されていること。６．凍結温度での媒質の粘度が低いこと、代表的には、水のそれに近いこと。７．媒質は、氷点下でも液体状態であること。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）が、上記で説明した要求事項を満たすものであることを本発明者は発見した。実験の評価の容易さを考えて、モデルとしてラットの心臓を使用した。ラット心臓を実験に使用した場合には、機能試験の方法がすでに確立されており、比較のための情報が入手しやすいという事情がある。最大の関心事は、凍結保存を行った後の心臓の機能回復であった。全部の実験対象について、超微細構造レベルの変化がないかどうかを確認するために、組織の電子顕微鏡観察も行った。電子顕微鏡による詳しい観察でも、細胞内構造への明確な損傷は認められなかった。実験では、心臓機能は、極めて低い温度で、しかも、早い冷却速度で凍結保存したにもかかわらず著明な機能復帰が見られた。肉眼的にも損傷はなく、心臓収縮の動作から心臓の機能は正常であることが認められた。本発明は個体臓器や組織の長期保存、ひいては、臓器銀行の設立に道を拓くものである。例２ＨＩＶの治療ヒトに対するステージ３臨床試験での毒性試験を行った。対象はＨＩＶ−１陽性患者で、治療には「ビロデン(Virodene)P058」皮膚パッチを使用した。本発明者は、ＤＭＦに関する細胞培養によるin Vitro試験も実施した。ＨＩＶ−１患者の治療として、ジメチルホルムアミドゲルを含浸させた皮膚パッチ（ビロデンP058）を患者の体に貼り付ける方法を採用した。皮膚パッチを患者身体の種々の部位、例えば、前腕に貼り付けた。各パッチには、ＤＭＦ（９２．５％ m/m）とコロイド二酸化ケイ素（７．５％、m/m）から成る約７，０６４ｇのゲルを含有されるようにした。ゲルは、ＤＭＦ液がパッチから漏れるのを防ぐ役目をした。ＤＭＦは急速に蒸発するので、パッチは、その使用の１２時間前に作製するようにした。患者におけるＤＭＦの血液中濃度の目標値を１００ppm とした。体重が６０ｋｇ以上の患者での血液中濃度を１００ppmにするには、約１４ｇを１２時間使用する必要がある。２５０〜３００ｍｇのＮ−アセチル−システイン−グルタチオンおよび／または必須リン脂質を肝臓ブースタとしで患者に毎日投与した（経口又は静脈内）。これの代用として、あるいは、追加として、グルタミンを投与してもかまわない。MarzとNohovaの研究によれば、この量を吸収するのに必要な皮膚表面は約１２７．２ｃｍ²とされている。１００ppmの血中レベルを達成するには、時間当たり約１，２７２ｇのＤＭＦが吸収されるようにする必要がある。従って、各パッチには、約７，０６４ｇのＤＭＦが必要であり、そのために必要な表面面積は６．３６ｃｍ²となる。ＤＭＦの吸収率は９．４mg/cm²/hourである。このような投与量で、理論的には、１２５〜１３５ppmを得られる筈であるが、ＤＭＦの蒸発があるので、最終的には１００ppmとなる。吸収能は患者ごとの皮膚の特徴や皮膚の厚さにより違ってくる。望ましいＤＭＦ血中レベルを維持するために、各患者ごとの血漿ＤＭＦ濃度をモニターし、患者のＤＭＦレベルに合わせて治療法を調整した(同じ治療を受けている患者の血漿ＤＭＦ濃度レベルの例を示した図６，７を参照)。パッチには、ＤＭＦと二酸化ケイ素から成る約７，０６４ｇのゲルを含ませた。各パッチを、１週間に１回の割合で１２週間、あるいは１週間に２回の割合で６週間（１回に１２時間）貼った。各患者での少なくとも３回の処置を含む試験での血液検査の結果、投与から３週間以内に、ＣＤ・Ｔ細胞数は３５０から１０００に増加し、ＰＣＲ法で観察したウイルス負荷は１２０，０００/mlから５００/mlに減少した(図３)。使用したＰＣＲ試験法は、ロッシェ(Roche)増幅ＨＩＶモニター法であった。血漿ミリリットル当たりのウイルス負荷が５００以下の場合には検出不可能である。治療対象の患者には、処置前に重篤なアクネあるいは風疹徴候の例もあった。ＤＭＦで治療し、その血液中濃度を５０〜１００ppmとした場合には、治療開始から７日以内に風疹と重篤なアクネ徴候が消えた。ジメチルホルムアミドで治療する前に、患者に関する広範囲のベースライン臨床・生理的評価試験を行った。この評価試験により、患者に関する基礎的な生化学的、血液学的なデータが得られた。患者の全身の総ウイルス数を決定するために、詳細なウイルス学的、血清試験（ＨＩＶ−１）を実施した。これらの試験は、週車位で、又は治療のたびに実施した。治療期間中は、患者の血中ＤＭＦ濃度を１時間ごとに測定した。毎朝、静脈より採血を行い、生理食塩水を２０ml/hの割合で注入し、さらに、ＤＭＦ由来の活性代謝物ＡＭＣＣのモニタリング（例えば、４時間ごとの尿採取により）を毎日実施した。その後のＤＭＦの使用量を、吸収における変動が原因で起こるＤＭＦの血液中濃度の変動に合わせて調整し、肝臓機能の変化を検出するために、血液学的、生化学的検査を毎日実施した。