JP2000509265A

JP2000509265A - 自己免疫疾患免疫療法用の自己抗原および該抗原に構造的に関係する蛋白

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Publication number: JP2000509265A
Application number: JP9537477A
Authority: JP
Inventors: ボーツ，アナ・マリア・ヘレナ; フエルヘーイデン，ヘイスベルツス・フランシスカス・マリア; ボス，エボ・シブラン
Original assignee: アクゾ・ノベル・エヌ・ベー
Priority date: 1996-04-18
Filing date: 1997-04-15
Publication date: 2000-07-25
Also published as: NO984835D0; KR20000005476A; PL187451B1; CA2251584A1; NO984835L; PL329350A1; CZ333398A3; HUP9903378A3; BR9708714A; WO1997040149A1; CN1216582A; AU2386997A; EP0904369A1; RU2189248C2; US5843449A; NZ332311A; HU221348B1; TR199802082T2; HUP9903378A2; AU724547B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、免疫寛容誘導による哺乳動物の自己免疫疾患での関節軟骨損傷の抗原特異的治療における、自己抗原ＨＣｇｐ−３９、ならびにＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列、特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND(配列番号１)と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白の使用に関する。自己抗原ＨＣｇｐ−３９およびアミノ酸配列YKLVCYYT-SWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する関節炎原性蛋白は、動物、好ましくはマウスにおいて関節炎を誘発するのにも好適である。本発明はさらに、前記自己抗原および／または前記関節炎原性蛋白を含む医薬組成物、試験検体中の自己反応性Ｔ細胞の検出のための診断方法、ならびに該方法で使用される試験キットに関するものでもある。

Description

【発明の詳細な説明】自己免疫疾患免疫療法用の自己抗原および該抗原に構造的に関係する蛋白本発明は、新規な自己抗原およびそれに関連する蛋白、自己免疫疾患における関節軟骨の慢性損傷の治療におけるそれらの使用、前記自己抗原および／または蛋白を含む医薬組成物、試験サンプル中の自己反応性Ｔ細胞の検出のための診断方法、ならびに該方法で使用される試験キットに関する。免疫系は、自己抗原に対する寛容構築によって得られる外来抗原（非自己抗原）と自己抗原（個体自身の身体に由来する自己の抗原）との間の区別の原理に基づいて形成される。免疫系は、Ｔリンパ球およびＢリンパ球などの特異的細胞を活性化させ、インターロイキン、抗体および補体因子のような可溶性因子を産生することで、外来抗原に対して個体を保護し、外来抗原に対する曝露に反応する。免疫系が反応する抗原は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって分解され、抗原の断片が、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ糖蛋白と結合し細胞表面で発現される。ＭＨＣ−糖蛋白−抗原断片複合体がＴ細胞に提示され、そのＴ細胞が、Ｔ細胞受容体によって、結合しているＭＨＣクラスＩＩ蛋白と一体で抗原断片を認識する。Ｔ細胞が活性化され、すなわちインターロイキンを増産および／または産生することで、攻撃を受ける抗原に対する活性化リンパ球の拡大が生じる（Grey et al.，Sci.Am.，261:38-46，1989）。自己抗原も、連続的に処理されて、Ｔ細胞に対するＭＨＣ糖蛋白によって抗原断片として提示される（Jardetsky et al.，Nature 353:326-329，1991）。そのように、自己認識は免疫系に固有のものである。通常の環境下では、免疫系は自己の抗原に対して寛容であって、その自己抗原による免疫応答の活性化が回避される。自己抗原に対する寛容が失われると、免疫系は１以上の自己抗原に対して活性化されるようになり、自己反応性Ｔ細胞の活性化および自己抗体の産生を生じる。この現象は、自己免疫と称される。免疫応答は一般に破壊的であることから、すなわち侵襲性の外来抗原を破壊することから、自己免疫応答は身体自体の組織の損傷を起こす可能性がある。自己免疫疾患に対するＴ細胞の寄与については、いくつかの研究で明らかになっている。マウスでは、実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）が、ＭＨＣクラスＩＩ分子に複合体形成したミエリン塩基性蛋白（ＭＢＰ）の単一エピトープに対する特異性によって結合する非常に特定の群のＴ細胞によって介在される。各種自己免疫疾患に対する感受性が高い動物であるルイスラットでは、疾患がＴ細胞によって介在されることが明らかになっている。ヒトにおいても、自己免疫疾患は自己免疫性Ｔ細胞に関連するものと考えられている。破壊的な自己免疫応答は、関節軟骨の完全性が慢性的な炎症の過程で損なわれ、多数の活性化リンパ球およびＭＨＣクラスＩＩ発現細胞が存在するようになる慢性関節リウマチ（ＲＡ）などの各種疾患において示唆されている。単に軟骨が存在することが、局所炎症応答を維持する上での必要条件であるように思われる。すなわち、軟骨分解は、ＲＡにおける軟骨応答性自己反応性Ｔ細胞の活性化に関連していることが明らかになっている（Sigall et al.，Clin.Exp.Rheumat.，6 ，:59，1988;Glant et al.，Biochem.Soc.Trans.，18:796，1990;Burmester et al.