臨床および生理的評価も毎日実施した。ウイルス数を決定し、免疫状態の改善（ＣＤ４・Ｔヘルパー細胞）と予後状態をモニターするために、ウイルス学的・血清学的評価を毎日行った。血清学的評価では、ｐ２４抗原に基礎を置き、定量的なＰＣＲ法、あるいは、必要に応じてその他の方法を採用した。患者の免疫状態の改善と予後状態をモニターするために、ＣＤ４数とβ−２−マクログロブリンの定量も毎週実施した。有害な変化に対する迅速な応答を可能にし、臨床効果を最大限にし、副作用を最小にするために、全臨床・試験データを中央データシステムに組み入れた。試験項目は下記の通りであった。ａ）血清：Ｓ−Ｎａ、Ｓ−Ｋ、Ｓ−Ｃｌ、Ｓ−ＣＯ₂、尿素、尿酸、血清クレアチニン（Ｓ−ｃｒｅａｔ）、Ｓ−Ｃａ、Ｓ−Ｃａ、Ｓ−Ｍｇ、リン、総血清、Ｓ −Ｃｏｎｊｄ。ｂ）ヘモグロビン：ＨＢＤｅｔ、赤血球、ヘマトクリット、ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ、ＲＤＷ。ｃ）タンパク質電気泳動：血清総タンパク質、血清アルブミン、総グロブリン、 α₁グロブリン、α₂グロブリン、βグロブリン、γグロブリン。ｄ）白血球分画：白血球数、好中球、リンパ球、単球、好酸球、好塩基球。ｅ）肝臓酵素：アルカリフォスファターゼ、γＧＴ、ＡＬＴ（ＳＧＰＴ）、ＡＳＴ（ＳＧＯＴ）、ＬＤ。ｆ）ウイルス検査：細胞マーカ、ＰＣＲ、β₂ミクログロビン、Ｐ２４抗原、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＣＫ−ＭＢ濃度。ｇ）ＤＭＦレベル血液分析。ｈ）ＡＭＣＣレベル尿分析。ＤＭＦは、逆転写阻害物質とプロテアーゼ阻害物質の１つであるかのような作用をした。in Vitro試験では、ＤＭＦ溶液がウイルス、例えば、キャプシドを分解した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドで構成された群から選択された活性成分を含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される、臓器の冷凍保存、および、ウイルス感染症および／または細菌感染症治療のための物質又は組成物。２．Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つがメチル基である請求項１に記載の物質又は組成物。３．Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つがフッ素化Ｃ₁−Ｃ₃アルキル基である請求項１に記載の物質又は組成物。４．活性成分がＮ−フルオロメチル−Ｎ−メチル−ホルムアミドである請求項３に記載の物質又は組成物。５．活性成分がジメチルホルムアミドである請求項１又は２に記載の物質又は組成物。６．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドで構成された群から選択された活性成分を含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される、臓器の凍結保存のための物質又は組成物。７．Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つがメチル基である請求項６に記載の物質又は組成物。８．Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つがフッ素化Ｃ₁−Ｃ₃アルキル基である請求項６に記載の物質又は組成物。９．活性低温処理用成分がＮ−フルオロメチル−Ｎ−メチル−ホルムアミドである請求項８に記載の物質又は組成物。１０．活性低温処理用成分がジメチルホルムアミドである請求項７に記載の物質又は組成物。１１．低温処理用成分を、塩化ナトリウム、ニナトリウム−ＥＤＴＡ、重炭酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、グルコース、Hespes−水酸化ナトリウム、および、これらの２つ以上の混合物で構成される群から選択された成分から成る生理溶液と組み合わせて使用できる、請求項５〜１０のうちの１つに記載の物質又は組成物。１２．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドで構成された群から選択された活性成分を含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療ための物質又は組成物。１３．ウイルス感染症が後天性ヒト免疫不全症候群（ＨＩＶ−１）から選択される請求項１２に記載の物質又は組成物。１４．Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つがメチル基である請求項１２又は１３に記載の物質又は組成物。１５．Ｒ₁およびＲ₂の少なくとも１つがフッ素化Ｃ₁−Ｃ₃アルキル基である請求項１２又は１３に記載の物質又は組成物。１６．活性治療成分がＮ−フルオロメチル−Ｎ−メチル−ホルムアミドである請求項１５に記載の物質又は組成物。１７．活性治療成分がジメチルホルムアミドである請求項１２〜１４のうちの１つに記載の物質又は組成物。１８．少なくとも１種類の生理的に受け入れ可能な添加剤又は担体を含む請求項１２〜１７のうちの１つに記載の物質又は組成物。１９．生理的に受け入れ可能な添加剤又は担体がコロイド二酸化ケイ素である請求項１２〜１７のうちの１つに記載の物質又は組成物。２０．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された凍結保護成分を、生理溶液と組み合わせるステップを含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂ −Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される、臓器の凍結保存に使用する凍結保護剤の作製法。２１．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された活性治療成分と、少なくとも１種類の生理的に受け入れ可能な医薬品添加物又は担体を組み合わせるステップを含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃ はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される、ウイルス感染症および／または細菌感染症を治療するための薬剤又は製剤を作製する方法。２２．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂（この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂ ）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される）であるアミドから成る群から選択された凍結保護成分から成る凍結保護剤の、臓器凍結保存における使用法。２３.一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂（この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂ ）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃ はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される)であるアミドから成る群から選択された活性治療成分から成る薬剤又は製剤の、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療における使用法。２４．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂（この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂ ）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される）であるアミドから成る群から選択された成分である凍結保護成分の凍結保護剤の製造における使用法。２５．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された活性治療成分を含み、この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療用の薬剤又は製剤の製造における、本発明による物質又は組成物の使用法。２６．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された凍結保護剤（この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される）で潅流するステップと、潅流した臓器の温度を、臓器が少なくとも一時的に保存される保存温度まで下げるステップが含まれる、臓器を低温下で保存する方法。２７．臓器を生理溶液で事前に潅流して、臓器を温度８〜５℃にまで冷却し、その後に臓器を凍結保護剤で潅流するステップと、一方で、その凍結保護剤中の凍結保護成分の濃度を上昇させながら臓器を保存温度まで冷却するステップを含む請求項２６に記載の方法。２８．凍結保護成分の濃度を、漸進的に２５％から４０％に上昇させる請求項２７に記載の方法。２９．保存温度が、氷点下−４〜−１９６℃である請求項２７又は２８に記載の方法。