，Rheumatoid arthritis Smolen，Kalden，Maini(Eds)Springer-Verlag B erlin Heidelberg,1992）。さらに、手術によってＲＡ患者から軟骨を除去することで、炎症プロセスが軽減されることが明らかになっている（G.S.Panayi et al，Clin.Exp.Rheumatol． 11(suppl 8):S1-S8，1993）。従って軟骨蛋白が、Ｔ細胞を刺激する能力を有する標的自己抗原であると考えられる。この自己反応性Ｔ細胞の活性化によって、自己免疫疾患が発生する。しかしながら、慢性関節リウマチ発症において何らかの役割を果たす自己抗原性成分の確認にはほど遠い状態である。軟骨の損傷を生じる炎症応答は、例えばステロイド剤などのいくつかの薬剤によって治療することができる。しかしながらそれらの薬剤は、非特異的な免疫抑制剤である場合が多く、有毒な副作用を有する。非特異的免疫抑制の持つ欠点により、その治療法は非常に好ましくない療法となっている。抗原特異的無毒性免疫抑制療法は、非特異的免疫抑制に代わる非常に魅力的な代替法を提供するものである。この抗原特異的療法には、標的自己抗原または標的自己抗原のアミノ酸配列との配列相同性を示すアミノ酸配列を有する抗原、あるいは前記自己抗原または前記抗原に由来する合成Ｔ細胞反応性ペプチドが関与する。これらの合成ペプチドは自己抗原のＴ細胞エピトープに相当するものであり、それ自体および自己抗原の両方に対する特異的Ｔ細胞寛容を誘発することができる。免疫系を活性化させる当の抗原で免疫系を脱感作するのは逆説的であるように思われるが、標的（自己）抗原を管理下に投与することは、免疫系の脱感作において非常に有効なものとなり得る。免疫系の脱感作または免疫寛容は、抗原もしくはエピトープを摂取もしくは吸入した動物は、その抗原またはエピトープを全身経路を介して導入した際に、その抗原またはエピトープに対する全身免疫応答を起こす能力が低いという以前から認められていた現象に基づくものである。寛容療法を効果的に用いてＴ細胞介在軟骨損傷を治療するには、原因となる自己抗原または標的自己抗原のアミノ酸配列と配列相同性を示すアミノ酸配列を有する抗原を確認し、炎症プロセスの原因となるＴ細胞を活性化している自己抗原に対して患者を脱感作させることが強く望まれる。本発明の目的は、自己抗原、該自己抗原のアミノ酸配列と十分な相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白であって、Ｔ細胞介在軟骨損傷を患う患者における原因となる軟骨抗原に対する特異的Ｔ細胞寛容を誘発するのに好適な自己抗原および／または蛋白を提供することにある。本発明のさらに別の目的は、関節炎症状を抑制する新規薬剤のスクリーニングで使用するのに好適な関節炎動物の試験モデルを提供することにある。本発明のさらに別の目的は、関節軟骨の損傷に関与する自己反応性Ｔ細胞を検出する方法ならびに該方法で使用される試験キットを提供することにある。驚くべきことに、ヒト軟骨糖蛋白３９（以下、ＨＣｇｐ−３９と称する）が、特異的Ｔ細胞を活性化するＲＡ患者における標的自己抗原であり、従って炎症プロセスを起こしたり、それに介在することが認められた。ＨＣｇｐ−３９の関節炎原性がＢａｌｂ／ｃマウスで確認された。Ｂａｌｂ−ｃマウスにおける前記蛋白の単回皮下注射は、動物において関節炎徴候を起こすことができた。ＨＣｇｐ −３９誘発疾患の経過は、前足および／または後足において定期的に起こり、軽度関節炎からより重度の形へと徐々に進行する再発を特徴とするものであった。さらに、冒されている関節の対称分布が認められ、それは再発および結節形成の所見とともに、関節炎特にＲＡにおける疾患進行を示唆するものである。さらに驚くべき点として、ＨＣｇｐ−３９の投与によって、免疫寛容と、より重要な点として関節炎の進行遅延および／または抑制を生じることが認められた。さらに別の驚くべき点として、ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白は、動物に注射した場合に関節炎を誘発し得ることが認められた。特に、アミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDR-FL CTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白は、ＨＣｇｐ−２９について記載のものと同様にして、動物において関節炎を誘発することができた。好ましくは、これらの関節炎原性蛋白は、ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列、特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と７０％以上、より好ましくは８０％以上、最も好ましくは９０％以上の相同性を示すアミノ配列を有する。本発明による関節炎原性蛋白の配列番号１のアミノ酸配列との配列相同性のパーセントは、ＦＡＳＴＡ（W.R.Pearson and D.J.Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci U SA,85，2444-2448,1988）などの一般に使用される配列比較プログラムを介して求められることは明らかである。本発明による好適な関節炎原性蛋白は、例えばブタヘパリン結合性３８ｋＤａ蛋白、ウシ３９ｋＤａホエー蛋白、ヒトＹＫＬ− ３９蛋白、マウス乳房退行３９ｋＤａ蛋白（ｂｒｐ３９）、ヒト輸卵管特異糖蛋白、マウス輸卵管特異糖蛋白、ハムスター輸卵管特異糖蛋白、ウシ輸卵管特異糖蛋白、ヒトキトトリオシダーゼ（chitotriosidase）前駆体蛋白およびマウス分泌蛋白ＹＭ−１前駆体などがある。本発明による関節炎原性蛋白は、相同性自己抗原に対する免疫系の全身寛容を誘発するのに非常に好適であり、哺乳動物における関節炎発症を遅延および／または抑制するのに使用することができる。ＨＣｇｐ−３９は、成人患者と健常成人の両方の血清中に存在する。ただしその蛋白の血清濃度は、健常成人と比較して患者の方が約２倍である。さらに、ＨＣｇｐ−３９をコードするｍＲＮＡは、ＲＡ患者から得られる滑液試料または軟骨で認められるが、手術で得られる健常成人の軟骨は、前記ｍＲＮＡをほとんど含まない。関節軟骨細胞および滑液細胞を培養すると、その主要な分泌産生物はＨＣｇｐ−３９となる(Hakala et al.，J.Biol.Chem.，Vol．