３０．臓器を、一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された凍結保護剤（この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される）に、臓器が事前に設定されている保存温度以上の温度になるまで曝露させるステップと、臓器を、凍結保護成分を含む凍結保護剤で潅流しながら、漸進的に凍結保護剤中の保護成分の濃度を低下させるステップおよび臓器の温度を上げ、その後、生理溶液で臓器を潅流するステップを含み、凍結保護剤により潅流され、保存温度にまで冷却されている臓器を解凍する方法。３０．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂（この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロケン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂ ）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃ はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される）であるアミドから成る群から選択された活性治療成分の生理学的な有効量を含む薬剤又は製剤を、ウイルス感染症患者および／または細菌感染症に投与するステップを含むウイルス感染症および／または細菌感染症の治療法。３２．投与量を、活性治療薬の血液中濃度、つまり、治療を受ける患者の血中濃度が約５０〜２００ppmになるように選択する請求項３１に記載の方法。３３．血中濃度が５０〜１００ppmになるように投与量を選択する請求項３２に記載の方法。３４．治療薬が経皮的に投与される請求項のいちの１つに記載された方法。３５．投与の方法が、経口投与、吸入投与、座薬を使用した投与、静脈投与やこれらの２つ以上を組み合わせたものである請求項３１〜３４に記載の方法。３６．一般式がＲ₃−ＣＯ−ＮＲ₁Ｒ₂であるアミドから成る群から選択された活性治療成分（この一般式において、Ｒ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｍｅ、ハロメチル、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、飽和および不飽和ハロゲン化Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基、ヒドロキシル化アルキル基から成る群から選択された基であるか、あるいは、Ｒ₁およびＲ₂が共に、（ＣＨ₂）ｎ（ここにおいて、ｎ＝４又は５）又は（ＣＨ₂）₂Ｏ（ＣＨ₂）₂を形成し、Ｒ₃はＨ、Ｍｅ、飽和および不飽和Ｃ₂−Ｃ₃アルキル基から選択される）の有効量を吸収又は吸着する局所適用法から成る、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療のための投与形態。３７．ウイルスに感染した後、請求項３１〜３５のいずれか１つに記載の方法に従って治療を受けたヒトから採取した抗体により調製されたワクチン。３８．実質的に上記で説明され、図で示されたような、臓器の凍結保存およびウイルス感染症および／または細菌感染症の治療のための物質又は組成物。３９．実質的に上記で説明され、図で示されたような、臓器の凍結保存のための物質又は組成物。４０．実質的に上記で説明され、図で示されたような、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療のための物質又は組成物。４１．実質的に上記で説明され、図で示されたような、凍結保護剤の作製方法。４２．実質的に上記で説明され、図で示されたような、薬剤又は製剤の作製方法。４３．実質的に上記で説明され、図で示されたような、臓器の凍結保存における凍結保護剤の使用法。４４．実質的に上記で説明され、図で示されたような、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療におけるの薬剤又は製剤の使用法。４５．実質的に上記で説明され、図で示されたような、凍結保護剤の生産における凍結保護成分の使用法。４６．実質的に上記で説明され、図で示されたような、薬剤又は製剤の生産における物質又は組成物の使用法。４７．実質的に上記で説明され、図で示されたような、低温での臓器保存の方法。４８．実質的に上記で説明され、図で示されたような、臓器の解凍の方法。４９．実質的に上記で説明され、図で示されたような、ウイルス感染症および／または細菌感染症の治療法。５０．実質的に上記で説明され、図で示されたような投与形態。５１．実質的に上記で説明され、図で示されたようなワクチン。