268，34:25803，19 93)。ＨＣｇｐ−３９の関節炎原性については、ハカラ（Hakala）らの刊行物でも他のいずれの刊行物においても、記載も示唆もされていない。アミノ酸配列がＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列、特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYS-FANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示す蛋白について報告されている。ブタヘパリン結合性３８ｋＤａ蛋白の確認については、シャケルトンらの報告に記載されている（Shackelt on et al.，(1995)，J.Biol.Chem．Vol.270，No.22，13076-13083）。しかしながら、その蛋白の機能は確認されていない。ウシ３９ｋＤａホエー蛋白の単離および特性決定が、レマンらの報告に記載されている(J.J.Rejman et al．(1988) ，Biochem.Biophys.Res.Comm．Vol.150，No.1，329-334)。マウス乳房退行３９ｋＤａ蛋白（ｂｒｐ３９）は、モリソンらの報告に記載されている（Morrison a nd Leder，1994，Oncogene，9，3417）。ヒト輸卵管特異糖蛋白をコードするｃＤＮＡおよび相当するアミノ酸配列のクローニングはアリアスらの報告に記載されている(Arias et al．(1994),Biology of Reproduction 51，685-694)。マウスおよびハムスターの輸卵管特異糖蛋白などの他の哺乳動物輸卵管特異糖蛋白は、特開平７−１０７９７９号（Kinosei Peptide Kenkyusho KK）に開示されている。ウシ輸卵管特異糖蛋白の精製および分子クローニングについては、センダイらの報告に記載されている(Y.Sendai et al.，1994，Biol.of Reprod． 50，927-934)。ヒトキトトリオシダーゼ前駆体蛋白は、活性化ヒトマクロファージによって分泌され、相当するｃＤＮＡのクローニングおよびアミノ酸配列はブートらの報告に記載されている（Boot et al.(1995)，J.Biol.Chem.Vol.270，No .44，26252-26256）。マウス分泌蛋白ＹＭ−１前駆体のアミノ酸配列は、チャンら（Chang et al）によって提出されている（１９９２年６月にEMBL Data Libra ryに対して。受託番号Ｍ９４５８４；未発表）。ヒト軟骨細胞蛋白ＹＫＬ−３９のアミノ酸配列は、フーらの報告に記載されている(Hu et al.(1996),J.Biol.Ch em．Vol.271，No.32，19415-19420)。しかしながら、上記の刊行物のいずれも、本発明による蛋白の関節炎原性について暗示も示唆もするものではなく、それらの蛋白を治療における医薬品として使用して、例えば関節炎、より詳細には慢性関節リウマチなどのＴ細胞介在軟骨損傷を患う哺乳動物、詳細にはヒトにおいてＨＣｇｐ−３９に対する特異的Ｔ細胞寛容を誘発することができるという事実についても暗示も示唆もない。そこで、本発明によれば、ＨＣｇｐ−３９およびＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列、詳細にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白は、関節炎、より具体的には慢性関節リウマチなどのＴ細胞介在軟骨損傷を患う患者において、ＨＣｇｐ−３９に対する特異的Ｔ細胞寛容を誘発する療法で使用するのに非常に好適である。さらに、患っている軟骨において、ＨＣｇｐ−３９自己抗原に対するＴ細胞特異的寛容を誘発することができるＨＣｇｐ−３９の断片および本発明による関節炎原性蛋白も、本発明の範囲に含まれる。ＷＯ９５／０１９９５およびＷＯ９５／０２１８８には、ＲＡのマーカーとしてのＨＣｇｐ−３９の診断上の使用について記載されている。ただし、ＨＣｇｐ−３９の関節炎原性は、開示も示唆もされていない。それらの明細書のいずれの箇所にも、患っている軟骨においてＨＣｇｐ−３９に対するＴ細胞特異的寛容を誘発する抗原特異的療法で、ＨＣｇｐ−３９やそれの断片、そして本発明によるＴ細胞反応性ペプチドを使用することについて暗示も示唆もされていない。ＨＣｇｐ−３９；ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列、詳細にはアミノ酸配列YKLV CYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLC-THIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する関節炎原性蛋白；ならびに本発明による前記関節炎原性蛋白由来の断片を、組換えＤＮＡ技術を利用して得ることができる。それについては、ＨＣｇｐ−３９；ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列、詳細にはアミノ酸配列YKLVCYYT SWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白；あるいは本発明による蛋白由来の断片またはその断片の多重体をコードする核酸配列を発現ベクターに挿入する。好適な発現ベクターには特には、複製および発現のために必要な制御領域を有するプラスミド、コスミド、ウィルスおよびＹＡＣ（Yeast Artificial Chromosomes）がある。その発現ベクターを宿主細胞で発現させることができる。好適な宿主細胞には例えば、細菌、酵母細胞および哺乳動物細胞などがある。そのような方法は、当業者には公知である（Sambrook et al.，Molecular Cloning:a Laboratory Manual， Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，1989）。その組換えＤＮＡ技術を用いて、本明細書で配列が開示されているウシホエー蛋白を宿主細胞で得ることができる。そこで本発明はさらに、配列番号３で示されるウシホエー蛋白をコードする単離ｃＤＮＡならびに配列番号２によるウシホエー蛋白を提供するものでもある。本発明の内容を知れば、断片も得られることは明らかであろう。「断片」という用語は、本発明の範囲内である、起源、構造および作用機序の要素が共通である蛋白の一部であるアミノ酸配列を指す。本発明による関節炎原性蛋白由来の好適な断片も、ペプチド合成のための公知の有機化学的方法のいずれかによって得ることができる。ペプチド合成の有機化学的方法は、均一相で、あるいはいわゆる固相を利用して、縮合反応によって必要なアミノ酸をカップリングさせる方法などがあると考えられる。上記縮合反応の最も一般的方法には、カルボジイミド法、アジド法、混成無水物法および活性化エステルを用いる方法がある（例えば、The Peptides，Analysis，Synthesis ，Biology Vol.1-3(Ed．Gross，E and Meienhofer，J.)1979，1980，1981(Acade mic Press，Inc)に記載のもの）。「固相」を用いて、上記ＨＣｇｐ−３９および関節炎原性蛋白の好適な断片を得る方法が報告されている(例:J.Amer.Chem.Soc.85:2149(1963)およびInt.J.Pep tide Protein Res．35:161-214(1990))。特に好適な固相には例えば、ワンの報告（Wang（1974）J.Am.Chem.Soc.95:132 8）記載のｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂（４−ヒドロキシ−メチル−フェノキシ−メチル−コポリスチレン− １％ジビニルベンゼン樹脂）などがある。合成後、温和な条件下で蛋白を固相から分けることができる。所望のアミノ酸配列の合成後、樹脂からのペプチドの分離を、例えばトリイソプロピルシラン、アニソールまたはエタンジチオール、チオアニソールなどの補集剤を含むトリフルオロ酢酸によって行う。縮合反応に関与しない反応性基は上記のように、酸、塩基または還元を利用して加水分解することで非常に容易に再除去できる基によって効果的に保護する。可能な保護基についての比較的広範囲の説明がグロスらの編著にある（The Pept ides，Analysis，Synthesis，Biology，Vol.1-9(Eds．Gross，Udenfriend and M eienhofer)1979-1987(Academic Press，Inc.)）。保護基は、例えばトリフルオロ酢酸を用いて、あるいは水素とパラジウムなどの触媒またはＨＢｒの氷酢酸溶液による温和な還元によって、特定の基の性質に応じて、各種従来法によって脱離させることができる。免疫系を活性化させる当の抗原で免疫系を脱感作するのは逆説的であるように思われるが、この脱感作は、抗原もしくはエピトープを摂取もしくは吸入した動物は、その抗原またはエピトープを全身経路を介して導入した際に、その抗原またはエピトープに対する全身免疫応答を起こす能力が低いという以前から認められていた現象に基づくものである。従って、ＨＣｇｐ−３９および／またはＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列、特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白の管理下の投与は、免疫系の脱感作で有効なものとなり得る。ＨＣｇｐ−３９に対して患者を脱感作することができる本発明による蛋白の断片も、本発明の範囲に含まれる。本発明によれば、軟骨が自己反応性Ｔ細胞による攻撃を受けている患者に、ＨＣｇｐ−３９、ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQ YREGDGSCFPDALDR-FLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する１以上の蛋白、または本発明による蛋白由来の１以上の断片、ならびに医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を投与して、その患者の特異的自己反応性Ｔ細胞を攻撃を受けている軟骨におけるＨＣｇｐ−３９に対して寛容とし、炎症応答を軽減することができる。本発明による医薬組成物で使用するのに好適な蛋白は、ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列、特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白である。本発明による医薬組成物で使用するのに非常に好適な蛋白は例えば、ブタヘパリン結合性３８ｋＤａ蛋白、ウシ３９ｋＤａホエー蛋白、マウス乳房退行３９ｋＤａ蛋白（ｂｒｐ３９）、マウス輸卵管特異糖蛋白、ハムスター輸卵管特異糖蛋白、ウシ輸卵管特異糖蛋白、ヒトＹＫＬ−３９蛋白、ヒト輸卵管特異糖蛋白、ヒトキトトリオシダーゼ前駆体蛋白およびマウス分泌蛋白ＹＭ−１前駆体などがある。やはり本発明による医薬組成物で使用するのに非常に好適なものとして、ＨＣｇｐ−３９またはＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSW SQYREGDGSCFPDALDR-FLCTHIYSFANISND(配列番号１)と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白または本発明による蛋白由来の１以上の断片をコードするＤＮＡを有するＤＮＡ（発現）ベクターがある。投与すると、ＤＮＡ（発現）ベクターは、発現によって、ＨＣｇｐ−３９またはＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCY YTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYS-FANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白または本発明による断片をあるレベルで提供することができ、そのレベルは、ＨＣｇｐ−３９蛋白またはペプチドを含む医薬組成物の直接投与によって得られると考えられるレべルと同様である。自己抗原ＨＣｇｐ−３９、ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列 YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDR-FLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する関節炎原性蛋白および本発明による前記関節炎原性蛋白由来の断片は、自己反応性Ｔ細胞に対する特異的寛容提供効果を有することで、免疫抑制ステロイド薬の非特異的抑制効果と比較して、免疫系の他の成分が損なわれないようにするという利点を有する。ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDR-FLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有するアミノ酸配列または本発明による断片を有する自己抗原または蛋白は安全であり、有毒な副作用は起こらない。本発明による自己抗原または蛋白を高用量または低用量で投与することで、寛容を得ることができる。自己抗原または蛋白の量は、投与経路、投与時間、患者の年齢ならびに全身の健康状態および食事によって決まる。一般に、蛋白０．０１〜１０００μｇ／ｋｇ、好ましくは０．５〜５００μｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜１００μｇ／ｋｇの用量を用いることができる。医薬的に許容される担体は当業者には公知であり、例えば、無菌生理食塩水、乳糖、ショ糖、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストリン、寒天、ペクチン、落花生油、オリーブ油、ゴマ油および水などがある。他の担体としては、例えば所望に応じてリポソームに包埋したＭＨＣクラスＩＩ分子などがあり得る。さらに、本発明による医薬組成物は、１以上の補助剤を含有することができる。好適な補助剤には特に、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、アンフィゲン（amphigen）、トコフェロール類、モノホスホフェニル脂質Ａ、ムラミルジペプチドならびにクイルＡ（Quill A）などのサポニン類などがある。補助剤の量は、補助剤自体の性質によって決まる。さらに、本発明による医薬組成物は、例えばソルビトール、マンニトール、デンプン、ショ糖デキストリンおよびグルコースのような炭化水素、アルブミンまたはカゼインのような蛋白、アルカリホスフェート類のような緩衝剤などの１以上の安定剤を含有させることができる。好適な投与経路は、筋肉注射、皮下注射、静脈注射または腹腔内注射、経口および経鼻投与である。経口および経鼻投与が好ましい投与経路である。関節炎原性があるために、ＨＣｇｐ−３９ならびにＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白を用いて、動物に臨床的関節炎を誘発することができる。少量のＨＣｇｐ−３９またはＨＣｇｐ− ３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDR-FLCTHIYS FANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する１以上の蛋白または本発明による蛋白の１以上の断片を投与すると、前記動物において関節炎の徴候を発症させて、関節炎、特に慢性関節リウマチにおける疾患進行を示唆する疾患パターンを生じさせることができる。ＨＣｇｐ−３９蛋白またはＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALD RFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白をＢａｌｂ／ｃマウスに皮下注射したところ、動物は関節炎の徴候を発症した。ＨＣｇｐ−３９誘発疾患ならびにＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白によって誘発された疾患の経過は、前足および／または後足で定期的に起こる再発ならびに軽度の関節炎からより重度の形への漸進的進行を特徴としていた。さらに、冒されている関節の対称分布が認められ、それは再発および結節形成の所見とともに、関節炎特にＲＡにおける疾患進行を示唆するものである。そこでこの罹患動物は、関節炎の発症および進行の基礎となる機序について研究を行う上で十分な動物モデルを提供するものである。さらに、その罹患動物を用いて、新たな関節炎治療薬を研究し、その薬剤の関節炎発症に対する効果を調べることができる。好ましくは、関節炎、特に慢性関節リウマチの動物モデルとしてマウスを用いる。前記動物において関節炎を誘発するには、好適な量のＨＣｇｐ−３９または本発明による１以上の蛋白を投与しなければならない。好適な量は、０．１〜１０００μｇ、好ましくは１〜１００μｇ、より好ましくは１０〜５０μｇ／ｋｇである。ＨＣｇｐ−３９あるいはＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白あるいはそれの断片の量は、投与経路、投与時間および使用する動物の種類によって決まる。好適な投与経路は、前述のものと同じである。関節炎誘発の効果を誘発するため、ＨＣｇｐ−３９蛋白あるいはＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFP DALDRFLCTHIYSFANISND(配列番号１)と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白あるいは本発明によるペプチドが、前述のような安定剤または補助剤を１以上含有することができる。ＨＣｇｐ−３９、ＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYT SWSQYREGDGSCFPDALDR-FLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白、あるいは本発明によるそれの断片は、関節軟骨の慢性炎症に関与する活性自己反応性Ｔ細胞の存在を検出するための診断方法での使用に非常に好適である。本発明による診断方法は、以下の段階を有する。ａ）個体の血液検体からの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の単離、ｂ）好適な条件下での前記ＰＢＭＣの培養、ｃ）本発明による自己抗原または蛋白およびそれの断片の存在下での前記ＰＢＭＣ培養液のインキュベーション、ｄ）個体における活性化自己反応性Ｔ細胞の存在を示す、Ｔ細胞の応答、例えば増殖応答の検出自己反応性Ｔ細胞の増殖応答を測定することによる応答の検出の場合、例えば³ Ｈ−チミジンなどの放射性同位元素の取り込みが、増殖の尺度となる。ＰＢＭＣに存在する自己反応性Ｔ細胞の応答も、サイトカイン特異的ＥＬＩＳＡによるサイトカイン放出の測定、あるいは⁵¹クロム放出による細胞傷害性の測定を行うことで検出することができる。別の検出方法としては、ＦＡＣＳ分析による活性化マーカー、例えばＩＬ−２Ｒの発現の測定がある。そこで、本発明による１以上のペプチドと好適な検出剤を含む診断組成物は本発明に含まれる。検出の種類に応じて検出剤は、放射性同位元素、酵素または細胞表面もしくは活性化マーカーに特異的な抗体であることができる。さらに、本発明による１以上のペプチドを含む試験キットも本発明の範囲に含まれる。その試験キットは、本発明による診断方法で使用するのに好適である。そこで本発明は、ＨＣｇｐ−３９に対して反応性の自己免疫Ｔ細胞が、例えば関節炎、特に慢性関節リウマチなどのＴ細胞介在軟骨損傷を患っている患者に存在するか否かを検出する方法を提供するものである。ＨＣｇｐ−３９特異的Ｔ細胞が存在すると、ＨＣｇｐ−３９またはＨＣｇｐ−３９のアミノ酸配列特にはアミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDR-FLCTHIYSFANISND(配列番号１)と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する１以上の関節炎原性蛋白または本発明によるペプチドあるいはそれらの組み合わせによる前記Ｔ細胞の寛容化によって、関節炎の発症を遅延させたり、抑制することができる。以下の実施例は本発明を説明するためのものであり、いかなる形でも本発明の範囲を制限するものと解釈すべきではない。図面の説明図１は、ＨＣｇｐ−３９寛容化および非寛容化Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける関節炎の発症および進行を示す図である。ＡＳは、感作後における罹患動物の１日当たりの総関節炎スコアであり、Ｎは感作後における１日当たり罹患動物数である。図２は、それぞれ０．２μｇ、１μｇ、５μｇおよび２５μｇウシ３９ｋＤａホエー蛋白を投与した場合の、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける関節炎の発症および進行を示す図である。発症／進行は、感作後の１日当たりの累積スコア（罹患動物の総関節炎スコア）として表してある。実施例１方法ＭＧ６３骨肉腫細胞系からのＨＣｇｐ−３９の精製ＭＧ６３細胞（ヒト骨肉腫ＡＴＣＣＣＲＬ１４２７）を、ＤＭＥＭ／ＨＡＭのＦ１２血清を含まない培地で、細胞工場で培養した。ＨＣｇｐ−３９は、ヘパリンアフィニテイクロマトグラフィーとそれに続くスーパーデックス（super de x）７５クロマトグラフィーによって、培養上清から精製した。純度をＳＤＳ− ＰＡＧＥによってチェックした。さらに、Ｎ末端アミノ酸配列決定から、精製した蛋白がハカラら（Hakala et al.）報告の蛋白と同一であることが確認された。Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＨＣｇｐ−３９の関節炎原性不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中に１：１で混合した精製ＨＣｇｐ −３９（１０μｇまたは５０μｇ）のＰＢＳ（１００μＬ容量）溶液（０．５ＭＮａＣｌ、０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．５）を、４匹すつ２群の雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（Harlan CPB，Zeist，The Netherlands）の胸部領域に皮下注射し、対照４匹にＰＢＳ（ＩＦＡ中１：１）を注射した。マウスについて、１日１回関節炎の臨床徴候を調べた。関節炎の重度は、各足を０〜３（グラントら（Glant et al）の論文による）で評点することで評価した。すなわち、スコア０＝変化なし、スコア１＝紅斑および腫脹、スコア２＝腫脹および肉眼で認められる変形、スコア３＝屈曲および伸長の不能による静止状態である。ＨＣｇｐ−３９の経鼻投与による寛容誘発ＰＴ４５ミクロ導管およびハミルトン注射器を用いて、Ｂａｌｂ／ｃ雌マウス１０匹（エンフルランス（Enflurance）で軽く麻酔を施したもの）に、蛋白２８ μｇを経鼻的に（２×１０μＬ）投与した。関節炎誘発の１５日前、１０日前および５日前に抗原を投与した。対照（ｎ＝１０）に対して、媒体（ＰＢＳ）のみを投与した以外、同様の投与法を行った（表１）。蛋白１０μｇを用いて、第０日に上述の方法に従って感作を行った後に、遅発型過敏（ＤＴＨ）応答を測定することで、免疫寛容を評価した。第０日での感作の次に、第８日に、左後足蹠にＨＣｇｐ−３９（１０μｇ）の５０μｇ液を注射した（誘発）。ＤＴＨ反応を、足蹠の増大（［左腫脹（ｍｍ×１０^-3）−右腫脹（ｍｍ×１０^-3）］／右腫脹（ｍｍ×１０^-3））×１００％として測定した。負荷後０時間、２４時間および４８時間後に、社内設計のμメータを用いて、足蹠腫脹を測定した。さらに、感作後３１日までこれら同一マウスでの関節炎誘発に対する寛容をモニタリングし、マウスについて臨床徴候を１日１回調べた。関節炎の重度を上記の方法に従って評価した。表１．寛容表 DTH＝遅発型過敏症。PBS=0.5M NaCl、0.01Mリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.5結果ＨＣｇｐ−３９の関節炎原性ＩＦＡと混合したＨＣｇｐ−３９５０μｇを１回注射した後、全てのマウスが徐々に重度関節炎を発症した（表２）。関節炎の徴候が最初に認められたのは、動物４匹中３匹の前足において、感作から１５〜２０日後であった。前足に徴候を示さなかったマウスは、感作第３４日までに後足に関節炎を発症した。ＨＣｇｐ−３９誘発疾患の経過は、前足または後足で定期的に起こる再発と軽度関節炎からより重度の関節炎への漸進的進行（疾患の進行は、６２日間追跡した）を特徴としていた。非常に多くの場合（＞５０％）、罹患関節の対称分布が認められた。すなわち、両方の前足または両方の後足が同時に関節炎徴候を示した。５０μｇに代えて１０μｇのＨＣｇｐ−３９をＩＦＡと混合したものを用いて、関節炎誘発を同様に行った。しかしながら、関節炎スコアはわずかに低くくなった（データは示していない）。マウス４匹中３匹が重度の関節炎を発症した。実験期間中、マウス１匹がごく軽度の徴候を示した。実験期間を通じて、対照マウスは関節炎の徴候を示さなかった。総じて、１０μｇと５０μｇのいずれの蛋白も、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて進行性関節炎を誘発するのに十分であった。関節の対称的罹患と再発を特徴とする、ＨＣｇｐ−３９による関節炎誘発の慢性的性質は、慢性関節炎（ＲＡ）における疾患進行を示唆している。表２．ＨＣｇｐ−３９感作Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける関節炎の発症および進行 FP＝前足。HP＝後足。contr.＝対照。関節炎徴候；なし：スコア＝０、軽度：動物当たりのスコアが２を超えない、重度：動物当たりのスコアが≧３。ＤＴＨアッセイで測定される免疫寛容第０日にＨＣｇｐ−３９を注射した対照マウスは、強力な抗原特異的ＤＴＨ応答を示したが、それはＨＣｇｐ−３９に対する細胞免疫応答が感作で誘発されたことを示唆するものである（表３）。しかしながら、ＨＣｇｐ−３９の経鼻投与は、自己抗原誘発時のＤＴＨ応答を完全に消失させ、それによってＨＣｇｐ−３９特異的Ｔ細胞が実際に寛容化されていることが明らかである。特に、非寛容化群の動物１０匹中４匹が、誘発部位に隣接する足首で関節炎を発症した。それとは対照的に寛容化群は、誘発部位に隣接する関節で関節炎を発症せず、ＨＣｇｐ−３９に対する免疫寛容によって関節炎発症が予防されることを示唆している。表３．経鼻投与による寛容化後のＨＣｇｐ−３９に対するＤＴＨ応答関節炎の誘発または進行に対する寛容次に、ＨＣｇｐ−３９寛容化および非寛容化Ｂａｌｂ／ｃマウスについて、関節炎の発症および進行をさらにモニタリングした。対照（非寛容化）群の全マウスで、ＨＣｇｐ−３９による感作で疾患が発症した（表４）。７匹のマウスが徐々に重度の関節炎を発症し、３匹のマウスが軽度の徴候のみを示した（最高スコア２）。それとは対照的に、ＨＣｇｐ−３９寛容化群のマウス５匹は、実験期間中疾患発症に対して保護された。さらに、寛容化群の動物２匹は、軽度の徴候のみを短期間示した。３匹の動物が、スコア４の比較的重度の関節炎を発症した。興味深い点として、寛容化動物では、それぞれ最低７〜９日まで、後足および前足の両方で関節炎発症が遅延した（図１）。寛容化群では罹患した動物数は相対的に少なかったが、前足の動物当たりの関節炎スコアは、非寛容化動物における関節炎スコアと同等であった。しかしながら、後足の動物当たりの関節炎スコアは、寛容化動物における方が若干低かった（図１）。表４．ＨＣｇｐ−３９寛容化および非寛容化Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける関節炎の発症および進行関節炎発症：最初の徴候観察−最高数の罹患動物。関節炎徴候；徴候なし：スコア＝０、軽度：動物当たりのスコアが２を超えない、重度：動物当たりスコアが≧４。上記の実験は、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＨＣｇｐ−３９の関節炎原性を示すものである。ＨＣｇｐ−３９誘発疾患の経過は、前足および／または後足で定期的に起こる再発ならびに軽度の関節炎からより重度の形への漸進的進行を特徴としていた。さらに、冒されている関節の対称分布が認められ、それは再発の所見とともに、関節炎特に慢性関節リウマチにおける疾患進行を示唆するものである。全ての動物で関節炎徴候を発症させた蛋白１０μｇまたは５０μｇの単回皮下注射によって、ＨＣｇｐ −３９の強い関節炎原性が明らかになった。ＨＣｇｐ−３９特異的ＤＴＨ応答の誘発によって、ＨＣｇｐ−３９特異的Ｔ細胞が実際にＨＣｇｐ−３９感作に応答して誘発されることが明らかになった。これらのデータはさらに、ＨＣｇｐ−３９によって足蹠で免疫感作された動物でＨＣｇｐ−３９特異的なin vitro増殖応答が示されたことで確認された（データは示していない）。重要な点として、非寛容化動物が注射部位に隣接する足首に関節炎を発症し、関節炎誘発におけるＨＣｇｐ−３９特異的Ｔ細胞の関与を示唆している。ペプチド抗原の経鼻投与を用いて、抗原特異的免疫寛容を誘発している。その実験から、ＨＣｇｐ−３９を経鼻投与することで、免疫非応答性が生じることが明らかになった。ＨＣｇｐ−３９寛容化マウスでは感作後のＤＴＨ応答は完全に消失したが、対照マウスは抗原特異的腫脹を示した。これらの所見は、ＨＣｇｐ−３９の投与が末梢免疫寛容を生じることを示している。非寛容化動物では、マウス１０匹中４匹で、ＤＴＨ応答に足首（誘発部位に隣接）での関節炎が伴っていた。それとは対照的に、ＨＣｇｐ−３９寛容化動物の足首は完全に保護され、自己反応性Ｔ細胞が有効に抑制されたことを示唆している。ＨＣｇｐ−３９による寛容化が疾患発生に対する保護効果を有するという知見は、寛容化群の動物１０匹中５匹が実験期間全体を通じて完全に保護されたという所見によっても得られた。その群の他の５匹は最終的に臨床徴候を生じたが、関節炎の発症はかなり遅くなった。従って、関節炎原性プロセスにＨＣｇｐ− ３９特異的Ｔ細胞が関与していると言うことができ、より重要な点として、本発明による医薬組成物を用いたこれらＴ細胞の寛容化により、関節炎発生を遅延または抑制させることができると言える。実施例２方法Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるウシ３９ｋＤａホエー蛋白の関節炎原性不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中に１：１で混合した精製ウシ３９ｋＤａホエー蛋白（０．２μｇ、１μｇ、５μｇまたは２５μ ｇ）の緩衝液（１００μＬ）溶液（０．５ＮａＣｌ、０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．５）を、１０匹ずつ４群の雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（Charles River，Sulzfeld，Germany）の胸部領域に皮下注射し、対照１０匹にＰＢＳ（ＩＦＡ中１：１）を注射した。２日に１回関節炎の臨床徴候を調べた。関節炎の重度は、各足を０〜３（グラントら（Glant et al）の論文による）で評点することで評価した。すなわち、スコア０＝変化なし、スコア１＝紅斑および／または軽度の腫脹、スコア２＝重度の腫脹および／または肉眼で認められる変形、スコア３＝屈曲および伸長の不能による静止状態である。ウシホエーｇｐ３９ｃＤＮＡのクローニング雌ウシ乳腺ラムダブルーミド（Lambda Bluemid）（−）ｃＤＮＡライブラリ（ Clontech Laboratories Inc.が特注製造したオリゴｄＴおよびランダムプライミングしたもの）を、宿主としてＸＬ１ＢｌｕｅＭＲＦ株を用いて増幅し、ライブラリの平板培養とフィルターレプリカ製造をメーカーの説明に従って行った。オリゴ標識キット（Pharmacia）を用いて³²Ｐ標識を行ったＨＣｇｐ−３９ｃＤＮＡからのＰｖｕＩＩ断片をフィルターとハイブリダイズさせた。陽性のプラークを増幅し、再スクリーニングし、相当するファージの挿入物ＤＮＡについて、サーモシーケナーゼ（Thermosequenase）キット（Amersha m）を用いて配列決定を行った。その配列を配列番号３に示してある。その配列では、ヌクレオチド位置９５４で、１個のクローンがＣを有しており、別のものがＴを有していた。結果ウシ３９ｋＤａホエー単蛋白の関節炎原性ＩＦＡと混合したウシ３９ｋＤａホエー蛋白２５μｇの単回注射後、全てのマウスが徐々に関節炎を生じた（表５）。関節炎の徴候が最初に認められたのは、前足または後足での感作から８〜２０日後であった。ウシ３９ｋＤａホエー蛋白誘発関節炎の経過は、後足で定期的に起こる再発ならびに軽度の関節炎からより重度の関節炎への漸進的進行を特徴としていた（疾患の進行は７０日間追跡した）。非常に多くの場合、冒されている関節の対称分布が認められ、両方の前足または両方の後足が同時に関節炎徴候を示したことを意味している。２５μｇに代えて５μｇ、１μｇおよび０．２μｇのウシ３９ｋＤａホエー蛋白をＩＦＡと混合して用いても、同様に関節炎誘発が生じた。ウシ３９ｋＤａホエー蛋白１μｇまたは０．２μｇによる誘発を受けたマウスは、より軽度の関節炎を生じ、それぞれ７匹および６匹のマウスが軽度の関節炎を生じたのに対し、重度の関節炎を生じたのは３匹および４匹のみであった。実験終了後、各マウス群についての評点日当たりの累積スコアを計算した（図２）。ウシ３９ｋＤａホエー蛋白２５μｇによる免疫感作後、３０日後に２７（２５μｇ）という最大スコアが得られ、それに続いて明瞭な再発があった。免疫感作にそれより低用量のウシ３９ｋＤａホエー蛋白を用いた場合、動物は、用量２５μｇで誘発されたマウスと比較して若干低い関節炎スコアを示した。相対的に低いスコアが得られたが、いずれの群でも関節炎の再発パターンが認められた。対照のＰＢＳ投与マウスでは、後足の軽微で一時的な腫脹が認められる場合があった。この現象は、未処置の注射をしていない動物でも認められた。これらのマウス群についての評点日当たりのこの平均累積腫脹は平均３．４であり、生物学的バックグラウンドと考えられた。結論として、ウシ３９ｋＤａホエー蛋白（２５μｇ、５μｇ、１μｇおよび０．２μｇのいずれも）は、雌Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて進行性関節炎を誘発することができる。再発と関節の対称的罹患を特徴とする、ウシ３９ｋＤａホエー蛋白誘発関節炎の慢性性は、慢性関節リウマチ（ＲＡ）における疾患の進行を示唆するものである。表５．ウシ３９ｋＤａホエー蛋白感作Ｂａｌｂ／ｃマウスでの関節炎の発症および進行 FP＝前足。HP＝後足。関節炎徴候；なし：スコア＝０、軽度：動物当たりのスコアが２を超えない、重度：動物当たりのスコアが≧３。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ボス，エボ・シブランオランダ国、エヌ・エル―5344・イエー・アー・オス、ド・フリーストラート・８

Claims

【特許請求の範囲】１．治療薬として使用される、アミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCT HIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白。２．前記蛋白がウシ３９ｋＤａホエー蛋白またはヒトＹＫＬ−３９蛋白である請求項１に記載の使用。３．アミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDR-FLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する１以上の蛋白と医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物。４．前記蛋白がウシ３９ｋＤａホエー蛋白またはヒトＹＫＬ−３９蛋白である請求項３に記載の医薬組成物。５．Ｔ細胞介在軟骨損傷を患う哺乳動物において同一自己抗原に対する特異的Ｔ細胞の寛容誘発のための医薬製剤製造における、アミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYR EGDGSCFPDALDR-FLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する蛋白の使用。６．前記蛋白がウシ３９ｋＤａホエー蛋白またはヒトＹＫＬ−３９蛋白である請求項５に記載の使用。７．動物、好ましくはマウスにおいて関節炎を誘発する方法で使用される、アミノ酸配列YKLVCYYTSWSQYREGDGSC-FPDALDRFLCTHIYSFANISND（配列番号１）と５０％以上の相同性を示すアミノ酸配列を有する１以上の蛋白。８．前記蛋白がウシ３９ｋＤａホエー蛋白またはヒトＹＫＬ−３９蛋白である請求項７に記載の方法。９．請求項７または８記載の方法によって前記関節炎が誘発された、関節炎に罹患している動物。１０．関節炎、特に慢性関節リウマチの治療用の新薬スクリーニング向けの請求項９に記載の動物の使用。１１．配列番号２のアミノ酸配列を有する蛋白。１２．請求項１１に記載のアミノ酸配列をコードする単離ＤＮＡ。１３．配列番号３のＤＮＡ配列を有する請求項１２記載の単離ＤＮＡ。